TWI680122B - 活化腺苷單磷酸活化蛋白激酶之化合物 - Google Patents

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Chung Wai Shiau
蘇溶真
Jung Chen Su
林彥儒
Yan Ju Lin
黃瑞雯
Jui Wen Huang
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國立陽明大學
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Abstract

本發明係揭示一種如結構式I之化合物，其係作為腺苷單磷酸活化蛋白 激酶之活化劑，而得以磷酸化活化腺苷單磷酸活化蛋白激酶，進而調控下游訊息傳遞路徑，而可抑制肝癌細胞及乳癌細胞之生長***，亦可誘發脂肪細胞死亡；是故，本發明所揭示之化合物可應用於製備與腺苷單磷酸活化蛋白激酶相關之癌症及脂肪代謝疾病或症候群之醫藥組合物上，亦可用於治療與腺苷單磷酸活化蛋白激酶相關之癌症及脂肪代謝疾病或症候群。

Description

活化腺苷單磷酸活化蛋白激酶之化合物
本發明係關於一種新穎之化合物及其應用，尤其指一種作為腺苷單磷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase；AMPK)活化劑(agonist)之化合物，並能應用於治療由腺苷單磷酸活化蛋白激酶介導之癌症、脂肪代謝相關疾病或症候群。
腺苷單磷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase；AMPK)係一蛋白複合體(complex)，其係包含α、β及γ三個次單元(AMPK α、AMPK β及AMPK γ)，且為真核生物細胞中代謝相關反應之重要調控者，當腺苷單磷酸活化蛋白激酶受到上游因子的調控而被活化時，係進一步調控下游訊息傳遞分子，例如：HIF-1、TSC1、TSC2、Raptor、ULK1、SREBP-1、SirT1、P300、HNF4 α、Torc2、HDAC4、MBS85、MYPT1、Tau、CLIP170、ATGL、HSL、ACC、HMG-CoA、PFKFB3、GS及TCB1D1等，進而調控與代謝相關之訊息傳遞路徑。
腺苷單磷酸活化蛋白激酶所調控之代謝反應係直接影響細胞生長及細胞存活，且腺苷單磷酸活化蛋白激酶的失能或呈現低活化態的現象常見於癌症、肥胖症、糖尿病及老化相關疾病中；當腺苷單磷酸活化蛋白激酶發生磷酸化修飾時即轉變為活化態，並具有蛋白激酶的活性，亦即活化之腺苷單磷 酸活化蛋白激酶可進一步磷酸化下游分子以啟動或抑制訊息傳遞路徑；在一些研究中指出，磷酸化活化之腺苷單磷酸活化蛋白激酶可進一步抑制癌細胞及脂肪細胞之生長及存活，在線蟲模式(C.elegans)中亦可觀察到相同的現象；由此可知，腺苷單磷酸活化蛋白激酶之活化在生物體細胞中扮演關鍵的角色，使其成為藥物開發以及疾病治療之潛在標的。
腺苷單磷酸活化蛋白激酶的活化劑(agonist/activator)又可細分為間接型(indirect)腺苷單磷酸活化蛋白激酶活化劑及直接型(direct)腺苷單磷酸活化蛋白激酶活化劑，由於直接型腺苷單磷酸活化蛋白激酶活化劑對於腺苷單磷酸活化蛋白激酶複合體(complex)中各個次單元分別具有結合專一性(binding specificity)，亦即其係透過直接結合於腺苷單磷酸活化蛋白激酶進而影響其活性，而非透過其他分子間接影響腺苷單磷酸活化蛋白激酶之活性，故直接型腺苷單磷酸活化蛋白激酶活化劑之臨床應用性較間接型腺苷單磷酸活化蛋白激酶活化劑為高；目前已有已開發之直接型腺苷單磷酸活化蛋白激酶活化劑進入臨床試驗階段，且以化合物A-769662及化合物911為指標性化合物，而絕大部分現有的化合物係對腺苷單磷酸活化蛋白激酶複合體中調控次單元(AMPK β 2)或感測ATP濃度次單元(AMPK γ)具有專一性，較少對活性次單元(AMPK α)具有專一性之化合物，故本案即以此為方向著手開發新穎之化合物。
本發明基於上述之目的，於一方面，係提出一種新穎之化合物， 其係如結構式I所式，
Figure TWI680122B_D0001
， 其中，R1係一未經取代或一經取代之芳香環基(aromatic group)，R3係一經取代之苯胺基(phenyl amide group)或苯基脲(phenyl urea group)且Ar係一未經取代或一經取代之伸苯基(phenylene group)。
於本發明之一實施例中，該未經取代或該經取代之伸苯基係
Figure TWI680122B_D0002
或
Figure TWI680122B_D0003
，且R2係一氫、一鹵化物(halide)或一烷基(alkyl group)。
於本發明之一實施例中，R1係一未經取代或一經取代之苯基或一 經取代之
Figure TWI680122B_D0004
、
Figure TWI680122B_D0005
、
Figure TWI680122B_D0006
、
Figure TWI680122B_D0007
、
Figure TWI680122B_D0008
或
Figure TWI680122B_D0009
於本發明之一實施例中，R1係一未經取代之吡咯基(pyrrolic group)、一經取代之吡咯基或一經取代之
Figure TWI680122B_D0010
。
於本發明之一實施例中，R1係一未經取代之噻吩基(thiophene group)、一經取代之噻吩基或一經取代之
Figure TWI680122B_D0011
。
於本發明之一實施例中，R1係一未經取代之萘基(naphthalenic group)、一經取代之萘基或一經取代之
Figure TWI680122B_D0012
。
於本發明之一實施例中，R1係一雙取代苯基、一經取代之
Figure TWI680122B_D0013
於本發明之一實施例中，R3之該經取代之苯胺基係一經取代之
Figure TWI680122B_D0014
於本發明之一實施例中，R3之該經取代之苯基脲係一經取代之
Figure TWI680122B_D0015
於本發明之一實施例中，R2之該鹵化物係氟或氯。
於本發明之一實施例中，R2之該烷基係甲烷基或乙烷基。
於另一方面，本發明基於上述之化合物，提出一種將該化合物用於製備醫藥組成物之用途，且所述之醫藥組成物係用於與腺苷單磷酸活化蛋白 激酶(AMP-activated protein kinase；AMPK)相關之癌症、脂質代謝疾病或脂質代謝症候群。
在另一方面，本發明亦針對上述之化合物，提出一種以有效劑量之該化合物或其醫藥上可接受之鹽治療疾病之用途，且所述之疾病係與腺苷單磷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase；AMPK)相關之癌症、脂質代謝疾病或脂質代謝症候群。
於本發明之一實施例中，該癌症係肝癌或乳癌。
於本發明之一實施例中，該化合物係對腺苷單磷酸活化蛋白激酶之α次單元具有結合特異性，並磷酸化活化腺苷單磷酸活化蛋白激酶之α次單元。
於本發明之一實施例中，該化合物係誘發脂肪細胞之細胞凋亡。
圖1A-1B係顯示本發明之化合物可活化AMPK。
圖2A-2C係顯示本發明之化合物可磷酸化活化AMPK。
圖2D係顯示本發明之化合物在磷酸化活化AMPK後可進一步調控下游訊息傳遞分子。
圖3係顯示本發明之化合物可抑制肝癌細胞之生長。
圖4係顯示本發明之化合物可抑制三陰性乳癌細胞之生長。
圖5A-5B係顯示本發明之化合物可誘發脂肪細胞之細胞死亡。
圖6係顯示餵養本發明之化合物于高脂飲食肥胖小鼠可減少其體重。
名詞定義
「Ar」係指含有芳香環之基團，其結構中含有碳氫的有機化合物，分子結構中含有一個或多個兩種不同類型共價鍵聯結成的原子平面環的一大類化合物的總稱。
「芳香環」係指具有共振鍵環的環狀平面分子，其相較於相同原子組的其它幾何或連接結構更為穩定，由於最常見的芳香族化合物是苯，因此「芳香族」亦可稱之為苯衍生物。
「苯胺基」係指基礎結構為C6H6N-之基團。
「苯基脲」係指基礎結構為C6H5NHCONH之基團。
「伸苯基」係指基礎結構為雙取代苯環(di-substituted benzene ring)之基團。
「鹵化物」係指氟、氯、溴以及碘。
「烷基」係指僅含有碳、氫兩種原子的鏈狀有機官能團。
「經取代」係指由所命名之取代基實施多種程度之取代；如揭示或主張多個取代基部分，則經取代化合物可獨立地由一或多個所揭示或所主張取代基部分來單一地或複數個地取代；此外，獨立地經取代意指(兩個或更多個)取代基可相同或不同。
「醫藥上可接受之」在本說明書中係指使用合理的醫學判斷且遵循所有可應用之政府法規，能安全且適於投與人類或動物之化合物、材料、組合物、鹽及/或劑型。
「有效劑量」係指本發明化合物的一種劑量，其意謂(1)治療或預防特定疾病、病狀或病症；(2)減輕、改善或消除特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀；或(3預防或延遲本文所述之特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀發作。
「治療」係指逆轉、緩解、抑制該術語所適用之病症或病狀或該病症或病狀之一或多種症狀的進展、延遲其發作或預防該病症或病狀；除非另外說明，否則如本說明書所用，「治療(treatment)」係指治療行為，如「治療(treating)」在上文中剛剛定義；「治療」亦包括對個體之佐劑治療及新佐劑治療；為避免疑問，本說明書中提及「治療」包括提及治癒性、姑息性及預防性治療，及給予用於此類治療的藥劑。
本發明之醫藥組成物及治療方法中，化合物給予方式及劑量範圍，可採用任何適宜給予途徑以提供哺乳動物(尤其人類)有效劑量之本發明化合物；例如，可採用經口、經直腸、局部、非經腸、經眼、經肺、經鼻及諸如此類；劑型包括錠劑、***錠(troches)、分散劑、懸浮液、溶液、膠囊、乳霜、軟膏、氣溶膠及諸如此類但不以此為限，較佳者，係經口給予本發明化合物。
本發明之適合個體包括哺乳動物個體；所述之哺乳動物包括(但不限於)大、貓、牛、山羊、馬、綿羊、豬、嚙齒動物、兔類動物、靈長類動物 及其類似動物，且涵蓋未出生之哺乳動物；於一較佳實施例中，人類為一適合個體，人類個體可為任一性別且處於任何發育階段。
功效
本發明所揭示之化合物係腺苷單磷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase；AMPK)之活化劑，其係結合至腺苷單磷酸活化蛋白激酶α次單元(AMPK α)，並透過磷酸化活化AMPK α，進而調控AMPK α所介導之下游訊息傳遞路徑，而得以抑制癌細胞之生長以及誘發脂肪細胞死亡；故，本發明之化合物及醫藥上可接受之鹽可有效治療由腺苷單磷酸活化蛋白激酶所介導或其他方式與腺苷單磷酸活化蛋白激酶有關之疾病或病狀，諸如癌症、代謝疾病、脂肪代謝疾病、脂肪代謝症候群、糖尿病及老化相關疾病，但不以此為限。
本發明之其他特色及優點將於下列實施範例中被進一步舉例與說明，而該實施範例僅作為輔助說明，並非用於限制本發明之範圍。
本發明化合物之合成方法
以下化學反應式圖示及實施例係用於合成本發明如結構式I所示之化合物之流程圖，而此些化學反應式及實施例僅用以闡釋本發明之技術精神，不應以此些化學反應式及實施例來限制本發明。
合成本發明之化合物之第一反應通式(反應式I)：
Figure TWI680122B_D0016
於上述反應式I之第一步驟中，化合物A與化合物B在N,N-二異丙基乙基胺(N,N-Diisopropylethylamine；DIEA)的環境下進行耦合反應以產生中間產物C，於此步驟中，DIEA首先於4℃下加入溶於DMSO之化合物B中，接著，再將化合物A加入以獲得一混合溶液，該混合溶液接續在4℃下攪拌5分鐘，而後，於室溫下反應3小時，再加入冰水以終止反應；接著，以100毫升之3倍乙酸乙酯(ethyl acetate)進行萃取以獲得有機層，再將有機層以鹽水(brine)清洗後以無水硫酸鎂(MgSO4)除水乾燥後過濾，過濾後之溶液經濃縮後透過層析管柱純化以獲得中間產物C；接著將中間產物C在氫及鈀/碳(Palladium/charcoal)的環境下進行水合反應以獲得化合物D，待此反應結束後，取得Palladium/charcoal之過濾物並透過層析管柱純化以獲得化合物D；另一方面，化合物E與經取代之硼酸(boronic acid)F在(1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵)二氯化鈀(1,1'-Bis(diphenylphosphino)ferrocene)palladium(II)dichloride；Pd(dppf)Cl2)環境下進行耦合反應以獲得化合物G，於此反應中，溶於二甲醚(methoxymethane；DME) 溶液之化合物E經乾燥後與boronic acidF及Pd(dppf)2Cl2共同混合後於氮氣環境下加熱至90℃，待混合溶液之溫度降至室溫後，將其過濾並濃縮在透過層析管柱進行純化以獲得化合物G；於最終步驟中，化合物G及化合物D在異丙醇(isopropanol alcohol；IPA)溶液中加入催化劑鹽酸(HCl)進行反應，此混合物於100℃下加熱8小時候，以100毫升之3倍乙酸乙酯進行萃取，再將所獲得之有機層以鹽水清洗後，以無水硫酸鎂(MgSO4)除水乾燥後過濾，過濾後之溶液經濃縮後透過層析管柱純化以獲得化合物H。
於上述之反應式I中，R1係一未經取代或一經取代之芳香環基， 例如：一未經取代或一經取代之苯基或一經取代之
Figure TWI680122B_D0017
、
Figure TWI680122B_D0018
、
Figure TWI680122B_D0019
、
Figure TWI680122B_D0020
、
Figure TWI680122B_D0021
、
Figure TWI680122B_D0022
、一未經取代之吡咯基(pyrrolic group)、一經取代之吡咯基、一經取代之
Figure TWI680122B_D0023
、一未經取代之噻吩基(thiophene group)、一經取代之噻吩基、一經取代之
Figure TWI680122B_D0024
、一未經取代之萘基(naphthalenic group)、一經取代之萘基、一經取代之
Figure TWI680122B_D0025
、一雙取代苯基或一經取代之
Figure TWI680122B_D0026
此外，於上述之反應式I中，R3可為一經取代之苯胺基，例如： 一經取代之
Figure TWI680122B_D0027
；R3亦可為一經取代之苯基脲，例如：一經取代之
Figure TWI680122B_D0028
又，於上述之反應式I中，Ar可為一未經取代或一經取代之 伸苯基，例如：
Figure TWI680122B_D0029
或
Figure TWI680122B_D0030
，其中，且R2可為一氫、一鹵化物或一 烷基，於較佳實施例中，該鹵化物可為氟或氯，該烷基可為甲基或乙基。
透過上述之反應式I可合成如表1所列之本發明衍生之化合物。
實施例1、合成化合物SCT-1011
本發明所揭示之化合物之一實施例SCT-1011係由下列之化學式II所合成：
Figure TWI680122B_D0031
在合成化合物SCT1001之流程中，4-甲基-3-硝基苯甲酰氯(4-methyl-3-nitrobenzoylchloride)首先與5-氯-3-(三氟甲基)苯胺(5-chloro-3-(trifluoromethyl)aniline)進行耦合反應，接著在鈀/碳(Pd/C)的催化下進行中間產物之還原反應使得氮基還原為胺基，另一方面，2,4-二氯嘧啶(2,4-dichloropyrimidine)係與4-氰基苯硼酸((4-cyanophenyl)boronic acid)進行耦合反應以獲得4-(2-氯嘧啶-4-基)苯甲腈(4-(2-chloropyrimidin-4-yl)benzonitrile)，接著4-(2-chloropyrimidin-4-yl)benzonitrile係耦合於前述之胺基而獲得化合物SCT1001。
於反應式II之第一步驟中，係合成中間產物4-(2-chloropyrimidin-4-yl)benzonitrile；溶於二甲氧基乙烷(dimethoxyethane)溶液之2,4-dichloropyrimidine,4-氰基硼酸((4-cyanophenyl)boronic acid)及催化劑量 之(1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵)二氯化鈀(1,1'-Bis(diphenylphosphino)ferrocene)palladium(II)dichloride,Pd(dppt)Cl2)係與3個當量之三乙胺(triethylamine)混合，並將混合物以90℃加熱3小時，將混合物過濾取得過濾物後經濃縮及純化而獲得中間產物4-(2-chloropyrimidin-4-yl)benzonitrile。
4-(2-氯嘧啶-4-基)苯甲腈(4-(2-chloropyrimidin-4-yl)benzonitrile)之分析結果：1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ 8.73(d,J=5.2Hz,1H),8.20(d,J=8.4Hz,2H),7.81(d,J=8.4Hz,2H),7.62(d,J=5.2Hz,1H)ppm.
於反應式II之第一步驟中，係合成3-氨基-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基苯甲酰胺(3-amino-N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methylbenzamide)；於此一步驟中，首先，1當量之4-氯-3-(三氟甲基)苯胺(4-chloro-3-(trifluoromethyl)aniline)及1.2當量之triethylamine係共同溶於3毫升之二氯甲烷(dichloromethane)中，並於冰浴中緩慢加入溶於3毫升dichloromethane之4-甲基-3-硝基苯甲酰氯(4-Methyl-3-nitrobenzoyl chloride)(0.28毫莫耳)，再於室溫下攪拌3小時，接著，於氫氣及鈀(palladium)環境下，粗中間產物之氮基還原為胺基，並於過濾後以層析管柱(己烷/乙酸乙酯=9：1)(hexane/ethyl acetate=9：1)純化以獲得3-氨基-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基苯甲酰胺(3-amino-N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methylbenzamide)。
3-氨基-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基苯甲酰胺(3-amino-N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methylbenzamide)之分析結果： 1 H NMR(400MHz,MeOH)：δ 8.24(s,1H),7.95(d,J=8.8Hz,1H),7.57(d,J8.8Hz,1H),7.25(s,1H),7.16(q,J=8.0Hz,2H),2.22(s,3H)ppm.HRMS calculated for C 15 H 12 ClF 3 N 2 O(M-H)-：328.72.Found：327.22.
於反應式II之最終步驟中，係合成最終產物化合物SCT-1001；首先，溶於1.0當量之4-(2-chloropyrimidin-4-yl)benzonitrile之0.61毫莫耳之3-amino-N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methylbenzamide係混合於isopropyl alcohol(IPA)，並加入催化劑量之HCl，接著，混合物係經濃縮並以層析管柱純化以獲得N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-((4-(4-氰基苯基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲基苯甲酰胺(N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((4-(4-cyanophenyl)pyrimidin-2-yl)amino)-4-methylbenzamide)，即為化合物SCT-1001。
合成本發明之化合物之第二反應通式(反應式III)：
Figure TWI680122B_D0032
於上述反應式III之第一步驟中，化合物I與化合物B在THF的環境下進行耦合反應以產生中間產物J，於此步驟中，triphosgene及THF首先於4℃下加入包含化合物I之THF溶液及TEA之中，接著，再將化合物B加入以獲得一混合溶液，該混合溶液接續在4℃下攪拌5分鐘，而後，於室溫下反應3小時，再加入冰水以終止反應；接著，以100毫升之3倍ethyl acetate進行萃取以獲得有機層，再將有機層以brine清洗後以無水硫酸鎂(MgSO4)除水乾燥後過濾，過濾後之溶液經濃縮後透過層析管柱純化以獲得中間產物J；接著將中間產物J在氫及Palladium/charcoal的環境下進行水合反應以獲得化合物K，待此反應結束後，取得Palladium/charcoal之過濾物並透過層析管柱純化以獲得化合物D；另一方面，化合物E與經取代之boronic acid F在Pd(dppf)2Cl2環境下進行耦合反應以獲得化合物G，於此反應中，溶於DME溶液之化合物E經乾燥後與boronic acid F及Pd(dppf)2Cl2共同混合後於氮氣環境下加熱至90℃，待混合溶液之溫度降至室溫後，將其過濾並濃縮在透過層析管柱進行純化以獲得化合物G；於最終步驟中，化合物G及化合物K在IPA溶液中加入催化劑HCl進行反應，此混合物於100℃下加熱8小時後，以100毫升之3倍ethyl acetate進行萃取，再將所獲得之有機層以brine清洗後，以無水硫酸鎂(MgSO4)除水乾燥後過濾，過濾後之溶液經濃縮後透過層析管柱純化以獲得化合物H。
於上述之反應式III中，R1係一未經取代或一經取代之芳香環基， 例如：一未經取代或一經取代之苯基或一經取代之
Figure TWI680122B_D0033
、
Figure TWI680122B_D0034
、
Figure TWI680122B_D0035
、
Figure TWI680122B_D0036
、
Figure TWI680122B_D0037
、
Figure TWI680122B_D0038
、一未經取代之吡咯基(pyrrolic group)、一經取代之吡咯基、一經取代之
Figure TWI680122B_D0039
、一未經取代之噻吩基(thiophene group)、一經取代之噻吩基、一經取代之
Figure TWI680122B_D0040
、一未經取代之萘基(naphthalenic group)、一經取代之萘基、一經取代之
Figure TWI680122B_D0041
、一雙取代苯基或一經取代之
Figure TWI680122B_D0042
此外，於上述之反應式III中，R3可為一經取代之苯胺基，例如： 一經取代之
Figure TWI680122B_D0043
；R3亦可為一經取代之苯基脲，例如：一經取代之
Figure TWI680122B_D0044
又，於上述之反應式III中，Ar可為一未經取代或一經取代之 伸苯基，例如：
Figure TWI680122B_D0045
或
Figure TWI680122B_D0046
，其中，且R2可為一氫、一鹵化物或一 烷基，於較佳實施例中，該鹵化物可為氟或氯，該烷基可為甲基或乙基。
透過上述之反應式III可合成如表1所列之本發明衍生之化合物。
實施例2、合成化合物SCT-1015
本發明所揭示之化合物之一實施例SCT-1015係由下列之化學式IV所合成：
Figure TWI680122B_D0047
在合成化合物SCT1015之流程中，首先，0.148克、0.61毫莫耳之4-氯-4-3-(三氟甲基)苯胺(chloro-3-(trifluoromethyl)aniline)及2.2毫莫耳之三乙胺(triethylamine)係與3毫升乾燥之四氫呋喃(THF)混合，再將之於冰浴中緩慢加入0.30毫莫耳三光氣(triphosgene)之乾燥之THF溶液中，接著於室溫下攪拌30分鐘後進行濃縮，再以1當量之3-硝基苯胺(3-nitroaniline)於65℃下反應30分鐘，而後再次進行濃縮；接著於氫氣的環境下藉由催化劑鈀/碳(Pd/C)將粗中間產物之轉化為胺基中間產物，並於過濾後以層析管柱(hexane/ethyl acetate=1：1)純化以獲得1-(3-氨基苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲(1-(3-aminophenyl)-3-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)urea)。
1-(3-氨基苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲(1-(3-aminophenyl)-3-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)urea)之分析結果：1 H NMR(400MHz,MeOD-d 4)：δ 7.98(d,J=2.4Hz,1H),7.60(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.49(d,J=8.8Hz,1H),7.02(t,J=8.0Hz,1H),6.91(s,1H),6.70(dd,J=8.0,1.2Hz,1H),6.44(dd,J=8.0,1.2Hz,1H)ppm。
於反應式IV之第二步驟中，係合成中間產物叔丁基-2-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(t-butyl-2-(2-chloropyrimidin-4-yl)-1H-pyrrole-1-carboxylate)；2,4-二氯嘧啶(2,4-dichloropyrimidine)之二甲氧基乙烷(dimethoxyethane)溶液、1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡咯-2-基-吡咯)硼酸(1-(tert-butoxycarbonyl)-1H-pyrrol-2-yl-pyrrol)boronic acid)及催化劑量之1'-Bis(diphenylphosphino)ferrocene)palladium(II)dichloride,Pd(dppf)Cl 2)係與3個當量之triethylamine共同混合，並將混合物於90℃下加熱3小時，並於過濾後以層析管柱(hexane/ethyl acetate=9：1)純化以獲得t-butyl 2-(2-chloropyrimidin-4-yl)-1H-pyrrole-1-carboxylate。
叔丁基-2-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(Tert-butyl 2-(2-chloropyrimidin-4-yl)-1H-pyrrole-1-carboxylate)之分析結果：1 H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ 8.47(d,J=5.2Hz,1H),7.36(dd,J=3.6,2.0Hz,1H),7.28(d,J=5.2Hz,1H),6.64(dd,J=3.6,1.6Hz,1H),6.20(t,J=3.6Hz,1H),1.40(s,9H)ppm。
於反應式IV之最終步驟中，係合成最終產物化合物SCT-1015；首先，溶於1.0當量t-butyl2-(2-chloropyrimidin-4-yl)-1H-pyrrole-1-carboxylate之0.61毫莫耳之1-(3-aminophenyl)-3-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)urea係混 合於isopropyl alcohol(IPA)，並加入催化劑量之HCl，接著，混合物係經濃縮並以層析管柱(hexane/ethylacetate=2：1)純化以獲得1-(3-((4-(1H-吡咯-2-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲(1-(3-((4-(1H-pyrrol-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(4-chloro-3-(trifleoromethyl)phenyl)urea)，即為化合物SCT-1015。
1-(3-((4-(1H-吡咯-2-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲(1-(3-((4-(1H-pyrrol-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(4-chloro-3-(trifleoromethyl)phenyl)urea)之分析結果：1 H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 11.75(s,1H),10.55(s,1H),9.91(s,1H),9.61(s,1H),8.45(s,1H),8.35(d,J=6.4Hz,1H),8.08(s,1H),7.64(s,2H),7.38(s,1H),7.34(d,J=6.4Hz,1H),7.28(t,J=8.0Hz,1H),7.22(s,1H),7.12(d,J=8.0Hz,1H),7.03(d,J=7.6Hz,1H),6.36(s,1H)ppm.13C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 159.5,153.1,152.3,148.3,139.2,138.8,137.8,131.6,128.8,127.9,126.8,126.3(q),122.5,122.3(q),121.9,116.7,116.1(q),113.7,113.1,111.4,109.8,104.7ppm.HRMS calculated forC22H16ClF3N6O(M-H)-：471.0942.Found：471.0957.
本發明之化合物及其相關衍生物之圖譜結果
實施例1、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((4-(4-cyanophenyl)pyrimidin-2-yl)amino)-4-methylbenzamide(化合物SCT-1001)
Figure TWI680122B_D0048
分析結果
1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ 8.79(s,1H),8.53(d,J=5.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.17(d,J=8.4Hz,2H),7.90~7.87(m,2H),7.74(d,J=8.4Hz,2H),7.47(t,J=8.0Hz,2H),7.30(d,J=8.0Hz,1H),7.19(d,J=5.2Hz,1H),7.12(s,1H),2.40(s,3H)ppm.HRMS calculated for C26H17ClF3N5O(M-H)-：506.0990.Found：506.1010.
實施例2、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((4-(3-cyanophenyl)pyrimidin-2-yl)amino)-4-methylbenzamide(化合物SCT-1002)
Figure TWI680122B_D0049
分析結果
1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ 8.88(s,1H),8.56(d,J=5.2Hz,1H),8.41(s,1H),8.32(d,J=8.0Hz,1H),8.00(s,1H),7.95(dd,J=8.4,2.8Hz,1H),7.87(s,1H),7.76(d,J=8.0Hz,1H),7.59(t,J=8.0Hz,1H),7.51~7.48(m,2H),7.30(d,J=7.6Hz,1H),7.20(d,J=5.2Hz,1H),7.09(s,1H),2.44(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 164.9,160.9,160.4,159.4,138.2,137.6,137.2,135.9,133.7,131.4,131.3,130.8,130.0,129.9,129.6,126.0(q),124.4,123.6,122.9,120.9,118.5(q),117.9,111.6,107.4,17.7ppm.HRMS calculated for C26H17ClF3N5O(M-H)-506.0990.Found：506.1008.
實施例3、
3-((4-(1H-pyrrol-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)-N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)p henyl)-4-methylbenzamide(化合物SCT-1003)
分析結果
Figure TWI680122B_D0050
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.43(d,J=2.0Hz,1H),8.26(d,J=2.4Hz,1H),8.19(d,J=5.6Hz,1H),7.96(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.63(dd,J=8.0,2.0Hz,1H),7.58(d,J=8.8Hz,1H),7.40(d,J=8.0Hz,1H),7.02(d,J=5.6Hz,1H),6.99(dd,J=2.8,1.6Hz,1H),6.95(dd,J=3.6,1.6Hz,1H),6.25(dd,J=3.6,2.8Hz,1H),2.41(s,3H)ppm.HRMS calculated for C23H17ClF3N5O(M-H)-：470.0990.Found：470.0997.
實施例4、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((4-phenylpyrimidin-2-yl)amino)benzamide(化合物SCT-1004)
Figure TWI680122B_D0051
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.46(d,J=6.4Hz,1H),8.36(s,1H),8.30(s,1H),8.29(d,J=7.2Hz,2H),8.08(dd,J=8.8,2.8Hz,1H),7.99(dd,J=8.0,1.6Hz,1H), 7.75(d,J=6.4Hz,1H),7.71(t,J=6.4Hz,1H),7.66~7.59(m,4H),2.48(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,MeOD-d4)：δ 172.4,167.2,156.0,150.0,140.2,139.7,135.8,134.8,133.1,132.7,130.5,129.7,129.0(q),127.9,127.1,127.0,126.2,124.3(q),120.5(q),108.7,18.4ppm.HRMS calculated for C25H18ClF3N4O(M-H)-：481.1038.Found：481.1043.
實施例5、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((4-(2-methoxynaphthalen-1-yl)pyrimidin-2-yl)amino)-4-methylbenzamide(化合物SCT-1005)
Figure TWI680122B_D0052
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.49(d,J=5.2Hz,1H),8.30(s,1H),8.13(s,1H),7.95(d,J=9.2Hz,1H),7.78(d,J=8.0Hz,2H),7.56~7.52(m,3H),7.44(d,J=9.2Hz,1H),7.37~7.32(m,2H),7.24(t,J=7.6Hz,1H),6.91(d,J=5.2Hz,1H),3.87(s,3H),2.38(s,3H)ppm.HRMS calculated for C30H22ClF3N4O2(M-H)-：561.1300.Found：561.1311.
實施例6、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((6-phenylpyrimidin-4-yl)amino)benzamide(化合物SCT-1006)
Figure TWI680122B_D0053
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.76(s,1H),8.27(d,J=2.4Hz,1H),8.05(s,1H),7.97(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.94(dd,J=8.0,2.0Hz,1H),7.85(d,J=7.6Hz,2H),7.73~7.56(m,5H),7.11(s,1H),2.42(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,MeOD-d4)：δ 166.2,163.6,154.5,152.4,139.0,138.0,134.9,133.1,132.6,131.6,131.3,130.1,129.5,127.9(q),127.1,126.7,126.1,125.9,124.8,124.2,121.5,119.3(q),16.8ppm.HRMS calculated for C25H18ClF3N4O(M-H)-：481.1038.Found：481.1043.
實施例7、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((4-(thiophen-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)benzamide(化合物SCT-1007)
Figure TWI680122B_D0054
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 10.7(s,1H),9.86(s,1H),8.45(d,J=5.6Hz,1H),8.37(d,J=2.4Hz,1H),8.24(s,1H),8.15(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),8.12(d,J=4.0Hz,1H),7.86(d,J=4.0Hz,1H),7.82(d,J=8.0Hz,1H),7.69(d,J=8.0Hz,1H),7.48~7.45(m,2H),7.25(dd,J=4.8,4.0Hz,1H),2.35(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 165.0,161.2,156.8,153.3,140.9,138.3,136.8,135.9,132.8,131.8,131.5,130.3,130.2,128.7,126.1(q),124.5,124.4,124.3,123.7,120.9,118.5(q),105.6,17.7ppm.HRMS calculated for C23H16ClF3N4OS(M-H)-：487.0602.Found：487.0609.59.
實施例8、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((4-(3-(methylthio)phenyl)pyrimidin-2-yl)amino)benzamide(化合物SCT-1008)
Figure TWI680122B_D0055
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.71(s,1H),9.70(s,1H),8.56(d,J=5.6Hz,1H),8.40(s,1H),8.34(s,1H),8.15(d,J=8.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.89(d,J=6.0Hz,1H),7.81(d,J=8.0Hz,1H),7.69(d,J=8.8Hz,1H),7.55(d,J=5.6Hz,1H),7.46-7.41(m,3H),2.42(s,3H),2.36(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 165.0,164.5,158.0,155.6,138.9,138.3,136.5,136.4,135.9, 131.6,131.5,130.1,129.0,128.3,126.1(q),124.5,124.0,123.8,123.7,123.6,123.3,121.0,118.5(q),107.3,17.7,13.9ppm.HRMS calculated for C26H20ClF3N4OS(M-H)-：527.0915.Found：527.0922.
實施例9、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((4-(4-fluoro-3-methylphenyl)pyrimidin-2-yl)amino)-4-methylbenzamide(化合物SCT-1009)
Figure TWI680122B_D0056
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.69(s,1H),9.52(s,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.48(s,1H),8.42(d,J=2.4Hz,1H),8.18(d,J=6.4Hz,1H),8.12(d,J=8.8Hz,1H),8.03~8.00(m,1H),7.78(d,J=8.0Hz,1H),7.69(d,J=8.8Hz,1H),7.50(d,J=5.6Hz,1H),7.43(d,J=8.0Hz,1H),7.24(t,J=8.8Hz,1H),2.37(s,3H),2.26(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 166.1,164.9,164.6,162.1,159.0,156.7,139.3,137.7,136.5,132.4,131.5(d),130.9,127.6(d),126.9(q),125.6,125.4,125.3,124.6,124.4,124.1,121.9,119.3(q),116.0(d),108.0,18.6,14.5(d)ppm.HRMS calculated for C26H19ClF4N4O(M-H)- 513.1100.Found：513.1106.
實施例10、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((4-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)pyrimidin-2-yl)amino)benzamide(化合物SCT-1010)
Figure TWI680122B_D0057
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.45(d,J=6.4Hz,1H),8.40(d,J=8.4Hz,2H),8.33(s,1H),8.27(s,1H),8.02(d,J=9.2Hz,1H),7.97(d,J=8.0Hz,1H),7.73(d,J=6.4Hz,1H),7.61(d,J=8.4Hz,2H),7.49(d,J=8.4Hz,2H),2.47(s,3H)ppm.13C NMR(100MHz,MeOD-d4)：δ 171.2,167.4,156.1,154.1,150.1,140.3,139.5,135.6,134.8,134.5,133.1,132.8,131.9,129.0(m),128.0,127.2,127.0,126.1,125.6,123.0,122.9,122.3,120.6(m),120.4,108.7,18.2ppm.HRMS calculated for C26H17ClF6N4O2(M-H)-：565.0860.Found：565.0864.
實施例11、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-4-methyl-3-((4-(4-(trifluoromethyl)phenyl)pyrimidin-2-yl)amino)benzamide(化合物SCT-1011)
Figure TWI680122B_D0058
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.45~8.41(m,3H),8.27(d,J=8.4Hz,2H),7.97(d,J=9.2Hz,1H),7.92(d,J=7.6Hz,1H),7.87(d,J=8.4Hz,2H),7.70(d,J=6.4Hz,1H),7.59(t,J=7.6Hz,2H),2.46(s,3H)ppm.HRMS calculated for C26H17ClF6N4O(M-H)-：549.0911.Found：549.0916.
實施例12、
N-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-((4-(3,5-dichlorophenyl)pyrimidin-2-yl)amino)-4-methylbenzamide(化合物SCT-1012)
Figure TWI680122B_D0059
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.64(s,1H),9.33(s,1H),8.56(d,J=5.2Hz,1H),8.41(s,1H),8.39(s,1H),8.16(s,2H),8.11(d,J=8.8Hz,1H),7.76~7.74(m,2H),7.69(d,J=8.8Hz,1H),7.55(d,J=5.2Hz,1H),7.41(d,J=8.0Hz,1H),2.35(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 165.0,160.6,159.7,158.7,139.4,138.4,137.2,135.7,134.3,131.4,131.3,129.9,129.8,126.0(q),125.2,124.5,123.6,123.1,122.3,121.0,118.5(q),107.7,17.7ppm.HRMS calculated for C25H16Cl3F3N4O(M-H)-：549.0258.Found：549.0270.
實施例13、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-(4-cyanophenyl)pyrimidin-2-yl)a mino)phenyl)urea(化合物SCT-1013)
Figure TWI680122B_D0060
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.76(s,1H),9.57(s,1H),9.08(s,1H),8.62(d,J=5.2Hz,1H),8.44(d,J=8.0Hz,2H),8.21(s,1H),8.18(s,1H),7.96(d,J=8.0Hz,2H),7.60(s,2H),7.51(d,J=5.2Hz,1H),7.32(d,J=8.0Hz,1H),7.20(t,J=8.0Hz,1H),7.04(d,J=6.8Hz,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ161.2,159.6,159.1,151.9,140.3,139.1,139.0,132.3,131.5,128.3,127.4,126.2(q),123.7,122.3,121.6,121.0,118.0,115.9(q),112.9,112.6,111.5,108.6,108.0ppm.HRMS calculated for C25H16ClF3N6O(M-H)-：507.0942.Found：507.0955.
實施例14、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-(3-cyanophenyl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1014)
Figure TWI680122B_D0061
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.66(s,1H),8.59(d,J=8.8Hz,1H),8.47(d,J=6.4Hz,1H),8.19(s,1H),8.04(d,J=2.4Hz,1H),7.96(d,J=8.0Hz,1H),7.75(t,J=8.0 Hz,1H),7.64(d,J=6.0Hz,1H),7.61(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.49(d,J=8.4Hz,1H),7.39(t,J=8.0Hz,1H),7.22(d,J=8.0Hz,1H),7.15(d,J=8.0Hz,1H)ppm.HRMS calculated for C25H16ClF3N6O(M-H)-：507.0942.Found：507.0954.
實施例15、
1-(3-((4-(1H-pyrrol-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)urea(化合物SCT-1015)
Figure TWI680122B_D0062
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.75(s,1H),10.55(s,1H),9.91(s,1H),9.61(s,1H),8.45(s,1H),8.35(d,J=6.4Hz,1H),8.08(s,1H),7.64(s,2H),7.38(s,1H),7.34(d,J=6.4Hz,1H),7.28(t,J=8.0Hz,1H),7.22(s,1H),7.12(d,J=8.0Hz,1H),7.03(d,J=7.6Hz,1H),6.36(s,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 159.5,153.1,152.3,148.3,139.2,138.8,137.8,131.6,128.8,127.9,126.8,126.3(q),122.5,122.3(q),121.9,116.7,116.1(q),113.7,113.1,111.4,109.8,104.7ppm.HRMS calculated for C22H16ClF3N6O(M-H)-：471.0942.Found：471.0957.
實施例16、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-phenylpyrimidin-2-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1016)
Figure TWI680122B_D0063
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.00(s,1H),9.85(s,1H),9.31(s,1H),8.56(d,J=5.6Hz,1H),8.28~8.26(m,2H),8.17(s,1H),8.14(s,1H),7.62(s,2H),7.54~7.53(m,3H),7.49(d,J=5.6Hz,1H),7.37(d,J=8.0Hz,1H),7.24(t,J=8.0Hz,1H),7.08(d,J=8.0Hz,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 164.5,158.1,156.4,152.0,139.7,139.2,139.1,135.6,131.6,130.9,128.5,128.4,127.0,126.3(q),122.4(q),122.2,121.5,115.8(q),113.3,112.0,109.2,107.3ppm.HRMS calculated for C24H17ClF3N5O(M-H)-：482.0990.Found：482.1002.
實施例17、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-(thiophen-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1017)
Figure TWI680122B_D0064
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.23(d,J=6.4Hz,1H),8.18(d,J=4.0Hz,1H),8.03(d,J=2.4Hz,1H),7.94(d,J=4.0Hz,1H),7.91(s,1H),7.63(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),7.51(d,J=7.6Hz,1H),7.50(d,J=6.8Hz,1H),7.43(t,J=8.4Hz,1H), 7.31~7.24(m,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 160.3,156.9,154.7,152.0,141.2,139.1,139.1,132.1,131.5,129.7,128.5,128.5,126.2(q),122.2,121.6,121.0(q),115.8(q),113.7,112.7,109.8,105.8ppm.HRMS calculated for C22H15ClF3N5OS(M-H)-：488.0554.Found：488.0568.
實施例18、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-(3-(methylthio)phenyl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1018)
Figure TWI680122B_D0065
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.37(d,J=6.8Hz,1H),8.18(s,1H),8.05~8.04(m,3H),7.67(d,J=6.4Hz,1H),7.62(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.55~7.48(m,3H),7.44(t,J=8.0Hz,1H),7.24(t,J=8.0Hz,2H),2.53(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 163.5,158.5,157.1,152.0,139.8,139.1,138.7,136.4,131.5,129.0,128.3,128.0,126.4(q),123.6,123.3,122.3(q),122.2,121.5,115.9(q),113.3,112.0,109.3,107.5,14.0ppm.HRMS calculated for C25H19ClF3N5OS(M-H)-：528.0867.Found：528.0878.
實施例19、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-(4-fluoro-3-methylphenyl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1019)
Figure TWI680122B_D0066
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.90(s,1H),9.75(s,1H),9.25(s,1H),8.54(d,J=5.6Hz,1H),8.19~8.13(m,4H),7.60(s,1H),7.59(s,1H),7.45(d,J=5.6Hz,1H),7.32~7.20(m,3H),7.04(d,J=8.0Hz,1H),2.27(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 163.4,163.3,161.0,158.3,156.8,152.0,139.8,139.1,131.8(d),131.5,130.4(d),128.3,126.8(d),126.2(q),124.4(d),122.3(q),122.2,121.6,115.9(q),115.0(d),113.2,111.9,109.2,107.1,13.7(d)ppm.HRMS calculated for C25H18ClF4N5O(M-H)-：514.1052.Found：514.1062.
實施例20、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1020)
Figure TWI680122B_D0067
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.83(s,1H),9.72(s,1H),9.20(s,1H),8.58(d,J=5.6Hz,1H),8.41(d,J=9.2Hz,2H),8.30(s,1H),8.19(s,1H),7.60(s,1H),7.59(s,1H),7.46(d,J=9.2Hz,2H),7.46(s,1H),7.29(d,J=8.4Hz,1H),7.21(t,J=8.0Hz,1H),7.01(d,J=8.0Hz,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 162.1,159.1,158.2,152.0,149.7,140.2,139.1,139.0,135.0,131.5,129.0,128.3,126.3(q),122.3,121.6,121.0(q),120.8,120.6,115.8(q),113.0,111.6,108.8,107.4ppm.HRMS calculated for C25H16ClF6N5O2(M-H)-：566.0813.Found：566.0826.
實施例21、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-(4-(trifluoromethyl)phenyl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1021)
Figure TWI680122B_D0068
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.77(s,1H),9.22(s,1H),8.88(s,1H),8.62(d,J=4.8Hz,1H),8.47(d,J=8.0Hz,2H),8.31(s,1H),8.18(s,1H),7.82(d,J=8.0Hz,2H),7.60(s,2H),7.50(d,J=4.8Hz,1H),7.32(d,J=8.0Hz,1H),7.20(t,J=8.0Hz,1H),6.99(d,J=8.0Hz,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 161.5,159.7,159.1,151.9,140.4,140.0,138.9(d),131.40,130.2(q),128.2,127.4,126.2(q),125.1(d),124.8,124.2(q),122.5,121.7,121.5(q),116.1(q),112.9,111.6,108.8,107.9ppm.HRMS calculated for C25H16ClF6N5O(M-H)-：550.0864.Found：550.0874.
實施例22、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((6-phenylpyrimidin-4-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1022)
Figure TWI680122B_D0069
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.30(s,1H),9.93(s,1H),9.59(s,1H),8.91(s,1H),8.12(s,1H),7.92(d,J=7.2Hz,2H),7.87(s,1H),7.67~7.58(m,5H),7.41(d,J=8.0Hz,1H),7.36(s,1H),7.33(t,J=8.0Hz,1H),7.23(d,J=8.0Hz,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 161.1,153.4,153.2,152.1,139.5,138.9,137.2,131.7,131.5,130.5,129.0,128.9,126.7,126.1(q),123.7,122.2,121.7,121.0(q),115.9(q),115.3,114.8,111.2,102.9,102.6ppm.HRMS calculated for C24H17ClF3N5O(M-H)-：482.0990.Found：482.1001.
實施例23、
1-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-3-(3-((4-(3,5-dichlorophenyl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)urea(化合物SCT-1023)
Figure TWI680122B_D0070
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.44(d,J=6.4Hz,1H),8.22(d,J=2.0Hz,2H),8.13(s,1H),8.02(d,J=2.8Hz,1H),7.68(t,J=2.0Hz,1H),7.61(dd,J=8.8,2.8Hz,1H),7.58(d,J=6.4Hz,1H),7.49(d,J=8.8Hz,1H),7.38(t,J=8.0Hz,1H),7.22(d,J=8.0Hz,1H),7.15(d,J=8.0Hz,1H)ppm.HRMS calculated for C24H15Cl3F3N5O(M-H)-：550.0211.Found：550.0228.
實施例24、
1-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(3-(trifluoromethyl)phenyl)urea(化合物SCT-1029)
Figure TWI680122B_D0071
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.74(s,1H),10.47(s,1H),9.72(s,1H),9.53(s,1H),8.56(s,1H),8.36(d,J=6.4Hz,1H),8.02(s,1H),7.60(d,J=8.0Hz,1H),7.55(t,J=8.0Hz,1H),7.38(s,1H),7.34(s,1H),7.32(s,1H),7.28(t,J=8.0Hz,1H),7.20(s,1H),7.10(d,J=8.0Hz,1H),7.00(d,J=8.0Hz,1H),6.36(m,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 159.2,153.6,152.5,149.1,140.0,139.3,138.0,129.5,128.9(q),128.7,128.0,126.3,123.7(q),121.5,117.8(d),116.3,113.6(q),113.5(d),112.9,111.3,109.6,104.8ppm.HRMS calculated for C22H17F3N6O(M+H)-：439.1489.Found：439.1479.
實施例25、
1-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)urea(化合物SCT-1030)
Figure TWI680122B_D0072
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.76(s,1H),10.55(s,1H),9.54(s,1H),9.50(s,1H),8.58(s,1H),8.36(d,J=6.4Hz,1H),7.58(d,J=9.2Hz,2H),7.39~7.23(m,6H),7.07(d,J=8.0Hz,1H),7.01(d,J=8.0Hz,1H),6.38(m,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 159.5,153.2,152.6,148.3,142.3,139.5,138.4,137.8,128.7,128.0,126.9,121.3,120.0(q),119.2,116.8,113.4,112.9,111.6,109.7,104.8ppm.HRMS calculated for C22H17F3N6O2(M+H)-：455.1438.Found：455.1429.
實施例26、
1-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(3-chlorophenyl)urea(化合物SCT-1031)
Figure TWI680122B_D0073
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.92(s,1H),8.12(d,J=6.8Hz,1H),7.81(s,1H),7.41(d,J=4.0Hz,1H),7.39~7.31(m,4H),7.27(d,J=8.0Hz,1H),7.09(d,J=8.0Hz,1H),6.96(d,J=8.0Hz,1H),6.92(d,J=8.0Hz,1H),6.48(t,J=4.0Hz,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 159.2,153.0,152.2,148.2,140.4,139.2,137.7,132.5,129.7,128.5,127.8,126.4,120.9,116.9,116.5,116.1,113.2,112.6,112.3,109.4,104.6ppm.HRMS calculated for C21H17ClN6O(M+H)-：405.1225.Found：405.1217.
實施例27、
1-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(3,5-dichlorophenyl)Urea(化合物SCT-1032)
Figure TWI680122B_D0074
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.67(s,1H),10.34(s,1H),9.77(s,1H),9.50(s,1H),8.62(s,1H),8.34(d,J=6.4Hz,1H),7.56(d,J=6.4Hz,2H),7.36(s,1H),7.30(d,J=6.4Hz,1H),7.26(s,1H),7.25(d,J=8.0Hz,1H),7.17(s,1H),7.07(d,J=8.0Hz,1H),6.94(d,J=8.0Hz,1H),6.38(s,1H)ppm.13 CNMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 159.0,154.1,152.2,149.7,141.7,139.0,138.2,133.7,128.7,128.1,125.9,120.6,115.9,115.8,113.6,112.8,111.2,109.6,104.8ppm.HRMS calculated for C21H16Cl2N6O(M+H)-：439.0835.Found：439.0827.
實施例28、
1-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(3-ethylphenyl)urea(化合物SCT-1033)
Figure TWI680122B_D0075
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.82(s,1H),10.54(s,1H),9.45(s,1H),9.24(s,1H),8.70(s,1H),8.36(d,J=6.4Hz,1H),7.40(s,1H),7.38~7.20(m,6H),7.04(d,J=8.0Hz,1H),6.94(d,J=8.0Hz,1H),6.86(d,J=7.6Hz,1H),6.39~6.37(m,1H),2.58(q,J=7.6Hz,2H),1.17(t,J=7.6Hz,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 159.3,153.4,152.6,148.7,143.9,139.7,139.0,137.9,128.6,128.2,128.0,126.5,121.1,117.4,116.5,115.5,113.0,112.6,111.4,109.4,104.7,27.8,15.1ppm.HRMS calculated for C23H22N6O(M+H)-：399.1928.Found：399.1919.
實施例29、
1-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(2-fluoro-5-methylphenyl)urea(化合物SCT-1034)
Figure TWI680122B_D0076
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO)：δ 11.74(s,1H),10.35(s,1H),9.57(s,1H),8.75(s,1H),8.71(s,1H),8.37(d,J=5.6Hz,1H),7.94(d,J=7.6Hz,1H),7.31~7.24(m,3H),7.15~7.07(m,3H),6.91(d,J=7.6Hz,1H),6.85(s,1H),6.36(s,1H),2.29(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 158.7,154.5,152.1,151.4,150.4,149.0,139.3,138.5,132.8(d),128.5,128.1,126.2(d),125.4,122.7(d),121.1,115.3,114.2(d),113.0,112.1,111.0,109.1,104.8,20.1ppm.HRMS calculated for C22H19FN6O(M+H)-：403.1677.Found：403.1669.
實施例30、
1-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl)urea(化合物SCT-1035)
Figure TWI680122B_D0077
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.75(s,1H),10.57(s,1H),10.26(s,1H),9.72(s,1H),8.46(s,1H),8.37(d,J=6.4Hz,1H),8.12(s,2H),7.64(s,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J=6.4Hz,1H),7.31(t,J=8.0Hz,1H),7.23(s,1H),7.15(d,J=8.0Hz,1H),7.06(d,J=8.0Hz,1H),6.37~6.35(m,1H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 159.5,153.0,152.2,148.2,141.3,139.0,137.7,130.3(q),128.8,127.9,126.8,122.8(q),117.2,116.8,114.0,113.9,113.3,111.3,109.9,104.7ppm.
實施例31、
1-(4-((4-(1H-pyrrol-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-(4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl)urea(化合物SCT-1036)
Figure TWI680122B_D0078
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.42(s,1H),9.27(s,1H),9.08(s,1H),8.66(s,1H),8.32(d,J=5.2Hz,1H),8.11(s,1H),7.74(d,J=8.8Hz,2H),7.64~7.58(m,2H),7.37(d,J=8.8Hz,2H),7.06~7.04(m,2H),6.95(s,1H),6.22(s,1H)ppm.HRMS calculated for C22H16ClF3N6O(M+H)-：473.1099.Found：473.1092.
實施例32、Methyl
3-(3-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)ureido)benzo-ate(化
Figure TWI680122B_D0079
合物SCT-1037)
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.72(s,1H),10.49(s,1H),9.60(s,1H),9.51(s,1H),8.65(s,1H),8.35(d,J=6.4Hz,1H),8.24(s,1H),7.63(d,J=8.0Hz,1H),7.59 (d,J=7.6Hz,1H),7.47(t,J=7.6Hz,1H),7.38(s,1H),7.33(d,J=6.4Hz,1H),7.30(s,1H),7.27(d,J=8.0Hz,1H),7.06(d,J=8.0Hz,1H),6.96(d,J=8.0Hz,1H),6.40~6.38(m,1H),3.84(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 165.7,159.2,153.6,152.5,149.0,140.0,139.4,138.0,130.0,128.8,128.7,127.9,126.6,122.4,122.3,118.0,116.4,113.3,112.7,111.4,109.5,104.8,51.7ppm.HRMS calculated for C23H20N6O3(M+H)-：429.1670.Found：429.1663.
實施例33、Methyl
5-(3-(3-((4-(1H-pyrrol-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)ureido)-2-methylbenzoate(化合物SCT-1039)
Figure TWI680122B_D0080
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.67(s,1H),10.25(s,1H),9.32(s,1H),9.30(s,1H),8.70(s,1H),8.34(d,J=5.6Hz,1H),8.06(s,1H),7.49(d,J=8.4Hz,1H),7.29~7.23(m,4H),7.19(s,1H),7.04(d,J=8.0Hz,1H),6.90(d,J=8.0Hz,1H),6.36(s,1H),3.81(s,3H),2.45(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 166.8,158.7,154.6,152.5,150.6,139.4,138.5,137.0,131.9,131.5,129.1,128.5,128.1,125.6,121.6,119.1,115.3,113.0,112.3,111.1,109.3,104.8,51.4,19.9ppm.HRMS calculated for C24H22N6O3(M+H)-：443.1826.Found：443.1822.
實施例34、
Methyl5-(3-(3-((4-(1H-pyrrol-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)ureido)-2-chlorobenzoate(化合物SCT-1041)
Figure TWI680122B_D0081
分析結果
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ 8.95(s,1H),8.33(s,1H),8.15(d,J=6.8Hz,1H),7.75(d,J=7.6Hz,1H),7.64(d,J=8.4Hz,1H),7.50(t,J=7.6Hz,1H),7.44~7.41(m,2H),7.38(t,J=8.0Hz,1H),7.34(d,J=7.6Hz,1H),6.98~6.92(m,2H),6.49~6.47(m,1H),3.93(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ165.7,159.2,153.5,152.5,149.0,139.5,139.4,138.0,129.7,128.8,128.7,127.9,126.6,122.4,122.3,118.0,116.4,113.3,112.7,111.4,109.5,104.8,51.7ppm.HRMS calculated for C23H19ClN6O3(M+H)-：463.1280.Found：463.1280.
實施例35、
3-(3-(3-((4-(1H-pyrrol-2-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)ureido)benzoic acid(化合物SCT-1038)
Figure TWI680122B_D0082
分析結果 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.36(s,1H),9.44(s,1H),9.03(s,1H),8.85(s,2H),8.33(d,J=5.2Hz,1H),8.19(s,1H),7.63~7.59(m,2H),7.44(t,J=8.0Hz,1H),7.16(t,J=8.0Hz,1H),7.10~7.06(m,3H),7.02(s,1H),6.76(d,J=8.0Hz,1H),6.22~6.21(m,1H)ppm.HRMS calculated for C22H18N6O3(M+H)-：415.1513.Found：415.1507.
實施例36、
5-(3-(3-((4-(1H-pyrrol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)ureido)-2-methylbenzoic acid(化合物SCT-1040)
Figure TWI680122B_D0083
分析結果
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 12.89(s,1H),11.39(s,1H),9.48(s,1H),8.86(s,2H),8.76(s,1H),8.33(d,J=5.2Hz,1H),8.01(s,1H),7.51(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),7.25(d,J=8.4Hz,1H),7.16(t,J=8.0Hz,1H),7.10~7.02(m,4H),6.74(d,J=8.0Hz,1H),6.24~6.22(m,1H),2.47(s,3H)ppm.13 C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ 168.2,159.3,157.4,156.3,152.4,140.8,139.1,136.8,131.9,131.4,130.3,128.8,128.1,122.2,121.4,119.6,112.1,111.0,110.4,109.7,108.0,105.1,20.1ppm.
實施例37
Figure TWI680122B_D0084
實施例38
Figure TWI680122B_D0085
實施例39
Figure TWI680122B_D0086
實施例40
Figure TWI680122B_D0087
實施例41
Figure TWI680122B_D0088
實施例42
Figure TWI680122B_D0089
實施例43
Figure TWI680122B_D0090
實施例44
Figure TWI680122B_D0091
實施例45
Figure TWI680122B_D0092
實施例46
Figure TWI680122B_D0093
實施例47
Figure TWI680122B_D0094
實施例48
Figure TWI680122B_D0095
實施例49
Figure TWI680122B_D0096
實施例50
Figure TWI680122B_D0097
實施例51
Figure TWI680122B_D0098
實施例52
Figure TWI680122B_D0099
實施例53
Figure TWI680122B_D0100
實施例54
Figure TWI680122B_D0101
實施例55
Figure TWI680122B_D0102
實施例56
Figure TWI680122B_D0103
實施例57
Figure TWI680122B_D0104
實施例58
Figure TWI680122B_D0105
實施例59
Figure TWI680122B_D0106
實施例60
Figure TWI680122B_D0107
實施例61
Figure TWI680122B_D0108
實施例62
Figure TWI680122B_D0109
實施例63
Figure TWI680122B_D0110
實施例64
Figure TWI680122B_D0111
實施例65
Figure TWI680122B_D0112
實施例66
Figure TWI680122B_D0113
實施例67
Figure TWI680122B_D0114
實施例68
Figure TWI680122B_D0115
實施例69
Figure TWI680122B_D0116
實施例70
Figure TWI680122B_D0117
實施例71
Figure TWI680122B_D0118
實施例72
Figure TWI680122B_D0119
生物活性測試
為確認本發明之化合物之藥理特性及對生物之影響性，故分別分析其對腺苷單磷酸活化蛋白激酶活性之影響，以及其對癌症細胞存活率、脂肪細胞生長之影響，以下，將依序說明本發明之化合物之測試結果數據。
細胞株
肝癌細胞株Huh-7係取自健康科學研究資源銀行(Health Science Research Resources Bank；HSRRB,Osaka,Japan；JCRB0403)；肝癌細胞株PLC/PRF/5(PLC5)、Sk-Hep-1及HCC1806係取自美國典型培養物保存中心(ATCC,Manassas,VA)；所有細胞株自取得後立即放大培養並凍存，因此每3個月即可以解凍凍存之細胞而得以以同一批細胞進行實驗。
AMPK激酶活性測試(AMPK kinase enzyme assay)
自肝癌細胞株PLC5取得蛋白質萃取物後，將萃取物及抗AMPK α 1之抗體(anti-AMPKa1 antibody)共同培養於免疫共沉澱緩衝溶液 (G-Biosciences)中隔夜培養，接著，蛋白磁珠(Protein A/G Magnetic Bead；PureProteomeTM)分別加入各樣品中並於4℃下旋轉培養4小時；於重組蛋白AMPK之分析中，係將不同劑量之化合物與12.5奈克(ng)之重組蛋白人類AMPK(α 1,β1,γ1)共同培養，而後，係依據用以偵測AMPK活性之分析法AMPK SAMS peptide assay(Cyclex)之使用手冊執行分析。
結果如圖1A，在加入20-20,000奈體積莫耳濃度(nM)之化合物SCT-1015至AMPK α 1免疫共沉澱之蛋白萃取物後測試AMPK活性，相較於未加入化合物之組別，AMPK之活性確實明顯增加；又如圖1B，另將20-2,000奈體積莫耳濃度之化合物SCT-1015與重組蛋白AMPK α 1/β1/γ1共同培養，相較於未加入化合物之組別，重組蛋白AMPK α 1/β1/γ1之活性亦明顯增加；由圖1A及1B顯示SCT-1015化合物可增加肝癌細胞中AMPK之活性。
以酵素連結免疫分析法(ELISA assay)偵測AMPK磷酸化活性
於此分析中係使用ThermoFisher Science所販售之商業化套組AMPK[pT172]Phospho-ELISA Kit(KHO0651)，肝癌細胞株PLC5係與10微體積莫耳濃度(μM)之化合物衍生物共同培養24小時，並依據其所揭示之使用手冊執行分析，並以波長450奈米(nm)偵測吸光值。
結果如表3所示，第一欄為化合物編號，第三欄為化合物活化AMPK之測試結果，控制組係僅添加化合物衍生物之溶劑DMSO，數值則以3組樣品(N=3)之平均值±標準差顯示；由結果可以得知，化合物衍生物確實能夠於T172的位置磷酸化並活化AMPK，其中，又以化合物SCT1015之活化效果(1.8)為最佳。
以免疫墨點分析法(Immuno-blot assay)偵測AMPK之磷酸化
分別收取與化合物SCT-1015共同培養之肝癌細胞株PCL5及三陰性乳癌細胞株(TNBC)MDA-MB-231及MDA-MB-453，於清洗後以RIPA緩衝液裂解細胞以獲得蛋白萃取物，接著以Bio-Rad Protein Assay dye reagent(Bio-Rad)量測蛋白濃度，再以2倍SDS-loading buffer(100mM Tris HCl,pH 6.8,200mM β-mercaptoethanol,4% SDS,0.02% bromophenol blue,and 20% glycerol)調整蛋白樣本體積，而後將蛋白樣本以10% SDS polyacrylamide gels進行電泳分離後轉漬到PVDF膜上，接著加入1級抗體至膜上以偵測目標蛋白，再加入帶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)之二級抗體以結合1級抗體，接著加入辣根過氧化物酶之反應基質(enhanced SuperSignal West Pico Cheminluminescent Substrate；Pierce)進行反應以獲得特定蛋白之訊號，蛋白含量係以β-actin作為內控制組以進行分析；結果如圖2A-2C所示，於肝癌細胞株PCL5及三陰性乳癌細胞株(TNBC)MDA-MB-231及MDA-MB-453中，添加化合物SCT-1015相較於未添加之組別，其磷酸化AMPK α(p-AMPK α)之蛋白表現量均顯著增加，又如圖2D所示，在三株肝癌細胞株PLC/PRF/5、SK-hep1及Huh-7中，經磷酸化活化之AMPK係進一步調控下游訊息傳遞分子HIF1及PDHK1；由上述結果可以得知，本案之化合物SCT-1015確實能夠磷酸化活化AMPK α，並得以進一步調控下游訊息傳遞路徑，進而影響細胞內相關的生化反應。
肝癌細胞株之細胞存活率測試(cytotoxicity effect)
此分析係以Thermo Fisher Scientific所販售之商業化套組Prestoblue assay進行分析，三株肝癌細胞株PLC/PRF/5、SK-hep1及Huh-7係分別與化合物SCT-1015共同培養48小時及72小時，依據前述之商業化套組使用手冊執行分析；結果如圖3所示，相較於控制組DMSO，三株肝癌細胞株在分別添加5-20微體積莫耳濃度(μM)之化合物SCT-1015培養之後，可明顯抑制細胞增生，且抑制細胞增生的效果係隨著化合物SCT-1015的濃度增加而更顯著；由此可知，本發明之化合物確實能夠透過活化AMPK而抑制肝癌細胞之生長***。
三陰性乳癌細胞之細胞存活率測試
實驗係以帶有螢光素酶(luc2)基因之三陰性乳癌細胞HCC1806(HCC1806/luc2)建立原位性三陰性乳癌小鼠模式(HCC1806/luc2-bearing orthotopic mice)，並將實驗小鼠分為兩個組別，分別為(1)控制組(vehicle)：口服溶劑；(2)實驗組：(SCT-1015)：口服化合物SCT-1015(20毫克/公斤)，分別將前述之樣品每天餵食小鼠並持續14天，且於第0天及第14天時，分別注射螢光素酶之反應基質至小鼠腹腔中，再以活體影像系統(In vivo imaging system；IVIS)偵測HCC1806/luc2細胞所發出的冷光訊號，以觀察細胞生長情形。
結果如圖4所示，第一行為第0天拍攝之影像，第二行則為第14天拍攝之影像；相較於實驗組(SCT-1015)於第0天拍攝之小鼠影像，餵食化合物SCT-1015之小鼠，其帶有的HCC1806/luc2細胞數量並未顯著增加，且相較於控制組於第14天拍攝之小鼠影像，餵食化合物SCT-1015之小鼠，其HCC1806/luc2細胞數量顯著減少；由此實驗結果可以得知，本發明之化合物可以透過活化AMPK以抑制三陰性乳癌細胞之生長。
脂肪細胞之細胞生長情形測試
實驗係依據脂肪細胞分化標準流程，將人類脂肪前驅細胞(human pre-adipocytes)處理分化試劑(Gibco StemPro adipogenesis differentiation reagent)並培養14天，以誘導其分化為成熟脂肪細胞(mature adipocytes)，接著，將成熟脂肪細胞分別處理不同濃度之化合物SCT-1015(100μM、25μM、12.5μM、5μM及2.5μM)或僅處理溶劑(控制組Mock)或未處理任何樣品(未處理組 non-treated)並培養48小時，接著再以染劑adipoRed(Lonza inc.)進行脂肪細胞呈色，並以激發光波長485nm及散色光波長572nm量測脂肪細胞之螢光訊號以計算細胞數量；此外，在細胞處理2.5μM之化合物SCT-1015後，亦透過拍攝細胞影像以觀察細胞型態。
結果如圖5A所示，相較於控制組(Mock)，成熟脂肪細胞在處理化合物SCT-1015後細胞數量顯著降低，且細胞減少的數量隨著化合物SCT-1015濃度增加而漸增；又如圖5B所示，細胞在處理2.5μM之化合物SCT-1015之下，成熟脂肪細胞(標記*處)呈現皺縮且死亡的型態，反之，未分化之細胞(標記**處)則仍維持健康的細胞型態；由上述實驗結果可以得知，本發明之化合物能夠誘發脂肪細胞之細胞死亡，並且對未分化之細胞不具毒殺性。
以本發明之化合物處理高脂飲食肥胖症小鼠模式(diet-induced obesity(DIO)mouse models)
雄性實驗小鼠C57BL/6係購自國家實驗研究院國家實驗動物中心(National Laboratory Animal Center；NLAC,Taipei,Taiwan)，並連續4週餵養小鼠高脂肪飲食以誘發肥胖症(diet-induced obesity；DIO)，而後取得所建立之高脂飲食肥胖症小鼠進行後續實驗；高脂飲食肥胖症小鼠係分為三個組別，一組5隻小鼠，分別為(1)控制組(vehicle)：混合溶劑(N-甲基吡咯酮：聚氧乙烯蓖麻油：生理食鹽水=1：2：7(NMP：Cre：Saline=1：2：7)；(2)標準品(orlistat)：溶於混合溶劑(NMP：Cre：Saline=1：2：7)之orlistat(50毫克/公斤)及(3)實驗組(SCT-1015)：溶於混合溶劑(NMP：Cre：Saline=1：2：7)之化合物SCT-1015(50毫克/公斤)，分別將前述 之樣品以口服處理小鼠，每天處理一次並持續32天，記錄小鼠之體重及飲食狀況。
結果如圖6所示，相較於控制組之小鼠，處理化合物SCT-1015之小鼠其體重平均減少5%，且與處理標準品orlistat之小鼠所減少的體重相仿，由此可知，本發明之化合物可透過影響AMPK之活性，進而誘導脂肪細胞之細胞凋亡，而得以減少高脂飲食肥胖症小鼠之體重。
綜合上述，本發明所揭示之化合物，係具有新穎之化學結構，並可作為腺苷單磷酸活化蛋白激酶之活化劑；透過前述之實驗結果證實，本發明之化合物能夠透過結合至腺苷單磷酸活化蛋白激酶α次單元(AMPK α)，進而磷酸化活化AMPK α，而能夠進一步調控下游訊息傳遞分子，並且得以抑制肝癌細胞及乳癌細胞之生長***，此外，亦可誘發脂肪細胞之細胞死亡，故本發明所提供之化合物更可用於製備醫藥組成物，而該醫藥組成物係用於由腺苷單磷酸活化蛋白激酶所介導之癌症或脂肪代謝相關疾病或症候群，另一方面，亦可將本發明所提供之化合物應用於疾病治療上，而該疾病則係由腺苷單磷酸活化蛋白激酶所介導之癌症或脂肪代謝相關疾病或症候群；據此，本發明提供一具醫療潛力之新穎化合物，其相較習知技術具有較佳的活化AMPK效力及較佳之治療專一性。

Claims (8)

  1. 一種如結構式I所示之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中，R1係選自由一未經取代或經取代之苯基、一經取代之、一經取代之、一經取代之、一經取代之、一經取代之、一未經取代或經取代之吡咯基(pyrrolic group)、一經取代之、一未經取代或經取代之噻吩基(thiophene group)、一經取代之、一未經取代或經取代之萘基(naphthalenic group)、一經取代之、一雙取代苯基、一經取代之及一經取代之所組成之群組中之一，R3係選自由 所組成之群組中之一，且Ar係一未經取代或一經取代之伸苯基(phenylene group)。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該未經取代或該經取代之伸苯基係或，且R2係一氫、一鹵化物(halide)或一烷基(alkyl group)。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中，R2之該鹵化物係氟或氯。
  4. 如申請專利範圍第2項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中，R2之該烷基係甲烷基或乙烷基。
  5. 一種如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用以製備治療由腺苷單磷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase；AMPK)所介導的癌症、脂質代謝疾病或脂質代謝症候群之醫藥組成物。
  6. 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該癌症係肝癌或乳癌。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該化合物係對腺苷單磷酸活化蛋白激酶之α次單元具有結合特異性，並磷酸化活化腺苷單磷酸活化蛋白激酶之α次單元。
  8. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該化合物係誘發脂肪細胞之細胞死亡。
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