TWI715172B - 具有抑制體脂肪形成之組合物 - Google Patents
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Abstract
一種具有抑制體脂肪形成之組合物，其係含有315~620
μg/mL之橙皮苷以及160~230μg/mL之聖草次苷，且該組合物之製造方法係將整顆檸檬連皮帶籽裂解成檸檬汁後，再將胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)以及季也蒙有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora guilliermondii)植入100%純檸檬汁中後經過發酵而得。
Description
本發明係有關於一種組合物；更詳而言之，特別係關於一種具有抑制體脂肪形成之組合物。
橙皮苷為柑橘類水果中的一種黃酮類化合物，其主要儲存於柑橘類水果之果皮中，且近年來有不少研究指出服用橙皮苷萃取物對於人體具有降血壓、降膽固醇和預防動脈硬化之效果，但卻未見有人採用發酵的方式使柑橘類水果中的橙皮苷含量增加，並使其功效不亞於橙皮苷萃取物。
有鑑於此，本案申請人遂依其多年從事相關領域之研發經驗，針對前述之缺失進行深入探討，並依前述需求積極尋求解決之道，歷經長時間的努力研究與多次測試，終於完成本發明。
本發明之主要目的在於提供一種能降低三酸甘油脂之組合物。
為達上述之目的，本發明具有抑制體脂肪形成之組合物，其係含有315~620μg/mL之橙皮苷以及160~230μg/mL之聖草次苷，且該組合物之製造方法係先將檸檬裂解成檸檬汁後，再將檸檬汁進行發酵而得。
而該裂解的過程係將整顆檸檬連皮帶籽裂解成檸檬汁，又發酵時係將胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)以及季也蒙有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora guilliermondii)植入100%純檸檬汁中。
為期許本發明之目的、功效、特徵及結構能夠有更為詳盡之瞭解，茲舉較佳實施例並配合圖式說明如後。
本發明具有抑制體脂肪形成之組合物，其係含有315~620μg/mL之橙皮苷以及160~230μg/mL之聖草次苷，且該組合物之製造方法係先將檸檬裂解成檸檬汁後，再將檸檬汁進行發酵而得。
而該檸檬的裂解係將整顆檸檬連同果皮和種子裂解成檸檬汁，接著再直接將益生菌植入100%純檸檬汁內進行發酵，且發酵的過程中需將溫度控制在26℃~32℃之間並持續攪拌12到24天，而在攪拌的過程中會不間斷的透過攪拌設備將空氣打入檸檬汁內，使檸檬汁、益生菌以及空氣三者能充分的混合。
其中，該益生菌係由胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)以及季蒙也有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora guilliermondii) 以混合比例介於1~3:1~2之間所組成，又該檸檬汁和益生菌的混合比例介於1~2:0.04~0.4之間，該胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)寄存於德國菌種中心，寄存編號為DSM 32004，該季蒙也有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora guilliermondii)寄存於德國菌種中心，寄存編號為DSM 32005。
本實施例以動物實驗作驗證，藉此來證實服用本發明之組合物確實具有調整三酸甘油脂之功效，有關動物實驗之相關方法以及檢測結果如下所示。
試驗動物：選用來自樂斯科生物科技股份有限公司的十週齡大鼠(Sprague-Dawley, SD)。
飼育管理：實驗用之大鼠飼育環境控制在22±3℃，濕度在50±20%，並控制光照期為早上六點到晚上六點，黑暗期則為晚上六點到翌日早上六點，光照期與黑暗期各十二小時，且需每日監測環境溫度及濕度。
飼料配方：正常組飼料採用Research Diets, Inc的AIN-93M，而對照組飼料則採用高熱量飼料，正常組和對照組的大鼠均採自由攝食方式餵食，而高熱量飼料之配方如下表(一)所示。
表(一)
| 配料 | Gm | Kcal |
| 酪蛋白 | 174 | 696 |
| L-胱胺酸 | 1.8 | 7 |
| 玉米澱粉 | 324.7 | 1299 |
| 麥芽糊精 | 110 | 440 |
| 蔗糖 | 70 | 280 |
| 纖維素 | 60 | 0 |
| 大豆油 | 100 | 900 |
| 豬油 | 100 | 900 |
| 特丁基對苯二酚 | 0.008 | 0 |
| 礦物質 | 35 | 0 |
| 維他命 | 10 | 40 |
| 膽鹼 | 2.5 | 0 |
飲水：將自來水經逆滲透處理機處理後裝入經高溫高壓滅菌之塑料瓶後供大鼠自由飲用。
試驗組別設計：詳細的投予量如下表(一)所示，劑量推算係根據2005年美國食品藥物管理局所公告之實驗出其估算方法，以60公斤之成人為基準，使用高等實驗動物進行試驗時，劑量之換算原則為人體每日每公斤體重之建議攝取量的6.2倍為大鼠1倍劑量。
表(二)
| 組別 | 投予物質 | 投予劑量 (mL/kg) | 高熱量飼料 | 相對人體劑量(倍) |
| 正常組 | 滅菌水 | 10 | 無 | 無 |
| 負對照組 | 滅菌水 | 10 | 有 | 無 |
| 低劑量對照組 | 本發明 | 10 | 有 | 1 |
| 中劑量對照組 | 本發明 | 10 | 有 | 2 |
| 高劑量對照組 | 本發明 | 10 | 有 | 6 |
試驗劑量之配製：將本發明以冷凍乾燥之方式製備成粉末，以滅菌水直接配製濃縮液至投予體積，以50mL的本發明為例，其經濃縮處理後之體積為13.5mL，以人體與大鼠之劑量換算如下，低劑量對照組大鼠投予
g/kg bw/day的本發明、中劑量大鼠投予
g/kg bw/day的本發明、高劑量大鼠投予
g/kg bw/day的本發明。
投予期間、方法：將不同劑量之本發明與滅菌水配置後，直接進行管餵口服投予並持續八週。
臨床症狀觀察：試驗期間每周定期量測大鼠體重並比較試驗開始與結束時之體重，且每日記錄各組大鼠之飼料攝取量並在試驗結束後計算食物利用率。
體脂肪收集與量測：試驗結束後將大鼠犧牲並取出內臟脂肪(腹膜腔內之附睪、腎臟周圍及腸繫膜上面的脂肪)進行秤重並換算體脂肪率。
臟器收集與量測：大鼠犧牲後取出其肝臟、腎臟、脾臟和心臟秤重。
血清學檢測：大鼠犧牲前禁食12小時後，以二氧化碳麻醉並收集腹腔靜脈血液，將血液離心後取上清液(血清)以全自動血清生化分析儀檢測(Automated biochemistry analyzer, Vitros 5.1 FS, Johnson & Johnson. Inc., USA)進行分析，分析的項目包含有：血脂、血糖、肝功能、腎功能、電解質平衡狀態。
肝臟脂肪檢測：檢驗大鼠肝臟中之總膽固醇和三酸甘油脂含量，再依照Folch萃取法，取0.2g的肝臟加入20倍質量的氯仿/甲醇(2:1；v/v)溶液，以均質機研磨後取1.5mL上清液以氮氣吹乾並去除有機溶劑，再以triton X-100溶液回溶，溶液中之總膽固醇和三酸甘油脂以全自動血清生化分析儀檢測(Automated biochemistry analyzer, Vitros 5.1 FS, Johnson & Johnson. Inc., USA)檢測。
在本次動物試驗中，主要係探討本發明對於不易形成體脂肪之功效，並將試驗分為正常組(給予正常飼料)、負對照組(給予高熱量飼料)、低劑量對照組(給予高熱量飼料以及1倍相對人體劑量之本發明)、中劑量對照組(給予高熱量飼料以及2倍相對人體劑量之本發明)、高劑量對照組(給予高熱量飼料以及6倍相對人體劑量之本發明)，且每組均為12隻試驗動物，經連續給予8週後進行血液和臟器之相關檢測，而檢測結果以平均值正負標準差表示，而檢測數據以單因子變異數分析(One-way ANOVA)進行分析，並以鄧肯多重差距檢定(Duncan's multiple range test)進行事後檢定，其結果如下列所示：
首先，就各組大鼠之每週平均體重之記錄如下表(三)所示。
表(三)
| 組別 | 體重(g) | ||||
| 第0週 | 第1週 | 第2週 | 第3週 | 第4週 | |
| 正常組 | 349.0±11.9 a | 362.6±10.0 a | 394.3±13.0 a | 415.1±14.0 a | 430.9±15.4 a |
| 負對照組 | 348.7±11.3 a | 372.3±11.5 a | 418.3±14.2 b | 450.3±16.2 c | 481.8±20.9 c |
| 低劑量 對照組 | 348.7±13.7 a | 372.3±11.5 a | 418.3±14.2 b | 450.3±16.2 c | 481.8±20.9 c |
| 中劑量 對照組 | 350.2±10.8 a | 379.1±8.1 a | 421.3±12.2 b | 452.8±15.8 c | 477.6±14.1 c |
| 高劑量 對照組 | 347.0±18.3 a | 370.6±24.0 a | 400.9±22.9 a | 434.8±27.7 b | 459.0±26.0 b |
| 組別 | 體重(g) | ||||
| 第5週 | 第6週 | 第7週 | 第8週 | 增加量 | |
| 正常組 | 454.5±13.8 a | 475.8±14.4 a | 491.7±15.6 a | 507.3±18.3 a | 158.3±15.1 a |
| 負對照組 | 510.4±22.1 c | 539.9±14.5 c | 565.8±23.0 c | 582.0±25.6 c | 234.5±14.9 d |
| 低劑量 對照組 | 510.4±22.1 c | 537.8±22.2 c | 565.8±23.0 c | 582.0±25.6 c | 233.3±20.2 d |
| 中劑量 對照組 | 502.8±18.6 c | 527.0±21.4 c | 544.8±25.5 c | 560.6±24.2 b | 210.4±26.3 c |
| 高劑量 對照組 | 476.8±32.7 b | 498.7±37.6 b | 514.6±44.2 b | 527.3±38.6 a | 180.3±27.2 b |
表(三)中之上標英文字母a、b、c、d表示統計之結果，而不同字母表示組間統計有顯著差異（p>0.05）。
由上表(三)可看出除了正常組於試驗期間之體重皆顯著低於負對照組，表示高熱量飼料可成功誘導大鼠肥胖，中劑量對照組只在第八週的平均體重顯著低於負對照組，反觀高劑量對照組從第二週到第八週知平均體重均顯著低於負對照組，但低劑量對照組則和負對照組無明顯差異。
接著，就各組大鼠之每日飼料攝食量並統計該週之平均攝食量如下表(四)所示。
表(四)
| 組別 | 平均攝食量(g) | ||||
| 第1週 | 第2週 | 第3週 | 第4週 | 第5週 | |
| 正常組 | 152.1±1.9 c | 157.1±2.3 a | 150.9±1.8 a | 149.3±2.3 b | 161.7±1.8 c |
| 負對照組 | 148.5±1.3 bc | 150.9±11.9 a | 147.0±7.1 a | 148.0±9.6 b | 154.4±12.8 bc |
| 低劑量 對照組 | 147.0±2.0 b | 154.8±2.0 a | 150.1±2.2 a | 149.7±2.1 b | 159.9±2.0 c |
| 中劑量 對照組 | 151.2±2.3 c | 155.7±4.8 a | 147.5±14.8 a | 140.5±7.2 a | 136.8±16.4 a |
| 高劑量 對照組 | 138.0±9.0 a | 153.2±6.1 a | 147.5±14.8 a | 140.5±7.2 a | 136.8±16.4 a |
| 組別 | 平均攝食量(g) | |||
| 第6週 | 第7週 | 第8週 | 總攝食量 | |
| 正常組 | 155.8±1.1 c | 154.3±1.5 c | 127.8±1.5 a | 1208.9±5.2 c |
| 負對照組 | 154.0±11.0 bc | 151.2±7.9 c | 123.2±5.5 c | 1177.2±57.0 bc |
| 低劑量 對照組 | 159.7±14 c | 155.6±5.5 c | 125.0±3.6 c | 1201.7±12.1 c |
| 中劑量 對照組 | 140.6±18.7 a | 125.3±12.9 a | 121.6±22.1 c | 1103.3±58.7 a |
| 高劑量 對照組 | 140.6±18.7 a | 125.3±12.9 a | 121.6±22.1 c | 1103.3±58.7 a |
表(四)中之上標英文字母a、b、c、d表示統計之結果，而不同字母表示組間統計有顯著差異（p>0.05）。
由上表(四)可看出中劑量對照組之第7週以及高劑量對照組第1週、第4週至第7週的平均攝食量均顯著低於負對照組（p>0.05）。
接續，就各組大鼠之食物利用率和體脂肪率如下表(五)所示。
表(五)
| 組別 | 食物利用率(%) | 體脂肪量(g) | 體脂肪率(%) |
| 正常組 | 13.10±1.24 a | 21.116±3.125 a | 4.156±0.563 a |
| 負對照組 | 19.99±1.92 d | 39.230±7.073 c | 6.733±1.247 c |
| 低劑量對照組 | 19.42±1.66 c | 37.220±7.340 c | 6.408±1.315 c |
| 中劑量對照組 | 18.16±1.97 c | 30.645±6.927 b | 5.472±1.211 b |
| 高劑量對照組 | 16.35±2.36 b | 25.199±4.483 a | 4.784±0.800 ab |
表(五)中之上標英文字母a、b、c表示統計之結果，而不同字母表示組間統計有顯著差異（p>0.05）。
由上表(五)可知在食物利用率方面正常組顯著低於給予高熱量飼料之各對照組，而在各對照組中之中劑量對照組和高劑量對照組之食物利用率顯著低於其他對照組。
就體脂肪方面正常組的平均體脂肪重量明顯低於各對照組，而對各照組中又以中劑量對照組和高劑量對照組之體脂肪量顯著低於負對照組，另外在體脂肪率的部分同樣也是中劑量對照組和高劑量對照組之體脂肪率顯著低於負對照組。
再來，就各組大鼠之血液中之尿酸(uric acid, UA)以及肌酐酸(creatinine, CRE)含量作為評估腎功能之指標，其結果如下表(六)所示。
表(六)
| 組別 | 尿酸(mg/dL) | 肌酐酸(mg/dL) |
| 正常組 | 3.20±0.94 a | 0.742±0.072 a |
| 負對照組 | 3.38±0.82 a | 0.742±0.068 a |
| 低劑量對照組 | 3.32±0.79 a | 0.740±0.058 a |
| 中劑量對照組 | 3.67±0.73 a | 0.775±0.058 a |
| 高劑量對照組 | 3.58±0.52 a | 0.777±0.071 a |
由上表(六)可看出各組別血液中之尿酸以及肌酐酸均無差異，因此可知服用本發明不會影響腎臟正常之功能。
接續，就各組大鼠血液中天門冬胺酸轉胺酶(AST)和丙胺酸轉胺酶(ALT)酵素活性來觀察試驗動物之肝臟功能，其結果如下表(七)所示。
表(七)
| 組別 | 天門冬胺酸轉胺酶(U/L) | 丙胺酸轉胺酶(U/L) |
| 正常組 | 94.8±9.2 a | 3.20±0.94 a |
| 負對照組 | 98.3±14.0 a | 3.38±0.82 a |
| 低劑量對照組 | 97.4±14.0 a | 3.32±0.79 a |
| 中劑量對照組 | 97.1±16.4 a | 3.67±0.73 a |
| 高劑量對照組 | 94.6±7.0 a | 3.58±0.52 a |
由上表(七)可看出血液中之天門冬胺酸轉胺酶(AST)和丙胺酸轉胺酶(ALT)酵素活性在高熱量飲食誘導的組別中，不論投予劑量的多寡均和正常組無差異。
接續，就各組大鼠體內電解質平衡，其結果如下表(八)所示。
表(八)
| 組別 | 鈉(mmol/L) | 鉀(mmol/L) |
| 正常組 | 143.8±1.9 a | 7.74±0.74 a |
| 負對照組 | 144.7±2.7 a | 7.79±0.70 a |
| 低劑量對照組 | 145.6±2.5 a | 7.74±0.73 a |
| 中劑量對照組 | 145.4±2.5 a | 7.83±0.69 a |
| 高劑量對照組 | 145.2±6.1 a | 7.73±0.76 a |
由上表(八)可看出在高熱量的飼料餵食下，不論是否服用本發明，大鼠血液中之鈉、鉀離子量均和正常組無差異，因此可知服用本發明不會影響大鼠體內之電解質平衡。
接續，就各組大鼠血液中之血糖質檢測，其結果如下表(九)所示。
表(九)
| 組別 | 血糖(mg/dL) |
| 正常組 | 112.34±17.91 a |
| 負對照組 | 114.23±12.96 a |
| 低劑量對照組 | 112.22±11.62 a |
| 中劑量對照組 | 109.67±14.97 a |
| 高劑量對照組 | 110.27±12.73 a |
由上表(十)可看出血液中之血糖值在高熱量飲食誘導的組別中，不論投予劑量的多寡均和正常組無差異。
接續，就各組大鼠血清中之總膽固醇(Total cholesterol)、三酸甘油脂(Total triglyceride)、高密度膽固醇(HDL-C)以及低密度膽固醇(LDL-C) 檢測，其結果如下表(十一)所示。
表(十一)
| 組別 | 總膽固醇(mg/dL) | 三酸甘油脂(mg/dL) |
| 正常組 | 58.2±8.6 a | 46.7±7.0 a |
| 負對照組 | 65.7±11.8 a | 100.1±31.1 b |
| 低劑量對照組 | 56.2±9.0 a | 61.9±18.3 a |
| 中劑量對照組 | 55.8±10.5 a | 52.8±14.1 a |
| 高劑量對照組 | 47.5±7.0 a | 43.7±9.6 a |
| 組別 | 高密度膽固醇(mg/dL) | 低密度膽固醇(mg/dL) |
| 正常組 | 12.03±2.33 a | 6.62±1.23 a |
| 負對照組 | 12.35±2.59 a | 7.14±1.91 a |
| 低劑量對照組 | 11.47±2.75 a | 6.01±1.51 a |
| 中劑量對照組 | 10.48±2.03 a | 6.38±1.04 a |
| 高劑量對照組 | 11.33±2.60 a | 5.76±0.92 a |
由上表(十一)可看出低、中、高劑量對照組血清中三酸甘油脂以及總膽固醇濃度均顯著低於負對照組，而在高密度膽固醇和低密度膽固醇濃度方面僅有高劑量對照組顯著低於負對照組。
接續，就各組大鼠血液中之非酯化游離脂肪酸(FFA)含量檢測，其結果如下表(十二)所示。
表(十二)
| 組別 | 非酯化游離脂肪酸(mmol/L) |
| 正常組 | 0.40±0.05 a |
| 負對照組 | 0.54±0.08 a |
| 低劑量對照組 | 0.49±0.06 a |
| 中劑量對照組 | 0.52±0.11 a |
| 高劑量對照組 | 0.51±0.09 a |
由上表(十二)可看出在高熱量飲食誘導的對照組中非酯化游離脂肪酸的含量比正常組相比有顯著上升，而低、中、高劑量對照組之非酯化游離脂肪酸含量則和負對照組無明顯差異。
接續，就各組大鼠肝臟中之總膽固醇(Total cholesterol)、三酸甘油脂(Total triglyceride)濃度含量檢測，其結果如下表(十三)所示。
表(十三)
| 組別 | 總膽固醇(mg/g) | 三酸甘油脂(mg/g) |
| 正常組 | 2.32±0.61 a | 23.77±8.04 a |
| 負對照組 | 6.11±1.90 c | 75.55±16.52 c |
| 低劑量對照組 | 5.48±1.22 b | 69.43±15.81 b |
| 中劑量對照組 | 4.92±1.17 b | 55.62±19.78 b |
| 高劑量對照組 | 3.31±0.84 b | 28.77±10.62 b |
由上表(十三)可看出在高熱量飲食誘導的對照組中，大鼠肝臟中的總膽固醇以及三酸甘油脂均高於正常組，而低、中、高劑量對照組肝臟中的總膽固醇以及三酸甘油脂均顯著低於負對照組。
綜合上述表格可知大鼠在服用了本發明之後，其肝、腎機能以及電解質平衡不受影響，而低、中、高劑量對照組之大鼠肝臟脂肪含量顯著低於無服用本發明之負對照組，由此可知服用本發明是有助減輕體重、減少體脂肪量以及降低體脂肪率。
故，本發明在同類產品中具有極佳之進步性以及實用性，同時查遍國內外關於此類結構之技術資料文獻後，確實未發現有相同或近似之構造存在於本案申請之前，因此本案應已符合『創作性』、『合於產業利用性』以及『進步性』的專利要件，爰依法提出申請之。
唯，以上所述者，僅係本發明之較佳實施例而已，舉凡應用本發明說明書及申請專利範圍所為之其它等效結構變化者，理應包含在本發明之申請專利範圍內。
無。
無。
無。
無。
Claims (1)
- 一種具有抑制體脂肪形成之組合物，其係含有315~620μg/mL之橙皮苷以及160~230μg/mL之聖草次苷，且該組合物之製造方法係先將檸檬裂解成檸檬汁後，再將檸檬汁進行發酵而得；其中，該檸檬的裂解係將整顆檸檬連同果皮和種子裂解成檸檬汁，接著再直接將益生菌植入100%純檸檬汁內進行發酵，且發酵的過程中需將溫度控制在26℃~32℃之間並持續攪拌12到24天，而在攪拌的過程中會不間斷的透過攪拌設備將空氣打入檸檬汁內，使檸檬汁、益生菌以及空氣三者能充分的混合；又，該益生菌係由胚芽乳酸桿菌以及季蒙也有孢漢遜酵母菌以混合比例介於1~3：1~2之間所組成，又該檸檬汁和益生菌的混合比例介於1~2：0.04~0.4之間。
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW108130892A TWI715172B (zh) | 2019-08-28 | 2019-08-28 | 具有抑制體脂肪形成之組合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| TW (1) | TWI715172B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1124133C (zh) * | 1997-10-28 | 2003-10-15 | 韩国科学技术研究院 | 橙皮苷和橙皮素作为肝病的预防或治疗剂的应用 |
| CN1946830A (zh) * | 2004-12-27 | 2007-04-11 | 百佳株式会社 | 抗氧化材料、防劣化剂和食品或饮料 |
-
2019
- 2019-08-28 TW TW108130892A patent/TWI715172B/zh active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1124133C (zh) * | 1997-10-28 | 2003-10-15 | 韩国科学技术研究院 | 橙皮苷和橙皮素作为肝病的预防或治疗剂的应用 |
| CN1946830A (zh) * | 2004-12-27 | 2007-04-11 | 百佳株式会社 | 抗氧化材料、防劣化剂和食品或饮料 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Hashemi, Seyed Mohammad Bagher, et al. "Fermented sweet lemon juice (Citrus limetta) using Lactobacillus plantarum LS5: Chemical composition, antioxidant and antibacterial activities." Journal of Functional Foods 38 (2017): 409-414. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW202108766A (zh) | 2021-03-01 |
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