TW577736B - A pharmaceutical composition for cerebral function improvement - Google Patents

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577736 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 _五、發明説明U ) 發明背晷 1 .發明領域 本發明像鼷於腦功能增進劑，更特定言之，傺蘭於藉 由抑制腦水腫，保護腦功能、活化腦部代謝、或降低梗 塞程度而作用之劑。 2 .先前技藝之說明 近年來，罹患血管疾病或因車禍等造成腦損傷之人數 曰益增加。此等狀況常伴隨腦水腫及腦部代謝之損傷。此 趨勢可能綠於增加脂質攝取之飲食改變以及隨箸老年人 口增加而産生心血管疾病之絨染率增加。 損害腦功能之腦水腫定義為腦主質水含置之增加，其 造成腦容量之增加。腦水腫不僅造成神經元短暫的代謝及 功能損傷，亦增加顱内壓力，其造成腦循環舆代謝之損 傷。此等變化進一步使腦水腫惡化，可能造成有致命危 險之腦赫尼亞（b r a i n h e r n i a t i ο η ) 〇 腦水腫可分為二種病因學型式，其為血管原性水腫舆 細胞毒性水艟。 1·血管原性水腫：由於自血管漏出至腦組織之血清成分 停留在组織間而産生血管原性水腫，造成腦部微血管 之血液-腦障壁官能障礙。此型水腫典型伴随腦挫傷 ，腫瘤，膜腫或出血，及顱内血腫。 2·細胞毒性水腫··細胞毒性水腫由細胞膜損傷所造成， 該損傷係在腦本質内能量代謝遭損害時由乳酸鹽累積 引起。此型水腫典型伴隨著腦局部缺血，血氣過少及 (請先閲讀背面之注意事項^>-^?^頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 577736 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _ B7五、發明説明（> ) 乳酸毒症。 目前針對此等狀況之治療方法包括： (1) 靜脈内高滲性流體：高滲性流體藉由増加血液滲 透壓及因而吸引組織間隙液回至血管内使腦水腫獲得 纾解。然而，因血液滲透壓再度降低，在中斷高滲性 輸液後觀察到回縮現象。 (2) 皮質類固醇：皮質類固醇用於治療伴隨有腦腫瘤 或膿腫之血管原性水腫，因為彼等促進血液-腦障壁 之功能、安定細胞膜及抑制炎性反應及腦脊髄液之産 生。然而，已報導皮質類固醇造成缺血性神經元損傷 惡化。 (3) 抗氣化劑：抗氧化劑藉由清除缺血或細胞損傷所 産生之自由基而使腦水腫纾解。 (4) Ca-通道阻斷劑：預期Ca-通道阻斷劑抑制延遲之 神經元死亡，其因水腫存在下鈣流入腦神經元而産生 。然而，Ca-通道阻斷劑具有血管擴張效果，因而可能 因增加局部血流而惡化腦水腫。 (5) 巴比土酸鹽（Barbiturates):巴比土酸鹽保護腦 免於缺血，因彼等減低腦部代謝活性（腦部氣及葡萄糖 消耗）及因而抑制進一步乳酸鹽累積及酸毒症。然而， 巴比土酸係在亦造成呼吸抑制與心血管毒性之劑量下 執行此等有益之效果。因此，其使用時需小心呼吸與 循環之處理。 因此，開發有效用於預防與治療腦水腫且不具誘發回 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 577736 A7 B7 五、發明説明（> ) 縮反應或其他毒性之能力之藥物有其需要性。 本發明人已發現卢-羥基丁酸，其鹽及其酯（先前未評 估其在腦功能上之效果）藉由活化腦代謝而抑制腦水腫。 此等化合物亦發現藉由活化腦部代謝而保護腦粒腺體， 因而降低由缺血引起之腦梗塞程度。 因此，本發明提供腦功能增進劑，其藉由抑制腦水腫 、保護腦功能、活化腦代謝、或降低腦梗塞程度進行專 一性的作用。 發明槪沭 本發明提供含有下式（1)化合物作為活性成分之腦功 能增進劑： ch3—c—ch2—coo—r3 r2 (1) 其中Rig羥基時，R2表示氫原子； 或1^1與1?2合併形成氣基； R3表示氫原子、齡金屬、或單元、二元或三元醇 殘基，

Ri表示羥基及R2與R3表示氫原子時，化合物可 為由2-10個分子組成之寡聚物。 另言之，本發明目的偽提供含式（1)化合物之腦功能 增進劑，及更特定言之，提供含有羥基丁酸、/?-羥 基丁酸鈉及/或/?-羥基丁酸酯之腦功能增進劑。 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 577736 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（4 ) 式（1)化合物，如本發明腦功能增進劑之活性成分， 藉由抑制腦水腫、保護腦功能、活化腦部代謝或降低腦 梗塞程度而作用。 據此，本發明之另一目的偽提供含式（1)化合物作為 活性成分之腦水腫抑制劑，腦功能保護劑、腦部代謝活 化劑及腦梗塞降低劑。 圖式顯示本説明書下文中所述動物研究之結果。 第1圖顯示/?-羥基丁酸鈉或羥基丁酸甲酯劑量與 腦部水含量之關偽。 第2圖顯示羥基丁酸鈉劑量與存活時間之關偽。 第3圖顯示/3-羥基丁酸鈉投予之持缅期間與存活時 間之關偽。 第4圖顯示/3-羥基丁酸鈉對,腦部水含量之影遒。 第5圖顯示/3-羥基丁酸鈉對腦部Na+含量之影饗。 第6圖顯示羥基丁酸鈉對腦部K+含量之影響。 第7圖顯示羥基丁酸鈉對腦部ATP含量之影轡。 第8圖顯示/9-羥基丁酸鈉對腦部乳酸鹽含量之影繼。 發^里詳細説明 泠-羥基丁酸，式（1)之代表性化合物，為肝臓中脂肪 酸降解所産生之酮（如丙酮及乙醯基醋酸）。因羥基 丁酸於糖尿病患之尿液中測得及在饑餓時血液中化合物 含量增加，因此在Owen等人報導肥胖病患之代謝研究結 果以前被認為是代謝終産物且不為生命體所需〔J· Clin· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T ¢. 577736 A7 __B7_ 五、發明説明（7 ) 醇與2-丁烯-1,4-二醇，三元醇如丙三醇，及酸如酒石 酸與丁二酸。Ri表示羥基及R2與R3表示氫原子時， 化合物可為由2-10値分子組成之寡聚物。 式（1)化合物之例包括乙醯基醋酸，/9-羥基丁酸、 羥基丁酸鈉與/3-羥基丁酸酯％酯類可包括該等含有 甲醇、乙醇與丙三醇者（單_、二-與三-酯）。 本發明之腦功能增進劑可適用於治療伴隨腦損傷、腫 瘤或出血，顱内血腫或腦缺血後期産生之血管原性水腫 與因腦缺血、嚴重腦損傷或缺氣症引起之細胞毒性水腫。 本發明之腦功能增進劑較佳以腸胃外途徑用流體，恆 速地經靜脈輸入，但亦可經由腸内營養法或經由靜脈内 注射投予。此等劑較佳以水溶液形式使用。 通常，此等劑可以5 -500mM之濃度加至腸胃外途徑用之 流體中，及以1-2亳升/公斤/小時之速度投予，雖然最 佳濃度視病患體重而定。腸胄外途徑用流體中此等劑之 濃度範圍較佳為10-300mM,但更佳為20-lOOraM。 通常，此等劑較佳投予1-7天，雖然投予之持續期間 亦視病患之起始狀況與反應而定。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 式（1)化合物之腦功能增進效果以實例方式説明如下。 A):腦水腫抑制效果： 實例1: /9-羥基丁酸鈉之劑量與效果間之關傺 於雄性偉斯逹（Wistar)鼠（重158.8 士 1.2克）中研究 /3 -羥基丁酸鈉對兩側共通頸動脈結紮與分開所誘發之 腦水腫之抑制效果。製備濃度2.5, 5.0, 1 0, 20, 40， -9 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 577736 A7 B7 五、發明説明（8 ) 8 0 , 1 6 0與3 2 0 mM之冷-羥基丁酸鈉溶液，並以10毫升/ (請先W讀背®-之注意事項f 頁) 公斤/小時之速度投予5小時。據此，/?-羥基丁酸鈉 之投予劑量分別為 3.1, 6·3, 12.5, 25, 50, 100, 200 與4 0 0毫升/公斤/小時。 鼠在使用***麻醉下手術及藉由吸入異氟烷/氣化亞 氮/氣（0.5: 70:30)之混合物維持。於頸部進行中線 切割，並小心地剖開結締組織以避免傷及迷失神經，同 時暴露出兩側共通頸動脈。 為投予試驗藥物，***套管於右外側頸靜脈及使套管 之一端通過動物背部。之後共通頸動脈於兩點結紮（頭侧 面舆心臓倒面）及在二個結紮點間分開。将皮虜切割處 縫合及立即使用輪入泵（速度10毫升/公斤/小時達5小 時）藉由連缠式靜脈内輸入給予各鼠生理食鹽水或办-羥 基丁酸鈉溶液之一。 偽裝手術之鼠中，兩倒共通頸動脈以相同方式暴露 及使皮虜切割處密合而無動脈結紮與分開。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 完成投予時，各鼠被斷頭且立即單離出全腦。去除小 腦與延髓後，測量腦濕重。之後在105°C下將腦乾燥24小 時，再测量乾重c腦部水含量以下式計算： 腦部水含量（％) =(腦濕重-腦乾重）/腦濕重X 100 如第1圖所示。腦部水含量與>8 _羥基丁酸鈉之劑量 相豳。 (於第1圖中，BHBNa表示/5-羥基丁酸納，而BHBMe表 示羥基丁酸甲酯）。 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4^格（210 X297公釐） 577736 A7 _B7___ 五、發明説明（9 ) 偽裝手術之鼠之腦部水含量為79·56±〇·〇5%0在結 紮兩倒共通頸動脈後接受生理食鹽水之鼠中，腦部水含 量顯箸地高於偽裝手術之組，顯示腦水腫之開始。 於所有以石-羥基丁酸鈉處理之組中，腦部水含量低 於生理食鹽水之組，而其差異在劑量或更高時，在 統計學上是顯箸的（Ρ<〇·〇1)。此等結果顯示办-羥基丁 酸鈉對預防與治療腦水腫有效。 奮例2 : -羥基丁酸甲酯之劑量與效果間之開傺 藉由使用上述之相同程序，>5 -羥基-丁酸甲酯以劑量 25毫克/公斤/小時投予鼠達5小時。結果亦示於第1 圖中。 奮例3 使用指定量之下列成分製備根據適當程序之腸胃外途 徑用之溶液： 請 先 閱 讀 背 面· 之 注 意 事 項 奮 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 β -羥基丁酸甲酯 2 · 42 克 氯 化 鈉 2 · 05克 氛 化 鉀 1 · 47克 m 萄 糖 50 · 00克 此 等 成分溶於約9 5 0毫升水中， 及PH值以氫氣化鈉調 至 7 . 0〇 之後，將水加入溶液中使 之恰為1000毫升。所 製 得 之 溶液通過0.4 5撤米孔徑濾器過濾。 濾液充填於500 毫 升 玻 璃瓶中及經高壓滅菌取得不含沈澱 之無色腸胃外 途 用 溶 液。 -1 1 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 577736 A7 B7 五、發明説明（…） 使用此溶液，於實例1所述相同動物模型中評估β -羥基丁酸甲酯對腦水腫之影響。於所有以此溶液處理之 鼠中，腦部水含量低於生理食鹽水處理組者，顯示冷-羥基-丁酸甲酯抑制腦水腫之發生。 B ):腦功能保護效果： 實 (材料與方法） 1 .試驗動物 使用6-9週齡之雄性偉斯達鼠（Japan S,L.C· Ltd.)。 動物保持在23-310與55 土 15%濕度下，每日亮燈12小時 (自 7: 00至 19: 00)。餵食粒狀飲食（MF, Oriental Yeast Co., Ltd.)與自由飲用水。每組動物數目為6-8。 2 .試驗與對照藥物 1)試驗藥物 召-羥基丁酸鈉（純度9 9 . 8 % ) 研究所用批次之樣本在研究完成後作測試，並無顯現 品質之改變。已確認所製得之溶液安定至少一星期及彼 等以適當濃度製得。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 )對照藥物

(1) 生理食鹽水JP 製造商：Plant of 01 s u k a Pharmaceutical Co·, Ltd. (2) Grenol(商標名） 組成物（每100毫升之内容物） -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7 五、發明説明（Π ) 濃縮之丙三醇 10克 果糖 5克 氯化鈉 0 . 9克 製造商：Shimizu Pharmaceutical Co·,Ltd· 3. 投予 試驗之/?-羥基丁酸鈉劑量為50與100毫克/公斤/小 時（溶液分別以80mM與160mM製得），而Grenol以推薦之 臨床劑量（5毫克/公斤/小時）給予。所有組中，溶液 以5毫克/公斤/小時之速度經右外側頸靜脈中之套管 投入達1小時。另一組接受劑量1〇〇毫克/公斤/小時 之/3-羥基丁酸鈉3小時以研究投予期間對試驗藥物效 果之影饗。 4. 程序 鼠在使用***麻醉下進行手術及藉由吸入異氟烷/氧 化亞氮/氣（0.5: 70: 30)之混合物維持。於右外側頸 靜脈***套管，並將套管之另一端固定在背部肌肉上。 將指定劑量之試驗或對照藥物經套管投予，接著立即投 予氣化鉀UCN : 3毫克/公斤）。存活時間定義為投予氡 (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 0 差 隔誤 間準 之標 吸土 呼值止 均 J 平 停為 始析示 開分表 至計據 鉀統數 化 5 藉 異 差 之 間 組 向行 單進 用 ， 使時 由異 差在 之設 著度 顯程 間著 組顯 得 〇 測驗 〇 試 性較 著比 顯重 其多 驗、 試tt 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 577736 A7 B7 五、發明説明（a ) (結果） 第2圖顯示/3-羥基丁酸鈉劑量與存活時間之闋偽， 而第3圖顯示投予持續時間與存活時間之關傺。 藉由以羥基丁酸鈉50或100毫克/公斤/小時處理 1小時之存活時間相較於生理食鹽水接受組被顯著的延 長（58.8土2,4及58.8土1.2秒78.44.6士81.6秒；第2_) 。雖然以Grenol處理之鼠亦較生理食鹽水接受組存活更 久，其差異並不具統計學上之顯著性（52.8 土 2.3秒vs 44 · 6 土 1 · 6秒；第 2 圖）。 以100毫克/公斤/小時/9-羥基丁酸鈉處理3小時之 鼠之存活時間與處理1小時之鼠並無顯著差異（6 1.0 土 1.6 秒 vs58.2 士 2.2秒；第 3 圖）。 咸信氟化鉀藉由抑制電子傳輸条統之氧供給與經由抑 制粒腺體細胞色素氧化酶阻斷AT P産生來表現其細胞毒 性。已報導抗缺氧機轉可包括促進腦部葡萄糖攝取，活 化粒腺體丁二酸氧化酶条統及促進腦部血流增加。-羥基丁酸，於本研究之試驗劑量下顯著地抑制腦部水含 量之增加，其係藉由兩側共通頸動脈結紮（B L C L ) 6小時 誘發。在相同之劑量下，化合物在氰化鉀投予後顯著地 延長存活時間。相反地，Grenol處理組相較於生理食鹽 水處理組並未顯現存活時間顯箸的增加。基於此等發現 ,/9 -羥基丁酸之等滲性溶液可藉由活化腦部代謝而抑制 BLCL誘發之腦水腫模型中腦部水含量之增加，不同於 G r e η ο 1抗水腫效果之機轉。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 577736

A

7 B 五、發明説明（α ) 表1與第4 - 6圖列示結紮兩側共通頸動脈之鼠中腦部 水與電解質含量之數據，該等鼠以或未以BHBNa處理。 表1 腦部水與電解質含量 組 腦部水含量 Na+含量（毫當 K+含量（毫當 (n = 9) (96) 量/公斤乾重） 量/公斤乾重） 偽裝手術 79·32土 0·13* 224.08± 5.93* 458·31± 13.44* 生理食鹽水 81.96土 0.21 304,39± 12.83 405.99土 20.96 BHBNa 79.50土 0.09* 269.74士 15.98* 420·42± 5·76 * P〈 0.01 vs·生理食鹽水組 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 兩側共通頸動脈結紮（BLCL)造成生理食鹽水組相較於 偽裝手術組，腦部水與Na+含量有顯著的增加（P < 0 · 0 1)以 及腦部K +含髮_著的降低。柑較於生理食鹽水處理組， 接受連續式BHBNa輸人之鼠顯現腦部水與Na+含量&<0.01) 顯著較小之增加，雖然腦部K+含量並無顯著差異。 實J』」__ (材料與方法） 1 .試驗動物 - 17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 577736 .................... 、 A7 B7 五、發明説明（4) 使用雄性偉斯達鼠（Japan S.L.C· Ltd.)於研究中。 動物維持在23 土 31C與55 土 15%濕度下，每日亮燈12小 時（自7: 00至19: 00)。彼等餵食粒狀飲食（MF, Oriental Yeast Co., Ltd.)及自由飲用水。研究時彼等之重量範 圍自161 . 7至249·0克。 2.試驗與對照藥物 1)試驗藥物 /3 -羥基丁酸鈉（Β Η B N a )。 2 )對照藥物

Glyceol(商標名） 組成物（每100毫升之内容物） 濃縮甘油 10克 果糖 5克 氯化鈉 0 · 9克 經銷商：C h u g a i P h a r m a c e u t i c a 1 C 〇 ·，L t d · 3 )賦形劑 (1)賦形劑 1

生理食鹽水 JP 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經銷商：Otsuka Pharmaceutical Co.，Ltd· (2 )賦形劑 2

注射用蒸餾水 J P 經銷商：0 t s u k a Pharmaceutical Co·，Ltd. 3 .給劑溶液之製備 稱重恰0.2克B H BNa並溶於注射用蒸餾水中使逹终體積 -18 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 577736 A7 _______ B7 ___ 五、發明説明（J ) 中加入3毫升以水飽和之乙K。混合物經攪拌及在3000 rpin與4¾下離心15分鐘，去除***層（上清液）。進行此 萃取程序二次並分析所得水相以測定ATP含量。樣本溶 液之另一份用以測定乳酸鹽含量。腦重由如上所測試管 重之相差計算得到。 腦部 ATP 含量藉由使用 Luroat LB9507(EG & G BERTH0LD) 以酵素方法（蟲螢光素-蟲螢光素酶方法）測定，所得數 據表示為撤莫耳（以moles) /濕重（克）。 腦部乳酸鹽含量藉由使用Determiner LAUyowa Medics) 以酵素方法（乳酸鹽脱氫酶方法）測定，所得數據表示為 徹莫耳/濕重（克）。 5 .統計分析 數據表示為平均值土標準誤差（S.E.)。組間之差異藉 由使用單向AH 0VA試驗其顯著性。測得顯著差異時，進行 Scheffe’s多重比較試驗。顯著性程度設為p< 0.05。 (結果） 腦部ATP與乳酸鹽含量之數據分別列示於第7與8圖。 1. BHBHa對正常鼠腦部ATP與乳酸鹽含量之影饗。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 連續輸入BHBNa 3小時對於無BLCL之正常鼠腦部ATP或 乳酸鹽含量並無顯箸效果。 2. BHBNa與Glyceol對具BLCL之鼠腦部ATP與乳酸鹽含量 之影_ 1 )腦部ATP含量 BLCL 3小時後生理食鹽水處理鼠之腦部ATP含量相較 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 577736 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（θ ) 於偽裝手術之鼠顯著地降低（0.52 土 0.10 vs. 1.85 士 0.13 徹莫耳/濕重（克）。BLCL期間接受劑量30毫克/公斤/ 小時 BHBNa之鼠相較於生理食鹽水組顯現出腦部AT P含 量顯著較少之降低，其終值（1.56 ± 0.10撤莫耳/濕重 (克））類似偽裝手術之鼠。BLCL期間連續輸人Glyceal相 較於生理食鹽水組並未達成腦部ATP含量顯著的差異（ 1.00 土 0.04 vs. 0.52 士 0.10 徼莫耳 / 濕重（克））。 2 .腦部乳酸鹽含量 BLCL 3小時後，生理食鹽水處理鼠之腦部乳酸鹽含量 相較於偽裝手術之鼠顯著地増加（11.39 士 0.85 vs.0.61 土 80.12微莫耳/濕重（克））。BLCL期間接受劑量30毫克 /公斤/小時BHBH a之鼠相較於生理食鹽水組顯現出腦 部乳酸鹽含量顯著較少之增加，其終值為1 . 36 士 0. 17徹 莫耳/濕重（克）。BLCL期間接受Glyceol之鼠亦較生理 食鹽水組顯示出腦部乳酸鹽顯著較少之增加（7. 16 土 0.54 vs. 11.39 土 0.85徹莫耳/濕重（克）），但終值仍顯著高 於偽裝手術之組。 D ):腦梗塞降低效果 奮例7 : (材料與方法） 1 .試驗動物 使用8週齡之雄性偉斯達鼠（Charles River Japan, Inc.)於研究中。動物維持在23 士 31與55 土 15%濕度下 ，每日亮燈12小時（自7: 00至19: 00)。彼等餵食粒狀 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -')ι^φ------IT------—φ— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 577736 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（>。） 飲食（MF, Oriental Yeast Co·, Ltd·)及自由飲用水。 研究時彼等之重量範圍自270.6至338.9克。 2.試驗及對照藥物 1)試驗藥物 召-羥基丁酸鈉（BHBHa)。 2 )賦形劑 (1)賦形劑 1

生理食鹽水 JP 經銷商：0 t s u k a P h a r m a c e u t i c a 1 C 〇 ·，L t d · (2)賦形劑 2

^ 注射用蒸餾水 JP 經銷商：Otsuka Pharmaceutical Co.，Ltd· 3 .試驗溶液之製備 使用前立卽製備B Η B N a溶液。 稱重恰0.2克BHBNa及溶於注射用蒸餾水中溱成終體積 10毫升，於9毫升之此溶液中加入生理食鹽水組成30毫 升。以此方式取得之0.6% BHBNa溶液（劑量30毫克/公 斤）藉由通過 D IS Μ I C - 2 5 C S ( 0 · 2/i M A D V A N T E C T 〇 y 〇 )過濾 而滅菌。 4.中腦動脈阻塞/再灌流模型之製備 (1 )中腦動脈阻塞模型 ***麻醉下，於頸部作中線切割。切割抵達右頸動 脈分叉口，同時避免傷及迷失神經。分叉口附近，共通 頸動脈與外側頸動脈自周圍結締組織與脂肪組織單離出 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 577736 A7 B7 五、發明説明（W ) 。源自外側頸動脈之枕骨與高位甲狀動脈被剖開，以6-〇 絲作雙重結紮並切割。隨後外側頸動脈以5-0絲作雙重結 紮並切斷。此外，右内側頸動脈自周圍結締組織剖開暴 露出翼突與顎之動脈。外側頸動脈經切開及栓塞線（ embolizing thread)經此切割處***至離内側頸動脈21 毫米之距離。線頭越過中腦動脈之源頭及進入前側腦動 脈約1-2毫米，因此中腦動脈藉由線之中央部分阻塞。 於偽裝手術之鼠中，皮庸切割處經縫合而無***任一 栓塞線於内側頸動脈中，隨後維持彼等鼠直至到達犧牲 之預定時間。 2 )再灌流模型 中腦動脈以栓塞線阻塞2小時後，在***麻醉下去除 該線使其再灌流。 5.投予試驗舆對照藥物 ***栓塞線後，之即經由前一天***於股靜脈中之套 管連鑛輸入生理食鹽水或0.6% BHBNa溶液予各鼠。投 予偽使用輸入泵進行，速度5毫升/公斤/小時且持缠 直至到逹犧牲之預定時間（再灌流後24小時）。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 6 .腦樣本之製備 各鼠在再灌流後24小時犧牲。腦經單離出及藉由使用 Brain Slicer(M(JROM-ACHI KIKAI·,Ltd)自前腦邊緣後 面7毫米之點至耳間線（終腦）切成2毫米冠狀斷片。腦 斷片經染色以藉由整體浸漬在2% 2,3,5 -三苯基四唑氯 化物（TTC)於生理食鹽水之溶液中30分鐘而偵測出正常粒 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） 577736 A7 B7 五、發明説明（π) 腺體。經染色之斷片以10%中性緩衝之甲醛固定。 7 .腦斷片之評估 腦部經TTC-染色之冠狀斷Η照Η藉由使用底片掃瞄器 掃瞄及數據以影像分析軟體（NIH Image)處理。各腦斷 片上梗塞區域（粒腺體死亡)之百分比自未染色區之總面積 相對於斷Η總面積計算得到。 (結果） 取得之梗塞數據百分比列示於表2。 表 2梗塞數據 Ν =4 梗塞％ 標準誤差 BHBHa 18 · 99 土 1 · 59 生理食鹽水 35.18 土 2 · 69 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在中腦動脈阻塞2小時期間與後續2 4小時之再灌流期 間接受連鑌輸入生理食鹽水之鼠之平均梗塞百分比為3 5. 18 土 2.69%。梗塞經發現於中腦動脈區（顳葉），前腦 動脈區（頂葉），及右腦半球中紋狀體内與周圍區域。此 等發現暗示梗塞不僅可在中央缺血區發生，亦在中腦動 脈胆塞後之周圍區域（頂葉與紋狀體）發生。 另一方面，動脈阻塞後立卽連績輸入BHBNa (30毫克 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 577736 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（a) /公斤/小時）將梗塞平均百分比降至18·99± 1.59%。 大部分之梗塞集中點位於中央缺血帶及少數延伸至周圍 區域。 ^ 實激__8」__毒性研究 (1) 口服或靜脈内.投予單一劑量2000毫克/公斤之Β Η B N a 至二種性別之偉斯達或SD鼠。鼠存活而無任一不正常之 發現。 (2) 重覆口服或靜脈内投予BHBHa至雄性偉斯達或SD鼠 二星期。給予500毫克/公斤- 2000毫克/公斤之鼠存活 而無任一不正常之發現。 實I』丄—配方 指定量之下列成分用以根據適當程序製備腸胃外投予 用溶液： 冷-羥基丁酸單甘油酯 16.0克 氣化鈉 3 . 1 5克 氛化鉀 0.30克 將各成分溶於約950毫升之水中，而以氫氯酸，或氫 氯化鈉將pH調至7.0。隨後將更多之水加入使達恰1·〇〇〇 毫升。所製得之溶液通過〇 . 2徼米濾器過濾，並將濾液瑱 充於500毫升玻璃容器内及高壓滅菌以得到無沈澱，無 色之腸胃外用溶液。 他配方 藉由使用列示於表3中之指定量成分，根據上述程序 取得無沈澱，無色之腸胃外用溶液。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 577736 A7 B7 經 濟 部 t f 五、發明説明（蟧） 表3所用簡稱如下： BHB=/3 -羥基丁酸； BHBNa=/9_羥基丁酸鈉；· BHBMe = -羥基丁酸甲酯；及 BHB-oligonmar)。Θ -翔基丁酸寡聚物（二聚物）。 表3成分與量之表 (克/升） BHB BHBNa BHBMe BHB-oligo (3mar) NaC 1 KC 1 葡萄糖 (1) 31.2 — 一 — 2.05 1.47 S0 (2) 2.42 一 一 — 2.05 1.47 50 (3) 15.6 一 一 — 7.02 1.47 50 (4) 2.42 一 — ·— 7.02 1.47 50 (5) 一 16.4 — 一 0.585 一 50 (6) 一 16.4 — — 一 1.47 50 (7) 一 一 36.3 — 2.05 1.47 50 (8) 一 — 18.15 一 7.02 一 50 (9) — 一 2.42 — 7.02 1.47 50 (10) 一 — — 46.5 2.05 1.47 50 (11) 一 一 — 6.2 2.05 1.47 50 (12) — 一 — 46.5 7.02 1.47 50 (13) 一 — — 6.2 7.02 1.47 50 r 1 26- 先 閲' 讀 背 面 · 之 注 項 i

I 4 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） ...... A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（π) 如上述，本發明之腦功能增進劑，其含有式（1)化合 物作為活性成分，可抑制腦水腫、保護腦功能，改善損 傷之腦部代謝，及降低腦梗塞之程度。因此，預期此等 劑對改善腦功能極有效。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）

Claims (1)

1. 577736 B8 月，… g| ! 氣 以。 ..............—一—》〜—.‘,.·，· ^ 六、申請專利範圍 第851 14504號「用於改善腦部功能之醫藥組合物」專利案 (90年5月28日修正） 六、申請專利範圍： 1 · 一種增進腦部功能之醫藥組合物，其含有下式（丨）化 合物作爲活性成分： I1 CH3 —?—CH2 Β〇〇〇—Rq I ό (1) R2 其中Ri爲經基時R2表示氫原子； 以及R3表示氫原子，鹼金屬，或q-Cn單元、二元 或三元醇殘基，·或式（1)化合物之酯爲2-10個分子之 β_羥基丁酸酯組成之寡聚物。 2 ·如申請專利範圍第1項之增進腦部功能之醫藥組合 物，其中式（1)化合物選自冷-羥基丁酸酯，冷-羥基 丁酸鈉，2_10個分子之ys-羥基丁酸酯組成之寡聚 物，及含有甲醇、乙醇、丁醇、乙二醇、1，3 - 丁二 醇、2 - 丁烯-1，4~二醇、丙三醇、酒石酸以及丁 二酸之/3 -羥基丁酸酯之酯類。 3 · —種抑制腦水腫之醫藥組合物，其含有如申請專利範 圍第1項之式（1)化合物作爲活性成分。 4 · 一種降低腦梗塞之醫藥組合物，其含有如申請專利範 圍第1項之式（1)化合物作爲活性成分。 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -------訂---------線· "u^"· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製