TWI723514B - 具有降低膽固醇之組合物 - Google Patents
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Abstract
一種具有降低膽固醇之組合物，其係含有320~526μg/mL之橙皮苷以及70~110μg/mL之阿魏酸，且該組合物之製造方法係將整顆檸檬連皮帶籽裂解成檸檬汁後，再將胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)以及季也蒙有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora guilliermondii)植入100%純檸檬汁後經過發酵而得。
Description
本發明係有關於一種組合物；更詳而言之，特別係關於一種具有降低膽固醇之組合物。
橙皮苷為柑橘類水果中的一種黃酮類化合物，其主要儲存於柑橘類水果之果皮中，且近年來有不少研究指出服用橙皮苷萃取物對於人體具有降血壓、降膽固醇和預防動脈硬化之效果，但卻未見有人採用發酵的方式使柑橘類水果中的橙皮苷含量增加，並使其功效不亞於橙皮苷萃取物。
有鑑於此，本案申請人遂依其多年從事相關領域之研發經驗，針對前述之缺失進行深入探討，並依前述需求積極尋求解決之道，歷經長時間的努力研究與多次測試，終於完成本發明。
本發明之主要目的在於提供一種能降低膽固醇之組合物。
為達上述之目的，本發明具有降低膽固醇之組合物，其係含有320~526μg/mL之橙皮苷以及70~110μg/mL之阿魏酸，且該組合物之製造方法係先將檸檬裂解成檸檬汁後，再將檸檬汁進行發酵而得。
而該裂解的過程係將整顆檸檬連皮帶籽裂解成檸檬汁，又發酵時係將胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)以及季也蒙有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora guilliermondii)植入100%純檸檬汁中。
為期許本發明之目的、功效、特徵及結構能夠有更為詳盡之瞭解，茲舉較佳實施例並配合圖式說明如後。
本發明具有降低膽固醇之組合物，其係含有320~526μg/mL之橙皮苷以及70~110μg/mL之阿魏酸，且該組合物之製造方法係先將檸檬裂解成檸檬汁後，再將檸檬汁進行發酵而得。
而該檸檬的裂解係將整顆檸檬連同果皮和種子裂解成檸檬汁，接著再直接將益生菌植入100%純檸檬汁內進行發酵，且發酵的過程中需將溫度控制在25℃~35℃之間並持續攪拌14到22天，而在攪拌的過程中會不間斷的透過攪拌設備將空氣打入檸檬汁內，使檸檬汁、益生菌以及空氣三者能充分的混合。
其中，該益生菌係由胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)以及季蒙也有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora guilliermondii) 以混合比例介於1~6:1~8之間所組成，又該檸檬汁和益生菌的混合比例介於1~2:0.05~0.5之間，該胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)寄存於德國菌種中心，寄存編號為DSM 32004，該季蒙也有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora guilliermondii)寄存於德國菌種中心，寄存編號為DSM 32005。
本實施例以動物實驗作驗證，藉此來證實服用本發明之組合物確實具有降低膽固醇之功效，有關動物實驗之相關方法以及檢測結果如下所示。
試驗動物：選用來自財團法人國家實驗研究院國家實驗動物中心的八週齡雄性倉鼠(Syrian Hamster)。
飼育管理：實驗用之倉鼠飼養於麥德凱生科動物中心 Room E中，飼育環境控制在22±3℃，濕度在50±20%，並控制光照期為早上六點到晚上六點，黑暗期則為晚上六點到翌日早上六點，光照期與黑暗期各十二小時，且需每日監測環境溫度及濕度。
飼料配方：正常組飼料採用LabDiet的Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010，而對照組飼料則採用Research Diets的RD Western Diet(modify from D12079B)高油脂高膽固醇飼料，正常組和對照組的倉鼠均採自由攝食方式餵食。
飲水：將自來水經逆滲透處理機處理後裝入已滅菌之塑料瓶後供倉鼠自由飲用。
試驗組別設計：詳細的投予量如下表(一)所示，劑量推算係根據2005年美國食品藥物管理局所公告之實驗出其估算方法，以60公斤之成人為基準，使用高等實驗動物進行試驗時，劑量之換算原則為人體每日每公斤體重之建議攝取量的7.4倍為倉鼠1倍劑量。
表(一)
| 組別 | 投予物質 | 投予劑量 (mL/kg/day) | 高油脂高膽固醇飼料 | 相對人體劑量(倍) |
| 正常組 | 滅菌水 | 無 | 無 | 無 |
| 負對照組 | 滅菌水 | 無 | 有 | 無 |
| 低劑量對照組 | 本發明 | 6.2 | 有 | 1 |
| 中劑量對照組 | 本發明 | 12.3 | 有 | 2 |
| 高劑量對照組 | 本發明 | 37.0 | 有 | 6 |
試驗物質之配製：將本發明以冷凍濃縮之方式製備成3.7倍濃縮液，以滅菌水直接配製濃縮液至投予體積，以50mL的本發明為例，其經濃縮處理後之體機為13.5mL，以人體與倉鼠之劑量換算如下，低劑量對照組倉鼠投予
mL/kg/day的本發明、中劑量對照組倉鼠投予
mL/kg/day的本發明、高劑量對照組倉鼠投予
mL/kg/day的本發明。
投予期間、方法：倉鼠於試驗開始第一天經口管餵食試驗物質或對照物質連續6週，投予劑量之計算係根據當日投予前量測之體重為基準，投予的劑量如上所述，投予的體積為10mL/kg。
臨床症狀觀察：試驗期間每日進行臨床觀察，並記錄倉鼠是否有異常臨床症狀或死亡，並每週定時量測倉鼠體重變化及其飼料攝取量。
血清收集與血清製備：第6週以犧牲採血方式收集血液樣本，採取之血液放入生化管中並於室溫靜置2小時後，再以
離心15分鐘收集上層血清樣本，檢測血清中之總膽固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C) 、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol, HDL-C)。
糞便收集：第6週犧牲前3天收集倉鼠糞便，並去除沾黏於糞便之毛髮等雜物，以熱風乾燥後再磨成粉狀，接著進行總膽固醇(TC)含量檢測分析。
臟器採集：試驗結束後以異氟醚(Isoflurane)將倉鼠麻醉犧牲後，採集肝臟秤重以及檢查是否有脂肪肝，並取其中最大葉於-70℃冰箱保存後進行總膽固醇(TC)含量檢測分析。
血清生化指標測定：採用血清生化分析儀檢測血清中之總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，並計算高密度脂蛋白膽固醇/低密度脂蛋白膽固醇和總膽固醇/高密度脂蛋白膽固醇之比值。
糞便總膽固醇之含量檢測：依照Folch 法，將粉狀的糞便粉末以篩子濾除較大顆粒，再取一定量的糞便粉末加入20倍重量的氯仿/甲醇混合溶液(混合比例為2：1)，以組織均質機均質後，接著以
離心10分鐘並取出澄清液，接續依照Carlson & Goldford法，將離心後的糞便脂質均質液中加入0.2倍體積之0.9%生理食鹽水(saline)均勻混合，於室溫下以
離心5分鐘後去除上層液體，保留脂相層後置於95℃烘箱中待有機溶劑揮發後，以生化分析儀分析糞便中總膽固醇。
肝臟總膽固醇之含量檢測：依照Folch 法，取一定量的肝臟加入20倍重量的氯仿/甲醇混合溶液(混合比例為2：1)，接續依照Carlson & Goldford法，並以組織均質機均質後，接著以
離心10分鐘並取出澄清液，將離心後之肝臟組織脂質均質液加入0.2倍體積之0.9%生理食鹽水(saline)混合均勻，於室溫下以
離心5分鐘，去除上層液體並保留脂相層後置於95℃烘箱中待有機溶劑揮發後，以脂溶液(tert-Butyl alcohol：Triton Ｘ-100：methanol = 2：1：1)溶解均勻混合，以生化分析儀分析糞便中總膽固醇。
在本次動物試驗中，主要係探討本發明對於降低膽固醇之功效，並將試驗分為正常組(給予正常飼料以及滅菌水)、負對照組(給予高油脂高膽固醇飼料以及滅菌水)、低劑量對照組(給予高油脂高膽固醇飼料以及1倍相對人體劑量的本發明)、中劑量對照組(給予高油脂高膽固醇飼料以及2倍相對人體劑量的本發明)以及高劑量對照組(給予高油脂高膽固醇飼料以及6倍相對人體劑量的本發明)，且每組均為10隻試驗動物，經口服投予6週後進行血液、糞便、肝臟之膽固醇之相關檢測，而檢測結果以平均值正負標準差表示，而檢測數據以單因子變異數分析(One-way ANOVA)進行分析，並以鄧肯多重差距檢定(Duncan multiple range test)進行事後檢定，其結果如下列所示：
首先，就各組倉鼠之每週平均攝食量之記錄如下表(二)所示。
表(二)
| 組別 | 本發明劑量 (mL/kg) | 飼料攝取量(g/day) | ||
| 第1週 | 第2週 | 第3週 | ||
| 正常組 | 無 | 8.787±0.730 | 7.917±0.950 | 8.320±0.952 |
| 負對照組 | 無 | 6.622±0.563 | 6.574±0.584 | 6.276±0.433 |
| 低劑量 對照組 | 6.2 | 6.202±0.595 | 6.286±0.638 | 5.881±1.098 |
| 中劑量 對照組 | 12.3 | 6.416±0.792 | 6.279±0.671 | 6.237±1.011 |
| 高劑量 對照組 | 37 | 6.123±0.675 | 6.301±0.911 | 6.116±0.603 |
| 組別 | 本發明劑量 (mL/kg) | 飼料攝取量(g/day) | ||
| 第4週 | 第5週 | 第6週 | ||
| 正常組 | 無 | 8.584±0.839 | 8.659±0.660 | 8.504±0.729 |
| 負對照組 | 無 | 6.030±0.650 | 6.321±0.425 | 6.576±0.638 |
| 低劑量 對照組 | 6.2 | 5.903±0.653 | 6.171±0.802 | 6.310±0.738 |
| 中劑量 對照組 | 12.3 | 5.739±1.151 | 5.910±0.936 | 6.482±0.621 |
| 高劑量 對照組 | 37 | 6.109±0.810 | 6.434±0.803 | 5.939±0.801 |
由上表(二)可看出除了正常組之外，餵食高油脂高膽固醇飼料之各個對照組之平均攝食量皆無明顯差別。
接著，就各組倉鼠之每週平均體重變化以及平均肝臟重量如下表(三)所示。
表(三)
| 組別 | 本發明劑量 (mL/kg) | 體重(g) | |||
| 第0週 | 第1週 | 第2週 | 第3週 | ||
| 正常組 | 無 | 104.46±9.77 | 115.25±9.20 | 117.81±9.58 | 115.75±10.18 |
| 負對照組 | 無 | 107.21±5.84 | 116.00±6.81 | 123.15±8.01 | 123.68±6.66 |
| 低劑量 對照組 | 6.2 | 105.27±9.01 | 112.81±9.34 | 119.07±11.03 | 116.44±11.83 |
| 中劑量 對照組 | 12.3 | 109.87±10.12 | 118.22±11.62 | 122.13±13.13 | 119.86±13.20 |
| 高劑量 對照組 | 37 | 110.51±13.39 | 117.43±12.68 | 119.48±13.47 | 118.51±12.03 |
| 組別 | 劑量 (mL/kg) | 體重(g) | 肝臟相對 百分比 (g/100g 體重) | ||
| 第4週 | 第5週 | 第6週 | |||
| 正常組 | 無 | 121.48±10.14 | 124.12±10.52 | 123.50±10.23 | 3.314±0.208 |
| 負對照組 | 無 | 127.99±8.31 | 131.95±8.06 | 134.66±9.51 | 5.084±0.317 |
| 低劑量 對照組 | 6.2 | 119.84±12.98 | 123.76±13.91 | 125.08±14.19 | 4.574±0.303 |
| 中劑量 對照組 | 12.3 | 121.51±16.47 | 124.04±16.88 | 126.94±16.07 | 4.506±0.478 |
| 高劑量 對照組 | 37 | 119.66±11.50 | 123.51±13.39 | 122.06±14.88 | 4.681±0.392 |
由上表(三)可看出除了負對照組以外，其餘的組別在體重方面差異性並不大，而在肝臟相對重量方面，由於負對照組餵養高油脂高膽固醇飼料造成過多的脂肪在肝臟堆積，使負對照組之肝臟相對重量明顯大於正常組，且服用不同劑量對照組之肝臟相對重量明顯小於負對照組，由此可看出服用本發明是能降低脂肪在肝臟堆積的情況。
接續，就各組倉鼠之第6週血清中總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)以及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量如下表(四)所示。
表(四)
| 組別 | 本發明劑量(mL/kg) | 總膽固醇(mg/dL) | HDL-C (mg/dL) | LDL-C (mg/dL) |
| 正常組 | 無 | 157.4±23.4 | 66.73±3.83 | 31.26±9.19 |
| 負對照組 | 無 | 457.4±30.3 | 157.18±9.86 | 58.46±9.38 |
| 低劑量對照組 | 6.2 | 317.8±18.4 | 153.10±6.94 | 38.29±12.96 |
| 中劑量對照組 | 12.3 | 313.9±24.3 | 158.37±16.06 | 32.70±14.96 |
| 高劑量對照組 | 37.0 | 330.7±42.2 | 156.63±10.39 | 37.38±12.50 |
由上表(四)可知在6週試驗結束後，各劑量對照組之血清中的總膽固醇以及低密度脂蛋白膽固醇含量與負對照組相比皆有顯著降低，且又以中劑量組對降低總膽固醇以及低密度脂蛋白膽固醇的效果最為明顯，而在高密度脂蛋白膽固醇含量方面，各劑量對照組和負對照組並無明顯的差異。
再來，就各組倉鼠之第6週試驗結束前糞便中總膽固醇含量如下表(五)所示。
表(五)
| 組別 | 本發明劑量(mL/kg) | 總膽固醇(mg/dL) |
| 正常組 | 無 | 0.4601±0.189 |
| 負對照組 | 無 | 3.325±0.807 |
| 低劑量對照組 | 6.2 | 4.490±1.559 |
| 中劑量對照組 | 12.3 | 4.377±1.009 |
| 高劑量對照組 | 37.0 | 4.489±0.736 |
由上表(五)可看出各劑量對照組糞便中的平均總膽固醇含量均明顯高於負對照組。
最後，就各組倉鼠之第6週肝臟中總膽固醇含量如下表(六)所示。
表(六)
| 組別 | 本發明劑量(mL/kg) | 總膽固醇(mg/dL) |
| 正常組 | 無 | 1.485±0.399 |
| 負對照組 | 無 | 29.979±3.677 |
| 低劑量對照組 | 6.2 | 25.515±1.648 |
| 中劑量對照組 | 12.3 | 25.153±2.672 |
| 高劑量對照組 | 37.0 | 23.701±4.718 |
由上表(六)可看出各劑量對照組肝臟中的總膽固醇含量是明顯低於負對照組，且又以高劑量對照組降低的幅度最為顯著。
綜合上述表格可知倉鼠在服用了本發明之後，是有助於降低其血清和肝臟中的膽固醇含量。
故，本發明在同類產品中具有極佳之進步性以及實用性，同時查遍國內外關於此類結構之F技術資料文獻後，確實未發現有相同或近似之構造存在於本案申請之前，因此本案應已符合『創作性』、『合於產業利用性』以及『進步性』的專利要件，爰依法提出申請之。
唯，以上所述者，僅係本發明之較佳實施例而已，舉凡應用本發明說明書及申請專利範圍所為之其它等效結構變化者，理應包含在本發明之申請專利範圍內。
無。
無。
無。
Claims (1)
- 一種具有降低膽固醇之組合物，其係含有320~526μg/mL之橙皮苷以及70~110μg/mL之阿魏酸，且該組合物之製造方法係先將檸檬裂解成檸檬汁後，再將檸檬汁進行發酵而得；其中，該檸檬的裂解係將整顆檸檬連同果皮和種子裂解成檸檬汁，接著再直接將益生菌植入100%純檸檬汁內進行發酵，且發酵的過程中需將溫度控制在25℃~35℃之間並持續攪拌14到22天，而在攪拌的過程中會不間斷的透過攪拌設備將空氣打入檸檬汁內，使檸檬汁、益生菌以及空氣三者能充分的混合；又，該益生菌係由胚芽乳酸桿菌以及季蒙也有孢漢遜酵母菌以混合比例介於1~6：1~8之間所組成，又該檸檬汁和益生菌的混合比例介於1~2：0.05~0.5之間。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW108130893A TWI723514B (zh) | 2019-08-28 | 2019-08-28 | 具有降低膽固醇之組合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW108130893A TWI723514B (zh) | 2019-08-28 | 2019-08-28 | 具有降低膽固醇之組合物 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202108163A TW202108163A (zh) | 2021-03-01 |
| TWI723514B true TWI723514B (zh) | 2021-04-01 |
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ID=76035279
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW108130893A TWI723514B (zh) | 2019-08-28 | 2019-08-28 | 具有降低膽固醇之組合物 |
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|---|---|
| TW (1) | TWI723514B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104970405A (zh) * | 2014-02-21 | 2015-10-14 | 东莞健茂生物科技有限公司 | 一种提升柠檬多酚含量的柠檬发酵方法 |
-
2019
- 2019-08-28 TW TW108130893A patent/TWI723514B/zh active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104970405A (zh) * | 2014-02-21 | 2015-10-14 | 东莞健茂生物科技有限公司 | 一种提升柠檬多酚含量的柠檬发酵方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 49, n. 3, jul./sep.,pp.439-411 2013 |
| Clinica Chimica Acta Volume 327, Issues 1–2, January 2003, Pages 129-137 |
| J. Clin. Biochem. Nutr., 43, 201-209, November 2008 |
| J. Clin. Biochem. Nutr., 43, 201-209, November 2008 Clinica Chimica Acta Volume 327, Issues 1–2, January 2003, Pages 129-137 Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 49, n. 3, jul./sep.,pp.439-411 2013 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW202108163A (zh) | 2021-03-01 |
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