TW202241955A - Ｇａｒｐ蛋白抗體及其應用 - Google Patents
Ｇａｒｐ蛋白抗體及其應用 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202241955A TW202241955A TW111101854A TW111101854A TW202241955A TW 202241955 A TW202241955 A TW 202241955A TW 111101854 A TW111101854 A TW 111101854A TW 111101854 A TW111101854 A TW 111101854A TW 202241955 A TW202241955 A TW 202241955A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- sequence shown
- binding protein
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 46
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title description 33
- 101000771075 Homo sapiens Cyclic nucleotide-gated cation channel beta-1 Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 101001004924 Homo sapiens Transforming growth factor beta activator LRRC32 Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000052917 human LRRC32 Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 101500025614 Homo sapiens Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 13
- 101710093674 Cyclic nucleotide-gated cation channel beta-1 Proteins 0.000 claims abstract 5
- 101710169732 Transforming growth factor beta activator LRRC32 Proteins 0.000 claims abstract 5
- 102100025946 Transforming growth factor beta activator LRRC32 Human genes 0.000 claims abstract 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 522
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 claims description 327
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 claims description 327
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 193
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 169
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 55
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 53
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 52
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 49
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 43
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 43
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 43
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 43
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 40
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 35
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 35
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 35
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 28
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 28
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims description 28
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 27
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 25
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 25
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 21
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 20
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 claims description 20
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 17
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 claims description 16
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 claims description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 13
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 12
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 12
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims description 12
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 12
- 102000057208 Smad2 Human genes 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 101710143123 Mothers against decapentaplegic homolog 2 Proteins 0.000 claims description 10
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 9
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 claims description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 4
- 238000003881 globally optimized alternating phase rectangular pulse Methods 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 description 38
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 33
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 31
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 29
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 27
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 24
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 20
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 18
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 17
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 17
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 17
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 16
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 16
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000006870 function Effects 0.000 description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 12
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical group C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 12
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 11
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 11
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 11
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 11
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 11
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 11
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 11
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 11
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 10
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- 206010055114 Colon cancer metastatic Diseases 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 7
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 229940066453 tecentriq Drugs 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 6
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 239000012270 PD-1 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 239000012271 PD-L1 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 4
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 4
- 239000012668 PD-1-inhibitor Substances 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 4
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 229940121655 pd-1 inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 229940121656 pd-l1 inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 3
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 3
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- ZBOYJODMIAUJHH-SANMLTNESA-N (2s)-1-[[2,6-dimethoxy-4-[(2-methyl-3-phenylphenyl)methoxy]phenyl]methyl]piperidine-2-carboxylic acid Chemical compound C=1C(OC)=C(CN2[C@@H](CCCC2)C(O)=O)C(OC)=CC=1OCC(C=1C)=CC=CC=1C1=CC=CC=C1 ZBOYJODMIAUJHH-SANMLTNESA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 229940123587 Cell cycle inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 101000998947 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-46 Proteins 0.000 description 2
- 101001037153 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-7 Proteins 0.000 description 2
- 101001138133 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-5 Proteins 0.000 description 2
- 101001008263 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-15 Proteins 0.000 description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102100036888 Immunoglobulin heavy variable 1-46 Human genes 0.000 description 2
- 102100040231 Immunoglobulin heavy variable 3-7 Human genes 0.000 description 2
- 102100020769 Immunoglobulin kappa variable 1-5 Human genes 0.000 description 2
- 102100027410 Immunoglobulin kappa variable 3D-15 Human genes 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 2
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940121372 histone deacetylase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000003276 histone deacetylase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 2
- 210000002602 induced regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012444 intercalating antibiotic Substances 0.000 description 2
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 238000012004 kinetic exclusion assay Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002501 natural regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 229940121497 sintilimab Drugs 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000002849 thermal shift Methods 0.000 description 2
- 229950007123 tislelizumab Drugs 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- UWNXGZKSIKQKAH-SSEXGKCCSA-N (2R)-2-[[2-[(3-cyanophenyl)methoxy]-4-[[3-(2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-6-yl)-2-methylphenyl]methoxy]-5-methylphenyl]methylamino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound Cc1cc(CN[C@H](CO)C(O)=O)c(OCc2cccc(c2)C#N)cc1OCc1cccc(c1C)-c1ccc2OCCOc2c1 UWNXGZKSIKQKAH-SSEXGKCCSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical group NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008720 Bone Marrow Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- JEDPSOYOYVELLZ-UHFFFAOYSA-N COc1nc(OCc2cccc(c2C)-c2ccccc2)ccc1CNCCNC(C)=O Chemical compound COc1nc(OCc2cccc(c2C)-c2ccccc2)ccc1CNCCNC(C)=O JEDPSOYOYVELLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- QBXVXKRWOVBUDB-GRKNLSHJSA-N ClC=1C(=CC(=C(CN2[C@H](C[C@H](C2)O)C(=O)O)C1)OCC1=CC(=CC=C1)C#N)OCC1=C(C(=CC=C1)C1=CC2=C(OCCO2)C=C1)C Chemical compound ClC=1C(=CC(=C(CN2[C@H](C[C@H](C2)O)C(=O)O)C1)OCC1=CC(=CC=C1)C#N)OCC1=C(C(=CC=C1)C1=CC2=C(OCCO2)C=C1)C QBXVXKRWOVBUDB-GRKNLSHJSA-N 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029764 DNA-directed DNA/RNA polymerase mu Human genes 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101710088235 Envelope glycoprotein C homolog Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 101001066129 Homo sapiens Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 1
- OWYWGLHRNBIFJP-UHFFFAOYSA-N Ipazine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(Cl)=NC(NC(C)C)=N1 OWYWGLHRNBIFJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 108010006444 Leucine-Rich Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000012269 PD-1/PD-L1 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108700032504 Smad2 Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 108091005735 TGF-beta receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000016715 Transforming Growth Factor beta Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108091093126 WHP Posttrascriptional Response Element Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000006491 bone marrow cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000981 bystander Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229950007712 camrelizumab Drugs 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008570 general process Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 102000047486 human GAPDH Human genes 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000005746 immune checkpoint blockade Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 210000005008 immunosuppressive cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 238000012482 interaction analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 229940121653 pd-1/pd-l1 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 229940121514 toripalimab Drugs 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4621—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells immunosuppressive or immunotolerising
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46434—Antigens related to induction of tolerance to non-self
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/55—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Abstract
本申請涉及一種GARP蛋白抗體，以及包含或表達該GARP蛋白抗體的細胞。該GARP蛋白抗體以約1.0E-12或更低的K D 值與人GARP/人TGF-β 1複合物結合。本申請還提供一種包含該GARP蛋白抗體和免疫檢查點抑制劑的藥物組合及其用途。
Description
本申請涉及生物醫藥領域，具體的涉及一種GARP蛋白抗體及其應用。
調節性T細胞(Treg)與自身免疫性疾病和腫瘤發生關係密切，其異常活性可導致自身免疫性疾病或者腫瘤發生。Treg細胞是近年來免疫學領域研究的熱點，其具有免疫應答低下和免疫抑制兩大特徵，藉由“主動”的方式抑制免疫系統從而發揮免疫負調作用。根據來源及作用機制，Treg可分為天然產生的CD4+CD25+Treg(自然調節性T細胞，nTreg)和誘導產生的適應性調節T細胞(aTreg或iTreg)。
GARP(human glycoprotein A repetitions predominant)蛋白是80kDa的I型膜糖蛋白，屬於富含亮胺酸的重複蛋白家族。GARP蛋白表達在巨核細胞，血小板和活化的調節性T細胞(Treg細胞)上。TGF-β與無活性結合蛋白LAP形成籠狀結構，處於非活性狀態，這種籠狀結構可以被GARP，整合素，蛋白酶或其他基質激活，形成活性的TGF-β，藉由自分泌或旁分泌與受體結合激活細胞信號。TGF-β信號被認為是導致腫瘤對檢查點阻斷療法產生耐藥
的主要原因。例如，TGF-β增加腫瘤微環境中的免疫抑制細胞和免疫抑制因子。
TGF-β作為一種免疫抑制細胞因子，藉由不同的機制對免疫應答產生廣泛的抑制作用。TGF-β降低Th1、Th2細胞和細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的分化和功能，所有這些都提供重要的抗腫瘤效應。TGF-β還藉由調節調節性T(Treg)細胞的數量和功能，增強免疫耐受和腫瘤逃避。此外，TGF-β藉由抑制或刺激細胞增殖來調節免疫細胞的命運，從而影響胸腺和外周T細胞的發育。
目前，臨床上的大部分抗體是中和所有TGF-β亞型，存在較大的安全性問題。藉由針對GARP-TGF-β 1複合物的療法可以抑制Treg釋放活性TGF-β 1，提高PD-1/PD-L1的抗腫瘤活性。目前，亟需副作用小、安全性高的、對腫瘤微環境的不良影響比廣泛阻斷所有TGF-β亞型小的抗GARP-TGF-β 1複合物的新型抗體。
本申請提供了一種分離的抗原結合蛋白，其具有下列性質中的一種或多種：1)在Octet測定中，以約1.0E-12或更低的KD值與人GARP/人TGF-β 1複合物結合；2)不與只表達人GARP的細胞或只表達人TGF-β 1的細胞結合；3)抑制Treg細胞中的SMAD2磷酸化；4)抑制表達人GARP/人TGF-β 1的HEK293T細胞釋放TGF-β 1；5)阻止Treg細胞對人外周血單個核細胞(PBMC)釋放白細胞介素-2(IL-2)和干擾素-γ(IFN-γ)的抑制；以及6)在人PBMC移植小鼠的GvHD模型中，阻斷Treg細胞對該人PBMC引起
的GvHD的抑制作用。一方面，本申請提供了一種分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR2，該HCDR2包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR1，該HCDR1包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含重鏈可變區VH，該VH包含該HCDR1、該HCDR2和該HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該HCDR2包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；以及該HCDR1包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR1，該H-FR1的C末端與該HCDR1的N末端直接或間接地相連，且該H-FR1包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的H-FR1包含SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR2，該H-FR2位於該HCDR1與該HCDR2之間，且該H-FR2包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的H-FR2包含SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：23中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR3，該H-FR3位於該HCDR2與該HCDR3之間，且該H-FR3包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的H-FR3包含SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：24中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR4，該H-FR4的N末端與該HCDR3的C末端直接或間接地相連，且該H-FR4包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的H-FR4包含SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：25中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，該H-FR1包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列；該H-FR2包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列；該H-FR3包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列；以及該H-FR4包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，該H-FR1包含SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列；該H-FR2包含SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：23中任一項所示的胺基酸序列；該H-FR3包含SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：24中任一項所示的胺基酸序列；以及該H-FR4包含SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：25中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含選自下述任意一組的胺基酸序列：
a)H-FR1：SEQ ID NO：5，H-FR2：SEQ ID NO：6，H-FR3：SEQ ID NO：7和H-FR4：SEQ ID NO：8；
b)H-FR1：SEQ ID NO：22，H-FR2：SEQ ID NO：23，H-FR3：SEQ ID NO：24和H-FR4：SEQ ID NO：25。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含重鏈可變區VH，該VH包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的VH包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：21中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含輕鏈可變區VL，該VL包含該LCDR1、該LCDR2和該LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列；該LCDR2包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列；以及該LCDR1包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含輕鏈可變區VL，該VL包含該LCDR1、該LCDR2和該LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列；該LCDR2包含SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：28中任一項所示的胺基酸序列；以及該LCDR1包含SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：27中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該LCDR1、LCDR2、LCDR3包含選自下述任意一組的胺基酸序列：
a)LCDR1：SEQ ID NO：10，LCDR2：SEQ ID NO：11和LCDR3：SEQ ID NO：12；
b)LCDR1：SEQ ID NO：27，LCDR2：SEQ ID NO：28和LCDR3：SEQ ID NO：12。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR1，該L-FR1的C末端與該LCDR1的N末端直接或間接地相連，且該L-FR1包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的L-FR1包含SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：29中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR2，該L-FR2位於該LCDR1與該LCDR2之間，且該L-FR2包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR3，該L-FR3位於該LCDR2與該LCDR3之間，且該L-FR3包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的L-FR3包含SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：30中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR4，該L-FR4的N末端與該LCDR3的C末端直接或間接地相連，且該L-FR4包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的L-FR4包含SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：31中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4，該L-FR1包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列；該L-FR2包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列；以及該L-FR4包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4，該L-FR1包含SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：29中任一項所示的胺基酸序列；該L-FR2包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3包含SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：30中任一項所示的胺基酸序列；以及該L-FR4包含SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：31中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4包含選自下述任意一組的胺基酸序列：
a)L-FR1：SEQ ID NO：13，L-FR2：SEQ ID NO：14，L-FR3：SEQ ID NO：15和L-FR4：SEQ ID NO：16；
b)L-FR1：SEQ ID NO：29，L-FR2：SEQ ID NO：14，L-FR3：SEQ ID NO：30和L-FR4：SEQ ID NO：31。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含輕鏈可變區VL，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的VL包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：26中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含重鏈恆定區，且該重鏈恆定區包括源自IgG的恆定區或源自IgY的恆定區。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的重鏈恆定區包括源自人IgG4的恆定區。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的重鏈恆定區包含SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含輕鏈恆定區，且該抗體輕鏈恆定區包括源自Ig κ的恆定區或源自Ig λ的恆定區。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的輕鏈恆定區包括源自人Ig κ的恆定區。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的輕鏈恆定區包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含重鏈HC，該HC包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：32中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含輕鏈LC，該LC包含SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：33中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HC和LC，該HC包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：32中任一項所示的胺基酸序列，且該LC包含SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：33中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗原結合蛋白的HC和LC包含選自下述任意一組的胺基酸序列：
a)HC：SEQ ID NO：19和LC：SEQ ID NO：20；
b)HC：SEQ ID NO：32和LC：SEQ ID NO：33。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包括抗體或其抗原結合片段。
在某些實施方式中，該抗原結合片段包括Fab、Fab’、F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2、scFv、di-scFv、VHH和/或dAb。
在某些實施方式中，該抗體選自下組：單株抗體、單鏈抗體、鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體和全人源抗體。
另一方面，本申請提供了一種多肽，其包含該分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本申請提供了一種免疫綴合物，其包含該分離的抗原結合蛋白或該多肽。
在某些實施方式中，該免疫綴合物還包括藥學上可接受的治療劑。
在某些實施方式中，該治療劑選自下組：細胞毒性劑和細胞抑制劑。
另一方面，本申請提供了一種分離的核酸分子，其編碼該分離的抗原結合蛋白，或者該多肽。
另一方面，本申請提供了一種載體，其包含該分離的核酸分子。
另一方面，本申請提供了一種細胞，其包含該分離的抗原結合蛋白，該多肽，該免疫綴合物，該分離的核酸分子和/或該載體。
另一方面，本申請提供了一種製備該分離的抗原結合蛋白或該多肽的方法，該方法包括在使得該分離的抗原結合蛋白或該多肽表達的條件下，培養該細胞。
另一方面，本申請提供了一種醫藥組成物，其包含該分離的抗原結合蛋白，該多肽，該免疫綴合物，該分離的核酸分子，該載體，該細胞，和/或藥學上可接受的佐劑和/或賦形劑。
另一方面，本申請提供了一種藥物組合，其包含該分離的抗原結合蛋白和免疫檢查點抑制劑。
在某些實施方式中，該免疫檢查點抑制劑包括抑制PD-1/PD-L1相互作用的物質。
在某些實施方式中，該免疫檢查點抑制劑選自下組：PD-1/PD-L1阻斷劑、PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑、PD-1抑制劑和PD-L1抑制劑。
在某些實施方式中，該免疫檢查點抑制劑包括抗PD-L1抗體。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含HCDR2，該HCDR2包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含HCDR1，該HCDR1包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含重鏈可變區VH，該VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列；該HCDR2包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列；以及該HCDR1包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含重鏈可變區VH，該VH包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含輕鏈可變區VL，該VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列；該LCDR2包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列；以及該LCDR1包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包含輕鏈可變區VL，該VL包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該抗PD-L1抗體包括阿替利珠單抗。
在某些實施方式中，該藥物組合可以是醫藥組成物。
另一方面，本申請提供了一種試劑盒，其包括該藥物組合。
另一方面，本申請提供了該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該免疫綴合物、該分離的核酸分子、該載體，該細胞和/或該醫藥組成物，其用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括與GARP的蛋白表達相關的腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
另一方面，本申請提供了該藥物組合和/或該試劑盒，其用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
另一方面，本申請提供了該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該免疫綴合物、該分離的核酸分子、該載體，該細胞和/或該醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括黑色素瘤。
另一方面，本申請提供了該藥物組合和/或該試劑盒在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
另一方面，本申請提供了一種預防和/或治療疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的該分離的抗原結合蛋白、該分離的核酸分子、該載體，該細胞、該醫藥組成物，其中該疾病或病症包括腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
另一方面，本申請提供了一種預防和/或治療疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的該藥物組合，其中該疾病或病症包括腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
所屬技術領域具有通常知識者能夠從下文的詳細描述中容易地洞察到本申請的其它方面和優勢。下文的詳細描述中僅顯示和描述了本申請的示例性實施方式。如所屬技術領域具有通常知識者將認識到的，本申請的內容使得所屬技術領域具有通常知識者能夠對所公開的具體實施方式進行改動而不脫離本申請所涉及發明的精神和範圍。相應地，本申請的附圖和說明書中的描述僅僅是示例性的，而非為限制性的。
本申請所涉及的發明的具體特徵如所附申請專利範圍所顯示。藉由參考下文中詳細描述的示例性實施方式和圖式能夠更好地理解本申請所涉及發明的特點和優勢。對附圖簡要說明如下：
圖1A至圖1D顯示的是本申請所述抗原結合蛋白的抗原結合活性。
圖2顯示的是本申請示例性的鼠源抗體8H2D7B3的阻斷實驗結果。
圖3A及圖3B顯示的是本申請示例性的鼠源抗體8H2D7B3對Treg細胞中SMAD2磷酸化的影響。
圖4顯示的是本申請示例性的JYB1907hz18抗體對Treg細胞中SMAD2磷酸化的影響。
圖5顯示的是本申請示例性的JYB1907hz18抗體對HEK293T細胞釋放TGF-β 1的影響。
圖6A及圖6B顯示的是本申請示例性的JYB1907hz18抗體對PBMC釋放IL-2和IFN-γ的影響。
圖7A顯示的是本申請示例性的JYB1907hz18抗體在人源化FcRn小鼠模型中藥物代謝動力學(PK)研究曲線。
圖7B顯示的是本申請所述MHG8抗體在人源化FcRn小鼠模型中藥物代謝動力學(PK)研究曲線。
圖8A及圖8B顯示的是本申請示例性的JYB1907hz18抗體在小鼠GvHD模型中的研究結果。
圖9顯示的是本申請示例性的JYB1907hz18抗體在小鼠黑色素瘤模型中的藥效檢測結果。
圖10顯示的是本申請示例性的JYB1907hz18抗體在小鼠乳腺癌模型中的藥效檢測結果。
圖11顯示的是本申請示例性的JYB1907hz18抗體在小鼠肺鱗癌模型中的藥效檢測結果。
以下由特定的具體實施例說明本申請發明的實施方式，熟悉此技術的人士可由本說明書所公開的內容容易地瞭解本申請發明的其他優點及效果。
術語定義
在本申請中，術語“分離的”通常指從天然狀態下經人工手段獲得的。如果自然界中出現某一種“分離”的物質或成分，那麼可能是其所處
的天然環境發生了改變，或從天然環境下分離出該物質，或二者情況均有發生。例如，某一活體動物體內天然存在某種未被分離的多聚核苷酸或多肽，而從這種天然狀態下分離出來的高純度的相同的多聚核苷酸或多肽即稱之為分離的。術語“分離的”不排除混有人工或合成的物質，也不排除存在不影響物質活性的其它不純物質。
在本申請中，術語“抗原結合蛋白”通常是指一種能夠特異性識別和/或中和特定抗原的多肽分子。在本申請中，術語“抗原結合蛋白”可包括“抗體”或“抗原結合片段”。例如，該抗體可包含藉由二硫鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈組成的免疫球蛋白，並且可包括任何包含其抗原結合部分的分子。術語“抗體”可包括單株抗體、抗體片段或抗體衍生物，包括但不限於鼠源抗體、人抗體(全人源抗體)、人源化抗體、嵌合抗體、單鏈抗體(例如，scFv)，以及與抗原結合的抗體片段(例如，Fab、Fab’和(Fab)2片段)。術語“抗體”還可包括抗體的所有重組體形式，例如在原核細胞中表達的抗體、未糖基化的抗體以及本文所述的任何與抗原結合的抗體片段及其衍生物。每條重鏈可由重鏈可變區(VH)和重鏈恆定區構成。每條輕鏈可由輕鏈可變區(VL)和輕鏈恆定區構成。VH和VL區可進一步被區分為稱為互補決定區(CDR)的高變區，它們散佈在稱為構架區(FR)的更保守的區域中。每個VH和VL可由三個CDR和四個FR區構成，它們從胺基端至羧基端可按以下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原(例如，人GARP)相互作用的結合結構域。抗體的恆定區可介導該免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合，該宿主組織或因子包括免疫系統的多種細胞(例如，效應細胞)和經典補體系統的第一成分
(Clq)。該CDRs的確切邊界已根據不同系統不同地限定。由Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1987)和(1991))描述的系統，不僅提供了可應用於抗原結合片段的任何可變區的明確殘基編號系統，還提供了限定CDRs的精確殘基邊界。這些CDRs可以被稱為Kabat CDRs。Chothia和同事(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)以及Chothia等人，Nature 342：877-883(1989))發現儘管在胺基酸序列層級上具有大的多樣性，但是Kabat CDRs內的某些亞部分採取幾乎相同的肽主鏈構象。這些亞部分命名為L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分別指輕鏈和重鏈區域。這些區域可以被稱為Chothia CDRs，該Chothia CDRs具有與Kabat CDRs重疊的邊界。與Kabat CDRs重疊的限定CDRs的其他邊界已由Padlan(FASEB J.9：133-139(1995))和MacCallum(J Mol Biol 262(5)：732-45(1996))描述。另外，其他的CDR邊界定義可能不嚴格地遵循上述系統之一，但仍將與Kabat CDRs重疊，儘管按照特定殘基或殘基組或甚至整個CDRs並不顯著影響抗原結合的預測或實驗發現，它們可以縮短或加長。在本申請中，使用的是Chothia編號系統。
在本申請中，術語“抗原結合片段”通常是指抗體中發揮特異性結合抗原功能的一個或多個片段。抗體的抗原結合功能可藉由抗體的全長片段來實現。抗體的抗原結合功能也可藉由以下來實現：包括Fv、ScFv、dsFv、Fab、Fab’或F(ab’)2的片段的重鏈，或者，包括Fv、scFv、dsFv、Fab、Fab’或F(ab’)2的片段的輕鏈。(1)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH結構域組成的一價片段；(2)F(ab’)2片段，包含藉由鉸鏈區處的二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(3)由VH和CH結構域組成的Fd片段；(4)由抗體
單臂的VL和VH結構域組成的Fv片段；(5)由VH結構域組成的dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341：544-546)；(6)分離的互補決定區(CDR)和(7)可視需要地藉由接頭連接的兩個或以上分離的CDR的組合。例如，還可包括由VL和VH配對形成的一價單鏈分子Fv(scFv)(參見Bird等(1988)Science 242：423-426；以及Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85：5879-5883)。例如，還可包括缺失抗體輕鏈而只有重鏈可變區的一類抗體VHH(例如，可參見康曉圳等，生物工程學報，2018,34(12)：1974-1984)。該“抗原結合部分”還可包括免疫球蛋白融合蛋白，該融合蛋白包含選自以下的結合結構域：(1)與免疫球蛋白鉸鏈區多肽融合的結合結構域多肽；(2)與鉸鏈區融合的免疫球蛋白重鏈CH2恆定區；和(3)與CH2恆定區融合的免疫球蛋白重鏈CH3恆定區。
在本申請中，術語“單株抗體”通常是指一群基本同源的抗體，即包含該群的各個抗體除了可能的以微量存在的天然發生的突變之外是相同的。單株抗體是高度特異性的，直接針對單個抗原性位點。例如，該單株抗體可以藉由融合瘤技術製備或者藉由使用重組DNA方法在細菌、真核動物或植物細胞中產生單株抗體也可以得自噬菌體抗體文庫，使用例如Clackson etal.,Nature,352：624-628(1991)和Marks et al.,Mol.Biol.，222：581-597(1991)所述的技術進行。
在本申請中，術語“嵌合抗體”通常是指這樣的抗體，其中每個重鏈或輕鏈胺基酸序列的一部分與來自特定物種的抗體中相應胺基酸序列同源，或者屬於特定的類別，而該鏈的其餘區段則與另一物種中的相應序列同源。例如，輕鏈和重鏈的可變區均來自一個動物物種(如小鼠、大鼠等)的抗
體的可變區，而恆定部分則與來自另一物種(如人)的抗體序列同源。例如，為獲得嵌合抗體，可利用非人源的B細胞或融合瘤細胞產生可變區，而與其組合的恆定區則來自人。該可變區具有易於製備的優點，並且其特異性不受與其組合的恆定區的來源的影響。同時，由於嵌合抗體的恆定區可來源於人類，因此嵌合在注射時抗體引發免疫應答的可能性會低於使用恆定區為非人來源的抗體。
在本申請中，術語“人源化抗體”通常是指一種嵌合抗體，其含有較少的來自非人免疫球蛋白的序列，從而降低異種抗體引入到人類中時的免疫原性，同時保持抗體的完全抗原結合親和力和特異性。例如，可以使用CDR移植(Jones et al.,Nature 321：522(1986))及其變體；包括“重塑”(reshaping)，(Verhoeyen,et al.,1988 Science 239：1534-1536；Riechmann,et al.,1988 Nature 332：323-337；Tempest,et al.,Bio/Technol 1991 9：266-271)，“高度加成”(hyperchimerization)，(Queen,et al.,1989 Proc Natl Acad Sci USA 86：10029-10033；Co,et al.,1991 Proc Natl Acad Sci USA 88：2869-2873；Co,et al.,1992 J Immunol 148：1149-1154)和“貼面”(veneering)，(Mark,et al.,“Derivation of therapeutically active humanized and veneered anti-CD18 antibodies.”In：Metcalf B W,Dalton B J,eds.Cellular adhesion：molecular definition to therapeutic potential.New York：Plenum Press,1994：291-312)、表面重建(美國專利US5639641)等技術手段，對非人源的結合域進行人源化。如果其他區域，例如鉸鏈區和恆定區結構域也源自非人來源，則這些區域也可以被人源化。
在本申請中，術語“鼠源抗體”通常是指可變區框架和CDR區得自小鼠種系免疫球蛋白序列的抗體。此外，如果抗體包含恆定區，其也得自小
鼠種系免疫球蛋白序列。本申請的鼠源抗體可以包含不由小鼠種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基，例如藉由體外隨機突變或點突變或藉由體內體細胞突變而導入的突變。然而，術語“鼠源抗體”不包括在小鼠框架序列中***得自其他哺乳動物物種的CDR序列的抗體。
在本申請中，術語“GARP蛋白”或“GARP抗原可以互換使用，並且包括GARP的任何變體和同源物，其由細胞天然表達或在用GARP基因轉染的細胞上表達。在本申請中，GARP可以為人GARP，其在UniProt/Swiss-Prot中的登錄號為Q14392。在本申請中，GARP可在免疫細胞表面表達。例如，可在調節性T細胞(Treg)表面表達。
在本申請中，術語“TGF-β 1”與“TGF β 1”互換使用，通常與細胞生長調節和分化有關。在本申請中，該TGF-β 1是TGF-β的亞型。在本申請中，該“TGF-β 1”可包括TGF-β 1的任何變體和同源物，其由細胞天然表達或在用TGF-β 1基因轉染的細胞上表達。在本申請中，該“TGF-β 1”可以為人TGF-β 1，其在UniProt/Swiss-Prot中的登錄號為P01137。在本申請中，該“TGF-β 1”可被GARP激活，並與CD8+T細胞上的TGF β受體結合抑制CD8+T細胞對腫瘤細胞的殺傷功能。
除了本文提到的特定蛋白質和核苷酸之外，本申請還可包括其功能性變體、衍生物、類似物、同源物及其片段。
術語“功能性變體”指與天然存在序列具有基本上同一的胺基酸序列或由基本上同一的核苷酸序列編碼並能夠具有天然存在序列的一種或多種活性的多肽。在本申請的上下文中，任何給定序列的變體是指其中殘基的特定序列(無論是胺基酸或核苷酸殘基)已經經過修飾而使得該多肽或多核苷酸
基本上保留至少一種內源功能的序列。可以藉由天然存在的蛋白質和/或多核苷酸中存在的至少一個胺基酸殘基和/或核苷酸殘基的添加、缺失、取代、修飾、替換和/或變異來獲得變體序列，只要保持原來的功能活性即可。
在本申請中，術語“衍生物”通常是指本申請的多肽或多核苷酸而言包括自/對序列的一個(或多個)胺基酸殘基的任何取代、變異、修飾、替換、缺失和/或添加，只要所得的多肽或多核苷酸基本上保留其至少一種內源功能。
在本申請中，術語“類似物”通常對多肽或多核苷酸而言，包括多肽或多核苷酸的任何模擬物，即擁有該模擬物模擬的多肽或多核苷酸的至少一種內源功能的化學化合物。
通常，可以進行胺基酸取代，例如至少1個(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或20個以上)胺基酸取代，只要經修飾的序列基本上保持需要的活性或能力。胺基酸取代可包括使用非天然存在的類似物。
在本申請中，術語“同源物”通常是指與天然存在序列具有一定同源性的胺基酸序列或核苷酸序列。術語“同源性”可以等同於序列“同一性”。同源序列可以包括可以與主題序列是至少80%、85%、90%、99.1%、99.2%、99.3%、99.4%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%或99.9%相同的胺基酸序列。通常，同源物將包含與主題胺基酸序列相同的活性位點等。同源性可以根據相似性(即具有相似化學性質/功能的胺基酸殘基)來考慮，也可以在序列同一性方面表達同源性。在本申請中，提及的胺基酸序列或核苷酸序列的SEQ ID NO中的任一項具有百分比同一性的序列是指在所提及的SEQ ID NO的整個長度上具有該百分比同一性的序列。為了確定序列同一性，可進行序列比對，其可
藉由所屬技術領域具有通常知識者瞭解的各種方式進行，例如，使用BLAST、BLAST-2、ALIGN、NEEDLE或Megalign(DNASTAR)軟體等。所屬技術領域具有通常知識者能夠確定用於比對的適當參數，包括在所比較的全長序列中實現最優比對所需要的任何算法。
用於本申請的蛋白質或多肽也可以具有胺基酸殘基的缺失、***或取代，該胺基酸殘基產生沉默的變化並導致功能上等同的蛋白質。可以根據殘基的極性、電荷、溶解性、疏水性、親水性和/或兩性性質的相似性進行有意的胺基酸取代，只要保留內源性功能即可。例如，帶負電荷的胺基酸包括天冬胺酸和谷胺酸；帶正電荷的胺基酸包括賴胺酸和精胺酸；並且含具有相似親水性值的不帶電極性頭基的胺基酸包括天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸和酪胺酸。
在本申請中，術語“腫瘤”通常是指在各種致瘤因子作用下，局部組織細胞增生所形成的贅生物。例如，該腫瘤可包括實體瘤。例如，該腫瘤可包括與GARP的蛋白表達相關的腫瘤。術語“與GARP的蛋白表達相關的腫瘤”通常是指GARP表達導致疾病進展或逃避免疫監視而形成的腫瘤。該與GARP的蛋白表達相關的腫瘤可以是GARP陽性的腫瘤。在GARP陽性的腫瘤中，與正常細胞相比，腫瘤細胞表面的GAPR的蛋白表達量高約1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、50%、60%、70%、80%或更高。例如，該腫瘤可以是轉移性結腸癌。例如，該腫瘤可以是肝細胞癌。例如，該腫瘤可以是晚期腎細胞癌。例如，該腫瘤可以是非小細胞肺癌。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
在本申請中，術語“黑色素瘤”通常是指黑色素細胞來源的一種高度惡性的腫瘤。在本申請中，該黑色素瘤可發生於皮膚，也可見於黏膜和內臟。
在本申請中，術語“免疫綴合物”通常是指該其他試劑(例如，化療劑、放射性元素、細胞生長抑制劑和細胞毒性劑)與該分離的抗原結合蛋白綴合(例如，藉由連接分子共價相連)而形成的綴合物，該綴合物可以藉由該分離的抗原結合蛋白與靶細胞上的抗原的特異性結合，將該其他試劑遞送至靶細胞(例如，腫瘤細胞)。然後該免疫綴合物經該內化，最終進入靶細胞內部(例如，進入溶酶體等泡囊體)，此時該免疫綴合物中的連接分子可以裂解，釋放該其他試劑從而發揮其細胞毒性效應。此外，該抗原也可以由該靶細胞分泌，並位於該靶細胞外的間隙。
在本申請中，術語“藥學上可接受的治療劑”通常是指可以抑制腫瘤和/或腫瘤細胞增殖的試劑。在本申請中，該治療劑可以是細胞毒性劑，也可以是細胞抑制劑。例如，該治療劑可以選自以下組：有絲***抑制劑、激酶抑制劑、烷基化試劑、抗代謝藥、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酶、拓撲異構酶抑制劑、組蛋白脫乙醯基酶抑制劑、抗存活劑、生物學應答調節劑。
在本申請中，術語“受試者”通常指人類或非人類動物，包括但不限於貓、狗、馬、豬、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠或猴。
在本申請中，術語“核酸分子”通常是指從其天然環境中分離的或人工合成的任何長度的分離形式的核苷酸、脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其類似物。
在本申請中，術語“載體”通常是指能夠在合適的宿主中自我複製的核酸分子。該載體可將***的核酸分子轉移到細胞中和/或細胞之間。該載體可包括主要用於將DNA或RNA***細胞中的載體、主要用於複製DNA或RNA的載體，以及主要用於DNA或RNA的轉錄和/或翻譯的表達的載體。該載體可以是當引入合適的細胞時能夠轉錄並翻譯成多肽的多核苷酸。通常，藉由培養包含該載體的合適的細胞，該載體可以產生期望的表達產物。在本申請中，該載體可包含慢病毒載體。
在本申請中，術語“細胞”通常是指可以或已經含有包括本申請所述的核酸分子的質粒或載體，或者能夠表達本申請所述的多肽或本申請所述的抗原結合蛋白的個體細胞，細胞系或細胞培養物。該細胞可以包括單個細胞的子代。由於天然的，意外的或故意的突變，子代細胞與原始親本細胞在形態上或在基因組上可能不一定完全相同，但能夠表達本申請所述的多肽或抗原結合蛋白即可。該細胞可以藉由使用本申請所述的載體體外轉染細胞而得到。該細胞可以是原核細胞(例如大腸桿菌)，也可以是真核細胞(例如酵母細胞，例如COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、HeLa細胞、HEK293細胞、COS-1細胞、NS0細胞或骨髓瘤細胞)。在一些實施方式中，該細胞可以是免疫細胞。例如，該免疫細胞可以選自下組：T細胞、B細胞、天然殺傷細胞(NK細胞)、巨噬細胞、NKT細胞、單核細胞、樹突狀細胞、粒細胞、淋巴細胞、白細胞和/或外周血單個核細胞。例如，該免疫細胞可以是T細胞。
在本申請中，術語“治療”通常是指：(i)預防可能易患疾病、病症和/或病狀、但尚未診斷出患病的患者出現該疾病、病症或病狀；(ii)抑制該疾病、病症或病狀，亦即遏制其發展；以及(iii)緩解該疾病、病
症或病狀，亦即使得該疾病、病症和/或病狀和/或與該疾病、病症和/或病狀相關聯的症狀消退。
在本申請中，術語“多肽”、“肽”、“蛋白”和“蛋白質”可互換地使用，通常是指具有任何長度的胺基酸的聚合物。該聚合物可以是直鏈或支鏈的，它可以包含修飾的胺基酸，並且可以被非胺基酸中斷。這些術語還涵蓋已經被修飾的胺基酸聚合物。這些修飾可以包含：二硫鍵形成、糖基化、脂化(lipidation)、乙醯化、磷酸化、或任何其他操縱(如與標記組分結合)。術語“胺基酸”包括天然的和/或非天然的或者合成的胺基酸，包括甘胺酸以及D和L旋光異構體、以及胺基酸類似物和肽模擬物。
在本申請中，術語“多核苷酸”、“核苷酸”、“核苷酸序列”、“核酸”和“寡核苷酸”可互換地使用，通常是指具有任何長度的核苷酸的聚合形式，如脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸、或其類似物。多核苷酸可具有任何三維結構，並且可以執行已知或未知的任何功能。以下是多核苷酸的非限制性實例：基因或基因片段的編碼區或非編碼區、根據連接分析定義的多個座位(一個座位)、外顯子、內含子、信使RNA(mRNA)、轉運RNA、核糖體RNA、短干擾RNA(siRNA)、短髮夾RNA(shRNA)、micro-RNA(miRNA)、核酶、cDNA、重組多核苷酸、分支多核苷酸、質粒、載體、任何序列的分離的DNA、任何序列的分離的RNA、核酸探針、和引子。多核苷酸可以包含一個或多個經修飾的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸類似物。如果存在，可以在聚合物組裝之前或之後進行核苷酸結構的修飾。核苷酸的序列可以被非核苷酸組分中斷。多核苷酸可以在聚合後，如藉由與標記的組分綴合來進一步修飾。
在本申請中，術語“KD”(同樣地，“K D ”或“KD”)通常指“親和常數”或“平衡解離常數”，並指在滴定測量中在平衡時、或者藉由將解離速率常數(kd)除以結合速率常數(ka)所獲得的值。使用結合速率常數(ka)、解離速率常數(kd)和平衡解離常數(KD)表示結合蛋白(例如本申請所述的分離的抗原結合蛋白)對抗原(例如，GARP蛋白)的結合親和力。確定結合和解離速率常數的方法為本領域熟知。使用基於熒光的技術提供了高靈敏度以及在生理緩衝液中在平衡時檢查樣品的能力。例如，可以藉由Octet測定該K D 值，也可以使用其他實驗途徑和儀器例如BIAcore(生物分子相互作用分析)測定(例如，可以從BIAcoreInternationalAB，aGEHealthcarecompany，Uppsala，瑞典獲得的儀器)。另外，也可以使用可以從SapidyneInstruments(Boise，Idaho)獲得的KinExA(動態排阻測定(KineticExclusionAssay))測定該K D 值，或者使用表面電漿共振儀(SPR)測定該K D 值。
在本申請中，術語“和/或”應理解為意指可選項中的任一項或可選項的兩項。
在本申請中，術語“包含”通常是指包括明確指定的特徵，但不排除其他要素。在某些情形中，“包含”也涵蓋僅包括指定的組分的情況。
在本申請中，術語“約”通常是指在指定數值以上或以下0.5%-10%的範圍內變動，例如在指定數值以上或以下0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、或10%的範圍內變動。
在本申請中，術語“包括”通常是指包含、總括、含有或包涵的含義。在某些情況下，也表示“為”、“由……組成”的含義。
發明詳述
本申請所述分離的抗原結合蛋白
一方面，本申請提供一種分離的抗原結合蛋白，其可以以約1.0E-12M或更低(例如，該K D 不高於約1.0E-12M、不高於約0.9E-12M、不高於約0.8E-12M、不高於約0.7E-12M、不高於約0.6E-12M、不高於0.5E-12M、不高於0.4E-12M、不高於0.3E-12M、不高於0.2E-12M或不高於0.1E-12M或以下)的K D 值與人GARP/人TGF-β 1複合物結合。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可與參比抗體競爭結合該人GARP/人TGF-β 1複合物，該參比抗體可包含重鏈可變區VH，該VH可包含HCDR1、HCDR2和HCDR3中的至少一個、兩個或三個。
在本申請中，該參比抗體的HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述參比抗體的HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；且該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同HCDR1-3的抗體。
例如，本申請所述參比抗體的HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；且該HCDR3
可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同HCDR1-3的抗體。
例如，本申請所述參比抗體的HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；且該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同HCDR1-3的抗體。
例如，該參比抗體的VH可包含框架區H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4。
在本申請中，該參比抗體的H-FR1可包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列。
QVQLX1QSGAEX2X3X4PGX5SVKX6SCKAS(SEQ ID NO：46)，其中，X1可以是Q或V，X2可以是L或V，X3可以是K或V，X4可以是K或R，X5可以是A或S，X6可以是L或V。
在本申請中，該參比抗體的H-FR1可包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的H-FR2可包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列。
WMYWVX1QX2PX3QGLEWIGSI(SEQ ID NO：47)，其中，X1可以是K或R，X2可以是A或R，X3可以是G或I。
在本申請中，該參比抗體的H-FR2可包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的H-FR3可包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列。
THYNQKFX1X2RX3TVTVDKSX4RIVYMX5LSSLX6SEDX7AVYFCAR(SEQ ID NO：48)，其中，X1可以是Q或K，X2可以是D或G，X3可以是A或V，X4可以是S或T，X5可以是E或Q，X6可以是R或T，X7可以是S或T。
在本申請中，該參比抗體的H-FR3可包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的H-FR4可包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列。
WGX1GTX2VTVSS(SEQ ID NO：49)，其中，X1可以是Q或T，X2可以是M或T。
在本申請中，該參比抗體的H-FR4可包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的H-FR1可包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；且該H-FR4可包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的H-FR1可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；且該H-FR4可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同H-FR1-4的抗體。
在本申請中，該參比抗體的H-FR1可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；且該H-FR4可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同H-FR1-4的抗體。
在本申請中，該參比抗體的H-FR1可包含SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；且該H-FR4可包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同H-FR1-4的抗體。
在本申請中，該參比抗體可包含重鏈可變區，該重鏈可變區可包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
QVQLX1QSGAEX2X3X4PGX5SVKX6SCKASGYTLSNYWMYWVX7QX8PX9QGLEWIGSIAPSDSETHYNQKFX10X11RX12TVTVDKSX13RIVYMX14LSSLX15SEDX16AVYFCARGGFGYGSSHWYFDVWGX17GTX18VTVSS(SEQ ID NO：50)，其中，X1可以是Q或V，X2可以是L或V，X3可以是K或V，X4可以是K或R，X5可以是A或S，X6可以是L或V，X7可以是K或R，X8可以是A或R，X9可以是G或I，X10可以是Q或K，X11可以是D或G，X12可以是A或V，X13可以是S或T，X14可以是E或Q，X15可以是R或T，X16可以是S或T，X17可以是Q或T，X18可以是M或T。
在本申請中，該參比抗體的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：21中任一項所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體可包含重鏈恆定區，該重鏈恆定區可包括源自IgG的恆定區或源自IgY的恆定區。
例如，該參比抗體的重鏈恆定區可包含SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體可包括輕鏈可變區VL，該VL可包含LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本申請中，該參比抗體的LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的LCDR2可包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列。
GATSLEX1(SEQ ID NO：45)，其中，X1可以是S或T。
在本申請中，該參比抗體的LCDR2可包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的LCDR1可包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
X1ASDHINKWLA(SEQ ID NO：44)，其中，X1可以是K或R。
在本申請中，該參比抗體的LCDR1可包含SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述參比抗體的LCDR1可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；且該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同LCDR1-3的抗體。
例如，本申請所述參比抗體的LCDR1可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；且該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同LCDR1-3的抗體。
例如，本申請所述參比抗體的LCDR1可包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列；且該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同LCDR1-3的抗體。
例如，該參比抗體的VL可包含框架區L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4。
在本申請中，該參比抗體的L-FR1可包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列。
DIQMTQSX1X2X3LSX4SX5GX6RVTITC(SEQ ID NO：52)，其中，X1可以是P或S，X2可以是A或S，X3可以是T或Y，X4可以是A或V，X5可以是L或V，X6可以是D或G。
在本申請中，該參比抗體的L-FR1可包含SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的L-FR3可包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列。
GX1PSRFSGSGSGKDYTLX2IX3X4LQX5X6DX7ATYYC(SEQ ID NO：53)，其中，X1可以是I或V，X2可以是T或S，X3可以是T或S，X4可以是G或S，X5可以是P或T，X6可以是D或E，X7可以是F或V。
在本申請中，該參比抗體的L-FR3可包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的L-FR4可包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列。
FGX1GTKLEIK(SEQ ID NO：54)，其中，X1可以是G或Q。
在本申請中，該參比抗體的L-FR4可包含SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的L-FR1可包含SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列；且該L-FR4可包含SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體的L-FR1可包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；且該L-FR4可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同L-FR1-4的抗體。
在本申請中，該參比抗體的L-FR1可包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；且該L-FR4可包含SEQ ID NO：16所示的
胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同H-FR1-4的抗體。
在本申請中，該參比抗體的L-FR1可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列；且該L-FR4可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同L-FR1-4的抗體。
在本申請中，該參比抗體可包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列。
DIQMTQSX1X2X3LSX4SX5GX6RVTITCX7ASDHINKWLAWYQQKPGNAPRLLISGATSLEX8GX9PSRFSGSGSGKDYTLX10IX11X12LQX13X14DX15ATYYCQQYWTTPYTFGX16GTKLEIK(SEQ ID NO：51)，其中，X1可以是P或S，X2可以是A或S，X3可以是T或Y，X4可以是A或V，X5可以是L或V，X6可以是D或G，X7可以是K或R，X8可以是S或T，X9可以是I或V，X10可以是T或S，X11可以是T或S，X12可以是G或S，X13可以是P或T，X14可以是D或E，X15可以是F或V，X16可以是G或Q。
在本申請中，該參比抗體的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：26中任一項所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體可包含輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區包括源自Ig κ的恆定區或源自Ig λ的恆定區。
例如，該參比抗體的輕鏈恆定區包含SEQ ID NO：18中任一項所示的胺基酸序列。
在本申請中，該參比抗體可包含HCDR1-3和LCDR1-3。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同HCDR1-3和LCDR1-3的抗原結合蛋白。
在本申請中，該參比抗體可包含HCDR1-3以及LCDR1-3。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同HCDR1-3和LCDR1-3的抗原結合蛋白。
在本申請中，該參比抗體可包含HCDR1-3以及LCDR1-3。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同HCDR1-3和LCDR1-3的抗原結合蛋白。
在本申請中，該參比抗體可包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區可包含HCDR1-3以及H-FR1-4，且該輕鏈可變區可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該H-FR1可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；該H-FR4可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列；該L-FR1可包括SEQ ID NO：13的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；該L-FR4可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗原結合片段8H2D7B3或與其具有相同重鏈可變區的抗原結合蛋白。例如，該參比抗體的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同輕鏈可變區的抗原結合蛋白。
在本申請中，該參比抗體包含重鏈和輕鏈，該參比抗體的重鏈可包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同重鏈的抗原結合蛋白。例如，該參比抗體的輕鏈可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同輕鏈的抗原結合蛋白。
在本申請中，該參比抗體可包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區可包含HCDR1-3以及H-FR1-4，且該輕鏈可變區可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該H-FR1可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；該H-FR4可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列；該L-FR1可包括SEQ ID NO：13的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；該L-FR4可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗原結合片段JYB1907hz0或與其具有相同重鏈可變區的抗原結合蛋白。例如，該參比抗體的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同輕鏈可變區的抗原結合蛋白。
在本申請中，該參比抗體可包含重鏈和輕鏈，該參比抗體的重鏈可包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同重鏈的抗原結合蛋白。例如，該參比抗體的輕鏈可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同輕鏈的抗原結合蛋白。
在本申請中，該參比抗體可包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區可包含HCDR1-3以及H-FR1-4，且該輕鏈可變區可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該H-FR1可包含SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；該H-FR4可包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列；該L-FR1可包括SEQ ID NO：29的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列；該L-FR4可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗原結合片段JYB1907hz18或與其具有相同重鏈可變區的抗原結合蛋白。例如，該參比抗體的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同輕鏈可變區的抗原結合蛋白。
在本申請中，該參比抗體可包含重鏈和輕鏈。例如，該參比抗體的重鏈可包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同重鏈的抗原結合蛋白。例如，該參比抗體的輕鏈可包含SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。例如，該參比抗體可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同輕鏈的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可與人GARP/人TGF-β 1複合物結合。
本申請所述分離的抗原結合蛋白可緩解或治療治療腫瘤，其中該腫瘤可包括實體瘤。例如，可包括與GARP的表達相關的腫瘤。例如，該腫瘤可以是轉移性結腸癌。例如，該腫瘤可以是肝細胞癌。例如，該腫瘤可以是晚期腎細胞癌。例如，該腫瘤可以是非小細胞肺癌。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤、乳腺癌和/或肺鱗癌。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈可變區VH，該VH可包含HCDR1、HCDR2和HCDR3中的至少一個、至少兩個或至少三個。
在本申請中，該抗原結合蛋白的HCDR3可包含SEQ 1D NO：4所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述分離的抗原結合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；且該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同HCDR1-3的抗體。
例如，本申請所述分離的抗原結合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
且該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同HCDR1-3的抗體。
例如，本申請所述分離的抗原結合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；且該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同HCDR1-3的抗體。
例如，該抗原結合蛋白的VH可包含框架區H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列。
QVQLX1QSGAEX2X3X4PGX5SVKX6SCKAS(SEQ ID NO：46)，其中，X1可以是Q或V，X2可以是L或V，X3可以是K或V，X4可以是K或R，X5可以是A或S，X6可以是L或V。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列。
WMYWVX1QX2PX3QGLEWIGSI(SEQ ID NO：47)，其中，X1可以是K或R，X2可以是A或R，X3可以是G或I。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列。
THYNQKFX1X2RX3TVTVDKSX4RIVYMX5LSSLX6SEDX7AVYFCAR(SEQ ID NO：48)，其中，X1可以是Q或K，X2可以是D或G，X3可以是A或V，X4可以是S或T，X5可以是E或Q，X6可以是R或T，X7可以是S或T。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列。
WGX1GTX2VTVSS(SEQ ID NO：49)，其中，X1可以是Q或T，X2可以是M或T。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；且該抗
原結合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同H-FR1-4的抗體。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同H-FR1-4的抗體。
在本申請中，該抗原結合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同H-FR1-4的抗體。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈可變區，該重鏈可變區可包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
QVQLX1QSGAEX2X3X4PGX5SVKX6SCKASGYTLSNYWMYWVX7QX8PX9QGLEWIGSIAPSDSETHYNQKFX10X11RX12TVTVDKSX13RIVYMX14LSSLX15SEDX16AVYFCARGGFGYGSSHWYFDVWGX17GTX18VTVSS(SEQ ID NO：50)，其中，X1可以是Q或V，X2可以是L或V，X3可以是K或V，X4可以是K或R，X5可以是A或S，X6可以是L或V，X7可以是K或R，X8可以是A或R，X9可以是G或I，X10可以是Q或K，X11可以是D或G，X12可以是A或V，X13可以是S或T，X14可以是E或Q，X15可以是R或T，X16可以是S或T，X17可以是Q或T，X18可以是M或T。
在本申請中，該抗原結合蛋白的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈恆定區，該重鏈恆定區可包括源自IgG的恆定區或源自IgY的恆定區。例如，該重鏈恆定區可包括源自人IgG1和或IgG4的恆定區。
例如，該抗原結合蛋白的輕鏈恆定區可包含SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包括輕鏈可變區VL，該VL可包含LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本申請中，該抗原結合蛋白的LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的LCDR2可包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列。
GATSLEX1(SEQ ID NO：45)，其中，X1可以是S或T。
在本申請中，該抗原結合蛋白的LCDR2可包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的LCDR1可包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
X1ASDHINKWLA(SEQ ID NO：44)，其中，X1可以是K或R。
在本申請中，該抗原結合蛋白的LCDR1可包含SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列。
例如，該抗原結合蛋白的LCDR1可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同LCDR1-3的抗體。
例如，該抗原結合蛋白的LCDR1可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同LCDR1-3的抗體。
例如，該抗原結合蛋白的LCDR1可包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的LCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同LCDR1-3的抗體。
例如，該抗原結合蛋白的VL可包含框架區L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列。
DIQMTQSX1X2X3LSX4SX5GX6RVTITC(SEQ ID NO：52)，其中，X1可以是P或S，X2可以是A或S，X3可以是T或Y，X4可以是A或V，X5可以是L或V，X6可以是D或G。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列。
GX1PSRFSGSGSGKDYTLX2IX3X4LQX5X6DX7ATYYC(SEQ ID NO：53)，其中，X1可以是I或V，X2可以是T或S，X3可以是T或S，X4可以是G或S，X5可以是P或T，X6可以是D或E，X7可以是F或V。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列。
FGX1GTKLEIK(SEQ ID NO：54)，其中，X1可以是G或Q。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同L-FR1-4的抗體。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同H-FR1-4的抗體。
在本申請中，該抗原結合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該抗原結合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列；且該抗原結合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同L-FR1-4的抗體。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列。
DIQMTQSX1X2X3LSX4SX5GX6RVTITCX7ASDHINKWLAWYQQKPGNAPRLLISGATSLEX8GX9PSRFSGSGSGKDYTLX10IX11X12LQX13X14DX15ATYYCQQYWTTPYTFGX16GTKLEIK(SEQ ID NO：51)，其中，X1可以是P或S，X2可以是A或S，X3可以是T或Y，X4可以是A或V，X5可以是L或V，X6可以是D或G，X7可以是K或R，X8可以是S或T，X9可以是I或V，X10可以是T或S，X11可以是T或S，X12
可以是G或S，X13可以是P或T，X14可以是D或E，X15可以是F或V，X16可以是G或Q。
在本申請中，該抗原結合蛋白的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：26中任一項所示的胺基酸序列。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區包括源自Ig κ的恆定區或源自Ig λ的恆定區。
例如，該抗原結合蛋白的輕鏈恆定區包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含HCDR1-3和LCDR1-3。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同HCDR1-3和LCDR1-3的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含HCDR1-3和LCDR1-3。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同HCDR1-3和LCDR1-3的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含HCDR1-3和LCDR1-3。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同HCDR1-3和LCDR1-3的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區可包含HCDR1-3以及H-FR1-4，且該輕鏈可變區可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該H-FR1可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；該H-FR4可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列；該L-FR1可包括SEQ ID NO：13的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；該L-FR4可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合片段的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗原結合片段8H2D7B3或與其具有相同重鏈可變區的抗原結合蛋白。例如，該分離的抗原結合蛋白的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列。例如，
該分離的抗原結合蛋白可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同輕鏈可變區的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈和輕鏈。例如，該分離的抗原結合蛋白的重鏈可包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同重鏈的抗原結合蛋白。例如，該分離的抗原結合蛋白的輕鏈可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體8H2D7B3或與其具有相同輕鏈的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區可包含HCDR1-3以及H-FR1-4，且該輕鏈可變區可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該H-FR1可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；該H-FR4可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列；該L-FR1可包括SEQ ID NO：13的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；該L-FR4可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗原結合片段JYB1907hz0或與其具有相同重鏈可變區的抗原結合蛋白。例如，該分離
的抗原結合蛋白的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同輕鏈可變區的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈和輕鏈。例如，該分離的抗原結合蛋白的重鏈可包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同重鏈的抗原結合蛋白。例如，該分離的抗原結合蛋白的輕鏈可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz0或與其具有相同輕鏈的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區可包含HCDR1-3以及H-FR1-4，且該輕鏈可變區可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。例如，該H-FR1可包含SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列；該H-FR2可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；該H-FR3可包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；該H-FR4可包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列；該L-FR1可包括SEQ ID NO：29的胺基酸序列；該L-FR2可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列；該L-FR4可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包
括抗原結合片段JYB1907hz18或與其具有相同重鏈可變區的抗原結合蛋白。例如，該分離的抗原結合蛋白的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同輕鏈可變區的抗原結合蛋白。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含重鏈和輕鏈。例如，該分離的抗原結合蛋白的重鏈可包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同重鏈的抗原結合蛋白。例如，該分離的抗原結合蛋白的輕鏈可包含SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。例如，該分離的抗原結合蛋白可包括抗體JYB1907hz18或與其具有相同輕鏈的抗原結合蛋白。
多肽和免疫綴合物
另一方面，本申請提供了一種或多種多肽，其可包含本申請的分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本申請提供了一種或多種免疫綴合物，該免疫綴合物可包含本申請的分離的抗原結合蛋白。在某些實施方式中，該免疫綴合物還可包含藥學上可接受的治療劑。
在本申請中，該治療劑可以是細胞毒性劑，也可以是細胞抑制劑。例如，該治療劑可以選自以下組：有絲***抑制劑、激酶抑制劑、烷基化試劑、抗代謝藥、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酶、拓撲異構酶抑制劑、組蛋白脫乙醯基酶抑制劑、抗存活劑、生物學應答調節劑。
核酸、載體和細胞
另一方面，本申請還提供了分離的一種或多種核酸分子，該一種或多種核酸分子可編碼本申請所述分離的抗原結合蛋白。例如，該一種或多種核酸分子中的每一個核酸分子可以編碼完整的該抗原結合蛋白，也可以編碼其中的一部分(例如，HCDR1-3、重鏈可變區中的一種或多種)。
本申請所述的核酸分子可以為分離的。例如，其可以是藉由以下方法產生或合成的：(i)在體外擴增的，例如藉由聚合酶鏈式反應(PCR)擴增產生的，(ii)藉由選殖重組產生的，(iii)純化的，例如藉由酶切和凝膠電泳分級分離，或者(iv)合成的，例如藉由化學合成。例如，該分離的核酸可以是藉由重組DNA技術製備的核酸分子。
在本申請中，可以藉由本領域已知的多種方法來製備編碼該分離的抗原結合蛋白的核酸，這些方法包括但不限於，採用逆轉錄PCR和PCR獲得本申請所述分離的抗原結合蛋白的核酸分子。
另一方面，本申請提供了一種或多種載體，其包含本申請所述的一種或多種核酸分子。每種載體中可包含一種或多種該核酸分子。此外，該載體中還可包含其他基因，例如允許在適當的宿主細胞中和在適當的條件下選擇該載體的標記基因。此外，該載體還可包含允許編碼區在適當宿主中正確表達的表達控制元件。這樣的控制元件為所屬技術領域具有通常知識者所熟知的，例如，可包括啟動子、核糖體結合位點、增強子和調節基因轉錄或mRNA翻譯的其他控制元件等。在某些實施方式中，該表達控制序列為可調的元件。該表達控制序列的具體結構可根據物種或細胞類型的功能而變化，但通常包含分別參與轉錄和翻譯起始的5’非轉錄序列和5’及3’非翻譯序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。例如，5’非轉錄表達控制序列可包含啟動子
區，啟動子區可包含用於轉錄控制功能性連接核酸的啟動子序列。該表達控制序列還可包括增強子序列或上游活化子序列。在本申請中，適當的啟動子可包括，例如用於SP6、T3和T7聚合酶的啟動子、人U6RNA啟動子、CMV啟動子及其人工雜合啟動子(如CMV)，其中啟動子的某部分可與其他細胞蛋白(如人GAPDH，甘油醛-3-磷酸脫氫酶)基因啟動子的某部分融合，其可包含或不包含另外的內含子。本申請所述的一種或多種核酸分子可以與該表達控制元件可操作地連接。
該載體可以包括，例如質粒、黏粒、病毒、噬菌體或者在例如遺傳工程中通常使用的其他載體。例如，該載體可為表達載體。例如，該載體可為病毒載體。可以將病毒載體直接給予至患者(體內)或可以藉由間接的形式，例如，在體外使用病毒處理細胞，然後將處理過的細胞給予至患者(離體)。病毒載體技術在本領域中是公知的，並在例如Sambrook等(2001,Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)和其他病毒學和分子生物學手冊中進行了描述。常規的基於病毒的系統可以包括用於基因轉移的逆轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體以及單純皰疹病毒載體。在某些情形中，可以用逆轉錄病毒、慢病毒和腺相關病毒的方法將基因轉移整合進宿主基因組中，使***的基因長期表達。慢病毒載體是能夠轉導或感染非***細胞並典型地產生較高病毒效價的逆轉錄病毒載體。慢病毒載體可包含長末端重複序列5’LTR和截短的3’LTR、RRE、rev應答元件(cPPT)、中央終止序列(CTS)和/或翻譯後調控元件(WPRE)。本申請所述的載體可以被引入細胞。
另一方面，本申請提供了一種細胞。該細胞可包含本申請所述的分離的抗原結合蛋白、所述的多肽、所述的免疫綴合物、一種或多種核酸分子和/或本申請所述的一種或多種載體。例如，每種或每個細胞可包含一個或一種本申請所述的核酸分子或載體。例如，每種或每個細胞可包含多個(例如，2個或以上)或多種(例如，2種或以上)本申請所述的核酸分子或載體。例如，可將本申請所述的載體引入該宿主細胞中，例如原核細胞(例如，細菌細胞)、CHO細胞、NS/0細胞、HEK293T細胞、293F細胞或HEK293A細胞，或者其他真核細胞，如來自植物的細胞、真菌或酵母細胞等。可藉由本領域已知的方法將本申請所述的載體引入該宿主細胞中，例如電穿孔、lipofectine轉染、lipofectamin轉染等。例如，該細胞可以包括酵母細胞。例如，該細胞可以包括大腸桿菌細胞。例如，該細胞可以包括哺乳動物細胞。例如，該細胞可以包括免疫細胞。
該細胞可以包括免疫細胞。在某些情形中，該細胞可以包括免疫細胞。例如，該細胞可包括T細胞、B細胞、天然殺傷(NK)細胞、巨噬細胞、NKT細胞、單核細胞、樹突狀細胞、粒細胞、淋巴細胞、白細胞和/或外周血單個核細胞。
醫藥組成物和藥物組合
另一方面，本申請提供了一種醫藥組成物。該醫藥組成物可包含本申請所述的分離的抗原結合蛋白、所述的多肽、所述的免疫綴合物、所述分離的核酸分子、所述的載體、所述的細胞，和/或藥學上可接受的佐劑和/或賦形劑。在本申請中，該藥學上可接受的佐劑可以包括緩衝劑、抗氧化劑、防腐劑、低分子量多肽、蛋白質、親水聚合物、胺基酸、糖、螯合劑、反離子、
金屬複合物和/或非離子表面活性劑。除非與本申請所述的細胞不相容，否則任何常規介質或試劑均可以考慮用於本申請的醫藥組成物中。在本申請中，該藥學上可接受的賦形劑可以包括在藥物製劑中除主藥以外的附加物，也可稱為輔料。例如，該賦形劑可以包括片劑中的黏合劑、填充劑、崩解劑、潤滑劑。例如，該賦形劑可以包括中藥丸劑中的酒、醋、藥汁等。例如，該賦形劑可以包括半固體製劑軟膏劑、霜劑中的基質部分。例如，該賦形劑可以包括液體製劑中的防腐劑、抗氧劑、矯味劑、芳香劑、助溶劑、乳化劑、增溶劑、滲透壓調節劑、著色劑。
另一方面，本申請提供了一種藥物組合，其包含該分離的抗原結合蛋白和免疫檢查點抑制劑。
在本申請中，該免疫檢查點抑制劑可包括抑制PD-1/PD-L1相互作用的物質。例如，該免疫檢查點抑制劑可選自下組：PD-1/PD-L1阻斷劑、PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑、PD-1抑制劑和PD-L1抑制劑。
例如，該PD-1/PD-L1阻斷劑可選自下組：BMS202(PD-1/PD-L1抑制劑2)、BMS-1(PD-1/PD-L1抑制劑1)、PD-1/PD-L1抑制劑3、BMS-1166和BMS-1001。
例如，該PD-1抑制劑可包括抗PD-1抗體。例如，該PD-L1抑制劑可包括PD-L1抗體。
例如，該抗PD-1抗體可選自下組：Nivolumab(納武單抗)、Pembrolizumab(派姆單抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠單抗)、Toripalimab(特瑞普利單抗)、Sintilimab(信迪利單抗)和Tislelizumab(替雷利珠單抗)。例
如，該抗PD-L1抗體可選自下組：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含選自下組的抗體的HCDR3：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含選自下組的抗體的HCDR2：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含選自下組的抗體的HCDR1：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含選自下組的抗體的LCDR3：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含選自下組的抗體的LCDR2：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含選自下組的抗體的LCDR1：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含選自下組的抗體的VH：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含選自下組的抗體的VL：Durvalumab(德瓦魯單抗)、Atezolizumab(阿替利珠單抗)和avelumab(阿維單抗)。在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含HCDR3，該HCDR3可包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗PD-L1抗體包含HCDR2，該HCDR2包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗PD-L1抗體包含HCDR1，該HCDR1包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗PD-L1抗體包含重鏈可變區VH，該VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列；該HCDR2包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列；以及該HCDR1包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。例如，抗體可包括阿替利珠單抗或與其具有相同HCDR1-3的抗體。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含重鏈可變區VH，該VH可包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含LCDR3，該LCDR3可包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含LCDR2，該LCDR2可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含LCDR1，該LCDR1可包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含輕鏈可變區VL，該VL可包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，該LCDR3可包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列；以及該LCDR1可包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列。例如，抗體可包括阿替利珠單抗或與其具有相同LCDR1-3的抗體。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含輕鏈可變區VL，該VL可包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗PD-L1抗體可包含重鏈和輕鏈，該重鏈可包含HCDR1-3以及H-ER1-4，且該輕鏈可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列；該HCDR3可包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列；該LCDR1可包括SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列。例如，該抗PD-L1抗體可包括阿替利珠單抗或與其具有相同HCDR1-3和LCDR1-3的抗原結合蛋白。例如，該抗PD-L1抗體的重鏈可變區可包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。例如，該抗PD-L1抗體可包括阿替利珠單抗或與其具有相同重鏈可變區的抗原結合蛋白。例如，該抗PD-L1抗體的輕鏈可變區可包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列。例如，該抗PD-L1抗體可包括阿替利珠單抗或與其具有相同輕鏈可變區的抗原結合蛋白。例如，該抗PD-L1抗體的重鏈可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列。例如，該抗PD-L1抗體可包括阿替利珠單抗或與其具有相
同重鏈的抗原結合蛋白。例如，該抗PD-L1抗體的輕鏈可包含SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列。例如，該抗PD-L1抗體可包括阿替利珠單抗或與其具有相同輕鏈的抗原結合蛋白。
試劑盒、用途和方法
另一方面，本申請提供了一種試劑盒，其包含所述的藥物組合。
另一方面，本申請提供了分離的抗原結合蛋白、所述的多肽、所述的免疫綴合物、所述分離的核酸分子、所述的載體、所述的醫藥組成物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
例如，該腫瘤可包括實體瘤。例如，該腫瘤可包括與GARP的蛋白表達相關的腫瘤。例如，該腫瘤可以是轉移性結腸癌。例如，該腫瘤可以是肝細胞癌。例如，該腫瘤可以是晚期腎細胞癌。例如，該腫瘤可以是非小細胞肺癌。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
另一方面，在本申請中，該試劑盒和/或該藥物組合用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
例如，該腫瘤可包括實體瘤。例如，該腫瘤可包括與GARP的蛋白表達相關的腫瘤。例如，該腫瘤可以是轉移性結腸癌。例如，該腫瘤可以是肝細胞癌。例如，該腫瘤可以是晚期腎細胞癌。例如，該腫瘤可以是非小細胞肺癌。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
另一方面，本申請提供了一種所述的分離的抗原結合蛋白、所述的多肽、所述的免疫綴合物、所述的分離的核酸分子、所述的載體、所述的
細胞和/或所述的醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
例如，該腫瘤可包括實體瘤。例如，該腫瘤可包括與GARP的蛋白表達相關的腫瘤。例如，該腫瘤可以是轉移性結腸癌。例如，該腫瘤可以是肝細胞癌。例如，該腫瘤可以是晚期腎細胞癌。例如，該腫瘤可以是非小細胞肺癌。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
另一方面，本申請提供了一種藥物組合和/或試劑盒在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
例如，該腫瘤可包括實體瘤。例如，該腫瘤可包括與GARP的蛋白表達相關的腫瘤。例如，該腫瘤可以是轉移性結腸癌。例如，該腫瘤可以是肝細胞癌。例如，該腫瘤可以是晚期腎細胞癌。例如，該腫瘤可以是非小細胞肺癌。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
另一方面，本申請提供了一種預防和/或治療疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用該分離的抗原結合蛋白、該分離的核酸分子、該載體，該細胞、該醫藥組成物，其中該疾病或病症包括腫瘤。
另一方面，本申請提供了一種預防和/或治療疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用該藥物組合，其中該疾病或病症包括腫瘤。
例如，該腫瘤可包括實體瘤。例如，該腫瘤可包括與GARP的蛋白表達相關的腫瘤。例如，該腫瘤可以是轉移性結腸癌。例如，該腫瘤可以是肝細胞癌。例如，該腫瘤可以是晚期腎細胞癌。例如，該腫瘤可以是非小細胞肺癌。例如，該腫瘤可以是黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
本申請所述醫藥組成物、藥物組合及方法可與其他類型的癌症療法結合使用，諸如化學療法、手術、放射、基因療法等。本申請中所描述的醫藥組成物及方法可用於其他依賴於免疫反應的疾病病狀，諸如炎症、免疫疾病及感染性疾病。
在本申請中，該受試者可以包括人或非人動物。例如，該非人動物可以選自下組：猴、雞、鵝、貓、狗、小鼠和大鼠。此外，非人動物也可以包括任何除人以外的動物物種，例如家畜動物，或齧齒類動物，或靈長類動物，或家養動物，或家禽動物。該人可以是高加索人、非洲人、亞洲人、閃族人，或其他種族，或各種種族的雜合體。又例如，該人可以是老年、成年、青少年、兒童或者嬰兒。
可以根據在實驗動物中的有效量推測在人類中的有效量。例如，Freireich等人描述了動物和人的劑量的相互關係(基於每平方米身體表面的毫克數)(Freireich et al.，Cancer Chemother.Rep.50，219(1966))。身體表面積可以從患者的身高和體重近似確定。參見例如Scientific Tables，Geigy Pharmaceuticals，Ardsley，N.Y.，537(1970)。
不欲被任何理論所限，下文中的實施例僅僅是為了闡釋本申請的融合蛋白、製備方法和用途等，而不用於限制本申請發明的範圍。
實施方案
1.分離的抗原結合蛋白，其具有下述性質中的一種或多種：
a)在Octet測定中，以約1.0E-12或更低的K D 值與人GARP/人TGF-β 1複合物結合；
b)不與只表達人GARP的細胞或只表達人TGF-β 1的細胞結合；
c)抑制Treg細胞中的SMAD2磷酸化；
d)抑制表達人GARP/人TGF-β 1的HEK293T細胞釋放TGF-β 1；
e)阻止Treg細胞對人外周血單個核細胞(PBMC)釋放IL-2和IFN-γ的抑制；
f)在人PBMC移植小鼠的GvHD模型中，阻斷Treg細胞對該人PBMC引起的GvHD的抑制作用。
2.根據實施方案1所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。
3.根據實施方案1或2所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR2，該HCDR2包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列。
4 根據實施方案1至3中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR1，該HCDR1包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列。
5.根據實施方案1至4中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含重鏈可變區VH，該VH包含該HCDR1、該HCDR2和該HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；該HCDR2包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；以及該HCDR1包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列。
6.根據實施方案1至5中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR1，該H-FR1的C末端與該HCDR1的N末端直接或間接地相連，且該H-FR1包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列。
7.根據實施方案6所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR1包含SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列。
8.根據實施方案1至7中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR2，該H-FR2位於該HCDR1與該HCDR2之間，且該H-FR2包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列。
9.根據實施方案8所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR2包含SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：23中任一項所示的胺基酸序列。
10.根據實施方案1至9中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR3，該H-FR3位於該HCDR2與該HCDR3之間，且該H-FR3包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列。
11.根據實施方案10所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR3包含SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：24中任一項所示的胺基酸序列。
12.根據實施方案1至11中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR4，該H-FR4的N末端與該HCDR3的C末端直接或間接地相連，且該H-FR4包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列。
13.根據實施方案12所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR4包含SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：25中任一項所示的胺基酸序列。
14.根據實施方案1至13中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，該H-FR1包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列；該H-FR2包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列；該H-FR3包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列；以及該H-FR4包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列。
15.根據實施方案1至14中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，該H-FR1包含SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列；該H-FR2包含SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：23中任
一項所示的胺基酸序列；該H-FR3包含SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：24中任一項所示的胺基酸序列；以及該H-FR4包含SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：25中任一項所示的胺基酸序列。
16.根據實施方案15所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含選自下述任意一組的胺基酸序列：
a)H-FR1：SEQ ID NO：5，H-FR2：SEQ ID NO：6，H-FR3：SEQ ID NO：7和H-FR4：SEQ ID NO：8；
b)H-FR1：SEQ ID NO：22，H-FR2：SEQ ID NO：23，H-FR3：SEQ ID NO：24和H-FR4：SEQ ID NO：25。
17.根據實施方案1至16中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含重鏈可變區VH，該VH包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
18.根據實施方案17所述的分離的抗原結合蛋白，其中該VH包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：21中任一項所示的胺基酸序列。
19.根據實施方案1至18中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。
20.根據實施方案1至19中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列。
21.根據實施方案1至20中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：28中任一項所示的胺基酸序列。
22.根據實施方案1至21中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
23.根據實施方案1至22中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：27中任一項所示的胺基酸序列。
24.根據實施方案1至23中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈可變區VL，該VL包含該LCDR1、該LCDR2和該LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列；該LCDR2包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列；以及該LCDR1包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
25.根據實施方案1至24中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈可變區VL，該VL包含該LCDR1、該LCDR2和該LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列：該LCDR2包含SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：28中任一項所示的胺基酸序列；以及該LCDR1包含SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：27中任一項所示的胺基酸序列。
26.根據實施方案25所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR1、LCDR2、LCDR3包含選自下述任意一組的胺基酸序列：
a)LCDR1：SEQ ID NO：10，LCDR2：SEQ ID NO：11和LCDR3：SEQ ID NO：12；
b)LCDR1：SEQ ID NO：27，LCDR2：SEQ ID NO：28和LCDR3：SEQ ID NO：12。
27.根據實施方案1至26中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR1，該L-FR1的C末端與該LCDR1的N末端直接或間接地相連，且該L-FR1包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列。
28.根據實施方案27所述的分離的抗原結合蛋白，其中該L-FR1包含SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：29中任一項所示的胺基酸序列。
29.根據實施方案1至28中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR2，該L-FR2位於該LCDR1與該LCDR2之間，且該L-FR2包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列。
30.根據實施方案1至29中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR3，該L-FR3位於該LCDR2與該LCDR3之間，且該L-FR3包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列。
31.根據實施方案30所述的分離的抗原結合蛋白，其中該L-FR3包含SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：30中任一項所示的胺基酸序列。
32.根據實施方案1至31中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR4，該L-FR4的N末端與該LCDR3的C末端直接或間接地相連，且該L-FR4包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列。
33.根據實施方案32所述的分離的抗原結合蛋白，其中該L-FR4包含SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：31中任一項所示的胺基酸序列。
34.根據實施方案1至33中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4，該L-FR1包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列；該L-FR2包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；該L-FR3包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列；以及該L-FR4包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列。
35.根據實施方案1至34中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4，該L-FR1包含SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：29中任一項所示的胺基酸序列；該L-FR2包含SEQ ID NO：14中任一項所示的胺
基酸序列；該L-FR3包含SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：30中任一項所示的胺基酸序列；以及該L-FR4包含SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：31中任一項所示的胺基酸序列。
36.根據實施方案35所述的分離的抗原結合蛋白，其中該L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4包含選自下述任意一組的胺基酸序列：
a)L-FR1：SEQ ID NO：13，L-FR2：SEQ ID NO：14，L-FR3：SEQ ID NO：15和L-FR4：SEQ ID NO：16；
b)L-FR1：SEQ ID NO：29，L-FR2：SEQ ID NO：14，L-FR3：SEQ ID NO：30和L-FR4：SEQ ID NO：31。
37.根據實施方案1至36中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈可變區VL，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列。
38.根據實施方案1至37中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈可變區VL，該VL包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：26中任一項所示的胺基酸序列。
39.根據實施方案1至38中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含重鏈恆定區，且該重鏈恆定區包括源自IgG的恆定區或源自IgY的恆定區。
40.根據實施方案39所述的分離的抗原結合蛋白，其中該重鏈恆定區包括源自人IgG4的恆定區。
41.根據實施方案39或40所述的分離的抗原結合蛋白，其中該重鏈恆定區包含SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列。
42.根據實施方案1至41中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈恆定區，且該抗體輕鏈恆定區包括源自Ig κ的恆定區或源自Ig λ的恆定區。
43.根據實施方案42所述的分離的抗原結合蛋白，其中該輕鏈恆定區包括源自人Ig κ的恆定區。
44.根據實施方案42或43所述的分離的抗原結合蛋白，其中該輕鏈恆定區包含SEQ ID NO：18中任一項所示的胺基酸序列。
45.根據實施方案1至44中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含重鏈HC，該HC包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：32中任一項所示的胺基酸序列。
46.根據實施方案1至45中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈LC，該LC包含SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：33中任一項所示的胺基酸序列。
47.根據實施方案1至46中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HC和LC，該HC包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：32中任一項所示的胺基酸序列，且該LC包含SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：33中任一項所示的胺基酸序列。
48.根據實施方案47所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HC和LC包含選自下述任意一組的胺基酸序列：
a)HC：SEQ ID NO：19和LC：SEQ ID NO：20；
b)HC：SEQ ID NO：32和LC：SEQ ID NO：33。
49.根據實施方案1至-48中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包括抗體或其抗原結合片段。
50.根據實施方案49所述的分離的抗原結合蛋白，其中該抗原結合片段包括Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
51.根據實施方案49或50所述的分離的抗原結合蛋白，其中該抗體選自下組：單株抗體、單鏈抗體、鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體和全人源抗體。
52.多肽，其包含實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
53.免疫綴合物，其包含實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白或實施方案52所述的多肽。
54.根據實施方案53所述的免疫綴合物，其還包括藥學上可接受的治療劑。
55.根據實施方案54所述的免疫綴合物，其中該治療劑選自下組：細胞毒性劑和細胞抑制劑。
56.分離的核酸分子，其編碼實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，或者實施方案52所述的多肽。
57.載體，其包含實施方案56所述的分離的核酸分子。
58.細胞，其包含實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，實施方案52所述的多肽，實施方案53至55中任一項所述的免疫綴合物，實施方案56所述的分離的核酸分子和/或實施方案57所述的載體。
59.製備實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白或實施方案52所述的多肽的方法，該方法包括在使得實施方案1至51中任一項所述的
分離的抗原結合蛋白或實施方案52所述的多肽表達的條件下，培養根據實施方案58所述的細胞。
60.醫藥組成物，其包含實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、實施方案52所述的多肽、實施方案53至55中任一項所述的免疫綴合物、實施方案56所述的分離的核酸分子、實施方案57所述的載體、實施方案58所述的細胞，和/或藥學上可接受的佐劑和/或賦形劑。
61.藥物組合，其包含實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白和免疫檢查點抑制劑。
62.根據實施方案61所述的藥物組合，其中該免疫檢查點抑制劑包括抑制PD-1/PD-L1相互作用的物質。
63.根據實施方案61或62所述的藥物組合，其中該免疫檢查點抑制劑選自下組：PD-1/PD-L1阻斷劑、PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑、PD-1抑制劑和PD-L1抑制劑。
64.根據實施方案61至63中任一項所述的藥物組合，其中該免疫檢查點抑制劑包括抗PD-L1抗體。
65.根據實施方案64所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列。
66.根據實施方案64或65所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含HCDR2，該HCDR2包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
67.根據實施方案64至66中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含HCDR1，該HCDR1包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。
68.根據實施方案64至67中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含重鏈可變區VH，該VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列；該HCDR2包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列；以及該HCDR1包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。
69.根據實施方案64至68中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含重鏈可變區VH，該VH包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
70.根據實施方案64至69中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列。
71.根據實施方案64至70中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
72.根據實施方案64至71中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列。
73.根據實施方案64至72中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含輕鏈可變區VL，該VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列；該LCDR2包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列；以及該LCDR1包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列。
74.根據實施方案64至73中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包含輕鏈可變區VL，該VL包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列。
75.根據實施方案64至74中任一項所述的藥物組合，其中該抗PD-L1抗體包括阿替利珠單抗。
76.根據實施方案61至75中任一項所述的藥物組合，其可以是醫藥組成物。
77.一種試劑盒，其包含實施方案61至76中任一項所述的藥物組合。
78.實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、實施方案52所述的多肽、實施方案53至55中任一項所述的免疫綴合物、實施方案56所述的分離的核酸分子、實施方案57所述的載體，實施方案58所述的細胞和/或實施方案60中任一項所述的醫藥組成物，其用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
79.根據實施方案78所述的用途，其中該腫瘤包括實體瘤。
80.根據實施方案78或79所述的用途，其中該腫瘤包括與GARP的蛋白表達相關的腫瘤。
81.根據實施方案78至80中任一項所述的用途，其中該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
82.實施方案61至76中任一項所述的藥物組合和/或實施方案77所述的試劑盒，其用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
83.根據實施方案82所述的用途，其中該腫瘤包括實體瘤。
84.根據實施方案82或83所述的用途，其中該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
85.根據實施方案82至84中任一項所述的用途，其中該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
86.實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、實施方案52所述的多肽、實施方案53至55中任一項所述的免疫綴合物、實施方案56所述的分離的核酸分子、實施方案57所述的載體，實施方案58所述的細胞和/或實
施方案60所述的醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
87.根據實施方案86所述的用途，其中該腫瘤包括實體瘤。
88.根據實施方案86或87所述的用途，其中該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
89.根據實施方案86-88中任一項該用途，其中該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
90.實施方案61至76中任一項所述的藥物組合和/或實施方案77所述的試劑盒在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
91.根據實施方案90所述的用途，其中該腫瘤包括實體瘤。
92.根據實施方案90或91所述的用途，其中該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
93.根據實施方案90至92中任一項所述的用途，其中該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
94.一種預防和/或治療疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的實施方案1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、實施方案52所述的多肽、實施方案53至55中任一項所述的免疫綴合物、實施方案56所述的分離的核酸分子、實施方案57所述的載體，實施方案58所述的細胞、實施方案60所述的醫藥組成物，其中該疾病或病症包括腫瘤。
95.根據實施方案94所述的方法，其中該腫瘤包括實體瘤。
96.根據實施方案94或95所述的用途，其中該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
97.根據實施方案94至96中任一項所述的方法，其中該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
98.一種預防和/或治療疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的實施方案61至76中任一項所述的藥物組合，其中該疾病或病症包括腫瘤。
99.根據實施方案98所述的方法，其中該腫瘤包括實體瘤。
100.根據實施方案98或99所述的方法，其中該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
101.根據實施方案98至100中任一項所述的方法，其中該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
實施例
實施例1 重組質粒製備及免疫細胞株構建
人GARP(記為hGARP)全長胺基酸序列(Uniprot#Q14392)與人Latent TGF-β(記為hTGF-β 1)全長胺基酸序列(Uniprot#P01137)經密碼子優化，合成的DNA序列按已建立的分子生物學方法分別被選殖到載體pLVX-IRES.puro和pLVX-IRES.G418中，構建好的重組質粒藉由慢病毒包裝，感染293F細胞，經抗生素加壓篩選，挑單株得到過表達hGARP/hTGF-β 1的293F-hGARP/hTGF-β 1單株重組細胞株，經流式抗人GARP抗體(Enzo life science，ALX-804-867FI-0100)和抗人TGF-β 1抗體(R&D Systems，FAB2463A)染色，流式細胞儀上機檢測，結果如表1所示，挑取表達量高的293F-hGARP/hTGF-β 1單株重組細胞株做免疫。類似方法用於CHOK1-hGARP/hTGF-β 1，293T-hGARP和293T-hTGF-β 1單株重組細胞株的製備，用於單株抗體的篩選和鑑定。
表1 293F-hGARP/hTGF-β 1單株重組細胞株的流式檢測結果
實施例2 鼠抗人GARP單株抗體的製備
2.1 免疫
用293F-hGARP/hTGF-β 1單株重組細胞株2F4和2D3分別免疫Balb/c,SJL小鼠3-4次，3-5×106細胞/隻，間隔時間2-3週，第三次免疫後第七天採血，為免疫後血清。用CHOK1-hGARP/hTGF-β 1和空細胞CHOK1檢測免疫後血清的流式細胞結合程度，計算CHOK1-hGARP/hTGF-β 1和空細胞CHOK1流式結合平均熒光強度的比值，比值較高的小鼠用於融合。融合前三天，用3-5×106細胞/隻的293F-hGARP/hTGF-β 1單株重組細胞株衝擊免疫小鼠。
2.2 融合
融合當天，小鼠安樂死後，解剖、取脾、研磨並收集細胞，1500rpm，5min離心，收集細胞，用5毫升紅細胞裂解液懸浮細胞，4度放置5分鐘，用DMEM+10%FBS終止反應，計數。離心後用40mlDMEM懸浮細胞，靜置2~3min後轉移上清到另外一個50毫升離心管中。收集SP2/0細胞，按SP2/0：脾細胞=1：5的比例混合，離心，充分吸取上清後，拍鬆，混合細胞沉澱，用DMEM洗滌混合細胞兩次，依照常規方法進行PEG融合或者電融合後，用DMEM培養
基洗滌細胞並將其重新懸浮於DMEM+10%FBS+1×HAT的篩選培養基中。將融合後的細胞加入96孔細胞培養板內，置37℃、濕度75%、5%CO2培養箱內培養9~10天。
2.3 篩選及亞選殖，抗體純化
用流式檢測96孔細胞培養板中的融合瘤上清對CHOK1-hGARP/hTGF-β 1細胞的結合活性。
CHOK1-hGARP/hTGF-β 1單株重組細胞株在T-75細胞培養瓶中擴大培養至90%匯合度，吸盡培養基，用PBS緩衝液(購自Invitrogen)洗滌2次，然後用無酶細胞解離液(Versene solution，15040066，購自Life technology公司)處理和收集細胞。用PBS緩衝液洗滌細胞2次，進行細胞計數後將細胞用PBS緩衝液稀釋至2×106細胞每毫升，加入FACS緩衝液(含有2% FBS的PBS)，室溫孵育15分鐘，然後用PBS緩衝液離心洗滌2次。將收集的細胞用FACS緩衝液懸浮至3×106細胞/mL。按每孔100微升加入到96孔FACS反應板中，加入96孔細胞培養板中的融合瘤上清每孔100微升，4℃孵育1小時。離心後，棄上清，加入每孔100微升熒光(Alexa 488)標記的二抗(購自Invitrogen)，4℃孵育1小時。用FACS緩衝液離心洗滌3次，加入每孔100微升固定液[4%(v/v)多聚甲醛]懸浮細胞，10分鐘後用FACS緩衝液離心洗滌2次。用30微升FACS緩衝液懸浮細胞，用流式細胞儀intellycite plus(購自Sartorius公司)檢測和分析結果。
陽性的融合瘤上清對應的細胞株轉至24孔細胞培養板繼續培養2-4天後，24孔細胞培養板中的融合瘤上清(對應的細胞株名稱：8H2)用於檢測與CHOK1-hGARP/hTGF-β 1細胞的結合活性，結果如下表2所示。從24孔細胞培養板中挑取陽性細胞進行亞選殖及亞選殖篩選，直至得到穩定的可分泌結合
CHOK1-hGARP/hTGF-β 1的融合瘤單株抗體細胞株8H2D7B3，並採用常規無血清培養基進行50毫升小規模生產，常規protein A柱純化得到純化單株抗體做後續鑑定。
表2 融合瘤上清與CHOK1-hGARP/hTGF-β 1細胞的結合活性的檢測結果
2.4 輕重鏈可變區胺基酸序列測定
離心搜集5×107個融合瘤細胞8H2D7B3，常規Trizol法提取總RNA。逆轉錄反應後得到的cDNA藉由末端轉移酶進行加G反應，後用VH，VK引子和polyC引子擴增含可變區序列的DNA，做T-A株，測序後進行抗體序列分析。
實施例3 鼠抗人GARP單株抗體的鑑定
3.1 流式鑑定鼠抗人GARP單株抗體結合293F細胞，293F-hGARP細胞，293F-hTGF-β 1細胞和293F-hGARP/hTGF-β 1複合物的功能。
細胞計數後300g離心5min丟棄上清，用1×PBS重新懸浮清洗細胞，300g離心5min，棄上清，然後用2% FBS的FACS buffer重新懸浮調成密度1e6/mL。細胞鋪板1e5/孔，100μL/孔，4℃，0.5h，離心300g，5min，棄上清。加待測抗體(2%FBS的FACS buffer配置)15μg/mL開始，1：5梯度稀釋，7個梯度，0μg/mL為對照，100μL/孔，吹打混勻，4℃，1h，300g離心5min，棄上清。加200μL/孔的1×PBS，重新懸浮細胞混勻，300g離心5min，棄上清，重複二遍。加二抗Alexa 488(donkey anti-mouse IgG(H+L)，lot：2018296，Thermo
Fisher)使用2% FBS的FACS buffer 1：1000配製，100μL/well，4℃，避光1h。加200μL/孔的1×PBS，重新懸浮細胞混勻，300g離心5min，棄上清，重複二遍。2% FBS的FACS buffer重新懸浮，FACS機器讀值。利用軟體作圖並計算EC50。其中，MHG8為陽性對照，鼠IgG1(mIgG1)為同型對照。結果如圖1A至圖1D所示：圖1A表示待測抗體與293F細胞的結合，圖1B表示待測抗體與293F-hGARP細胞的結合，圖1C表示待測抗體與293F-hTGF-β 1細胞，圖1D表示待測抗體與293F-hGARP/hTGF-β 1複合物的，表明鼠源抗體8H2D7B3僅與293F-hGARP/hTGF-β 1複合物結合。
3.2 流式檢測鼠抗人GARP單株抗體阻斷MHG8(抗人GARP抗體)與293F-hGARP/hTGF-β 1複合物結合功能
細胞計數300g離心5min丟棄上清，用1×PBS重新懸浮清洗細胞，300g離心5min，棄上清，然後2%FBS的FACS buffer重新懸浮調成密度1e6/mL。細胞鋪板1e5/孔，100μL/孔，4℃，0.5h，300g離心5min，棄上清。加競爭抗體MHG8 with alexa488(lot：1905151702，1.39mg/mL)終濃度30μg/mL，每孔50μL，加待測抗體(2%FBS的FACS buffer配置)30μg/mL開始，1：5梯度稀釋，7個梯度，0μg/mL為對照，100μL/孔，吹打混勻，4℃，1h，300g離心5min，棄上清。加200μL/孔的1×PBS，重新懸浮細胞混勻，300g離心5min，棄上清，重複二遍。加二抗Alexa 488(donkey anti-mouse IgG(h+L)，lot：2018296，Thermo Fisher)，使用2%FBS的FACS buffer 1：1000配製，100μL/well，4℃，避光1h。加200μL/well的1×PBS，重新懸浮細胞混勻，300g離心5min，棄上清，重複二遍。2% FBS的FACS buffer重新懸浮，FACS機器讀值。利用軟體作圖並計算EC50。其中，MHG8為陽性對照，鼠IgG1(mIgG1)為
同型對照。結果如圖2所示，鼠源抗體8H2D7B3可阻斷MHG8與293F-hGARP/hTGF-β 1複合物的結合。
3.3 Western blot和Alpha Elisa測定純化後鼠抗人GARP單株抗體抑制Treg細胞中的SMAD2磷酸化
新鮮的PBMC細胞購至ALLCELLS公司，先將PBMC細胞400g離心10min，然後用1% FBS(Thermo Fisher，10099-141)和50mmol EDTA(ThermoFisher，15400054)的1×PBS培養基(Thermo Fisher，10010049)重新懸浮。PBMC進行Treg細胞提取參考Treg提取試劑盒(Miltenyi,Cat：130-091-301)操作步驟進行。Treg細胞抗體處理：Treg體外擴增14天，收集細胞計數，1.5×106個Treg細胞去除磁珠並用於陰性對照。24孔板每孔1×106/mL鋪板，每孔1mL。待測抗體加入24孔板，濃度25μg/mL。37℃，二氧化碳培養箱培養36h。
Alpha Elisa檢測：離心收集細胞，加入50μL的Lysis buffer，裂解30min。1300rpm離心5min，10μL上清用於Alpha Elisa檢測(PerkinElmer，ALSU-PSM2-A500)。
Western Blot檢測：離心收集細胞，加入50μL的Lysis buffer，裂解30min。1300rpm離心5min，10μL上清用於Western blot檢測。結果如圖3A及圖3B所示：圖3A表示待測抗體抑制Treg細胞中的SMAD2磷酸化的Western blot檢測結果，圖3B表示待測抗體抑制Treg細胞中的SMAD2磷酸化的Alpha Elisa檢測信號值，表明鼠源抗體與陽性對照抗TGF-β 1和MHG8類似，均能抑制Treg細胞中SMAD2蛋白的磷酸化。
藉由結合、阻斷等功能鑒定，選擇8H2D7B3作為鼠源候選抗體並進行人源化。
測得鼠抗人GARP單株抗體8H2D7B3可變區序列如下：
>8H2D7B3 VH
QVQLQQSGAELVRPGSSVKLSCKASGYTLSNYWMYWVKQRPIQGLEWIGSIAPSDSETHYNQKFKDRATVTVDKSSRIVYMQLSSLTSEDSAVYFCARGGFGYGSSHWYFDVWGTGTTVTVSS
>8H2D7B3 VL
DIQMTQSSAYLSVSLGGRVTITCKASDHINKWLAWYQQKPGNAPRLLISGATSLETGIPSRFSGSGSGKDYTLSITGLQTEDVATYYCQQYWTTPYTFGGGTKLEIK
鼠抗人GARP單株抗體8H2D7B3的重鏈及輕鏈CDR區如表3所示。
表3 鼠抗人GARP單株抗體8H2D7B3的重鏈及輕鏈CDR區
實施例4 鼠抗人GARP單株抗體的人源化
4.1 藉由序列比對挑選與鼠抗人GARP單株抗體8H2D7B3最同源的人Germline抗體(數據來源：IMGT)做為人源化設計框架(輕鏈以IGKV3D-15*01或IGKV1-5*03，IGKJ2*02或IGKJ4*02為框架，重鏈以IGHV3-7*03或IGHV1-46*03，IGHJ3*01，為框架)，對抗體輕重鏈可變區進行Chothia編號[Chothia & Lesk,1987]，定義抗體CDR區：CDRL1(L24-L34)，CDRL2(L50-L56)，CDRL3
(L89-L97)，CDRH1(H26-H32)，CDRH2(H52-H56)，CDRH3(H95-H97)，根據序列比對和可變區結構信息對抗體輕重鏈可變區胺基酸進行人源化突變。
4.2 Germline抗體序列信息
IGKV3D-15*01：
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWP
IGKV1-5*03：
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYS
IGHV3-7*03：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
IGHV1-46*03：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR
IGKJ2*02：
CTFGQGTKLEIK
IGKJ4*02：
LTFGGGTKVEIK
IGHJ3*01：
DAFDVWGQGTMVTVSS
4.3設計表達載體，基因合成，哺乳細胞表達純化重組抗體，比較人源化抗體和嵌合抗體活性，理化性質的差異，進行1-2輪人源化優化，輕重鏈均以上述Germline抗體為框架CDR移植的人源化序列進行優化設計。得到的嵌合抗體命名為JYB1907hz0，人源化抗體命名為JYB1907hz18。
4.4 人源化抗體表達和純化
抗體工程優化設計序列後，全長JYB1907hz18輕重鏈蛋白質序列分別進行密碼子優化，基因合成密碼子優化後DNA片段(Genscript)，株合成後基因片段到表達載體pcDNA3.4(Life Technologies)。表達質粒擴增和質粒抽提後雙質粒共轉ExpiCHO細胞(ThermoFisher Scientific，A29133)，根據供應商ExpiCHO表達系統方法進行抗體瞬轉表達，大致過程如下：在培養總體積25ml培養基中，36.5℃，8%二氧化碳濃度下培養ExpiCHO細胞到密度6×106/mL，使用ExpiFectamine轉染試劑各轉10μg抗體輕重鏈表達質粒到細胞；轉染一天後，各取150μL和4mL ExpiCHO增強劑和ExpiCHO輔料添加到培養細胞中，繼續培養至9天，4℃，3500轉離心取上清。混合AmMagTM Protein A磁珠(Genscript，L00695)和抗體表達上清，室溫孵育2小時，PBS洗滌兩次棄上清，加入適量沖提緩衝液Protein G or A SefinoseTMElution buffer(Sangon,C600481)，充分混勻後置於試管架上靜止孵育5分鐘，孵育期間重新懸浮磁珠2~3次，重複沖提2次，沖提後，立即加入適量中和液1M Tris-HCl,pH7.5(Sangon,B548124)中和備用。
4.5 純化後的人源化抗體的親和力檢測
4.5.1 採用Octet RED96e(Fortebio)測定JYB1907hz18與hGARP/hTGF-β 1複合物(愷佧，貨號：GAR-HM4TG)的親和力，1907Hz18與hGARP/hTGF-β 1複合物均用1xPBST(1xPBS：生工，B548117-0500；0.02%吐溫
20：Sigma，P1379)稀釋，hGARP/hTGF-β 1複合物的起始濃度為100nM，3倍梯度稀釋，JYB1907hz18使用濃度為33.3nM。
4.5.2 樣品上機檢測(Octet Data Acquisition 11.1.0.11)：首先，將樣品加入96孔板(Greiner bio-one，655209)，體系為200μL/well。然後設置軟體參數，板溫設定為30℃，收集標準動力學信號的頻率為5.0HZ。接著，用1xPBST預濕AHC傳感器(Fortébio，貨號：18-0015)10分鐘，然後上機檢測。每個循環包含以下步驟：1)浸入緩衝液60s；2)檢測抗原(hGARP/hTGF-β 1複合物)是否與傳感器有非特異性結合；3)10mM pH1.7的甘胺酸溶液再生；4)浸入緩衝液60s；5)抗體(JYB1907hz18)固化在傳感器上，時間為25s；6)傳感器浸入緩衝液180s；7)抗原(hGARP/hTGF-β 1複合物)與抗體(JYB1907hz18)結合，時間180s；8)抗原(hGARP/hTGF-β 1複合物)與抗體(JYB1907hz18)的解離，時間10分鐘；9)傳感器再生。
4.5.3 數據分析
採用Fortebio的Data Analysis 12.0軟體，對抗原(hGARP/hTGF-β 1複合物)-抗體(JYB1907hz18)以1：1的結合方式，測定結合速率(Ka)和解離速率(Kd)，以此計算抗體的平衡解離常數(KD)。結果如表4所示，JYB1907hz18與hGARP/hTGF-β 1結合的親和力優於陽性對照抗體MHG8。
表4 JYB1907hz18與hGARP/hTGF-β 1的親和力檢測結果
實施例5 JYB1907hz18抑制Treg細胞中的SMAD2磷酸化
新鮮的PBMC細胞購至ALLCELLS公司，先將PBMC細胞400g離心10min，然後用1%FBS(Thermo Fisher，10099-141)和50mmolEDTA(ThermoFisher，15400054)的1×PBS培養基(Thermo Fisher，10010049)重新懸浮。PBMC進行Treg細胞提取參考Treg提取試劑盒(Miltenyi,Cat：130-091-301)操作步驟進行。Treg細胞抗體處理：Treg體外擴增14天，收集細胞計數，1.5×106個Treg細胞去除磁珠並用於陰性對照。24孔板每孔1×106/mL鋪板，每孔1mL。待測抗體加入24孔板，濃度25μg/mL。37℃，二氧化碳培養箱培養36h。其中，抗TGF-β 1和MHG8為陽性對照，人IgG4為同型對照。
Alpha Elisa檢測：離心收集細胞，加入50μL的Lysis buffer，裂解30min。1300rpm離心5min，10μL上清用於Alpha Elisa檢測(PerkinElmer，ALSU-PSM2-A500)。
如上述方法評估，JYB1907hz18抑制Treg細胞中的SMAD2磷酸化，結果如圖4所示。
實施例6 JYB1907hz18抑制TGF β 1釋放試驗研究
293T-hGARP/hTGF-β 1細胞由上海睿智化學構建，LN229細胞購至南京科佰(貨號：CBP60302)。待2種細胞生長至70%密度時分別用胰酶(Thermo，25200056)消化，加入含有10%FBS(Thermo Fisher，10099-141)和1×Pen Strep(Thermo Fisher，15140-122)的新鮮DMEM(Thermofisher,11965092)分別對每個細胞進行重新懸浮，按每孔3×106個細胞(每孔50μL)依次加入96孔板中(Corning，3599)。每孔加入50μL梯度稀釋的JYB1907hz18(終濃度10μg/mL起始，2倍梯度稀釋，最後一個孔抗體濃度為0，共10個點)，置於37℃，5%CO2培養箱培養5~6h。離心取上清，使用TGF-β 1 ELISA試劑盒
(Biolegend，貨號：580709)進行TGF-β 1檢測。其中，MHG8為陽性對照，人IgG4為同型對照。
如上述方法評估，JYB1907hz18抑制293T細胞釋放TGF-β 1，結果如圖5所示。
實施例7 JYB1907hz18阻止Treg對外周血單個核細胞(PBMC)釋放IL-2和IFN-γ的抑制
新鮮的PBMC細胞購至TPCS公司，先將PBMC細胞400g離心10min，然後用1% FBS(Thermo Fisher，10099-141)和50mmol EDTA(ThermoFisher，15400054)的1×PBS培養基(Thermo Fisher，10010049)重新懸浮。吸出少許PBMC用於後續實驗，剩餘PBMC進行Treg細胞提取，參考Treg提取試劑盒(Miltenyi,Cat：130-091-301)操作步驟進行。將提取的Treg細胞和PBMC細胞計數並調整濃度為5e5/mL，PBMC組，加入50μLPBMC和48μL的1% HBS(TPCS，A515)和1×Pen Strep(Thermo Fisher，15140-122)的TexMACSTM Medium培養基(Miltenyi Biotec，170-076-309)以及2μL的CD3/CD28抗體磁珠(Miltenyi Biotec，130-095-345)。PBMC+Treg細胞組，加入50μLPBMC和46μL的1% HBS(TPCS，A515)和1×Pen Strep(Thermo Fisher，15140-122)的TexMACSTM Medium培養基(Miltenyi Biotec，170-076-309)以及4μL的CD3/CD28抗體磁珠(Miltenyi Biotec，130-095-345)。加入待測抗體JYB1907hz18，每孔50μL，終濃度為25μg/ml。置於37℃，5%CO2培養箱培養20-24h。離心取上清，使用IL-2 ELISA和IFN-γ ELISA試劑盒進行IL-2檢測(R&D，VAL110)和IFN-γ檢測(R&D，DIF50C)。其中，MHG8為陽性對照。
如上述方法評估，JYB1907hz18阻止Treg對外周血單個核細胞(PBMC)釋放白細胞介素-2(IL-2)和干擾素-γ(IFN-γ)的抑制，結果如圖6A及圖6B所示：圖6A表示待測抗體阻止Treg對外周血單個核細胞(PBMC)釋放白細胞介素-2(IL-2)的抑制；圖6B表示待測抗體阻止Treg對外周血單個核細胞(PBMC)釋放干擾素-γ(IFN-γ)的抑制。
實施例8 在人源化FcRn小鼠模型中藥物代謝動力學(PK)研究
以人源化FcRn小鼠為受試動物，分別研究兩個待試藥物MHG8和JYB1907hz18單次皮下給藥後的藥物代謝動力學指標。所有動物實驗方案獲得了IACUC審閱和批准。hEcRn小鼠採購自北京百奧賽圖，雄性，6~8週齡，體重23~26g，飼養於SPF級動物房，標準顆粒飼料餵養，自由進食及飲水，室溫18~24℃，相對濕度40%~50%，每日12h晝夜交替。實驗動物共12隻，隨機分為三組，每組四隻動物，皮下單次給藥，給藥劑量為10mg/kg，給藥體積為10mL/kg。採血時間點為給藥前，給藥後2h、6h、24h(第1天)、第2天、第3天、第4天、第7天、第10天、第14天、第21天、第28天、第35天和第42天。藉由臉頰穿刺採集全血60μL/隻至EP管中，室溫靜置30min，然後離心(2000g，4℃，5min)分離血清，每個樣品分裝為2份(檢測管和備份管)，10μL/管，置於-80℃保存。
利用Elisa間接法檢測，分析三種藥下不同時間點藥物代謝動力學。包被抗原為鼠抗人IgG4 Fe(abcam，lot：GR3248093-2,ab99820)，2μg/mL，100μL/孔，4℃，過夜。洗板後用200μL/孔封閉液4℃過夜。血清樣本加樣，50μL/孔，37℃，1h。檢測抗體為hGARP/hTGF β 1-biotin(0.78mg/ml，lot：030201)+Streptavidin-peroxidase(Sigma，lot：SLCB5784)，
100μl/孔，37℃，0.5h。TMB顯色液(KPL，貨號：52-00-03)顯色，酶標儀(Molecular Devices，SpectraMax M3)讀值OD450。根據標準曲線獲得藥物濃度，PK Solver非房室進行數據處理獲得PK參數。
給藥MHG8後，半衰期(t1/2)=4.8天，最高濃度(Cmax)為50036ng/ml(如圖7B所示)；給藥JYB1907hz18後半衰期(t1/2)=8.82天，最高濃度(Cmax)為139437ng/ml(如圖7A所示)。
實施例9 JYB1907hz18理化性質研究
9.1 SEC-HPLC純度分析
9.1.1 將樣品(JYB1907hz18)稀釋至1mg/mL，混勻，12000rpm離心5min，取上清轉至樣品瓶，放入HPLC樣品盤。設置色譜條件如表5所示。
表5 色譜條件
9.1.2 色譜管柱採用流動相(200mM磷酸鹽緩衝液，pH6.8)平衡後，進樣分析，用色譜軟體進行數據分析，峰面積歸一化法計算各個峰的峰面積百分比。
9.2 HIC-HPLC分析
9.2.1 將樣品(JYB1907hz18)稀釋至1mg/ml，離心取上清待測。設置色譜條件如表6所示。
表6 色譜條件
9.2.2 用流動相A(50mM磷酸鹽緩衝液/1M硫酸銨，pH 7.0)和流動相B(50mM磷酸鹽緩衝液，pH 7.0)進行梯度沖提，記錄主峰保留時間。
9.3 熔解溫度(Tm)值分析
將樣品(JYB1907hz18)用樣品緩衝液稀釋至1mg/mL，然後按照Protein Thermal ShiftTM Starter Kit說明書，取樣品(JYB1907hz18)溶液13μL加入至PCR管內，加入5μL Protein Thermal shift TM Buffer，加入2μL10×染色液，使反應體積為20μL，混勻後，12000rpm離心5min以去除氣泡。將檢測樣品(JYB1907hz18)置於PCR儀內，進行樣品分析，記錄樣品(JYB1907hz18)的Tm值。
9.4 iCIEF分析
取樣品(JYB1907hz18)溶液加入到已經充分混勻的以下體系中：1%的甲基纖維素(MC)70μl，尿素5M 80μl，兩性電解質Pharmalyte pH 3-10 8μl，pI marker 5.5和9.5各2μl。補加適當體積超純水至200μl，混勻。離心取
上清進樣分析。分析結束後，將結果文件導入ChromPerfect軟體進行圖譜積分處理並計算各峰的等電點以及各峰百分比。
JYB1907hz18的理化分析結果如表7所示。
表7 JYB1907hz18的理化分析結果
實施例10 JYB1907hz18抗體在小鼠GvHD模型中的研究
NOG小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，7-8週齡，雌性，共40隻。凍存PBMC購自妙通(上海)生物科技有限公司。從新鮮的PBMC中提取Treg細胞，Treg細胞體外擴增培養方法同實施例5。NOG小鼠經過適應期後，提前3天白消胺25mg/kg腹腔注射處理小鼠。隨機選取10隻小鼠，復蘇同批次凍存的PBMC，每隻小鼠靜脈注射3×106 PBMC，作為第一組。將復蘇的PBMC與Treg細胞混合，其餘30隻小鼠每隻尾靜脈注射3×106PBMC和3×106Treg細胞，注射後當天，根據體重進行隨機分組，分為第二、三、四組。分組後進行給藥，第一組腹腔注射Isotype Ctrl，第二組腹腔注射Isotype Ctrl，第三組腹腔注射MHG8(陽性對照)，劑量為20mg/kg，第四組腹腔注射JYB1907hz18，劑量為20mg/kg，給藥頻率一週兩次，共給藥12次。每週兩次對小鼠進行稱重，GvHD評分，並統計生存率。GvHD評分標準如表8所示。當小鼠體重減輕超過25%，對小鼠進行安樂死處理。
表8 GvHD評分標準
到第42天實驗結束，第一組小鼠死亡4隻，第二組小鼠死亡3隻，第三組和第四組還有5隻小鼠未死亡。第二組因為加入了Treg細胞，抑制了PBMC在體內的擴增，所以延緩了GvHD的發生時間，而給藥MHG8和JYB1907hz18的第三組和第四組，藥物抑制了Treg的作用，與第一組相比，GvHD的評分和死亡率均較高，結果如圖8A及圖8B所示：圖8A表示待測抗體用於小鼠的GvHD的評分；圖8B表示待測抗體用於小鼠的存活率。
實施例11 JYB1907hz18抗體在人黑色素瘤A375小鼠腫瘤模型中的藥效檢測
NOG-DKO小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，7-8週齡，雌性，共48隻。凍存PBMC購自妙通(上海)生物科技有限公司。A375人黑色素瘤細胞購自ATCC。復蘇PBMC，每隻小鼠尾靜脈注射6E6數量的PBMC，建立人源化小鼠模型。一週後收集擴增培養後的A375細胞與基質膠混勻之後以2E6數量接種於NOG-DKO小鼠皮下。待腫瘤體積長到100mm3進
行隨機分組，每組8隻小鼠，當天給藥。G1組給藥同型對照，劑量20mg/kg；G2組給藥MHG8(陽性對照)，劑量20mg/kg；G3組給藥JYB1907hz18，劑量20mg/kg；G4組給藥Tencentriq，劑量10mg/kg；G5組給藥MHG8(劑量20mg/kg)和Tencentriq(劑量10mg/kg)；G6組給藥JYB1907hz18(劑量20mg/kg)和Tencentriq(劑量10mg/kg)。所有給藥方式均為腹腔注射，一週兩次，共給藥8次。
在分組後第28天，G1組的平均腫瘤體積為1110±104mm3，G2組的平均腫瘤體積為1088±116mm3，G3組的平均腫瘤體積為1000±233mm3，G4組的平均腫瘤體積為834±155mm3，G5組的平均瘤重611±146mm3，G6組平均腫瘤體積為471±87mm3，G5組有50%的抑瘤率，G6組有64%抑瘤率。G5和G6組相對於G1組均有統計學差異(G5 vs G1,G6 vs G1)，G5 vs G1,P<0.05；G6vs G1,P<0.001.其他組均無統計學差異。證明MHG8與Tecentriq(抗PD-L1抗體)，JYB1907hz18與Tecentriq(抗PD-L1抗體)聯用均有抑制腫瘤生長的作用，結果如圖9所示。
實施例12 JYB1907hz18抗體在人乳腺癌JIMT-1小鼠腫瘤模型中的藥效學研究
NOG-DKO小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，7-8週齡，雌性，共24隻。凍存PBMC購自妙通(上海)生物科技有限公司。JIMT-1人乳腺癌細胞購自ATCC。復蘇PBMC，每隻小鼠尾靜脈注射6E6數量的PBMC，建立人源化小鼠模型。一週後收集擴增培養後的JIMT-1細胞與基質膠混勻之後以3E6數量接種於NOG-DKO小鼠背部皮下。待腫瘤體積長到100
mm3左右進行隨機分組，每組8隻動物，當天給藥。G1組給藥同型對照，劑量20mg/kg；G2組給藥JYB1907hz18，劑量20mg/kg；G3組給藥Tecentriq，劑量10mg/kg。所有給藥方式均為腹腔注射，一週兩次，共給藥8次。
在分組後第28天，G1組的平均腫瘤體積為740±57mm3，G2組的平均腫瘤體積為426±45mm3，G3組的平均腫瘤體積為469±72mm3，G2組有52%的抑瘤率，G3組有45%的抑瘤率。G2和G3組相對於G1組(G2 vs G1,G3 vs G1)均有統計學差異，G2 vs G1，P<0.001；G3 vs G1，P<0.01。證明JYB1907hz18單用和Tecentriq(抗PD-L1抗體)單用均有抑制腫瘤生長的作用，其中JYB1907hz18相比於Tecentriq(抗PD-L1抗體)有更好的抑制腫瘤生長的作用，結果如圖10所示。
實施例13 JYB1907hz18抗體在人肺鱗癌EBC-1小鼠腫瘤模型中的藥效學研究
NOG-DKO小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，7-8週齡，雌性，共24隻。凍存PBMC購自妙通(上海)生物科技有限公司。EBC-1人乳腺癌細胞購自ATCC。復蘇PBMC，每隻小鼠尾靜脈注射6E6數量的PBMC，建立人源化小鼠模型。一週後收集擴增培養後的EBC-1細胞與基質膠混勻之後以3E6數量接種於NOG-DKO小鼠背部皮下。待腫瘤體積長到100mm3左右進行隨機分組，每組8隻動物，當天給藥。G1組給藥同型對照，劑量20mg/kg；G2組給藥JYB1907hz18，劑量20mg/kg；G3組給藥Tecentriq，劑量10mg/kg。所有給藥方式均為腹腔注射，一週兩次，共給藥8次。
在分組後第24天，G1組的平均腫瘤體積為1273±212mm3，G2組的平均腫瘤體積為797±113mm3，G3組的平均腫瘤體積為842±115mm3，G2組有42%的抑瘤率，G3組有38%的抑瘤率。從腫瘤生長趨勢圖來看，在此癌種上JYB1907hz單用和Tecentriq(抗PD-L1抗體)單用均有抑制腫瘤生長的趨勢，結果如圖11所示。
<110> 大陸商上海濟煜醫藥科技有限公司(SHANGHAI JEMINCARE PHARMACEUTICAL CO.,LTD.) 大陸商江西濟民可信集團有限公司(JIANGXI JEMINCARE GROUP CO.,LTD.)
<120> GARP蛋白抗體及其應用
<130> 0134-PA-024TW
<160> 54
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 VH；1907hz0 VH
<400> 1
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 HCDR1；1907hz0 HCDR1；JYB1907hz18 HCDR1
<400> 2
<210> 3
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 HCDR2；JYB1907hz0 HCDR2；JYB1907hz18 HCDR2
<400> 3
<210> 4
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 HCDR3；JYB1907hz0 HCDR3；JYB1907hz18 HCDR3
<400> 4
<210> 5
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 H-FR1；1907hz0 H-FR1
<400> 5
<210> 6
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 H-FR2；1907hz0 H-FR2
<400> 6
<210> 7
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 H-FR3；1907hz0 H-FR3
<400> 7
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 H-FR4；1907hz0 H-FR4
<400> 8
<210> 9
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 VL；1907hz0 VL
<400> 9
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 LCDR1；1907Hz0 LCDR1
<400> 10
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 LCDR2；1907Hz0 LCDR2
<400> 11
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 LCDR3；1907Hz0 VL LCDR3；JYB1907hz18 LCDR3
<400> 12
<210> 13
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 L-FR1；1907hz0 L-FR1
<400> 13
<210> 14
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 L-FR2；1907hz0 L-FR2；1907hz18 L-FR2
<400> 14
<210> 15
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 L-FR3；1907Hz0 L-FR3
<400> 15
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 L-FR4；1907Hz0 L-FR4
<400> 16
<210> 17
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重鏈恆定區
<400> 17
<210> 18
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 輕鏈恆定區
<400> 18
<210> 19
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907hz0重鏈
<400> 19
<210> 20
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907Hz0輕鏈
<400> 20
<210> 21
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> JYB1907hz18 VH
<400> 21
<210> 22
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907Hz18 H-FR1
<400> 22
<210> 23
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907Hz18 H-FR2
<400> 23
<210> 24
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907Hz18 H-FR3
<400> 24
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907Hz18 H-FR4
<400> 25
<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> JYB1907hz18 VL
<400> 26
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> JYB1907hz18 LCDR1
<400> 27
<210> 28
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> JYB1907hz18 LCDR2
<400> 28
<210> 29
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907Hz18 L-FR1
<400> 29
<210> 30
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907Hz18 L-FR3
<400> 30
<210> 31
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1907Hz18 L-FR4
<400> 31
<210> 32
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> JYB1907hz18重鏈
<400> 32
<210> 33
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> JYB1907hz18輕鏈
<400> 33
<210> 34
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體VH
<400> 34
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體HCDR1
<400> 35
<210> 36
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體HCDR2
<400> 36
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體HCDR3
<400> 37
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體VL
<400> 38
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體LCDR1
<400> 39
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體LCDR2
<400> 40
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體LCDR3
<400> 41
<210> 42
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體 重鏈
<400> 42
<210> 43
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗PD-L1抗體 輕鏈
<400> 43
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 LCDR1；1907Hz0 VL LCDR1；JYB1907hz18 LCDR1通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa=Lys或Arg
<400> 44
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 LCDR2；1907Hz0 VL LCDR2；JYB1907hz18 LCDR2通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa=Ser或Thr
<400> 45
<210> 46
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 H-FR1；1907Hz0 H-FR1；1907Hz18 H-FR1通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa=Gln或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa=Leu或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa=Lys或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> Xaa=Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa=Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> Xaa=Leu或Val
<400> 46
<210> 47
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 H-FR2；1907Hz0 H-FR2；1907Hz18 H-FR2通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa=Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa=Ala或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa=Gly或Ile
<400> 47
<210> 48
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 H-FR3；1907Hz0 H-FR3；1907Hz18 H-FR3通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa=Lys或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa=Asp或Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa=Ala或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(25)
<223> Xaa=Glu或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(30)
<223> Xaa=Arg或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (34)..(34)
<223> Xaa=Ser或Thr
<400> 48
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 H-FR4；1907Hz0 H-FR4；1907Hz18 H-FR4通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa=Gln或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa=Met或Thr
<400> 49
<210> 50
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 VH；1907Hz0 VH；JYB1907hz18 VH通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa=Gln或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa=Leu或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa=Lys或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> Xaa=Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa=Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> Xaa=Leu或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (38)..(38)
<223> Xaa=Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (40)..(40)
<223> Xaa=Ala或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (42)..(42)
<223> Xaa=Gly或Ile
<220>
<221> misc_feature
<222> (65)..(65)
<223> Xaa=Lys或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (66)..(66)
<223> Xaa=Asp或Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (68)..(68)
<223> Xaa=Ala或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (76)..(76)
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (82)..(82)
<223> Xaa=Glu或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> Xaa=Arg或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (91)..(91)
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (115)..(115)
<223> Xaa=Gln或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (118)..(118)
<223> Xaa=Met或Thr
<400> 50
<210> 51
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 VL；1907Hz0 VL；JYB1907hz18 VL通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa=Pro或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa=Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa=Thr或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> Xaa=Ala或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa=Leu或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)..(17)
<223> Xaa=Asp或Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> Xaa=Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (56)..(56)
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (58)..(58)
<223> Xaa=Ile或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (76)..(76)
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (77)..(77)
<223> Xaa=Gly或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (80)..(80)
<223> Xaa=Pro或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> Xaa=Asp或Glu
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> Xaa=Phe或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (100)..(100)
<223> Xaa=Gly或Gln
<400> 51
<210> 52
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 L-FR1；1907Hz0 L-FR1；1907Hz18 L-FR1通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa=Pro或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa=Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa=Thr或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> Xaa=Ala或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa=Leu或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)..(17)
<223> Xaa=Asp或Gly
<400> 52
<210> 53
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 L-FR3；1907Hz0 L-FR3；1907Hz18 L-FR3通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa=Ile或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (18)..(18)
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> Xaa=Gly或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> Xaa=Pro或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(25)
<223> Xaa=Asp或Glu
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(27)
<223> Xaa=Phe或Val
<400> 53
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 8H2D7B3 L-FR4；1907Hz0 L-FR4；1907Hz18 L-FR4通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa=Gly或Gln
<400> 54
Claims (26)
- 一種分離的抗原結合蛋白，其具有下述性質中的一種或多種：a)在Octet測定中，以約1.0E-12或更低的K D 值與人GARP/人TGF-β 1複合物結合；b)不與只表達人GARP的細胞或只表達人TGF-β 1的細胞結合；c)抑制Treg細胞中的SMAD2磷酸化；d)抑制表達人GARP/人TGF-β 1的HEK293T細胞釋放TGF-β 1；e)阻止Treg細胞對人外周血單個核細胞(PBMC)釋放IL-2和IFN-γ的抑制；f)在人PBMC移植小鼠的GvHD模型中，阻斷Treg細胞對該人PBMC引起的GvHD的抑制作用。
- 如請求項1所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR3、HCDR2和/或HCDR1，該HCDR3包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列：該HCDR2包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；以及該HCDR1包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列。
- 如請求項1或2所述的分離的抗原結合蛋白，其包含重鏈可變區VH，該VH包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
- 如請求項3所述的分離的抗原結合蛋白，其中該VH包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：21中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至4中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR3、LCDR2和/或LCDR1，該LCDR3包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列；該LCDR2包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列；以及該LCDR1包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至5中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：28中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至6中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：27中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項5或6所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR1、LCDR2、LCDR3包含選自下述任意一組的胺基酸序列：a)LCDR1：SEQ ID NO：10，LCDR2：SEQ ID NO：11和LCDR3：SEQ ID NO：12；b)LCDR1：SEQ ID NO：27，LCDR2：SEQ ID NO：28和LCDR3：SEQ ID NO：12。
- 如請求項1至8中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈可變區VL，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至9中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈可變區VL，該VL包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：26中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至10中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含重鏈HC，該HC包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：32中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至11中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含輕鏈LC，該LC包含SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：33中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項12所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HC和LC包含選自下述任意一組的胺基酸序列：a)HC：SEQ ID NO：19和LC：SEQ ID NO：20：b)HC：SEQ ID NO：32和LC：SEQ ID NO：33。
- 如請求項1至13中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包括抗體或其抗原結合片段。
- 一種多肽，其包含如請求項1至14中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
- 一種免疫綴合物，其包含如請求項1至14中任一項所述的分離的抗原結合蛋白或如請求項15所述的多肽。
- 一種分離的核酸分子，其編碼如請求項1至14中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，或者如請求項15所述的多肽。
- 一種載體，其包含如請求項17所述的分離的核酸分子。
- 一種細胞，其包含如請求項1至14中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、如請求項15所述的多肽、如請求項16所述的免疫綴合物、如請求項17所述的分離的核酸分子和/或如請求項18所述的載體。
- 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至14中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、如請求項15所述的多肽、如請求項16所述的免疫綴合物、如請求項17所述的分離的核酸分子、如請求項18所述的載體、如請求項19所述的細胞，和/或藥學上可接受的佐劑和/或賦形劑。
- 一種藥物組合，其包含如請求項1至14中任一項所述的分離的抗原結合蛋白和免疫檢查點抑制劑。
- 一種試劑盒，其包含如請求項21所述的藥物組合。
- 如請求項1至14中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、如請求項15所述的多肽、如請求項16所述的免疫綴合物、如請求項17所述的分離的核酸分子、如請求項18所述的載體，如請求項19所述的細胞、如請求項20所述的醫藥組成物、如請求項21所述的藥物組合和/或如請求項22所述的試劑盒在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
- 如請求項23所述的用途，其中該腫瘤包括實體瘤。
- 如請求項23或24所述的用途，其中該腫瘤包括與GARP的表達相關的腫瘤。
- 如請求項23至25中任一項所述的用途，其中該腫瘤包括黑色素瘤、乳腺腫瘤和/或肺腫瘤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110065290 | 2021-01-18 | ||
| CN202110065290.8 | 2021-01-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202241955A true TW202241955A (zh) | 2022-11-01 |
Family
ID=82446943
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW111101854A TW202241955A (zh) | 2021-01-18 | 2022-01-17 | Ｇａｒｐ蛋白抗體及其應用 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20240117034A1 (zh) |
| EP (1) | EP4279509A1 (zh) |
| JP (1) | JP2024502670A (zh) |
| KR (1) | KR20230169936A (zh) |
| CN (1) | CN116710125A (zh) |
| AU (1) | AU2022207029A1 (zh) |
| BR (1) | BR112023014319A2 (zh) |
| CA (1) | CA3208624A1 (zh) |
| IL (1) | IL304453A (zh) |
| TW (1) | TW202241955A (zh) |
| WO (1) | WO2022152285A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20240042020A1 (en) * | 2022-07-29 | 2024-02-08 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Anti-garp-tgf-beta1/pd-1 combination therapy |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5639641A (en) | 1992-09-09 | 1997-06-17 | Immunogen Inc. | Resurfacing of rodent antibodies |
| KR20220025174A (ko) * | 2013-08-01 | 2022-03-03 | 위니베르시트카솔리끄드루뱅 | 항garp 단백질 항체와 그 용도 |
| EP3253796A1 (en) * | 2015-02-03 | 2017-12-13 | Université Catholique de Louvain | Anti-garp protein and uses thereof |
| CN109071646A (zh) * | 2016-03-11 | 2018-12-21 | 供石公司 | TGFβ1-结合免疫球蛋白及其用途 |
| GB201707561D0 (en) * | 2017-05-11 | 2017-06-28 | Argenx Bvba | GARP-TGF-beta antibodies |
-
2022
- 2022-01-17 US US18/272,826 patent/US20240117034A1/en active Pending
- 2022-01-17 EP EP22739160.4A patent/EP4279509A1/en active Pending
- 2022-01-17 CA CA3208624A patent/CA3208624A1/en active Pending
- 2022-01-17 KR KR1020237027472A patent/KR20230169936A/ko unknown
- 2022-01-17 BR BR112023014319A patent/BR112023014319A2/pt unknown
- 2022-01-17 TW TW111101854A patent/TW202241955A/zh unknown
- 2022-01-17 AU AU2022207029A patent/AU2022207029A1/en active Pending
- 2022-01-17 CN CN202280010421.5A patent/CN116710125A/zh active Pending
- 2022-01-17 JP JP2023542963A patent/JP2024502670A/ja active Pending
- 2022-01-17 WO PCT/CN2022/072265 patent/WO2022152285A1/zh active Application Filing
-
2023
- 2023-07-13 IL IL304453A patent/IL304453A/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2022207029A1 (en) | 2023-08-17 |
| CN116710125A (zh) | 2023-09-05 |
| IL304453A (en) | 2023-09-01 |
| EP4279509A1 (en) | 2023-11-22 |
| US20240117034A1 (en) | 2024-04-11 |
| CA3208624A1 (en) | 2022-07-21 |
| JP2024502670A (ja) | 2024-01-22 |
| KR20230169936A (ko) | 2023-12-18 |
| BR112023014319A2 (pt) | 2023-09-26 |
| WO2022152285A1 (zh) | 2022-07-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI757304B (zh) | Lag-3抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 | |
| WO2018205985A1 (zh) | 含有TGF-β受体的融合蛋白及其医药用途 | |
| CN112500485B (zh) | 一种抗b7-h3抗体及其应用 | |
| CN110790839B (zh) | 抗pd-1抗体、其抗原结合片段及医药用途 | |
| WO2020168555A1 (zh) | Cd3抗原结合片段及其应用 | |
| CN111094339B (zh) | 抗pd-1抗体和抗lag-3抗体联合在制备***的药物中的用途 | |
| JPWO2012176765A1 (ja) | 抗ヒトｐ−カドへリン（ｃｄｈ３）遺伝子組み換え抗体 | |
| CN115812081A (zh) | 抗ctla-4抗体及其用途 | |
| WO2023125888A1 (zh) | 一种gprc5d抗体及其应用 | |
| JP2024514246A (ja) | Ｃｌｄｎ１８．２抗原結合タンパク質およびその使用 | |
| WO2022152285A1 (zh) | Garp蛋白抗体及其应用 | |
| WO2023280297A1 (zh) | Cd19抗体及其应用 | |
| CN114075283A (zh) | 结合人cd38的抗体、其制备方法和用途 | |
| CN111848794A (zh) | 一种分离的lag-3结合蛋白及其应用 | |
| CN115521378B (zh) | Pd-l1抗体及其用途 | |
| CN114773485B (zh) | 抗人PD-L1抗体和TGFβRII的双功能融合蛋白分子 | |
| CN115521379B (zh) | Pd-1抗体及其用途 | |
| CN116419970B (zh) | 低毒性抗ox40抗体、其药物组合物及应用 | |
| WO2022257900A1 (zh) | 抗masp-2抗体及其用途 | |
| WO2022247826A1 (zh) | 靶向pd-l1和cd73的特异性结合蛋白 | |
| CN114773485A (zh) | 抗人PD-L1抗体和TGFβRII的双功能融合蛋白分子 | |
| CN114907476A (zh) | 抗tigit抗体及其用途 | |
| CN116102655A (zh) | 靶向pd-l1/pd-1的抗体及其应用 | |
| CN117567614A (zh) | 抗cd73抗体及其用途 | |
| CN116606373A (zh) | 新型冠状病毒中和抗体及其用途 |