TWI272948B - HSA-free stabilized interferon liquid formulations - Google Patents

Description

1272948 狄、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明一般係關於含有干擾素的醫藥組成物，特 e ^ 、卞擾素-/5之安定化調配物，其不含人類血清蛋白做為 碩外的醫藥上賦形劑。 … 【先前技術】 干擾素是細胞激素，即可以於細胞間傳遞訊息的可溶 蛋白貝’並且在免疫系統扮演重要的角色，其幫助摧毁 成感染的微生物並修補任何產生的傷害。干擾素天然的 是由文感染的細胞所分泌，第一次發現在1 957年，他們 的名字是演生自他們「干擾」病毒複製及增殖的事實。 干擾素具有抗病毒以及抗增殖活性，基於生化及免疫 ^生貝，天然產生的人類干擾素分為三個主要的族群：干擾 素-α (白血球）、干擾素·冷（纖維母細胞）和干擾素_ 7 (免疫）。α _干擾素現在在美國及其他國家被證實可治療 叙樣細胞白血病（hairy cell leukemia )、性病疲（ venereal warts)、卡波濟氏肉瘤（]^〇心s咖( 一種常常折磨遭受後天免疫缺症候群（AIDS)之病患的癌 症）、以及慢性非A、非B肝炎。 此外，干擾素（IFN)是身體對病毒感染有反應時所 產生的醣蛋白質，其在所保護的細胞中抑制病毒的增殖， 由較低分子量的蛋白質所組成，IFN的作用是非常的非特 異性的，即由-種病毒所誘發的IFN可以對其他廣大範圍 的病毒有效力，然而，他們是物種特異性的，即由一物種 1272948 所產生的IFN只會刺激相同或相似物種的細胞抗病毒活性 IFN疋弟一群被發現具有抗腫瘤及抗病毒潛力的細胞激 素。 三種主要的IFN係指iFN-α、IFN-β以及IFN-γ，這些 主要種類的IFN剛開始是根據其來源細胞（白血球、纖維 母細胞或T細胞）而分類的，但是，已知有一些種類可能 由一種細胞所產生，所以，白血球IFN現在被稱為IFN_a ’纖維母細胞IFN是IFN-β，而T細胞IFN是IFN-γ，也 有第四種由“Namalwa，，細胞系（源自Burkitt’s淋巴瘤）產 生的 IFN ’ 類淋巴母細胞 ifn ( lymphoblastoid IFN)， 似乎是生產白血球和纖維母細胞IFN兩者的混合物。 干擾素單位或干擾素國際單位（U或iu，為國際單位 )被報導做為IFN活性的量度，其定義為保護5〇%的細胞 免於病毒侵害所需的量，用於測量生物活性的分析是細胞 病受抑制分析，描述於Rubinstein等人（1981 )、 Faimlletti，P· C·，等人（1981)。在這個干擾素抗病毒的分 析中，約需要1單位/毫升的干擾素的量來產生5〇%的細胞 病邊，忒單位疋根據由國家健康機構（Pestka，s·丨)所 提供之Hu-IFN-冷國際參照標準來決定的。 每一個類別的IFN包含數個不同的種類，IFN邛和 IFN-γ各自是單一基因的產物。 分類為IFNs-α的蛋白質是最多變的一群，其包含約15 個種類，染色體9上有一群汀^^以基因，其含有至少”個 成員，當中有15是活性的並且經轉錄的，成熟的汀价-以 1272948 並沒有被醣基化。 IFNs-α和IFN-β的長度一樣（165或166個胺基酸）， 具有相似的生物活性，IFNs-γ的長度是146個胺基酸，與a 和β類較不相似’只有IFNs-γ可以活化巨嗟細胞或誘發殺 手Τ細胞的成熟，這些新類型的醫藥試劑有時可以稱為生 物反應修飾者（BRM)，因為他們在生物對腫瘤的反應具 有影響力，經由免疫調控影響辨識作用。 人類纖維母細胞干擾素（IFN-β)具.有抗病毒活性並且 也可以刺激自然殺手細胞對抗瘤細胞，它是由病毒以及雙 股RNA所誘發的約20,000 Da的多肽，從纖維母細胞干擾 素基因的核苷酸序列（藉由重組DNA技術選殖，Derynk 等人，1980 )推導出完整的蛋白質胺基酸序列，有166個 胺基酸長。

Shepard等人（1981 )描述了在鹼基842的突變（於 位置141將Cys變成Tyr)使其失去了抗病毒的活性，還 有核苷酸1119-1121缺失的變異選殖株。

Mark等人（1984)用（A)置換驗基469(T)，置入 —人工突變，使位置17的胺基酸從Cys變成Ser，所得到 的IFN-β報導與「天然的」IFN-β有同樣的活性，並且在長 期的儲存 （-70。〇中穩定。

Rebif® ( Serono-重組人類干擾素_β )是干擾素治療 多發性硬化（MS )最新的開發，是干擾素（IFN ) ·沒一 ！ a ’由哺乳動物細胞細生成，其建議的國際非專屬財產名稱 (International Nonproprietary Name，INN )為「干摄素 1272948 如同所有蛋白質危機的醫藥品，使用IFN- /3做為醫藥 忒劑必須克服的一項主要障礙是醫藥效用的喪失，可起因 方；其在醫藥調配物中不穩定。 會威脅到多肽活性以及在醫藥調配物中功效的物理性 不女疋性包括變性作用和可溶性及不可溶性聚集體的生成 化孚不女疋性包括水解、醯亞胺（丨㈤丨仏）的生成、氧

化作用、外消旋化和dearnidati〇n，這些變化有些是已知會 k成有興趣之蛋白質醫藥上活性的損失或減少，在其他例 子中k些！化的確切影響是未知的，但是其所造成之降 級的產物卻仍是醫藥上所不能接受的，㈣會有造成不想 要之副作用的可能性。 夕肽在s藥組成物中的穩定性仍然是反覆試驗扮演 重要角色的領域（回顧Wang ( 1999 )加.pha

^5:129-188; Wang Hanson ( 1988 ) J. Parenteral S

Tech. 42:S3-S26)。添加到多肽醫藥上調配物之用以辦 其穩定性的賦形劑包括緩衝物、.類、介面活性劑、: 二=二醇以及聚合物’但是這些化學添加劑的安定 果言因蛋白質而異。 目前的㈣·㈣配物使用㈣作為增加㈣心 二=，然而’使用HSA有一些缺點。HSA是人類 ^物且因此必須得自人類個體。雖然已努力減低届 血液產物（諸如HSA)的使用卻帶著引進 大員病毋（诸如HIV和HCV)的可能性。 9 1272948 所以，需要其他含有生理上可相容之安定劑而可改善 j蛋白質溶解度並穩定該蛋白f不會形成凝集的腳-万醫 藥組成物，藉此增進其醫藥上的效用。 【發明内容】 本發明係關於含有干擾素（IFN)的安定化醫藥組成 物以及其製備方法。這些組成物是在不含人類血清蛋白素 (HSA)存在下製備的，而因此不含此醫藥上的賦形劑。 此組成物在這裡係稱為「不含HSA」的㈣醫藥組成物 ，且其包括-干擾素（IFN)或一異構型、突變形成的蛋 白質、融合的蛋白質、功能性衍生物、活性部分或其鹽， 八m成物疋含有緩衝液、介面活性劑、等滲劑及抗氧 化劑的溶液。 根據本發明的-個具體實例，該組成物也含有制菌劑 〇

本文所用的「干擾素」或「IFNj是指包括文獻中所 定義為此的任何分子’包括例如前面「先前技藝」段落中 任何形式的IFN。尤其，IFN_a、_·_ ιρΝ_γ是包括在 上述定義中的。IFN-β是根據本發明之較佳的。適合本 發明之IFN-β可商業購得為例如Rebif(§) (^刚〇)、 Αν_Χ® (Bl〇gen)或石 fer〇n® (Schering)。人類來 源之干擾素的用途也是本發明較佳的。本文所用之術語干 擾素是指涵蓋異構型、突變形成的蛋白質、融合的蛋白質 、功能性衍生物、活性部分或其鹽。 、 本文所用的術語「干擾素J⑽㈣或祕β)」是指包括纖維 10 1272948 母細胞干擾素（尤其是人類來源的），是自生物液中分離 來的或是從原核或真核寄主細胞經由DNA重組技術得到 的，以及其鹽、功能性衍生物、變異物、相似物和活性部 分。較佳的IFN-/3是指干擾素fla。 本文所用的術語「突變形成的蛋白質」係指IFN的相似物 ，其在一個或更多天然IFN之胺基酸殘基被不同的胺基酸 殘基或所取代、或刪除、或一或更多的胺基酸殘基被加到 IFN的天然序列中，但是與野生型IFN相較並沒有大大的 改變所得到之產物的活性。這些突變形成的蛋白質藉由已 知的合成方法製備及/或藉由定點突變技術或其他適合的已 知技術。較佳的突變形成的蛋白質包括（例如）she卯d 等人（1981)或Mark等人（1984)所描述的。 任何此突變形成的蛋白質較佳的是具有足以複製ifn 序列的胺基酸序列，例如具有實質上與IFN相似或甚至更 好的活性。干擾素的生物活性是熟習該項技藝者所熟知的 ，且生物標準已由（例如）國家生物學標準與控制研究 所建立及提供（http://immun〇i〇gy 〇rg/links/NiBSc )。 /夬疋IFN /舌性的生物分析已被描述。ifn分析的進行 可以（例如）如Rubinstein等人（1981)所描述。因此藉 由例行的實驗可以決定任何所給的突變形成之蛋白質是否 實質上具有與IFN相似或甚至更好的活性。 可用於本發明之IFN突變形成的蛋白質或編碼之的核 酸包括了有限套實質上相應序列為置換胜肽或多核苷酸， 其可以被習於該項技藝者根據本文的教示或指引不需過度 11 1272948 實驗就可以例行的獲得。 本發明突變形成的蛋白質的較佳改變是被稱為「保守 性」置換的。本發明多肽或蛋白質的保守性胺基酸置換可 包括同一群内的同義胺基酸，其具有相當相似的物化性質 ，使得該群内成員的置換可以保留分子的生物功能。清楚 的是，在上述定義的序列中也可以進行胺基酸的***和置 換，但不改變其功能，尤其是如果***或刪除只牽涉到幾 個胺基酸（例如少於三十個，且較佳的少於十個），而且 不移除或取代對功能構形重要的胺基酸，例如半胱胺酸殘 基。經由這些刪除及/或***而產生的蛋白質和突變形成的 蛋白質都屬於本發明的範疇。 較佳的，該同義胺基酸族群是表I中所定義的，更佳 的是，該同義胺基酸族群是表II所定義者，最佳的是，該 同義胺基酸族群是表ΠΙ中所定義者。

表I 較佳的同義胺基酸族群 胺基酸 同義族群 Ser Ser，Thr，Gly，Asn Arg Arg, Gln，Lys，Glu，His Leu lie，Phe，Tyr，Met，Val，Leu Pro Gly，Ala，Thr，Pro Thr Pro, Ser，Ala，Gly，His，Gln，Thr Ala Gly? Thr? Pro, Ala Val Met，Tyr，Phe，lie，Leu，Val Gly Ala, Thr，Pro, Ser，Gly 12 1272948 lie Met，Tyr，Phe，Val，Leu，lie Phe Trp5 Met，Tyr，lie，Val，Leu，Phe Tyr Trp，Met，Phe，lie，Val，Leu，Tyr Cys Ser5 Thr，Cys His Glu，Lys，Gln，Thr，Arg，His Gin Glu，Lys，Asn，His，Thr，Arg，Gin Asn Gln，Asp，Ser，Asn Lys Glu，Gln，His，Arg，Lys Asp Glu，Asn, Asp Glu Asp，Lys，Asn，Gln，His，Arg，Glu Met Phe5 lie，Val，Leu，Met Trp Trp

表II 更佳的同義胺基酸族群 胺基酸 同義族群 Ser Ser Arg His，Lys，Arg Leu Leu? lie, Phe? Met Pro Ala, Pro Thr Thr Ala Pro, Ala Val Val，Met, lie Gly Gly lie lie，Met，Phe，Val，Leu Phe Met，Tyr，lie，Leu，Phe Tyr Phe, Tyr Cys Cys，Ser 13 1272948

His His，Gln，Arg Gin Glu? Gln? His Asn Asp, Asn Lys Lys，Arg Asp Asp，Asn Glu Glu，Gin Met Met，Phe，Ile，Val，Leu Trp Trp 表in 最佳的同義胺基酸族群 胺基酸 同義族群 Ser * Ser Arg Arg Leu Leu，lie，Met Pro Pro Thr Thr Ala Ala Val Val Gly Gly lie lie, Met, Leu Phe Phe Tyr Tyr Cys Cys，Ser His His Gin Gin Asn Asn Lys Lys

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Asp Asp Glu Glu Met Met, lie, Leu Trp Met 用於本發明以在蛋白質中產生胺基酸置換來得到IFN 犬變形成之蛋白質的例子包括任何已知的方法步驟，諸如 Mark 等人的美國專利 4,959,3 14、4,588,585 及 4,737,462 ; K〇th 等人的 5，116,943 ; Namen 等人的 4,965,195 ; Chong 等人的4,879，111 ;和Lee等人的5,017,691 ;以及Shaw等 人在美國專利4,9〇4,584中離胺酸置換的蛋白質。特定的 IFN- /5之突變形成蛋白質已被（例如）Mark等人（1984 )所描述。 術語「融合的蛋白質」係指與另一個蛋白質融合的含 有1FN或其突變形成的蛋白質的多肽，其（勿如）在體液 中具有延長的存留時間。IFN可以與另一個蛋白質、多肽 或相似物（勿如免疫球蛋白或其片段）融合。 本文所說的「功能性衍生物」涵蓋IFN衍生物及其突 又形成的蛋白質和融合的蛋白質，其可以用技藝中已知的 方$製備自殘基或N-或c_端基團上支鏈的功能基團，只 要它們仍是醫藥上可接受的（意即它們不會破會蛋白質的 :性丄貫質上與㈣有相似活性且不會使含有它的組成物 ，毋性）就包括在本發明内。這些衍生物可（例如）包 括聚乙二醇支鏈，它會遮蔽抗原性區域並延續IFN在體液 的存在。其他衍生物包㈣基的脂肪族酯、與氨或-級或 15 1272948 二及=應的幾基的胺基化合物、有醢殘基的胺基酸殘基 基的N-醯基衍生物（…—或碳環aroy〗 基團）或含醯基之自由經基0_酿基衍生物（例 或 threonyl 殘基）。 八為㈣❸’舌性部分」或突變形成的蛋白質以及融 1 =自%質:本發明涵蓋任何蛋白質分子多肽鏈片段或前 自或與連接其上的分子或絲—起（心醣類或鱗 二二舌：蛋…子聚集體或聽殘基本身），前提是該 π刀的活性相較於對應的IFN並沒有顯著的降低。 =所用的術語「鹽」係指上述蛋白質或其相似物之 : 夂基的鹽以及胺基的酸加成鹽兩者。缓基的鹽可以用技藝 已知的方法形成並包括無機鹽，例如鈉鹽 、鐵鹽、或辞鹽和相㈣，以及與（例如）胺類；諸如： 乙和故、精胺酸、或離胺酸）、六氫_、普魯卡因及其 相似物形成之具有有機成分的鹽。酸加成鹽包括（ 機酸（諸如例如鹽酸或硫酸）的鹽，以及具有有機 項夂^士口例如醋酸或草酸）的鹽。當然，任何這些鹽都必 縣，本發明蛋白質（㈣）的生物活性，意即，具有結 合相應受體且開啟受體訊息反應的能力。 物是發明’使用重組的人類·'和本發明的化合 一近來已有描述-種特別種類的干擾素變異體，所謂的 〇13致丨生干擾素」是非天然產生的IFN變異體（Us 〇13,253 )。I據本發明—較佳的具體實例，本發明的化 16 1272948 合物係與-致性干擾素合併使用。 士同本文所使用的，人類干擾素—致性（㈣-c〇咅 血球干擾素亞群1列：些於大部分天然人類白 殘基，且(在那=:Γ!亞群中常見的胺基酸 位置裡）包括-主好♦ ^中㊉見胺基酸的—或更多 5 , 要备生於該位置的胺基酸，並且不含在 至少一個天生亞型中 个3在 應-con㉟蓋（―不二不存在的任何胺基酸殘基。 不包括）U.S. 4,695,623, 4,897,471 和 5，5 41，2 9 3所揭示$宁# 疋義、、、e IFN-conl、IFN_c〇n2 及 IFN_ IFN"〇n ^ κ 1所祸述的方法或藉由其他標準方法來產生。 在-較佳的具體實例中，該融合蛋白質含有ig融合。 口玄W虫合可以是直拉66 -V、丄 勺或！由短的連接胜肽（長度約1至3

的胺基酸殘基或更具，A 更長例如13個胺基酸殘基長）。該連 接物可以（例如彳早& u # 序列為E-F-M ( Glu-Phe-Met)的三胜 肽，或是13個胺基醅— 、 土 ^的連接序列，其在IFN序列及免疫 球蛋白序歹,J之間含冑心Phe_Gly-Ala.Gly-Leu —·

Gly Gly Gln-Phe-Met。所得到的融合蛋白質可具有改善的 性質’諸如在體液中的存在時間（半生期）延長、提高的 特異活性、提高的表現量、或該融合蛋白質容易純化。 在一較佳的具體實例中，IFN是融合到ig分子的固定 位置中’較佳的是融合到重鏈區域，像是（例如）人類 IgGl的CH2 # CH3區域。其他&分子的異構物（ isoform )也適合用於生產本發明之融合蛋白質，諸如收2 17 1272948 、：igGa或IgG4異構物或其他Ig種類，像是（例如） 或IgA。融合蛋白質可以是單體或多聚體，異質或同質多 聚體。 在一較佳的具體實例中，該功能性衍生物有至少一個 部分連接到一或更多#官能|，其係胺基酸殘基上的一或 更多的支鏈。較佳的，該部分是聚乙烯（pEG )部分。 PEG化可以藉由已知的方法進行，諸如（例如） W099/55377所描述者。 技藥給個體的劑量（單一或多次劑量)會因許多因素 而異，包括藥物動力學性質、投藥方式、病患狀況以及特 )± ( H別年齡、體重、健康、大小）、症狀程度、協同 治療、治療頻率和所想要的效果。 人類1FN^的標準劑量範圍從每天80 000 IU/kg和 200 000 IU/kg或每人每天6则（百萬國際單位）和a MIU或每人22至44微克。根據本發明，IFN較佳的投藥 劑！是約1至50微克，更佳的為每人每天約1〇至％微 克或約10至20微克。 、根據本發明，活性成分的投藥可以藉由靜脈内、肌肉 内或皮下方式。較佳的iFN投藥方式是皮下方式。 IFN也可以每天或每隔一天投藥，頻率較少。較佳的 ’ IFN是每週投藥一次、兩次或三次。 較佳的投藥方式是皮下投藥，例如每週投藥三次。更 仫的杈藥方式是肌肉内投藥，例如每週施用一次。

較佳的，22至44微克或6 MIU至12 MIU的IFNJ 18 1272948 是藉由皮下注射每週投藥三次 。 跳石可以經由皮下投藥，劑量為每隔-天25至30 微克或8刚至9.6 MIU。3〇叫或6圓的祕万可以 進一步每週一次肌肉内投藥。 術浯「女定性」係指本發明干擾素調配物的物理、化 學及構形安定性（包括生物效力的維持）。造成蛋白質調 配物不安定的原因可能是化學降解或蛋白質分子聚集形成 較高階層的聚集體、去醣基化、聽基化修飾、氧化作用或 任何其他結構上的㈣，使得本發明所包含之干擾素多肽 的至少^個生物活性減低。 -個「安定J的溶液或調配物是指其蛋白質降解、修 飾、生物活性減低程度及類似者被令人滿意的控制住，而 且不會隨時間增加其不可接受性。較佳的，經過從^至 24個月，該調配物維持至少為或約6〇%之標記的干擾素活 性，更佳的是至少為或％ 7〇 %，最較佳的是至少為或約 卿。。本發明該安定化之不含HSA的㈣組成物當儲存於 Μ C日夺，較佳的具有適用期至少約六個月、十二個月、 十八個月，更佳的至少二十個月，再更佳的至少約二十二 個月’最佳的至少約二十四個月。 監測本發明不含HSA之IFN醫藥組成物安定性的方法 為技藝中已存在的，包括本文所揭示之實施例的方法。因 此’本發明液態醫藥組成物在儲存期間㈣聚集物的形 Z容易的藉由-段時間後測量溶液中可溶性㈣的 來決定。溶液中可溶性多肽的含量可以藉由—些適用於债 19 1272948 測㈣的分析方法來定量，該等方法包括（例如 RP ) HPLC以及uv吸收光譜法，如下面實施例所描述。 =定儲存期間液態調配物中可溶性和不可溶性聚 可以精由（例如）<吏用如同下面實施例所提到的分析式超 高速離心來達成’來分辨以可溶性聚集體存在的可溶性夕 肽部分和以非聚集體、生物活性分子形式存在的部分。夕 術浯「多次劑量的使用」是指包括使用單一藥瓶、安 瓿或筒的干擾素調配物超過一次注射者，例如2、3、4、女 、6或更多次注射。該注射的進行較佳是經過一段時間， 至少為或約12小時、24小時、48小時等等，較佳是高達 為或約12天。該注射可以間隔（例如）6、12、24、化或 72小時。 5 術語「緩衝液」或「生理上可接受的緩衝液」係指一 化合物溶液用於醫藥上或獸醫使用上的調配物中是安全的 ，並且具有維持或控制調配物PH在想要的範圍内的效果 。用於控制pH在微酸性PH至微鹼性PH之可接受的緩衝 液包括（但不限於）化合物磷酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、 精胺酸、TRIS以及組胺酸。「TRIS」係指胺基羥基 曱基-1，3-丙烷二醇以及任何其醫藥上可接受的鹽。較佳的 緩衝液是含有鹽（saline)或可接受之鹽（salt)的醋酸鹽 缓衝液。 「等滲壓劑」是指一化合物其是生理上可耐受性的且 提供合適的滲性給調配物以防止水的淨流動通過與調配物 接觸之細胞膜。化合物諸如甘油經常用於此等目的，濃度 20 1272948 係已知的。其他合適的 或蛋白質（例如甘胺酸或蛋白=括（但不限於）胺基酸 及醣類（例如葡萄糖、甘露糖醇、奔：（例如氯化納）以 麈劑較佳的是甘露糖醇。 庶、糖和乳糖）’該等渗 術語「抗氧化劑」係指一化人 衍生的自+ 1 ~ β 化口物其可防止氧氣或氧所 中，常加於殷—/ 抗乳化劑係在一些賦形劑 劑的、、# Λ尨 及化丰女定性。抗氧化 片J的添加係用於減少或遲 此雄物化反應’該氧化反應是與- 孔汛或有自由基存在時發生的。 延二反應經常可被光、溫度、 ^，. . . ^ 又阿，辰度虱氣、微量金屬或過 乳化物的存在所催化。亞硫酸 石六賒辦 皿亞石瓜酸虱鹽、硫脲、甲 石瓜月女酸、乙二胺四乙酸（ (BHT、 （EDTA)的鹽、二丁基羥基曱苯 QBHT)以及丁基羥基 用於M w 乳本（ΒΗΑ)係、常做為抗氧化劑 复二中。贿Α納已被發現可增進抗氧化劑的活性， 由整合那些會催化氧化反應的金屬離子，最佳的抗 乳化劑是甲硫胺酸。 術语「抑菌物」係指-加至調配物中的化合物或組成 :抗菌劑的功效。本發明保藏之含干擾素的調配物較佳 订σ保存效果的法令或規範標準，可做為商業實施的多 用途產品。抑菌物的例子包括酚、m-曱酚、厂甲酚、。•甲 酚、氯甲酚、苯甲醇、對羥苯曱酸烷酯（甲基、乙基、丙 丁基及相似物）、經基氯苯胺、陽性矣、去水醋酸鈉 从及硫柳汞（thimer0sal )，該抑菌劑較佳的是苯甲醇。 術語「表面活性劑」係指一可溶性化合物其會減少液 21 1272948 體的表面張力或減少兩液體或液體和固體之間的界面張力 ’該表面張力是作用在液體表面的力，以減少表面積。表 面活性劑以有時備用於醫藥調配物中，包括遞送低分子質 里某物及夕肽’以改善藥物的吸收或改善其到達標的組織 的遞送。熟知的表面活性劑包括聚山梨醇酯（聚氧乙稀衍 生物’吐溫）以及Pluronic 〇 根據本發明較佳的具體實例，頃發現藉由將干擾素與 表面 /舌性劑（選自 Pluronic® F77、Pluronic F87、piuronic F88以及Piuronic⑧F68，尤其較佳的是plur〇nic f68 ( BASF，Pluronic F68 也稱為 p〇1〇xamer ι88))調配在一起 會獲得安定的調配物，可減少因藥瓶表面及/或遞送裝置乂 例如注射器、泵、導管等等）之吸附所造成的活性損失。 也發現藉由將干擾素與表面活性劑（選自Pluronic@ F77、

Pluronic F87、Pluronic F88 以及 Pluronic® F68，尤其較佳 的是 Pluronic F68 ( BASF，Pluronic F68 也稱為 P〇i〇xamer 1 88 ))調配在一起可獲得一安定的調配物，對氧化作用 以及蛋白質聚集體的形成更具有抗性。

Pluronic表面活性劑是環氧乙烷（E〇 )以及環氧丙烷 (」的樹脂塊（block )共聚物，環氧丙烧樹脂塊（p〇 )被夾在兩個環氧乙烷（E0 ) 樹脂塊之間。

CK H0—(ch2ch2〇)x-(ch2ch〇)-(ch2ch2o)x-h EO PO E0 22 1272948

Pluronic表面活性劑是由兩步驟程序合成的·· 環氧丙烷 1·想要的分子量的疏水性是藉由控制性添加 到丙一醇的兩個經基中產生的；以及 2·添加環氧乙烷，使疏水性夾在親水性基團中間。 在Phonic® F77中，聚氧乙浠（親水性）的日百分比 是观’疏水性（聚氧丙烯）的分子量是約為2,3〇6〇ρ 在luronic F87中，聚氧乙稀（親水性）的百分比是 70%’疏水性（聚氧丙烯）的分子量是約為2,644心。 在PW F88中，聚氧乙烯（親水性）的百分比是 80%，疏水性（聚氧丙烯）的分子量是約為^。 在P1Ur〇niCF68中，聚氧乙稀（親水性）&百分比是 8〇%，疏水性（聚氧丙烯）的分子量是約為"㈣。 Pluronic F77典型的性質列在下面： 平均分子量：6600 ; 熔點/流點：48°C ; 物理形式@ 20°C :固體； 黏稠度（布氏）

cps : 480 [於 25°C 時液態，於 60°C

糊狀以及於77°C時固體]; 表面張力，達因/公分@ 25〇c · 〇·1%濃度：47.0 〇·〇1%濃度：49.3 0.001%濃度：52.8 界面張力，達因/公分@ 25。〇對Nuj〇i ; 0·1°/。濃度：17.7 23 1272948 0.01%濃度·· 20.8 0.01%濃度：25.5 Draves Wetting, Seconds 25°C 1.0%濃度：> 360 0.1%濃度：> 360 泡沫高度

Ross Miles，0· 1 %，mm @ 50oC ·· 100

Ross Miles, 0.1 %，mm @ 26〇C ·· 47

Dynamic, 0· 1 %，mm @ 400 ml/min : > 600 水性溶液中的濁點，GC 1%濃度：>100 10%濃度：>100 HLB (親水性-親油性平衡）：25

Pluronic F87典型的性質列在下面： 平均分子量：7700 ; 熔點/流點：49QC ; 物理形式@ 20°C :固體； 黏稠度（布氏）cps ·· 700 [於25。0時液態，於60°C時糊 狀以及於77。〇時固體]; 表面張力，達因/公分@ 25°C ; 0.1%濃度·· 44.0 0.01%濃度：47.0 0.001%濃度·· 50.2 界面張力，達因/公分@ 25°C對Nujol ; 24 1272948 0.1%濃度：17.4 0.01%濃度：20.3 0.01%濃度：23.3 Draves Wetting, Seconds 25°C 1.0%濃度：> 360 0.1%濃度：> 360 泡沐1¾度

Ross Miles，0· 1 %，mm @ 50〇C ·· 80

Ross Miles，0· 1 %，mm @ 26〇C ·· 3 7

Dynamic，0.1 %，mm @ 400 ml/min : > 600 水性溶液中的濁點，GC 1%濃度：>100 10%濃度：>100 HLB (親水性-親油性平衡）：24

Pluronic F88典型的性質列在下面： 平均分子量·· 11400 ; 熔點/流點：5VC ; 物理形式@ 20°C :固體； 黏稠度（布氏）cps : 2300 [於25°C時液態，於60°C時 糊狀以及於77。0時固體]； 表面張力，達因/公分@ 25QC ; 0.1%濃度：48.5 0.01%濃度：52.6 0.001%濃度·· 55.7 25 1272948 界面張力，達因/公分@ 25°C對Nujol ; 0.1%濃度：20.5 0.01%濃度：23.3 0.01%濃度：27.0 Draves Wetting, Seconds 25°C 1.0%濃度：〉360 0.1%濃度：> 360 泡沫高度

Ross Miles, 0· 1 %，mm @ 50〇C ·· 80

Ross Miles，0· 1 %, mm @ 26〇C : 3 7

Dynamic，0· 1 %，mm @ 400 ml/min : > 600 ! 水性溶液中的濁點，GC 1%濃度：>100 10%濃度：>100 HLB (親水性-親油性平衡）：28 Pluronic F68典型的性質列在下面： 平均分子量：8400 ; 熔點/流點：52QC ; 物理形式@ 20°C :固體； 黏稠度（布氏）cps : 1000 [於25QC時液態，於60。(：時糊 狀以及於77°C時固體]; 表面張力，達因/公分@ 25°C ; 0.1%濃度：50.3 0.01%濃度：51.2 26 1272948 ,0.001%濃度：53.6 界面張力，達因/公分@ 25°C對Nujol ; 0.1%濃度：19.8 0.01%濃度：24.0 0.01%濃度：26.0 Draves Wetting, Seconds 25°C 1.0% 濃度：>360 0.1%濃度：> 360 泡沫高度

Ross Miles, 0.1%? mm @ 50°C · 35

Ross Miles，〇· 1 %，mm @ 260C · 40

Dynamic，0.1%，mm @ 400 ml/min ··> 600 水性溶液中的濁點，〇C 1%濃度：>100 10%濃度：>100 HLB (親水性-親油性平衡）：29 其他與上述性質相似的聚集體也可以使用於本發明的 調配物中，較佳的表面活性劑是Pluronic f68，以及具有 相似性質的表面活性劑。

Pluronic (尤其是Piur〇nic F68 )較佳的濃度是在一段 儲存時間後（例如12至24個月）能夠維持干擾素安定性 :?且該濃度足夠防止因表面（諸如藥瓶、安訊或筒或 注射裔）吸附而造成的蛋白質損失。 在液態調配物中，PI一:(尤其是心。“^ 27 1272948 度較佳的是為或約〇.〇1毫克/毫升至為或約 西乂土上人A . 一〜〜/，工π从纠1 V，宅見/晕升， “為或約0.05毫克/毫升至為或約5毫克/毫升，更較 2的為或約01毫克/毫升至為或約2毫克/毫升，最佳的 為或約1毫克/毫升。 、在調配物中狐㈣濃度較佳的是或約1G微克/毫升 2或約_微克/毫升，更佳的為或約20微克/毫升至為 :500微克/毫升，更較佳的為或約3〇至為或約_， 取佳的為或約44、88或264微克/毫升。 本發明調配物較佳的具有pH介於約3〇及為或約5〇 ，更佳的為或肖3.7 < 4.7。較佳的緩衝液是醋酸，盆含 =佳的抗衡離子（counten〇n)納或卸離子。酷緩 :是技藝中所熟知的，總溶液中的緩衝液濃度可介於在； 、、勺 5 mM、9.5 mM、1 〇 、sn '/γ ^ mM 50 100 rnM> 150 M MO ^以及500 ^，該緩衝液濃度較佳的是 或約1GmM，尤其較佳的是緩衝液醋酸離+Π)福，pH為 3.5 ± 0.2 或 4.5 土 0.2 。 局 本發明組成物中的抗氧化劑（ 、、曲危* ;从η ^人例如甲硫胺酸）較佳的 /辰度為或約0.01至為或約5〇 Γ ^ 笔兄/笔升，更佳的為或約 〇·〇5至為或約0.3毫克/毫升，最 ^ 1土的為我約〇·1毫克/毫升。 在液恐調配物中等滲遷齋丨Γ w…… 甘露糖醇）濃度較佳 的為或約0.5毫克/毫升至為或 十从，一士 ρ ⑽笔克/*升，更佳的為 或为1 *克/¾升至為或約250毫 幼in古士 /古也、 毛見/笔升’更較佳的為或 、、、、：10笔克/¾升至為或約1〇〇毫克 毫克/毫升。 克^升’攻佳的為或約55 28 1272948 本發明包括液態調配物，較佳的用於注射的溶劑是水。 液態調配物可以是單一劑量或多重劑量，那些本發明 打算作為多重劑量使用之液態干擾素調配物較佳的含有抑 菌物，諸如酚、m-甲酚、，甲酚、甲酚、氯甲齡、苯曱 醇、對經苯甲酸烧醋（甲基、乙基、丙基、丁基和相似物 )、羥基氯笨胺、陽性皂、去水醋酸納以及硫柳汞（ thimerosal )。尤其較佳的是酚、苯甲醇和甲酚，更佳 的是苯甲醇。該抑菌物藥劑的用量是在一段多重劑量注射 的期間裡（可以是或約12或24小時至為或約12天，較 佳的為或約6至為或約12天）使其能有效維持調配物實 質上無菌（適合於注射）的濃度。該抑菌物濃度較佳的是 或約0.1% (抑菌物質量/溶劑質量）至為或約2 〇%，更佳 的為或約〇_2%至為或約1 ·〇%。在苯曱醇的例子中，尤其 較佳的濃度是〇·2或0.3%)。但是，防腐劑（例如苯曱醇 )的使用）並不限於多重劑量的調配物，也可以添加至單 一劑量的調配物中。 本發明調配物中干擾素的範圍包括重建（ reconstitution)所獲得的量，濃度從約1〇微克/毫升至約 50耄克/宅升，雖然較低或較高的濃度是可以使用的且取 决於打算的遞迗工具，例如，溶液調配物會因皮膚藥貼的 、肺部的、經黏膜的或滲透的或微泵的方法而異。干擾素 /辰度較佳的是或約5.0微克/毫升至為或約2毫克/毫升，更 佳的為或約1〇微克/毫升至為或約i毫克/毫升，最佳的為 或約30微克/毫升至為或約100微克/毫升。 29 1272948 本發明调配.物較佳的是在包裝經過24個月後保有至少 是或約6〇%的干擾素活性，更佳的至少為或約70 %，最佳 的至少為或约80%。 ☆在一更佳的具體實例t，本發明提供一種製造前述液 態醫藥組成物的方法。 在一更佳的具體實例巾，本發明提供一種製造經套穿 的（packaged)醫藥組成物的方法，其包括放置了-如二 述含有活性成分和賦形劑的溶液。 在一更佳的具體實例中，本發明提供一種做為人類較 藥上使用的製造物品，其包括一含有上述醫藥組成物的 ： 瓶’以及-說明此溶液可在第一次使用後存放一段為或約 -十四小時或更久時間的文字資料，較佳的該文 明該溶液可以存放至為或約12天。 、科說 在第-次使用多重劑量調配物之後，其可以存 用至少為或約24小時，較佳的至少為或約4 吏 更佳的至12天。在筮一；址m4 G天， -人使用该调配物之後，較 保存在低於宮、、西下r μ & 平乂彳土的應 子在低於…（即低於為或約25。〇，更 或約100 C，更伟的也-V、从a -於為 , 更佳的為或約2-8。。，最佳的為或約4 。 本發明調配物可出4，…丫 ° 籾j糟由包秸添加一經計算的賦 到緩衝溶液中然後添加干擾素的方法來製備。Ϊ 然後將所得到的溶液置於藥瓶、安瓶或。羽 項技藝者可以睁解此大、土 ‘於該 緊解此方法的變化，例如成分添 是否使用額外的添加物、調配物製備時的溫 '員序、 是可以因濃度以及所使用的投藥方式來最適化的因子PH都 30 Ϊ272948 在使用多重劑量的調配物中， 到含有活性成分（干擾素）的溶液中，或=物藥劑添加 或筒中，然後要使用的時二者有可：在-分 〉容液混合。 、/、 3有活性成分的 :發明的調配物本發明可以使用已知的裝 匕3廷些單一藥瓶系統 又枭 射哭普f叮m ㈣子包括自動注射器或筆狀注 m，可用於遞送諸如Rebiject@的溶液。 本案所主張的產物包括套裝的材所 需要的資訊，該套裝的材料還提供 ^理^門所 法2”:的材料提供給病人雙藥瓶、濕/乾性產物的用 二丄四小： = 以製備最終溶液並使用此最終溶液於 - ,s _ ll t在早—樂瓶的溶液產物中， =溶液使"二十四小時或更久的時間。本案 二乾圍的產物對於人類醫藥上產物的使用有用。 n = 配物μ清澈的溶液提供給病人，該溶 液=為單—次使用或重複使用多次，可以滿足病人單 一或厂人騎的治療，因此比現有方式提 的治療療法。 文万便 此處所述之安定的或經保存的調配物或溶液中的干擾 素可以根據本發明藉由許多遞送方法投藥給的病人，包括 SC或ΙΜ注射；皮膚的、經黏膜的、植入、滲透泵、筒、 U泵口服的或其他技藝中所熟知而習於該項技藝者理解 的方法。 術m樂瓶」係泛指可使干擾素維持在受控制的無菌 31 1272948 狀態的固體或液態形式中的容器。 包括安瓿、筒、泡妝勺继，. 斤用的樂瓶的例子 狀匕旋（blister packa这《ν' 社 干擾素經由注射石广 )或其他適合將 田，王射裔、泵（包括滲透的）、 、肺部或黏膜的嘖南J #…^ + g、皮膚藥貼 ]赁Μ遞迗給病人的容器。合 物以用於非腸胃的、 乍為套破產 技藝中所熟知及丁解的。 反；奴条的樂瓶是 本發明中的術語「治瘩 .^ ^ 助的影塑，勺把。 療」係私任何對於疾病形成有幫 形成。 ☆ % ♦生後緩和、減少、降低或減輕病理 ★包括㈣或異構物、突變形成的蛋白#、融合的蛋白 負广性街生物、活性片段或鹽之本發明的醫藥 可有效用於以此多肽治療的診斷、預防以及治療（局部或 全身）以床徵兆。此臨床徵兆包括（例如）中樞神經系統 的（CNS)、腦的及/或脊椎神經的失調或疾病，包括多發 性硬化，自體免疫疾病，包括風濕性關節炎、牛皮癬、

Cr—氏病；以及癌症，包括乳癌、***癌、膀胱癌、 腎癌以及結腸癌。 此處所引用的參考文獻（包括期刊文章或摘要、已公 開或未公開的美國或外國專利申請案、已核准的美國或外 國專利或其他參考資料）係以其全文併入本文做為參考， 包括該引用文獻中所有的數據、表、圖以及内文。此外， 此處所引用的文獻中索引的文獻全文也併入本文做為參考 〇 參照已知的方法步驟、習知方法步驟、已知方法或習 32 1272948 :法並不思味著任何本發明的方面、說明或具體實例已 被相關技藝所揭示、教示或提及。 前述的特定具體實例可完整的顯現本發明的一般本質 ’使其他人可以藉由實施技藝中的技術㈣（包括此處所 引用的麥考文獻内容）纟易的修飾及/或調整各種應用，這 樣的特定具體實例不需經過度實驗.、不偏離本發明的基本 概念。因j：匕，基於本文的教示，這樣的調整和修飾是在所 揭示的具體實例之均等意義範圍内啲。應瞭解，本文的用 語或術語是用於描述的目的而非限制用，說明書中的術語 或用語的解釋應根據本文的教示以及習於該項&藝者的一 般知識來解讀。 【實施方式】 器中液熊單二^劑量之不含 素厶-1 a言周西Ρ.物— 1二1勒免必相容性測μ 進仃初步貫驗以確認一些像抗氧化劑以及表面活性劑 的賦形劑的保護效果，因為預期去除人類血清蛋白素（ HSA )的產品會影響產品的氧化作用、聚集體的形成以及 吸附到表面。 將干擾素万-la調配為濃度44微克/毫升及88微克/毫 升於醋酸鈉緩衝液中’其含有54 6毫克/毫升甘露糖醇以 及一些賦形劑，諸如〇.4% HSA、〇.〇12% Η硫胺酸、吐 溫 20 ( 0.005%、〇.〇〇7%、〇 〇ι%)、ρ〇ι__ 188 ( 0.05%、0.1%、〇.5% )。將不同的組合放置於有壓力（ 33 1272948 stresSlng)環境下（存放 从m / L或震盪之）並測試其1仏 作用（藉由RP-HPLC)以月取隹A 氧化 及t集作用（藉由SE-HPLC)。 ，DEP]以及·2概述了存放於_兩週後的氧化作 σ聚集仙程度。對每-種表面活性劑來說，干擾素r 188#)兩/重又測试的表面活性劑（吐溫20以及P〇1〇Xamer 丄以）的組合顯示了與澧声舶 辰度相關的氧化作用的增加（ DEP-1、#心6和#7-9的组人）·於、曲由 ^ 。，於濃度 〇.5〇/〇 的 P〇l〇xamer 188 (也稱為 piuronic f_68 痞 f Μ、〇士 / H68)時，藥物完全被降解 (表DEP-1、#9 )。如預期的，σ+、、西π各 ^ 1吐/皿20有較高的降解速率 ’其係因為氧化了合成作用中以殘 ^ Τ Μ殘餘物存在的物質（例如 過氧化氫）。 經40°C儲存（表DEP-2)者，*主工 」有 兩表面活性劑於不同的 測試濃度下的並不影響聚集程度。

表DEP-1儲存於40〇C後的氧( %)，以Rp_HpLC #3 #4 #5 #6 #7 #8 #9 #10 #11 IFN44 IFN 44 mcg+0.4% HSA (目前 IFN 44 mcg+〇.〇12% L- IFN 44 meg IFN 44 meg IFN 44 meg IFN 44 meg IFN 44 meg IFN 44 meg IFN 44 mcg+0.012% L-Met+0.007% IFN 44 mcg+0.012 L- 9 4 n • m. =無法測量，因為完全降解 3.5 2w 6.5 5.5 6.2 6.0 7.0 8.7 6.9 8.0 n.m. 6.9 7.6 34 1272948

表DEP-2儲存於40°C後的總聚集體（％)，藉SE-HPLC T=0 2w #1 IFN44 2.6 2.8 #4 IFN 44 meg 2.4 2.1 #5 IFN 44 meg 2.8 2.0 #6 IFN 44 meg 2.6 2.0 #7 IFN 44 meg 2.5 2.9 #8 IFN 44 meg 2.5 2.5 #9 IFN 44 meg 2.6 2.9 表 DEP-3 顯示使用其 Critical Micellar Concentration (CMC )的兩表面活性劑（吐溫20以及Poloxamer 188 (F-68 ))可幫助防止由五分鐘震盪所引起的聚集作用。

表DEP_3五分鐘震盪後的總聚集體（％)，以SE-HPLC T=0 五分鐘震盪 #1 IFN 44 meg 1.6 2.5 #3 IFN 44 meg +0.012%L-Met 1.4 2.4 #10 IFN 44 meg +0.012%L-Met +0.007%吐溫 20 1.4 1.3 #11 IFN 44 meg +0.012%L-Met +0.1%F-68 1.3 1.3 1.1.1 物理-化學特性 已知對藥物品質具重要性的物理-化學特性是氧化作用 以及二聚物/聚集體的量，這些特性都在相容性分析中被考 慮’總結如上。 35 1272948 1.2賦形劑 1 ·2· 1 10 mM醋酸納緩衝液，5 含有54.6毫克/毫升甘露糖醇做為等滲壓劑的ι〇 _ 醋酸鈉缓衝液（pH 3.5)會安定化產物，如目前上市產品 (Rebif@)(前一發明）及EP 759,775中所述者。 L2.2 Poloxamer 1 8 8

Poloxamer 188 (或 Phrenic F_68 )是以濃度 〇」％ ( Critical Micellar C〇nCentration)包括在調配物中的，以防 止在製造過程中容器表面吸附了藥物物質；較高的濃度會 對產物的安定性（氧化作用較高）有負面影響；較低濃度 對限制吸附的效果較小。

Poloxamer 188對於抑制藥物在製造過程中吸附作用的 效果可由下面的分析證明：將含有44微克/毫升干擾素冷_ 1a的溶液與二種不同濃度的表面活性劑（吐溫2 〇或 Poloxamer 188)或HSA混合，模擬製造過程；在不同步 驟（混合、無菌過濾、填充）取樣並用定量rP_HPLc方 法測試之。 收取下列樣品： •過濾前（BF) •第一次過濾後（AF1 ) •弟一次過濾、後（AF2) •填充後（T=0時完成的產物） 結果顯示在表DEP-4且以回收（％ )對起始值（即過 36 1272948 濾前混合的溶液）表示之：對於製造時藥物物質吸附的肪 止，Poloxamer 188比吐溫20更有效，但是跟HSA —樣有 效0 表DEP-4製造時干擾素泠-1这回收％ 無HSA/無 表面活酬 HSA 0.003% 吐溫20 0.007% 吐溫20 0.02% 吐溫20 0.05% F-68 0.1% F-68 0.2% F-68 AF1 97.8 97.5 98.2 97.7 99.1 98.3 98.6 98.9 AF2 94.5 97.3 96.3 96.6 97.6 97.0 98.4 98.3 T=0 93.8 96.9 95.8 95.7 96.3 96.5 97.0 98.0 在加速條件下（4(Γ(：兩週）測試從不同供應商得到的 不同級Poloxamer 1 88的氧化產物來決定所用的品質··選 擇得自BASF的Poloxamer 188，因為其有較少的氧化作用 並且是醫藥級的，結果顯示在表DEP-5 : 表DEP-5含有0·1% Poloxamer 188 (不同的品質和供應商）之 調配物中偵測到的氧化形式％ 供應商 品質 T=0 40°C 一週 40°C 兩週 BASF 醫藥級 2.6 - 3.2 Fluka GC用 - 3.8 4.7 Sigma 生化用 - 3.2 4.4 1.2.3 L-曱硫胺酸 L-甲硫胺酸（L-Met)係以濃度0.012%包含在調配物 37 1272948 此/辰度的效果係顯示為與不含

中以限制氧化作用， ! L-曱硫 ’較高濃度的（〇·〇5%、 效果。40CC儲存時所偵 表_含有不同濃度L-曱硫胺酸⑴胸）之干擾素^調配物中

IFN^la44^ + 0.012% L-Met IFNP-la44^ +〇.〇5%L-Met IFNNa44 微克 +0.1%1^黯 氧化形式。/〇 在調配物形成期間，L-曱硫胺酸做為抗氧化劑的效果 係用三個月的安定性數據（於2-8〇C以及25 土 2〇C)確認 ，產生自含有L-甲硫胺酸與表面活性劑的調配物：L_曱硫 胺酸在濃度0·012%可以作為有效的抗氧化劑，並且可以確 保與目前產物可相較的安定性（見圖1 2及丨3 )。 JLU_遇配物形成 新的不含HSA之干擾素yj _ia調配物的形成係著重在 最末容器的初步檢測結果的確認（L-曱硫胺酸做為抗氧化 劑的效果，添加P〇l〇xaxner 1 88以防止製造時的損失）。 製備44微克/毫升以及88微克/毫升的干擾素溶 38 1272948 液（含54.6笔克/ ¾升甘露糖醇於醋酸鈉緩衝液中 ，pH 3.5) ’並且包括下列賦形劑： •吐溫 20 ( 0.003%、〇·〇〇7%、〇 〇2%) • Poloxamer 188 ( 〇·〇5〇/0、〇·! %、〇·2% ) • L -甲硫胺酸（〇 %、〇 · 〇 12 % ) • HSA ( 0.4% ’目前的調配物，以"—"表示） 调配物組成物的研究顯示在表DEp_7。

調配物係根據下面所描述的方式製備： 曰90毫升的各調配物係在無菌條件下製備，藉由將所需 量的：形劑（溶於WFI)與藥物物質（干擾素点七）混: ’接著將調配物以〇·22微米的膜過濾、（過濾兩次，經兩個 39 1272948 膜過濾器），且將〇·5毫升的各溶液填裝入

Hypak玻璃注射器中，一批次量約][8〇個注射器 宅升的 然後將調配物存於2-8°C、25 ± 2〇c及4〇 測試安定性至1 2週（存於40 ± 2〇C的描口目，丨r C ’並 J银則至6週）。 在形成（development)時使用下面的分析和 、。 一生物一致性（CPE生物分析） 法： 分析（RP-HPLC方法） 氧化作用產物（RP-HPLC方法）

二聚物/聚集體（SE-HPLC方法以及SDS_pAGE) Ρί1 (電位法） 〆令透壓度（crioscopic測量） 結果和其值顯示在表DEP-8至DEP-17

40 1272948 — 25〇C 0時間 2週 4週 8週 12週 IFN-1 11.7 11.2 11.5 11.0 10.7 IFN-2 11.5 11.8 11.3 11.1 10.7 IFN-3 11.3 10.7 10.6 10.4 8.9 IFN-4 11.8 10.8 11.8 12.2 11.6 IFN-5 12.1 12.3 12.5 12.0 10.9 IFN-6 12.1 12.9 12.0 11.5 10.5 IFN-7 12.1 11.2 12.7 12.8 11.3 IFN-8 11.2 11.1 11.5 11.6 10.9 IFN-9 11.2 11.0 12.1 11.5 10.9 IFN-10 12.0 11.7 11.8 12.5 11.6 4(TC 0時間 2週 4週 6週 IFN-1 11.7 9.4 9.4 9.6 IFN-2 11.5 10.0 9.7 9.6 IFN-3 11.3 7.8 7.2 6.0 IFN-4 11.8 10.9 11.4 13.0 IFN-5 12.1 12.1 13.1 12.1 IFN-6 12.1 11.6 12.7 11.4 IFN-7 12.1 11.0 12.2 12.0 IFN-8 11.2 11.0 11.6 12.0 IFN-9 11.2 10.1 9.1 7.1 IFN-10 12.0 12.3 12.0 11.0 由 線性回歸分析計算並 顯示於表DEP-9的斜率顯示了 含有吐 溫 20 ( #1、 2、3、9 )且存放於 40°C之所有調配物 其生物 活性降低； 生物活性 降低也在調 配物#3以及6 (最 向濃度 的表面活性 劑）觀察 到，存放於 25°C 以及 2-8°C。 41 1272948 表DEP-9 生物一致性的線性回歸分析（斜率以MIU/毫升x週表示） IFN-1 IFN-2 IFN-3 IFN-4 IFN-5 IFN-6 IFN-7 IFN-8 IFN-9 IFN-10 2-8〇C -0.07 -0.04 -0.12 -0.04 -0.03 -0.13 -0.06 -0.03 0.06 -0.06 25〇C -0.08 -0.08 -0.17 0.03 -0.10 -0.17 -0.02 -0.01 -0.02 0.00 40°C -0.32 -0.29 -0.83 0.20 0.05 -0.05 0.06 0.16 -0.67 -0.17 表DEP-10以RP-HPLC分析（微克/注射器） 2-8t 0時間 4週 8週 12週 IFN-1 23.4 21.5 22.8 21.2 IFN-2 22.9 21.4 22.2 21.1 IFN-3 22.4 20.8 20.8 20.2 IFN-4 22.9 22.4 23.1 21.2 IFN-5 23.6 23.3 21.7 22.2 IFN-6 23.1 21.4 22.9 21.2 IFN-7 23.0 22.8 23.4 22.0 IFN-8 21.2 20.0 23.5 20.0 IFN-9 23.0 21.7 21.6 22.1 IFN-10 22.8 22.6 22.7 23.2 IFN-11 45.6 43.9 44.3 44.7 25〇C 0時間 2週 4週 8週 12週 IFN-1 23.4 20.5 20.7 20.7 20.1 IFN-2 22.9 21.2 19.8 20.8 19.7 IFN-3 22.4 19.9 19.1 17.6 16.6 IFN-4 22.9 21.5 22.2 22.5 21.1 IFN-5 23.6 23.4 23.0 23.6 21.4 IFN-6 23.1 22.6 20.7 22.0 20.5 IFN-7 23.0 23.1 22.9 23.2 22.6 IFN-8 21.2 20.8 19.8 20.8 19.7 IFN-9 23.0 20.5 20.2 18.2 18.6 IFN-10 22.8 22.2 22.6 22.0 22.3 IFN-11 45.6 45.2 44.6 43.4 44.8

42 1272948

以線性回歸分析計算以及表DEp_ 示了儲存於-c之含有吐溫2〇 (#1、2、3斤、二。的斜率顯 有較高的I白皙士八4口丄 ）的調配物 的蛋白貝成分知失；同樣的趨勢可以在 调配物#5和ό觀察到。於2_8〇(：， ^ 么zL，凋配物# i、2、 溫 2〇) 、4、5 (含 Poloxamer m (3 土 以及9 (含吐溫2〇與 L_曱硫胺酸）有顯著的蛋白質成分減少。 ’ 表DEP_11試驗的線性回歸分析(斜率以微克/注射器χ週表示) IFN-1 IFN-2 IFN-3 IFN-4 IFN-5 IFN-6 IFN-7 IFN-8 IFN-9 IFN-10 IFN-11 2-8〇C -0.13 -0.11 -0.16 -0.11 -0.14 -0.11 •0.06 0.00 -0.07 0.03 -0.06 25〇C -0.19 -0.20 -0.44 -0.09 -0.15 -0.18 -0.03 -0.09 -0.34 -0.04 -0.10 40°C -1.10 -1.20 -2.00 -0.64 -0.64 -0.76 -1.00 -0.53 -1.70 -0.47 -0.92 43 1272948

表DEP-12氧化形式°/〇，以RP_HPLC 2-8〇C 0時間 4週 8週 12週 IFN-1 2.8 2.8 3.3 3.4 IFN-2 2.5 2.9 3.4 3.4 IFN-3 2.7 3.0 4.2 4.5 IFN-4 2.6 2.6 3.6 3.2 IFN-5 2.8 2.8 3.6 3.2 IFN-6 2.5 3.1 4.5 4.4 IFN-7 1.5 1.5 1.7 1.3 IFN-8 2.8 2.9 3.2 3.1 IFN-9 3.3 3.4 3.4 3.6 IFN-10 3.0 3.2 3.0 3.0 IFN-11 2.6 2.9 2.9 2.9 25〇C 0時間 2週 4週 8週 12週 IFN-1 2.8 3.0 3.1 4.2 4.3 IFN-2 2.5 3.0 3.1 3.4 4.6 IFN-3 2.7 3.5 3.9 6.7 6.8 IFN-4 2.6 3.0 3.1 4.7 4.8 IFN-5 2.8 3.0 3.1 4.4 4.5 IFN-6 2.5 3.0 3.2 5.3 5.7 IFN-7 1.5 1.7 1.9 2.0 2.3 IFN-8 2.8 3.1 2.9 4.1 4.3 IFN-9 3.3 3.4 3.5 3.9 4.4 IFN-10 3.0 3.0 3.2 3.3 3.5 IFN-11 2.6 2.8 3.1 3.2 3.4 1 40°C 0時間 2週 4週 6週 IFN-1 2.8 6.0 8.3 12.4 IFN-2 2.5 3.7 8.7 10.7 IFN-3 2.7 8.8 12.3 16.9 IFN>4 2.6 4.1 6.7 10.3 IFN-5 2.8 3.7 7.2 9.6 IFN-6 2.5 4.9 7.6 13.3 IFN-7 1.5 2.8 3.9 11.8 IFN-8 2.8 3.8 7.6 10.7 IFN-9 3.3 5.7 8.6 12.8 IFN-10 3.0 3.6 9.3 9.7 IFN-11 2.6 3.2 5.3 6.8 « 44 1272948 以線性回歸分析计异並總結在表DEP- 1 3的斜率顯示 了含有吐溫20的調配物具有較快的氧化速率（與含有 Poloxamer 188的調配物相較），且氧化作用程度取決於吐 溫20的濃度。 L-曱硫胺酸於不同測試溫度下抑制氧化作用的效果也 以調配物#9 (吐溫20+L-甲硫胺酸）與#3 (吐溫2〇 )相較 表示，以及調配物#10 ( Poloxamer 188 + L-曱硫胺酸）與#6 (Poloxamer 188)相車交表示0

表DEP-13 氧化形式的線性回歸分析（斜率以氧化形式%/週表示） IFN-1 IFN-2 IFN-3 IFN>4 IFN-5 IFN-6 EFN-7 IFN-8 IFN-9 IFN-10 IFN-11 2-8〇C 0.06 0.08 0.17 0.07 0.05 0.17 -0.01 0.03 0.02 0.00 0.02 25〇C 0.14 0.16 0.38 0.21 0.16 0.29 0.06 0.14 0.09 0.04 0.06 40°C 1.60 1.50 2.30 1.30 1.20 1.80 1.60 1.40 1.60 1.30 0.74

表 DEP-14 總聚集體（％)，以 SE-HPLC 或 SDS-PAGE 2-8〇C 0時間 4週 8週 12週 IFN-1 0.8 0.5 0.7 0.5 IFN-2 0.8 0.4 0.7 0.3 IFN-3 1.1 0.6 0.9 1.2 IFN-4 1.2 0.9 1.4 1.7 IFN-5 1.0 1.4 0.9 1.6 IFN-6 1.1 1.8 0.9 1.5 IFN-7* ^3% <3% <3% <4.5% IFN-8 1.2 1.6 1.2 2.0 IFN-9 1.7 1.4 1.7 1.2 IFN-10 1.4 1.3 1.3 1.3 IFN-11 1.4 0.9 0.4 1.7 f 45 1272948 25〇C 0時間 2週 4週 8週 12週 IFN-1 0.8 0.4 0.2 0.2 0.3 IFN-2 0.8 0.4 0.1 0.3 0.0 IFN-3 1.1 0.6 0.3 0.3 0.5 IFN-4 1.2 1.2 0.6 0.9 0.9 IFN-5 1.0 0.6 0.8 0.4 0.9 IFN-6 1.1 0.7 0.9 0.6 0.8 IFN-7 ^3% <3% <3% <3% <4.5% IFN-8 1.2 0.8 0.9 0.4 0.9 IFN-9 1.7 0.6 0.9 0.6 0.5 IFN-10 1.4 0.5 0.7 0.5 0.5 IFN-11 1.4 1.1 0.9 0.5 1.4 40°C 0時間 2週 4週 6週 IFN-1 0.8 0.5 0.4 0.9 IFN-2 0.8 0.6 0.6 0.8 IFN-3 1.1 0.7 0.5 0.6 IFN-4 1.2 1.4 0.6 1.1 IFN-5 L0 0.9 1.1 1.4 IFN-6 1.1 1.1 1.2 1.4 IFN-7 ^3% <3% ^3% <4.5% IFN-8 1.2 0.8 0.7 0.6 IFN-9 1.7 0.8 1.0 0.6 IFN-10 1.4 0.8 1.4 1.0 IFN-11 1.4 1.3 1.2 1.8

以線性回歸分析計算並總結在表DEP -1 5的斜率顯示 了當儲存於不同溫度下時，總聚集體成分沒有顯著增加產 生0 46 1272948 表DEP-15 : 總聚集體的線性回歸分析（斜率以總聚集體%/週表示）

IFN-1 IFN-2 IFN-3 IFN-4 IFN-5 IFN-6 IFN-8 IFN-9 IFN-10 IFN-11 -0.01 -0.03 0.01 0.04 0.04 0.01 0.05 -0.03 -0.01 0.01 -0.04 -0.05 -0.04 -0.03 -0.01 -0.03 -0.03 -0.07 -0.05 -0.01 0.01 0.01 -0.09 -0.07 0.07 0.05 -0.10 -0.15 -0.03 0.07 表 DEP-16 於 2-8°C 的 pH 值

2TC 〇時間 4週 8週 12週 24週 104週 IFN-1 3.7 3.7 3.7 3.7 一 變 祕2 3.7 3.7 3.7 3.7 • IFN-3 3.7 3.7 3.6 3.6 • IFN-4 3.7 3.8 3.7 3.6 IFN-5 3.7 3.7 3.7 3.7 二 | IFN-6 3.6 3.7 3.7 3.7 一 3.7 IFN-7 3.6 3.5 3.6 3.6 • 3.6 IFN-8 3.6 3.6 3.7 3.7 3.7 IFN-9 3.6 3.7 3.6 3.7 參 _ IFN-10 3.6 3.7 3.7 3.7 _ 3.7 IFN-11 3.5 3.6 3.6 3.6 3.6 - 25〇C IFN-1 0時間 3.7 IFN-2 3.7 IFN-3 3.7 IFN-4 3.7 IFN-5 3.7 IFN-6 3.6 祕7 3.6 IFN-8 3.6 IFN-9 3.6 IFN-10 3.6 IFN-11 3.5 週.6.6.6.6r^r^vqr^.7r^.6 20λ^ολ^3·ο^ολ^ολ^ολ^ο^3·30λ^ 週 4 8週 3.6 3.6 3.7 3.7 3.7 3.6 3.6 3.7 3.6 3.7 3.6 12週 3.7 3.7 3.7 3.7 3.7 3.7 3.6 3.7 3.6 3.6 3.6 IFN-1 0時間 3.7 IFN-2 3.7 IFN-3 3.7 IFN-4 3.7 IFN-5 3.7 IFN-6 3.6 IFN-7 3.6 IFN-8 3.6 IFN-9 3.6 IFN-10 3.6 IFN-11 3.5 66667766676 2 3· 3· 3* 3· 3· 3· 3· 3· 3· 3· 3·^ 週- 沒有觀察 有 時 存 儲 到 4(TC 4週 3.7 3.7 3.7 3.7 3.6 3.6 3.6 3.7 3.7 3.7 3.5pH改變 6週 3.7 3.8 3.8 3.8 3.7 4.0 3.6 3.7 3.7 3.6 3.6

47 1272948 表DEP-17滲透壓度（〇SM/公斤） IFN-1 0.348 IFN-2 0.345 IFN-3 0.345 IFN-4 0.346 IFN-5 0.354 IFN.6 0.358 IFN-7 0.399 IFN-8 0.354 IFN-9 0.369 IFN-10 0.366 IFN-11 0.361 所測試之調配物的滲透壓度是適當的。

配 PH 基於調配物形成的結果，選擇了下列不含HSA的言 物·· • 44或88微克/毫升干擾素泠_la於醋酸鈉缓衝液中， 3.5，含有 • 5 4 · 6毫克/毫升甘露糖醇， • 1 毫克/毫升 Poloxamer 1 88 • 0 · 1 2毫克/毫升L-曱硫胺酸。 1.3.2過剩物 沒有使用過剩物。 1.3.3 物理化學以及4妨7¼皙 這些性質都在調配物形成分析中考慮到，如上所述 48 ^72948

目前的製備方、、木、& 藥物物質係直接與成=、、曰:製備實驗室規模的新調配物·· 業規模方法，以預知注射器填進:τ雙重過濾以模擬工 。注射器接著手工i μ 、、别無菌過濾接著管線過濾 的真“最後的“溶液。 母一個步驟的描述如下。 、乍口進仃。 1^2_趁免計算 獲得44微克/毫升溶 含量（毫克）： 而之干擾素点-la藥物物質ϋ D (毫克）=44微身/ Α = 3.96毫克 毛Χ 90毫升> 3960微克 之干擾素Ha t物物質Β的 相當於含量D (毫克） 體積（毫升）： Β (毫升）=3·96亳克：主體效f卜 獲得90毫升的44微克/毫升、六、貝（笔克/毫升）

體積（毫升）： 毛’合液所需之賦形劑溶液V * β (毫升） (ci^ 1公克/毫升） V (毫升）=90毫升 氣化鈉1 Μ溶；^ 在WFI製備1河的氫氧化納溶液 49 1272948 酸鈉.緩衝液，pH 3.5 將適量冰错醆加到WFi中，用】M Na〇H4 5〇%經稀

釋的醋酸調整 M ^ PH至3·5 土 〇·2，溶液用WFi成為最終體積 將、、二计异的賦形劑（甘露糖醇、吐溫20或p〇i〇xamer 188/ L-f硫胺酸）含量秤重並溶於所需量的G.G1 Μ醋酸 、〜街液中’ Ρίί 3·5 ;若需要，接下來可以用1Μ NaOH 或50%經稀釋的醋酸檢查並調整_至3·5 土 〇·2;溶液用 0·01 Μ醋酸鈉緩衝液成為最終重量。 _遷合藥物物皙沒济 將所而s B ( g )白勺干擾素沒_ j a冑物物質添加到所需 量的賦形劑溶液V(g)中，並輕輕攪拌至均句。 第一次過濾藥物物曾沒、t 將經混合的溶液卩〇·2微米耐綸膜（umP〇r ν66 0.2微 米，02.5公分，Pall)過渡，架設到不錄鋼支架上，在氮 氣壓力下（1 bar max)並收集進破璃燒杯中。 1」一4 · 8第二次過爐藥物物質滚t 將前〆次過濾的溶液於相同條件下再以新的〇2微米 耐綸膜過濾一次。 50 1272948 1.4.9填裝注射i 1毫升的玻璃注射器裡無菌裝填入〇·5毫升的最終溶 液。 1.4.10過程中的 ~------- 在整個過程中溫度保持在冷卻狀態下，使用冷卻的 W.F.I·並將賦形劑溶液和混合的溶液儲存在2_8。匸。 i施例~於自動注射器筒中的不含HSA干樁 .素沒一-1 a之液態吝#劑量調配物 當開發新穎的不含HSA之調配物時，開發筒中多重劑 量產品的需求增加，其目標在於減少目前注射器中市售產 品的HS A。多重劑量調配物可允許自行利用自動注射器投 樂而增加病患的方便性。 最常使用的抑菌物藥劑（0.3% 曱酚、〇·5〇/〇酚以及 0.9%笨甲醇）先是與活性物質一起被研究，並且與注射器 中的單一劑量配方（44或88微克/毫升的干擾素召-la、 54·6毫克/毫升甘露糖醇、1毫克/毫升p〇1〇xamer I”、 〇·12 *克/毫升L-甲硫胺酸於10 mM醋酸鈉緩衝液中，pH 3·5) 相較；觀察到如下： 包含各抑菌物藥劑（以常用於防止微生物污染的濃度 )使得氧化形式增加以及使得聚集作用大幅增加； 0·3% I 曱酚以及混合 0.5% 酚與 0.1% P〇l〇xamer ι88 使得聚集作用大幅增加。 51 1272948 根據預調配時所得到的訊 苯甲醇和酚（不入P〗 々风无者重在 (負丁妒+ erI88)以及額外的抑菌物藥劑 性越物子、本乙醇）；EDTA也與苯甲醇-起被研究：活 作用和聚集❹是主要被觀察到的降解途徑 。己勿中本甲醇含量的減少可增加產物的有效期。 0 有”他在此訏期被研究的保存劑並沒有顯著改盖產 口口的安定性。 σ 在調配物形成最後，得到下列候選多重劑量調配物： 調配物β_ 264微克干擾以·la、163 8毫克甘露糖醇 —笔克P〇1〇Xamer 188、0·36毫克L甲硫胺酸、6毫克 本甲醇於3毫升的10_錯酸納緩衝液中，阳35 調配物A - 264微券+提本〇 , 見干擾素召-la、163.8毫克甘露糖 :、3毫克Poloxamer 188、〇 %毫克l甲硫胺酸於2 7毫 =的U ^醋酸納緩衝液中，PH 3.5’與〇.3 4升的3% 本甲醇混合在刪中，得到最終多重劑量調配物。 每一個候選調配物進行三個實驗室規模的批次並測試 :定性指示方法至六個月：兩種儲存⑨2TC的候選調配 勿都沒有發生顯著的降解：在加速條件下（25〇c)發生的 主要降解作用是氧化作用。 在測试袁終’用可比fe沾^ 1 » 孕乂的女疋性狀態確認兩候選的多 重劑量調配物： 調配物B是-立即可用的多重劑量調配物， 2% 求甲醇； 調配物A是一含有〇.3%笨甲醇的多重劑量調配物，其 52 1272948 係由混合兩筒的内容物而得到（一個含有活性成分以及賦 形劑，一個含有以達到最終表現之所需量的苯甲醇）。 2.1研究的目標 本研究的目標是形成一不含HS A之干擾素/3-la多重 劑量調配物，於3毫升筒中有264微克，可允許使用自動 注射器投藥。 2.2實驗部分 2.2.1材料 干擾素-/3 _la ( Serono S.A.) 甘露糖醇 DAB，Ph Ειπ*，BP，USP，FCC，E421 (Merck) 冰醋酸 100 % GR ( Merck) 氫氧化納顆粒GR ( Merck )

Poloxamer 188 ( Lutrol F 68 DAC，USP/NF， BASF ) 生化用L-曱硫胺酸（Merck) 合成用m-曱紛（Merck) 合成用酴（Merck) 苯曱醇 Ph Eur，BP，NF (Merck) 氯丁醇（Aldrich) 苯乙醇（Sigma)

Sodium methylparaben BP? USP/NF ( Formenti ) 53 1272948

Sodium propylparaben BP? USP/NF ( Formenti ) EDTA 二鈉鹽（Fluka) 特純 1，2-丙二醇 DAB，Ph Eur，BP，USP (Merck) 乙腈（Merck) 三氣醋酸（Baker) 七氟丁酸（Pierce ) 2.2.2設備 HPLC 系統（Waters) 千禧32軟體（Waters) 滲壓計（Osmomat 030-D，Gonotec ) pH 計（mod· 654, Metrohm) 經校準的吸量管（Gilson)

UltiporN66 0.2 微米耐綸膜，FTKNF，0 4.7 公分（Pall) UltiporN66 0.2 微米耐綸膜，NR14225，0 14.2 公分（Pall) 不鏽鋼支架，0 4.7公分以及0 10公分（Sartorius) 不鏽鋼槽（S artorius ) C4 管柱 5 微米（0·46χ25 公分）（Baker) C4 管柱，Supelcosil LC-304 5 微米（0.46x25 公分）（Supelco) TSK 管柱，G2000SWXL ( 0.46x25 公分）（TosoHaas ) 54 1272948 2.3預調配物分析 先分析在最終容器内（3毫升的筒）與活性物質以及 不同賦形劑混合物混合之最常用的抑菌物藥劑（0.3% m-甲 酚、0.5%酚以及0.9%苯曱醇）：醋酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩 衝液/甘露糖醇、醋酸鹽猨衝液/甘露糖醇/L-Met/Poloxamer 188。就氧化作用（以RP-HPLC )以及聚集作用（以SE-HPLC )於40°C儲存時研究活性物質在不同環境中的相容 性。表1提供了在此初步期不同步驟之受檢測調配物的概 要。 比較添加了各抑菌物藥劑的影響與選自注射器單一劑 量形成系統的單一劑量配方（參考）（44或88微克/毫升 的干擾素/3 - la、54.6毫克/毫升的甘露糖醇、1毫克/毫升 的Poloxamer 1 88、0· 12毫克/毫升的L -甲硫胺酸，於10 mM醋酸納緩衝液中，pH 3.5 )。 表1 :干擾素沒-la多重劑量調配物的組成物（預調配物） 調配物 組成物 參照 Ace/Man/Plu/Metl E Ace/CR F Ace/PH G Ace/BA Η Ace I Ace/Man/CR J Ace/Man/PH Κ Ace/Man/BA L Ace/Man 55 1272948

Μ Ace/Man/PH Ν Ace/Man/Metl/PH 〇 Ace/Man/Met2/PH Ρ Ace/Man/Plu/PH Q Ace/Man/Plu/Met 1 /PH R Ace/Man/Plu/Met2/PH S Ace/Man/BA Τ Ace/Man/Metl/BA U Ace/Man/Met2/BA V Ace/Man/Plu/BA W Ace/Man/Plu/Metl/BA X Ace/Man/Plu/Met2/BA

Ace = 10 mM醋酸納缓衝液pH 3·5 ; Man = 54.6毫克/ 毫升；Plu = 1 毫克/毫升 Poloxamer 188 ; Metl 二 0·12 毫克 /毫升的L-曱硫胺酸；Met2 = 0.24毫克/毫升的L-甲硫胺酸 ;CR = 3毫克/毫升的曱酚；PH = 5 毫克/毫升的酚； BA = 9毫克/毫升的苯甲醇 2.4調配物形成 根據預調配時所得到的資訊，調配物的形成先是著重 在苯甲醇以及酚；也研究額外的保存劑（氯丁醇、笨乙醇 )以及與苯曱醇結合的 EDTA 。一個相較的調配物（MS-3)(對應於該新穎的不含HSA的干擾素冷-1 a單一劑量調 配物）也是調配在筒内並做為參考。 此階段所製備的調配物組成物（毫克/毫升）顯示在表 2至5 : 56 1272948 表2·含有苯甲醇的干援素召-la多重劑量調配物（組成物在毫克^毫升中) # 脈 甘露糖醇 Poloxamer 188 L-Met 苯甲醇 MS-3 (銬） 0.088 54.6 1 0.12 - Q.S.至1毫升 MS-13 0.088 54.6 1 0.12 1.5 Q.S.至1毫升 MS-14 0.088 54.6 - 0.12 1.5 Q.S.至1毫升 MS-15 0.088 54.6 1 0.12 3 q.s.至1毫升 MS-16 0.088 54.6 - 0.12 3 q.s.至1毫升 MS-17 0.088 54.6 1 0.12 4.5 Q.S.至1毫升 MS-18 0.088 54.6 - 0.12 4.5 Q.S.至1毫升 MS-1 0.088 54.6 1 0.12 9 q.s.至1毫升 MS-2 0.088 54.6 - 0.12 9 Q.S.至1毫升

表3. 含有酚的干擾素沒-la多重劑量調配物（毫克/毫升） # 厕 甘露糖醇 丙二醇 酚 mmmmm MS-4 0.088 54.6 - 5 q.s.至1毫升 MS-5 0.088 54.6 100 5 q.s.至1毫升 表4含有氯丁醇以及苯乙醇的干擾素糸la多重劑量調配物（毫办毫升) # IFN 甘露糖醇 Poloxame rl88 L-Met 氯丁醇 苯乙醇 醋隱緩讎 MS-35 0.088 54.6 1 0.12 1 - q.s.至1毫升 MS-34 0.088 54.6 1 0.12 - 1 Q.S.至1毫升 MS-34b 0.088 54.6 1 0.12 - 1 q.s.至1毫升

表5:含有EDTA的干擾素召4a多重劑量調配物（毫克/毫升) # IFN 甘露糖醇 L-Met Poloxamer 188 EDTA 苯甲醇 MS-32 0.088 54.6 0.12 1 1 2 Q.S.至1毫升 MS-33 0.088 54.6 - 1 1 2 q.s.至1毫升 MS-36 0.088 54.6 0.12 1 0.5 1 q.s.至1毫升 57 1272948 在調配物形成的最後’確認下列候選多重劑量調配物 調配物B - 264微克干擾素/9 -1 a於3毫升醋酸鹽緩衝 液中，pH 3.5，含有54.6毫克/亳升的甘露糖醇、1毫克/ 毫升的Poloxamei· 188、0.12毫克/毫升的甲硫胺酸以及 2毫克/毫升的苯曱醇（0.2%苯曱醇） 調配物A - 264微克干擾素/5 - ia於2.7毫升醋酸鹽緩 衝液中，pH 3.5，含有54.6毫克/毫升的甘露糖醇、1毫克 /毫升的Poloxamer 188及0.12毫克/毫升的L-曱硫胺酸， 與0.3毫升的3%苯曱醇於WFI中混合，得到最終多重劑 量調配物（0.3%苯曱醇） 2.5保存效果測試 含有不同濃度之苯曱醇（0.2%至〇·9%)的多重劑量調 配物係根據EP以及USP藥典來篩選其保存效果。 初步測試的進行係藉由選擇作為指標的金黃色葡萄球 菌、黑麴菌以及白色念珠菌：調配物本身的酸性pH是對 細菌（金育色葡萄球菌）有效的抑菌物的現象以及一些白 色念珠菌菌株可甚至在低pH值（pH約2 )中存活的事實 使得選擇白色念珠菌成為測試的關鍵指標。保存劑功效測 试之可接受的標準是使用Ep以及USP藥典中所描述的。 堡選調配物

Hil調配物 A 製備三組實驗室規模約14()筒/批次的批次；配方如表6 : 58 1272948 表6 :干擾素yS -ia多重 劑量調配物A的組成物

Poloxamer 188 L·甲硫胺睡'

微米耐綸 前後以及 將活性成分與賦形劑溶液混合，然後經0.22 膜過濾；筒中填充2.7毫升的最終溶液，在過濾 填充後取樣以監測過程中活性物質的損失。 儲存樣品並測試其安 25土2°C ( 3個月）以及4〇±2°C ( 1個月） 製備六組實驗室規模的批次的3%苯甲醇於WFi中 與含有活性成分的筒混合；該批次的組成物如表7 : 表7 : WFI中3%苯甲醇的組成物 苯甲醇 WH 30毫覔 Q.S.至1.0毫升 添加所需量之苯曱醇至WFI，然後經〇·22微来 Durapore膜過濾；筒中填充〇·5毫升以及最後以殺菌斧殺 菌。 將樣品存放於25土2。0並測試其苯甲醇成分以及ρΗ 一 個月。 59 1272948

2^6.2調配物B 製備三組實驗室規模的約筒/批次的批次；組成物 如表8 · 表8 :干擾素点-la多重劑量調配物]3的組成物 -----— Poloxamer 188 Ί-甲硫胺酸 pH 3.5 88微克 54.6毫克 1¾ 毫克 "qllTFlff- 將活性成分與賦形劑溶液混合’然後經〇 22微米的綸 膜過濾：筒中填充3毫升的最終溶液，在過濾前後以及： 充後取樣以監測過程中活性物質的損失。 、 儲存樣品並測試其安定性於2-8°C ( 6個月） 25土2°C ( 6 個月）以及 4〇±2°C ( 3 週）。 2 · 6.3 保存功效測試 兩候選調配物都根據EP以及usp藥典測試其保存 效。 力 2.7分析測試及方法 下面所描述的分析測試及方法已被用來監測實驗室規 模之調配物的安定性： •分析（RP-HPLC方法） •氧化形式（RP-HPLC方法） •總聚集體（SE-HPLC方法） 60 1272948 •生物活性（試管内生物分析） • pH (電位測量） •滲透壓度（只在T=0時）（冰點測定） •苯甲醇分析（GC) 2.7.1 結果 2.7.1.1_預調配物

在有壓力（stressed )( 40°C )的狀況下彳貞測到的氧化 形式以及總聚集體含量顯示在表9以及1 0 ·· 表9 :當儲存於40。(：（RP-HPLC)時干擾素泠-la多重劑量調配物中的 氧化形式％

調配物 組成物 T=0 3天 於 40°C 6天 於 40°C <參照 Ace/Man/Plu/Met1 3.0 - 4.2 E Ace/CR 2-8 2.7 - F Ace/PH 2.6 3.5 - G Ace/BA 2.6 6.3 - Η Ace 3.6 2.7 - 1 Ace/Man/CR 2.3 3.0 - J Ace/Man/PH 3.6 2.5 - Κ Ace/Man/BA 4.0 4.7 - L Ace/Man 2.9 2.3 - Μ Ace/Man/PH 2.9 - 6.3 Ν Ace/Man/Met1/PH 2.7 - 5.3 0 Ace/Man/Met2/PH 2.5 - 4.9 Ρ Ace/Man/Plu/PH 2.3 - 6.8 Q Ace/Man/Plu/Met1/PH 2.2 - 7.2 R Ace/Man/Plu/Met2/PH 2.1 - 4.2 S Ace/Man/BA 2.6 - 5.0 T Ace/Man/Met1/BA 2.7 - 5.0 u Ace/Man/Met2/BA 2.5 - 4.8 V Ace/Man/Plu/BA 2.5 - 5.0 w Ace/Man/Plu/Met1/BA 2.6 - 5.0 X Ace/Man/Plu/Met2/BA 3.0 - 6.2 61 1272948

Ace = 1 0 mM醋酸納緩衝液pH 3 ·5 ; Man = 54· 6毫克/ 毫升；Plu = 1 毫克/毫升 Poloxamer 188 ; Metl = 0.12 毫 克/毫升的L-甲硫胺酸；Met2 = 0.24毫克/毫升的L-曱硫胺 酸；CR = 3毫克/毫升的m-甲酚；PH = 5毫克/毫升的酚 ;BA = 9毫克/毫升的苯曱醇 表10 :當儲存於40°C (RP-HPLC)時干擾素召-la多重劑量調配物中的 總聚集體％ 調配物 組成物 T=0 3天 於 40°C 6天 於 40〇C 參照 Ace/Man/Plu/Met1 3.2 - 3.2 E Ace/CR 1.8 9.4 8.5 F Ace/PH 2.2 39.8 9.4 G Ace/BA 2.0 4.7 7.2 Η Ace 2.8 2.5 1.7 1 Ace/Man/CR 2.4 15.6 20.1 J Ace/Man/PH 2.0 2.3 2.1 Κ Ace/Man/BA 2.3 3.6 4.5 L Ace/Man 3.0 3.2 2.3 Μ Ace/Man/PH 2.2 - 4.4 Ν Ace/Man/Met1/PH 2.2 - 5.8 Ο Ace/Man/Met2/PH 2.3 - 8.8 Ρ Ace/Man/Plu/PH 2.2 - 40.3 Q Ace/Man/P1u/Met1/PH 2.3 - 46.3 R Ace/Man/Plu/Met2/PH 2.3 - 35.9 S Ace/Man/BA 2.5 - 3.4 Τ Ace/Man/Met1/BA 2.6 - 5.4 U Ace/Man/Met2/BA 1.4 - 3.0 V Ace/Man/Plu/BA 2.9 - 4.8 W Ace/Man/Plu/Met1/BA 2.9 - 5.8 X Ace/Man/Plu/Met2/BA 1.6 - 5.8

Ace = 10 mM酷酸納緩衝液pH 3.5 ; Man = 54.6毫克/ 毫升；Plu = 1 毫克/毫升 Poloxamer 188 ; Metl = 0.12 毫 克/毫升的L-曱硫胺酸；Met2二0.24毫克/毫升的L-甲硫胺 酸；CR = 3毫克/毫升的m-曱酚；PH = 5毫克/毫升的酚 62 1272948 δΑ = 9毫克/毫升的苯曱醇 添加各抑菌物藥劑（濃度為常用的濃度以防止微生物 污染）使得氧化形式增加及促進聚集作用的顯著增加（與 單一劑量調配物（參照組）相較）。 0.5°/〇的酚與0.1%的Poloxamer 188的組合負向的影響 產物的安定性，因為有約40%的聚集體形成（調配物^ 。0.3%的m-甲酚被排除以進一步形成，因為聚集物 的増加（調配物I )負向的影響產物的安定性。 調配物形成 所有的安定性數據（原始數據）收集在區段表中；使 用線性回歸分析來評估該數據。 含有茉甲醇的調配％_ 高濃度的苯甲醇（0.9% )合g石t y ， 一 ”曰員面的影響產物安定性（ 就氧化形式以及聚集體成分兩者 ,^ 1 ^ ^ • ^ J σ J ，如圖1至ό所示 ，含有0.9°/。苯甲 用增加較多，如圖 在壓力（stressed)狀態下（4〇〇c) 醇的調配物（MS-1以及MSj)氧化作 1所示； 牡刀口返 啊順」的狀態下（25。〇，所有 本甲醇的調配物之氧化作用增加較多（與不含苯 配物（MS-3,參照組）相較），如示； 63 1272948 經過長期的餘存（2tC)者，在 調配物（购以及Ms·”中觀察 氧=甲醇的 ;偵測含有苯甲酶你μ A ]礼化作用速率 (圖3)。 ·；观之調配物的可相較降解速率 至=♦集體的含量，觀察到下列·· 在壓力（stressed )狀態下（4〇〇c) 〇·9〇/。苯甲醇的調配物（MS] m麻2)隹本到含有 ，如圖4所示； 艰木作用增加 在加速以及長期狀態下（25〇C及2_8。〇 物都沒有觀察到聚集作用的增加，如圖5及6所^斤有調配 在40。。觀察到含有〇 9%苯甲醇之調配物（二， ⑽—2)的生物活性降低；存放於25〇c以及2 以及 樣品並沒有觀察到該現象。 之同樣 所有溫度的儲存下都沒有觀察到效價降低。 所有/JHL度的儲存下都沒有發生改變。~ 酚 選擇之抑 調配物 盼（MS-4以及MS·”會負面影 “形式而言），而氯丁醇_以及笨的:二 乂及MS-34b )則顯示與參照組溶液（Ms_3， )有可相較的安定性，如圖7以及8所示：不"… 一至於總聚集體的含量’在有壓力的狀態下（· 祭到含㈣的調配物（MS_4 ^批5) ”㈣㈣著 64 1272948 曰加’如圖9所示；較低的溫度（25〇γ 右L以及2-8。〇則沒 有發生聚集作用的增加。 2 7 調配物 添加EDTA到含有〇·ι%_〇 2。/。苯甲酸& 32 本Τ知的调配物中（MS- -3 3、MS-36 )並沒有降低氧化作 )..._ 午礼化作用的程度（圖10 ，硯祭到含有0.1% EDTA以及〇 MS>32 > MS 3S W ^ , ·本甲醇之調配物（ MS-33 )在加速狀態下聚集物 :可相龄从政& K苯初3里增加（圖1 1 ) 相較的降解作用在2-8°C觀察到·· 師選分析的結果顯示至少濃度等 色念珠菌而古）& — m ^ 门不ϋ· 3% (就白 的本甲酵可滿足USP以及ΕΡ藥典的標準。

線性==的評估適用下列方式進行：每—批次都使用 到批次二：變：ΓΓ“差分析(―)以将 行正式的統計分析。，"儲存沒有硯察到變異性時，不违

於候選物 之前以及之後 樣品（在過濾 的干擾素/3 -1 a A 4備時從在程（in-process ) ’已完成的產物）中回收取得 65 1272948 總結在表1 1 :沒有紀錄到顯著的活性成分損失。 表11 :於候選物A製備時干擾素石-la回收％ RT-01 RT-02 RT-03 第1次過濾之後 98.6 99.7 98.0 第2次過濾之後 98.3 98.5 103.8 筒中的成品 98.4 97.5 100.7 2.8.1.2 活性藥物的安定柯 計算存放於不同溫度下之氧化形式含量的三個批次共 通的斜率以及截距；統計分析的結果顯示在表i 2 : 表12 :干擾素沒-la多重劑量候選物A (氧化形式）的統計分析結果 2-8°C ΊδΧ—--— 40°C 綜合斜率 (%/週） 綜合截距 (%) fe合斜率 (%/週） 綜合截距 (%) 綜合斜率 (%/週） 綜合截距 (%) 0.063 2.73 0.322 ~ 2.67 2.206 2.51 ---1 總聚集體量以及分析都沒有觀察到顯著的變異；因此 不進行正式的統什分析。三個批次的聚集體有不同含量是 因為使用不同層的主體來製備之故。 2^8.2候選盈』· 1·8·2·1 方t製備時—哲收 於候選物B製備時在ln_pr。⑽樣品（在過渡之前以 及之後，已完成的產物）中回收取得的干擾素石_la總結 66 1272948 在表15 :沒有紀錄到顯著的活性成分損失。 表I5 :於候選物B製備時干擾素点-la回收％ MS-01 MS-02 MS-03 第1次過濾之後~ 100.7 116.5 97.38 第2次過濾之後 101.2 114.9 98.82 同中的成品 100.6 112.0 95.76 n2 ·2—垄J鱼藥物的忠佘忖 對氧化形式程度所做的統計分析顯示下列： 计异3個批次的共通斜率以及截距，於4〇〇c ··綜合斜 率等於1.42%/週，以及綜合截距等於2/72〇/〇 ; °十^r 25 C時3個批次的共通斜率（p-值=〇·〇95 ) 口此’使用最糟情況者（批次MS-03 ):經過一個月的 儲存後觀察到氧化 化形式增加1.17% (0.27%/週）； )·、、、 十# C時3個批次的共通斜率（值=〇·〇ΐ6 ^ 使用最糟情況者（批次MS-03 ):經過一個月 的儲存後觀察到羞 、 — 化形式增加〇·2% ( 0.047%/週）。 攸女定性數擔击 著的變昱. 中〉又有觀察到總聚集體量以及分析有顯 _丄 礙仃正式的統計分析。 儲存時沒有_ 狀況下（40。〇 $到生物活性的降低，即使在有壓力的 在試驗的最终， 知到具有可相較的安定性概況之兩個 67 1272948 候選多重劑量調配物·· 候選調配物B 1 -立即可用的多重劑量調配物，其含 有0.2%苯甲醇； 候選調配物A是-多重劑量調配物，其含有〇 3%笨甲 酵，是《昆合兩冑（一個含有活性成分及赋形冑，一個含有 以達到最終表現之需要量的苯甲醇）成分之後得到。 —這些候選溶液也在較高pH(45 ± 〇2)下作測試，其 安定性概況並沒有顯著的改變。申請人發現此稍高的㈣ 調配物PH可增加皮下注射的局部耐受性。因此上述兩候 選溶液在PH為4·5或4,7時可以更容易被病患所接受。 AM調配物A的方法 ，其係將2 0公克的氫氧化 首先製備in氫氧化鈉溶液 鈉顆粒溶於500公克的W.F I•中 然後製備0.〇U M2 ^ 將1 32公^ 士 Sa歐鈉緩衝液，PH 3.5±0.2，其係 肘1.32 A克的冰醋 1 N NAOH ^ 4. 』、，勺匕800公克W.F.I.中。然後用

丄n ΑυΗ δ周整溶液的pH 為最終重量2〇〇〇公克 · - ·。接著使該溶液成 稀釋的醋酸調整 ' 用1 N NAOH或50%經 克。 ·5±〇·2 ’該溶液成為最終重量2〇〇〇公 最終溶液係如下製備。 秤重一經計算 ，

醋酸鈉緩衝液中，'形浏含里亚溶解於所需量的11 mM 若需要的話）；妙二3·5土〇·2’檢測溶液的pH並調整之（ < 添力口所需要量的τ ^ ^ / 68 1272948 CH〇細胞重組產生）·，最終曹旦於#山％丄., 、董里係藉由添加11 mM醋酸 鈉缓衝液達到，pH 3.5土0.2。 取一毫升此最終溶液以進行定量RP肌C測試（樣品 BF =第一次過濾之前）。 將最終溶液經裝在不鏽鋼支持器上的0.2㈣膜過渡 ，該溶液收集至玻璃燒杯中。 〜 取一毫升此最終溶液以進行定量RpHpLC測試。 將》亥最、合液如則一點所述經第二個裝在不鏽鋼支持 器上的0.2微米膜過濾。 、 取一毫升此最終溶液以進行定量RpHpLC測試。 將三宅升的玻璃筒填充入27毫升該最終溶液並塞住 此溶液已準備好可以和含有3%苯曱醇溶液（wfi中 的筒混合。 劑量-候i調配物B的方法 首先製備1N氫氧化鈉溶液，其係將2〇公克的氫氧化 鈉顆粒溶於500公克的W.F.I.中。 然後製備0.011 Μ醋酸鈉緩衝液，ΡΗ 3·5±〇2，其係 將1.32公克的冰醋酸加到約MOO公克w.f·；!.中。然後用 1 ΝΝΑΟΗ調整溶液的ΡΗ至ΡΗ35±〇·2。接著使該溶液成 為最終重量2000公克，ΡΗ再一次用1 Ν να〇η或5〇%經 稀釋的醋酸調整到3.5±0.2，該溶液成為最終重量2〇〇〇公 克。 69 1272948 取終溶液係 种重一經计异的賊形劑含| 4 j 3里並溶解於所需量的10 HIM 酉曰酉义鈉緩衝液中，pH 3 5 + 〇 2 —不 ' 撿測溶液的pH並調整之（ 右需要的話）；然後添加所需Iθ / rwr, 刀所而要量的r-h干擾素-/3-la (從 CH〇細胞重組產生）；最線會息 d $里係藉由添加1 OmM醋酸鈉 、友衝液達到，ΡΗ 3.5±〇 2。 取 曰愛升此轉溶㈣進行定量RpHpLC測試。 ^將取、、冬冷液經裝在不鏽鋼支持器上的"微米膜過濾 ，該溶液收集至玻璃燒杯中。 取一耄升此最終溶液以進行定量rP HplC測試。 將该最終溶液如前一點所述經第二個裝在不鏽鋼支持 裔上的〇·2微米膜過濾。 取一毫升此最終溶液以進行定量RP HPLC測試。 將三毫升的玻璃筒填充入3毫升該最終溶液並塞住。 此溶液已準備好可以和含有3 %苯甲醇溶液（WFI中 )的筒混合。 【圖式簡單說明】 圖1 :顯示了氧化形式的苜分比，其係存在於具有不 同/辰度苯甲醇的干擾素万_ 1 3多重劑量調配物中（貯存於 4〇°C 後）。 圖2 :顯示了氧化形式的育分比，其係存在於具有不 同；辰度本甲醇的干擾素石· 1 a多重劑量調配物申（貯存於 25°C 後）。 圖3 ··顯示了氧化形式的苜分比’其係存在於具有不 70 1272948 5辰度笨甲醇的干擾素/3 -1 a多重劑量調配物中（貯存於 2、8〇c 後）。 一 圖4 :顯示了總聚集體的百分比，其係存在於具有不 ’辰度笨甲醇的干擾素/5 -la多重劑量調配物中（貯存於 40〇C 後）。 、 _ 圖5 ··顯示了總聚集體的百分比，其係存在於具有不 ^ /辰度笨曱醇的干擾素冷-1 a多重劑量調配物中（貯存於 25〇C 後）。 、 ^ 圖6 ·顯不了總聚集體的百分比，其係存在於具有不 5 /辰度苯甲醇的干擾素冷_la多重劑量調配物中（貯存於 2、8。。後）。 、 ”、、員示了氧化形式的百分比，其係存在於含有替 、勺抑菌物樂劑的干擾素点-1 a多重劑量調配物中（貯存 於 25。(：後）。 、圖f ··顯示了氧化形式的百分比，其係存在於含有替 代的抑囷物藥劑的干擾素冷—la乡重劑量調配物巾（貯 於 2-8。(：後）。 、圖2 ··顯示了總聚集體的百分比，其係存在於含有替 代的抑囷物藥劑的干擾素/9 多重劑量調配物中。 圖1 0 ··顯示了氧化形式的百分比，其係存在於含有 EDTA的干擾素/5七多重劑量調配物中（貯存於25〇c後 )° 圖11 :顯示了總聚集體的百分比，其係存在於含有 干擾素万七多重劑量調配物中（貯存於抓後 71 1272948 圖1 2 :顯示了 〇·〇 12% L-曱硫胺酸做為抗氧化劑的 有效性（2-8。〇 。 圖1 3 :顯示了 〇.〇 12% L-曱硫胺酸做為抗氧化劑的 有效性（25 土 2。〇 。 參考文獻 1.Study Group. The Lancet 1998; 3525 1498-1504. 2. Clegg and Bryant, Exp. Opin. Parmacother 2001 ； 2(4)： 623-639. 3. Derynk R. et al.5 Nature 1980; 285, 542-547. 4. Familletti? P. C·，Rubinstein，S.，and Pestka，S. 1981 “A Convenient and Rapid Cytopathic Effect Inhibition Assay for Interferon,” in Methods in Enzymology，V〇l. 78 (S. Pestka, ed. )，Academic Press，New York，387-394; 5. Hultgren C5 Milich DR? Weiland 05 Sallberg M.(

1998 ) . The antiviral compound ribavirin modulates the T helper ( Th) 1 /Th2 subset balance in hepatitis B and C virus-specific immune responses. J Gen Virol 1998; 79 :2381-2391. 6. McCormick JB? King IJ? Webb PA? Scribner CL? Craven RB? Johnson KM5 Elliott LH5 Belmont-Williams R. Lassa fever. Effective therapy with ribavirin. N Engl J Med. 1 986 Jan 2; 314 ( 1 ) :20-6. 7. Mark D.F. et al.? Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81 72 1272948 (18 ) 5662-5666 ( 1984). 8. Pestka，S. ( 1986 ) ’’Interferon Standards and

General Abbreviations，in Methods in Enzymology ( S · Pestka，ed·)，Academic Press，New York 119，14-23· 9. Rubinstein， S.’Familletti， P.C.， and Pestka, S. Convenient Assay for Interferons. J. Virol 1981; 37，755-758. 10.Shepard Η. M. et al.? Nature 1981; 294? 563-565. 73

Claims (1)

1. 一—丨 , 年月日修(更)正本 ϋ拉 疮、申請專利範圍： 1 —插 h ^ r ^ —如 女疋化之不含H S A的液能醫蘿έ日士、仏 IFN- θ，甘山 仗心诸条組成物’其含有 中該調配物是合右综 壓劑以及抗4 & Τί A 、、、 1液、表面活性劑、等滲 久抗虱化劑的溶液，且1 。 υ仏减心ψ硫胺酸 根據申請專利範圍第丨項的組成物， 疋人頰重組IFN_沒。 μ IFN- /5 是::=:Γ彻第1項的組成物’其中該緩衝液 的量==組成：的沖在一特定。Η加或減。5單位 ，、中遠特定的pH是約3.0至約5.0。 3.5±=據申請專利範圍第3項的組成物，其。中該。H是 4 5 5·根據申請專利範圍第3項的組成物，其中該pH是 • 士 0 · 2 〇 6A 6.根據申請專利範圍第1項的組成物，其中該緩衝液 的濃度是約5mM至5〇〇mM。 7.根據申請專利範圍第ό項的組成物，其中該缓衝液 的）農度是約10 mM。 ^ 8 ·根據申請專利範圍第1項的組成物，其中該緩衝液 疋醋酸鹽緩衝液。 9·根據申請專利範圍第1項的組成物，其中該等滲壓 劑是甘露糖醇。 1 〇·根據申請專利範圍第1項的組成物，其中該等滲壓 ^的痕度是約0.5毫克/毫升至約5〇〇毫克/毫升。 74 1272948 11 ·根據申請專利範圍第10項的組成物，其中該等滲 壓劑的濃度是約55毫克/毫升。 12. 根據申請專利範圍第丨項的組成物，其中該表面活 性劑是選自 Pluronic⑧ F77、Plur〇nic F87、plur〇nic F88 以 及 Pluronic F68。 13. 根據申請專利範圍第12項的組成物，其中該表面 活性劑是Pluronic F68。 14. 根據申請專利範圍第丨項的組成物，其中該表面活 性劑的濃度是約0.01毫克/毫升至約10毫克/毫升。 1 5 ·根據申請專利範圍第1 4項的組成物，其中該表面 活性劑的濃度是約1毫克/毫升。 1 6.根據申请專利範圍第丨項的組成物，其中該抗氧化 劑的濃度是約0.01至約5.0毫克/毫升。 1 7.根據申請專利範圍第1 6項的組成物，其中該抗氧 化劑的濃度是約〇·1毫克/毫升。 1 8 ·根據申請專利範圍第1項的組成物，其中該干擾素 的濃度是約1 0微克/毫升至約8〇〇微克/毫升。 1 9·根據申請專利範圍第1 8項的組成物，其中該干擾 素的濃度是約44、88或264微克/毫升。 2〇·根據申請專利範圍第1項的組成物，其中該組成物 是水性溶液。 2 1 ·根據申請專利範圍第1項的組成物，其進一步含有 抑菌物藥劑。 22·根據申請專利範圍第2 1項的組成物，其中該抑菌 75 1272948 物藥劑是笨曱醇。 23. 根據中請專利範圍第21項的組成物，其 物藥劑的濃度是約0.1%至約2.0〇/〇 〇 Λ抑菌 24. 根據申請專利範圍第23項的組成物，其 物藥劑的濃度是約0.2或〇·3% 〇 Λ抑菌 25. -種用於製備根㈣請專利範圍第丄i 2 含HSA的安定化液態醫藥組成物的方法，其中該\之不 添加，經計算之量的表面活性劑、抗氧化劑以及=包括 到經缓衝的溶液中，然後添加干擾素（IFN)。 呤壓劑 26. 一種在無囷環培穷扭Θ ra 衣兄么封且在使用前適於儲存的办μ 其含有根據申請專利範圍第丨 4器， 藥上調配物。項中任-項的液態醫 其中該容器J 其中該容器肩 其中該容器是 27·根據申請專利範圍第26項的容器 一用於單一劑量投藥之預填充注射器。W 28·根據申請專利範圍第26項的容器 藥瓶。 29.根據申請專利範圍第26項的容器 用於自動注射器的筒（cartridge) 。 ° 3〇.根據申請專利範圍第274 28項的 容器是用於單—劑量或多重劑#投藥。 "f 31.-種用於多重劑量投藥根據申請專利 23項中任一項之醫遂j、仏a + 弟 2〇 j 貝之面樂組成物的套組，其中該 個容器填裝有根據申請專利範圍第i至 y有第- 醫藥組成物’以及第二個輪有抑菌物藥劑溶二-項 76