TW202246356A

TW202246356A - 用於增強連接子靶向之材料及方法

Info

Publication number: TW202246356A
Application number: TW111105529A
Authority: TW
Inventors: 桑佳亞辛格; 拉庫馬加內桑; 陳俊; 伊克巴爾Ｓ格雷瓦爾
Original assignee: 美商健生生物科技公司
Priority date: 2021-02-16
Filing date: 2022-02-16
Publication date: 2022-12-01
Also published as: WO2022177902A1; US20230374156A1; MX2023009568A; CA3211114A1; EP4294430A1; AU2022224508A1; KR20230145423A; US20220267472A1; JP2024506694A; US11639396B2; UY39633A; BR112023016360A2

Abstract

本文提供特異性結合至連接子肽之分子，包括抗體及其抗原結合片段，及本文描述之抗體及抗原結合片段之產生及使用的方法。本文亦提供產生特異性結合至免疫隱性抗原決定基之抗體之方法。

Description

用於增強連接子靶向之材料及方法

本文提供之揭示內容係關於特異性結合至連接子肽之分子(諸如抗體及抗原結合片段)，及其產生及使用的方法。本文提供之揭示內容亦係關於產生特異性結合至免疫隱性抗原決定基之此等分子(包括抗體)之方法。

稱為MSCD331 (GGSEGKSSGSGSESKSTGGS；SEQ ID NO: 98)之多肽連接子常用以基因融合不同重鏈可變(VH)及輕鏈可變(VL)區以形成單鏈可變片段(scFv)分子。此等scFv分子後續可為工程化免疫細胞及細胞系上雙特異性抗體或嵌合抗原受體(CAR)之部分。因此，針對MSCD331連接子具有高特異性之單株抗體(mAb)可用作scFv、雙特異性抗體及CAR之生物量測及分子建模中的基本工具試劑。

針對連接子肽之單特異性抗血清及mAb之可用率相對有限。此歸因於(例如)連接子肽之差免疫原性。在此等情況下，一種策略已將該肽偶合至具有良好免疫原性之較大載體蛋白。然而，對該連接子肽之免疫反應通常被對該載體蛋白之壓倒性反應掩蔽，藉此阻礙抗連接子特異性單株之發展。

因此，需要針對MSCD331連接子具有高特異性之抗體及用於產生特異性結合至免疫隱性抗原決定基(諸如連接子肽)之抗體之經改良方法，本發明滿足此需求。

在一項態樣中，本文提供一種經分離抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。

在一些實施例中，該經分離抗體或其抗原結合片段特異性結合至由GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列構成之連接子肽。

在一些實施例中，該經分離抗體或其抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 21、23、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區(VH)之重鏈互補決定區1 (CDR1)、重鏈CDR2及重鏈CDR3；及/或包含SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區(VL)之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3。

在一些實施例中，該經分離抗體或其抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3。

在一些實施例中，該經分離抗體或其抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之重鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列之重鏈CDR3。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之輕鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之輕鏈CDR3。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段包含含有以下胺基酸序列的重鏈CDR1、重鏈CDR2、重鏈CDR3、輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3： a) 分別SEQ ID NO: 1、2、3、49、50及57； b) 分別SEQ ID NO: 4、5、3、49、50及57； c) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、52、53及54； d) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、49、50及57； e) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、66、62及67； f) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、52、50及54； g) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、52、53及54； h) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、64、56及65； i) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、55、56及60； j) 分別SEQ ID NO: 11、12、13、49、50及51； k) 分別SEQ ID NO: 11、14、15、58、50及51； l) 分別SEQ ID NO: 16、17、18、61、59及63；或 m) 分別SEQ ID NO: 19、8、20、49、50及51。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區(VH)；及/或包含SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區(VL)。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段包括：包含由SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46或48之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)；及/或包含由SEQ ID NO: 69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95或97之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區；或包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段包括：包含由SEQ ID NO: 22之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 81之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 24之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 26之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 28之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 97之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 32之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 34之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 71之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 34之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 95之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 36之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 71之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 79之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 83之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 85之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 40之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 42之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 93之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 42之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 69之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 44之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 87之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 46之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 89之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；或包含由SEQ ID NO: 48之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 91之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段不特異性結合至胺基酸序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 99)。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段不特異性結合至免疫球蛋白G (IgG)。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段係重組的。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段係人類抗體、單株抗體、單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。

在一些實施例中，該經分離抗體或抗原結合片段係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。

在另一態樣中，本文提供編碼本文描述之經分離抗體或抗原結合片段之經分離聚核苷酸。

在一些實施例中，該經分離聚核苷酸包含： SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46或48之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列；及/或 SEQ ID NO: 69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95或97之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列。

在一些實施例中，該經分離聚核苷酸包含： SEQ ID NO: 22之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 81之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 24之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 26之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 28之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 97之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 32之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 34之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 71之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 34之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 95之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 36之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 71之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 79之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 83之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 85之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 40之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 42之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 93之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 42之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 69之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 44之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 87之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 46之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 89之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列；或 SEQ ID NO: 48之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 91之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列。

在另一態樣中，本文提供包含編碼本文描述之經分離抗體或抗原結合片段之聚核苷酸之載體。

在另一態樣中，本文提供表現本文描述之經分離抗體或抗原結合片段之重組細胞。在一些實施例中，該細胞係融合瘤。在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段係經重組產生。

在另一態樣中，本文提供包含編碼本文描述之經分離抗體或抗原結合片段之聚核苷酸或載體之重組細胞。在一些實施例中，該細胞係融合瘤。在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段係經重組產生。

在另一態樣中，本文提供一種套組，其包含(i)本文描述之經分離抗體或抗原結合片段，或編碼該經分離抗體或抗原結合片段之聚核苷酸或載體；及(ii)用於其之包裝。

在另一態樣中，本文提供一種包含本文描述之經分離抗體或抗原結合片段之親和基質。

在另一態樣中，本文提供一種產生本文描述之經分離抗體或抗原結合片段之方法，其中該方法包括培養本文描述之重組細胞並分離該抗體或抗原結合片段。

在另一態樣中，本文提供一種於樣本中偵測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽的多肽之方法，該方法包括(i)使該樣本與本文描述之經分離抗體或抗原結合片段接觸，及(ii)偵測該多肽對該經分離抗體或抗原結合片段之結合。

在另一態樣中，本文提供一種於樣本中偵測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽的多肽之方法，該方法包括(i)使該樣本與能夠結合至該連接子肽之抗體裝置(antibody means)接觸，及(ii)偵測該多肽對該抗體裝置之結合。

在另一態樣中，本文提供一種於樣本中量測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽的量之方法，該方法包括(i)使該樣本與本文描述之經分離抗體或抗原結合片段接觸，及(ii)定量該多肽對該經分離抗體或抗原結合片段之結合。

在另一態樣中，本文提供一種於樣本中量測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽的量之方法，該方法包括(i)使該樣本與可結合至該連接子肽之抗體裝置接觸，及(ii)定量該多肽對該等經分離抗體裝置之結合。

在量測包含SEQ ID NO: 98之連接子肽之多肽的量之方法之一些實施例中，該方法進一步包括比較步驟(ii)中所量測之結合與對照值。在一些實施例中，該對照值係預定值。

在各種實施例中，包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽的多肽係抗體、抗原結合片段或嵌合抗原受體。在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段係人類抗體、單株抗體、單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段係多特異性抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段係雙特異性抗體或抗原結合片段。

在另一態樣中，本文提供一種產生特異性結合至免疫隱性抗原決定基之抗體之方法，其包括 a) 用複數種耐受原使成年動物免疫， b) 對該成年動物投與選擇性殺死快速增殖之淋巴球之藥劑， c) 用複數種免疫原使該成年動物免疫，該等免疫原各包含免疫隱性抗原決定基經結合至步驟(a)中使用之耐受原中之一者， d) 在步驟(c)後自該成年動物獲得B淋巴球， e)篩選由步驟(d)中獲得之B淋巴球產生之融合瘤或抗體庫以獲得特異性結合至該免疫隱性抗原決定基之候選抗體；及 f) 分離步驟(e)中鑑別為特異性結合至該免疫隱性抗原決定基之抗體。

在抗體產生方法之一些實施例中，步驟(c)包括在初始免疫化後，對成年動物投與一或多個加強劑量之該免疫原或包含免疫隱性抗原決定基經結合至步驟(a)中使用之不同耐受原之免疫原。

在抗體產生方法之一些實施例中，該藥劑係烷化劑。在一些實施例中，該藥劑係環磷醯胺。

在抗體產生方法之一些實施例中，步驟(b)重複至少一次。在一些實施例中，步驟(b)重複兩次。

在抗體產生方法之一些實施例中，該免疫隱性抗原決定基係長度小於50個胺基酸之肽。在一些實施例中，該免疫隱性抗原決定基係長度約10至30個胺基酸之肽。在一些實施例中，該免疫隱性抗原決定基係長度約20個胺基酸之肽。在一些實施例中，該免疫隱性抗原決定基係長度約14個胺基酸之肽。

在抗體產生方法之一些實施例中，該耐受原係載體蛋白。在一些實施例中，該載體蛋白係選自卵白蛋白(OVA)、鑰孔血藍蛋白(KLH)及藍色載體蛋白(BCP)。

在抗體產生方法之一些實施例中，該動物係小鼠。

相關申請案之交叉參考

本專利申請案主張對2021年2月16日申請之美國臨時申請案第63/149,857號、2021年2月16日申請之美國臨時申請案第63/149,865號、2021年2月16日申請之美國臨時申請案第63/149,872號、2021年2月16日申請之美國臨時申請案第63/149,883號及2021年2月16日申請之美國臨時申請案第63/149,892號之優先權，該等案件之各者之揭示內容均以全文引用之方式併入本文中。定義

在本說明書及隨附申請專利範圍通篇中使用關於敘述之態樣之各種術語。除非另有指示，否則此等術語應以其在此項技術中之一般含義給定。其他明確定義之術語應以與本文提供之定義一致之方式予以解釋。

如本說明書及隨附申請專利範圍中使用，除非內文另有明確規定，否則單數形式「一」、「一個」及「該」包括複數個指示物。因此，例如，對「細胞」之提及包括兩個或更多個細胞之組合，及諸如此類。

如本文使用之術語「約」在提及可量測值(諸如量、時距，及諸如此類)時，意欲包含自指定值高達±10%之變化，因為此等變化適用於進行本文揭示之方法。除非另有指示，否則本說明書及隨附申請專利範圍中使用之所有表示成分、性質(諸如分子量)、反應條件等之量的數字應瞭解為在所有情況下均由術語「約」修飾。因此，除非另有相反指示，否則下列說明書及隨附申請專利範圍中闡述之數值參數係可取決於待由本發明尋求獲得之所需性質而變化之近似值。至少而非試圖將均等論之應用限制於隨附申請專利範圍之範疇，各數值參數應至少根據報告之有效數字之數量及藉由應用一般捨入技術解釋。

儘管闡述本發明之廣泛範疇之數值範圍及參數係近似值，但特定實例中闡述之數值儘可能精確地報告。然而，任何數值均固有地含有某些誤差，該等誤差必定由其等各別測試量測中發現之標準偏差產生。

「經分離」意謂生物組分(諸如核酸、肽或蛋白質)已自天然生成該組分之有機體之其他生物組分(即，其他染色體及染色體外DNA及RNA及蛋白質)大體上分離、分開產生或純化。因此，已「經分離」之核酸、肽及蛋白質包括藉由標準純化方法純化之核酸及蛋白質。「經分離」核酸、肽及蛋白質可為組合物之部分且若此組合物不為該核酸、肽或蛋白質之天然環境之部分則仍為經分離。該術語亦包括藉由宿主細胞中之重組表現製備之核酸、肽及蛋白質，及化學合成之核酸。如本文使用，「經分離」抗體或抗原結合片段旨在係指大體上不含其他具有不同抗原特異性之抗體或抗原結合片段之抗體或抗原結合片段(例如，特異性結合至SEQ ID NO: 98之連接子肽之經分離抗體大體上不含特異性結合除SEQ ID NO: 98之連接子肽外之抗原之抗體)。經分離抗體可特異性結合至SEQ ID NO: 98之連接子肽之抗原決定基、同功型或變體。

「聚核苷酸」(同義地稱為「核酸分子」、「核苷酸」或「核酸」)係指任何聚核糖核苷酸或聚去氧糖核核苷酸，其可為未經修飾之RNA或DNA或經修飾RNA或DNA。「聚核苷酸」包括(但不限於)單股及雙股DNA、為單股及雙股區域之混合物之DNA、單股及雙股RNA，及為單股及雙股區域之混合物之RNA、包含可為單股或(更通常)雙股或單股及雙股區域之混合物之DNA及RNA之雜合體分子。另外，「聚核苷酸」係指包含RNA或DNA或RNA及DNA兩者之三股區域。術語聚核苷酸亦包括含有一或多個經修飾鹼基之DNA或RNA及主鏈出於穩定性或出於其他原因而經修飾之DNA或RNA。「經修飾」鹼基包括(例如)三苯甲基化鹼基及非尋常鹼基(諸如肌苷)。可對DNA及RNA作出多種修飾；因此，「聚核苷酸」包括如自然中通常發現之聚核苷酸之經化學、酶促或代謝修飾形式，及病毒及細胞之DNA及RNA特性之化學形式。「聚核苷酸」亦包括相對較短核酸鏈，通常稱為寡核苷酸。

「大體上相同」之含義可取決於使用該術語之內文而不同。因為重鏈及輕鏈及編碼其之基因中可能存在天然序列變異，所以吾人將預期於胺基酸序列或編碼本文描述之抗體或抗原結合片段之基因內發現一些程度之變異，但對其等獨特結合性質(例如，特異性及親和力)幾乎沒有或沒有影響。此預期部分由於基因密碼之簡併性，及保守胺基酸序列變異之進化成功，該等保守胺基酸序列變異不明顯改變經編碼蛋白質之性質。因此，在核酸序列之內文中，「大體上相同」意謂兩個或更多個序列之間至少65%同一性。較佳地，該術語係指兩個或更多個序列之間至少70%同一性，更佳至少75%同一性，更佳至少80%同一性，更佳至少85%同一性，更佳至少90%同一性，更佳至少91%同一性，更佳至少92%同一性，更佳至少93%同一性，更佳至少94%同一性，更佳至少95%同一性，更佳至少96%同一性，更佳至少97%同一性，更佳至少98%同一性，且更佳至少99%或更大之同一性。兩個序列之間的同一性百分比係由該等序列共用之相同位置之數量之函數(即，同源性%=相同位置之數量/位置總數量 x 100)，考慮空隙數量，及各空隙長度，需引入其以最佳比對該等兩個序列。兩個核苷酸或胺基酸序列之間的同一性百分比可(例如)使用已併入ALIGN程式(2.0版)中之E. Meyers及W. Miller, Comput. Appl. Biosci 4, 11-17 (1988)之演算法，使用PAM120權重殘基表，空隙長度罰分12及空隙罰分4予以測定。另外，兩個胺基酸序列之間的同一性百分比可使用Needleman及Wunsch, J. Mol. Biol. 48, 444-453 (1970)演算法測定。

可於蛋白質之胺基酸序列內發生但對蛋白質功能無實質性影響之變異程度遠低於核酸序列之變異程度，因為相同簡併性原則不適用於胺基酸序列。因此，在抗體或抗原結合片段之內文中，「大體上相同」意謂與本文描述之抗體或抗原結合片段具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性之抗體或抗原結合片段。其他實施例包括具有框架、支架或其他非結合區之連接子特異性抗體或抗原結合片段，該其他非結合區不與本文描述之抗體及抗原結合片段具有顯著同一性，但確實併入一或多個CDR或賦予結合所需之與本文描述之此等序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性之其他序列。

「純系」係自單個細胞或共同祖先藉由有絲***衍生之細胞群體。「細胞系」係能夠活體外穩定生長多代之初生細胞之純系。在本文提供之一些實例中，細胞藉由用DNA轉染該等細胞轉化。

術語「表現(express)」及「產生(produce)」 (或「表現(expression)」及「產生(production)」)在本文中同義使用，且係指基因產物之生物合成。此等術語包含將基因轉錄為RNA。此等術語亦包含將RNA轉譯為一或多種多肽，且進一步包含所有天然生成之轉錄後及轉譯後修飾。抗體或其抗原結合片段之表現或產生可於細胞之細胞質內，或於細胞外環境(諸如細胞培養物之生長介質)內。

術語「治療(treating或treatment)」係指減輕或改善損傷、病理或病症之任何成功或成功跡象，包括任何客觀或主觀參數諸如減少、緩解、減輕症狀；或使病患對該病症更耐受；減緩退化或衰退之速率；使退化之最終點較不虛弱；改良個體之身體或精神健康；或延長存活時間。該治療可由客觀或主觀參數評估；包括身體檢查、神經系統檢查或精神評估之結果。

「有效量」或「治療有效量」係指在必要之劑量及期間內，有效達成所需治療結果之量。抗連接子抗體之治療有效量可根據諸如以下之因素而變化：個體之疾病狀態、年齡、性別及重量，及該抗體於該個體中誘發所需反應之能力。治療有效量亦係其中治療有利效應超過該抗體或抗體部分之任何毒性或有害效應之量。

除非另有規定，否則「抗體」係指包括各種單體、聚合物及嵌合形式之免疫球蛋白之所有同型(IgG、IgA、IgE、IgM、IgD及IgY)。具體言之，術語「抗體」包含多株抗體、單株抗體(mAb)及抗體樣多肽，諸如嵌合抗體及人類化抗體。

「抗原結合片段」係可針對特定抗原顯示結合親和力之任何蛋白質結構。抗原結合片段包括彼等藉由任何已知技術(諸如酶促裂解、肽合成及重組技術)提供者。一些抗原結合片段由保留親代抗體分子之抗原結合特異性之完整抗體之部分構成。例如，抗原結合片段可包含已知結合特定抗原之抗體之至少一個可變區(重鏈或輕鏈可變區)或一或多個CDR。合適之抗原結合片段之實例包括(但不限於)雙功能抗體及單鏈分子及Fab、F(ab’)2、Fc、Fabc及Fv分子、單鏈(Sc)抗體(例如，scFv)、線性抗體、單域抗體(諸如sdAb (VL或VH)、駱駝VHH域)、由抗體片段形成之多特異性抗體、個別抗體輕鏈、個別抗體重鏈、抗體鏈或CDR與其他蛋白質之間的嵌合融合物、支架蛋白、重鏈單體或二聚體、輕鏈單體或二聚體、由一個重鏈及一個輕鏈構成之二聚體、由VL、VH、CL及CH1域構成之單價片段，或如WO2007059782中描述之單價抗體、包含兩個Fab片段經雙硫鍵於鉸鏈區連接之二價片段、基本上由VH及CH1域構成之Fd片段；基本上由抗體之單臂之VL及VH域構成之Fv片段、dAb片段(Ward等人，Nature 341, 544-546 (1989))，其基本上由VH域構成且亦稱為域抗體(Holt等人；Trends Biotechnol. 2003 Nov.; 21(11):484-90)；駱駝或奈米抗體(Revets等人；Expert Opin Biol Ther. 2005 Jan.; 5(1):111-24)；經分離之互補決定區(CDR)，及諸如此類。所有抗體同型均可用以產生抗原結合片段。另外，抗原結合片段可包括非抗體蛋白質框架，其可在賦予受關注之給定抗原(諸如支架蛋白)親和力之方向上成功併入多肽鏈段。抗原結合片段可經重組產生或藉由完整抗體之酶促或化學裂解產生。片語「抗體或其抗原結合片段」可用以表示給定抗原結合片段併入該片語中提及之抗體之一或多個胺基酸鏈段。

術語「CDR」及其複數「CDRs」係指互補決定區(CDR)，其中三個組成輕鏈可變區(LCDR1、LCDR2及LCDR3)之結合特性及三個組成重鏈可變區(HCDR1、HCDR2及HCDR3)之結合特性。CDR有助於抗體分子之功能活性並由包含支架或框架區之胺基酸序列隔開。確切定義之CDR邊界及長度受制於不同之分類及編號系統。因此，CDR可藉由Kabat、Chothia、contact或任何其他邊界定義提及。儘管邊界不同，但此等系統各具有一定程度之重疊，於此重疊中構成可變序列內的所謂「高變區」。因此，根據此等系統之CDR定義可在長度及邊界區域上相對於相鄰框架區不同。參見(例如) Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH公開案第91-3242號(1991)；Chothia等人，「Canonical Structures For the Hypervariable Regions of Immunoglobulins」 J. Mol. Biol. 196:901 (1987)；及MacCallum等人，「Antibody-Antigen Interactions: Contact Analysis and Binding Site Topography」 J. Mol. Biol. 262:732 (1996))，其各以全文引用之方式併入本文中。

通常，CDR形成可分類為正準結構之環結構。術語「正準結構」係指抗原結合環(CDR)採用之主鏈構象。自比較結構研究，已發現六個抗原結合環中之五個僅具有有限之可用構象庫。各正準結構可由多肽主鏈之扭轉角表徵。抗體之間的對應環可因此具有非常相似之三維結構，儘管環的大部分中具有高胺基酸序列變異性(Chothia等人，「Canonical Structures For the Hypervariable Regions of Immunoglobulins」， J. Mol. Biol. 196:901 (1987)；Chothia等人，「Conformations of Immunoglobulin Hypervariable Regions」， I 342:877 (1989)；Martin及Thornton，「Structural Families in Loops of Homologous Proteins: Automatic Classification, Modelling and Application to Antibodies」， J. Mol. Biol. 263:800 (1996)，其各以全文引用之方式併入本文中)。此外，採用之環結構與其周圍之胺基酸序列之間存在關係。特定正準類別之構象由該環之長度及位於該環內及保守框架(即，該環外部)內之關鍵位置之胺基酸殘基決定。因此，可基於此等關鍵胺基酸殘基之存在對特定正準類別作出分配。

術語「多肽」可與術語「蛋白質」互換使用且在其最廣泛意義上係指具有兩個或更多個次單元胺基酸、胺基酸類似物或擬肽物之化合物。該等次單元可由肽鍵連接。在另一實施例中，該次單元可由其他鍵(例如，酯、醚等)連接。如本文使用，術語「胺基酸」係指天然及/或非天然或合成性胺基酸，包括甘胺酸及D及L光學異構體兩者、胺基酸類似物及擬肽物。若肽鏈係短的，則具有三個或更多個胺基酸之肽通常稱為寡肽。若該肽鏈係長的，則該肽通常稱為多肽或蛋白質。

「特異性結合(Specifically bind或bind specifically)」或其衍生詞當用於抗體或抗體片段之內文中時表示經由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段編碼之域結合至受關注蛋白質之一或多個抗原決定基，而不優先結合含有混合分子群體之樣本中之其他分子。通常，如藉由表面電漿子共振分析或細胞結合分析量測，抗體以小於約1x10 ^-8M之Kd結合至同源抗原。諸如「[抗原]特異性」抗體(例如，連接子特異性抗體)之片語意欲表達本文列舉之抗體特異性結合本文列舉之抗原。

「載體」係其中可操作地***另一核酸鏈段以引起該鏈段之複製或表現的複製子，諸如質體、噬菌體、黏接質體或病毒。

如本文使用，術語「宿主細胞」可為任何類型之細胞，例如，初生細胞、培養中之細胞或來自細胞系之細胞。在特定實施例中，術語「宿主細胞」係指經核酸分子轉染之細胞及此細胞之後代或潛在後代。此細胞之後代可與經該核酸分子轉染之親代細胞不同，例如，由於後續世代中可發生之突變或環境影響或該核酸分子整合至宿主細胞基因體內。

術語「個體」係指人類及非人類動物，包括所有脊椎動物，例如，哺乳動物及非哺乳動物，諸如非人類靈長類動物、小鼠、兔、綿羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲動物及爬行動物。在本文描述之方法之許多實施例中，該個體係人類。

如本文使用之術語「樣本」係指可含有受關注分析物之任何組合物或混合物。該樣本可為自個體分離之相似流體、細胞或組織(例如，手術切除之腫瘤組織、生檢，包括細針抽吸)，及個體內存在之流體、細胞或組織之集合。在一些實施例中，該樣本係生物流體。生物流體通常在生理溫度下係液體且可包括個體或生物來源中存在、自其抽取、表現或另外提取之天然生成之流體。來源於特定組織、器官或局部區域之某些生物流體及某些其他生物流體可更全面或系統地位於個體或生物來源中。生物流體之實例包括血液、血清及漿膜液、血漿、淋巴、尿液、唾液、囊液、淚滴、糞便、痰液、分泌組織及器官之黏膜分泌物、***分泌物、腹水(諸如彼等與非實體瘤相關聯者)、胸膜、心包、腹膜、腹部及其他體腔之流體、藉由支氣管灌洗法收集之流體及諸如此類。生物流體亦可包括與個體或生物來源接觸之液體溶液，例如，細胞及器官培養基，包括細胞或器官適應之介質、灌洗流體及諸如此類。如本文使用，術語「樣本」包含自個體移除之材料或個體中存在之材料。

如本文使用之術語「免疫隱性抗原決定基」旨在係指至少就多株及單株抗體產生而言，通常無法高效用於藉由免疫化產生抗體反應之抗原決定基。此等免疫隱性抗原決定基將一般比免疫原中通常與其等締合之其他抗原決定基較不豐富及/或較低抗原性。即使在其中免疫隱性抗原決定基可引起強抗體反應之情況下，此反應可由(例如)因為由於與該免疫原中之免疫隱性抗原決定基締合之其他抗原決定基(稱為「免疫顯性抗原決定基」)所致之抗原攻擊而產生之抗體總數統計性掩蔽。在一些實施例中，該免疫隱性抗原決定基係長度小於約50個胺基酸，例如，約6至40個胺基酸、約8至35個胺基酸、約10至30個胺基酸、約10至20個胺基酸、約15至25個胺基酸、約14個胺基酸或約20個胺基酸之短肽。在一項特定實施例中，該免疫隱性抗原決定基係SEQ ID NO: 98之連接子肽或其片段。

如本文使用之術語「耐受原」係指於個體(例如，動物)中促進耐受性發展之抗原劑。如本文使用之術語「耐受性」係指免疫反應程度降低、免疫反應之發作或進展的延遲及/或免疫反應之發作或進展的風險降低。免疫原的任何不攜載會引發免疫反應之抗原決定基之部分均可用作耐受原。例如，當使用表現抗原之CHO-K1細胞作為免疫原時，野生型CHO-K1細胞可用作耐受原，或當使用Fc標籤抗原作為免疫原時，Fc可用作耐受原。耐受原之非限制性實例包括肽、蛋白質及細胞。在一些實施例中，本文使用之耐受原包括(例如)載體蛋白諸如卵白蛋白(OVA)、鑰孔血藍蛋白(KLH)及藍色載體蛋白(BCP)。

如本文使用之術語「免疫原」係指能夠於個體(例如，動物)中引起免疫反應之抗原劑。在一些實施例中，本文使用之免疫原包含結合至本文描述之載體蛋白之免疫隱性抗原決定基，諸如短連接子肽。

本文描述之實施例不限於特定方法、試劑、化合物、組合物或生物系統，其等當然可變化。 連接子特異性抗體及抗原結合片段

本文描述特異性結合至包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之經分離抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，本文描述之經分離抗體或其抗原結合片段特異性結合至由GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列構成之連接子肽。

抗體分子之一般結構包含抗原結合域，其包括重鏈及輕鏈；及Fc域，其發揮多種功能，包括補體固定及結合抗體受體。在一些實施例中，經分離抗體或抗原結合片段抗體可特異性結合至SEQ ID NO: 98之連接子肽之片段或變體。

本文描述之連接子特異性抗體或抗原結合片段包括所有同型(IgA、IgD、IgE、IgG及IgM)，及四鏈免疫球蛋白結構之合成性多聚體。本文描述之抗體或抗原結合片段亦包括通常在母雞或火雞血清及母雞或火雞蛋黃中所發現之IgY同型。

該等連接子特異性抗體及抗原結合片段可藉由重組方式而衍生自任何物種。例如，該等抗體或抗原結合片段可為小鼠、大鼠、山羊、馬、豬、牛、雞、兔、駱駝、驢、人類，或其嵌合形式。針對投與人類之用途，非人類衍生之抗體或抗原結合片段可經基因或結構改造以在投與人類病患時較不具抗原性。

在一些實施例中，該等抗體或抗原結合片段係嵌合的。如本文使用，術語「嵌合」係指抗體或其抗原結合片段具有衍生自非人類哺乳動物、囓齒動物或爬行動物之抗體胺基酸序列之至少一個可變域之至少一些部分，而該抗體或其抗原結合片段之剩餘部分係衍生自人類。

該等抗體可包括單株抗體(包括鼠類、人類、人類化及嵌合單株抗體)、多株、抗原結合片段、雙特異性或多特異性抗體、單體、二聚體、四聚體或多聚體抗體、單鏈抗體、域抗體及包含具有所需特異性之抗原結合位點之免疫球蛋白分子之任何其他經修飾構型。該抗體可為天然生成之抗體，例如，自哺乳動物(例如，鼠類、靈長類動物、小鼠、兔、山羊、馬、雞、倉鼠、人類等)分離及/或純化之抗體。或者，該抗體可為工程化(例如，基因工程化)抗體。

在一些實施例中，該等抗體係人類化抗體。人類化抗體可為含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(諸如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗體之其他抗原結合子序列)。在大多數情況下，人類化抗體係人類免疫球蛋白(接受者抗體)，其中來自該接受者之互補決定區(CDR)之殘基係經來自具有所需特異性、親和力及能力之非人類物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠或兔之CDR之殘基置換。一般而言，該人類化抗體將包含大體上所有至少一個及通常兩個可變域，其中所有或大體上所有該等CDR區對應非人類免疫球蛋白的CDR區，及所有或大體上所有框架區係人類免疫球蛋白序列的框架區。該人類化抗體可包括免疫球蛋白恆定區(Fc)(通常人類免疫球蛋白的恆定區)之至少一部分。

人類化抗體具有衍生自非人類物種之抗原結合位點及可變區框架係衍生自人類免疫球蛋白序列。人類抗體具有重鏈及輕鏈可變區，其中框架及抗原結合位點兩者均來源於人類起源之序列。

本文描述之抗體或抗原結合片段可以多種形式出現，但將包括表1中所示之抗體CDR之一或多者。在一些實施例中提供包含含有表1中所述抗體之任一者之CDR1、CDR2及CDR3之重鏈的連接子特異性抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中提供包含含有表1中所述抗體之任一者之CDR1、CDR2及CDR3之重鏈及含有表1中所述抗體之任一者之CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈的連接子特異性抗體或其抗原結合片段。

在一些實施例中提供包含含有表2中所述抗體之任一者之重鏈可變域之重鏈的連接子特異性抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中提供包含含有表2中所述抗體之任一者之輕鏈可變域之輕鏈的連接子特異性抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中提供包含含有表2中所述抗體之任一者之重鏈可變域之重鏈及包含表2中所述抗體之任一者之輕鏈可變域之輕鏈的連接子特異性抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，本文描述之連接子特異性抗體或其抗原結合片段之重鏈可變域係由表2中所述之編碼VH之核苷酸序列編碼。在一些實施例中，本文描述之連接子特異性抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變域係由表2中所述之編碼VL之核苷酸序列編碼。表1：例示性抗連接子抗體及其CDR序列

純系名稱

樣本名稱

HCDR1

SEQ ID NO

HCDR2

SEQ ID NO

HCDR3

SEQ ID NO

樣本名稱

LCDR1

SEQ ID NO

LCDR2

SEQ ID NO

LCDR3

SEQ ID NO

13D5F7

VH1

GFNIKNTY

11

IDPTNGNT

12

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13

VK1

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LVS

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51

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10

IHPSDSDT

8

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9

VK2

QSLLDSDGETY

52

LVS

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54

16B1C7

VH3

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK3

QSLLDSDGETY

52

LVS

50

WQGTFFPRT

54

16B1D4

VH4

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

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LTMPVEGDY

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VK4

QSLLDSDGETY

52

LVS

50

WQGTFFPRT

54

16B1E3

VH5

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK5

QSLLDSDGETY

52

LVS

50

WQGTFFPRT

54

17G3D6

VH6

GYPFTRYW

7

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK7

QSLLDSDGKTY

49

LVS

50

WQGTHFPYT

57

17F3H6

VH7

GYPFTRYW

7

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK6

QSLLDSDGETY

52

QVS

53

WQGTFFPRT

54

17G3E9

VH8

GYPFTRYW

7

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK8

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VH9

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VK9

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LVS

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VH10

GYTFTRYW

10

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8

LTMPVEGDY

9

VK10

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52

QVS

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WQGTFFPRT

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18B4F3

VH11

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

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9

VK11

QSLLDSDGETY

52

QVS

53

WQGTFFPRT

54

18B4G2

VH12

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK12

QSLLDSDGETY

52

QVS

53

WQGTFFPRT

54

18B4F5

VH13

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK13

QSLLDSDGETY

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QVS

53

WQGTFFPRT

54

19D1E9

VH14

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1

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2

TGFDWDDY

3

VK14

QSLLDSDGKTY

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LVS

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21H7C10

VH15

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK15

QSLLDSDGETY

52

QVS

53

WQGTFFPRT

54

21H7C6

VH16

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK16

ENIYSY

55

NAK

56

QHHYVTPPT

60

21H7H10

VH17

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK17

ENIYSY

55

NAK

56

QHHYVTPPT

60

22H5B12

VH18

GYPFTRYW

7

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK18

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QVS

53

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22H5G10

VH19

GYPFTRYW

7

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK19

QSLLDSDGETY

52

QVS

53

WQGTFFPRT

54

22H5B7

VH20

GYPFTRYW

7

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK20

QSLLDSDGETY

52

QVS

53

WQGTFFPRT

54

22H5C1

VH21

GYPFTRYW

7

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK21

QSLLDSDGETY

52

QVS

53

WQGTFFPRT

54

22H5F12

VH22

GYPFTRYW

7

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LTMPVEGDY

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VK22

QSLLDSDGETY

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QVS

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VH23

GYTFTRYW

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LTMPVEGDY

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VK23

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52

QVS

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23F1E1

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8

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9

VK24

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52

QVS

53

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54

23F1E7

VH25

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK25

QSLLDSDGETY

52

QVS

53

WQGTFFPRT

54

30H3A3

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15

VK26

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VH27

GFNIKNTY

11

IDPANGYT

14

AAFSSYVGYFDV

15

VK27

QSLLETDGRTY

58

LVS

50

WQGTHFPRT

51

7C2H8

VH28

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16

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17

ARIGIYHGDYGEFDY

18

VK28

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61

RMS

59

MQHLKYPFT

63

8H9F11

VH29

GYTFTSYW

19

IHPSDSDT

8

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20

VK29

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49

LVS

50

WQGTHFPRT

51

16B1F4

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GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

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9

VK30

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LVS

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VH31

GFNIKNTY

11

IDPTNGNT

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AGLGSNYFYSDV

13

VK31

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49

LVS

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51

16B1F10

VH32

GYTFTRYW

10

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8

LTMPVEGDY

9

VK32

GNIHNY

64

NAK

56

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16B1C1

VH33

GYTFTRYW

10

IHPSDSDT

8

LTMPVEGDY

9

VK33

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LVS

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17G3D11

VH34

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4

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VK34

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17G3F6

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GITFSNYW

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TGFDWDDY

3

VK35

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LVS

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57

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VH36

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10

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VK37

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19D1B6

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9

VK39

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62

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GFNIKNTY

11

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VH48

GFNIKNTY

11

IDPANGYT

14

AAFSSYVGYFDV

15

VK48

QSLLETDGRTY

58

LVS

50

WQGTHFPRT

51

7C2G8

VH49

GYTFTDYY

16

INPNHGGS

17

ARIGIYHGDYGEFDY

18

VK49

KSLLHSNGNTY

61

RMS

59

MQHLKYPFT

63

8H9E7

VH50

GYTFTSYW

19

IHPSDSDT

8

ASFITTVGDV

20

VK50

QSLLDSDGKTY

49

LVS

50

WQGTHFPRT

51

表2：例示性抗連接子抗體之重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之核苷酸及胺基酸序列

純系名稱	樣本名稱	核苷酸序列(SEQ ID NO)	胺基酸序列(SEQ ID NO)	樣本名稱	核苷酸序列(SEQ ID NO)	胺基酸序列(SEQ ID NO)
13D5F7	VH1	42	41	VK1	69	68
16B1A7	VH2	34	33	VK2	71	70
16B1C7	VH3	36	35	VK3	71	70
16B1D4	VH4	34	33	VK4	71	70
16B1E3	VH5	34	33	VK5	71	70
17G3D6	VH6	28	27	VK7	73	72
17F3H6	VH7	30	29	VK6	75	74
17G3E9	VH8	30	29	VK8	75	74
17G3B2	VH9	32	31	VK9	75	74
18B4B4	VH10	38	37	VK10	77	76
18B4F3	VH11	38	37	VK11	79	78
18B4G2	VH12	38	37	VK12	77	76
18B4F5	VH13	38	37	VK13	77	76
19D1E9	VH14	22	21	VK14	81	80
21H7C10	VH15	38	37	VK15	77	76
21H7C6	VH16	38	37	VK16	83	82
21H7H10	VH17	38	37	VK17	85	84
22H5B12	VH18	30	29	VK18	73	72
22H5G10	VH19	30	29	VK19	73	72
22H5B7	VH20	30	29	VK20	73	72
22H5C1	VH21	30	29	VK21	73	72
22H5F12	VH22	30	29	VK22	73	72
23F1A3	VH23	38	37	VK23	77	76
23F1E1	VH24	38	37	VK24	79	78
23F1E7	VH25	38	37	VK25	77	76
30H3A3	VH26	44	43	VK26	87	86
30H3C4	VH27	44	43	VK27	87	86
7C2H8	VH28	46	45	VK28	89	88
8H9F11	VH29	48	47	VK29	91	90
16B1F4	VH30	34	33	VK30	71	70
13D5C10	VH31	42	41	VK31	93	92
16B1F10	VH32	34	33	VK32	95	94
16B1C1	VH33	34	33	VK33	71	70
17G3D11	VH34	24	23	VK34	75	74
17G3F6	VH35	24	23	VK35	75	74
18B4B10	VH36	38	37	VK36	77	76
18B4F11	VH37	40	39	VK37	77	76
18B4H10	VH38	38	37	VK38	77	76
19D1B6	VH39	30	29	VK39	97	96
21H7C8	VH40	38	37	VK40	79	78
21H7B10	VH41	30	29	VK41	77	76
22H5A4	VH42	38	37	VK42	73	72
22H5D1	VH43	30	29	VK43	73	72
23F1A2	VH44	38	37	VK44	77	76
23F1D8	VH45	38	37	VK45	77	76
30H3B3	VH46	44	43	VK46	87	86
30H3C3	VH47	44	43	VK47	87	86
30H3C8	VH48	44	43	VK48	87	86
7C2G8	VH49	46	45	VK49	89	88
8H9E7	VH50	48	47	VK50	91	90

在一些實施例中，該經分離抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO: 21、23、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區(VH)之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3。

在一些實施例中，該經分離抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區(VL)之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3。

在一些實施例中，該經分離抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO: 21、23、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區(VH)之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；及含有SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區(VL)之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3。

在一些實施例中，該經分離抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO: 21、23、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；及含有SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之重鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列之重鏈CDR3。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含選自由以下組成之群之重鏈CDR1：SEQ ID NO: 1、4、7、10、11、16及19，及其保守修飾，其中該抗連接子抗體或抗原結合片段結合包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含選自由以下組成之群之重鏈CDR2：SEQ ID NO: 2、5、8、12、14及17，及其保守修飾，其中該抗連接子抗體或抗原結合片段結合包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含選自由以下組成之群之重鏈CDR3：SEQ ID NO: 3、9、13、15、18及20，及其保守修飾，其中該抗連接子抗體或抗原結合片段結合包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之輕鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之輕鏈CDR3。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含選自由以下組成之群之輕鏈CDR1：SEQ ID NO: 49、52、55、58、61、64及66，及其保守修飾，其中該抗連接子抗體或抗原結合片段結合包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含選自由以下組成之群之輕鏈CDR2：SEQ ID NO: 50、53、56、59及62，及其保守修飾，其中該抗連接子抗體或抗原結合片段結合包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含選自由以下組成之群之輕鏈CDR3：SEQ ID NO: 51、54、57、60、63、65及67，及其保守修飾，其中該抗連接子抗體或抗原結合片段結合包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含含有以下胺基酸序列的重鏈CDR1、重鏈CDR2、重鏈CDR3、輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3： a) 分別SEQ ID NO: 1、2、3、49、50及57； b) 分別SEQ ID NO: 4、5、3、49、50及57； c) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、52、53及54； d) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、49、50及57； e) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、66、62及67； f) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、52、50及54； g) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、52、53及54； h) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、64、56及65； i) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、55、56及60； j) 分別SEQ ID NO: 11、12、13、49、50及51； k) 分別SEQ ID NO: 11、14、15、58、50及51； l) 分別SEQ ID NO: 16、17、18、61、59及63；或 m) 分別SEQ ID NO: 19、8、20、49、50及51。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區(VH)；及/或包含SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區(VL)。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)；及/或包含SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含：包含由SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46或48之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)；及/或包含由SEQ ID NO: 69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95或97之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包含：包含由SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46或48之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)；及/或包含由SEQ ID NO: 69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95或97之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區；或包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之輕鏈可變區；重鏈可變區包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，及輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之輕鏈可變區；或包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包括：包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之重鏈可變區之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之輕鏈可變區之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包括：包含由SEQ ID NO: 22之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 81之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 24之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 26之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 28之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 97之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 32之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 34之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 71之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 34之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 95之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 36之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 71之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 79之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 83之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 85之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 40之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 42之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 93之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 42之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 69之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 44之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 87之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 46之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 89之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；或包含由SEQ ID NO: 48之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 91之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段包括：包含由SEQ ID NO: 22之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 81之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 24之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 26之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 28之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 97之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 32之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 34之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 71之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 34之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 95之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 36之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 71之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 79之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 83之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 85之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 40之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 42之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 93之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 42之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 69之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 44之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 87之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；包含由SEQ ID NO: 46之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 89之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區；或包含由SEQ ID NO: 48之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO: 91之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區。

在各種實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段不結合至胺基酸序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 99)。

在各種實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段不具有對免疫球蛋白G (IgG)之非特異性結合。在一些實施例中，該抗連接子抗體或抗原結合片段不結合至免疫球蛋白G (IgG)之恆定區。

上文段落中討論之由CDR及/或可變域序列定義之特異性抗體可包括另外修飾。

本文描述之連接子特異性抗體或抗原結合片段包括保留所述連接子特異性抗體或抗原結合片段之生物性質(例如，結合親和力或免疫效應物活性)之具有單個或多個胺基酸取代、刪除或添加之變體。在本發明之內文中，除非另有指示，否則下列記號用以描述突變；i)給定位置中胺基酸之取代書寫為例如S228P，其意謂用脯胺酸取代位置228中之絲胺酸；及ii)針對特異性變體，使用特定三個或一個字母代碼(包括代碼Xaa及X)以指示任何胺基酸殘基。因此，以絲胺酸取代位置228中之精胺酸指定為：S228P，或以任何胺基酸殘基取代位置228中之絲胺酸指定為S228P。在位置228中刪除絲胺酸之情況下，其由S228*指示。熟習此項技術者可產生具有單個或多個胺基酸取代、刪除或添加之變體。

此等變體可包括：(a)其中一或多個胺基酸殘基經保守或非保守胺基酸取代之變體，(b)其中一或多個胺基酸經添加至多肽或自其刪除之變體，(c)其中一或多個胺基酸包括取代基之變體，及(d)其中該多肽與可賦予該多肽有用性質之另一肽或多肽(諸如融合配偶體、蛋白質標籤或其他化學部分，諸如，舉例而言，抗體之抗原決定基、聚組胺酸序列、生物素部分及諸如此類)融合之變體。本文描述之抗體或抗原結合片段可包括其中來自一個物種之胺基酸殘基於保守或非保守位置取代另一物種中之相應殘基之變體。在其他實施例中，於非保守位置之胺基酸殘基係經保守或非保守殘基取代。用於獲得此等變體之技術(包括基因(刪除、突變等)、化學及酶促技術)為一般技術者已知。

胺基酸取代可為保守的，藉此其意謂經取代胺基酸具有與原始胺基酸相似之化學性質。熟習此項技術者將瞭解哪些胺基酸共用相似化學性質。例如，下列胺基酸組共用相似化學性質諸如尺寸、電荷及極性：組1：Ala、Ser、Thr、Pro、Gly；組2：Asp、Asn、Glu、Gln；組3：His、Arg、Lys；組4：Met、Leu、Ile、Val、Cys；組5：Phe、Thy、Trp。

本文描述之連接子特異性抗體或抗原結合片段可體現數種抗體同型，諸如IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。在一些實施例中，該抗體同型係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型，較佳IgG1或IgG4同型。在一些實施例中，該抗體同型係IgA1或IgA2。抗體或其抗原結合片段特異性主要由CDR之胺基酸序列及排佈決定。因此，一種同型之CDR可轉移至另一同型而不改變抗原特異性。或者，已建立引起融合瘤自產生一種抗體同型轉換為另一者(同型轉換)而不改變抗原特異性之技術。因此，此等抗體同型係於本文描述之抗體或抗原結合片段之範圍內。

抗體或抗原結合片段針對包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽可具有任何程度之親和力或強結合性。在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段可以一定範圍之親和力(K _D)結合SEQ ID NO: 98之連接子肽。在各種實施例中，如藉由表面電漿子共振或金耐科薩(Kinexa)方法測定，如由熟習此項技術者實踐，該抗體或抗原結合片段以高親和力，例如，以等於或小於約10 ^-7M，諸如(但不限於) 1至9.9 (或於其中之任何範圍或值，諸如1、2、3、4、5、6、7、8或9)×10 ^-8M、10 ^-9M、10 ^-10M、10 ^-11M、10 ^-12M、10 ^-13M、10 ^-14M、10 ^-15M或於其中之任何範圍或值之K _D結合至SEQ ID NO: 98之連接子肽。一個示例性親和力係等於或小於1×10 ^-8M。另一示例性親和力係等於或小於1×10 ^-9M。

測試抗體結合至靶肽或其任何部分之能力之方法為此項技術中已知且包括任何抗體-抗原結合分析，諸如，舉例而言，放射性免疫分析(RIA)、西方墨點法、酶聯免疫吸附分析(ELISA)、免疫沈澱法及競爭抑制分析。

本文亦揭示經分離聚核苷酸，其編碼特異性結合至包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之抗體或抗原結合片段。能夠編碼本文提供之可變域鏈段之經分離聚核苷酸可包括於相同或不同之載體上以產生抗體或抗原結合片段。可編碼本文描述之抗連接子抗體或其抗原結合片段之VH或VL之例示性聚核苷酸序列顯示於表2中。

在一些實施例中，編碼抗連接子抗體或抗原結合片段之經分離聚核苷酸包含： SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46或48之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列；及/或 SEQ ID NO: 69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95或97之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列。

在一些實施例中，編碼抗連接子抗體或抗原結合片段之經分離聚核苷酸包含： SEQ ID NO: 22之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 81之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 24之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 26之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 28之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 97之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 32之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 34之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 71之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 34之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 95之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 36之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 71之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 79之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 83之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 85之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 40之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 42之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 93之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 42之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 69之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 44之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 87之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列； SEQ ID NO: 46之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 89之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列；或 SEQ ID NO: 48之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列，及SEQ ID NO: 91之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%、85%、90%，較佳95%或更大，諸如95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列。

在一些實施例中，編碼抗連接子抗體或抗原結合片段之經分離聚核苷酸包含： SEQ ID NO: 22之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 81之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 24之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 26之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 28之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 97之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 32之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 34之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 71之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 34之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 95之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 36之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 71之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 79之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 83之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 85之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 40之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 42之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 93之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 42之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 69之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 44之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 87之編碼VL之核苷酸序列； SEQ ID NO: 46之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 89之編碼VL之核苷酸序列；或 SEQ ID NO: 48之編碼VH之核苷酸序列，及SEQ ID NO: 91之編碼VL之核苷酸序列。

編碼重組抗原結合蛋白之聚核苷酸亦於本發明之範圍內。在一些實施例中，本文描述之聚核苷酸(及其編碼之肽)包括前導序列。可採用此項技術中已知的任何前導序列。該前導序列可包括(但不限於)限制位點或轉譯起始位點。

本文亦提供包含本文描述之聚核苷酸之載體。該等載體可為表現載體。因此，含有編碼受關注多肽之序列之重組表現載體經審慎考慮為在本發明之範圍內。該表現載體可含有一或多種另外序列諸如(但不限於)調節序列(例如，啟動子、強化子)、選擇標記及聚腺苷酸化信號。用於轉形範圍廣泛之宿主細胞之載體係眾所周知的且包括(但不限於)質體、噬質體、黏接質體、桿狀病毒、桿粒(bacmid)、細菌人工染色體(BAC)、酵母人工染色體(YAC)，及其他細菌、酵母及病毒載體。

於說明書範圍內之重組表現載體包括編碼至少一種重組蛋白的合成性、基因體或cDNA衍生之核酸片段可操作地連接至適宜調節元件。此等調節元件可包括轉錄啟動子、編碼適宜mRNA核糖體結合位點之序列，及控制轉錄及轉譯終止之序列。表現載體(尤其哺乳動物表現載體)亦可包括一或多個非轉錄元件，諸如複製起點、連接至欲表現之基因之適宜啟動子及強化子、其他5'或3'側邊非轉錄序列、5'或3'非轉譯序列(諸如必要之核糖體結合位點)、聚腺苷酸化位點、剪接供體及受體位點，或轉錄終止序列。亦可併入賦予在宿主中複製之能力之複製起點。

欲用以轉形脊椎動物細胞之表現載體中之轉錄及轉譯控制序列可由病毒來源提供。例示性載體可如由Okayama及Berg，3 Mol.Cell. Biol. 280 (1983)描述般構築。

在一些實施例中，編碼抗體或抗原結合片段之序列係放置於強效組成型啟動子之控制下，諸如用於下列基因之啟動子：次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HPRT)、腺苷去胺酶、丙酮酸激酶、β-肌動蛋白、人類肌凝蛋白、人類血色素、人類肌肉肌酸等。另外，許多病毒啟動子於真核細胞中組成性地發揮作用且適合與本文描述之實施例一起使用。此等病毒啟動子包括(但不限於)巨細胞病毒(CMV)即刻早期啟動子、SV40之早期及晚期啟動子、小鼠***腫瘤病毒(MMTV)啟動子、馬洛尼白血病病毒之長末端重複序列(LTR)、人類免疫缺陷病毒(HIV)、艾司坦巴爾病毒(EBV)、勞斯肉瘤病毒(RSV)及其他反轉錄病毒，及單純疱疹病毒之胸苷激酶啟動子。在一項實施例中，編碼連接子特異性抗體或其抗原結合片段之序列係放置於誘導型啟動子之控制下，諸如金屬硫蛋白啟動子、四環素誘導型啟動子、去氧羥四環素誘導型啟動子、含有一或多種干擾素刺激之反應元件(ISRE) (諸如蛋白激酶R、2',5'-寡腺苷酸合成酶、Mx基因、ADAR1，及諸如此類)之啟動子。

本文描述之載體可含有一或多個內部核糖體進入位點(IRES)。包含IRES序列於融合載體內可有利於增強一些蛋白質之表現。在一些實施例中，載體系統將包括一或多個聚腺苷酸化位點(例如，SV40)，其可在前述核酸序列之任一者之上游或下游。載體組分可連續地連接，或以一種為表現基因產物提供最佳間隔之方式排佈(即，藉由在ORF之間引入「間隔子」核苷酸)，或以另一種方式放置。調節元件(諸如IRES模體)亦可經排佈以為表現提供最佳間隔。

載體可包含此項技術中熟知的選擇標記。選擇標記包括正向選擇及負向選擇標記，例如，抗生素抗性基因(例如，新黴素抗性基因、潮黴素抗性基因、康黴素抗性基因、四環素抗性基因、青黴素抗性基因、嘌黴素抗性基因、殺稻瘟菌素抗性基因)、麩胺酸合成酶基因、HSV-TK、用於更昔洛韋(ganciclovir)選擇之HSV-TK衍生物，或用於6-甲基嘌呤選擇之細菌嘌呤核苷磷解酶基因(Gadi等人，7 Gene Ther. 1738-1743 (2000))。編碼選擇標記或選殖位點之核酸序列可在編碼受關注多肽或選殖位點之核酸序列之上游或下游。

本文描述之載體可用編碼本文描述之抗體或抗原結合片段之基因轉形各種細胞。例如，該等載體可用以生成產生連接子特異性抗體或抗原結合片段之細胞。因此，另一態樣之特徵在於用包含編碼特異性結合SEQ ID NO: 98之連接子肽之抗體或其抗原結合片段(諸如本文描述並例示之抗體或抗原結合片段)之核酸序列之載體轉形之宿主細胞。

用於將外源基因引入細胞內之多種技術為此項技術中已知且可出於進行本文描述方法之目的，根據本文描述並例示之各種實施例，用以構築重組細胞。所用技術應提供將異源性基因序列穩定轉移至宿主細胞，使得該異源性基因序列可由細胞後代遺傳並表現，且使得接受者細胞之必要發育及生理功能不受破壞。可使用之技術包括(但不限於)染色體轉移(例如，細胞融合、染色體介導之基因轉移、微細胞介導之基因轉移)、物理方法(例如，轉染、球形質體融合、顯微注射、電穿孔、脂質體載體)、病毒載體轉移(例如，重組DNA病毒、重組RNA病毒)及諸如此類(描述於Cline, 29 Pharmac. Ther. 69-92 (1985)中)。亦可使用磷酸鈣沈澱及聚乙二醇(PEG)誘導之細菌原生質體與哺乳動物細胞之融合以轉形細胞。

適用於表現本文描述之連接子特異性抗體或抗原結合片段之細胞係較佳真核細胞，更佳植物、囓齒動物或人類起源之細胞，例如(但不限於) NSO、CHO、CHOK1、perC.6、Tk-ts13、BHK、HEK293細胞、COS-7、T98G、CV-1/EBNA、L細胞、C127、3T3、HeLa、NS1、Sp2/0骨髓瘤細胞及BHK細胞系等。另外合適之細胞可包括昆蟲細胞(諸如Sf7細胞)、酵母細胞、植物細胞或細菌細胞(諸如大腸桿菌)。另外，可使用融合瘤細胞進行抗體之表現。此項技術中已充分確立用於產生融合瘤之方法。

可針對本文描述之抗體或抗原結合片段之重組表現選擇或篩選經本文描述之表現載體轉形之細胞。擴增重組陽性細胞並篩選顯示所需表型(諸如高程度表現、增強之生長性質，或產生具有所需生物化學特性(例如，由於蛋白質修飾或改變之轉譯後修飾)之蛋白質之能力)之次純系。此等表型可由於給定次純系之固有性質或由於突變。突變可通過使用化學物質、UV波長光、輻射、病毒、***誘變原、DNA錯配修復之抑制，或此等方法之組合進行。

適用於製造抗體之方法為此項技術中已知。例如，標準融合瘤方法描述於(例如) Köhler及Milstein，Eur. J. Immunol., 5, 511-519 (1976)、Harlow及Lane (編), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988)及C. A. Janeway等人(編), Immunobiology，第5版，Garland Publishing, New York, N.Y. (2001)中。或者，其他方法，諸如EBV融合瘤方法(Haskard及Archer，J. Immunol. Methods, 74(2), 361-67 (1984)，及Roder等人，Methods Enzymol., 121, 140-67 (1986))，及噬菌體載體表現系統(參見，例如，Huse等人，Science, 246, 127581 (1989))為此項技術中已知。另外，於非人類動物中產生抗體之方法描述於(例如)美國專利第5,545,806、5,569,825及5,714,352號，及美國專利申請公開案第2002/0197266 A1號中。

亦可使用噬菌體顯示以產生抗體。在此方面，編碼抗體之抗原結合可變(V)域之噬菌體庫可使用標準分子生物學及重組DNA技術(參見，例如，Sambrook等人，同上，及Ausubel等人，同上)產生。選擇特異性結合至所需抗原(即，SEQ ID NO: 98之連接子肽)的編碼具有所需特異性之可變區之噬菌體，並重構包含所選可變域之完整或部分抗體。將編碼重構抗體之核酸序列引入適宜細胞系(諸如用於融合瘤產生之骨髓瘤細胞)內，使得該細胞分泌具有單株抗體之特性之抗體(參見，例如，Janeway等人，同上，Huse等人，同上，及美國專利第6,265,150號)。

抗體可由對於特異性重鏈及輕鏈免疫球蛋白為基因轉基因的轉基因小鼠產生。此等方法為此項技術中已知且描述於(例如)美國專利第5,545,806及5,569,825號，及Janeway等人，同上中。

用於產生人類化抗體之方法為此項技術中已知且描述於(例如) Janeway等人，同上，美國專利第5,225,539、5,585,089及5,693,761號、歐洲專利第0239400 B1號及英國專利第2188638號中。人類化抗體亦可使用美國專利第5,639,641號及Pedersen等人，J. Mol. Biol., 235, 959-973 (1994)中描述之抗體表面重塑技術予以產生。

如本文利用，抗體可為多鏈或單鏈，或完整免疫球蛋白，且可衍生自天然來源或重組來源。抗體可為免疫球蛋白分子之四聚體。

在一些實施例中，該抗體係雙特異性抗體。現有抗體之VL及/或VH區或如本文描述鑑別之VL及VH區可工程化為雙特異性全長抗體。製造此等雙特異性抗體可藉由使用諸如彼等描述於以下中之技術調節抗體Fc中之CH3相互作用以形成雙特異性抗體：美國專利第7,695,936號；國際專利公開案第WO04/111233號；美國專利公開案第2010/0015133號；美國專利公開案第2007/0287170號；國際專利公開案第WO2008/119353號；美國專利公開案第2009/0182127號；美國專利公開案第2010/0286374號；美國專利公開案第2011/0123532號；國際專利公開案第WO2011/131746號；國際專利公開案第WO2011/143545號；或美國專利公開案第2012/0149876號。例如，本發明之雙特異性抗體可活體外於無細胞環境中藉由將非對稱突變引入兩個單特異性同二聚體抗體之CH3區內並在還原條件下自兩個親代單特異性同二聚體抗體形成雙特異性異二聚體抗體以根據國際專利公開案第WO2011/131746號中描述之方法容許雙硫鍵異構化而產生。在該等方法中，第一單特異性二價抗體及第二單特異性二價抗體係經工程化以於CH3域具有某些促進異二聚體穩定性之取代；將該等抗體在足以容許鉸鏈區中之半胱胺酸經受雙硫鍵異構化之還原條件下一起培養；藉此藉由Fab臂交換產生雙特異性抗體。培養條件可視需要恢復至非還原。可使用之例示性還原劑係2-巰基乙胺(2-MEA)、二硫蘇糖醇(DTT)、二硫赤蘚糖醇(DTE)、麩胱甘肽、參(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱胺酸及β-巰基乙醇，較佳選自由以下組成之群之還原劑：2-巰基乙胺、二硫蘇糖醇及參(2-羧乙基)膦。例如，可使用在至少20℃之溫度下在至少25 mM 2-MEA之存在下或在至少0.5 mM二硫蘇糖醇之存在下在5至8之pH下，例如在7.0之pH下或在7.4之pH下培養至少90 min。

雙特異性抗體之抗原結合區可採取任何容許特異性識別標靶的形式，例如該結合區可為或可包括重鏈可變域、Fv (重鏈可變域及輕鏈可變域之組合)、基於纖網蛋白III型域之結合域(諸如來自纖網蛋白，或基於來自纖網蛋白之III型域之共通性，或來自腱生蛋白或基於來自腱生蛋白之III型域之共通性，諸如來自Janssen Biotech, Inc.之Centyrin分子，參見例如WO2010/051274及WO2010/093627)。因此，本文提供包含結合連接子肽及另一抗原之兩個不同抗原結合區之雙特異性分子。

已經描述雙特異性抗體之不同形式且最近由Chames及Baty (2009) Curr Opin Drug Disc Dev 12: 276回顧。

在一些實施例中，本發明之雙特異性抗體係雙功能抗體、交叉抗體或經由如彼等本發明中描述之受控Fab臂交換獲得之雙特異性抗體。

在一些實施例中，雙特異性抗體包括具有互補CH3域以迫使異二聚化之IgG樣分子；重組IgG樣雙靶向分子，其中該分子之兩側各含有至少兩種不同抗體之Fab片段或該Fab片段之部分；IgG融合分子，其中全長IgG抗體係融合至額外之Fab片段或Fab片段之部分；Fc融合分子，其中單鏈Fv分子或穩定之雙功能抗體係融合至重鏈恆定域、Fc區或其部分；Fab融合分子，其中不同Fab片段融合在一起；基於ScFv及雙功能抗體及重鏈抗體(例如，域抗體、奈米抗體)，其中不同單鏈Fv分子或不同雙功能抗體或不同重鏈抗體(例如域抗體、奈米抗體)係彼此融合或融合至另一蛋白質或載體分子。

在一些實施例中，具有互補CH3域分子之IgG樣分子包括Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech)、杵臼(Knobs-into-Holes)(Genentech)、CrossMAb (Roche)及靜電匹配(Amgen)、LUZ-Y (Genentech)、股交換工程化域抗體(參見Dbody)(EMD Serono)、Biclonic (Merus)及DuoBody (Genmab A/S)。

在一些實施例中，重組IgG樣雙靶向分子包括雙靶向(DT)-Ig (GSK/Domantis)、二合一抗體(Genentech)、交聯Mab (Karmanos Cancer Center)、mAb2 (F-Star)及CovX抗體(CovX/Pfizer)。

在一些實施例中，IgG融合分子包括雙重可變域(DVD)-Ig (Abbott)、IgG樣雙特異性(InnClone/Eli Lilly)、Ts2Ab (MedImmune/AZ)及BsAb (Zymogenetics)、HERCULES (Biogen Idec)及TvAb (Roche)。

在一些實施例中，Fc融合分子包括ScFv/Fc融合物(Academic Institution)、SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion、Zymogenetics/BMS)、雙重親和力重新靶向技術(Fc-DART) (MacroGenics)及雙重(ScFv).sub.2-Fab (國家抗體醫學研究中心-中國)。

在一些實施例中，Fab融合雙特異性抗體包括F(ab)2 (Medarex/AMGEN)、雙重作用或雙Fab (Genentech)、對接鎖定(DNL) (ImmunoMedics)、二價雙特異性(Biotecnol)及Fab-Fv (UCB-Celltech)。基於ScFv-之抗體、基於雙功能抗體之抗體及域抗體包括(但不限於)雙特異性T細胞接合子(BiTE) (Micromet)、串聯雙功能抗體(Tandab) (Affimed)、雙重親和力重新靶向技術(DART) (MacroGenics)、單鏈雙功能抗體(Academic)、TCR樣抗體(AIT，ReceptorLogics)、人類血清白蛋白ScFv融合物(Merrimack)及COMBODY (Epigen Biotech)、雙靶向奈米抗體(Ablynx)、僅雙靶向重鏈域抗體。

本發明之全長雙特異性抗體可(例如)使用兩個單特異性二價抗體之間的Fab臂交換(或半分子交換)，藉由於各半分子中之重鏈CH3界面引入取代以有利於兩個具有不同特異性之抗體半分子在無細胞環境中活體外或使用共表現形成異二聚體而產生。Fab臂交換反應係雙硫鍵異構化反應及CH3域之解離-締合之結果。親代單特異性抗體之鉸鏈區中之重鏈雙硫鍵係經還原。親代單特異性抗體中之一者之所得游離半胱胺酸與第二親代單特異性抗體分子之半胱胺酸殘基形成重鏈間雙硫鍵且同時親代抗體之CH3域藉由解離-締合釋放並重組。Fab臂之CH3域可經工程化以有利於異二聚化而非同二聚化。所得產物係具有兩個Fab臂或半分子之雙特異性抗體，該等兩個Fab臂或半分子各結合不同抗原決定基。

如本文使用之「同二聚化」係指兩個具有相同CH3胺基酸序列之重鏈之相互作用。如本文使用之「同二聚體」係指具有兩個具有相同CH3胺基酸序列之重鏈之抗體。

如本文使用之「異二聚化」係指兩個具有不同CH3胺基酸序列之重鏈之相互作用。如本文使用之「異二聚體」係指具有兩個具有不同CH3胺基酸序列之重鏈之抗體。

可使用「杵臼」策略(參見，例如，PCT國際公開案第WO 2006/028936號)以產生全長雙特異性抗體。簡而言之，於人類IgG中形成CH3域界面之所選胺基酸可於影響CH3域相互作用之位置經突變以促進異二聚體形成。將具有小側鏈之胺基酸(臼)引入特異性結合第一抗原之抗體之重鏈內並將具有大側鏈之胺基酸(杵)引入特異性結合第二抗原之抗體之重鏈內。在兩種抗體之共表現後，由於具有「臼」之重鏈與具有「杵」之重鏈優先相互作用而形成異二聚體。形成杵及臼之例示性CH3取代對係(表示為第一重鏈之第一CH3域中之經修飾位置/第二重鏈之第二CH3域中之經修飾位置)：T366Y/F405A、T366W/ F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S及T366W/T366S_L368A_Y407V。

可使用其他策略，諸如使用靜電相互作用藉由取代一個CH3表面上帶正電之殘基及第二CH3表面上帶負電之殘基促進重鏈異二聚化，如美國專利公開案第US2010/0015133號；美國專利公開案第US2009/0182127號；美國專利公開案第US2010/028637號或美國專利公開案第US2011/0123532號中描述。在其他策略中，異二聚化可藉由下列取代(表示為第一重鏈之第一CH3域中之經修飾位置/第二重鏈之第二CH3域中之經修飾位置)促進：如美國專利公開案第US2012/0149876號或美國專利公開案第US2013/0195849號中描述之L351Y_F405AY407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F或T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W。

在一些實施例中，該抗連接子抗體或其抗原結合片段可經修飾以包含可偵測標記，諸如，舉例而言，放射性同位素、螢光團(例如，螢光素異硫氰酸酯(FITC)、藻紅素(PE))、酶(例如，鹼性磷酸酶、山葵過氧化酶)及元素粒子(例如，金粒子)。

例示性可偵測標記包括放射性同位素、磁珠、金屬珠、膠體粒子、螢光染料、電子緻密試劑、酶(例如，如常用於ELISA中)、生物素、地高辛(digoxigenin)、半抗原、發光分子、化學發光分子、螢光染料、螢光團、螢光淬滅劑、有色分子、放射性同位素、閃爍物、抗生物素蛋白、卵白素、蛋白A、蛋白G、抗體或其片段、聚組胺酸、Ni ²⁺、Flag標籤、myc標籤、重金屬、酶、鹼性磷酸酶、過氧化酶、螢光素酶、電子供體/受體、吖錠酯及比色受質。

可偵測標記可自發發射信號，諸如當該可偵測標記係放射性同位素時。在其他情況下，，該可偵測標記由於受外場刺激而發射信號。適宜染料包括任何市售染料，諸如，舉例而言，5(6)-羧基螢光素、IR染料680RD馬來醯亞胺或IR染料800CW、多吡啶釕染料，及諸如此類。適宜螢光團係螢光素異硫氰酸酯(FITC)、螢光素硫半卡肼、玫瑰紅、德州紅、CyDyes(例如，Cy3、Cy5、Cy5.5)、Alexa Fluors(例如，Alexa488、Alexa555、Alexa594；Alexa647)、近紅外(NIR) (700至900 nm)螢光染料及羰花青及胺基苯乙烯基染料。 使用連接子特異性抗體之方法

本文提供用於生物偵測及量測中之連接子特異性抗體或其抗原結合片段。特定言之，此等抗體或抗原結合片段可適用於在樣本中偵測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽。因此，本發明提供一種於樣本中偵測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽之方法，其可包括(i)使該樣本與本文描述之經分離抗體或抗原結合片段接觸，及(ii)偵測該多肽對該經分離抗體或抗原結合片段之結合。用於此等方法中之抗體包括彼等本文上文描述者，例如具有表1或2中(例如CDR或可變域序列)及此等抗體之進一步討論中所闡述特徵之連接子特異性抗體或抗原結合片段。

本文亦提供一種於樣本中量測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽的量之方法。在一些實施例中，該方法包括(i)使該樣本與本文描述之經分離抗體或抗原結合片段接觸，及(ii)定量該多肽對該經分離抗體或抗原結合片段之結合。此方法可進一步包括比較步驟(ii)中所量測之結合與對照值。在一些實施例中，該對照值係預定值(例如，標準曲線)。用於此等方法中之抗體包括彼等本文上文描述者，例如具有表1或2中(例如CDR或可變域序列)及此等抗體之進一步討論中所闡述特徵之連接子特異性抗體或抗原結合片段。

在一些實施例中，樣本可為包含多肽之液體組合物，該多肽包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。在一些實施例中，該多肽係抗體、抗原結合片段或嵌合抗原受體(CAR)。該抗體或抗原結合片段可為(例如)人類抗體、單株抗體、單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。在一特定實施例中，待分析之多肽係scFv。在一些實施例中，待分析之多肽係多特異性抗體或抗原結合片段。在一特定實施例中，待分析之多肽係雙特異性抗體或抗原結合片段。在一特定實施例中，待分析之多肽係嵌合抗原受體(CAR)。該CAR可呈現於免疫細胞(諸如T細胞或NK細胞)上。

在一些實施例中，樣本可來源於尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘤細胞、非組織相關聯之細胞(即，游離細胞)、組織(例如，手術切除之腫瘤組織，生檢，包括細針抽吸)、組織學製劑，及諸如此類。

在一些實施例中，樣本可與多於一種本文描述之連接子特異性抗體或抗原結合片段接觸。例如，樣本可與第一連接子特異性抗體或其抗原結合片段接觸，及然後與第二連接子特異性抗體或其抗原結合片段接觸，其中該第一抗體或抗原結合片段及該第二抗體或抗原結合片段不為相同之抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，該第一抗體或其抗原結合片段可在接觸該樣本前固定於表面，諸如多孔盤、晶片或相似基材。在其他實施例中，該第一抗體或其抗原結合片段可在接觸該樣本前根本不固定或附著至任何事物。

在一些態樣中，本文亦提供包含本文描述之經分離抗體或抗原結合片段之親和力基質。本文描述之連接子特異性抗體及抗原結合片段可藉由附著至適宜撐體予以固定。撐體之實例包括(但不限於)珠、膜、瓊脂糖、磁珠、盤、管、管柱。本文描述之連接子特異性抗體及抗原結合片段可附著至ELISA盤、磁珠或表面電漿子共振生物感測器晶片。將抗體及抗原結合片段附著至撐體之方法為熟習此項技術者已知，且包括(例如)使用親和力結合對，例如生物素及卵白素，或抗體及抗原，或使用共價鍵聯。

本文描述之連接子特異性抗體及抗原結合片段可經可偵測標記。在一些實施例中，經標記之抗體及抗原結合片段可促進經由本文描述之方法偵測受關注連接子肽(例如，SEQ ID NO: 98)。許多此等標記容易為熟習此項技術者已知。例如，適宜標記包括(但不應認為限於)放射性標記、螢光標記、抗原決定基標籤、生物素、發色團標記、ECL標記或酶。更具體言之，本文描述之標記包括釕、 ¹¹¹In-DOTA、 ¹¹¹In-二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、山葵過氧化酶、鹼性磷酸酶及β-半乳糖苷酶、聚組胺酸(HIS標籤)、吖啶染料、花青染料、螢光酮染料、噁嗪染料、啡啶染料、玫瑰紅染料、Alexafluor®染料，及諸如此類。

本文描述之連接子特異性抗體及抗原結合片段可用於多種分析中以於樣本中偵測受關注連接子肽(例如，SEQ ID NO: 98)。一些適宜分析包括(但不應認為限於)西方墨點法分析、放射性免疫分析、表面電漿子共振、免疫螢光測定法、免疫沈澱法、平衡透析、免疫擴散、電化學發光(ECL)免疫分析、免疫組織化學、螢光活化之細胞分選(FACS)或ELISA分析。套組

本文提供用於在生物樣本中偵測受關注連接子肽(例如，SEQ ID NO: 98)之套組。此等套組可包括本文描述之連接子特異性抗體或其抗原結合片段或編碼其之聚核苷酸或載體中之一或多者，及該套組之使用說明。

本文提供之連接子特異性抗體或抗原結合片段可為在溶液中；凍乾的；固定於基材、載體或盤；或經可偵測標記。

本文描述之套組亦可包括適用於進行本文描述之方法之另外組件。以實例說明之，該等套組可包含用於自個體獲得樣本、對照或參考樣本(例如，來自患有緩慢進展之癌症之個體及/或尚未患有癌症之個體之樣本)之構件、一或多個樣本隔室及/或描述進行本發明之方法之指導材料及組織特異性對照物或標準品。

用於量測包含SEQ ID NO: 98之連接子肽之多肽的量之構件可進一步包括(例如)緩衝劑或其他用於定量該多肽對該經分離抗體或抗原結合片段之結合之分析中之試劑。該等說明(instruction)可為(例如)用於進行該分析之印刷式說明及/或用於評估該多肽之量的說明。

本文描述之套組亦可包括用於自個體分離樣本之構件。此等構件可包含一或多項可用以自個體獲得流體或組織之設備或試劑。用於自個體獲得樣本之構件亦可包含用於自血液樣本分離血液組分(諸如血清)之構件。 產生針對免疫隱性抗原決定基之抗體之方法

本文提供產生特異性結合至免疫隱性抗原決定基之抗體之方法。此等方法可包括下列步驟中之一或多者： a) 用一或多種(例如，1、2、3、4、5、6或更多種)耐受原使成年動物免疫， b) 對該成年動物投與選擇性殺死快速增殖之淋巴球之藥劑， c) 用一或多種(例如，1、2、3、4、5、6或更多種)免疫原使該成年動物免疫，該等免疫原各包含免疫隱性抗原決定基經結合至步驟(a)中使用之耐受原之一者， d) 在步驟(c)後自該成年動物獲得B淋巴球， e)篩選由步驟(d)中獲得之B淋巴球產生之融合瘤或抗體庫以獲得特異性結合至該免疫隱性抗原決定基之候選抗體；及 f) 分離步驟(e)中鑑別為特異性結合至該免疫隱性抗原決定基之抗體。

在一些實施例中，步驟(c)包括在初始免疫化後，對成年動物投與一或多個加強劑量之該免疫原或包含免疫隱性抗原決定基經結合至步驟(a)中使用之不同耐受原之免疫原。該等加強劑量的投與量可為足以提高針對免疫原之抗體效價及/或增加分泌針對免疫原之抗體之漿細胞遷移至動物脾內。在一些實施例中，在初始免疫化後，投與1、2、3、4、5、6或更多個加強劑量。在一些實施例中，在初始免疫化後，投與3個加強劑量。在一些實施例中，在初始免疫化後，投與4個加強劑量。在一些實施例中，該等加強劑量可在初始免疫化後約1週、約2週、約3週、約4週、1個月、約5週、約6週、約7週、約8週、2個月、約9週、約10週、約11週、約12週或3個月投與。在一例示性實施例中，該初始免疫化係以一劑量之包含免疫隱性抗原決定基經結合至耐受原中之一者之免疫原進行，接著係三個加強劑，各包含相同免疫隱性抗原決定基經結合至步驟(a)使用之耐受原中之各者，及融合前加強劑，包含相同免疫隱性抗原決定基經結合至步驟(a)使用之耐受原中之各者之混合物。

選擇性殺死快速增殖之淋巴球之藥劑可在用耐受原使動物免疫後投與。用於本發明之方法中之藥劑可為抑制快速增殖之免疫細胞(包括B淋巴球及T淋巴球之純系)生長的藥劑。因此，產生針對該等耐受原之抗體並因此快速***之B淋巴球自系統耗盡。能夠選擇性殺死快速複製/***細胞之適當藥劑包括任何細胞抑制或細胞毒性化合物或藥物，例如，用於化學療法中之藥物，其等作用方式係阻止細胞生長或殺死快速***之細胞。適用於本發明之方法中之例示性化合物包括烷化劑、抗代謝物、蒽環類、拓樸異構酶抑制劑、細胞毒性抗生素及天然產物類別中的化合物。此等化合物之實例包括(但不限於)順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、環孢素A、麥考酚酯、黴酚酸酯(mofetil)、硫唑嘌呤、他克莫司、來氟米特、黴酚酸、美法侖、苯丁酸氮芥、胺甲喋呤、氟尿嘧啶、長春新鹼、白消安、甲基二(氯乙基)胺、苯丁酸氮芥、依弗醯胺、環磷醯胺、長春花生物鹼及紫杉烷類(諸如紫杉醇(Taxol)及多西他賽)、I型拓樸異構酶抑制劑(諸如喜樹鹼類藥物，例如伊立替康及拓撲替康)及II型拓樸異構酶抑制劑(諸如安吖啶、依託泊苷、磷酸依託泊苷及替尼泊苷)。在一項實施例中，使用環磷醯胺作為本發明之方法中的該藥劑。

在一些實施例中，選擇性殺死快速增殖之淋巴球之藥劑可投與多於一次，例如，兩次、三次、四次或更多次。在一些實施例中，選擇性殺死快速增殖之淋巴球之藥劑可投與三次。在一些實施例中，多個劑量之選擇性殺死快速增殖之淋巴球之藥劑可以8小時、12小時、16小時、24小時、30小時、36小時、42小時或48小時間隔投與。在一些實施例中，選擇性殺死快速增殖之淋巴球之藥劑可在耐受原誘導後10 min、30 min、1小時、8小時、12小時、16小時、24小時、30小時、36小時、42小時、48小時、60小時、72小時、4天、5天、6天、1週或10天投與。選擇該藥劑之劑量使得其足夠高至可對B細胞發揮其細胞毒性但不高至動物對引起不可接受之毒性或副作用。在本文描述之一例示性實施例中，環磷醯胺係以100 mg/kg動物體重投與並於耐受原誘導後之3個不同時間點：10 min、24小時及48小時投與。發現此劑量及投與時間表為研究提供乾淨無耐受原之健康動物模型。可調整該劑量，只要此等劑量足夠高至可對B細胞發揮其細胞毒性但不高至對動物引起不可接受之毒性或副作用即可。例如，可使用諸如約70 mg/kg、約80 mg/kg、約90 mg/kg、約110 mg/kg、約120 mg/kg或約150 mg/kg動物體重之劑量。

倘若已耗盡對耐受原具有反應性之淋巴球，則用一或多種免疫原使動物免疫(方法之步驟(c))，該等免疫原各包含免疫隱性抗原決定基經結合至步驟(a)中使用之耐受原之一者。儘管不希望受理論束縛，但據信在此步驟中，僅受刺激複製之B細胞(或至少顯著比例之受刺激複製之B細胞)將為識別該等耐受原與該等免疫原(即，免疫隱性抗原決定基)之間之差異的B細胞。以此方式，產出產生區分該等耐受原與該等免疫原之抗體之B細胞且可產生可結合至該等免疫原而非該等耐受原之抗體。

用於本申請案之方法中之免疫隱性抗原決定基可包含可被所用動物之免疫系統識別為外來物且將導致觸發免疫反應並產生抗體之任何分子或由其構成。耐受原與免疫原之間的差異可非常小，例如可為數個胺基酸長度，因為據信該方法之敏感度意謂可產生將區分耐受原與免疫原在結構上之僅較小差異之抗體。

在一些實施例中，免疫隱性抗原決定基係長度小於約50個胺基酸之短肽。在一些實施例中，該免疫隱性抗原決定基係約6至40個胺基酸、約8至35個胺基酸、約10至20個胺基酸、約10至30個胺基酸、約15至25個胺基酸或約20個胺基酸之短肽。在一些實施例中，該免疫隱性抗原決定基係長度10個胺基酸、11個胺基酸、12個胺基酸、13個胺基酸、14個胺基酸、15個胺基酸、16個胺基酸、17個胺基酸、18個胺基酸、19個胺基酸、20個胺基酸、21個胺基酸、22個胺基酸、23個胺基酸、24個胺基酸或25個胺基酸之短肽。在一項實施例中，該免疫隱性抗原決定基係長度約14個胺基酸之短肽。在一項實施例中，該免疫隱性抗原決定基係長度約20個胺基酸之短肽。在一項特定實施例中，該免疫隱性抗原決定基係SEQ ID NO: 98之連接子肽或其片段。

在一些實施例中，用於本發明之方法中之耐受原包含載體蛋白。適用於本發明之方法中之載體蛋白之實例包括(但不限於)卵白蛋白(OVA)、鑰孔血藍蛋白(KLH)、藍色載體蛋白(BCP)、甲狀腺球蛋白(THY)、大豆胰蛋白酶抑制劑(STI)及多附著肽(MAP)、白蛋白、血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、C反應蛋白、伴白蛋白、乳白蛋白、離子載體蛋白、醯基載體蛋白、信號轉導銜接蛋白、雄性素結合蛋白、鈣結合蛋白、鈣調蛋白結合蛋白、血漿銅藍蛋白、膽固醇酯轉移蛋白、f盒蛋白、脂肪酸結合蛋白、濾泡抑素、濾泡抑素相關蛋白、GTP結合蛋白、胰島素樣生長因子結合蛋白、鐵結合蛋白、潛伏TGFβ結合蛋白、捕光蛋白複合物、淋巴球抗原、膜運輸蛋白、神經垂體素、週質結合蛋白、磷酸結合蛋白、磷脂醯乙醇胺結合蛋白、磷脂運輸蛋白、視黃醇結合蛋白、RNA結合蛋白、s期激酶相關蛋白、性激素結合球蛋白、甲狀腺素結合蛋白、轉鈷胺素、運皮素蛋白、轉鐵蛋白結合蛋白及/或維生素D結合蛋白。

如上文描述，脾細胞係獲自免疫動物並與骨髓瘤細胞或能夠於培養中無限複製之轉形細胞融合以產生融合瘤。產生融合瘤之方法為此項技術中熟知且包括(例如)彼等Köhler及Milstein (1975)及Pytowski (1988)中描述之程序，該案之揭示內容係以全文引用之方式併入本文中。選殖個別融合瘤細胞並測試純系的抗體產生。例如，可針對抗原特異性抗體反應性篩選融合瘤上清液。一經鑑別產生與抗原反應之抗體之融合瘤細胞系，則可將該等細胞冷凍並儲存以確保長期供應。當需更多抗體時，後續可解凍此等細胞系以確保長期供應。

待用於本發明之方法中之動物可為任何能夠增強對受關注抗原之免疫反應之動物。因此，較佳之動物係非人類動物或哺乳動物。可使用任何牲畜、家畜或實驗室動物。特定實例包括囓齒動物(例如大鼠、小鼠、天竺鼠、倉鼠)、雪貂、兔、駱馬、綿羊、豬、牛、狗、貓及非人類靈長類動物。在一些實施例中，該動物係小鼠。實例

本文提供下列實例以進一步描述本文揭示之實施例中之一些。該等實例旨在闡述而非限制本文揭示之實施例。實例1：耐受化及免疫化

在本發明實例中，開發一種耐受化技術以破壞載體特異性淋巴球並使免疫系統偏向對較低免疫原性之連接子肽產生反應。耐受化策略係基於以下想法：抗原反應性增殖淋巴球可使用化學烷化劑諸如(但不限於)環磷醯胺優先破壞。因此，在載體蛋白耐受化後以即時方式注射環磷醯胺有助於開發一種能夠在用連接子-載體結合物免疫化後增強連接子特異性免疫反應之小鼠模型。如本文揭示，使用用於投與環磷醯胺之精心設計之劑量及時間方案之此成人耐受化方法易於操作，具有縮短之時間線，並提供一種缺乏耐受原特異性反應之系統。

在免疫化及加強給藥期間，交替進行與MSCD331肽結合之不同載體蛋白(卵白蛋白(OVA)、鑰孔血藍蛋白(KLH)及藍色載體蛋白(BCP))以特異性引導預耐受化動物對該肽之免疫反應。間歇性評估此等動物血清的抗MSCD331效價，並選擇反應最佳之動物以產生雜合體及單株。

用於耐受化及免疫化實驗之實驗動物係於5週齡時獲得之C57/BL6雌性小鼠。為在成年階段誘導對不同載體蛋白的耐受性，將各25 µg KLH、OVA及BCP (Janssen)混合於無菌杜爾貝科磷酸鹽緩衝鹽水(DPBS) (GIBCO，14190-144-500 ML)中，並腹腔內(i.p.)注入15隻C57/BL6小鼠內。耐受化後十分鐘，在第0天腹腔內(i.p.)注射環磷醯胺(100 mg/kg體重)。在第1及2天，遵循相似方法對該等小鼠再次投與環磷醯胺。在三輪環磷醯胺注射後，讓小鼠休息直至第6天。在第7天，收集血清並使用酶聯免疫吸附分析(ELISA)測試耐受原特異性(例如，OVA、KLH、BCP)反應。

對於耐受化動物之免疫化，發現所有15隻動物均具有低或無載體特異性反應，且因此進一步採集用於免疫化。將小鼠分組為3個籠子(定群1至3)，各籠子含有5隻小鼠。在耐受化後第9天使用80 µg/動物之MSCD331-KLH進行初次免疫化。此後接著每兩週一次之加強劑，及進行間歇性效價檢查。投與總計三個加強劑：第一加強劑係使用MSCD331-OVA；第二加強劑係使用MSCD331-BCP；及第三加強劑係使用MSCD331-OVA。初次免疫化係使用弗氏完全佐劑(FCA) (Sigma；F5881-10 mL)，接著弗氏不完全佐劑(FIA) (Sigma；F5506-10 mL)中之三個加強劑進行。籠子1及2中之動物透過皮下(s.c.)途徑免疫，而籠子3中之動物經由腹腔內(i.p.)途徑免疫。對於融合前加強劑，於DPBS (Sigma；14190144)中製備MSCD331-KLH、MSCD331-OVA及MSCD331-BCP之混合物並以100 µg每隻動物進行i.p.投與。例示性免疫化時間表之描述提供於表3中。表3：免疫化時間表

天	抗原投與/效價檢查
不適用	免疫前採血1至20 µl血清；使用ELISA檢查效價
不適用	ELISA用於免疫前血清檢查
第0天	25 μg KLH、OVA及BCP載體蛋白
第0天-10 min	環磷醯胺100 mg/kg小鼠體重
第1天	環磷醯胺100 mg/kg小鼠體重
第2天	環磷醯胺100 mg/kg小鼠體重
第7天	免疫前採血2至20 µl血清；使用ELISA檢查效價
第8天	ELISA用於耐受化檢查
第9天	初次免疫化，80 µg MSCD331-KLH；使用FCA，籠子1及2使用5個皮下位點(40 µl每位點)，及籠子3使用腹腔內途徑
第30天	第1個加強劑，80 µg MSCD331-OVA及IFA佐劑
第37天	第1次採血，使用生物素化MSCD331以ELISA檢查效價
第47天	第2個加強劑，80 µg MSCD331-BCP及FIA
第54天	第2次採血，使用生物素化MSCD331以ELISA檢查效價
第61天	第3個加強劑，80 µg MSCD331-OVA及FIA佐劑
第68天	第3次採血，FACS及ELISA檢查效價
第76天	融合前加強劑，100 µg MSCD331-KLH、OVA及BCP於PBS中；腹腔內位點(200 µl)
第79天	與Sp2/0 IL6細胞融合

對於用於確定耐受化及免疫化之ELISA，用1 µg/ml的稀釋於DPBS中的KLH、OVA、BCP及MSCD331生物素塗佈96孔微量滴定盤(Nunc，456537)並將其在4℃下培養整夜。然後用PBS清洗盤並在室溫下使用5%脫脂奶粉(Chem cruz，SC-2325)對其阻斷1小時。將血清添加至稀釋於DPBS中之經阻斷盤並在37℃下培養2小時。用含有0.05% Tween-20 (SIGMA，P2287-500 mL)之PBS清洗盤並使用製備於1%牛血清白蛋白(BSA) (Hi-media，MB083-100gm)中之山羊抗小鼠IgG山葵過氧化酶(HRP) (R&D Systems，HAF007)偵測結合之IgG。1小時後，使用3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺(TMB)受質(SIGMA，T4444-100 mL)清洗盤並使其顯影。使用2N H ₂SO ₄終止反應並於450 nm量測吸光度(光學密度O.D.)。圖1證實耐受化後第7天來自動物之血清顯示不結合至耐受原。為產生此等資料，來自耐受化動物之血清1:100稀釋於分析稀釋劑中並鋪板至經KLH、OVA及BCP塗佈的盤上以測定任何耐受原特異性效價之存在。將血清效價與僅二級對照進行比較。圖2A至C證實來自耐受動物之血清顯示在第二加強劑後對耐受原(KLH、OVA、BCP)具有低反應性，但對免疫原(MSCD331)具有高反應性。為產生此等資料，將來自動物之採血前、第一次採血及第二次採血血清1:1000稀釋於分析稀釋劑中，並藉由ELISA評估KLH、OVA、BCP及MSCD331特異性反應。圖2A顯示獲自第一動物定群(定群1)之ELISA資料；圖2B顯示獲自第二動物定群(定群2)之ELISA資料；及圖2C顯示獲自第三動物定群(定群3)之ELISA資料。

使用流式細胞分析技術以確認抗MSD331特異性效價。簡而言之，使用過表現具有MSCD331連接子之CAR之NS0細胞系自免疫動物篩選血清。使用野生型(WT) NS0細胞及過表現具有(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99)之CAR之NS0細胞作為反向篩選工具。使用與Alexa fluor 647結合之CD9b137-LH以確認CAR於NS0系上之表現。細胞用1:100稀釋於FACS緩衝劑(含有2% FBS [胎牛血清]之DPBS)中之血清培養，接著添加與藻紅素(PE)結合之山羊抗小鼠IgG (Southern Biotech；1030-09)。於Acea Novocyte流式細胞儀上清洗並獲取細胞。圖3A至3C證實來自耐受化動物之血清顯示免疫化後之MSCD331特異性反應。為產生此等資料，將來自耐受化動物之第一次採血、第二次採血及第三次採血之血清1:100稀釋於FACS緩衝劑中，並經由流式細胞分析技術評估對NS0野生型(WT)細胞及過表現攜載MSCD331或(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99)之CAR之NS0細胞之結合。圖3A顯示獲自第一動物定群(定群1)之流式細胞分析技術資料；圖3B顯示獲自第二動物定群(定群2)之流式細胞分析技術資料；及圖3C顯示獲自第三動物定群(定群3)之流式細胞分析技術資料。

如圖4中顯示，最後針對5隻選定動物彙編流式細胞分析技術資料。為產生此等資料，來自第一動物定群(定群1)之動物C1M4 (定群1，小鼠4)及C1M5 (定群1，小鼠5)、來自第二動物定群(定群2)之C2M3 (定群2，小鼠3)及C2M5 (定群2，小鼠5)，及來自第三動物定群(定群3)之C3M2 (定群3，小鼠2)係最佳反應者，及效價在第三次採血與融合前採血之間恆定，且因此，此等動物用於後續單株產生。實例2：篩選以鑑別MSCD331特異性單株

本發明實例涉及產生多種針對MSCD331連接子之單株抗體，及後續使用不同篩選試劑測定其抗原決定基識別能力。此等試劑包括scFv–Fc融合蛋白、雙臂/單臂中攜載scFv之雙特異性抗體、表現CAR之細胞系及經純化CAR-ECD (細胞外域)蛋白。為測定此等單株之特異性，使用具有相同VH及VL鏈，但攜載不同連接子(G4S)4 (GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；SEQ ID NO: 99)之scFv。MSCD331及(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 98及99)具有相同長度，但其等胺基酸序列不同。因此，攜載(G4S)4 (SEQ ID NO: 99)之scFv及CAR分子在高度特異性抗MSCD331單株之鑑別中用作重要反向篩選工具。為測定此等單株識別抗原決定基之一般性，使用具有不同VH及VL鏈但攜載相同MSCD331連接子之各種CAR。

用於篩選以鑑別MSCD331特異性單株之抗原係具有MSCD331連接子之scFv-Fc融合蛋白，單臂上具有scFv之雙特異性抗體：VG53 (Vδ2*Null)、VG56 (Vδ2*CD33)、VG65 (Vγ9*Null)及VG68 (Vγ9*CD33)，或雙臂上具有scFv之雙特異性抗體：VG51 (Vγ9*Null)及VG52 (Vγ9*CD123)及his標籤CAR-ECD蛋白，使用CD9B441-HL-ScFv-HSA-His (A003W10)及GP5B83-HL-ScFv-HSA-His (GC5W47)進行篩選，兩者均具有該MSCD331連接子。使用非特異性his標籤蛋白CD70 (CD70-His)及具有(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99)之scFv-Fc融合蛋白進行反向篩選。用於如下文描述之基於流式細胞分析技術之篩選之細胞系係過表現攜載MSCD331或(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 98或99)之CAR (CD9B137-LH)之NS0及sup-T1細胞系。

為產生抗MSCD331特異性單株，評估經不同載體蛋白(例如，KLH、BCP及OVA)耐受化，及後續經偶合至此等載體蛋白之MSCD331免疫之動物的血清中之抗MSCD331特異性效價。獲取來自顯示高抗MSCD331效價(如實例1中)之最佳反應動物之脾細胞並與SP2/0骨髓瘤細胞融合。產生雜合體後，使雜合體於24孔及6孔組織培養盤中擴增以評估穩定性，且於擴增之各步驟，藉由流式細胞分析技術使用表現攜載MSCD331連接子之CD79b特異性CAR (CD9B137-LH)之NS0細胞篩選。於6孔盤階段，雜合體亦使用表現具有不同連接子(G4S)4 (SEQ ID NO: 99)之CD9B137-LH CAR之NS0細胞反向篩選。對顯示特異性結合至攜載MSCD331-CAR之NS0細胞之雜合體進行有限稀釋以產生單株。在不同雙特異性及CAR分子之內文中，同樣於擴增之不同階段篩選該等單株並針對範圍廣泛之試劑分析最終單株組以確認其等對MSCD331之特異性，及其等識別MSCD331之一般性。

為藉由間接ELISA篩選單株，藉由ELISA於經scFv-Fc融合蛋白、雙特異性抗體及CAR-ECD蛋白塗佈之盤上篩選單株。將抗原以於DPBS中1 µg/ml的濃度塗佈至Nunc maxisorp盤(Nunc)上並在4℃下培養整夜。清洗盤並用稀釋於PBS中之5%脫脂奶粉阻斷及在室溫下培養1小時。在37℃下將上清液培養2小時，接著在室溫下歷時1小時添加稀釋於1% BSA中之山羊抗小鼠IgG HRP。使用TMB受質將盤顯影並藉由添加2N H ₂SO ₄終止反應。於450 nm使用分光光度計量測吸光度(光學密度O.D.)。圖7A至7B證實在基於ELISA之分析中特異性結合至MSCD331但不結合至(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99)之單株。為產生此等資料，於具有MSCD331 (圖7A)或(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99) (圖7B)之scFv-Fc融合蛋白上篩選來自單株培養物之上清液。圖8A至8F顯示跨包括以下不同雙特異性抗體之單株識別MSCD331：VG52 (Vγ9*CD123)，如圖8A中顯示；VG51 (Vγ9*Null)，如圖8B中顯示；VG53 (Vδ2*Null)，如圖8C中顯示；VG65 (Vγ9*Null)，如圖8D中顯示；VG56 (Vδ2*CD33)，如圖8E中顯示；及VG68 (Vγ9*CD33)，如圖8F中顯示。應注意，此等雙特異性抗體具有攜載MSCD331連接子之scFv (具有不同靶特異性)於雙臂(圖8A至8B)中或於單臂(圖8C至8F)中。如圖9A至9C中顯示，本發明實例中進一步證實，單株能夠識別不同CAR-ECD構築體中之MSCD331。為產生此等資料，於具有不同域特異性，但表現相同MSCD331連接子之his標籤CAR-ECD蛋白上篩選來自50個入圍單株培養物之上清液。圖9A及圖9B分別顯示經由基於ELISA之方法獲取的關於GP5B83-HL-scFv-HSA-His (GC5W47)及CD9B441-HL-ScFv-His (A003W10)之結合的此資料。如圖9C中顯示，無關his標籤抗原CD70 (CD70-His)用於反向篩選。

為將雜合體及單株上清液結合至表現CAR之NS0及sup-T1細胞，以每孔10萬個細胞之密度將表現CAR之NS0及sup-T1細胞接種於FACS盤(Grenier，96孔U底盤)中。在4℃下用該等細胞系將自該等單株收集之上清液培養45 min。細胞用FACS緩衝劑(含有2% FBS之PBS)清洗並在4℃下用山羊抗小鼠IgG-PE (Southern Biotech)染色30分鐘。清洗該等盤並用於在Acea Novocyte流式細胞儀上獲取。圖5證實顯示NS0細胞系上使用攜載MSCD331及(G4S)4連接子之CD9B137-LH CAR (如SEQ ID NO: 99揭示之「(G4S)4連接子」)之MSCD331特異性結合之雜合體的鑑別。於表現攜載MSCD331或(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99)之CD9B137-LH CAR之NS0細胞上篩選來自雜合體培養物之上清液。於6孔階段篩選之總計43個雜合體中，14個雜合體顯示高中度MSCD331特異性結合。具體言之，8個MSCD331雜合體具有超過100,000 MFI之平均螢光強度(MFI)程度(高MSCD331特異性結合)，及6個MSCD331雜合體具有超過30,000 MFI之平均螢光強度(MFI)程度(中度MSCD331特異性結合)。亦進行MSCD331特異性血清(即，陽性對照血清)及僅二級抗體對照於該等細胞系上之結合。

如圖6中顯示，藉由使用過表現CAR之NS0及sup-T1細胞系評估，單株顯示結合至MSCD331之特異性及一般性。針對於表現攜載MSCD331 (圖6B)或(G4S)4 (圖6D)連接子(SEQ ID NO: 99)之CD9B137-LH CAR之NS0細胞上，及於表現攜載MSCD331 (圖6A)或(G4S)4 (圖6C)連接子(SEQ ID NO: 99)之人類生殖系VH及VL之sup-T1細胞上篩選之來自單株培養物之上清液收集範例資料。

為檢查抗體(單株上清液)對B細胞IgG之非特異性結合，將人類PBMC (周邊血單核細胞)以75萬個細胞/100 µl接種於U底96孔盤中。用該等PBMC在4℃下將來自50個入圍單株之上清液培養45 min，清洗並於冰上用山羊抗小鼠IgG-PE及抗人類CD19-APC (Biolegend)染色30分鐘。使用Acea Novocyte流式細胞儀進行資料獲取。證實單株不顯示非特異性IgG結合之流式細胞分析技術結果顯示於圖10中。 * * *

本發明不受本文描述之特定實施例之範圍限制。事實上，除彼等本文描述者外，本發明之各種修飾對熟習此項技術者而言將自前述說明書變得顯而易見。此等修飾旨在落於隨附申請專利範圍之範疇內。

本文所述之所有專利、申請案、公開案、測試方法、參考文獻及其他材料均以全文引用之方式併入本文中，該引用之程度就如同實際上存在於本說明中一樣。

圖1證實耐受化後第7天來自動物之血清顯示不結合至耐受原。將來自耐受化動物之血清1:100稀釋於分析稀釋劑中並鋪板至經鑰孔血藍蛋白(KLH)、卵白蛋白(OVA)及藍色載體蛋白(BCP) (開放形狀)塗佈之盤上以測定任何耐受原特異性效價之存在。將該等血清效價與僅二級對照(填實形狀)進行比較。於450 nm量測吸光度(光學密度O.D.)。

圖2A至2C證實來自耐受化動物之血清顯示在第二加強劑後對耐受原(例如，KLH、OVA、BCP)具有低反應性，但對免疫原(MSCD331)具有高反應性。為產生此等資料，將來自動物之採血前、第一次採血及第二次採血血清1:1000稀釋於分析稀釋劑中並藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)評估KLH、OVA、BCP及MSCD331特異性反應。圖2A顯示獲自第一動物定群(定群1)之ELISA資料；圖2B顯示獲自第二動物定群(定群2)之ELISA資料；及圖2C顯示獲自第三動物定群(定群3)之ELISA資料。

圖3A至3C證實來自耐受化動物之血清顯示免疫後之MSCD331特異性反應。為產生此等資料，將來自耐受化動物之第一次採血、第二次採血及第三次採血之血清1:100稀釋於FACS緩衝劑中並使用流式細胞分析技術檢查對NS0野生型(WT)細胞及過表現攜載MSCD331或(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99)之嵌合抗原受體(CAR)之NS0細胞之結合。該等圖亦顯示細胞系上之二級(sec)抗體及陽性化合物結合。信號量測為平均螢光強度(MFI)。圖3A顯示獲自第一動物定群(定群1)之流式細胞分析技術資料；圖3B顯示獲自第二動物定群(定群2)之流式細胞分析技術資料；及圖3C顯示獲自第三動物定群(定群3)之流式細胞分析技術資料。

圖4顯示針對5隻選定動物彙編之流式細胞分析技術資料。為產生此等資料，來自第一動物定群(定群1)之動物C1M4 (定群1，小鼠4)及C1M5 (定群1，小鼠5)、來自第二動物定群(定群2)之C2M3 (定群2，小鼠3)及C2M5 (定群2，小鼠5)及來自第三動物定群(定群3)之C3M2 (定群3，小鼠2)係最佳反應者，及效價在第三次採血與融合前採血之間恆定，且因此，此等動物用於後續單株產生。信號量測為平均螢光強度(MFI)。

圖5證實顯示NS0細胞系上使用攜載MSCD331及(G4S)4連接子之CD9B137-LH CAR (如SEQ ID NO: 99揭示之「(G4S)4連接子」)之MSCD331特異性結合之雜合體的鑑別。於表現攜載MSCD331或(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99)之CD9B137-LH CAR之NS0細胞上篩選來自雜合體培養物之上清液。於6孔階段篩選之總計43個雜合體中，14個雜合體顯示高中度MSCD331特異性結合。具體言之，如表(插頁)中匯總，8個MSCD331雜合體具有超過100,000 MFI之平均螢光強度(MFI)程度(高MSCD331特異性結合)，及6個MSCD331雜合體具有超過30,000 MFI之平均螢光強度(MFI)程度(中度MSCD331特異性結合)。亦進行MSCD331特異性血清(即，陽性對照血清)及僅二級抗體對照於該等細胞系上之結合。

圖6A至6D證實使用過表現CAR之NS0及sup-T1細胞系評估單株對MSCD331之結合之特異性及一般性。於表現攜載MSCD331 (圖6B)或(G4S)4 (圖6D)連接子(SEQ ID NO: 99)之CD9B137-LH CAR之NS0細胞上，及於表現攜載MSCD331 (圖6A)或(G4S)4 (圖6C)連接子(SEQ ID NO: 99)之人類生殖系VH及VL鏈之sup-T1細胞上篩選來自單株培養物之上清液。亦指示MSCD331特異性血清(陽性對照)及僅二級抗體(二級對照)對該等細胞系之結合。信號量測為平均螢光強度(MFI)。

圖7A至7B證實在基於ELISA之分析中，特異性結合至MSCD331，但不結合至(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99)之單株。為產生此等資料，於具有MSCD331 (圖7A)或(G4S)4連接子(SEQ ID NO: 99) (圖7B)之scFv-Fc融合蛋白上篩選來自單株培養物之上清液。來源於不同雜合體親代之單株由不同形狀指示，如匯總於參考表中。已指示MSCD331特定性血清(陽性)及僅二級抗體(陰性)對照之結合。於450 nm量測吸光度(光學密度O.D.)。

圖8A至8F證實不同雙特異性抗體之單株識別MSCD331。MSCD331之單株識別顯示於下列範例雙特異性抗體中：VG52 (Vγ9*CD123)，如圖8A中顯示；VG51 (Vγ9*Null)，如圖8B中顯示；VG53 (Vδ2*Null)，如圖8C中顯示；VG65 (Vγ9*Null)，如圖8D中顯示；VG56 (Vδ2*CD33)，如圖8E中顯示；及VG68 (Vγ9*CD33)，如圖8F中顯示。應注意，此等雙特異性抗體具有攜載MSCD331連接子之具有不同靶特異性之scFv於雙臂中(如圖8A至8B中)或於單臂中(如圖8C至8F中)。對於此等實驗，於經雙特異性抗體塗佈之盤上使用基於ELISA之方法篩選來自單株培養物之上清液。來源於不同雜合體親代之單株由不同形狀指示，如匯總於參考表中。亦顯示MSCD331特異性血清(陽性)及僅二級抗體(陰性)對照對該等細胞系之結合。於450 nm量測吸光度(光學密度O.D.)。

圖9A至9C證實不同CAR細胞外域(ECD)構築體之單株識別MSCD331。為產生此等資料，於具有不同域特異性，但表現相同MSCD331連接子之his標籤CAR-ECD蛋白上篩選來自50個入圍單株培養物之上清液。圖9A及圖9B分別顯示如經由基於ELISA之方法獲取的關於GP5B83-HL-scFv-HSA-His (GC5W47)及CD9B441-HL-ScFv-His (A003W10)之結合的此資料。無關his標籤抗原CD70 (CD70-His)用於反向篩選(圖9C)。來源於不同雜合體親代之單株由不同形狀指示，如匯總於參考表中。亦顯示MSCD331特異性血清(圖9A至9B為陽性對照)或CD70及His特異性血清(圖9C為陽性對照)，及僅二級抗體(陰性對照)對該等細胞系之結合。於450 nm量測吸光度(光學密度O.D.)。

圖10證實單株不顯示非特異性結合。將來自50個入圍單株培養物之上清液於人類周邊血單核細胞(PBMC)上培養，接著用抗小鼠IgG (藻紅素) PE培養。針對CD19-APC及抗小鼠IgG-PE雙陽性群體檢查散射門控淋巴球以鑑別結合至B細胞之單株抗體(mAb)。亦顯示陽性對照及二級抗體(陰性)對照於PBMC上之結合。


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          1               5                   10                  15      
          Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ala Gly Ile Thr Phe Arg Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Tyr Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Arg Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Gly Phe Asp Trp Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Thr Val Ser Ser 
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          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          tcctgtgttg ccgctggaat cactttcagg aactattgga tgaactgggt ccgccagtct      120
          ccagagaggg ggcttgagtg ggttggtcaa attagattga aatctgatta ttatgcaaca      180
          cattatgcgg agtctgtgaa agggaggttc accatctcaa gagatgattc caaacgtagt      240
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          Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Tyr 
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                      100                 105                 110         
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          Gly Arg Ile His Pro Ser Asp Ser Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
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          agctacgtag gatacttcga tgtctggggc acagggacca cggtcaccgt ctcctcag        358
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          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Asp Ile Asn Pro Asn His Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
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                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ile Gly Ile Tyr His Gly Asp Tyr Gly Glu Phe Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
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          aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac      240
          atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aaggataggg      300
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          tcctcag                                                                367
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          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
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          Gly Arg Ile His Pro Ser Asp Ser Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Phe Ile Thr Thr Val Gly Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr 
                      100                 105                 110         
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          aatcaaaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac      240
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          Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Glu Thr Tyr 
          1               5                   10      
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          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
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          Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 
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          <![CDATA[<221> 來源]]>
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          <![CDATA[<400> 56]]>
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          Gln Ser Leu Leu Glu Thr Asp Gly Arg Thr Tyr 
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          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 
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          Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 
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          Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
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          Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 91]]>
          <![CDATA[<211> 337]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成聚核苷酸」]]>
          <![CDATA[<400> 91]]>
          gacatcaaga tgacccagtc tccactcact ttgtcggtta ccattggaca accagcctcc       60
          atatcttgca agtcaagtca gagcctctta gatagtgatg gaaagacata tttgaattgg      120
          ttgttactaa ggccaggcca gtctccaaag cgcctactct atctggtgtc taaactggac      180
          tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc      240
          agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tattattgct ggcaaggtac acattttcct      300
          cggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaac                               337
          <![CDATA[<210> 92]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<400> 92]]>
          Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 93]]>
          <![CDATA[<211> 337]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成聚核苷酸」]]>
          <![CDATA[<400> 93]]>
          gacatcaaga tgacccagtc tccactcact ttgtcggtta ccattggaca accagcctcc       60
          atctcttgca agtcaagtca gagcctctta gatagtgatg gaaagacata tttgaattgg      120
          ttgttacaga ggccaggcca gtctccaaag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac      180
          tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc      240
          agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tattattgct ggcaaggtac acattttcct      300
          cggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaac                               337
          <![CDATA[<210> 94]]>
          <![CDATA[<211> 107]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<400> 94]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Leu Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asn Ala Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210> 95]]>
          <![CDATA[<211> 322]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成聚核苷酸」]]>
          <![CDATA[<400> 95]]>
          gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc       60
          atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac aattatttag catggtatca gcagaaacag      120
          ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatct      180
          aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa ttttctctca agatcaacag cctgcagcct      240
          gaagatcttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggaatg ctccgtacac gttcggaggg      300
          gggaccaagc tggaattaaa ac                                               322
          <![CDATA[<210> 96]]>
          <![CDATA[<211> 113]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<400> 96]]>
          Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 
                          85                  90                  95      
          Tyr Tyr Ser Tyr Pro Pro Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 
                      100                 105                 110         
          Lys 
          <![CDATA[<210> 97]]>
          <![CDATA[<211> 340]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成聚核苷酸」]]>
          <![CDATA[<400> 97]]>
          gacatcaaga tgacccagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact       60
          atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtagca atcaaaagaa ctacttggcc      120
          tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg      180
          gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc      240
          atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttatagctat      300
          cctccggcgt tcggtggagg caccaagctg gaaatcaaac                            340
          <![CDATA[<210> 98]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<400> 98]]>
          Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          Thr Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210> 99]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> 來源]]>
          <![CDATA[<223> /注釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<400> 99]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20

Claims

一種經分離抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽。
如請求項1之經分離抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至由GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列構成之連接子肽。
如請求項1或請求項2之經分離抗體或其抗原結合片段，其包括：包含SEQ ID NO: 21、23、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之重鏈可變區(VH)之重鏈互補決定區1 (CDR1)、重鏈CDR2及重鏈CDR3；及/或包含SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之輕鏈可變區(VL)之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3。
如請求項1或2之經分離抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之VH之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3，及包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VL之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3。
如請求項1至4中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之重鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之重鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列之重鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之重鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列之重鏈CDR3。
如請求項1至5中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列之輕鏈CDR3；包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之輕鏈CDR3；或包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列之輕鏈CDR2及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之輕鏈CDR3。
如請求項1至6中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包含含有以下胺基酸序列的重鏈CDR1、重鏈CDR2、重鏈CDR3、輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3： a) 分別SEQ ID NO: 1、2、3、49、50及57； b) 分別SEQ ID NO: 4、5、3、49、50及57； c) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、52、53及54； d) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、49、50及57； e) 分別SEQ ID NO: 7、8、9、66、62及67； f) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、52、50及54； g) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、52、53及54； h) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、64、56及65； i) 分別SEQ ID NO: 10、8、9、55、56及60； j) 分別SEQ ID NO: 11、12、13、49、50及51； k) 分別SEQ ID NO: 11、14、15、58、50及51； l) 分別SEQ ID NO: 16、17、18、61、59及63；或 m) 分別SEQ ID NO: 19、8、20、49、50及51。
如請求項1至7中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包括：包含SEQ ID NO: 21、23、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH；及/或包含SEQ ID NO: 68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94或96之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL。
如請求項1至8之經分離抗體或抗原結合片段，其包括：包含由SEQ ID NO: 22、24、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46或48之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH；及/或包含由SEQ ID NO: 69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95或97之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL。
如請求項1至9中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包括：包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL；或包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VH，及包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列或與其具有至少80%同一性之序列之VL。
如請求項1至10中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包括：包含由SEQ ID NO: 22之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 81之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 24之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 28之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 97之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 30之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 32之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 75之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 34之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 71之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 34之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 95之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 36之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 71之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 79之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 83之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 85之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 38之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 73之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 40之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 77之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 42之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 93之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 42之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 69之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 44之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 87之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；包含由SEQ ID NO: 46之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 89之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL；或包含由SEQ ID NO: 48之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VH，及包含由SEQ ID NO: 91之核苷酸序列或與其具有至少80%同一性之序列編碼之胺基酸序列之VL。
如請求項1至11中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段不特異性地結合至胺基酸序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 99)。
如請求項1至12中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段不特異性地結合至免疫球蛋白G (IgG)。
如請求項1至13中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段係重組的。
如請求項1至14中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段係人類抗體、單株抗體、單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。
如請求項1至15中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。
一種經分離聚核苷酸，其編碼如請求項1至16中任一項之經分離抗體或抗原結合片段。
如請求項17之經分離聚核苷酸，其包含： SEQ ID NO: 22、24、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46或48之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列；及/或 SEQ ID NO: 69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95或97之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列。
如請求項17或18之經分離聚核苷酸，其包含： SEQ ID NO: 22之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 81之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 24之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 28之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 97之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 30之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 32之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 75之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 34之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 71之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 34之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 95之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 36之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 71之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 79之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 83之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 85之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 38之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 73之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 40之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 77之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 42之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 93之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 42之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 69之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 44之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 87之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列； SEQ ID NO: 46之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 89之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列；或 SEQ ID NO: 48之編碼VH之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列，及SEQ ID NO: 91之編碼VL之核苷酸序列，或與其具有至少80%同一性之序列。
一種載體，其包含如請求項17至19中任一項之聚核苷酸。
一種表現如請求項1至16中任一項之經分離抗體或抗原結合片段之重組細胞，其包含如請求項17至19中任一項之聚核苷酸或如請求項20之載體。
如請求項21之細胞，其中該細胞係融合瘤。
如請求項21或22之細胞，其中該抗體或抗原結合片段係經重組產生。
一種套組，其包含(i)如請求項1至16中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，或如請求項17至19中任一項之聚核苷酸，或如請求項20之載體及(ii)用於其之包裝。
一種親和基質，其包含如請求項1至16中任一項之經分離抗體或抗原結合片段。
一種產生如請求項1至16中任一項之經分離抗體或抗原結合片段之方法，其中該方法包括培養如請求項21至23中任一項之重組細胞，並分離該抗體或抗原結合片段。
一種於樣本中偵測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽之方法，該方法包括(i)使該樣本與如請求項1至16中任一項之經分離抗體或抗原結合片段接觸，及(ii)偵測該多肽對該經分離抗體或抗原結合片段之結合。
一種於樣本中偵測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽之方法，該方法包括(i)使該樣本與能夠結合至該連接子肽之抗體裝置接觸，及(ii)偵測該多肽對該抗體裝置之結合。
一種於樣本中量測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽的量之方法，該方法包括(i)使該樣本與如請求項1至16中任一項之經分離抗體或抗原結合片段接觸，及(ii)定量該多肽對該經分離抗體或抗原結合片段之結合。
一種於樣本中量測包含含有GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之多肽的量之方法，該方法包括(i)使該樣本與能夠結合至該連接子肽之抗體裝置接觸，及(ii)定量該多肽對該經分離抗體裝置之結合。
如請求項29或30之方法，其進一步包括將於步驟(ii)中量測之該結合與對照值進行比較。
如請求項31之方法，其中該對照值係預定值。
如請求項27至32中任一項之方法，其中包含該連接子肽之該多肽係抗體、抗原結合片段或嵌合抗原受體。
如請求項33之方法，其中包含該連接子肽之該抗體或抗原結合片段係人類抗體、單株抗體、單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。
如請求項34之方法，其中包含該連接子肽之該抗體或抗原結合片段係多特異性抗體或抗原結合片段。
如請求項35之方法，其中包含該連接子肽之該抗體或抗原結合片段係雙特異性抗體或抗原結合片段。
一種產生特異性結合至免疫隱性抗原決定基之抗體之方法，其包括以下步驟： a) 用複數種耐受原使成年動物免疫， b) 對該成年動物投與選擇性殺死快速增殖之淋巴球之藥劑， c) 用複數種免疫原使該成年動物免疫，該等免疫原各包含經結合至步驟(a)中使用之該等耐受原中之一者之該免疫隱性抗原決定基， d) 在步驟(c)後自該成年動物獲得B淋巴球， e)篩選由步驟(d)中獲得之B淋巴球產生之融合瘤或抗體庫以獲得特異性地結合至該免疫隱性抗原決定基之候選抗體；及 f) 分離步驟(e)中鑑別為特異性地結合至該免疫隱性抗原決定基之抗體。
如請求項37之方法，其中該藥劑係烷化劑。
如請求項38之方法，其中該藥劑係環磷醯胺。
一種產生特異性地結合至免疫隱性抗原決定基之抗體之方法，該方法包括以下步驟： a) 用複數種耐受原使成年動物免疫， b) 對該成年動物投與用於選擇性殺死快速增殖之淋巴球之裝置， c) 用複數種免疫原使該成年動物免疫，該等免疫原各包含經結合至步驟(a)中使用之該等耐受原中之一者之該免疫隱性抗原決定基， d) 在步驟(c)後自該成年動物獲得B淋巴球， e)篩選由步驟(d)中獲得之B淋巴球產生之融合瘤或抗體庫以獲得特異性地結合至該免疫隱性抗原決定基之候選抗體；及 f) 分離步驟(e)中鑑別為特異性地結合至該免疫隱性抗原決定基之抗體。
如請求項37至40中任一項之方法，其中步驟(c)包括在初始免疫化後，對該成年動物投與一或多個加強劑量之該免疫原或包含經結合至步驟(a)中使用之不同耐受原之該免疫隱性抗原決定基的免疫原。
如請求項37至41中任一項之方法，其中步驟(b)經重複至少一次。
如請求項42之方法，其中步驟(b)經重複兩次。
如請求項37至43中任一項之方法，其中該免疫隱性抗原決定基係長度小於50個胺基酸之肽。
如請求項37至44中任一項之方法，其中該免疫隱性抗原決定基係長度約10至30個胺基酸之肽。
如請求項37至45中任一項之方法，其中該免疫隱性抗原決定基係長度約20個胺基酸之肽。
如請求項37至46中任一項之方法，其中該免疫隱性抗原決定基係長度約14個胺基酸之肽。
如請求項37至47中任一項之方法，其中該耐受原係載體蛋白。
如請求項48之方法，其中該載體蛋白係選自卵白蛋白(OVA)、鑰孔血藍蛋白(KLH)及藍色載體蛋白(BCP)。
如請求項37至49中任一項之方法，其中該動物係小鼠。
一種組合物，其包含：用於特異性地結合至包含GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 98)之胺基酸序列之連接子肽之抗體裝置及載體。