TWI682940B - 抗ceacam1抗體及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供了帶有對CEACAM1特異的經改良之結合能力的抗CEACAM1抗體，及其用途。根據本發明的抗CEACAM1抗體展現對CEACAM1特異的優越結合能力，亦活化了細胞毒性T細胞與自然殺手細胞的抗癌免疫功能，於是，彼等的每一者皆可有效地用作抗癌劑與用於治療癌症的組成物。

Description

抗CEACAM1抗體及其用途
技術領域 本發明關於特異地結合至CEACAM1的抗CEACAM1抗體、及其用途。
背景技藝 癌胚抗原相關細胞黏附分子1 (此後稱作CEACAM1)，一種跨膜糖蛋白，屬於癌胚抗原(CEA)家族。在CEA家族成員中，CEACAM1、CEACAM3、CEACAM4、CEACAM5、CEACAM6、CEACAM7與CEACAM8在人體中表現。更重要的是，CEACAM1是在包括活化T細胞與自然殺手細胞的淋巴球群體中表現的CEA家族的唯一成員。已報導CEACAM1在癌細胞中高度表現。此外，在上皮細胞、內皮細胞、和骨髓細胞也觀察到低位準的CEACAM1表現。在淋巴球表面上，CEACAM1在調控免疫回應時發揮作用。明確地說，CEACAM1已被證明是活化T細胞的抑制性受體，包括人類腸上皮細胞所內含者(Gray-Owen & Bloomberg,Nat. Rev. Immunol. 2006; 6:433-446; Moraleset al., J. Immunol , 1999; 163: 1363-1370)。
尤其，CEACAM1被認為是類似於PD-1與CTLA-4的免疫檢查點分子，在調節T細胞活化時發揮關鍵作用。免疫檢查點途徑在非炎性生理條件下保護組織免於免疫所介導的損傷。當CEACAM1在T淋巴球上被活化時，主要在CEACAM1-CEACAM1反位嗜同接合之後，CEACAM1藉由向其自身的細胞質ITIM基序招募磷酸酶來發出信號以抑制TCR所介導的炎症途徑(Chen et al.,J. Immunol. 2008; 180: 6085-6093)。於是，抑止癌症背景下的免疫檢查點途徑已成為有前景的抗癌治療策略。
對數種人類腫瘤類型的研究已報導，腫瘤可藉由誘發CEACAM1來避免免疫。此外，在臨床前動物腫瘤模型中，已顯示使用單株抗體(mAbs)阻斷CEACAM1相互作用可增強針對腫瘤的免疫回應，促進腫瘤抑止作用(Ortenberg et al.,Mol. Cancer Ther. 2012； 11(6):1300-1310)。
習用抗癌藥物的最大議題之一是與其有限且具有高復發率的抗癌功效相比，治療所帶來的有害副作用。另一方面，最近引人注目的方式─所謂的免疫檢查點阻斷─係藉由再度活化腫瘤反應性耗竭的T細胞而非直接殺死癌細胞來消除癌症。這類方式似乎相對安全有效，因為它利用宿主免疫功能來消除癌症，並能夠保持不相關的正常細胞不受影響。就來自必治妥施貴寶(Bristol-Myers Squibb)的靶向PD-1的保疾伏(nivolumab)而言，毒性特徵在可掌控範圍內，相較於習用抗癌藥物，而其抗癌效果顯著高於習用藥物。在2015年發表的治療轉移性黑色素瘤患者的保疾伏與標準化療劑達卡巴仁(dacarbazine)之間的彼此直接比對(head-to-head comparison)的第III期研究中，舉例來說，保疾伏顯示40%客觀回應率(95% CI，33.3至47.0)，相較於達卡巴仁的13.9% ORR (95% CI，9.5至19.4)。保疾伏組的中位無進展存活期為5.1個月，而達卡巴仁組為2.2個月。毒性剖析亦確信保疾伏係優於達卡巴仁(Robert et al.,New Engl. J. Med. 2015; 372:320-330)。
同時，CEACAM1阻斷抗體係作用在細胞毒性T細胞和自然殺手細胞表面上表現的CEACAM1，與腫瘤細胞上過度表現的CEACAM1分子相互作用。因此，在過度表現CEACAM1的腫瘤中，預期CEACAM1靶向抗體可阻斷T/NK細胞和腫瘤細胞之間的CEACAM1-CEACAM1嗜同性抑止相互作用，藉此再度活化抗腫瘤T/NK細胞回應。目前正在開發的CEACAM1靶向抗體(第1期臨床試驗在2017年2月提早中止)除了CEACAM1外，亦可識別CEACAM3與CEACAM5。該BMS選殖體的此類脫靶識別性質可能是由於其在人類CEACAM1、CEACAM3與CEACAM5高度同源的N域中的表位序列。
發明揭示內容 技術問題
因此，為了開發特異地結合至CEACAM1的抗CEACAM1抗體，發明人已致力於發現抗CEACAM1抗體係結合至CEACAM1的N-域而不與CEACAM3、CEACAM5、CEACAM6或CEACAM8交叉反應，並已完成本發明。問題的解決
根據本發明的一個目的，提供有一種抗CEACAM1抗體或其片段，其包含：輕鏈CDR1，其包含選自於由SEQ ID NOS: 1至8所構成之群組的胺基酸序列中之一者；輕鏈CDR2，其包含選自於由SEQ ID NOS: 9至16所構成之群組的胺基酸序列中之一者；輕鏈CDR3，其包含選自於由SEQ ID NOS: 17至29所構成之群組的胺基酸序列中之一者；重鏈CDR1，其包含選自於由SEQ ID NOS: 30至38所構成之群組的胺基酸序列中之一者；重鏈CDR2，其包含選自於由SEQ ID NOS: 39至46所構成之群組的胺基酸序列中之一者；以及重鏈CDR3，其包含選自於由SEQ ID NOS: 47至55所構成之群組的胺基酸序列中之一者。
根據本發明的另一個目的，提供有一種抗CEACAM1抗體或其片段，其包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 23所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
進一步地，根據本發明的另一個目的，提供有一種抗癌劑，其包含上述抗CEACAM1抗體或其片段作為活性成分。
另外，根據本發明的另一個目的，提供有一種抗癌佐劑，其包含上述抗CEACAM1抗體或其片段作為活性成分。
再者，根據本發明的另一個目的，提供有一種用於治療癌症的組成物，其包含上述抗癌佐劑與細胞治療劑。
而且，根據本發明的另一個目的，提供有一種用於治療癌症的方法，該方法包含將與上述抗CEACAM1抗體或其片段接觸過的淋巴球投予一個體。
此外，根據本發明的另一個目的，提供有一種用於抑制表現CEACAM1的腫瘤細胞之增殖的方法，該方法包含使該表現CEACAM1的腫瘤細胞與抗CEACAM1抗體或其片段接觸。發明的有利效應
根據本發明的抗CEACAM1抗體係特異地結合至CEACAM1，藉此活化細胞毒性T細胞與自然殺手細胞的抗癌免疫功能，於是，它可有效地用作抗癌劑以及用於治療癌症的組成物。
執行發明的最佳模式 此後，詳細說明本發明。
本發明提供了包含下列的抗CEACAM1抗體或其片段：輕鏈CDR1，其包含選自於由SEQ ID NOS: 1至8所構成之群組的胺基酸序列中之一者；輕鏈CDR2，其包含選自於由SEQ ID NOS: 9至16所構成之群組的胺基酸序列中之一者；輕鏈CDR3，其包含選自於由SEQ ID NOS: 17至29所構成之群組的胺基酸序列中之一者；重鏈CDR1，其包含選自於由SEQ ID NOS: 30至38所構成之群組的胺基酸序列中之一者；重鏈CDR2，其包含選自於由SEQ ID NOS: 39至46所構成之群組的胺基酸序列中之一者；以及重鏈CDR3，其包含選自於由SEQ ID NOS: 47至55所構成之群組的胺基酸序列中之一者。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 17所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 56所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
進一步地，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 106所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 18所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
另外，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 58所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
此外，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 107所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 19所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 60所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
而且，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 108所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 20所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 62所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
而且，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 109所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 10所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 17所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 64所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 110所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 10所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 21所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 66所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
進一步地，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 111所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 11所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 22所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 68所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
另外，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 112所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 10所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 17所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 48所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 64所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 88所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
而且，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 110所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 122所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 10所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 17所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 31所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 64所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 90所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 110所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 123所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 2所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 12所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 24所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 32所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 40所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 49所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
進一步地，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 72所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 92所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
另外，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 114所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 124所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 3所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 13所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 25所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 33所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 41所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 50所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
而且，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 74所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 94所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 115所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 125所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 4所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 14所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 23所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 34所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 42所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 51所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 76所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 96所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
進一步地，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 116所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 126所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 5所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 15所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 26所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 35所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 43所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 52所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
另外，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 78所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 98所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
而且，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 117所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 127所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 6所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 16所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 27所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 36所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 44所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 53所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 80所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 100所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 118所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 128所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 7所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 14所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 28所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 37所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 45所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 54所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
進一步地，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 82所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 102所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
另外，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 119所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 129所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 8所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 15所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 29所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 38所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 46所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 55所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
而且，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 84所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 104所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 120所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 130所表示之胺基酸序列的重鏈。
明確地說，上述抗CEACAM1抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 23所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 70所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
進一步地，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 113所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
本案所用的術語「抗體」是指結合至抗原並干擾抗原作用或消除抗原的免疫蛋白。有五種抗體，IgM、IgD、IgG、IgA與IgE，其中各者含有由重鏈恆定區基因μ、δ、γ、α，及ε製造的重鏈。在抗體技術中，主要使用IgG。IgG的四種同型是IgG1、IgG2、IgG3與IgG4，彼等的結構和功能特性可能不同。
再者，IgG具有由兩條重鏈蛋白(約50 kDa)和兩條輕鏈蛋白(約25 kDa)組成的Y形高度穩定的結構(分子量，約150 kDa)。抗體的輕鏈和重鏈被分為胺基酸序列在抗體間為全同的恆定區以及胺基酸序列在抗體間為不同的可變區。重鏈恆定區包含CH1、H (鉸鏈)、CH2和CH3域。各域是由兩個β-褶板組成，並藉由分子中的雙硫鍵聯接。重鏈和輕鏈的兩個可變區結合形成抗原結合位點。該抗原結合位點係存在於抗體的兩臂上，各臂一個，可與抗原結合的此類部分被稱為Fab (抗體結合片段)，不能與抗原結合的部分被稱為Fc (可結晶片段)。Fab和Fc係藉由撓性鉸鏈區連接。
再者，本案所用的術語"CDR"是指高度可變區，該高度可變區是就各個抗體而言在抗體的重鏈和輕鏈可變區具有不同胺基酸序列的位點，並指抗原結合位點。關於抗體的立體結構，CDR在抗體的表面上形成環形，並且在該環下方存在框架區(FR)，以在結構上支持CDR。在重鏈和輕鏈的各者中有三個環結構，該等六個環結構彼此結合，以直接地接觸抗原。
再者，該抗體片段可為選自於由下列所構成之群組中之一者：Fab、scFv、F(ab)2 ，及Fv。抗體片段是指排除Fc區的抗原結合域，其適於將刺激物與抗原的結合轉移至細胞或補體等的效應子功能，並可包括第三代抗體片段，例如單域抗體或微型抗體等。
此外，該抗體片段具有進入組織和腫瘤的良好滲透性，因為彼等具有相較於完整結構IgG的小型尺寸。由於彼等可在細菌中生產，因此彼等具有低生產成本的優點，並且可以在不期望將抗原與刺激物的結合轉移至細胞或補體的功能時使用，因為彼等不具有Fc。由於彼等在人體中的半衰期短，所以抗體片段係適用於體內診斷。然而，當構成該抗體的胺基酸中的一些鹼性、酸性或中性胺基酸彼此置換時，等電點(pI)可改變。抗體等電點的變化可引致諸如體內毒性副作用減少或抗體水溶性增加的變化，於是，在治療性抗體的情況下，可使用完整結構IgG，考慮到其親和力和結構形式。
再者，本發明的抗CEACAM1抗體或其片段的輕鏈可變域可具有含有由SEQ ID NOS: 56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82或84所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域序列，或其可與以上輕鏈可變域序列具有97%、98%或99%的同源性。
進一步地，本發明的抗CEACAM1抗體或其片段的重鏈可變域可具有含有由SEQ ID NOS: 86、88、90、92、94、96、98、102或104所表示之胺基酸序列的重鏈可變域序列，或其可與以上重鏈可變域序列具有97%、98%或99%的同源性。
另外，本發明的抗CEACAM1抗體或其片段可與含有由SEQ ID NOS: 56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82或84所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域序列、以及含有由SEQ ID NOS: 86、88、90、92、94、96、98、102或104所表示之胺基酸序列的重鏈可變域序列具有97%、98%或99%的同源性。
而且，抗CEACAM1抗體是指結合至CEACAM1的抗體。如本案所用，術語"C25"是抗CEACAM1抗體的一具體例。C25可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 23所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
再者，上述抗體或其片段可包含：含有由SEQ ID NO: 70所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO: 86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。在本案中，假使重鏈可變域的CDR1、CDR2，及CDR3是全同的，則框架部分可被修飾。尤其，若干框架部分的胺基酸序列可被修飾，以製造人源化抗體。
上述的CD25可包含：含有由SEQ ID NO: 113所表示之胺基酸序列的輕鏈，及含有由SEQ ID NO: 121所表示之胺基酸序列的重鏈。
C25的變化型可包含：含有由SEQ ID NO: 1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 9、10或11所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO: 17、18、19、20、21或22所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO: 30或31所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO: 39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO: 47或48所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。明確地說，在本發明的一個具體例中，C25的變化型在表1中顯示為1-19、1-23、3-07、3-27、4R9、4R20、4R26、4R9_H2-2和4R9_H4-n20。
再者，上述抗CEACAM1抗體或其片段係識別CEACAM1的N-域和B-域作為表位。再者，該抗體不與CEACAM3、CEACAM5、CEACAM6或CAECAM8交叉反應。
進一步地，本發明的抗CEACAM1抗體可藉由已知的單株抗體製備技術輕易地製備。用於製備單株抗體的方法可藉由使用來自致免疫動物的B淋巴球製備雜交瘤、或藉由使用噬菌體展示技術來實施，但不限於其等。
本發明亦提供了包含該抗CEACAM1抗體或其片段作為活性成分的抗癌劑。
包含抗CEACAM1抗體或其片段作為活性成分的本發明的抗癌劑可用於治療過度表現CEACAM1的癌症或腫瘤。明確地說，當在消除癌細胞發揮作用的細胞毒性T細胞的T細胞受體(TCR)識別癌症或腫瘤細胞的表位時，與TCR的一個組分CD4 (分化簇4)結合的LCK (淋巴球特異性蛋白酪胺酸激酶)蛋白係磷酸化TCR的另一個組分CD3ζ (分化簇3ζ)。當ZAP70 (仄他鏈相關蛋白激酶70)蛋白與該磷酸化的CD3ζ結合時，ZAP70蛋白的末端部分係再次被LCK蛋白磷酸化，藉此活化T細胞炎症途徑，包括RAS-MAPK (Ras-MAP激酶)信號轉導，於是T細胞被活化。
然而，在過度表現CEACAM1的癌細胞或腫瘤細胞的情況下，由於CEACAM1-CEACAM1相互作用，SHP1 (含Src同源區2域的磷酸酶-1)蛋白係與被結合至TCR的CD4末端的LCK蛋白質磷酸化的CEACAM1 ITIM (基於免疫受體酪胺酸的抑制基序)部分結合。再者，CD3ζ的末端與ZAP70一起被SHP1蛋白去磷酸化，於是，包括RAS-MAPK途徑的TCR下游信號傳導途徑未被活化，結果，T細胞未被活化。
於是，該抗CEACAM1抗體或其片段可經由結合至細胞毒性T細胞、自然殺手細胞和癌細胞中表現的CEACAM1來事先阻斷CEACAM1-CEACAM1相互作用而用作抗癌劑。
再者，本案所用的術語「抗癌」涵蓋了「預防」與「治療」。在本案中，「預防」是指藉由投予抗癌劑來防止癌症增殖和延遲癌症進展的所有行動，以及「治療」是指藉由投予本發明的抗體來改善或減輕癌症症狀的所有行動。
再者，本案所用的術語「癌症」可選自於由下列所構成之群組：胃癌、甲狀腺癌、胰臟癌、黑色素瘤、肺癌和骨髓瘤，但不限於其等。可能包括固體癌症和血癌，只要其具有CEACAM1作為受體且其免疫檢查點途徑異常即可，並無特別限制。再者，本發明提供了包含抗CEACAM1抗體或其片段作為活性成分的抗癌佐劑。
此外，本發明提供包含上述抗癌佐劑與細胞治療劑的用於治療癌症的組成物。該細胞治療劑可包括細胞毒性T細胞或自然殺手細胞。
再者，本案所用的術語「細胞治療劑」是指用於經由一系列行動來預防或治療的藥物，該一系列行動係藉由在體外增殖並選擇活的自體、同種異體，及異種細胞來改變生物學特性以恢復細胞與組織的功能。明確地說，該細胞治療劑可為細胞毒性T細胞或自然殺手細胞。
再者，所提供的是使用本發明的抗CEACAM1抗體或其片段治療癌症的方法。明確地說，該方法可包含將與該抗CEACAM1抗體或其片段接觸過的淋巴球投予一個體。淋巴球是一類白血球，佔所有白血球的約25%，可能是自然殺手細胞、T細胞和B細胞。再者，淋巴球可獲自一個體。較佳地，淋巴球可包括細胞毒性T細胞與自然殺手細胞的至少一者。癌症係如上所述。
再者，本案所用的術語「個體(subject)」是指處於藉由投予本發明的抗癌佐劑可緩解、抑止或治療疾病之狀態、或患有疾病的人。
再者，本案所用的術語「接觸(contacting)」亦指將該抗CEACAM1抗體或其片段和表現CEACAM1的細胞混合。
本案所用的術語「投藥」是指藉由適當方法將有效量的物質引進個體，其包含本發明的抗CEACAM1抗體或其片段的組成物的投藥可透過允許物質到達標靶組織的一般投藥途徑進行。明確地說，取決於預期的用途，該投藥可為胃腸外投藥(即，靜脈內、皮下、腹膜內或局部投藥等)，並且較佳地，其可為靜脈內投藥。在投至實體瘤的一些情況下，就抗體的快速和容易接近而言，局部投藥可為較佳的。劑量係取決於患者的體重、年齡、性別、健康狀況、飲食、投藥時間、投藥方法、***速度、和疾病嚴重性而有所異動。單次藥量可為約0.001至10 mg/kg，其可以每日或每週的基礎投藥。有效量可根據治療患者的醫師的判斷來調整。
根據本發明的用於治療癌症的組成物可以藥學有效量投予，以治療癌細胞或其轉移或抑制癌症生長。劑量可取決於癌症類型、患者的年齡和體重、症狀的本質和嚴重性、當前治療的類型、治療次數、投藥類型和途徑等而有所異動，並可由本領域專家輕易地決定。
對於本發明的組成物，上述藥理學或生理學組分可同時或依序投予，或者可依序或同時與額外的常規治療劑合併投予。此類投藥可為單次或多次投藥。重要的是要考慮到所有上述因素並以最小份量帶來最大效果而無副作用的份量投予，其可由熟習此藝者輕易地決定。
再者，本發明提供使用抗CEACAM1抗體或其片段抑制表現CEACAM1的腫瘤細胞之增殖的方法。明確地說，該方法可包含使表現CEACAM1的腫瘤細胞與抗CEACAM1抗體或其片段接觸。發明模式
此後，本發明係藉由實施例詳細解釋。下列實施例係意圖進一步例示本發明，而非限制其範疇。實施例1 抗CEACAM1 抗體(C25) 實施例1.1 製備抗CEACAM1 抗體
將以單鏈可變片段(scFv)形式***pComb3X載體(Addgene；目錄號63891)的抗體片段基因進行PCR，以獲得SEQ ID NOS: 57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83或85所表示之輕鏈可變區基因，以及SEQ ID NOS: 87、89、91、93、95、97、99、101、103或105所表示之重鏈可變區基因，其包括各個限制酶所識別的序列。重鏈基因用NotI和ApaI限制酶處理，輕鏈基因用NotI和BamHI限制酶處理。
將重鏈和輕鏈基因***以與重鏈或輕鏈基因相同的限制酶消化的pcIW載體(Promega；目錄號E1731)。隨後，使用限制酶選擇含有重鏈轉錄單元和輕鏈轉錄單元的載體。使用QIAGEN Plasmid Plus Midi套組(QIAGEN；目錄號12943)提取所選擇的載體，並且使用若干提取的DNA藉由鹼基序列分析來最終地識別抗體的鹼基序列。以上述鹼基序列為基準來分析抗體的胺基酸序列。所分析抗體的胺基酸序列和鹼基序列顯示在表1與表2。 [表1]
Figure 02_image001
[表2]
Figure 02_image003
濃度為每毫升2.5 × 106 個細胞的三十毫升ExpiHEK293F細胞(ThermoFisher scientific；目錄號A14527)係以30 μg提取的抗體DNA處理並轉染。在轉染隔天，將增強子(ThermoFisher；目錄號A14524)加至該轉染的ExpiHEK293F細胞並於振盪培育箱中以37°C、8% CO2 與125 rpm的條件培養7天，以產生抗CEACAM1抗體。
培養後，將藉由離心從培養基分離的上清液與100 μl蛋白質A珠(Repligen；目錄號CA-PRI-0100)一起培育2小時。珠子隨後用10 ml結合緩衝液(ThermoFisher Scientific；目錄號21019)洗滌。此後，將200 μl沖提緩衝液(ThermoFisher Scientific；目錄號21004)加至珠子中，以分離共軛至珠子的抗體。所分離的抗體係藉由加入10 μl的1.5M Tris-HCl pH8.8溶液(Bio-Rad；目錄號210005897)來中和。實驗實施例1 評估抗CEACAM1 抗體的結合能力 實驗實施例1.1 根據CEACAM1 域評估抗CEACAM1 抗體的結合能力
濃度為每毫升2.5 × 106 個細胞的三十毫升ExpiHEK293F細胞(ThermoFisher scientific；目錄號A14527)係以與人類免疫球蛋白Cκ域共軛的CEACAM1突變蛋白的30 μg DNA處理並轉染。再者，將增強子(ThermoFisher；目錄號A14524)加至該轉染的ExpiHEK293F細胞並於振盪培育箱中以37°C、8% CO2 與125 rpm的條件培養7天。
隨後，從培養基分離上清液並與κ選擇珠(GE Healthcare；目錄號17-5458-01)反應2小時。之後，珠子用10 ml結合緩衝液洗滌並加入200 μl沖提緩衝液，以從珠子分離並純化CEACAM1突變蛋白(圖1)。
將純化的CEACAM1突變蛋白的各者(2.5 μg)溶於1,000 μl PBS並以每孔20 μl分配至各孔，隨後於4°C反應16小時。再者，將1 μl C25稀釋在1,000 μl PBS並以每孔25 μl分配至各孔，隨後於37°C反應1小時。隨後，各孔以藉由將10 μl Tween 20 (Sigma-Aldrich；目錄號P9146)稀釋於990 μl PBS製備的洗滌緩衝液洗滌3次。之後，將與1 μl辣根過氧化物酶(HRP)共軛的人類IgG (HRP-共軛的抗人類IgG：Sigma；目錄號A0170)稀釋於5000 μl PBS，隨後將其以每孔25μl分配至各孔並於37°C培育1小時。
反應完成後，該等孔用洗滌緩衝液洗滌三次，將25 μl TMB溶液(KPL；目錄號52-00-03)加至各孔來誘發顯色。隨後，將25 μl的2 M H2 SO4 加至各孔以終止反應，並且在450 nm的波長測量吸光度。
結果，在C25的情況下，發現到N-域和B-域是以完全親和力結合的關鍵位點。發現到A1與A2就直接結合而言並非必要。於是，C25係主要結合至CEACAM1的N-域，為了以完全親和力結合，另外需要B-域。反之，相較於C25以其完全親和力結合，若干C25衍生的突變選殖體係以對於B-域具有最小或剩餘的依賴性結合至CEACAM1的N-域(圖2)。實驗實施例1.2 評估抗CEACAM1 抗體結合至CEACAM1 蛋白的結合能力
將兩微克的重組CEACAM1蛋白溶於1000 μl PBS，並以每孔50 μl分配至96孔盤(Nunc；目錄號467679)並於4°C培育16小時。之後，將300 μl的3% (v/v)牛血清白蛋白加至各孔並於37°C培育1小時。將C25抗體(0.75 μg)溶於1000 μl PBS。將稀釋的C25溶液與PBS以1:1體積比例連續稀釋，達14次。將15個不同稀釋的C25溶液的各者以每孔50 μl分配至各孔，並於37°C培育1小時。隨後，各孔以藉由將10 μl Tween 20 (Sigma-Aldrich；目錄號P9146)稀釋於990 μl PBS製備的洗滌緩衝液洗滌3次。之後，將與1 μl HRP共軛的人類IgG稀釋於5000 μl PBS，隨後將其以每孔50 μl分配至各孔並培育1小時。該等孔用洗滌緩衝液洗滌三次，並將50μl TMB溶液加至各孔來誘發顯色，隨後，將50 μl的2 M H2 SO4 加至各孔以終止反應。在450 nm的波長測量吸光度。
結果，測得EC50 (半最大有效濃度)值為0.35 nM (圖3)。
再者，將2.5 μg重組CEACAM-1/CD66a蛋白(R&D systems；目錄號2244-CM)溶於10 ml PBS，分以每孔100 μl分配至96孔盤(Nunc；目錄號467679)並於4°C培育過夜。之後，將300 μl的1% (v/v)牛血清白蛋白加至各孔，使其於37o C培育1小時。
將C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C25與C26抗體的各者(3μg)溶於1000 μl PBS。將稀釋的抗體各者與PBS以1:1體積比例的連續稀釋，達6次。將稀釋成7個濃度的抗體各者以每孔100 μl分配至各孔，並使其於37°C培育1小時。隨後，各孔以藉由將10 μl Tween 20 (Sigma-Aldrich；目錄號P9146)稀釋於990 μl PBS製備的洗滌緩衝液洗滌3次。之後，將2 μl與HRP共軛的人類IgG稀釋於10 ml PBS，隨後將其以每孔100 μl分配至各孔並培育1小時。
反應完成後，該等孔用洗滌緩衝液洗滌三次，將100 μl TMB溶液加至各孔來誘發顯色。隨後，將100 μl的2 M H2 SO4 加至各孔以終止反應，並且在450 nm的波長測量吸光度。
結果，發現C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C25和C26抗體係結合至CEACAM1蛋白(圖4)。實驗實施例1.3. 評估抗CEACAM1 抗體結合至表現在細胞表面上的CEACAM1 蛋白的結合能力
Jurkat T細胞(Jurkat E6.1 (ATCC； TIB-152TM))以CEACAM1 cDNA轉染，並用700 μg/ml G418抗生素處理以供選擇。將選出的CEACAM1-Jurkat T細胞系再次懸浮於補充有2% (v/v) FBS的DPBS (下稱FACS緩衝液)，於1,500 rpm離心，隨後再次懸浮於FACS緩衝液，俾使細胞數目為3x106 /ml。將細胞以每孔100 μl分配至U底96孔盤的各孔。隨後，將細胞於1,500 rpm離心，丟棄上清液。在將回收細胞再次懸浮於添加有0.5 μl人類Fc阻斷(BD Pharmingen；目錄號564220)溶液的50 μl FACS緩衝液後，使細胞於4o C培育15分鐘(圖5)。
將抗CEACAM1抗體或人類IgG4 (Sigma；目錄號I4639)稀釋於50 μl FACS緩衝液，以獲得20 μg/ml、10 μg/ml、5 μg/ml、2.5 μg/ml、1.25 μg/ml、0.625 μg/ml、0.3125 μg/ml與0.15625 μg/ml的濃度。將以上稀釋的五十毫升抗CEACAM1抗體或人類IgG4加至細胞並於4o C培育1.5小時。
將和抗體一起培育的細胞重複地投至將細胞再次懸浮於FACS緩衝液並以1,500 rpm離心溶液的洗滌流程。將標記有藻紅蛋白的山羊抗人類F(ab)2 (下稱PE) (藻紅蛋白-共軛的山羊抗人類F(ab)2 ；(Sigma；目錄號P8047))以1:200體積比例稀釋於FACS緩衝液，隨後將100 μl各個溶液加至各孔，將其在黑暗條件下於4o C培育30分鐘。
將該等細胞重複地投至將細胞再次懸浮於FACS緩衝液、以1,500 rpm離心溶液，並丟棄上清液的洗滌流程。隨後將細胞再次懸浮於100 μl固定緩衝液(BD CytofixTM ；目錄號554655)，並在暗處於4o C培育30分鐘。
將和固定緩衝液一起培育的細胞重複地投至將細胞再次懸浮於FACS緩衝液、以1,500 rpm離心溶液，並丟棄上清液的洗滌流程。將洗過的細胞再次懸浮於200 μl FACS緩衝液，並在FACS LSR-Fortessa中比對標記PE的細胞的平均螢光強度(MFIs)。所有FACS分析係使用FlowJo軟體執行。
觀察到C25結合至標靶的最大位準(MFI 1800或更多)是在5 μg/ml的濃度達到，但其結合能力在低於5 μg/ml的濃度時迅速下降(圖5a)。
以上製備的CEACAM1-Jurkat T細胞係以Fc阻斷溶液處理並培育15分鐘。隨後，將包括4R9、4R9_H2-2、4R9_H4-n20與4R26的C25與C25衍生的選殖體連同人類IgG4分別稀釋於50 μl FACS緩衝液至25 μg/ml、5 μg/ml、1 μg/ml、0.2 μg/ml、0.04 μg/ml、0.008 μg/ml、0.0016 μg/ml與0.00032 μg的濃度，隨後分配至細胞中，將其於4o C培育1.5小時。在此，注意到細胞數目係調整為1x105 。將和抗體一起培育的細胞重複地投至將細胞再次懸浮於FACS緩衝液並以1,500 rpm離心溶液的洗滌流程。
將PE-共軛的山羊抗人類F(ab)2 ；(Sigma；目錄號P8047))以1:200體積比例稀釋於FACS緩衝液，隨後以每孔100 μl加至細胞。將該等細胞充分地再次懸浮並並在黑暗條件下於4o C培育30分鐘。
將和固定緩衝液一起培育的細胞重複地投至將細胞再次懸浮於FACS緩衝液、以1,500 rpm離心溶液，並丟棄上清液的洗滌流程。將洗過的細胞再次懸浮於200 μl FACS緩衝液，並在FACS LSR-Fortessa中監測標記PE的細胞的平均螢光強度(MFIs)。所有FACS分析係使用FlowJo軟體執行。
與圖5a中的結果一致，C25顯示其靶標結合的最大位準(MFI 8008或更多)是在5 μg/ml的濃度，但在低於5 μg/ml的濃度，結合能力迅速下降。另一方面，即使在0.2 μg/ml的濃度，C25衍生的選殖體4R9、4R26，及4R9_H2-2的靶標結合能力亦維持其最大位準的高達80%或更高。此外，4R9_H4-n20選殖體的MFI值達到高達12,000或更多，顯示比其他選殖體的MFI值高出1.5倍(12,000 vs 8,000)，但是和C25相似，在低於5 μg/ml的濃度，結合能力迅速下降(圖5b)。實驗實施例1.4. 測量各個抗CEACAM1 抗體的標靶結合親和力
使用Octet QKe (Pall ForteBio)測量C25、4R9、4R26、4R9_H2-2、4R9_H4-n20與4R9_H4-n20HC+4R26LC對CEACAM1的定量結合能力。將實施例1所單離純化、濃度為400 nM的抗體以1:1一系列稀釋6次，將濃度為400 nM、200 nM、100 nM、50 nM、25 nM、12.5 nM與6.25 nM的所得抗體溶液連續分配至Greiner 96孔盤(Greiner；目錄號655209)。各排的最末孔是抗體濃度為0 nM的樣本。將重組人類CEACAM1蛋白(R&D Systems；目錄號2244-CM)稀釋，以獲得6.25 μg/μl的濃度並以每孔200 μl分配至另一列的各孔。
至於洗滌緩衝液、中和緩衝液和基線緩衝液，將試劑/動力學緩衝液(10X) (Fortebio；目錄號18-1092)以1:10稀釋並以每孔200 μl連續分配至一列的各孔，且該再生緩衝液係以每孔200 μl分配至各孔。分別地製備Greiner 96孔盤，將試劑/動力學緩衝液(1X)以每孔200 μl分配至欲使用的生物感測器號碼的各孔，並安裝生物感測器/抗His (His1K) (Fortebio；目錄號18-5120)匣。結合和解離週期分別設定為300秒和600秒，並測量KD 值。
結果，彼等對CEACAM1的親和力被測定為1.82 nM至39.0 nM的親和力(KD )值(圖6)。實驗實施例2 評估抗CEACAM1 抗體的物理性質 實驗實施例2.1 識別抗CEACAM1 抗體的等電點
將20毫升IEF陽極緩衝液(50x)與980 ml去離子水(下稱DW)混合，以製作1X IEF陽極緩衝液，並將20 ml IEF陰極緩衝液pH 3-10 (10X)與180 ml DW混合，以製作1X IEF陰極緩衝液。使1X IEF陽極緩衝液與1xIEF陰極緩衝液冷卻至4o C並使用。
使用IEF凝膠(Invitrogen/pH 3-10 IEF凝膠；1.0 mm x 10孔/EC6655BOX)，將上方腔室填充200 ml 1X IEF陰極緩衝液並將下方腔室填充600 ml 1X IEF陽極緩衝液。將混合有10 μl IEF樣本緩衝液(pH 3-10, 2X)的含有1.12 mg/ml濃度的10 μl C25的20 μl溶液取出的十五微升μl載入，並將5 μl IEF標記物3-10 (SERVA/10 mg/mL/SERVA Liquid Mix；39212.01)用作標記。
電泳係以100V: 1小時、200V: 1小時與500V: 30分鐘的三個步驟改變電壓來進行，並使用12% TCA溶液固定30分鐘。固定後，使用考馬斯藍R-250內含子生物技術(IBS-BC006)評估等電點。
結果，C25的實際等電點值為8.0，略高於其理論值7.76 (圖7)。實驗實施例3 測量抗CEACAM1 抗體對T 細胞活化的效應 實驗實施例3.1 藉由抗CEACAM1 抗體評估T 細胞活化
將Jurkat E6.1 (ATCC； TIB-152TM)細胞以1 × 105 /200 μl再次懸浮於補充有10% (v/v)胎牛血清(Gibco；目錄號16000044)與1X青黴素/鏈黴素(100X；Gibco；目錄號15140122)的完整的伊氏改良之都氏培養基(Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium) (IMDM；Invitrogen；目錄號12440053)，並在10 μg/ml或25 μg/ml的存在下，和塗覆在盤上的抗CD3 (OKT3；0.1 μg/ml；eBioscience；目錄號16-0037)於37o C與5% CO2 培育96小時。HuIgG4係用作對照組。
96小時後，回收細胞和培養基並以1,500 rpm離心。當留存上清液以供IL-2測量的同時，回收剩餘的細胞，以FACS緩衝液置換，並投至和Fc受體在4o C的阻斷步驟，達15分鐘。
使細胞和抗CD25-PE-Cy7抗體或抗CD69-APC抗體(eBioscience；抗CD25-PE-Cy7：目錄號25-0259；抗CD69-APC：目錄號17-0699)於4o C培育15分鐘。
將細胞填充FACS緩衝液到至多200 μl，並以1,200 rpm離心5分鐘，除去上清液。將細胞再次懸浮於新鮮的FACS緩衝液後，重複此流程三次，以完全除去未結合的抗體。將細胞再次懸浮於補充有1% (v/v)多聚甲醛的DPBS並於4°C固定30分鐘。
將細胞再次懸浮於lX FoxP3染色緩衝液(eBioscience；目錄號00-5523-00)並離心。重複此流程兩次後，將標記有不同染料的抗Ki67抗體(eBioscience；目錄號350520)以1: 100體積比例稀釋於1X FoxP3染色緩衝液，將其加至該細胞，以獲得總體積50 μl，隨後使混合物於4°C培育30分鐘。將細胞填充1X FoxP3染色緩衝液並離心。重複該洗滌三次後，將細胞施用於流式細胞術，以計數FACS LSR-Fortessa裝置中的活化的CD25+ CD69+ 細胞與另外的Ki67+ 增殖群，並使用FlowJo軟體分析(圖8與10)。
結果，當Jurkat T細胞以在Jurkat E6.1 T細胞的CCM1誘發條件(OKT3: 0.1 μg/ml，在cIMDM培養4天)下，以抗體濃度為10 μg/ml與25 μg/ml的C25處理時，觀察到高位準的活化。更明確地說，Jurkat T細胞的活化CD25+ CD69+ 群的百分比與數目皆增加兩倍或更高，增殖的Ki67+ 細胞的百分比與數目亦增加兩倍或更高，相較於以huIgG4處理的對照組(圖9b與11b)。實驗實施例3.2 藉由抗CEACAM1 抗體評估T 細胞的IL-2 分泌
為了評估藉由抗CEACAM1抗體，從T細胞分泌IL-2的變化，首先將抗IL-2抗體(capture Ab: eBioscience；目錄號14-7029-85)稀釋於包覆緩衝液(50 mM碳酸鹽/碳酸氫鹽緩衝液，pH 9.6)。隨後，將稀釋的抗IL-2抗體溶液以每孔200 μl分配96孔盤的各孔，並於4o C培育16至18小時。隨後，用DPBS與200 μl阻斷緩衝液(SuperBlock™ Blocking Buffer: ThermoFisher Scientific；目錄號37515)洗滌96孔盤，隨後將其於室溫培育30分鐘。
為了獲得標準曲線，將IL-2重組蛋白(R&D Systems；目錄號P60568)稀釋於阻斷緩衝液，以獲得20 μg/ml的濃度。將稀釋的IL-2重組蛋白溶液以1:1體積比例一系列稀釋11次。將十二個IL-2重組蛋白樣本與來自實施例3.1儲存在-80o C的Jurkat E6.1細胞培養物的上清液以每孔100 μl分配至塗有IL-2抗體的96孔盤的各孔，並在室溫培育2小時。
在以將10 μl Tween 20 (Sigma-Aldrich；目錄號P9146)稀釋於990 μl PBS製備的洗滌緩衝液洗滌96孔盤4次後，藉由將生物素-共軛的抗IL-2抗體(偵測抗體：eBioscience；目錄號13-7028)以1: 1,000的體積比例稀釋於阻斷緩衝液所製備的溶液以每孔100 μl分配至各孔，隨後將其於室溫培育2小時。
以洗滌緩衝液洗滌96孔盤4次後，藉由將過氧化物酶標記的鏈黴抗生物素蛋白(Sigma；目錄號S5512)以1: 1,000的體積比例稀釋於阻斷緩衝液所製備的溶液以每孔100 μl分配至各孔，隨後將其於室溫培育2小時。
以洗滌緩衝液洗滌96孔盤4次後，將TMB過氧化物酶受質溶液(KPL；目錄號52-00-02)以每孔100 μl分配至各孔，將其培育10分鐘。隨後，將終止溶液(KPL；目錄號50-85-05)以每孔100 μl加至該等孔，以終止反應。使用分子動力學讀取器裝置在450nm的波長測量O.D值。使用SoftMax Pro 5.4.1.分析測量值。
結果，當細胞以10 μg/ml與25 μg/ml抗體濃度的C25在Jurkat E6.1的CEACAM1誘發條件(OKT3，0.1 μg/ml，培養4天)處理時，使用上清液測得的分泌的IL-2位準比對照組高了約三倍(圖9c與11c)。實驗實施例3.3 藉由抗CEACAM-1 抗體評估過度表現CEACAM1 的T 細胞的活化
將EF1啟動子-CEACAM1-GFP載體轉染到Jurkat E6.1 T細胞中，隨後以濃度700 μg/ml的G418二硫酸鹽溶液(Sigma；G8168)處理以供選擇。使用螢光活化細胞分選儀將GFP+ CEACAM1+ 細胞分離，以構築過度表現CEACAM1的Jurkat細胞(CEACAM1-Jurkat T細胞)。
將衍生自Jurkat E6.1 (ATCC； TIB-152TM)細胞的CEACAM1-Jurkat T細胞再次懸浮於補充有10% FBS與1X青黴素/鏈黴素的200 μl IMDM中，以獲得1 × 105 的細胞數，隨後在10 μg/ml或25 μg/ml C25的存在下，以塗覆在盤上的OKT3 (0.1或1 μg/ml；eBioscience； 16-0037)刺激48小時。HuIgG4係用作對照組。
48小時後，回收細胞和培養基並以1,500 rpm離心。將上清液儲存在-80°C以用於IL-2 ELISA，回收其餘細胞，以FACS緩衝液置換，並投至和Fc受體在4o C的阻斷步驟，達15分鐘。細胞以CD25-PE-Cy7抗體或抗CD69-APC抗體處理，並於4o C培育15分鐘。
回收細胞，填充FACS緩衝液到至多200 μl，並於1,200 rpm離心5分鐘。將細胞再次懸浮於新鮮的FACS緩衝液後，重複此流程三次，以完全除去未結合的抗體。將細胞再次懸浮於補充有1% (v/v)多聚甲醛的DPBS並於4°C固定30分鐘。
將細胞填入lX FoxP3染色緩衝液到至多200 μl，並於1,200 rpm離心5分鐘，除去上清液。重複此流程兩次後，將標記有不同染料的抗Ki67抗體以1: 100體積比例稀釋，將其加至該等細胞，以獲得50 μl的總體積，隨後將該混合物於4o C培育30分鐘。
將細胞填入lX FoxP3染色緩衝液到至多200 μl，並於1,200 rpm離心5分鐘，除去上清液。重複此流程三次後，最後以FACS緩衝液置換，在FACS LSR-Fortessa裝置識別彼等當中的活化的CD25+ CD69+ 細胞與增殖的Ki67+ 細胞並使用FlowJo軟體分析(圖12與15)。
結果，在抗CEACAM1的存在下，低濃度OKT3 (0.1 μg/ml)的CEACAM1-Jurkat T細胞顯示高位準的活化。更明確地說，相較於huIgG4處理組所具者，CEACAM1-Jurkat T細胞的CD25+ CD69+ 群增加了1.5倍(C25，於25 μg/ml)或4倍或更多(C25，於10 μg/ml) (圖13b與14b)。
再者，在抗CEACAM1的存在下，高濃度OKT3 (1 μg/ml)的CEACAM1-Jurkat T細胞顯示高位準的活化。更明確地說，相較於huIgG4處理組所具者，CEACAM1-Jurkat T細胞的CD25+ CD69+ 群增加了2倍(C25，於25 μg/ml)或6倍或更多(C25，於10 μg/ml) (圖16b與17b)。實驗實施例3.4 藉由抗CEACAM1 抗體評估過度表現CEACAM1 的T 細胞的IL-2 分泌
為了評估抗CEACAM1抗體在過度表現CEACAM1的T細胞中所誘發的分泌IL-2位準的變化，將實驗實施例3.3中，從CEACAM1-Jurkat E6.1 T細胞分離並儲存於-80°C的上清液以如同實驗實施例3.2的相同方法投至ELISA。
結果，當過度表現CEACAM1的CEACAM1-Jurkat T細胞以培養條件(OKT3，濃度為0.1 μg/ml，培養2天)的10 μg/ml與25 μg/ ml抗體濃度的C25處理時，使用上清液測得的IL-2分泌位準係比對照組高了20倍或更多(圖13c與14c)。
此外，當過度表現CEACAM1的CEACAM1-Jurkat T細胞以另一培養條件(OKT3，濃度為1 μg/ml，培養2天)的10 μg/ml與25 μg/ ml抗體濃度的C25處理時，使用上清液測得的IL-2分泌位準係比對照組高了1.5倍或更多(圖16c與17c)。實驗實施例3.5 使用NFAT- 螢光素酶試驗評估藉由抗CEACAM1 抗體的T 細胞活化
將Jurkat-GFP/NFAT-luc細胞(不表現CEACAM1的細胞，過度表現NFAT-螢光素酶報導子的細胞)或Jurkat-CCM1/NFAT-luc細胞(過度表現CEACAM1的細胞，過度表現NFAT-螢光素酶報導子的細胞)以6 x 105 的細胞數目再次懸浮於各孔中，並分配至塗覆有0.05或0.1 μg/ml OKT3的96孔盤，並添加實施例1所製備之濃度為10 μg/ml的各個抗體與抗CD28 (28.2；eBioscience；目錄號16-0289-85；於1 μg/ml)。人類IgG4係用作陰性對照組。
培育6小時後，採集細胞，用PBS洗滌一次，並用80 μl被動裂解緩衝液裂解。將二十微升細胞裂解物分配至白色96孔試驗盤的各孔中，然後將其置於光度計裝置。將螢光素酶緩衝液裝入光度計 注射器中，並將80 μl螢光素酶緩衝液注入各孔中，以測量螢光素酶的活性。
結果，在6小時的培養條件，不表現CEACAM1的Jurkat-GFP/NFAT-luc中並無觀察到C25對CCM1依賴性T細胞抑制的抑制效應，而在6小時歷時期間，在Jurkat-CCM1/NFAT-luc細胞中，藉由C25，於0.05與0.1 μg/ml兩者的OKT3濃度，TCR所誘發之NFAT活化的增強位準係高了2倍或更多(圖18與19)。
再者，於0.1 μg/ml的OKT3濃度，以C25衍生的抗CEACAM1抗體處理的實驗組顯示比IgG4處理組高了1.5至2倍的NFAT-luc螢光素酶活性，其在統計學上是顯著的(圖20)。實驗實施例4 評估在人類與猴組織表現CEACAM1
製備EZ-Link™ Sulo-NHS-LC-LC-生物素(ThermoFisher Scientific；目錄號21338)的10mM溶液，在每1 mg C25添加13.3 μl溶液並於4°C進行生物素化2小時。將人類與猴TMA載玻片在60o C烘箱中脫蠟1小時。以二甲苯(100%)、酒精(90%)、酒精(80%)與酒精(酒精-DW)的順序逐步進行水合。
為了擷取抗原，將TMA載玻片在含有1.5 L Tris-EDTA pH 9.0緩衝液的恆溫水浴中處理，使其於100°C培育20分鐘。為了防止細胞內的過氧化物酶活性，對其添加100 μl的3%過氧化氫並培育6分鐘，隨後對其添加100 μl的5% (v/v)正常馬血清並培育30分鐘。
將一級抗體(生物素-共軛的hIgG4或C25；1 mg/ml)以1: 1或1: 5體積比例稀釋於100 μl染色緩衝液，並於室溫培育2小時。加入一百微升ABC試劑並培育30分鐘。加入DAB受質套組(VECTOR LABORATORIES；目錄號SK-4100)，接著顯色2分鐘，並用蘇木精比較性染色以供分析。由於在正常細胞的CEACAM1表現位準極低，所以抗體以相對高的濃度使用。
食蟹猴正常組織上的C25染色強度和人類正常組織上的C25染色強度相似，正常組織的CEACAM1表現位準非常低。因此，只有當用高濃度的C25處理組織時，才偵測到CEACAM1表現(圖21)。人類IgG4係以相同濃度用作C25的對照組(圖22)。實驗實施例5 評估抗CEACAM1 抗體的交叉反應性 實驗實施例5.1 使用人類IgG Fab 抗體評估抗CEACAM1 抗體對CEACAM 家族蛋白的交叉反應性
將所有的重組人類CEACAM-1/CD66a蛋白(R&D systems；目錄號2244-CM，HCCM1)、重組人類CEACAM-5/CD66e蛋白(R&D systems；目錄號4128-CM，HCCM5)、重組人類CEACAM-6/CD66c蛋白(R&D systems；目錄號3934-CM，HCCM6)、重組人類CEACAM-3/CD66d蛋白(Sino Biological；目錄號11933-H08H，HCCM3)、重組小鼠PD-1 Fc嵌合蛋白(R&D systems；目錄號1021-PD，mPD-1-Fc)、重組CEACAM1-Fc (IgG4)蛋白(Mogam，內部生產，HCCM1-Fc)、重組人類CEACAM-1/CD66a蛋白批量(R&D systems；目錄號2244-CM，HCCM1(批量))與小鼠CEACAM1/CD66a蛋白(Sino Biological；目錄號50571-M08H，小鼠CCM1) (各為2.5 μg)分別溶於10 ml PBS，並以每孔100 μl分配至96孔盤(Nunc；目錄號467679)，將其於4°C培育過夜。然後，各孔以300 μl的1% (v/v)血清白蛋白處理，將其於37o C培育1小時。
將三微克的C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C25與C26抗體分別溶於1000 μl PBS。將稀釋的抗體以每孔100 μl分配至塗覆有各個蛋白的各孔，將其於37o C培育1小時。隨後，各孔以將10 μl Tween 20 (Sigma-Aldrich；目錄號P9146)稀釋於990 μl PBS所製備的洗滌緩衝液洗滌3次。然後，將2 μl的RP-共軛人類抗IgG-Fab抗體(抗人類IgG Fab；Sigma；目錄號A0293)稀釋於10 ml PBS，以每孔100 μl加至該等孔，並培育1小時。
反應完成後，用洗滌緩衝液洗滌該等孔三次，將100 μl TMB溶液加至各孔來誘發顯色。隨後，將100 μl的2 M H2 SO4 加至各孔以終止反應，並且在450 nm的波長測量吸光度。
結果，所有的C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C25與C26抗體顯示對HCCM1、HCCM1 (批量)與HCCM1-Fc的結合能力的高位準。排除C17、C19、C22以外的CEACAM1抗體顯示對HCCM3、HCCM5與HCCM6的結合能力的基礎位準(圖23)。於是，推論本發明的抗CEACAM抗體僅特異地結合至CEACAM1。實驗實施例5.2 使用人類IgG Fc 抗體之抗CEACAM1 抗體對CEACAM 家族蛋白的交叉反應性
將所有的重組人類CEACAM-1/CD66a蛋白(R&D systems；目錄號2244-CM，HCCM1)、重組人類CEACAM-5/CD66e蛋白(R&D systems；目錄號4128-CM，HCCM5)、重組人類CEACAM-6/CD66c蛋白(R&D systems；目錄號3934-CM，HCCM6)、重組人類CEACAM-3/CD66d蛋白(Sino Biological；目錄號11933-H08H，HCCM3)、人類B7-H5/Gi24/VISTA蛋白(Sino Biological；目錄號13482-H08H，HVISTA)、重組人類CEACAM-1/CD66a蛋白批量(R&D systems；目錄號2244-CM，HCCM1 (批量))、重組人類CEACAM1-N域-κ蛋白(Mogam，內部生產，HCCM1-N域-κ), and BSA蛋白(各為2.5 μg)分別溶於10 ml PBS，並以每孔100 μl分配至96孔盤，將其於4°C培育過夜。然後，各孔以300 μl的1% (v/v)血清白蛋白處理，將其於37o C培育1小時。
將C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C25與C26抗體(3 μg)各別溶於1000 μl PBS。將稀釋的抗體以每孔100 μl分配至塗覆有各個蛋白的各孔，並於37o C培育1小時。隨後，各孔以將10 μl Tween 20 (Sigma-Aldrich；目錄號P9146)稀釋於990 μl PBS所製備的洗滌緩衝液洗滌3次。然後，將2 μl的HRP-共軛人類抗IgG-Fc抗體(抗人類IgG Fc，Sigma，目錄號A0170)稀釋於10 ml PBS，以每孔100 μl加至該等孔，並培育1小時。
反應完成後，用洗滌緩衝液洗滌該等孔三次，將100 μl TMB溶液加至各孔來誘發顯色。隨後，將100 μl的2 M H2 SO4 加至各孔以終止反應，並且在450 nm的波長測量吸光度。
結果，所有的C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C25與C26抗體顯示對HCCM1、HCCM1 (批量)與HCCM1-N-域-κ的結合能力的高位準，而排除C17、C19、C22以外的CEACAM1抗體顯示對HCCM3、HCCM5與HCCM6的結合能力的基礎位準(圖24)。於是，發現本發明的抗CEACAM1抗體僅特異地結合至CEACAM1。實驗實施例5.3 以抗CEACAM1 抗體評估表現在細胞上的CEACAM 家族蛋白的交叉反應性
對HEK293細胞添加各為10 μg的作為對照組載體的pEF1α-AcGFP-N1載體(Clontech，目錄號631973)、CEACAM1、CEACAM3、CEACAM5、CEACAM6與CEACAM8質體載體，接著在脈衝電壓1,100 V、脈衝寬度20 ms和脈衝數2的條件下轉染。轉染48小時後，藉由螢光顯微鏡確認GFP表現。該等細胞用1 ml TrypLE Express溶液(ThermoFisher Scientific；目錄號12605010)處理分開，再次懸浮於補充有10% (v/v) FBS的9 ml DMEM (Gibco，目錄號11995-065)，並以1,200rpm離心5分鐘，除去所得上清液。
用PBS洗滌一次後，將細胞再次懸浮於FACS緩衝液，以獲得5 x 105 個細胞/100 μl的濃度。將人類Fc阻斷溶液以每個樣本1 μl加至樣本，將其於4°C培育10分鐘。該等細胞以1 μg/5x105 個細胞的hulgG4或所列出的抗CEACAM1選殖體之一處理，將其於4°C培育10分鐘。用FACS緩衝液洗滌後，將標記PE的山羊抗huIgG4抗體以1: 200的比例稀釋於FACS緩衝液，並以每個樣本100 μl加至該等樣本，將其於4°C培育30分鐘。將樣本填充FACS緩衝液到至多200 μl，隨後於1,200 rpm離心5分鐘，以除去所得上清液。加入固定緩衝液(300 μl)將細胞再次懸浮。在FACS LSR-Fortessa裝置中選出表現GFP的細胞，使用專對各個CEACAM成員的抗體(表3)來分別地評估CEACAM成員的表現。再者，藉由PE螢光通道評估抗CEACAM1抗體的結合並使用FlowJo軟體分析。 [表3]
Figure 107110072-A0304-0001
結果，發現C25和C25所衍生的選殖體僅在CEACAM1所屬的CEACAM成員中特異地結合至CEACAM1 (圖25)。
此外，將HEK293細胞與各為10 μg的對照組載體、食蟹猴CEACAM1質體載體與人類CEACAM1質體載體混合，接著使用Neon轉染系統在脈衝電壓1,100 V、脈衝寬度20 ms與脈衝數2的條件下轉染。轉染48小時後，藉由螢光顯微鏡確認GFP表現，該等細胞用TrypLE Express溶液處理分開，並轉移至FACS緩衝液，以終止反應。
用PBS洗滌一次後，將細胞再次懸浮於FACS緩衝液，以獲得5 x 105 個細胞/100 μl的濃度。將人類Fc阻斷溶液以每個樣本1 μl加至樣本，將其於4°C培育10分鐘。該等樣本以濃度為1 μg/5x105 個細胞的人類IgG4或C25處理，將其於4°C培育1小時。用FACS緩衝液洗滌後，將標記PE的山羊抗huIgG4抗體以1: 200的比例稀釋於FACS緩衝液，並以每個樣本100 μl加至該等樣本，將其於4°C培育30分鐘。將樣本填充FACS緩衝液到至多200 μl，隨後於1,200 rpm離心5分鐘，以除去所得上清液。加入固定緩衝液(300 μl)將細胞再次懸浮。在FACS LSR-Fortessa裝置中選出表現GFP的細胞，使用對CEA家族的各個成員特異的抗體來評估CEACAM成員各者的表現。再者，和C25結合係藉由PE螢光通道評估並使用FlowJo軟體分析。
結果，發現C25不僅識別人類CEACAM1，亦識別猴(食蟹猴) CEACAM1 (圖26a)。C25所衍生的選殖體亦識別食蟹猴的CEACAM1以及人類蛋白(圖26b)。實驗實施例6 評估抗CEACAM1 抗體的抗癌效應
將癌細胞(MKN45: JCRB Cell Bank；目錄號JCRB0254； MKN1: JCRB Cell Bank；目錄號JCRB0252)以1x104 個/200 μl的濃度再次懸浮於RPMI 1640培養基(ThermoFisher Scientific；目錄號11875093)，並以每孔200 μl分配至96孔盤的各孔中，並在37o C與5% CO2 的條件下培養過夜。將未共軛的細胞連同培養基一起除去，對其添加相對於癌細胞呈不同比例的TALL-104 (ATCC；目錄號CRL-11386TM)或NK92MI (ATCC；目錄號CRL-2408TM)細胞(0:1, 0.1:1: 1:1, 10:1)。在此，亦將濃度為10 μg/ml的C25加至該等孔。作為對照組，以相同方式處理huIgG4。
共同培養6小時後，將未共軛的可溶細胞連同培養基一起除去，將Cell Titer 96 Aqueous One溶液(Promega；目錄號G3582)、MTS試驗試劑以1:4的比例稀釋於RPMI 1640培養基。將稀釋的溶液以每孔200 μl加至該等孔，並在暗處再培養3小時。然後，用分光光度計在490 nm波長下測量各個樣本的O.D值，並使用SoftMax Pro 5.4.1程式分析測量值。
結果，當藉由評估C25體外效力的方法來評估CTL (圖27：TALL-104)或NK (圖28：NK-92MI)細胞的抗癌效應時，發現到在表現高位準CEACAM1的MKN45胃癌細胞系的情況下，C25增加了CTLs與自然殺手細胞的抗癌免疫反應，而在MKN1的情況下，未觀察到C25的抗癌效應，MKN1是一種胃癌細胞系，其中未偵測到CEACAM1表現(圖27與28)。
此外，當C25所衍生的抗CEACAM1抗體選殖體的體外效應係以如同上文的相同方式於CEACAM1+ MKN45癌細胞系測試時，相較於對照組，藉由抗CEACAM1抗體的癌細胞死亡達到40至50%位準(圖29)。
圖1是根據一個具體例製備的重組CEACAMl結構的示意圖。
圖2顯示取決於重組CEACAM1構成域的抗CEACAM1抗體結合能力。
圖3例示取決於C25濃度之C25結合至重組CEACAMl的比較結果。
圖4展示取決於抗CEACAM1抗體濃度之抗CEACAM1抗體結合至CEACAM1。
圖5繪示取決於C25與C25所衍生的抗體選殖體的濃度，CEACAM1-Jurkat T細胞系表面上表現的CEACAM1的結合能力： (a)代表取決於C25的濃度，CEACAM1-Jurkat T細胞系表面上表現的CEACAM1的結合能力；以及(b)代表取決於C25所衍生的抗體選殖體的濃度，CEACAM1-Jurkat T細胞系表面上表現的CEACAM1的結合能力。
圖6是顯示抗CEACAM1抗體對CEACAM1的親和力的圖表。該親和力是藉由動力學速度常數Kon 與Koff 和平衡解離常數KD 獲得。
圖7是顯示C25的等電點的照片。第一道、第二道和第三道分別是IEF-標記物3-10、huIgG4，及C25的結果。
圖8顯示經由CD69、CD25與Ki67標記物表現，藉由C25連同抗CD3 (OKT3；0.1 μg/ml)抗體的Jurkat E6.1 T細胞系的活化。C25與huIgG4的濃度是10 μg/ml。
圖9是顯示藉由C25連同OKT3 (0.1 μg/ml)活化的Jurkat E6.1 T細胞的數目與IL-2分泌位準的圖。C25與huIgG4的濃度是10 μg/ml： (a)代表藉由C25連同OKT3增殖的Jurkat E6.1 T細胞的數目；(b)顯示表現CD69與Ki67標記物的活化T細胞；以及(c)顯示藉由C25活化的Jurkat E6.1 T細胞的IL-2分泌位準。
圖10例示經由CD69、CD25與Ki67標記物表現，藉由C25連同OKT3 (0.1 μg/ml)的Jurkat E6.1 T細胞系的活化。C25與huIgG4的濃度是25 μg/ml。
圖11是顯示藉由C25連同OKT3 (0.1 μg/ml)活化的Jurkat E6.1 T細胞的數目與IL-2分泌位準的圖。C25與huIgG4的濃度是25 μg/ml： (a)代表藉由C25連同OKT3增殖的Jurkat E6.1 T細胞的數目；(b)顯示表現CD69與Ki67標記物的活化T細胞；以及(c)顯示藉由C25連同OKT3活化的Jurkat E6.1 T細胞的IL-2分泌位準。OKT3的濃度是0.1 μg/ml
圖12展示經由CD69、CD25與Ki67標記物表現，藉由C25連同OKT3的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞系的活化。OKT3的濃度是0.1 μg/ml。
圖13是顯示藉由C25活化的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的數目與IL-2分泌位準的圖。OKT3與C25或對照組Ab的濃度分別是0.1 μg/ml 與10 μg/ml： (a)代表藉由C25連同OKT3增殖的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的數目；(b)顯示表現CD69與Ki67標記物的活化T細胞的數目；以及(c)顯示藉由C25連同OKT3活化的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的IL-2分泌位準。
圖14是顯示藉由C25連同OKT3活化的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的數目與IL-2分泌位準的圖。OKT3與C25或對照組Ab的濃度分別是0.1 μg/ml與25 μg/ml： (a)代表藉由C25連同OKT3增殖的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的數目；(b)顯示表現CD69與Ki67標記物的活化T細胞的數目；以及(c)顯示藉由C25連同OKT3活化的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的IL-2分泌位準。
圖15繪示經由CD69、CD25與Ki67標記物表現，藉由C25連同OKT3的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞系的活化。OKT3的濃度是1 μg/ml。
圖16是顯示藉由C25連同OKT3活化的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的數目與IL-2分泌位準的圖。OKT3與C25或對照組Ab的濃度分別是0.1 μg/ml與10 μg/ml： (a)代表藉由C25連同OKT3增殖的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的數目；(b)顯示表現CD69與Ki67標記物的活化T細胞的數目；以及(c)顯示藉由C25連同OKT3活化的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的IL-2分泌位準。
圖17是顯示藉由C25連同OKT3活化的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的數目與IL-2分泌位準的圖。OKT3與C25或對照組Ab的濃度分別是1 μg/ml與25 μg/ml： (a)代表藉由C25連同OKT3增殖的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的數目；(b)顯示表現CD69與Ki67標記物的活化T細胞的數目；以及(c)顯示藉由C25連同OKT3活化的過度表現CEACAM1的Jurkat E6.1 T細胞的IL-2分泌位準。
圖18是顯示藉助於TCR誘發的NFAT活化，藉由C25處理的T細胞活化的圖。OKT3與C25或對照組Ab的濃度分別是0.05 μg/ml與10 μg/ml： (a)顯示TCR誘發的NFAT活化，藉由C25處理不表現CEACAM1的Jurkat-GFP/NFAT-luc細胞的測量結果；以及(b)是TCR誘發的NFAT活化，藉由C25處理過度表現CEACAM1的Jurkat-CCM1/NFAT-luc細胞的測量結果。
圖19是藉助於TCR誘發的NFAT活化，藉由C25處理的T細胞活化的結果。OKT3與C25或對照組Ab的濃度分別是0.1 μg/ml與10 μg/ml： (a)顯示TCR誘發的NFAT活化，藉由C25處理不表現CEACAM1的Jurkat-GFP/NFAT-luc細胞的測量結果；以及(b)是TCR誘發的NFAT活化，藉由C25處理過度表現CEACAM1的Jurkat-CCM1/NFAT-luc細胞的測量結果。
圖20是顯示相較於對照組，藉由包括C25的抗CEACAM1抗體的T細胞的NFAT螢光素酶活性增加的圖。OKT3與抗CEACAM或對照組Ab的濃度分別是0.1 μg/ml與10 μg/ml：
圖21提供了顯示C25染色結果的照片，以評估人類與猴的正常組織中的CEACAM1表現的程度。
圖22提供了顯示人類與猴的正常組織中的huIgG4染色結果的照片。
圖23展示抗CEACAM1抗體與CEACAM家族蛋白的交叉反應性。
圖24顯示抗CEACAM1抗體與CEACAM家族蛋白的交叉反應性。
圖25顯示C25 (a)與C25所衍生的抗CEACAM1抗體選殖體(b)不和在細胞表面上表現的CEACAM3、CEACAM5、CEACAM6或CEACAM8交叉反應。
圖26繪示C25 (a)與C25所衍生的抗CEACAM1抗體選殖體(b)不僅結合至人類CEACAM1，亦結合至猴CEACAM1，其係藉由檢查在細胞表面上表現的蛋白的結合能力。
圖27例示C25所介導的對於CEACAM1+ TALL-104 T細胞針對CEACAM1+ 癌細胞的抗癌活性的增強效應： (a)顯示當TALL-104 T細胞與CEACAM1+ MNK45癌細胞在不同效應子：標靶(E:T)比例的C25存在下共同培養時，癌細胞的存活率；以及(b)顯示當TALL-104 T細胞與CEACAM1- MNK1癌細胞在不同E:T比例的C25存在下共同培養時，癌細胞的存活率。
圖28是顯示C25所介導的對於CEACAM1+ NK92MI NK細胞針對CEACAM1+ 癌細胞的抗癌活性的增強效應的圖： (a)顯示當CEACAM1+ NK92MI NK細胞與CEACAM1+ MNK45癌細胞在不同E:T比例的C25存在下共同培養時，癌細胞的存活率；以及(b)顯示當CEACAM1+ NK92MI NK細胞與CEACAM1+ MNK1癌細胞在不同E:T比例的C25的存在下共同培養時，癌細胞的存活率。
圖29是顯示藉由C25與C25所衍生的抗體選殖體針對CEACAM1+ 癌細胞活化的CEACAM1+ TALL-104細胞的抗癌活性的增強位準的圖： 當CEACAM1+ TALL-104 T細胞與CEACAM1+ 癌細胞(MKN45)以1:1的E:T比例共同培養時，C25與C25衍生的抗體選殖體所促進的TALL-104細胞的癌細胞死亡係顯示為相較於對照組抗體的癌細胞存活率。
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<210> 1
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VL)的胺基酸序列
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<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VL)的胺基酸序列
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<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VL)的胺基酸序列
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<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VL)的胺基酸序列
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<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VL)的胺基酸序列
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<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VL)的胺基酸序列
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<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VL)的胺基酸序列
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<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VL)的胺基酸序列
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VL)的胺基酸序列
<400> 16
Figure 107110072-A0305-02-0065-15
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 17
Figure 107110072-A0305-02-0066-16
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 18
Figure 107110072-A0305-02-0066-17
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 19
Figure 107110072-A0305-02-0066-18
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 20
Figure 107110072-A0305-02-0066-19
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 21
Figure 107110072-A0305-02-0067-23
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 22
Figure 107110072-A0305-02-0067-22
<210> 23
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 23
Figure 107110072-A0305-02-0067-21
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 24
Figure 107110072-A0305-02-0067-20
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 25
Figure 107110072-A0305-02-0068-24
<210> 26
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 26
Figure 107110072-A0305-02-0068-25
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 27
Figure 107110072-A0305-02-0068-26
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 28
Figure 107110072-A0305-02-0069-28
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VL)的胺基酸序列
<400> 29
Figure 107110072-A0305-02-0069-29
<210> 30
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 30
Figure 107110072-A0305-02-0069-30
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 31
Figure 107110072-A0305-02-0069-31
<210> 32
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 32
Figure 107110072-A0305-02-0070-32
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 33
Figure 107110072-A0305-02-0070-33
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 34
Figure 107110072-A0305-02-0070-34
<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 35
Figure 107110072-A0305-02-0071-35
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 36
Figure 107110072-A0305-02-0071-36
<210> 37
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 37
Figure 107110072-A0305-02-0071-38
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR1(VH)的胺基酸序列
<400> 38
Figure 107110072-A0305-02-0071-37
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VH)的胺基酸序列
<400> 39
Figure 107110072-A0305-02-0072-39
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VH)的胺基酸序列
<400> 40
Figure 107110072-A0305-02-0072-40
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VH)的胺基酸序列
<400> 41
Figure 107110072-A0305-02-0072-41
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VH)的胺基酸序列
<400> 42
Figure 107110072-A0305-02-0072-42
<210> 43
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VH)的胺基酸序列
<400> 43
Figure 107110072-A0305-02-0073-43
<210> 44
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VH)的胺基酸序列
<400> 44
Figure 107110072-A0305-02-0073-44
<210> 45
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VH)的胺基酸序列
<400> 45
Figure 107110072-A0305-02-0073-45
<210> 46
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR2(VH)的胺基酸序列
<400> 46
Figure 107110072-A0305-02-0074-46
<210> 47
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 47
Figure 107110072-A0305-02-0074-47
<210> 48
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 48
Figure 107110072-A0305-02-0074-48
<210> 49
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 49
Figure 107110072-A0305-02-0074-49
<210> 50
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 50
Figure 107110072-A0305-02-0075-50
<210> 51
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 51
Figure 107110072-A0305-02-0075-51
<210> 52
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 52
Figure 107110072-A0305-02-0075-52
<210> 53
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 53
Figure 107110072-A0305-02-0076-53
<210> 54
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 54
Figure 107110072-A0305-02-0076-54
<210> 55
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體的CDR3(VH)的胺基酸序列
<400> 55
Figure 107110072-A0305-02-0076-55
<210> 56
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 56
Figure 107110072-A0305-02-0077-56
<210> 57
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 57
Figure 107110072-A0305-02-0077-57
Figure 107110072-A0305-02-0078-58
<210> 58
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 58
Figure 107110072-A0305-02-0078-59
<210> 59
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 59
Figure 107110072-A0305-02-0078-60
Figure 107110072-A0305-02-0079-61
<210> 60
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 60
Figure 107110072-A0305-02-0079-63
<210> 61
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 61
Figure 107110072-A0305-02-0080-64
<210> 62
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 62
Figure 107110072-A0305-02-0080-65
<210> 63
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 63
Figure 107110072-A0305-02-0081-66
<210> 64
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 64
Figure 107110072-A0305-02-0081-68
Figure 107110072-A0305-02-0082-69
<210> 65
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 65
Figure 107110072-A0305-02-0082-70
<210> 66
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 66
Figure 107110072-A0305-02-0082-72
Figure 107110072-A0305-02-0083-73
<210> 67
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 67
Figure 107110072-A0305-02-0083-74
<210> 68
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 68
Figure 107110072-A0305-02-0083-75
Figure 107110072-A0305-02-0084-76
<210> 69
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 69
Figure 107110072-A0305-02-0084-77
<210> 70
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 70
Figure 107110072-A0305-02-0085-79
<210> 71
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 71
Figure 107110072-A0305-02-0085-81
<210> 72
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 72
Figure 107110072-A0305-02-0086-82
<210> 73
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 73
Figure 107110072-A0305-02-0086-83
Figure 107110072-A0305-02-0087-85
<210> 74
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 74
Figure 107110072-A0305-02-0087-86
<210> 75
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 75
Figure 107110072-A0305-02-0088-87
<210> 76
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 76
Figure 107110072-A0305-02-0088-88
<210> 77
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 77
Figure 107110072-A0305-02-0089-89
<210> 78
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 78
Figure 107110072-A0305-02-0089-90
Figure 107110072-A0305-02-0090-91
<210> 79
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 79
Figure 107110072-A0305-02-0090-92
<210> 80
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 80
Figure 107110072-A0305-02-0090-93
Figure 107110072-A0305-02-0091-94
<210> 81
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 81
Figure 107110072-A0305-02-0091-95
<210> 82
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 82
Figure 107110072-A0305-02-0091-96
Figure 107110072-A0305-02-0092-97
<210> 83
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 83
Figure 107110072-A0305-02-0092-98
<210> 84
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 84
Figure 107110072-A0305-02-0093-99
<210> 85
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的核苷酸序列
<400> 85
Figure 107110072-A0305-02-0093-100
Figure 107110072-A0305-02-0094-101
<210> 86
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 86
Figure 107110072-A0305-02-0094-102
<210> 87
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 87
Figure 107110072-A0305-02-0095-103
<210> 88
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 88
Figure 107110072-A0305-02-0095-104
<210> 89
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 89
Figure 107110072-A0305-02-0096-105
<210> 90
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 90
Figure 107110072-A0305-02-0096-106
Figure 107110072-A0305-02-0097-107
<210> 91
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 91
Figure 107110072-A0305-02-0097-108
<210> 92
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 92
Figure 107110072-A0305-02-0097-109
Figure 107110072-A0305-02-0098-110
<210> 93
<211> 362
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 93
Figure 107110072-A0305-02-0098-111
<210> 94
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 94
Figure 107110072-A0305-02-0099-112
<210> 95
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 95
Figure 107110072-A0305-02-0099-113
Figure 107110072-A0305-02-0100-114
<210> 96
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 96
Figure 107110072-A0305-02-0100-115
<210> 97
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 97
Figure 107110072-A0305-02-0101-116
<210> 98
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 98
Figure 107110072-A0305-02-0101-117
Figure 107110072-A0305-02-0102-118
<210> 99
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 99
Figure 107110072-A0305-02-0102-119
<210> 100
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 100
Figure 107110072-A0305-02-0102-120
Figure 107110072-A0305-02-0103-121
<210> 101
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 101
Figure 107110072-A0305-02-0103-122
<210> 102
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 102
Figure 107110072-A0305-02-0104-123
<210> 103
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 103
Figure 107110072-A0305-02-0104-124
Figure 107110072-A0305-02-0105-125
<210> 104
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VL)的胺基酸序列
<400> 104
Figure 107110072-A0305-02-0105-126
<210> 105
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體可變區(VH)的核苷酸序列
<400> 105
Figure 107110072-A0305-02-0106-127
<210> 106
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 106
Figure 107110072-A0305-02-0106-129
Figure 107110072-A0305-02-0107-131
<210> 107
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 107
Figure 107110072-A0305-02-0107-132
Figure 107110072-A0305-02-0108-133
<210> 108
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 108
Figure 107110072-A0305-02-0108-134
Figure 107110072-A0305-02-0109-135
<210> 109
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 109
Figure 107110072-A0305-02-0109-136
Figure 107110072-A0305-02-0110-137
<210> 110
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 110
Figure 107110072-A0305-02-0110-138
Figure 107110072-A0305-02-0111-140
<210> 111
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 111
Figure 107110072-A0305-02-0111-141
Figure 107110072-A0305-02-0112-142
<210> 112
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 112
Figure 107110072-A0305-02-0113-143
<210> 113
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 113
Figure 107110072-A0305-02-0114-144
<210> 114
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 114
Figure 107110072-A0305-02-0115-145
<210> 115
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 115
Figure 107110072-A0305-02-0116-146
Figure 107110072-A0305-02-0117-147
<210> 116
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 116
Figure 107110072-A0305-02-0117-148
Figure 107110072-A0305-02-0118-149
<210> 117
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 117
Figure 107110072-A0305-02-0118-150
Figure 107110072-A0305-02-0119-151
<210> 118
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 118
Figure 107110072-A0305-02-0119-152
Figure 107110072-A0305-02-0120-153
<210> 119
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 119
Figure 107110072-A0305-02-0120-154
Figure 107110072-A0305-02-0121-155
<210> 120
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體輕鏈的胺基酸序列
<400> 120
Figure 107110072-A0305-02-0121-156
Figure 107110072-A0305-02-0122-157
<210> 121
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 121
Figure 107110072-A0305-02-0122-158
Figure 107110072-A0305-02-0123-159
Figure 107110072-A0305-02-0124-160
<210> 122
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 122
Figure 107110072-A0305-02-0124-161
Figure 107110072-A0305-02-0125-162
Figure 107110072-A0305-02-0126-163
<210> 123
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 123
Figure 107110072-A0305-02-0126-164
Figure 107110072-A0305-02-0127-165
Figure 107110072-A0305-02-0128-166
<210> 124
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 124
Figure 107110072-A0305-02-0128-167
Figure 107110072-A0305-02-0129-168
Figure 107110072-A0305-02-0130-169
<210> 125
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 125
Figure 107110072-A0305-02-0130-170
Figure 107110072-A0305-02-0131-171
<210> 126
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 126
Figure 107110072-A0305-02-0132-172
Figure 107110072-A0305-02-0133-173
<210> 127
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 127
Figure 107110072-A0305-02-0134-174
Figure 107110072-A0305-02-0135-175
<210> 128
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 128
Figure 107110072-A0305-02-0136-176
Figure 107110072-A0305-02-0137-177
<210> 129
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 129
Figure 107110072-A0305-02-0138-178
Figure 107110072-A0305-02-0139-179
<210> 130
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CEACAM1抗體重鏈的胺基酸序列
<400> 130
Figure 107110072-A0305-02-0140-180
Figure 107110072-A0305-02-0141-181
(無)

Claims (33)

  1. 一種抗CEACAM1抗體或其片段，其包含：輕鏈CDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；輕鏈CDR2，其包含選自於由SEQ ID NOS：9至16所構成之群組的胺基酸序列中之一者；輕鏈CDR3，其包含選自於由SEQ ID NOS：17至29所構成之群組的胺基酸序列中之一者；重鏈CDR1，其包含選自於由SEQ ID NOS：30至38所構成之群組的胺基酸序列中之一者；重鏈CDR2，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；以及重鏈CDR3，其包含選自於由SEQ ID NOS：47至55所構成之群組的胺基酸序列中之一者。
  2. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：17所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  3. 如請求項2之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：56所表示之胺 基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  4. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：18所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  5. 如請求項4之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：58所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  6. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：19所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  7. 如請求項6之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：60所表示之胺 基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  8. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：20所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  9. 如請求項8之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：62所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  10. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：10所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：17所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  11. 如請求項10之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：64所表示之胺 基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  12. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：10所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：21所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  13. 如請求項12之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：66所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  14. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：11所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：22所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  15. 如請求項14之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：68所表示之胺 基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  16. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：10所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：17所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：48所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  17. 如請求項16之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：64所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：88所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  18. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：10所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：17所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：31所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  19. 如請求項18之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：64所表示之胺 基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：90所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  20. 如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：1所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：9所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR2、含有由SEQ ID NO：23所表示之胺基酸序列的輕鏈CDR3、含有由SEQ ID NO：30所表示之胺基酸序列的重鏈CDR1、含有由SEQ ID NO：39所表示之胺基酸序列的重鏈CDR2，及含有由SEQ ID NO：47所表示之胺基酸序列的重鏈CDR3。
  21. 如請求項20之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體包含：含有由SEQ ID NO：70所表示之胺基酸序列的輕鏈可變域，及含有由SEQ ID NO：86所表示之胺基酸序列的重鏈可變域。
  22. 如請求項1至21中任一項之抗CEACAM1抗體或其片段，其中該抗體片段為選自於由下列所構成之群組中之一者：Fab、scFv、F(ab)2與Ev。
  23. 一種抗癌劑，其包含如請求項1至21中任一項之抗CEACAM1抗體或其片段作為活性成分。
  24. 如請求項23之抗癌劑，其中該癌症為選自於由下列所構成之群組中之一者：胃癌、胰臟癌、黑色素瘤、肺癌、甲狀腺癌和骨髓瘤。
  25. 一種抗癌佐劑，其包含如請求項1至21中任一項之抗CEACAM1抗體或其片段作為活性成分。
  26. 一種用於治療癌症的組成物，其包含如請求項25之抗癌佐劑與細胞治療劑。
  27. 如請求項26之用於治療癌症的組成物，其中該細胞治療劑為細胞毒性T細胞或自然殺手細胞。
  28. 一種與如請求項1至21中任一項之抗CEACAM1抗體或其片段接觸過之淋巴球於製備藥物的用途，該藥物是用於治療癌症。
  29. 如請求項28之用途，其中該淋巴球包含細胞毒性T細胞與自然殺手細胞中之至少一者。
  30. 如請求項28之用途，其中該淋巴球係取得自一個體。
  31. 如請求項28之用途，其中該癌症為選自於由下列所構成之群組中之一者：胃癌、胰臟癌、黑色素瘤、肺癌、甲狀腺癌和骨髓瘤。
  32. 一種用於抑制表現CEACAM1的腫瘤細胞之增殖的體外方法，其包含使該表現CEACAM1的腫瘤細胞與如請求項1之抗CEACAM1抗體或其片段接觸。
  33. 一種如請求項1之抗體或其片段用於製備預防或治療癌症的藥物的用途。
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