TWI480060B - 含有三棱素ｂ之組成物及含有三棱素ｂ之組成物之製造方法 - Google Patents

Description

含有三棱素B之組成物及含有三棱素B之組成物之製造方法

本發明係關於源自百香果(passionfruit)種子之含有三棱素B(Scirpusin B)的含有三棱素B之組成物及含有三棱素B之組成物之製造方法。

百香果係西番蓮科西番蓮屬之植物，別名：時鐘果，該果實酸甜，可作為水果直接食用果實、將其果汁作為純汁飲用、調配至果凍、蛋糕等飲食品，使用於增加風味。百香果的種子堅硬，用作純汁時要自果實中去除，即使在果實連同種子飲食的情況下，因為種子外皮堅硬不易消化，所以會被直接***掉。

歷來，百香果種子無利用之用途而廢棄，但本申請人們已揭示百香果之種子萃取物可有效利用，作為抑制黑色素生成用之有效成分和促進膠原蛋白產生用之有效成分(專利文獻1、2)。然後，亦揭示(專利文獻3)該有效成分係多酚類化合物之雲杉醇(Piceatannol)。

另一方面，關於雲杉醇二聚體之三棱素B(Scirpusin B)，已有報告揭示係具有抗HIV活性(非專利文獻1)、具有超氧化物陰離子之去除活性(非專利文獻2)、具有α-澱粉酶活性之抑制活性(非專利文獻3)、具有黃嘌呤氧化酶之抑制活性(非專利文獻4)。

[先行技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]　日本特開2009-102298號公報

[專利文獻2]　日本特開2009-102299號公報

[專利文獻3]　日本特開2010-30911號公報

[非專利文獻]

[非專利文獻1] Guo-xun Yang,Jin-tao Zhou,Ya-zun Li,and Chang-qi Hu「Anti-HIV Bioactive stilbene dimers of Caragana rosea.」Planta. Med. 71(2005),p569-571.

[非專利文獻2] Ting Xiang,Toshio Uno,Fumino Ogino,Cuoqian Ai,Jie Duo,and Ushio Sankawa「Antioxidant constituents of Caragana tibetica.」Chem. Pharm. Bull. 53(9)(2005),p1204-1206.

[非專利文獻3] Kyoko Kobayashi,Tamaki Ishihara,Eriko Khono,Toshio Miyase,and Fumihiko Yoshizaki「Constituents of stem bark of Callistemon rigidus showing inhibitory effects on mouse α-amylase activity.」Bioi. Pharm. Bull,29(6),(2006)p1275-1277.

[非專利文獻4] G. Schmeda-Hirschmann,M.I. Gutierrez,J.I.Loyola,and J.Zuniga「Biological activity and xanthine oxidase inhibitors from Scirpus californicus(C. A. Mey.)Steud.」Phytotherapy Research,10,(1996)p683-685.

就食品安全之一般性觀念來看，調配至機能性食品和健康食品等飲食品之三棱素B係以源自天然物質者較佳。然而，歷來所知含有三棱素B之天然產物，其含量稀少，只能取得非常低含量之三棱素B組成物。

所以，本發明之目的係提供源自天然物質之組成物且係含有高含量三棱素B之含有三棱素B之組成物，以及其製造方法。

本發明者們為了達成上述目的而深入研究之結果，發現歷來無利用之用途而廢棄之百香果種子中含有豐富之三棱素B而完成本發明。

換言之，本發明之含有三棱素B之組成物，其特徵係得自百香果種子且含有三棱素B。

若依照本發明之含有三棱素B之組成物，即可提供含有高含量三棱素B之源自天然物質之組成物。而因係源自天然物質之組成物，所以也適用於化妝品、醫藥品、還有調配至機能性食品和健康食品等飲食品。

另一方面，本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法，其特徵係添加從含水醇系溶劑及含水酮系溶劑中選出之至少1種至百香果種子，將三棱素B萃取至前述溶劑中。

若依照本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法，因係添加自含水醇系溶劑及含水酮系溶劑中選出之至少1種至百香果種子，將三棱素B萃取至前述溶劑中，所以可收率佳地製造含有高含量三棱素B之源自天然物質之組成物。

本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法中，前述百香果種子係以百香果之生的種子或百香果之生的種子經乾燥後之種子較佳。

又，在本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法中，前述含水醇系溶劑係以含水乙醇或含水1,3-丁二醇，前述含水酮系溶劑係以含水丙酮較佳。若依照此，三棱素B之萃取率更好。

又，本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法中，在萃取後，可施行溶劑之去除、還有濃縮、噴霧乾燥、冷凍乾燥、純化等處理。

另一方面，本發明之另一項係添加源自百香果種子之三棱素B的飲食品。

又，本發明還有另一項係添加源自百香果種子之三棱素B的化妝品。

若依照本發明之含有三棱素B之組成物，可提供含有高含量三棱素B之源自天然物質之組成物。而因係源自天然物質之組成物，所以也適用於化妝品、醫藥品、還有調配至機能性食品和健康食品等飲食品。另一方面，若依照本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法，因係添加從含水醇系溶劑及含水酮系溶劑中選出之至少1種至百香果種子，將三棱素B萃取至前述溶劑中，所以可收率佳地製造源自天然物質之組成物且含有高含量三棱素B者。

本發明之含有三棱素B之組成物係得自百香果種子之組成物且含有三棱素B者。該形狀可為液狀、固狀、半固狀、凝膠狀等，關於該含有三棱素B之組成物中之三棱素B含量，舉例來說較佳之範圍係1×10^-6 質量%至99.9質量%，舉例來說更佳之範圍係1×10^-4 質量%至20質量%，舉例來說最佳之範圍係1×10^-3 質量%至5質量%。又，關於該三棱素B以固形物量換算之含量，舉例來說較佳之範圍係0.01質量%至99.9質量%，舉例來說更佳之範圍係0.05質量%至30質量%，舉例來說最佳之範圍係0.1質量%至20質量%。

三棱素B(Scirpusin B)係以下面化學式(1)表示

百香果係西番蓮科西番蓮屬之植物，別名：時鐘果，其果實酸甜，作為水果直接食用果實、將其果汁作為純汁飲用、調配至果凍、蛋糕等飲食品，使用於增加風味。百香果的種子堅硬，用作純汁時要從果實中去除，即使果實連同種子飲食，亦因為種子外皮堅硬不易消化，會被直接***掉。本發明係發現歷來無利用之用途而廢棄之百香果種子中含有豐富三棱素B為基礎之發明。再者，本發明所使用之百香果種子以歷來之百香果食用經歷也可作為佐證，縱使調配至機能性食品和健康食品等飲食品，係安全性上沒有問題者。

本發明之含有三棱素B之組成物，較佳者例如，可藉由將生的或乾燥後的百香果種子直接或粉碎後用種種溶劑萃取的方法來得到。該百香果種子，為了提高萃取率，可適宜地施以酸或鹼分解、酵素分解等化學處理，然後萃取。再者，若依照下面說明之本發明含有三棱素B之組成物之製造方法，因能特別是收率佳地得到含有高含量三棱素B之組成物，所以藉由該方法取得最佳。

以下，說明關於本發明之含有三裬素B之組成物之製造方法。

在本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法中，百香果種子可使用生的或乾燥後的百香果種子。又，為了提高萃取率，亦可將百香果種子適宜地施以粉碎、搾油、酸或鹼分解、酵素分解等化學處理，接著進行萃取。粉碎可使用公知之粉碎機施行。再者，因百香果種子之油份多，粉碎後會有變成糊狀的情形。

接著，添加從含水醇系溶劑及含水酮系溶劑中選出之至少1種至百香果種子，將三棱素B萃取至該溶劑中。此時以進行攪拌、振動或加熱回流等進行萃取較佳。

作為含水醇系溶劑，可使用乙醇、甲醇、1,3-丁二醇等之含水溶劑，特別是含水乙醇、含水1,3-丁二醇較佳。又，含水酮系溶劑，可使用丙酮、甲基乙基酮、二乙基酮、氯丙酮等之含水溶劑，特別是含水丙酮較佳。

其含水率，在含水乙醇的情況，以乙醇佔20至99.9體積%者較佳，佔40至99.9體積%者更佳，佔60至80體積%者最佳。在含水1,3-丁二醇的情況，以1,3-丁二醇佔10至90體積%者較佳，佔20至60體積%者更佳，佔30至50體積%者最佳。在含水丙酮的情況，以丙酮佔20至99.9體積%者較佳，佔40至99.9體積%者更佳，佔60至80體積%者最佳。上述範圍之外，三棱素B之萃取率有變差的傾向，而不佳。再者，以下，關於含水溶劑之含水率之記載為了簡便化，例如，含水20體積%之80體積%乙醇記載為「80%含水乙醇」。又，例如，含水30體積%之70體積%乙醇記載為「70%含水乙醇」。又，例如，含水30體積%之70體積%1,3-丁二醇記載為70%含水BG」。再者，例如，含水30體積%之70體積%丙酮記載為「70%含水丙酮」。

本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法，其萃取可使用公知之振動裝置施行。其溫度條件係以15至40℃左右，振動時間係以0.5至3小時左右較佳。又，此萃取可藉由伴隨超音波振動之振動來施行。若依照此，因可有效地提供振動給與被粉碎後接觸上述各溶劑之百香果種子，而可提高自百香果種子萃取三棱素B至上述各溶劑中之萃取率，該伴隨超音波振動之振動可藉由公知之超音波裝置等來授與。

本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法中，其萃取可使用上述含水醇系溶劑或含水酮系溶劑，藉公知之加熱回流之方法施行。其加熱溫度係以60至95℃左右，回流時間係以1至2小時左右較佳。

又，本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法中，萃取後，亦可將上述溶劑減壓餾除。若依照此方法，可作成不含有機溶劑之組成物，作為食品材料調配至機能性食品和健康食品等飲食品，而可能符合其安全性基準等。

本發明之含有三棱素B之組成物之製造方法中，可施行以複數溶劑進行階段性萃取。藉此，可收率更佳地製造含有高含量三棱素B之含有三棱素B之組成物。

具體而言，例如，將百香果種子粉碎後，添加上述含水醇系溶劑及上述含水酮系溶劑的任一者，施行振動或加熱回流等，將三棱素B萃取至該溶劑中得到第1萃取物。藉離心等將萃取物和無法作為該萃取物回收之殘渣分離，在該殘渣中，添加上述溶劑中未選擇的另一者，施行振動或加熱回流等，將三棱素B萃取至該溶劑中得到第2萃取物。然後，混合前述之第1萃取物和第2萃取物。再者，不用多提亦可知該第2萃取物單獨也可能利用作為百香果種子之萃取物。

依此種方式，藉施行複數溶劑之階段性萃取，百香果種子經上述含水醇系溶劑或上述含水酮系溶劑之第1萃取處理，因可認為該物理性質等特性係變化成合適萃取用的性質，繼續第2萃取處理時，使用上述含水醇系溶劑或上述含水酮系溶劑之情況，或使用上述之外的溶劑之情況，均可期待該萃取率被改善。

上述方法所得到之百香果種子之萃取物，關於該萃取物中的三棱素B含量，舉例來說較佳之範圍係1×10^-6 質量%至99.9質量%，舉例來說更佳範圍係1×10^-4 質量%至20質量%，舉例來說最佳範圍係1×10^-3 質量%至5質量%。又，關於該三棱素B以固形物量換算之含量，舉例來說較佳範圍係0.01質量%至99.9質量%，舉例來說更佳範圍係0.05質量%至30質量%，舉例來說最佳範圍係0.1質量%至20質量%。此萃取物可直接或以濃縮後之液狀物作為含有三棱素B之組成物。還有藉冷凍乾燥或噴霧乾燥粉末化，而可將該粉末狀物作為含有三棱素B之組成物。又，該等之型態亦無制限。在萃取物中所含之不溶物係可適宜地以過濾等方式去除。不溶物亦可再粉碎成細微粒子狀。

又，將依照上述之得自百香果種子之主要萃取物，可藉離子交換、大小排除(size exclusion)管柱層析法、HPLC法、凝膠過濾、薄膜分離等，以三棱素B作為指標進行區分、純化等，而可將此產物作為含有三棱素B之組成物。

換言之，將得自百香果種子之三棱素B以下面條件進行分析用HPLC時，該三棱素B在12.54分鐘附近溶出(參照第1圖，再者，第1圖中，在8.9分鐘附近溶出的物質係雲杉醇(Piceatannol))。又，以質量分析裝置施行質譜測定時，作為陰離子模式之訊號呈現出m/z485(參照第2圖)。

[HPLC條件]

管柱：ODS-3直徑4.6mm、長150mm(GL Sciences株式會社製)

管柱溫度：45℃

溶出條件：流速0.75ml/min、15%乙腈(acetonitrile)(0min)→40%乙腈(20min)→45%乙腈(25min)

UV檢測：280nm

所以，在本發明中，藉如上述舉例之分析手段，邊確認得自百香果種子之三棱素B之存在，同時適宜地區分、純化，而可調製出提高三棱素B含量、源自百香果種子之含有三棱素B之組成物。

源自百香果種子之三棱素B係因應必要，添加藥學上容許之基質或載體，作成錠劑、顆粒劑、散劑、溶液劑、粉末、顆粒、膠囊、膠狀劑等型態，除了可利用在醫藥外，作成軟膏劑、乳膏劑(cream)、凝膠(gel)、敷膜、化妝水、化妝料等型態，可利用作為化妝品。

又，源自百香果種子之三棱素B，可調配至特定保建用食品、營養補助食品、機能性食品等來攝取。這類食品可例舉如巧克力、軟餅(biscuit)、口香糖、糖果、餅乾(cookie)，軟糖(Gummy)、錠狀糖果等糖果甜點類；穀類製品(serial)；粉末飲料、清涼飲料、乳飲料、營養飲料、碳酸飲料、果凍飲料等飲料；冰淇淋、雪霜(sherbet)等冷凍甜點。再者，蕎麥麵、義大利麵、烏龍麵、素麵等麵類亦可為較佳之例子。又，於特定保建用食品和營養補助食品等情況下，亦可為粉末、顆粒、膠囊、糖漿、錠、糖衣錠等型態。

源自百香果種子之三棱素B，添加至飲食品或化妝品來利用時，關於該飲食品中或化妝品中之三棱素B含量，舉例來說較佳之範圍係1×10^-6 質量%至50質量%，舉例來說更佳之範圍係1×10^-4 質量%至20質量%，舉例來說最佳之範圍係1×10^-3 質量%至5質量%。又，關於該三棱素B以固形物量換算之含量，舉例來說較佳之範圍係0.01質量%至80質量%，舉例來說更佳之範圍係0.05質量%至30質量%，舉例來說最佳之範圍係0.1質量%至20質量%。

(實施例)

以下雖列舉實施例具體地說明本實驗，但本發明之範圍並不受限於該等實施例。

〈試驗例1〉(得自百香果之三棱素B之回收/純化/鑑定)

於百香果種子經冷凍乾燥並粉碎後之粉碎物(30至60網目通過(mesh pass))60g中，添加80%丙酮200ml，在室溫攪拌製作種子萃取液。將此液藉使用ODS管柱之HPLC進行區分。HPLC之區分條件係同以下所示。

‧　管柱：ODS-3直徑20mm、長250mm(GL Sciences株式會社製)

‧　管柱溫度：室溫

‧　溶出條件：流速5ml/min、10%乙腈(0min)→50%乙腈(70min)→80%乙腈(75min)→80%乙腈(90min)

‧　UV檢測：280nm

第3圖係表示HPLC層析圖。該結果，可見到在停留時間51分鐘附近有最大波峰。又，可見到在停留時間57分鐘附近有第2波峰。

上述停留時間57分鐘附近溶出之成分為何種物質係依照以下方式鑑定。

首先，取得於停留時間57分鐘附近溶出之區分，再以HPLC純化至純度97%左右。將此，施行HPLC/質量分析(安捷倫科技有限公司(Agilent Technologies)製，裝置名「Agillent 1100 LC/MC System」)及NMR分析。結果同以下所示。

ESI：m/z485(M)；¹ H NMR(CD30D,500MHz)：δ4.38(1H,d,J=6.0Hz),δ5.32((1H,d,J=6.0Hz),δ6.19(2H,d,J=2.2Hz),δ6.21(1H,t,J=2.0Hz),δ6.30(1H,d,J=6.0Hz),6.58(1H,d,J=16.1Hz),6.62(1H,dd,J=2.2,8.5Hz)6.66(1H,d,J=1.9Hz),δ6.68(1H,d,J=7.8Hz),6.74(1H,d,J=2.2Hz)6.78(1H,d,J=8.2Hz),6.81(1H,d,J=16.4Hz),δ6.80(1H,d,J=1.9Hz)；¹³ C NMR：(CD30D,125MHz)：δ:58.1,94.8,96.8,102.2,104.4,107.3x2,113.6,114.0,116.2x2,116.3,118.4,119.8,120.0,123.6,δ: 130.9,131.0,134.9,137.0,146.3,146.4,146.5,146.6,147.6,159.8x3,162.7

以上之NMR分析結果顯示係下述式(1)所表示之三棱素B(Scirpusin B)。

又，上述57分鐘附近溶出成分之旋光度測定(日本分光株式會社(JASCO Corporation)製，裝置名「P-2200旋光計」)的結果係[α]_D ²³ ：0.0°，依照傅立葉(Fourier)轉換紅外線分光光度計(日本分光株式會社製，裝置名「FT/IR-6200 Fourier-Transform Infrared Spectrometer」)之紅外線吸收光譜結果，在1605cm^-1 ,1520cm^-1 ,1445cm^-1 ,1339cm^-1 ,1282cm^-1 ,1197cm^-1 ,1156cm^-1 ,1116cm^-1 ,1002cm^-1 有吸收波峰。該結果亦與上述鑑定結果無矛盾處。再者，在「Kyoko Kobayashi et al,;Biol. Pharm. Bull. 29(6),(2006)p1275-1277」，亦記載了三棱素B之NMR、旋光度、紅外線吸收光譜等之分析結果。

另一方面，停留時間51分鐘附近溶出之成分已另鑑定出係下述化學式(2)表示之雲杉醇(Piceatannol)。

自以上可知，上述種子萃取物之上述區分用HPLC分析中57分鐘附近之波峰係三棱素B之波峰，百香果的種子中確實含有多量三棱素B。再者，百香果之果皮和果肉中未檢測出三棱素B。

〈試驗例2〉(自百香果種子萃取三棱素B)

檢討關於自百香果種子萃取三棱素B之方法。具體上係藉下面萃取方法，檢討三棱素B之萃取率。

(1)藉由含水乙醇及含水丙酮振動萃取

在粉碎之種子60g中加入80%含水乙醇200ml，在室溫振動30分鐘，施行萃取，回收其上清液。本步驟重複2次。再者，在其殘渣固體中加入80%含水丙酮200ml，在室溫振動30分鐘，施行萃取，回收其上清液。本步驟重複3次。然後收集回收的上清液，將取得之萃取液濃縮，以80%含水乙醇定容至200ml，以其10μl注入分析用HPLC。然後，以預先純化成高純度者(97%)作為標準作成標準曲線，定量該萃取物內所含之三棱素B量。

(2)藉由含水乙醇加熱回流萃取

在粉碎之種子300g中加入80%、90%或95%含水乙醇3L，在92℃施行加熱回流萃取90分鐘。然後，濃縮得到的萃取液，以80%含水乙醇定容至200ml，以其10μl注入分析用HPLC。然後，藉由預先作成之標準曲線，定量該萃取物內所含之三棱素B量。

(3)藉由含水1,3-丁二醇(含水BG)攪拌萃取

在經熱風乾燥之種子或再粉碎之種子10g中加入20%、40%、50%、60%或80%含水BG約100ml，在80℃施行加熱攪拌萃取1小時。然後，得到的萃取液一部份提供HPLC分析，藉由預先作成之標準曲線，定量該萃取物內所含之三棱素B量。

結果整理於下面表1、2。再者，在該表1中，(A)從萃取用之種子每100g所萃取出的三棱素B量(mg)，或(B)換算成萃取液之固形物量中之三棱素B含量(質量%)表示。

如同表1所示，百香果種子每100g，可萃取220mg至363mg之三棱素B。在各萃取方法中，作為萃取液之固形物量中之含量，振動萃取係2.5質量%，80%含水乙醇加熱回流萃取係2.1質量%，90%含水乙醇加熱回流萃取係3.2質量%，95%含水乙醇加熱回流萃取係1.9質量%。所以，在萃取方法的比較中，藉由90%含水乙醇之加熱回流萃取係最有效率地萃取出三棱素B。又，將百香果種子中所含之三棱素B含量，以萃取率最高值來換算的話，可知百香果種子係至少以0.36質量%左右之高含量含有三棱素B。然後，亦知可將其有效率地萃取。

又，在表2，(A)以萃取用之種子每100g，萃取出的三棱素B量(mg)，或(B)以換算成萃取液中之三棱素B含量(μg/mL)表示。

如同表2所示，藉由含水1,3-丁二醇(含水BG)攪拌萃取，百香果種子每100g，可萃取92.6mg至401mg三棱素B被萃取出來。又，50%含水BG的情況係以未粉碎之完整種子施行萃取之結果。雖萃取率略為降低，但確認了不施行粉碎亦可萃取。

第1圖係表示得自百香果種子之三棱素B的定量分析用HPLC層析圖。

第2圖係表示得自百香果種子之三棱素B的質譜圖。

第3圖係表示得自百香果種子之萃取物的區分用HPLC層析圖。

由於本案的圖為實驗數據，並非本案的代表圖。

故本案無指定代表圖。

Claims (6)

1. 一種含有三棱素B之組成物之製造方法，其特徵係將自含水醇系溶劑及含水酮系溶劑中選出之至少1種作為溶劑添加至百香果種子，藉由加熱回流，將三棱素B萃取至前述溶劑中。
2. 一種含有三棱素B之組成物之製造方法，其特徵係將含水1,3-丁二醇作為溶劑添加至百香果種子，在加熱下，將三棱素B萃取至前述溶劑中。
3. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之含有三棱素B之組成物之製造方法，其中，前述百香果種子為百香果之生的種子或將百香果之生的種子乾燥後之種子。
4. 如申請專利範圍第1項所述之含有三棱素B之組成物之製造方法，其中，前述溶劑為含水乙醇或含水丙酮。
5. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之含有三棱素B之組成物之製造方法，其係萃取後，餾除溶劑。
6. 一種百香果種子之用途，其係作為三棱素B之來源使用。