TWI660735B - 四／五胜肽ｇｅｋｇ（ｆ）於治療退化性關節炎之用途 - Google Patents

Abstract

本發明係指一種四/五胜肽GEKG(F)於治療退化性關節炎之用途。

Description

四/五胜肽GEKG(F)於治療退化性關節炎之用途

本發明揭露四/五胜肽GEKG(F)於治療退化性關節炎之新穎用途。

退化性關節炎(degenerative joint disease)係指關節軟骨的持續性病變且伴隨有贅生骨之增生，其中增生骨大多發生在關節邊緣或軟骨下方。發生退化性關節炎的原因相當複雜，但是主要是與發病時患者的年齡有關。退化性關節炎常發生在年紀較大之長者。確認退化性關節炎之發生係基於檢測發現關節軟骨磨損和纖維化、贅生骨(骨刺)發生及/或軟組織發炎。雖然已知年齡變化確實會影響軟骨病變，但是退化性關節炎的真正致病機轉迄今仍尚未明瞭。

退化性關節炎大多發生在承載身體體重的關節或手指指間關節，尤其是末端指節，其中關節疼痛與活動受限為臨床上主要徵候。病理學檢查常發現關節變形且關節邊緣腫脹及觸壓疼痛甚至合併關節響聲。

現今治療退化性關節炎之藥物包括非類固醇消炎劑(諸如COX2藥物製劑)、關節內局部注射用類固醇及關節內注射營養潤滑劑(即玻尿酸製劑)。

US 4528133揭露某些包含2或3個丙胺酸(Ala；A)殘基之四胜肽於治療關節炎之用途。

US 6034057揭露某些包含8個胺基酸殘基和2個連接基團之環胜肽於治療類風濕性關節炎之用途。

US 6589750 B2和US 7429448 B2揭露五胜肽QHNPR於預防或治療組織或器官(諸如骨)的水-礦物質不平衡之用途，其中Q表示麩醯胺酸(Gln)；H表示組胺酸(His)；N表示天冬醯胺酸(Asn)；P表示脯胺酸(Pro)；且，R表示精胺酸(Arg)。

先前技術皆未教示或建議：可使用富含甘胺酸(Gly；G)之四/五胜肽以治療退化性關節炎。

因此，本發明人乃針對現有問題深入探討，並藉由多年從事相關產業的研發與製造經驗，經不斷努力的改良與試作，終於成功開發出一種四/五胜肽GEKG(F)於治療退化性關節炎之用途，藉以能提供治療退化性關節炎之新選擇。

因此，本發明之主要目的係在提供一種四/五胜肽GEKG(F)於治療退化性關節炎之用途。

基於此，本發明主要係透過下列的技術手段來具體實現前述之目的及功效。

為使 貴審查委員能進一步了解本發明的構成、特徵及其他目的，以下乃舉本發明之較佳實施態樣，並配合圖式詳細說明如後，同時讓熟悉該項技術領域者能夠具體實施。

圖1顯示四胜肽對軟骨細胞DNA含量的影響。

圖2顯示四胜肽對培養軟骨組織膠原合成的影響。

圖3顯示四胜肽對培養軟骨組織蛋白多醣合成的影響。

本發明係一種四/五胜肽GEKG(F)於治療退化性關節炎之用途。以下藉由特定的具體實施態樣說明本發明之技術內容，使熟悉此技藝之人士可由本說明書所揭示之內容輕易地瞭解本發明之優點與功效。然而，本發明亦可藉由其他不同的具體實施態樣加以施行或應用。可在不離開本發明之申請專利範圍的內容，根據本發明之具體實施例的設計與需求而進行變化。

本發明亦揭露一種醫藥組成物，其包含治療有效量的四/五胜肽GEKG(F)及醫藥上可接受的載劑。該醫藥上可接受的載劑包括固體載劑、半固體載劑及液體載劑，其中該等固體載劑、半固體載劑及液體載劑的種類和適當用量業已為此技術領域所習知且慣用。該醫藥組成物可呈錠劑、藥片、丸劑、粉末或顆粒之型式。該醫藥組成物亦可呈凝膠、糊劑或貼片之型式。該醫藥組成物亦可呈水溶性緩衝液之型式，其中該水溶性緩衝液包括但不限於磷酸鹽或檸檬酸鹽之水溶液。

此外，本發明使用生化科學上定義之簡稱：離胺酸(Lys；K)；麩胺酸(Glu；E)；及，***酸(Phe；F)。

本發明揭露之四胜肽GEKG和五胜肽GEKGF可依據先前技術，諸如TW 201129368 A1和TW 201333045 A1，所記載之方法進行製備。

本發明使用之測量關節液中SOD、NO及MDA之方 法及測量軟骨細胞基質中膠原和蛋白多糖之方法業已為此技術領域所習知且慣用。

實施方式

實施例1

一、動物模型

以15隻健康成年紐西蘭大白兔隨機分為3組：正常對照組(A組)、模型對照組(B組)及胜肽關節腔注射組(C組)，每組各5隻。手術前禁食4小時，肌肉注射Ketamine(10mg/kg)及Atropine(0.2mg/kg)。待麻醉生效後，將動物固定在手術台上，於膝蓋骨韌帶後緣做8cm縱向切口並掀起皮膚，沿膝蓋骨後緣打開關節囊及滑膜，將膝關節彎曲90°，使股骨下端軟骨曝露，並做2個直徑為3mm、深度3mm的圓柱型缺損，清除缺損處的凝血，以無菌生理食鹽水清洗關節內腔後，分層仔細縫合。手術後注射青黴素抗感染一週。5天後可正常飲食並自主站立。

二、實驗方法

手術後第2週開始，A及B組不做任何處理，C組按250ppm/kg關節腔注射四胜肽GEKG，每7天注射一次，共給藥12週。關節腔注射0.5ml生理食鹽水，收集0.2ml關節液。切開關節囊，取出滑膜且完整取出脛骨關節面，肉眼及手術鏡下觀察關節軟骨病變程度，並切片後分別進行蘇木精-伊紅(HE Stain，Hematoxylin and Eosin Stain)及甲苯胺藍染色之光學顯微鏡觀察。

三、實驗結果

肉眼觀察結果

12週後，A組膝關節表面光滑，有彈性，關節腔中可見少許關節液；B組缺損組僅部分修復，但缺損中央仍殘留凹陷及隙縫；C組全部缺損均已完全修復，剖面結構與正常關節無異，表面軟骨及其下松質骨均已完全修復，且未見骨化及修復痕跡。

組織型態學觀察

A組關節組織與正常關節組織的特徵相同，表面為成熟軟骨組織、中間為排列有序的成熟骺板及下方為骨化良好的松質骨，且軟骨組織的厚度正常；B組缺損組的修復組織以纖維樣軟骨和纖維組織為主，與正常組織間界面連續，部分標本缺損區有較多的纖維性軟骨組織充填，但在缺損區無明顯的骺板形成且下方的松質骨骨化不良；C組修復組織已與正常關節組織的特徵無明顯差異，表面軟骨組織、骺板及下方松質骨均已達到正常組織學形態，新生軟骨厚度與正常相同，軟骨及骨交界處已無法區分。

生化指標檢測

與B組比較，C組關節軟骨形態明顯改善且同時關節液中SOD明顯升高，而NO及MDA均明顯降低。

結論

1、組織形態學實驗結果表明：注射四胜肽GEKG 於關節腔可明顯修復已損傷的軟骨組織，對於退化性關節炎的治療效果十分確切。

2、四胜肽GEKG顯著降低滑膜中MDA，降低關節腔內的脂質過氧化損傷程度，因而減輕自由基對軟骨細胞及基質的損傷，達到保護關節軟骨的作用。

3、四胜肽GEKG明顯提高兔子關節內腔SOD濃度，消除發炎所產生的自由基，進而保護軟骨且抑制與防止軟骨病變。

4、四胜肽GEKG明顯提高兔子關節內腔NO濃度，因而減輕NO對軟骨的破壞。

實施例2

一、實驗方法

1、取兔子生長板軟骨細胞，進行持續培養，設四胜肽GEKG單獨作用組、膠原單獨作用組、四胜肽GEKG+膠原聯合作用組，分別添加四胜肽GEKG(250ppm)、膠原(100ng/ml)及四胜肽GEKG(250ppm)+膠原(100ng/ml)，並設陰性對照組，待新生軟骨組織長滿離心管底部後，轉移至24孔培養板內繼續培養，隔天更換培養基，到達預定培養時間(3、7及14天)後，收取標本進行各項檢測。

2、組織學與組織化學檢測：收集標本進行HE染色，免疫組織化學(S-P法)檢測。

3、使用Hoechst 33258法測定軟骨細胞DNA含量。

4、軟骨細胞基質合成：除水分外，軟骨細胞基質中最主要的成分是膠原和由糖胺聚糖與核心蛋白構成的蛋白多 糖。通過對新生組織中膠原與蛋白多糖含量的測定，定量分析基質含量與代謝狀況。

5、羥脯胺酸法測定軟骨細胞膠原合成：由於羥脯胺酸在膠原中的比例相對恒定(約占膠原重量的10%)，因此可以通過定量羥脯胺酸以分析軟骨細胞膠原的產量。嚴格按羥脯胺酸檢測試劑盒說明書操作，並計算各樣品的膠原含量。

二、實驗結果

1、四胜肽GEKG對軟骨細胞增生的影響：添加四胜肽GEKG對軟骨細胞增生顯著，其中軟骨細胞DNA含量與對照組顯示統計學之差異(圖1)，該結果說明四胜肽GEKG可有效促進軟骨細胞增生。

2、四胜肽GEKG對軟骨細胞基質合成的影響：添加四胜肽GEKG顯著促進膠原與蛋白多醣的合成且進一步有效促進軟骨細胞增生，該結果與對照組有統計學之差異(圖2及圖3)。

藉此，可以理解本發明為一創意極佳之發明，除了有效解決現有問題，更大幅增進治療功效，且在相同的技術領域中未見相同或近似的產品創作或公開使用，同時具有功效的增進。故本發明已符合發明專利有關「新穎性」與「進步性」的要件，乃依法提出申請發明專利。

<110> 富比積生物科技股份有限公司

<120> 四/五胜肽GEKG(F)於治療退化性關節炎之用途

<140>

<141>

<160> 2

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<223> 合成胜肽

<400> 1

<210> 2

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<223> 合成胜肽

<400> 2

Claims (3)

1. 一種四胜肽GEKG於製備供治療退化性關節炎之藥物之用途，其中G表示甘胺酸(Gly)，E表示麩胺酸(Glu)且K表示離胺酸(Lys)，其中經治療之關節液中SOD含量升高，NO和MDA含量降低且關節軟骨細胞增生。
2. 如請求項1之用途，其中該藥物係醫藥組成物，其中該醫藥組成物包含治療有效量的四胜肽GEKG及醫藥上可接受的載劑。
3. 如請求項2之用途，其中該醫藥組成物係貼片。