JP7401538B2 - 抗ｃｌｄｎ１８．２抗体およびその使用 - Google Patents

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Description

本発明は、疾患の治療および免疫学の分野に関する。特に、本発明は、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはその抗原結合フラグメント、それをコードする核酸分子、それを含有する免疫複合体、二重特異性分子、キメラ抗原受容体、および医薬組成物、ならびに腫瘍の予防および／または治療に対するそれらの使用に関する。
胃癌は、世界中で最も一般的な悪性腫瘍の１つであり、その５年生存率は低く、ほとんどの国で２０％～４０％のレベルであり、毎年約７００，０００人がこの疾患が原因で死亡する。中国における胃癌の生存率は、３５．９％である。統計によれば、２０１５年の中国において、胃癌の新規症例数は６７９．１／１００，０００に達し、死亡数は４９８．０／１００，０００と高く、このため、胃癌は、肺癌に次いで罹病率および死亡率が高い２番目に最も一般的な腫瘍となった。胃癌は悪性度が高く、胃癌スクリーニングは広く実施されていないため、患者は通常、進行期で診断され、その結果、根治手術の機会が失われ、化学療法のみが主要な治療法として残る。
腫瘍分子生物学の発展に伴い、標的薬物および免疫療法が、血腫、乳癌および結腸直腸癌の治療において有効性を有することが確認されているが、胃癌治療におけるそれらの適用は、比較的立ち止まっている。現在、胃癌標的療法に対して国際的に承認されている標的には、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）が含まれ、承認されている胃癌免疫療法の標的は、プログラム細胞死タンパク質１(programmed lethal protein 1)（ＰＤ－１）である。２０１７年９月、ＡＴＴＲＡＣＴＩＯＮ－２の大規模第ＩＩＩ相臨床試験に基づき、日本の厚生労働省は、化学療法抵抗性の進行胃癌を有する患者の治療のためのＰＤ－１抗体オプジーボを承認した。プラセボと比較して、オプジーボは、死亡率を３７％減少させることができ、有効率１１．２％を示した。Ｋｅｙｎｏｔｅ０５９の第ＩＩ相臨床試験に基づき、米国ＦＤＡは、有効率１５．５％を示す、化学療法抵抗性のＰＤ－Ｌ１陽性の進行胃癌患者の治療におけるＰＤ－１抗体キイトルーダの使用の承認を促進している。標的療法の点では、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、腫瘍血管新生を促進するのみならず、腫瘍細胞の表面上の受容体にも結合して、下流シグナル伝達経路を活性化し、腫瘍幹細胞の形成、発生および遊走に直接的に関与する。ＶＥＧＦＲ２阻害剤のアパチニブおよびラムシルマブの両方は、第二選択以上の進行胃癌のＶＥＦＲ標的療法に安全かつ有効であることが臨床的に確認されている。毎年胃癌の新規症例の約６％～３５％において、ＨＥＲ２遺伝子の増幅またはタンパク質の過剰発現が生じるため、ＨＥＲ２は、抗癌治療における重要な標的の１つである。ＴＯＧＡ第ＩＩＩ相臨床試験は、ＨＥＲ２（＋）進行胃癌の第一選択治療におけるトラスツズマブの利点を最初に実証し、化学療法と組み合わせたトラスツズマブで治療された群のＯＳは、化学療法単独で治療された群のＯＳよりも有意に長く（１３．８ヵ月 対 １１ヵ月）、ＰＦＳ、ＯＲＲ（客観的奏効率）およびＴＴＰ（無増悪期間）を含む副次的評価項目も、有意に改善された。しかしながら、中国におけるＨＥＲ２陽性患者の割合は、わずか約１０％であり、したがって、胃癌に対する新規の治療標的を探索することが不可避である。
クローディンは、上皮および内皮のタイトジャンクション内の膜貫通タンパク質複合体であり、隣接細胞間のギャップの上側に位置する。その分布は組織および臓器特異的であり、その機能は主に、細胞接着、細胞極性の維持、傍細胞透過性の調節、ならびに細胞の増殖および分化の調節への関与を含む。クローディン１８分子は、４つの膜貫通疎水性領域および２つの細胞外ループを有するテトラスパニンであり、２つの異なるスプライスバリアントＣＬＤＮ１８．１およびＣＬＤＮ１８．２として存在する。ＣＬＤＮ１８．１およびＣＬＤＮ１８．２は、細胞内領域のＮ末端および第１の細胞外ループにおける配列が異なっているが、他の部分において同じタンパク質一次配列を共有する。ＣＬＤＮ１８の組織分布は、ＣＬＤＮ１８．１は肺細胞上にのみ選択的に発現しているが、ＣＬＤＮ１８．２は胃細胞上にのみ発現しており、正常な胃におけるＣＬＤＮ１８．２の発現は、分化した短寿命の胃上皮細胞に限定されることを示している。ＣＬＤＮ１８．２は、胃細胞の悪性形質転換中にしばしば保持され、したがって、ヒト胃癌細胞の表面上にしばしば提示され、消化管腺腫の６０％～８０％が、ＣＬＤＮ１８．２陽性である（Clinical Cancer Research 2008, 14 (23): 7624－34）。さらに、ＣＬＤＮ１８．２は、膵管癌および転移性膵臓癌において高度に発現し、陽性率は６０～７０％であるため、膵管癌／膵臓癌の診断マーカーおよび治療標的として使用することができる（Journal of Clinical Pathology 2012, 65: 431- 436; World Journal of Gastroenterology 2014, 20 (31): 10813-10824; International Journal of Cancer 2014, 134: 731－739）。他の腫瘍におけるＣＬＤＮ１８．２の異所性活性化に関する集中的な研究はなく、現在入手可能な文書では、膵臓癌における前述の異所性活性化に加えて、このタンパク質は、食道癌、気管支癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、ＥＮＴ腫瘍、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌およびそれらの転移、特に、クルケンベルグ腫瘍などの胃癌転移、腹膜転移およびリンパ節転移においても発現することが示されている（Clinical Cancer Research 2008, 14 (23): 7624－34; International Journal of Cancer 2014, 134: 731－739; Cancer Letters 2017, 403: 66-73; International Journal of Cancer 2014, 135 (9): 2206-2214）。ＣＬＤＮ１８．２は、予防的および治療的価値を有する腫瘍標的であり、癌細胞と正常細胞との間のその差次的発現、その膜局在、ほとんどの毒性関連正常組織におけるその非存在、および胃におけるその発現が、胃の標的陰性幹細胞（または位置的に隔絶された幹細胞）により補充され得る分化胃細胞に限定されることから、ＣＬＤＮ１８．２は、癌免疫療法に対する魅力的な標的となっている。したがって、癌患者にとってさらに薬物療法の選択肢を提供する、高い特異性、低い毒性作用または副作用、および優れた臨床的有効性を有する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を開発することが緊急かつ必要である。
発明の具体的説明
本発明の抗体は、ヒトＣＬＤＮ１８．２を特異的に認識する／に対して特異的に結合することができ、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを介してＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）の死滅を誘導することができ、既知の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体と比較して優れた機能的特徴を示す。したがって、本発明の抗体は、腫瘍を予防および／または治療できる可能性を有し、大きな臨床的価値を有する。
本発明の抗体
したがって、一つの側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号７５、もしくは配列番号７５と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１、
（ｉｉ）以下の配列：配列番号７６、もしくは配列番号７６と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号７７、もしくは配列番号７７と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号７８、もしくは配列番号７８と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号７９、もしくは配列番号７９と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号８０、もしくは配列番号８０と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号７５において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号７６において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号７７において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号７８または９６において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号８０において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号７３において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号７４において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；または
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号９１において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号９２において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、
抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、４４Ｆ７またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．１μｇ／ｍｌ以下（例えば、０．０５μｇ／ｍｌ以下）のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合しない；
（ｄ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号７５において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号７６において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号７７において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号７８もしくは９６において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７９において示されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号８０において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）（ａ）配列番号７３において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号７４において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ；もしくは（ｂ）配列番号９１において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号９２において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号７３において示される配列；
（ｉｉ）配列番号７３において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号７３において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号７４において示される配列；
（ｖ）配列番号７４において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号７４において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７３において示される配列を有するＶＨおよび配列番号７４において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異（back mutations）を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ヒト免疫グロブリンの重鎖フレームワーク領域もしくはそのバリアント、ここで、前記バリアントは、それが由来する配列と比較して最大２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大１５個、最大１０個、もしくは最大５個のアミノ酸の保存的置換；例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の保存的置換）を有する；および／または
（ｂ）ヒト免疫グロブリンの軽鎖フレームワーク領域もしくはそのバリアント、ここで、前記バリアントは、それが由来する配列と比較して最大２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大１５個、最大１０個、もしくは最大５個のアミノ酸の保存的置換；例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の保存的置換）を有する；
を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域、例えば、ヒト生殖系列抗体遺伝子によりコードされるアミノ酸配列に含まれるフレームワーク領域を含んでなる。特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト重鎖生殖系列遺伝子によりコードされるアミノ酸配列に含まれる重鎖フレームワーク領域、および／またはヒト軽鎖生殖系列遺伝子によりコードされるアミノ酸配列に含まれる軽鎖フレームワーク領域を含んでなる。
このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのフレームワーク領域（重鎖フレームワーク領域および／または軽鎖フレームワーク領域）は、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよい。特定の複数の好ましい実施形態において、前記フレームワーク領域（重鎖フレームワーク領域および／または軽鎖フレームワーク領域）は、対応するマウス残基に逆変異している１以上のアミノ酸残基または対応するマウス残基の保存的アミノ酸置換（このような変異は逆突然変異と呼ばれる）を含んでなる。
したがって、特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（例えば、ヒト生殖系列抗体遺伝子によりコードされるアミノ酸配列に含まれるフレームワーク領域）を含んでなり、前記フレームワーク領域は、ヒト残基からマウス残基への１以上の逆突然変異を場合により含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号９１において示される配列；
（ｉｉ）配列番号９１において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号９１において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号９２において示される配列；
（ｖ）配列番号９２において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号９２において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９１において示される配列を有するＶＨおよび配列番号９２において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号９９において示される配列；
（ｉｉ）配列番号９９において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号９９において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号１００において示される配列；
（ｖ）配列番号１００において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号１００において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９９において示される配列を有するＶＨおよび配列番号１００において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１０１において示される配列；
（ｉｉ）配列番号１０１において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号１０１において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号１０２において示される配列；
（ｖ）配列番号１０２において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号１０２において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０１において示される配列を有するＶＨおよび配列番号１０２において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号３、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１；
（ｉｉ）以下の配列：配列番号４、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号５、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号６、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号７、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号８、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号３において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４において示されるＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号５において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号６において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号８において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号１において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号２において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、１Ｄ１０またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．１μｇ／ｍｌ以下（例えば、０．０５μｇ／ｍｌ、０．０２μｇ／ｍｌ以下）のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｄ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）例えば、ＦＡＣＳまたはフローサイトメトリーにより測定された内部移行レベルが少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％以上）で、細胞（例えば、腫瘍細胞）へのＣＬＤＮ１８．２の内部移行を媒介する；細胞は、その表面上に発現したＣＬＤＮ１８．２を有する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号３において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４において示されるＶＨ ＣＤＲ２および配列番号５において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号６において示されるＶＬ ＣＤＲ１；配列番号７において示されるＶＬ ＣＤＲ２；配列番号８において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号１において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号２において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１において示される配列；
（ｉｉ）配列番号１において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号１において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号２において示される配列；
（ｖ）配列番号２において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号２において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１において示される配列を有するＶＨおよび配列番号２において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号１１、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１、
（ｉｉ）以下の配列：配列番号１２、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号１３、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号１４、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号１５、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号１６、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号１１において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２において示されるＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１３において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号１４において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１５において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１６において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号９において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号１０において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、２Ｆ１２またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．１μｇ／ｍｌ以下（例えば、０．０５μｇ／ｍｌ以下）のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合しない；
（ｄ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号１１において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１３において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号１４において示されるＶＬ ＣＤＲ１；配列番号１５において示されるＶＬ ＣＤＲ２；配列番号１６において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号９において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号１０において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号９において示される配列；
（ｉｉ）配列番号９において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号９において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号１０において示される配列；
（ｖ）配列番号１０において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号１０において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９において示される配列を有するＶＨおよび配列番号１０において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号１９、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１、
（ｉｉ）以下の配列：配列番号２０、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号２１、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号２２、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号２３、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号２４、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号１９において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号２２において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号１７において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号１８において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、３Ｆ２またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．１μｇ／ｍｌ以下（例えば、０．０５μｇ／ｍｌ以下）のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合しない；
（ｄ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号１９において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号２２において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３において示されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号２４において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号１７において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号１８において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１７において示される配列；
（ｉｉ）配列番号１７において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号１７において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号１８において示される配列；
（ｖ）配列番号１８において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号１８において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７において示される配列を有するＶＨおよび配列番号１８において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号２７、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１；
（ｉｉ）以下の配列：配列番号２８、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号２９、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号３０、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号３１、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号３２、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号２７において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２８において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２９において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号３０において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３１において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号３２において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号２５において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号２６において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、５Ｆ９またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．５μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．２μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｄ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）例えば、ＦＡＣＳまたはフローサイトメトリーにより測定された内部移行レベルが少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％以上）で、細胞（例えば、腫瘍細胞）へのＣＬＤＮ１８．２の内部移行を媒介する；細胞は、その表面上に発現したＣＬＤＮ１８．２を有する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号２７において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２８において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２９において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号３０において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３１において示されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号３２において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号２５において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号２６において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号２５において示される配列；
（ｉｉ）配列番号２５において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号２５において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号２６において示される配列；
（ｖ）配列番号２６において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号２６において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２５において示される配列を有するＶＨおよび配列番号２６において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号３５、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１、
（ｉｉ）以下の配列：配列番号３６、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号３７、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号３８、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号３９、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号４０、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号３５において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３６において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３７において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号３８において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３９において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号４０において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号３３において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号３４において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、９Ｆ３またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．２μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合しない；
（ｄ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号３５において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３６において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３７において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号３８において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３９において示されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号４０において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号３３において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号３４において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号３３において示される配列；
（ｉｉ）配列番号３３において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号３３において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号３４において示される配列；
（ｖ）配列番号３４において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号３４において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３において示される配列を有するＶＨおよび配列番号３４において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号４３、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１、
（ｉｉ）以下の配列：配列番号４４、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号４５、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号４６、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号４７、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号４８、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号４３において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４４において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号４５において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号４６において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４７において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号４８において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号４１において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号４２において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、１０Ｂ１１またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．１μｇ／ｍｌ以下（例えば、０．０５μｇ／ｍｌ以下）のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合しない；
（ｄ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号４３において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４４において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号４５において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号４６において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号４７において示されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号４８において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号４１において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号４２において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号４１において示される配列；
（ｉｉ）配列番号４１において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号４１において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号４２において示される配列；
（ｖ）配列番号４２において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号４２において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４１において示される配列を有するＶＨおよび配列番号４２において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号５１、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１；
（ｉｉ）以下の配列：配列番号５２、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号５３、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号５４、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号５５、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号５６、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号５１において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号５２において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号５３において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号５４において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５５において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号５６において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号４９において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号５０において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、２７Ｂ５またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．２μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合しない；
（ｄ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号５１において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号５２において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号５３において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号５４において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５５において示されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号５６において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号４９において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号５０において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号４９において示される配列；
（ｉｉ）配列番号４９において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号４９において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号５０において示される配列；
（ｖ）配列番号５０において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号５０において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４９において示される配列を有するＶＨおよび配列番号５０において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号５９、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１；
（ｉｉ）以下の配列：配列番号６０、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号６１、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号６２、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号６３、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号６４、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号５９において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６０において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号６１において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号６２において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６３において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６４において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号５７において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号５８において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、３７Ｂ１またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．１μｇ／ｍｌ以下（例えば、０．０５μｇ／ｍｌ以下）のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合しない；
（ｄ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｆ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号５９において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６０において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号６１において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号６２において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号６３において示されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号６４において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号５７において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号５８において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号５７において示される配列；
（ｉｉ）配列番号５７において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号５７において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号５８において示される配列；
（ｖ）配列番号５８において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号５８において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５７において示される配列を有するＶＨおよび配列番号５８において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号６７、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１；
（ｉｉ）以下の配列：配列番号６８、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号６９、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号７０、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号７１、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号７２、もしくはそれと比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、配列番号６７において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６８において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号６９において示されるＶＨ ＣＤＲ３を含んでなり；かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、配列番号７０において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７１において示されるＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号７２において示されるＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。
本発明はまた、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖可変領域が、配列番号６５において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなり；かつ前記軽鎖可変領域が、配列番号６６において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖可変領域の３個のＣＤＲ、および／または前記軽鎖可変領域の３個のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムを用いて決定される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、４４Ａ８またはその抗原結合フラグメント、そのキメラ抗体、またはそのヒト化抗体、またはそのバリアントであり、ここで、前記バリアントは、それが由来する抗体または抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の生物学的機能：
（ａ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｂ）０．１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、マウスＣＬＤＮ１８．２に結合する；
（ｃ）ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合しない；
（ｄ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｅ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞などの腫瘍細胞）の死滅を誘導する；
（ｆ）例えば、ＦＡＣＳまたはフローサイトメトリーにより測定された内部移行レベルが少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％以上）で、細胞（例えば、腫瘍細胞）へのＣＬＤＮ１８．２の内部移行を媒介する；細胞は、その表面上に発現したＣＬＤＮ１８．２を有する；
（ｇ）対象における腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を予防および／または治療する
のうち１つ以上を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（１）配列番号６７において示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６８において示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号６９において示されるＶＨ ＣＤＲ３；配列番号７０において示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７１において示されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号７２において示されるＶＬ ＣＤＲ３；または
（２）配列番号６５において示される重鎖可変領域の３個のＣＤＲ；および配列番号６６において示される軽鎖可変領域の３個のＣＤＲ
を含んでなる。
例示的な実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号６５において示される配列；
（ｉｉ）配列番号６５において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｉｉｉ）配列番号６５において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
および／または、
（ｂ）（ｉｖ）配列番号６６において示される配列；
（ｖ）配列番号６６において示される配列と比較して１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；もしくは
（ｖｉ）配列番号６６において示される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に列挙される置換は、保存的置換である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６５において示される配列を有するＶＨおよび配列番号６６において示される配列を有するＶＬを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＨは、ヒト免疫グロブリンに由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなり、かつ／または前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＶＬは、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク領域（ＦＲ）を含んでなる。このような複数の実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域ＦＲおよび／または軽鎖可変領域ＦＲは、１以上の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含んでなってもよく、例えば、前記重鎖フレームワーク領域ＦＲおよび／または軽鎖フレームワーク領域ＦＲは、１以上のアミノ酸逆突然変異を含んでなってもよく、対応するマウスアミノ酸残基は、これらの逆突然変異に含まれる。
特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）免疫グロブリンに由来する定常領域配列またはそのバリアントをさらに含んでなってもよく、ここで、前記バリアントは、それが由来する配列と比較して１個以上のアミノ酸の置換、欠失または付加を有する。特定の複数の好ましい実施形態において、前記バリアントは、それが由来する配列と比較して１個以上のアミノ酸の保存的置換を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントの重鎖は、ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）もしくはそのバリアントを含んでなり、ここで、前記バリアントは、１個以上のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、最大２０個、最大１５個、最大１０個、もしくは最大５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加；例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する；かつ／または、
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖は、ヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）もしくはそのバリアントを含んでなり、ここで、前記バリアントは、最大２０個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、最大１５個、最大１０個、もしくは最大５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加；例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖定常領域は、ＩｇＧ重鎖定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖定常領域は、マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。特定の複数の好ましい実施形態において、前記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。特定の複数の実施形態において、前記重鎖定常領域は、好ましくは、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記軽鎖定常領域は、κ軽鎖定常領域である。特定の複数の好ましい実施形態において、前記軽鎖定常領域は、マウスκ軽鎖定常領域である。特定の複数の好ましい実施形態において、前記軽鎖定常領域は、ヒトκ軽鎖定常領域である。
特定の複数の例示的な実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８１において示される重鎖定常領域（ＣＨ）；および／または、配列番号８２において示される軽鎖定常領域（ＣＬ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体である。特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、およびシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）からなる群から選択される。
本発明において、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、それが由来する抗体もしくはその抗原結合フラグメントとは、１以上のアミノ酸残基の保存的置換（例えば、最大２０個、最大１５個、最大１０個、もしくは最大５個のアミノ酸の保存的置換）のみが異なり、またはそれが由来する抗体もしくはその抗原結合フラグメントに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有し、かつそれが由来する抗体もしくはその抗原結合フラグメントの生物学的機能を実質的に保持するバリアントを含んでもよい。
抗体の調製
本発明の抗体は、当技術分野で公知の種々の方法、例えば、遺伝子工学組換え技術により調製することができる。例えば、本発明の抗体の重鎖および軽鎖遺伝子をコードするＤＮＡ分子は、化学合成またはＰＣＲ増幅により得られる。得られたＤＮＡ分子を発現ベクターに挿入し、次いで、宿主細胞にトランスフェクトする。次いで、トランスフェクトされた宿主細胞を特定の条件下で培養して、本発明の抗体を発現させる。
本発明の抗原結合フラグメントは、インタクト抗体分子を加水分解することにより得ることができる（Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Methods 24: 107-117 (1992); and Brennan et al., Science 229: 81 (1985)参照）。あるいは、これらの抗原結合フラグメントは、組換え宿主細胞により直接産生されることもできる（Hudson, Curr. Opin. Immunol. 11: 548-557 (1999); Little et al., Immunol. Today, 21: 364-370 (2000)においてレビュー）。例えば、Ｆａｂ’フラグメントは、宿主細胞から直接得ることもでき；Ｆａｂ’フラグメントは、化学的にカップリングされ、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Carter et al., Bio/ Technology, 10: 163-167 (1992)）。さらに、Ｆｖ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞の培養培地から直接単離することもできる。当業者は、これらの抗原結合フラグメントを調製するための他の技術を十分認識している。
したがって、別の側面において、本発明は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸分子を提供する。特定の複数の好ましい実施形態において、前記単離核酸分子は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域をコードする。
別の側面において、本発明は、本発明の単離核酸分子を含んでなるベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）を提供する。特定の複数の好ましい実施形態において、本発明のベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ファージなどである。特定の複数の好ましい実施形態において、前記ベクターは、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）において本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現することができる。
別の側面において、本発明は、本発明の単離核酸分子または本発明のベクターを含んでなる宿主細胞を提供する。このような宿主細胞としては、限定されるものではないが、原核細胞、例えば、大腸菌細胞、ならびに真核細胞、例えば、酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞、および動物細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えば、マウス細胞、ヒト細胞など）が挙げられる。特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－Ｓ、ＣＨＯ ＤＧ４４）である。
別の側面において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを調製する方法であって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で本発明の宿主細胞を培養すること、および培養された宿主細胞培養物から前記抗体またはその抗原結合フラグメントを回収することを含んでなる方法が提供される。
誘導体化抗体
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、別の分子（例えば、別のポリペプチドまたはタンパク質）に誘導体化、例えば、連結することができる。一般に、抗体またはその抗原結合フラグメントの誘導体化（例えば、標識化）は、ＣＬＤＮ１８．２（特に、ヒトＣＬＤＮ１８．２）へのその結合に悪影響を及ぼさない。したがって、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、このような誘導体化型を含むことも意図する。例えば、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、１以上の他の分子群、例えば、別の抗体（例えば、二重特異性抗体を形成するための）、検出試薬、医薬試薬、および／または別の分子への抗体もしくはその抗原結合フラグメントの結合を媒介することができるタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、アビジンもしくはポリヒスチジンタグ）に機能的に連結することができる（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合、もしくは他の手段により）。さらに、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、化学基、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチルもしくはエチル、またはグリコシルで誘導体化することもできる。これらの基は、血清中半減期の増大などの抗体の生物学的特性を改善するために使用することができる。
したがって、特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、標識されている。特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識、例えば、酵素、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）、またはビオチンを有する。本発明に係る検出可能な標識は、蛍光的、分光学的、光化学的、生化学的、免疫学的、電気的、光学的、または化学的手段により検出することができる任意の物質であってよい。このような標識は当技術分野で周知であり、その例としては、限定されるものではないが、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼなど）、放射性核種（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ）、テキサスレッド、ローダミン、量子ドット、またはシアニン色素誘導体（例えば、Ｃｙ７、Ａｌｅｘａ ７５０）、発光材料（例えば、アクリジンエステルなどの化学発光材料）、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標））、熱量測定標識、例えば、コロイド金または色ガラスまたはプラスチックビーズ（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）、および上記の標識により修飾されたアビジン（例えば、ストレプトアビジン）に結合するためのビオチンが挙げられる。これらの標識の使用を教示する特許としては、限定されるものではないが、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号（総て引用することにより本明細書の一部とされる）が挙げられる。上記の検出可能な標識は、当技術分野で公知の方法により検出することができる。例えば、放射性標識は、写真フィルムまたはシンチレーションカウンターを用いて検出することができ、蛍光標識は、放射光を検出するための光検出器を用いて検出することができる。酵素標識は、基質を酵素に付し、基質に対する酵素の作用により産生される反応生成物を検出することにより、一般に検出される。また、熱量測定標識は、呈色標識を単に可視化することにより、検出される。特定の複数の実施形態において、このような標識は、免疫学的検出（例えば、酵素結合免疫測定法、放射免疫測定法、蛍光免疫測定法、化学発光免疫測定法など）に好適であり得る。特定の複数の実施形態において、上記の検出可能な標識は、潜在的な立体障害を低減するために、異なる長さのリンカーを介して、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントに連結することができる。
二重特異性または多重特異性分子
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、二重特異性または多重特異性分子を形成するために使用することができる。本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、二重特異性または多重特異性分子の一部であってもよく、前記二重特異性または多重特異性分子は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントのものと異なる結合特異性を有する第２の機能モジュール（例えば、第２の抗体）を含んでなり、そのため、それは、少なくとも２つの異なる結合部位および／または標的分子に結合することができる。例えば、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、併用療法の潜在的な標的として使用することができる任意のタンパク質に対して特異的に結合することができる第２の抗体またはその抗原結合フラグメントに連結することができる。前記二重特異性または多重特異性分子を作製するために、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１以上の他の結合分子（例えば、さらなる抗体、抗体フラグメント、ペプチド、または結合模倣物）に連結することができる（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合または他の手段により）。
したがって、別の側面において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなる二重特異性または多重特異性分子を提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記二重特異性または多重特異性分子は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合し、１以上の他の標的に対してさらに特異的に結合する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記二重特異性または多重特異性分子は、第２の標的に対する第２の結合特異性を有する少なくとも１つの分子（例えば、第２の抗体）をさらに含んでなる。
免疫複合体
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、治療剤と連結して、免疫複合体を形成することができる。これらの免疫複合体は、１以上の治療剤を標的組織（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍などの腫瘍関連抗原）に選択的に送達する能力を有するため、前記免疫複合体は、疾患（例えば、癌）の治療における本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの治療効果を増強することができる。
したがって、別の側面において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと、抗体またはその抗原結合フラグメントに連結した治療剤とを含んでなる免疫複合体を提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記免疫複合体は抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記治療剤は細胞傷害剤である。本発明において、前記細胞傷害剤は、細胞（例えば、死滅細胞）に対して有害である任意の剤を含む。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記治療剤は、アルキル化剤、抗有糸***剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
本発明の免疫複合体に使用することができるアルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、ナイトロジェンマスタード（例えば、ジクロロエチルメチルアミン、フェニル酪酸マスタード、メルファラン、シクロホスファアミドなど）、エチレンイミン（例えば、チオテパ(thiotepae)など）、スルホン酸塩およびポリオール（例えば、ブスルファン、ジブロモマンニトール）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、ロムスチンなど）、白金ベースの抗腫瘍剤（例えば、シスプラチン(rdscisplatin)、オキサリプラチン、カルボプラチンなど）が挙げられる。
本発明の免疫複合体に使用することができる抗有糸***剤の例としては、限定されるものではないが、メイタンシノイド（例えば、メイタンシン、メイタンシノール、メイタンシノールのＣ－３エステルなど）、タキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセルまたはナノ粒子パクリタキセルなど）、ニチニチソウアルカロイド（例えば、ビンブラスチン硫酸塩、ビンクリスチン、ビンブラスチン、またはビノレルビンなど）が挙げられる。
本発明の免疫複合体に使用することができる抗腫瘍抗生物質の例としては、限定されるものではないが、アクチノマイシン、アントラサイクリン抗生物質（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシンなど）、カリチアマイシン、デュオカルマイシンなどが挙げられる。
本発明の免疫複合体に使用することができる代謝拮抗剤の例としては、限定されるものではないが、葉酸拮抗剤（例えば、メトトレキサートなど）、ピリミジン拮抗剤（例えば、５－フルオロウラシル、フルオロウリジン、シタラビン、カペシタビン、ゲムシタビンなど）、プリン拮抗剤（例えば、６－メルカプトプリン、６－チオグアニンなど）、アデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、クラドリビン、フルダラビン、ネララビン、ペントスタチンなど）が挙げられる。
本発明の免疫複合体に使用することができるトポイソメラーゼ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、カンプトテシンおよびその誘導体（例えば、イリノテカン、トポテカンなど）、アムサクリン、ダウノマイシン、アドリアマイシン、エピポドフィロトキシン、エリプチシン、エピルビシン、エトポシド、ラゾキサン、テニポシドなどが挙げられる。
本発明の免疫複合体に使用することができるチロシンキナーゼ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、アキシチニブ、ボスチニブ、シルデニブ(sildenib)、ダサチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマキサニブ、スニチニブ、バンデタニブなどが挙げられる。
本発明の免疫複合体に使用することができる放射性核種剤の例としては、限定されるものではないが、Ｉ１３１、Ｉｎ１１１、Ｙ９０、Ｌｕ１７７などが挙げられる。
特定の複数の例示的な実施形態において、前記治療剤は、白金ベースの抗腫瘍剤、アントラサイクリン系抗生物質、タキサン、ヌクレオシド類似体、カンプトテシン化合物、およびそれらの類似体または同族体、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、リンカーを介して前記治療剤に場合により結合される。
本発明において、前記細胞傷害剤は、当技術分野で利用可能なリンカー技術を用いて、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントにカップリングされ得る。細胞傷害剤を抗体にカップリングするために使用されているリンカーの種類の例としては、限定されるものではないが、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィド、およびペプチド含有リンカーが挙げられる。例えば、リソソーム区画内で低ｐＨによる切断を受けやすい、またはプロテアーゼ、例えば、カテプシン（例えば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）などの腫瘍組織において優先的に発現するプロテアーゼによる切断を受けやすいリンカーを選択することができる。
細胞傷害剤、リンカーの種類、および治療剤を抗体にカップリングさせる方法に関するさらなる考察については、Saito, G. et al. (2003) Adv. Drug Deliv. Rev. 55: 199-215; Trail, PA et al. (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52: 328-337; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3: 207-212; Allen, TM (2002) Nat. Rev. Cancer 2: 750-763; Pastan, I. and Kreitman, RJ (2002) Curr. Opin. Investig. Drugs 3: 1089-1091; Senter, PD and Springer, CJ (2001) Adv. Drug Deliv. Rev. 53: 247-264も参照されたい。
キメラ抗原受容体
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を構築するために使用することができ、前記キメラ抗原受容体は、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合する、膜貫通ドメインおよび１以上の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに連結された細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含んでなる。前記細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメイン、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメイン、またはそれらの組合せを含んでなってもよい。前記Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部（例えば、ＣＤ３ζタンパク質の細胞内部分）を指す。前記共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部を指し、前記共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要な抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。
本発明のＣＡＲの特徴としては、ＭＨＣ非拘束的に、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）に対してＴ細胞の特異性および反応性を向け直すその能力が挙げられる。ＣＬＤＮ１８．２のＭＨＣ非拘束性認識は、本発明のＣＡＲを発現するＴ細胞に、抗原プロセシングに依存しない抗原を認識する能力を与える。
したがって、別の側面において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原結合ドメインを含んでなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗原結合ドメインは、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
特定の複数の好ましい実施形態において、抗原結合受容体は、本発明の抗体の抗原結合フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗原結合受容体は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）により発現される。
特定の複数の好ましい実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にポリペプチド配列を含んでなるスペーサードメインが存在してもよい。前記スペーサードメインは、最大３００個のアミノ酸、好ましくは、１０～１００個のアミノ酸、最も好ましくは、２５～５０個のアミノ酸を含んでなってもよい。いくつかの実施形態において、前記スペーサードメインは、免疫グロブリンドメイン、例えば、ヒト免疫グロブリン配列を含んでなってもよい。特定の複数の例示的な実施形態において、前記免疫グロブリンドメインは、免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメイン配列を含んでなる。このような複数の実施形態において、特定の理論に拘束されるものではないが、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインは、ＣＡＲの抗原結合ドメインをＣＡＲ発現細胞の膜から離し、天然のＴＣＲのサイズおよびドメイン構造をより正確に模倣できると考えられる。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記膜貫通ドメインは、天然源または合成源に由来してもよい。このような複数の実施形態において、前記ドメインは、いずれの膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来してもよい。本発明のＣＡＲに使用することができる例示的な膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、βまたはζ鎖の少なくとも膜貫通領域を含んでなってもよく、前記Ｔ細胞受容体は、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤＳ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４からなる群から選択され得る。あるいは、前記膜貫通ドメインは合成のものであってもよく、その場合、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含むことになる。
特定の複数の例示的な実施形態において、前記膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメイン、例えば、ＣＤ８膜貫通ドメインを含んでなる。
特定の複数の例示的な実施形態において、前記膜貫通ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子（例えば、ＣＤ１３７またはＣＤ２８）の膜貫通ドメインを含んでなる。
特定の複数の好ましい実施形態において、ＣＡＲに使用することができる細胞内Ｔ細胞ドメインの例としては、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および抗原受容体会合後にシグナル伝達を開始するように協力して作用する共刺激分子の細胞質配列、ならびにこれらの配列の任意の誘導体またはバリアント、ならびに同じ機能的能力を有する任意の合成配列が挙げられる。
特定の複数の好ましい実施形態において、ＣＡＲの細胞内領域は、刺激的に作用する一次細胞質シグナル伝達配列を含んでなってもよく、前記一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシン活性化モチーフすなわちＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含んでなってもよい。ＣＡＲに含まれ得る一次細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤＳ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄタンパク質に由来するものが挙げられる。
特定の複数の好ましい実施形態において、ＣＡＲの細胞内領域は、一次細胞質シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を単独で、またはＣＡＲに使用することができる任意の他の所望の細胞質ドメインと組み合わせて含有するＩＴＡＭを含んでなってもよい。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ζ鎖の一部および細胞内共刺激シグナル伝達ドメインを含んでなる。前記共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部を指す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要な抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２ＣおよびＢ７－Ｈ３が挙げられる。
特定の複数の好ましい実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、ＣＤ８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１３７シグナル伝達ドメイン、またはそれらの任意の組合せを含んでなってもよい。ＣＡＲ上の１以上のＴ細胞シグナルドメインの順序は、必要に応じて当業者により変更することができる。
キメラ抗原受容体、およびこのような受容体を含有するＴ細胞を作製する方法、ならびにそれらの使用（例えば、癌の治療のための使用）は、当技術分野で公知であり、それらの詳細な説明は、例えば、Brentjens et al., 2010, Molecular Therapy, 18: 4,666-668；Morgan et al., 2010, Molecular Therapy, 2010年2月23日オンライン公開, 1-9頁；Till et al., 2008, Blood, 112: 2261-2271；Park et al., Trends Biotechnol., 29: 550-557, 2011；Grupp et al., NEnglJMed., 368: 1509-1518, 2013；Han et al., J. Hematol Oncol., 6:47, 2013；ＰＣＴ特許公報ＷＯ２０１２／０７９０００、ＷＯ２０１３／１２６７２６；および米国特許公報２０１２／０２１３７８３に見出すことができ、その総ては引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる。例えば、本発明のキメラ抗原結合受容体をコードする核酸分子は、ＣＡＲを作製するために、宿主細胞、例えば、Ｔ細胞における発現のための発現ベクター（例えば、レンチウイルスベクター）に含めることができる。特定の複数の例示的な実施形態において、前記キメラ抗原受容体を使用する方法は、対象からＴ細胞を単離すること、前記キメラ抗原受容体をコードする発現ベクター（例えば、レンチウイルスベクター）でＴ細胞を形質転換すること、および前記キメラ抗原受容体を発現する改変Ｔ細胞を前記対象に投与して、治療、例えば、前記対象における腫瘍の治療を行うことを含んでなる。
このため、別の側面において、本発明は、本発明のキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸分子を提供する。特定の複数の好ましい実施形態において、前記単離核酸分子は、本発明のキメラ抗原受容体をコードする。
別の側面において、本発明は、上記の単離核酸分子を含んでなるベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）を提供する。特定の複数の好ましい実施形態において、本発明のベクターは、例えば、プラスミドである。
別の側面において、本発明は、上記の単離核酸分子またはベクターを含んでなる宿主細胞を提供する。特定の複数の好ましい実施形態において、前記宿主細胞はＴ細胞である。特定の複数の好ましい実施形態において、前記宿主細胞はキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）である。
治療方法および医薬組成物
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＬＤＮ１８．２への結合を介してＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを誘導することができ、よって、腫瘍を予防および／または治療するために使用することができる。
したがって、別の側面において、本発明は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、または免疫複合体、ならびに薬学上許容可能な担体および／もしくは賦形剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記医薬組成物は、さらなる薬学上有効な剤をさらに含んでなってもよい。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記さらなる薬学上有効な剤は、抗腫瘍剤、例えば、アルキル化剤、抗有糸***剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種、放射線増感剤（例えば、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、タキサン、シスプラチンなど）、抗血管新生剤、サイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１など）、分子標的剤（例えば、リツキシマブなどのＣＤ２０抗体、トラスツズマブなどのＨｅｒ２抗体、ベバシズマブなどのＶＥＧＦ抗体、セツキシマブなどのＥＧＦＲ抗体など）、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＬＡＧ－３抗体など）、腫瘍溶解性ウイルスなどである。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記医薬組成物において、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、または免疫複合体およびさらなる薬学上有効な剤は、別々の成分としてまたは単一組成物の成分として提供される。このため、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、または免疫複合体およびさらなる薬学上有効な剤は、同時に、別々に、または逐次的に投与することができる。
特定の複数の例示的な実施形態において、前記医薬組成物は、無菌注射液（例えば、水性または非水性懸濁液または溶液）を含んでなる。特定の複数の例示的な実施形態において、このような無菌注射液は、注射用水（ＷＦＩ）、静菌注射用水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば、０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ）、グルコース溶液（例えば、５％グルコース）、界面活性剤含有溶液（例えば、０．０１％ポリソルベート２０）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）、リンゲル液、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
別の側面において、本発明は、細胞の表面上のＣＬＤＮ１８．２の発現レベルを低減させる方法であって、細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２の発現レベルを低減させるために、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体または医薬組成物と前記細胞を接触させることを含んでなり；ここで、前記細胞は、その表面上に発現したＣＬＤＮ１８．２を有する、方法を提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記細胞は、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記方法は、非診断目的でｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２の発現レベルを低減させるために使用される。
別の側面において、細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２の発現レベルを低減させるための薬剤の製造における、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、または医薬組成物の使用が提供される。
別の側面において、本発明の抗体もしくは抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、または医薬組成物は、細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２の発現レベルを低減させるために提供される。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞の成長を阻害する、および／または前記腫瘍細胞を死滅させる方法であって、有効量の本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体、または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ））と前記腫瘍細胞を接触させることを含んでなる方法を提供する。
前記方法は、治療目的、または非治療目的で使用することができる。特定の複数の好ましい実施形態において、前記方法は、非治療目的で使用してもよく、前記方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞の成長を阻害する、および／または前記腫瘍細胞を死滅させるために使用される。
別の側面において、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞の成長を阻害する、および／または前記腫瘍細胞を死滅させるための薬剤の製造における、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ））の使用が提供される。
別の側面において、前記抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ））は、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞の成長を阻害する、および／または前記腫瘍細胞を死滅させるために提供される。
別の側面において、本発明は、対象（例えば、ヒト）における腫瘍を予防および／または治療する方法であって、有効量の前記抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体、または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ））を、それを必要とする対象に投与することを含んでなる方法を提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記腫瘍は、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞と関与する。特定の複数の好ましい実施形態において、前記ＣＬＤＮ１８．２は、前記腫瘍細胞の表面上に発現される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記腫瘍はＣＬＤＮ１８．２を発現する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記腫瘍は、胃癌、食道癌、膵臓癌、気管支癌、非小細胞肺癌、乳癌、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌およびそれらの転移性癌（例えば、クルケンベルグ腫瘍などの胃癌転移、腹膜転移またはリンパ節転移）からなる群から選択される。
特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体、または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ））は、さらなる抗腫瘍剤と組み合わせて使用される。このようなさらなる抗腫瘍剤は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ）が投与される前、それと同時またはその後に投与することができる。
特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体、または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ）は、さらなる療法と組み合わせて投与される。このようなさらなる療法は、腫瘍に対する公知の任意の療法、例えば、手術、化学療法、放射線療法、標的療法、免疫療法、ホルモン療法、遺伝子療法、または緩和ケアであってよい。このようなさらなる療法は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ）が投与される前、それと同時またはその後に行うことができる。
本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ）は、医学分野で公知の任意の投与形、例えば、錠剤、丸剤、懸濁剤、エマルション、液剤、ゲル、カプセル剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、ロゼンジ、坐剤、注射剤（注射液、注射用無菌散剤および注射用濃縮液を含む）、吸入剤、噴霧剤などに処方することができる。好ましい投与形は、意図する投与経路および治療的使用に依存する。本発明の医薬組成物は、無菌かつ製造および保存の条件下で安定であるべきである。１つの好ましい投与形は、注射剤である。このような注射剤は、無菌注射液であってもよい。例えば、無菌注射液は、以下の方法：必要量の本発明の抗体を適当な溶媒に組み込むこと、および場合により、他の所望の成分（限定されるものではないが、ｐＨ調整剤、界面活性剤、アジュバント、イオン強度増強剤、等張剤、保存剤、希釈剤、またはそれらの任意の組合せを含む）を同時に組み込むこと、次いで、濾過滅菌を行うことにより、調製することができる。さらに、無菌注射液は、保存および使用の利便性のために、無菌凍結乾燥粉末として調製することができる（例えば、真空乾燥または凍結乾燥により）。このような無菌凍結乾燥粉末は、好適な担体、例えば、注射用水（ＷＦＩ）、静菌注射用水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば、０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ）、グルコース溶液（例えば、５％グルコース）、界面活性剤含有溶液（例えば、０．０１％ポリソルベート２０）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）、リンゲル液、およびそれらの任意の組合せに用時分散させることができる。
さらに、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）は、投与の利便性のために、医薬組成物中に単位投与形で存在することができる。
本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）は、限定されるものではないが、経口経路、頬側経路、舌下経路、眼球経路、局所経路、非経口経路、直腸経路、くも膜下腔内経路、細胞質内経路、鼠径部経路、膀胱内経路、局部経路（例えば、散剤、軟膏剤または点滴剤）、または鼻腔経路を含む、当技術分野で公知の任意の好適な方法により投与することができる。しかしながら、多くの治療的使用では、好ましい投与経路／様式は、非経口投与（例えば、静脈内注射またはボーラス、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射）である。当業者は、投与経路および／または投与様式は、意図する目的に応じて変わることを理解するであろう。好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）は、静脈内注射またはボーラスにより投与される。
本発明の医薬組成物は、「治療上有効な量」または「予防上有効な量」の本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子、免疫複合体、医薬組成物、キメラ抗原受容体または前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）を含んでなってもよい。「予防上有効な量」は、疾患の発症を予防する、停止する、または遅延させるのに十分な量を指す。「治療上有効な量」は、疾患にすでに罹患している患者において前記疾患およびその合併症を治癒するまたは少なくとも部分的に阻止するのに十分な量を指す。本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの治療上有効な量は、治療される疾患の重症度、患者の免疫系の全体的な状態、年齢、体重および性別などの患者の一般状態、投与経路、ならびに同時に適用される他の療法などの因子に応じて変わり得る。
本発明において、投与計画は、最適な反応（例えば、治療的反応または予防的反応）を得るために調整することができる。例えば、単一用量を投与してもよいし、または複数の用量をある期間にわたり投与してもよいし、または治療状況の緊急性に応じて用量を比例的に増加または減少させてもよい。
本発明において、前記対象は、哺乳動物、例えば、ヒトであってもよい。
検出方法およびキット
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができ、よって、サンプル中のＣＬＤＮ１８．２の存在またはレベルを検出するために使用することができる。
したがって、別の側面において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなるキットを提供する。特定の複数の好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識で標識されている。好ましい実施形態において、キットは、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを特異的に認識する二次抗体をさらに含んでなる。好ましくは、第２の抗体は、検出可能な標識をさらに含んでなる。
本発明において、検出可能な標識は、蛍光的、分光学的、光化学的、生化学的、免疫学的、電気的、光学的、または化学的手段により検出することができる任意の物質であってよい。このような標識は、免疫学的検出（例えば、酵素結合免疫測定法、放射免疫測定法、蛍光免疫測定法、化学発光免疫測定法など）に好適であり得ることが、特に好ましい。このような標識は当技術分野で周知であり、限定されるものではないが、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼなど）、放射性核種（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ）、テキサスレッド、ローダミン、量子ドット、またはシアニン色素誘導体（例えば、Ｃｙ７、Ａｌｅｘａ ７５０）、発光材料（例えば、アクリジンエステルなどの化学発光材料）、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標））、熱量測定標識、例えば、コロイド金または色ガラスまたはプラスチックビーズ（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）、および上記の標識により修飾されたアビジン（例えば、ストレプトアビジン）に結合するためのビオチンが挙げられる。これらの標識の使用を教示する特許としては、限定されるものではないが、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号（総て引用することにより本明細書の一部とされる）が挙げられる。上記の検出可能な標識は、当技術分野で公知の方法により検出することができる。例えば、放射性標識は、写真フィルムまたはシンチレーションカウンターを用いて検出することができ、蛍光標識は、放射光を検出するための光検出器を用いて検出することができる。酵素標識は、基質を酵素に付し、基質に対する酵素の作用により産生される反応生成物を検出することにより、一般に検出される。また、熱量測定標識は、呈色標識を単に可視化することにより、検出される。特定の複数の実施形態において、上記の検出可能な標識は、潜在的な立体障害を低減するために、異なる長さのリンカーを介して、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントに連結することができる。
別の側面において、本発明は、サンプル中のＣＬＤＮ１８．２の存在または量を検出する方法であって、以下の工程：
（１）本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと前記サンプルを接触させること；
（２）前記抗体またはその抗原結合フラグメントとＣＬＤＮ１８．２との複合体の形成または量を検出すること
を含んでなる方法を提供する。
前記複合体の形成は、ＣＬＤＮ１８．２またはＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞の存在を示す。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記サンプルは、細胞サンプル、すなわち、細胞（例えば、腫瘍細胞）を含んでなるサンプルである。このような複数の実施形態において、好ましくは、前記複合体は、前記抗体、抗原結合フラグメントまたはコンジュゲートと前記サンプル中の細胞により発現されるＣＬＤＮ１８．２との間で形成される。
好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識でさらに標識されている。別の好ましい実施形態において、工程（２）において、検出可能な標識を有する試薬が、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを検出するために使用される。
前記方法は、診断目的、または非診断目的（例えば、前記サンプルが、患者由来のサンプルではなく、細胞サンプルである）で使用してもよい。特定の複数の好ましい実施形態において、前記ＣＬＤＮ１８．２はヒトＣＬＤＮ１８．２である。
別の側面において、サンプル中のＣＬＤＮ１８．２の存在または量を検出するためのキットの製造における、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの使用が提供される。特定の複数の好ましい実施形態において、前記ＣＬＤＮ１８．２はヒトＣＬＤＮ１８．２である。
別の側面において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２を標的とする抗腫瘍療法により腫瘍が治療可能であるかどうかを決定する方法であって、以下の工程：
（１）本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと腫瘍細胞を含有するサンプルを接触させること；
（２）前記抗体またはその抗原結合フラグメントとＣＬＤＮ１８．２との複合体の形成を検出すること
を含んでなる方法を提供する。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記複合体は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントと前記サンプル中の前記腫瘍細胞により発現されるＣＬＤＮ１８．２との間で形成される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記サンプルは、腫瘍を有する、腫瘍を有すると疑われる、または腫瘍を有するリスクにある対象に由来するものである。特定の複数の好ましい実施形態において、前記サンプルは、組織または臓器が癌を有さない場合に細胞がＣＬＤＮ１８．２を実質的に発現しない組織または臓器に由来するものである。特定の複数の好ましい実施形態において、前記組織は、胃組織、肺組織、食道組織、膵臓組織、または***組織からなる群から選択され、前記組織は、場合により、例えば、組織または臓器細胞の目視検査または培養検査により、癌に冒されていると診断されている。特定の複数の好ましい実施形態において、前記組織は、胃組織以外の組織である。特定の複数の好ましい実施形態において、前記組織は、肺組織、食道組織、膵臓組織または***組織である。このような複数の実施形態において、ＣＬＤＮ１８．２もしくはＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞が存在する場合、および／またはＣＬＤＮ１８．２もしくはＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞の量が、参照レベルと比較して（例えば、腫瘍疾患を有さない患者と比較して）増加している場合、前記対象はＣＬＤＮ１８．２を標的とする抗腫瘍療法に好適であることが示される。
好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識でさらに標識されている。別の好ましい実施形態において、工程（２）において、検出可能な標識を有する試薬が、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを検出するために使用される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記ＣＬＤＮ１８．２はヒトＣＬＤＮ１８．２である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記腫瘍は、胃癌、食道癌、膵臓癌、気管支癌、非小細胞肺癌、乳癌、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌およびそれらの転移性癌（例えば、クルケンベルグ腫瘍などの胃癌転移、腹膜転移またはリンパ節転移）からなる群から選択される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記腫瘍は、食道癌、膵臓癌、気管支癌、非小細胞肺癌、乳癌、ＥＮＴ癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌およびそれらの転移性癌（例えば、クルケンベルグ腫瘍などの胃癌転移、腹膜転移またはリンパ節転移）からなる群から選択される。
別の側面において、ＣＬＤＮ１８．２を標的とする抗腫瘍療法により腫瘍が治療可能であるかどうかを決定するためのキットの製造における、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの使用が提供される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識で標識されている。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記ＣＬＤＮ１８．２はヒトＣＬＤＮ１８．２である。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記腫瘍は、胃癌、食道癌、膵臓癌、気管支癌、非小細胞肺癌、乳癌、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌およびそれらの転移性癌（例えば、クルケンベルグ腫瘍などの胃癌転移、腹膜転移またはリンパ節転移）からなる群から選択される。
特定の複数の好ましい実施形態において、前記腫瘍は、食道癌、膵臓癌、気管支癌、非小細胞肺癌、乳癌、ＥＮＴ癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌およびそれらの転移性癌（例えば、クルケンベルグ腫瘍などの胃癌転移、腹膜転移またはリンパ節転移）からなる群から選択される。
用語の定義
本発明において、特に断りのない限り、本明細書で使用される科学技術用語は、当業者により一般的に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用される細胞培養、生化学、核酸化学、および免疫学の実験手順は、対応する分野で広く使用されている慣例的な手順である。一方、本発明をさらに理解するために、関連する用語の定義および説明を以下に示す。
本明細書で使用する場合、用語「ＣＬＤＮ１８（クローディン１８）」は、当業者により一般的に理解される意味を有し、これは、クローディンファミリーに属し、上皮および内皮のタイトジャンクション内の膜貫通タンパク質であり、２つのスプライスバリアントＣＬＤＮ１８．１およびＣＬＤＮ１８．２の形態で存在する。ＣＬＤＮ１８．１およびＣＬＤＮ１８．２の配列は、当技術分野で周知である。詳細については、ＮＣＢＩデータベースアクセッション番号ＮＰ＿０５７４５３．１およびＮＰ＿００１００２０２６．１を参照。
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、典型的に２対のポリペプチド鎖からなる免疫グロブリン分子を指し、各対は、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を有する。抗体軽鎖は、κ（カッパ）およびλ（ラムダ）軽鎖に分類され得る。重鎖は、μ、δ、γ、α、またはεに分類され得、抗体のアイソタイプは、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥと定義される。軽鎖および重鎖内では、可変領域および定常領域が、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結され、重鎖は、約３個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をさらに含む。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。重鎖定常領域は、３個のドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。軽鎖定常領域は、ドメインＣＬからなる。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介するなど、種々のエフェクター機能を示す。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる間隔を置いた保存領域が散在している高度の変性を有する領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）という）にも細分され得る。ＶＨおよびＶＬの各々は、アミノ末端からカルボキシ末端にかけてＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４の順序で配置された３個のＣＤＲおよび４個のＦＲから構成される。各重鎖／軽鎖対の可変領域（ＶＨおよびＶＬ）は、それぞれ抗原結合部位を形成する。種々の領域またはドメインにおけるアミノ酸の割当ては、Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991))、またはChothia & Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196 : 901-917; Chothia et al. (1989) Nature 342: 878-883の定義に従ってもよい。
本明細書で使用する場合、用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原結合を担う抗体の可変領域のアミノ酸残基を指す。重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と名付けられた３個のＣＤＲを含む。これらのＣＤＲの正確な境界は、当技術分野で公知の種々のナンバリングシステムに従って、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステム（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991）、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングシステム（Chothia & Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al. (1989) Nature 342: 878-883）またはＩＭＧＴナンバリングシステム（Lefranc et al., Dev. Comparat. Immunol. 27: 55-77, 2003）に従って、定義することができる。特定の抗体に関して、当業者ならば、各ナンバリングシステムにより定義されたＣＤＲを容易に同定するであろう。また、異なるナンバリングシステム間の対応は、当業者に周知である（例えば、Lefranc et al., Dev. Comparat. Immunol. 27: 55-77, 2003参照）。
本発明において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントに含まれるＣＤＲは、当技術分野で公知の種々のナンバリングシステムに従って決定することができる。特定の複数の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントに含まれるＣＤＲは、好ましくは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴナンバリングシステムにより決定される。特定の複数の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントに含まれるＣＤＲは、好ましくは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムにより決定される。
本明細書で使用する場合、用語「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、抗体の可変領域における上記で定義されるＣＤＲ残基以外のそれらのアミノ酸残基を指す。
用語「抗体」は、抗体を産生する任意の特定の方法により限定されない。例えば、それには、組換え抗体、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体が含まれる。抗体は、異なるアイソタイプの抗体、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体であってもよい。
本明細書で使用する場合、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、全長抗体が結合する同じ抗原に対して特異的に結合する能力を有する、かつ／または抗原に対して特異的に結合するために全長抗体と競合する、全長抗体のフラグメントを含んでなるポリペプチドを指し、「抗原結合部分」ともいう。一般に、Fundamental Immunology, 第7章 (Paul, W.編, 第2版, Raven Press, NY (1989))を参照されたい（これは、総ての目的のために、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる）。抗体の抗原結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術により、または全抗体の酵素的もしくは化学的切断により産生され得る。抗原結合フラグメントの限定されない例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、キメラ抗体、直鎖状抗体、ナノボディ（Ｄｏｍａｎｔｉｓ社の技術）、プロボディ、およびこのようなポリペプチドが挙げられ、抗原結合フラグメントは、ポリペプチドに特異的抗原結合能力を付与するのに十分な抗体の少なくとも一部を含んでなる。改変抗体バリアントは、Holliger et al., 2005; Nat Biotechnol, 23: 1126-1136においてレビューされている。
本明細書で使用する場合、用語「全長抗体」は、２つの「全長重鎖」および２つの「全長軽鎖」からなる抗体を指す。「全長重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端の方向に重鎖可変領域（ＶＨ）、重鎖定常領域ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域（ＨＲ）、重鎖定常領域ＣＨ２ドメインおよび重鎖定常領域ＣＨ３ドメインからなるポリペプチド鎖を指し、全長抗体がＩｇＥアイソタイプである場合、重鎖定常領域ＣＨ４ドメインが場合によりさらに含まれる。好ましくは、「全長重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端の方向にＶＨ、ＣＨ１、ＨＲ、ＣＨ２およびＣＨ３からなるポリペプチド鎖である。「全長軽鎖」は、Ｎ末端からＣ末端の方向に軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなるポリペプチド鎖である。２対の全長抗体鎖は、ＣＬとＣＨ１との間のジスルフィド結合および２つの全長重鎖のＨＲの間のジスルフィド結合により、ともに連結されている。本発明の全長抗体は、単一種、例えば、ヒト由来であってもよいし、または、キメラ抗体もしくはヒト化抗体であってもよい。本発明の全長抗体は、それぞれＶＨおよびＶＬの対により形成された２つの抗原結合部位を含んでなり、これらの２つの抗原結合部位は、同じ抗原を特異的に認識する／に対して特異的に結合する。
本明細書で使用する場合、用語「Ｆｄ」は、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる抗体フラグメントを指し；用語「ｄＡｂフラグメント」は、ＶＨドメインからなる抗体フラグメントを指し（Ward et al., Nature 341: 544 546 ( 1989)）；用語「Ｆａｂフラグメント」は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる抗体フラグメントを指し；用語「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、ヒンジ領域上のジスルフィド架橋により接続された２つのＦａｂフラグメントを含んでなる抗体フラグメントを指し；用語「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つの完全な軽鎖および重鎖のＦｄフラグメント（ＶＨおよびＣＨ１ドメインから構成される）からなるＦ（ａｂ’）２フラグメントにおける２つの重鎖フラグメントを接続するジスルフィド結合を還元することにより得られるフラグメントを指す。
本明細書で使用する場合、用語「Ｆｖ」は、抗体の１つのアームのＶＬおよびＶＨドメインからなる抗体フラグメントを指す。Ｆｖフラグメントは、一般に、完全な抗原結合部位を形成することができる最小の抗体フラグメントであると考えられている。一般に、６個のＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与すると考えられている。しかしながら、可変領域（例えば、３個の抗原特異的ＣＤＲのみを含むＦｄフラグメント）でも、抗原を認識し、それに結合することができるが、その親和性は、完全な結合部位のものより低い場合がある。
本明細書で使用する場合、用語「Ｆｃ」は、抗体の第１の重鎖の第２および第３の定常領域を第２の重鎖の第２および第３の定常領域とジスルフィド結合を介して連結させることにより形成される抗体フラグメントを指す。抗体のＦｃフラグメントは、多くの異なる機能を有するが、抗原結合に関与しない。
本明細書で使用する場合、用語「ｓｃＦｖ」は、ＶＬおよびＶＨドメインを含んでなる単一ポリペプチド鎖を指し、ここで、ＶＬおよびＶＨは、リンカーを介して連結されている（例えば、Bird et al., Science 242: 423 -426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883 (1988);およびPluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113巻, Roseburg and Moore編, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)参照）。このようなｓｃＦｖ分子は、ＮＨ２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨまたはＮＨ２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨという一般的な構造を有してもよい。従来技術の好適なリンカーは、繰り返しＧＧＧＧＳアミノ酸配列またはそのバリアントからなる。例えば、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）４を有するリンカーを使用してもよいが、そのバリアントも使用してもよい(Holliger et al. (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448)。本発明において有用な他のリンカーは、Alfthan et al. (1995), Protein Eng. 8: 725-731, Choi et al. (2001), Eur. J. Immunol. 31: 94-106, Hu et al. (1996), Cancer Res. 56: 3055-3061, Kipriyanov et al. (1999), J. Mol. Biol. 293: 41-56およびRoovers et al. (2001), Cancer Immunolにより記載されている。いくつかの場合において、ジスルフィド結合は、ｓｃＦｖのＶＨとＶＬとの間に存在してもよい。
本明細書で使用する場合、用語「ダイアボディ」は、そのＶＨおよびＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上に発現しているフラグメントを指すが、使用されるリンカーは、同じ鎖の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短すぎるため、ドメインは別の鎖の相補ドメインと対形成せざるを得ず、２つの抗原結合部位が生成している（例えば、Holliger P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)、およびPoljak RJ et al., Structure 2: 1121-1123 (1994)参照）。
本明細書で使用する場合、用語「シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）」は、当業者により一般的に理解される意味を有し、全長抗体が結合する同じ抗原に対して特異的に結合する能力を有する、単一モノマー可変抗体ドメイン（例えば、単一重鎖可変領域）からなる抗体フラグメントを指す。シングルドメイン抗体は、ナノボディとしても知られる。
本明細書で使用する場合、用語「プロボディ」は、当業者により一般的に理解される意味を有し、健常組織において不活性なままであるが、疾患環境において特異的に活性化（例えば、疾患環境において豊富であるまたは特異的に存在するプロテアーゼによるタンパク質分解切断）され得るマスク化抗体を指す。詳細な教示については、例えば、Desnoyers et al., Sci. Transl. Med., 5: 207ra144, 2013参照。類似のマスキング技術を、本明細書に記載の抗体または抗原結合部分のいずれかに対して使用することができる。
上記抗体フラグメントの各々は、全長抗体が結合する同じ抗原に対して特異的に結合する能力を有する、かつ／または抗原に対して特異的に結合するために全長抗体と競合する。
抗体の抗原結合フラグメント（例えば、上記の抗体フラグメント）は、当業者に公知の従来の技術（例えば、組換えＤＮＡ技術または酵素的もしくは化学的断片化法）を用いて、特定の抗体（例えば、本発明により提供される抗体）から得ることができ、インタクト抗体をスクリーニングするのと同じ様式で、特異性に関してスクリーニングすることができる。
文脈において、明確に明示されない限り、用語「抗体」に言及する場合、インタクト抗体だけでなく、抗体の抗原結合フラグメントも含む。
本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」、「ｍＡｂ」は、同じ意味を有し、互換的に使用され、高度に相同な抗体分子の集団、すなわち、自然に生じ得る自然変異を除き、同一の抗体分子の集団に由来する抗体または抗体のフラグメントを指す。モノクローナル抗体は、抗原上の単一エピトープに対して高度に特異的である。モノクローナル抗体と比較して、ポリクローナル抗体は、一般に、抗原上の異なるエピトープを通常認識する少なくとも２つ以上の異なる抗体を含む。さらに、修飾語「モノクローナル」は単に、抗体の高度に均一な集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとは解釈されない。
本発明のモノクローナル抗体は、種々の技術、例えば、ハイブリドーマ技術（例えば、Kohler et al. Nature, 256: 495, 1975参照）、組換えＤＮＡ技術（例えば、米国特許出願第４，８１６，５６７号参照）、またはファージ抗体ライブラリー技術（例えば、Clackson et al. Nature352: 624-628, 1991、またはMarks et al. J. Mol. Biol. 222: 581-597, 1991参照）により、調製することができる。
抗体は、周知の技術、例えば、プロテインＡまたはプロテインＧを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより、精製することができる。引き続いてまたはその代わりに、特異抗原（抗体により認識される標的分子）またはそのエピトープをカラム上に固定化することができ、免疫特異抗体を免疫アフィニティークロマトグラフィーにより精製することができる。免疫グロブリンの精製については、例えば、D. Wilkinson (The Scientist, The Scientist, Inc., Philadelphia Pa.により出版, 第14巻, 第8号 (2000年4月17日), pp. 25-28)を参照してもよい。
本明細書で使用する場合、用語「キメラ抗体」は、その軽鎖または／および重鎖の一部が、１つの抗体（特定の種に由来するものであってもよいし、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属するものでもよい）に由来し、その軽鎖または／および重鎖の別の部分が、別の抗体（同じもしくは異なる種に由来するものであってもよいし、または同じもしくは異なる抗体クラスもしくはサブクラスに属するものでもよい）に由来するが、いずれにせよ、標的抗原に対する結合の活性を依然として保持している抗体を指す（Ｃａｂｉｌｌｙらに対する米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851 6855 (1984)）。例えば、用語「キメラ抗体」は、抗体の重鎖および軽鎖可変領域が、第１の抗体（例えば、マウス抗体）に由来し、一方、抗体の重鎖および軽鎖定常領域が、第２の抗体（例えば、ヒト抗体）に由来する、そのような抗体（例えば、ヒト－マウスキメラ抗体）を含んでなってもよい。
本明細書で使用する場合、用語「ヒト化抗体」は、そのアミノ酸配列がヒト抗体の配列に対する相同性を増大させるように改変されている遺伝子改変非ヒト抗体を指す。一般に、ヒト化抗体のＣＤＲ領域の総てまたは一部は、非ヒト抗体（ドナー抗体）に由来し、非ＣＤＲ領域（例えば、可変領域ＦＲおよび／または定常領域）の総てまたは一部は、ヒト免疫グロブリン（レセプター抗体）に由来する。ヒト化抗体は、一般に、限定されるものではないが、抗原特異性、親和性、反応性などを含むドナー抗体の予想される特性を有する。ドナー抗体は、予想される特性（例えば、抗原特異性、親和性、反応性など）を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）の抗体であり得る。
本出願において、本発明の抗体の予想される特性は、（１）ＣＬＤＮ１８．２（特にヒトＣＬＤＮ１８．２）を特異的に認識する／に対して特異的に結合する；（２）ＣＬＤＮ１８．２の内部移行を媒介する；（３）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞の死滅を誘導する；（４）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介してヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞の死滅を誘導する；（５）腫瘍を予防および／または治療するという能力を含む。本発明の抗体は、前述の予想される特性のうち１つ以上を有する。
本発明のキメラ抗体またはヒト化抗体は、上記のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づき、調製することができる。重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡは、標的マウスハイブリドーマから得ることができ、標準的な分子生物学技術を用いて、非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように改変することができる。
キメラ抗体を調製するために、当技術分野で公知の方法（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらに対する米国特許第４，８１６，５６７号参照）を用いて、マウス免疫グロブリンの可変領域をヒト免疫グロブリンの定常領域に連結することができる。例えば、ＶＨをコードするＤＮＡは、全長重鎖遺伝子を得るために、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に連結される。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野で公知であり（例えば、Kabat, EA et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照）、これらの領域を含有するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域であってもよいが、一般に好ましくは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域である。例えば、ＶＬをコードするＤＮＡは、全長軽鎖遺伝子（およびＦａｂ軽鎖遺伝子）を得るために、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に連結される。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野で公知であり（例えば、Kabat, EA et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, US Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照）、これらの領域を含有するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域は、κまたはλ定常領域であってもよいが、一般に好ましくは、κ定常領域である。
ヒト化抗体を調製するために、当技術分野で公知の任意の方法を用いることにより、マウスＣＤＲ領域をヒトフレームワーク配列上に移植することができる（Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号；Ｑｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６２号、および同第６，１８０，３７０号；ならびにLo, Benny, KC編, Antibody Engineering: Methods and Protocols, 第248巻, Humana Press, New Jersey, 2004参照）。あるいは、トランスジェニック動物を使用することもでき、これは、免疫化後に内因性免疫グロブリンを産生することなく、完全ヒト抗体ライブラリーを作製することができる。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらし、このような生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入は、抗原チャレンジ時にヒト抗体の産生をもたらすことが報告されている（例えば、Jakobovits et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551; Jakobovits et al., 1993, Nature 362 : 255-258; Bruggermann et al., 1993, Year in Immunology 7: 33; and Duchosal et al., 1992, Nature 355: 258参照）。上記のトランスジェニック動物の限定されない例としては、整列されていないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ座位と、内因性μおよびκ鎖座位を不活性化する標的変異とを含んでなるＨｕＭＡｂマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）（例えば、Lonberg et al. (1994) Nature 368 (6474): 856-859参照）；またはヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖トランス染色体を有する「ＫＭマウス（商標）」（特許出願ＷＯ０２／４３４７８参照）が挙げられる。抗体をヒト化する他の方法としては、ファージディスプレイ技術が挙げられる
(Hoogenboom et al., 1991, J. Mol. Biol. 227: 381; Marks et al., J. Mol. Biol. 1991, 222: 581-597; Vaughan et al., 1996, Nature Biotech 14: 309)。
本明細書で使用する場合、用語「生殖系列抗体遺伝子」または「生殖系列抗体遺伝子セグメント」は、特定の免疫グロブリンの発現のための遺伝子再構成および変異に至り得る成熟プロセスを受けていない、免疫グロブリンをコードする生物体のゲノムに存在する配列を指す。本発明において、用語「重鎖生殖系列遺伝子」は、Ｖ遺伝子（可変）、Ｄ遺伝子（多様性）、Ｊ遺伝子（連結）およびＣ遺伝子（定常）を含んでなる、免疫グロブリン重鎖をコードする生殖系列抗体遺伝子または遺伝子フラグメントを指し；同様に、用語「軽鎖生殖系列遺伝子」は、Ｖ遺伝子（可変）、Ｊ遺伝子（連結）およびＣ遺伝子（定常）を含んでなる、免疫グロブリン軽鎖をコードする生殖系列抗体遺伝子または遺伝子フラグメントを指す。本発明において、生殖系列抗体遺伝子または生殖系列抗体遺伝子フラグメントによりコードされるアミノ酸配列は、「生殖系列配列」ともいう。生殖系列抗体遺伝子または生殖系列抗体遺伝子フラグメントおよびその対応する生殖系列配列は、当業者に周知であり、専門データベース（例えば、ＩＭＧＴ、ＵＮＳＷＩｇ、ＮＣＢＩ、またはＶＢＡＳＥ２）から得るまたは検索することができる。
本明細書で使用する場合、用語「特異的に結合する」または「特異的結合」は、２分子間の非ランダム結合反応、例えば、抗体とそれが向かう抗原との間の反応を指す。特異的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。本発明において、用語「ＫＤ」は、抗体と抗原との間の結合親和性を説明するために使用される、特異的な抗体抗原相互作用の解離平衡定数を指す。平衡解離定数が低い程、抗体抗原結合が密着し、抗体と抗原との間の親和性が高くなる。いくつかの実施形態において、抗原に対して特異的に結合する抗体（または抗原に対して特異的である抗体）は、約１０－９Ｍ未満、例えば、約１０－９Ｍ未満、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍまたは１０－１２Ｍ以下の親和性（ＫＤ）で抗体が抗原に結合することを意味する。２分子間の特異的結合特性は、当技術分野で公知の方法を用いて決定することができ、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ機器における表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により決定することができる。
本明細書で使用する場合、用語「細胞傷害剤」は、細胞に対して有害である（例えば、細胞を死滅させる）任意の剤、例えば、化学療法薬、細菌毒素、植物毒素または放射性同位体などを含んでなる。
本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、ポリヌクレオチドを挿入することができる核酸ビヒクルを指す。ベクターが、挿入されたポリヌクレオチドによりコードされるタンパク質の発現を可能にする場合、そのベクターは、発現ベクターという。ベクターは、形質転換、形質導入またはトランスフェクションにより宿主細胞に導入することができ、その結果、ベクターにより運ばれる遺伝物質エレメントが、宿主細胞において発現され得る。ベクターは当業者にとって周知であり、限定されるものではないが、プラスミド；ファージミド；コスミド；人工染色体、例えば、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）；ファージ、例えば、λファージまたはＭ１３ファージおよび動物ウイルスが挙げられる。ベクターとして使用することができる動物ウイルスとしては、限定されるものではないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられる。ベクターは、限定されるものではないが、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択エレメント、およびレポーター遺伝子を含む、発現を制御する種々のエレメントを含んでなってもよい。さらに、ベクターは、複製開始部位を含んでなってもよい。
本明細書で使用する場合、用語「宿主細胞」は、ベクターを導入することができる細胞を指し、限定されるものではないが、原核細胞、例えば、大腸菌もしくは枯草菌、真菌細胞、例えば、酵母細胞もしくはアスペルギルス、昆虫細胞、例えば、Ｓ２ショウジョウバエ細胞もしくはＳｆ９、または動物細胞、例えば、線維芽細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、もしくはヒト細胞が挙げられる。
本明細書で使用する場合、用語「同一性」は、２つのポリペプチド間または２つの核酸間の一致度を指す。比較のための２つの配列が、特定の部位で塩基またはアミノ酸の同じモノマーサブユニットを有する（例えば、２つのＤＮＡ分子の各々が、特定の部位でアデニンを有する、または２つのポリペプチドの各々が、特定の部位でリシンを有する）場合、２つの分子は、その部位において同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、比較のための部位の総数に対する２つの配列により共有される同一の部位の数×１００の関数である。例えば、２つの配列の１０個の部位のうち６個が一致する場合、これらの２つの配列は、６０％の同一性を有する。例えば、ＤＮＡ配列：ＣＴＧＡＣＴおよびＣＡＧＧＴＴは、５０％の同一性を共有する（６個の部位のうち３個が一致する）。一般に、２つの配列の比較は、最大の同一性をもたらすように行われる。このようなアラインメントは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら(J. Mol. Biol. 48:443-453, 1970)の方法に基づいたＡｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）などのコンピュータープログラムを用いて行うことができる。２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み付け残基表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を用いて、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ(Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988))のアルゴリズムを用いて、決定することもできる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性のパーセンテージは、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびにギャップの重み１６、１４、１２、１０、８、６、または４および長さの重み１、２、３、４、５、または６を用いて、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（http://www.gcg.comにて入手可能）におけるギャッププログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ(J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970))のアルゴリズムにより、決定することができる。
本明細書で使用する場合、用語「保存的置換」および「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸配列を含んでなるタンパク質／ポリペプチドの予想される特性に対して不利に影響を及ぼさないまたはそれを変化させないアミノ酸置換を指す。例えば、保存的置換は、当技術分野で公知の標準的な技術、例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発により導入してもよい。保存的アミノ酸置換としては、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基、例えば、対応するアミノ酸残基と物理的または機能的に類似した（例えば、類似のサイズ、形状、電荷、共有結合または水素結合を形成する能力を含む化学的特性を有する）残基に置換される置換が挙げられる。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニンおよびヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、対応するアミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基に置換される。アミノ酸保存的置換を同定する方法は、当技術分野で周知である（例えば、Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12(10): 879-884 (1999);およびBurks et al., Proc. Natl Acad. Set USA 94: 412-417 (1997)参照。これらは、引用することにより本明細書の一部とされる）。
本明細書に関与する２０個の従来のアミノ酸は、常法に従って表される。例えば、Immunology-A Synthesis (第2版, E. S. Golub and D. R. Gren編, Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))参照（これは、引用することにより本明細書の一部とされる）。本発明において、用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、同じ意味を有し、互換的に使用され得る。さらに、本発明において、アミノ酸は一般に、１文字コードおよび３文字コードとして表される。例えば、アラニンは、ＡまたはＡｌａとして表してもよい。
本明細書で使用する場合、用語「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、Ｔ細胞受容体の１以上の細胞内シグナル伝達ドメインと結合している抗体（例えば、ｓｃＦｖ）に由来する細胞外標的ドメインを有する改変Ｔ細胞受容体を指す。本発明において、用語「キメラ抗原受容体Ｔ細胞」は、ＣＡＲを発現し、かつＣＡＲの標的ドメインにより決定される抗原特異性を有するＴ細胞を指す。ＣＡＲを調製する方法（例えば、癌治療における使用のための）は、当技術分野で公知であり、例えば、Park et al., Trends Biotechnol., 29: 550-557, 2011; Grupp et al., NEnglJMed., 368: 1509-1518, 2013; Han et al., J. Hematol Oncol., 6:47, 2013;ＰＣＴ特許公報ＷＯ２０１２／０７９０００、ＷＯ２０１３／０５９５９３；および米国特許公報２０１２／０２１３７８３参照（これらの総ては、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる）。
本明細書で使用する場合、用語「薬学上許容可能な担体および／または賦形剤」は、当技術分野で周知である、対象および有効成分と薬理学的および／または生理学的に適合する担体および／または賦形剤を指し（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences. Gennaro AR編, 第19版. Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1995参照）、限定されるものではないが、ｐＨ調整剤、界面活性剤、アジュバント、イオン強度増強剤、希釈剤、浸透圧維持剤、吸収遅延剤、保存剤が挙げられる。例えば、ｐＨ調整剤としては、限定されるものではないが、リン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。界面活性剤としては、限定されるものではないが、陽イオン、陰イオンまたは非イオン性界面活性剤、例えば、ツイーン８０が挙げられる。イオン強度増強剤としては、限定されるものではないが、塩化ナトリウムが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、トリクロロ－ｔ－ブタノール、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。浸透圧維持剤としては、限定されるものではないが、糖、ＮａＣｌなどが挙げられる。吸収遅延剤としては、限定されるものではないが、モノステアリン酸塩およびゼラチンが挙げられる。希釈剤としては、限定されるものではないが、水、水性緩衝液（例えば、緩衝生理食塩水）、アルコールおよびポリオール（例えば、グリセロール）などが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、チメロサール、２－フェノキシエタノール、パラベン、トリクロロ－ｔ－ブタノール、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。安定剤は、当業者により一般に理解される意味を有し、薬剤中の有効成分の所望の活性を安定化することができ、限定されるものではないが、グルタミン酸ナトリウム、ゼラチン、ＳＰＧＡ、糖類（例えば、ソルビトール、マンニトール、デンプン、スクロース、ラクトース、デキストラン、またはグルコース）、アミノ酸（例えば、グルタミン酸、グリシン）、タンパク質（例えば、乾燥乳清、アルブミン、またはカゼイン）またはそれらの分解産物（例えば、ラクトアルブミン加水分解産物）などが挙げられる。特定の複数の例示的な実施形態において、薬学上許容可能な担体または賦形剤は、無菌注射液（例えば、水性または非水性懸濁液または溶液）を含む。特定の複数の例示的な実施形態において、このような無菌注射液は、注射用水（ＷＦＩ）、静菌注射用水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば、０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ）、グルコース溶液（例えば、５％グルコース）、界面活性剤含有溶液（例えば、０．０１％ポリソルベート２０）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）、リンゲル液、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
本明細書で使用する場合、用語「予防／予防すること」は、対象における疾患または障害または症状（例えば、腫瘍）の発生を予防するまたは遅延させるために行われる方法を指す。本明細書で使用する場合、用語「治療／治療すること」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るために行われる方法を指す。本発明の目的では、有益なまたは所望の臨床結果としては、限定されるものではないが、症状を緩和すること、疾患の範囲を低減させること、疾患の状態を安定化させること（すなわち、それ以上悪化させないこと）、疾患の発症を遅延または緩徐化させること、疾患の状態を改善または軽減すること、および検出可能または検出不能のいずれかの症状を軽減すること（部分的または全体的のいずれか）が挙げられる。さらに、用語「治療／治療すること」は、予想される生存期間（治療を受けない場合）と比較して生存期間を延長させることも指し得る。
本明細書で使用する場合、用語「対象」は、哺乳動物、例えば、霊長類哺乳動物、例えば、ヒトを指す。特定の複数の実施形態において、対象（例えば、ヒト）は、腫瘍（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍）を有する、または上記の疾患を有するリスクにある。
本明細書で使用する場合、用語「有効量」は、所望の効果を得るまたは少なくとも部分的に得るのに十分な量を指す。例えば、疾患（例えば、腫瘍）を予防するための有効量は、疾患（例えば、腫瘍）の発症を予防する、停止する、または遅延させるのに十分な量であり；疾患を治療するための有効量は、疾患を有する患者において疾患およびその合併症を治癒するまたは少なくとも部分的に阻止するのに十分な量である。このような有効量の決定は、当業者の能力の範囲内に十分ある。例えば、治療的使用のための有効量は、治療される疾患の重症度、患者の免疫系の全体的な状態、年齢、体重および性別などの患者の一般状態、薬剤の投与経路、ならびに同時に使用されるさらなる療法などに依存する。
本明細書で使用する場合、用語「免疫エフェクター細胞」は、造血起源であり、免疫応答において役割を果たす細胞、例えば、Ｂ細胞およびＴ細胞などのリンパ球；ナチュラルキラー細胞；単球細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球および顆粒球などの骨髄系細胞を含む。特定の複数の好ましい実施形態において、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。
本明細書で使用する場合、用語「転移」は、癌細胞の原発部位から身体の他の部位への伝播を指す。転移の形成は、非常に複雑なプロセスであり、原発腫瘍からの悪性細胞の分離、細胞外マトリックスへの浸潤、体腔および血管に侵入するための内皮基底膜への侵入、ならびに血液輸送による標的臓器へのその後の浸潤に依存する。最終的に、標的部位における新たな腫瘍（すなわち、二次腫瘍または転移性腫瘍）の成長は、血管新生に依存する。腫瘍細胞または腫瘍成分は残存し、転移能を生じ得ることから、原発腫瘍の除去後ですら、腫瘍転移が生じることが多い。一つの実施形態において、本発明に係る「転移」という用語は、原発腫瘍および所属リンパ節系から離れた転移に関する「遠隔転移」に関する。二次腫瘍または転移性腫瘍の細胞は、原発腫瘍における細胞と類似している。このことは、例えば、卵巣癌が肝臓に転移した場合、二次腫瘍は、（異常な肝細胞ではなく）異常な卵巣細胞から構成されることを意味する。よって、肝臓における腫瘍は、転移性卵巣癌（肝臓癌ではない）と呼ばれる。
［発明の効果］
従来技術と比較して、本発明の技術的解決法は、以下の有益な効果を有する。
本発明の抗体は、ＣＬＤＮ１８．２を特異的に認識する／に対して特異的に結合することができ、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを介してＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）の死滅を誘導することができる。したがって、本発明の抗体は、腫瘍、特にＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍の予防および／または治療に使用される可能性を有する。本発明のヒト化抗体は、親抗体の機能および特性を保持するだけでなく、高度のヒト化も有するため、免疫原性応答を惹起することなく、ヒト対象に安全に投与することができる。本発明の抗体が、公知の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体と比較して、親和性および腫瘍死滅活性を有意に改善していることは、特に意外である。したがって、本発明の抗体（特に、ヒト化抗体）は、大きな臨床的価値を有する。
本発明の実施形態を、図面および実施例を参照して以下に詳細に説明するが、当業者は、以下の図面および実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明を説明するために使用されるだけであることを理解するであろう。図面および好ましい実施形態に関する以下の詳細な説明から、本発明の種々の目的および有利な側面が、当業者に実施可能となるであろう。
図１Ａ～１Ｄは、それぞれ異なる細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２またはＣＬＤＮ１８．１に対する抗ＣＬＤＮ１８．２マウス抗体の結合活性の測定の結果を示す。図１Ａ：ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２；図１Ｂ：ＨＥＫ２９３Ｔ－ｍＣＬＤＮ１８．２；図１Ｃ：ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．１；図１Ｄ：ＨＥＫ２９３Ｔ。 図２は、細胞表面ＣＬＤＮ１８．２に対する抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体の結合活性の測定の結果を示す。 図３Ａ～３Ｃは、それぞれＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２、ＫＡＴＯ－ＩＩＩ、およびＮＵＧＣ４に対する抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体のＡＤＣＣ活性の測定の結果を示す。図３Ａ：ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２；図３Ｂ：ＫＡＴＯ－ＩＩＩ；図３Ｃ：ＮＵＧＣ４。 図４Ａ～４Ｂは、それぞれＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２およびＫＡＴＯ－ＩＩＩに対する抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体のＣＤＣ活性の測定の結果を示す。図４Ａ：ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２；図４Ｂ：ＫＡＴＯ－ＩＩＩ。 図５は、細胞表面ＣＬＤＮ１８．２に対する抗ＣＬＤＮ１８．２ヒト化抗体の結合活性の測定の結果を示す。 図６は、ＫＡＴＯ－ＩＩＩに対する抗ＣＬＤＮ１８．２ヒト化抗体のＡＤＣＣ活性の測定の結果を示す。 図７は、ＫＡＴＯ－ＩＩＩに対する抗ＣＬＤＮ１８．２ヒト化抗体のＣＤＣ活性の測定の結果を示す。 図８Ａ～８Ｂは、それぞれマウス腫瘍モデルにおける腫瘍容積（Ａ）および生存期間（Ｂ）に対する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の効果を示す。
配列情報
本発明に関与するいくつかの配列の情報を、以下の表１に示す。
Figure 0007401538000001
Figure 0007401538000002
Figure 0007401538000003
Figure 0007401538000004
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本発明を実施するための具体的なモデル
以下の実施例を参照して本発明を説明するが、これらの実施例は、本発明を限定することなく、本発明を説明することを意図するものである。
特に断りのない限り、本発明において使用される分子生物学実験法および免疫測定法は、J. Sambrook et al., Molecular Cloning: Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989,およびF.M. Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, 第3版, John Wiley & Sons, Inc., 1995から基本的に参照することができ、制限酵素の使用は、製品の製造業者により推奨される条件に従った。当業者ならば、実施形態は、実施例により本発明を説明するものであり、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定することを意図するものではないことが分かるであろう。
実施例１：抗ＣＬＤＮ１８．２マウス抗体の作製
抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体を得るために、マウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｗｅｉｔｏｎｇ Ｌｉｈｕａ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，２１６系統）を、異なる免疫化戦略（表２）によりワクチン接種し、マウスモノクローナル抗体の産生を誘発した。抗原としては、ヒトＣＬＤＮ１８．２細胞外ドメイン１をコードする核酸配列を発現する発現プラスミド（ＣＬＤＮ１８．２－ＥＣＬ１ ＤＮＡ；配列番号８３、ベクターはｐｃＤＮＡ３．１）、ヒトＣＬＤＮ１８．２細胞外ドメイン１－補体Ｃ３をコードする核酸配列を発現する発現プラスミド（ＣＬＤＮ１８．２－ＥＣＬ１－Ｃ３ｄ ＤＮＡ；配列番号８４、ベクターはｐｃＤＮＡ３．１）、全長ヒトＣＬＤＮ１８．２をコードする核酸配列を発現する発現プラスミド（ｈＣＬＤＮ１８．２ ＤＮＡ；配列番号８５、ベクターはｐｃＤＮＡ３．１）、ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現するトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ－ｈＣＬＤＮ１８．２）、ヒトＣＬＤＮ１８．２を高度に発現するトランスフェクトされた腎胚細胞（ＨＥＫ２９３－ｈＣＬＤＮ１８．２）が含まれた。アジュバントとしては、ｉｎ ｖｉｖｏ－ｊｅｔＰＥＩ（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ社、カタログ番号２０１－５０Ｇ）、ＯＤＮ １８２６ ＶａｃｃｉＧｒａｄｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社、カタログ番号ｖａｃ－１８２６－１）、完全フロイントアジュバントＣＦＡ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社、カタログ番号ｖａｃ－ｃｆａ－６０）が含まれた。また、投与経路としては、筋肉内（ｉｍ）、腹腔内（ｉｐ）、および皮下（ｓｃ）注射が含まれた。追加免疫の３日後に、ポリエチレングリコール法を用いて、免疫化マウスの脾臓細胞をマウス骨髄腫細胞ＳＰ２／０と融合し、それにより、抗体を発現し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで無期限に増殖することができる融合細胞を得、この融合細胞をＨＡＴ選択培地にて培養した。融合ハイブリドーマ細胞を９６ウェル細胞培養プレートに蒔き、陽性クローンを、一次スクリーニングを介して選択し、２～３ラウンドのサブクローニングに供した。
Figure 0007401538000012
一次スクリーニング：一次スクリーニングにおいて、ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞を用いることにより、成長中のクローンの上清を、細胞の表面上のＣＬＤＮ１８．２に結合するその能力に関して試験した。上清中の反応性抗体の存在を、二次抗体ＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ａｂｃａｍ社、カタログ番号ａｂ９７０１５）を用いることにより検出し、結合能を全視野走査サイトメーターで評価した（実施例３参照）。
二次スクリーニング：ヒトＣＬＤＮ１８を発現する細胞を用いることにより、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合した融合クローンの上清を、細胞の表面上のＣＬＤＮ１８．１に結合するその能力に関して試験した。上清中の反応性抗体の存在を、二次抗体ＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ａｂｃａｍ社、カタログ番号ａｂ９７０１５）を用いることにより検出し、結合能を全視野走査サイトメーターで評価した（詳細な実験工程については、実施例３参照）。最終的に、１０個の陽性モノクローナルハイブリドーマ細胞株を得、以下の抗体を培養上清から単離および精製した：１Ｄ１０、２Ｆ１２、３Ｆ２、５Ｆ９、９Ｆ３、１０Ｂ１１、２７Ｂ５、３７Ｂ１、４４Ａ８、４４Ｆ７。
実施例２：抗ＣＬＤＮ１８．２マウス抗体の抗原結合活性の評価
２．１ ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞株の構築
レンチウイルス感染および抗生物質抵抗性スクリーニングの方法（ＭＯＩ＝３～１０、５μｇ／ｍｌポリブレン）を用いることにより、ヒトＣＬＤＮ１８．２（配列番号８６）もしくはＣＬＤＮ１８．１（配列番号８８）、またはマウスＣＬＤＮ１８．２（配列番号８７）を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ）、ＣＨＯＳ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）、ＯＣＵＭ－１胃癌腫瘍細胞（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｋｅｂａｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）において過剰発現させた。レンチウイルスは、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｇｅｎｅｃｈｅｍ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．により提供された。細胞感染の７２時間後、対応する抗生物質を適用し、培養を２～４週間継続し、次いで、増殖させ、その後の実験のために凍結保存した。
２．２ 細胞走査サイトメーターによる細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２およびＣＬＤＮ１８．１に対するマウス抗体の結合の検出
ヒトＣＬＤＮ１８．２（ｈＣＬＤＮ１８．２）を発現するＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２およびＯＣＵＭ－１－ｈＣＬＤＮ１８．２、もしくはマウスＣＬＤＮ１８．２（ｍＣＬＤＮ１８．２）を発現するＨＥＫ２９３Ｔ－ｍＣＬＤＮ１８．２ならびに対応する陰性対照細胞株ＨＥＫ２９３Ｔを使用した；または、ヒトＣＬＤＮ１８．１（ｈＣＬＤＮ１８．１）を発現するＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．１およびＣＨＯＳ－ｈＣＬＤＮ１８．１を使用した。ＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ａｂｃａｍ社、カタログ番号ａｂ９７０１５）またはＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ａｂｃａｍ社、カタログ番号ａｂ９７００３）を、二次抗体として使用した。結合曲線は、以下の方法を用いることにより作成した。
平底９６ウェルプレート中のウェルあたり１０％ＦＢＳを含有する１００μＬのＤＭＥＭに、１０，０００個の細胞を蒔いた。細胞がウェルの底部に一晩接着または定着した後、翌日に上清を除去した。２００μＬのＤＭＥＭで全容量（すなわち、１００μＬ）の１／３に希釈することにより、抗体の３倍勾配希釈を行った。１００μＬの希釈抗体（融合クローンまたはサブクローンの上清は、スクリーニングに使用した）を、細胞プレートの各ウェルに加え、１００μＬのＤＭＥＭを対応する陰性対照ウェルに加え、インキュベーションを室温で１時間行った。上清を除去した後、１００μＬの二次抗体（５μｇ／ｍＬ、ＤＭＥＭで希釈）を各ウェルに加え、室温で０．５時間インキュベートした。染色後に上清を除去し、次いで、ＰＢＳで１回洗浄した。１００μＬのＰＢＳを各ウェルに加え、次いで、サイトメーターで読み取りを行った。
全視野走査サイトメーター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ社、Ｃｅｌｉｇｏ（登録商標）Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を使用して、実験プレートの読み取り値を測定した。測定中、ウェル中の細胞の高速走査イメージングを、二次抗体に対応する緑色蛍光チャネルおよび明視野チャネルにおいて同時に行った。蛍光標識した細胞の形態および蛍光強度に従って設定したパラメーターの下で、緑色蛍光チャネルから得た画像において、抗体に結合した細胞を数え、細胞の形態に従って設定したパラメーターの下で、明視野チャネルから得た画像において、接着細胞を数えた。また、接着細胞の総数における緑色蛍光を有する抗体結合細胞のパーセンテージ（蛍光細胞の％）は、緑色蛍光チャネルから得られた計数結果を、明視野チャネルから得られた計数結果で割ることにより得た。ＣＬＤＮ１８．２発現細胞に対する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の結合活性は、このパーセンテージに従って決定した。すなわち、パーセンテージが低い程、細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２に結合する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の能力が乏しく、逆に、パーセンテージが高い程、細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２に結合する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の能力が優れている。データ解析は、ＧｒａｐｈＰａｄを用いて行った。
ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現するＨＥＫ２９３Ｔ、マウスＣＬＤＮ１８．２を発現するＨＥＫ２９３Ｔ、ヒトＣＬＤＮ１８．１を発現するＨＥＫ２９３Ｔ、および対照ＨＥＫ２９３Ｔに対する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の結合活性の測定の結果を図１Ａ～１Ｄに示し、図中、横座標は、抗体濃度の対数を示し、縦座標は、接着細胞の総数における緑色蛍光を有するＣＬＤＮ１８．２抗体結合細胞のパーセンテージを示した。抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の抗原結合活性のＥＣ５０を近似曲線からさらに得、その結果を表３に示し、表中、参照抗体は１７５Ｄ１０（Ｇａｎｙｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＡＧ）であり、これは、例えば、ＣＮ１０１３１２９８９ＢおよびＣＮ１０３５０９１１４Ｂに開示されていたものである。
Figure 0007401538000013
上記の結果は、１Ｄ１０、２Ｆ１２、３Ｆ２、５Ｆ９、９Ｆ３、１０Ｂ１１、２７Ｂ５、３７Ｂ１、４４Ａ８および４４Ｆ７の総てが、ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に結合することができ、参照抗体１７５Ｄ１０よりも有意に優れており、これらの抗体は、ＣＬＤＮ１８．２を発現しなかった陰性対照細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に結合しなかったことを示した。
ＣＬＤＮ１８．１に対する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の結合活性のＥＣ５０値を、表４に示した。その結果は、２Ｆ１２、３Ｆ２、９Ｆ３、１０Ｂ１１、２７Ｂ５、３７Ｂ１、４４Ａ８および４４Ｆ７のいずれもＣＬＤＮ１８．１に結合せず、ＣＬＤＮ１８．２に対する良好な結合特異性を示すことを示した。
Figure 0007401538000014
実施例３：抗ＣＬＤＮ１８．２マウス抗体の配列決定およびキメラ抗体の調製
３．１ 抗ヒトＣＬＤＮ１８．２マウス抗体の可変領域配列の決定
ハイブリドーマ細胞を遠心分離により回収し、５～１０×１０６個の細胞に１ｍｌのトリゾールおよび０．２ｍｌのクロロホルムを加え、１５秒間激しく振り混ぜ、次いで、室温で３分間インキュベートした。遠心分離後、水相を回収し、０．５ｍｌのイソプロパノールを加え、次いで、室温で１０分間インキュベートした。沈殿物を回収し、エタノールで洗浄し、乾燥させて、ＲＮＡを得た。鋳型ＲＮＡおよびプライマーを氷浴遠心管に加え、プライマーおよび鋳型が正しく対になった場合、逆転写を行い、次いで、ＰＣＲ増幅を行った。増幅が完了した後、４本の微量遠心管にそれぞれ２．５μｌのｄＮＴＰ／ｄｄＮＴＰ混合物を加え、その後の使用のために３７℃で５分間インキュベートした。空の微量遠心管に、１ｐｍｏｌのＰＣＲ増幅産物、１０ｐｍｏｌのシークエンシングプライマー、２μｌの５倍シークエンシングバッファーを加え、再蒸留水を加えて全容量１０μｌとし、次いで、９６℃で８分間の加熱、１分間の氷浴、ならびに４℃および１００００ｇで１０秒間の遠心分離に供した。２μｌの予冷標識混合物（ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰそれぞれ０．７５μｍｏｌ／Ｌ）、α－３２Ｐ－ｄＡＴＰ ５μＣｉ、１μｌの０．１ｍｏｌ／Ｌ ＤＤＴ、２Ｕのシークエンシング酵素を加え、次いで、水を加えて１５μｌとし、よく混合し、氷上に２分間置いた。３．５μｌの標識化反応混合物を、４本の準備した微量遠心管に加え、３７℃で５分間インキュベートした。４μｌの停止液を各管に加えた。サンプルを８０℃の水浴中で５分間熱変性させ、２μｌの量でシークエンシングゲルの各レーンにロードし、これらのフラグメントを電気泳動により分離して、配列情報を回収した。
１０個のマウス抗体のＶＨおよびＶＬ配列を、以下の表５に示した。また、１０個のマウスモノクローナル抗体のＣＤＲ配列（表６）を、Ｋａｂａｔらにより記載の方法により、さらに決定した（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland (1991), pp. 647-669）。
Figure 0007401538000015
Figure 0007401538000016
３．２ ヒト－マウスキメラ抗体の調製および抗原結合活性の評価
上記のマウス抗体の重鎖および軽鎖可変領域をコードする遺伝子配列（配列番号１０３～１２２参照）を、それぞれヒト抗体の重鎖定常領域（配列番号８１）および軽鎖定常領域（配列番号８２）をコードする配列にライゲートし、ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）において組換え発現させ、それにより、対応するキメラ抗体１Ｄ１０－ｃｈＩｇＧ１、２Ｆ１２－ｃｈＩｇＧ１、３Ｆ２－ｃｈＩｇＧ１、５Ｆ９－ｃｈＩｇＧ１、９Ｆ３－ｃｈＩｇＧ１、１０Ｂ１１－ｃｈＩｇＧ１、２７Ｂ５－ｃｈＩｇＧ１、３７Ｂ１－ｃｈＩｇＧ１、４４Ａ８－ｃｈＩｇＧ１、４４Ｆ７－ｃｈＩｇＧ１を得た。ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２）に対する異なる濃度のキメラ抗体の結合活性を、実施例２に記載の方法により検出した。結果を図２に示し、図中、横座標は、抗体濃度の対数を示し、縦座標は、接着細胞の総数における緑色蛍光を有するＣＬＤＮ１８．２抗体結合細胞のパーセンテージ（蛍光細胞の％）を示した。抗原に対するキメラ抗体の結合活性のＥＣ５０値を、近似曲線からさらに得、表７に示した。結果は、キメラ抗体３Ｆ２－ｃｈＩｇＧ１、５Ｆ９－ｃｈＩｇＧ１、９Ｆ３－ｃｈＩｇＧ１、１０Ｂ１１－ｃｈＩｇＧ１、２７Ｂ５－ｃｈＩｇＧ１、３７Ｂ１－ｃｈＩｇＧ１、４４Ａ８－ｃｈＩｇＧ１および４４Ｆ７－ｃｈＩｇＧ１は総て、ヒトＣＬＤＮ１８．２を認識する／に結合することができたことを示した。
Figure 0007401538000017
実施例４：ＡＤＣＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体の活性の評価
ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２、またはｈＣＬＤＮ１８．２を天然に発現するヒト胃癌腫瘍細胞株ＫＡＴＯ－ＩＩＩおよびＮＵＧＣ４を標的細胞として使用し、フィコールにより単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をエフェクター細胞として使用した。標的細胞を回収し、ＰＢＳで２回洗浄した。生細胞色素カルセインＡＭ（５０μｇのカルセインＡＭ乾燥粉末（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｃ３１００ＭＰ）を５０μｌのＤＭＳＯに溶解した）を３μＭに希釈し、標的細胞を、５％ＣＯ２下で３７℃にて３０分間染色した。染色後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、５０００個の標的細胞を、平底９６ウェルプレート中のウェルあたり１００μＬのＤＭＥＭに蒔いた。２００μＬのＤＭＥＭで全容量（すなわち、１００μＬ）の１／３に希釈することにより、試験した抗体の３倍勾配希釈を行った。５０μＬの希釈抗体を、細胞プレートの対応するウェルに加え（５０μＬのＤＭＥＭ培地を、非特異的死滅のために対照ウェルに加えた）、５％ＣＯ２下で３７℃にて３０分間、標的細胞とともにインキュベートした。次に、５０μＬ中の５００００個の単離ＰＢＭＣを、エフェクター細胞として各ウェルに加え、次いで、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離して、細胞をプレートの底部に定着させた。複数の時点（０時間、２時間、３時間、４時間、および６時間）で、全視野走査サイトメーター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ社、Ｃｅｌｉｇｏ（登録商標）Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）における読み取りのために、実験プレートを測定した。測定中、ウェル中の細胞の高速走査イメージングを、カルセインＡＭに対応する緑色蛍光チャネルおよび明視野チャネルにおいて同時に行った。蛍光標識した細胞の形態および蛍光強度に従って設定したパラメーターの下で、緑色蛍光チャネルから得た画像において、各ウェル中の生細胞を数え、細胞の形態に従って設定したパラメーターの下で、明視野チャネルから得た画像において、各ウェル中の総細胞を数えた。また、細胞の総数における緑色蛍光を有する生細胞のパーセンテージは、緑色蛍光チャネルから得られた計数結果を、明視野チャネルから得られた計数結果で割ることにより得た。細胞の総数における抗体の存在下で特異的細胞溶解を受けていた細胞のパーセンテージは、非特異的対照ウェルのパーセンテージから抗体の存在下で得られた対応するパーセンテージを引くことにより得た。ＡＤＣＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の活性は、このパーセンテージ値に基づいて決定した。すなわち、パーセンテージが低い程、ＡＤＣＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の能力が低く、逆に、パーセンテージが高い程、ＡＤＣＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の能力が優れている。データ解析は、ＧｒａｐｈＰａｄを用いて行った。
ＡＤＣＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の活性の測定結果を図３Ａ～３Ｃに示し、図中、横座標は、抗体濃度の対数を示し、縦座標は、特異的溶解の補正後のパーセンテージを示した。ＡＤＣＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体の活性のＥＣ５０を近似曲線からさらに得、その結果を表８に示した。結果は、試験した抗体は、ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に対するＰＢＭＣの死滅効果を誘導することができ、参照抗体１７５Ｄ１０より有意に優れていたことを示した。
Figure 0007401538000018
実施例５：ＣＤＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体の活性の評価
ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２、またはｈＣＬＤＮ１８．２を天然に発現したヒト胃癌腫瘍細胞株ＫＡＴＯ－ＩＩＩを標的細胞として使用し、新鮮ヒト血清をエフェクター細胞として使用した。標的細胞を回収し、ＰＢＳで２回洗浄した。生細胞色素カルセインＡＭ（５０μｇのカルセインＡＭ乾燥粉末（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｃ３１００ＭＰ）を５０μｌのＤＭＳＯに溶解した）を３μＭに希釈し、標的細胞を、５％ＣＯ２下で３７℃にて３０分間染色した。染色後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、８，０００個の標的細胞を、平底９６ウェルプレート中のウェルあたり２５μＬのＤＭＥＭに蒔いた。２００μＬのＤＭＥＭで全容量（すなわち、１００μＬ）の１／３に希釈することにより、試験した抗体の３倍勾配希釈を行った。２５μＬの希釈抗体を、細胞プレートの各ウェルに加え（２５μＬのＤＭＥＭ培地を、非特異的死滅のために対照ウェルに加えた）、５％ＣＯ２下で３７℃にて３０分間、標的細胞とともにインキュベートした。次に、５０μＬの新鮮単離２０％ヒト血清（ＤＭＥＭで希釈）を、エフェクター細胞として各ウェルに加え、次いで、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離して、細胞をプレートの底部に定着させた。複数の時点（０、１、２、３、および４時間）で、全視野走査サイトメーター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ社、Ｃｅｌｉｇｏ（登録商標）Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）における読み取りのために、実験プレートを測定した。測定中、ウェル中の細胞の高速走査イメージングを、カルセインＡＭに対応する緑色蛍光チャネルおよび明視野チャネルにおいて同時に行った。蛍光標識した細胞の形態および蛍光強度に従って設定したパラメーターの下で、緑色蛍光チャネルから得た画像において、各ウェル中の生細胞を数え、細胞の形態に従って設定したパラメーターの下で、明視野チャネルから得た画像において、各ウェル中の総細胞を数えた。また、細胞の総数における緑色蛍光を有する生細胞のパーセンテージは、緑色蛍光チャネルから得られた計数結果を、明視野チャネルから得られた計数結果で割ることにより得た。細胞の総数における抗体の存在下で特異的細胞死滅を受けていた細胞のパーセンテージは、非特異的対照ウェルのパーセンテージから抗体の存在下で得られた対応するパーセンテージを引くことにより得た。ＣＤＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の活性は、このパーセンテージ値に基づいて決定した。すなわち、パーセンテージが低い程、ＣＤＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の能力が低く、逆に、パーセンテージが高い程、ＣＤＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の能力が優れている。データ解析は、ＧｒａｐｈＰａｄを用いて行った。
ＣＤＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の活性の測定結果を図４Ａ～４Ｂに示し、図中、横座標は、抗体濃度の対数を示し、縦座標は、特異的細胞死滅の補正後のパーセンテージを示した。ＣＤＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体のＥＣ５０を近似曲線からさらに得、その結果を表９に示した。結果は、試験した抗体は、ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に対するヒト血清中の補体の死滅効果を誘導することができ、参照抗体１７５Ｄ１０より有意に優れていたことを示した。
Figure 0007401538000019
実施例６：ＣＬＤＮ１８．２内部移行を誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の活性の評価
本実施例において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体により媒介される細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２）の表面上のＣＬＤＮ１８．２の内部移行レベルを、フローサイトメトリーにより検出した。細胞の２つのサンプルを、それぞれ３７℃で１時間および４時間、１０μｇ／ｍＬキメラ抗体とともにインキュベートした。２％ＦＢＳを含有するＰＢＳで数回洗浄した後、１０μｇ／ｍＬ二次抗体を加え、４℃で３０分間染色した。次に、細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２の発現レベルを、フローサイトメトリーにより分析した。
ＭＦＩ４Ｈは、インキュベーションの４時間後のサンプルのＭＦＩであり、ＭＦＩ１Ｈは、インキュベーションの１時間後のサンプルのＭＦＩであり、ここで、抗体の結合は完了しており、エンドサイトーシスはまだ生じていなかったと仮定した。ＭＦＩバックグラウンドは、二次抗体のみのＭＦＩであった。細胞表面ＣＬＤＮ１８．２の抗体媒介性内部移行のパーセンテージは、以下の式により計算した：
内部移行したＣＬＤＮ１８．２のパーセンテージ（％）＝１００－１００×（ＭＦＩ４Ｈ－ＭＦＩ１Ｈ）／（ＭＦＩ１Ｈ－ＭＦＩバックグラウンド）
結果を表１０に示した。これらの抗体は、ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２細胞の表面上のＣＬＤＮ１８．２の内部移行を、様々な程度で媒介した。
Figure 0007401538000020
実施例７：抗ＣＬＤＮ１８．２抗体のヒト化およびその活性の評価
候補抗体およびヒト抗体の配列相同性を改善するため、かつヒトに対する抗体の免疫原性を低減するために、上記の実施例において提供されたマウス抗体を、マウスＣＤＲ領域がヒトフレームワーク配列上に移植された、ヒト化のための設計および調製に供することができた（Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号；Ｑｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号；ならびにLo, Benny, KC編, Antibody Engineering: Methods and Protocols, 第248巻, Humana Press, New Jersey, 2004参照）。一般に、ヒト化抗体のＣＤＲ領域の総てまたは一部は、非ヒト抗体（ドナー抗体）に由来し、非ＣＤＲ領域（例えば、可変領域ＦＲおよび／または定常領域）の総てまたは一部は、ヒト免疫グロブリン（レセプター抗体）に由来した。
これに基づき、本発明者らは、それぞれ７００４－０９ｈｕ０９、７００４－０９ｈｕ１０、および７００４－０９ｈｕ１５と名付けたマウス抗体４４Ｆ７の３つのヒト化抗体を調製および取得した。それらのアミノ酸配列を以下の表に示した。
Figure 0007401538000021
上記のヒト化抗体の重鎖および軽鎖可変領域をコードする遺伝子配列（配列番号１２３～１２８参照）を、ヒト抗体の重鎖定常領域（配列番号８１）および軽鎖定常領域（配列番号８２）をコードする配列にライゲートし、次いで、組換え発現を行った。ＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２の表面上に発現したＣＬＤＮ１８．２に対するヒト化抗体の結合能力を、細胞走査サイトメーターにより、および実施例２．２に記載の方法を用いることにより決定した。結果を図５に示し、図中、横座標は、抗体濃度の対数を示し、縦座標は、接着細胞の総数における緑色蛍光を有するＣＬＤＮ１８．２抗体結合細胞のパーセンテージ（蛍光細胞の％）を示した。抗ＣＬＤＮ１８．２ヒト化抗体の抗原結合活性のＥＣ５０を近似曲線からさらに得、その結果を表１２に示した。結果は、試験したヒト化抗体は総て、ｈＣＬＤＮ１８．２発現細胞に結合することができ、その親和性は、親キメラ抗体のものと同じ桁であったことを示した。
Figure 0007401538000022
さらに、本発明者らは、ＡＤＣＣを誘導するヒト化抗体の能力を検討し、評価方法は、実施例４に記載の方法を参照した。ヒト胃癌腫瘍細胞ＫＡＴＯ－ＩＩＩを標的細胞として使用し、フィコールにより単離されたヒト末梢血単核細胞をエフェクター細胞として使用した。測定結果を図６に示し、図中、横座標は、抗体濃度の対数を示し、縦座標は、特異的細胞溶解の補正後のパーセンテージを示した。ＡＤＣＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体の活性のＥＣ５０を近似曲線からさらに得、その結果を表１３に示した。結果は、試験した抗体は総て、ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に対するＰＢＭＣの死滅効果を誘導することができ、ＡＤＣＣを誘導するそれらの能力は、親キメラ抗体のものと同じ桁であり、参照抗体１７５Ｄ１０のものより有意に優れていたことを示した。
Figure 0007401538000023
本発明者らはまた、ＣＤＣを誘導するヒト化抗体の能力を検討し、評価方法は、実施例５の方法を参照した。ヒト胃癌腫瘍細胞ＫＡＴＯ－ＩＩＩを標的細胞として使用し、新鮮ヒト血清をエフェクター細胞として使用した。測定結果を図７に示し、図中、横座標は、抗体濃度の対数を示し、縦座標は、特異的細胞死滅の補正後のパーセンテージを示した。ＣＤＣを誘導する抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体の活性のＥＣ５０を近似曲線からさらに得、その結果を表１４に示した。結果は、試験した抗体は総て、ヒトＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に対するヒト血清中の補体の死滅効果を誘導することができ、ＣＤＣを誘導するその能力は、親キメラ抗体のものと同じ桁であり、参照抗体１７５Ｄ１０のものより有意に優れていたことを示した。
Figure 0007401538000024
上記の結果は、本発明のヒト化抗体は、高度のヒト化を示し、そのため免疫拒絶の可能性を低減するだけでなく、それらの親キメラ抗体のものに匹敵し、かつ公知の抗体のものより優れた抗腫瘍活性も示したことを示した。
実施例８：抗ＣＬＤＮ１８．２キメラ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価
動物における抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の抗腫瘍効果を検討するために、ヌードマウス（ＳＣＩＤ、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｗｅｉｔｏｎｇｌｉｈｕａ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）に対し、１×１０７個のＨＥＫ２９３Ｔ－ｈＣＬＤＮ１８．２細胞を皮下接種した。接種日から静脈内投与および腹腔内投与を交互に、週２回を４週間、１回１０ｍｇ／ｋｇで行った。投与の終了後、マウスにおける腫瘍サイズの検出を継続した。図８Ａは、処置後のマウスにおける腫瘍容積の変化を示したものである。結果は、４４Ｆ７－ｃｈＩｇＧ１抗体処置は、投与群のマウスにおいて、腫瘍成長を有意に阻害しただけでなく、腫瘍を完全に排除し、その抗腫瘍効果は、参照抗体１７５Ｄ１０のものよりも有意に優れていたことを示した。さらに、図８Ｂは、４４Ｆ７－ｃｈＩｇＧ１は、担癌マウスの全生存期間を有意に延長し、優れた抗腫瘍活性を示したことを示したものである。参照抗体１７５Ｄ１０と比較して、４４Ｆ７－ｃｈＩｇＧ１は、生存期間の延長において有意な利点も示したことが分かる。このような技術的効果は、有意かつ予想外のものであった。
本発明の特定の複数の実施形態を詳細に説明してきたが、当業者ならば、公表されている総ての教示に従って、種々の改変および変更を詳細に対して行うことができ、これらの変更は総て本発明の保護範囲にあることを理解するであろう。本発明の全体は、添付の特許請求の範囲およびその任意の等価物によって与えられる。

Claims (38)

  1. ＣＬＤＮ１８．２に対して特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
    前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
    （１）配列番号７３において示される配列を有するＶＨおよび配列番号７４において示される配列を有するＶＬを含んでなる、
    （２）配列番号９１において示される配列を有するＶＨおよび配列番号９２において示される配列を有するＶＬを含んでなる、
    （３）配列番号９９において示される配列を有するＶＨおよび配列番号１００において示される配列を有するＶＬを含んでなる、または
    （４）配列番号１０１において示される配列を有するＶＨおよび配列番号１０２において示される配列を有するＶＬを含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメント。
  2. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト免疫グロブリン由来の、重鎖定常領域（ＣＨ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含んでなる、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  3. 以下の一つ以上を特徴とする、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント：
    （１）前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ重鎖定常領域である；
    （２）前記重鎖定常領域（ＣＨ）が、配列番号８１において示される；
    （３）前記軽鎖定常領域が、κ軽鎖定常領域である；
    （４）前記軽鎖定常領域（ＣＬ）が配列番号８２において示される。
  4. 前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、およびダイアボディからなる群から選択される；かつ／または、前記抗体が、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体もしくは多重特異性抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  5. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、検出可能な標識で標識されている、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  6. 前記検出可能な標識が、酵素、放射性核種、蛍光色素、発光物質、またはビオチンで標識されている、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  7. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域をコードする、単離核酸分子。
  8. 請求項７に記載の単離核酸分子を含んでなるベクター。
  9. 請求項７に記載の単離核酸分子または請求項８に記載のベクターを含んでなる、宿主細胞。
  10. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを調製する方法であって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で請求項９に記載の宿主細胞を培養すること、および培養された宿主細胞の培養物から前記抗体またはその抗原結合フラグメントを回収することを含んでなる、方法。
  11. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなる二重特異性または多重特異性分子。
  12. 前記二重特異性または多重特異性分子が、第２の標的に対する第２の結合特異性を有する少なくとも１つの第２の抗体をさらに含んでなる、請求項１１に記載の二重特異性または多重特異性分子。
  13. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、および前記抗体またはその抗原結合フラグメントに連結された治療剤を含んでなる免疫複合体。
  14. 前記治療剤が細胞傷害剤であるか、または前記免疫複合体が抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である、請求項１３に記載の免疫複合体。
  15. 前記治療剤が、アルキル化剤、抗有糸***剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種、およびそれらの任意の組合せから選択される、請求項１３に記載の免疫複合体。
  16. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、請求項１１または１２に記載の二重特異性もしくは多重特異性分子、または請求項１３～１５のいずれか一項に記載の免疫複合体、ならびに薬学上許容可能な担体および／もしくは賦形剤を含んでなる医薬組成物。
  17. さらなる薬学上有効な剤をさらに含んでなり、
    前記さらなる薬学上有効な剤が抗腫瘍剤である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  18. 前記さらなる薬学上有効な剤が、アルキル化剤、抗有糸***剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的剤、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスである、請求項１７に記載の医薬組成物。
  19. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなるキット。
  20. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、検出可能な標識標識されている、請求項１９に記載のキット。
  21. 前記キットが、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを特異的に認識する第２の抗体をさらに含んでなり、前記第２の抗体が、検出可能な標識をさらに含んでなる、請求項１９に記載のキット。
  22. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原結合ドメインを含んでなるキメラ抗原受容体。
  23. 前記抗原結合ドメインが、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる、請求項２２に記載のキメラ抗原受容体。
  24. 前記抗原結合ドメインがｓｃＦｖである、請求項２２に記載のキメラ抗原受容体。
  25. 請求項２２～２４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体をコードする単離核酸分子。
  26. 請求項２５に記載の単離核酸分子を含んでなるベクター。
  27. 請求項２５に記載の単離核酸分子または請求項２６に記載のベクターを含んでなる宿主細胞であって、
    前記宿主細胞が免疫エフェクター細胞である、宿主細胞。
  28. 前記宿主細胞がキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）である、請求項２７に記載の宿主細胞。
  29. インビトロで、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞の成長を阻害する、および／または前記ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞を死滅させる方法であって、有効量の請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または請求項１１または１２に記載の二重特異性もしくは多重特異性分子、または請求項１３～１５のいずれか一項に記載の免疫複合体、または請求項１６～１８のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２２～２４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体、または請求項２７または２８に記載の宿主細胞と、前記腫瘍細胞を接触させることを含んでなる、方法。
  30. 対象における腫瘍を予防および／または治療するための薬剤の製造における、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または請求項１１または１２に記載の二重特異性もしくは多重特異性分子、または請求項１３～１５のいずれか一項に記載の免疫複合体、または請求項１６～１８のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項２２～２４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体、または請求項２５に記載の単離核酸分子、または請求項２６に記載のベクター、または請求項２７または２８に記載の宿主細胞の使用。
  31. 前記薬剤が、抗腫瘍剤であるさらなる薬学上有効な剤をさらに含んでなる、請求項３０に記載の使用。
  32. 前記さらなる薬学上有効な剤が、アルキル化剤、抗有糸***剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的剤、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスである、請求項３１に記載の使用。
  33. 前記腫瘍がＣＬＤＮ１８．２を発現し、
    前記腫瘍が、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞と関与する、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の使用。
  34. 前記腫瘍が、胃癌、食道癌、膵臓癌、気管支癌、非小細胞肺癌、乳癌、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌およびそれらの転移性癌からなる群から選択される；かつ／または、前記対象が、哺乳動物である、請求項３０～３３のいずれか一項に記載の使用。
  35. 前記転移性癌が胃癌転移である、請求項３４に記載の使用。
  36. 前記転移性癌がクルケンベルグ腫瘍、腹膜転移またはリンパ節転移である、請求項３４に記載の使用。
  37. サンプル中のＣＬＤＮ１８．２の存在または量を検出する方法であって、以下の工程：
    （１）請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと前記サンプルを接触させること；
    （２）前記抗体またはその抗原結合フラグメントとＣＬＤＮ１８．２との複合体の形成または量を検出すること
    を含んでなる、方法。
  38. ＣＬＤＮ１８．２を標的とする抗腫瘍療法により腫瘍が治療可能であるかどうかを決定するためのキットの製造における、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントの使用。
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