TWI408137B - 經取代之二唑衍生物、其醫藥用途及醫藥組合物 - Google Patents

經取代之二唑衍生物、其醫藥用途及醫藥組合物 Download PDF

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Description

經取代之 二唑衍生物、其醫藥用途及醫藥組合物
本發明係有關一種具有醫藥活性之新穎二唑衍生物、其製法、含其之醫藥組合物及其於治療多種不同病變上之用途。
神經鞘胺醇1-磷酸酯(S1P)為一種由神經鞘胺醇經由神經鞘胺醇激酶之磷酸化作用所形成之生物活性脂質媒介劑，其在血液中呈高濃度存在。其係由許多種細胞產生及分泌，包括彼等造血來源，如：血小板與肥大細胞(Okamoto等人之1998 J Biol Chem 273(42):27104;Sanchez與Hla 2004, J Cell Biochem 92:913)。其具有廣泛之生物作用，包括調節細胞增生、分化、運動、血管形成、及發炎細胞與血小板之活化(Pyne與Pyne 2000, Biochem J. 349:385)。已有文獻說明五種S1P反應性受體亞型：S1P1(Edg-1)、S1P2(Edg-5)、S1P3(Edg-3)、S1P4(Edg-6)與S1P5(Edg-8)，形成受體之G-蛋白質偶合內皮肽分化基因家族之一部份(Chun等人之2002 Pharmacological Reviews 54:265、Sanchez與Hla 2004 J Cellular Biochemistry, 92:913)。這5種受體表現不同mRNA，S1P1-3之表現最廣，S1P4表現在淋巴系與造血組織，及S1P5主要表現在腦部，及較低之程度表現在胰臟。其利用G蛋白質之不同子群發出訊號，以促進許多不同生 物反應(Kluk與Hla 2002 Biochem et Biophysica Acta 1582:72, Sanchez與Hla 2004, J Cellular Biochem 92:913)。
所提出之S1P1受體角色包括淋巴細胞運送、細胞素之誘導/壓抑，及對內皮細胞之影響(Rosen與Goetzl 2005 Nat Rev Immunol. 5:560)。S1P1受體之促效劑已用於許多自體免疫與轉殖動物模式中，包括MS之實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)模式，以降低所誘發疾病之嚴重性(Brinkman等人之2003 JBC 277:21453;Fujino等人之2003 J Pharmacol Exp Ther 305:70;Webb等人之2004 J Neuroimmunol 153:108;Rausch等人之2004 J Magn Reson Imaging 20:16)。此活性據稱受S1P1促效劑透過淋巴系統對淋巴細胞循環之影響所媒介。以S1P1促效劑處理會使次級淋巴系器官(如：淋巴結)中之淋巴細胞發生內聚現象(sequestration)，在動物模式中誘發可逆性之周邊淋巴細胞減少(Chiba等人之1998, J Immunology 160:5037, Forrest等人之2004 J Pharmacol Exp Ther 309:758;Sanna等人之2004 JBC 279:13839)。有關促效劑之公開數據顯示，化合物處理會誘發S1P1受體經由內化作用自細胞表面流失(Graler與Goetzl 2004 FASEB J 18:551;Matloubian等人之2004 Nature 427:355;Jo等人之2005 Chem Biol 12:703)，且此免疫細胞上S1P1受體減少之結果造成T細胞自淋巴結回到血流中之移動量亦減少。
刪除S1P1基因會引起胚胎死亡。探討S1P1受體於淋 巴細胞移動與運送作用中角色之實驗包括使有標記之無S1P1之T細胞進入經幅射處理之野生型小鼠體內。此等細胞顯示自次級淋巴系器官流失之現象減少(Matloubian等人之2004 Nature 427:355)。
S1P1亦涉及內皮細胞聯合調控作用之角色(Allende等人之2003 102:3665, Blood Singelton等人之2005 FASEB J 19:1646)。基於此內皮作用，已有文獻指出S1P1促效劑會影響單離之淋巴結，可能在調控免疫疾病上扮演某種角色。S1P1促效劑促使消耗淋巴結之淋巴竇之內皮基質”門控”關閉，阻止淋巴細胞流失(Wei等人之2005, Nat. Immunology 6:1228)。
免疫壓抑性化合物FTY720(JP 11080026-A)可降低動物與人類之循環中淋巴細胞，在免疫疾病之動物模式中具有疾病調控活性，在減輕多發性硬化復發上降低緩解速率(Brinkman等人之2002 JBC 277:21453、Mandala等人之2002 Science 296:346、Fujino等人之2003 J Pharmacology與Experimental Therapeutics 305:45658、Brinkman等人之2004 American J Transplantation 4:1019、Webb等人之2004 J Neuroimmunology 153:108、Morris等人之2005 EurJ Immunol 35:3570、Chiba 2005 Pharmacology與Therapeutics 108:308、Kahan等人之2003, Transplantation 76:1079、Kappos等人之2006 New Eng J Medicine 335:1124)。此化合物為一種可於活體內經神經鞘胺醇激酶磷酸化產生對S1P1、S1P3、S1P4 與S1P5受體具有促效活性之分子之前藥。臨床研究已證實，FTY720之處理在第一段24小時內造成心跳徐緩(Kappos等人之2006 New Eng J Medicine 335:1124)。依據許多細胞與動物實驗，心跳徐緩應係對S1P3受體之促效作用所致。此等實驗包括使用剔除S1P3之動物，不會如同野生型小鼠在接受FTY720投藥及使用S1P1選擇性化合物後出現心跳徐緩現象(Hale等人之2004 Bio有機& Medicinal Chemistry Letters 14:3501、Sanna等人之2004 JBC 279:13839、Koyrakh等人之2005 American J 移植5:529)。
下列專利申請案說明作為S1P1促效劑之二唑衍生物：WO03/105771、WO05/058848、WO06/047195、WO06/100633、WO06/115188與WO06/131336。
下列專利申請案說明作為抗細小核糖核酸病毒劑之吲哚-二唑衍生物：WO96/009822。下列專利申請案分別說明作為白三烯受體擷抗劑、農藥與農化殺真菌劑之吲哚-羧酸衍生物：WO06/090817、EP 0 439 785與DE 39 39 238。
國際專利申請案WO06/001463揭示多種作為S1P1受體之促效劑之化合物。
國際專利申請案PCT/EP2007/064185揭示作為S1P1受體之促效劑之吲哚-二唑化合物。
現已發現一種結構上相關且可提供作為S1P1受體促效劑之新穎化合物。
因此本發明提供一種式(I)化合物或其鹽： 其中R5 與R6 中之一為氫或R2 ，且另一個為(a) R3 與R4 中之一為(b) A為苯基或5或6-員雜芳基環；R1 為氫或至多3個分別獨立選自下列之取代基：鹵素、C(1-4) 烷基、C(1-4) 烷氧基、C(5-7) 環烷基、C(5-7) 環烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基、氰基、苯基、5或6員雜芳基環、哌啶基與吡咯啶基；R2 為氫或至多3個分別獨立選自下列之取代基：鹵素、C(1-4) 烷基、C(1-4) 烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基與氰基； R7 為氫或鹵素；Z為C(1-4) 烷基，其可視需要穿插一個N或O且可視需要於碳上經至多四個分別獨立選自：鹵素、甲基與羥基之取代基取代，但其限制條件為沒有碳原子經兩個羥基取代。
因此本發明提供一種式(IA)化合物或其鹽： 其中A、R1 、R2 、R5 、R6 、R7 與Z如式(I)化合物之定義。
因此本發明提供一種式(IB)化合物或其鹽： 其中A、R1 、R2 、R5 、R6 、R7 與Z如式(I)化合物之定義。
因此本發明提供一種式(II)化合物或其醫藥上可接受之衍生物： 其中R5 與R6 中之一為氫或R2 ，且另一個為(a) R3 與R4 中之一為氫，且另一個為(b) A為苯基或5或6-員雜芳基環；R1 為氫或至多3個分別獨立選自下列之取代基：鹵素、C(1-4) 烷基、C(1-4) 烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基、氰基、與可視需要經取代之苯基或可視需要經取代之5或6員雜芳基環；R2 為氫或至多3個分別獨立選自下列之取代基：鹵素、C(1-4) 烷基、C(1-4 )烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基與氰基；R7 為氫或鹵素；Z為C(1-4) 烷基，其可視需要穿插N或O且可視需要經鹵素或甲基取代。
當R1 為苯基或5或6員雜芳基環時，其可經至多3個選自下列之取代基取代：鹵素、C(1-4) 烷基、C(1-4) 烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基與氰基。
咸了解，式(II)化合物中，當R4 為(b)時，R3 將不存在，且該位於芳香環內之鍵結排列將如上述式(IB)所示。
作為基團或基團之一部份(例如：烷氧基或羥烷基)之術語“烷基”係指所有異構型之直鏈或分支鏈烷基。術語"C(1-4) 烷基"係指包含至少一個及至多4個碳原子之如上述定義烷基。此等烷基實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、1-甲基丙基或2-甲基丙基。此等烷氧基實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基或1-甲基丙氧基。
合適之C(5-7) 環烷基包括環戊基、環己基與環庚基。
合適之C(5-7) 環烷氧基包括環戊氧基、環己氧基與環庚氧基。
本文所採用術語"鹵素"係指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)，且術語"鹵基"係指鹵素：氟基(-F)、氯基(-Cl)、溴基(-Br)與碘基(-I)。
術語"雜芳基環"代表包含一個或多個雜原子之不飽和環。當術語雜芳基代表5員基團時，其包含選自：O、N或S之雜原子，且可視需要另包含1至3個氮原子。當雜芳基代表6-員基團時，其包含1至3個氮原子。此等5或6員雜芳基環實例包括吡咯基、***基、噻二唑基、四唑基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、噻唑基、異唑基、唑基、二唑基、呋咱基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡基、嗒基與三基。
本發明一項具體實施例為式(I)化合物，其中A為噻吩基、吡啶基或苯基；及R1 為兩個分別獨立選自下列之取代基：氯、溴、異丙氧基、丙氧基、甲氧基、1-甲基丙氧基、氰基、三氟甲 基、三氟甲氧基、環己基、哌啶、吡咯啶基、乙基、2-甲基丙基、苯基與環戊氧基；及R2 為氫；及R7 為氫；及Z為伸乙基或伸丙基，其分別可視需要在同一碳上經二甲基取代。
本發明一項具體實施例為式(I)化合物，其中R6 為(a)與R5 為氫；及A為噻吩基、吡啶基或苯基；及R1 為兩個分別獨立選自下列之取代基：氯、溴、異丙氧基、丙氧基、甲氧基、1-甲基丙氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、環己基、哌啶、吡咯啶基、乙基、2-甲基丙基、苯基與環戊氧基；及R2 為氫；及R7 為氫；及Z為伸乙基或伸丙基，其分別可視需要在同一碳上經二甲基取代。
本發明一項具體實施例為式(IA)化合物，其中R6 為(a)與R5 為氫；及A為苯基；及R1 為兩個分別獨立選自下列之取代基：氯、異丙氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、哌啶基、乙基與苯基；及R2 為氫；及 R7 為氫；及Z為伸乙基或伸丙基。
本發明一項具體實施例為式(IA)化合物，其中R6 為(a)與R5 為氫；及A為苯基；及R1 為氯與異丙氧基；及R2 為氫；及R7 為氫；及Z為伸乙基或伸丙基。
本發明一項具體實施例為式(IB)化合物，其中R6 為(a)與R5 為氫；及A為苯基；及R1 為兩個分別獨立選自下列之取代基：氯、異丙氧基與氰基；與R2 為氫；及R7 為氫；及Z為伸乙基或伸丙基。
本發明一項具體實施例為式(I)化合物，其中R5 為(a)與R6 為氫；及A為噻吩基、吡啶基或苯基；及R1 為兩個分別獨立選自下列之取代基：氯、溴、異丙氧基、丙氧基、甲氧基、1-甲基丙氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、環己基、哌啶、吡咯啶基、乙基、2-甲基丙基、苯基與環戊氧基；及 R2 為氫；及R7 為氫；及Z為伸乙基或伸丙基，其分別可視需要在同一碳上經二甲基取代。
本發明一項具體實施例為式(IA)化合物，其中R5 為(a)與R6 為氫；及A為苯基；及R1 為氯與異丙氧基；及R2 為氫；及R7 為氫；及Z為伸乙基。
本發明一項具體實施例為式(IB)化合物，其中R5 為(a)與R6 為氫；及/或A為苯基；及R1 為兩個分別獨立選自下列之取代基：氯、異丙氧基、苯基與三氟甲基；及R2 為氫；及R7 為氫；及Z為伸丙基。
本發明一項具體實施例為式(II)化合物，其中R3 為(b)；及/或R5 為(a)與R6 為氫；及/或A為可視需要經取代之噻吩或苯基；及/或R1 為氫、鹵素、C1-4 烷氧基、或三氟甲基；及/或 R2 為氫；及/或Z為伸乙基。
本發明另一項具體實施例為式(II)化合物，其中R3 為(b)；及/或R5 為(a)與R6 為氫；及/或A為經苯基取代之噻吩；及/或R1 為氫、鹵素、C1-4 烷氧基、或三氟甲基；及/或R2 為氫；及/或Z為伸乙基。
本發明包括所有光學異構物，如：式(I)化合物之立體異構型，包括對映異構物、非對映異構物與其混合物，如：消旋物。不同立體異構型可利用傳統方法彼此分離或解析，或可依傳統立體選擇性或不對稱合成法得到任何指定之異構物。
合適之本發明化合物為：3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(乙基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3- 基)-1H-吲唑-1-基]丁酸3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(丙基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-[5-(5-{3-氯-4-[(三氟甲基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-(5-{5-[4-環己基-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-(5-{5-[4-(甲基氧)-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]乙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(甲基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-(5-{5-[3-乙基-4-(1-哌啶基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-{5-[5-(4-環己基-3-乙基苯基)-1,2,4-二唑-3-基]-1H -吲 唑-1-基}丙酸3-(5-{5-[3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-[5-(5-{3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-(5-{5-{3-氯-4-(2-甲基丙基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸4-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸3-{5-[5-(2-氰基-4-聯苯基)-1,2,4-二唑-3-基]-1H -吲唑-1-基}丙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(1-吡咯啶基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸4-[5-(5-{5-氯-6-[1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸鹽酸鹽4-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸鹽酸鹽4-(5-{5-[2-(三氟甲基)-4-聯苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-(5-{5-[2-(三氟甲基)-4-聯苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-2H -吲唑-2-基)丁酸3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)- 2H -吲唑-2-基]丙酸3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丙酸4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸4-(4-{5-[3-乙基-4-(1-哌啶基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-(4-{5-[2-(三氟甲基)-4-聯苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-[4-(5-{3-氯-4-[(三氟甲基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸3-(4-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸4-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸4-(4-{5-[4-苯基-5-(三氟甲基)-2-噻吩基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸3-{5-[5-(3-氰基-4-{[(1S )-1-甲基丙基]氧}苯基)-1,2,4-二唑-3-基]-1H -吲唑-1-基}丙酸鈉鹽3-{5-[5-(3-氰基-4-{[(1R )-1-甲基丙基]氧}苯基)-1,2,4-二唑-3-基]-1H -吲唑-1-基}丙酸鈉鹽3-(5-{5-[3-氰基-4-(環戊基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H - 吲唑-1-基)丙酸4-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸4-(5-{5-[4-苯基-5-(三氟甲基)-2-噻吩基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]-2,2-二甲基丙酸3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3- 基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸4-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸或其鹽。
式(I)化合物之醫藥上可接受之衍生物包括任何式(I)化合物之醫藥上可接受之鹽類、酯類或此等酯類之鹽類，當投與接受者後，可(直接或間接)形成式(I)化合物或其活性代謝物或殘基。
本文說明之某些式(I)化合物之酯類為用於合成某些說明實例之中間物。此等酯類亦可具有作為S1P1促效劑之活性，並形成本發明之一部份。
式(I)化合物可形成酸加成鹽。咸了解，醫學用之式(I)化合物之鹽類應係醫藥上可接受者。合適之醫藥上可接受之鹽類係習此相關技藝之人士咸了解者且包括說明於J. Pharm. Sci.1977, 66, 1-19中者，如：與無機酸(例如：鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸或磷酸)；及與有機酸(例如：琥珀酸、馬來酸、乙酸、富馬酸、檸檬酸、酒石酸、苯甲酸、對甲苯磺酸、甲磺酸或萘磺酸)形成之酸加成鹽類。某些式(I)化合物可與一當量或更多當量之酸形成酸加成鹽。本發明範圍內包括所有可能之化學計量型及非化學計量型。亦可由醫藥上可接受之鹼類(包括無機鹼類與有機鹼類)製成鹽類。衍生自無機鹼類之鹽類包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、三價錳、二價艋、鉀、鈉、鋅，等等之鹽類。衍生自醫藥上可接受之有機鹼類之鹽類包括一級、二 級與三級胺類；經取代之胺類(包括天然之經取代之胺類)；與環狀胺類。特別之醫藥上可接受之有機鹼類包括：精胺酸、甜菜鹼、咖啡因、膽鹼、N,N'-二苯甲基乙二胺、二乙基胺、2-二乙基胺基乙醇、2-二甲基胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-嗎啉、N-乙基哌啶、葡胺、葡糖胺、組織胺、哈胺青黴素、異丙基胺、離胺酸、甲基葡胺、嗎啉、哌、哌啶、普魯卡因、嘌呤、可可鹼、三乙基胺、三甲基胺、三丙基胺、參(羥甲基)胺基甲烷(TRIS，trometamol)，等等之鹽類。亦可由鹼性離子交換樹脂(例如：聚胺樹脂)形成鹽類。當本發明化合物為鹼性時，該鹽類可由醫藥上可接受之無毒性酸類製備，包括無機酸與有機酸。此等酸類包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸樣酸、乙磺酸、乙二磺酸、富馬酸、葡糖酸、麩胺酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸，等等。
式(I)化合物可製成結晶型或非結晶型，且若為結晶型時，可視需要呈水合物或溶合物。本發明範圍內包括化學計量之水合物或溶合物及含不同水量與/或溶劑量之化合物。
本發明另一方面提供一種製備式(I)化合物之方法。習此相關技藝之人士咸了解，反應圖1至8亦適用於使用適當中間物製備式(I)中R6 為(a)不同於R5 為(a)時)之化合物。式(IV)化合物係文獻中已知化合物，且可自商品取得其中 R6 為(a)或R5 為(a)之異構物。
其中一種用於製備式(IA)化合物之途徑示於反應圖1。
式(III)化合物可經肼水合物處理，轉化成式(IV)化合物，或者式(IV)化合物可自商品取得或可依文獻之說明製備。
式(IV)化合物可經羥胺鹽酸鹽與適當鹼(如：碳氫鈉)，於溶劑(如：甲醇或乙醇)，於加溫(如：50℃)下處理，轉化成式(V)化合物。
式(V)化合物可經式(VI)羧酸，於EDAC與HOBt之存在下，於合適溶劑(如：DMF)中處理，轉化成式(VII)化合物。此等反應典型地在加溫(如：50-80℃)下進行。典型地，由酸(VI)、EDAC與HOBt於室溫下攪拌一段時間後，才添加式(V)化合物。式(VI)酸可自商品取得或可依下文說明之許多途徑製備。
式(VII)化合物可經烷化劑(VIII)，於鹼(如：碳酸銫)之存在下，於溶劑(如：DMF或DMPU)中處理，轉化成式(IX)化合物。此等反應可在加溫(如：80℃)下或於微波反應爐中，在如：140℃之溫度下進行。烷化劑(VIII)可自商品取得或可採用標準方法製備。
式(IX)化合物可經鹼(如：氫氧化鈉水溶液)，於醇類溶劑(如：乙醇或甲醇)中反應，轉化成式(IA)化合物。可添加共溶劑(如：THF)促進溶解。該水解反應可於室溫下或在加溫(如：50-80℃)下進行。或者，此轉化反應可使用固態氫氧化鈉，於乙醇中，於微波反應器中，在如：100℃之溫度下進行。或者，此等反應可在微波反應器中，使用二甲胺，於乙醇中，添加如：160℃之溫度下之水進行。
由(VII)與(VIII)形成(IX)之反應亦可產生異構性式(X)化合物(反應圖2)。由式(VII)化合物經式(VIII)烷化劑，使用鹼(如：碳酸銫)，於溶劑(如：DMF)中，依前述說明處 理，產生式(IX)與(X)化合物之混合物，其典型地利用層析法分離。
式(X)化合物可利用反應圖3說明之水解步驟，轉化成式(IB)化合物。
或者，式(IA)與(IB)化合物可依反應圖4、5與6所示之途徑製備。式(XI)與(XII)化合物製法可由式(IV)化合物與式(VIII)烷化劑，於鹼(如：碳酸銫)，於溶劑(如：DMF)中反應。此等反應典型地在加溫(如：80℃)下進行。有時候，化合物(XI)與(XII)可利用層析法分離，而其他時候則可使用這兩種化合物之混合物用於接續反應來產生(IX)與(X)之 混合物後，再利用層析法分離。
式(XI)化合物可依反應圖5所示，轉化成式(IX)化合物。
式(XI)化合物可經羥胺鹽酸鹽與鹼(如：碳酸氫鈉)，於溶劑(如：乙醇)中，在加溫(例如：50℃)下處理，轉化成式 (XIII)化合物。
式(XIII)化合物可利用式(VI)羧酸，於EDAC與HOBt之存在下，於合適溶劑(如：DMF)中處理，轉化成式(IX)化合物。此等反應典型地在加溫(如：50-120℃)下進行。有時候，先於室溫下攪拌酸(VI)、EDAC與HOBt一段時間後，再添加式(XII)化合物，或者可合併所有試劑，共同加熱。式(IX)化合物可依前述說明轉化成式(IA)化合物。
式(XII)化合物可依反應圖6之說明，轉化成式(X)化合物。
式(XII)化合物可經羥胺鹽酸鹽與鹼(如：碳酸氫鈉)，於溶劑(如：乙醇)中，於加溫(例如；50℃)下處理，轉化成式(XIV)化合物。
式(XIV)化合物可經式(VI)羧酸，於EDAC與HOBt之 存在下，於合適溶劑(如：DMF)中處理，轉化成式(X)化合物。此等反應典型地在加溫(如：80-120℃)下進行。可先於室溫下攪拌酸(VI)、EDAC與HOBt一段時間後，再添加式(IX)化合物，或者可合併所有試劑，共同加熱。可依前述說明轉化式(X)化合物形成式(IB)化合物。
式(XI)中Z為-CH2 -CH2 -之化合物(以式(XVIII)化合物表示)亦可依反應圖7所示途徑製備。
式(XV)化合物可經乙酸酐，於溶劑(如：氯仿)中，於5℃至15℃之溫度間處理後，以鹼(如：乙酸鉀與亞硝酸異戊酯)，於室溫至80℃之溫度間處理，轉化成式(XVI)化合 物。
式(XVI)化合物可依據異構物(XIX)之形成法轉化成式(XVI)化合物：
其係以2-丙酸乙酯，於鹼(如：DBU)之存在下，於溶劑(如：乙腈)中，於回流溫度下處理。
式(XVII)化合物可經二氰基鋅，於觸媒(如：Pd2 (dba)3 )與配位體(如：DPPF)之存在下，於溶劑(如：1,4-二烷)中，於回流溫度下處理，轉化成式(XVIII)化合物。
或者，式(XVI)化合物可經二氰基鋅[Zn(CN)2 ]，於觸媒(如：Pd(PPh3 )4 )之存在下，於溶劑(如：NMP)中，於如：80℃之溫度下處理，轉化成式(IV)化合物。式(IV)化合物可類似彼等用於轉化式(XV)化合物形成式(XVII)化合物之方式轉化成式(XVIII)化合物。
式(XIII)化合物可依據反應圖8所示途徑轉化成式(IX)化合物：
式(VI)化合物可經草醯氯，於DMF之存在下，於溶劑(如：二氯甲烷)中，於室溫下處理，轉化成式(XIX)化合物。
式(XIII)化合物可經式(XX)化合物，於鹼(如：三乙基胺)之存在下，於溶劑(如：二氯甲烷)中，於0℃下處理，轉化成式(XXI)化合物。
式(XXI)化合物可於100℃下，於溶劑(如：乙腈)之存在下加熱後，轉化成式(IX)化合物。
或者，式(XIII)化合物可經式(XX)與三乙胺，於溶劑(如：乙腈)中，於室溫至110℃之溫度下處理，轉化成式(IX)化合物。
因此式(I)化合物與其醫藥上可接受之鹽可用於治療經由S1P1受體所媒介之病症或病變。特定言之，式(I)化合物 與其醫藥上可接受之鹽可用於治療多發性硬化、自體免疫疾病、慢性發炎病變、氣喘、發炎神經病變、關節炎、移植、克隆氏症(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、缺血-再灌流傷害、固體腫瘤與腫瘤轉移、與血管新生有關之疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒疾病、發炎腸部病症、胰島素與非胰島素依賴型糖尿病(下文中稱為"本發明之病變")。
咸了解，本文所採用"治療"包括預防及減輕已確定之症狀。
因此本發明亦提供一種式(I)化合物與其醫藥上可接受之鹽，作為醫療物質使用，特定言之用於治療經由S1P1受體所媒介之病症或病變。特定言之，本發明提供一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，作為治療多發性硬化、自體免疫疾病、慢性發炎病變、氣喘、發炎神經病變、關節炎、移植、克隆氏症(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、缺血-再灌流傷害、固體腫瘤與腫瘤轉移、與血管新生有關之疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒疾病、發炎腸部病症、胰島素與非胰島素依賴型糖尿病之醫藥物質使用。本發明進一步提供一種治療哺乳動物(包括人類)受S1P1受體所媒介病症或病變之方法，其包括對該患者投與醫療上安全且有效之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽類。
另一方面，本發明提供一種以式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽類於製造醫藥，用於治療S1P1受體所媒介病症 或病變之方法。
為了在醫療法中使用式(I)化合物，其通常依據標準製藥操作法調配成醫藥組合物。本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，與醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本發明另一方面提供一種製備醫藥組合物之方法，該製法包括混合式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本發明醫藥組合物宜在常壓常溫下混合製備，通常適合經口、非經腸式或經直腸投藥，因此可呈錠劑、膠囊、口服液製劑、粉劑、粒劑、***錠、再組成用粉劑、注射或輸液用溶液或懸浮液或栓劑。通常以口服用組合物較佳。
本發明化合物對S1P1受體之藥效與效力可利用本文所說明GTPγS分析法，於人類選殖受體上決定，或利用亦說明於本文中之酵母結合性分析法決定。已採用本文說明之功能分析法證實式(I)化合物對S1P1受體具有促效活性。
口服用錠劑與膠囊可呈單位劑型，且可包含常用之賦形劑，如：結合劑(例如：預糊化玉米澱粉、聚乙烯基吡咯啶酮或羥丙基甲基纖維素)；填料(例如：乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；製錠潤滑劑(例如：硬脂酸鎂、滑石或矽石)；崩解劑(例如：馬鈴薯澱粉或澱粉乙醇酸鈉)；與可接受之濕化劑(例如：月桂基硫酸酯鈉)。錠劑可依習知之一般醫藥製法包覆包衣。
口服用液體製劑可呈例如：水性或油性懸浮液、溶液、乳液、糖漿或酏劑型式，或可呈乾物型式，臨用前方使用水或其他合適媒劑再組成。此等液體製劑可包含習知添加劑，如：懸浮劑(例如：山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂肪)、乳化劑(例如：卵磷脂或金合歡膠)、非水性媒劑(其可包括食用油類，例如：杏仁油、油酯類、乙醇或分餾植物油)、防腐劑(例如：對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)，且若需要時，可使用常用之調味劑或著色劑、緩衝鹽及甜味劑。口服用製劑宜調配成控制釋放活性化合物。
非經腸式投藥時，液態單位劑型可使用本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽與無菌媒劑製備。注射用調配物可利用本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽與無菌媒劑，可視需要添加防腐劑，形成單位劑型，例如：含於安瓶或多劑量瓶中。組合物可於油性或水性媒劑中形成懸浮液、溶液或乳液，且可包含調配劑，如：懸浮劑、安定劑與/或勻散劑。或者，活性成份可呈粉末形式，供於臨用前與合適媒劑(例如：無菌無熱原水)再組成。依所使用媒劑及濃度而定，化合物可懸浮或溶於媒劑中。製備溶液時，化合物可溶於注射用水中，先經過濾除菌後，才填入合適小瓶或安瓶中，並密封。合宜時，如：局部麻醉劑、防腐劑與緩衝劑之輔劑可溶於媒劑中。為了加強安定性，組合物可在填入小瓶中後冷凍，於真空下排除水。非經腸式懸浮液基本上依相同方式製備，但其中化合物係懸浮，而非溶解於媒 劑中，且無法進行過濾除菌。化合物可先使用環氧乙烷處理殺菌後，再懸浮於無菌媒劑中。合宜時，組合物中可包含界面活性劑或濕化劑，以促進化合物均勻分佈。
洗液可使用水性或油性基質調配，且通常亦包含一種或多種乳化劑、安定劑、勻散劑、懸浮劑、增稠劑、或著色劑。滴劑可使用亦包含一種或多種勻散劑、安定劑、溶解劑或懸浮劑之水性或非水性基質調配。其中亦可包含防腐劑。
本發明化合物亦可調配成直腸用組合物，如：栓劑或灌腸藥，例如：包含常用之栓劑基質，如：可可奶油或其他甘油酯。
本發明化合物亦可調配成儲積式製劑。此等長效型調配物可經植入法投藥(例如：皮下或肌內)或經肌內注射投藥。因此，例如：本發明化合物可使用合適之聚合性或疏水性材料(例如：於可接受之油中形成乳液)或離子交換樹脂或呈難溶性衍生物，例如：難溶性鹽類調配。
經鼻內投藥時，本發明化合物可調配成溶液，經由合適之定劑量或單位劑量裝置投藥，或與合適載劑形成粉末混合物，使用合適傳送裝置投藥。因此式(I)化合物可調配成經口、頰內、非經腸式、局部(包括眼內與鼻內)、儲積式或經直腸投藥，或呈適合經吸入或吹入投藥之型式(經口或鼻)。
式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽可調配成局部投藥用之油膏、乳霜、凝膠、洗液、***塞劑、氣霧劑或滴劑 (例如：眼用、耳用或鼻用滴劑)投藥。油膏與乳霜可例如：使用水性或油性基質，並添加合適增稠劑與/或膠凝劑調配。投與眼腈之油膏可依無菌方式，使用無菌成份製造。
該組合物可包含0.1%至99%重量比，較佳為10至60%重量比之活性物質，端賴投藥方法決定。用於治療上述病變之化合物劑量將依一般方式，隨病變嚴重性、患者體重及其他類似因素變化。然而，依據一般原則，合適單位劑量可為0.05至1000 mg、1.0至500mg或1.0至200 mg，且此等單位劑量可一天投與一次以上，例如：一天2或3次。
式(I)化合物與其醫藥上可接受之鹽可呈組合製劑使用。例如：本發明化合物可組合環孢素A或其他醫療活性化合物使用。
本發明亦包括標記同位素之化合物，此等化合物與式(I)，等等化合物相同，但其中一個或多個原子被另一個與其天然原子量或質量數不同之原子置換。可進入本發明化合物之同位素實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟、碘與氯之同位素，如：3 H、11 C、14 C、18 F、123 I與125 I。
包含上述同位素與/或其他原子之其他同位素之式(I)化合物與該化合物之醫藥上可接受之鹽均在本發明範圍內。標記同位素之本發明化合物(例如：彼等標記如：3 H、14 C放射性同位素之化合物)適用於藥物與/或受質組織分佈分析法。氚化(亦即3 H)與碳-14(亦即14 C)同位素由於方便製造及檢測，因此特別適用。11 C與18 F同位素特別適用於PET(正 子放射斷層掃瞄攝影)，且125 I同位素特別適用於SPECT(單光子放射電腦斷層掃瞄攝影)，均適用於腦部顯影。此外，改用較重同位素，如：氘(亦即2 H)取代時，可因代謝安定性較高而提供某些醫療效益，例如：延長活體內半衰期或降低劑量需求，因此，較適合某些環境。標記同位素之本發明式(I)，等等化合物通常可依反應圖與/或下文實例所揭示方法，改用容易取得之標記同位素之試劑替代未標記同位素之試劑製備。
本說明書摘錄之所有文獻(包括(但不限於)：專利案與專利申請案)已以引用方式完全併入本文中，其引用之程度就如同已特定地及個別地將各公開案之整體揭示內容以引用之方式併入一般。
下列製法說明與實例係說明本發明化合物製法。
分析級LCMS系統之條件、硬體與軟體 硬體
Agilent 1100梯度幫浦
Agilent 1100自動取樣器
Agilent 1100 DAD檢測器
Agilent 1100脫氣機
Agilent 1100烘箱
Agilent 1100控制器
Waters Acquity二元溶劑處理器
Waters Acquity樣本處理器
Waters Acquity PDA
Waters ZQ質譜儀
Sedere Sedex 55、Sedere Sedex 85、Sedere Sedex 75或Polymer Labs PL-ELS-2100
軟體
Waters MassLynx 4.0 SP2版或4.1版
5分鐘方法 管柱
所使用之管柱為Waters Atlantis，其規格為4.6mmx50mm。
固相粒度為3μm。
管柱
所使用之管柱為Waters Atlantis，其規格為4.6mmx50mm。固相粒度為3μm。
溶劑
A：水性溶劑=水＋0.05%甲酸
B：有機溶劑=乙腈＋0.05%甲酸
方法
所使用之一般方法具有5分鐘操作時間。
流速
上述方法之流速為3毫升/分鐘。
2分鐘方法 軟體
Waters MassLynx 4.1版
管柱
所使用之管柱為Waters Acquity BEH UPLC C18，其規格為2.1mmx50mm。固相粒度為1.7μm。
溶劑
A：水性溶劑=水＋0.05%甲酸
B：有機溶劑=乙腈＋0.05%甲酸
弱洗滌=1:1甲醇：水
強洗滌=水
方法
所使用之一般方法具有2分鐘操作時間。
上述方法之流速為1毫升/分鐘。
該一般方法之注射體積為0.5微升。
管柱溫度為40℃。
UV檢測範圍為220至330nm
開放通路質量導向自動製備系統(Open Access Mass Directed Auto Prep系統(MDAP)) 硬體
開放通路質量導向自動製備儀器包括下列：1個Waters 600梯度幫浦
1個Waters 2767注射/收集器
1個Waters試劑處理器
1個MicroMass ZQ質譜儀
1個Gilson Aspec-廢物收集器
1個Gilson 115溶離後UV檢測器
1個電腦系統。
軟體
MicroMass MassLynx v4.0
管柱
所使用之管柱通常為Supelco LCABZ++管柱，其規格為內直徑20mm，長100mm。固相粒度為5微米。
溶劑
A：水性溶劑=水＋0.1%甲酸
B：有機溶劑=MeCN：水95:5+0.05%甲酸
補充溶劑=MeOH：水80:20+50mMol乙酸銨
針頭潤洗溶劑=MeOH：水：DMSO 80:10:10
方法
依據所需化合物之分析滯留時間，自5種方法選用其中一種。
其運轉時間均為15分鐘，包括10分鐘梯度及之後5分鐘管柱沖刷與再平衡步驟。
MDP 1.5-2.2=0-30% B
MDP 2.0-2.8=5-30% B
MDP 2.5-3.0=15-55% B
MDP 2.8-4.0=30-80% B
MDP 3.8-5.5=50-90% B
流速
上述所有方法之流速均為20ml/min。
替代系統： 硬體
˙Waters 2525二元梯度模式
˙Waters 515輔助幫浦
˙Waters幫浦控制模式
˙Waters 2767注射收集器
˙Waters管柱流體處理器
˙Waters 2996光雙極排列檢測器
˙Waters ZQ質譜儀
˙Gilson 202溶離份收集器
˙Gilson Aspec廢物收集器
軟體
Waters MassLynx 4 SP2版
管柱
所使用管柱為Waters Atlantis，其規格為19mmx100mm(小規模)與30mmx100mm(大規模)。固相粒度為5mm。
溶劑
A：水性溶劑=水＋0.1%甲酸
B：有機溶劑=乙腈＋0.1%甲酸
補充溶劑=甲醇：水80:20
針頭潤洗溶劑=甲醇
方法
依據所需化合物之滯留時間，有5種方法可供選用。其運轉時間為13.5分鐘，包括10分鐘梯度，及之後3.5分鐘管柱沖刷與再平衡步驟。
大/小規模1.0-1.5=5-30% B
大/小規模1.5-2.2=15-55% B
大/小規模2.2-2.9=30-85% B
大/小規模2.9-3.6=50-99% B
大/小規模3.6-5.0=80-99% B(6分鐘後，沖刷與再平衡7.5分鐘)
流速
上述所有方法之流速為20mls/min(小規模)或40mls/min(大規模)。
淺梯度
大規模1.5至2.3分鐘=13-29% B
大規模1.9至2.3分鐘=25-41% B
大規模2.3至2.6分鐘=37-53% B
大規模2.6至3.1分鐘=49-65% B
大規模3.1至3.6分鐘=61-77% B
NMR條件 硬體
Bruker 400MHz超遮蔽
Bruker B-ACS60自動取樣器
Bruker Advance 400 Console
Bruker DPX250
Bruker AVANCE 500
Bruker DRX600
軟體
使用界面-NMR Kiosk
控制軟體-XWin NMR 3.0版
層析法
除非本文中另有說明，否則所有層析法均使用矽膠管柱進行。
縮寫：
SCX-　　　強力陽離子交換法
一般化學
用於製備實例之中間物不一定由指定之說明製備。
D1之說明 1H -吲唑-5-甲腈(D1)
取2-氟-5-氰基苯甲醛(1.1 g)溶於肼水合物(19 ml)，於室溫下攪拌18小時。然後蒸餾溶液，殘質經矽膠急驟管柱層析法，以DCM溶離純化。產生標題化合物(300 mg)。
D1之說明(替代製法) 1H -吲唑-5-甲腈(D1)
取5-氰基-3-氟苯甲醛(4 g, 26.8 mmol)溶於肼水合物，於室溫下攪拌18小時。溶液倒至冰上，過濾分離所得固體後，於60℃下真空乾燥，產生標題化合物(1.27 g)之粉紅色固體。再自水層中分離出產物。MS(ES):C8 H5 N3 理論值143；實測值144(MH+ )。
亦可如過去之說明製備1H -吲唑-5-甲腈(Halley與Sava 1997, Synth. Commun. 27(7):1199-1207)。
D2之說明 N -羥基-1H -吲唑-5-羧亞胺醯胺(D2)
取5-氰基吲唑(D1) (500 mg)、羥胺HCl(485 mg)與NaHCO3 (1.47 g)溶於/懸浮於MeOH(18 ml)，加熱至50℃，攪拌19小時與一夜。反應混合物過濾後，以MeOH洗滌與蒸發，產生標題化合物(584 mg)之白色固體。MS(ES):C8 H8 N4 O理論值176；實測值177(MH+ )。
D3之說明 3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(D3)
取4-羥基-3-氯苯甲酸甲酯(13.4 g)溶於DMF(150 ml)，依序以K2 CO3 (19.9 g)與異丙基溴(13.5 ml)處理，加熱所得混合物至70℃，攪拌一夜。反應混合物隨後冷卻至RT，蒸發至乾，再溶於EtOH，過濾，再蒸發一次，產生酯中間物(22.24g)之白色固體。此化合物為乙酯與甲酯之3:1混合物，以粗產物用於下一個反應。
取中間物粗產物(22.24 g)溶於MeOH(75 ml)，以2MNaOH水溶液(75 ml)處理，加熱至60℃，並攪拌2小時。反應混合物隨後冷卻至RT，蒸發MeOH，其餘水溶液 經5M HCl水溶液(30 ml)酸化。濾出沉澱與乾燥，產生標題化合物(15.1 g)之白色固體。δH(CDCl3 , 400MHz):1.42(6H, d), 4.70(1H, septet), 6.97(1H, d), 7.97(1H, d), 8.12(1H, s)。MS(ES):C10 H11 ClO3 理論值214；實測值213(M-H+ )。
3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸可依WO2006047195說明之製法製備。
D4之說明 5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑(D4)
取3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(D3) (712 mg)、EDCI.HCl(699 mg)與HOBT(493 mg)溶於DMF(16.5 ml)，於室溫下攪拌10分鐘。添加N -羥基-1H -吲唑-5-羧亞胺醯胺(D2) (584 mg)，加熱混合物至80℃12小時。反應混合物隨後冷卻至RT，靜置一個週末，蒸發至乾，再溶於H2 O。以EtOAc(x 3)萃取此溶液，合併之萃液經鹽水洗滌，蒸發，與DCM磨製2次，經音波處理4分鐘後，過濾，乾燥，再重覆一次，產生標題化合物(407 mg)之粉紅色固體。δH(d6 -DMSO, 400MHz):1.37(6H, d), 4.89(1H, septet), 7.46(1H, d), 7.73(1H, d), 8.04(1H, d), 8.13(1H, d), 8.20(1H, s), 8.28(1H, s), 8.58(1H, s)。MS(ES):C18 H15 ClN4 O2 理論值354；實測值355(M+H)。
D5之說明 3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D5)
取5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑(D4) (200 mg)溶於DMPU(2.8 ml)，依序以Cs2 CO3 (367 mg)與3-溴丙酸乙酯(145 ul)處理。所得混合物於微波反應器中加熱至140℃ 1.5小時。反應混合物隨後冷卻至RT，蒸發至乾，溶於H2 O。以EtOAc(x 3)萃取此溶液，合併之萃液經鹽水洗滌，與蒸發，產生標題化合物(240 mg)之褐色油狀物。MS(ES):C23 H23 35 ClN4 O4 理論值454；實測值455(MH+ )。
D5之說明(替代製法) 3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D5)
取含3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52) (2.04 g, 7.38 mmol)、3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(D3) (1.743 g, 8.12 mmol)、EDC(2.123 g, 11.08 mmol)與HOBT(1.357 g, 8.86 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(DMF)(25 ml)攪拌一夜後，於120℃下加熱4小時。取混合物溶於EtOA後，以水與NaHCO3 洗滌，經急驟層析法，以EtOAc/異己烷10-90%與10-30%依序溶離純化。蒸發溶劑，產生(1.95 g)白色固體。MS(ES):C23 H23 35 ClN4 O4 理論值454；實測值(MH+ )455。
D6之說明 3-氯-4-(乙基氧)苯甲酸甲酯(D6)
取-4-羥基-3-氯苯甲酸甲酯(10 g, 53.6 mmol)與碳酸鉀(14.8 g, 107.2 mmol)懸浮於DMF(110 ml)，添加乙基碘(8.56 ml, 107.2 mmol)。加熱反應混合物至70℃一夜。反應混合物過濾，以醚洗滌殘質。有機溶液真空蒸發後，溶於EtOAc，以NaOH水溶液與水洗滌，脫水及蒸發至乾，產生標題化合物(11.24 g)之黃色油狀物。MS(ES):C10 H11 35 ClO3 理論值214；實測值(MH+ )215。
D7之說明 3-氯-4-(乙基氧)苯甲酸(D7)
在含3-氯-4-(乙基氧)苯甲酸甲酯(D6) (11.24 g, 52.4 mmol)之甲醇(40 ml)攪拌懸浮液中添加2M NaOH水溶液(40 ml)。所得混合物於60℃下加熱2小時。反應混合物分溶於EtOAc與稀鹽酸之間。分離有機相，脫水與真空蒸發，產生粗產物。此產物與醚磨製，產生標題化合物之白色固體(8.21 g)。MS(ES):C9 H9 35 ClO3 理論值200；實測值(MH+ )201。
D8之說明 3-乙基-4-(1-哌啶基)苯基氰(D8)
取4-胺基-3-乙基苯基氰(3.0 g, 20.5 mmol)、1,5-二溴戊烷(11.1 mL, 82.1 mmol)、碳酸鉀(5.67 g, 41.0 mmol)與水(39.6 mL)均分至10支微波反應小瓶中，分別於160℃下加 熱1h。合併所有反應混合物，以乙酸乙酯(40 mL)萃取2次，合併之有機份脫水(相分離器)與真空濃縮。添加二氯甲烷。混合物過濾，濾液經矽膠層析法，以2-5%乙酸乙酯之己烷溶液溶離純化，產生標題化合物之無色油狀物(823 mg, 3.85 mmol)。分析顯示該化合物包含少量二溴戊烷雜質。MS(ES):C14 H18 N2 理論值214；實測值215(MH+ )。
D9之說明 3-乙基-4-(1-哌啶基)苯甲酸(D9)
取含3-乙基-4-(1-哌啶基)苯基氰(D8) (817 mg, 3.82 mmol)與氫氧化鉀(2.14 g, 38.2 mmol)之乙醇(35 mL)與水(8 mL)加熱至90℃(爐溫)9h。再加氫氧化鉀(2.14 g, 38.2 mmol)與水(8 mL)，再加熱反應18h。使反應冷卻，以HCl水溶液中和。過濾分離白色固體，曾試圖以SCX卡管純化濾液，但未成功。合併固體與SCX之產物。添加甲醇後，以乙酸酸化混合物。混合物過濾，得到濾液後，加至SCX卡管，以甲醇洗滌，以2M氨之甲醇溶液溶離。以試驗規模得到標題化合物之白色固體(96 mg, 0.41 mmol)，由其餘物 質得到無色油狀物(563 mg, 2.41 mmol)。MS(ES):C14 H19 NO2 理論值233；實測值234(MH+ )。
D10之說明 3-乙基-4-碘苯基氰(D10)
於0℃下，取4-胺基-3-乙基苯基氰(2.50 g, 17.1 mmol)於水(14 mL)中攪拌，滴加濃鹽酸(7.80 mL, 257 mmol)後，滴加亞硝酸鈉(1.24 g, 18.0 mmol)之水溶液(3.43 mL)。攪拌所得混合物15分鐘後，以15分鐘時間加至0℃之碘化鉀(2.98 g, 18.0 mmol)之水溶液(6.0 mL)。於室溫下攪拌混合物2h。混合物經乙酸乙酯(3x100 mL)萃取，合併之有機份經鹽水(100 mL)洗滌，脫水(相分離器)，與真空濃縮，產生標題化合物之褐色固體(4.21 g, 16.4 mmol)。δH(甲醇-d4 , 400 MHz):8.02(1H, d), 7.61(1H, d), 7.24(1H, dd), 2.80(2H, q), 1.21(3H, t)。
D11之說明 4-(1-環己烯-1-基)-3-乙基苯基氰(D11)
取含3-乙基-4-碘苯基氰(D10) (1.23 g, 4.80 mmol)、1-環己烯-1-基-二羥硼酸(907 mg, 7.20 mmol)、甲醇鈉(778 mg, 14.4 mmol)與雙(三苯基膦)鈀(II)氯化物(337 mg, 0.48 mmol)之無水甲醇(12 mL)混合物於微波爐中，在80℃下加熱10分鐘。取反應混合物分溶於乙酸乙酯(40 mL)與水(40 mL)之間後，有機層再經水(40 mL)洗滌，脫水(相分離器)，與真空濃縮。粗產物經矽膠層析法，以0-5% EtOAc之己烷溶液溶離30分鐘，產生標題化合物之黃色油狀物(824 mg, 3.91 mmol)。δH(甲醇-d4 , 400 MHz)7.56(1H, d), 7.46(1H, dd), 7.19(1H, d), 5.61-5.56(1H, m), 2.68(2H, quart), 2.23-2.16(4H, m), 1.85-1.68(4H, m), 1.20(3H, t)。
D12之說明 4-(1-環己烯-1-基)-3-乙基苯甲酸(D12)
取含4-(1-環己烯-1-基)-3-乙基苯基氰(D11) (824 mg, 3.91 mmol)與氫氧化鉀(2.19 g, 39.1 mmol)之乙醇(36 mL)與水(8 mL)於90℃(爐溫)下加熱20h。反應混合物真空濃縮，殘質分溶於乙酸乙酯(120 mL)與鹽酸水溶液(2M, 50 mL)之間後，有機相再經鹽酸(2M, 50 mL)洗滌，脫水(相分離器)，與真空濃縮，產生標題化合物之黃色油狀物(808 mg, 3.51 mmol)。LCMS(ES):C15 H18 O2 理論值230；實測值229(M-H+ )。
D13之說明 4-環己基-3-乙基苯甲酸(D13)
取4-(1-環己烯-1-基)-3-乙基苯甲酸(D12) (803 mg, 3.49 mmol)溶於甲醇(70 mL)，於H-Cube反應瓶上，使用鈀/碳卡管氫化。取產物溶液真空濃縮，產生標題化合物之白色固體(792 mg, 3.41 mmol)。δH(甲醇-d4 , 400 MHz):7.82-7.68(2H, m), 7.33(1H, d), 2.83(1H, m), 2.73(2H, q), 1.87(2H, m), 1.85-1.70(3H, m), 1.58-1.30(5H, m), 1.22(3H, t)。
D14之說明 3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸1-甲基乙基酯(D14)
取含3-溴-4-羥基苯甲酸(2.00 g, 9.22 mmol)、2-碘丙烷(1.85 mL, 18.4 mmol)與碳酸鉀(2.55 g, 18.4 mmol)之DMF(175 mL)混合物加熱至回流5h。使反應冷卻，過濾。濾液真空濃縮，殘質分溶於乙酸乙酯(150 mL)與水(150 mL)之間，經2M NaOH鹼化。有機相脫水(相分離器)，與真空濃縮，產生標題化合物之黃色油狀物(2.36 g, 7.84 mmol)。δH(甲醇-d4 , 400 MHz):8.05(1H, d), 7.90(1H, dd), 7.25(1H, d), 5.10(1H, septet), 4.81(1H, septet), 1.32(6H, d), 1.31(6H, d)。
D15之說明 3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(D15)
取含3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸1-甲基乙基酯(D14) (2.36 g, 7.84 mmol)之乙醇溶液(100 mL)與氫氧化鈉水溶液(2M, 39 mL)加熱至回流5h。反應混合物真空濃縮，分溶於乙酸乙酯(125 mL)與水(125 mL)之間，後者經2M HCl(40 mL)酸化。再以乙酸乙酯(70 mL)萃取水層，合併之有機萃液脫水(相分離器)與真空濃縮，產生標題化合物之灰白色固體(1.83 g, 7.06 mmol)。MS(ES):C10 H11 BrO3 理論值258,260；實測值257, 259(M-H+ )。
D16之說明 4-溴-3-氯苯甲酸乙酯(D16)
在含4-溴-3-氯苯甲酸(5.00 g, 21.2 mmol)之乙醇(50 mL)懸浮液中添加硫酸(5 mL)，所得混合物加熱至回流60h。反應分溶於乙酸乙酯(50 mL)與水(50 mL)之間。水層再 經乙酸乙酯萃取，合併之有機份脫水(相分離器)與真空濃縮，產生標題化合物之褐色油狀物/固體(5.09 g, 19.3 mmol)。δH(d6 -DMSO, 400 MHz):8.06(1H, d), 7.96(1H, d), 7.80(1H, dd), 4.33(2H, q), 1.33(3H, t)。
D17之說明 3-氯-4-(2-甲基丙基)苯甲酸乙酯(D17)
取含異丁基鋅化溴之THF溶液(0.5 M, 30 mL, 15.0 mmol)於氬氣下加至4-溴-3-氯苯甲酸乙酯(D16) (2.00 g, 7.60 mmol)，添加1,1'-雙(二苯基膦基)二茂絡鐵-鈀(II)二氯化物-二氯甲烷錯化物(930 mg, 1.14 mmol)。加熱反應至回流4.5h。混合物真空濃縮，殘質分溶於乙酸乙酯(125 mL)與水(125 mL)之間。濾出所形成之固體，棄置不要。有機層經水(100 mL)洗滌，脫水(相分離器)，與真空濃縮。粗產物經矽膠層析法，以0-5%EtOAc之己烷溶液溶離30分鐘，產生標題化合物之無色油狀物(1.76 g, 7.33 mmol)。δH(d6 -DMSO, 400 MHz):7.91(1H, d), 7.80(1H, dd), 7.46(1H, d), 4.30(2H, q), 2.66(2H, d), 1.88-2.01(1H, m), 1.32(3H, t), 0.89(6H, d)。
D18之說明 3-氯-4-(2-甲基丙基)苯甲酸(D18)
取含3-氯-4-(2-甲基丙基)苯甲酸乙酯(D17) (1.76 g, 7.33 mmol)與氫氧化鈉水溶液(2M, 3.70 mL, 7.4 mmol)之乙醇(30 mL)溶液於40℃下加熱3h。反應混合物真空濃縮，殘質分溶於乙酸乙酯(100 mL)與水(100 mL)之間，後者經2M HCl(4 mL)酸化。水層經乙酸乙酯(100 mL)萃取，合併之有機萃液脫水(相分離器)與真空濃縮，產生標題化合物之白色固體(1.35 g, 6.36 mmol)。MS(ES):C11 H13 35 ClO2 理論值212；實測值211(M-H+ )。
D19之說明 3-氰基-4-{[(三氟甲基)磺醯基]氧}苯甲酸甲酯(D19)
在含3-氰基-4-羥基苯甲酸甲酯(3 g, 16.93 mmol)與三乙基胺(3.54 ml, 25.4 mmol)之無水二氯甲烷(60 ml)溶液中，於0℃及氬氣沖刷下，慢慢滴加三氟甲烷磺酸酐(3.15 ml, 18.63 mmol)。使反應回升至室溫，並攪拌1h。反應混合物依序經10%碳酸鉀水溶液(2x50 mL)與HCl水溶液(2M, 2x50 mL)後，有機相脫水(相分離器)，真空排除溶劑，產生標題化合物之深褐色油狀物(5.165 g, 16.70 mmol)。δH(CDCl3 , 400 MHz):8.44(1H, d), 8.38(1H, dd), 7.60(1H, d), 3.99(3H, s)。
D20之說明 2-氰基-4-聯苯羧酸甲酯(D20)
下列反應係分成兩批各一半量進行：取3-氰基-4-{[(三氟甲基)磺醯基]氧}苯甲酸甲酯(D19) (1.5 g, 4.85 mmol)、苯 基二羥硼酸(1.183 g, 9.70 mmol)、碳酸鉀(2.011 g, 14.55 mmol)與肆-三苯基膦(0)鈀(0.561 g, 0.485 mmol)溶於DMF(24 ml)，混合物於微波爐中，在150℃下加熱30分鐘。合併兩個反應，以乙酸乙酯(50 mL)稀釋，混合物經矽藻土過濾排除鈀殘質。濾液真空濃縮減少DMF含量後，殘質分溶於飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)與乙酸乙酯(50 mL)之間。有機相再依序經碳酸氫鈉(50 mL)與水(50 mL)洗滌後，脫水(MgSO4 )，過濾，真空排除溶劑。褐色固體經矽膠層析法，以0-25% EtOAc之異己烷溶液溶離35分鐘純化，產生標題化合物之白色固體(935 mg, 3.94 mmol)。δH(d6 -DMSO, 400 MHz):8.42(1H, d), 8.29(1H, dd), 7.81(1H, d), 7.65(2H, m), 7.60-7.50(3H, m), 3.92(3H, s)。
D21之說明 2-氰基-4-聯苯羧酸(D21)
在2-氰基-4-聯苯羧酸甲酯(D20) (935 mg, 3.94 mmol)中添加乙醇(18 ml)，但無法溶解，因此添加二氯甲烷(10 ml)。然後再添加2M氫氧化鈉水溶液(2 ml, 4.00 mmol)，攪拌反應2h。在混合物中添加二氯甲烷(20 mL)與2M HCl水 溶液(10 mL)。分層，水性萃液再經二氯甲烷(20 mL)萃取。合併之有機相脫水(相分離器)，真空排除溶劑，產生白色固體，溶於甲醇(30 mL)，添加氫氧化鈉水溶液(2M, 3 mL)。於室溫下攪拌反應1h後，加水(20 mL)。再攪拌反應1h。添加二氯甲烷(60 mL)，混合物振盪，分層。水相再經二氯甲烷(50 mL)萃取後，合併之有機相脫水(相分離器)，真空排除溶劑，產生標題化合物之白色固體(849 mg, 3.80 mmol)。MS(ES):C14 H9 NO2 理論值223；實測值222(M-H+ )。
D22之說明 4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(D22)
取4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸(1 g, 4.45 mmol)溶於乙醇(3 ml)，添加濃硫酸(0.15 ml)。混合物於微波爐中，在100℃下加熱5分鐘後，於120℃下15分鐘。真空排除溶劑，殘質分溶於飽和碳酸氫鈉水溶液(50 ml)與乙酸乙酯(50 ml)之間。水層再經EtOAc(50 ml)萃取，合併有機相，經相分離器脫水與真空濃縮，產生標題化合物(1.026 g)之無色油狀物。δH(甲醇-d4 , 400 MHz)1.40(3H, t), 4.41(2H, q), 7.76(1H, d), 8.21(1H, dd), 8.33(1H, d)。
D22之說明(替代製法) 4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(D22)
取含4-氯-3-三氟甲基苯甲酸(10 g, 44.5 mmol)之乙醇(10 ml)溶液均分至兩個微波反應小瓶中。添加濃硫酸(0.75 ml)至各瓶中(共1.5 ml)。反應於微波爐中，在120℃下共加熱30分鐘。合併反應混合物與真空濃縮。殘質分溶於EtOAc(100 ml)與碳酸氫鈉水溶液(100 ml)之間。分離有機相，以碳酸氫鈉水溶液(100 ml)與水(2x100 ml)洗滌後，脫水(相分離器)，真空排除溶劑，產生標題化合物(4.126 g)之無色油狀物。δH(400 MHz,甲醇-d4 )符合前述實例。
D23之說明 2-(三氟甲基)-4-聯苯羧酸(D23)
將反應分成4份，分別使用四分之一試劑：在含4-溴-3-(三氟甲基)苯基氰(4 g, 16.00 mmol)、苯基二羥硼酸(3.90 g, 32.0 mmol)與碳酸鉀(6.63 g, 48.0 mmol)之N ,N -二甲基甲 醯胺(DMF)(64 ml)混合物中添加肆-三苯基膦(0)鈀(1.849 g, 1.600 mmol)。各反應於微波爐中，在150℃下加熱30分鐘。合併之反應混合物經寅氏鹽過濾，以乙酸乙酯洗滌，真空排除溶劑。殘質分溶於乙酸乙酯(100 mL)與水(100 mL)之間，有機相經碳酸氫鈉溶液(100 mL)洗滌。有機相脫水(MgSO4 )，過濾，真空排除溶劑。褐色油狀物與二氯甲烷磨製，過濾，產生淺黃色固體，2-(三氟甲基)-4-聯苯羧醯胺(2.47 g)，其未再純化即使用。在含2-(三氟甲基)-4-聯苯羧醯胺(2 g, 7.54 mmol)之乙醇(80 ml)溶液中添加氫氧化鉀(4.23 g, 75 mmol)與水，加熱混合物至90℃ 18h。反應混合物真空濃縮，殘質分溶於二氯甲烷(100 mL)與2M HCl(100 mL)之間。單離有機相，與脫水(相分離器)，真空排除溶劑，產生粗產物。使用Biotage Horizon，逆相卡管，以5-100% MeCN之水溶液溶離純化，產生灰白色固體標題化合物(960 mg)。MS(ES):C14 H9 F3 O2 理論值266；實測值265(M-H+ )。
D23之說明(替代製法) 2-(三氟甲基)-4-聯苯羧酸(D23)
A批次：取含4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(D22) (1.0 g, 3.96 mmol)、苯基二羥硼酸(724 mg, 5.94 mmol)、乙酸鈀(44 mg)、(二環己基膦基)聯苯(140.2 mg)與氟化鉀(689 mg, 11.9 mmol)之THF(8 ml)混合物於微波爐中，在120℃下共攪拌40分鐘。
B批次：取含4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(D22) (500 mg, 1.98 mmol)、苯基二羥硼酸(290 mg, 2.38 mmol)、乙酸鈀(2.2 mg)、(二環己基膦基)聯苯(7 mg)與氟化鉀(344 mg, 5.8 mmol)之THF(4 ml)混合物於微波爐中，在120℃下攪拌20分鐘。
合併來自A & B批次之反應混合物，過濾，濾液真空濃縮。殘質經急驟層析法純化(SiO2 ，0至5% EtOAc之己烷溶液)，產生起始物與偶合產物之混合物。產物溶於乙醇(10 ml)與2M NaOH(aq)(5ml)後，加熱至回流3h。真空排除溶劑，殘質分溶於DCM與2M HCl水溶液之間。再以DCM萃取水層。合併有機相，真空濃縮。粗產物於Horizon上進行逆相層析法，以5至100%MeCN之水溶液溶離純化，產生標題化合物之白色固體(367 mg)(DN108121-170A2, GSK1869780A)。MS(ES):C14 H9 F3 O2 理論值266；實測值265(M-H+ )。
D24之說明 3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯甲酸甲酯(D24)
於氬氣下，在3-氰基-4-{[(三氟甲基)磺醯基]氧}苯甲酸甲酯(D19) (1.5 g, 4.85 mmol)中添加含溴(2-甲基丙基)鋅(48.5 ml, 24.25 mmol)之四氫呋喃(50 ml)。然後在溶液中添加1,1'-雙(二苯基膦基)二茂絡鐵二氯鈀(II)-二氯甲烷錯化物(0.355 g, 0.485 mmol)，加熱反應至回流6h。加水(2 mL)中止混合物反應後，經寅氏鹽過濾，以乙酸乙酯洗滌。真空排除溶劑。殘質分溶於乙酸乙酯(50 mL)與水(50 mL)之間，有機相脫水(相分離器)，真空排除溶劑。殘質經矽膠層析法，以0-15% EtOAc之異己烷溶液溶離純化40分鐘。收集兩批產物，其中一批為標題化合物之無色油狀物(233 mg, 1.072 mmol)。δH(CDCl3 , 400 MHz):8.28(1H, d), 8.15(1H, dd), 7.38(1H, d), 3.94, 3H, s), 2.78(2H, d), 2.02(1H, m), 0.96(6H, d)。
D25之說明 3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯甲酸(D25)
取3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯甲酸甲酯(D24) (233 mg, 1.072 mmol)溶於乙醇(4 ml)，添加2M氫氧化鈉水溶液(1 ml, 2 mmol)。攪拌反應1h。添加2M HCl水溶液(10 mL)，以二氯甲烷(20 mL+10 mL)萃取混合物。單離有機相，經相分離器脫水與合併後，真空排除溶劑，產生標題化合物之白色固體(203 mg, 0.999 mmol)。MS(ES):C12 H13 NO2 理論值203；實測值202(M-H+ )。
D26之說明 5-甲醯基-2-{[(1S )-1-甲基丙基]氧}苯基氰(D26)
取(2S )-2-丁醇(0.99 g, 0.013 mol)溶於DMF(50 ml)，冷卻溶液至0℃。在此溶液中分批添加氫化鈉(60%礦物油勻散液，1.54g, 0.036 mol)，添加完畢後，於0℃下攪拌混合物10分鐘。添加2-氟-5-甲醯基苯基氰(2.0 g, 0.013 mol)，使反應混合物回升至室溫(於冰浴中慢慢回升)，於室溫下攪拌反應混合物一夜。反應混合物隨後冷卻至0℃，以鹽水中止 反應，以EtOAc(~25ml)稀釋。混合物分溶，以水(~30ml)萃取有機份。合併之有機相通過相分離卡管後，減壓蒸發至乾，產生粗產物。粗產物殘質於40+M Biotage卡管上，以20至50% EtOAc之己烷溶液混合物溶離純化。產生標題化合物(220mg)之白色固體。MS(ES):C12 H13 NO2 理論值203；實測值204(MH+ )。
D27之說明 3-氰基-4-{[(1S )-1-甲基丙基]氧}苯甲酸(D27)
在含5-甲醯基-2-{[(1S )-1-甲基丙基]氧}苯基氰(D26) (220mg, 1.08 mmol)之乙酸(20ml)溶液中添加過硼酸鈉四水合物(334mg, 2.17 mmol)，反應混合物於50℃下加熱一個週末。反應混合物真空濃縮。加水(~50ml)。添加EtOAc(~30ml)，分層，水層再經EtOAc(~30ml)萃取，合併之有機相減壓蒸發至乾，產生標題化合物(245mg)之灰白色固體。MS(ES):C12 H13 NO2 理論值219；實測值220(MH+ )。
D28之說明 5-甲醯基-2-{[(1R )-1-甲基丙基]氧}苯基氰(D28)
取(2R )-2-丁醇(0.99 g, 0.013 mol)溶於DMF(50 ml)，溶液冷卻至0℃。在其中分批添加氯化鈉(60%礦物油勻散液)(1.54g, 0.036 mol)。添加完畢後，於0℃下攪拌混合物10分鐘。添加2-氟-5-甲醯基苯基氰(2.0 g, 0.013 mol)，使反應混合物回升至室溫(於冰浴中慢慢回升)，於室溫下攪拌反應混合物一夜。反應混合物隨後冷卻至0℃，以鹽水中止反應，以EtOAc(~25ml)稀釋。混合物分溶，以水(~30ml)萃取有機份。合併之有機相通過相分離卡管後，減壓蒸發至乾，產生粗產物。粗產物殘質於40+M Biotage卡管上，以20至50% EtOAc之己烷溶液混合物溶離純化。產生標題化合物(310mg)之黃色油狀物。δH(d6 -DMSO, 400 MHz):9.88(1H, s), 8.30(1H, s), 8.15(1H, d), 7.49(1H, d), 4.73-4.81(1H, m), 1.63-1.79(2H, m), 1.33(3H, d), 0.95(3H, t)。
D29之說明 3-氰基-4-{[(1R )-1-甲基丙基]氧}苯甲酸(D29)
在含5-甲醯基-2-{[(1R )-1-甲基丙基]氧}苯基氰(D37) (310mg, 1.53 mmol)之乙酸(30ml)溶液中添加過硼酸鈉 四水合物(471mg, 3.05 mmol)，反應混合物於50℃下加熱一個週末。反應混合物真空濃縮。加水(~50ml)。添加EtOAc(~30ml)，分層，水層再經EtOAc(~30ml)萃取2次，合併之有機相減壓蒸發至乾，產生標題化合物(315mg)之灰白色固體。MS(ES):C12 H13 NO2 理論值219；實測值220(MH+ )。
D30之說明 5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸1-甲基乙基酯(D30)
取5-氯-6-羥基-3-吡啶羧酸(3.00 g, 17.28 mmol)懸浮於甲苯(75 ml)，以碳酸銀(12.4 g, 24.8 mmol)與2-碘丙烷(6.9 ml, 69.12 mmol)處理，於RT與黑暗中攪拌18小時。混合物過濾，濾液蒸發，產生含雜質之標題化合物(1.32 g)。δH(d6 -DMSO)1.31(6H, d), 1.35(6H, d), 5.13(1H, sept), 5.40(1H, sept), 8.22(1H, d), 8.65(1H, d)。
D30之說明(替代製法) 5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸1-甲基乙基酯(D30)
取5-氯-6-羥基-3-吡啶羧酸(1 g, 5.76 mmol)懸浮於液甲苯(200ml)，以碳酸銀(3.97 g, 14.40 mmol)與2-碘丙烷(3.46 ml, 34.6 mmol)處理，於RT與黑暗中攪拌3天。再加2-碘丙烷(3ml)，並攪拌24小時。添加EtOAc(200ml)，以水(200ml)與飽和NaHCO3 (50ml)洗滌後，以水(200ml)洗滌。經硫酸鎂脫水，與蒸發排除溶劑，產生1.0 g標題化合物之透明無色油狀物，其未經進一步判別即使用。
D30之說明(替代製法) 5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸1-甲基乙基酯(D30)
取2-碘丙烷(12.42 ml, 124 mmol)加至含5-氯-6-羥基-3-吡啶羧酸(可自Fluka藥廠取得商品，5.4 g, 31.1 mmol)與 Ag2 CO3 (21.45 g, 78 mmol)之CHCl3 (200 ml)懸浮液中，於室溫下攪拌反應3天。濾出沉澱，與真空排除溶劑，產生標題化合物(4 g, 47%)之黃色油狀物，其未再純化即用於下一個步驟。MS(ES) C12 H16 ClNO3 理論值257，實測值258 [M+H]+
D31之說明 5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸(D31)
取含5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸1-甲基乙基酯(D30) (1.6 g, 6.21 mmol)之異丙醇(70 ml)與水(35.0 ml)經2N氫氧化鈉(6.21 ml, 12.42 mmol)處理，並攪拌3小時，產生單一產物。蒸發排除IPA，以冰醋酸酸化，以EtOAc(100ml)萃取產物。經硫酸鎂脫水，與蒸發排除溶劑，產生1.30g標題化合物之白色固體。MS(ES)C9 H10 35 ClNO3 理論值215；實測值214(M-H+ )。
D31之說明(替代製法) 5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸(D31)
添加氫氧化鈉(29.1 ml, 58.2 mmol)至含5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸1-甲基乙基酯(D30) (3 g, 11.64 mmol)之甲醇(25 ml)溶液中，於室溫下攪拌一夜。蒸發溶劑後，以2M HCl中和，以醚萃取。經硫酸鎂脫水，與蒸發，產生不純之白色固體。與DCM磨製，產生標題化合物之純的白色固體。MS(ES)C9 H10 ClNO3 理論值215，實測值216 [M+H]+
D32之說明 4-(1-環己烯-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲醯胺(D32)
取4-溴-3-(三氟甲基)苯基氰(商品)(1.2 g, 4.80 mmol)、1-環己烯-1-基二羥硼酸(0.907 g, 7.20 mmol)、甲醇鈉(0.778 g, 14.40 mmol)與雙(三苯基膦)鈀(II)氯化物(0.337 g, 0.480 mmol)加至無水甲醇(12 mL)，混合物於微波爐中，在80℃下加熱10分鐘。反應混合物分溶於乙酸乙酯(40 mL)與水 (40 mL)之間後，再以水(40 mL)洗滌有機相。有機相脫水(MgSO4 )，過濾，真空排除溶劑。粗產物經急驟矽膠層析法，以0-75%乙酸乙酯之己烷溶液溶離純化，產生標題化合物之白色固體(1.02 g)。MS(ES):C14 H14 F3 NO理論值269；實測值270(MH+ )。
D33之說明 4-環己基-3-(三氟甲基)苯甲醯胺(D33)
取4-(1-環己烯-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲醯胺(D32) (850 mg, 3.16 mmol)溶於甲醇(63 ml)，使用H-Cube反應瓶，以鈀/碳，於40℃下，在流速2mL/min下氫化。真空排除溶劑，產生標題化合物之白色固體(822 mg)。MS(ES):C14 H16 F3 NO理論值271；實測值272(MH+ )。
D34之說明 4-環己基-3-(三氟甲基)苯甲酸(D34)
在含4-環己基-3-(三氟甲基)苯甲醯胺(D33) (822 mg, 3.03 mmol)之乙醇(40 ml)溶液中添加氫氧化鉀(1.700 g, 30.3 mmol)與水(5 ml)，加熱反應至90℃(爐溫)3h，於室溫下攪拌16h。再加氫氧化鉀(1.700 g, 30.3 mmol)，於回流下加熱反應27h。再加5 mL水，加熱反應66小時(一個週末)。反應混合物真空濃縮，殘質分溶於乙酸乙酯(25 mL)與鹽酸水溶液(2M, 25 mL)之間。水層再經乙酸乙酯(25mL)萃取，合併之有機相脫水(MgSO4 )，過濾，真空排除溶劑，產生標題化合物之白色固體(737 mg)。MS(ES):C14 H15 F3 O2 理論值272；實測值271(M-H+ )。
D35之說明 4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯甲酸1-甲基乙基酯(D35)
取含4-羥基-3-(三氟甲基)苯甲酸(商品)(450 mg, 2.18 mmol)、2-碘丙烷(435 μL, 4.36 mmol)與碳酸鉀(603 mg, 4.36 mmol)之N ,N '-二甲基甲醯胺(40 mL)混合物於70℃下加熱4h後，再加2-碘丙烷(218 μL, 2.18 mmol)，續加熱18h。然後濾出有機固體，以乙酸乙酯潤洗。濾液真空濃 縮，分溶於乙酸乙酯(150 mL)與含一些氫氧化鈉水溶液之水(150 mL)之間。有機層脫水(相分離器)，與真空濃縮，產生標題化合物粗產物(704 mg)之黃色油狀物。MS(ES):C14 H17 F3 O3 理論值290；實測值291(MH+ )。
D36之說明 4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯甲酸(D36)
在含4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯甲酸1-甲基乙基酯(D35) (704 mg, 2.43 mmol)之乙醇(110 mL)混合物中添加氫氧化鈉水溶液(2M, 12.2 mL, 24.3 mmol)，加熱反應至回流1h。混合物真空濃縮，殘質分溶於乙酸乙酯(100 mL)與水(100 mL)之間，以鹽酸水溶液(2M, 13 mL)酸化。水層再經乙酸乙酯(100 mL)萃取，合併之有機層脫水，與真空濃縮，產生標題化合物之黃色固體(563 mg)。MS(ES):C11 H11 F3 O3 理論值248；實測值247(M-H+ )。
D37之說明 3-氯-4-(丙基氧)苯甲酸甲酯(D37)
取4-羥基-3-氯苯甲酸甲酯(10 g, 53.6 mmol)溶於DMF(110 ml)後，依序添加碳酸鉀(14.8 g, 107.2 mmol)與正丙基碘(10.4 ml, 107.2 mmol)。加熱反應至70℃一夜，過濾後，濾液再分溶於EtOAc與水之間。分離有機層，脫水與蒸發，產生標題化合物之黃色油狀物(12.37 g)。MS(ES)C11 H13 35 ClO3 理論值228；實測值229(MH+ )。
D38之說明 3-氯-4-(丙基氧)苯甲酸(D38)
取含3-氯-4-(丙基氧)苯甲酸甲酯(D37) (RD 108825-58-B1)(12.22 g, 0.053 mol)之乙醇溶液(40 ml)與2M NaOH水溶液(40 ml)於60℃下加熱3小時。使反應冷卻後，靜置於室溫下一個週末。反應混合物倒至HCl稀水溶液與EtOAc之混合物中。分離有機層，脫水與蒸發，產生之固體與醚磨 製，產生標題化合物之白色固體(7.7 g)。MS(ES)C10 H11 35 ClO3 理論值214；實測值213(M-H+ )。
D39之說明 3-氯-4-(1-吡咯啶基)苯甲酸乙酯(D39)
取含4-溴-3-氯苯甲酸乙酯(D16) (2.53 g, 9.62 mmol)、吡咯啶(1.03 mL, 12.5 mmol)、第三丁醇鈉(1.29 g, 13.5 mmol)、BINAP(196 mg, 0.29 mmol)與參(二亞苯甲基丙酮)二鈀(0)(58 mg, 0.10 mmol)之甲苯(120 mL)混合物於氬氣下加熱至回流3h。使反應冷卻與過濾。以甲苯洗滌固體後，濾液濃縮。殘質分溶於乙酸乙酯(150 mL)與添加碳酸氫鈉水溶液(50 mL)之水(100 mL)之間。有機相脫水(相分離器)，與濃縮，產生橙色油狀物。該油狀物經逆相層析法，以5-100%乙腈之水溶液溶離純化，產生標題化合物之橙色油狀物(600 mg)。其中包含一些雜質。MS(ES):C13 H16 35 ClNO2 理論值253；實測值254(MH+ )。
可依類似方法製備其他標題化合物(85 mg)。
D40之說明 3-氯-4-(1-吡咯啶基)苯甲酸(D40)
取含3-氯-4-(1-吡咯啶基)苯甲酸乙酯(D39) (685 mg, 2.71 mmol)與氫氧化鈉水溶液(2M, 1.36 mL, 2.72 mmol)之乙醇(15 mL)混合物於40℃下加熱17h。再添加氫氧化鈉(1.36 mL, 2.72 mmol)，再加熱反應8h。混合物濃縮，殘質溶於水(100 mL)。水相經乙酸乙酯(2x100 mL)洗滌後，酸化至pH 6。有白色固體形成，因此濾出，以水洗滌及於真空烘箱中乾燥，產生標題化合物之灰白色固體(362 mg)。MS(ES):C11 H12 35 ClNO2 理論值225；實測值226(MH+ )。
D41之說明 2-(環戊基氧)-5-甲醯基苯基氰(D41)
取含環戊醇(1.15g, 0.013 mol)之DMF(50ml)溶液冷卻至0℃。分批添加氫化鈉(1.54g, 0.016 mol)至溶液中，添加完畢後，於0℃下攪拌混合物10分鐘。添加3-氰基-4-氟苯甲醛(商品)(2.0g, 0.013 mol)，使混合物回升至室溫，攪拌一夜。反應混合物冷卻至0℃，添加鹽水，以乙酸乙酯(~25ml)稀釋混合物並分溶，有機層經水(~30ml)洗滌，通過相分離卡管進行脫水。溶液真空濃縮，殘質經Biotage SP4(40M)，使用20-60%乙酸乙酯/己烷為溶離液純化。取含產物溶離份真空濃縮，產生標題化合物(1.02g, 4.2 mmol)之黃色液體。MS(ES)：理論值C13 H13 NO2 215；實測值216(MH+ )。
D42之說明 3-氰基-4-(環戊基氧)苯甲酸(D42)
在50℃之含(D41) (0.13g, 0.604 mmol)之乙酸(20ml)溶液中分批添加過硼酸鈉四水合物(0.186g, 1.208 mmol)。反應混合物於50℃下攪拌一夜。續於50℃下攪拌48h，添加過硼酸鈉四水合物(0.093 g, 0.604 mmol)至反應混合物，續攪拌2天，然後於室溫下靜置反應混合物2天。真空排除溶劑，混合物分溶於乙酸乙酯(~20ml)與水(~20ml)之間，水層 經乙酸乙酯(2x~15ml)萃取，合併之有機層真空濃縮，產生標題化合物(106mg, 0.435mmol)之黃色固體。MS(ES)：理論值C13 H13 NO3 231；實測值230(M-H+ )。
D43之說明 5-[3-(1H -吲唑-5-基)-1,2,4- 二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧]苯基氰(D43)
取3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(可依WO2005/58848之說明製備)(1.52 g)、EDAC(2.14 g)與HOBt(1.51 g)溶於DMF(30 ml)後，攪拌5分鐘。添加N -羥基-1H -吲唑-5-羧亞胺醯胺(D2) (1.3 g)，加熱反應至80℃ 6小時，靜置冷卻一夜。真空排除溶劑，粗產物分溶於EtOAc與碳酸氫鈉水溶液之間。分離有機層，脫水及蒸發至乾。所得固體與醚及乙酸乙酯磨製，以甲醇與醚洗滌，產生標題化合物(816 mg)之粉紅色固體。MS(ES):C19 H15 N5 O2 理論值345；實測值(MH+ )346。
D43之說明(替代製法) 5-[3-(1H -吲唑-5-基)-1,2,4- 二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧]苯基氰(D43)
取3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲醯基氯(D106) (545 mg, 2.437 mmol)與N -羥基-1H-吲唑-5-羧亞胺醯胺(D2) (685 mg, 2.437 mmol)溶於乙腈(30 ml)後，添加三乙胺(0.374 ml, 2.68 mmol)。於室溫下攪拌所得混合物3h後，於80℃下48h，然後於室溫下冷卻。濾出所形成之沉澱，溶於EtOAc，以水洗滌，蒸發與層析[0-15% EtOAc之環己烷溶液]，產生標題化合物(170 mg, 17%)之粉紅色固體。MS(ES):C19 H15 N5 O2 理論值345；實測值(MH+ )346
D44與D45之說明 4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸乙酯(D44)與4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸乙酯(D45)
取5-[3-(1H -吲唑-5-基)-1,2,4-二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧]苯基氰(D43) (200 mg, 0.58 mmol)溶於DMF(5 ml)，添加Cs2 CO3 (567 mg, 1.74 mmol)與4-溴丁酸乙酯(0.166 ml, 1.16 mmol)。加熱反應至80℃ 12小時後，冷卻。反應混合物分溶於水與EtOAc之間。分離有機層，脫水與真空蒸發，產生粗產物，經急驟層析法純化(EtOAc/石油醚1:6至1:1)，產生4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸乙酯(D44) (151 mg)之白色固體。δH(d6 -DMSO)1.14(3H, t), 1.39(6H, d), 2.04-2.18(2H, m), 2.31(2H, t), 4.01(2H, q), 4.51(2H, t), 4.99(1H, sept), 7.57(1H, d), 7.87(1H, d), 8.08(1H, dd), 8.29(1H, d), 8.43(1H, dd), 8.52(1H, d), 8.57-8.58(1H, m)。MS(ES):C25 H25 N5 O4 理論值459；實測值(MH+ )460與RD108825-187A2 4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸乙酯(D45) (66 mg)之白色固體。δH(d6 -DMSO)1.16(3H, t), 1.37(6H, d), 2.14-2.26(2H, m), 2.32(2H, t), 4.03(2H, q), 4.51(2H, t), 4.99(1H, sept), 7.57(1H, d), 7.78-7.80(1H, m), 7.89(1H, dd), 8.42(1H, dd), 8.52(1H, d), 8.57-8.58(1H, m), 8.62(1H, s)。MS(ES)C25 H25 N5 O4 理論值459；實測值(MH+ )460。
D46之說明 [5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]乙酸乙酯(D46)
類似(D44) 之製法，由5-[3-(1H -吲唑-5-基)-1,2,4-二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧]苯基氰(D43)與 溴乙酸乙酯製備。粗產物與***磨製純化，產生標題化合物之黃色固體。MS(ES)C23 H21 N5 O4 理論值431；實測值(MH+ )432。
D47之說明 3-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)
在含1H-吲唑-5-甲腈(D1) (2.8 g, 19.72 mmol)之DMF(60 ml)溶液中添加碳酸銫(12.86 g, 39.4 mmol)後，添加3-溴丙酸乙酯(3.8 ml, 29.6 mmol)。反應混合物於80℃下攪拌3小時後，冷卻。真空排除溶劑，粗產物分溶於EtOAc(x2)與水之間，合併有機相，脫水與蒸發。粗產物與甲苯共沸後，經急驟層析法純化(EtOAc/己烷1:3)，產生3.75 g粉紅色固體，與己烷磨製，產生標題化合物(3.2 g)之粉紅色固體。MS(ES):C13 H13 N3 O2 理論值243，實測值(MH+ )244。
D47之說明(替代製法) 3-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)
在含1H -吲唑-5-甲腈(D1) (3.88 g, 27.3 mmol)之DMF(85 ml)混合物中添加Cs2 CO3 (17.8 g, 54.6 mmol)後， 添加3-溴丙酸乙酯(3.5 ml, 27 mmol)與3-氯丙酸乙酯(3.3 g, 24.2 mmol)。反應混合物於80℃下攪拌4小時後，冷卻。真空排除溶劑，粗產物分溶於EtOAc與水之間，分離有機相，經鹽水洗滌，脫水與蒸發。粗產物與甲苯共沸，經急驟層析法純化(EtOAc/己烷1:9至1:1)，產生3.84 g之黃色膠狀物。MS數據如同前一項實例。
D47之說明(替代製法) 3-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)
取1H -吲唑-5-甲腈(D1) (3.5 g, 24.45 mmol)溶於N ,N -二甲基甲醯胺(60 ml)。添加碳酸銫(15.93 g, 48.9 mmol)與3-溴丙酸乙酯(4.68 ml, 36.7 mmol)。混合物於80℃下加熱4小時。以EtOAc稀釋，以水(3x40ml)洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發。混合物經急驟層析法，依序以EtOAc/異己烷10-30%與10-20%溶離純化，產生(3.682g)第一種異構物(黃色油狀物)與(1.509g)第二種異構物(粉紅色固體)。由1H NMR分析第一種異構物顯示，其為含有2-異構物(約20%)之1-異構物。δH(d6 -DMSO, 400MHz)1.05(3H, t), 2.95(2H, t), 3.97(2H, q), 4.69(2H, t), 7.74(1H, dd), 7.92(1H, dt), 8.28(1H, d), 8.38(1H, dd)。MS(ES+ ):C13 H13 N3 O2 理論值243；實測值(MH+ )244。
D48之說明 4-(4-氰基-2H -吲唑-2-基)丁酸乙酯與4-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)丁酸乙酯之混合物(D48)
取含4-溴丁酸乙酯(0.390 g, 1.998 mmol)、1H -吲唑-4-甲腈(0.143 g, 0.999 mmol)與碳酸銫(0.976 g, 3.00 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(4 ml)混合物攪拌及於80℃下加熱90分鐘，冷卻，以乙酸乙酯/水(各30ml)稀釋，以3x15ml水洗滌有機相，脫水(硫酸鎂)，蒸發，經急驟層析法，以1:2乙酸乙酯/己烷溶離純化，產生部份分離之兩種異構物，經判別後再合併，產生異構物之標題混合物(249 mg)。1-異構物之δH(CDCl3 , 400MHz):1.24(3H, t), 2.29(4H, m), 4.12,(2H, q), 4.53(2H, t), 7.45(1H, dd), 7.54(1H, dd), 7.71(1H, dd), 8.19(1H, d)。2-異構物之δH(CDCl3 , 400MHz)for 1.25(3H, t), 2.35(4H, m), 4.14,(2H, q), 4.58(2H, t), 7.33(1H, dd), 7.54(1H, dd), 7.96(1H, dd), 8.15(1H, d)。
D48之說明(替代製法) 4-(4-氰基-2H -吲唑-2-基)丁酸乙酯與4-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)丁酸乙酯之混合物(D48)
取含4-溴丁酸乙酯(5.36 ml, 37.4 mmol)、1H -吲唑-4-甲腈(2.68 g, 18.72 mmol)與碳酸銫(18.30 g, 56.2 mmol)之N ,N -二甲基甲醯胺(50 ml)混合物於80℃下加熱90分鐘，冷卻，以EtOAc/水稀釋，以3x30ml水洗滌有機相，脫水(硫酸鎂)與蒸發。經急驟層析法，以EtOAc/己烷1:3溶離純化，產生異構物之標題混合物(4.7g)之黃色油狀物。MS(ES+ ):C14 H15 N3 O2 理論值257；實測值(MH+ )258。
D49之說明 3-(4-氰基-2H -吲唑-2-基)丙酸乙酯與3-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯之混合物 (D49)
取3-溴丙酸乙酯(1.808 g, 9.99 mmol)、1H -吲唑-4-甲腈(0.715 g, 4.99 mmol)與碳酸銫(4.88 g, 14.98 mmol)之N ,N -二甲基甲醯胺(DMF)(10 ml)混合物攪拌，於80℃下加熱2小時，冷卻，以乙酸乙酯(40ml)與水(40ml)稀釋，以3x15ml水洗滌有機相，脫水(硫酸鎂)，蒸發與經急驟層析法，以3:7乙酸乙酯/己烷溶離純化，產生1.19g無色油狀物，會慢慢結晶成白色固體。NMR與LC/MS顯示其係異構物之～3:1混合物。MS(ES):C13 H13 N3 O2 理論值243，實測值(MH+ )244。
D50與D51之說明 4-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丁酸乙酯(D50)與4-(5-氰基-2H -吲唑-2-基)丁酸乙酯(D51)
在含1H -吲唑-5-甲腈(D1) (1.93 g, 13.59 mmol)之DMF(45 ml)溶液中依序添加碳酸銫(9.1 g, 27.9 mmol)與4-溴丁酸乙酯(2.92 ml, 20.4 mmol)。反應於80℃下加熱6小時。真空排除大部份DMF。所得產物分溶於乙酸乙酯與水之間，有機相經鹽水洗滌，脫水與蒸發，產生4 g膠狀物。粗產物經急驟層析法，使用1:4 EtOAc之己烷溶液溶離純化。單離溶離速度最快之點，產生RD107973-39B1，經判別為4-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丁酸乙酯(D50) 。δH(d6 -DMSO)1.13(3H, t), 2.04-2.13(2H, m), 2.29(2H, t), 3.99(2H, q), 4.51(2H, t), 7.74(1H, dd), 7.88(1H, d), 8.28(1H, d), 8.41-8.44(1H, m)。MS(ES):C14 H15 N3 O2 理論值257，實測值(MH+ )258。
單離溶離速度較慢之點，產生標題化合物。δH(d6 -DMSO)1.15(3H, t), 2.15-2.22(2H, m), 2.31(2H, t), 4.01(2H, q), 4.49-4.55(2H, m), 7.48(1H, dd), 7.78(1H, dd), 8.43-8.44(1H, m), 8.67(1H, d)。C14 H15 N3 O2 理論值257，實測值(MH+ )258。
D52之說明 3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)
取3-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47) (1g, 4.11 mmol)溶於乙醇(30 ml)，添加碳酸氫鈉(1.73 g, 20.55 mmol)與羥胺鹽酸鹽(571 mg, 8.22 mmol)。反應於50℃下加熱一夜後，使之冷卻。反應混合物過濾，殘質經乙醇洗滌。濾液真空蒸發至乾。所得標題化合物粗產物(1.06 g)即可用於下一個反應。
D52之說明(替代製法) 3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)
取3-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47) (1 g, 4.11 mmol)溶於乙醇(30 ml)，添加碳酸氫鈉(1.73 g, 20.88 mmol)與羥胺鹽酸鹽(571 mg, 8.22 mmol)。反應靜置於室溫下一夜後，加熱至50℃ 4小時後，冷卻一夜。反應混合物過濾， 殘質經乙醇洗滌。真空蒸發乙醇濾液至乾後，與醚磨製，產生標題化合物(764 mg)之白色固體，純度約90%。MS(ES):C13 H16 N4 O3 理論值276；實測值(MH+ )277。
D52之說明(替代製法) 3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)
取3-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47) (3.84 g, 15.8 mmol)溶於乙醇(100 ml)，依序添加碳酸氫鈉(6.6 g, 79 mmol)與羥胺鹽酸鹽(3.3 g, 47.4 mmol)。反應加熱至50℃共11小時後，冷卻一夜。反應過濾，殘質經乙醇洗滌，濾液真空蒸發至乾。所得固體與醚磨製，產生標題化合物(3.79 g)之白色固體。MS(ES):C13 H16 N4 O3 理論值276；實測值(MH+ )277。
D52之說明(替代製法) 3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)
取3-(5-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯D47 (3.6 g, 14.80 mmol)溶於乙醇(40 ml)，添加羥胺鹽酸鹽(2.057 g, 29.6 mmol)與碳酸氫鈉(6.22 g, 74.0 mmol)。混合物於60℃下加熱一夜，冷卻，過濾，蒸發濾液。溶於EtOAc，以水(3x20ml)洗滌，經硫酸鎂脫水，再蒸發一次，產生(1.75g)產物。再自旋轉蒸發器中回收0.290 g白色結晶。MS(ES+ ):C13 H16 N4 O3 理論值276；實測值(MH+ )277。
D53之說明 4-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丁酸乙酯(D53)
類似上述方法，由D50 RD107973-039B1製備此化合物。MS(ES):C14 H18 N4 O3 理論值290；實測值(MH+ )291。
D54之說明 4-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-2H -吲唑-2-基}丁酸乙酯(D54)
類似上述方法，由4-(5-氰基-2H -吲唑-2-基)丁酸乙酯(D51) 製備此化合物。MS(ES):C14 H18 N4 O3 理論值290；實測值(MH+ )291。
D55之說明 3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-2H -吲唑-2-基}丙酸乙酯與3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯之混合物(D55)
取含3-(4-氰基-2H -吲唑-2-基)丙酸乙酯與3-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯之混合物(D49) (1.2g, 4.938mmol)(樣本為1與2-異構物之～3:1混合物)、羥胺鹽酸鹽(0.686 g, 9.87 mmol)與碳酸氫鈉(2.072 g, 24.66 mmol)之乙醇(15 ml)混合物於50℃下加熱3小時。過濾固體，濾液蒸發至乾，產生(1.4g)無色油狀物。LCMS與NMR證實為異構物之 ～3:1混合物。MS(ES):C13 H16 N4 O3 理論值276；實測值(MH+ )277。
D56之說明 4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-2H -吲唑-2-基}丁酸乙酯與4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丁酸乙酯之混合物(D56)
取含4-(4-氰基-2H -吲唑-2-基)丁酸乙酯與4-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)丁酸乙酯之混合物(D48) (0.249 g, 0.968 mmol)(樣本為1與2-異構物之～3:2混合物)、羥胺鹽酸鹽(0.135 g, 1.936 mmol)與碳酸氫鈉(0.407g, 4.84mmol)之乙醇(5 ml)混合物攪拌及於80℃下加熱90分鐘後，以乙酸乙酯(30ml)/水(50ml)稀釋，有機相脫水(硫酸鎂)與蒸發，產生標題混合物(270mg)之無色膠狀物。LC/MS顯示其為含有少量雜質之異構物之3:2混合物。MS(ES):C14 H18 N4 O3 理論值290；實測值(MH+ )291。
D56之說明(替代製法) 4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-2H -吲唑-2-基}丁酸乙酯與4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丁酸乙酯之混合物(D56)
取含4-(4-氰基-2H -吲唑-2-基)丁酸乙酯與4-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)丁酸乙酯之混合物(D48) (4.7g, 9.13 mmol)(樣本為1與2-異構物之～2:1混合物)、羥胺鹽酸鹽(2.54 g, 36.5 mmol)與碳酸氫鈉(7.67g 91mmol)之乙醇(50 ml)懸浮液於50℃下加熱3小時，冷卻與蒸發，分溶於EtOAc/水之間。有機層脫水(硫酸鎂)，蒸發，與醚磨製，產生標題混合物(4g)之白色固體。NMR與LCMS顯示其為異構物之2:1混合物。MS(ES):C14 H18 N4 O3 理論值290；實測值(MH+)291。
D57之說明 3-(5-{5-[3-氯-4-(乙基氧)苯基]-1,2,4- 二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D57)
取3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52) (265 mg, 0.96 mmol)與3-氯-4-(乙基氧)苯甲酸(D7) (192 mg, 0.96 mmol)於DMF(5 ml)中，於80℃下共同攪拌，添加EDAC(203 mg)與HOBt(142 mg)。當判斷反應已完成時(由LCMS分析)，冷卻，反應混合物分溶於EtOAc與碳酸氫鈉水溶液之間。分離有機層，以水洗滌，脫水與蒸發，與乙醇磨製，產生粗產物。經急驟層析法純化(EtOAc/己烷1:3至1:1)，產生標題化合物(87 mg)之白色固體。MS(ES):C22 H21 35 ClN4 O4 理論值440，實測值(MH+ )441。
D58之說明 3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D58)
取3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52) (265 mg, 0.96 mmol)、3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(可依WO2005/58848之說明製備)(197 mg, 0.96 mmol)、EDAC(203 mg)與HOBt(142 mg)於DMF(5 ml)中，於80℃下攪拌2小時。於室溫下攪拌一個週末後，再於80℃下加熱4小時。反應混合物冷卻後，分溶於EtOAc與碳酸氫鈉之間。分離有機層，經鹽水洗滌，脫水與真空蒸發至乾。粗產物經急驟層析法純化，產生標題化合物(214 mg)之白色固體。MS(ES):C24 H23 N5 O4 理論值445；實測值(MH+ )446。
D58之說明(替代製法) 3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D58)
取含3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(可依WO2005/58848之說明製備)(371mg, 1.81mmol)、EDAC(547mg, 2.85mmol)與HOBt(437mg, 2.85mmol)之DMF(5ml)混合物靜置於室溫下10分鐘。添加3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52) (500mg, 1.81mmol)，於室溫下靜置一夜。添加EDAC(200mg, 1.04mmol)，靜置24小時。混合物於80℃下加熱2天，每夜均於室溫下靜置。混合物再於80℃下加熱4小時。添加EtOAc(50ml)，以水(60ml)、飽和NaHCO3 (60ml)與水(60ml)洗滌。取EtOAc層脫水(MgSO4 )，蒸發溶劑。與乙醇磨製，產生標題化合物(523mg)之米色固體。MS(ES):C24 H23 N5 O4 理論值445；實測值(MH+ )446。
D59之說明 3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4- 二 唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D59)
取4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯甲酸(D36) (100 mg, 0.4 mmol)溶於DMF(5 ml)後，添加EDAC(115 mg, 0.6 mmol)與HOBt(81 mg, 0.6 mmol)。攪拌混合物30分鐘後，添加3-{5-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52) (111 mg, 0.40 mmol)，反應於80℃下加熱一夜。再加EDAC(50 mg)，再加熱反應4小時。再加EDAC(20 mg)，加熱反應一夜。添加反應混合物至乙酸乙酯與碳酸氫鈉之混合物中，分離有機相，再以乙酸乙酯萃取水相。合併之有機相依序經水與鹽水洗滌，脫水與蒸發，產生粗產物。此產物經急驟層析法純化(SiO2 )，產生標題化合物(82 mg)。MS(ES):C24 H23 F3 N4 O4 理論值488；實測值(MH+ )489。
D60之說明 4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸乙酯(D60)
取含4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-2H -吲唑-2-基}丁酸乙酯與4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丁酸乙酯之混合物(D56) (0.27 g, 0.930 mmol)(係1與2-異構物之3:2混合物)、3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(D3) (0.200 g, 0.930 mmol)、EDC(0.196 g, 1.023 mmol)與HOBT(0.157 g, 1.023 mmol)之N ,N -二甲基甲醯胺(5 ml)於80℃下攪拌16小時後，於120℃下2小時。反應冷卻，以乙酸乙酯(40ml)與水(40ml)稀釋，有機相經3x15ml水洗滌，脫水(硫酸鎂)與蒸發。粗產物經急驟層析法，以3:7乙酸乙酯/己烷溶離純化，產生兩種產物，與1:1醚/己烷磨製，產生66 mg先溶離點與36 mg後溶離點。先溶離點為所需之1-經取代之吲唑。δH(CDCl3 , 400MHz):1.24(3H, t), 1.46(6H, d), 2.31(4H, m), 4.12(2H, q), 4.55(2H, t), 4.73(1H, m), 7.08(1H, d), 7.52(1H, dd), 7.62(1H, d), 8.07(1H, dd), 8.11(1H, dd), 8.29(1H, d), 8.70(1H, d)。
D60之說明(替代製法) 4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸乙酯(D60) N2665-84-A1
取含4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-2H -吲唑-2-基}丁酸乙酯與4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丁酸乙酯之混合物(D56) (4g, 13.78 mmol)、3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(D3) (2.96 g, 13.78 mmol)、EDC(2.91 g, 15.16 mmol)與HOBT(2.321 g, 15.16 mmol)之DMF(40 ml)溶液於室溫下攪拌3小時，形成中間物後，於120℃下加熱2小時進行環化。溶液冷卻，以EtOAc稀釋，以水洗滌3次，脫水(硫酸鎂)與蒸發。經急驟層析法，以EtOAc/異己烷1:3溶離純化。合併之溶離份蒸發，產生標題化合物(1.5g)之白色固體。MS(ES):C24 H25 35 ClN4 O4 理論值468；實測值(MH+ )469。δH(CDCl3 , 400MHz):1.24(3H, t), 1.46(6H, d), 2.31(4H, m), 4.12(2H, q), 4.55(2H, t), 4.73(1H, m), 7.08(1H, d), 7.52(1H, dd), 7.62(1H, d), 8.06(1H, dd), 8.10(1H, dd), 8.29(1H, d), 8.70(1H, d)。
D61之說明 3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D61)
取含3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-2H -吲唑-2-基}丙酸乙酯與3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯之混合物(D55) (700 mg, 1.27 mmol)(係1-與2-異構物之3:1混合物)、3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(D3) (0.544g, 2.53 mmol)、EDC(0.534 g, 2.79 mmol)與HOBT(0.427 g, 2.79 mmol)之N ,N -二甲基甲醯胺(10 ml)於120℃下加熱2小時，冷卻，以乙酸乙酯(60ml)稀釋，以水(3x20ml)洗滌。有機層脫水(MgSO4 )，蒸發與經急驟層析法，以EtOAc/己烷1:4溶離純化，產生標題化合物(380mg)之白色固體。δH(CDCl3 , 400MHz):1.17(3H, t), 1.46(6H, d), 3.02(2H, t), 4.10(2H, q), 4.70-4.77(3H, m), 7.08(1H, d), 7.53(1H, dd), 7.69(1H, d), 8.05-8.12(2H, m), 8.29(1H, d), 8.71(1H, d)。MS(ES):C23 H23 35 ClN4 O4 理論值454；實測值(MH+ )455。
下列化合物係類似前述實例之化學方法製備。有些例子中，先共同攪拌羧酸、EDAC與HOBt後，才添加偕胺肟。 有些例子中，先於室溫下攪拌反應混合物後，才加熱。除非本文中另有說明，否則反應均於80至120℃之溫度間，在DMF中進行。有些例子中，再添加EDAC與/或HOBt。在D91之 例子中，則再添加羧酸。產物係經急驟層析法、磨製法、MDAP、逆相層析法、使用乙醇使產物自反應混合物中沉澱析出或此等方法之組合等方法純化。
D96之說明 3-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D96)
添加1H -吲唑-4-甲腈(0.716 g, 5 mmol)、3-溴丙酸乙酯(1.276 ml, 10.00 mmol)與碳酸銫(4.90 g, 15.00 mmol)至N ,N -二甲基甲醯胺(DMF)(20 ml)，混合物加熱至90℃ 80分鐘。混合物冷卻後，以乙酸乙酯與水之混合物萃取。有機份經3x30ml水洗滌，脫水(MgSO4)，過濾，與蒸發。添加粗產物混合物至Biotage管柱上，以乙酸乙酯/石油醚1:3溶離，產生0.95g標題化合物。δH(CDCl3 , 400MHz)1.17(3H, t), 3.01(2H, t), 4.08(2H, q), 4.71(2H, t), 7.46(1H, dd), 7.54(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.21(1H, d)。
D97之說明 3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}丙酸乙酯(D97)
取3-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D96) (0.95 g, 3.91 mmol)、羥胺鹽酸鹽(1.086 g, 15.62 mmol)與碳酸氫鈉(3.28 g, 39.1 mmol)於乙醇(20 ml)中，在50℃下加熱3小時。過濾混合物，與蒸發，產生標題化合物(760 mg)之白色粉末MS(ES):C13 H16 N4 O3 理論值276；實測值(MH+ )277。
D98之說明 3-溴-2,2-二甲基丙酸乙酯(D98)
取3-溴-2,2-二甲基丙酸(可自Fluka藥廠取得商品)(1 g, 5.52 mmol)溶於亞硫醯氯(5 ml, 68.5 mmol)，所得混合物回流2h後，冷卻至室溫，與真空濃縮。殘質溶於乙醇(10 ml)，於室溫下攪拌30分鐘。真空排除大部份溶劑，殘質溶於EtOAc，以1MNaOH水溶液、鹽水洗滌2次，脫水與濃縮，產生標題化合物(0.939 g, 81%)之淺黃色油狀物，其未再純化即用於下一個步驟。
D99之說明 4-溴-2,2-二甲基丁酸乙酯(D99)
於室溫下，將溴化氫通入3,3-二甲基二氫-2(3H )-呋喃酮(1 g, 8.76 mmol)中約5h，所得混合物靜置於室溫下一夜。使氮氣通過混合物。酸粗產物溶於DCM(10 ml)，以草醯氯(2.3 ml, 26.3 mmol)與DMF(1滴)處理，所得混合物於室溫下攪拌一個週末後，真空濃縮。殘質經乙醇(10 ml)處理，所得混合物於室溫下攪拌1小時後，倒至水中。水相經***萃取，***溶液經鹽水洗滌，脫水與真空濃縮，產生標題化合物(949 mg, 49%)之極淺黃色油狀物，其未再純化即用於下一個步驟。
D100與D101之說明 3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D100)N6128-6-A4與3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D101)
取含5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑(D4) (122 mg, 0.344 mmol)之DMF(2 ml)經3- 溴-2,2-二甲基丙酸乙酯(D98) (79 mg, 0.378 mmol)與Cs2 CO3 (134 mg, 0.413 mmol)處理，所得混合物於80℃下攪拌一夜。再加3-溴-2,2-二甲基丙酸乙酯(D98) (29 mg, 0.4 mmol)與Cs2 CO3 (56 mg, 0.5 mmol)，所得混合物於80℃下攪拌6h後，冷卻至室溫，與真空濃縮。殘質溶於EtOAc，有機相依序以水與鹽水洗滌，脫水與真空濃縮。殘質經矽膠急驟層析法純化[乙酸乙酯/環己烷梯度]，產生3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D100) (92 mg, 55%)與3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D101) (49 mg, 30%)。MS(ES)C25 H27 ClN4 O4 理論值482，實測值483 [M+H]+ 。
D102之說明 3-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(D102)
取1H -吲唑-4-甲腈(來自Insight Chemical Solution Ltd.之商品)(500 mg, 3.49 mmol)、3-溴-2,2-二甲基丙酸乙酯(D98) (803 mg, 3.84 mmol)與Cs2 CO3 (1.36 g, 4.19 mmol)之 無水DMF(3 ml)加熱至80℃一夜後，再加熱7小時。反應混合物分溶於EtOAc與H2 O之間。分兩層，有機相再經H2 O、鹽水洗滌，脫水與濃縮成黃色油狀物。殘質經矽膠急驟層析法純化[乙酸乙酯/環己烷梯度]，產生標題化合物(356 mg, 37%)之結晶物質。MS(ES)C15 H17 N3 O2 理論值271，實測值272 [M+H]+
D102之說明(替代製法) 3-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(D102)
取含1H-吲唑-4-甲腈(來自Insight Chemical Solution Ltd.之商品)(298 mg, 1.957 mmol)之無水N,N-二甲基甲醯胺(DMF)(1 ml)，於氮蒙氣下經NaH(94 mg, 2.348 mmol)處理。添加含3-溴-2,2-二甲基丙酸乙酯(D98) (450 mg, 2.153 mmol)之DMF(2ml)溶液至深褐色混合物中。加熱反應混合物至80℃一夜後，真空濃縮。殘質溶於EtOAc，有機相依序經水與鹽水洗滌，脫水與濃縮，產生褐色膠狀物。殘質經矽膠急驟層析法純化[乙酸乙酯/環己烷梯度]，產生標題化合物(217 mg, 86%)之黃色油狀物。MS(ES)C15 H15 N3 O2 理論值 271，實測值272 [M+H]+
D103之說明 3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}-2,2-二甲基丙酸乙酯(D103)
取含3-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(D102) (348 mg, 1.28 mmol)、羥胺鹽酸鹽(1.087 g, 10.26 mmol)、NaHCO3 (1.078 g, 12.83 mmol)之MeOH(20 ml)於65℃下加熱24h後，於室溫下一個週末。混合物過濾，濃縮，以水處理，激烈攪拌10分鐘，過濾，與乾燥，產生無色固體，於45℃下真空乾燥一夜，產生標題化合物(373 mg, 90%)。MS(ES)C15 H20 N4 O3 理論值304，實測值305 [M+H]+
D104之說明 3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D104)
取含3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(D3) (245 mg, 1.143 mmol)、3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2,2-二甲基丙酸乙酯(D103) (348 mg, 1.143 mmol)之DMF(5 ml)，於室溫下依序經N -乙基-N -(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.240 ml, 1.372 mmol)與HATU(522 mg, 1.372 mmol)處理。所得混合物於室溫下攪拌1小時，於80℃下一夜後，再攪拌4小時。隨後冷卻至室溫與真空濃縮。殘質溶於EtOAc，依序以H2 O與鹽水洗滌有機相2次，脫水與真空濃縮。殘質經矽膠急驟層析法純化[乙酸乙酯/環己烷梯度]，產生標題化合物(233 mg, 39%)之乳色固體。MS(ES)C25 H27 ClN4 O4 理論值482，實測值483 [M+H]+
D105之說明 3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D105)
依序取5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸(D31) (70.9 mg, 0.329 mmol)、三乙胺(0.092 ml, 0.657 mmol)、HOBT(60.4 mg, 0.394 mmol)與EDC(76 mg, 0.394 mmol)及3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2,2-二甲基丙酸乙酯(D103) (100 mg, 0.329 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(DMF)(5 ml)中。所得混合物於50℃下攪拌一夜後，冷卻至室溫，於EtOAc中稀釋。有機相經H2 O洗滌，脫水與真空濃縮。殘質經矽膠急驟層析法純化[15-40% EtOAc/環己烷]，產生標題化合物(30 mg, 17%)之淡黃色固體。MS(ES)C24 H26 ClN5 O4 理論值483，實測值484 [M+H]+
D106之說明 3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲醯氯(D106)
添加草醯氯(0.224 ml, 2.56 mmol)至含3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲酸(其製法說明於WO2005/58848, 500 mg, 2.437 mmol)之DCM(10 ml)溶液中後，添加DMF(20μl)，所得混合物於室溫下攪拌2h。蒸發溶劑，產生標題化合物(545 mg, 100%)之橄欖綠固體，其未再純化即用於下一個步驟。
D107之說明 3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D107)
在含5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1,2,4-二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧]苯基氰(D43) (85 mg, 0.246 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(DMF)(5 ml)中添加3-溴-2,2-二甲基丙酸乙酯(D98) (103 mg, 0.492 mmol)與Cs2 CO3 (120 mg, 0.369 mmol)。所得混合物於80℃下攪拌48h後，冷卻至室溫，以EtOAc稀釋。有機相經水洗滌，經硫酸鎂脫水，與真空濃縮。殘質經矽膠急驟層析法純化[30-50% EtOAc/環己烯]，產生標題化合物(20 mg, 16%)之黃色固體。MS(ES) C26 H27 N5 O4 理論值473，實測值474 [M+H]+
D108之說明 4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸乙酯(D108)
標題化合物係類似3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D107) 之製程，但改用4-溴-2,2-二甲基丁酸乙酯(D99) 替代3-溴-2,2-二甲基丙酸乙酯(D98) 作為烷化劑，得到5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1,2,4-二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧]苯基氰(D43) ，產率31%(50 mg)。MS(ES)C25 H25 N5 O4 理論值459，實測值460 [M+H]+
D109之說明 3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D109)
取3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲醯氯(D106) (0.398 mmol)於乙腈(3.00 ml)中，於室溫下，依序經3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2,2-二甲基丙酸乙酯(D103) (101 mg, 0.332 mmol)與三乙胺(0.069 ml, 0.498 mmol)處理。所得黃色溶液於室溫下攪拌1h，回流一夜，再過24小時，再隔夜後，冷卻至室溫與真空濃縮。殘質經矽膠急驟層析法純化[乙酸乙酯/環己烷梯度]，產生標題化合物(107 mg, 68%)之無色固體。MS(ES)C26 H27 N5 O4 理論值473，實測值474 [M+H]+
D110之說明 5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑(D110)，N6043-42
取含5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸(D31) (350mg, 1.623mmol)、三乙胺(328mg, 452μl, 3.25mmol)、羥基苯并***水合物(298mg, 1.95mmol)、EDC(373mg, 1.95mmol)與N -羥基-1H -吲唑-5-羧亞胺醯胺(D2) (430mg, 2.43mmol)之DMF(5ml)混合物於50℃下攪拌4天。反應混合物冷卻至室溫，以EtOAc(25ml)稀釋。有機層經飽和NaHCO3 水溶液、水與鹽水依序洗滌。有機相脫水與真空濃縮，產生標題化合物(334 mg, 58%)之淺紅色固體，其未再純化即用於下一個步驟。MS(ES)C17 H14 ClN5 O2 理論值355，實測值356 [M+H]+
D111之說明 3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D111)
取含5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑(D110) (335mg, 0.94mmol)、3-溴-2,2-二甲基丙酸乙酯(D98) (197mg, 0.94mmol)與K2 CO3 (130mg, 0.94mmol)之DMF(5ml)混合物於80℃下攪拌48小時。反應混合物隨後冷卻至室溫，分溶於EtOAc與水(30ml 1:1)之間。分離有機相，經硫酸鎂脫水，與真空濃縮。殘質經矽 膠急驟層析法純化[20%乙酸乙酯/環己烷]，產生標題化合物(100 mg, 22%)之無色固體。MS(ES)C24 H26 ClN5 O4 理論值483，實測值484 [M+H]+
D112之說明 4-(4-溴-1H -吲唑-1-基)-2,2-二甲基丁酸乙酯(D112)
於室溫下，在含4-溴-1H -吲唑(來自Insight Chemical Solution Ltd.之商品，826 mg, 4.19 mmol)之DMF(10 ml)溶液中添加Cs2 CO3 (1.37 g, 4.19 mmol)與4-溴-2,2-二甲基丁酸乙酯(D99) (1.40 g, 6.29 mmol)，所得混合物於80℃下攪拌24h後，冷卻至室溫，以AcOEt稀釋。有機相經水洗滌，經硫酸鎂脫水，與真空濃縮。殘質經矽膠急驟層析法純化[15-25% EtOAc/環己烷]，產生標題化合物(600 mg, 40%)之橙色油狀物。MS(ES)C15 H19 81 BrN2 O2 理論值340，實測值341 [M+H]+
D113之說明 4-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)-2,2-二甲基丁酸乙酯(D113)，N6375-40
於室溫下，在含4-(4-溴-1H -吲唑-1-基)-2,2-二甲基丁酸乙酯(D112) (600 mg, 1.77 mmol)與Zn(CN)2 (207 mg, 1.77 mmol)之DMF(5 ml)溶液中添加Pd(PPh3 )4 (204 mg, 0.18 mmol)，所得混合物於100℃下攪拌一個週末，再加熱5小時後，冷卻至室溫，以AcOEt稀釋。有機相經寅氏鹽過濾，依序以水與鹽水洗滌，脫水與真空濃縮。殘質經矽膠急驟層析法純化[10-20% EtOAc/環己烷]，產生標題化合物(200 mg, 36%)之無色油狀物。MS(ES)C16 H19 N3 O2 理論值285，實測值286 [M+H]+ 。
D114之說明 4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}-2,2-二甲基丁酸乙酯(D114)
4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}-2,2-二甲基丁酸乙酯(D114) 係類似3-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}-2,2-二甲基丙酸乙酯(D103) 之合成法，由4-(4-氰基-1H -吲唑-1-基)-2,2-二甲基丁酸乙酯(D113) 製得200 mg，產率85%。MS(ES)C16 H22 N4 O3 理論值318，實測值319 [M+H]+ 。
D115之說明 4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸乙酯(D115)
4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑- 3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸乙酯(D115) 係類似5-[3-(1H -吲唑-5-基)-1,2,4-二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧]苯基氰(D43) 之替代製法，由3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯甲醯氯(D106) 與4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}-2,2-二甲基丁酸乙酯(D114) 製得120 mg，產率74%。MS(ES)C27 H29 N5 O4 理論值487，實測值48 [M+H]+ 。
D116之說明 4-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸乙酯(D116)
於室溫下，依序取5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶羧酸(D31) (67.7 mg, 0.314 mmol)、三乙胺(88 μl, 0.628 mmol)與HOBT(57.7 mg, 0.377 mmol)、EDC(72.3 mg, 0.377)與4-{4-[(羥胺基)(亞胺基)甲基]-1H -吲唑-1-基}-2,2-二甲基丁酸乙酯(D114) (100 mg, 0.314 mmol)溶於DMF(4 ml)後，於50℃下攪拌5天。混合物冷卻至室溫，以EtOAc稀釋。有機相經水洗滌，脫水與真空濃縮。殘質經矽膠急驟層析法純 化[15-40% EtOAc/環己烷]，產生標題化合物(110 mg, 67%)之淡黃色固體。MS(ES)C25 H28 ClN5 O4 理論值497，實測值498 [M+H]+ 。
實例1 3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸(E1)
取3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D5) (240 mg)溶於MeOH(5 ml)，以2 MNaOH水溶液(5 ml)處理，於RT下攪拌一夜，真空排除MeOH。隨後以1M NaOH水溶液稀釋反應混合物，以EtOAc(x 2)萃取，酸化至pH=3。以EtOAc(x 3)萃取此溶液，合併之萃液經鹽水洗滌，與蒸發，產生粗產物。使用MDAP系統純化，產生標題化合物(13 mg)之白色固體。δH(CDCl3 , 400MHz):1.44(6H, d), 3.03(2H, t), 4.68-4.75(3H, m), 7.05(1H, d), 7.60(1H, d), 8.06(1H, d), 8.11(1H, s), 8.15(1H, d), 8.24(1H, s), 8.56(1H, s)。MS(ES):C21 H19 35 ClN4 O4 理論值426；實測值427(MH+ )。
實例1(替代製法) 3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸(E1)
取3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D5) (1.95 g, 4.29 mmol)溶於乙醇。添加2M NaOH(2.143 ml, 4.29 mmol)，溶液於室溫下靜置3小時。蒸發乙醇，混合物溶於EtOAc與水中，以乙酸酸化。有機層脫水(MgSO4 )與蒸發，產生(1.34g)之白色固體。δH(d6 -DMSO, 400MHz):1.37(6H, d), 2.89(2H, t), 4.65(2H, t), 4.89(1H, m), 7.45(1H, d), 7.89(1H, d), 8.06(1H, d), 8.12(1H, d), 8.20(1H, s), 8.27(1H, s), 8.55(1H, s)。MS(ES):C21 H19 35 ClN4 O4 理論值426；實測值427(MH+ )。
實例2 3-(5-{5-[3-氯-4-(乙基氧)苯基]-1,2,4- 二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸鈉(E2)
取3-(5-{5-[3-氯-4-(乙基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D57) (77 mg, 0.17 mmol)懸浮於2M NaOH水溶液(2 ml)與乙醇(2 ml)中。混合物於50℃下加熱 至溶解後，冷卻。真空排除乙醇。過濾所得固體，以乙醇、水與***洗滌後，於高度真空下乾燥，產生標題化合物(63.6 mg)之粉紅色固體。δH(甲醇-d4 , 400MHz)1.49(3H, t), 2.77(2H, t), 4.25(2H, q), 4.71(2H, t), 7.27(1H, d), 7.82(1H, d), 8.09-8.25(4H, m), 8.55(1H, s)。MS(ES):C20 H17 35 ClN4 O4 理論值412；實測值(MH+ )413。
實例3 3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸鈉(E3)
取3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D58) (99 mg, 0.22 mmol)溶於乙醇(2 ml)，添加2M NaOH水溶液(0.55 ml)。反應於80℃下加熱30分鐘，使試劑溶解。反應混合物冷卻至室溫後，靜置一夜。過濾所得沉澱，依序以水與醚洗滌，於真空 下加熱乾燥，產生標題化合物(29.1 mg)。δH(甲醇-d4 , 400MHz)1.46(6H, d), 2.78,(2H, t), 4.71(2H, t), 4.88-5.00(估測為1H[部份重疊之水波峰],m).7.43(1H, d), 7.83(1H, d), 8.10-8.17(2H, m), 8.37-8.49(2H, m), 8.56(1H, s), MS(ES):C22 H19 N5 O4 理論值417；，實測值(MH+ )418。
實例4 3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸(E4)
取3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸乙酯D58) (523mg, 1.17mmol)在50℃下加溫溶於乙醇(20ml)與THF(10ml)之混合物中，冷卻至RT，添加2N NaOH(1ml, 2 mmol)，於室溫下靜置30分鐘。蒸發排除溶劑，加水(50ml)，以EtOAc(50ml)洗滌。 酸化水層，以EtOAc(50ml)萃取產物。EtOAc層經硫酸鎂脫水，蒸發溶劑。與***磨製，產生標題化合物(139mg)之米色固體。δH(d6 -DMSO, 400 MHz):1.39(6H, d), 2.90(2H, t), 4.66(2H, t), 4.94-5.03(1H, m), 7.57(1H, d), 7.90(1H, d), 8.07(1H, dd), 8.28(1H, d), 8.42(1H, dd), 8.54(2H, dd), 12.35(1H,寬s)。MS(ES):C22 H19 N5 O4 理論值417；實測值(MH+ )418。
實例5 4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸(E5)
取含4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸乙酯(D44) (73 mg, 0.16 mmol)、33%二甲基胺之乙醇(4 ml)於微波爐中，在160℃下加熱1小時。添加2滴水後，於微波爐中，在160℃下加熱3小時。反應冷卻一夜後，真空蒸發至乾。曾試圖進行MDAP純化所產生之粗產物。
在含4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸乙酯(D44) (65 mg, 0.14 mmol)之乙醇(10 ml)溶液中添加2M NaOH水溶液(1 ml)。於80℃下加熱1小時後，於室溫下靜置一夜。蒸發溶劑，粗產物經MDAP純化。所得產物與醚及水磨製，產生粗產物。
合併粗產物，經MDAP純化，取含產物之溶離份冷凍乾燥，產生標題化合物(11.1 mg)。δH(d6 -DMSO, 400MHz)1.39(6H, d), 2.01-2.11(2H, m), 2.23(2H, t), 4.50(2H, t), 4.98(1H, sept), 7.56(1H, d), 7.86(1H, d), 8.07(1H, dd), 8.28(1H, d), 8.42(1H, dd), 8.52(1H, d), 8.57(1H, dd)。MS(ES):C23 H21 N5 O4 理論值431；實測值(MH+ )432。
實例6 3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4- 二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸(E6)
取3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸乙酯(D59) (82 mg, 0.17 mmol)溶於乙醇(4 ml)後，添加2M NaOH水溶液(0.5 ml)。於室溫下攪拌反應一夜後，真空蒸發乙醇。添加乙酸 乙酯，但由於化合物似乎同時進入水層與有機層，因此蒸發混合物。經MDAP純化(分兩批)後，冷凍乾燥，產生標題化合物(28.7 mg)。δH(400MHz, d6 -DMSO)1.36(6H, d), 2.88(2H, t), 4.65(2H, t), 4.98(1H, sept.), 7.59(1H, d), 7.89(1H, d), 8.07(1H, dd), 8.27(1H, d), 8.32(1H, d), 8.41(1H, dd), 8.57(1H, dd)。MS(ES):C22 H19 F3 N4 O4 理論值460；實測值(MH+ )461。
實例7 4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸(E7)
添加2M氫氧化鈉(1 ml, 2 mmol)至含4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸乙酯(D60) (N2666-13-A1)(0.062 g, 0.132 mmol)之乙醇(5 ml)溶液中，加熱反應至80℃，使其溶解後，靜置冷卻2小時。蒸發，溶於乙酸乙酯/水(各25ml)，以乙酸酸化。有機相脫水(硫酸鎂)，蒸發，與15ml甲苯共沸，與醚磨製，過濾，產生標題化合物(42mg)之白色固體。δH(d6 -DMSO, 400MHz):1.37(6H, d), 2.09(2H, m), 2.24(2H, t), 4.54(2H, t), 4.90(1H, m), 7.47(1H, d), 7.62(1H, dd), 7.97(1H, d), 8.01(1H, d), 8.17(1H, dd), 8.26(1H, d), 8.56(1H, s)。MS(ES):C22 H21 35 ClN4 O4 理論值440；實測值(MH+ )441。
實例7(替代製法) 4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸(E7)
取含4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸乙酯(D60) (1.5 g, 3.20 mmol)之熱乙醇(15 ml)溶液經氫氧化鈉(7.5 ml, 15.00 mmol)處理，靜置1h。蒸發溶劑，殘質分溶於乙酸乙酯/水之間，添加乙酸調整pH至5，分層。有機層經硫酸鎂脫水，與蒸發。粗產物與醚磨製，產生標題化合物(1.1g)之白色固體。δH(d6 -DMSO, 400MHz):1.37(6H, d), 2.08(2H, m), 2.23(2H, t), 4.54(2H, t), 4.90(1H, m), 7.47(1H, d), 7.62(1H, dd), 7.97(1H, d), 8.01(1H, d), 8.17(1H, dd), 8.26(1H, d), 8.56(1H, s)。MS(ES):C22 H21 35 ClN4 O4 理論值440；實測值(MH+ )441。
實例8 3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)- 1H -吲唑-1-基]丙酸(E8)
取3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1 H -吲唑-1-基]丙酸乙酯(D61) (380 mg, 0.835 mmol)溶於熱乙醇(4 ml)，添加2M氫氧化鈉(2 ml, 4.00 mmol)，攪拌溶液30分鐘。有沉澱形成。蒸發乙醇，殘質分溶於EtOAc/水之間。以AcOH中和水層，分層。有機層經硫酸鎂脫水，與蒸發。粗產物與醚磨製，產生(240 mg)白色固體。δH(d6 -DMSO)1.36(6H, d), 2.90(2H, t), 4.68(2H, t), 4.89(1H, m), 7.46(1H, d), 7.59(1H, t), 7.99(2H, d), 8.16(1H, dd), 8.25(1H, d), 8.55(1H, s), 11.90(1H, br. s)。MS(ES):C21 H19 35 ClN4 O4 理論值426；實測值(MH+ )427。
下列實例係依類似水解反應製備。除非本文中另有說明，否則該等反應均在室溫至80℃之溫度間進行。反應溶劑為乙醇與2M NaOH(水溶液)之混合物。有些例子中，會添加其他溶劑(如：DCM)促進溶解。有些例子中，會在操作製 程中改用其他溶劑(如：DCM)替代EtOAc。有些例子中，酸化反應混合物(使用乙酸或鹽酸)，產生羧酸，而其他例子中，單離出產物之鈉鹽。有些例子中，蒸發部份反應溶劑，使產物沉澱，並可過濾單離出此產物。或者，有時候可單離出羧酸後，經氫氧化鈉處理，轉化成鈉鹽。E23、E24 之例子中，於操作中使用鹽酸酸化反應，產生鹽酸鹽。該化合物係經MDAP或磨製法純化。有時候採用冷凍乾燥法，產生固體產物。
實例42 4-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸(E42)
取4-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸乙酯(D63) (127 mg, 0.27 mmol)溶於乙醇(5 ml)後，添加氫氧化鈉(11 mg)。反應混合物於微波反應器中，在100℃下加熱1小時後，使之冷卻。過濾分離所得固體後，以丙酮洗滌。經MDAP純化後，冷凍乾燥所得物質，產生標題化合物(38.1 mg)。MS(ES):C22 H21 35 ClN4 O4 理論值440；實測值(MH+ )441。
下列實例係類似上述方法製備。
實例44 4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸(E44)
添加4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸乙酯(D45) (60 mg, 0.13 mmol)至二甲胺之乙醇溶液(4 ml)中後，添加幾滴水。於微波反應器中加熱混合物至160℃4小時後，靜置冷卻。真空排除溶劑，粗產物經MDAP純化，產生標題化合物(28.3 mg)之白色固體。MS(ES):C23 H21 N5 O4 理論值431；實測值(MH+ )432。
實例45 3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸(E45)
於室溫下，在含3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D100) (85 mg, 176 mmol)之THF(2 ml)溶液中添加NaOH(2N水溶液，440μl, 880 mmol)，所得混合物於50℃下攪拌一夜。添加NaOH(2N水溶液，440μl, 880 mmol)與THF(2 ml)，所得混合物於80℃下攪拌兩夜，隨後冷卻至室溫。真空排除大部份THF，酸化所得水相至pH 3。濾出所 形成之沉澱，以H2 O洗滌後，於60℃下真空乾燥，產生標題化合物(73 mg, 91%)之白色固體。MS(ES):C23 H23 ClN4 O4 理論值454；實測值(MH+ )455。
下列實例係類似實例45(E45) 說明之製法，使用EtOH替代THF作為有機溶劑製備：
實例48 3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸(E48)
取3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D105) (50 mg, 0.103 mmol)溶於乙醇(10 ml)。添加氫氧化鈉(2N水溶液，0.258 ml, 0.517 mmol)，所得混合物於60℃下攪拌一夜後，冷卻至室溫。蒸發溶劑後，加水稀釋殘質。以2N HCl水溶液中和水相後，以EtOAc萃取。以水洗滌有機相，經硫酸鎂脫水，與真空濃縮，產生標題化合物(22 mg, 42%)之灰白色固體。MS(ES):C22 H22 ClN5 O4 理論值455；實測值(MH+ )456。
實例49 3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸(E49)
取3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D107) (50 mg, 0.106 mmol)溶於乙醇(10 ml)。添加氫氧化鈉(2N水溶液，0.264 ml, 0.528 mmol)，所得混合物於室溫下攪拌2h。真空排除大部份溶劑，殘質加水稀釋。以2N HCl水溶液中和水相後，以EtOAc萃取。以水洗滌有機相，經硫酸鎂脫水，與真空濃縮，產生標題化合物(15 mg, 30%)之淡黃色固體。MS(ES):C23 H24 N5 O4 理論值445；實測值(MH+ )446。
實例50 4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸(E50)
標題化合物(E50) 係類似實例49(E49) 之製法，由4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸乙酯(D108) 製得(16 mg, 32%)。MS(ES):C25 H25 N5 O4 理論值459；實測值(MH+ )460。
實例51 3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸(E51)
取含3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D109) (100mg, 0.21mmol)之乙醇(2ml)溶液經2M氫氧化鈉水溶液(1ml，大量過量)處理，於80℃下加熱2小時。反應混合物冷卻，真空排除大部份乙醇。殘質加水(3ml)稀釋，以濃HCl水溶液酸化，以EtOAc(3x10ml)萃取。合併之萃液脫水與真空濃縮。殘質經MDAP純化，產生所需產物(5 mg, 5%)之無色固體。MS(ES)C24 H23 N5 O4 理論值445；實測值(MH+ )446。
實例52 3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4- 二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸(E52)
取含3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸乙酯(D111) (100mg, 0.21mmol)之乙醇(2ml)溶液經2M氫氧化鈉水溶液(1ml)處理，於80℃下攪拌加熱4小時。反應混合物冷卻至室溫，加水(5ml)稀釋。水溶液經冰醋酸酸化，以EtOAc(2x10ml)萃取。合併之有機相經硫酸鎂脫水，與真空濃縮。殘質經MDAP純化，產生所需產物(3 mg, 3%)之無色固體。MS(ES):C22 H22 ClN5 O4 理論值455；實測值(MH+ )456。
下列實例係類似實例48(E48) 說明之方法製備。
S1P1 GTPγS結合性分析法
取穩定表現S1P1受體之大鼠嗜鹼性白血病細胞(RBL)生長至80%匯集度後，集中至10ml磷酸鹽緩衝之生理食鹽水(PBS)中，於1200rpm下離心5分鐘。排除上清液後，取離心塊再懸浮於20倍體積之分析緩衝液(20mM HEPES pH 7.4、100mM NaCl、10mM MgCl2 .6H2 O、10μM GDP、皂角苷10μg/ml)均質化。取膜懸浮液再於20,000rpm下離心20分鐘，再均質化一次及再離心一次。第二次離心後，離心塊再懸浮於適當體積(各燒瓶細胞使用1ml)，分析蛋白質濃度。
取S1P之濃縮母液先經音波處理後，由10-5 M濃度開始製備一系列稀釋液。取稀釋後之膜(10μg/孔)於96個深孔分析板中，與多種不同S1P濃度及0.3nM35 S-GTPγS(NEN；比活性為1250 Ci/mmol)培養。於30℃下進行結合45分鐘，採用Packard Universal Harvester收集器，在GF/B過濾板上收集膜，中止反應。分析板乾燥45分鐘 後，在各孔中添加50μl Microscint 0，並於Topcount NXT計數器(Perkin Elmer)上測定結合性。採用Graphpad Prism 4分析數據，以高於底線值之刺激百分比表示。EC50值之定義為產生50%最大刺激度時所需之促效劑濃度。
本發明實例1於此GTPγS結合性分析法中之pEC50>6。
S1P1 GTPγS結合性分法(替代方法)
製備膜之所有步驟均在4℃下進行。取穩定表現人類S1P1受體之大鼠肝細胞瘤細胞或穩定表現人類S1P3受體之大鼠嗜鹼性白血病細胞(RBL)生長至80%匯集度後，集中至10ml磷酸鹽緩衝之生理食鹽水(PBS)中，於1200rpm下離心5分鐘。排除上清液後，取離心塊再懸浮於200ml緩衝液(50mM HEPES、1mM抗纖維蛋白溶酶肽、25μg/ml制菌肽、1mM EDTA、1mM PMSF、2μM胃蛋白酶抑制素A)，在Waring玻璃攪拌器中，均質化細胞15秒2次。在第一次均質化後，將攪拌器置入冰中5分鐘，最後一次均質化後，置入冰中10-40分鐘，以使泡沫消散。產物再於500g下離心20分鐘，上清液於48,000g下離心36分鐘。取離心塊再懸浮於上述相同緩衝液中，但其中不含PMSF與胃蛋白酶抑制素A，再強迫產物通過0.6mm針頭，補充至所需體積(通常為原始細胞離心塊之4倍體積)，分成等份，冷凍保存在-80℃下。
取人類S1P1大鼠肝細胞瘤膜(1.578g/孔)附著在含於分 析緩衝液(HEPES 20mM、MgCl2 10mM、NaCl 100mM，使用KOH 5M調整至與pH 7，亦添加GDP 10μM FAC(最終分析濃度)與皂角苷90μg/ml FAC)中之塗佈小麥胚芽凝集素(WGA)-之閃爍近似分析法(SPA)珠粒(0.125mg/孔)上。
於冰上預偶合30分鐘後，取珠粒與膜懸浮液分配至含0.1μl化合物之白色Greiner聚丙烯LV384-孔分析板(5μl/孔)中。然後添加以分析緩衝液補充至5μl/孔之[35 S]-GTPγS(0.5nM最終放射配位體濃度)至促效劑分析板中。最終分析混合液(10.1μl)再於1000rpm下離心5分鐘後，立即於Viewlux讀數機上讀取數據。
所有試驗化合物均溶於DMSO，濃度為10mM，係於100%DMSO中，使用1:4之稀釋步驟製成11個點之劑量效應曲線。取稀釋液移至分析板上，確保所有分析板之間之DMSO濃度保持恆定。
各分析板上之所有數據均經16個高對照組孔與16個低對照組孔之平均值標準化。然後採用四參數擬合曲線。
本發明實例1至52於本分析法中之pEC50>5。
S1P3 GTPγS結合性分析
取來自大鼠嗜鹼性白血病細胞之S1P3膜(RBL-2H3)(1.5μg/孔)附著在含於分析緩衝液(HEPES 20mM、MgCl2 3mM、NaCl 100mM，且使用KOH 5M調整至與pH 7，亦添加GDP 10μM FAC與皂角苷90μg/ml FAC)之塗佈WGA之SPA珠粒(0.125mg/孔)上。
於冰上預偶合30分鐘後，取珠粒與膜懸浮液分配至含0.1μl化合物之白色Greiner聚丙烯LV384-孔分析板(5μl/孔)中。然後添加以分析緩衝液補充至5μl/孔之[35 S]-GTPγS(0.5nM最終放射配位體濃度)至促效劑分析板中。最終分析混合液(10.1μl)再於1000rpm下離心5分鐘後，立即於Viewlux讀數機上讀取數據。
所有試驗化合物均溶於DMSO，濃度為10mM，係於100%DMSO中，使用1:4之稀釋步驟製成11個點之劑量效應曲線。取稀釋液移至分析板上，確保所有分析板之間之DMSO濃度保持恆定。
各分析板上之所有數據均經16個高對照組孔與16個低對照組孔之平均值標準化。然後採用四參數擬合曲線。
本發明實例1至46與52於本分析法中之pEC50<6.5，許多試驗實例於本分析法中之pEC50<5。
酵母結合性分析法
表現人類S1P1受體之釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae )細胞之製法為取表現節段整合至MMY23菌株酵母之ura3 染色體位置。此節段包括編碼人類S1P1受體之DNA序列，其S1P1之5'末端側接酵母GPD發動子且S1P1之3'末端側接酵母轉錄終止序列。MMY23表現酵母/哺乳動物嵌合G-蛋白質α亞單位，其中Gpa1之C-末端5個胺基酸被人類Gαi1/2之C-末端5個胺基酸置換(其說明於Brown等人(2000),Yeast 16 :11-22)。細胞於30℃之不含尿嘧 啶、色胺酸、腺嘌呤與白胺酸之液態合成性完全(Synthetic Complete)(SC)酵母培養基(Guthrie與Fink(1991),酵素學方法(Methods in Enzymology), Vol. 194)中生長至後對數期(約6 OD600 /ml)。
取促效劑於DMSO中製成10 mM溶液。使用於DMSO稀釋4倍之稀釋液(BiomekFX, Beckman)預估EC50 值(達成50%最高效應時所需濃度)。取促效劑之DMSO溶液(1%最終分析體積)移至來自Greiner公司之黑色微滴定板(384孔)中。細胞懸浮於不含組胺酸、尿嘧啶、色胺酸、腺嘌呤與白胺酸且補充0.1mM 3-胺基***之0.1M磷酸鈉pH 7.0，與10μM螢光素二-β-D-吡喃葡糖苷(FDGlu)之SC培養基中，密度0.2 OD600 /ml。添加此混合物(每孔50ul)至分析板(Multidrop 384, Lab Systems)內之促效劑中。於30℃下培養24小時後，採用螢光微滴定板讀數機(Tecan Spectrofluor或LJL Analyst激發波長：485nm；發射波長：535nm)測定由FDGlu受到外切葡聚糖酶(係一種由酵母在促效劑刺激生長期間內因性產生之酵素)降解產生之螢光素。由螢光相對化合物濃度作圖，採用四參數擬合法反覆進行曲線擬合，產生濃度效應值。由下列公式計算效力(Emax )Emax =Max[化合物X] -Min[化合物X] /Max[S1P] -Min[S1P] x100%
其中Max[化合物X] 與Min[化合物X] 分別為來自化合物X之濃度效應曲線之擬合最大值與最小值，Max[S1P] 與Min[S1P] 分別 為神經鞘胺醇-1-磷酸酯(來自Sigma藥廠)之濃度效應曲線之擬合最大值與最小值。由下列公式計算等效莫耳比例(EMR)值EMR=EC50[化合物X] /EC50[S1P]
其中EC50[化合物X] 為化合物X之EC50 ，及EC50[S1P] 為S1P之EC50 。
本分析法所測試本發明實例化合物之pEC50>5。

Claims (12)

  1. 一種式(I)化合物或其鹽： 其中R5 與R6 中之一為氫或R2 ，且另一個為(a)， R3 與R4 中之一為(b)，且另一個為氫， A 為苯基或5或6-員雜芳基環，當雜芳基代表5員基團時，其包含選自：O、N或S之雜原子，且可視需要另包含1至3個氮原子，當雜芳基代表6-員基團時，其包含1至3個氮原子；R1 為氫或至多3個分別獨立選自下列之取代基：鹵素、C(1-4) 烷基、C(1-4) 烷氧基、C(5-7) 環烷基、C(5-7) 環烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基、氰基、苯基、5或6員雜芳基環、哌啶基與吡咯啶基； R2 為氫或至多3個分別獨立選自下列之取代基：鹵素、C(1-4) 烷基、C(1-4) 烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基與氰基；R7 為氫或鹵素；Z 為C(1-4) 烷基，其可視需要穿插一個N或O，且可視需要於碳上經至多四個分別獨立選自：鹵素、甲基與羥基之取代基取代，但其限制條件為沒有碳原子經兩個羥基取代。
  2. 一種式(IA)化合物或其鹽： 其中R2 、R5 、R6 、R7 與Z如申請專利範圍第1項之定義。
  3. 一種式(IB)化合物或其鹽： 其中R2 、R5 、R6 、R7 與Z如申請專利範圍第1項之定義。
  4. 根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中A 為可視需要經取代之噻吩、吡啶基或苯基；及R1 為兩個分別獨立選自下列之取代基：氫、氯、溴、異丙 氧基、丙氧基、甲氧基、1-甲基丙氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、環己基、哌啶、吡咯啶基、乙基、2-甲基丙基、苯基與環戊氧基；及R2 為氫；及R7 為氫；及Z 為伸乙基或伸丙基，其可視需要在同一碳上經二甲基取代。
  5. 一種選自下列之化合物：3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(乙基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(丙基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲 唑-1-基)丙酸3-[5-(5-{3-氯-4-[(三氟甲基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-(5-{5-[4-環己基-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-(5-{5-[4-(甲基氧)-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]乙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(甲基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-(5-{5-[3-乙基-4-(1-哌啶基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-{5-[5-(4-環己基-3-乙基苯基)-1,2,4-二唑-3-基]-1H -吲唑-1-基}丙酸3-(5-{5-[3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸3-[5-(5-{3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(2-甲基丙基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸4-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸3-{5-[5-(2-氰基-4-聯苯基)-1,2,4-二唑-3-基]-1H -吲唑-1- 基}丙酸3-(5-{5-[3-氯-4-(1-吡咯啶基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸4-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸鹽酸鹽4-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸鹽酸鹽4-(5-{5-[2-(三氟甲基)-4-聯苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-(5-{5-[2-(三氟甲基)-4-聯苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-2H -吲唑-2-基)丁酸3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丙酸3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丙酸3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丙酸4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸4-(4-{5-[3-乙基-4-(1-哌啶基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-(4-{5-[2-(三氟甲基)-4-聯苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-[4-(5-{3-氯-4-[(三氟甲基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)- 1H -吲唑-1-基]丁酸3-(4-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧]-3-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸4-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸4-(4-{5-[4-苯基-5-(三氟甲基)-2-噻吩基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸3-{5-[5-(3-氰基-4-{[(1S )-1-甲基丙基]氧}苯基)-1,2,4-二唑-3-基]-1H -吲唑-1-基}丙酸鈉鹽3-{5-[5-(3-氰基-4-{[(1R )-1-甲基丙基]氧}苯基)-1,2,4-二唑-3-基]-1H -吲唑-1-基}丙酸鈉鹽3-(5-{5-[3-氰基-4-(環戊基氧)苯基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丙酸4-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]丁酸4-(5-{5-[4-苯基-5-(三氟甲基)-2-噻吩基]-1,2,4-二唑-3-基}-1H -吲唑-1-基)丁酸4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-2H -吲唑-2-基]丁酸3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3- 基)-2H -吲唑-2-基]-2,2-二甲基丙酸3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丙酸4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧]苯基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸4-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧]-3-吡啶基}-1,2,4-二唑-3-基)-1H -吲唑-1-基]-2,2-二甲基丁酸或其鹽。
  6. 一種以根據申請專利範圍第1至5項中任一項之化合物於製造用於治療S1P1受體所媒介病症或病變之藥物之用途，其中該病症或病變為多發性硬化、自體免疫疾病、慢性發炎病變、氣喘、發炎神經病變、關節炎、移植、克隆氏症(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、缺血-再灌流傷害、固體腫瘤與腫瘤轉移、與血管新生有關之 疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒疾病、發炎腸部病症、胰島素與非胰島素依賴型糖尿病。
  7. 根據申請專利範圍第6項之用途，其中該病症或病變為多發性硬化。
  8. 一種醫藥組合物，其包含根據申請專利範圍第1至5項中任一項之化合物。
  9. 一種製備根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物之方法。
  10. 一種用於治療哺乳動物(包括人類)之經由S1P1受體所媒介病症或病變之醫藥組合物，其包含醫療上安全且有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。
  11. 根據申請專利範圍第10項之醫藥組合物，其中該病症或病變為多發性硬化、自體免疫疾病、慢性發炎病變、氣喘、發炎神經病變、關節炎、移植、克隆氏症(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、缺血-再灌流傷害、固體腫瘤與腫瘤轉移、與血管新生有關之疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒疾病、發炎腸部病症、胰島素與非胰島素依賴型糖尿病。
  12. 根據申請專利範圍第10或11項之醫藥組合物，其中該病症或病變為多發性硬化。
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