TWI331529B - - Google Patents

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1331529 玖、發明說明 發明所屬之技術領域： 本發明涉及一種來源於肉蓰蓉屬植物的含有苯乙醇苷 的製劑及其製備方法，和在抗老年癡呆、抑制血小板聚集 的應用。 先前技術： 隨著世界人口老齡化的日益嚴重，與衰老有關的許多 疾病如老年癡呆症等已成爲當今社會嚴重威脅老年人身體 健康的因素，由於致病機理複雜，目前尙未找到針對該病 的具有顯著療效的藥物。基於肉蓰蓉長期以來作爲傳統補 腎、壯陽、強精藥用於臨床，因此成爲被深入硏究的物件。 中藥肉蓰蓉//erh 爲列當科肉蓰蓉屬多年生寄 生草本植物，主産於中國西北各省，藥用其肉質莖，具有 補腎陽、益精血、潤腸通便之功效，主治男子陽痿 '女子 ***、血枯便秘等症，有“沙漠人參”之美譽。其中管花 肉蓰蓉爲肉蓰蓉屬中産量最大的一種。 從八十年代初，日本學者開始系統硏究肉蓰蓉屬植物 的化學成分和藥理活性，發現苯乙醇苷類化合物是肉蓰蓉 屬植物的主要活性成分，具有抗氧化、促進物質代謝、改 善學習記億、增強性功能等作用，並對多種單體苯乙醇苷 類化合物進 f了了深入硏究（Sato T，et al. Yakugaku Zasshi， 1 985, 105(12): 1 1 3 1 )，有關這方面的硏究還有大量文獻報 道（Jimenez C，et al. Nat Prod Rep, 1994，11(6): 591; 6 1331529

Cometa F, et al. Fitoterapia，1993，64(3): 195.)。 發明內容： 本案發明人在對肉蓰蓉屬進行十多年硏究的基礎上， 發現在該屬植物中管花肉蓰蓉的苯乙醇苷類化合物含量最 高，並提出了一種從管花肉蓰蓉提取苯乙醇苷類化合物的 新穎工藝，製備出含有苯乙醇苷的製劑，經過大量藥理試 驗，發現該製劑具有明顯的增強記憶力、抑制血栓、抑制 血小板聚集形成等作用。 本發明的目的之一是提供一種來源於管花肉蓰蓉的含 有苯乙醇苷的製劑；本發明的目的之二是提供從管花肉蓰 蓉獲得一含有苯乙醇苷的製劑的製備工藝；本發明的目的 之三是提供抗老年癡呆的醫藥組合物。本發明的另一目的 是提供抑制血小板聚集的醫藥組合物。 爲達成上述本發明目的，依照本發明內容完成的一種 從管花肉蓰蓉獲得的含有苯乙醇苷的製劑，包含10-70%松 果菊苷（echinacoside)及 1_4〇% 類葉升麻苷（acteoside)，以 該製劑的重量爲基準。 優選的，本發明的製劑包含25-70%松果菊苷 (echinacoside)及 5-40%類葉升麻苷（acteoside)，以該製劑 的重量爲基準。 優選的，本發明的製劑從管花肉蓰蓉的肉質莖製備。 優選的，本發明的製劑進一步包含2f-乙醯基類葉升麻 音（2,-acetylacteoside)、campneoside I、campneoside II、 7 1331529 管花肉薇蓉苷 A(cistantubuloside A)、Βι、B2、Ci、C2、 crenatoside、去咖啡醯基類葉升麻苷

(decaffeoylacteoside)、異類葉升麻苷（isoacteoside)、紅 景天苷（rhodioloside)、syringalide A 3 ’-α-L-rhamnopyranoside 和管花音 A(tubulosideA)，它們 於該製劑的含量均低於5%，以該製劑的重量爲基準。 本發明提供一種從管花肉蓰蓉製備一含有苯乙醇苷的 製劑的方法，包含下列步驟： · a) 將管花肉蓰蓉的地下部分以一第一極性溶劑加予 萃取； b) 將步驟a)獲得的萃取物加到裝有疏水大孔隙聚合 物的柱中，使得苯乙醇苷吸附在聚合物上； c) 用第二極性溶劑作爲流動相流洗液洗脫該柱以除 去游離的化合物，而實質上大部份的苯乙醇苷仍然吸附在 聚合物上；以及 d) 用第三極性溶劑將苯乙醇苷從聚合物上洗脫下 來，得到含有苯乙醇苷的洗脫液，該第三極性溶劑與第二 © 極性溶劑相比極性較低。 優選的，本發明的製備方法的步驟a)的管花肉蓰蓉的 地下部分爲其肉質莖。 優選的，本發明製備方法的步驟a)的萃取包含將管花 肉蓰蓉的地下部分與第一極性溶劑的混合物煮沸0.5-10小 時，以過濾方式分離該混合物而得到一液體部份作爲該萃 取物，或減壓濃縮該萃取物而獲得一浸膏（extract)作爲該萃 8 1331529 取物。優選的，該管花肉蓰蓉的地下部分與第一極性溶劑 _ 的混合物中的管花肉蓰蓉的地下部分與第一極性溶劑的重 量比例爲1 : 4〜20。 優選的，本發明的製備方法的步驟a)的第一極性溶劑 ' 爲水，或水與乙醇的混合溶劑。 優選的，本發明的製備方法的步驟b)的該聚合物由交 聯聚芳族物質組成。更優選的，該聚合物由交聯的聚苯乙 烯，或交聯的苯乙烯和二乙烯苯共聚物所組成。 ® 優選的，本發明的製備方法的步驟c)的第二極性溶劑 爲水，步驟d)的第三極性溶劑包含甲醇，乙醇，水與甲醇 的混合溶劑，或水與乙醇的混合溶劑，更優選的第三極性 溶劑爲水與乙醇的混合溶劑。 優選的，本發明的製備方法還包含除去含有苯乙醇苷 的洗脫液中的溶劑以得到乾燥產物。 本發明還提供一種用於抗老年癡呆症的醫藥組合物， 包含一抗老年癡呆症治療有效量作爲有效成分的本發明的 含有苯乙醇苷的製劑；及與該有效成分共同使用之醫藥容 ® 許載體或稀釋劑。 本發明還提供一種用於抑制血小板聚集的醫藥組合 物，包含一抑制血小板聚集有效量作爲有效成分的本發明 的含有苯乙醇苷的製劑；及與該有效成分共同使用之醫藥 . 容許載體或稀釋劑。 本發明還提供本發明的含有苯乙醇苷的製劑作爲活性 成分在製備預防和治療老年癡呆症藥物中的應用。 9 1331529 本發明還提供本發明的含有苯乙醇苷的製劑作爲活性 成分在製備抑制血小板聚集藥物中的應用。 實施方式： 本發明從管花肉蓰蓉製備的一種含有苯乙醇苷的製劑 · 其中主要成分松果菊苷（e chi naco side)和類葉升麻苷 (acteoside)分別含10〜70%和1〜40%，以該製劑的重量 · 爲基準。本發明所述的來源於管花肉蓰蓉的苯乙醇苷類化 Φ 合物的結構通式爲：

包括松果菊苷、類葉升麻苷、2'·乙醯基類葉升麻苷 (2、acetylacteoside)、campneoside I、campneoside II、管 花肉蓰蓉苷 A(cistantubulosideA)、Βι、B2、Ci、C2、 crenatoside、去咖啡酿基類葉升麻苷

(decaffeoylacteoside)、異類葉升麻苷（isoacteoside)、紅 景天苷（rhodioloside)、syringalide A 3’-a-L-rhamnopyranoside 和管花苷 A (tubuloside A)等成分 (表1)，其中除松果菊苷及類葉升麻苷外均以少量或微量 存在於本發明的製劑中。表1中各成分係經高效液相色譜 指紋圖譜確定，該高效液相色譜指紋圖譜是在以下條件下 獲得的：固定相爲十八烷基矽烷鍵合矽膠；流動相爲乙腈 10 1331529 — 0.05M磷酸水溶液（4:96—15:85)梯度洗脫，流速1 ml/min，檢測波長 330nm。 表1 含有苯乙醇苷的製劑所含主要成分

Compound Name Ri r2 r3 R4 Rs Ri r7 2’-Acetylacteoside Ac Rha Cf H H OH OH Acteoside H Rha Cf H H OH OH Campneoside I H Rha Cf H OMe(S/R) OH OH Campneoside II H Rha Cf H OH(S/R) OH OH ♦Cistantubuloside A H Rha Cf Glc H H OH ♦Cistantubulosides B1/B2 H Rha Cm/c-Cm Glc H OH OH *Cistantubulosides C1/C2 H Rha Cf Glc OH(S/R) OH OH Decaffeoylacteoside H Rha H H H OH OH Echinacoside H Rha Cf Glc H OH OH Isoacteoside H Rha H Cf H OH OH Rhodioloside (Salidroside) H H H H H H OH Syringalide A 3’-a-L-rhamnopyranoside H Rha Cf H H H OH Tubuloside A Ac Rha Cf Glc H OH OH Crenatoside 結構見下式 *新化合物

Ac: Acetyl Cf: trans-CafFeoyl Cm: trans-Coumaroyl c-Cm: cis-Coumaroyl Glc: β-D-Glucopyranose Rha: a-L-Rhamnopyranose ll

Crenatoside 1331529 本發明是通過如下方案實現的：（i)溶劑提取法：以 管花肉薇蓉 Cbiawc/je (Schenk.) Wight 藥材，切 成飮片或粉碎成粉末，選用一定量的水或乙醇或甲醇或其 他低級脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒浸泡，在室溫下 滲漉提取，或用超聲波震蕩提取，或在加熱狀態下浸潤提 取或回流提取，濾液備用。藥渣再加適量溶液煎煮或回流 提取數次，濾過。合倂濾液，減壓濃縮，即得提取浸膏。（2) 純化方法：將提取浸膏以水加熱溶解，注入如D-1 01型、 AB-8型或其他類型的大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，棄 去；再用水、甲醇、乙醇、含水甲醇或含水乙醇的一種或 多種進行洗脫，洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫， 收集洗脫液，濃縮，利用常用乾燥方法乾燥，即得管花肉 蓰蓉製備含苯乙醇苷的製劑，並將該製劑作爲抗老年癡呆 症、抑制血小板聚集的有效成分，使之與藥學上可接受的 載體或其他適宜賦形劑相結合，按照常規方法製成膠囊 劑、顆粒劑、散劑、片劑、糖漿劑、酊劑等劑型，用於預 防和治療老年癡呆症，及抑制血小板聚集。 本發明的藥理試驗方案爲：利用水迷宮實驗，通過與 12 1331529 空白組和對照組比較，判斷給藥組小鼠學習記憶增加的統 _ 計學意義。結果發現本發明含有苯乙醇苷的製劑可以明顯 提高正常小鼠的學習記憶；對乙醇誘導小鼠記憶再現缺失 有明顯的保護作用；對東莨菪鹼引起的小鼠記憶獲得障礙 _ 有明顯的改善記憶作用；對亞硝酸鈉引起的小鼠記憶鞏固 - 障礙有明顯的保護作用；能明顯改善氫化可的松所致腎陽 虛小鼠的學習記憶功能，並顯著降低氫化可的松引起的小 鼠死亡率；改善局竈性腦缺血一再灌注癡呆大鼠學習記憶 · 障礙，此外，還能明顯抑制大鼠動一靜脈旁路血栓形成和 血小板聚集作用。在上述藥理活性試驗的基礎上，臨床可 被用於抗衰老、預防和治療老年癡呆症〔包括血管性癡呆 (VD)和阿爾海默氏綜合症（AD)〕。 下面結合實施例對本發明做進一步詳細的描述，但不 以此限制本發明。 提取方法： 鲁 實施例1. 管花肉蓰蓉藥材l〇kg，切成飮片，加8倍量水浸泡1 小時後煎煮提取2小時，濾過，濾液備用。藥渣再加6倍 量水煎煮提取2次，毎次1小時，濾過。合倂三次濾液， 減壓濃縮至比重1.10 (50°c)，加乙醇至含醇量達60%，冷 藏12小時，傾出上淸液，將殘留的懸濁液過濾，合倂上淸 液和濾液，回收乙醇並減壓濃縮至比重1.10 (50°C)，得提 13 1331529 取浸膏5.6kg。 實施例2. 管花肉蓰蓉藥材l〇kg，粉碎成粉末’加15倍量水浸 泡2小時後煎煮提取3小時’濾過’濾液備用。藥渣再加 - 12倍量水，煎煮提取4次，每次2小時，濾過。合倂濾液’ 減壓濃縮至比重1.25(50°C )，加乙醇至含醇量達80% ’冷 藏24小時，傾出上淸液，將殘留的懸濁液過濾，合倂上淸 · 液和濾液，回收乙醇並減壓濃縮至比重1.25 (50°C) ’得提 取浸膏7.2kg。 實施例3. 管花肉蓰蓉藥材l〇kg，切成飮片，加7倍量水浸泡3 小時後煎煮提取4小時，濾過’濾液備用。藥渣再加5倍 量水，煎煮提取4次，每次4小時，濾過。合倂濾液’減 壓濃縮至比重1.05 (50°C )，加1〇〇%乙醇至含醇量達50 %，冷藏10小時，傾出上淸液，將殘留的懸濁液過濾，合 ® 倂上淸液和濾液，回收乙醇並減壓濃縮至比重1.10 (50 °C )，得提取浸膏6.5kg。 實施例4. 管花肉蓰蓉藥材l〇kg，粉碎成粉末，加4倍量40%乙 醇浸泡3小時後回流提取4小時，濾過，濾液備用。藥渣 再加4倍量40%乙醇，回流提取4次，每次4小時，濾過。 14 1331529 合倂濾液，減壓濃縮至比重1.05 (50°C )，得提取浸膏6.2kg。 ， 純化方法： 實施例5. ' 將提取浸膏6kg加0.5倍量水加熱溶解，徐徐注入已 · 處理好的D-101型大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，收集 藥材2倍量水洗脫液備用；再用20%乙醇洗脫，收集藥材 2倍量20%乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附 ® 樹脂柱中，先用藥材2倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用 20%乙醇洗脫，收集藥材2倍量20%乙醇洗脫液備用。合 倂2次20%乙醇洗脫液，濃縮，乾燥，即得含有苯乙醇苷 的製劑865g。 以高效液相色譜法測定松果菊苷及類葉升麻苷的含量 的測定： 固定相爲十八烷基矽烷鍵合矽膠；甲醇-0.15%醋酸 (30:70)爲流動相，流速1 ml/分鐘，檢測波長333 nm。 精密稱取60°C減壓乾燥24小時的松果菊苷和類葉升 ® 麻苷對照品適量，加50%甲醇製成每1 ml含0.1 mg的溶 液，作爲對照品溶液。 供試品溶液的製備係取前述含有苯乙醇苷的製劑50 mg，置於25ml量瓶中，加50%甲醇適量，超音波處理使 . 溶解，加50%甲醇稀釋至刻度，搖句，精密量取1 ml，置 於1〇 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，用0.45 μιη濾 膜濾得過供試品溶液。 15 1331529 分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各5 μΐ，注入 液相色譜儀，測定松果菊苷及類葉升麻苷的色譜峰的峰面 積，採用峰面積計算即得。松果菊苷的含量經計算爲37.5 重量％，及類葉升麻苷的含量經計算爲6.7重量％。 實施例6. 將提取浸膏6kg加5倍量水加熱溶解，徐徐注入已處 理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，收集藥 · 材8倍量水洗脫液備用；再用60%乙醇洗脫，收集藥材8 倍量60%乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹 脂柱中，先用藥材6倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用60 %乙醇洗脫，收集藥材7倍量60%乙醇洗脫液備用。合倂 2次60%乙醇洗脫液，濃縮，乾燥，即得含有苯乙醇苷的 製劑1203g。採用實施例6的方法測定該製劑的松果菊苷 及類葉升麻苷的含量，它們分別爲48. 6重量％及11.8重量 %。 實施例7. 將提取浸膏6kg加3倍量水加熱溶解，徐徐注入已處 理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，收集藥 材8倍量水洗脫液備用；再用95%乙醇洗脫’收集藥材8 倍量95%乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹 脂柱中，先用藥材6倍量水洗脫’棄去水洗脫液；再用95 %乙醇洗脫，收集藥材8倍量95%乙醇洗脫液備用。合倂 16 1331529 2次95%乙醇洗脫液，濃縮，乾燥，得含有苯乙醇苷的製 劑1260g。採用實施例6的方法測定該製劑的松果菊苷及 類葉升麻苷的含量，它們分別爲41. 3重量％及7.4重量％。 實施例8. · 將提取浸膏6kg加1倍量水加熱溶解，徐徐注入已處 理好的大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，收集藥材4倍量 水洗脫液備用；再用40%乙醇洗脫，收集藥材5倍量40 # %乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹脂柱 中，先用藥材3倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用40%乙 醇洗脫，收集藥材4倍量40%乙醇洗脫液備用。合併2次 40%乙醇洗脫液，濃縮，乾燥，即得含有苯乙醇苷的製劑 11 〇7g。採用實施例6的方法測定該製劑的松果菊苷及類葉 升麻苷的含量，它們分別爲3 1. 7重量％及6.1重量％。 藥理作用： 實施例9. 含有苯乙醇苷的製劑對正常小鼠學習記憶的影響試驗 ® LACA系小鼠，採用水迷宮實驗，以吡拉西坦片（腦複 康）爲陽性對照藥每周測定6天，共測27天。 結果：各給藥組與對照組小鼠逐日水迷宮測定反應時 間d値結果總結於表2。 . 17 1331529 表2含有苯乙醇苷的製劑經口給藥27天對小鼠學習記憶 的影響 d値（n=27) 試驗 比較組別 >0.5 >0.8 沙5合計 天 % 天 % 天 % 第一次 對照組一含有苯乙醇苷的 製劑50mg/kg組 4 14.8 5 18.5 9 33.3 對照組一含有苯乙醇苷的 製劑200mg/kg組 10 37.0 3 11.1 13 48.2 第二次 對照組一含有苯乙醇苷的 製劑400mg/kg組 0 0 27 100.0 27 100.0 對照組一腦複康400mg/kg 組 5 18.5 2 7.4 7 25.5 腦複康組—含有苯乙醇苷 的製劑400mg/kg組 7 25.9 16 59.3 23 85.2 從表2可見，經口服給予小鼠不同劑量含有苯乙醇苷 的製劑，各劑量組與對照組的反應時間比較，總趨勢呈含 有苯乙醇苷的製劑各劑量組的反應時間短於對照組的天 · 數，隨含有苯乙醇苷的製劑劑量增加，反應時間呈興奮作 用的天數（反應時間縮短）也增多。在27天測定中，根據 d値分析有顯著性差異的天數，含有苯乙醇苷的製劑50 mg/kg 組有 9 天，200 mg/kg 組有 1 3 天，400 mg/kg 組有 27天。顯示隨含有苯乙醇苷的製劑劑量增加，呈反應時間 ‘ 興奮作用的天數明顯增加的劑量依賴關係》腦複康 ’ 400mg/kg組與對照組比較呈興奮作用的天數爲7天。與等 18 1331529 劑量含有苯乙醇苷的製劑比較明顯少於含有苯乙醇苷的製 劑組，表明含有苯乙醇苷的製劑組對小鼠學習記億的興奮 作用明顯強於腦複康組。 實施例10. 含有苯乙醇苷的製劑對乙醇誘導小鼠記憶再現缺失的 保護作用 受試藥物與對照藥同實施例7。LACA系小鼠，採用水 迷宮實驗方法。 各組經口分別給藥，於給藥後1小時，經口給予30% 乙醇O.lml/lOgBW。給乙醇後30分鐘，進行水迷宮測定。 各組小鼠經訓練後到達目標的游泳時間，給予乙醇30 分鐘後到達目標游泳時間，以及錯誤出現次數、隻數試驗 結果整理見表3。 1331529

表3含有苯乙醇苷的製劑經口給藥1周對乙醇誘導LACA 系雄鼠記憶再現缺失的保護作用 組別 劑量 動 訓練後到達目標 給酒精後到達目標 mg/kg 物 時間 錯誤 時間 錯誤 錯誤 整組錯 數 (秒） 次數/ (秒） 次數/ 率 誤率 (隻） 隻數 隻數 次/隻 次/隻 麵 50 12 7.46 土 0/0 34.40 土 47/8 5.88 3.92 製劑 0.13 21.71* 200 11 7.14 土 0/0 16.99 土 8/3δδ 2.67 0.73 0.18 9.Q6m 400 10 7.91 土 0/0 24.38 土 46/7 6.57 4.60 0.19 27.84 腦複康 400 10 8.00 士 0/0 24.08 土 54/6 9.00 5.40 0.46 32.52 對照 12 7.73 士 0/0 37.78 土 62/10 6.20 5.17 0.75 15.90

t檢驗：與對照組比較# # P<0.01，與200mg/kg組比較

*P<0.05 X2檢驗：與對照組比較△△?<0.01 從表4可見，含有苯乙醇苷的製劑各組及腦複康組給予 乙醇後到達目標反應時間較對照組時間短，較未給乙醇明 顯延長。但僅含有苯乙醇苷的製劑200 mg/kg組與對照組 間差異有顯著性（Ρ<〇.〇1)，而且含有苹乙醇苷的製劑50 20 1331529 mg/kg組與200 mg/kg組間差異有顯著性（P<〇.〇5)，呈劑量 效應關係。而含有苯乙醇苷的製劑400 mg/kg組和腦複康 組與對照組間差異無顯著性。表明含有苯乙醇苷的製劑在 200 mg/kg劑量經口給藥，對乙醇誘導記憶再現缺失有明 · 顯保護作用。含有苯乙醇苷的製劑其他劑量組和腦複康組 - 雖然到達目標時間反應短於對照組，但無統計學差異，保 護作用不明顯。另外，從乙醇誘導後，水迷宮測定小鼠出 現錯誤次數和出現錯誤的動物數，也顯示含有苯乙醇苷的 φ 製劑200 mg/kg組具有明顯保護乙醇誘導小鼠記憶再現缺 失作用。其餘給藥組雖然錯誤次數或隻數略少於對照組， 但保護作用不明顯，與對照組間差異無顯著性。 實施例Π 含有苯乙醇苷的製劑對東萇菪鹼引起的小鼠記億獲得 障礙的影響 (1)藥品與動物 受試藥物和對照藥同實施例9。採用小鼠跳臺訓練和 ® 測試方法，隨機分爲正常對照組、模型組、吡拉西坦 600mg/kg組和含有苯乙醇苷的製劑400, 200，100 mg/kg 組，每組15隻。以0.2 ml/10g體重的體積灌胃給藥’正 常對照組和模型組灌胃等體積的蒸餾水，每日一次。在連 . 續給藥至29天時進行訓練，訓練前lh給藥，訓練前15min _ 除正常對照組外各組腹腔注射東莨菪鹼1 mg/kg。第30天 進行測試，並於測試前lh給藥。結果見表4。 21 1331529 從表4可見，給予東莨菪鹼後，和正常對照組比較小 鼠跳臺試驗的測試潛伏期縮短，測試錯誤次數增多。與模 型組比較，吡拉西坦600 mg/kg，含有苯乙醇苷的製劑400, 200 mg/kg能明顯延長測試潛伏期，減少測試錯誤次數， 有明顯的改善記憶作用。含有苯乙醇苷的製劑1〇〇 mg/kg 能明顯延長測試潛伏期，但測試錯誤次數與模型組比較無 顯著差異。 表4 含有苯乙醇苷的製劑對東莨菪鹼致小鼠記憶獲 得障礙的影響 （I土 組別 劑量 (mg/kg) 動物數 (隻） 測試潛伏期 (S) 測試錯誤次數 (次/5min) 正常對照 1 4(1) 194.1 ±101.5* 1.36±1.45* 觀組 15 67.1 ±78.4 3.13±2.47 吡拉西坦 600 15 144.5 ±117.4* 1.60 ±1.40* 製劑 400 12(3) 206.1 ±98.8** 1.08±1.16** 200 12(3) 183.2±115.2** 1.42±1.38* 100 14(1) 191.8±117.5** 1.50 ±2.07 與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01 ;括弧中數位爲電擊死 亡數。 實施例12. 含有苯乙醇苷的製劑對大鼠動一靜脈旁路血栓形成的 影響 22 1331529 雄性SD大鼠，以阿斯匹林腸溶片爲對照，以下述方 程計算，結果見表5。 血栓抑制率（％)= (蒸餾水對照組血栓重一用藥組血栓重）/蒸餾水對照組血栓重X 1〇0% 與蒸餾水對照組比較，含有苯乙醇苷的製劑200, 100mg/kg 灌胃給藥能抑制大鼠動靜脈旁路血栓形成，抑制率分別爲 16.04%和19.60%，但均明顯弱於10011^化8阿斯匹林的作 用，其抑制率達34.97%。含有苯乙醇苷的製劑50mg/kg對 大鼠動靜脈旁路血栓形成無影響。 表5 含有苯乙醇苷的製劑灌胃給藥對大鼠動-靜脈旁路 血栓形成的影響 組別 劑量 (mg/kg) 動物數 (隻） 血栓濕重 (mg，x±SD) 血栓抑制率 (%) 蒸餾水 10 44.9±3·83 阿斯匹林 100 10 29.2±4.00** 34.97 製劑 200 10 37.7±7.42* 16.04 100 10 36·1±5.16* 19.60 50 10 42.6 ±7.12 5.12 與蒸餾水對照組比較*p<0.05, **p<0.0b 實施例13. 苯乙醇總苷對大鼠血小板聚集功能的影響 23 1331529 二磷酸腺苷二鈉（ADP)，中科院上海生化東風生化技術 _ 公司產品，批號爲9305 122，用前配成1 mg/ml儲備液冰箱 保存，用時以磷酸緩衝液稀釋3倍。。 將雄性SD大鼠按體重隨機分爲5組，分別爲蒸餾水 ‘ 對照組、阿斯匹林100 mg/kg、含有苯乙醇苷的製劑200， - 100和50 mg/kg組，灌胃給藥，給藥體積爲0.5 mg/100 g 體重，對照組給予等體積的蒸餾水，連續給藥7天，末次 給藥前禁食12小時，第7天給藥後1小時從腹主動脈抽取 · 血液’以3.8%的枸櫞酸鈉（1 : 9)抗凝，輕輕混勻後，以1000 rpm離心3分鐘，吸出上層富含血小板血漿（PRP)，餘血繼 續在300 rpm離心lOmin，上淸爲貧血小皮血漿（ppp)比濁 管中加入200 v 1 PRP，並以ppp調零點，預保溫5 min後 加入50 v 1的ADP溶液誘尋血小板聚集，測定血小板聚集 強度（SPA-4多功能血小板聚集儀，上海科達測試儀器廠生 產）’計算血小板聚集抑制率。 聚集抑制率(%)=里歷組最大聚集強度-藥物組最大聚集強度χ1ΩΩ〇/ 癱 對照腿大聚集強度 和蒸飽水對照組比較，含有苯乙醇苷的製劑2〇〇，1〇〇 和50 mg/kg灌胃給藥均能抑制ADP誘尋的大鼠血小板聚 集’以200 mg/kg組的抑制率最高，達到59.48%，見表6。 · 24 1331529 表6 含有苯乙醇苷的製劑灌胃給藥對大鼠血小板聚集功 能的影響 組別 制率 劑量 (mg/kg) 動物數 (隻） 血小板最大聚集(％) (* 土 SD) 血/J版聚集抑 (%) 蒸餾水 10 54.82±7.88 阿斯匹林 100 11 32.73±11.14林 40.30 製劑 200 10 22.21 ±6.23** 59.48 100 11 34.54 ±15.69* 36.99 50 10 31.65± 12.81** 42.26 與蒸餾水對照組比較*Ρ<〇.〇1，**Ρ<〇.〇〇1。 25

Claims (1)

1331529 (2009年8月修正) * > 申請專利範圍 | 1. 一種從管花肉蓰蓉獲得的含有苯乙醇苷的製劑，包 含10-50%松果菊苷（echinacoside)及1-15%類葉升麻苷 (acteoside)，以該製劑的重量爲基準，其係由包含下列步 驟的方法所製備： a) 將管花肉蓰蓉的肉質莖以一第一極性溶劑加予萃 取； b) 將步驟a)獲得的萃取物加到裝有疏水大孔隙聚合 物的柱中，使得苯乙醇苷吸附在聚合物上； c) 用第二極性溶劑作爲流動相流洗液洗脫該柱以除 去游離的化合物，而實質上大部份的苯乙醇苷仍然吸附在 聚合物上；以及 d) 用第三極性溶劑將苯乙醇苷從聚合物上洗脫下 來，得到含有苯乙醇苷的洗脫液， 其中第一極性溶劑爲水，甲醇，乙醇，或水與乙醇的 混合溶劑、第二極性溶劑爲水及第三極性溶劑爲水，甲醇， 乙醇，水與甲醇的混合溶劑，或水與乙醇的混合溶劑，且 該第三極性溶劑與第二極性溶劑相比極性較低。 2·如申請專利範圍第1項的製劑，其包含25-50%松 果菊音（echinacoside)及 5-15%類葉升麻音（acteoside)，以 該製劑的重量爲基準。 3.如申請專利範圍第1項的製劑，其中該管花肉蓰蓉 26 1331529 (2009年8月修正) 包含管花肉蓰蓉的肉質莖。 4.如申請專利範圍第1項的製劑，其中的步驟a)的萃取 包含將管花肉蓰蓉的肉質莖與第一極性溶劑的混合物煮沸 0.5-10小時，以過濾方式分離該混合物而得到一液體部份 作爲萃取物，或減壓濃縮該萃取物而獲得一浸膏（extract) 作爲萃取物。 5. 如申請專利範圍第4項的製劑，其中步驟a)的第一極 性溶劑爲水，或水與乙醇的混合溶劑。 6. 如申請專利範圍第1項的製劑，其中步驟b)的聚合物 由交聯聚芳族物質組成。 7. 如申請專利範圍第6項的製劑，其中該聚合物由交聯 的聚苯乙烯，或交聯的苯乙烯和二乙烯苯共聚物所組成。 8. 如申請專利範圍第1項的製劑，其中該第三極性溶劑 爲水與乙醇的混合溶劑。 9. 如申請專利範圍第1項的製劑，其中該方法還包含除 去步驟d)的含有苯乙醇苷的洗脫液中的溶劑以得到乾燥產 物。 ,1331529 (2009年8月修正) 10.—種使用申請專利範圍第1至第9項中任一項所述 的製劑於製造抗老年癡呆症（senile dementia)的藥物的用 途。 11. 一種使用申請專利範圍第1至第9項中任一項所述 的製劑於製造抑制血小板聚集的藥物的用途。

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