TWI670016B - 酵母萃取物之用途 - Google Patents

Abstract

麩胱甘肽雖已知有高度的黑色素產生抑制作用或抗氧化作用等各種的美容效果，但在日本國內仍是歸類為醫藥品而無法利用於作為食品。然而，尤以近年來食品要求此種機能。

針對萃取自有食用經驗且安全性被認可之酵母的含麩胱甘肽之酵母萃取物，利用小鼠B16黑色素瘤細胞來確認抑制黑色素產生的效果，結果確認了：與同濃度的麩胱甘肽單質相比可獲得2倍以上之優良的黑色素產生抑制效果。

Description

酵母萃取物之用途

本發明提供利用有食用經驗且安全性被認可的酵母，於菌體培養後萃取出酵母萃取物，利用所得酵母萃取物及麩胱甘肽的黑色素產生抑制劑。

抗衡因年齡增長、壓力、暴露於紫外線等原因所引起的色斑、皺紋、鬆弛等皮膚症狀的惡化而美麗地保持肌膚的美觀，對於女性而言為關切的要事。因此，吾人謀求用以預防或改善皮膚症狀的惡化之手段，迄此已完成各種研究。特別是，色斑、斑點、日曬後之色素沉澱等已知係因存在於皮膚之色素細胞(黑色素細胞)的活化使黑色素生成顯著亢進而引起。作為用以預防或改善此等色素沉澱所涉及之皮膚症狀的惡化的素材之一，已知有麩胱甘肽。

麩胱甘肽係指麩胺酸、半胱胺酸、甘胺酸此三種胺基酸鍵結而成的三肽，具有作為在細胞內保護細胞免於活性氧或過氧化物質侵害之抗氧化物質的作用、或將異物排出至細胞外之解毒作用等生物體內重要的作用。在肌膚中，活 性氧亦屬黑色素色素的產生原因，據認為藉由麩胱甘肽的抗氧化作用可抑制色斑、色素沉澱。

[先前技術文獻]

[專利文獻]

[專利文獻1]日本特開2002-29920號公報

麩胱甘肽雖已知有高度的黑色素產生抑制作用或抗氧化作用等各種的美容效果，但在日本仍是歸類為醫藥品而無法利用於作為食品。

本發明之課題為提供作為食品、或醫藥品等之安全性高且美白效果優良的黑色素產生抑制劑。

吾人有鑒於此實情而致力重複研究，發現：利用有食用經驗且安全性受認可的圓酵母(Torula yeast)，於菌體培養後萃取出酵母萃取物，所得富含麩胱甘肽之酵母萃取物具有較麩胱甘肽單獨時更高的黑色素產生抑制效果，而完成本發明。

亦即，本發明提供： (1)一種黑色素產生抑制劑，其含有酵母萃取物及麩胱甘肽；(2)一種飲食品，其含有如(1)之黑色素產生抑制劑；(3)一種化妝品，其含有如(1)之黑色素產生抑制劑；(4)一種醫藥品，其含有如(1)之黑色素產生抑制劑。

針對萃取自有食用經驗且安全性受認可之食用酵母的含麩胱甘肽之酵母萃取物，利用小鼠B16黑色素瘤細胞來確認黑色素產生抑制的效果，結果確認了：與同濃度的麩胱甘肽單獨時相比可獲得2倍以上之優良的黑色素產生抑制效果。

1‧‧‧對照組

2‧‧‧麩胱甘肽

3‧‧‧本案發明(含麩胱甘肽之酵母萃取物)

4‧‧‧正對照(乳酸鈉)

圖1顯示黑色素產生抑制效果。

本發明所使用的酵母可無特別限制地使用。舉例來說，若萃取自含有麩胱甘肽的酵母時，由於可獲得含酵母萃取物與麩胱甘肽的含麩胱甘肽之酵母萃取物，因而較佳。特佳之酵母係一般名稱稱為「圓酵母」的高蛋白假絲酵母(Candida utilis)。酵母的培養形式不特別限制，一般係使用批次培養、或連續培養任一種。培養基亦可使用一般所使用者。舉例來說，作為碳源，可使用葡萄糖、乙酸、乙醇、甘油、糖蜜、亞硫酸紙漿廢液等。作為氮源，可使用尿素、氨、硫酸銨、 氯化銨、硝酸鹽等。就磷酸、鉀、鎂源而言，亦以過磷酸石灰、磷酸銨、氯化鉀、氫氧化鉀、硫酸鎂、氯化鎂等一般的工業用原料為佳。此外，一般係添加鋅、銅、錳、鐵離子等無機鹽。又，亦有添加維生素、胺基酸、核酸相關物質等者。尚可添加酪蛋白、酵母萃取物、肉萃取物、腖等的有機物。培養溫度為21~37℃，較佳為25~34℃；pH為3.0~8.0，尤以3.5~7.0為佳。由於胺基酸或核酸的生產性會隨培養條件而變動，因此因應目標之酵母萃取物的製品規格來進行條件設定。

於菌體培養後由酵母菌體進行萃取。萃取法無特別限制，一般而言，可藉由自消化法、熱水萃取法、酵素萃取法、酸或鹼萃取法、或此等之組合來進行。

藉由自消化進行萃取時，例如，在55℃下攪拌4小時。如採酵素萃取法，係以細胞壁溶解酵素或蛋白酶等進行攪拌萃取。如採酸萃取法，係以硫酸等調整成酸性後進行萃取。如採鹼萃取法，則調整成鹼性後進行萃取。於自消化後(例如在55℃下攪拌4小時)，亦可採進行酵素萃取等的組合。

萃取後，以離心分離將酵母殘渣分離，於濃縮後進行冷凍乾燥或熱風乾燥，由此可得含麩胱甘肽之酵母萃取物。酵母萃取物中所含之麩胱甘肽可為還原型麩胱甘肽、氧化型麩胱甘肽、及此等之混合物的任一種。酵母萃取物中的麩胱甘肽含量，只要在酵母萃取物中含有麩胱甘肽即可。例如為含有3質量%以上，較佳為10質量%以上之麩胱甘肽的酵母萃取物。更佳為在乾燥酵母萃取物中含有15質量%以上之麩胱甘肽的酵母萃取物。為使酵母萃取物中的麩胱甘肽含量達 15%以上，培養酵母中的麩胱甘肽含量愈高愈佳，據此，依前述之萃取法萃取出酵母萃取物者的效率較好。作為提高酵母中的麩胱甘肽含量之方法，宜為周知之方法。例如有對培養基中添加鋅離子的方法(日本特開2000-279164號公報)；以鎘耐性、巨環內酯系抗生物質耐性為指標的富含麩胱甘肽之酵母株的取得方法(日本特開2006-42637號公報、日本特開2006-42638號公報)。如日本特開2011-103789號公報所述，亦可藉由變異酵母菌體萃取獲得。又，亦可使用一般販售的酵母萃取物。例如有KOHJIN Life Sciences公司製「Hithionextract」YH-15、YH-D18等。

麩胱甘肽濃度的測定方法係以DTNB-HPLC法(Journal of Chromatography,194(1980)424-428)進行。本案的麩胱甘肽含量係指合併還原型及氧化型麩胱甘肽的總麩胱甘肽含量。

本發明中，由於酵母萃取物中之成分與麩胱甘肽的加乘效果，藉由對於麩胱甘肽含量較低、或不含麩胱甘肽的酵母萃取物添加麩胱甘肽亦可製成含麩胱甘肽之酵母萃取物。

本發明提供以含有上述之本發明富含麩胱甘肽之酵母萃取物為特徵的飲食品、化妝品、皮膚外用劑或醫藥品。

本發明中的飲食品係指摻合有上述組成物的食品、飲品、嗜好品、補給品等經口攝取者。其形態不特別限定，可以採用：可製成麵包類、麵類等主食者； 可製成乳酪、火腿、維也納香腸、魚貝類加工品等副食者；果汁飲料、碳酸飲料、乳飲料等飲料；餅乾、蛋糕、果凍、布丁、糖果、優格等嗜好品等。又，作為補給品之形態亦不特別限定，亦可採用錠劑、膠囊、軟膠囊、營養飲料狀的形態。

飲食品中的上述組成物的摻合量只要具有黑色素產生抑制效果則不特別限定，例如含麩胱甘肽之酵母萃取物，相對於飲食品的質量100g含有10pg~20g即可。其中較佳為100pg~2g，更佳為10ng~500mg。

本發明之化妝品係指摻合有上述組成物的化妝水、乳液、粉底、口紅等。

組成物的摻合量不特別限定，例如相對於上述組成物的質量100g含有10pg~20g即可。其中較佳為100pg~2g，更佳為10ng~500mg。

又本發明可作為皮膚外用劑等的醫藥品使用。雖意指摻合有上述組成物的洗劑、乳劑、軟膏、噴霧劑、貼劑(材)等之形狀者，惟其形態不特別限定，只要可發揮本發明目的之效果即可，可為任意形態。

醫藥品中的組成物的摻合量不特別限定，例如富含麩胱甘肽之酵母萃取物，相對於組成物的質量100g10pg~20g即可。其中較佳為100pg~2g，更佳為10ng~500mg。

[實施例]

以下舉出實施例對本發明更詳細加以說明，惟本發明不受此等實施例所限定。

(實施例1)

含麩胱甘肽之酵母萃取物的製造

(酵母的培養)

預先在含有YPD培養基(酵母萃取物1%、聚腖2%、葡萄糖2%)的三角燒瓶中將Candida utilis CS7529株(FERMP-3340)進行種母培養，在30L容量發酵槽中，於18L培養基中將其進行1~2%的接菌。培養基組成使用葡萄糖4%、磷酸一銨0.3%、硫酸銨0.161%、氯化鉀0.137%、硫酸鎂0.08%、硫酸銅1.6ppm、硫酸鐵14ppm、硫酸錳16ppm、硫酸鋅14ppm。培養條件採用pH4.0、培養溫度30℃、通氣量1vvm、攪拌600rpm進行，並添加氨來進行pH的控制。進行16小時的菌體培養後，回收培養液，藉由離心分離集菌，而得到180g的濕潤酵母菌體。

(酵母萃取物的萃取)

藉由將菌體培養後的濕潤酵母菌體懸浮於蒸餾水並重複離心分離來進行清洗。清洗後再度將濕潤菌體懸浮於蒸餾水、或將經冷凍乾燥或熱風乾燥的乾燥菌體懸浮於蒸餾水，並調整為以下條件來進行萃取物萃取。

自消化：以1N HCl調整為pH5.0後，在55℃下攪拌4小時

酵素萃取：以1N NaOH調整為pH7後，以細胞壁溶解酵素(Tunicase)或蛋白酶在55℃下進行4小時攪拌萃取

酸萃取：以1N硫酸調整為pH2以下後，在65℃下進行2分鐘攪拌萃取

鹼萃取：以2N NaOH調整為pH13後，在70℃下進行20分鐘攪拌萃取

(酵母萃取物的乾燥)

萃取後以離心分離分離酵母殘渣，並將萃取物濃縮後，進行冷凍乾燥或熱風乾燥而得到含麩胱甘肽之酵母萃取物。還原型麩胱甘肽含量為15.51%、麩胱甘肽含量(總麩胱甘肽含量)為17.68%。

(黑色素產生抑制效果的確認)

依循以下程序測定黑色素產生抑制效果。

<黑色素產生抑制效果的驗證>

將B16小鼠黑色素瘤細胞播種於6井平板(2×10⁴/井)，進行24小時前培養(5%CO₂、37℃)。培養液使用含5%胎牛血清的D-MEM培養基。其後，更換為新鮮培養基，其中添加麩胱甘肽(比較例1)、富含麩胱甘肽之酵母萃取物(實施例1)使最終濃度以還原型麩胱甘肽換算計成為1.0mM，及已知有黑色素產生抑制效果的乳酸鈉(比較例2)使最終濃度成為50mM。在播種後第4日去除培養基，將平板以PBS(磷酸緩衝生理食鹽水)清洗後，以0.25%胰蛋白酶EDTA剝離，並藉由離心(10000rpm、3min)操作回收團粒(細胞)。回收之團粒以PBS清洗2次後，以1mL的PBS調整細胞浮游液而將0.8mL使用於黑色素量的測定、將0.2mL使用於蛋白質的定量。

將作為黑色素量的測定用之回收團粒以150μL的1N NaOH熔解(100℃、10分)，利用微盤分析儀(microplate reader)測定405nm的吸光度。作為蛋白質的回收定量用之團粒以BCA法進行蛋白質的定量。以添加水者為對照組，求取令對照組為100%時，添加比較例1、2而培養的細胞之每單位蛋白質的黑色素量作為黑色素生成率。

將實施例1之結果示於圖1。如圖1所示，就麩胱甘肽單獨時(比較例1)，黑色素產生抑制率與對照組相比為約40%，相對於此，本案發明之富含麩胱甘肽之酵母萃取物的黑色素產生抑制率與對照組相比為約85%，可判斷與麩胱甘肽單獨時相比具有2倍以上的黑色素產生抑制效果。可認為此係因麩胱甘肽與酵母萃取物中的麩胱甘肽以外之成分顯示加乘效果所致。因此，本發明之富含麩胱甘肽之酵母萃取物可作為食品使用，並可發揮優良的黑色素產生抑制效果，而有用於作為黑色素產生抑制劑。

Claims (1)

1. 一種酵母萃取物之用途，係使用酵母萃取物以製造黑色素產生抑制劑，該黑色素產生抑制劑含有酵母萃取物及麩胱甘肽，該酵母萃取物含有15質量%以上的麩胱甘肽。