TWI705059B

TWI705059B - 法尼基轉移酶抑制劑及其用途

Info

Publication number: TWI705059B
Application number: TW106109645A
Authority: TW
Inventors: 陳裕仁; 林麗純
Original assignee: 台灣基督長老教會馬偕醫療財團法人馬偕紀念醫院; 衛生福利部國家中醫藥研究所
Priority date: 2016-03-23
Filing date: 2017-03-23
Publication date: 2020-09-21
Also published as: CN109071425A; US20190084956A1; CN109071425B; WO2017162122A1; TW201733996A; US10745370B2

Abstract

本揭示內容是關於新穎的化合物及其用途。本發明化合物具有抑制法尼基轉移酶活性的功效，因此可作為免疫細胞的調控劑；據此，該些化合物可用以製備一藥物，以治療與過量表現法尼基轉移酶或免疫反應相關或所引發的疾病。本揭示內容亦提供包含本發明化合物之藥學組合物。

Description

法尼基轉移酶抑制劑及其用途

本揭示內容是關於新穎的化合物及其用途。更具體來說，本揭示內容是關於對法尼基轉移酶及免疫細胞具有抑制功效的新穎化合物，以及其於製備用以治療腫瘤、神經退化性疾病、早衰性老化症、感染性疾病或免疫性疾病之藥物的用途。

法尼基轉移酶是三種已知類異戊二烯轉移酶(prenyltransferase)中的一種。就結構上來看，法尼基轉移酶是由二個次單元所組成：一個48kDa的α次單元及一個46kDa的β次單元。二個次單元主要皆是由α螺旋(α helices)所構成。α次單元是由平行堆疊之成對α螺旋的雙層結構所組成，該結構如同毯子般部分包覆圍繞β次單元。β次單元的α螺旋會形成一桶狀結構。活性位置是位於由部分α次單元圍繞之β次單元的中心。

法尼基轉移酶可對蛋白進行轉譯後修飾，其係將一稱為法尼基團的類異戊二烯脂質(isoprenoid lipid)加至接近標的蛋白末端之半胱胺酸的-SH基團，並形成一硫醚鍵結。該轉譯後修飾過程稱為法尼基化(farnesylation)，可藉由法尼基團的疏水特性使法尼基化蛋白與膜相連接。多數法尼基化蛋白會參與細胞訊息傳遞路徑；最為人熟知的一種法尼基化蛋白為Ras超級家族。已知Ras蛋白會經由調控促***原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及磷脂酸肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/Akt訊息傳遞路徑來促進細胞增生，且抑制細胞凋亡。此外，法尼基化蛋白亦會藉由活化不同的效應蛋白來調控轉錄、轉譯、細胞骨架肌動蛋白的動力特性、附著、轉形、存活、移動及免疫反應等細胞過程，其中該些效應蛋白包含蛋白激酶C(protein kinase C,PLCε)、Ras及Rab交互子1(Ras and Rab interactor 1,Rin1)、Ral鳥嘌呤核苷酸解離刺激劑(Ral guanine nucleotide dissociation stimulator,RalGDS)及Tiam1，而Tiam1則會進一步活化Rac、RhoB、NF-κB及c-Jun N端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)。

經法尼基轉移酶作用而產生法尼基化的Ras蛋白具有功能活性，可調控下游的細胞過程。已知過量表現法尼基轉移酶會造成與細胞生長異常、神經退化、早衰老化或異常免疫反應相關之不同疾病或病理徵狀。

有鑑於此，相關領域亟需一種可抑制法尼基轉移酶活性的法尼基轉移酶抑制劑，其可作為一種先導化合物，據以製備可治療與法尼基轉移酶活化相關之疾病及/或病症的藥物。

發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。

本揭示內容是關於可有效抑制法尼基轉移酶之活性的新穎化合物。基於該抑制功效，本揭示內容亦提供包含該新穎化合物的藥學組合物及其用途。

因此，本揭示內容的第一態樣是關於一種化合物，其係具有如式(1)之化學結構：

及其藥學上可接受的鹽類(salt)、溶劑化物(solvate)或立體異構物(stereoisomer)，其中R₁是氫或羥基，且R₂是羥基或甲氧基。

在某些實施方式中，式(1)化合物可以是式(1a)化合物或其藥學上可接受的鹽類、溶劑化物或立體異構物：

其中R₁是H或羥基，且R₂是羥基或甲氧基。

在其他實施方式中，式(1)化合物可以是式(1b)化合物或其藥學上可接受的鹽類、溶劑化物或立體異構物：

其中R₁是氫或羥基，且R₂是羥基或甲氧基。

本揭示內容第二態樣是關於一種用以治療與法尼基轉移酶活化相關之疾病或病症的藥學組合物。該藥學組合物包含一有效量之上述化合物、其藥學上可接受的鹽類、溶劑化物或立體異構物；以及一藥學上可接受之載體。

依據本揭示內容某些實施方式，與法尼基轉移酶活化相關的疾病或病症可以是腫瘤、神經退化性疾病、早衰性老化症、感染性疾病或免疫性疾病。

本揭示內容第三態樣是關於一種用以治療一罹患或疑似罹患與法尼基轉移酶活化相關之疾病或病症之個體的方法。該方法包含對該個體投予一治療有效量之一或多種上述化合物、其藥學上可接受的鹽類、溶劑化物或立體異構物，或是本揭示內容所述之藥學組合物。

在本揭示內容實施方式中，與法尼基轉移酶活化相關的疾病或病症可以是腫瘤、神經退化性疾病、早衰性老化症、感染性疾病或免疫性疾病。

依據一實施方式，腫瘤可以是黑色素瘤、白血病、腦癌、舌癌、大腸直腸癌、食道癌、胃癌、肺癌、多發性骨髓瘤、膀胱癌、乳癌、胰臟癌、腎臟癌、肝癌、膽管癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巢癌、***癌或頭頸部鱗狀細胞癌。

依據另一實施方式，神經退化性疾病是選自由阿滋海默症(Alzheimer's disease)、帕金森氏症(Parkinson's disease)、亨丁頓氏症(Huntington's disease)及肌肉萎縮性脊髓側索硬化症 (Amyotrophic lateral sclerosis)所組成的群組。

依據再另一實施方式，該早衰性老化症是早衰症(progeria)。

依據另一實施方式，感染性疾病可由寄生蟲、病毒或細菌所引起。

在某些實施方式中，免疫性疾病可以是自體免疫性疾病、移植相關疾病、過敏性疾病、發炎性疾病、敗血症或休克。

在一特定實施方式中，可接受本發明方法治療的個體是一人類，且本發明化合物的治療有效量約為每公斤0.08-10.0毫克。較佳地，本發明化合物的治療有效量約為每公斤1毫克。

本揭示內容的第四態樣是關於一種於活體外抑制免疫細胞生長、分化或功能的方法。該方法包含將該免疫細胞與一有效量之一或多種上述化合物、其藥學上可接受的鹽類、溶劑化物或立體異構物，或是本揭示內容所述之藥學組合物共同培養。

依據本揭示內容某些實施方式，免疫細胞是一抗原呈現細胞(antigen-presenting cell)。在一特定實施方式中，該抗原呈現細胞是樹突細胞(dendritic cell)。在另一特定實施方式中，該抗原呈現細胞是巨噬細胞(macrophage)。

依據本揭示內容其他實施方式，本發明化合物的有效量至少為1μM；較佳地，本發明化合物的有效量約為1-100μM；最佳地，本發明化合物的有效量約為2-50μM。

在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。

為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖為依據本揭示內容一實施例所闡述之照片，其係關於以(A)Mib-8或Mib-10，(B)Mib-5、Mib-6或Mib-7，或是(C)特定治療處理後巨噬細胞的外觀形態；第2圖為依據本揭示內容另一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後巨噬細胞的細胞存活率；第3圖為依據本揭示內容一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後巨噬細胞的CD14表現量；第4圖是為依據本揭示內容另一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後巨噬細胞的CD80表現量；第5圖為依據本揭示內容再另一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後巨噬細胞的CD206表現量；第6圖為依據本揭示內容一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後巨噬細胞的吞噬作用(phagocytosis)百分比；第7圖為依據本揭示內容一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後樹突細胞的細胞數量；第8圖為依據本揭示內容一實施例所闡述之照片，其係關於以特定化合物處理後樹突細胞的外觀形態；第9圖為依據本揭示內容另一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後樹突細胞的CD1a表現量；第10圖為依據本揭示內容一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後樹突細胞的CD83表現量；第11圖為依據本揭示內容一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後樹突細胞的CD14表現量；第12圖為依據本揭示內容一實施例所闡述之柱狀圖，其係關於以特定化合物處理後樹突細胞的HLA-DR表現量；以及第13圖為依據本揭示內容另一實施例所闡述之存活曲線，其中是對受體小鼠投予特定化合物後，觀察其皮膚同種異體移植物(allograft)的存活率。

根據慣常的作業方式，圖中各種特徵與元件並未依比例繪製，其繪製方式是為了以最佳的方式呈現與本發明相關的具體特徵與元件。此外，在不同圖式間，以相同或相似的元件符號來指稱相似的元件/部件。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。

雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比(例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者)均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。在此處，將數值範圍表示成由一端點至另一段點或介於二端點之間；除非另有說明，此處所述的數值範圍皆包含端點。

除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。此外，在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。

在本揭示內容中，「藥學上可接受之載體」(pharmaceutically acceptable carrier)是指適合與治療成分一起使用的物質，不會影響產生不當的副作用(例如毒性、刺激性及過敏反應)，且具有合理的效益/風險比。此外，各載體需為「可接受的」(acceptable)，即各載體需與藥學組合物之其他成分相容。載體可以是固體、半固體、液體稀釋劑、霜劑或膠囊形式。

在本揭示內容中，「治療」(treating)一詞包含部份或完全預防、改善、減輕及/或處理與法尼基轉移酶相關之病徵、次要病徵或症狀。「治療」(treating)一詞於本說明書中亦指對一個體應用或投予本揭示內容之一或多種化合物，或是包含一或多種化合物的組合物，其中該個體係患有與法尼基轉移酶相關之病徵、次要病徵或症狀，藉以達到部份或完全減輕、減緩、治癒疾病、延遲發病、抑制病程發展、降低疾病嚴重性，及/或降低一或多個與法尼基轉移酶相關之病徵、症狀、或次要病徵的發生。與法尼基轉移酶相關之病徵、次要病徵及/或症狀包含，但不限於腫瘤、神經退化性疾病、早衰性老化症、感染性疾病及免疫性疾病。在此「治療」亦可以是投予至患有早期該些病徵或症狀之個體，以降低該個體發展成為與法尼基轉移酶相關之病徵、次要病徵及/或症狀的風險。若可減少一個或多個病徵或臨床標記，則該治療為「有效」治療。或者是，若可降低、減緩或終止疾病病程、病徵或症狀的發展，則該治療為「有效」治療。

「有效量」(effective amount)在此處係指一藥物的用量足以產生所欲的療效反應。具體的有效量取決於多種因素，如欲治療的特定狀況、患者的生理條件(如，患者體重、年齡或性別)、接受治療的哺乳動物或動物的類型、治療持續時間、目前療法(如果有的話)的本質以及所用的具體配方和化合物或其衍生物的結構。有效量亦指一種化合物或組合物，其治療利益效果超越其毒性或有害影響。舉例來說，可將有效量表示成藥物的總重量(譬如以克、毫克或微克為單位)或表示成藥物重量與體重之比例(其單位為毫克/公斤(mg/kg))。習知技藝者可依據動物模式的劑量來計算藥物(如本揭示內容之化合物)的人體等效劑量(human equivalent dose,HED)。舉例來說，習知技藝者可依據美國食品藥物管理局(US Food and Drug Administration,FDA)所公告之「估算成人健康志願者在初始臨床治療測式之最大安全起始劑量」(Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)來估算人體使用之最高安全劑量。

「個體」(subject)一詞是指包含人類的動物，其係依據本揭示內容之方法，能接受本揭示內容之化合物的治療。除非特定指出，否則「個體」(subject) 一詞同時意指男性及女性，且可以是任何年齡，例如兒童或成人。

本揭示內容是關於一種如式(1)之化合物、一種包含該化合物之藥學組合物及其用途：

其中，R₁是氫或羥基，且R₂是羥基或甲氧基。

此外，本揭示內容亦包含式(1)化合物的鹽類及溶劑化物，據以製備本揭示內容所述藥學組合物及/或應用於本揭示內容所述之方法。本揭示內容的各化合物更包含一或多種立體異構物，因此可以鏡像異構物(enantiomer)之外消旋混合物或非鏡像異構物之混合物的形式存在。本發明因此包含該些化合物之純立體異構物及其混合物。可利用習知技術(例如結晶、色層分析及使用解析劑)以非對稱合成法合成出該立體異構物或解析出該立體異構物。較佳是藉由製備性高效液相層析技術(preparative high performance liquid chromatography,HPLC)由外消旋混合物中將鏡像異構物彼此分離。或者是，可將外消旋混合物與溶於溶劑之光學活性解析劑進行反應，據以將鏡像異構物彼此分離。依據解析劑的光學形式，在二種鏡像異構物中，其中一種鏡像異構物會以具有高產率及高光學純度的不溶性鹽類形式析出，而另一鏡像異構物則會留存於溶液中。本發明因此更包含本揭示內容所述之化合物的光學異構混合物。本發明亦包含本揭示內容所述之化合物的結構異構物(configurational isomer)(例如順式及反式異構物，而不論其是否具有雙鍵)，其可以混合物、純化形式或幾近純化形式存在。本揭示內容更包含式(1)化合物的所有可能立體異構物及幾何異構物(geometric isomers)。本發明同時包含外消旋化合物及光學活性異構物。此外，若式(1)化合物具有互變異構物(tautomer)，則本揭示內容亦包含化合物之所有的互變異構物。

本揭示內容的化合物可以鹽類形式存在。本發明方法較佳是使用本揭示內容所述之藥學上可接受的鹽類。可由化合物最終的分離及純化過程或是藉由將化合物與一帶有一適當陽離子之酸類反應來製備式(1)化合物的鹽類。式(1)化合物之藥學上可接受的鹽類可以是由藥學上可接受之酸類所形成的酸加成鹽(acid addition salts)。用以形成藥學上可接受鹽類的酸類示例包含無機酸(例如，硝酸、硼酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸)及有機酸(例如，草酸、順丁烯二酸、琥珀酸、酒石酸和檸檬酸)。本發明例示性的化合物鹽類包含，但不限於氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、2-羥乙基磺酸鹽(2-hydroxyethansulfonate)、磷酸鹽、磷酸氫鹽、醋酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、甲酸鹽、琥珀酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、抗壞血酸鹽、羥乙磺酸鹽、水楊酸鹽、甲磺酸鹽、均三甲苯磺酸鹽(mesitylenesulfonate)、萘磺酸鹽(naphthylenesulfonate)、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽(2-naphthalenesulfonate)、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate)、果凍酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽(picrate)、新戊酸鹽、丙酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸鹽、麩胺酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽(paratoluenesulfonate)、十一酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、葡萄糖酸鹽、甲磺酸鹽、乙二磺酸鹽(ethanedisulfonate)、苯磺酸鹽(benzene sulphonate)及對甲苯磺酸鹽(p-toluenesulfonate)。另外，下述鹽類化合物可對本發明化合物之可用的氨基進行季銨化(quaternized)：含甲基(methyl)、乙基(ethyl)、丙基(propyl)及丁基(butyl)的氯化物、溴化物和碘化物；含二甲基、二乙基、二丁基及二戊基的硫酸鹽；含癸基、十二烷基、十四烷基及十八烷基的氯化物、溴化物及碘化物；以及含苯甲基及苯乙基(phenethyl)的溴化物。鑑於前述，此說明書中任何關於式(1)化合物的引述皆包含式(1)化合物及其藥學上可接受之鹽類或溶劑化物。

如同上述，法尼基轉移酶會經由Ras訊息傳遞路徑參與調控不同的細胞過程；因此，過量表現法尼基轉移酶可能會導致諸如腫瘤、神經退化性疾病、早衰性老化症及異常免疫反應等疾病。依據本揭示內容實施方式，式(1)化合物可抑制法尼基轉移酶的活性，因此可作為先導化合物，據以製備用以治療與法尼基轉移酶活化相關之疾病及/或病症的藥物。

此外，依據本揭示內容某些實施方式，式(1)化合物可抑制免疫細胞的生長、分化或功能。在一實施方式中，免疫細胞是樹突細胞。在另一實施方式中，免疫細胞是巨噬細胞。已知樹突細胞及巨噬細胞皆為抗原呈現細胞，可將抗原呈現給T細胞，進而引發下游的免疫反應。因此，除了上述與法尼基轉移酶過量表現相關之疾病以外，式(1)化合物亦可用以製備一藥物，以治療與異常及/或不當免疫反應相關之疾病。

具體來說，例式性之可利用本發明式(1)化合物治療的疾病包含，但不限於，腫瘤、神經退化性疾病、早衰性老化症、感染性疾病或免疫性疾病。更具體來說，腫瘤可以是黑色素瘤、白血病、腦癌、舌癌、大腸直腸癌、食道癌、胃癌、肺癌、多發性骨髓瘤、膀胱癌、乳癌、胰臟癌、腎臟癌、肝癌、膽管癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巢癌、***癌及頭頸部鱗狀細胞癌。神經退化性疾病是選自由阿滋海默症、帕金森氏症、亨丁頓氏症及肌肉萎縮性脊髓側索硬化症所組成的群組。該早衰性老化症是早衰症。該感染性疾病可由寄生蟲、病毒或細菌所引起。免疫性疾病可是自體免疫性疾病、移植相關疾病、過敏性疾病、發炎性疾病、敗血症、休克或其他由異常免疫反應或過度免疫反應所造成的疾病。

在某些實施方式中，式(1)化合物為式(1a)化合物：

其中，R₁是氫或羥基，且R₂是羥基或甲氧基。

依據一實施方式，本揭示內容提供了化合物Mib-5，其具有如式(1a)之化學結構，其中R₁是氫，且R₂是甲氧基。依據另一實施方式，本揭示內容提供了化合物Mib-6，其具有如式(1a)之化學結構，其中R₁是羥基，且R₂是甲氧基。依據再另一實施方式，本揭示內容提供了化合物Mib-7，其具有如式(1a)之化學結構，其中R₁及R₂皆為羥基。依據另一實施方式，本揭示內容提供了化合物Mib-9，其具有如式(1a)之化學結構，其中R₁是氫，且R₂是羥基。

在其他實施方式中，式(1)化合物為式(1b)化合物：

其中，R₁是氫或羥基，且R₂是羥基或甲氧基。

依據一特定實施方式，本揭示內容提供了一種如式(1b)之化合物，其中R₁及R₂皆為羥基(即Mib-8)。依據另一特定實施方式，本揭示內容提供了一種如式(1b)之化合物，其中R₁是氫，且R₂是羥基(即Mib-10)。

式(1)化合物包含以下化合物：

可利用任何本發明所屬技術特定具有通常知識者熟知的方法來製備式(1)化合物。舉例來說，可依據本揭示內容操作實施例所述步驟，由植物美洲含羞草(Mimosa diplotricha)來萃取式(1)化合物。

本揭示內容的第二態樣是關於一種用以治療一罹患或疑似罹患與法尼基轉移酶活化相關之疾病或病症之個體的方法。更具體來說，該疾病或病症可以是腫瘤、神經退化性疾病、早衰性老化症、感染性疾病或免疫性疾病。

本揭示內容之方法是利用式(1)化合物(特別是式(1a)或(1b)化合物)來治療與法尼基轉移酶活化相關的疾病。本揭示內容之方法可對個體投予式(1)之純化合物或其藥學組合物。可以在特定疾病或病症發病期間或之後，投予式(1)之純化合物或其藥學組合物。一般來說，藥學組合物為無菌且不包含投予後會產生副作用之毒性、致癌性或致突變性化合物。

依據本揭示內容某些實施方式，本發明方法可治療的腫瘤可以是黑色素瘤、白血病、腦癌、舌癌、大腸直腸癌、食道癌、胃癌、肺癌、多發性骨髓瘤、膀胱癌、乳癌、胰臟癌、腎臟癌、肝癌、膽管癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巢癌、***癌或頭頸部鱗狀細胞癌。神經退化性疾病是選自由阿滋海默症、帕金森氏症、亨丁頓氏症及肌肉萎縮性脊髓側索硬化症所組成的群組。該早衰性老化症是早衰症。該感染性疾病可由寄生蟲、病毒或細菌所引起。免疫性疾病可是自體免疫性疾病、移植相關疾病、過敏性疾病、發炎性疾病、敗血症、休克或其他由異常免疫反應或過度免疫反應所造成的疾病。

在某些實施方式中，本發明方法包含對個體投予一治療有效量之式(1)化合物。在一特定實施方式中，本發明方法包含對個體投予一治療有效量之式(1a)化合物；而在另一特定實施方式中，本發明方法包含對個體投予一治療有效量之式(1b)化合物

依據本揭示內容一實施方式，該個體為一小鼠，且本發明化物(即式(1)化合物)的治療有效量約為每公斤1-100毫克；亦即，治療有效量可以是每公斤1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100毫克；較佳地，治療有效量約為每公斤5-50毫克。在一操作實施例中，治療有效量為每公斤10毫克。

習知技藝人士可依據動物模式決定的投予劑量來計算本發明化合物(即式(1)化合物)的人體等效劑量。因此，對人類的治療有效量約為每公斤0.08-10.0毫克；亦即，治療有效量可以是每公斤0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0或10.0毫克。在一較佳實施方式中，治療有效量約為每公斤0.5-5.0毫克。更佳的是，治療有效量約為每公斤1.0毫克。

可將本揭示內容之化合物(例如式(1)化合物)與適當之藥學上可接受之載體或賦形劑結合，以製備藥學組合物，且配製為固體、半固體或液體形式，例如錠片、膠囊、粉末、顆粒、軟膏、溶液、栓劑和注射劑。因此，活性化合物可以經由不同路徑投予至個體體內，例如口服、頰內、直腸、非口服、腹腔內注射等方式。在藥劑的形式上，活性化合物可以單獨或與其他已知的藥學活性劑合併施予以治療藉由抑制與法尼基轉移酶相關之疾病或徵狀而獲得療效的疾病和症狀。各途徑所適用之不同藥劑型式為該技術領域習知技藝者所熟知。需知在任何情況下，最佳施予途徑取決於疾病的本質或疾病的嚴重程度，或是治療的特定狀況。

在某些實施方式中，本揭示內容的藥學組合物是以固體劑型作口服施予。該些固體劑型可以是膠囊、密封袋、錠片、丸劑、錠劑、粉末或顆粒。在該些劑型中，將活性成分(如任一種上述化合物)與至少一種藥學上可接受之賦形劑混合。任何上述之固體劑型可選擇性地包含包衣(coatings)和殼層(shells)，例如腸溶包衣(enteric coatings)及用以改善任何成分之釋放率的包衣。該些包衣的範例為該技術領域所熟知的。在一實施例中，本揭示內容的藥學組合物為錠片，例如快速釋放錠片(quick-release tablets)。在另一實施例中，本揭示內容的藥學組合物配製為長效釋放劑型(sustained release forms)。在再一實施方式中，本揭示內容的藥學組合物為粉末，其係包覆於軟式及硬式明膠膠囊中。

在某些實施方式中，本揭示內容的藥學組合物是以液體劑型作口服施予。液體劑型可以更包含一緩衝藥劑以維持一期望的pH值。亦可將液體劑型填充於軟式明膠膠囊中。舉例來說，液體可以包含一溶液、懸浮液、乳膠、微浮膠、沈澱物或任何期望的液體介質，其係帶有任一種上述之化合物，或一藥學上可接受之衍生物、鹽類或其溶劑化物，或其組合。液體可加以設計來改善上述活性化合物之溶解度，以形成一包含藥物的乳膠或經釋放後的分散質(disperse phase)。

在某些實施方式中，本揭示內容的藥學組合物是適用於非口腔施予的劑型，例如注射施予，其係包含但不限於皮下、彈丸注射(bolus injection)、肌肉、腹腔及靜脈注射。藥學組合物可以配製成油性或水性的等張懸浮液、溶液或乳膠，且可以包含處方藥劑(formulatoary agents)，例如懸浮、穩定或分散藥劑。另外，組合物可以製成乾燥形式，例如粉末、晶體或冷凍乾燥的固體，並附與使用前為無菌且無熱原(pyrogen-free)的水或等張生理食鹽水。組合物亦可置於無菌的安瓶(ampoules)或小瓶(vials)中。

基於對免疫細胞的抑制功效，本揭示內容第三態樣是關於一種於活體外抑制免疫細胞生長、分化或功能的方法。該方法包含將該免疫細胞與一有效量之式(1)化合物或其藥學組合物共同培養。

依據本揭示內容某些實施方式，該免疫細胞是抗原呈現細胞，例如樹突細胞或巨噬細胞。在該些實施方式中，有效量至少為1μM。較佳地，有效量約為1-100μM，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100μM。更佳地，有效量約為2-50μM。依據一特定實施方式，10μM之式(1)化合物即足以於活體外抑制樹突細胞或巨噬細胞的生長、分化或功能。

已知巨噬細胞主要可分為二細胞群：M1巨噬細胞(亦稱為典型活化巨噬細胞)及M2巨噬細胞(亦稱為替代型活化巨噬細胞)。可利用脂多醣(lipopolysaccharide,LPS)或干擾素-γ (interferon-γ,IFN-γ)等來活化M1巨噬細胞，活化後的M1巨噬細胞會分泌大量的介白素-12(interleukin-12,IL-12)及少量的IL-10；因此，M1巨噬細胞通常會引起發炎反應。相反地，可藉由IL-4等來活化M2巨噬細胞，活化後的M2巨噬細胞會產生IL-10及腫瘤生長因子-β(tumor growth factor-β,TGF-β)等抗發炎細胞激素；因此，M2巨噬細胞通常會促進抗發炎反應。依據本揭示內容一實施方式，對一巨噬細胞群投予一有效量之本發明化合物(即式(1)化合物)或其藥學組合物會減少該些巨噬細胞的存活率，並藉由降低CD80(一種M1巨噬細胞的分化標誌)的表現量及增升CD206(一種M2巨噬細胞的分化標誌)的表現量，促使M1及M2巨噬細胞群之間的平衡偏向M2巨噬細胞群。

依據本揭示內容另一實施方式，對樹突細胞投予一有效量之本發明化合物(即式(1)化合物)或其藥學組合物會減少該些樹突細胞的存活率，並降低分化標誌(例如CD1a)及成熟標誌(例如CD83)的表現量。

下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。

實施例

材料及方法

細胞培養及處理

利用Ficoll-Hypaque密度離心及抗CD14微磁珠的正向篩選法，由已簽署知情同意書之健康供體的周邊血分離單核球細胞(Mononuclear cell,MNC)。

將分離出之CD14⁺細胞培養於包含10%胎牛血清、每毫升100奈克之顆粒細胞巨噬細胞群落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF,Gentaur)及每毫升50奈克之IL-4(R&D)的MEM細胞培養液(Minimum Essential Medium)中，並將細胞置於包含5% CO₂/95%空氣的37℃環境中培養。

為評估本發明化合物對樹突細胞的功效，於第1天分別對CD14⁺細胞投予10μM之測試化合物(即Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8、Mib-9及Mib-10)。接著，在第3天時，加入一半體積之包含相同測試化合物的細胞培養液。之後於第6天時，加入包含IL-1、IL-6及腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的細胞激素混合液以促使細胞成熟。在第7天時，收集分化的樹突細胞，並進行包含細胞存活試驗、外觀形態觀察及細胞標誌染色等分析。

至於本發明化合物對巨噬細胞的功效，除了於第6天加入細胞激素混合液之步驟外，利用上述方法培養及處理CD14⁺細胞。於第6天收集巨噬細胞，並進行後續包含細胞存活試驗、台盼藍(trypan blue)排除試驗、外觀形態觀察、細胞標誌染色及吞噬活性分析等試驗。

分化分析

加入脂多醣來誘發新鮮分離之CD14⁺細胞進行M1分化，而加入IL-4來誘發新鮮分離之CD14⁺細胞進行M2分化。之後，加入特定劑量之本發明化合物(例如Mib-5、6、7、8、9或10)。6天後，利用細胞存活試驗來決定分化巨噬細胞的類型。

台盼藍排除試驗

利用染色排除試驗來決定細胞懸浮液中存活細胞的數量。存活細胞由於具有完整的細胞膜，可將包含台盼藍、伊紅(eosin)或丙啶(propidium)等染劑排除於細胞之外，死亡的細胞則無法排除該些染劑。在本試驗中，先對細胞投予測試化合物(即Mib-5、6、7、8、9或10)一段時間(例如72小時)後，收集細胞後，使細胞懸浮於適當的緩衝溶液中。將細胞懸浮液與台盼藍染劑均勻混合，再以肉眼觀察來分析細胞是否吸收或排除該染劑。存活細胞具有乾淨的細胞質，而非存活細胞則具有藍色的細胞質。72小時後，利用二級多項式迴歸模型(second-order polynomial regression model)及SigmaPlot軟體(Systat Software Inc.,San Jose,California)由不同濃度之測試化合物所得的劑量相關曲線來分析可減少50%細胞存活率的濃度(IC₅₀)。

以劉氏染色(Liu’s Staining)來分析細 胞外觀形態

將細胞轉移至蓋玻片上，並以溶液A(0.5克之甲基藍及1.7克之伊紅黃，溶於1,000毫升的乙醇中)封蓋之。45秒後，以2：1(溶液B：溶液A)的比例加入溶液B(1.3克之天藍染料(azure)、1.4克之甲基藍、23.38克之Na₂HPO₄及6.5克之KH₂PO₄，溶於1,000毫升的蒸餾水中)。輕吹表面以混合溶液。將玻片放置90秒後，以流動的水快速沖洗染色溶液。以顯微鏡來檢測染色細胞的外觀形態。

細胞存活試驗

利用細胞計數套組-8(CCK-8,Sigma)來分析細胞存活率。計算測試化合物對巨噬細胞或樹突細胞的半最大抑制濃度(IC₅₀)。

細胞標誌分析及染色

利用與螢光異硫氰酸鹽(fluorescein isothiocyanate,FITC)及藻紅素(phycoerythrin,PE)結合之單株抗體以FACS測量器來偵測不同細胞標誌的表現量，包含表現於巨噬細胞表面的CD14、CD206及CD80，以及表現於樹突細胞表面的CD1a、CD14、CD83及HLA-DR。本實驗使用的單株抗體包含抗-CD14(IgG-FITC)、抗-CD206(IgG-FITC)、抗-CD80-PE、抗-CD1a-PE、抗-CD83-PE及抗-人類白血球抗體(HLA)-DR-PE。利用CellQuest軟體來分析結果。

吞噬試驗

利用流式細胞儀來檢測巨噬細胞的吞噬活性。將綠色螢光乳膠磁珠(以羧酸鹽修飾的磁珠，直徑為2微米)懸浮於PBS溶液中，再加入巨噬細胞培養盤中，於37℃輕微搖晃培養盤2小時。以流式細胞儀來檢測巨噬細胞的螢光強度。

抑制法尼基轉移酶

修改已知方法(Long et al.,2009)於384孔洞微盤(最終體積為20微升)來進行此部分的實驗。簡單來說，將10nM之大鼠PFTase(Jena Biosciences,Jena,Germany)與測試化合物或DMSO(1%)共同培養15分鐘，再將該混合物加入一溶液(50mM Tris-HCl(pH 7.5)、5mM MgCl₂、5mM DTT、0.1mM ZnCl₂、0.2%辛基-β-D-喃葡萄糖(octyl-β-D-glucopyranoside,Sigma,St.Louis,MO)、10μM PFTase受質橫醯-Gly-Cys-Val-Leu-Ser-OH(dansyl-Gly-Cys-Val-Leu-Ser-OH)及10μM法尼基焦磷酸鹽(farnesyl pyrophosphate,Sigma,St.Louis,MO))，據以誘發反應發生。將反應物置於37℃反應30分鐘，接著利用M5培養盤讀取器(Molecular Devices,CA,USA)以340奈米的激發波長及505奈米的吸收波長來偵測螢光。

動物實驗

由台灣國科會的動物資源中心(台北，台灣)購買6到8週大的C57BL/6(H-2^b)及BALB/c(H-2^d)公鼠。所有的動物實驗皆經馬偕紀念醫院的動物倫理委員會許可。依照標準程序進行皮膚移植手術。簡單來說，由C57BL/6供體小鼠收集一2 x 1公分的全層皮膚移植物。於BALB/c受體小鼠製備一移植床(graft bed)。將皮膚移植物縫合至受體的移植床。若超過80%之移植物的表皮面積產生壞死現象，即定義為排斥反應。測試的試劑包含載體組(作為對照組)、Mib-5(每天每公斤10毫克)、Mib-7(每天每公斤10毫克)及雷帕黴素(rapamycin，每天每公斤1.5毫克，作為正對照組)。每天以腹腔注射方式投予治療，連續投予20天，直到觀察到排斥反應。

實施例1 製備及確認式(1)化合物

1.1 製備式(1)化合物

取乾燥的美洲含羞草根部(1.8公斤)，以酒精(40公升)加熱迴流萃取3次，在減壓環境中濃縮萃取物。濃縮的酒精萃取物以水與氯仿進行分佈分配，取得氯仿萃取物。氯仿萃取物(42克)以矽膠管柱進行層析分離，在乙酸乙酯/正己烷沖提系統下沖提，分成23個次分劃(Frs.1-23)。分劃-15(1.12克)，-16(565毫克)，分別經Sephadex LH-20與半製備型高壓C18管柱(20 X 250毫米，5微米；70% ACN/H₂O沖提，流速：每分鐘4.7毫升)反覆分離純化，由分劃-15得到Mib-5(14毫克)、Mib-6(12毫克)、Mib-7(8毫克)、及Mib-8(20毫克)，由分劃-16得到Mib-9(4毫克)及Mib-10(14毫克)。

1.2 本發明化合物的結構

本實施例是利用1D及2D NMR、UV以及HR MS光譜試驗來分析式(1a)及(1b)化合物的結構。以X光晶體分析及CD光譜來決定各化合物的絕對構型。於化合物Mib-5、6、7及9可發現8S,9S,10S,12R,1”S及6”R的絕對構型；而於化合物Mib-8及10則可發現8S,9S,10S,12S,1”R及6”S的絕對構型。

1.2.1 Mib-5

UV(MeOH)λ_max(log ε)281(4.06)nm；IR(KBr)ν_max 3429,1705,1625,1604,1439,1376,1366,1204,1165,1089cm^-1；[α]²⁶ _D -82.4°(c 0.38,MeOH)；¹H NMR(CDCl₃,600MHz)；¹³C NMR(CDCl₃,150MHz)參見表1及表2；ESIMS m/z 613[M-H]^-；HRESIMS m/z 615.2970[M+H]⁺(計算C₃₇H₄₃O₈,615.2958).；CD[nm(Δε(3.2毫克/50毫升之MeOH)：307(-0.3),288(+6.5),273(-0.5),260(+4.3),241(-6.1),234(-4.8),211(-8.4)。

1.2.2 Mib-6

UV(MeOH)λ_max(log ε)255(4.43)nm；IR(KBr)ν_max 3534,3400,1707,1660,1609,1433,1344,1205,1160,1113,1080cm^-1；[α]²⁶ _D -172.8°(c 0.415,CHCl₃)；¹H NMR(CDCl₃,600MHz)；¹³C NMR(CDCl₃,150MHz)參見表1及表2；ESIMS m/z 629[M-H]^-；HRESIMS m/z 631.2914[M+H]⁺(計算C₃₇H₄₃O₉, 631.2907)；CD[nm(Δε(2.9毫克/50毫升之MeOH)：356(-1.0),323(+1.5),294(-5.1),269(+23.0),249(-19.6),229(-10.3),214(-17.7)。

接著將Mib-6進行X光分析，其中是將MeOH溶液緩慢蒸發後形成的無色晶體(0.20×0.15×0.05毫米³)固定在配有銅放射(λ=1.54178Å)的Nonius CCD繞射儀上。晶體數據：C₃₇H₄₆O₁₁，Mr=666.74克/莫耳，斜方。細胞參數：a=10.4620(11)Å，b=12.5584(8)Å，c=26.2046(19)Å，V=3442.9(5)Å³，晶格群P2₁2₁2₁(Z=4)，D _calc=1.286毫克/米³，F(000)=1424。共收集7104反射(4821單一，R _int=0.0913)，範圍為3.90°<θ<67.99°。利用直接方法解析結構，並以滿矩陣最小平方之F ²數值來細化修改。最終指數為R ₁=0.0799，wR ₂=0.2036，適配性=1.069。

1.2.3 Mib-7

UV(MeOH)λ_max(log ε)255(4.08)nm；IR(KBr)ν_max 3432,1722,1659,1607,1443,1352,1155,1108cm^-1；[α]²⁶ _D -124.8°(c 0.52,MeOH)；¹H NMR(CD₃OD,600MHz)；¹³C NMR(CD₃OD,150MHz)參見表1及表2；ESIMS m/z 615[M-H]^-；HRESIMS m/z 617.2745[M+H]⁺(計算C₃₆H₄₁O₉,617.2751)；CD[nm(Δε(2.6毫克/50毫升MeOH)：357(-0.5), 324(+0.6),295(-2.6),269(+10.1),248(-8.9),227(-4.7),206(-12.4)。

1.2.4 Mib-8

UV(MeOH)λ_max(log ε)256(4.16)nm；IR(KBr)ν_max 3465,1703,1661,1606,1443,1410,1356,1208,1172,1097,1026cm^-1；[α]²⁶ _D +172.9°(c 0.45,MeOH)；¹H NMR(CD₃OD,600MHz)；¹³C NMR(CD₃OD,150MHz)參見表1及表2；ESIMS m/z 615[M-H]^-；HRESIMS m/z 617.2754[M+H]⁺(計算C₃₆H₄₁O₉,617.2751)；CD[nm(Δε(2.7毫克/50毫升MeOH)：363(+2.2),321(-0.3),296(+1.3),271(-9.2),250(+10.0),241(+6.3),216(-2.5).

接著將Mib-8進行X光分析，其中是將MeOH溶液緩慢蒸發後形成的無色晶體(0.25×0.20×0.15毫米³)固定在配有銅放射(λ=1.54178Å)的Nonius CCD繞射儀上。晶體數據：C₃₈H₄₈O₁₁,Mr=680.76克/莫耳，斜方。細胞參數：a=7.72090(10)，b=15.8528(3)，c=28.9225(5)Å，V=3540.05(10)Å³，晶格群P2₁2₁2₁(Z=4)，D _calc=1.277毫克/米³，F(000)=1456。共收集12264反射(6451單一，R _int=0.0232)，範圍為3.06°<θ<67.96°。利用直接方法解析結構，並以滿矩陣最小平方之F ²數值來細化修改。最終指數為R ₁=0.0515，wR ₂=0.1444，適配性=0.989。

1.2.5 Mib-9

UV(MeOH)λ_max(log ε)250(3.70),277 sh.(3.58)nm；IR(KBr)ν_max 3469,1705,1624,1375,1085cm^-1；[α]²⁶ _D -51.6°(c 0.35,MeOH)；¹H NMR(CDCl₃,600MHz)；¹³C NMR(CDCl₃,150MHz)參見表1及表2；ESIMS m/z 599[M-H]^-；HRESIMS m/z 601.2804[M+H]⁺(計算C₃₆H₄₁O₈,601.2801)；CD[nm(Δε(2.9毫克/50毫升MeOH)：308(+0),291(+1.4),276(+0.3),261(+2.5),244(-2.4),236(-1.8),223(-3.5),212(-3.7)。

1.2.6 Mib-10

UV(MeOH)λ_max(log ε)240 sh.(4.13),278(4.04)nm；IR(KBr)ν_max 3433,1709,1668,1645,1464,1381,1322,1209,1175cm^-1；[α]²⁶ _D +234.7°(c 0.42,MeOH)；¹H NMR(CDCl₃,600MHz)；¹³C NMR(CDCl₃,150MHz)參見表1及表2；ESIMS m/z 599[M-H]^-；HRESIMS m/z 601.2794[M+H]⁺(計算C₃₆H₄₁O₈,601.2801)；CD[nm(Δε(2.9毫克/50毫升MeOH)：340(+2.8),316(+0.4),306(+0.7),265(-7.5),244(+9.8),229(+6.4),221(+7.9),207(+2.3)。

1.3 本發明化合物對法尼基轉移酶活性的影響

在本實施例中，將測試式(1a)及(1b)化合物對法尼基轉移酶的功效，其中FTase抑制劑II是作為正對照組，表2總結該些結果。

如表3所述，相較於Mib-9及Mib-10之半最大抑制濃度(IC₅₀)分別為47及28μM，Mib-5、6、7及8更具有抑制法尼基轉移酶的潛力，其IC₅₀皆小於10μM。因此，實施例1.2及1.3將僅對Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8及Mib-10進行後續分析。

1.4 本發明化合物對巨噬細胞之存活率、外觀形態、極化反應(polarization)及細胞功能的影響

實施例1.4將依據「材料及方法」所述之方法來分析Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8及Mib-10對巨噬細胞之細胞功能的影響，包含外觀形態的改變、細胞存活率、分化及不同細胞標誌的表現量。第1到5圖及表3到表6總結了該些結果。

第1圖為代表性照片。投予Mib-8或Mib-10後，約有20%的細胞會呈現附著的外觀形態(第1圖之圖A)；而投予Mib-5、Mib-6或Mib-7的細胞則會呈現圓形，不會附著於支持基質上(第1圖之圖B)。接著以劉氏染色來分析細胞的外觀形態；結果指出，相較於對照組，投予實施例1.1之任一種化合物(即Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8或Mib-10)皆不會顯著改變細胞的外觀形態(第1圖之圖C)。

台盼藍分析進一步確認，除了Mib-6對巨噬細胞具有些微毒性外，Mib-5、Mib-7、Mib-8及Mib-10皆不會負向影響細胞的存活率(第2圖)。該些結果指出，在式(1a)及(1b)的化合物中，Mib-5、Mib-7、Mib-8及Mib-10可分別抑制巨噬細胞的法尼基轉移酶，而不會影響其細胞存活率。

表4則是關於本發明化合物對巨噬細胞之分化的影響。相較於對照組(即未投予治療的細胞)，投予Mib-7或Mib-10會降低巨噬細胞的M1細胞群，且會增加約40%的M2細胞群。Mib-5或Mib-6皆會顯著降低M1細胞群，且會些微減少M2細胞群。Mib-8不會影響M2細胞群，而會減少約20%的M1細胞群。

第3到5圖及表5到表7分別闡述了本發明化合物對CD14、CD80及CD206等細胞標誌表現的影響。

值得注意的是，投予Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8或Mib-10皆不會影響CD14的總表現量(第3圖)。此外，投予本發明化合物(即Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8或Mib-10)不會改變M1細胞群，而會顯著降低M2細胞群(表5)。至於CD80，投予Mib-5、Mib-6或Mib-7會顯著降低CD80的總表現量，而投予Mib-8或Mib-10則會增加CD80的總表現量(增加約為對照組的2倍)(第4圖)。此外，投予Mib-5、Mib-6、Mib-7或Mib-8會降低M1細胞群；而投予Mib-5、Mib-7、Mib-8或Mib-10則會增加M2細胞群(表6)。關於CD206，在投予Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8或Mib-10後可觀察到CD206表現量的增加(第5圖)；投予Mib-5、Mib-6、Mib-7或Mib-8會顯著降低M1細胞群，而投予Mib-5、Mib-6或Mib-7則會增加M2細胞群(表7)。

第6圖闡述了本發明化合物對M1及/或M2細胞群之吞噬活性的功效，其中相較於對照組，投予Mib-5、Mib-7、Mib-8及Mib-10皆會減少吞噬活性，Mib-6則不會影響細胞的吞噬活性。

整體來看，本實施例的數據證實本發明化合物(包含Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8及Mib-10)皆可作為法尼基轉移酶抑制劑，其不具有顯著的細胞毒性，且會將M1/M2細胞群間的平衡趨向累積M2細胞群。因此，本發明化合物可作為一種用以製備抗發炎藥劑的先導化合物，據以治療由過度免疫反應所造成的免疫疾病。

1.5 本發明化合物對樹突細胞之細胞存活率、外觀形態、分化及成熟的影響

本實施例將探討本發明化合物對樹突細胞的作用功效。簡單來說，本實施例是對樹突細胞投予10μM之Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8或Mib-10。7天後收集細胞，觀察細胞的外觀形態，並分析細胞存活率及/或細胞標誌之表現。

依據台盼藍排除試驗分析結果，投予Mib-5、Mib-6或Mib-7會降低樹突細胞的存活率，而投予Mib-8及Mib-10則不會影響細胞的存活率(第7圖)。

接著利用劉氏染色來分析細胞的外觀形態。結果指出，相較於對照組，投予Mib-5、Mib-6或Mib-7會引發細胞死亡而改變其外觀形態，並造成較少量的樹突分化反應。相較之下，投予Mib-8或Mib-10則不會顯著影響細胞的外觀形態(第8圖)。

利用流式細胞儀來分析CD1a、CD14、CD83或HLA-DR於樹突細胞的表現量。CD1a是一種樹突細胞的分化標誌，投予Mib-5、Mib-6或Mib-7可抑制該標誌的表現，相較之下，投予Mib-8或Mib-10則不會產生影響(第9圖)。CD83是一種樹突細胞的成熟標誌，結果顯示投予Mib-5、Mib-6或Mib-7會抑制該標誌的表現，而Mib-8或Mib-10則不會影響該表現量(第10圖)。本發明Mib化合物皆不會影響單核球/ 巨噬細胞標誌(CD14，可用以評估再分化結果，第11圖)及第II型MHC分子HLA-DR(第12圖)的表現量。

上述結果指出，Mib-5、Mib-6及Mib-7皆會抑制樹突細胞的存活率、分化及成熟。

實施例2 利用皮膚移植排斥的實驗動物模式來分析Mib-5及Mib-7的活體內功效

利用C57BL/6(H-2^b)小鼠作為供體鼠，BALB/c(H-2^d)小鼠作為受體鼠進行皮膚同種異體移植試驗，據以分析Mib-5及Mib-7對同種異體移植物之存活率的影響，其中雷帕黴素是作為正對照組。如第13圖的結果所示，投予Mib-5或Mib-7可顯著延長受體鼠之皮膚移植物的平均存活率。

總結上述，本揭示內容提供了6種新穎化合物(即Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8、Mib-9及Mib-10)，其中5種化合物(即Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8及Mib-10)具有抑制法尼基轉移酶活性的功效，且不會產生任何細胞毒性。此外，本揭示內容亦證實該5種可抑制法尼基轉移酶的化合物(即Mib-5、Mib-6、Mib-7、Mib-8及Mib-10)可調控巨噬細胞的極化反應及細胞功能，並影響樹突細胞的分化及成熟。因此，本發明化合物可作為潛力候選先導化合物，據以製備可用以治療與法尼基轉移酶活化相關之疾病及/或病症(例如免疫性疾病)的藥物。

雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。

Claims

一種如式(1)之化合物或其藥學上可接受的鹽類或立體異構物，
其中，R₁是氫或羥基，且R₂是羥基或甲氧基。
如請求項1所述之化合物，其中該化合物具有如式(1a)之化學結構，其中R₁及R₂分別如請求項1所定義，
如請求項1所述之化合物，其中該化合物具有如式(1b)之化學結構，其中R₁及R₂分別如請求項1所定義，
一種如式(1)之化合物的用途，其係用以製備一藥物以治療一罹患移植排斥或發炎性疾病的個體，
其中，R₁是氫或羥基，且R₂是羥基或甲氧基。
如請求項4所述之用途，其中該藥物投予至該個體體內的劑量約為每公斤0.08-10.0毫克。