TWI666324B - 蟬花活性物質及其用於降低眼壓之用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種蟬花活性物質用於製備降低眼壓之口服組合物的用途。此蟬花活性物質係經下列步驟製備：(a)取蟬花菌絲體於平板培養基上，於15-35℃培養5-14天；(b)將步驟(a)培養後之蟬花菌絲體接種至燒瓶內，於15-35℃、pH 2-8的條件培養3-10天；(c)將步驟(b)培養後之蟬花菌絲體接種至發酵槽內，於15-35℃、pH 2-8的條件培養3-10天，形成蟬花菌絲體發酵液；(d)將蟬花菌絲體發酵液冷凍乾燥後磨粉，形成蟬花菌絲體凍乾粉；及(e)將蟬花菌絲體凍乾粉以溶劑萃取，形成含有蟬花活性物質之蟬花菌絲體萃取液。

Description

蟬花活性物質及其用於降低眼壓之用途
本發明關於一種蟬花活性物質及包含其之組合物，特別是指此蟬花活性物質及其組合物在用於降低眼壓之用途。
房水(Aqueous humor)
眼睛由柔軟而堅強的組織構成，能輕巧而快速的運動。房水於眼睛中循環，攜帶氧氣、糖分以及滋養眼睛所需的其他必要養分。房水的成份與其流經路線的組織產生的新陳代謝物有關，例如水晶體會消耗房水中的葡萄糖、鉀離子及氨基酸，而產生乳酸的代謝物；角膜也具類似情形，其代謝也會消耗由房水供給的養分。因此和眼球後房比較，前房(anterior chamber)的房水含有較低濃度的葡萄糖和較高濃度的乳酸。角膜的內皮細胞為了保持角膜的澄清透明，必需以每小時10mL的速度將水份排到前房；而正常情況下，每隻眼分泌房水的速度約為每小時150mL。睫狀體(ciliary body)負責分泌房水，房水的分泌速度與房水由小樑組織(trabecular meshwork,TM)和葡萄膜鞏膜通路(uveoscleral outflow)流出的速度，是決定眼壓高低的主要因素。
眼壓
眼壓又稱之為眼內壓(Intraocular pressure,IOP)，係指眼球內容物對眼球內壁的壓力。正常眼壓通常落在10-21mmHg之間，雙眼的差異不大於5mmHg，且每天的波動範圍在8mmHg之內。高眼壓容易對視神經造成損害，導致青光眼。
眼壓係通過房水生成和排出的動態平衡所維持，其可以由三個參數影響：房水的生成速率，房水排出的阻力以及靜脈壓力。靜脈壓力很少變化，故調節眼壓的藥物主要以調節房水的生成速率和排出阻力來控制眼壓。
青光眼(Glaucoma)
青光眼(Glaucoma)的成因主要為睫狀體分泌房水的速度過快，或房水由小樑組織和葡萄膜鞏膜通路的排出受到阻塞，使得前房之房水滯留，而造成眼內壓異常升高。長期高眼內壓會造成視網膜神經節細胞(retinal ganglion cells)慢性、不可逆的退化，進而導致視野缺損、視覺神經損傷及失明。青光眼依致病原因可分為先天性青光眼、繼發性青光眼、慢性隅角開放性青光眼及急性隅角閉鎖性青光眼。
青光眼藥物
目前臨床上常用治療青光眼藥物大致可分為七種，其中β-交感神經阻斷劑或***素衍生物若無使用禁忌，則為首選藥物。青光眼治療後需固定追蹤，以確定療效或副作用。若單一藥品治療效果不理想，可能需要多種藥物合併治療。使用一種以上眼藥水時，需注意藥水之間需間隔五分鐘，懸浮液劑型眼藥需最後使用，並應注意勿將藥水瓶口觸碰眼睛，以保持眼藥水的無菌度。
β-交感神經阻斷劑(β-Adrenergic blockers)
此類藥品可降低房水分泌，降低眼壓效果顯著，目前為第一線用藥。其主要副作用為眼睛刺激(刺痛感、灼熱感)、結膜炎、角膜炎。另外，可能經由黏膜吸收而有全身性的副作用。非選擇性的β-交感神經阻斷劑，如timolol，可能引起的全身性副作用為心跳變慢、心律不整、眩暈、氣喘發作，因此患有心律不整及氣喘的病人應避免使用。
α 2-交感神經致效劑(α 2-Adrenergic agonists)
此類藥品可減少房水分泌及增加葡萄膜鞏膜路徑房水流出而降低眼壓，若病人對β-交感神經阻斷劑耐受不佳或有禁忌時，可做為替代用藥。其主要副作用為過敏性結膜炎、結膜充血、眼睛搔癢、灼熱感、視覺模糊、口乾。此類藥品不可與精神科用藥的單胺氧化酶抑制劑(Monoamine Oxidase Inhibitors,MAOIs)一起使用，可能加重其副作用。
膽鹼激素致效劑(Cholinergic agonists)
此類藥品為治療青光眼的最早用藥，藉由縮小瞳孔拉緊虹膜來增大眼前房隅角的空間，增加前房隅角房水的流出而降低眼壓。此類藥品副作用較顯著，如可能造成睫狀肌收縮引起頭痛，眼部刺痛感、灼熱感、點藥後瞳孔會縮小，患者在光線不佳時視力會減弱，現今使用率已降低。
碳酸酐酶抑制劑(Carbonic anhydrase inhibitors)
此類藥品可以抑制房水的分泌來降低眼壓，可分為口服與眼藥水劑型。口服劑型的副作用為噁心、嘔吐、手腳發麻、疲倦、腎結石、近視、味覺異常等。因其副作用多，現多用於輔助降眼壓藥物。其眼用製劑全身副作用較少，常見副作用為結膜炎、視力模糊、眼睛搔癢、灼熱感、畏光。 因其為磺胺類藥物，對磺胺藥過敏之患者，應避免使用。有嚴重腎功能不全的病人(肌酸酐廓清率<30mL/min)也不建議使用。
***素衍生物(Prostaglandin analogs)
此類藥品可增加葡萄膜鞏膜路徑房水的排出而降低眼壓，因其藥效長、降壓效果好，每天僅需使用一次。其藥價較高，雖有些文獻將其列為治療建議中的第一線用藥，但健保規定限用於β-交感神經阻斷劑效果不佳或不適用時方可使用。副作用為視力模糊、結膜充血、眼睛搔癢、乾眼、角膜炎、眼周色素沉澱、睫毛增生及顏色變深(其為不規律增生，可能導致睫毛倒插，停藥後可回復)、黃斑部水腫、虹彩炎、畏光(可於睡前給藥，避免不適)等。
複方製劑
許多青光眼病人必須點兩種以上的眼藥，才能達到降眼壓效果。複方眼藥水結合了兩種不同作用機轉的藥品，可減少每日點藥次數，增加點藥順服性，也可減少防腐劑用量。複方製劑的副作用與所含各成分相似，病人可因其降壓效力與耐受性做選擇。
滲透壓利尿劑(Osmotic diuretics)
此類藥品如靜脈注射mannitol及口服液isosorbide，因其可升高血液張力，使玻璃體體積因其內水分被吸取至血管中而減少，因而可降低眼壓並使虹膜及水晶體往後位移，增加隅角深度。Mannitol注射液可用於急性青光眼快速降眼壓，但不適用於有脫水狀態、排尿困難、腎機能障礙及鬱血性心臟病患。此類藥物全身副作用多，如頭痛、頻尿、嘔吐、電解質不平衡等，為非常態使用之降眼壓藥物。
蟬花(Cordyceps cicadae)
型態與分布
蟬花又名土蟬花、蟲花、蟬草、胡蟬、蟬菌、蟬蛹草、金蟬花、蟬茸或蠶茸等，為子囊菌亞門(Ascomycotina)，麥角菌目(Claricipiyales)，麥角菌科(clavicipitaceae)，蟲草屬(Cordyceps)真菌，由感染蟬蛹或蟬科山蟬(Cicada flammate)、螻蛄(Platypleura kaempferi)、黑蚱(Crytotympana pustulata)及竹蟬(Platylomia pieli)等幼蟲身上使其死亡，後於蟬蛹前端或蟲體頭部形成花蕾狀子座而成，故名蟬花，為一種菌蟲複合體。蟬花可依不同的寄主及感染菌種分類為大蟬花或金蟬草(C.cicadae)、小蟬花(C.sobolifera)及蟬草，或蟬生蟲草(C.cicadicola)三種。蟬花多產於長江以南熱帶和亞熱帶地區，在中國為福建、浙江、四川、雲南及江蘇等地。在台灣部分山區亦有野生蟬花子實體蹤跡。
蟬擬青黴的有性階段，被認為是大蟬草(Cordyceps cicadae)，大蟬草俗名獨角龍，子座棒狀或角狀，從寄主頭部發出，單生或叢生，褐色。在自然界廣為分布的是蟬擬青黴(蟬花)，大蟬草稀少。
功效
蟬花為名貴傳統中藥材，性寒、味甘、無毒，曬乾後可入藥，有散風熱、鎮驚、明目、退翳障、透疹之功效。《本草綱目》稱其主治小兒天吊、驚癇、心悸、夜啼。
蟬花入藥已有一千多年歷史，且野生蟬花之歷史記載比冬蟲夏草早了800年。蟬花之名最早見於南北朝劉宋時代之《雷公炮製論》，其中記載：凡使蟬花要白花全者。收得後於屋下懸乾，去甲土後用漿水煮一 日，至夜焙乾，研細用之。
宋朝蘇頌的傳統醫書《圖經草本》記載「山蜀中，其蟬上有一角，如花冠狀，謂之蟬花。」；北宋唐慎微所著《証類草本》記載「蟬花味甘、性寒、無毒，具疏散風熱、定驚解痙之效，主治小兒夜啼、心悸等症狀。」；《本草綱目》亦記載「蟬花功同蟬蛻，又止瘧疾。」；亦有中醫藥書記載主治翳膜遮睛，如：《景岳全書》「蟬花散：治肝經風熱，毒瓦斯上攻，眼目赤痛，及一切內外翳障。」但上述功效目前仍無相關科學論證或發表。
現今亦有文獻報導「蟬花五味散」及「萬應蟬花散」等傳統方劑應用於眼部相關疾病之研究。河南醫科大學第一附屬醫院眼科的彭廣華等曾以中藥生液散和「蟬花五味散」配合西藥治療外傷性低眼壓。外傷性低眼壓是眼外傷的一種常見併發症，會嚴重影響視功能。該研究結果顯示中西藥治療組14人達正常眼壓(>1.33kPa)，有效率占46.67%，平均提高眼壓0.76kPa，西藥治療組30人中8人達正常眼壓，有效率占26.67%，平均提高眼壓0.41kPa；中國新鄉市中醫院徐大梅等觀察「萬應蟬花散」加減內服外洗治療春季結膜炎100例臨床觀察，並與西藥治療做對比觀察。結果治療組治癒率為78%，對照組為26%。一年後，治療組復發率為22%，對照組為88%。
上述二例皆為添加蟬花子實體之複方藥劑的應用，分別用於提高眼壓與治療春季結膜炎之臨床觀察，並無明確表示蟬花對降低眼壓之功效或青光眼之預防效果。
蟬花與冬蟲夏草同屬蟲生真菌複合體，蟬花之功能性與應用 性不亞於冬蟲夏草和蛹蟲草，具相近醫療保健功效，且含有相近的化學成分，所以常作為冬蟲夏草的代用品。而天然冬蟲夏草產量日趨減少，且天然蟬花子實體亦不多，限制了大量的使用。故可以人工培養作為天然蟬花之替代品，人工培養物的主要生物活性成分、藥理學作用均和天然蟬花相似或超出天然蟬花。天然蟬花的產生需依賴於寄主，而寄主又受自然環境的制約，特別是受氣候因子或人為因素的影響。以人工培養品來替代日益枯竭的自然資源，為一條理想的途徑，因此蟬花液態發酵菌絲體具高度經濟應用價值。
本發明之目的為提供一種蟬花活性物質的新穎用途，其可以用來製備具降低眼壓或治療青光眼的藥物。相較於先前技術所介紹的治療青光眼藥物皆為化學性的藥物，而本發明使用的蟬花活性物質更為天然、安全，且製備方法簡便。
根據本發明，提供一種蟬花活性物質用於製備降低眼壓之口服組合物的用途。此蟬花活性物質係經下列步驟製備：(a)取蟬花菌絲體於平板培養基上，於15-35℃培養5-14天；(b)將步驟(a)培養後之蟬花菌絲體接種至燒瓶內，於15-35℃、pH 2-8的條件培養3-10天；(c)將步驟(b)培養後之蟬花菌絲體接種至發酵槽內，於15-35℃、pH 2-8的條件培養3-10天，形成蟬花菌絲體發酵液；(d)將蟬花菌絲體發酵液乾燥後磨粉，形成蟬花菌絲體凍乾粉；及(e)將蟬花菌絲體凍乾粉以溶劑萃取，形成含有蟬花活性物質之蟬花菌絲體萃取液。
一實施例中，製備蟬花活性物質使用的蟬花菌絲體為寄存於財團法人食品工業發展研究所，寄存編號為MU30106之蟬花菌絲體。
一實施例中，製備蟬花活性物質的步驟更包括步驟(f)：將蟬花菌絲體萃取液乾燥，以獲得蟬花活性物質。
一實施例中，步驟(c)的發酵槽更進一步通入氣體，此氣體包括空氣、氧氣、二氧化碳、氦氣或其組合。
一實施例中，步驟(c)中發酵槽的槽壓為0.5-1.0kg/cm2且通氣速率為0.01-1.5VVM。
一實施例中，組合物為食品組合物或醫藥組合物。
一實施例中，當組合物為醫藥組合物時，此組合物進一步包含藥學上可接受之載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑。
一實施例中，步驟(e)中使用的溶劑為醇類、水或水醇混合液。
一實施例中，醇類的體積係大於蟬花菌絲體發酵液凍乾粉的體積至少10倍。
一實施例中，蟬花活性物質之用途係用於製造治療青光眼之口服組合物。
為使本發明之特徵及優點能更加清楚，以下配合圖式說明本發明之實施方式。
第1圖至第3圖繪示兔子眼壓變化的結果(分別對應表3至表 6)。
第1圖繪示正常兔眼內壓動物模式之眼內壓。
第2圖繪示正常兔眼內壓動物模式之眼內壓變化量(Delta IOP)。
第3圖繪示正常兔眼內壓動物模式之Delta IOP比例變化。
實驗原理
正常兔眼內壓動物模式
本試驗中使用成年、8-12週齡、雌性之紐西蘭白兔(New Zealand White(NZW)Rabbit)，此品系實驗動物已有豐富的基礎參考資料與數據，可適用於正常兔眼內壓動物模式。試驗中採用正常眼壓模式，比起誘導性高眼壓數據上較不易失真，為目前藥物開發常採用的方式。
實驗步驟
蟬花活性物質的製備
蟬花菌絲體來源
本發明之實施例所用之蟬花(Cordyceps cicadae)菌絲體係由採集而得之台灣野生蟬花子實體，經分離而得其菌絲，並繼代保存於平板培養基上，經台灣食品工業發展研究所做鑑定證實其基因序列為蟬花(Cordyceps cicadae)，此菌株現已公開寄存於財團法人食品工業發展研究所之生物資源研究中心(BCRC)，寄存編號為MU30106(此菌株亦寄存於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，編號CGMCC No.10486)。但本發明所述 之蟬花活性物質不限於由此菌種所得。
液體培養
液態發酵培養可依規模大小而有不同程度之控制設備，包括搖瓶、槽體、攪拌控制、溫度控制、pH控制、溶氧控制、消泡控制及發酵程序控制等，比起固態培養，不需耗費大量人力及時間成本，且製程可完全在無菌環境中且能均勻取樣控管品質，量產時再現性佳。本發明的蟬花活性物質，係將蟬花菌絲體以液體培養後萃取而得。液體培養係先將菌絲體接種於平板培養基上，於適當溫度15-35℃(較佳為25℃)下培養5天至2周後，刮取菌絲接種於燒瓶內。在15-35℃(較佳為25℃)，pH 2-8，較佳為pH 4-7，更佳者約pH 4.5，震盪速率10-250rpm之下培養3-10天。然後將燒瓶培養物接種於發酵槽培養基(成分如下表1，與燒瓶培養基相同)內，在15-35℃(較佳為25℃)、槽壓0.5-1.0kg/cm2、pH 2-8、10-150rpm攪拌速度或不攪拌(air lift)情況、0.01-1.5VVM通氣速率(通入空氣或空氣與氧氣、二氧化碳與氮氣的混合物，較佳者為空氣)的條件下培養3-10天，即得蟬花菌絲體發酵液，包括菌絲體與澄清液。此發酵液內即含本發明之蟬花活性物質。蟬花菌絲體發酵液可進一步藉由乾燥步驟製備為發酵液凍乾粉。
上述培養基配方中，綜合性碳氮源可為穀類(如：麥粉類) 或豆類(如：黃豆粉、綠豆粉、大豆粉等)；無機鹽類可為硫酸鎂、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鐵等；醣類可為葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖等。特別說明的是，上述培養基配方僅為一範例，使用時成份可依需求調整，或搭配市售培養基使用，並無特別限制。
乾燥
本發明使用的乾燥方法包含但不限於：噴霧乾燥、熱風乾燥、滾筒乾燥、冷凍乾燥、減壓濃縮或其他適合的乾燥方法，以將蟬花菌絲體發酵液製備成發酵液凍乾粉。
醇萃取
蟬花菌絲體發酵液經乾燥法製備而得之發酵液凍乾粉加入醇類溶劑(1-100%甲醇或乙醇，重量百分濃度或體積百分濃度)回溶，萃取數分鐘(包含但不限於浸泡、攪拌、震盪或超音波萃取法)，之後經減壓濃縮法或上述之任一乾燥法進行乾燥，即得蟬花菌絲體醇萃物。
實施例一 蟬花液態發酵培養及活性物質之製備
菌絲體菌株：BCRC MU30106
平板培養：將蟬花菌絲體接種於平板培養基上，培養基為馬鈴薯糊精培養基(Potato Dextrose Agar,PDA)，於25℃下培養約5天。
燒瓶培養：刮取平板上之菌絲接種於燒瓶內，用下表2之培養基，在約25℃，pH 4.5下，於震盪機上以轉速120rpm震盪培養3天。
發酵槽培養：培養基同表2，將燒瓶培養物接種於發酵槽培養基內，在25℃，槽壓0.5-1.0kg/cm2，pH 4.5下，10-150rpm攪拌速度或不攪拌(air lift)情況，以0.5-1.0VVM通氣速率通入空氣，培養3天，得菌絲體與澄清液，稱為蟬花菌絲體發酵液。發酵液內含本發明之蟬花活性物質。將蟬花菌絲體發酵液經冷凍乾燥可得發酵液凍乾粉。
萃取物製備-醇萃取：取蟬花菌絲體發酵液凍乾粉加入20倍體積乙醇(體積百分濃度95%)回溶，利用超音波震盪萃取1小時，萃取懸浮液離心後取上清液經減壓濃縮，得蟬花菌絲體醇萃物(此例中為黏稠膏狀)。
結果：20公噸發酵槽培養完畢之蟬花菌絲體發酵液經冷凍乾燥後，可得約110公斤發酵液凍乾粉。經由萃取步驟可取得較高濃度之用以降低眼壓或治療青光眼其所導致之病變的蟬花活性物質。蟬花活性物質的態樣包含蟬花菌絲體發酵液(菌絲體與澄清液)、發酵液凍乾粉、醇萃物或其他劑型。以下實施例二中，係以醇萃物作為蟬花活性物質態樣。
實施例二 降眼壓動物模式及相關指標之分析
實驗動物
使用實驗動物為成年、8-12週齡、雌性之紐西蘭白兔(New Zealand White(NZW)Rabbit)，以耳朵標記試驗編號以區分實驗動物個體，並於飼育籠上 標示籠號、品系、週齡、動物試驗編號、試驗組別、入室日期及試驗期間。飼養區之光照時間自動控制為12小時亮、12小時暗，室溫23±2℃、相對溼度40-70%。動物可自由取得充分之食物及飲水。實驗動物在檢疫及試驗期間分別由獸醫師及試驗人員每日進行臨床症狀觀察並紀錄，以確保實驗動物健康狀況。實驗動物經檢疫、馴化1週後，始可開始進行實驗。
實驗開始前(D0)，依據實驗動物體重隨機分組，使各組平均體重及體重分布趨勢相近，並測得實驗動物之右眼眼內壓(intraocular pressure,IOP)作為基準點。
溶劑與試驗物質
上述發酵所得黏稠膏狀蟬花醇萃物，進行管餵時，將其溶於比例為大豆沙拉油：生理食鹽水=1：1之溶劑中。正對照組為市售治療青光眼藥物Timolol，能降低眼球內房水的產生，間接降低眼內壓，本試驗中所用濃度為0.5%。Timolol係以眼藥水滴劑方式施用。
試驗分組
試驗中將動物分為5組，每組各5隻動物，每日投予試驗物質一次，見下表3所示表3、試驗動物之分組
試驗方式
實驗動物依組別每日分別投予溶劑、試驗物質(即含有本發明蟬花醇萃物)或正對照藥物(0.5% Timolo)一次。並於投予溶劑、試驗物質或正對照藥物前1小時、後1小時及後3小時分別測量右眼之眼內壓。並分別比較眼內壓、眼內壓變化量(Delta IOP)、Delta IOP比例變化之表現。
眼內壓：於各時間點以回彈式眼壓計TonoVet Tonometer對受試動物進行右眼眼內壓檢測，其優點為不需麻醉受試動物，且無痛可直接檢測，並漸少因麻醉帶來的誤差。
眼內壓變化量(Delta IOP)：為各時間點相較於0hr之眼內壓變化量
△IOP=IOP time point -IOP 0hr
Delta IOP比例變化：為各時間點之△IOP相較於0hr之IOP變化量比例
Percentage of △IOP=△IOP/IOP 0hr
試驗數據分析
本試驗數據以實驗結果之平均值(Mean)±標準差(standard error of mean, S.E.M.)來表示。採用Student's t-test比較各組間是否具差異性，若p值小於0.05則表示兩試驗組之間具有統計上顯著差異。
實施例三 蟬花活性物質對於降眼壓及相關指標之效果評估
眼內壓(IOP)
眼內壓的測量結果如下表4及圖式第1圖所示，其中星號標記(*)表示試驗組與溶劑對照組有顯著差異。單星號(*)代表P<0.05；雙星號(**)代表P<0.01；三星號(***)代表P<0.001。
相較於溶劑對照組，蟬花2.5mg/kg/b.w.醇萃物組在第一天投藥後1小時[D1(1)]，眼內壓即顯著降低。蟬花25mg/kg/b.w.醇萃物組在第一天投藥後1小時[D1(1)]、3小時[D1(3)]及第二天投藥後1小時[D2(1)]皆可顯著降低眼內壓。正對照組0.5% Timolol於投藥後各時間點皆可明顯降低眼內壓。
眼內壓變化量(△IOP)
眼內壓變化量的測量結果如下表5及圖式第2圖所示，其中星號標記(*)的意義與表1及第1圖相同，皆表示試驗組與溶劑對照組有顯著差異。
表5、正常兔眼內壓動物模式之眼內壓變化量(對應第2圖)
相較於溶劑控制組，蟬花25mg/kg/b.w.醇萃物組在第一天與第二天投藥後1小時及3小時，皆可顯著降低眼內壓變化量。正對照組0.5% Timolol組除第二天投藥後三小時無顯著降低△IOP，其他時間點皆可顯著降低△IOP。
眼內壓變化量的百分率(Percentage of Delta IOP)
眼內壓變化量百分率(比例變化)的測量結果如下表6及圖式第3圖所示，其中星號標記(*)的意義與上述相同，皆表示試驗組與溶劑對照組有顯著差異。
相較於溶劑控制組，蟬花25mg/kg/b.w.醇萃物組在第一天與第二天投藥後1小時及3小時，皆可顯著降低△IOP百分率。正對照組0.5% Timolol組除第二天投藥後三小時無顯著降低△IOP百分率之外，其餘時間點 皆可顯著降低△IOP百分率。。
上述實施例三之試驗證明，以實施例一製備方法製成的蟬花活性物質，對於正常兔眼壓模式動物，口服即有顯著之降眼內壓(IOP)效果，甚至可達成接近已證明療效之Timolol藥物的治療效果。故蟬花活性物質可應用於降眼壓及預防青光眼之領域。
根據上述動物低劑量與高劑量分組試驗，換算出的人體有效劑量約介於52.34mg/人/天至523.4mg/人/天之間(以每人體重70公斤換算)。
雖然本發明以實施例說明如上，惟此些實施例並非用以限制本發明。本領域之通常知識者在不脫離本發明技藝精神的範疇內，當可對此些實施例進行等效實施或變更，故本發明的保護範圍應以其後所附之申請專利範圍為準。
【生物材料寄存】 國內寄存資訊【請依寄存機構、日期、號碼順序註記】
寄存機構：財團法人食品工業發展研究所之生物資源研究中心(BCRC)
寄存日期：102年11月25日
寄存編號：MU30106

Claims (11)

  1. 一種蟬花活性物質用於製造降低眼壓之組合物的用途，其中該蟬花活性物質係經下列步驟製備：(a)取一蟬花(Cordyceps cicadae)菌絲體於平板培養基上，於15-35℃培養5-14天；(b)將步驟(a)培養後之蟬花菌絲體接種至一燒瓶內，於15-35℃、pH 2-8的條件培養3-10天；(c)將步驟(b)培養後之蟬花菌絲體接種至一發酵槽內，於15-35℃、pH 2-8的條件培養3-10天，形成含有該蟬花活性物質之一蟬花菌絲體發酵液；(d)將該蟬花菌絲體發酵液乾燥後，形成含有該蟬花活性物質之一蟬花菌絲體乾燥品；及(e)將該蟬花菌絲體乾燥品以一醇類萃取，形成含有該蟬花活性物質之一蟬花菌絲體萃取液。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中製備該蟬花活性物質的步驟更包括步驟(f)：將該蟬花菌絲體萃取液乾燥，以獲得該蟬花活性物質。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該蟬花菌絲體為寄存於財團法人食品工業發展研究所，寄存編號為MU30106之蟬花菌絲體。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中步驟(c)中該發酵槽進一步通入一氣體，該氣體包括空氣、氧氣、二氧化碳、氦氣或其組合。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中步驟(c)之該發酵槽的槽壓為0.5-1.0kg/cm2且通氣速率為0.01-1.5VVM。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該組合物為食品組合物或醫藥組合物。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中當該組合物為醫藥組合物時，該組合物進一步包含藥學上可接受之載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該醇類的體積係大於該蟬花菌絲體發酵液凍乾粉的體積至少20倍。
  9. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其係用於製造治療青光眼之組合物。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該降低眼壓之組合物係以口服方式施用。
  11. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中步驟(d)中之該醇類為乙醇。
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