TWI548353B - 燕窩萃取物的萃取方法 - Google Patents

Description

燕窩萃取物的萃取方法

本發明係關於一種萃取方法，特別關於一種適用於萃取燕窩萃取物之萃取方法。

燕窩是中國自古代以來開始被食用的傳統名貴食品之一，是指雨燕目雨燕科部分雨燕和金絲燕屬的幾種金絲燕分泌出來的唾液，再混合其他物質(如：羽毛)所築成的巢穴，而非雀形目燕科鳥類(如家燕)所築巢穴。

其中以金絲燕唾液的蛋白質純度和營養價值為最高。產自中國南部沿海一帶、越南、泰國、馬來西亞、印尼及菲律賓等地。燕窩被採摘之後，還要經過蒸細、浸泡、除雜、挑毛、烘乾等複雜的加工才能製成燕窩成品，包括燕盞、燕條、燕餅、燕絲。其中燕盞是整隻優質的燕窩經除雜保留原有形狀而成，故價格特別昂貴。

而在燕窩之組成中，係含有一種名為燕窩酸之活性物質，其又稱為唾液酸。貢納爾．布利克斯等人於1952年從頜下腺粘蛋白中分離出唾液酸(Sialic acid)，並建立了唾液酸的命名規則，但在很長時期內人們對其生理功能了解甚少，其化學結構在1960年才被確切地測定出來。隨著現代物理學、化學和生命科學技術的飛速發展，唾液酸的生理活性已逐漸被認識。唾液酸是神經氨酸中胺基酸或羥基氫被取代的一類衍生物的總稱，通常也指代此類化合物中最重要的成員之一N-乙醯神經氨酸。唾液酸在自然界分佈很廣，目前已知的食物中唾液酸含量最高的是存在燕窩中，含量達12%左右，在牛奶、雞蛋和奶酪中也存在唾液酸，其主要作為糖蛋白和神經節苷脂的組分。唾液酸取代基通常為乙醯基或羥乙醯基，不過甲基、硫酸酯基、磷酸酯基取代氨基的唾液酸也已被發現。目前被發現的唾液酸單醣 家族約有50種，都是神經胺酸的衍生物，每一種都攜帶著各種不同的取代基，有的是胺基(amine groups)、有的則是羥基(hydroxyl groups)。

而在唾液酸家族中又以N-acetylneuraminic acid(Neu5Ac)、 N-glycolylneuraminic acid(Neu5Gc)和N-acetyl-9-O-acetylneuraminic acid(Neu5Ac)最為常見。其中Neu5Gc普遍出現於動物細胞，但在人體中卻只有少量出現於腫瘤細胞上，正常的細胞則無Neu5Gc存在。

唾液酸除了本身結構上的變化，也會隨著本身分子修飾的不 同而有所改變。除此之外，唾液酸與唾液酸之間或與其他的醣之鍵結方式，也產生唾液酸鍵結結構的多樣性。像是Neu5Ac以α2,3-連結或是α2,6-連結的方式與半乳糖結合，形成Neu5Ac-α2,3-Gal和Neu5Ac-α2,6-Gal。而人類的組織和細胞中只有Neu5Ac，卻沒有Neu5Gc的存在。亦有文獻顯示，流感病毒之感染與唾液酸有關，因此其中一類的抗流感藥物(克流感(oseltamivir)和瑞樂沙(zanamivir))，為模擬唾液酸之類似物，可與病毒的神經胺酸酶也就是唾液酸酶反應，使得病毒無法正常的從宿主細胞中釋出，因此無法再感染其他正常細胞。

有文獻顯示，唾液酸是大腦神經節苷脂和糖蛋白的結構和功 能上的重要組成部分。因唾液酸是神經細胞膜及突觸的營養素，因此唾液酸可促進神經細胞的分化、發育和神經再生作用，參與突觸傳遞、維持細胞的正常機能，參與記憶學習功能。動物實驗研究表明，補充唾液酸可以提高動物的學習行為，而補充唾液酸可以明顯增加大腦和小腦的神經節苷脂和糖蛋白中唾液酸的含量，可以提高實驗動物在迷宮測試中的測試結果。此結果表明，唾液酸對於學習能力相當重要。亦有研究顯示，大腦的生長和成熟與唾液酸所參與形成的酸性糖脂與蛋白含量的增加有關，而衰老和先天性發育遲緩綜合徵與其含量下降有關。通過動物實驗發現，在沒有唾液酸或唾液酸含量很低的情況下，實驗動物的學習及記憶能力均大大下降。

許多研究都證明，母乳餵養的嬰兒能夠從母乳中攝取大量的 唾液酸，其有可能促進神經節苷脂和在體液、組織和配糖體中的糖蛋白的 唾液酸化，同時進一步顯示出母乳餵養對嬰兒的神經系統和智力的發育要優於奶粉餵養。而在嬰兒誕生後，母乳則是為嬰兒補充唾液酸的有效途徑，因為每mL母乳中含有約0.3-1.5mg的唾液酸。

更進一步的，有研究發現，燕窩含有一種醣蛋白，可增強刀 豆蛋白A(Con A)或植物血凝素A(PHA)刺激人體血液中單核細胞的有絲***，因而稱為「促進細胞***因子」(mitogenic stimulation factor)。其如同表皮生長因子(epidermic growth factor)能夠刺激細胞***增殖和促進細胞分化，使得受損的上皮細胞得以快速修復。而此醣蛋白與刀豆蛋白A激發作用在最初的10小時保有最強的效果。除此之外，其醣蛋白的活性非常穩定，並不會因胰蛋白酶的作用或是在鹼性環境下經由***萃取而消失。

而在燕窩醣蛋白的寡糖研究方面，有文獻顯示燕窩醣蛋白上 有著各式各樣的含唾液酸的O-鏈結寡糖。而若以酵素切下燕窩醣蛋白上N-鏈結寡糖進行分析，發現燕窩醣蛋白上唾液酸N-鏈結寡糖含有多量的L-岩藻糖(L-fucose)，而其含的唾液酸是多價的，並且在對抗疾病上可能扮演著重要的角色。另外也有研究指出，經胰酶水解之燕窩可以達到抗流感病毒的效果，可能和燕窩中所含的唾液酸有關。

為了萃取出燕窩中的營養成分，目前現有之萃取方法多採取 高溫高壓之萃取方式。然而，此種萃取方式將破壞燕窩中所含的唾液酸與唾液酸所附隨之醣蛋白及/或燕窩中的表皮生長因子、纖維母細胞生長因子等蛋白質分子，致使所得到的萃取物中唾液酸與蛋白質的含量不高，故而服用此種燕窩萃取物之效果有限。

因此，如何提供一種可萃取出具有相當含量之唾液酸及蛋白 質的燕窩萃取物的萃取方法，使萃取所得之燕窩萃取物具有相當效用(例如：提升免疫力、增強記憶力、預防感冒功能)，已成為重要課題之一。

有鑑於上述課題，本發明之目的為提供一種燕窩萃取物的萃取方法，萃取出之燕窩萃取物仍保留有相當含量之唾液酸及蛋白質。

為達上述目的，依據本發明之一種燕窩萃取物的萃取方法， 包含有以下步驟：提供燕窩粉碎物水溶液置於反應槽中進行乳化，加熱至第一溫度並將反應槽抽取真空並持續第一時間，以形成燕窩乳化液，其中反應槽具有乳化器及環繞乳化器之攪拌器，第一溫度為攝氏30至60度，且第一時間為30分鐘至12小時；在維持該乳化器及該攪拌器之運轉之情況下，將燕窩乳化液調整至第二溫度後，將蛋白酵素加入反應槽，並維持於第二溫度下持續第二時間，其中第二溫度為攝氏30度至攝氏40度，且第二時間為1至12小時；終止蛋白酵素之反應；過濾燕窩乳化液，取得燕窩濾液；濃縮燕窩濾液，並將濃縮後之燕窩濾液進行滅菌處理，以取得燕窩萃取液。

在一實施例中，燕窩萃取物的萃取方法進一步包括將燕窩萃取液進行凍乾之步驟，以製成燕窩萃取物。

在一實施例中，於乳化步驟中，反應槽之真空壓力係維持於10~200torr。

在一實施例中，於乳化步驟中，乳化器之轉速為每分鐘1200~3600轉(rpm)，且該攪拌器之轉速為每分鐘10~60轉(rpm)。

在一實施例中，終止蛋白酵素之反應之步驟係將燕窩乳化液加熱至攝氏50~70度並持續30~120分鐘。

在一實施例中，過濾燕窩乳化液之步驟係於第二壓力下進行，且第二壓力為400~720torr。

在一實施例中，濃縮燕窩濾液之步驟之壓力為600~720torr，且濃縮倍率為2~4倍。

在一實施例中，將燕窩濾液進行滅菌處理之步驟係依巴式低溫殺菌法進行。

在一實施例中，蛋白酵素為木瓜酵素、胰蛋白脢、或鳳梨酵素中之至少一種。

在一實施例中，燕窩萃取液或燕窩萃取物包含有1%至13%重量百分比之唾液酸以及4%至15%重量百分比之蛋白質，其中蛋白質之分 子量分布為100Da至300kDa，且其中小於6.5kDa之蛋白質佔總蛋白質含量為0.6%~6.4%重量百分比。

承上所述，本發明之燕窩萃取物的萃取方法，因於進行乳化 時採取真空減壓之萃取步驟，並維持乳化溫度於低於攝氏60度，於保有相當乳化效率的條件下，同時也避免了因高溫高壓製程而破壞燕窩中的有效成分。因此，本發明之萃取方法所萃取出的燕窩萃取物，具有相當含量之唾液酸及蛋白質，故具有相當效用，而可製成洗髮精、護髮乳、面膜、卸妝液、眼霜、護手霜、化妝水、沐浴精、美容液、身體用乳霜、牙膏、枇杷膏、軟糖、或是肥皂等產品。

1‧‧‧反應槽

10‧‧‧中心軸

11‧‧‧乳化器

111‧‧‧乳化葉片

12‧‧‧攪拌器

121‧‧‧第一攪拌葉片

13‧‧‧第二攪拌葉片

14‧‧‧第一馬達

15‧‧‧第二馬達

S1、S2、S3、S4、S5、S6‧‧‧步驟

圖1為本發明第一較佳實施例之燕窩萃取物的萃取方法流程示意圖。

圖2為圖1所示之實施例之萃取方法中所使用的反應槽示意圖。

以下將參照相關圖式，說明依本發明較佳實施例之一種燕窩萃取物的萃取方法，其中相同的元件將以相同的參照符號加以說明。此外，以下各實施例及各實驗例中所提及之數值範圍，如有特別指示及說明者外，均包含各數值範圍端點值及該端點值之間之任意數值，且亦涵蓋任何正整數、有理數及無理數，以及包含前述各種數值之任意組合所涵蓋的範圍。

請參考圖1及圖2，圖1為本發明第一較佳實施例之一種燕窩萃取物的萃取方法流程示意圖，圖2為本實施例之萃取方法中所使用的反應槽示意圖。本實施例之燕窩萃取物的萃取方法，包含有下述步驟。

步驟S1(真空乳化步驟)：提供燕窩粉碎物水溶液，並置於反應槽1中進行乳化。燕窩粉碎物水溶液的取得是將購得之燕盞、燕餅或燕絲以粉碎機機械粉碎後，取得燕窩粉碎物之粒徑範圍約在250~830微米(μm)，並將燕窩粉碎物以適當之重量比例溶於水中。所使用的水以無菌蒸 餾水為佳，以降低產品的微生物污染風險。而燕窩粉碎物與水的重量比例，較佳為1：19(燕窩：水)，使其形成適當濃度之水溶液，以免濃度過高導致後續乳化步驟中乳化器及攪拌器發生無法有效運作之情況。接著，將燕窩粉碎物水溶液加熱至第一溫度並將反應槽1抽取真空並持續第一時間，以形成燕窩乳化液。第一溫度為攝氏30至60度，第一時間為30分鐘至12小時。請同時參考圖2，反應槽1具有中心軸10、乳化器11、攪拌器12、第一馬達14、以及第二馬達15，乳化器11為連接設置於反應槽1之中央的中心軸10，而攪拌器12大致上呈一「ㄇ」型結構，並環繞於乳化器11進行設置，且具有複數個向中心軸10延伸的第一攪拌葉片121。中心軸10連接第一馬達14，而攪拌器12則與第二馬達15連接。第一馬達14與第二馬達15為同軸設置，但可獨立運作。第一馬達14經由中心軸10而帶動乳化器11的乳化葉片111旋轉。而第二馬達15則帶動攪拌器12旋轉，使向中心軸10延伸的第一攪拌葉片121隨同旋轉以達成攪拌之目的。此外，在中心軸10上可進一步增設複數個第二攪拌葉片13，而第二攪拌葉片13的可以是如圖2中所示的一端較寬一端較窄的不對稱構型，藉此進一步增加第二攪拌葉片13的攪拌能力，使反應槽1中的液體能夠混合的更快速以及均勻。由於本步驟S2中，攪拌器12是在乳化器11運作同時，繞著乳化器11進行攪拌，並且兩者轉速有相當的差異，而在其他實施態樣中，兩者的旋轉方向可以為相反，一者為順時針旋轉另一為逆時針旋轉。藉此，可使反應槽1中黏稠度相當高的燕窩粉碎物水溶液形成循環渦流，使經過乳化器11乳化後的液體被帶至他處，同時將未被乳化的液體帶至乳化器11處進行乳化，故可提升整體乳化效率，使萃取後之產物具有相當量的有效成分(例如唾液酸及/或蛋白質)。

此外，於進行步驟S1之真空乳化步驟時，反應槽1之真空 壓力較佳係維持於10~200托(torr，相當於毫米汞柱，mmHg)，而實際使用之壓力則可依燕窩粉末溶液之黏稠度而定，亦即燕窩粉末溶液黏稠度越高，則反應槽1於此步驟S2中的真空壓力則越低。而於本步驟S2之真空乳化步驟中，乳化器11之轉速較佳為每分鐘1200~3600轉(rpm)，且攪拌器12之轉速為每分鐘10~60轉(rpm)。由於本步驟S2採用真空減壓之 萃取方式，並且不以高溫(攝氏30度至60度)進行乳化，故可於燕窩粉末溶液進行有效的乳化情況下，同時避免破壞燕窩中的有效成分(例如唾液酸與蛋白質)。

接著，進行步驟S2(酵素反應步驟)：將於反應槽1中經過 步驟S2處理後之燕窩乳化液，在維持攪拌器12及乳化器11持續運轉的情況下，調整至第二溫度，將蛋白酵素加入反應槽，並維持於第二溫度下持續第二時間，其中第二溫度為攝氏30度至攝氏40度，且第二時間為1至12小時。本步驟S2加入之蛋白酵素，較佳的比例是0.1-0.3%重量百分比，而適用的蛋白酵素可為木瓜酵素、胰蛋白脢、或鳳梨酵素所至少其中之一種，或前述酵素之任意組合。而酵素反應的環境，其pH值較佳是維持在7至7.5之間，以保持蛋白酵素的活性。

接著，進行步驟S3(終止蛋白酵素反應步驟)，並於終止蛋 白酵素之反應時，較佳係以加熱失活(heat deactivate)的方式終止蛋白酵素的反應，亦即可將反應槽1中的燕窩乳化液加熱至攝氏50至70度並持續30至120分鐘，使蛋白酵素失去活性以終止其反應。而在終止蛋白酵素反應步驟時，仍維持反應槽1中的pH值在7至7.5之間，以保持反應環境的穩定，避免過度破壞燕窩中的有效成分。

接著，進行步驟S4(過濾步驟)。為了要去除燕窩乳化液中 不反應或未反應完全的雜質，則將經由步驟S3處理後之燕窩乳化液進行過濾，以取得燕窩濾液。由於經由步驟S3處理後之燕窩乳化液仍具有相當之黏稠度，故本步驟S4中係採取減壓方式進行過濾，亦即將步驟S3處理後之燕窩乳化液通過一連接有鐵篩的管柱，於第二壓力下進行過濾，第二壓力較佳為400至720torr。

接著，為了要減低燕窩濾液的體積以及降低濾液中的水分， 以利後續長期保存燕窩萃取液，所以進行步驟S5(濃縮滅菌步驟)。本步驟S5中，係將燕窩濾液於600至720torr之壓力下進行濃縮，而最終的濃縮倍率可控制於2~4倍。濃縮之後，則燕窩濾液進行滅菌處理，以取得燕窩萃取液。而本步驟S5中的滅菌處理方式，較佳為依巴式低溫殺菌法進行滅菌，並維持一低壓環境，使其能進行有效之滅菌條件下，亦同時避免因高 溫所導致的蛋白質變性。

而本實施例中所採用的巴式低溫殺菌法則以溫度維持於攝 氏65度，殺菌時間為30分鐘，環境壓力為10至200torr(小於100torr更佳)之條件為佳。

為了明瞭萃取效率，可將經由步驟S5所取得之燕窩萃取液 採樣送檢，同時檢驗其唾液酸含量、蛋白質含量及分子量分布，以及檢驗其生菌數。

另外，為了長期保存之目的，可進一步進行步驟S6(凍乾 步驟)：將經由步驟S5所取得之燕窩萃取液，加入重量百分比為0至5%的賦型劑，進行凍乾，以製成燕窩萃取物。加入賦型劑之目的則在於避免於凍乾過程中產生氣泡，維持反應過程之穩定。賦型劑包含有澱粉、玉米澱粉、麥芽糊精、乳糖、糊精、或纖維素中至少一種，而可使本實施例所得之燕窩萃取物適於製成各種固態或半固態之產品，例如膠囊、乳液等。

此外，經由本實施例之萃取方法所萃取出之燕窩萃取液及燕 窩萃取物，經後續實驗例之實驗結果顯示，其均可包含有1%至13%重量百分比之唾液酸以及4%至15%重量百分比之蛋白質。前述1%至13%重量百分比之唾液酸之數值範圍係指「1%」及「13%」之間之任意數值均涵蓋在內，例如1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%以及前述各數值之間的任何正整數、有理數及無理數，並且包含前述各種數值之任意組合所涵蓋的範圍。前述4%至15%重量百分比之蛋白質之數值範圍，亦同，係指「4%」及「15%」之間之任意數值均涵蓋在內，且亦涵蓋任何正整數、有理數及無理數，例如4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%，以及包含前述各種數值之任意組合所涵蓋的範圍。

而萃取所得之燕窩萃取液及燕窩萃取物，係均可包含有表皮 生長因子(EGF，Epidermal Growth Factor)、或纖維母細胞生長因子(FGF，Fibroblast Growth Factor)至少其中之一種蛋白質，且蛋白質之分子量分布為100Da至300kDa。另外，小於6.5kDa之蛋白質佔總蛋白質含量為0.6%~6.4%重量百分比。

進一步來說，經由本實施例之萃取步驟所得之燕窩萃取物， 可呈一粉狀，且於基質輔助雷射脫附游離飛行式時間質譜分析法(MALDI-TOF MS)分析圖譜中於145.991m/z、172.000m/z、190.017m/z、211.987m/z、294.06m/z、335.104m/z、379.132m/z、496.354m/z以及1563.790m/z具有特徵峰。而當以燕窩萃取液狀進行測試時，其於基質輔助雷射脫附游離飛行式時間質譜分析法(MALDI-TOF MS)分析圖譜中於171.966m/z、189.971m/z、211.976m/z、233.971m/z、249.949m/z、379.067m/z、445.031m/z、655.995m/z具有特徵峰。詳細數據及實驗方式如後所述。

而本實施例所製得之燕窩萃取液及燕窩萃取物，可用以製成 洗髮精、護髮乳、面膜、卸妝液、眼霜、護手霜、化妝水、沐浴精、美容液、身體用乳霜、牙膏、枇杷膏、軟糖、或是肥皂中至少一種。

上述各項產品之添加成份，如後實驗例六中所述。

綜上所述，本發明之一種燕窩萃取物的萃取方法，發明之燕 窩萃取物的萃取方法，因於進行乳化時採取真空減壓之萃取步驟，並維持乳化溫度於低於攝氏60度，於保有相當乳化效率的條件下，同時也避免了因高溫高壓製程而破壞燕窩中的有效成分。因此，本發明之萃取方法所萃取出的燕窩萃取物，具有相當含量之唾液酸及蛋白質，故具有相當效用，而可製成洗髮精、護髮乳、面膜、卸妝液、眼霜、護手霜、化妝水、沐浴精、美容液、身體用乳霜、牙膏、枇杷膏、軟糖、或是肥皂等產品。

接下來將以實驗例具體說明本發明之前述較佳實施例之燕 窩萃取物之萃取方法的實際操作方式及效果。然需注意的是，以下之說明是用來詳述本發明以使此熟習該項技術者能夠據以實現，但並非用以限定本發明之範圍。

實驗例一：燕窩萃取組成物之萃取

首先，取天然燕窩磨碎後之燕窩粉末6公斤，加入114公升 之無菌蒸餾水中並至於反應槽1中。接著進行真空減壓萃取，亦即於攝氏30~50度環境中抽取真空(壓力為10~200托(torr))維持30分鐘至12小時，同時乳化器11之轉速設定為每分鐘1200~3600轉，且攪拌器12之轉速設定為每分鐘10~60轉。同時，待反應槽1中之溶液冷卻至攝氏37度之 後，加入228公克之蛋白酵素(可為木瓜酵素、胰蛋白脢、或鳳梨酵素)，維持於攝氏37度下作用1~12小時，之後將燕窩乳化液加熱至攝氏50~70度並持續30~120分鐘，以中止酵素反應。

接著於400~720torr之壓力下過濾上述經過蛋白酵素反應完畢後之液體，以濾除未溶解之雜質，並將濾液於600至720torr之壓力下進行濃縮後，以巴式低溫殺菌法(溫度維持於攝氏65度，殺菌時間為30分鐘，環境壓力為10至200torr)進行殺菌，取得燕窩萃取液。

將前述燕窩萃取液混入0~10%重量百分比之糊精進行凍乾處理，以取得粉狀之燕窩萃取物(以下簡稱燕窩萃取粉)。

實驗例二：燕窩萃取物中粗蛋白質含量之分析

將上述實驗例一中取得之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉，以經濟部中央標準局食品中粗蛋白質之檢驗法(CNS總號5035，類號N6116，又俗稱「凱氏法」(Kjeldahl method))分別進行粗蛋白質含量之測定。以實驗例一中萃取條件下所製得之不同樣本之進行重複測驗，結果顯示每100公克之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉中含有4至15公克之粗蛋白質(依不同樣本，每100公克之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉中可含有4、4.9、11.57、14.6、15公克之粗蛋白質)。

實驗例三：燕窩萃取物中唾液酸含量分析

將上述實驗例一中取得之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉，以高效液相色譜法(華永有等人，中國衛生檢驗雜誌，2010年10月第20卷第10期，頁2454-2456)檢測各樣本之唾液酸含量。結果顯示，以實驗例一之萃取條件下所製得之不同樣本之進行重複測驗，其唾液酸之重量百分比為1%至13%(依不同樣本，燕窩萃取液以及燕窩萃取粉中可含有1%、2.07%、3.09%、8.61%、10.08%、13%之唾液酸)。而上述所列的參考文獻全體皆引用作為本說明書的揭示內容。

經由上述實驗結果可知，實驗例一中取得之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉含有相當含量之唾液酸，因此本發明所屬技術領域具有通常知識者，依據本說明書之揭露內容，當可得知本發明所提供之燕窩萃取組成物及含有此種燕窩萃取組成物之食品可具有提升免疫力、增強記憶力、預 防感冒之功能。

實驗例四：燕窩萃取物中蛋白質分子量分布分析

將上述實驗例一中取得之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉，以十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)來分析樣本中蛋白質之分子量分布。前述十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠濃度為12%及15%，且添加有10%重量百分比的甘油(glycerol)，並將實驗後之膠體以Bio-rad gel DOC XR+系統影像分析裝置掃描及分析計算各樣本中之不同分子量之蛋白質含量。以實驗例一之萃取條件下所製得之不同樣本之進行重複測驗，結果顯示，經實驗例一所製得之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉中，小於6.5kDa之蛋白質佔總蛋白質含量約是0.6%至6.4%重量百分比，以其中一樣本進行前述分析之蛋白質分子量分布分析結果如下表一所示。

此外，將上述實驗例一中取得之燕窩萃取粉，經由基質輔助雷射脫附游離飛行式時間質譜分析法(MALDI-TOF MS)進一步分析樣本中各分子之分子量分布，發現在分析圖譜中於145.991m/z、172.000m/z、190.017m/z、211.987m/z、294.065m/z、335.104m/z、379.132m/z、496.354m/z、1563.790m/z、5312.775m/z、6220.710m/z、5419.701m/z、7802.584m/z、5562.115m/z、24966.772m/z、以及5916.553m/z處有特徵峰(peak)。

而將上述實驗例一中取得之燕窩萃取液，經由基質輔助雷射 脫附游離飛行式時間質譜分析法(MALDI-TOF MS)進一步分析樣本中各分子之分子量分布，發現在分析圖譜中於171.966m/z、189.971m/z、211.976m/z、233.971m/z、249.949m/z、379.067m/z、445.031m/z、655.995m/z、5308.455m/z、5417.040m/z、5553.870m/z、5865.525m/z、6219.320m/z、7593.220m/z、7824.713m/z、8147.532m/z、以及25756.060m/z處有特徵峰(peak)。

上述基質輔助雷射脫附游離飛行式時間質譜分析法 (MALDI-TOF MS)顯示之「m/z」(質荷比)單位，即相當於分子量之道爾吞(Dalton，Da)單位。亦即上述基質輔助雷射脫附游離飛行式時間質譜分析法於圖譜中每1m/z相當於1Da之分子量。

上述結果顯示，不論是燕窩萃取液以及燕窩萃取粉的樣本 中，均含有寡肽(oligo-peptide)分子(其分子量小於1000Da)，特別有助於生物體(例如：人體)之經皮吸收或是經消化道吸收。因此本發明所屬技術領域具有通常知識者，依據本說明書之揭露內容，當可得知本發明所提供之燕窩萃取組成物及含有此種燕窩萃取組成物之食品，具有提升免疫力、增強記憶力、預防感冒之功能。

實驗例五：燕窩萃取物中EGF與FGF檢測

將上述實驗例一中取得之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉，係利用商用EGF與FGF試劑套組(廠商名：Peprotech，套組名分別為：Human EGF Mini ELISA Development Kit PEP-900-M05、Human FGF-basic ELISA Development Kit 900-K0)以三明治酵素免疫分析法(sandwich enzyme-linked immunosorbent assay，Sandwich ELISA)檢測樣本中的EGF及FGF。每樣本進行三重複，而EGF標準品自1000皮克/毫升(pg/mL)連續兩倍稀釋至15.625皮克/毫升(pg/mL)，而FGF標準品則自4000皮克/毫升(pg/mL)連續兩倍稀釋至62.5皮克/毫升(pg/mL)。其中捕捉抗體(Capture Antibody)濃度為100微克/毫升(μg/mL)，而偵測抗體(Detection Antibody)濃度為100微克/毫升(μg/mL)。並以卵白素結合辣根過氧化物酶(Avidin-HRP conjugate)與ABTS (2,2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate))進行呈色反應，每五分鐘測定一次於450nm/650nm讀取反應之吸光值，並且控制最高濃度之標準品吸光值不可超過1.2，最低濃度的標準品吸光值不可超過0.2。其餘實驗步驟則依照所利用商用EGF與FGF試劑套組中所附之說明進行操作。

結果顯示，每毫升的燕窩萃取液至少含有0.04μg之EGF，而每克的燕窩萃取粉至少含有0.0832μg之EGF，同時以其他來源購得之燕窩食品(即食燕)進行測試，其產品中每克含有之EGF小於31.26pg。而每毫升的燕窩萃取液中至少含有0.16μg的FGF，而每克的燕窩萃取粉含有38.835~261.88ng之FGF，同時以其他來源購得之燕窩食品(即食燕)進行測試，其產品中每克含有228.67~300.172pg之FGF。

由上述實驗結果可知，經上述實驗例一中取得之燕窩萃取液以及燕窩萃取粉確實含有相當含量之EGF及FGF蛋白質，故本發明所提供之燕窩萃取組成物及含有此種燕窩萃取組成物之食品可具有促進表皮生長、皮膚保養、護髮或是傷口修補之功能。

實驗例六：燕窩萃取組成物所製得之各產品添加成份

A.護手霜

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、甘油、蘆薈精華液(Kidachi Aloe Ekisu)與肉豆蔻酸異丙酯(isopropyl myristate)、甘油硬脂酸(Glyceryl Stearate)、鯨蠟醇(cetyl alcohol)、山梨糖醇(Sorbitol)、鯨蠟醇聚醚-15(Ceteth-15)、硬脂山梨坦(Sorbitan Stearate)及其他適當的乳化劑，以製得含有燕窩萃取物之護手霜。

B.燕萃膠囊

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以2%-8.5%的重量百分比添加65.7%-93.0%的麥芽糊精，並取適當量(500-1000毫克)包裝於明膠膠囊中，以製得含有燕窩萃取物之燕萃膠囊。

C.洗髮精

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、十二烷基硫酸鹽、十二烷基聚氧乙烯硫酸鹽、椰油基兩性醋酸鈉、椰油基單乙醇醯胺、聚二甲基矽氧烷(Dimethicone)、膠原蛋 白、維生素、植物提取物(例如：蘆薈精華液)、珠光劑、保濕劑、香精、色素、防腐劑、螯合劑(例如：EDTA)，以製得含有燕窩萃取物之洗髮精。

D.護髮乳

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、界面活性劑(例如硫酸月桂酸鈉(Sodium Lauryl Sulfate)、月桂醇聚醚硫酸酯鈉鹽(Sodium Laureth Sulfate)、椰油醯胺DEA(Cocamide DEA)、及/或乙二醇硬脂酸酯(Glycol stearate))、柔潤劑、乳化劑(例如橄欖油、聚山梨醇酯(Polysorbate)、氯化鈉(Sodium chloride))、保溼劑(例如醋酸鹽維他命E(Tocopheryl Acetate E))、及其他適當之防腐劑(例如羥甲基甘氨酸鈉)、及香料，以製得含有燕窩萃取物之護髮乳。

E.面膜

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的熊果素、玻尿酸、彈力蛋白(Elastin)、海藻萃取物、羥苯丙酯、水，並塗附於適當基材(例如：不織布)上，以製得含有燕窩萃取物之面膜。

F.卸妝液

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、聚矽氧化合物(Cyclopentasiloxane)、柔潤劑(例如異十六烷(Isohexadecane))、香料、界面活性劑(例如己二醇(Hexylene Glycol)、氯化鈉(Sodium chloride))、乳化劑(例如環己矽氧烷(Cyclohexasiloxane))、防腐劑(例如苯甲醇、苯氧乙醇(Phenoxyethanol))、香料、及抗氧化劑(例如檸檬酸鈉)，以製得含有燕窩萃取物之卸妝液。

G.眼霜

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、保濕劑(例如甘油、異構寡糖(Saccharide isomerate))，矽基順滑劑(例如Cyclomethicone)、植物油、抗氧化劑(例如維生素E)，以製得含有燕窩萃取物之眼霜。

H.化妝水

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百 分比添加適量的水、保溼劑(例如雙丙甘醇(Dipropylene glycol、丁二醇(Butylene Glycol)、甘油)、酒精、乳化劑(例如甲基葡糖聚醚-10(Methyl gluceth-10)、聚甘油-2二異硬脂酸(Polyglyceryl-2 diisostearate))、界面活性劑(例如PEG-60氫化篦麻油(PEG-60 Hydrogenated Castor Oil)、異硬脂酸(Isostearic Acid))、柔潤劑(例如三異辛酸甘油酯(Triethylhexanoin))、適當防腐劑，以製得含有燕窩萃取物之化妝水。

I.沐浴精

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、保溼劑(例如甘油、丙烯乙二醇)、界面活性劑(例如聚山梨醇酯20(Polysorbate 20)、PEG-150二硬脂酸酯(PEG 150 Distearate)、氫化蓖麻油(Hydrogenated Castor Oil))、乳化劑(例如甘油油酸酯(Glyceryl oleate))、防腐劑(例如甲基異噻唑啉酮(Methylisothiazolinone))、適當香料，以製得含有燕窩萃取物之化妝水。

J.美容液

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、酒精、保溼劑(例如甘油、丁二醇(Butylene Glycol))、乳化劑(例如氫化卵磷脂(Hydrogenated lecithin))、柔潤劑(例如乙醯穀氨醯胺(Acetyl Glutamine))、適當香料、防腐劑(例如苯甲酸甲脂(Methylparaben))，以製得含有燕窩萃取物之美容液。

K.身體用乳霜，添加全成分

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、保溼劑(例如甘油、丙烯乙二醇、1,2-戊二醇(Pentylene Glycol))、適當香料、柔潤劑(例如環戊矽氧烷(Cyclopentasiloxane)、甘油硬脂酸(Glyceryl Stearate))、界面活性劑(例如PEG-60氫化篦麻油(PEG-60 Hydrogenated Castor Oil)、抗氧化劑(例如檸檬酸鈉)、乳化劑(例如山崳酸(Behenic acid))、防腐劑、適當香料，以製得含有燕窩萃取物之身體用乳霜。

L.牙膏

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、矽酸鹽、白雲母、氟化物、界面活性劑(例如十二烷 基硫酸鈉(SLS))、適當香料、甘油、山梨醣醇，以製得含有燕窩萃取物之牙膏。

M.枇杷膏

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、蜂蜜、冰糖、植物(例如川貝母、枇杷葉、北沙參、桔梗、甘草、薄荷腦、杏仁)萃取物，以製得含有燕窩萃取物之枇杷膏。

N.肥皂

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、油(例如棕櫚油)、硬脂酸鈉、適當香料和染料，以製得含有燕窩萃取物之肥皂。

O.軟糖

以實驗例一所取得之燕窩萃取組成物以0.02%-3%的重量百分比添加適量的水、明膠、葡萄糖、蔗糖、檸檬酸、及適當香料與甜味劑，以製得含有燕窩萃取物之軟糖。

以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。

S1、S2、S3、S4、S5、S6‧‧‧步驟

Claims (8)

1. 一種燕窩萃取物的萃取方法，包含有：提供一燕窩粉碎物水溶液置於一反應槽中進行乳化，加熱至一第一溫度並將該反應槽抽取真空並持續一第一時間，以形成一燕窩乳化液，其中該反應槽具有一乳化器及環繞該乳化器之一攪拌器，該第一溫度為攝氏30至50度，且該第一時間為30分鐘至12小時，其中該燕窩粉碎物水溶液中燕窩粉碎物與水的比例為1：19，該反應槽之真空壓力係維持於10~200torr；在維持該乳化器及該攪拌器之運轉之情況下，將該燕窩乳化液調整至一第二溫度後，將一蛋白酵素加入該反應槽，並維持於該第二溫度下持續一第二時間，其中該第二溫度為攝氏30度至攝氏40度，且該第二時間為1至12小時；終止該蛋白酵素之反應；過濾該燕窩乳化液，取得一燕窩濾液；以及濃縮該燕窩濾液，並將該濃縮後之該燕窩濾液進行滅菌處理，以取得一燕窩萃取液；其中，該燕窩萃取液包含有：一1%至13%重量百分比之唾液酸；以及一4%至15%重量百分比之蛋白質，其中該蛋白質之分子量分布為100Da至300kDa，且其中小於6.5kDa之蛋白質佔總蛋白質含量為0.6%~6.4%重量百分比，該蛋白質包含表皮生長因子以及纖維母細胞生長因子。
2. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，進一步包括將該燕窩萃取液進行凍乾之步驟，以製成一燕窩萃取物。
3. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，其中於該乳化步驟中，該乳化器之轉速為每分鐘1200~3600轉，且該攪拌器之轉速為每分鐘10~60轉。
4. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，其中終止該蛋白酵素之反應之步驟係將該燕窩乳化液加熱至攝氏50~70度並持續30~120分鐘。
5. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，其中該過濾該燕窩乳化液之步驟係於一第二壓力下進行，且該第二壓力為400~720torr。
6. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，其中濃縮該燕窩濾液之步驟之壓力為600~720torr，且濃縮倍率為2~4倍。
7. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，其中將該燕窩濾液進行滅菌處理之步驟係依巴式低溫殺菌法進行。
8. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，其中該蛋白酵素為木瓜酵素、胰蛋白脢、或鳳梨酵素中之至少一種。