TW202235077A - Usp7結合存活靶向嵌合(surtac)分子及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供包括USP7結合域之嵌合分子及其用途，其用於使泛素化蛋白質去泛素化，及/或用於治療有需要之個體的疾病。此外，本發明揭示包括與目標蛋白結合域連接之USP7結合域的存活靶向嵌合(SURTAC)分子以及其用於去泛素化及治療疾病之用途。在一些情況下，該目標蛋白為泛素化蛋白質，其中結合USP7酶可以蛋白分解方式自該目標泛素化蛋白質移除泛素。

Description

USP7結合存活靶向嵌合(SURTAC)分子及其用途
本文揭示嵌合分子，其包括與去泛素化酶7 (又稱為泛素羧基端水解酶7或泛素特異性加工蛋白酶7 (USP7))之結合區。在一些情況下，此等嵌合分子為雙官能性且進一步包括與泛素化蛋白質之結合區。本文揭示之雙官能性嵌合分子包含存活靶向嵌合(SURTAC)分子，其經設計以使USP7酶與目標泛素化蛋白質極為接近且藉此去泛素化及減少此等特異性目標蛋白質之細胞降解。本文揭示使用包括SURTAC之嵌合分子以增加靶向泛素化蛋白質之穩定性及/或存活期及治療疾病的方法。
活細胞內任何蛋白之濃度係藉由蛋白質合成與蛋白質降解之平衡來測定經調節之蛋白質降解係精確控制細胞內之個別蛋白質含量的關鍵。
泛素(Ub)係由76個胺基酸組成之小蛋白質，其在調節細胞中蛋白質之半衰期中至關重要。蛋白質藉由在稱為泛素化之過程中與泛素共價結合而進行轉譯後修飾。
泛素可經由三種酶之連續作用共價連接至多肽受質上之離胺酸殘基：泛素活化酶(E1)；泛素結合酶(E2)；及催化泛素轉移至受質的泛素連接酶(E3)。泛素含有七個離胺酸殘基(K6、K11、K27、K29、K33、K48、K63)，其連同其N端甲硫胺酸(Met1)可充當二級連接點以製成具有不同結構及功能之不同聚泛素鏈。泛素化通常歸屬於靶向胞溶質蛋白以供蛋白酶體降解。相比之下，膜蛋白之泛素化可引起更細微的結果，包括調節蛋白質運輸/分選、穩定性及/或功能。
與目標結合的聚泛素鏈之類型及數目經高度調節以產生影響不同生理過程之不同訊號。此變通性起因於以下事實：不僅目標可經單泛素化或聚泛素化，而且會形成不同類型的聚泛素鏈。在泛素之調節功能中，聚泛素化可標記用於蛋白酶體介導之降解的經修飾之蛋白質。靶向以供細胞中之蛋白酶體降解的蛋白質經三種或更多種泛素分子「標記」(聚泛素化)。單個泛素分子(單泛素化)之結合通常不靶向供降解之單泛素化蛋白質。蛋白質泛素化為動態雙向過程，其可藉由去泛素化(去泛素化酶，DUB)酶逆轉或調節。
蛋白酶體為藉由蛋白質水解使蛋白質降解的蛋白質複合物，該蛋白質水解係使肽鍵斷裂的化學反應。蛋白酶體形成泛素-蛋白酶體系統(UPS)之關鍵組件。蛋白質泛素化及後續蛋白質水解及藉由蛋白酶體之降解係調節蛋白質之半衰期中的重要機制。UPS亦在蛋白質品質控制中起作用，從而迅速識別及破壞摺疊異常的蛋白質。
全部已知Ub鏈之解析結構係獨特的，在很大程度上表明各鍵聯之形成及水解係由一組特定的結合酶及DUB催化。最近，已鑑別出新穎的Ub鏈且此等鏈包括具有異質鍵聯的不可降解「分叉」鏈。泛素化已與人類之包括但不限於以下的疾病及病症相關：癌症，諸如囊腫纖維化、心律不整、癲癇及神經痛之遺傳性病症以及促進不同病毒及細菌病原體之病原性生命週期的傳染性疾病。
去泛素化酶(DUB)為經由泛素鏈之修正及移除而提供突出的泛素傳信的專用異肽酶。存在超過100種人類DUB，包含6個不同家族：1)泛素特異性蛋白酶(USP)家族、2)卵巢腫瘤蛋白酶(OUT)家族、3)泛素C端水解酶(UCH)家族、4) Josephin域家族(Josephin)、5)與含泛素之新穎DUB家族交互的模體(MINDY)及6) JAB1/MPN/Mov34金屬酶域家族(JAMM)。值得注意的是，與含有具有不同鍵聯偏好之不同酶集合的OTU家族形成鮮明對比，USP家族係相對混雜的，能水解所有泛素鍵聯。將鍵聯特異性的DUB純化且用於無細胞之活體外分析中。
對於去泛素化酶(DUB)在泛素化蛋白質上執行其活性，其包含至少一個催化域。催化域為與附接至目標蛋白之泛素接觸且自目標蛋白移除泛素的結構域。
去泛素化酶7，又稱為泛素羧基端水解酶7 (Uniprot ID=Q93009)、疱疹病毒相關之泛素特異性蛋白酶、泛素硫酯酶7及泛素特異性加工蛋白酶7 (USP7)為泛素特異性蛋白酶(USP)。USP7裂解直鏈及分支鏈多泛素聚合物，且使單泛素化受質及聚泛素化受質去泛素化。USP7已展示使諸如p53 (腫瘤抑制因子蛋白質)及WASH (核內體蛋白質再循環所必需的)之目標蛋白去泛素化，且藉由抵消參與各別過程的諸如HDM2及TRIM27之蛋白質的相對泛素連接酶活性來調節其活性。
囊腫纖維化(CF)為由編碼囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白(CFTR)之基因的突變所引起之體染色體隱性遺傳病症，該等突變導致CFTR之功能缺失。疾病發生率在高加索人群體中為2000至3000名新生兒中有1名患病，而在天然非洲人及亞洲人中非常低。
囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白(CFTR)基因編碼負責輔助調節各種組織中之鹽及水吸收及分泌的上皮離子通道。CFTR蛋白質為1480個胺基酸質膜蛋白質，其屬於ATP結合卡匣(ABC)轉運體之超家族。CFTR結構由以下組成：胞溶質N端接著六個跨膜螺旋、核苷酸結合域(NBD1)、調節(R)域、六個額外的跨膜螺旋、第二核苷酸結合域(NBD2)及胞溶質C端(Riordan，Annu Rev Biochem 77:701-726，2008)。跨膜螺旋形成可透過氯離子、碳酸氫根、碘離子及其他陰離子之孔隙。打開孔隙需要藉由cAMP依賴性蛋白激酶A使R域磷酸化以及結合藉由NBD1及NBD2之組裝所形成的兩個囊袋中的兩個ATP分子。
CFTR係在多種細胞類型中，且特定言之在各種器官(包括肺、胰臟、肝臟及腸道)之上皮細胞中表現的cAMP/ATP調節陰離子通道(Mall及Hartl，Eur Respir J 44:1042-1054，2014)。增加胞內cAMP含量之生理訊號誘發CFTR活化。在大多數組織中，打開CFTR孔隙導致氯離子及碳酸氫根分泌。一個值得注意的例外係汗腺管道，其中CFTR介導氯離子吸收而非分泌。
在上皮細胞中，CFTR之功能正常對維持全身(包括呼吸道及消化組織)之電解質輸送至關重要。藉由CF中出現之嚴重病理性表現證實了CFTR之重要作用。在肺中，CFTR依賴性陰離子分泌之缺乏削弱了黏液纖毛清除及先天性抗微生物機制(Collawn及Matalon，Am J Physiol 307:L917-L923，2014)。因此，氣道移生有觸發嚴重發炎性反應及呼吸功能之漸進式缺失(包括慢性肺病)的抗生素抗性細菌。
除呼吸道疾病以外，CF患者通常遭受腸胃問題及胰臟功能不全。若不進行治療，則CF會導致死亡。另外，大部分患有CF之男性不育且患有CF之女性的生育力降低。相比於CF相關基因之兩個複本的嚴重作用，具有CF相關基因之單個複本的個體可展現出對由腹瀉引起之脫水的抗性增加。此異型合子優勢可解釋群體內相對高頻之CF基因。
CF患者之CFTR基因之序列分析已揭露多種致病突變(Cutting, G. R.等人(1990) Nature 346:366-369；Dean, M.等人(1990) Cell 61:863:870；Kerem, B-S等人(1989) Science 245:1073-1080；Kerem, B-S等人 (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8447-8451)。迄今為止，已鑑別出超過2000個引起CF之CF基因突變，包括6類蛋白質分子缺陷(第I類：CFTR蛋白質合成之過早停止；第II類：CFTR蛋白質之有缺陷的成熟及胞內定位；第III類：CFTR孔隙之打開受損；第IV類：降低CFTR孔隙易位陰離子之能力；第V類：因為變異之RNA剪接而降低蛋白質合成；及第VI類：CFTR於質膜處之穩定性降低導致內化及降解加速)。
大部分突變具有低或極低頻率(Bobadilla等人，Hum Mutat 19:575-606, 2002)。然而，單突變F508del存在於50-90%之CF患者中。F508del，亦即NBD1內位置508處之***酸缺失，導致CFTR蛋白質之多個缺陷(Okiyoneda等人，Nat Chem Biol 9:444-454, 2013)。首先，F508del-CFTR摺疊及穩定性嚴重受損。由NBD1之固有不穩定性及NBD1與胞溶質環4之間的相互作用引起的此類問題在很大程度上減少F508del-CFTR運輸至質膜(運輸缺陷)。實際上，突變CFTR保持截留於內質網(ER)中，於其中藉由泛素-蛋白酶體系統迅速降解(Lukacs及Verkman，Trends Mol Med 18:81-91，2012)。由F508del引起之第二缺陷係開放通道機率(亦即通道在打開狀態下所耗費之時間分數)減少(閘控缺陷)。此外，若藉由拯救操縱移動至質膜，則F508del-CFTR亦展示半衰期減少。由於此類缺陷，F508del突變合併了第II類、第III類及第VI類特徵。
運輸及閘控缺陷通常亦可藉由其他CF突變單獨地造成。舉例而言，定義為第II類突變的G85E、L1077P、A455E及N1303K削弱了CFTR運輸(Van Goor等人，J Cyst Fibros 13:29-36，2014)。實際上，定義為第III類突變的G551D、G1349D、G178R及G970R並不影響運輸但在很大程度上減少CFTR打開時間(Yu等人，J Cyst Fibros 11:237-245, 2012)。
儘管CF之治療有進展，但無法治癒。仍需要藉由直接以改善及恢復個體中CFTR之功能為目標來治療個體之CF。
聚(ADP-核糖)聚合酶-1 (PARP-1)已涉及多種細胞過程，諸如DNA損壞修復(DDR)、細胞凋亡及基因體穩定性。PARP-1結合DNA單股斷裂(鏈裂)且傳訊DDR過程。PARP-1之抑制劑(PARPi)結合於DNA上之PARP-1且誘導『經捕獲之』PARP-DNA複合物之累積。此導致潛在有毒的DNA鏈斷裂之累積，該等斷裂可證實對細胞具有致死性。
健康的非腫瘤細胞保留解毒此等捕獲之PARP-DNA複合物且存活的能力。利用PARPi靶向癌細胞中之合成致死性作用機制。不同於靜止的健康細胞，腫瘤細胞不能恰當地修復此等『經捕獲之』PARP-DNA複合物。因此，腫瘤細胞被DNA股斷裂缺陷擊敗並且死亡。所捕獲之PARP-DNA複合物的量似乎與PARPi腫瘤學藥物之臨床功效有關。
本發明描述嵌合分子及其用於定向蛋白質拯救(TPR)之用途，其中靶向可(1)增加蛋白質(例如但不限於CFTR)之功能突變型或摺疊異常形式的濃度以便校正摺疊、強化活性、恢復功能及/或擴增CFTR蛋白質之功能，且藉此治療CF；或可(2)增加野生型蛋白質(例如但不限於PARP)之局部濃度，以便保持PARP-DNA捕獲活性且藉此增加腫瘤細胞中之DNA損壞、細胞應力及細胞死亡。
在一個態樣中，本文提供一種包含第一結合域之嵌合分子，其中該第一結合域包含結合泛素羰基端蛋白酶7酶之USP7結合劑。在另一態樣中，包含該USP7結合劑之第一結合域由 式 (1)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
Figure 02_image003
(1)， 其中： W 1至W 13各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺基、CN、-NHC(O)R 6、-C(O)OR 6、-OC(O)R 6、C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH、-C(O)-烷基、-C(O)O-烷基、-C(O)NH-烷基或SH； X 1至X 12各自獨立地為C或N； R 1為鍵結、烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、C(O)-烷基、-烷基-O-烷基、烷基-NH-烷基、烷基-雜環-環-R 3、
Figure 02_image005
； n為0與10之間的整數； R 3為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、-C(O)、-C(O)S、-SO 2、-S(O)、C(O)OC(O)、酯或醯胺基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基； 其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代；且 其中若X 1至X 12各自獨立地為N，則對應取代基W 2至W 13不存在。
在一相關態樣中，包含該USP7結合劑之第一結合域由 式 (2)之結構或其醫藥鹽表示：
Figure 02_image007
(2)， 其中： W 2至W 5及W 8至W 13各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺、CN、-NHCOR 6、-OC(O)R 6、C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH或SH； R 2為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜環烷基-CO、胺、醯胺基、酯、-O-烷基、烷基-COOH、-CH 2-COOH、-NH-烷基、-CH 2-芳基、-雜環-環-R 3或
Figure 02_image009
； n為0與10之間的整數； R 3為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、-C(O)、-C(O)S、-SO 2、-S(O)、C(O)OC(O)、酯或醯胺基； R 4及R 5各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、羥基、-CO-烷基、-C(O)O-烷基或-C(O)NH-烷基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基；且 其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。
在另一相關態樣中，USP7結合劑由 式 (6)之結構或其醫藥鹽表示：
Figure 02_image011
(6)。
在又一相關態樣中，USP7結合劑由式(7)之結構或其醫藥鹽表示：
Figure 02_image013
(7)。
在另一態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含如上文所描述之包含選自式1至7中之任一者或其醫藥鹽的USP7結合域的嵌合分子，及醫藥學上可接受之載劑。
在另一態樣中，本文所揭示之嵌合分子進一步包含第二結合域，其中該第二結合域包含經設計以結合於泛素化蛋白質之目標結合劑。在一相關態樣中，目標結合劑包含結合於泛素化蛋白質之抗體或其抗原結合片段；或結合於泛素化蛋白質之配位體。在另一相關態樣中，目標結合劑直接結合於泛素化蛋白質。在又一相關態樣中，目標結合劑結合與泛素化蛋白質結合之中間分子。在一相關態樣中，泛素化蛋白質包含CFTR (囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白)蛋白質或PARP1 (聚(ADP-核糖)聚合酶-1)蛋白質。在一相關態樣中，泛素化蛋白質包含蛋白激酶A (PKA)。在一相關態樣中，包含該目標結合劑之第二結合域包含由式A至K中之任一者表示的結構：
Figure 02_image015
Figure 02_image017
Figure 02_image019
Figure 02_image021
。在一相關態樣中，包含該目標結合劑之第二結合域包含由式(L)至(N)表示之結構：
Figure 02_image023
(N) (未展示連接點)。在一相關態樣中，式(L)至(N)亦可示出為：
Figure 02_image025
Figure 02_image027
。在一些實施例中，第二結合域包含式(M)之結構的鹽，諸如三乙銨鹽
Figure 02_image029
(未展示連接點)。
在另一態樣中，本文所揭示之嵌合分子包含經設計以將第一結合域連接至第二結合域之連接子域。在一相關態樣中，連接子域將第一結合域共價地連接至第二結合域。在另一相關態樣中，連接子域將第一結合域非共價地連接至第二結合域。在另一相關態樣中，連接子域包含選自由以下組成之群的結構：聚乙二醇、芳族基、烷基、烯基、磷酸烷基酯、烷基矽氧烷、環氧基、醯基鹵化物、縮水甘油基、羧酸酯、烷基胺、烷基醯胺、酸酐或其任何組合；或天然或合成來源之多肽，其具有2至18個碳原子之間的鏈長。在另一相關態樣中，連接子由式(i)至(xxiii)之結構中之任一者表示：
Figure 02_image031
Figure 02_image033
Figure 02_image035
。
在另一態樣中，本文揭示之嵌合分子由以下任一者之結構表示：嵌合分子I：
Figure 02_image037
， 嵌合分子II：
Figure 02_image039
，嵌合分子III：
Figure 02_image041
， 嵌合分子IV：
Figure 02_image043
， 嵌合分子V：
Figure 02_image045
， 嵌合分子VI：
Figure 02_image047
， 嵌合分子VII：
Figure 02_image049
， 嵌合分子VIII：
Figure 02_image051
， 嵌合分子IX：
Figure 02_image053
， 嵌合分子X：
Figure 02_image055
， 嵌合分子XI：
Figure 02_image057
， 嵌合分子XII：
Figure 02_image059
， 嵌合分子XIII：
Figure 02_image061
, 嵌合分子XIV：
Figure 02_image063
， 嵌合分子XV：
Figure 02_image065
， 嵌合分子XVI：
Figure 02_image067
， 嵌合分子XVII：
Figure 02_image069
， 嵌合分子XVIII：
Figure 02_image071
， 嵌合分子XIX：
Figure 02_image073
或 嵌合分子XX：
Figure 02_image075
。
在另一態樣中，本文揭示之嵌合分子由表2及表3中提供之嵌合分子1至177中之任一者之結構表示。在一相關態樣中結構包含嵌合分子19、20、21或168。
在另一態樣中，本文揭示一種醫藥組合物，其包含嵌合分子及醫藥學上可接受之載劑。
在另一態樣中，本文揭示一種用於預防或減少泛素化蛋白質之降解的方法，其包含使泛素化蛋白質與本文所揭示之由表2及表3中提供之嵌合分子1至177中之任一者之結構表示的嵌合分子接觸，藉此預防或減少該泛素化蛋白質之降解。在另一態樣中，本文揭示一種用於自泛素化蛋白質移除至少一個泛素分子之方法，其包含使泛素化蛋白質與本文所揭示之由表2及表3中提供之嵌合分子1至177中之任一者之結構表示的嵌合分子接觸，藉此自該泛素化蛋白質移除至少一個泛素分子。在一相關態樣中，泛素化蛋白質包含泛素蛋白酶之非天然目標。
在另一態樣中，本文揭示一種治療有需要個體之疾病的方法，其包含投與治療有效量之包含本文所揭示之由表2及表3中提供之嵌合分子1至177中之任一者之結構表示之嵌合分子的醫藥組合物，藉此治療該有需要之個體的該疾病。在一相關態樣中，該疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮。在另一相關態樣中，疾病包含囊腫纖維化。在另一相關態樣中，投藥與至少一種額外的囊腫纖維化治療性化合物或治療組合進行。在另一相關態樣中，疾病包含癌症。在又一相關態樣中，癌症對用PARP抑制劑治療具有抗性。
交叉參考
本申請案主張2021年1月7日申請之美國臨時專利申請案第63/134,597號之權益，其以全文引用之方式併入本文中。
在以下詳細描述中，許多具體細節經闡述以提供對包含第一結合域之嵌合分子及其用途的充分理解，該第一結合域包含結合泛素羰基端蛋白酶7酶之去泛素化酶結合劑。在其他情況下，未詳細描述熟知的方法、程序及組分，以免混淆嵌合分子及其用途之描述。 嵌合分子
在某些實施例中，本文揭示一種包含第一結合域之嵌合分子，其中該第一結合域包含結合泛素羰基端蛋白酶7酶(泛素特異性加工蛋白酶7 (USP7))之去泛素化酶結合劑。如本文中所使用，在一些實施例中，術語「USP7結合劑」涵蓋結合泛素羰基端蛋白酶7酶之域。泛素羰基端蛋白酶7酶為提供酯、硫酯、醯胺、肽及由泛素(「Ub」) (附接至蛋白質(泛素化蛋白質)之76-殘基蛋白質)之C端Gly形成之異肽鍵之硫醇依賴性水解的去泛素化酶。
術語「嵌合分子」一般意謂所提及之分子由兩個或更多個在自然界中未一起發現於單一分子中的不同域或結構製成。在一些實施例中，本文所提供之嵌合分子包含至少兩個域：USP7結合域及另一個域。在一些實施例中，本文所提供之嵌合分子包含至少兩個在自然界中未一起發現於單一分子中之不同域或結構，亦即第一及第二結合域。在某些實施例中，本文所揭示之嵌合結構功能性結合USP7酶及目標泛素化蛋白質。在自然界中，未發現特異性地且同時結合USP7酶及如本文所描述之目標泛素化蛋白質的分子。在一些實施例中，本文提供之嵌合分子包含至少兩個在自然界中未一起發現於單一分子中之不同域或結構，亦即第一域及連接子域。在自然界中，未發現特異地且同時結合USP7並且包含如本文所描述之連接子域的分子。在一些實施例中，本文所提供之嵌合分子包含至少三個在自然界中未一起發現於單一分子中之不同域或結構，亦即結合USP7酶之第一域、結合目標泛素化(Ub)蛋白質之第二域，及連接USP7結合及目標泛素化蛋白質結合域之連接子域。在自然界中，未發現特異地且同時結合USP7及目標Ub蛋白質並且包含如本文所描述之連接子域的分子。
在一個態樣中，本文提供一種嵌合分子，其具有式(AA)之結構 BD1-LINKER-BD2， 式(AA) 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，其中 BD1為第一結合域，其中第一結合域包含結合USP7酶之泛素特異性加工蛋白酶7 (USP7)結合劑； BD2為第二結合域，其中第二結合域包含經設計以結合於泛素化蛋白質之目標結合劑；及 LINKER為連接子域，其將第一結合域共價或非共價地連接至第二結合域。
在某些實施例中，本文提供一種複合物，其包含USP7蛋白質、本發明之嵌合分子及目標蛋白。在一些實施例中，目標蛋白為Ub-CFTR。在一些實施例中，目標蛋白為Ub-PARP1。在一些實施例中，目標蛋白為Ub-PKA。
在一些實施例中，BD1為USP7結合劑，例如本文所描述之USP7結合劑。在一些實施例中，BD1包含式(1)至(7)、(1*)、(2*)或(6*)之結構。
在一些實施例中，BD2為目標結合劑。在一些實施例中，BD2結合於包含CFTR蛋白質之泛素化蛋白質。在一些實施例中，BD2結合於包含PARP1蛋白質之泛素化蛋白質。在一些實施例中，BD2結合於包含PKA蛋白質之泛素化蛋白質。在一些實施例中，BD2包含由式A至K、K*、K**、B*及B**表示之結構。
在一些實施例中，連接子域包含式(i)至(xxiv)之結構。
如本文中所使用，術語「去泛素化酶7」、「泛素羧基端水解酶7」、「疱疹病毒相關之泛素特異性蛋白酶」、「泛素硫酯酶7」、「泛素特異性加工蛋白酶7」及「USP7」可互換使用，具有相同含義及品質。在一些實施例中，USP7可選擇性且非共價地結合特異性目標泛素化蛋白質。在其他實施例中，USP7可非共價地結合非天然泛素化蛋白質目標。
熟悉此項技術者將瞭解，在一些實施例中，在USP7與先前未知目標之間的功能性相互作用的情況下，先前未知目標可涵蓋USP7之非天然目標，例如尚未知曉係USP7之受質的蛋白質。因此，本文所提供之嵌合分子所結合的Ub-蛋白質可為在USP7之當前已知受質列表以外的蛋白質。其可歸因於以下事實：在某些實施例中，已提出包括USP7之去泛素化酶功能上識別泛素-泛素鍵聯而非泛素-目標蛋白鍵聯，使得具有一或多個泛素-泛素鍵聯的任何蛋白質可為本文所提供之嵌合分子的目標蛋白。
在一個實施例中，由本文所提供之嵌合分子結合之Ub-蛋白質可與泛素蛋白酶USP7相互作用。此類Ub-蛋白質之實例包括但不限於UVSSA (UV刺激之支架蛋白質A)、XPC (著色性乾皮病C組補充蛋白質)、ABL1 (阿貝爾森酪胺酸-蛋白激酶1)、AR (雄性素受體)、ATXN1 (共濟失調蛋白-1)、CHEK1 (絲胺酸/蘇胺酸-蛋白激酶Chk1)、CHFR (E3泛素-蛋白質連接酶CHFR)、CLSPN (Claspin)、CSNK2A1 (酪蛋白激酶II次單元α)、DAXX (死亡域-相關蛋白6)、DNMT1 (DNA(胞嘧啶-5)-甲基轉移酶1)、FOXO1 (叉頭框蛋白質O1)、FOXO4 (叉頭框蛋白質O4)、GMPS (GMP合成酶)、IFNAR1 (I型干擾素受體1)、IKBKG (I-κ-B激酶次單元γ)、KAT5 (組蛋白乙醯基轉移酶KAT5)、KDM1A (離胺酸特異性組蛋白去甲基酶1A)、MARCHF7 (膜相關環-CH-型指7)、MDM2 (E3泛素-蛋白質連接酶Mdm2)、MDM4 (Mdm2類p53-結合蛋白)、MEX3C (RNA結合E3泛素-蛋白質連接酶MEX3C)、MYC (Myc原癌基因蛋白質)、MYD88 (骨髓分化初始反應蛋白MyD88)、PML (前髓細胞性白血病蛋白質)、POLH (DNA聚合酶θ)、PPARG (過氧化體增殖物活化受體γ)、PTEN (磷脂醯肌醇3,4,5-三磷酸酯3-磷酸酶及雙重特異性蛋白質磷酸酶)、RAD18 (E3泛素-蛋白質連接酶RAD18)、RARA (視黃酸受體α)、RB1 (視網膜母細胞瘤相關蛋白)、RELA (轉錄因子p65)、RNF168 (E3泛素-蛋白質連接酶RNF168)、RNF220 (E3泛素-蛋白質連接酶RNF220)、SKP1 (S期激酶相關蛋白1)、TP53 (細胞腫瘤抗原p53)、TRAF6 (TNF受體相關因子6)、TRIP12 (E3泛素-蛋白質連接酶TRIP12)或TRRAP (轉化/轉錄域相關蛋白質)。
謹慎地設計本文所提供之嵌合分子以達成其指定活性。首先，其尺寸保持最小以使得製造簡單及優良的細胞膜滲透性。其次，在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子同時靶向至少兩種天然存在的細胞蛋白質，一種為泛素化蛋白質且另一種為USP7酶。為允許同時結合兩種不同的目標蛋白，在一些實施例中，本文所提供之嵌合分子具有兩個各自靶向不同目標蛋白之不同結合域。第三，為允許USP7酶執行其對泛素化蛋白質之作用，兩個結合域在空間上經配置以使USP7酶與Ub-蛋白質足夠接近。
熟習此項技術者將瞭解，術語「Ub-蛋白質」涵蓋與所連接的Ub分子數目無關的經泛素化蛋白質。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含單個Ub分子。在一些情況下，其表示多個Ub分子，且此等Ub分子附接至目標蛋白及在具有複雜架構及理論上不確定數目的直鏈及分支鏈泛素鏈的混合物中的多個其他泛素分子。
在一些實施例中，包含包括USP7結合劑之第一結合域的嵌合分子可用於中預防或減少泛素化蛋白質之降解的方法中。在一些實施例中，泛素化蛋白質為USP7之已知目標。在一些實施例中，泛素化蛋白質並非USP7之已知目標。
在一些實施例中，包含包括USP7結合劑之第一結合域的嵌合分子可用於自泛素化蛋白質移除至少一個泛素分子的方法中。在一些實施例中，泛素化蛋白質為USP7之已知目標。在一些實施例中，泛素化蛋白質並非USP7之已知目標。
在一些實施例中，包含包括USP7結合劑之第一結合域的嵌合分子可用於治療有需要之個體之疾病的方法中。在一些實施例中，包含包括USP7結合劑之第一結合域的嵌合分子可用於治療有需要之個體之疾病的方法中，其中該治療包含自與該疾病相關之蛋白質移除至少一種泛素。在一些實施例中，包含包括USP7結合劑之第一結合域的嵌合分子可用於治療有需要之個體之疾病的方法中，其中該疾病係選自癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，待治療之疾病包含囊腫纖維化。 包含USP7結合劑之第一結合域
在一些實施例中，本文所提供之USP7結合嵌合分子在包含去泛素化酶結合劑(「USP7結合劑」)之第一結合域處結合於細胞USP7 (圖1A)。
熟悉此項技術者將瞭解，在一些實施例中，經分離之USP7結合劑及所包含的與嵌合分子之組分相同的USP7結合劑的技術特徵可相同或類似，且在替代性實施例中可取決於所量測的特徵而不同。在一些實施例中，將本文所揭示之嵌合分子用於治療疾病之方法中。因此，USP7結合劑之技術特徵差異，例如但不限於USP7之結合親和力及/或USP7結合劑對結合之USP7酶的促效/拮抗活性，可有益於嵌合分子用於治療疾病之作用。
在一些實施例中，關於USP7結合劑與目標USP7酶之間的相互作用，包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑具有至少一個不存在於經分離之USP7結合劑中的有益特徵。在一些實施例中，包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑具有至少一個與經分離之USP7結合劑相比增強的有益特徵。在一些實施例中，包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑具有至少一個與經分離之USP7結合劑相比相同或類似的特徵。在一些實施例中，包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑具有至少一個與經分離之USP7結合劑相比不同的特徵。
在一些實施例中，包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑具有與經分離之USP7結合劑相比增加的針對USP7之結合親和力。在一些實施例中，包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑具有與經分離之USP7結合劑相比相同或類似的針對USP7之結合親和力。在一些實施例中，包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑具有與經分離之USP7結合劑相比降低的針對USP7之結合親和力。
在一些實施例中，與經分離之USP7相比，USP7與包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑的結合使得USP7水解酶活性之抑制增加。在一些實施例中，與經分離之USP7活性相比，USP7與包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑的結合不影響USP7水解酶活性。在一些實施例中，與經分離之USP7活性相比，USP7與包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑的結合最低限度地抑制USP7水解酶活性。在一些實施例中，與經分離之USP7活性相比，USP7與包含於嵌合分子之第一結合域內的USP7結合劑的結合增加USP7水解酶活性。
在一些實施例中，USP7結合於該第一結合域所包含之USP7結合劑。在某些實施例中，該第一結合域所包含之USP7結合劑與USP7的結合不抑制USP7酶的去泛素化活性(硫醇依賴性水解活性)。在一些實施例中，與USP7結合至不與嵌合分子連接之USP7結合劑時的去泛素化活性相比，嵌合分子之第一結合域所包含的USP7結合劑與USP7的結合不抑制USP7酶的去泛素化活性。在某些實施例中，與USP7結合至獨立於嵌合分子之USP7結合劑時的水解活性相比，包含USP7結合劑之第一結合域與USP7的結合不降低USP7酶的去泛素化活性(硫醇依賴性水解活性)。在某些實施例中，與USP7結合至獨立於嵌合分子之USP7結合劑時的水解活性相比，包含USP7結合劑之第一結合域與USP7的結合降低USP7酶的去泛素化活性(硫醇依賴性水解活性)。
在某些實施例中，包含於第一結合域內之USP7結合劑與USP7之結合親和力與USP7與USP7結合劑之分離形式(獨立於嵌合分子)的結合親和力相當。在某些實施例中，相比於USP7與USP7結合劑之分離形式(獨立於嵌合分子)的結合親和力，包含於第一結合域內之USP7結合劑與USP7之結合親和力增加。在某些實施例中，相比於USP7與USP7結合劑之分離形式(獨立於嵌合分子)的結合親和力，包含於第一結合域內之USP7結合劑與USP7之結合親和力降低。
在一些實施例中，相比於USP7與經分離之USP7結合劑的結合，USP7與包含於第一結合域內之USP7結合劑的結合改變了USP7酶的去泛素化活性(硫醇依賴性水解活性)。在一些實施例中，相比於USP7與經分離之USP7結合劑之結合，USP7與包含於第一結合域內之USP7結合劑的結合增加了USP7酶的去泛素化活性(硫醇依賴性水解活性)。在一些實施例中，相比於USP7與經分離之USP7結合劑的結合，USP7與包含於第一結合域內之USP7結合劑的結合降低USP7酶的去泛素化活性(硫醇依賴性水解活性)。
在一些實施例中，「域」包含小分子或其活性部分。在一些實施例中，「域」包含肽。在一些實施例中，「域」包含多肽或其部分。在一些實施例中，「域」包含蛋白質或其活性部分。
在某些實施例中，第一結合域可為小分子。在一些實施例中，小分子為有機化合物。在一個實施例中，小分子具有其最長軸在0.1 nm至10 nm之間的尺寸。在另一實施例中，小分子具有其最長軸在0.5 nm至5 nm之間的尺寸。在一個實施例中，小分子具有1道爾頓至1000道爾頓之重量。在另一實施例中，小分子具有1道爾頓至500道爾頓之重量。在另一實施例中，小分子具有1道爾頓至100道爾頓之重量。
在一些實施例中，「小分子」可涵蓋在實驗室中製備或在自然界中發現之實質上非肽、非寡聚有機化合物。在某些實施例中，如本文中所使用之小分子可涵蓋為「天然產物類」的化合物，然而，術語「小分子」不限於「天然產物類」化合物。實際上，小分子之特徵通常在於其含有若干碳-碳鍵，且具有小於1500 g/mol、小於1250 g/mol、小於1000 g/mol、小於750 g/mol、小於500 g/mol、或小於250 g/mol之分子量，但此特徵並不意欲限制本文所揭示之嵌合分子的目的。
熟悉此項技術者應認識到，第一結合域涵蓋本文所描述之嵌合分子的離散區，且可區別地藉由如本文所揭示之物理及功能特性鑑別。
在一些實施例中，第一結合域負責募集(例如，以特異性方式鑑別及結合) USP7去泛素化酶。在一些實施例中，第一結合域包含USP7去泛素化酶結合劑(「USP7」結合劑)。在一些實施例中，USP7結合劑特異地識別USP7。在一些實施例中，USP7結合劑包含抗體或其片段。在一些實施例中，USP7結合劑包含特異地識別USP7之小分子。在一些實施例中，USP7結合劑包含USP7之配位體。在一些實施例中，USP7結合劑包含特異地識別USP7之小分子。在一些實施例中，USP7結合劑包含適體。
熟習此項技術者應理解，因為第一結合域結合細胞內部之USP7，所以其在無額外步驟的情況下結合之後非共價地連接至USP7。不受任何理論或機制束縛，假設第一結合域短暫地結合於USP7，至少持續最少的時間以允許USP7執行自如本文所描述之第二結合域所結合的泛素化蛋白質的(移除至少一個Ub分子)活性。
本文所提供之嵌合分子與USP7之間的結合可為直接的或間接的。
在一些實施例中，包含USP7結合劑之第一結合域可直接且特異性地結合於中間分子，該中間分子直接且特異性地結合於USP7。在一些實施例中，第一結合域特異性結合於中間分子，且中間分子特異性地結合於USP7。在一些實施例中，第一結合域間接但特異性地結合於USP7。在某些實施例中，在第一結合域與USP7之間可採用超過一個中間分子，其中第一結合域間接但特異性地結合於USP7。在某些實施例中，結合於USP7之中間分子包含結合於USP7之抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，結合於USP7之中間分子包含USP7之配位體。在某些實施例中，結合於USP7之中間分子包含適體。
在某些實施例中，第一結合域短暫地結合於USP7且在泛素化蛋白質去泛素化時與USP7解離。在某些實施例中，第一結合域短暫地結合於USP7且在自泛素化蛋白質移除一或多個泛素分子時與USP7解離。在某些實施例中，第一結合域不可逆地結合於USP7且在泛素化蛋白質去泛素化時或在自泛素化蛋白質移除Ub分子時並不與USP7解離。在某些實施例中，第一結合域結合於自第二結合域所結合之泛素化蛋白質裂解泛素的USP7。
在一個態樣中，本文提供一種嵌合分子，其具有式(AA)之結構 BD1-LINKER-BD2， 式(AA) 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，其中 BD1、BD2及LINKER如上文所定義。
在一些實施例中，BD1包含USP7結合劑，例如式(1)至(7)、(1*)、(2*)或(6*)之結構。
在一些實施例中，包含USP7結合劑之第一結合域由 式 (1)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
Figure 02_image077
(1)， 其中： W 1至W 13各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺基、CN、-NHC(O)R 6、-C(O)OR 6、-OC(O)R 6、C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH、-C(O)-烷基、-C(O)O-烷基、-C(O)NH-烷基或SH； X 1至X 12各自獨立地為C或N； R 1為鍵結、烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、C(O)-烷基、-烷基-O-烷基、烷基-NH-烷基、烷基-雜環-環-R 3、
Figure 02_image079
； n為0與10之間的整數； R 3為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、-C(O)、-C(O)S、-SO 2、-S(O)、C(O)OC(O)、酯或醯胺基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基； 其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代；且 其中若X 1至X 12各自獨立地為N，則對應取代基W 2至W 13不存在。
在一些實施例中，包含USP7結合劑之第一結合域由 式 (1*)之結構表示：
Figure 02_image081
， 其中： W 1至W 13各自獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基； X 1為N或CW 2； X 2為N或CW 3； X 3為N或CW 4； X 4為N或CW 5； X 5為N或CW 6； X 6為N或CW 7； X 7為N或CW 8； X 8為N或CW 9； X 9為N或CW 10； X 10為N或CW 11； X 11為N或CW 12； X 12為N或CW 13； 各R a獨立地為C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、C 1-C 6烷基(環烷基)、C 1-C 6烷基(雜環烷基)、C 1-C 6烷基(芳基)或C 1-C 6烷基(雜芳基)，其中烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基獨立地視情況經一或多個R e取代； 各R b獨立地為氫、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、C 1-C 6烷基(環烷基)、C 1-C 6烷基(雜環烷基)、C 1-C 6烷基(芳基)或C 1-C 6烷基(雜芳基)，其中烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基獨立地視情況經一或多個R e取代； R c及R d各自獨立地為氫、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、C 1-C 6烷基(環烷基)、C 1-C 6烷基(雜環烷基)、C 1-C 6烷基(芳基)或C 1-C 6烷基(雜芳基)，其中烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基獨立地視情況經一或多個R e取代； 或R c及R d與其所附接之原子一起形成視情況經一或多個R e取代之雜環烷基；及 各R e獨立地為鹵素、-CN、-OH、-OCH 3、-S(=O)CH 3、-S(=O) 2CH 3、-S(=O) 2NH 2、-S(=O) 2NHCH 3、-S(=O) 2N(CH 3) 2、-NH 2、-NHCH 3、-N(CH 3) 2、-C(=O)CH 3、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基及C 1-C 6雜烷基。
在式(1*)之一些實施例中，X 1為N。在式(1*)之一些實施例中，X 1為CW 2。在式(1*)之一些實施例中，X 2為N。在式(1*)之一些實施例中，X 2為CW 3。在式(1*)之一些實施例中，X 3為N。在式(1*)之一些實施例中，X 3為CW 4。在式(1*)之一些實施例中，X 4為N。在式(1*)之一些實施例中，X 4為CW 5。在式(1*)之一些實施例中，X 5為N。在式(1*)之一些實施例中，X 5為CW 6。在式(1*)之一些實施例中，X 6為N。在式(1*)之一些實施例中，X 6為CW 7。在式(1*)之一些實施例中，X 7為N。在式(1*)之一些實施例中，X 7為CW 8。在式(1*)之一些實施例中，X 8為N。在式(1*)之一些實施例中，X 8為CW 9。在式(1*)之一些實施例中，X 9為N。在式(1*)之一些實施例中，X 9為CW 10。在式(1*)之一些實施例中，X 10為N。在式(1*)之一些實施例中，X 10為CW 11。在式(1*)之一些實施例中，X 11為N。在式(1*)之一些實施例中，X 11為CW 12。在式(1*)之一些實施例中，X 12為N。在式(1*)之一些實施例中，X 12為CW 13。在式(1*)之一些實施例中，W 5為-NR cR d。
在某些實施例中，包含該USP7結合劑之第一結合域由 式 (2)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
Figure 02_image083
(2)， 其中： W 2至W 5及W 8至W 13各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺、CN、-NHCOR 6、-OC(O)R 6、C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH或SH； R 2為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜環烷基-CO、胺、醯胺基、酯、-O-烷基、烷基-COOH、-CH 2-COOH、-NH-烷基、-CH 2-芳基、-雜環-環-R 3或
Figure 02_image085
； n為0與10之間的整數； R 3為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、-C(O)、-C(O)S、-SO 2、-S(O)、C(O)OC(O)、酯或醯胺基； R 4及R 5各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、羥基、-C(O)-烷基、-C(O)O-烷基或-C(O)NH-烷基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基；且 其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。
在某些實施例中，包含該USP7結合劑之第一結合域由 式 (2*)之結構表示：
Figure 02_image087
， 其中W 2至W 5、W 8至W 13、R c及R d之定義與式(1*)中所定義相同。
在某些實施例中，包含該USP7結合劑之第一結合域由 式 (3)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
Figure 02_image089
(3)， 其中 W 2至W 5及W 8至W 13各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺、CN、-NHCOR 6、-OC(O)R 6、C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH或SH； X 1至X 4及X 9至X 12各自獨立地為C或N； R 4及R 5各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、羥基、-CO-烷基、-C(O)O-烷基、-(CO)NH-烷基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基； 其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基中之每一者視情況經取代；且 其中若X 1至X 4及X 9至X 12各自獨立地為N，則對應取代基W 2至W 5及W 10至W 13不存在。
在某些實施例中，包含該USP7結合劑之第一結合域由 式 (4)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
Figure 02_image091
(4)， 其中： W 2至W 5及W 8至W 13各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺、CN、-NHCOR 6、-OC(O)R 6、C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH或SH； R 4及R 5各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、羥基、-C(O)-烷基、-C(O)O-烷基、-C(O)NH-烷基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基；且 其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。
在某些實施例中，USP7結合劑由 式 (5)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
Figure 02_image093
(5)， 其中 W 2至W 5及W 8至W 21各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、胺、CN、-NHCOR 3、NH-烷基、NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、烷氧基、COOH、OH或SH； n在0與10之間； X 13至X 16各自獨立地為C或N； R 3為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、-C(O)、-C(NH)、-C(O)S、-SO 2、-S(O)、C(O)OC(O)、酯或醯胺基； R 4及R 5各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、羥基、-CO-烷基、-C(O)O-烷基或-C(O)NH-烷基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基； 其中該烷基、芳基、環烷基或雜環烷基中之每一者視情況經取代；且 其中若X 13至X 16各自獨立地為N，則N、W 14至W 15、W 16至W 17、W 18至W 19或W 20至W 21上之對應取代基中之一者不存在。
在某些實施例中，USP7結合劑由 式 (6)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
Figure 02_image095
(6)。
在某些實施例中，USP7結合劑由 式 (6*)之結構表示：
Figure 02_image097
。
在某些實施例中，USP7結合劑由 式 (7)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
Figure 02_image099
(7)。
如本文中所使用，術語「式(1)」、「式(2)」、「式(3)」、「式(4)」、「式(5)」、「式(6)」及「式(7)」在一些實施例中可各別地包含「式(1)」、「式(2)」、「式(3)」、「式(4)」、「式(5)」、「式(6)」及「式(7)」的醫藥學上可接受之鹽。 醫藥用鹽
如本文中所使用之術語「醫藥用鹽」係指根據IUPAC定則之藥物物質的「醫藥學上可接受之鹽」。醫藥用鹽為與藥物組合的呈鹽形式之非活性成分。如本文中所使用之術語「醫藥學上可接受之鹽」係指通式(1)至(7)之鹽或由通式涵蓋之任何其他鹽形式，其實質上對於活生物體為無毒的。典型的醫藥學上可接受之鹽包括藉由本發明之化合物與醫藥學上可接受之礦物質、鹼、酸或如本文所描述之鹽反應所製備的彼等鹽。酸式鹽亦稱為酸加成鹽。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹽包括任何醫藥學上可接受之有機或無機酸或鹼。
在一些非限制性實施例中，諸如此項技術中已知的醫藥用鹽(Stahl及Wermuth，2011，Handbook of pharmaceutical salts，第二版本) (其內容以全文引用之方式併入本文中)經例示於下文中。
在一個實施例中，醫藥學上可接受之酸為有機或無機酸或酸殘基。在另一實施例中，醫藥學上可接受之有機或無機酸或酸殘基選自由以下組成之群：鹽酸、甲磺酸、磷酸、檸檬酸、乳酸、丁二酸、酒石酸、
Figure 111100833-A0304-1
酸、苯甲酸、2-(4-羥苯甲醯基)-苯甲酸、甲苯磺酸、苯磺酸、抗壞血酸、硫酸、順丁烯二酸、甲酸、丙二酸、菸鹼酸、草酸、樟腦磺酸、環己胺磺酸、2,2-二氯-乙酸、二(三級丁基)-萘磺酸、二(三級丁基)-萘二磺酸、十二基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸(黏液酸)、龍膽酸(gentisic acid)、葡萄糖酸、葡糖酸、甘油磷酸、氫溴酸、氫碘酸、2-羥基-乙磺酸(羥乙基磺酸)、1-羥基-2-萘甲酸、亞甲基二膦酸(雙膦酸)、偏磷酸、甲基硼酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、硝酸、乳清酸、2-側氧基-戊二酸(酮戊二酸)、撲酸(pamoic acid/embonic acid)、丙酮酸、醣酸、柳酸、4-胺基-柳酸及硫氰酸。各可能性代表本發明之各別實施例。
醫藥酸式鹽形式之其他實施例可由以下酸形成：包括醋尿酸、4-乙醯胺基-苯甲酸、己二酸、胺基馬尿酸、4-胺基-柳酸、海藻酸、天冬胺酸、
Figure 111100833-A0304-1
酸、丁酸、癸酸(capric/decanoic)、己酸(caproic/hexanoic)、碳酸、樟腦酸、樟腦磺酸、辛酸(caprylic/octanoic)、環拉酸(cyclamic)、肉桂酸、2,2-二氯-乙酸、二(三級丁基)-萘磺酸、二(三級丁基)-萘二磺酸、脫氫乙酸、泛影酸(diatrizoic)、十二基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、依地酸、乙磺酸、2-乙基-己酸、異抗壞血酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸(黏液酸)、龍膽酸、葡糖庚酸、葡糖酸、葡糖醛酸、麩胺酸、戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、馬尿酸、氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、2-(4-羥苯甲醯基)-苯甲酸、2-羥基-乙磺酸(羥乙基磺酸)、1-羥基-2-萘甲酸、異丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、碘沙酸(iodoxamic)、異硬脂酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、杏仁酸、亞甲基二膦酸、甲磺酸、偏磷酸、甲基硼酸、肉豆蔻酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、菸鹼酸、油酸、草酸、棕櫚酸、三胺五乙酸(pentetic)、丙酸(propionic/propanoic)、焦麩胺酸、丙酮酸、磷酸、癸二酸、山梨酸、硬脂酸(十八烷酸)、辛二酸、丁二酸、硫酸、酒石酸、噻唑肟酸(thiazoximic)、硫氰酸、甲苯磺酸、三氟乙酸及十一碳烯酸(十一-10-烯酸)。各可能性代表本發明之各別實施例。在一個實施例中，醫藥學上可接受之鹽為有機或無機鹼或鹼之殘基，其選自由鹼金屬、鹼土金屬、鋁、鋅及銨組成之群。
在另一實施例中，醫藥學上可接受之鹽為選自由以下組成之群的無機陽離子：鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、鋁、鋅及銨。各可能性代表本發明之各別實施例。
在另一實施例中，醫藥學上可接受之有機胺鹽選自由以下組成之群：銨、一級胺、二級胺、三級胺、四級銨化合物、胺基醇及胺糖。有機胺鹼之非限制性實例為苄胺、苄星(benzathine)、甜菜鹼、三級丁胺(特丁胺)、二甲胺乙醇(deanol)、二環己胺、二乙胺、2-二乙胺基-乙醇、二乙醇胺、乙醇胺、乙二胺、海卓胺、𠰌啉、4-(2-羥乙基)𠰌啉、1-(2-羥乙基)-吡咯啶(尹波胺(epolamine))、咪唑、N-甲基還原葡糖胺(葡甲胺)、4-苯基環己胺、哌𠯤及緩血酸胺。各可能性代表本發明之各別實施例。
根據本發明使用的「式(1)」、「式(2)」、「式(3)」、「式(4)」、「式(5)」、「式(6)」及「式(7)」之化合物可以適用於預期投藥之任何形式提供。適合之形式包括本發明化合物之醫藥學上(亦即生理學上)可接受之鹽，及前藥(predrug/prodrug)形式。
醫藥學上可接受之加成鹽之實例包括但不限於無毒性無機及有機酸加成鹽，諸如氫氯化物、氫溴酸鹽、L-酒石酸鹽、硝酸鹽、過氯酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、阿康酸鹽、抗壞血酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、恩波酸鹽(embonate)、庚酸鹽、反丁烯二酸鹽、麩胺酸鹽、羥乙酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、杏仁酸鹽、甲烷磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、柳酸鹽、山梨酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、甲苯對磺酸鹽及其類似物。此類鹽可藉由此項技術中所熟知且予以描述之程序形成。
在某些實施例中，本文揭示包含第一結合域之嵌合分子，其中該第一結合域，例如 式 (1) 至 (7)包含結合泛素羰基端蛋白酶7酶(泛素特異性加工蛋白酶7 (USP7))之去泛素化酶結合劑。在某些實施例中，本文揭示包含第一結合域之嵌合分子，其中該第一結合域，例如 式 (1*)、 (2*)或 (6*)包含結合泛素羰基端蛋白酶7酶(泛素特異性加工蛋白酶7 (USP7))之去泛素化酶結合劑。 包含目標結合劑之第二結合域
在一些實施例中，本文所揭示之嵌合分子進一步包含第二結合域，該第二結合域包含經設計以結合經泛素化蛋白質之目標結合劑( 圖 1B)。因此，在一些實施例中，嵌合分子包含第一結合域，其中該第一結合域包含結合USP7之去泛素化酶結合劑；及第二結合域，其包含經設計以結合泛素化蛋白質之目標結合劑。在一些實施例中，目標結合劑與泛素化蛋白質之結合與該蛋白質所連接之Ub數目無關。在一些實施例中，目標結合劑與泛素化蛋白質之結合與該蛋白質所連接之Ub無關。在一些實施例中，第二結合域之泛素化蛋白質目標為USP7之已知目標。在一些實施例中，第二結合域之泛素化蛋白質目標包含USP7之非天然或非先前已知目標。在一些實施例中，目標結合劑直接結合於泛素化蛋白質。
在一些實施例中，目標結合劑特異性結合於由一或多個泛素(「Ub」)分子泛素化的目標蛋白。本文所提供之嵌合分子與泛素化蛋白質(「Ub-蛋白質」)目標之間的結合可為直接或間接的。間接結合可經由一個中間分子或藉由一系列中間分子或中間分子鏈進行。
在一些實施例中，第二結合域負責募集(例如，以特異性方式鑑別及結合) Ub-蛋白質。由包含於第二結合域內之目標結合劑靶向的Ub-蛋白質可為任何Ub-蛋白質或任何限定子類別的Ub-蛋白質。在一個實施例中，包含於第二結合域內之目標結合劑特異性結合於Ub-蛋白質。在一個實施例中，包含於第二結合域內之目標結合劑包含結合於Ub-蛋白質之抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，包含於第二結合域內之目標結合劑包含結合於Ub-蛋白質之配位體。在一些實施例中，包含於第二結合域內之目標結合劑包含結合於Ub-蛋白質之配位體，其中該配位體包含肽。在一些實施例中，包含於第二結合域內之目標結合劑包含結合於Ub-蛋白質之配位體，其中該配位體包含小分子。
舉例而言，在一些實施例中，目標結合劑包含特異性識別Ub-蛋白質之分子，諸如抗體或其片段。在替代性實施例中、目標結合劑包含由Ub-蛋白質特異性識別之分子，諸如Ub-蛋白質之配位體。在一些實施例中，目標結合劑包含由Ub-蛋白質特異性識別之分子，諸如適體。
在一些實施例中，目標結合劑包含幫助Ub-蛋白質之構形摺疊或去摺疊及組裝或分解的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含校正目標Ub-蛋白質之突變形式之構形摺疊或去摺疊的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含在其泛素化之前校正目標蛋白之突變形式之構形摺疊或去摺疊的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含校正目標Ub-蛋白質之突變形式在蛋白質合成位點之構形摺疊或去摺疊的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含在其泛素化之前校正目標蛋白之突變形式在蛋白質合成位點之構形摺疊或去摺疊的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含校正目標Ub-蛋白質之突變形式在目標Ub-蛋白質之指定位點的構形摺疊或去摺疊的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含在其泛素化之前校正目標蛋白之突變形式在目標蛋白之指定位點的構形摺疊或去摺疊的分子伴護蛋白。在一些實施例中，合成之目標指定位點或指定位點係選自胞質液、細胞器內膜表面、細胞器外膜表面、核內膜表面、核膜外膜表面、質膜之內膜或質膜之外膜。
在一些實施例中，目標結合劑包含幫助Ub-蛋白質之組裝或分解的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含校正目標Ub-蛋白質之突變形式之組裝或分解的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含在其泛素化之前校正目標蛋白之突變形式之組裝或分解的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含校正目標Ub-蛋白質之突變形式在蛋白質合成位點的組裝或分解的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含在其泛素化之前校正目標蛋白之突變形式在蛋白質合成位點的組裝或分解的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含校正目標Ub-蛋白質之突變形式在目標Ub-蛋白質之指定位點的組裝或分解的分子伴護蛋白。在一些實施例中，目標結合劑包含在其泛素化之前校正目標蛋白之突變形式在目標蛋白之指定位點的組裝或分解的分子伴護蛋白。在一些實施例中，合成之目標指定位點或指定位點係選自胞質液、細胞器內膜表面、細胞器外膜表面、核內膜表面、核膜外膜表面、質膜之內膜或質膜之外膜。
在一些實施例中，目標結合劑結合於目標蛋白之突變形成。在一些實施例中，目標結合劑結合於目標蛋白之摺疊異常形式。在一些實施例中，目標結合劑結合於目標蛋白之野生型(WT)形式。在一些實施例中，當目標結合劑與目標Ub-蛋白質之突變形式結合時，藉由與USP7結合劑結合之USP7去泛素化使得突變蛋白之半衰期增加且藉此拯救突變蛋白之功能性。在一些實施例中，當目標結合劑目標Ub-蛋白質之摺疊異常形式結合時，藉由與USP7結合劑結合之USP7去泛素化使得突變蛋白之半衰期增加且藉此拯救突變蛋白之功能性。在一些實施例中，當目標結合劑與目標Ub-蛋白質之WT形式結合時，藉由與USP7結合劑結合之USP7去泛素化使得半衰期增加且因此增加WT蛋白質之細胞濃度或局部濃度，藉此增強由WT蛋白質執行之治療結果。在一些實施例中，WT目標蛋白之濃度增強使得疾病療法，例如但不限於癌症療法之臨床功效增加。
在一些實施例中，當目標結合劑包含分子伴護蛋白或其活性部分時，其與目標Ub-蛋白質之突變形式結合且幫助目標蛋白之構形摺疊及組裝。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白在泛素化之前結合。在一些實施例中，當目標結合劑包含分子伴護蛋白或其活性部分時，其與目標蛋白在泛素化之前結合且在蛋白質合成時幫助其構形摺疊及組裝。在一些實施例中，當目標結合劑包含分子伴護蛋白或其活性部分時，其與目標蛋白之突變形式在泛素化之前結合且幫助目標蛋白之構形摺疊及組裝。在一些實施例中，當目標結合劑包含分子伴護蛋白或其活性部分時，其與目標蛋白在泛素化之前結合且使目標蛋白穩定。在一些實施例中，當目標結合劑包含分子伴護蛋白或其活性部分時，其與目標蛋白之突變形式在泛素化之前結合且幫助穩定目標蛋白。在一些實施例中，當目標結合劑包含分子伴護蛋白或其活性部分時，其與目標蛋白在泛素化之前結合且藉由穩定目標蛋白而幫助其恰當的***膜內。在一些實施例中，當目標結合劑包含分子伴護蛋白或其活性部分時，其與目標蛋白之突變形式在泛素化之前結合且藉由穩定目標蛋白而幫助恰當的***膜內。
在一些實施例中，目標結合劑包含目標蛋白之活性的增強劑，其中目標結合劑與目標Ub-蛋白質之結合增強或恢復該目標Ub-蛋白質之功能。在一些實施例中，目標結合劑包含目標蛋白之活性的增強劑其中目標結合劑與目標蛋白在泛素化之前的結合增強或恢復該目標蛋白之功能。在一些實施例中，目標結合劑包含目標蛋白之活性的增強劑，其中目標結合劑與突變目標Ub-蛋白質之結合增強或恢復該目標Ub-蛋白質之功能。在一些實施例中，目標結合劑包含目標蛋白之活性的增強劑，其中目標結合劑與目標蛋白之突變形式在泛素化之前的結合增強或恢復該目標蛋白之功能。
在一些實施例中，目標結合劑與目標Ub-蛋白質之結合增強或恢復或加強跨膜之離子轉運活性，其中目標-蛋白質包含離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白在泛素化之前的結合增強或恢復或加強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標Ub-蛋白質之結合增強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白在泛素化之前的結合增強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標Ub-蛋白質之結合恢復跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白在泛素化之前的結合恢復跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標Ub-蛋白質之結合加強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白在泛素化之前的結合加強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含離子通道。在一些實施例中，離子轉運活性之增強包含增加跨越PM之氯離子轉運。
在一些實施例中，離子轉運活性之恢復包含促進氯離子轉運增加。在一些實施例中，目標結合劑與目標Ub-蛋白質之突變形式的結合增強或恢復或加強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白之突變形式包含具有降低功能或無功能的離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白之突變形式在泛素化之前的結合增強或恢復或加強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含具有降低功能或無功能的離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標Ub-蛋白質之突變形式的結合增強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白之突變形式包含具有降低功能或無功能的離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白之突變形式在泛素化之前的結合增強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含具有降低功能或無功能的離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標Ub-蛋白質之突變形式的結合恢復跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白之突變形式包含具有降低功能或無功能的離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白質之突變形式的結合恢復跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含具有降低功能或無功能的離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標Ub-蛋白質之突變形式的結合加強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白之突變形式包含具有降低功能或無功能的離子通道。在一些實施例中，目標結合劑與目標蛋白之突變形式在泛素化之前的結合加強跨膜之離子轉運活性，其中目標蛋白包含具有降低功能或無功能的離子通道。
在一些實施例中，離子轉運活性之恢復包含促進氯離子轉運增加。在一些實施例中，活性恢復達至在目標蛋白之非突變形式中觀測到的正常水準。在一些實施例中，活性恢復達至在目標蛋白之非突變形式中觀測到的正常離子轉運水準。在一些實施例中，離子轉運活性之增強包含促進氯離子轉運增加，相比於不存在與包含包括目標蛋白結合劑之第二結合域之嵌合分子結合的活性水準。在一些實施例中，Ub-目標蛋白之結合藉由增強Ub-目標蛋白之通道打開機率(或閘控)而促進氯離子轉運增加。在一些實施例中，離子轉運活性之增強包含增加跨越PM之氯離子轉運。
在一些實施例中，目標結合劑調節Ub-目標蛋白之功能活性。在一些實施例中，目標結合劑調節Ub-目標蛋白之突變形式的功能活性。在一些實施例中，目標結合劑調節Ub-目標蛋白之功能活性，其中目標結合劑與目標Ub-蛋白質之結合增強目標Ub-蛋白質之功能。在一些實施例中，目標結合劑調節Ub-目標蛋白之功能活性，其中目標結合劑與目標Ub-蛋白質之結合恢復目標Ub-蛋白質之功能。在一些實施例中，目標結合劑調節Ub-目標蛋白之突變形式之功能活性，其中目標結合劑與突變目標Ub-蛋白質之結合增強突變目標Ub-蛋白質之功能。在一些實施例中，目標結合劑調節Ub-目標蛋白之突變形式之功能活性，其中目標結合劑與目標Ub-蛋白質之結合將突變目標Ub-蛋白質之功能恢復至野生型水準或接近野生型水準。在一些實施例中，目標結合劑調節目標蛋白之突變形式在泛素化之前的功能活性，其中目標結合劑與目標蛋白之結合增強突變目標蛋白之功能。在一些實施例中，目標結合劑調節目標蛋白之突變形式在泛素化之前的功能活性，其中目標結合劑與目標蛋白之結合將突變目標蛋白之功能恢復至野生型水準或接近野生型水準。
在一些實施例中，Ub-蛋白質與包含於第二域內之目標結合劑的結合使Ub-蛋白質穩定。在一些實施例中，Ub-蛋白質與包含於第二域內之目標結合劑的結合增加細胞中Ub-蛋白質之局部濃度。
如本文中所使用，術語「Ub-蛋白質」、「目標Ub-蛋白質」及「目標蛋白」可互換使用，其作為包含於本文所揭示之嵌合分子之第二結合域內之目標結合劑的結合目標均具有相同的含義及品質。熟習此項技術者將瞭解，包括「Ub」指示目標蛋白之泛素化狀態。在一些實施例中，目標蛋白與包含於第二結合域內之目標結合劑的結合與泛素化狀態無關。替代地，在一些實施例中，目標蛋白與包含於第二結合域內之目標結合劑的結合取決於或需要目標蛋白之泛素化。
不受任何理論或機制束縛，假設第二結合域短暫地結合於Ub-蛋白質目標，至少持續極少時間以允許第一結合域所結合之USP7移除至少一個Ub。
在另一實施例中，第二結合域直接且特異性地結合於中間分子，該中間分子直接且特異性地結合於目標Ub-蛋白質。在一些實施例中，由於第二結合域特異性地結合於中間分子且該中間分子特異性地結合於Ub-蛋白質，所以第一結合域間接但特異性地結合於Ub-蛋白質。在替代例中，在第一結合域與Ub-蛋白質之間可採用超過一個中間分子，因此第一結合域間接但特異性地結合於Ub-蛋白質。在某些實施例中，結合於Ub-蛋白質之中間分子包含結合於Ub-蛋白質之抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，結合於Ub-蛋白質之中間分子包含Ub-蛋白質之配位體。在某些實施例中，結合於Ub-蛋白質之中間分子包含結合於Ub-蛋白質之適體。
在某些實施例中，中間分子包含結合於泛素化蛋白質之抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，中間分子包含結合於泛素化蛋白質之配位體。
在一些實施例中，泛素化目標多肽為胞溶質多肽。在一些實施例中，泛素化目標多肽為核多肽。在一些實施例中，泛素化目標多肽為DNA結合蛋白。在一些實施例中，泛素化目標多肽定位至細胞核中之DNA損壞位點。在一些實施例中，泛素化目標多肽為膜結合多肽。在一些實施例中，泛素化目標多肽為細胞表面多肽。在一些實施例中，泛素化目標多肽與細胞表面多肽締合。
熟悉此項技術者應認識到，第二結合域涵蓋本文所描述之嵌合分子的離散區，且可區別地藉由如本文所揭示之物理及功能特性鑑別。
在某些實施例中，Ub-目標蛋白可與USP7相互作用。在某些實施例中，Ub-目標蛋白包含由USP7去泛素化的目標。在某些實施例中，Ub-目標蛋白包含由USP7去泛素化的非天然目標。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白(CFTR)。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含陰離子通道功能降低的CFTR之突變形式。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含具有極少至不具有陰離子通道功能的CFTR之突變形式。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含摺疊異常的CFTR之突變形式。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質及/或編碼該蛋白質之基因包含蛋白質產生突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質及/或編碼該蛋白質之基因包含蛋白質加工突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質及/或編碼該蛋白質之基因包含閘控突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質或編碼該蛋白質之基因包含傳導突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含聚-ADP-核糖基轉移酶1 (PARP-1)。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含WT PARP-1。
如本文中所使用，術語「去泛素化(deubiquitination/deubiquitylation)」可互換使用，具有全部相同的含義及品質。
在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含F508del突變，其中CFTR蛋白質缺失單個胺基酸。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含N1303K取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含I507del，其中CFTR蛋白質缺失單個胺基酸。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含G551D取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含S549N取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含D1152H取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含R347P取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含R117H取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含3849+10kbC至T的突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含2789+5G至A的突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含A455E取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含G85E取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含L1077P取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含G1349D取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含G178R取代突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含G970R取代突變。
在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含引起CFTR蛋白質之摺疊異常的突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含引起CFTR通道形成之摺疊異常的突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中編碼該CFTR蛋白質之基因包含將提前終止密碼子引入mRNA中的框移、剪接或無意義突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含導致摺疊異常、內質網(ER)品質控制系統之過早降解及受損蛋白質生物發生(其嚴重減少達至細胞表面之CFTR分子的數目)的突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含削弱CFTR通道之調節的突變，引起特徵為打開機率降低的異常閘控。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含藉由阻礙離子傳導孔改變通道傳導，從而導致整體傳導減少的突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含不改變蛋白質之構形但藉由引入啟動子或剪接異常而改變其豐度的突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含藉由減少其構形穩定性及/或產生額外的內化訊號而使ER後隔室及/或質膜(PM)處之通道不穩定的突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質包含加速CFTR之質膜轉換及降低CFTR之頂端膜表現的突變。
在一些實施例中，包含該目標結合劑之第二結合域包含由式A至K表示之結構：
Figure 02_image101
Figure 02_image103
Figure 02_image105
。
在一些實施例中，包含該目標結合劑之第二結合域包含由式A至K、K*、K**、B*或B**表示之結構，其中由式A至K、K*、K**、B*或B**表示之結構視情況經取代。舉例而言，式A至K、K*、K**、B*或B**之結構可視情況經一或多個選自以下之取代基取代：側氧基、鹵素、-CN、-NH 2、-NH(烷基)、-N(烷基) 2、-OH、-CO 2H、-CO 2烷基、-C(=O)NH 2、-C(=O)NH(烷基)、-C(=O)N(烷基) 2、-S(=O) 2NH 2、-S(=O) 2NH(烷基)、-S(=O) 2N(烷基) 2、烷基、環烷基、氟烷基、雜烷基、烷氧基、氟烷氧基、雜環烷基、芳基、雜芳基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷基亞碸、芳基亞碸、烷基碸及芳基碸。在一些其他實施例中，視情況選用之取代基係獨立地選自：D、鹵素、-CN、-NH 2、-NH(CH 3)、-N(CH 3) 2、-OH、-CO 2H、-CO 2(C 1-C 4烷基)、-C(=O)NH 2、-C(=O)NH(C 1-C 4烷基)、-C(=O)N(C 1-C 4烷基) 2、-S(=O) 2NH 2、-S(=O) 2NH(C 1-C 4烷基)、-S(=O) 2N(C 1-C 4烷基) 2、C 1-C 4烷基、C 3-C 6環烷基、C 1-C 4氟烷基、C 1-C 4雜烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4氟烷氧基、-SC 1-C 4烷基、-S(=O)C 1-C 4烷基及-S(=O) 2C 1-C 4烷基。在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之芳基視情況經以下基團取代：鹵素、甲基、乙基、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2、-NO 2、-S(O) 2NH 2、-S(O) 2NHCH 3、-S(O) 2NHCH 2CH 3、-S(O) 2NHCH(CH 3) 2、-S(O) 2N(CH 3) 2及/或-S(O) 2NHC(CH 3) 3。在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之芳基視情況經鹵素、甲基、乙基、丙基、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2及-NO 2取代。在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之雜芳基視情況經以下基團取代：鹵素、甲基、乙基、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2、-NO 2、-S(O) 2NH 2、-S(O) 2NHCH 3、-S(O) 2NHCH 2CH 3、-S(O) 2NHCH(CH 3) 2、-S(O) 2N(CH 3) 2及/或-S(O) 2NHC(CH 3) 3。在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之雜芳基視情況經鹵素、甲基、乙基、丙基、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2及-NO 2取代。
在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之烷基視情況經一或多個選自以下之取代基取代：側氧基、鹵素、胺基、腈、硝基、羥基、鹵烷基、烷氧基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜芳基及類似者。在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之烷基視情況經一或多個選自以下之取代基取代：側氧基、鹵素、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2、-NO 2或-C≡CH。在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之烷基視情況經一或多個鹵素取代。
在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之環烷基或雜環烷基視情況經一或多個選自以下之取代基取代：側氧基、鹵素、胺基、腈、硝基、羥基、烷基、烯基、炔基、鹵烷基、烷氧基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜芳基及類似者。在一些實施例中，式A至K、K*、K**、B*或B**之環烷基或雜環烷基視情況經一或多個選自以下之取代基取代：側氧基、鹵素、甲基、乙基、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2或-NO 2。
在一些實施例中，目標結合劑具有 式 (K*)之結構
Figure 02_image107
式(K*) A及B一起表示稠合芳族環，視情況經一或多個選自以下之取代基取代：鹵基、硝基、羥基、醚、硫醇、硫醚、胺基、C 1-7烷基、C 3-20雜環基及C 5-20芳基； R x係選自H、C 1- 20烷基、C 5-20芳基、C 3-20雜環基、醯胺基、硫基醯胺基、酯、醯基及磺醯基，其中醯基、C 1-20烷基、C 5-20芳基或C 3-20雜環基視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C 1-20烷基、C 5-20芳基、C 3-20雜環基、鹵基、羥基、醚、硝基、氰基、醯基、羧基、酯、醯胺基、胺基、醯基醯胺基、脲基、醯氧基、硫醇、硫醚、亞碸、磺醯基、硫基醯胺基及磺醯胺基； R C1及R C2均為氫；及 R 11係選自H及鹵基。在另一實施例中，式 (K*)之連接點不受限制。
在一些實施例中，目標結合劑具有式 (K**)之結構
Figure 02_image109
式(K**)， 其中， R 11係選自H及鹵基；及 R C3係選自H、C 1-7烷基、C 5-20芳基及C 3-20雜環基，其中C 1-7烷基、C 5-20芳基或C 3-20雜環基視情況經一或多個選自以下之取代基取代：C 1-20烷基、C 5-20芳基、C 3-20雜環基、鹵基、羥基、醚、硝基、氰基、醯基、羧基、酯、醯胺基、胺基、醯基醯胺基、脲基、醯氧基、硫醇、硫醚、亞碸、磺醯基、硫基醯胺基及磺醯胺基。
在一些實施例中，式(K**)之目標結合劑經由R C3連接至連接子。在一些實施例中，式(K*)之目標結合劑經由R X連接至連接子。
在一些實施例中，目標結合劑具有式 (B*)之結構
Figure 02_image111
式(B*)， 其中， 各R 21為視情況經取代之C 1-6脂族基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之C 3-10環脂族基、視情況經取代之3員至10員雜環脂族基、羧基、醯胺基、胺基、鹵基或羥基，限制條件為至少一個R 21為連接至吡啶基環之5位或6位的視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基； 各R 22為氫、視情況經取代之C 1-6脂族基、視情況經取代之C 3-6環脂族基、視情況經取代之苯基或視情況經取代之雜芳基； 各R 23及R 23'與其所附接之碳原子一起形成視情況經取代之C 3-7環脂族基或視情況經取代之雜環脂族基； 各R 24為視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；及 r為1、2、3或4。
在一些實施例中，式(B*)之目標結合劑經由R 21連接至連接子。
在一些實施例中，一個連接至吡啶基環之5位或6位的R 21為芳基或雜芳基，各自視情況經1、2或3個R D取代；其中R D為—Z DR 29；其中各Z D獨立地為鍵結或視情況經取代之分支鏈或直鏈C 1-6脂族鏈，其中Z D之至多兩個碳單元視情況且獨立地經以下基團置換：—CO—、—CS—、—CONR E—、—CONR ENR E—、—CO 2—、—OCO—、—NR ECO 2—、—O—、—NR ECONR E—、—OCONR E—、—NR ENR E—、—NR ECO—、—S—、—SO—、—SO 2—、—NR E—、—SO 2NR E—、—NR ESO 2—或—NR ESO 2NR E—；各R 29獨立地為R E、鹵基、—OH、—NH 2、—NO 2、—CN、—CF 3或—OCF 3；且各R E獨立地為氫、視情況經取代之C 1-8脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。
在一些實施例中，一個連接至吡啶基環之5位或6位的R 21為視情況經1、2或3個R D取代之苯基。在一些實施例中，一個連接至吡啶基環之5位或6位的R 1為視情況經1、2或3個R D取代之雜芳基。在一些實施例中，Z D之一個碳單元經以下基團置換：—O—、—NHC(O)—、—C(O)NR E—、—SO 2—、—NHSO 2—、—NHC(O)—、—SO—、—NR ESO 2—、—SO 2NH—、—SO 2NR E—、—NH—或—C(O)O—。
在一些實施例中，一個連接至吡啶基環之5位或6位的R 21為環脂族基或雜環脂族基，各自視情況經1、2或3個R D取代。在一些實施例中，一個連接至吡啶基環之5位或6位的R 21為視情況經取代之C 3-C 8環烷基或視情況經取代之C 3-C 8環烯基。
在一些實施例中，R 29獨立地為視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基、H或鹵基。
在一些實施例中，R 22為氫。
在一些實施例中，R 23及R 23'與其所附接之碳原子一起形成未經取代之環丙基、未經取代之環戊基或未經取代之環己基。在一些實施例中，R 23及R 23'與其所附接之碳原子一起形成未經取代之環丙基、未經取代之環戊基或未經取代之環己基。
在一些實施例中，R 24為視情況經1、2或3個—Z CR 28取代之芳基或雜芳基，其中各Z C獨立地為鍵結或視情況經取代之分支鏈或直鏈C 1-6脂族鏈，其中Z C之至多兩個碳單元視情況且獨立地經以下基團置換：—CO—、—CS—、—CONR C—、—CONR CNR C—、—CO 2—、—OCO—、—NR CCO 2—、—O—、—NR CCONR C—、—OCONR C—、—NR CNR C—、—NR CCO—、—S—、—SO—、—SO 2—、—NR C—、—SO 2NR C—、—NR CSO 2—或—NR CSO 2NR C—；各R 28獨立地為R C、鹵基、—OH、—NH 2、—NO 2、—CN或—OCF 3；且各R C獨立地為視情況經取代之C 1-8脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。
在一些實施例中，R 24為視情況經1、2或3個—Z CR 28取代之芳基。
在一些實施例中，目標結合劑具有 式 (B**)之結構
Figure 02_image113
式(B**)， 其中， R D為—Z DR 29，其中各Z D獨立地為鍵結或視情況經取代之分支鏈或直鏈C 1-6脂族鏈，其中Z D之至多兩個碳單元視情況且獨立地經以下基團置換：—CO—、—CS—、—CONR E—、—CONR ENR E—、—CO 2—、—OCO—、—NR ECO 2—、—O—、—NR ECONR E—、—OCONR E—、—NR ENR E—、—NR ECO—、—S—、—SO—、—SO 2—、—NR E—、—SO 2NR E—、—NR ESO 2—或—NR ESO 2NR E—； R 29獨立地為R E、鹵基、—OH、—NH 2、—NO 2、—CN、—CF 3或—OCF 3； 各R E獨立地為氫、視情況經取代之C 1-8脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基； R 22為C 1-4脂族基、C 3-6環脂族基、苯基或雜芳基，其中之每一者視情況經取代，或R 22為氫； R 23及R 23'與其所附接之碳原子一起形成C 3-7環脂族基或C 3-7雜環脂族基，其中之每一者視情況經1、2或3個—Z BR 27取代，其中各Z B獨立地為鍵結或視情況經取代之分支鏈或直鏈C 1-4脂族鏈，其中Z B之至多兩個碳單元視情況且獨立地經以下基團置換：—CO—、—CS—、—CONR B—、—CONR BNR B—、—CO 2—、—OCO—、—NR BCO 2—、—O—、—NR BCONR B、—OCONR B—、—NR BNR B—、—NR BCO—、—S—、—SO—、—SO 2—、—NR B—、—SO 2NR B—、—NR BSO 2—或—NR BSO 2NR B—； 各R 27獨立地為R B、鹵基、—OH、—NH 2 、—NO 2、—CN、—CF 3或—OCF 3； 各R B獨立地為氫、視情況經取代之C 1-8脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基； 各R 24為芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1、2或3個—Z CR 28取代，其中各Z C獨立地為鍵結或視情況經取代之分支鏈或直鏈C 1-6脂族鏈，其中Z C之至多兩個碳單元視情況且獨立地經以下基團置換：—CO—、—CS—、—CONR C—、—CONR CNR C—、—CO 2—、—OCO—、—NR CCO 2—、—O—、—NR CCONR C—、—OCONR C—、—NR CNR C—、—NR CCO—、—S—、—SO—、—SO 2—、—NR C—、—SO 2NR C—、—NR CSO 2—或—NR CSO 2NR C—； 各R 28獨立地為R C、鹵基、—OH、—NH 2、—NO 2、—CN、—CF 3或—OCF 3；且 各R C獨立地為視情況經取代之C 1-8脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。
在一些實施例中，式(B**)之目標結合劑經由R D連接至連接子。
在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含選自以下之小分子：依伐卡托(ivacaftor)、魯瑪卡托、特薩卡托(tezacaftor)、埃克斯卡托(elexacaftor)、ABBV-2222、帕森納卡托(posenacaftor)、勒瑟利卡托(nesolicaftor)、ABBV-191、ABBV-3067、ELX-02、PTI-428、PTI-801、PTI-808、VX-121、VX-561、奧拉帕尼或MRT5005。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含選自CW008、8-溴-cAMP及cAMPS-Sp或其鹽之小分子。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含依伐卡托。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含魯瑪卡托。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含特薩卡托。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含埃克斯卡托。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含ABBV-2222。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含帕森納卡托。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含勒瑟利卡托。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含ABBV-191。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含ABBV-3067。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含ELX-02。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含PTI-428。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含PTI-801。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含PTI-808。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含VX-121。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含VX-561。在一些實施例中，包含於第二結合域中之目標結合劑包含小分子，該小分子包含MRT5005。
蛋白激酶A (亦稱為環狀AMP-依賴性蛋白激酶或A激酶) (或PKA)為使蛋白質共價修飾有磷酸酯基團的酶。PKA之活性可藉由使細胞內環狀AMP之含量波動進行調節(因此其假訊作為環狀AMP-依賴性蛋白激酶)。因此，此酶可充當經由環狀AMP傳訊路徑起作用的多種激素之末端效應子。蛋白激酶A全酶為由兩種類型之次單元構成之雜四聚體：催化次單元及調節次單元。
在某些實施例中，Ub-目標蛋白可與USP7相互作用。在某些實施例中，Ub-目標蛋白包含由USP7去泛素化的目標。在某些實施例中，Ub-目標蛋白包含由USP7去泛素化的非天然目標。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含蛋白激酶A (PKA)。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含PKA之突變形式。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含摺疊異常的PKA之突變形式。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含PKA之突變形式，其中該PKA蛋白質及/或編碼該蛋白質之基因包含蛋白質產生突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含PKA之突變形式，其中該PKA蛋白質及/或編碼該蛋白質之基因包含蛋白質加工突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質及/或編碼該蛋白質之基因包含閘控突變。在一些實施例中，Ub-目標蛋白包含CFTR之突變形式，其中該CFTR蛋白質及/或編碼該蛋白質之基因包含傳導突變。在一些實施例中，第二結合域包含由式(L)至(N)表示之結構：
Figure 02_image115
Figure 02_image117
(未示出連接點)。 連接子
在一些實施例中，包含包括USP7結合劑之第一域的嵌合分子進一步包含連接至該第一結合域之連接子域( 圖 1C)。在一些實施例中，包含包括USP7結合劑之第一域及包含目標結合劑之第二結合域的嵌合分子進一步包含將該第一結合域連接至該第二結合域之連接子域。
在一些實施例中，連接至該第一結合域之連接子不影響該第一結構域之結合親和力。在一些實施例中，連接至該第一結合域之連接子影響該第一結構域之結合親和力。在一些實施例中，當該第一域連接至連接子域時，第一結合域包含改變的針對USP7之結合親和力。在一些實施例中，當該第一域連接至連接子域時，第一結合域包含增加的針對USP7之結合親和力。在一些實施例中，當該第一域連接至連接子域時，第一結合域包含降低的針對USP7之結合親和力。在一些實施例中，連接至連接子域之第一結合域具有改變的抑制USP7之水解酶活性的能力。在一些實施例中，連接至連接子域之第一結合域具有增加的抑制USP7之水解酶活性的能力。在一些實施例中，連接至連接子域之第一結合域具有降低的抑制USP7之水解酶活性的能力。在一些實施例中，連接至連接子域之第一結合域不抑制USP7之水解酶活性。
第一及/或第二結合域可直接地、間接地、共價地、非共價地、剛性地及/或可撓性地連接至連接子域。在一些實施例中，結合域可藉由剛性共價鍵直接連接至連接子域。在一些實施例中，結合域可藉由共價鍵直接連接至連接子域。在一些實施例中，結合域可藉由可撓性共價鍵直接連接至連接子域。在一些實施例中，結合域可藉由剛性非共價鍵直接連接至連接子域。在一些實施例中，結合域可藉由非共價鍵直接連接至連接子域。在一些實施例中，結合域可藉由可撓性非共價鍵直接連接至連接子域。在一些實施例中，第一或第二結合域可藉由共價鍵連接至連接子域，而另一結合域可藉由非共價鍵連接。
熟習此項技術者將瞭解，連接子域必須具有充分可撓性以成功地將USP7及所靶向之Ub-蛋白質有效地彙集在一起。在一些實施例中，連接子域包含足以預防過多移動及熵問題的剛性連接子。在一些實施例中，連接子域之長度包含將USP7及所靶向之Ub-蛋白質有效地彙集在一起的長度。在一些實施例中，連接子域之可撓性及長度的組合提供將USP7及所靶向之泛素化蛋白質有效地彙集在一起。熟習此項技術者將瞭解，連接子域由此在尺寸及可撓性兩個方面應為有效的。
在一個實施例中，連接子域用以將第一結合域連接至第二結合域。熟習此項技術者應理解，第一結合域與第二結合域之間的連接可以多種方式達成。舉例而言，該連接可為共價或非共價的。熟習此項技術者應理解，連接子域可為第一結合域與第二結合域之間的直接共價鍵。在一個實施例中，共價鍵聯包括第一結合域與第二結合域中之原子之間的單一、雙重或三重共價鍵，其為直接地或間接地經由一系列原子及共價鍵。在一個實施例中，非共價鍵聯包括非共價分子間相互作用之全部形式，包括(但不限於)靜電相互作用、氫鍵相互作用、凡得瓦爾力(Van der Waals forces)、疏水性相互作用及親水性相互作用。
在某些實施例中，連接子域為單個胺基酸。在某些實施例中，連接子域包含肽。在某些實施例中，肽包含2至50個胺基酸。在某些實施例中，肽包含4至10個胺基酸。在一些實施例中，肽包含4、5、6、7、8、9或10個胺基酸。在一些實施例中，肽包含11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個胺基酸。
在某些實施例中，連接子域包含小分子。在某些實施例中，小分子為有機化合物。在某些實施例中，小分子為合成的非天然存在之化合物。在一個實施例中，連接子域可為低分子量為至多1,000道爾頓之尺寸為10 nm或更小的小有機分子。在另一實施例中，連接子域可為含有例如大致100個或更少胺基酸的短肽。
在某些實施例中，連接子域經設計以將USP7酶安置於接近Ub-蛋白質。如熟習此項技術者將理解，泛素蛋白酶與泛素蛋白酶使Ub-蛋白質去泛素化所必需之Ub-蛋白質之間的鄰近度或距離將視蛋白酶/蛋白質組合而變化。
在某些實施例中，USP7至Ub-蛋白質之距離為20Å至1Å。在某些實施例中，USP7至Ub-蛋白質之距離為20 Å或更小。在某些實施例中，USP7至Ub-蛋白質之距離為15 Å或更小。在某些實施例中，USP7至Ub-蛋白質之距離為10 Å或更小。在某些實施例中，USP7至Ub-蛋白質之距離為5 Å或更小。在某些實施例中，USP7與Ub-蛋白質之間的距離使得USP7即使在兩者均未由本文所提供之嵌合分子結合時並未使Ub-蛋白質去泛素化，但確實在兩者均由本文所提供之嵌合分子結合時使Ub-蛋白質去泛素化。
在一些實施例中，連接子為5至20個碳原子長。在一些實施例中，連接子為2至18個碳原子長。在一些實施例中，連接子為2至20個碳原子長。在一些實施例中，連接子為5至10個原子長。在一些實施例中，連接子為10至15個原子長。在一些實施例中，連接子為15至20個原子長。在一些實施例中，連接子為10至20個原子長。在一些實施例中，連接子為2個原子長、3個原子長、4個原子長、5個原子長、6個原子長、7個原子長、8個原子長、9個原子長、10個原子長、11個原子長、12個原子長、13個原子長、14個原子長、15個原子長、16個原子長、17個原子長、18個原子長、19個原子長或20個原子長。
一般熟習此項技術者將容易地認識到，此項技術中通常已知的各種連接子可併入至本文所提供之嵌合分子中。此外，一般熟習此項技術者亦將認識到，雙官能蛋白質水解靶向嵌合(PROTAC)化合物中採用的各種連接子可併入至本文所提供之嵌合分子中，例如參見WO 2016/197114、美國專利9,632,089、美國專利9,938,264等，其以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，連接子包含聚乙二醇。在一些實施例中，連接子包含芳族基。在一些實施例中，連接子包含烷基。在一些實施例中，連接子包含烯基。在一些實施例中，連接子包含磷酸烷酯。在一些實施例中，連接子包含烷基矽氧烷。在一些實施例中，連接子包含環氧基。在一些實施例中，連接子包含醯基鹵化物。在一些實施例中，連接子包含縮水甘油基。在一些實施例中，連接子包含羧酸酯。在一些實施例中，連接子包含酸酐。
在一些實施例中，連接子包含經至少一個羧基部分取代之C1至C18伸烷基。在某些實施例中，連接子可衍生自經至少一個羧基部分取代之C1至C18伸烷基。在某些實施例中，連接子可衍生具有2至18個碳原子之鏈長的自天然或合成來源之胺基酸(多肽)，或該胺基酸之醯基鹵化物。此類胺基酸之非限制性實例為18-胺基十八酸及18-胺基硬脂酸。
在一些實施例中，連接子包含具有2至18個碳原子之鏈長的天然或合成來源之胺基酸(多肽)，或該胺基酸之醯基鹵化物。在一些實施例中，連接子包含具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18個碳原子之鏈長的天然或合成來源之胺基酸(多肽)，或該胺基酸之醯基鹵化物。
在一些實施例中，連接子包含C1至C18伸烷基。在一些實施例中，此連接子可衍生自二鹵基伸烷基。在一些實施例中，連接子包含C1伸烷基、C2伸烷基、C3伸烷基、C4伸烷基、C5伸烷基、C6伸烷基、C7伸烷基、C8伸烷基、C9伸烷基、C10伸烷基、C11伸烷基、C12伸烷基、C13伸烷基、C14伸烷基、C15伸烷基、C16伸烷基、C17伸烷基或C18伸烷基。
在一些實施例中，連接子為衍生自4,4-聯苯酚、二苯甲酸、二苯甲酸鹵化物、二苯甲酸磺酸酯、對苯二甲酸、對苯二甲酸鹵化物及對苯二甲酸磺酸酯之非限制性實例的芳族基。
在另一實施例中，連接子域可包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有1至約100個乙二醇單元、約1至約50個乙二醇單元、1至約25個乙二醇單元、約1至10個乙二醇單元、1至約8個乙二醇單元及1至6個乙二醇單元、2至4個乙二醇單元；或視情況經取代之烷基，其穿插有視情況經取代之O、N、S、P或Si原子。在某些實施例中，連接子經芳基、苯基、苯甲基、烷基、伸烷基或雜環基取代。
在一些實施例中，連接子域包含諸如聚乙二醇、芳族基、烷基、烯基、磷酸烷基酯、烷基矽氧烷、環氧基、醯基鹵化物、縮水甘油基、羧酸酯、烷基胺、烷基醯胺、酮、酸酐或其任何組合之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含聚乙二醇之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含芳族基之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含烷基之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含烯基之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含磷酸烷基酯之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含烷基醯胺之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含烷基及醯胺基之至少一個基團的結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含烷基及胺及/或醯胺基之至少一個基團的結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含烷基矽氧烷之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含環氧基之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含醯基鹵化物之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含縮水甘油基之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含羧酸酯之結構。在一些實施例中，連接子域包含有包含酸酐之結構。
在一些實施例中，連接子域可包含以下由 式 (i)至 (xxiii)表示之連接域中之一者：
Figure 02_image119
Figure 02_image121
Figure 02_image123
。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子包含由式(xxiv)表示之連接子域，其連接第一結合域及第二結合域， - LK 1-LK 2-LK 3- LK 4-LK 5- 式(xxiv) 其中， LK 1、LK 2、LK 3、LK 4及LK 5中之每一者獨立地選自經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基、經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基、經取代或未經取代之C 2-C 24伸烯基、經取代或未經取代之C 2-C 24伸炔基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜芳基、-(CH 2CH 2O) p-、-(OCH 2CH 2) p-、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O) 2-、-S(=O)(=NR LK)-、-C(=O)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)C(=O)-、-C(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)-、-OC(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)O-、-NR LKC(=O)NR LK-、-C(=O)NR LKC(=O)-、-S(=O) 2NR LK-、-NR LKS(=O) 2-、-NR LK-、-N(OR LK)-及一鍵； 各R LK獨立地為H或經取代或未經取代之C 1-C 6烷基；且 p為選自1至20之整數。
在一些實施例中，LK 1連接至第一結合域且LK 5連接至第二結合域。
在一些實施例中，LK 1為-O-。
在一些實施例中，LK 1為-(CH 2CH 2O) p-或-(OCH 2CH 2) p-。在一些實施例中，LK 1為-(CH 2CH 2O) p-。在一些實施例中，LK 1為-(OCH 2CH 2) p-。
在一些實施例中，LK 1為經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基。在一些實施例中，LK 1為經取代或未經取代之C 1-C 12伸雜烷基。
在一些實施例中，LK 1為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基、經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基、經取代或未經取代之C 2-C 24伸烯基或經取代或未經取代之C 2-C 24伸炔基。在一些實施例中，LK 1為經取代或未經取代之C 1-C 18伸烷基。在一些實施例中，LK 1為經取代或未經取代之C 9-C 24伸烷基。
在一些實施例中，p為1。在一些實施例中，p為2。在一些實施例中，p為3。在一些實施例中，p為4。在一些實施例中，p為5。在一些實施例中，p為6。在一些實施例中，p為7。在一些實施例中，p為8。在一些實施例中，p為9。在一些實施例中，p為10。
在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基。在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之C 1-C 12伸雜烷基。
在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基、經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基、經取代或未經取代之C 2-C 24伸烯基或經取代或未經取代之C 2-C 24伸炔基。在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之C 1-C 18伸烷基。在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之C 9-C 24伸烷基。在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之C 1-C 12伸烷基。在一些實施例中，LK 2為
Figure 02_image125
Figure 02_image127
Figure 02_image129
。在一些實施例中，LK 2為
Figure 02_image131
。在一些實施例中，LK 2視情況經一或多個側氧基取代。在一些實施例中，LK 2為鍵結。
在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或經取代或未經取代之雜芳基。在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之環烷基。在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之雜環烷基。在一些實施例中，LK 2為經取代或未經取代之5員或6員單環雜環烷基。在一些實施例中，LK 2為哌𠯤基。
在一些實施例中，LK 2為O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O) 2-、-S(=O)(=NR LK)-、-C(=O)-、-C(=N-OR LK)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)C(=O)-、-C(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)-、-OC(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)O-、-NR LKC(=O)NR LK-、-C(=O)NR LKC(=O)-、-S(=O) 2NR LK-、-NR LKS(=O) 2-或-NR LK-。
在一些實施例中，LK 3為鍵結。在一些實施例中，LK 3為經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或經取代或未經取代之雜芳基。在一些實施例中，LK 3為經取代或未經取代之環烷基。在一些實施例中，LK 3為經取代或未經取代之雜環烷基。在一些實施例中，LK 3為經取代或未經取代之5員或6員單環雜環烷基。在一些實施例中，LK 3為哌𠯤基。
在一些實施例中，LK 3為
Figure 02_image133
。
在一些實施例中，LK 3為O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O) 2-、-S(=O)(=NR LK)-、-C(=O)-、-C(=N-OR LK)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)C(=O)-、-C(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)-、-OC(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)O-、-NR LKC(=O)NR LK-、-C(=O)NR LKC(=O)-、-S(=O) 2NR LK-、-NR LKS(=O) 2-或-NR LK-。
在一些實施例中，LK 3為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基、經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基、經取代或未經取代之C 2-C 24伸烯基或經取代或未經取代之C 2-C 24伸炔基。在一些實施例中，LK 3為經取代或未經取代之C 1-C 18伸烷基。在一些實施例中，LK 3為經取代或未經取代之C 9-C 24伸烷基。在一些實施例中，LK 3為經取代或未經取代之C 1-C 12伸烷基。在一些實施例中，LK 3視情況經一或多個側氧基取代。
在一些實施例中，LK 4為鍵結。
在一些實施例中，LK 4為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基、經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基、經取代或未經取代之C 2-C 24伸烯基或經取代或未經取代之C 2-C 24伸炔基，在一些實施例中，LK 4為經取代或未經取代之C 1-C 18伸烷基，在一些實施例中，LK 4為經取代或未經取代之C 9-C 24伸烷基。在一些實施例中，LK 4為經取代或未經取代之C 1-C 12伸烷基。在一些實施例中，LK 4為
Figure 02_image135
Figure 02_image137
Figure 02_image139
。在一些實施例中，LK 4為
Figure 02_image141
。在一些實施例中，LK 4視情況經一或多個側氧基取代。
在一些實施例中，LK 4為O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O) 2-、-S(=O)(=NR LK)-、-C(=O)-、-C(=N-OR LK)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)C(=O)-、-C(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)-、-OC(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)O-、-NR LKC(=O)NR LK-、-C(=O)NR LKC(=O)-、-S(=O) 2NR LK-、-NR LKS(=O) 2-或-NR LK-。
在一些實施例中，LK 4為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基、經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基、經取代或未經取代之C 2-C 24伸烯基或經取代或未經取代之C 2-C 24伸炔基。在一些實施例中，LK 4為經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基。在一些實施例中，LK 4為經取代或未經取代之C 1-C 12伸雜烷基。
在一些實施例中，LK 5為鍵結。在一些實施例中，LK 5為O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O) 2-、-S(=O)(=NR LK)-、-C(=O)-、-C(=N-OR LK)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)C(=O)-、-C(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)-、-OC(=O)NR LK-、-NR LKC(=O)O-、-NR LKC(=O)NR LK-、-C(=O)NR LKC(=O)-、-S(=O) 2NR LK-、-NR LKS(=O) 2-或-NR LK-。在一些實施例中，LK 5為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基、經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基、經取代或未經取代之C 2-C 24伸烯基或經取代或未經取代之C 2-C 24伸炔基。
在一些實施例中，LK 1、LK 2、LK 3、LK 4及LK 5中之每一者獨立地經一或多個個別地且獨立地選自以下之額外基團取代：D、側氧基、鹵素、-CN、-NH 2、-NH(烷基)、-N(烷基) 2、-OH、-CO 2H、-CO 2烷基、-C(=O)NH 2、-C(=O)NH(烷基)、-C(=O)N(烷基) 2、-S(=O) 2NH 2、-S(=O) 2NH(烷基)、-S(=O) 2N(烷基) 2、烷基、環烷基、氟烷基、雜烷基、烷氧基、氟烷氧基、雜環烷基、芳基、雜芳基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷基亞碸、芳基亞碸、烷基碸及芳基碸。在一些其他實施例中，視情況選用之取代基係獨立地選自：D、鹵素、-CN、-NH 2、-NH(CH 3)、-N(CH 3) 2、-OH、-CO 2H、-CO 2(C 1-C 4烷基)、-C(=O)NH 2、-C(=O)NH(C 1-C 4烷基)、-C(=O)N(C 1-C 4烷基) 2、-S(=O) 2NH 2、-S(=O) 2NH(C 1-C 4烷基)、-S(=O) 2N(C 1-C 4烷基) 2、C 1-C 4烷基、C 3-C 6環烷基、C 1-C 4氟烷基、C 1-C 4雜烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4氟烷氧基、-SC 1-C 4烷基、-S(=O)C 1-C 4烷基及-S(=O) 2C 1-C 4烷基。在一些實施例中，LK 1、LK 2、LK 3、LK 4及LK 5中之每一者獨立地經一或多個個別地且獨立地選自以下之額外基團取代：D、側氧基、鹵素、-CN、-NH 2、-NH(烷基)、-N(烷基) 2、-OH、-CO 2H、C 1-C 6烷基、C 1-C 6氟烷基、C 1-C 6雜烷基或C 1-C 6烷氧基。
在一些實施例中，LK 1為-(CH 2CH 2O) p-或-(OCH 2CH 2) p-且LK 2、LK 3、LK 4及LK 5中之每一者為鍵結。在一些實施例中，p為5。在一些實施例中，p為4。在一些實施例中，p為3。在一些實施例中，p為6。在一些實施例中，p為7。在一些實施例中，p為2至10。
在一些實施例中，LK 1為-O-、LK 2為C 1-C 6伸烷基。LK 3為
Figure 02_image143
，LK 4為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基或經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基。
在一些實施例中，LK 1為-O-，LK 2為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基，且LK 3、LK 4及LK 5中之每一者為鍵結。
在一些實施例中，LK 1及LK 2中之每一者為經取代或未經取代之C 1-C 24伸烷基或經取代或未經取代之C 1-C 24伸雜烷基，且LK 3、LK 4及LK 5中之每一者為鍵結。
在一些實施例中，R LK獨立地為H。在一些實施例中，R LK為經取代或未經取代之C 1-C 6烷基，例如C 1-C 3烷基，包括甲基。
在一些實施例中，式(xxiv)之連接子域係選自：
Figure 02_image145
Figure 02_image147
。在一些實施例中，連接子域為或包含
Figure 02_image149
。在一些實施例中，連接子域為或包含
Figure 02_image151
。在一些實施例中，連接子域為或包含
Figure 02_image153
。在一些實施例中，連接子域為或包含
Figure 02_image155
。在一些實施例中，連接子域為或包含
Figure 02_image157
。在一些實施例中，-O-連接至第一結合域且伸乙基連接至第二結合域。在一些實施例中，-O-連接至第二結合域且伸乙基連接至第一結合域。
在一些實施例中，式(xxiv)之連接子域係選自
Figure 02_image159
，其中k為0至25，k1為0至10，且k2為0至10。在一些實施例中，式(xxiv)之連接子域包含
Figure 02_image161
或
Figure 02_image163
之結構，其中k為0至25，k1為0至10且k2為0至10。在一些實施例中，式(xxiv)之連接子域包含
Figure 02_image165
，其中k為0至25，k1為0至10且k2為0至10。在一些實施例中，k為0。在一些實施例中，k為1。在一些實施例中，k為2。在一些實施例中，k為3。在一些實施例中，k為4。在一些實施例中，k為5。在一些實施例中，k為6。在一些實施例中，k為7。在一些實施例中，k為8。在一些實施例中，k為9。在一些實施例中，k為10。在一些實施例中，k為11。在一些實施例中，k為12。在一些實施例中，k為13。在一些實施例中，k為14。在一些實施例中，k為15。在一些實施例中，k為16。在一些實施例中，k為17。在一些實施例中，k為18。在一些實施例中，k為19。在一些實施例中，k為20。在一些實施例中，k為21。在一些實施例中，k為22。在一些實施例中，k為23。在一些實施例中，k為24。在一些實施例中，k為25。在一些實施例中，k1為0。在一些實施例中，k1為1。在一些實施例中，k1為2。在一些實施例中，k1為3。在一些實施例中，k1為4。在一些實施例中，k1為5。在一些實施例中，k1為6。在一些實施例中，k1為7。在一些實施例中，k1為8。在一些實施例中，k1為9。在一些實施例中，k1為10。在一些實施例中，k2為0。在一些實施例中，k2為1。在一些實施例中，k2為2。在一些實施例中，k2為3。在一些實施例中，k2為4。在一些實施例中，k2為5。在一些實施例中，k2為6。在一些實施例中，k2為7。在一些實施例中，k2為8。在一些實施例中，k2為9。在一些實施例中，k2為10。在一些實施例中，連接子域包含
Figure 02_image167
之結構。在一些實施例中，連接子域包含
Figure 02_image169
之結構。
在一些實施例中，式(AA)之嵌合分子包含式( i)至( xxiv)之連接子。在一些實施例中，式(AA)之嵌合分子包含式( xxiv)之連接子。
在某些實施例中，連接子單元中之每一者獨立地為經取代或未經取代的具有2至50個碳原子之直鏈或分支鏈烷基鏈、具有2至50個碳原子之磷酸烷基酯鏈、具有2至50個碳原子之烷基醚鏈(例如，具有各種長度之PEG、PPG)、烷基醯胺、烷基胺或其任何組合。在一些實施例中，連接子包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有8個乙二醇單元。在額外實施例中，連接子包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有11個乙二醇單元。在額外實施例中，連接子包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有14個乙二醇單元。在額外實施例中，連接子包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有17個乙二醇單元。
在某些實施例中，連接子可為不對稱的。在某些實施例中，連接子可為對稱的。
連接子連接至結合域之化學物質包括但不限於酯、醯胺、胺、醯肼、硫醇、碸、亞碸、醚、羥胺、雜環、乙炔、烷基及烯烴。 SURTAC分子
在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域( 圖 1D)。在一些實施例中，包含以下之嵌合分子稱為存活靶向嵌合(「SURTAC」)分子：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-蛋白質之目標結合劑之第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域。
在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-CFTR蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域。在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-CFTR蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域，其中該Ub-CFTR蛋白質包含野生型CFTR或突變CFTR。在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-CFTR蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域，其中該CFTR蛋白質摺疊異常。在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-CFTR蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域，其中該CFTR蛋白質經正確摺疊。在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-CFTR蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域，其中該CFTR蛋白質小於全長CFTR。
在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-PARP-1蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域。在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-PARP-1蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域，其中該Ub-PARP-1蛋白質包含WT PARP-1。
在一些實施例中，嵌合分子包含：包含USP7結合劑之第一結合域、包含經設計以結合於Ub-PKA蛋白質之目標結合劑的第二結合域，及將第一結合域與第二結合域連接之連接子域。
在一些實施例中，第一結合域及第二結合域在空間上經配置以使USP7及Ub-蛋白質充分接近以允許USP7使所結合之Ub-蛋白質去泛素化。在一些實施例中，Ub-蛋白質之去泛素化增加該蛋白質之半衰期。在一些實施例中，第一結合域及第二結合域在空間上經配置以使USP7及Ub-CFTR蛋白質充分接近以允許USP7使所結合之Ub-CFTR去泛素化。在一些實施例中，Ub-蛋白質之去泛素化增加該CFTR之半衰期。在一些實施例中，第一結合域及第二結合域在空間上經配置以使USP7及Ub-PARP-1充分接近以允許USP7使所結合之Ub-PARP-1去泛素化。在一些實施例中，Ub-蛋白質之去泛素化增加該PARP-1之半衰期。在一些實施例中，Ub-蛋白質之去泛素化增加細胞核中該PARP-1之局部濃度。在一些實施例中，Ub-蛋白質之去泛素化增加結合至DNA之該PARP-1的量。
由於USP7結合劑及Ub-蛋白質結合劑之尺寸及體積不同，在設計本文所提供之嵌合分子的一個特定實施例時要解決第一結合域、第二結合域及連接子域相對於彼此之相對定向。一般而言，本文所提供之嵌合分子，且特定言之此等三個域之相對定向經設計以允許由第一結合域結合之USP7使由第二結合域結合之Ub-蛋白質去泛素化。
在一個實施例中，本文提供之嵌合分子經設計以特異性地結合各種細胞蛋白質，例如USP7酶及Ub-目標蛋白。在一些實施例中本文所提供之嵌合分子結合於包含胞內蛋白質之Ub-目標蛋白。在一些實施例中，本文所提供之嵌合分子結合於包含核蛋白質之Ub-目標蛋白。在一些實施例中，本文所提供之嵌合分子結合於部分在胞內且部分嵌入膜(例如質膜(「PM」))內的Ub-蛋白質，其中接近的Ub-蛋白質為胞內的。非限制性實例包括內嵌質膜於的受體蛋白質或孔隙蛋白質，其在一些實施例中可具有剛好暴露於細胞之(PM之)胞溶質側面上或PM之胞溶質側面上及胞外的蛋白質表面。
在某些實施例中，本文提供之嵌合分子結合至Ub-蛋白質。在某些實施例中，本文提供之嵌合分子結合至USP7。在某些實施例中，本文提供之嵌合分子同時結合至Ub-蛋白質及USP7。在某些實施例中，本文提供之嵌合分子在重疊時間結合至Ub-蛋白質及USP7兩者，同時不需要Ub-蛋白質結合時間與USP7結合時間一致。在某些實施例中，本文提供之嵌合分子結合至Ub-蛋白質、USP7、或Ub-蛋白質及USP7兩者。
在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，結合Ub-蛋白質及USP7。在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，且首先結合Ub-蛋白質且接著結合USP7。在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，且首先結合USP7且接著結合Ub-蛋白質。
在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，結合Ub-CFTR及USP7。在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，且首先結合CFTR且接著結合USP7。在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，且首先結合USP7且接著結合CFTR。
在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，結合Ub-PARP-1及USP7。在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，且首先結合PARP-1且接著結合USP7。在一些實施例中，嵌合分子進入細胞，且首先結合USP7且接著結合PARP-1。在一些實施例中，嵌合分子結合細胞內之Ub-PARP1及USP7酶。
在一些實施例中，嵌合分子在第二結合位點結合Ub-蛋白質，且在第一結合位點結合之USP7使Ub-蛋白質去泛素化。在一些實施例中，去泛素化使得Ub-蛋白質之穩定性增加。在一些實施例中，去泛素化使得Ub-蛋白質之半衰期增加。在一些實施例中，去泛素化使得Ub-蛋白質之局部濃度增加。
在一些實施例中，當Ub-蛋白質包含CFTR時，嵌合分子增強CFTR之功能性，其中其可增強CFTR至PM之運輸。在一些實施例中，嵌合分子增強CFTR至膜之運輸且甚至增強CFTR在PM中之恰當內化及摺疊。在一些實施例中，嵌合分子校正CFTR至PM之運輸以確保更多CFTR通道達至外部細胞表面。在一些實施例中，嵌合分子校正CFTR至PM之運輸以確保PM處之功能性CFTR通道。在一些實施例中，嵌合分子校正CFTR至PM之運輸以增加PM處之功能性CFTR通道的數目。在一些實施例中，嵌合分子增加PM處之功能性CFTR通道的量。在一些實施例中，嵌合分子有助於激活PM處之CFTR功能。在一些實施例中，嵌合分子激活PM處之CFTR功能，其中CFTR通道功能，例如陰離子轉運增強。在一些實施例中，嵌合分子激活PM處之CFTR，恢復CFTR功能。在一些實施例中，嵌合分子加強PM處之CFTR功能。在一些實施例中，嵌合分子加強PM處之CFTR功能，其中CFTR通道功能，例如陰離子轉運增強。在一些實施例中，嵌合分子加強PM處之CFTR且恢復CFTR功能。在一些實施例中，嵌合分子恢復PM處之正確CFTR功能。
在一些實施例中，嵌合分子在第二結合位點處結合Ub-CFTR且第一結合位點處所結合之USP7使Ub-蛋白質去泛素化。在一些實施例中，去泛素化使得Ub-蛋白質之穩定性增加。在一些實施例中，去泛素化使得Ub-蛋白質之半衰期增加。
在一些實施例中，當Ub-蛋白質包含PARP-1時，嵌合分子增強PARP-1之功能性，其中PARP-1保留其藉由DNA之捕獲活性。在一些實施例中，當Ub-蛋白質包含PARP-1時，嵌合分子增強PARP-1之功能性，其中細胞核中PARP-1之量增加使腫瘤細胞中之DNA損壞、細胞應力及細胞死亡增加。
在一些實施例中，嵌合分子具有雙重功能及(1) USP7使Ub-蛋白質去泛素化，從而使得穩定性增加、半衰期增加或該兩者，及(2)目標結合劑影響Ub-蛋白質之功能性，例如但不限於增強可用Ub-蛋白質或其用於治療性治療之去泛素化形式的量、改善該Ub-蛋白質之摺疊、校正該Ub-蛋白質之摺疊、增強Ub-蛋白質之活性、幫助正確地靶向細胞內之Ub-蛋白質、加強Ub-蛋白質之活性及/或增強Ub-蛋白質之運輸。
在一些實施例中，嵌合分子具有雙重功能及(1) USP7使Ub-CFTR蛋白質去泛素化，從而使得穩定性增加、半衰期增加或該兩者及(2)目標結合劑影響Ub-CFTR之功能性，例如但不限於增強CFTR至PM之運輸、增強CFTR至膜之運輸及增強CFTR在PM中之恰當內化及摺疊、校正CFTR至PM之運輸以確保更多CFTR通道達至外部細胞表面、校正CFTR至PM之運輸以確保PM處之功能性CFTR通道、校正CFTR至PM之運輸一確保更朵CFTR通道達至外部細胞表面、校正CFTR至PM之運輸以確保PM處之功能性CFTR通道增加、PM處之功能性CFTR通道之數目增加、PM處之功能性CFTR通道的量增加、有助於激活PM處之CFTR功能、增強CFTR通道功能(例如陰離子轉運)、藉由CFTR加強離子跨越PM之轉運、恢復PM處之CFTR功能、恢復及增強PM處之CFTR功能。
在一些實施例中，嵌合分子具有雙官能性且(1) USP7使Ub-PARP-1蛋白質去泛素化，導致半衰期增加及局部濃度增加，或該兩者，其中PARP-1之量增加使得DNA上捕獲之PARP-1增加，且腫瘤細胞中之DNA損壞增加、細胞應力增加及細胞死亡增加。
在一些實施例中，嵌合分子具有雙功能及(1)USP7使Ub-PKA蛋白質去泛素化，從而使得半衰期增加及局部濃度增加或該兩者，其中PKA之量增加充當成骨分化中cAMP/PKA/CREB路徑之活化劑。在一些實施例中，嵌合分子可用於治療骨骼相關之疾病，諸如成骨不全(OI)。在一些實施例中，嵌合分子可用於促進成骨。在一些實施例中，嵌合分子可用於治療與PKA相關之疾病或病況。
在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及/或之後不抑制Ub-蛋白質之活性及/或USP7之活性。在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及之後不抑制Ub-蛋白質之活性。在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及之後不抑制USP7之活性。在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及之後不抑制Ub-蛋白質之活性及USP7之活性。
熟悉此項技術者將瞭解，提及USP7活性包含蛋白酶活性。在一些實施例中，嵌合USP7結合劑分子結合於USP7酶且不抑制蛋白酶活性。在一些實施例中，嵌合USP7結合劑分子結合於USP7酶，其中蛋白酶活性之抑制與未結合作為嵌合分子之部分的類似USP7結合劑相比極小。在一些實施例中，嵌合USP7結合劑分子結合於USP7酶，其中蛋白酶活性之抑制與未結合作為嵌合分子之部分的類似USP7結合劑所觀測到的抑制相比降低。
在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及/或之後不抑制Ub-CFTR之活性及/或USP7之活性。在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在泛素化期間及之後不抑制Ub-CFTR之活性。在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及之後不抑制Ub-CFTR之活性及USP7之活性。
在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及/或之後不抑制Ub-PARP-1之活性及/或USP7之活性。在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及之後不抑制Ub-PARP-1之活性。在某些實施例中，本文所提供之嵌合分子在去泛素化期間及之後不抑制Ub-PARP-1之活性及USP7之活性。
在某些實施例中，嵌合分子可使USP7及Ub-蛋白質(例如但不限於Ub-CFTR及/或Ub-PARP-1)處於功能範圍內，與其對USP7活性或Ub-蛋白質活性(例如Ub-CFTR、PKA及/或Ub-PARP-1活性)之作用無關。在某些實施例中，嵌合分子可經置換，同時USP7現將處於適當位置以自Ub-蛋白質裂解Ub分子。因此，使用嵌合分子將有效地維持或增加Ub-蛋白質(例如但不限於Ub-CFTR、PKA及/或Ub-PARP-1)之預期半衰期。
熟悉此項技術者將瞭解，去泛素化蛋白質在一些實施例中可仍包含一或多個Ub分子，其中與本文所揭示之嵌合SURTAC分子接觸之後的Ub分子數目比與SURTC分子接觸之前的Ub分子數目更少。在其他實施例中，去泛素化蛋白質可不包含Ub分子。因此，在某些實施例中，如本文中所使用之術語「Ub-目標」涵蓋具有至少一個Ub分子之目標，而在其他實施例中，該術語涵蓋與本文所描述之嵌合分子結合之前的Ub分子數目相比，具有更少或不具有Ub分子之去泛素化目標。
在一個實施例中，本文所提供之嵌合分子被動地擴散跨過細胞膜。在一個實施例中，本文所提供之嵌合分子被動地擴散跨過PM。在一個實施例中，本文所提供之嵌合分子被動地擴散跨過核膜。
在一個實施例中，本文所提供之嵌合分子不靶向任何特定細胞群體。然而，混雜的細胞進入可能在活體內存在問題，尤其在全身性投藥期間。因此，在另一實施例中，本文所提供之嵌合分子可進一步包含第三結合域，其特異性地靶向由限定之細胞群體呈現之抗原。第三結合域可包含特異性識別細胞呈現抗原之分子，諸如抗體或其片段。在替代例中，第三結合域可包含由細胞呈現抗原特異性識別之分子，諸如細胞呈現抗原之配位體。在替代例中第三結合域可包含由細胞呈現抗原特異性識別之分子，諸如適體。熟習此項技術者應理解，因為第三結合域結合在細胞外部之細胞呈現抗原，所以其不需要額外步驟的情況下在結合之後並未共價連接至細胞呈現抗原。
不受任何理論或機制束縛，假設第三結合域短暫地結合於細胞呈現抗原，至少持續極少時間以允許本文所提供之嵌合分子結合至細胞呈現抗原，進而進入細胞。
在另一實施例中，本文所提供之嵌合分子穿透膜(例如PM)之固有能力可藉由進一步包含細胞穿透標籤強化。因此，本文所提供之嵌合分子可進一步包含細胞穿透標籤，其增加本文所提供之嵌合分子的細胞或膜穿透傾向。不受任何理論或機制束縛，假設細胞穿透標籤與細胞之膜短暫地相互作用，至少持續極少時間以允許本文所提供之嵌合分子進入細胞。熟習此項技術者應理解，多種細胞穿透標籤已經為已知的，諸如每年鑑別出更多的細胞穿透肽(CPP)。細胞穿透標籤，諸如細胞穿透肽(CPP)可為促進細胞攝入/攝取各種分子的短肽。本文所提供之嵌合分子可經由化學鍵聯(經由共價鍵)或經由非共價相互作用與CPP締合。
在一些實施例中，泛素化目標多肽為胞溶質。在一些實施例中，泛素化目標多肽為膜結合多肽。
由於本文提供之嵌合分子為合成的，亦即未在自然界中發現，所以熟習此項技術者應理解，本文所提供之嵌合分子可藉由例如蛋白質合成及有機化學之領域中已知的任何方法來產生。因此，本文所提供之嵌合分子可在活體外產生。當本文所提供之嵌合分子可完全或部分地由胺基酸製成，例如可為肽或蛋白質時，本文所提供之嵌合分子可藉由編碼本文所提供之嵌合分子的核酸序列(諸如mRNA、單股DNA (ssDNA)及雙股DNA (dsDNA))來產生。
如熟習此項技術者將理解，本文所提供之分子可結合其目標，對其目標執行作用，且接著釋放其目標。在某些實施例中，第二結合域短暫地結合於Ub-蛋白質，例如但不限於Ub-CFTR及/或PARP-1，且在藉由USP7自Ub-蛋白質(例如但不限於Ub-CFTR及/或PARP-1)移除一或多個泛素分子之後自該蛋白質解離。在某些實施例中，第二結合域識別僅在其泛素化狀態下之Ub-蛋白質，例如但不限於Ub-CFTR及/或PARP-1且並不識別在其去泛素化狀態下的相同蛋白質(例如，當全部或一些泛素分子自Ub-蛋白質 (例如但不限於Ub-CFTR及/或PARP-1)移除時)。在某些實施例中，第二結合域識別Ub-蛋白質，例如但不限於Ub-CFTR及/或PARP-1，與其泛素化狀態無關。
在某些實施例中，第二結合域短暫地結合於Ub-蛋白質，例如但不限於Ub-PKA且在藉由USP7自Ub-蛋白質(例如但不限於Ub-PKA)移除一或多個泛素分子之後自該蛋白質解離。在某些實施例中，第二結合域識別僅在其泛素化狀態下之Ub-蛋白質，例如但不限於Ub-PKA且並不識別在其去泛素化狀態下的相同蛋白質(例如，當全部或一些泛素分子自Ub-蛋白質(例如但不限於Ub-PKA移除時)。在某些實施例中，第二結合域識別Ub-蛋白質，例如但不限於Ub-PKA，與其泛素化狀態無關。
在一個實施例中，本文提供之嵌合分子經設計以使任何Ub-蛋白質非常接近於USP7，使得去泛素化酶可自Ub-蛋白質移除一或多個泛素分子。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含Ub-CFTR。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含Ub-PARP-1。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含Ub-PKA。在某些實施例中，Ub-蛋白質攜載單泛素分子。在某些實施例中，Ub-蛋白質在結合於上文所描述之嵌合分子後攜載單泛素分子在某些實施例中，Ub-蛋白質攜載聚泛素鏈。在某些實施例中，Ub-蛋白質在結合於上文所描述之嵌合分子之後攜載聚泛素鏈。在某些實施例中，聚泛素鏈包含至少2個泛素分子。在某些實施例中，聚泛素鏈包含至少4個泛素分子。在某些實施例中，聚泛素鏈包含至少6個泛素分子。在某些實施例中，聚泛素鏈包含至少8個泛素分子。在某些實施例中，聚泛素鏈包含至少10個泛素分子。
在某些實施例中，聚泛素鏈包含2至50個泛素分子。在某些實施例中，聚泛素鏈包含4至45個泛素分子。在某些實施例中，聚泛素鏈包含6至40個泛素分子。在某些實施例中，聚泛素鏈包含8至35個泛素分子。在某些實施例中，聚泛素鏈包含10至30個泛素分子。
在另一實施例中，由本文所提供之嵌合分子結合之Ub-蛋白質可為USP7之非天然目標。例如尚未已知為USP7之受質的蛋白質。
在一個實施例中，本文所揭示之嵌合分子之雙重結合活性使得一或多個泛素分子自USP7蛋白質實質裂解。在一個實施例中，本文所揭示之嵌合分子之雙重結合活性使得一或多個泛素分子自尚未已知為USP7受質的Ub-蛋白質裂解。
在一些實施例中，裂解包含Ub-Ub鍵之裂解。在一些實施例中，裂解包含Ub-蛋白質鍵之裂解。在一些實施例中，裂解包含比Ub-蛋白質鍵之裂解更強的Ub-Ub鍵之裂解。
在一個實施例中，自蛋白質受質移除一或多個泛素可為部分的，亦即蛋白質自本文所提供之具有比其所結合之Ub鏈更短的Ub鏈的嵌合分子脫離。在另一實施例中，一或多個泛素之移除可為完全的，亦即蛋白質自本文提供之不含任何Ub分子的嵌合分子脫離。在任一情況下，所產生的部分或完全去泛素化蛋白質經歷UPS相關蛋白質降解之傾向在未消除時顯著降低。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由下 式 (1*) 、式 (2*)或 式 (6*)中任一者之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 ( 1* )之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2 * )之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6 * )之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示的USP7結合劑，及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。熟悉此項技術者將瞭解，嵌合分子可包含例如由 式 (1) 至式 (7)中任一者表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)中任一者表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者或其醫藥學上可接受之鹽、 式 (1*) 、式 (2*) 或式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。熟悉此項技術者將瞭解，嵌合分子可包含例如由下 式 (1) 至式 (7)、 式 (1*) 、式 (2*) 或式 (6*)中任一者表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)中任一者表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 ( 2* )之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 ( 6* )之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)、 K*、 K**、 B*、 B**及 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含USP7結合劑及結合於PKA之目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含USP7結合劑及由 式 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其具有式(AA)之結構。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由式K*之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由式K**之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由式B*之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由式B**之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由式K*之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由式B*之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由式K**之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由式B**之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (1*)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由式K*之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由式B*之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由式K**之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由式B**之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2*)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由式K*之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由式B*之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由式K**之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由式B**之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6*)之結構表示的USP7結合劑及由式(L)至(N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文揭示之嵌合分子由 表 1中呈現的嵌合分子 I 至 XX之結構表示。左側行提供嵌合分子編號(#)，且中間行展示基於所鑑別出之目標結合劑域分組的嵌合分子結構。USP7結合劑經表示但決不視為受如上文所描述的 式 (6)或 式 (7)之結構限制。
表 1 ： 一般嵌合分子
# 目標結合劑 A 及 H ( 依伐卡托 )
I
Figure 02_image171
II
Figure 02_image173
III
Figure 02_image175
IV
Figure 02_image177
目標結合劑 B 及 J ( 魯瑪卡托 )
V
Figure 02_image179
VI
Figure 02_image181
VII
Figure 02_image183
VIII
Figure 02_image185
目標結合劑 C ( 特薩卡托 )
IX
Figure 02_image187
X
Figure 02_image189
目標結合劑 D ( 埃克斯卡托 )
XI
Figure 02_image191
XII
Figure 02_image193
目標結合劑 E (ABBV-2222)
XIII
Figure 02_image195
XIV
Figure 02_image197
目標結合劑 F ( 帕森納卡托 )
XV
Figure 02_image199
XVI
Figure 02_image201
目標結合劑 G ( 勒瑟利卡托 )
XVII
Figure 02_image203
XVIII
Figure 02_image205
目標結合劑 K ( 奧拉帕尼 )
XIX
Figure 02_image207
XX
Figure 02_image209
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子具有
Figure 02_image211
之結構，其中LINKER為本文所描述之連接子域，例如式(xxiv)之連接子域，其中第二結合域視情況經取代。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子具有
Figure 02_image213
之結構，其中LINKER為本文所描述之連接子域，例如式(xxiv)之連接子域，其中第二結合域視情況經取代。
在一些實施例中，表1之嵌合分子之連接子域可包含以下連接域中之一者，如由式( i)至( xxiii)表示：
Figure 02_image215
Figure 02_image217
Figure 02_image219
。每一者表示本發明之不同實施例。在一些實施例中，連接子域包含式(xxiv)之結構。
在某些實施例中，連接子單元中之每一者獨立地為經取代或未經取代的具有2至50個碳原子之直鏈或分支鏈烷基鏈、具有2至50個碳原子之磷酸烷基酯鏈、具有2至50個碳原子之烷基醚鏈(例如，具有各種長度之PEG、PPG)、烷基醯胺、烷基胺或其任何組合。在一些實施例中，連接子包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有8個乙二醇單元。在額外實施例中，連接子包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有11個乙二醇單元。在額外實施例中，連接子包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有14個乙二醇單元。在額外實施例中，連接子包含視情況經取代之(聚)乙二醇，其具有17個乙二醇單元。
在某些實施例中，連接子可為不對稱的。在某些實施例中，連接子可為對稱的。
連接子連接至結合域之化學物質包括但不限於酯、醯胺、胺、醯肼、硫醇、碸、亞碸、醚、羥胺、雜環、乙炔、烷基及烯烴。
在某些實施例中，本文揭示之嵌合分子由下文提供的表2中之 嵌合分子 1 至 54或表3中之 嵌合分子 55至 177之結構中之任一者表示。 表 2 ： 嵌合分子 1 至 54
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表 3 ： 嵌合分子 55 至 162
Figure 02_image249
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Figure 02_image307
Figure 02_image309
在一些實施例中，由表2及表3中揭示之結構表示的嵌合分子之結構域的順序為：目標結合劑域-連接子域-USP7結合劑域。在其他實施例中，由表2及表3中揭示之結構表示的嵌合分子之結構域的順序為：USP7結合劑域-連接子域-目標結合劑域。熟習此項技術者將瞭解，基於本文所提供之揭示內容，哪些域為USP7結合劑域、連接子域及目標結合劑域，與完整嵌合結構之定向無關。 化學定義
在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺基、CN、-NHCOR 6、-OC(O)R 6、-C(O)OR 6、C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH、-C(O)-烷基、-C(O)O-烷基或-C(O)NH-烷基或SH。每一者代表本發明之不同實施例。
在式(1*)或(1)之一些實施例中，W 1為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 1為-OH。在一些實施例中，W 1為SH。在一些實施例中，W 1為H。在一些實施例中，W 1為鹵素。在一些實施例中，W 1為CN。在一些實施例中，W 1為NO 2。在一些實施例中，W 1為-OR a。在一些實施例中，W 1為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或N(烷基) 2)。在一些實施例中，W 1為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 1為COOH。在一些實施例中，W 1為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 1為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 1為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 1為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 1為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 1為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 1為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 1為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 1為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 1為芳基。在一些實施例中，W 1為雜芳基。
在式(1)之一些實施例中，W 1為-OH。在式(1*)之一些實施例中，W 1為-OH。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 2為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 2為-OH。在一些實施例中，W 2為SH。在一些實施例中，W 2為H。在一些實施例中，W 2為鹵素。在一些實施例中，W 2為CN。在一些實施例中，W 2為NO 2。在一些實施例中，W 2為-OR a。在一些實施例中，W 2為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或N(烷基) 2)。在一些實施例中，W 2為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 2為COOH。在一些實施例中，W 2為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 2為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 2為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 2為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 2為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 2為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 2為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 2為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 2為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 2為芳基。在一些實施例中，W 2為雜芳基。
在式(1*)之一些實施例中，W 2為H。在式(2*)之一些實施例中，W 2為H。
在式(1)之一些實施例中，W 2為H。在式(2)之一些實施例中，W 2為H。在式(3)之一些實施例中，W 2為H。在式(4)之一些實施例中，W 2為H。在式(5)之一些實施例中，W 2為H。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 3為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 3為-OH。在一些實施例中，W 3為SH。在一些實施例中，W 3為H。在一些實施例中，W 3為鹵素。在一些實施例中，W 3為CN。在一些實施例中，W 3為NO 2。在一些實施例中，W 3為-OR a。在一些實施例中，W 3為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 3為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 3為COOH。在一些實施例中，W 3為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 3為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 3為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 3為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 3為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 3為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 3為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 3為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 3為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 3為芳基。在一些實施例中，W 3為雜芳基。
在式(1*)之一些實施例中，W 3為H。在式(2*)之一些實施例中，W 3為H。
在式(1)之一些實施例中，W 3為H。在式(2)之一些實施例中，W 3為H。在式(3)之一些實施例中，W 3為H。在式(4)之一些實施例中，W 3為H。在式(5)之一些實施例中，W 3為H。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 4為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 4為-OH。在一些實施例中，W 4為-SH。在一些實施例中，W 4為H。在一些實施例中，W 4為鹵素。在一些實施例中，W 4為CN。在一些實施例中，W 4為NO 2。在一些實施例中，W 4為-OR a。在一些實施例中，W 4為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 4為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 4為COOH。在一些實施例中，W 4為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 4為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 4為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 4為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 4為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 4為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 4為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 4為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 4為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 4為芳基。在一些實施例中，W 4為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 4為H。在式(2*)之一些實施例中，W 4為H。
在式(1)之一些實施例中，W 4為H。在式(2)之一些實施例中，W 4為H。在式(3)之一些實施例中，W 4為H。在式(4)之一些實施例中，W 4為H。在式(5)之一些實施例中，W 4為H。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 5為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 5為-OH。在一些實施例中，W 5為-SH。在一些實施例中，W 5為H。在一些實施例中，W 5為鹵素。在一些實施例中，W 5為CN。在一些實施例中，W 5為NO 2。在一些實施例中，W 5為-OR a。在一些實施例中，W 5為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 5為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 5為COOH。在一些實施例中，W 5為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 5為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 5為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 5為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 5為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 5為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 5為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 5為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 5為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 5為芳基。在一些實施例中，W 5為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 5為H。在式(2*)之一些實施例中，W 5為H。
在式(1)之一些實施例中，W 5為H。在式(2)之一些實施例中，W 5為H。在式(3)之一些實施例中，W 5為H。在式(4)之一些實施例中，W 5為H。在式(5)之一些實施例中，W 5為H。
在式(1*)或(1)之一些實施例中，W 6為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 6為-OH。在一些實施例中，W 6為-SH。在一些實施例中，W 6為H。在一些實施例中，W 6為鹵素。在一些實施例中，W 6為CN。在一些實施例中，W 6為NO 2。在一些實施例中，W 6為-OR a。在一些實施例中，W 6為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 6為NH 2。在一些實施例中，W 6為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 6為COOH。在一些實施例中，W 6為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 6為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 6為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 6為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 6為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 6為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 6為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 6為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 6為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 6為芳基。在一些實施例中，W 6為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 6為NH 2。在式(1)之一些實施例中，W 6為NH 2。
在式(1)之一些實施例中，W 7不存在。在式(1*)之一些實施例中，W 7為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 7烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 7為-OH。在一些實施例中，W 7為-SH。在一些實施例中，W 7為H。在一些實施例中，W 7為鹵素。在一些實施例中，W 7為CN。在一些實施例中，W 7為NO 2。在一些實施例中，W 7為-OR a。在一些實施例中，W 7為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 7為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 7為COOH。在一些實施例中，W 7為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 7為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 7為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 7為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 7為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 7為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 7為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 7為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 7為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 7為芳基。在一些實施例中，W 7為雜芳基。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 8為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 7烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 8為-OH。在一些實施例中，W 8為-SH。在一些實施例中，W 8為H。在一些實施例中，W 8為鹵素。在一些實施例中，W 8為CN。在一些實施例中，W 8為NO 2。在一些實施例中，W 8為-OR a。在一些實施例中，W 8為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 8為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 8為COOH。在一些實施例中，W 8為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 8為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 8為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 8為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 8為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 8為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 8為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 8為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 8為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 8為芳基。在一些實施例中，W 8為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 8為H。在式(2*)之一些實施例中，W 8為H。
在式(1)之一些實施例中，W 8為H。在式(2)之一些實施例中，W 8為H。在式(3)之一些實施例中，W 8為H。在式(4)之一些實施例中，W 8為H。在式(5)之一些實施例中，W 8為H。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 9為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 7烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 9為-OH。在一些實施例中，W 9為-SH。在一些實施例中，W 9為H。在一些實施例中，W 9為鹵素。在一些實施例中，W 9為CN。在一些實施例中，W 9為NO 2。在一些實施例中，W 9為-OR a。在一些實施例中，W 9為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 9為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 9為COOH。在一些實施例中，W 9為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 9為C 1-C 3烷基。在一些實施例中，W 9為甲基。在一些實施例中，W 9為乙基.在一些實施例中，W 9為丙基。在一些實施例中，W 9為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 9為C 1-C 3鹵烷基。在一些實施例中，W 9為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 9為C 1-C 3羥烷基。在一些實施例中，W 9為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 9為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 9為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 9為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 9為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 9為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 9為芳基。在一些實施例中，W 9為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 9為乙基。在式(2*)之一些實施例中，W 9為乙基。
在式(1)之一些實施例中，W 9為乙基。在式(2)之一些實施例中，W 9為乙基。在式(3)之一些實施例中，W 9為乙基。在式(4)之一些實施例中，W 9為乙基。在式(5)之一些實施例中，W 9為乙基。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 10為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 7烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 10為-OH。在一些實施例中，W 10為-SH。在一些實施例中，W 10為H。在一些實施例中，W 10為鹵素。在一些實施例中，W 10為CN。在一些實施例中，W 10為NO 2。在一些實施例中，W 10為-OR a。在一些實施例中，W 10為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 10為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 10為COOH。在一些實施例中，W 10為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 10為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 10為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 10為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 10為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 10為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 10為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 10為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 10為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 10為芳基。在一些實施例中，W 10為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 10為H。在式(2*)之一些實施例中，W 10為H。
在式(1)之一些實施例中，W 10為H。在式(2)之一些實施例中，W 10為H。在式(3)之一些實施例中，W 10為H。在式(4)之一些實施例中，W 10為H。在式(5)之一些實施例中，W 10為H。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 11為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 7烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 11為-OH。在一些實施例中，W 11為-SH。在一些實施例中，W 11為H。在一些實施例中，W 11為鹵素。在一些實施例中，W 11為CN。在一些實施例中，W 11為NO 2。在一些實施例中，W 11為-OR a。在一些實施例中，W 11為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 11為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 11為COOH。在一些實施例中，W 11為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 11為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 11為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 11為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 11為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 11為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 11為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 11為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 11為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 11為芳基。在一些實施例中，W 11為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 11為H。在式(2*)之一些實施例中，W 11為H。
在式(1)之一些實施例中，W 11為H。在式(2)之一些實施例中，W 11為H。在式(3)之一些實施例中，W 11為H。在式(4)之一些實施例中，W 11為H。在式(5)之一些實施例中，W 11為H。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 12為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 7烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 12為-OH。在一些實施例中，W 12為-SH。在一些實施例中，W 12為H。在一些實施例中，W 12為鹵素。在一些實施例中，W 12為CN。在一些實施例中，W 12為NO 2。在一些實施例中，W 12為-OR a。在一些實施例中，W 12為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 12為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 12為COOH。在一些實施例中，W 12為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 12為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 12為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 12為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 12為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 12為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 12為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 12為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 12為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 12為芳基。在一些實施例中，W 12為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 12為H。在式(2*)之一些實施例中，W 12為H。
在式(1)之一些實施例中，W 12為H。在式(2)之一些實施例中，W 12為H。在式(3)之一些實施例中，W 12為H。在式(4)之一些實施例中，W 12為H。在式(5)之一些實施例中，W 12為H。
在式(1*)、(2*)或(1)至(5)之一些實施例中，W 13為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-OH、-SH-OR a、-NR cR d、-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a、-C(=O)NR cR d、C 1-C 7烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，W 13為-OH。在一些實施例中，W 13為-SH。在一些實施例中，W 13為H。在一些實施例中，W 13為鹵素。在一些實施例中，W 13為CN。在一些實施例中，W 13為NO 2。在一些實施例中，W 13為-OR a。在一些實施例中，W 13為-NR cR d(例如，胺基、NH-烷基或正(烷基) 2)。在一些實施例中，W 13為-C(=O)R b、-C(=O)OR b、-OC(=O)R b、-NR bC(=O)R a或-C(=O)NR cR d。在一些實施例中，W 13為COOH。在一些實施例中，W 13為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，W 13為C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，W 13為C 1-C 6羥烷基。在一些實施例中，W 13為C 1-C 6胺烷基。在一些實施例中，W 13為C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，W 13為C 2-C 6烯基。在一些實施例中，W 13為C 2-C 6炔基。在一些實施例中，W 13為環烷基(例如，C 3-C 6環烷基)。在一些實施例中，W 13為雜環烷基(例如，5或6員雜環烷基)。在一些實施例中，W 13為芳基。在一些實施例中，W 13為雜芳基。在式(1*)之一些實施例中，W 13為H。在式(2*)之一些實施例中，W 13為H。
在式(1)之一些實施例中，W 13為H。在式(2)之一些實施例中，W 13為H。在式(3)之一些實施例中，W 13為H。在式(4)之一些實施例中，W 13為H。在式(5)之一些實施例中，W 13為H。
在式(1*)或(2*)之一些實施例中，各R a獨立地為C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、C 1-C 6烷基(環烷基)、C 1-C 6烷基(雜環烷基)、C 1-C 6烷基(芳基)或C 1-C 6烷基(雜芳基)，其中烷基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基獨立地視情況經一或多個R e取代。在一些實施例中，R a為C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、或環烷基、雜環烷基。在一些實施例中，R a為C 1-C 6烷基或C 1-C 6鹵烷基。在一些實施例中，R a為C 1-C 6烷基。
在式(1*)或(2*)之一些實施例中，各R b獨立地為氫、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、C 1-C 6烷基(環烷基)、C 1-C 6烷基(雜環烷基)、C 1-C 6烷基(芳基)或C 1-C 6烷基(雜芳基)，其中烷基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基獨立地視情況經一或多個R e取代。在一些實施例中，R b為氫、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基。在一些實施例中，R b為氫。在一些實施例中，R b為C 1-C 6烷基。
在式(1*)或(2*)之一些實施例中，R c及R d各自獨立地為氫、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基、C 1-C 6雜烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、C 1-C 6烷基(環烷基)、C 1-C 6烷基(雜環烷基)、C 1-C 6烷基(芳基)或C 1-C 6烷基(雜芳基)，其中烷基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基獨立地視情況經一或多個R e取代。在一些實施例中，R c為氫。在一些實施例中，R c為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，R d為氫。在一些實施例中，R d為C 1-C 6烷基。在式(1*)或(2*)之一些實施例中，R c及R d與其所附接之原子一起形成視情況經一或多個R e取代之雜環烷基。
在式(1*)或(2*)之一些實施例中，各R e獨立地為鹵素、-CN、-OH、-OCH 3、-S(=O)CH 3、-S(=O) 2CH 3、-S(=O) 2NH 2、-S(=O) 2NHCH 3、-S(=O) 2N(CH 3) 2、-NH 2、-NHCH 3、-N(CH 3) 2、-C(=O)CH 3、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 6羥烷基、C 1-C 6胺烷基及C 1-C 6雜烷基。在一些實施例中，R e為鹵素、-OH、-OCH 3、-NH 2、-NHCH 3、-N(CH 3) 2、-C(=O)CH 3、-C(=O)OH或-C(=O)OCH 3。在一些實施例中，R e為-C(=O)OH。
在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為氫。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為鹵化物。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為烷基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為環烷基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為雜環烷基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為芳基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為胺。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為CN。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為-NHCOR 3。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為-OC(O)R 6。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為-C(O)OR 6。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為C(O)NHR 6。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為NH-烷基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為NH-芳基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為NH-環烷基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為NH-雜環烷基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為NH-烷基-COOH。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為NH-CH 2-COOH。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為NO 2。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為CF 3。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為烷氧基。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為COOH。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為OH。在一些實施例中，W 1至W 16各自獨立地為SH。在一些實施例中，在式(1)中，其中若X 1至X 12各自獨立地為N，則N、W 2至W 13上之對應取代基不存在。
在一些實施例中，在式(3)中，其中若X 1至X 4及X 9至X 12各自獨立地為N，則對應取代基W 2至W 5及W 10至W 13不存在。
在一些實施例中，在式(5)中，其中若X 13至X 16各自獨立地為N，則N、W 14至W 15、W 16至W 17、W 18至W 19、W 20至W 21上之對應取代基中之一者不存在。
在一些實施例中，X 1至X 12各自獨立地為C或N。在一些實施例中，X 1為C。在另一實施例中，X 1為N。在一些實施例中，X 2為C。在另一實施例中，X 2為N。在一些實施例中，X 3為C。在另一實施例中，X 3為N。在一些實施例中，X 4為C。在另一實施例中，X 4為N。在一些實施例中，X 5為C。在另一實施例中，X 5為N。在一些實施例中，X 6為C。在另一實施例中，X 6為N。在一些實施例中，X 7為C。在另一實施例中，X 7為N。在一些實施例中，X 8為C。在另一實施例中，X 8為N。在一些實施例中，X 9為C。在另一實施例中，X 9為N。在一些實施例中，X 10為C。在另一實施例中，X 10為N。在一些實施例中，X 11為C。在另一實施例中，X 11為N。在一些實施例中，X 12為C。在另一實施例中，X 12為N。
在一些實施例中，式(1)之R 1為鍵結、烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、C(O)-烷基、-烷基-O-烷基、烷基-NH-烷基、烷基-雜環-環-R 3或
Figure 02_image311
。在一些實施例中，式(1)之R 1為鍵結。在一些實施例中，式(1)之R 1為烷基。式(1)之R 1為芳基。在一些實施例中，式(1)之R 1為雜芳基。在一些實施例中，式(1)之R 1為環烷基。在一些實施例中，式(1)之R 1為雜環烷基。在一些實施例中，式(1)之R 1為C(O)-烷基。在一些實施例中，式(1)之R 1為C(NH)-烷基。在一些實施例中，式(1)之R 1為-烷基-O-烷基。在一些實施例中，式(1)之R 1為-烷基-NH-烷基。在一些實施例中，式(1)之R 1為烷基-雜環-環-R 3。在一些實施例中，式(1)之R 1為
Figure 02_image313
。
在一些實施例中，式(2)之R 2為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜環烷基-CO、胺、醯胺基、酯、-O-烷基、烷基-COOH、-CH 2-COOH、-NH-烷基、-CH 2-芳基、-雜環-環-R 3或
Figure 02_image315
。在一些實施例中，R 2為鍵結。在一些實施例中，R 2為烷基。在一些實施例中，R 2為芳基。在一些實施例中，R 2為環烷基。在一些實施例中，R 2為雜環烷基。在一些實施例中，R 2為雜環烷基-C(O)。在一些實施例中，R 2為胺。在一些實施例中，R 2為醯胺基。在一些實施例中，R 2為酯。在一些實施例中，R 2為-O-烷基。在一些實施例中，R 2為烷基-COOH。在一些實施例中，R 2為-CH 2-COOH。在一些實施例中，R 2為-NH-烷基。在一些實施例中，R 2為-CH 2-芳基。在一些實施例中，R 2為-雜環-環-R 3。在一些實施例中，R 2為
Figure 02_image317
。
在一些實施例中，R 3為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、-C(O)、-C(NH)、-C(O)S、-SO 2、-S(O)、-C(O)OC(O)、酯或醯胺基。
在一些實施例中，R 3為鍵結。在一些實施例中，R 3為烷基。在一些實施例中，R 3為芳基。在一些實施例中，R 3為環烷基。在一些實施例中，R 3為雜環烷基。在一些實施例中，R 3為-C(O)。在一些實施例中，R 3為-C(NH)。在一些實施例中，R 3為-C(O)S。在一些實施例中，R 3為-SO 2。在一些實施例中，R 3為-S(O)。在一些實施例中，R 3為-C(O)OC(O)。在一些實施例中，R 3為酯。在一些實施例中，R 3為醯胺基。
在一些實施例中，式(2)、式(3)、式(4)及式(5)之R 4及R 5各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、羥基、-CO-烷基、-C(O)O-烷基或-C(O)NH-烷基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為氫。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為鹵化物。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為烷基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為環烷基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為雜環烷基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為芳基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為雜芳基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為羥基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為-CO-烷基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為-C(O)O-烷基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地為-C(O)NH-烷基。
在一些實施例中，R 6為烷基、芳基、環烷基、雜環烷基或雜芳基。在一些實施例中，R 6為烷基。在一些實施例中，R 6為芳基。在一些實施例中，R 6為環烷基。在一些實施例中，R 6為雜環烷基。在一些實施例中，R 6為雜芳基。
在一些實施例中，n在0與10之間。在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為4。在一些實施例中，n為5。在一些實施例中，n為6。 在一些實施例中，n為7。在一些實施例中，n為8。在一些實施例中，n為9。在一些實施例中，n為10。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，n為2。
在一些實施例中，q為1與10之間的整數。在一些實施例中，m為0至4之間的整數。在一些實施例中，k為0與4之間的整數。在一些實施例中，Pg為醇保護基。在一些實施例中，Hal為鹵素。在一些實施例中，LG'為脫離基，諸如鹵素、OTs、OMs或OTf。在一些實施例中，LG為選自OTs、OMs及OTf之脫離基。
在一些實施例中，在式(1)至(5)中，其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。在另一實施例中，其中該雜環-環為經取代之雜環-環。在另一實施例中，其中該雜環-環為未經取代之雜環-環。
在一些實施例中，在式(1)中，其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。在一些實施例中，在式(2)中，其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。在一些實施例中，在式(3)中，其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。在一些實施例中，在式(4)中，其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。在一些實施例中，在式(5)中，其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。
在一些實施例中，式(1)包含W 1為OH，W 2至W 5為H，X 1至X 5為C，W 6為NH 2，X 6為N，W 7不存在，W 8至W 13為H，X 7至X 12為C及R 1為
Figure 02_image319
。
在一些實施例中，式(1)包含W 1為OH，W 2至W 5為H，X 1至X 5為C，W 6為NH 2，X 6為N，W 7不存在，W 8至W 13為H，X 7至X 12為C及R 1為鍵結。
在一些實施例中，式(2)包含W 2至W 5各自獨立地為H，R 4及R 5各自獨立地為H，W 8至W 13各自獨立地為H，n為3及R 2為
Figure 02_image321
。
在一些實施例中，式(3)包含W 2至W 5各自獨立地為H，X 1至X 4各自獨立地為C，R 4及R 5各自獨立地為H，W 8至W 13各自獨立地為H，X 9至X 12各自獨立地為C。
在一些實施例中，式(4)包含W 2至W 5各自獨立地為H，X 1至X 4各自獨立地為C，R 4及R 5各自獨立地為H，W 8至W 13各自獨立地為H，X 9至X 12各自獨立地為C。
在一些實施例中，式(5)包含W 2至W 5各自獨立地為H，R 4及R 5各自獨立地為H，W 8至W 21各自獨立地為H，X 13至X 16各自獨立地為C及n為3。
如本文中所使用，除非另外說明，否則術語「烷基」可為含有至多約30個碳之任何直鏈或分支鏈烷基。在各種實施例中，烷基包括C 1-C 5碳。在一些實施例中，烷基包括C 1-C 6碳。在一些實施例中，烷基包括C 1-C 8碳。在一些實施例中，烷基包括C 1-C 10碳。在一些實施例中，烷基為C 1-C 12碳。在一些實施例中，烷基為C 1-C 20碳。在一些實施例中，分支鏈烷基為經具有1至5個碳之烷基側鏈取代之烷基。在各種實施例中，烷基可未經取代。在一些實施例中，烷基可以經取代。在一些實施例中，烷基為C 1-C 10烷基、C 1-C 9烷基、C 1-C 8烷基、C 1-C 7烷基、C 1-C 6烷基、C 1-C 5烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 3烷基、C 1-C 2烷基或C1烷基。烷基之其他實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、新戊基、三級戊基及己基，以及更長的烷基，諸如庚基、辛基及其類似基團。如本文中所使用，「伸烷基」為二價烷基。
烷基可為單一取代基，或其可為較大取代基之組分，諸如在烷氧基、烷氧基烷基、鹵烷基、芳基烷基、烷胺基、二烷胺基、烷基醯胺基、烷基脲中等。較佳烷基為甲基、乙基及丙基，且因此鹵甲基、二鹵甲基、三鹵甲基、鹵乙基、二鹵乙基、三鹵乙基、鹵丙基、二鹵丙基、三鹵丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、芳基甲基、芳基乙基、芳基丙基、甲胺基、乙胺基、丙胺基、二甲胺基、二乙胺基、甲基醯胺基、乙基醯胺基、丙基醯胺基、鹵甲基醯胺基、鹵乙基醯胺基、鹵丙基醯胺基、甲基-脲、乙基-脲、丙基-脲等。
如本文中所使用，術語「芳基」係指直接結合至另一基團且可經取代或未經取代的任何芳族環。芳基可為單一取代基，或芳基可為較大取代基之組分，諸如在芳烷基、芳胺基、芳基醯胺基中等。在一些實施例中，術語芳基亦包括雜芳基。例示性芳基包括但不限於苯基、甲苯基、二甲苯基、呋喃基、萘基、吡啶基、嘧啶基、嗒𠯤基、吡𠯤基、三𠯤基、噻唑基、㗁唑基、異㗁唑基、吡唑基、咪唑基、噻吩-基、吡咯基、吲哚基、苯基甲基、苯基乙基、苯胺基、苯基醯胺基、3-甲基-4H-1,2,4-***基、㗁二唑基、5-甲基-1,2,4-㗁二唑基、異噻唑基、噻二唑基、***基等。
在各種實施例中，「環烷基」或「碳環」基團係指包含碳原子作為環原子之環結構，其可為飽和或不飽和的、經取代或未經取代的、單一或稠合的。在一些實施例中，環烷基為3員至10員環。在一些實施例中，環烷基為3員至12員環。在一些實施例中，環烷基為6員環。在一些實施例中，環烷基為5員至7員環。在一些實施例中，環烷基為3員至8員環。在一些實施例中，環烷基環可稠合至另一飽和或不飽和的環烷基或雜環3員至8員環。在一些實施例中，環烷基環為飽和環。在一些實施例中，環烷基環為不飽和環。環烷基之非限制實例包含環己基、環己烯基、環丙基、環丙烯基、環戊基、環戊烯基、環戊二烯基、環丁基、環丁烯基、環辛基、環辛二烯基(COD)、環辛烷(COE)等。
術語「雜芳基」係指環中含有至少一個雜原子的5員至14員環的芳環系統。可包括在芳族環中之適合雜原子之非限制性實例包括氧、硫、磷及氮。雜芳基環之非限制性實例包括吡啶基、吡咯基、㗁唑基、吲哚基、異吲哚基、嘌呤基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、咔唑基、咪唑基、噻唑基、異㗁唑基、吡唑基、異噻唑基、喹啉基、異喹啉基、嗒𠯤基、嘧啶基、吡唑基等。其他實例包括(但不限於)氮呯基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并吲哚基、苯并二氧雜環戊烯基、苯并呋喃基、苯并㗁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧呯基、1,4-苯并二㗁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并㗁唑基、苯并二氧雜環戊烯基、苯并二氧雜環己烯基、苯并哌喃基、苯并哌喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(benzothienyl/benzothiophenyl)、苯并***基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、㖕啉基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、異噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、異吲哚基、吲哚啉基、異吲哚啉基、異喹啉基、吲
Figure 111100833-A0304-2
基、異㗁唑基、㖠啶基、㗁二唑基、2-側氧基氮呯基、㗁唑基、環氧乙烷基、1-氧離子基吡啶基、1-氧離子基嘧啶基、1-氧離子基吡𠯤基、1-氧離子基嗒𠯤基、1-苯基-1H-吡咯基、啡𠯤基、啡噻𠯤基、啡㗁 𠯤基、呔𠯤基、喋啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基、喹唑啉基、喹喏啉基、喹啉基、
Figure 111100833-A0304-3
啶基、異喹啉基、四氫喹啉基、噻唑基、噻二唑基、***基、四唑基、三𠯤基及噻吩基(thiophenyl) (亦即，噻吩基(thienyl))。雜芳基可未經取代或經由可用碳原子經一或多個基團取代：諸如鹵素、烷基、芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、烷基芳氧基、雜芳基氧基、側氧基、環烷基、苯基、雜芳基、雜環基、萘基、胺基、醯胺基、烷胺基、芳胺基、雜芳胺基、二烷胺基、二芳胺基、烷基芳基胺基、烷基雜芳基胺基、芳基雜芳基胺基、醯基、醯氧基、硝基、羧基、胺甲醯基、甲醯胺、氰基、磺醯基、磺醯基胺基、亞碸基、亞磺醯胺基、硫醇、烷硫基、芳硫基、烷磺醯基、-OCN、-SCN、-N═C═O、-NCS、-NO、-N 3、-OP(═O)(OR *) 2、-P(═O)(OR *) 2、-P(═O)(O −) 2、-P(═O)(OH) 2、-P(O)(OR *)(O −)、-C(═O)R *、-C(═O)X、-C(S)R *、-C(S)OR *、-C(O)SR *、—C(S)SR *、-C(S)NR * 2或-C(═NR *)NR * 2基團，其中各R *獨立地為H、烷基、芳基、芳烷基、雜環或保護基或前藥部分。任何取代基可未經取代或進一步經此等前述取代基中之任一者取代。
如本文中所使用，單獨或作為另一基團之部分使用的術語「胺基」或「胺」係指各自獨立地經H取代之任何一級、二級、三級或四級胺，經取代或未經取代之直鏈或分支鏈C 1-C 10烷基、直鏈或分支鏈C 2-C 10烯基、直鏈或分支鏈C 2-C 10炔基、經取代或未經取代之碳環基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜環基等。在一些實施例中，N為此項技術中已知的經取代之任何胺保護基且包括以全文引用之方式併入本文中的Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene及P. G. M. Wuts, 第3版, John Wiley & Sons, 1999中詳細地描述之彼等。
在一些實施例中，一級、二級及三級胺的連接點係經由氮原子。在二級或三級胺之情況下，氮上之取代基可相同或不同。胺基之非限制性類型包括-NH 2、-N(烷基) 2、-NH(烷基)、-N(碳環) 2、-NH(碳環)、-N(雜環基) 2、-NH(雜環基)、-N(芳基) 2、-NH(芳基)、-N(烷基)(芳基)、-N(烷基)(雜環基)、-N(碳環)(雜環基)、-N(芳基)(雜芳基)、-N(烷基)(雜芳基)等。術語「烷基胺基」係指經至少一個烷基取代之胺基。胺基之非限制性實例包括-NH 2、-NH(CH 3)、-N(CH 3) 2、-NH(CH 2CH 3)、-N(CH 2CH 3) 2、-NH(苯基)、-N(苯基) 2、-NH(苯甲基)、-N(苯甲基) 2等。經取代之烷基胺基通常指其中至少一個如本文所定義之經取代之烷基連接至胺基氮原子的如上文所定義之烷基胺基。經取代之烷基胺基之非限制性實例包括-NH(伸烷基-C(O)-OH)、-NH(伸烷基-C(O)-O-烷基)、-N(伸烷基-C(O)-OH) 2、-N(伸烷基-C(O)-O-烷基) 2。如本文中所使用之術語「鹵素」或「鹵基」或「鹵化物」係指-Cl、-Br、-F或-I基團。
如本文中所使用之術語「Pg」係指醇保護基，諸如且不限於乙醯基、苯甲基、苯甲醯基、甲氧基甲基醚、甲基醚、特戊醯基、矽基。此項技術中之任何醇保護基包括以全文引用之方式併入本文中的Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene及P. G. M. Wuts, 第3版, John Wiley & Sons, 1999中詳細地描述之彼等。
如本文中所使用之術語「Pg'」係指胺保護基，諸如且不限於t-Boc (三級丁氧基羰基)、Fmoc (茀基甲氧基羰基)、Cbz (苯甲氧基羰基)、Bn (苯甲基)、Bz (苯甲醯基)、Ts (甲苯磺醯基)、胺基甲酸酯基或此項技術中已知之任何胺保護基且包括以全文引用之方式併入本文中的Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene及P. G. M. Wuts, 第3版, John Wiley & Sons, 1999中詳細地描述之彼等。
如本文中所使用，單獨或作為另一基團之部分使用的術語「醯胺基」係指式-C(=O)NRR'或-NHCO -R或-N(R)-C(O)-R，其中R及R'各自個別地為H或如上文所定義的C 1至C 10烷基、芳基、環烷基、雜環。
如本文中所使用，術語「雜環-環」係指具有1至4個氮原子的經取代或未經取代之3員至8員環、具有1至4個氮原子的經取代或未經取代之雙環環、具有1至4個氮原子的經取代或未經取代之稠合環。「雜環-環」可經一或多個基團取代：諸如鹵素、羥基、烷氧基、芳氧基、烷基芳氧基、雜芳基氧基、芳基、側氧基、環烷基、苯基、雜芳基、雜環基、萘基、胺基、醯胺基、烷胺基、芳胺基、雜芳胺基、二烷胺基、二芳胺基、烷基芳基胺基、烷基雜芳基胺基、芳基雜芳基胺基、醯基、醯氧基、硝基、羧基、胺甲醯基、甲醯胺、氰基、磺醯基、磺醯基胺基、亞碸基、亞磺醯胺基、硫醇、烷硫基、芳硫基或烷磺醯基。任何取代基可未經取代或進一步經此等前述取代基中之任一者取代。
如本文中所使用之術語「酯」係指-O-(C=O)-R或-(C=O)-O-R，其中R為經取代或未經取代之直鏈或分支鏈C1-C12烷基、直鏈或分支鏈C2-C12烯基、直鏈或分支鏈C2-C12炔基、經取代或未經取代之碳環基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜環基等。
如本文中所使用，術語「烷氧基」係指經如上文所定義之烷基取代的醚基。烷氧基係指直鏈及分支鏈烷氧基兩者。烷氧基之非限制性實例為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、三級丁氧基。
在各種實施例中，「雜環」或「雜環烷基」環係指包含除碳原子以外的硫、氧、氮或其任何組合作為環之部分的環結構。在各種實施例中，「雜芳環」係指包含除碳原子之外的硫、氧、氮或其任何組合作為環之部分的芳族環結構。在一些實施例中，雜環或雜芳環為3員至10員環。在一些實施例中，雜環或雜芳環為3員至12員環。在一些實施例中，雜環或雜芳環為6員環。在一些實施例中，雜環或雜芳環為5員至7員環。在一些實施例中，雜環或雜芳環為3員至8員環。在一些實施例中，雜環或雜芳環可稠合至另一飽和或不飽和環烷基或雜環3員至8員環。在一些實施例中，雜環為飽和環。在一些實施例中，雜環為不飽和環。雜環或雜芳族環系統之非限制實例包含吡啶、哌啶、𠰌啉、哌𠯤、噻吩、吡咯、苯并二氧雜環戊烯、苯并呋喃-2(3H)-酮、苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯、吲哚、㗁唑、異㗁唑、咪唑及1-甲基咪唑、呋喃、***、嘧啶、吡𠯤、氧環丁烷(1-氧環丁烷或2-氧環丁烷)、萘、四氫噻吩1,1-二氧化物、噻唑、苯并咪唑、哌啶、1-甲基哌啶異喹啉、1,3-二氫異苯并呋喃、苯并呋喃、3-甲基-4H-1,2,4-***、㗁二唑基、5-甲基-1,2,4-㗁二唑、吡唑、異噻唑、噻二唑、四氫呋喃、㗁唑酮、㗁唑啶酮、噻唑酮、異噻唑啉酮、異㗁唑啶酮、咪唑啶酮、二氫吡唑酮、2H-吡咯-2-酮、呋喃酮、噻吩酮、噻𠮿1,1-二氧化物、***并嘧啶、6,7-二氫-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]㗁 𠯤或吲哚。雜環烷基之其他實例包括但不限於吖
Figure 111100833-A0304-4
基、吖呾基、二氧雜環戊烷基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氫異喹啉基、咪唑啉基、咪唑啶基、異噻唑啶基、異㗁唑啶基、𠰌啉基、八氫吲哚基、八氫異吲哚基、2-側氧基哌𠯤基、2-側氧基哌啶基、2-側氧基吡咯啶基、㗁唑啶基、哌啶基、哌𠯤基、4-哌啶酮基、吡咯啶基、吡唑啶基、
Figure 111100833-A0304-3
啶基、噻唑啶基、四氫呋喃基、三噻烷基、四氫哌喃基、硫𠰌啉基、噻𠰌啉基、1-側氧基-硫𠰌啉基、1,1-二側氧基-硫𠰌啉基、1,3-二氫異苯并呋喃-1-基、3-側氧基-1,3-二氫異苯并呋喃-1-基、甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基及2-側氧基-1,3- 二氧雜環戊烯-4-基。
「烯基」係指具有一或多個碳-碳雙鍵之視情況經取代之直鏈或視情況經取代之分支鏈烴單價基團。在一些實施例中，烯基具有二至約十個碳原子或二至約六個碳原子。基團可繞雙鍵呈順式或反式構形，且應理解為包括兩種異構體。實例包括(但不限於)乙烯基(-CH=CH 2)、1-丙烯基(-CH 2CH=CH 2)、異丙烯基[-C(CH 3)=CH 2]、丁烯基、1,3-丁二烯基及其類似基團。不論其何時出現在本文中時，諸如「C 2-C 6烯基」之數值範圍意謂烯基可由2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子或6個碳原子組成，但本發明定義亦涵蓋術語「烯基」之存在，其中未指定數值範圍。在一些實施例中，烯基為C 2-C 10烯基、C 2-C 9烯基、C 2-C 8烯基、C 2-C 7烯基、C 2-C 6烯基、C 2-C 5烯基、C 2-C 4烯基、C 2-C 3烯基或C 2烯基。除非本說明書中另外特定陳述，否則烯基視情況例如經以下取代：側氧基、鹵素、胺基、腈、硝基、羥基、鹵烷基、烷氧基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜芳基及其類似基團。在一些實施例中，烯基視情況經側氧基、鹵素、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2或-NO 2取代。在一些實施例中，烯基視情況經側氧基、鹵素、-CN、-CF 3、-OH或-OMe取代。在一些實施例中，烯基視情況經鹵素取代。
「炔基」係指具有一或多個碳-碳參鍵之視情況經取代之直鏈或視情況經取代之分支鏈烴單價基團。在一些實施例中，炔基具有二至約十個碳原子，更佳二至約六個碳原子。實例包括(但不限於)乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基、1,3-丁二炔基及其類似基團。不論其何時出現在本文中時，諸如「C 2-C 6炔基」之數值範圍意謂炔基可由2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子或6個碳原子組成，但本發明定義亦涵蓋術語「炔基」之存在，其中未指定數值範圍。在一些實施例中，炔基為C 2-C 10炔基、C 2-C 9炔基、C 2-C 8炔基、C 2-C 7炔基、C 2-C 6炔基、C 2-C 5炔基、C 2-C 4炔基、C 2-C 3炔基或C 2炔基。除非本說明書中另外特定陳述，否則炔基視情況例如經側氧基、鹵素、胺基、腈、硝基、羥基、鹵烷基、烷氧基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜芳基及其類似基團取代。在一些實施例中，炔基視情況經側氧基、鹵素、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2或-NO 2取代。在一些實施例中，炔基視情況經側氧基、鹵素、-CN、-CF 3、-OH或-OMe取代。在一些實施例中，炔基視情況經鹵素取代。
「胺基烷基」係指經一或多個胺取代之如上文所定義之烷基。在一些實施例中，烷基經一個胺取代。在一些實施例中，烷基經一個、兩個或三個胺取代。羥基烷基包括例如胺基甲基、胺基乙基、胺基丙基、胺基丁基或胺基戊基。在一些實施例中，羥基烷基為胺基甲基。
「鹵烷基」係指經一或多個鹵素取代之如上文所定義之烷基。在一些實施例中，烷基經一個、兩個或三個鹵素取代。在一些實施例中，烷基經一個、二個、三個、四個、五個或六個鹵素取代。鹵烷基可包括例如碘烷基、溴烷基、烷基。舉例而言，「氟烷基」係指經一或多個如上文所定義之氟基取代的如上文所定義之烷基，例如三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基及其類似基團。在一些實施例中，氟烷基之烷基部分視情況經取代。
「雜烷基」係指其中烷基之一或多個骨架原子係選自除碳外之原子，例如氧、氮(例如-NH-、-N(烷基)-)、硫或其組合的烷基。雜烷基在雜烷基之碳原子處附接至分子之其餘部分。在一個態樣中，雜烷基為C 1-C 6雜烷基，其中雜烷基包含1至6個碳原子及一或多個除碳以外之原子，例如氧、氮(例如，-NH-、-N(烷基)-)、硫或其組合，其中雜烷基在雜烷基之碳原子處附接至分子之其餘部分。此類雜烷基之實例為了讓-CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 3或-CH(CH 3)OCH 3。除非本說明書中另外特定說明，否則雜烷基視情況經例如側氧基、鹵素、胺基、腈、硝基、羥基、烷基、烯基、炔基、鹵烷基、烷氧基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜芳基及類似基團取代。在一些實施例中，雜烷基視情況經側氧基、鹵素、甲基、乙基、-CN、-CF 3、-OH、-OMe、-NH 2或-NO 2取代。在一些實施例中，雜烷基視情況經側氧基、鹵素、甲基、乙基、-CN、-CF 3、-OH或-OMe取代。在一些實施例中，雜烷基視情況經鹵素取代。如本文中所使用，「伸雜烷基」係指二價雜烷基。
「羥基烷基」係指經一或多個羥基取代之如上文所定義之烷基。在一些實施例中，烷基經一個羥基取代。在一些實施例中，烷基經一個、兩個或三個羥基取代。羥基烷基包括例如羥甲基、羥乙基、羥丙基、羥丁基或羥戊基。在一些實施例中，羥基烷基為羥甲基。
在一些實施例中，當化學術語/基團(例如，烷基、芳基、雜芳基、環烷基、胺基、烷氧基等)稱為經取代時，取代基之非限制性實例包括以下：F、Cl、Br、I、OH、SH、C 1-C 5直鏈或分支鏈烷基、芳基(例如，苯基)、雜芳基(例如，吡啶(2-吡啶、3-吡啶及4-吡啶))、環烷基(例如，環丙基)、雜環、烷氧基、CF 3、苯基、鹵苯基、(苯甲氧基)苯基、CN、NO 2、鹵烷基、羰基、醯胺基、烷基醯胺基、二烷基醯胺基、CO 2H、羧基、硫基、硫代烷基、C 1-C 5直鏈或分支鏈鹵烷氧基、CF 3、苯基、(苯甲氧基)苯基、-CH 2CN、NH 2、NH-烷基、N(烷基) 2、-OC(=O)CF 3、-OCH 2Ph、-NHC(=O)-烷基、-C(=O)Ph、C(=O)O-烷基、C(=O)、C(O)H、-C(O)NH 2或其任何組合。
在一些實施例中，本文揭示如上文所描述之嵌合分子之異構體。在某些實施例中，術語「異構體」包括但不限於立體異構物(包括光學異構體及類似物)、結構性異構體及類似物、構形異構體及類似物，及其類似物。在一個實施例中，異構體為立體異構體。在另一實施例中，異構體為光學異構體。
某些嵌合分子可以特定幾何或立體異構形式存在。在某些實施例中，本文所揭示之嵌合分子包含其順式及反式異構體、 R-鏡像異構體及 S-鏡像異構體、非鏡像異構體、外消旋混合物及其他混合物。額外不對稱碳原子可存在於諸如烷基之取代基中。所有此類異構體以及其混合物包括於本文中。
在某些實施例中，嵌合分子可含有至少一個對掌性中心。因此，用於本文中所描述之方法中之嵌合分子可以光學活性或外消旋形式存在且以光學活性或外消旋形式分離。嵌合分子可進一步以立體異構體形式(其亦可為光學活性異構體(例如，鏡像異構體，諸如(R)或(S)))，以鏡像異構性增濃混合物、外消旋混合物形式，或以單一鏡像異構體、非鏡像異構體混合物或任何其他立體異構體形式存在，包括(但不限於)： (R)(R)、 (R)(S)、 (S)(S)、 (S)(R)、 (R)(R)(R)、 (R)(R)(S)、 (R)(S)(R)、 (S)(R)(R)、 (R)(S)(S)、 (S)(R)(S)、 (S)(S)(R)或 (S)(S)(S)立體異構體。一些嵌合分子亦可展現出多晶形式。應理解，本文所描述之嵌合分子可涵蓋任何外消旋、光學活性、多晶型或立體異構形式或其混合物，該等形式具有適用於治療本文所描述之各種疾病的特性。亦應理解，對掌性及/或光活性可影響嵌合分子之生物活性。
此項技術中已熟知如何製備光活性形式(例如藉由用再結晶技術解析外消旋形式、藉由自光活性起始材料合成、藉由對掌性合成或藉由使用對掌性固定相進行層析分離)。
在某些實施例中，本文所揭示之嵌合分子亦可以含有實質上等量之立體異構體的外消旋混合物形式存在。在一些實施例中，嵌合分子可使用已知程序製備或以其他方式分離，以獲得實質上不含其對應立體異構體之立體異構體(亦即，實質上純的)。實質上純的意欲立體異構體為至少約95%純、更佳地至少約98%純、最佳地至少約99%純。
嵌合分子亦可呈水合物形式，其意謂化合物進一步包括化學計量或非化學計量之量的藉由非共價分子間力結合之水。
如本文中所使用，當一些化學官能基(例如，烷基或芳基)稱為「經取代」時，在本文中定義一或多個取代係可能的。
本文所揭示之嵌合分子可以一或多種可能的互變異構體形式存在，且視條件而定，可能將一些或所有互變異構體分離成個別及不同實體。應理解，本文涵蓋所有可能的互變異構體，包括所有額外的烯醇及酮互變異構體及/或異構體。
如本文中所使用，術語「式(1)至(7)衍生物」或「式(A)至(K)衍生物」係指向對應式中添加任何官能基或自對應式中移除任何官能基。非限制性實例為酮、胺、醯胺、醇、酯、醚、烷烴、烯烴、炔烴、烷基鹵化物、硫醇、醛或其任何組合。類似含義可應用於式(I*)、(2*)、(6*)、(K*)、(K**)、(B*)或(B**)。
在一些實施例中，本文所描述之化合物以其經同位素標記之形式存在。在一些實施例中，本文所揭示之方法包括藉由投與此類經同位素標記之化合物來治療疾病的方法。在一些實施例中，本文所揭示之方法包括藉由以醫藥組合物形式投與此類同位素標記化合物來治療疾病的方法。因此，在一些實施例中，本文所揭示之化合物包括經同位素標記之化合物，其與本文所列舉之化合物相同，但其中一或多個原子經原子質量或質量數不同於自然界中通常所發現的原子質量或質量數的原子置換。可併入本文所描述之化合物、或其溶劑合物或立體異構體中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟及氯之同位素，分別諸如 2H、 3H、 13C、 14C、 15N、 18O、 17O、 31P、 32P、 35S、 18F及 36Cl。含有前述同位素及/或其他原子之其他同位素的本文所描述之化合物及其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物或立體異構體在本發明之範疇內。某些經同位素標記之化合物，例如併入有諸如 3H及 14C之放射性同位素的彼等化合物適用於藥物及/或受質組織分佈分析。氚化(亦即 3H)及碳-14 (亦即 14C)同位素因其製備簡易性及可偵測性而引人注目。此外，用諸如氘(亦即 2H)之重同位素取代產生某些由較大代謝穩定性產生之治療優勢，例如活體內半衰期增加或劑量需求下降。在一些實施例中，同位素標記之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物或立體異構體藉由任何適合的方法製備。
在一些實施例中，本文所描述之化合物藉由其他方式標記，包括但不限於使用發色團或螢光部分、生物發光標記或化學發光標記。
在某些實施例中，本文所揭示之化合物中之 2H原子之豐度針對 1H原子中之一些或全部而富集。合成含氘化合物之方法為此項技術中已知的，且僅藉助於非限制性實例包括以下合成方法。
經氘取代之化合物係使用諸如以下中所述之各種方法合成：Dean, Dennis C.編. Recent Advances in the Synthesis and Applications of Radiolabeled Compounds for Drug Discovery and Development. [In: Curr., Pharm. Des., 2000; 6(10)] 2000, 110 pp；George W.; Varma, Rajender S. The Synthesis of Radiolabeled Compounds via Organometallic Intermediates, Tetrahedron, 1989, 45(21), 6601-21；及Evans, E. Anthony.  Synthesis of radiolabeled compounds, J. Radioanal. Chem., 1981, 64(1-2), 9-32。
氘化起始物質可容易地獲得，且經歷本文所述之合成方法以提供含氘化合物之合成。大量含氘試劑及架構基塊可購自化學供應商，諸如Aldrich Chemical Co.。
適用於親核取代反應之氘轉移試劑(諸如碘甲烷-d 3(CD 3I))係現成的，且可用以在親核取代反應條件下將經氘取代之碳原子轉移至反應受質。氘轉移試劑(諸如氘化鋰鋁(LiAlD 4))用以在還原條件下將氘轉移至反應受質。氘氣及鈀催化劑可用於還原不飽和碳-碳鍵及執行芳基碳-鹵素鍵之還原取代。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物含有一個氘原子。在另一實施例中，本文所揭示之化合物含有兩個氘原子。在另一實施例中，本文所揭示之化合物含有三個氘原子。在另一實施例中，本文所揭示之化合物含有四個氘原子。在另一實施例中，本文所揭示之化合物含有五個氘原子。在另一實施例中，本文所揭示之化合物含有六個氘原子。在另一實施例中，本文所揭示之化合物含有超過六個氘原子。在另一實施例中，本文所揭示之化合物完全經氘原子取代，且不含有非可交換的 1H氫原子。在一些實施例中，藉由其中氘化合成架構基塊用作起始物質之合成方法來測定氘併入之含量。 合成
在一些實施例中，本文提供一種製備本文所揭示之嵌合分子之製程(製程1)，其包含以下步驟： (i)        連接分子之活化； (ii)      使第一結合域與經活化連接分子之一個官能基偶合；及 (iii)     使第二結合域與經活化連接分子之第二官能基偶合。
在一個實施例中，製程1之步驟(ii)至(iii)兩者均在步驟(i)之後進行。在另一實施例中，步驟(ii)係在步驟(iii)之前進行。在另一實施例中，步驟(ii)係在步驟(iii)之後進行。在另一實施例中，步驟(ii)包含選自式(1)至(7)或其衍生物之USP7結合劑與(步驟(i)或步驟(iii)之)經活化連接子之一個官能基之間的偶合反應。在另一實施例中，步驟(iii)包含選自(A)至(K)或其衍生物之目標結合劑與(步驟(i)或步驟(ii)之)經活化連接子之第二官能基之間的偶合反應。
在另一實施例中，連接子活化-製程1之步驟(i)僅在連接子之一個末端進行，而另一端受保護基保護。在另一實施例中，在步驟(ii)或(iii)之偶合(與第一或第二域)之後，連接子之另一端經去保護且與第一或第二域偶合。在另一實施例中，在步驟(ii)與(iii)之間，連接子之另一端經去保護。在另一實施例中，在步驟(ii)與(iii)之間，連接子之另一端經活化。
在一些實施例中，本文提供一種製備本文所揭示之嵌合分子之製程(製程2)，其包含以下步驟： (i)        使第一結合域與連接分子之一個末端偶合；及 (ii)      使第二結合域與連接分子之第二末端偶合。
在另一實施例中，在步驟(ii)之前進行製程2之步驟(i)。在另一實施例中，在步驟(ii)之後進行步驟(i)。在另一實施例中，步驟(i)包含選自式(1)至(7)或其衍生物之USP7結合劑與本文所提供之連接子的一個官能基或一個末端之間的偶合反應。在另一實施例中，步驟(ii)包含選自(A)至(K)或其衍生物之目標結合劑與本文所提供之連接子之第二官能基或第二末端之間的偶合反應。在另一實施例中，連接分子視情況在偶合反應(i)之前活化。在另一實施例中，連接分子視情況在偶合反應(ii)之前活化。
在一些實施例中，經由此項技術中用於偶合醇及經脫離基取代之碳的任何已知方法進行製程1之步驟(ii)及(iii)以及製程2之步驟(i)及(ii)的偶合反應。在一些實施例中，經由此項技術中用於偶合酸及胺基之任何已知方法來進行製程1之步驟(ii)及(iii)以及製程2之步驟(i)及(ii)的偶合反應。
在一些實施例中，在製程1之步驟(ii)或(iii)或製程2之步驟(i)或(ii)的第一偶合反應之後，連接子之另一端經胺取代。
在另一實施例中，連接子之具有脫離基之另一端經胺置換。在另一實施例中，連接子之具有脫離基之另一端能夠藉由此項技術中已知之任何方法將OTs (脫離基)置換(轉化)為胺。
在某些實施例中，製程1之步驟(ii)之產物及/或製程2之步驟(i)之產物表示在以下結構中：
Figure 02_image323
在某些實施例中，製程1之步驟(ii)之產物及/或製程2之步驟(i)之產物，在轉化成胺後由以下結構表示：
Figure 02_image325
Figure 02_image327
Figure 02_image329
。 組合物
在一些實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之嵌合分子中之任一者。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之嵌合分子中之任一者的醫藥學上可接受之鹽。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之嵌合分子中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。在一個實施例中，醫藥組合物包含本文所描述之一或多種嵌合分子與其他化學組分(諸如生理學上(醫藥學上)適合之載劑及賦形劑的製劑。
醫藥學上可接受之賦形劑及載劑為熟習此項技術者所已知，且已充分地描述於各種公開案中，包括例如A.Gennaro (1995)「Remington: The Science and Practice of Pharmacy」第19版，Lippincott，Williams，& Wilkins formulations。醫藥組合物之目的為促進向生物體投與化合物。在某些實施例中，醫藥組合物提供本文所揭示之嵌合分子之醫藥劑型。
在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含有包含USP7結合劑之嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑。在一個實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (I) 至 (XX)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由表2及表3之 嵌合分子 (1) 至 (177)之結構表示的嵌合分子。
在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1*)、 (2*)或 (6*)之結構表示的USP7結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*) 或 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*) 或 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*) 或 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*) 或 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*) 或 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*) 或 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*) 或 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*) 或 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*) 或 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*) 或 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種嵌合分子，其包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*) 或 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*) 或 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (C)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (D)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (E)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (F)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (G)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (H)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (I)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K*) 或 (K**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (B*) 或 (B**)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，本文提供一種包含嵌合分子之醫藥組合物，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (L) 至 (N)之結構表示的目標結合劑。
在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (I)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (II)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (III)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (IV)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (V)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (VI)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (VII)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 ( VIII )之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 ( IX )之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (X)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XI)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XII)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XIII)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XIV)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XV)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XVI)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XVII)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XVIII)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XIX)之結構表示的嵌合分子。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (XX)之結構表示的嵌合分子。
在一些實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由表2及表3之 嵌合分子 1 至 177中任一者之結構表示的嵌合分子。
在一個實施例中，可向個體提供包含一或多種嵌合分子之以上組合物及額外活性劑以達成與用各種藥劑本身治療相比改善的治療效果。在一些實施例中，包含一或多種嵌合分子之醫藥組合物進一步包含至少一種額外治療劑。在另一實施例中，額外活性劑包含化學治療劑或本文所揭示之額外嵌合分子。在另一實施例中，額外活性劑包含免疫調節劑或本文所揭示之額外嵌合分子。在某些實施例中，額外活性劑包含PARP1抑制劑。在一些實施例中，PARP1抑制劑包含已知的PARP1抑制劑，例如但不限於維利帕尼(Veliparp) (ABT-888)、盧卡帕尼(Rucaparib) (Rubraca；AG-014699)、奧拉帕尼(Lynparza；AZD-2281)、尼拉帕尼(Niraparib)(Zejula；MK-4827)或他拉唑帕尼(Talazoparib) (BMN-673)。
在另一實施例中，額外活性劑包含CF治療劑或本文所揭示之額外嵌合分子。在另一實施例中，額外活性劑包含PARP1抑制劑、抗癌治療劑或本文所揭示之額外嵌合分子或其任何組合。
在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含：包含USP7結合劑之嵌合分子，以及至少一種額外的囊腫纖維化治療化合物或治療。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含：包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之USP7結合劑的嵌合分子，以及至少一種額外的囊腫纖維化治療化合物或治療。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含：包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A)至 (K)之結構表示的目標結合劑的嵌合分子，以及至少一種額外的囊腫纖維化治療化合物或治療。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由 嵌合分子 (I) 至 (XX)之結構表示之嵌合分子以及至少一種額外的囊腫纖維化治療化合物或治療。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含由本文 表 2 及表 3中提供之 嵌合分子 1 至 177之結構中任一者表示之嵌合分子，以及至少一種額外的囊腫纖維化治療化合物或治療。
在一些實施例中，至少一種額外的囊腫纖維化(「CF」)治療性化合物係選自依伐卡托、魯瑪卡托、特薩卡托、埃克斯卡托、ABBV-2222、帕森納卡托或勒瑟利卡托，或其任何組合。在一些實施例中，至少一種額外的囊腫纖維化治療化合物係選自依伐卡托、魯瑪卡托、特薩卡托、埃克斯卡托、ABBV-2222、帕森納卡托、勒瑟利卡托、ABBV-191、ABBV-3067、ELX-02、PTI-428、PTI-801、PTI-808、VX-121、VX-561或MRT5005。在一些實施例中，至少一種額外的囊腫纖維化治療化合物包含此項技術中已知的任何已知的囊腫纖維化治療化合物。
在一些實施例中，至少一種額外的CF治療化合物包含於與本文所揭示之嵌合分子相同的組合物中。在一些實施例中，至少一種額外的CF治療化合物包含於與本文所揭示之嵌合分子不同的組合物中。
在一些實施例中，本文所描述之組合物包含超過一種嵌合分子。在一些實施例中，至少一種額外的嵌合分子包含於與第一嵌合分子相同的組合物中。在一些實施例中，至少一種額外的嵌合分子包含於與另一嵌合分子不同的組合物中。
在一些實施例中，包含一或多種嵌合分子及至少一種額外治療劑之組合物包含兩種組合物，其中一種嵌合分子包含於一種組合物中且至少一種額外治療劑或額外嵌合分子包含於不同的組合物中。在一些實施例中，對於包含多種活性劑(包括一或多種嵌合分子及/或額外CF治療劑)之組合物，每種活性劑係在各別組合物中。在一些實施例中，對於包含多種活性劑(包括一或多種嵌合分子及/或額外CF治療劑)之組合物，活性劑包含於多種組合物中，其中治療劑可單獨地包含於組合物中，或可與至少一種額外治療劑包含於組合物中。
在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含：包含USP7結合劑之嵌合分子，以及至少一種額外的PARP1抑制劑及/或癌症治療化合物或治療。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含：包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之USP7結合劑的嵌合分子，以及至少一種額外的PARP1抑制劑及/或癌症治療化合物或治療。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含：包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的嵌合分子，以及至少一種額外的PARP1抑制劑及/或癌症治療化合物或治療。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含：由 嵌合分子 (XIX)至 ( XX)之結構表示之嵌合分子，以及至少一種額外的PARP1抑制劑及/或癌症治療化合物或治療。在一個實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含：由本文 表 3中提供之 嵌合分子 164 至 177之結構中任一者表示的嵌合分子，以及至少一種額外的PARP1抑制劑及/或癌症治療化合物或治療。
在一些實施例中，至少一種PARP1抑制劑係選自維利帕尼(ABT-888)、盧卡帕尼(Rubraca；AG-014699)、奧拉帕尼(Lynparza；AZD-2281)、尼拉帕尼(Zejula；MK-4827)或他拉唑帕尼(BMN-673)。在一些實施例中，至少一種額外PARP1抑制劑包含此項技術中已知的任何已知PARP1抑制劑。
在一些實施例中，至少一種額外PARP1抑制劑包含於與本文所揭示之嵌合分子相同的組合物中。在一些實施例中，至少一種額外PARP1抑制劑包含於與本文所揭示之嵌合分子不同的組合物中。
在一些實施例中，對於包含多種活性劑(包括一或多種嵌合分子及/或額外PARP1抑制劑或癌症治療劑或其組合)之組合物，每一種活性劑係在各別組合物中。在一些實施例中，對於包含多種活性劑(包括一或多種嵌合分子及/或額外PARP1抑制劑或抗癌劑或其組合)之組合物，活性劑包含於多種組合物中，其中治療劑可單獨地包含於組合物中，或可與至少一種額外治療劑包含於組合物中。
在一些實施例中，具有適當生理學上可接受之載劑的組合物可調配成呈固體、半固體、液體或氣體形式之製劑，諸如錠劑、膠囊、散劑、粒劑、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠、微球粒及氣溶膠。另外，其他醫藥活性成分及/或適合之賦形劑(諸如鹽類、緩衝液及穩定劑)可(但不必需)存在於組合物內。如本文中所使用，術語「醫藥學上可接受之載劑」在一些實施例中可與具有所有相同品質及含義的術語「生理學載劑」、「生理學上可接受之載劑」、「醫藥學上可接受之稀釋劑」或「醫藥學上可接受之賦形劑」互換使用。
醫藥組合物可呈固體或液體形式。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑為微粒，使得組合物例如呈錠劑或散劑形式。醫藥學上可接受之載劑可為液體，其中組合物為例如口服油、可注射液體或適用於例如吸入投藥之氣溶膠。當意欲用於經口投藥時，醫藥組合物較佳呈固體或液體形式，其中半固體、半液體、懸浮液及凝膠形式包括在本文視為固體或液體之形式內。
作為用於經口投藥之固體組合物，醫藥組合物可調配成散劑、顆粒、壓縮錠劑、丸劑、膠囊、口嚼錠、粉片或其類似物。該固體組合物將通常含有一或多種惰性稀釋劑或可食用的醫藥學上可接受之載劑。另外，可存在以下中之一或多者：黏合劑，諸如羧基甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉、乳糖或糊精；崩解劑，諸如海藻酸、海藻酸鈉、澱粉羥基乙酸鈉、玉米澱粉及其類似物；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或Sterotex；滑動劑，諸如膠態二氧化矽；甜味劑，諸如蔗糖或糖精；調味劑，諸如胡椒薄荷、水楊酸甲酯或柑橘調味劑；及著色劑。當醫藥組合物呈膠囊形式，例如明膠膠囊時，其可含有除以上類型之材料以外的液體醫藥學上可接受之載劑，諸如聚乙二醇或油。
醫藥組合物可呈液體形式，例如酏劑、糖漿、溶液、乳液或懸浮液。舉兩個例子而言，液體可用於經口投藥或用於藉由注射遞送。當意欲用於經口投藥時，較佳組合物亦含有除本發明之化合物之外的甜味劑、防腐劑、染料/著色劑及香味增強劑中之一或多者。在意欲藉由注射投藥之組合物中，可包括界面活性劑、防腐劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、穩定劑及等張劑中之一或多者。
液體醫藥組合物，無論其為溶液、懸浮液或其他類似形式，均可包括以下佐劑中之一或多者：無菌稀釋劑，諸如注射用水，生理鹽水溶液，較佳生理鹽水，林格氏溶液(Ringer's solution)，等張氯化鈉，不揮發性油，諸如可充當溶劑或懸浮介質之合成單酸甘油酯或二酸甘油酯，聚乙二醇，丙三醇，丙二醇或其他溶劑；抗細菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及張力調節劑，諸如氯化鈉或右旋糖。非經腸製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水係較佳佐劑。可注射醫藥組合物較佳地為無菌的。
意欲用於非經腸或經口投藥之液體醫藥組合物應含有一定量的如本文所揭示之嵌合分子以使得將獲得適合劑量。
醫藥組合物可意欲用於局部投藥，在此情況下醫藥學上可接受之載劑可適當地包含溶液、乳液、軟膏或凝膠基質。舉例而言，基質可包含以下中之一或多者：石蠟脂、羊毛蠟、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑(諸如水及醇)及乳化劑及穩定劑。增稠劑可存在於用於局部投藥之醫藥組合物中。若意欲用於經皮投藥，則組合物可包括經皮貼片或離子電滲療法(iontophoresis)裝置。醫藥組合物可意欲用於以例如栓劑形式經直腸投藥，該栓劑將在直腸中熔融且釋放藥物。用於經直腸投藥之組合物可含有油性基質作為適合之無刺激性賦形劑。此類基質包括(但不限於)羊毛蠟、可可脂及聚乙二醇。
醫藥組合物可包括各種材料，該等材料調節固體或液體劑量單元之物理形式。舉例而言，組合物可包括圍繞活性成分形成包覆殼層之材料。形成包覆殼層之材料通常為惰性的，且可選自例如糖、蟲膠及其他腸溶包覆劑。替代地，活性成分(本文所揭示之嵌合分子)可包覆於明膠膠囊中。呈固體或液體形式之醫藥組合物可包括結合至如本文所揭示之嵌合分子且藉此幫助傳遞化合物之試劑。可起此能力作用之適合試劑包括單株或多株抗體、一或多種蛋白質或脂質體。醫藥組合物可基本上由可以氣霧劑形式投與之劑量單元組成。術語氣溶膠用於表示介於膠態性質之彼等系統至由加壓封裝組成之系統範圍內的多種系統。遞送可藉由液化或壓縮氣體或藉由分配活性成分的適合之泵系統進行。氣溶膠可以單相、雙相或三相系統形式遞送以遞送活性成分。氣霧劑之遞送包括必需容器、活化劑、閥門、次容器及其類似物，其在一起可形成套組。一般熟習此項技術者在不進行過度實驗的情況下即可確定較佳氣霧劑。
醫藥組合物可藉由醫藥技術中熟知之方法製備。舉例而言，意欲藉由注射投與之醫藥組合物可藉由組合包含如本文所描述之嵌合分子及視情況選用的鹽、緩衝液及/或穩定劑中之一或多者的組合物與無菌蒸餾水以形成溶液來製備。可添加界面活性劑以促進形成均勻溶液或懸浮液。界面活性劑為化合物，其與嵌合分子組合物非共價相互作用以便促進嵌合分子在含水傳遞系統中溶解或均勻懸浮。
組合物可以治療有效量投與，其將視包括以下之各種因素而變化：所採用之嵌合分子化合物之活性；嵌合分子化合物之代謝穩定性及作用時長；患者之年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食；投藥模式及時間；***速率；藥物組合；特定過敏性或呼吸道病症或病狀之嚴重程度；及進行療法之個體。
在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑可為液體、半液體或固體。用於非經腸、皮內、皮下或局部施用之溶液或懸浮液可包括例如無菌稀釋劑(諸如水)、生理鹽水溶液、不揮發性油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其他合成溶劑；抗微生物劑(諸如苯甲醇及對羥基苯甲酸甲酯、苯酚或甲酚、汞劑、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯紮氯銨及苄索氯銨)；抗氧化劑(諸如抗壞血酸及亞硫酸氫鈉；甲硫胺酸、硫代硫酸鈉、鉑、過氧化氫酶、檸檬酸、半胱胺酸、硫代甘油、硫代乙醇酸、硫代山梨糖醇、丁基化羥基大茴香醚、丁基化羥基甲苯及/或沒食子酸丙酯)及螯合劑(諸如乙二胺四乙酸(EDTA))；緩衝液(諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽及磷酸鹽)。若靜脈內投與，則適合的醫藥學上可接受之載劑包括生理鹽水或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)，及含有增稠劑及增溶劑，諸如葡萄糖、聚乙二醇、聚丙二醇及其混合物之溶液。
包含如本文所描述之嵌合分子化合物的組合物可用醫藥學上可接受之載劑製備，該等載劑保護嵌合分子化合物或其前驅藥以避免自身體快速消除，諸如延時釋放調配物或包衣。此類醫藥學上可接受之載劑包括控制釋放調配物，諸如(但不限於)植入物及微膠囊化遞送系統，及生物可降解、生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、聚原酸酯、聚乳酸及一般熟習此項技術者已知之其他載劑。
在一些實施例中，術語「醫藥組合物」及「組合物」可在本文中互換使用，具有所有相同含義及品質。 使用方法
本文所提供之嵌合分子之設計及結構能夠使其在治療性治療中用作活性劑。在單獨使用時，作為一線療法，本文提供之嵌合分子能夠在USP7與目標Ub-蛋白質之間形成蛋白質複合物，其使得Ub-蛋白質所攜載之泛素分子數目減少。如本文通常所揭示，歸因於對細胞蛋白質發揮之複雜的泛素化作用，本文所提供之嵌合分子可用於影響細胞蛋白質及過程。
在一些實施例中，本文揭示一種用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法，其包含使Ub-蛋白質與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，本文揭示一種用於預防或減少與疾病相關之Ub-蛋白質降解的方法，其包含使Ub-蛋白質與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，本文揭示一種用於預防或減少與疾病相關之Ub-蛋白質降解的方法，其包含使Ub-蛋白質與本文所揭示之嵌合分子接觸，其中該疾病係選自癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，癌症包含對其他已知療法具有抗性之癌症。在一些實施例中，癌症包含BRCA突變相關之癌症。在一些實施例中，癌症包含乳癌、三陰性乳癌、卵巢癌、黑素瘤、非小細胞肺癌、***癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、骨肉瘤、惡性間皮瘤、睪丸癌、頭頸癌、淋巴瘤、胃癌、大腸癌、胰臟癌或神經膠質母細胞瘤。
在一些實施例中，本文揭示一種用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法，其包含使Ub-CFTR與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，本文揭示一種用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法，其包含使Ub-PARP1與本文所揭示之嵌合分子接觸。
在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之之降解的方法包含使Ub-蛋白質與由 嵌合分子 (I) 至 (XX)中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法包含使Ub-蛋白質與由本文表2及表3中提供之 嵌合分子 1 至 177中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。
在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之之降解的方法包含使Ub-CFTR與由 嵌合分子 (I) 至 (XVII)中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-CFTR之降解的方法包含使Ub-CFTR與由本文表2及表3中提供之 嵌合分子 1 至 163之結構中之任一者表示的嵌合分子接觸。
在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與由 嵌合分子 (XIX) 至 (XX)中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。在一些實施例中，用於預防或減少Ub-PARP1之降解的方法包含使Ub-PARP1與由本文表3中提供之 嵌合分子 164 至 177之結構中之任一者表示的嵌合分子接觸。
在一些實施例中，本文揭示一種用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法，其包含使Ub-蛋白質與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，本文揭示一種用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法，其包含使Ub-CFTR與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，本文揭示一種用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子之方法，其包含使Ub-PARP1與本文所揭示之嵌合分子接觸。
在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與由 嵌合分子 (I) 至 (XX)中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。在一些實施例中，用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-蛋白質與由本文表2及表3中提供之 嵌合分子 1 至 177之結構中之任一者表示的嵌合分子接觸。
在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與由 嵌合分子 (I) 至 (XVII)中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。在一些實施例中，用於自Ub-CFTR移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-CFTR與由本文表2及表3中提供之 嵌合分子 1 至 163中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。
在一些實施例中，泛素化程度影響細胞中所關注蛋白質之半衰期，例如但不限於CFTR之半衰期。在一些實施例中，泛素化程度影響細胞中所關注蛋白質之降解，例如但不限於CFTR之降解。
在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (1)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (2)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (3)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (4)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (5)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (6)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與嵌合分子接觸，該嵌合分子包含由 式 (7)之結構表示的USP7結合劑及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與由 嵌合分子 (XIX) 至 (XX)中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。在一些實施例中，用於自Ub-PARP1移除至少一個泛素分子的方法包含使Ub-PARP1與由本文表3中提供之 嵌合分子 164 至 177中任一者之結構表示的嵌合分子接觸。
在一些實施例中，泛素化程度影響細胞中所關注蛋白質之半衰期，例如但不限於PARP1之半衰期。在一些實施例中，泛素化程度影響細胞中所關注蛋白質之降解，例如但不限於PARP1之降解。
在一些實施例中，所關注蛋白質包含USP7之天然目標。在一些實施例中，所關注蛋白質包含USP7之非天然目標。在一些實施例中，所關注蛋白質包含受體蛋白。在一些實施例中，所關注蛋白質包含PM孔蛋白質。在一些實施例中，所關注蛋白質包含離子通道蛋白質。在一些實施例中，所關注蛋白質包含陰離子通道蛋白質。在一些實施例中，所關注蛋白質包含氯離子通道蛋白質。在一些實施例中，所關注蛋白質包含CFTR。在一些實施例中，所關注蛋白質包含CFTR之突變形式。在一些實施例中，所關注蛋白質包含摺疊異常之CFTR。在一些實施例中，所關注蛋白質包含錯誤靶向之CFTR。在一些實施例中，所關注蛋白質包含與野生型CFTR相比活性降低之CFTR。在一些實施例中，所關注蛋白質包含核蛋白質。在一些實施例中，所關注蛋白質包含參與DNA修復之蛋白質。在一些實施例中，所關注蛋白質包含酶。在一些實施例中，所關注蛋白質包含DNA結合蛋白。在一些實施例中，所關注蛋白質包含PARP1。在一些實施例中，所關注蛋白質包含WT PARP1。
本文提供之嵌合分子之一個應用的非限制性實例為經泛素化之所關注蛋白質的去泛素化(例如，自蛋白質移除全部或一些泛素分子)。在一些實施例中，移除全部或一些泛素分子維持或增加所關注蛋白質之半衰期。在一些實施例中，移除全部或一些泛素分子減少所關注蛋白質之降解。在一些實施例中，維持或增加所關注蛋白質之半衰期向罹患疾病或病狀之個體提供益處。在一些實施例中，減少所關注蛋白質之降解增加蛋白質的半衰期。在一些實施例中，預防所關注蛋白質之降解增加蛋白質的半衰期。在一些實施例中，減少所關注蛋白質之降解維持蛋白質的半衰期。在一些實施例中，預防所關注蛋白質之降解維持蛋白質的半衰期。在一些實施例中，移除全部或一些泛素分子增加所關注蛋白質之局部濃度。在一些實施例中，減少所關注蛋白質之降解為罹患疾病或病狀之個體提供益處。在某些實施例中，益處可包括維持蛋白質通道或藉由蛋白質執行功能。在某些實施例中，益處可包括癌細胞或腫瘤細胞中之DNA修復及細胞死亡減少，或癌細胞或腫瘤細胞中之DNA股斷裂增加。在某些實施例中，益處可包括所關注蛋白質之功能無變化。
在使用本文提供之嵌合分子使經泛素化的所關注蛋白質去泛素化(例如，自蛋白質移除全部或一些泛素分子)之方法的一些實施例中，該方法在活體內進行。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之應用的非限制性實例包含用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子之方法，其包含使Ub-蛋白質與包含第一結合域、第二結合域及連接子域的存活靶向嵌合(SURTAC)分子接觸，其中：第一結合域經設計以結合於可自結合至第二域之Ub-蛋白質裂解Ub的USP7；第二結合域經設計以結合於Ub-蛋白質，且連接子域經設計以將第一結合域連接至第二結合域；藉此自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子。在一些實施例中，在本文所揭示之方法中，Ub-蛋白質包含Ub-CFTR。在一些實施例中，在本文所揭示之方法中，Ub-蛋白質包含Ub-PARP1。
在一些實施例中，用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法，或用於自Ub-蛋白質移除至少一個Ub分子之方法進一步提供用於以下之方法：改善該Ub-蛋白質之摺疊、校正該Ub-蛋白質之摺疊、增強Ub-蛋白質之活性、加強Ub-蛋白質之活性、幫助正確地靶向細胞內之Ub-蛋白質，及/或增強Ub-蛋白質之運輸。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含Ub-CFTR。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含Ub-PARP-1。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之應用的非限制性實例包含用於自Ub-蛋白質移除至少一個泛素分子之方法，其中該方法在活體內進行。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之應用的非限制性實例包含用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法，該方法包含使Ub-蛋白質與包含第一結合域、第二結合域及連接子域的存活靶向嵌合(SURTAC)分子接觸，其中：第一結合域經設計以結合可自結合至第二結合域之Ub-蛋白質裂解泛素的USP7；第二結合域經設計以結合Ub-蛋白質，且連接子域經設計以將第一結合域連接至第二結合域；藉此預防、減少或減輕Ub-蛋白質之降解。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之應用的非限制性實例包含用於預防或減少Ub-蛋白質之降解的方法，其中該方法在活體內進行。
包括SURTAC分子及其組分的本文所揭示之嵌合分子已在上文中詳細描述。在本文所揭示之嵌合分子之使用方法的一些實施例中，Ub-蛋白質包含CFTR。在本文所揭示之嵌合分子之使用方法的一些實施例中，Ub-蛋白質包含PARP-1。
在一些實施例中，本文揭示一種用於預防或減少Ub-PKA之降解的方法，其包含使Ub-PKA與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，本文揭示一種用於預防或減少Ub-PKA之降解的方法，其包含使Ub-PKA與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，本文揭示一種用於治療成骨不全之方法，其包含使Ub-PKA與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，本文揭示一種用於促進骨生成之方法，其包含使Ub-PKA與本文所揭示之嵌合分子接觸。在一些實施例中，該方法包含投與包含第二結合域之嵌合分子，其中第二結合域為諸如式(L)至(N)之PKA結合劑。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之使用方法包含使用嵌合分子調節泛素化蛋白質(例如但不限於CFTR)之活性的方法，該方法包含使泛素化蛋白質與包含第一結合域、第二結合域及連接子域之嵌合分子接觸，其中： 第一結合域經設計以結合於USP7； 第二結合域經設計以結合於目標蛋白，且 連接子域經設計以將第一結合域連接至第二結合域； 藉此調節泛素化蛋白質之活性。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之使用方法包含用於調節泛素化蛋白質(例如但不限於CFTR)之細胞位置的用途，該方法包含使泛素化蛋白質與包含第一結合域、第二結合域及連接子域之嵌合分子接觸，其中： 第一結合域經設計以結合於USP7； 第二結合域經設計以結合於目標蛋白，且 連接子域經設計以將第一結合域連接至第二結合域；藉此調節泛素化蛋白質之細胞位置。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之使用方法包含使用嵌合分子改變泛素化蛋白質(例如但不限於PARP1)之例如下游活性，其中該WT DNA修復活性經改變以增加癌細胞或腫瘤細胞中之DNA股斷裂，該方法包含使泛素化蛋白質與包含第一結合域、第二結合域及連接子域之嵌合分子接觸，其中： 第一結合域經設計以結合於USP7； 第二結合域經設計以結合於目標蛋白，且 連接子域經設計以將第一結合域連接至第二結合域； 藉此改變泛素化蛋白質之功能活性。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之使用方法包含用於增強特定細胞位置內之泛素化蛋白質(例如但不限於細胞核中及/或細胞核中結合至DNA的PARP1)之濃度的用途，該方法包含使泛素化蛋白質與包含第一結合域、第二結合域及連接子域之嵌合分子接觸，其中： 第一結合域經設計以結合於USP7； 第二結合域經設計以結合於目標蛋白，且 連接子域經設計以將第一結合域連接至第二結合域；藉此增強細胞核中及/或與DNA締合之泛素化蛋白質的濃度。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之使用方法包含用於調節泛素化蛋白質與另一蛋白質之相互作用的用途，該方法包含使泛素化蛋白質與包含第一結合域、第二結合域及連接子域之嵌合分子接觸，其中： 第一結合域經設計以結合於USP7； 第二結合域經設計以結合於目標蛋白，且 連接子域經設計以將第一結合域連接至第二結合域；藉此調節泛素化蛋白質與其他蛋白質之相互作用。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之使用方法包含用於調節泛素化蛋白質與DNA之相互作用結果(例如但不限於增加細胞中結合至DNA之去泛素化蛋白質的量)的用途，該方法包含使泛素化蛋白質與包含第一結合域、第二結合域及連接子域之嵌合分子接觸，其中： 第一結合域經設計以結合於USP7； 第二結合域經設計以結合於目標蛋白，且 連接子域經設計以將第一結合域連接至第二結合域；藉此調節泛素化蛋白質與DNA之相互作用。在一些實施例中，細胞包含癌細胞或腫瘤細胞。熟悉此項技術者將瞭解，在一些實施例中，當去泛素化蛋白質為PARP1或類似蛋白質時，雖然去泛素化蛋白質之量在靜止/非癌細胞/非腫瘤細胞及腫瘤細胞/癌細胞兩者中增加，但靜止/非癌細胞/非腫瘤細胞仍保持解毒DNA結合之PARP1蛋白質及存活的能力，而癌細胞或腫瘤細胞卻不能。在一些實施例中，靶向USP7及PARP1之SURTAC分子的使用方法導致癌細胞及腫瘤細胞之細胞毒性。
在一些實施例中，本文所描述之嵌合分子之使用方法包含自Ub-蛋白質移除至少一個Ub及調節Ub-蛋白質之活性、調節Ub-蛋白質之細胞位置、調節Ub-蛋白質與另一蛋白質之相互作用、增強細胞中之Ub-蛋白質之局部濃度，或其任何組合。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含CFTR。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含CFTR或PARP1。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含CFTR或PARP1。在一些實施例中，Ub-蛋白質包含PKA。
本文提供之嵌合分子之一個應用的非限制性實例為因摺疊異常而泛素化之蛋白質的去泛素化。當細胞檢測道摺疊異常之蛋白質時，細胞通常會標記此等蛋白質以供降解。當細胞不區分非功能摺疊異常之蛋白質與部分功能性摺疊異常之蛋白質時，部分功能摺疊異常之蛋白質的泛素化及因此降解為某些疾病(諸如CF)之標誌。因此，藉由本文提供之嵌合分子對摺疊異常但仍具功能性的蛋白質(例如但不限於CFTR)之特定補救在對抗由摺疊異常之蛋白質引起之疾病或病狀(例如但不限於CF)中係有益的。
本文提供之嵌合分子之另一個應用的非限制性實例為WT蛋白質之去泛素化以便增加WT蛋白質之局部濃度，藉此WT蛋白質之量增加會導致有效***細胞(例如癌細胞及腫瘤細胞)之細胞毒性。因此，藉由增加WT PARP1之局部濃度且藉此增加PARP1捕獲於DNA上及DNA股斷裂之相關增加來對癌細胞及腫瘤細胞進行特異性細胞毒性靶向可例如藉由本文所提供之嵌合分子對UB-WT PARP1之靶向去泛素化而發生，其中影響在對抗諸如癌症之疾病或病狀中係有益的。
在一些實施例中，本文揭示一種治療有需要個體之疾病的方法，其包含投與治療有效量的包含本文所揭示之至少一種嵌合分子的醫藥組合物。在一些實施例中，在治療疾病之方法中，該疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法治療的疾病包含癌症。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法治療的疾病包含神經退化性疾病或病症。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法治療的疾病包含貧血症。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法治療的疾病包含代謝症候群。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法治療的疾病包含自體免疫。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法治療的疾病包含發炎性疾病或病症。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法治療的疾病包含感染。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法治療的疾病包含肌肉萎縮。在一些實施例中，所治療之疾病包含囊腫纖維化(CF)。
在一些實施例中，用於治療有需要個體之疾病的方法包含投與嵌合分子，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於治療有需要個體之疾病的方法包含投與嵌合分子，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至 式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，其中該疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮。在一些實施例中，疾病包含癌症。在一些實施例中，疾病包含神經退化性疾病或病症。在一些實施例中，疾病包含貧血症。在一些實施例中，疾病包含代謝症候群。在一些實施例中，疾病包含自體免疫。在一些實施例中，疾病包含發炎性疾病或病症。在一些實施例中，疾病包含感染。在一些實施例中，疾病包含肌肉萎縮。在一些實施例中，疾病包含囊腫纖維化(CF)。
在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由 式 (1)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由 式 (2)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由 式 (3)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由 式 (4)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由 式 (5)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由 式 (6)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由 式 (7)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在用於治療有需要個體之疾病之方法的某些實施例中，該疾病包含囊腫纖維化。
在一些實施例中，用於治療個體之疾病之方法包含治療患有CF之個體，其中該方法包含投與嵌合分子，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於治療個體之疾病之方法包含治療患有CF之個體，其中該方法包含投與包含由下 式 (1) 至式 (7 )中任一者之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於治療個體之疾病之方法包含治療患有CF之個體，其中該方法包含投與由 式 (7)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (J)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由 嵌合分子 (I) 至 (XVIII)中任一者之結構表示的嵌合分子。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療CF的方法，該方法包含投與由本文提供之表2及表3之 嵌合分子 1 至 163之結構中之任一者表示的嵌合分子。
在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由 式 (1)之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由 式 (2)之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由 式 (3)之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由 式 (4)之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由 式 (5)之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由 式 (6)之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由 式 (7)之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在用於治療有需要個體之疾病之方法的某些實施例中，疾病包含癌症。在一些實施例中，待治療之癌症對PARP抑制劑療法具有抗性。
在一些實施例中，用於治療個體之疾病之方法包含治療患有CF之個體，其中該方法包含投與嵌合分子，該嵌合分子包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的USP7結合劑，如上文詳細描述。在一些實施例中，用於治療個體之疾病之方法包含治療患有癌症之個體，其中該方法包含投與由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，用於治療個體之疾病之方法包含治療患有癌症之個體，其中該方法包含投與由 式 (7)之結構表示的嵌合分子及由 式 (K)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由 嵌合分子 (XIX) 至 (XX)中任一者之結構表示的嵌合分子。在一些實施例中，一種用於治療有需要個體之疾病，例如但不限於治療癌症的方法，該方法包含投與由本文提供之表3的 嵌合分子 164 至 177之結構中的任一者表示的嵌合分子。在一些實施例中，癌症對PARP抑制劑療法具有抗性。
在一些實施例中，本文揭示一種用於治療個體之疾病之方法，其中該疾病係選自癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮，且其中該方法包含投與由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的嵌合分子(如上文詳細描述)及額外治療劑。在一些實施例中，待治療之疾病包含囊腫纖維化，該方法包含投與由下 式 (1) 至式 (7)中之任一者之結構表示的嵌合分子及額外治療劑。
在一些實施例中，使用嵌合分子治療疾病之方法影響細胞中所關注蛋白質之半衰期。在一些實施例中，使用嵌合分子治療疾病之方法改善該Ub-蛋白質之摺疊、校正該Ub-蛋白質之摺疊、增強Ub-蛋白質之活性、加強Ub-蛋白質之活性、幫助正確地靶向細胞內之Ub-蛋白質，及/或增強Ub-蛋白質之運輸。在一些實施例中，使用嵌合分子治療疾病之方法影響細胞中所關注蛋白質之半衰期，且改善該Ub-蛋白質之摺疊、校正該Ub-蛋白質之摺疊、加強Ub-蛋白質之活性、增強Ub-蛋白質之活性、幫助正確地靶向細胞內之Ub-蛋白質，及/或增強Ub-蛋白質之運輸，或其任何組合。在一些實施例中，使用嵌合分子治療疾病之方法影響細胞中所關注蛋白質之局部濃度。在一些實施例中，Ub-蛋白質與疾病相關聯。在一些實施例中，不存在Ub-蛋白質與疾病相關聯。在一些實施例中，Ub-蛋白質與選自以下之疾病相關聯：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。
在一些實施例中，一種使用嵌合分子治療疾病之方法，其中該疾病包含CF，該使用方法影響細胞中CFTR之半衰期。在一些實施例中，一種使用嵌合分子治療疾病(其中該疾病包含CF)之方法改善該Ub-CFTR之摺疊、校正該Ub-CFTR之摺疊、加強Ub-CFTR之活性、增強藉由Ub-CFTR跨過PM之離子轉運、幫助正確地靶向細胞內之Ub-CFTR，及/或增強Ub-CFTR之運輸。在一些實施例中，使用嵌合分子治療疾病(其中該疾病包含CF)之方法影響細胞中CFTR之半衰期，且改善該Ub-CFTR之摺疊、校正該Ub-CFTR之摺疊、增強Ub-CFTR之活性、加強藉由Ub-CFTR目標跨過PM之離子轉運、幫助正確地靶向細胞內之Ub-CFTR，及/或增強Ub-CFTR之運輸，或其任何組合。
在一些實施例中，一種使用嵌合分子治療疾病之方法，其中該疾病包含癌症，該使用方法影響細胞核中PARP1之局部濃度。在一些實施例中，使用嵌合分子治療疾病(其中該疾病包含癌症)之方法增加結合至DNA之PARP1的量。在一些實施例中，使用嵌合分子治療疾病(其中該疾病包含癌症)之方法增加結合至DNA之PARP1的量且藉此增加DNA股斷裂之數目，藉此產生細胞之細胞毒性。在一些實施例中，細胞包含癌細胞或腫瘤細胞。
在本文所描述之使用方法的某些實施例中，本文所提供之嵌合分子進一步包含結合於目標細胞上呈現之抗原的第三結合域。如熟習此項技術者將理解，特異性靶向細胞上或特定細胞群上呈現之抗原的第三結合域允許將本文所提供之嵌合分子遞送至預定細胞，例如但不限於肺或胃腸細胞，其中CFTR之功能在CF中可降低或突變。在另一實施例中，第三結合域將本文所描述之嵌合分子特異性靶向癌細胞或腫瘤細胞。
在本文所描述之嵌合分子之使用方法的某些實施例中，嵌合分子進一步包含細胞穿透標籤。如熟習此項技術者將理解，增加嵌合分子進入細胞的細胞穿透標籤允許將嵌合分子高效遞送至細胞。在一些實施例中，細胞穿透標籤包含細胞穿透肽(CPP)。在一些實施例中，CPP包含促進各種分子之細胞攝入/攝取的短肽。在本文所描述之嵌合分子之使用方法的一些實施例中，嵌合分子經由化學鍵聯(經由共價鍵結)或經由非共價相互作用與CPP締合。
在本文所提供之嵌合分子之使用方法的某些實施例中，該使用方法恢復已受到損傷(例如但不限於突變CFTR蛋白質之表現)之細胞的正常細胞功能。在嵌合分子之使用方法的一些實施例中，該方法部分地恢復已受損傷(例如但不限於突變CFTR蛋白質之表現)之細胞的正常細胞功能。
在本文所提供之嵌合分子之使用方法的某些實施例中，該使用方法活化細胞(其包含癌細胞或腫瘤細胞)中對細胞具有細胞毒性的所靶向之Ub-蛋白質的功能，例如但不限於藉由使Ub-PARP1去泛素化增加Ub-PARP1蛋白質之局部細胞濃度。在嵌合分子之使用方法的一些實施例中，該方法維持細胞中之正常PARP1 DNA結合功能，當PARP1過量時會導致捕獲於DNA上之PARP1增加及DNA中之單股斷裂增加，且最終導致細胞死亡。 投藥
如本文所揭示之嵌合分子或包含嵌合分子之醫藥組合物的投藥可藉由多種不同途徑來達成，包括經口、非經腸、經鼻、靜脈內、皮內、皮下或局部。在一些實施例中，投藥模式視待治療或預防之病狀性質而定。在一些實施例中，投藥之後減輕、抑制、預防或延遲癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮之進展的量視為有效的。在一些實施例中，投藥之後減輕、抑制、預防或延遲癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮之症狀進展的量視為有效的。
在一些實施例中，投藥之後減輕、抑制、預防或延遲CF進展的量視為有效的。在一些實施例中，投藥之後減輕、抑制、預防或延遲CF之症狀進展的量視為有效的。
在一些實施例中，投藥之後減輕、抑制、預防或延遲癌症進展的量視為有效的。在一些實施例中，投藥之後增加癌細胞之細胞毒性的量視為有效的。
在某些實施例中，本文所揭示之方法投與嵌合分子以治療個體之疾病。在某些實施例中，本文所揭示之方法投與嵌合分子以治療個體之疾病，其中該疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮。在某些實施例中，本文所揭示之方法投與嵌合分子以治療個體之疾病，其中該疾病為囊腫纖維化。在某些實施例中，本文所揭示之方法投與嵌合分子以治療個體之疾病，其中該疾病為癌症。
在一些實施例中，向需要治療疾病之個體投與有效量之嵌合分子或其組合物，該疾病選自癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，向需要治療CF之個體投與有效量之嵌合分子或其組合物。在一些實施例中，向需要治療癌症之個體投與有效量之嵌合分子或其組合物。
在某些實施例中，本文所揭示之方法投與嵌合分子以及額外療法以治療個體之疾病。在某些實施例中，本文所揭示之方法投與嵌合分子以及額外療法以治療個體之疾病，其中該疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮。在一些實施例中，向需要治療CF之個體投與有效量之嵌合分子或其組合物及額外治療劑或其組合物。在一些實施例中，向需要治療癌症之個體投與有效量之嵌合分子或其組合物及額外治療劑或其組合物。在一些實施例中，額外療法為在疾病之護理標準中使用的療法。在一些實施例中，額外療法為在疾病之護理標準中使用的療法，該疾病選自癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮。在一些實施例中，額外療法為在治療CF之護理標準中使用的療法。在一些實施例中，額外治療劑為在疾病之護理標準中使用的治療劑。在一些實施例中，額外治療劑為在CF之護理標準中使用的治療劑。在一些實施例中，額外療法為在治療癌症之護理標準中使用的療法。在一些實施例中，額外治療劑為在疾病之護理標準中使用的治療劑。在一些實施例中，額外治療劑為為癌症之護理標準中使用的治療劑。
在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與改善或增強或加強與疾病相關的蛋白質之活性的治療活性分子，該疾病選自癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，所治療之疾病包含囊腫纖維化。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與治療劑，該治療劑能夠影響細胞中Ub-蛋白質之半衰期，及改善該Ub-蛋白質之摺疊、校正該Ub-蛋白質之摺疊、增強Ub-泛素化之活性、幫助正確地靶向細胞內之Ub-蛋白質，及/或增強Ub-蛋白質之運輸，或其任何組合，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，所治療之疾病包含囊腫纖維化。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠影響細胞中Ub-蛋白質之半衰期的治療劑，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，所治療之疾病包含囊腫纖維化。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠改善Ub-蛋白質之摺疊的治療劑，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠校正Ub-蛋白質之摺疊的治療劑，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠增強Ub-蛋白質之活性的治療劑，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠加強Ub-蛋白質之活性的治療劑，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠幫助正確地靶向細胞內之Ub-蛋白質的治療劑，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠增強Ub-蛋白質之運輸的治療劑，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠影響細胞中WT Ub-蛋白質之局部濃度的治療劑，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，所治療之疾病包含癌症。
在一些實施例中，改善或增強或加強細胞中Ub-蛋白質之活性至少1%、至少2%、至少3%、至少4%、至少5%、至少6%、至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或100%，其中該蛋白質與選自以下之疾病相關：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。
在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與改善或增強或加強CFTR之活性的治療活性分子。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與治療劑，該治療劑能夠影響細胞中Ub-CFTR之半衰期及改善該Ub-CFTR之摺疊、校正該Ub-CFTR之摺疊、增強Ub-CFTR之活性、幫助正確地靶向細胞內之Ub-CFTR，及/或增強Ub-CFTR之運輸，或其任何組合。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠影響細胞中Ub-CFTR之半衰期的治療劑。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠改善該Ub-CFTR之摺疊的治療劑。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠校正該Ub-CFTR之摺疊的治療劑。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠增強Ub-CFTR之活性的治療劑。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠增強Ub-CFTR之活性的治療劑。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠幫助正確地靶向細胞內之Ub-CFTR的治療劑。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠增強Ub-CFTR之運輸的治療劑。
在一些實施例中，改善或增強或加強細胞中Ub-CFTR之活性至少1%、至少2%、至少3%、至少4%、至少5%、至少6%、至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或100%。
在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與治療活性分子，該治療活性分子增強細胞核中PARP1之局部濃度、增加結合至DNA之PARP1分子的量、增加單股DNA斷裂及增加癌細胞或腫瘤細胞之細胞毒性。
在一些實施例中，本文提供一種治療疾病之方法，其中該方法包含投與本文所描述之醫藥組合物。
在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠治療CF之治療劑。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物之投藥包含投與能夠治療癌症之治療劑。
在一些實施例中，所投與之治療劑包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的嵌合分子，如上文詳細描述。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由 式 (1)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由 式 (2)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由 式 (3)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由 式 (4)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由 式 (5)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由 式 (6)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由 式 (7)之結構表示的嵌合分子及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑。
在一些實施例中，所投與之治療劑包含由以下 嵌合分子 (I) 至 (XX)中任一者之結構表示的嵌合分子。在一些實施例中，所投與之治療劑包含由表2及表3之以下 嵌合分子 1 至 177中任一者之結構表示的嵌合分子。
在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之嵌合化合物組合投與，如上文詳細描述。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之嵌合化合物及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑組合投與。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (1)之結構表示之嵌合化合物及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑組合投與。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (2)之結構表示之嵌合化合物及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑組合投與。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (3)之結構表示之嵌合化合物及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑組合投與。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (4)之結構表示之嵌合化合物及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑組合投與。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (5)之結構表示之嵌合化合物及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑組合投與。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (6)之結構表示之嵌合化合物及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑組合投與。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由下 式 (7)之結構表示之嵌合化合物及由 式 (A) 至 (K)之結構表示的目標結合劑組合投與。
在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由以下 嵌合分子 (I) 至 (XX)中任一者之結構表示的嵌合化合物組合投與。在一些實施例中，至少一種額外治療劑與由表2及表3之以下 嵌合分子 1 至 177中任一者之結構表示之嵌合化合物組合投與。
在一些實施例中，至少一種額外治療劑包含如本文所揭示之額外嵌合分子。在一些實施例中，至少一種額外治療劑係選自依伐卡托、魯瑪卡托、特薩卡托、埃克斯卡托、ABBV-2222、帕森納卡托、勒瑟利卡托、ABBV-191、ABBV-3067、ELX-02、PTI-428、PTI-801、PTI-808、VX-121、VX-561或MRT5005或其任何組合。在一些實施例中，至少一種額外治療劑係選自維利帕尼(ABT-888)、盧卡帕尼(Rubraca；AG-014699)、奧拉帕尼(Lynparza；AZD-2281)、尼拉帕尼(Zejula；MK-4827)或他拉唑帕尼(BMN-673)。
在一些實施例中，該至少一種額外治療劑包含組合物，該組合物包含至少一種額外治療劑或其醫藥用鹽。在一些實施例中，額外藥劑與本文所揭示之嵌合分子或其醫藥用鹽之投藥並行投與。在一些實施例中，額外藥劑係在投與本文所揭示之嵌合分子或其醫藥用鹽之前投與。在一些實施例中，額外藥劑係在投與本文所揭示之嵌合分子或其醫藥用鹽之後投與。在一些實施例中，額外藥劑係獨立於本文所揭示之嵌合分子或其醫藥用鹽之投藥進行投與。
在一些實施例中，在投與後治療有需要之個體之疾病的本文所揭示之嵌合分子或其組合物的量視為有效量。在一些實施例中，在投與後治療疾病的嵌合分子或其組合物的量視為有效量，該疾病選自癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，在投與後治療CF之嵌合分子或其組合物的量視為有效量。
在一些實施例中，在投藥後治療有需要個體之疾病的嵌合分子之量視為有效量，該嵌合分子包含包括由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之USP7結合劑的第一結合域；包含包括由 式 (1) 至 式 (7)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (1)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (2)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (3)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (4)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (5)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (6)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (7)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域； 嵌合分子 (I) 至 (XX)中之任一者；或表2及表3之 嵌合分子 1 至 177中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，疾病係選自癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，在投藥之後治療有需要個體之CF的嵌合分子之量視為有效量，該嵌合分子包含包括由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之USP7結合劑的第一結合域；包含包括由 式 (1) 至式 (7)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (J)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (1)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (J)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (2)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (J)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (3)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (J)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (4)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (J)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (5)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (J)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (6)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (J)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (7)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (J)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；或 嵌合分子 (I) 至 (XVIII)中之任一者；或表2及表3之 嵌合分子 1 至 163中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，在投藥之後治療「有需要個體」之癌症的嵌合分子之量視為有效量，該嵌合分子包含包括由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之USP7結合劑的第一結合域；包含包括由 式 (1) 至式 (7)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (1)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (2)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (3)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (4)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (5)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (6)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (7)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；或 嵌合分子 (XIX) 至 (XX)中之任一者；或 表 3之 嵌合分子 164 至 177中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽。
熟悉此項技術者將認識到，「有效量」(或「治療有效量」)可涵蓋在治療時足以影響益處或所希望臨床結果的量，以治療患有包含以下之疾病的個體：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，「有效量」(或「治療有效量」)可涵蓋在治療有需要之個體之CF時足以影響益處或所希望臨床結果的量。
在一些實施例中，可以治療有效量(劑量)投與嵌合分子，該嵌合分子包含包括由下 式 (1) 至式 (7)中任一者之結構表示之USP7結合劑的第一結合域；包含包括由 式 (1) 至式 (7)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (1)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (2)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (3)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (4)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (5)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (6)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；包含包括由 式 (7)之結構表示之USP7結合劑的第一結合域及包含由 式 (A) 至 (K)之結構表示之目標結合劑的第二結合域；或 嵌合分子 (I) 至 (XX)中之任一者；或表2及表3之 嵌合分子 1 至 177中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽，或其醫藥組合物。
治療有效量之確定完全在熟習此項技術者之能力範圍內。對於本文所揭示之方法中使用的任何製劑，治療有效量或劑量可最初由活體外分析估算。舉例而言，劑量可在動物模型中進行調配且此資訊可用以更準確地確定適用於人類之劑量。
如本文所描述之嵌合分子或其組合物之毒性及治療功效可藉由活體外、細胞培養物或實驗動物中之標準醫藥程序來確定。由此等活體外及細胞培養物分析及動物研究獲得之資料可用於調配適用於人類之劑量範圍。劑量可視所用劑型及所用投藥途徑而變化。確切調配物、投藥途徑及劑量可由個別醫師鑒於患者之病狀選擇。[參見例如，Fingl等人, (1975) 「The Pharmacological Basis of Therapeutics」, 第1章, 第1頁]。
待投與之組合物的量當然將視所治療之個體、病痛之嚴重程度、投藥方式、處方醫生之判斷等而定。
有效量可以一或多次劑量投與個體。就治療而言，有效量為足以治療個體之疾病的量，其中該疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，有效量為足以增強或改善細胞中與疾病相關之蛋白質之功能性的量。在一些實施例中，疾病為CF。在一些實施例中，有效量為足以增強或改善細胞中CFTR之功能性的量。有效量一般由醫師基於病例確定且熟習此項技術者之技能範圍內。當確定達到有效量之適當劑量時，通常考慮若干因素。此等因素包括個體之年齡、性別及重量、所治療之病狀、病狀之嚴重程度及待投與之嵌合分子或其組合物之形式及有效濃度。
本文所揭示之嵌合分子可藉由多種不同途徑投與。在一些實施例中，嵌合分子或其組合物係經口、靜脈內、腹膜內或皮下投與。
對於口服製劑，嵌合分子或其組合物可單獨或與適當添加劑組合使用以製成錠劑、散劑、粒劑或膠囊，例如利用習知添加劑，諸如乳糖、甘露醇、玉米澱粉或馬鈴薯澱粉；利用結合劑，諸如結晶纖維素、纖維素衍生物、***膠、玉米澱粉或明膠；利用崩解劑，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉或羧甲基纖維素鈉；利用潤滑劑，諸如滑石或硬脂酸鎂；且視需要利用稀釋劑、緩衝劑、濕潤劑、保存劑及調味劑。
嵌合分子或其組合物可藉由將其溶解、懸浮或乳化於水性或非水性溶劑中而調配成注射用製劑，該溶劑諸如蔬菜或其他類似油、合成脂族酸甘油酯、高碳數脂族酸或丙二醇之酯；且視需要利用習知添加劑，諸如增溶劑、等張劑、懸浮劑、乳化劑、穩定劑及保存劑。
嵌合分子或其組合物可以氣溶膠調配物形式用於經由吸入投與。本文所揭示之嵌合分子或如本文中詳細揭示之其醫藥學上可接受之鹽，或本文所揭示之其醫藥組合物可調配成加壓可接受之推進劑，諸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮及類似者。
此外，如本文中詳細揭示之嵌合分子或其醫藥學上可接受之鹽，或其醫藥組合物可藉由與多種基質(諸如乳化基質或水可溶性基質)混合而製成栓劑。 如本文中詳細揭示之嵌合分子或其醫藥學上可接受之鹽，或其醫藥組合物可經由栓劑經直腸投與。栓劑可包括媒劑，諸如可可脂、碳蠟及聚乙二醇，其在體溫下熔融但在室溫下固化。
可提供用於經口或直腸投與之單位劑型，諸如糖漿、酏劑及懸浮液，其中各劑量單位，例如一茶匙量(teaspoonful)、一湯匙量(tablespoonful)、錠劑或栓劑含有預定量的含有一或多種活性劑之組合物。類似地，用於注射或靜脈內投與之單位劑型可於組合物中包含嵌合分子或其組合物，所述組合物為在無菌水、無菌生理鹽水或另一醫藥學上可接受之載劑中的溶液。
如本文中所使用之術語「單位劑型」係指適用作人類及動物個體之單位劑量的物理離散單位，各單位含有預定量之活性劑以及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑或媒劑，該預定量經計算為足以產生所希望功效的量。活性劑之規格視所用特定化合物、欲達成之功效及與宿主中之各化合物相關的藥力學而定。
其他投藥模式亦將適用於治療有需要之個體的疾病。在一些實施例中，疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，所治療之疾病包含囊腫纖維化。在一些實施例中，其他投藥模式可用於治療CF。舉例而言，如本文中詳細揭示之嵌合分子或其醫藥學上可接受之鹽，或其醫藥組合物可調配成栓劑，及在一些情況下調配成氣溶膠及鼻內組合物。對於栓劑，媒劑組合物將包括傳統的結合劑及載劑，諸如聚烷二醇或三酸甘油酯。此栓劑可由含有約0.5%至約10% (w/w)或約1%至約2%範圍內之活性成分的混合物形成。
鼻內調配物將通常包括不會對鼻黏膜造成刺激亦不明顯地干擾纖毛功能的媒劑。諸如水、鹽水溶液之稀釋劑或其他已知物質可與本發明嵌合分子、其組合物及其調配物一起使用。經鼻調配物亦可含有防腐劑，諸如(但不限於)氯丁醇及氯化苯甲烴銨。可存在界面活性劑來增強由鼻黏膜對嵌合分子或其組合物之吸收。
如本文所揭示之嵌合分子或如本文中詳細揭示之其醫藥學上可接受之鹽，或其醫藥組合物可以可注射劑形式投與。典型地，可注射組合物經製備為液體溶液或懸浮液；亦可製備適合於在注射前溶解或懸浮於液體媒劑中之固體形式。製劑亦可乳化，或如本文中詳細揭示之嵌合分子或其醫藥學上可接受之鹽，或其醫藥組合物可囊封於脂質體媒劑中。
適合之賦形劑媒劑為例如水、鹽水、右旋糖、甘油、乙醇或類似者，及其組合。另外視需要，媒劑可含有少量輔助物質，諸如濕潤劑或乳化劑或pH緩衝劑。製備此類劑型之實際方法為已知的，或對於熟習此項技術者將為顯而易知的。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 第17版 1985；Remington: The Science and Practice of Pharmacy, A.R. Gennaro, (2000) Lippincott, Williams & Wilkins。待投與之組合物或調配物將在任何情況下含有足夠在進行治療之個體中達成所希望狀態的藥劑量。
公眾易於使用醫藥學上可接受之賦形劑，諸如媒劑、佐劑、載劑及稀釋劑。此外，公眾易於使用醫藥學上可接受之輔助物質，諸如pH調整劑及緩衝劑、張力調節劑、穩定劑、濕潤劑及其類似物。
熟悉此項技術者將瞭解，除非上下文另外明確地指示，否則單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個參考物。舉例而言，術語「一藥劑」或「至少一藥劑」可包括複數種藥劑，包括其混合物。
在一些實施例中，「治療」包含治療性治療且「預防」包含防治性或預防性措施，其中目的為預防或減輕如上文所描述之針對性病理學病狀或病症。因此，在一些實施例中，治療可包括直接影響包含以下之疾病或與該疾病相關之病症：癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化或肌肉萎縮。在某些實施例中，治療可包括直接影響CF或與CF相關之症狀。在一些實施例中，「預防」尤其涵蓋延遲症狀發作、預防疾病復發、降低復發事件之數目或頻率、增加症狀發作之間的潛伏期，或其組合。
熟悉此項技術者將瞭解，術語「治療」可涵蓋試圖更改待治療之個體之疾病病程的臨床干預，且可進行以預防或在臨床病理學過程期間進行。治療之治療作用包括(但不限於)預防疾病之發生或復發、緩解症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理性結果、預防癌轉移、降低疾病進展速率、改善或緩和疾病狀態，及緩解或改善預後。藉由預防疾病之進展，治療可預防患病或經診斷個體或疑似患有疾病之個體(例如具有與疾病相關之突變蛋白(例如但不限於突變CFTR)但尚未顯示任何症狀的個體)的疾病惡化。在一些實施例中，用於治療之投藥可預防處於疾病風險下或疑似患有該疾病之個體(例如但不限於具有與疾病相關之突變蛋白(例如但不限於突變CFTR)但未顯示疾病症狀的個體)的疾病或疾病症狀之發作。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法延遲疾病之至少一種症狀發作，該疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法延遲CF之至少一種症狀的發作。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法逆轉現有疾病之病程，例如包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化及肌肉萎縮的疾病。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法逆轉現有疾病之病程。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法逆轉現有CF之病程。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法治療CF且逆轉現有CF之病程。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法逆轉現有之病程。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法治療癌症且逆轉現有癌症之病程。在一些實施例中，本文所揭示之治療方法預防或減輕癌症之癌轉移。
熟悉此項技術者將瞭解，術語「個體」可涵蓋脊椎動物，在一些實施例中係指哺乳動物，且在一些實施例中係指人類。在一些實施例中，個體為年齡在新生兒與21歲之間的人類兒童。在一些實施例中，個體為人類成年人。
熟悉此項技術者將瞭解，術語「有效量」可涵蓋足以具有治療效果之量。在一些實施例中，「有效量」為足以治療有需要之個體的疾病或其症狀、減輕或抑制疾病之進展、改善或減緩疾病、減少或抑制疾病之擴散或其任何組合的量。
在本申請案通篇，本文所揭示之各種實施例可以範圍型式呈現。應理解，範圍格式中之描述僅為了方便及簡潔起見且不應視為對本發明之範疇的不靈活限制。因此，範圍之描述應視為已特定揭示所有可能之子範圍以及彼範圍內之個別數值。例如，對諸如1至6之範圍的描述應視為已特定揭示子範圍，諸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及彼範圍內之個別數值，例如1、2、3、4、5及6。不管範圍之廣度如何，此均適用。
每當在本文中指示數值範圍時，該數值範圍意欲包括所指示範圍內之任何引用數字(分數或整數)。片語「在第一指示數字與第二指示數字之間的範圍變化/範圍」及「第一指示數字至第二指示數字之範圍變化/範圍」在本文中互換使用且意謂包括第一及第二指示數字以及其間的所有分數及整數數字。
熟習此項技術者應理解，術語「結合域」，如同「第一結合域」及「第二結合域」通常係指特異性靶向各別分子或由各別分子特異性識別的分子部分。第一結合域可特異性靶向USP7 (亦即，自蛋白質及其他分子裂解泛素之蛋白酶，亦即將最終自所關注蛋白質移除一或多個泛素分子的酶)，或由USP7特異性識別。第二結合域可特異性靶向泛素化蛋白質，亦即，將最終自其中移除一或多個泛素分子的所關注蛋白質，或由泛素化蛋白質特異性識別。
熟習此項技術者應理解，術語「連接子」或「連接域」通常係指鍵聯、連接、締合或以其他方式與複數種其他分子相互作用的分子部分。在一個實施例中，本文所提供之嵌合分子之連接子域將本文所提供之嵌合分子的第一結合域連接或鍵聯至第二結合域。
術語「抗體(antibody/antibodies)」在本文中以廣泛意義使用且包括多株抗體及單株抗體兩者。除完整或「完全」免疫球蛋白分子之外，術語「抗體」中亦包括彼等免疫球蛋白分子之片段(例如，CDR、Fv、Fab及Fc片段)或聚合物，及免疫球蛋白分子之人類化型式。抗體亦可使用熟知的方法產生。在一個實施例中，本文所提供之嵌合分子之第二結合域可為結合泛素化蛋白質或其泛素化蛋白質結合片段的抗體。
如本文中所使用之術語「抗體」進一步包括Fab，該片段含有抗體分子之單價抗原結合片段，可藉由用酶木瓜蛋白酶消化全抗體以得到完整輕鏈及一條重鏈之一部分來產生；Fab'，可藉由用胃蛋白酶處理全抗體，接著還原以得到完整輕鏈及重鏈之一部分而獲得的抗體分子之片段，每個抗體分子獲得兩個Fab'片段；(Fab')2，可藉由用酶胃蛋白酶處理全抗體而無後續還原而獲得的抗體片段，F(ab')2為兩個Fab'片段藉由兩個二硫鍵結合在一起的二聚物。Fv，含有輕鏈可變區及重鏈可變區且表現為兩條鏈之基因工程改造片段；及單鏈抗體(「SCA」)，含有輕鏈可變區及重鏈可變區之基因工程改造分子，其中可變區藉由適合多肽連接子連接成基因融合單鏈分子。
在一個實施例中，Fv片段包含VH及VL鏈之締合。此締合可為非共價的，如Inbar等人, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 69:2659-62, 1972中所描述。替代地，可變鏈可藉由分子間雙硫鍵連接或藉由諸如戊二醛之化學物質交聯。替代地，Fv片段包含藉由肽連接子連接的VH及VL鏈。
如本文中所使用之術語「抗體」進一步包括編碼一或多個互補決定區(CDR)之肽。在一個實施例中，CDR肽(「最小識別單位」)可藉由構築編碼所關注之抗體的CDR的基因而獲得。
如本文所使用，術語「肽」包括天然肽(降解產物、以合成方式合成之肽或重組肽)及肽模擬物(通常為以合成方式合成之肽)，諸如類肽及半類肽(其為肽類似物)，其可具有例如使得肽在體內時更穩定或更能夠穿透至細菌細胞中的修飾。此類修飾包括但不限於N端修飾、C端修飾、肽鍵修飾，包括但不限於CH 2-NH、CH 2-S、CH 2-S=O、O=C-NH、CH 2-O、CH 2-CH 2、S=C-NH、CH=CH、-C(O)-O、-CO-(O)-、-CH(OH)-CH 2-或CF=CH、反轉醯胺鍵、或CF=CH、主鏈修飾及殘基修飾。
如本文所使用，術語「胺基酸(amino acid/amino acids)」應理解包括20種天然存在之胺基酸；通常經活體內轉譯後修飾之彼等胺基酸，包括例如羥基脯胺酸、磷酸絲胺酸及磷酸蘇胺酸；及其他非尋常胺基酸，包括但不限於2-胺基己二酸、羥基離胺酸、異鎖鏈素、正纈胺酸、正白胺酸及鳥胺酸。此外，術語「胺基酸」包括D-胺基酸及L-胺基酸兩者。
熟習此項技術者應理解，術語「配位體」通常係指與另一生物分子形成複合物的物質，諸如小分子。在一個實施例中，本文所提供之嵌合分子之第二結合域可包含結合泛素化蛋白質在配位體，且本文所提供之嵌合分子之第一結合域可包含結合USP7之配位體。
熟習此項技術者應理解，術語「泛素化蛋白質」通常係指最終將自其中移除一或多個泛素分子的所關注蛋白質。如熟習此項技術者將理解，「泛素化蛋白質」可攜載單個泛素分子、多個泛素分子、單泛素鏈、多個泛素鏈、線性泛素鏈、分支泛素鏈或其任何組合。在一個實施例中，本文所提供之嵌合分子之第二結合域可結合於泛素化蛋白質，亦即共價連接至至少一個泛素分子之蛋白質。
應理解，如本文中所使用之術語「調節」通常係指屬性之任何變化。舉例而言，「調節泛素化蛋白質之活性」可意謂增加或降低泛素化蛋白質之活性，「調節泛素化蛋白質之細胞位置」意謂改變泛素化蛋白質於細胞內之位置，且「調節泛素化蛋白質與另一蛋白質之相互作用」可意謂增加或降低泛素化蛋白質與不同蛋白質之間的蛋白質-蛋白質相互作用。
熟習此項技術者應理解，詞組「預防、減少或改善蛋白質降解」係指完全停止蛋白質降解、減少每時間單位降解之蛋白質數目，或降低蛋白質降解之速率。 實例 實例1：一般材料及方法
縮寫
aq. - 水性
Bn - 苯甲基
Boc - 三級丁氧基羰基
CDI - 1,1´-羰基二咪唑
DIEA - N,N-二異丙基乙基胺
DMAP - 4-(二甲胺基)吡啶
DMF - N,N-二甲基甲醯胺
EDCI - N-(3-二甲基胺基丙基)-N′-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽
ESI+ -電噴霧電離質譜陽離子模式
HATU - 3-氧化六氟磷酸1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-***并[4,5-b]吡啶鎓
HPLC - 高效液相層析
HOBt - 1-羥基苯并***
MTBE - 甲基三級丁基醚
NMR - 核磁共掁
Pd 2(dba) 3- 參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)
Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2- [1,1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷之複合物
prep - 製備型
R f- 滯留因子
SiO 2- 用於指示用於層析之矽膠
TBS - 三級丁基二甲基矽基
TFA - 三氟乙酸
THF - 四氫呋喃
TMAD - N,N,N′,N′-四甲基偶氮二甲醯胺
Ts - 甲苯磺醯基
Xantphos - 4,5-雙(二苯膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃
w/w - 重量/重量
層析
在Shimadzu LC-20AP儀器上使用針對各化合物列舉之管柱進行製備型高效液相層析(prep-HPLC)。在Biotage Isolera Prime上使用Welch Ultimate XB-C18 20-40 μm管柱進行逆相純化。急驟管柱層析使用矽膠(粒度0.15-0.30 mm)。在Waters Prep SFC 150 Mgm系統上進行超臨界流體層析(SFC)。
NMR 質譜分析
在室溫下在Bruker AVANCE NEO儀器400 MHz ( 1H)及376 MHz ( 19F)上記錄表徵化合物之NMR光譜。在CDCl 3(δ H=7.26)、甲醇-d 4(δ H=3.31)及DMSO-d 6(δ H=2.50)中使用殘餘溶劑峰以ppm報導化學位移(δ)。偶合常數(J)以赫茲(Hz)給出。資料報導如下：化學位移，多重性(s：單峰，d：雙重峰，t：三重峰，q：四重峰，br：寬峰，m：多重峰)、偶合常數及積分。 1H光譜中可缺少可交換質子。
試劑及條件
除非給定合成，否則試劑及起始物質係獲自商業來源。石油醚係指石油醚60-90。
化合物名稱
IUPAC名稱用於新穎化合物且在來自PerkinElmer之ChemDraw Ultra 12.0.2.1076或Scilligence Electronic Lab Notebook Version 5.1.2.38660中產生。其他化合物，尤其商業試劑使用由ChemDraw Ul.Structures產生之名稱或通常在線上資料庫及目錄中發現之名稱。 實例 2 ： (3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯之製備
Figure 02_image331
實例 3 ： (3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 ) -4- 乙基 - 5-(4-(3-( 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯之製備
Figure 02_image333
實例 4 ： (5-(4-(( 胺基 - 氧雜烷基癸基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯之製備表示如下
Figure 02_image335
實例5：4-甲基苯磺酸(4-(3-(4-(6-((三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-側氧基-氧雜烷基酯之製備表示如下
Figure 02_image337
實例 6 ： (5-(4-(3-(4-(1- 胺基 - 氧雜烷基癸 - 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯之製備表示如下
Figure 02_image339
實例7：1-苯甲基-N-(5-(苯甲氧基)-2-(三級丁基)-4-羥苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺 碳酸2-溴-4-(三級丁基)苯酯甲酯之合成
Figure 02_image341
向20℃下的2-溴-4-三級丁基-苯酚(70 g，305 mmol)及DMAP (1.87 g，15.3 mmol)於二氯甲烷(350 mL)中之冷卻溶液中逐滴添加0至5℃下的TEA (85.1 mL，611 mmol)，接著逐滴添加0至5℃下的氯甲酸甲酯(31.3 mL，404 mmol)。使反應物升溫且在20℃下攪拌1 h。將混合物緩慢傾入水(600 mL)中，且保留有機層，同時用二氯甲烷(3 × 350 mL)萃取水層。合併之有機層用1 M鹽酸(2 ×200 mL)洗滌且將有機層用飽和鹽水(3 × 350 mL)洗滌。有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈淺黃色油狀之標題化合物。
產量70 g (78%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 7.60 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.34 (dd, J= 2.0 Hz; J= 8.4 Hz 1H), 7.15 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 1.32 (s, 9H). m/z: [ESI+] 289 (M+2H) +, (C 12H 15BrO 3)。
碳酸 2- 溴 -4-( 三級丁基 )-5- 硝基苯酯甲酯之合成
Figure 02_image343
在20至25℃下向濃硫酸(185 mL)中逐份添加碳酸2-溴-4-(三級丁基)苯酯甲酯(80 g，279 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且在0至5℃下逐份添加硝酸鉀(42.9 g，424 mmol)。將反應物在25℃下攪拌2 h，緩慢傾入冰水(300 mL)中，且用二氯甲烷(2×200 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯50:1至40:1，Rf 0.45，石油醚/乙酸乙酯8:1)純化殘餘物，得到呈淺黃色油狀之標題化合物。
產量70 g (74%). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 1.41 (s, 9H). m/z: [ESI+] 332 (M+H) +, (C 12H 14BrNO 5)。
2- 溴 -4-( 三級丁基 )-5- 硝基苯酚之合成
Figure 02_image345
在0至5℃下向碳酸2-溴-4-(三級丁基)-5-硝苯酯甲酯(70 g，207 mmol)於二氯甲烷(400 mL)中之冷卻溶液中添加5.4 M甲醇鈉/甲醇(65.2 mL)。將混合物在20℃下攪拌2 h，在0℃下緩慢傾入1 M鹽酸(440 mL)中，且用二氯甲烷(2 × 400 mL)萃取。有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯80:1至60:1，Rf 0.3，石油醚/乙酸乙酯5:1)純化殘餘物，得到呈淺黃色油狀之標題化合物。
產量55 g (97%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 7.62 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.74 (s, 1H), 1.37 (s, 9H)。
1-( 苯甲氧基 )-2- 溴 -4-( 三級丁基 )-5- 硝基苯之合成
Figure 02_image347
在20℃下向2-溴-4-(三級丁基)-5-硝基苯酚(55 g，200 mmol)於DMF (500 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(55.4 g，401 mmol)及苯甲基溴(26.2 mL，220 mmol)。將反應物在20℃下攪拌1.5 h，傾入水(1.5 L)中且用乙酸乙酯(2 × 500 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3×1 L)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯80:1至50:1，TLC：石油醚/乙酸乙酯5:1，R f0.55)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量63 g (86%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 7.80 (s, 1H) 7.51 (s, 1H), 7.47-7.33 (m, 5H), 5.24 (s, 2H), 1.30 (s, 9H)。
5-( 苯甲氧基 )-4- 溴 -2-( 三級丁基 ) 苯胺之合成
Figure 02_image349
在50至70℃下向1-(苯甲氧基)-2-溴-4-(三級丁基)-5-硝基苯(63 g，173 mmol)及氯化銨(74.0 g，1.38 mol)於THF (200 mL)、水(70 mL)及乙醇(200 mL)中之溶液中逐份添加鐵粉(29.0 g，519 mmol)。將混合物在80℃下攪拌2 h，冷卻，且經由Celite ®過濾，用乙酸乙酯(3 × 30 mL)洗滌濾餅。將濾液傾入水(500 mL)中且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合併之有機層在真空中濃縮，得到呈綠色固體狀之標題化合物。
產量48 g (82%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 7.46-7.38 (m, 4H), 7.35-7.35 (dd, J= 5.2 Hz; J= 7.2 Hz 1H), 7.09 (s, 1H), 6.53 (s, 5H), 5.04 (s, 2H), 4.98 (s, 2H), 1.28 (s, 9H). m/z: [ESI+] 334 (M+H) +, (C 17H 20BrNO)。
N-(5-( 苯甲氧基 )-4- 溴 -2-( 三級丁基 ) 苯基 ) -4- 側氧基 -1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺之合成
Figure 02_image351
向4-側氧基-1H-喹啉-3-甲酸(25.9 g，137 mmol)及氯化銨(74 g，1.38 mol)於DMF (440 mL)中之溶液中添加HATU (64.5 g，170 mmol)及DIEA (36.4 mL，209 mmol)。將混合物在25℃下攪拌30 min，添加5-(苯甲氧基)-4-溴-2-(三級丁基)苯胺(44 g，131 mmol)且在70℃下持續攪拌4 h。將混合物冷卻至25℃，傾入水(1 L)中且過濾，用水(3 × 10 mL)洗滌濾餅。將濾液在真空中濃縮且藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯4:1至1:1.5，TLC：乙酸乙酯 R f0.6)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量63.4 g (95%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.9 (s, 1H), 12.1 (S, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.33 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.84-7.75 (m, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.55-7.49 (m, 4H), 7.43-7.40 (m, 2H), 7.36-7.32 (m, 1H), 5.13 (s, 2H), 1.42 (s, 9H). m/z: [ESI+] 507 (M+2H) +, (C 27H 25BrN 2O 3)。
1- 苯甲基 -N-(5-( 苯甲氧基 )-4- 溴 -2-( 三級丁基 ) 苯基 )-4- 側氧基 -1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺之合成
Figure 02_image353
向N-(5-(苯甲氧基)-4-溴-2-(三級丁基)苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(43 g，84 mmol)於DMF (430 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(23.2 g，168 mmol)及苯甲基溴(14.4 g，84.0 mmol)。將混合物在25℃下攪拌4 h，傾入水(1.5 L)中且過濾。濾餅用水(3 × 10 mL)洗滌，在真空中濃縮濾液，且用乙酸乙酯(150 mL)濕磨殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量34 g (68%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.00 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.43 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.83-7.77 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.57-7.49 (m, 4H), 7.43-7.27 (m, 8H), 5.85 (s, 2H), 5.14 (s, 2H), 1.43 (s, 9H). m/z: [ESI+] 595 (M+H) +, (C 34H 31BrN 2O 3)。
1- 苯甲基 -N-(5-( 苯甲氧基 )-2-( 三級丁基 ) -4- 羥苯基 )-4- 側氧基 - 1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺之合成
Figure 02_image355
在氮氣氛圍下向1-苯甲基-N-(5-(苯甲氧基)-4-溴-2-(三級丁基)苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(4 g，6.68 mmol)於二㗁烷(20 mL)及水(26 mL)中之溶液中添加二-三級丁基-[(2-2,4,6-三異丙基苯基)苯基]膦(255 mg，0.6 mmol)及氫氧化鉀(7.49 g，134 mmol)。添加Pd 2(dba) 3(183 mg，0.2 mmol)，且將混合物在145℃下攪拌16 h。再重複反應三次且將四個批次合併用於處理。將混合物冷卻至25℃，傾入水(200 mL)中，用1 M鹽酸(30 mL)調節至pH 5至6，且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析(SiO 2，二氯甲烷/乙酸乙酯8:1，TLC：石油醚/乙酸乙酯2:1 R f0.45)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量7.7 g (53%)。m/z: [ESI+] 533 (M+H) +, (C 34H 32BrN 2O 4)。 實例8：4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物
(4- 苯甲基磺醯基苯基 ) 硼酸之 合成
Figure 02_image357
在20℃下向(4-溴苯基)硼酸(76 g，0.38 mol)於二㗁烷(760 mL)中之溶液中添加Pd 2(dba) 3(17.3 g，18.9 mmol)、Xantphos (21.9 g，37.8 mmol)及DIEA (98.9 mL，0.57 mol)。將混合物脫氣且用氮氣吹掃三次。在20℃下在氮氣下添加苯甲基硫醇(54.5 mL，0.47 mol)。將反應物在100℃下攪拌2 h且冷卻至25℃。將反應混合物傾入水(1.5 L)中且用乙酸乙酯(2 L)稀釋。用1 M鹽酸(250 mL)將pH調節至5至6。將有機層分離且經MgSO 4乾燥。在真空中移除溶劑且藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯1:1，接著二氯甲烷/甲醇20:1)純化。粗產物用二氯甲烷/石油醚1:2 (300 mL)濕磨，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量53.6 g (58%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 8.00 (br s, 2H), 7.69 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.39-7.37 (m, 2H), 7.33-7.21 (m, 5H), 4.26 (s, 2H)。
N-(6- 溴 -2- 吡啶基 )-1-(2,2- 二氟 -1,3- 苯并二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺之合成
Figure 02_image359
在20℃下在氮氣下向1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲酸(80 g，330 mmol)於亞硫醯氯(80 mL，1.1 mol)中之溶液中添加DMF (2.54 mL，33 mmol)。將反應物在20℃下攪拌4 h。將反應混合物在減壓下濃縮，且用二氯甲烷(4 × 800 mL)溶解殘餘物且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷碳醯氯(86.8 g)。在20℃下向6-溴吡啶-2-胺(48 g，277 mmol)於二氯甲烷(480 mL)中之溶液中添加吡啶(67.2 mL，832 mmol)，且將混合物在20℃下在氮氣下攪拌直至獲得溶液。在0℃下將1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷碳醯氯(86.8 g，333 mmol)於二氯甲烷(480 mL)中之溶液逐滴添加至反應混合物中。將反應混合物在20℃下攪拌1.5 h，傾入水(500 mL)中，且用二氯甲烷(500 mL)萃取。有機層用1 M鹽酸(600 mL)及飽和碳酸氫鈉水溶液(500 mL)洗滌，經無水MgSO 4乾燥，且過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯10:1，TLC：石油醚/乙酸乙酯2:1，R f0.8)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量106 g (91%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 9.43 (s, 1H), 7.99 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.71 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.39-7.37 (m, 1H), 7.33-7.30 (m, 2H), 1.52-1.49 (m, 2H), 1.19-1.16 (m, 2H). m/z: [ESI+] 397.8 (M+H) +, (C 16H 11O 3F 2N 2Br)。
N-(6-(4-( 苯甲基硫基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺之合成
Figure 02_image361
在15至20℃下在氮氣下向N-(6-溴-2-吡啶基)-1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(51.7 g，123 mmol)及(4-苯甲基磺醯基苯基)硼酸(36 g，147 mmol)於二㗁烷(520 mL)及水(57 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(34 g，246 mmol)及Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(10 g，12.3 mmol)。將反應物在80℃下攪拌2 h且使其冷卻至25℃。將反應混合物傾入水(1.5 L)中，用乙酸乙酯(1 L)萃取，經無水MgSO 4乾燥，過濾，且在真空中濃縮濾液。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯20:1至0:1，TLC：石油醚:乙酸乙酯5:1，R f0.50)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量54 g (84%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 8.92 (s, 1H), 7.93-7.89 (m, 3H), 7.83 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.44-7.42 (m, 1H), 7.40-7.36 (m, 5H), 7.31-7.28 (m, 2H), 7.24-7.22 (m, 1H), 4.29 (s, 2H), 1.55-1.52 (m, 2H), 1.21-1.18 (m, 2H). m/z: [ESI+] 516.9 (M+H) +,  (C 29H 22F 2N 2O 3S)。
4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯 -1- 磺醯基氯化物之合成
Figure 02_image363
在20℃下向N-(6-(4-(苯甲基硫基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(35 g，67.8 mmol)於乙腈(350 mL)、水(70 mL)及乙酸(70 mL)中之溶液中添加N-氯代二醯亞胺(31.7 g，237 mmol)。將反應物在25℃下攪拌2 h。在減壓下移除揮發物且將水溶液傾入水(1 L)中。添加乙酸乙酯(1 L)且用飽和碳酸氫鈉水溶液(1 L)將混合物調節至pH 7至8。將有機層分離，經無水MgSO 4乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液且藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯10:1至1:2，TLC：石油醚/乙酸乙酯3:1，R f0.50)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量31 g (70%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 9.37 (s, 1H), 8.00-7.93 (m, 4H), 7.72-7.68 (m, 3H), 7.58 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.43-7.35 (m, 2H), 1.57-1.54 (m, 2H), 1.23- 1.20 (m, 2H). m/z: [ESI+] 592.9 (M+H) +, (C 22H 15SO 5F 2N 2) 實例 9 ： 1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 )-N-(5-(3- 羥苯基 ) 吡啶 -2- 基 ) 環丙烷甲醯胺
N-(5- 溴吡啶 -2- 基 )-1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺之合成
Figure 02_image365
在20℃下向1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲酸(42 g，173 mmol)於DMF (300 mL)中之溶液中添加HATU (98.9 g，260 mmol)及DIEA (60.4 mL，347 mmol)。將反應物在20℃下攪拌10 min，添加5-溴吡啶-2-胺(30 g，173 mmol)，且將反應物在80℃下攪拌16 h。使其冷卻至25℃，傾入水(1.2 L)中且用乙酸乙酯(2 × 700 mL)萃取。將有機層合併，用鹽水(2 × 1.5 L)洗滌，經無水MgSO 4脫水，且過濾。在50℃下在減壓下濃縮濾液。使用管柱層析法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯70:1至25:1，TLC：石油醚/乙酸乙酯5:1，R f0.50)純化殘餘物，得到呈黃色膠狀之標題化合物。
產量38.3 g (56%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.20 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.13 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.76 (dd, J= 2.4 Hz, 9.2 Hz, 1H), 7.68 (br s, 1H), 7.24 (dd, J= 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.20 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.11 (d, J= 8 .4 Hz, 1H), 1.76-1.74 (m, 2H), 1.21-1.18 (m, 2H). m/z: [ESI+] 397.8 (M+H) +, (C 16H 11O 3F 2N 2Br)。
1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 )-N-(5-(3- 羥苯基 ) 吡啶 -2- 基 ) 環丙烷甲醯胺之合成
Figure 02_image367
在氮氣下向N-(5-溴吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(38.3 g，94.6 mmol)於二㗁烷(345 mL)及水(39 mL)中之溶液中添加(3-羥苯基)硼酸(14.4 g，104 mmol)、Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(7.73 g，9.46 mmol)及碳酸鉀(26.2 g，189 mmol)。將反應物在80℃下攪拌1 h，冷卻至25℃，傾入水(1 L)中且用乙酸乙酯(2×1.5 L)萃取。有機層經合併，經MgSO 4乾燥且過濾。在50℃下在減壓下濃縮濾液。使用管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯25:1至0:1，二氯甲烷/乙酸乙酯1:1，TLC：石油醚/乙酸乙酯2:1，R f0.40)純化殘餘物。用乙酸乙酯(40 mL)濕磨產物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量28 g (72%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 9.57 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.48 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.08-8.06 (m, 1H), 8.03-8.00 (m, 1H), 7.59 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.44-7.42 (m, 1H), 7.38-7.35 (m, 1H), 7.25 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.01 (t, J= 2.0 Hz, 1H), 6.78 (dd, J= 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 1.55-1.53 (m, 2H), 1.22-1.19 (m, 2H). m/z: [ESI+] 411.1 (M+H) +, (C 22H 16O 4F 2N 2)。 實例 10 ： (S)-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-6-(3- 羥基 -1H- 吡唑 -1- 基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺
2,4- 二甲基 -4- 硝基 - 戊酸甲酯之合成
Figure 02_image369
在20℃下在氮氣下向2-硝基丙烷(240 g，2.69 mol)於THF (720 mL)中之溶液中添加DBU (205 g，1.35 mol)。將混合物加熱至50℃，逐滴添加2-甲基丙-2-烯酸甲酯(297 g，2.96 mol)且持續攪拌24 h。使反應混合物冷卻至25℃且將其溶解於MTBE (1.50 L)及水(500 mL)中。用1 M鹽酸(2 L)將其調節至pH 2且用MTBE (2 × 1 L)萃取。有機萃取物經無水MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯0:1至10:1，石油醚/乙酸乙酯5:1，R f0.5)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量496 g (96%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 3.67 (s, 3H), 2.50-2.42 (m, 2H), 2.05-2.02 (m, 1H), 1.58 (s, 3H), 1.53 (s, 3H), 1.18 (d, J= 6.8 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 143.0 (M-NO 2) +, (C 8H 15O 4N)。
3,5,5- 三甲基吡咯啶 -2- 酮之 合成
Figure 02_image371
在25℃在氮氣下向Raney-Ni (21 g)於乙醇(200 mL)中之溶液中添加2,4-二甲基-4-硝基戊酸甲酯(75 g，390 mmol)。將懸浮液脫氣且用氫吹掃三次且在60℃下在氫氛圍(36 psi)下攪拌24 h。重複反應，且將兩個批次合併用於處理。合併之反應混合物經由Celite ®過濾且在真空中濃縮濾液。將殘餘物傾入水(500 mL)中且用乙酸乙酯(6 × 500 mL)萃取。經合併之有機萃取物經無水MgSO 4乾燥，過濾，且在減壓下濃縮濾液。殘餘物用正庚烷(100 mL)濕磨，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量72.6 g (73%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 6.53 (s, 1H), 2.63-2.55 (m, 1H), 2.17-2.12 (m, 1H), 1.56-1.51 (m, 1H), 1.29 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.19 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。
2,2,4- 三甲基吡咯啶 鹽酸鹽之合成
Figure 02_image373
在20至30℃下在氮氣下將氫化鋰鋁(17.9 g，472 mmol)添加至THF (300 mL)中。在25至30℃下將3,5,5-三甲基吡咯啶-2-酮(30 g，236 mmol)於THF (300 mL)中之溶液逐滴添加至混合物中。將混合物在60℃下攪拌16 h。將混合物冷卻，且在0至10℃下逐滴添加水(18 mL)。在0至10℃下逐滴添加乙酸乙酯(180 mL)。在10℃下添加無水MgSO 4(300 g)。將混合物在20℃下攪拌30 min且藉由過濾移除固體。在15至30℃下將鹽酸(25 mL，259 mmol，37%w/w)添加至濾液中。將混合物攪拌30 min且在真空中濃縮。將殘餘物與甲苯(2×300 mL)一起共蒸發且用乙酸乙酯(70 mL)濕磨，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量30 g (85%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 9.39 (br s, 1H), 9.25 (br s, 1H), 3.33-3.30 (m, 1H), 2.75-2.72 (m, 1H), 2.47-2.44 (m, 1H), 1.98-1.93 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 1.40-1.34 (m, 1H), 1.30 (s, 3H), 1.04 (t, J= 6.8 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 114.2 (M+H) +, (C 7H 15N·HCl)。
6-(3-( 苯甲氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-2- 氯菸鹼酸之合成
Figure 02_image375
向6-(3-苯甲氧基吡唑-1-基)-2-氯-吡啶-3-甲酸乙酯(90 g，251 mmol)於乙醇(450 mL)、THF (180 mL)及水(180 mL)中之溶液中添加氫氧化鈉(12.1 g，300 mmol)。將反應物在25℃下攪拌16 h，在減壓下移除溶劑且將混合物傾入水(1.5 L)中。用1 M鹽酸(500 mL)將水溶液調節至pH 3至4。藉由過濾收集沈澱物，將其溶解於乙酸乙酯(2 L)中且經MgSO 4乾燥。在減壓下濃縮得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量56 g (61%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 8.43 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.11 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J= 4.0 Hz, 2H), 7.43-7.36 (m, 4H), 6.25-6.23 (m, 1H), 5.32 (s, 2H) 3.84 (s, 3H), 2.36 (s, 3H). m/z: [ESI+] 329.9 (M+H) +, (C 16H 12ClN 3O 3)。
6-(3-( 苯甲氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-2- 氯 -N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 菸鹼醯胺之合成
Figure 02_image377
向6-(3-(苯甲氧基)-1H-吡唑-1-基)-2-氯菸鹼酸(56 g，154 mmol)於THF (600 mL)中之溶液中添加CDI (32.5 g，201 mmol)。將反應物在25℃下攪拌0.5 h，添加1,3-二甲基吡唑-4-磺醯胺(29.7 g，170 mmol)及DBU (34.9 mL，231 mmol)，且繼續攪拌0.5 h。將反應混合物傾入水(1.5 L)中且用檸檬酸(600 mL)調節至pH 3至4。混合物用乙酸乙酯(3×300 mL)萃取，用鹽水(300 mL)洗滌，且經MgSO 4乾燥。在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量70 g (78%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 8.43 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.11 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J= 4.0 Hz, 2H), 7.43-7.36 (m, 4H), 6.25-6.23 (m, 1H), 5.32 (s, 2H) 3.84 (s, 3H), 2.36 (s, 3H). m/z: [ESI+] 486.9 (M+H) +, (C 21H 19ClN 6O 4S)。
(S)-6-(3-( 苯甲氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺之合成
Figure 02_image379
向6-(3-(苯甲氧基)-1H-吡唑-1-基)-2-氯-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)菸鹼醯胺(20.6 g，41.8 mmol)於DMSO (200 mL)及二乙氧基乙烷(50 mL)中之溶液中添加2,2,4-三甲基吡咯啶鹽酸鹽(25 g，0.17 mol)及碳酸鉀(28.9 g，0.21 mol)。將混合物在室溫下攪拌16 h，傾入水(1 L)中，且用1 M鹽酸(500 mL)調節至pH 3至4。藉由過濾收集沈澱物且將其溶解於乙酸乙酯(2 L)中。溶液經Na 2SO 4乾燥。將混合物真空濃縮且藉由SFC (管柱：Daicel CHIRALPAK IG 250 mm ×50 mm 10 µm；移動相：[溶劑A：0.1%氨水，溶劑B：甲醇]；以70% B運行梯度，梯度：70%-70% B，在5.4 min內，重複37次，總共200 min，在100% B下保持10 min)純化，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量20 g (76%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.34 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.21 (d, J= 4.0 Hz, 1H) 7.74 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.49 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.42-7.34 (m, 3H), 6.94 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.16-6.15 (d, J= 4.0Hz, 1H), 5.29 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.60-2.55 (m, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.22-2.14 (m, 1H), 1.89-1.85 (m, 1H), 1.56-1.53 (d, J= 12 Hz, 6H), 1.45-1.38 (m, 1H), 0.82-0.81(d, J= 4 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 564.1 (M+H) +, (C 28H 33N 7O 4S)。
(S)-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-6-(3- 羥基 -1H- 吡唑 -1- 基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺之合成
Figure 02_image381
向(S)-6-(3-(苯甲氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(6 g，10.3 mmol)於甲醇(60 mL)中之溶液中添加鈀/碳(1 g，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量5.6 g (粗物質)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.3 (br s, 1H), 10.5 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.11 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.90 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.60-2.57 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.22-2.20 (m, 1H), 1.89-1.85 (m, 1H), 1.55 (d, J= 11.2 Hz, 6H), 1.42 (t, J= 12.0 Hz, 1H), 0.82 (d, J= 6.0 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 474.0 (M+H) +, (C 21H 27N 7O 4S)。 實例 11 ： 5- 羥基 -8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸甲酯
(5- 羥基 -2- 甲基苯基 ) 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image383
向3-胺基-4-甲基-苯酚(30 g，244 mmol)於THF (600 mL)中之溶液中添加飽和碳酸鈉水溶液(150 mL)及二碳酸二三級丁酯(55.8 g，256 mmol)。將混合物在25℃下攪拌16 h，傾入水(500 mL)中，且用乙酸乙酯(3×300 mL)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯20:1至5:1)純化殘餘物且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量43 g (78%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 7.48 (s, 1H), 6.98 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.51-6.49 (m, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.36 (s, 1H), 2.16 (s, 3H), 1.53 (s, 9H). m/z: [ESI+] 246.0 (M+Na) +, (C 12H 17NO 3)。
(5-( 苯甲氧基 )-2- 甲基苯基 ) 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image385
。
向N-(5-羥基-2-甲基苯基)胺基甲酸三級丁酯(43 g，190 mmol)於DMF (530 mL)中之溶液中添加苯甲基溴(24.8 mL，209 mmol)及碳酸鉀(65.6 g，475 mmol)。將混合物在25℃下攪拌2 h，傾入水(2 L)中，且用乙酸乙酯(3 × 800 mL)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物用石油醚/乙酸乙酯50:1 (100 mL)濕磨，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量59.5 g (89%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 8.44 (s, 1H), 7.44-7.32 (m, 5H), 7.06-7.03 (m, 2H), 6.69 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.03 (s, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.46 (s, 9H). m/z: [ESI+] 336.0 (M+Na) +, (C 19H 23NO 3)。
5-( 苯甲氧基 )-2- 甲基苯胺之合成
Figure 02_image387
。
將N-(5-苯甲氧基-2-甲基-苯基)胺基甲酸三級丁酯(55g，170 mmol)於乙酸乙酯(100 mL)及4 M HCl/乙酸乙酯(500 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。將混合物過濾，用乙酸乙酯(3 × 10 mL)洗滌濾餅，且濃縮濾液。將殘餘物溶解於水/甲醇5:1 (1.5 L)中，用飽和碳酸氫鈉水溶液(80 mL)調節至pH 7至8，且用乙酸乙酯(3 × 500 mL)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物用石油醚/乙酸乙酯20:1 (80 mL)濕磨，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量36.3 g (98%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 7.41-7.30 (m, 5H), 6.78 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.27 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.13-6.11 (m, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 1.96 (s, 3H). m/z: [ESI+] 214.0 (M+H) +, (C 14H 15NO)。
5-( 苯甲氧基 )-8- 甲基 -2-( 3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 甲 酯之 合成
Figure 02_image389
。
向5-(苯甲氧基)-2-甲基苯胺(20 g，93 mmol)於乙醇(100 mL)中之溶液中添加3-甲基苯并呋喃-2-甲醛(14.9 g，93 mmol)及甲基側氧基丙酸酯(33.2 g，326 mmol)。將混合物在120℃下攪拌12 h且冷卻至15℃。藉由過濾收集產物且用乙醇(3×100 mL)洗滌。將固體在真空中乾燥，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量23 g (56%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.01 (s, 1H), 7.67 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.54-7.50 (m, 4H), 7.47-7.43 (m, 2H), 7.40-7.36 (m, 2H), 7.32-7.28 (m, 1H), 6.90 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.42 (d, J= 2.0 Hz, 3H), 2.90 (s, 3H), 2.78 (s, 3H). m/z: [ESI+] 438.2 (M+H) +, (C 28H 23NO 4)。
5- 羥基 - 8- 甲基 -2-( 3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 甲 酯之 合成
Figure 02_image391
。
將5-(苯甲氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(31.2 g，71.3 mmol)於甲醇(312 mL)中之溶液添加至濃硫酸(104 mL，1.95 mol)中。將混合物在80℃下攪拌12 h，傾入水(1 L)中且用乙酸乙酯(3×1 L)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物用二氯甲烷(30 mL)濕磨，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量15.8 g (59%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 10.55 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.76 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.43-7.41 (m, 1H), 7.36-7.34 (m, 1H), 6.87 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 2.66 (s, 3H). m/z: [ESI+] 348.1 (M+H) +, (C 21H 17NO 4)。 實例12：10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸酸
10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-10- 側氧基癸酸 三級丁酯之合成
Figure 02_image393
。
向10-(三級丁氧基)-10-側氧基癸酸(4 g，15.5 mmol)及HATU (6.73 g，17.7 mmol)於DMF (54 mL)中之溶液中添加DIEA (3.85 mL，22.1 mmol)。將反應物在25℃下攪拌15 min，且添加4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤(5.4 g，14.8 mmol)。將混合物在25℃下攪拌1 h，傾入水(50 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 70 mL)萃取。所得有機萃取物用鹽水(200 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，且在真空中移除溶劑，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量8.95 g。m/z: [ESI+] 607.0 (M+H) +, (C 34H 43FN 4O 5)。
10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-10- 側氧基癸酸之合成
Figure 02_image395
。
向10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸酸三級丁酯(8.95 g，14.7 mmol)於二氯甲烷(90 mL)中之溶液中添加TFA (8.74 mL，118 mmol)。將混合物在25℃下攪拌16 h，傾入水(50 mL)中且用飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)調節至pH 6至7。混合物用二氯甲烷(2 × 120 mL)萃取。將萃取物合併，用鹽水(200 mL)洗滌且經MgSO 4乾燥。在真空中移除溶劑，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量9.60 g。m/z: [ESI+] 551.0 (M+H) +, (C 30H 35FN 4O 5)。 實例13：N-(2-氯乙基)-10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺
Figure 02_image397
。
向10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸酸(5.95 g，10.8 mmol)於DMF (60 mL)中之溶液中添加HOBt (1.61 g，11.9 mmol)、EDCI (2.28 g，11.9 mmol)及DIEA (4.14 mL，23.7 mmol)。將反應物在25℃下攪拌15 min且添加2-氯乙胺鹽酸鹽(1.50 g，12.9 mmol)。將混合物在25℃下攪拌2 h，傾入水(180 mL)中，且用乙酸乙酯(180 mL)萃取。經合併之有機萃取物經MgSO 4乾燥，在真空中移除溶劑。藉由prep-HPLC (管柱：內徑57mm × H235mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 μm；120 Å；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以5% B運行梯度，梯度：5%-42% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量9.6 g (40%)。m/z: [ESI+] 612.1 (M+H) +。 實例14：12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基-十二酸
12-[4-[2- 氟 -5-[(4- 側氧基 -3H- 呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ] 苯甲醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-12- 側氧基 - 十二烷酸三級丁酯之合成
Figure 02_image399
。
向12-三級丁氧基-12-側氧基-十二烷酸(3 g，10.5 mmol)於DMF (36 mL)中之溶液中添加DIEA (2.61 mL，14.9 mmol)及HATU (4.55 g，12 mmol)。將混合物在25℃下攪拌30 min，添加4-((4-氟-3-(哌𠯤-1-羰基)苯基)甲基)-2H-呔𠯤-1-酮(3.66 g，9.98 mmol)，且將混合物在25℃下攪拌1 h。混合物用水(60 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 × 80 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(250 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且在真空下移除溶劑，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量6.33 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 635.2 (M+H) +, (C 36H 47FN 4O 5)。
12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3H- 呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-12- 側氧基 - 十二烷酸之合成
Figure 02_image401
。
將12-[4-[2-氟-5-[(4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基]苯甲醯基]哌𠯤-1-基]-12-側氧基-十二烷酸三級丁酯(L9A-12C-1) (6.33 g，9.97 mmol)及TFA (5.91 mL，79.5 mmol)於二氯甲烷(65 mL)中之溶液在25℃下攪拌16 h。將混合物傾入水(80 mL)中且用飽和碳酸氫鈉水溶液(15 mL)調節至pH 6至7。混合物用二氯甲烷(2 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾，且在真空中移除溶劑，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量5.77 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 579.1 (M+H) +, (C 32H 39FN 4O 5)。 實例15：3-(2-(2-(2-(3-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸之合成
Figure 02_image403
。
在20℃下向3-[2-[2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(200 mg，0.68 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中添加EDCI (130 mg，0.68 mmol)，HOBt (101 mg，0.75 mmol)及DIEA (263 mg，2.04 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min，添加4-((4-氟-3-(哌𠯤-1-羰基)苯基)甲基)-2H-呔𠯤-1-酮(249 mg，0.68 mmol)，且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm× 7 μm；移動相：[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨)，溶劑B：乙腈]；以18% B運行梯度，梯度：18%-48% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量312 mg (66%)。m/z: [ESI+] 643.4 (M+H) +, (C 32H 39FN 4O 9)。 實例16：3-(2-(2-(2-(2-(3-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸
Figure 02_image405
。
在20℃下向3-(2-(2-(2-(2-(2-羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(200 mg，0.59 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中添加EDCI (113 mg，0.59 mmol)，HOBt (88 mg，0.65 mmol)及DIEA (229 mg，1.77 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min且添加4-((4-氟-3-(哌𠯤-1-羰基)苯基)甲基)-2H-呔𠯤-1-酮(217 mg，0.59 mmol)，且將混合物在20℃下攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm× 7 μm；移動相：[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨水溶液)，溶劑B：乙腈]；以15% B運行梯度，梯度：15%-45% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈淺黃色油狀之標題化合物。
產量374 mg (92%)。m/z: (ESI+) 687.5 (M+H) +, (C 34H 43FN 4O 10)。 實例17：3-(2-(2-(2-(2-(2-(3-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸
Figure 02_image407
。
在20℃下向3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(200 mg，0.52 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中添加EDCI (100 mg，0.52 mmol)，HOBt (77.7 mg，0.58 mmol)及DIEA (203 mg，1.57 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min，添加4-((4-氟-3-(哌𠯤-1-羰基)苯基)甲基)-2H-呔𠯤-1-酮(192 mg，523 mmol)，且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (中性條件，管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm× 7 μm；移動相：[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨水溶液)，溶劑B：乙腈]；以15% B運行梯度，梯度：15%-45% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈淺黃色油狀之標題化合物。
產量273 mg (71%)。m/z: [ESI+] 731.5 (M+H) +, (C 36H 47FN 4O 11)。 實例18：3-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)丙酸
3-(2-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 丙酸三級丁酯之合成
Figure 02_image409
。
在0℃下向3-(2-胺基乙氧基)丙酸三級丁酯(92 mg，0.49 mmol)及TEA (123 mg，1.22 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(200 mg，0.41 mmol)。使混合物升溫至25℃且攪拌2 h。將反應混合物在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量260 mg (99%)。m/z: [ESI+] 646.2 (M+H) +, (C 31H 33F 2N 3O 8S)。
3-(2-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 丙酸 ) 之 合成
Figure 02_image411
在25℃將3-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)丙酸三級丁酯(260 mg，0.4 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液添加至TFA (3 mL，40.5 mmol)中。將混合物在25℃下攪拌3 h且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量230 mg (97%)。m/z: [ESI+] 590.1 (M+H) +, (C2 7H 25F 2N 3O 8S)。 實例19：N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
3,5- 二溴 -4- 乙基吡啶 -2- 胺 之合成
Figure 02_image413
。
向4-乙基吡啶-2-胺(600 g，4.91 mol)於THF (6 L)中之溶液中分批添加N-溴代丁二醯亞胺(1.75 kg，9.82 mol)。將混合物在25℃下攪拌4 h。接著將所得混合物在真空中濃縮，接著使用管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯50:1至10:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量1130 g (79%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.04 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 2.94 (q, J= 4.8, 2H), 1.17 (t, J= 7.6, 3H). m/z: [ESI+] 280.8 (M+H) +, (C 7H 8N 2Br 2)。
3- 溴 -4- 乙基 - 吡啶 -2- 胺之合成
Figure 02_image415
。
在-65℃至-70℃下向3,5-二溴-4-乙基吡啶-2-胺(450 g，1.67mol)於THF中之溶液中添加2.5 M正丁基鋰/己烷(1.24 L)。將混合物在-65℃至-70℃下攪拌1 h。將所得混合物傾入飽和氯化銨溶液(2 L)中且用乙酸乙酯(2 × 2 L)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮，接著使用管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯10:1至1:1)純化，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量135 g (41%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 7.89 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 6.53 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 2.68 (q, J= 7.6 Hz, 2H), 1.21 (t, J= 7.6, 3H). m/z: [ESI+] 201.8 (M+H) +, (C 7H 9N 2Br)。
3-(4- 苯甲氧基苯基 )-4- 乙基 - 吡啶 -2- 胺之合成
Figure 02_image417
。
在氮氣下向3-溴-4-乙基-吡啶-2-胺(117 g，556 mmol)、(4-苯甲氧基苯基)硼酸(190 g，834 mmol)及碳酸鈉(118 g，1.11 mol)於二㗁烷(1.17 L)及水(117 mL)中之溶液中添加Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(22.7 g，27.8 mmol)。將混合物在80℃下攪拌16 h。將所得混合物傾入鹽水(1 L)中且用乙酸乙酯(3 × 1.5 L)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯10:1至1:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量165 g (94%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 7.98 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.42 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 7.38 -7.34 (m, 1H) 7.17 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.09 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.64 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 2.32 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.04 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 305.0 (M+H) +, (C 20H 20N 2O)。
3-(4- 苯甲氧基苯基 )-5- 溴 -4- 乙基 - 吡啶 -2- 胺之合成
Figure 02_image419
。
在0℃下向3-(4-苯甲氧基苯基)-4-乙基-吡啶-2-胺(165 g，527 mmol)於THF (1.65 L)中之溶液中添加N-溴代丁二醯亞胺(93.8 g，527 mmol)。將混合物在25℃下攪拌1 h且在真空中濃縮。殘餘物用乙酸乙酯(150 mL)濕磨，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量200 g (97%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.13 (s, 1H), 7.48 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.42 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 7.38-7.34 (m, 1H) 7.15 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.09 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.12 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 2.46 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.00 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 383.8 (M+H) +, (C 20H 19N 2Obr)。
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5- 溴 -4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image421
。
向3-(4-苯甲氧基苯基)-5-溴-4-乙基-吡啶-2-胺(200 g，511 mmol)及DMAP (6.25 g，51.1 mmol)於二氯甲烷(2 L)中之溶液中添加二碳酸二三級丁酯(334 g，1.53 mol)及TEA (142 mL，1.02 mol)。將混合物在25℃下攪拌16 h。將混合物真空濃縮，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量304 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 426.9 (M+H) +, (C 30H 35N 2O 5Br)。
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image423
。
在氮氣下向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-溴-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(304 g，521 mmol)及(4-羥苯基)硼酸(108 g，781 mmol)於二㗁烷(3.04 L)及水(304 mL)中之溶液中添加Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(21.2 g，26.1 mmol)及碳酸鎂(110 g，1.04 mol)。將混合物在80℃下攪拌16 h且在真空中濃縮。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯20:1至1:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量150 g (47%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.30 (s, 1H), 7.48 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 7.42 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 7.35 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.21 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.15 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.00 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.91 (br, 1H), 6.84 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.11 (s, 2H), 2.44 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.38 (s, 18H), 0.69 (t, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 640.1 (M+H) +, (C 36H 40N 2O 6)。 實例20：4-甲基苯磺酸2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙酯
Figure 02_image425
。
將N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(2 g，3.3 mmol)、4-甲基苯磺酸2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙酯(2.73 g，6.60 mmol)及碳酸鉀(911 mg，6.60 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物在70℃下攪拌3 h。將混合物傾入水(60 mL)中，用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取，經MgSO 4乾燥且過濾。濃縮濾液，且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Ultimate XB-CN 250 × 50 × 10 μm；移動相：[溶劑A：己烷，溶劑B：乙醇]；以15% B運行梯度，梯度：15%-46% B，在16 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，接著冷凍乾燥，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量1.43 g (51%)。m/z: [ESI+] 839.2 (M+H) +, (C 47H 54O 10N 2S)。 實例21：4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯
Figure 02_image427
。
向4-甲基苯磺酸2-[2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙氧基]乙酯(4.54 g，9.89 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.37 g，9.89 mmol)及N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(3 g，4.95 mmol)。將混合物在70℃下攪拌3 h，冷卻至室溫，傾入水(60 mL)中且用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 20 mL)洗滌且經MgSO 4乾燥。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：內徑57 mm ×H235 mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 µm；120 Å；移動相：[溶劑A：水，溶劑B：乙腈]；以15% B運行梯度，梯度：15%-50% B，在15 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量2.1 g (48%)。m/z: [ESI+] 883.2 (M+H) +, (C 49H 58O 11N 2S)。 實例22：4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯
Figure 02_image429
。
向4-甲基苯磺酸2-[2-[2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酯(4.97 g，9.89)於DMF (30 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.37 g，9.89 mmol)及N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(3 g，4.95 mmol)。將混合物在70℃下攪拌3 h，冷卻至室溫，傾入水(60 mL)中且用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取。合併層用鹽水(3 × 20 mL)洗滌且經MgSO 4乾燥。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：內徑57 mm ×H235 mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 µm；120 Å；移動相：[溶劑A：水，溶劑B：乙腈]；以15% B運行梯度，梯度：15%-45% B，在15 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量2.2 g (46%)。m/z: [ESI+] 927.2 (M+H) +, (C 51H 62O 12N 2S)。 實例23：4-甲基苯磺酸14-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基酯
Figure 02_image431
。
向4-甲基苯磺酸2-[2-[2-[2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酯(5.41 g，9.89 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(3 g，4.95 mmol)及碳酸鉀(1.37 g，9.89 mmol)。將混合物在70℃下攪拌6 h，使其冷卻至25℃，傾入水(100 mL)中且用二氯甲烷(3×100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：內徑57mm × H235mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 μm；120 Å；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以18% B運行梯度，梯度：18%-58% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量2.3 g (47%)。m/z: [ESI+] 971.2 (M+H)+, (C 53H 66N 2O 13S)。 實例24：4-甲基苯磺酸14-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基酯
Figure 02_image433
。
向4-甲基苯磺酸2-[2-[2-[2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酯(3.38 g，6.19 mmol)及碳酸鉀(854 mg，6.19 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中添加N-三級丁氧基羰基-N-[3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-5-(4-羥苯基)-2-吡啶基]胺基甲酸三級丁酯(2 g，3.09 mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌8 h，傾入水(40 mL)中且用乙酸乙酯(3×40 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(4×40 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由prep-HPLC (管柱：內徑57 mm ×H235 mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 µm；120 Å；移動相：[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨)，溶劑B：乙腈]；以20% B運行梯度，梯度：20%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量450 mg (15%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 8.22 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.46 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.33-7.28 (m, 2H), 7.14-7.05 (m, 4H), 7.01-6.96 (m, 1H), 6.90 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.14-4.10 (m, 4H), 3.78-3.75 (m, 2H), 3.60-3.48 (m, 11H), 3.44 (s, 4H), 2.50-2.38 (m, 4H), 1.30 (d, J= 4.4 Hz, 18H), 0.97 (d, J= 5.2 Hz, 9H), 0.66-0.61 (m, 3H), 0.23-0.20 (m, 6H). m/z: [ESI+] 995.2 (M+H) +, (C 52H 74N 2O 13SSi)。 實例25：4-甲基苯磺酸17-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基酯
Figure 02_image435
。
向4-甲基苯磺酸2-[2-[2-[2-[2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酯(5.84 g，9.89 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.37 g，9.89 mmol)及N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(3 g，4.95 mmol)。將混合物在70℃下攪拌6 h。將混合物冷卻至室溫，傾入水(100 mL)中，且用二氯甲烷(2 × 100 mL)萃取。合併層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：內徑57 mm ×H235 mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 µm；120 Å；移動相：[溶劑A：水，溶劑B：乙腈]；以26% B運行梯度，梯度：26%-64% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量1.5 g (29%)。m/z: [ESI+] 1015.3 (M+H) +, (C 55H 70N 2O 14S)。 實例26：4-甲基苯磺酸20-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基酯
Figure 02_image437
。
向4-甲基苯磺酸2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酯(6.28 g，9.89 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.37 g，9.89 mmol)及N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(3 g，4.95 mmol)。將混合物在70℃下攪拌6 h。將混合物冷卻至室溫，傾入水(100 mL)中，且用二氯甲烷(2 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌且經MgSO 4乾燥。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：內徑57 mm ×H235 mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 µm；120 Å；移動相：[溶劑A：水，溶劑B：乙腈]；以26% B運行梯度，梯度：26%-64% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量3 g (54%)。m/z: [ESI+] 1059.2 (M+H) +, (C 57H 74N 2O 15S)。 實例27：N-(5-(4-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-(1,3- 二側氧基異吲哚啉 -2- 基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image439
。
將4-甲基苯磺酸2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙酯(2.45 g，2.91 mmol)及(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)鉀(538 mg，2.91 mmol)於DMF (15 mL)中之溶液在95℃下攪拌2 h。將反應混合物冷卻至40℃且傾入水(100 mL)中且用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。所得有機層用鹽水(100 mL)洗滌且經Na 2SO 4乾燥，且在真空中移除溶劑，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量2.3 g (97%)。m/z: [ESI+] 814.5 (M+H)+, (C 48H 51N 3O 9)。
N-(5-(4-(2-(2- 胺基乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image441
。
在20℃下向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(2.30 g，2.83 mmol)於乙醇(25 mL)中之溶液中添加單水合肼(610 mg，11.9 mmol)。將反應物在50℃下攪拌2 h。冷卻至25℃後，藉由過濾移除沈澱物且用乙酸乙酯(100 mL)洗滌濾餅。將濾液傾入水(100 mL)中且用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌且經Na 2SO 4乾燥，且在真空中移除溶劑，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量2.2g (89%)。m/z: [ESI+] 684.4 (M+H) +, (C 40H 49N 3O 7)。 實例28：N-(5-(4-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-(2-(1,3- 二側氧基異吲哚啉 -2- 基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image443
。
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯(2.12 g，2.38 mmol)於DMF (15 mL)中之溶液中添加(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)鉀(440 mg，2.38 mmol)。將混合物在95℃下攪拌2 h，冷卻至室溫且傾入水(100 mL)中。混合物用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(4 × 200 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且濃縮，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量2 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 858.3 (M+H) +, (C 50H 55N 3O 10)。
N-(5-(4-(2-(2-(2- 胺基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image445
。
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-(2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(2 g，2.33 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液中添加單水合肼(291 µL，5.87 mmol)。將混合物在50℃下攪拌2 h。固體藉由過濾移除且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)洗滌，且濃縮濾液。將殘餘物傾入水(100 mL)中且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥，且在真空中移除溶劑，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量2.9 g (95%)。m/z: [ESI+] 728.5 (M+H) +, (C 42H 53O 8N 3)。 實例29：N-(5-(4-(2-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-(2-(2-(1,3- 二側氧基異吲哚啉 -2- 基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image447
。
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯(2.15 g，2.28 mmol)於DMF (15 mL)中之溶液中添加(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)鉀(422 mg，2.28 mmol)。將混合物在95℃下攪拌2 h，冷卻至室溫，傾入水(100 mL)中且用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(4 × 200 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量2 g (97%)。m/z: [ESI+] 902.6 (M+H) +, (C 52H 59O 11N 3)。
N-(5-(4-(2-(2-(2-(2- 胺基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image449
。
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-(2-(2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(2 g，2.22 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液中添加水合肼(300 mg，5.87 mmol)。將混合物在50℃下攪拌2 h且冷卻至室溫。沈澱物藉由過濾移除且用乙酸乙酯(100 mL)洗滌。將濾液傾入水(100 mL)中且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥且濃縮，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量2.2 g (59%)。m/z: [ESI+] 772.5 (M+H) +, (C 44H 57O 9N 3)。 實例30：N-(5-(4-((14-胺基-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((14-(1,3- 二側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image451
。
向14-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基4-甲基苯磺酸酯(2.3 g，2.36 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中添加(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)鉀(437 mg，2.36 mmol)。將混合物在95℃下攪拌2 h，使其冷卻至25℃，傾入水(100 mL)中且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量2.6 g (81%)。m/z: [ESI+] 946.2 (M+H) +, (C 54H 63N 3O 12)。
N-(5-(4-((14- 胺基 -3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image453
。
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((14-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(2.6 g，1.92 mmol)於乙醇(26 mL)中之溶液中添加單水合肼(840 mg，16.4 mmol)。將混合物在50℃下攪拌2 h，使其冷卻至25℃，傾入水(50 mL)中且用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。經合併之有機層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量1.6 g (79%)。m/z: [ESI+] 816.2 (M+H) +, (C 46H 61N 3O 10)。 實例31：N-(5-(4-((14-胺基-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image455
。
向含鈀/碳(50 mg，10% w/w)之甲醇(1 mL)中添加N-(5-(4-((14-胺基-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯。將混合物在20℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾混合物且在真空中濃縮濾液，得到淺黃色油狀之標題化合物。
產量200 mg (33%)。m/z: [ESI+] 735.4 (M+H) +, (C 39H 55N 3O 10)。 實例32：N-(5-(4-((17-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((17-(1,3- 二側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image457
。
向4-甲基苯磺酸17-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基酯(1.5 g，1.46 mmol)於DMF (15 mL)中之溶液中添加(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)鉀(270 mg，1.46 mmol)。將混合物在95℃下攪拌2 h。將混合物冷卻至室溫且傾入水(100 mL)中。混合物用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取。合併之層用鹽水(4 × 200 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，且在真空中移除溶劑，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量1.6 g (93%)。m/z: [ESI+] 990.2 (M+H) +, (C 56H 67N 3O 13)。
N-(5-(4-((17- 胺基 -3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image459
。
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((17-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.6 g，1.36 mmol)於乙醇(16 mL)中之溶液中添加單水合肼(142 µL，2.86 mmol)。將混合物在50℃下攪拌2 h。過濾混合物且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)洗滌濾餅。在真空中移除溶劑。將殘餘物傾入水(50 mL)中且用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。經合併之有機萃取物經MgSO 4乾燥，且在真空中移除溶劑，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量1.3 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 860.2 (M+H) +, (C 48H 65N 3O 11)。 實例33：N-(5-(4-((17-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image461
。
向N-(5-(4-((17-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(300 mg，0.29 mmol)於甲醇(3 mL)中之溶液中添加鈀/碳(300 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在30℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量249 mg (85%)。m/z: [ESI+] 770.7 (M+H) +, (C 41H 59N 3O 11)。 實例34：N-(5-(4-((20-胺基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((20-(1,3- 二側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image463
。
向4-甲基苯磺酸20-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基酯(2.12 g，1.89 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中添加(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)鉀(350 mg，1.89 mmol)。將混合物在95℃下攪拌2 h，冷卻至室溫且傾入水(100 mL)中。混合物用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(4 × 200 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，在真空中移除溶劑，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量1.85 g (71%)。m/z: [ESI+] 1034.3 (M+H) +, (C 58H 71N 3O 14)。
N-(5-(4-((20- 胺基 -3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image465
。
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((20-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.85 g，1.34 mmol)於乙醇(18 mL)中之溶液中添加單水合肼(133 µL，2.69 mmol)。將混合物在50℃下攪拌2 h。藉由過濾移除沈澱物且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)洗滌。濃縮濾液，將殘餘物傾入水(50 mL)中且用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。經合併之有機萃取物經MgSO 4乾燥。在真空中移除溶劑，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量1.7 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 904.8 (M+H) +, (C 50H 69N 3O 12)。 實例35：N-(5-(4-((20-胺基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image467
。
向N-(5-(4-((20-胺基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(300 mg，0.29 mmol)於甲醇(3 mL)中之溶液中添加鈀/碳(30 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌12 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量254 mg (87%)。m/z: [ESI+] 814.8 (M+H) +, (C 43H 63O 12N 3)。 實例36：4-甲基苯磺酸14-[4-[5-(4-苯甲氧基苯基)-6-[雙(三級丁氧基羰基)胺基]-4-乙基-3-吡啶基]苯氧基]十四烷基酯
Figure 02_image469
。
在25℃下向4-甲基苯磺酸14-(對甲苯磺醯基氧基)十四烷基酯(11 g，19.8 mmol)於乙腈(90 mL)中之溶液中添加N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(6 g，9.89 mmol)及碳酸鉀(5.47 g，39.6 mmol)。將反應物在70℃下攪拌16 h，使其冷卻至20℃且過濾，用乙酸乙酯(2 × 100 mL)洗滌濾餅。在真空中濃縮濾液且藉由prep-HPLC (管柱：內徑57mm×H235mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 μm；120 Å；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以13% B運行梯度，梯度：13%-53% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量6.4 g (65%)。m/z: [ESI+] 963.6 (M+H) +, (C 57H 74N 2O 9S)。 實例37：N-三級丁氧基羰基-N-(4-乙基-5-(4-羥苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯
N-[5- 溴 -4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 )-2- 吡啶基 ]-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image471
。
向N-[5-溴-3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(20 g，32.9 mmol)於乙醇(200 mL)中之溶液中添加氫氧化鉀(3.69 g，65.8 mmol)。將混合物在50℃下攪拌16 h且在真空中濃縮。混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋且過濾。在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量18.9 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 494.9 (M+H) +, (C 23H 29N 2BrO 5)。
N-[5- 溴 -4- 乙基 -3-[4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ]-2- 吡啶基 ]-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image473
。
在0℃下向N-[5-溴-4-乙基-3-(4-羥基苯基)-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(18.9 g，38.3 mmol)及碳酸鉀(10.6 g，76.6 mmol)於DMF (190 mL)中之冷卻混合物中添加氯甲基甲基醚(7.47 mL，98.3 mmol)。將混合物在50℃下攪拌16 h，傾入水(700 mL)中，且用乙酸乙酯(2×300 mL)萃取。有機萃取物經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量18 g (53%)。m/z: [ESI+] 539.6 (M+H) +, (C 25H 33N 2BrO 6)。
N- 三級丁氧基羰基 -N-(4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 )-3-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 )-2- 吡啶基 ) 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image475
。
在氮氣下向N-[5-溴-4-乙基-3-[4-(甲氧基甲氧基)苯基]-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(18 g，33.5 mmol)及(4-羥苯基)硼酸(6.93 g，50.2 mmol)於二㗁烷(180 mL)及水(18 mL)中之溶液中添加碳酸鈉(7.1 g，66.9 mmol)及Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(1.37 g，1.67 mmol)。將混合物在80℃下攪拌16 h，傾入水(200 mL)中，且用乙酸乙酯(3 × 250 mL)萃取。合併之有機萃取物經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯20:1至10:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量10 g (51%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.30 (s, 1H), 7.17-7.15 (m, 4H), 6.85(d, J= 8.4, 2H), 6.77-6.72 (m, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.22 (s, 2H), 3.52 (s, 3H), 2.45-2.43 (m, 2H), 1.39 (s, 18H), 0.70 (t, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 551.0 (M+H) +, (C 31H 38N 2O 7) 實例38：N-(5-(4-(2-胺基乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N-[5-[4-(2- 胺基乙氧基 ) 苯基 ]-4- 乙基 -3-[4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ]-2- 吡啶基 ]-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image477
。
向N-三級丁氧基羰基-N-(4-乙基-5-(4-羥苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(3 g，5.45 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加N-(2-溴乙基)胺基甲酸苯甲酯(2.11 g，8.17 mmol)及碳酸鉀(1.51 g，10.9 mmol)。將混合物在50℃下攪拌16 h且過濾，且藉由prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm 10 µm；移動相：[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨)，溶劑B：乙腈]；以46% B運行梯度，梯度：46%-76% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液，得到呈暗色固體狀之標題化合物。
產量2.5 g (63%)。m/z: [ESI+] 728.4 (M+H) +, (C 41H 49N 3O 9)。
N-(5-(4-(2- 胺基乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 )-2- 吡啶基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image479
。
在氮氣下向N-[5-[4-(2-胺基乙氧基)苯基]-4-乙基-3-[4-(甲氧基甲氧基)苯基]-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(2.5g，3.43 mmol)於甲醇(25 mL)中之溶液中添加鈀/碳(250 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌5 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量1.5 g (65%)。m/z: [ESI+] 594.2 (M+H) +, (C 33H 43N 3O 7) 實例39：1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酸
1-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 -4- 乙基 -5-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十五烷 -15- 酸甲酯之合成
Figure 02_image481
。
在氮氣下向3-[2-[2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸甲酯(245 mg，0.88 mmol)及N-三級丁氧基羰基-N-(4-乙基-5-(4-羥苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(600 mg，0.8 mmol)於THF (6 mL)中之溶液中添加三苯膦(522 mg，1.99 mmol)。將混合物冷卻，在0℃下添加TMAD (274 mg，1.59 mmol)，且在25℃下繼續攪拌1h。將混合物傾入水(150 mL)中且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合併層用鹽水(3×50 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且在真空中移除溶劑。藉由(管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：溶劑A：[0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以49% B運行梯度，梯度：49%-83% B，在25 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量602 mg (93%)。m/z: [ESI+] 813.2 (M+H) +, (C 43H 60N 2O 13)。
1-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) -4- 乙基 - 5-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十五烷 -15- 酸之合成
Figure 02_image483
向1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酸甲酯(602 mg，0.74 mmol)於THF (6 mL)及水(6 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(63 mg，1.48 mmol)。將混合物在25℃下攪拌30 min，傾入水(50 mL)中且用1 M鹽酸(1.5 mL)調節至pH 3至4。混合物用乙酸乙酯(2 × 30 mL)萃取。合併之層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液，得到呈淺黃色油狀之標題化合物。
產量497 mg (粗物質)。m/z: [ESI+] 799.2 (M+H) +, (C 42H 58N 2O 13)。 實例40：1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-酸
1-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 乙基 -5-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷 -18- 酸 甲酯之合成
Figure 02_image485
向3-(2-(2-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸甲酯(284 mg，0.87 mmol)及N-三級丁氧基羰基-N-(4-乙基-5-(4-羥苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(600 mg，0.79 mmol)於THF (6 mL)中之溶液中添加三苯膦(522 mg，1.99 mmol)。將混合物脫氣且用氮氣吹掃三次。在0℃下將TMAD (274 mg，1.59 mmol)添加至混合物中。將混合物在25℃下攪拌1 h，傾入水(150 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併之層用鹽水(3 × 50 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且過濾。在真空中濃縮濾液且藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250 ×50 mm×7 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以54% B運行梯度，梯度：54%-81% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)B% ：54%-81%，21 min)純化，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量669 mg (96%)。m/z: [ESI+] 858.2 (M+H) +, (C 45H 64N 2O 14)
1-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 乙基 -5-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷 -18- 酸之合成
Figure 02_image487
向1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-酸甲酯(670 mg，0.78 mmol)於THF (6 mL)及水(6 mL)中之溶液中添加1 M氫氧化鋰水溶液(1.56 mL)。將混合物在20℃下攪拌0.5 h，傾入水(50 mL)中且用1 M鹽酸(1.5 mL)調節至pH 3至4。混合物用乙酸乙酯(2 × 30 mL)萃取。合併之層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中移除溶劑，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量542 mg (粗物質)。m/z: [ESI+] 843.2 (M+H)+, (C 44H 62N 2O 14) 實例41：1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-酸
1-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 乙基 -5-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷 -21- 酸甲酯之合成
Figure 02_image489
向N-三級丁氧基羰基-N-(4-乙基-5-(4-羥苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(630 mg，0.84 mmol)及3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸甲酯(661 mg，1.25 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(231 mg，1.67 mmol)。將混合物在50℃下攪拌36 h，過濾，且藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm× 7 μm；移動相：[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨水溶液)，溶劑B：乙腈]；以58% B運行梯度，梯度：58%-84% B，在118 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液，得到呈無色膠狀之標題化合物。
產量575 mg (74%)。m/z: [ESI+] 901.3 (M+H) +, (C 47H 68N 2O 15)。
1-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 乙基 -5-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷 -21- 酸之合成
Figure 02_image491
向1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-酸甲酯(580 mg，0.62 mmol)於THF (6 mL)中之溶液中添加1 M氫氧化鋰水溶液(1.24 mL)。將混合物在25℃下攪拌0.5 h，傾入水(30 mL)中且用1 M鹽酸(3mL)調節至pH 4至5。混合物用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 50 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且過濾。在真空中濃縮濾液，得到呈淺黃色膠狀之標題化合物。
產量517 mg (92%)。m/z: [ESI+] 888.2 (M+H)+, (C 46H 66N 2O 15) 實例42：N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯
3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 ) -4- 乙基吡啶 -2- 胺 (T2A_1) 之 合成
Figure 02_image493
向3-溴-4-乙基-吡啶-2-胺(150 g，746 mmol)、[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]硼酸(226 g，895 mmol)及碳酸鈉(158 g，1.49 mol)於二㗁烷(1.5 L)及水(167 mL)中之溶液中添加Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(30.4 g，37.3 mmol)。將混合物在80℃下攪拌16 h，在真空中濃縮，且藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯10:1至1:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量178 g (61%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 7.98 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.10 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.94 (d, J= 8.4, 2H), 6.63 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.33 (s, 2H), 2.31 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.05-1.02 (m, 12H), 0.25 (s, 6H). m/z: [ESI+] 330.1 (M+H) +, (C 19H 28N 2OSi)。
5- 溴 -3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 胺 之合成
Figure 02_image495
。
在0℃下向3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-胺(158 g，481 mmol)於THF (1.58 L)中之溶液中添加N-溴代丁二醯亞胺(85.6 g，481 mmol)。將混合物在25℃下攪拌2 h，在真空中濃縮，且藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯10:1至1:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量172 g (86%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.11 (s, 1H), 7.08 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.95 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 4.39 (s, 2H), 2.45 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.01 (m, 12H), 0.25 (s, 6H). m/z: [ESI+] 407.9 (M+H) +, (C 19H 27N 2BrOSi)。
N-[5- 溴 -3-[4-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基苯基 ]-4- 乙基 -2- 吡啶基 ]-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image497
向5-溴-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-胺(172 g，417 mmol)及DMAP (5.10 g，41.7 mmol)於二氯甲烷(1.72 L)中之溶液中添加二碳酸二三級丁酯(273 g，1.25 mol)及TEA (116 mL，834 mmol)。將混合物在25℃下攪拌16 h，在真空中濃縮，且藉由管柱層析(SiO 2。石油醚/乙酸乙酯20:1至10:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量140 g (53%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.56 (s, 1H), 7.08-7.05 (m, 2H), 6.84 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 2.56 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.35 (s, 18H), 1.00-0.96 (m, 12H), 0.22 (s, 6H). m/z: [ESI+] 611.0 (M+H) +, (C 29H 43N 2BrO 5Si)。
N- 三級丁氧基羰基 -N-[3-[4-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基苯基 ]-4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 )-2- 吡啶基 ] 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image499
在氮氣下向N-[5-溴-3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(140 g，222 mmol)及(4-羥苯基)硼酸(46.1 g，333 mmol)於二㗁烷(1.40 L)及水(140 mL)中之溶液中添加碳酸鈉(47.1 g，445 mmol)及Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(9.09 g，11.1 mmol)。將混合物在80℃下攪拌16 h，在真空中濃縮，且藉由管柱層析(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯20:1至5:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量102 g (73%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.06 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 6.92-6.87 (m, 4H), 6.64-6.61 (m, 4H), 2.20 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.15 (s, 18H), 0.78 (s, 9H), 0.44 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.00 (s, 6H). m/z: [ESI+] 621.2 (M+H) +, (C 35H 48O 6N 2Si)。
4-(3-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-5-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 甲酸苯甲酯之合成
Figure 02_image501
在20℃下在氮氣下向N-三級丁氧基羰基-N-[3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-5-(4-羥苯基)-2-吡啶基]胺基甲酸三級丁酯(80 g，129 mmol)及(E)-1-(甲氧基甲氧基)丙-1-烯(43.3 g，142 mmol)於THF (800 mL)中之溶液中添加三苯膦(84.5 g，322 mmol)。將混合物冷卻且在0℃下添加TMAD (44.4 g，257 mmol)。將混合物在25℃下攪拌1 h，在真空中濃縮，且藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm× 7 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以40% B運行梯度，梯度：40%-75% B，在20 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量105 g (91%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.06 (s, 1H), 7.11 (d, J= 4.8 Hz, 4H), 7.09-7.07 (m, 1H), 7.03 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.73 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.62 (d, J= 8.4 Hz, 2H) 4.90 (s, 2H), 3.83 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.30 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.33 (t, J= 7.6 Hz, 4H), 2.20-2.17 (m, 4H), 1.79-1.78 (m, 2H), 1.16 (s, 18H), 0.78 (s, 9H), 0.47 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.00 (s, 6H). m/z: [ESI+] 883.2 (M+H) +, (C 50H 68N 4O 8Si)。
N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 )苯基) -4-乙基- 5-(4-(3-(哌𠯤-1-基)丙氧基 ) 苯基 )吡啶-2-基)- N-三級丁氧基羰基 -胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image503
在25℃下向含鈀/碳(10 g，10% w/w)之甲醇(1.05 L)中添加4-(3-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸苯甲酯(105 g，118 mmol)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈灰色固體狀之標題化合物。
產量74 g (72%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.07 (s, 1H), 7.04-7.02 (m, 2H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.73 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.62 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 3.83 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.67 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.32 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.24 (s, 4H), 2.18 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 1.81-1.74 (m, 3H), 1.16 (s, 18H), 0.779 (s, 9H), 0.47 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.00 (s, 6H). m/z: [ESI+] 748.2 (M+H) +, (C 42H 62N 4O 6Si)。 實例43：N-[(5-(4-(3-(4-(1-溴-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image505
向3-[2-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(500 mg，1.52 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加DIEA (294 mg，2.28 mmol)及HATU (693 mg，1.82 mmol)。將混合物在20℃下攪拌15 min，添加N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.4 g，1.59 mmol)，且繼續攪拌1 h。將反應混合物傾入水(30 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取。經合併之有機萃取物經濃縮，且藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50mm×7µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以57% B運行梯度，梯度：57%-87% B，在24 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物。合併含有產物之溶離份且用飽和碳酸氫鈉水溶液(1.5 mL)調節至pH 7至8。混合物用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取，經合併之有機萃取物在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量1.2 g (73%)。m/z: [ESI+] 1057.9 (M+H) +, (C 53H 81O 11N 4Si)。 實例44：N-(5-(4-(3-(4-(1-溴-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image507
向3-[2-[2-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(1.5 g，4.02 mmol)於DMF (15 ml)中之溶液中添加HATU (2.29 g，6.03 mmol)及DIEA (1.4 mL，8.04 mmol)。將混合物在15℃下攪拌15 min，將N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(3.64 g，4.22 mmol)添加至混合物中且在15℃下攪拌1 h。藉由Prep-HPLC [溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以57% B運行梯度，梯度：57%-87% B，在20 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量2 g (42%)。m/z: [ESI+] 1001.4 (M+H) +, (C 55H 85BrN 4O 12Si)。 實例45：4-甲基苯磺酸18-(4-(3-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-18-側氧基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷基酯
Figure 02_image509
向3-[2-[2-[2-[2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(920 mg，1.75 mmol)於DMF (7 mL)中之溶液中添加HATU (997 mg，2.62 mmol)及DIEA (609 µL，3.50 mmol)。將混合物在15℃下攪拌0.5 h，添加N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.51 g，1.75 mmol)，且繼續攪拌2 h。將混合物傾入水(50 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 70 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌且經MgSO 4乾燥。過濾且在真空中濃縮得到殘餘物，藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以52% B運行梯度，梯度：52%-82% B，在20 min內，在95% B下保持5 min)將其純化。用飽和碳酸氫鈉水溶液(6 mL)將含有產物之溶離份調節至pH 7至8，用乙酸乙酯(3 × 70 mL)萃取且經MgSO 4乾燥。過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色膠狀之標題化合物。
產量575 mg (27%)。m/z: [ESI+] 1193.5 (M/2+H) +, (C 62H 92N 4O 15SiS)。 實例46：4-甲基苯磺酸21-(4-(3-(4-(6-((三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-(雙(三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷基酯
Figure 02_image511
向3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(200 mg，0.39 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加DIEA (102 mg，0.79 mmol)及HATU (224 mg，0.59 mmol)。將混合物在20℃下攪拌15 min，添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(308 mg，0.41 mmol)。且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以56% B運行梯度，梯度：56%-86% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物。在真空中濃縮含有產物之溶離份以移除乙腈且將所得溶液凍乾，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量200 mg (40%)。m/z: [ESI+] 1237.5 (M+H) +, (C 64H 96O 16N 4SSi)。 實例47：N-(5-(4-(3-(4-(3-胺基丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-2-吡啶基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
(5-(4-(3-(4-(3-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )( 三級丁氧基羰基 ) 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image513
在20℃下向3-(苯甲氧基羰基胺基)丙酸(584 mg，2.62 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中添加HATU (1.19 g，3.14 mmol)及DIEA (3.93 mmol，0.68 mL)。將混合物在20℃下攪拌10 min，添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(2 g，2.62 mmol)，且繼續攪拌1 h。將混合物傾入水(100 mL)中且藉由過濾收集產物。將固體在真空中乾燥，得到呈暗色固體狀之標題化合物。
產量2.78 g。m/z: [ESI+] 952.9 (M+H) +, (C 53H 73N 5O 9Si)。
N-(5-(4-(3-(4-(3- 胺基丙醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ) 氧基苯基 )-4- 乙基 -2- 吡啶基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image515
向(5-(4-(3-(4-(3-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)(三級丁氧基羰基)胺基甲酸三級丁酯(2.78 g，2.66 mmol)於甲醇(30 mL)中之溶液中添加鈀/碳(300 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在50℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量2.06 g (87%)。m/z: [ESI+] 819.3 (M+H) +, (C 45H 67N 5O 7Si)。 實例48：N-(5-(4-(3-(4-(3-胺基丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N-[5-[4-[3-[4-[3-( 苯甲氧基羰基胺基 ) 丙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 丙氧基 ] 苯基 ]-3-[4-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基苯基 ]-4- 乙基 -2- 吡啶基 ]-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image517
在20℃下向3-(苯甲氧基羰基胺基)丙酸(1 g，4.48 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加HATU (2.04 g，5.38 mmol)及DIEA (1.17 mL，6.72 mmol)。將混合物攪拌10 min，添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(4.11 g，4.70 mmol)，且繼續攪拌1 h。將混合物傾入水(100 mL)中，用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合併之有機層在減壓下濃縮，且藉由prep-HPLC (管柱：YMC Triart C18 250×50 mm×7 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以40% B運行梯度，梯度：40%-75% B，在20 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物。將混合物調節至pH 6至7且在真空中濃縮以移除乙腈。混合物用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取，經無水MgSO 4乾燥，過濾且濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量3.46 g (80%)。m/z: [ESI+] 952.9 (M+H) +, (C 53H 73N 5O 9Si)。
N-[5-[4-[3-[4-(3- 胺基丙醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ] 丙氧基 ] 苯基 ]-3-[4-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基苯基 ]-4- 乙基 -2- 吡啶基 ]-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image519
向N-[5-[4-[3-[4-[3-(苯甲氧基羰基胺基)丙醯基]哌𠯤-1-基]丙氧基]苯基]-3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(3.46 g，3.58 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液中添加鈀/碳(400 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在26℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌26 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量2.49 g (81%)。m/z: [ESI+] 818.8 (M+H) +, (C 45H 67N 5O 7Si)。 實例49：N-[5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基]哌𠯤-1-基]丙氧基]苯基]-3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N- 三級丁氧基羰基 -N-[3-[4-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基苯基 ]-4- 乙基 -5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-[2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 丙氧基 ] 苯基 ]-2- 吡啶基 ] 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image521
向3-[2-[2-[2-[2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(200 mg，0.041 mmol)於DMF (5 ml)中之溶液中添加HATU (234 mg，0.62 mmol)及DIEA (79.5 mg，0.62 mmol)。將混合物在25℃下攪拌0.5 h。添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(306 mg，0.41 mmol)。將混合物在25℃下攪拌2 h，傾入水(20 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量0.84 g (粗物質)。
N-[5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-(2- 胺基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 丙氧基 ] 苯基 ]-3-[4-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基苯基 ]-4- 乙基 -2- 吡啶基 ]-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image523
向N-三級丁氧基羰基-N-[3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-[2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基]哌𠯤-1-基]丙氧基]苯基]-2-吡啶基]胺基甲酸三級丁酯(915 mg，0.54 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加二乙胺(2.76 mL，26.8 mmol)。將混合物在15℃下攪拌16 h。將混合物在真空中濃縮且藉由prep-HPLC (管柱：內徑57mm×H235mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 μm；120 Å；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以20% B運行梯度，梯度：20%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物。用飽和碳酸氫鈉水溶液(0.5 mL)將含有產物之合併溶離份調節至pH 7且在真空中濃縮以移除乙腈。混合物用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。合併之有機層經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量150 mg (28%)。m/z: [ESI+] 497.9 (M/+H) +, (C 53H 83N 5O 11Si)。 實例50：N-(5-(4-(3-(4-(1-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N- 三級丁氧基羰基 -N-[3-[4-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基苯基 ]-4- 乙基 -5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 丙氧基 ] 苯基 ]-2- 吡啶基 ] 胺基甲酸異丙酯之合成
Figure 02_image525
向3-[2-[2-[2-[2-[2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(300 mg，0.56 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加HATU (322 mg，0.85 mmol)及DIEA (109 mg，0.85 mmol)。將混合物在25℃下攪拌0.5 h。添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(422 mg，0.56 mmol)，且繼續攪拌3 h。將混合物傾入水(20 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取。合併之層用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且真空移除溶劑，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量1.24 g (粗物質)。
N-(5-(4-(3-(4-(1- 胺基 -3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷 -18- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image527
向N-三級丁氧基羰基-N-[3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基]哌𠯤-1-基]丙氧基]苯基]-2-吡啶基]胺基甲酸異丙酯(1.23 g，0.63 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加二乙胺(3.26 mL，31.6 mmol)。將混合物在25℃下攪拌16 h，在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：內徑57mm×H235mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 μm；120 Å；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以20% B運行梯度，梯度：20%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量260 mg (33%)。m/z: [ESI+] 520.0 (M/2+H) +, (C 55H 87N 5O 12Si)。 實例51：N-(5-(4-(3-(4-(1-胺基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯
N- 三級丁氧基羰基 -N-[3-[4-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基苯基 ]-4- 乙基 -5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 丙氧基 ] 苯基 ]-2- 吡啶基 ] 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image529
向3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(300 mg，0.52 mmol)於DMF (7 mL)中之溶液中添加HATU (297 mg，0.78 mmol)及DIEA (101 mg，0.78 mmol)。將混合物在25℃下攪拌0.5 h，添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(389 mg，0.52 mmol)，且在25℃下繼續攪拌3 h。將混合物傾入水(20 mL)中，且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量1.03 g (粗物質)。
N-(5-(4-(3-(4-(1- 胺基 -3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷 -21- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image531
向N-三級丁氧基羰基-N-[3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基]哌𠯤-1-基]丙氧基]苯基]-2-吡啶基]胺基甲酸三級丁酯(1.03 g，0.55 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加二乙胺(2.84 mL，27.6 mmol)。將混合物在25℃下攪拌16 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：內徑57mm×H235mm，Welch Ultimate XB-C18 20-40 μm；120 Å；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以20% B運行梯度，梯度：20%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量280 mg (41%)。m/z: [ESI+] 1082.4 (M+H) +, (C 57H 91N 5O 13Si)。 實例52：N-(4-((15-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-15-側氧基-3,6,9,12-四氧雜十五烷基)氧基)-2-(三級丁基)-5-羥苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(嵌合分子4)
N-(5-(4-(3-(4-(1-(4-(1- 苯甲基 -4- 側氧基 -1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺基 )-2-( 苯甲氧基 )-5-( 三級丁基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十五烷 -15- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image533
在15℃下向N-[(5-(4-(3-(4-(1-溴-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.41 g，1.33 mmol)於DMF (8 mL)中之溶液中添加1-苯甲基-N-(5-(苯甲氧基)-2-(三級丁基)-4-羥苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(600 mg，1.11 mmol)及碳酸鉀(306 mg，2.22 mmol)。將反應物在80℃下攪拌15 h。冷卻至25℃後，將反應混合物傾入水(100 mL)中，且用乙酸乙酯(3 × 60 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(80 mL)洗滌且經Na 2SO 4乾燥，且在真空中移除溶劑，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量2 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 1395.7 (M+H) +, (C 81H 98N 6O 15)。
N-(5-(4-(3-(4-(1-(4-(1- 苯甲基 -4- 側氧基 -1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺基 )-5-( 三級丁基 ) -2- 羥基苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十五烷 -15- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image535
在15℃下在氮氣下向鈀/碳(200 mg，10%純度)及氫氧化鈀/碳(200 mg，20% w/w)於甲醇(5 mL)中之懸浮液中添加N-(5-(4-(3-(4-(1-(4-(1-苯甲基-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺基)-2-(苯甲氧基)-5-(三級丁基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(2 g，1.43 mmol)。反應物用氫吹掃三次且在80℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌24 h。溶液經由Celite ®過濾，且用二氯甲烷/甲醇10:1 (4 × 20 mL)洗滌濾餅。在減壓下濃縮濾液，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量2 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 653.7 (M/2+H) +, (C 74H 92N 6O 15)。
N-(4-((15-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-15- 側氧基 -3,6,9,12- 四氧雜十五烷基 ) 氧基 )-2-( 三級丁基 )-5- 羥苯基 )-1- 苯甲基 -4- 側氧基 -1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺之合成
Figure 02_image537
將N-(5-(4-(3-(4-(1-(4-(1-苯甲基-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺基)-5-(三級丁基)-2-羥基苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(2 g，1.53 mmol)於4 M HCl/甲醇(6 mL)中之溶液在15℃下攪拌5 h。在真空中移除溶劑，得到呈棕色油狀之標題化合物。
產量1.5 g (粗物質)。
N-(4-((15-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -15- 側氧基 - 3,6,9,12- 四氧雜十五烷基 ) 氧基 )-2- ( 三級丁基 ) -5- 羥苯基 )-4- 側氧基 - 1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺 ( 嵌合分子 4) 之 合成
Figure 02_image539
在氮氣下向N-(4-((15-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-15-側氧基-3,6,9,12-四氧雜十五烷基)氧基)-2-(三級丁基)-5-羥苯基)-1-苯甲基-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(1.5 g，1.36 mmol)於甲醇(8 mL)中之溶液中添加鈀/碳(200 mg，10% w/w)及氫氧化鈀/碳(200 mg，20% w/w)。將混合物脫氣且在15℃下用氫(15 psi)吹掃。將混合物在80℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌12 h。經由Celite ®過濾混合物。濾餅用二氯甲烷/甲醇10:1 (4 × 20 mL)洗滌。在真空中蒸發濾液。藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以25% B運行梯度，梯度：25%-55% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量10 mg (6%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4): δ 8.90 (s, 1H), 8.41-8.39 (m, 1H), 7.82-7.81 (m, 1H), 7.71-7.70 (m, 1H), 7.52-7.51 (m, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.26-7.24 (m, 2H), 7.13-7.11 (m, 2H), 7.99-7.97 (m, 6H), 4.75-4.70 (m, 1H), 4.30-4.25 (m, 1H), 4.18-4.15 (m, 4H), 3.74-3.73 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 4H), 3.67-3.42 (m, 10H), 3.42-3.41(m, 3H), 3.34-3.31(m, 2H), 3.28-3.25 (m, 1H), 3.24-3.23(m, 2H), 2.98-2.96 (m, 1H), 2.55-2.49 (m, 1H), 2.42-2.04 (m, 4H), 1.41 (s, 9H), 0.67 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 1015.7 (M+H) +, (C 57H 70N 6O 11)。 實例53：N-(4-((18-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-18-側氧基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷基)氧基)-2-(三級丁基)-5-羥苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(嵌合分子5)
N-(5-(4-(3-(4-(1-(4-(1- 苯甲基 -4- 側氧基 -1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺基 )-2-( 苯甲氧基 )-5-( 三級丁基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷 -18- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image541
向1-苯甲基-N-(5-(苯甲氧基)-2-(三級丁基)-4-羥苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(500 mg，0.93 mmol)及N-(5-(4-(3-(4-(1-溴-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.1 g，0.93 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(256 mg，1.85 mmol)。將混合物在50℃下攪拌40 h，過濾，且蒸發濾液。藉由prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm 10 µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以58% B運行梯度，梯度：58%-88% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量129 mg (9%)。m/z: [ESI+] 1439.6 (M+H) +, (C 83H 102O 16N 6)。
N-(5-(4-(3-(4-(1-(5-( 三級丁基 ) -2- 羥基 - 4-(4- 側氧基 - 1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷 -18- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image543
在氮氣下向N-(5-(4-(3-(4-(1-(4-(1-苯甲基-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺基)-2-(苯甲氧基)-5-(三級丁基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(129 mg，0.083 mmol)於甲醇(5 mL)中之溶液中添加鈀/碳(30 mg，10% w/w)及氫氧化鈀/碳(30 mg，20% w/w)。將混合物在真空中脫氣且用氫吹掃三次。將混合物在75℃下在氫氣(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾混合物，且在真空中濃縮濾液，得到呈紅色固體之標題化合物。
產量92 mg (78%)。m/z: [ESI+] 1259.5 (M+H) +, (C 69H 90O 16N 6)。
N-(4-((18-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -18- 側氧基 - 3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷基 ) 氧基 )-2-( 三級丁基 ) -5- 羥苯基 )-4- 側氧基 - 1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺 ( 嵌合分子 5) 之 合成
Figure 02_image545
將N-(5-(4-(3-(4-(1-(5-(三級丁基)-2-羥基-4-(4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(92 mg，0.065 mmol)於4 M HCl/甲醇(2.06 mL)中之溶液在15℃下攪拌4 h。在真空中移除溶劑，且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150×25 mm×10 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以5% B運行梯度，梯度：5%-35% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色膠狀之標題化合物。
產量51 mg (74%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.89 (s, 1H), 8.41 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.84-7.80 (m, 1H), 7.69 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.57-7.54 (m, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.28-7.25 (m, 2H), 7.13-7.11 (m, 2H), 7.04-6.96 (m, 6H), 4.18-4.15 (m, 5H), 3.88-3.86 (m, 3H), 3.77-3.59 (m, 21H), 3.40-3.35 (m, 5H), 2.71 (br s, 2H), 2.40 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.32-2.25 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.68 (t, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 1059.3 (M+H) +, (C 59H 74O 12N 6)。 實例54：N-(4-((21-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷基)氧基)-2-(三級丁基)-5-羥苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(嵌合分子6)
N-(5-(4-(3-(4-(1-(4-(1- 苯甲基 -4- 側氧基 -1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺基 )-2-( 苯甲氧基 )-5-( 三級丁基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷 -21- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image547
向1-苯甲基-N-(5-(苯甲氧基)-2-(三級丁基)-4-羥苯基)-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺(80 mg，0.15 mmol)及4-甲基苯磺酸21-(4-(3-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷基酯(200 mg,0.16 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(41 mg，0.30 mmol)。將混合物在70℃下攪拌3 h。將兩個批次之反應並行地運行且合併用於處理。過濾混合物，且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150×25 mm×10 µm；移動相：[溶劑A：0.05%氨水溶液，溶劑B：乙腈]；以60% B運行梯度，梯度：60%-90% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量82 mg (17%)。m/z: [ESI+] 742.6 (M/2+H) +, (C 85H 106N 6O 17)。 N-(5-(4-(3-(4-(1-(5-( 三級丁基 ) -2- 羥基 - 4-(4- 側氧基 - 1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷 -21- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image549
向N-(5-(4-(3-(4-(1-(4-(1-苯甲基-4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺基)-2-(苯甲氧基)-5-(三級丁基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(82 mg，0.051 mmol)於甲醇(5 mL)中之溶液中添加鈀/碳(16.0 mg，10% w/w)及氫氧化鈀/碳(16 mg，20% w/w)。將混合物在真空中脫氣且用氫吹掃三次。將混合物在75℃下在氫氣(15 psi)下攪拌12 h，經由Celite ®過濾，且蒸發溶劑，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量60 mg (79%)。m/z: [ESI+] 1303.5 (M+H) +, (C 71H 94N 6O 17)。
N-(4-((21-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -21- 側氧基 - 3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷基 ) 氧基 )-2-( 三級丁基 ) -5- 羥苯基 )-4- 側氧基 - 1,4- 二氫喹啉 -3- 甲醯胺 ( 嵌合分子 6) 之 合成
Figure 02_image551
將N-(5-(4-(3-(4-(1-(5-(三級丁基)-2-羥基-4-(4-側氧基-1,4-二氫喹啉-3-甲醯胺基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(60 mg，0.04 mmol)於4 M HCl/甲醇(3 mL)中之溶液在15℃下攪拌16 h，在真空中移除溶劑，且藉由Prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以20% B運行梯度，梯度：20%-50%B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量15 mg (32%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.90 (s, 1H), 8.40 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.84-7.80 (m, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.57-7.52 (m, 2H), 7.28-7.25 (m, 2H), 7.14-7.12 (m, 2H), 7.05-6.96 (m, 6H), 4.70 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 4.33 (d, J= 14.8 Hz, 1H), 4.18-4.14 (m, 4H), 3.88-3.86 (m, 2H), 3.74-3.61 (m, 25H), 3.45-3.41 (m, 2H), 3.24-3.01 (m, 3H), 2.94-2.86 (m, 1H), 2.54-2.50 (m, 1H), 2.41 (q, J= 7.6 Hz, 14.8 Hz, 2H), 2.33-2.30 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.68 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 1103.4 (M+H) +, (C 61H 78N 6O 13)。 實例55：N-(6-(4-(N-(2-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子91)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image553
在0至5℃下向N-(5-(4-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(354 mg，0.41 mmol)、TEA (82 mg，0.81 mmol)及DMAP (5 mg，0.041 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中逐滴添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(200 mg，0.41 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液。將反應物在25℃下攪拌2 h，傾入水(20 mL)中且用二氯甲烷(4×30 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌且經Na 2SO 4乾燥。在真空中移除溶劑，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量244 mg (53%)。m/z: [ESI+] 1140.6 (M+H) +, (C 62H 63F 2N 5O 12S)。
N-(5-(4-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image555
在15℃下在氮氣下向鈀/碳(30 mg，，10% w/w)於甲醇(3 mL)中之懸浮液中添加N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(244 mg，0.21 mmol)。反應物用氫吹掃三次且在15℃下在氫氣氛圍(15 psi)下攪拌24 h。經由Celite ®過濾混合物且用二氯甲烷/甲醇10:1 (4 × 10 mL)洗滌濾餅。在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量220 mg (98%)。m/z: [ESI+] 1050.5 (M+H) +,  (C 55H 57F 2N 5O 12S)。
N-(6-(4-(N-(2-(2-(4-(6- 胺基-4- 乙基 -5-(4- 羥苯基) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基)乙氧基) 乙基 ) 胺磺醯基)苯基) 吡啶 -2- 基 )-1-(2,2- 二氟苯并[d][1,3] 二氧雜環戊烯-5-基) 環丙烷甲醯胺( 嵌合分子91) 之合成。
Figure 02_image557
將N-(5-(4-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(220 mg，0.21 mmol)於4 M HCl/甲醇(3 mL)中之溶液在15℃下攪拌12 h。在減壓下移除溶劑。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以35% B運行梯度，梯度：35%-65% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化粗產物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量67 mg (36%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.10 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.3 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.99-7.92 (m, 3H), 7.71-7.66 (m, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.42 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.39-7.35 (m, 1H), 7.26 (t, J= 8.8 Hz, 3H), 7.19-7.13 (m, 2H), 7.03-6.97 (m, 4H), 4.12-4.03 (m, 2H), 3.78-3.69 (m, 2H), 3.55 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.13 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 2.43 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 1.74-1.67 (m, 2H), 1.35-1.26 (m, 2H), 0.70 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 850.4 (M+H) +, (C 45H 41F 2N 5O 8S)。 實例56：N-(6-(4-(N-(2-(2-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子92)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-(2-(4-(6-(1-2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image559
向N-(5-(4-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(265 mg，0.2 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加TEA (41 mg，0.41 mmol)及DMAP (2.5 mg，0.02 mmol)。 將混合物冷卻至0℃，添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(100 mg，02 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液，且繼續攪拌2 h。在真空中移除溶劑。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate XB-CN 250 ×50×10 μm；移動相：[溶劑A：己烷，溶劑B：乙醇]；以20% B運行梯度，梯度：20%-68% B，在15 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量160 mg (67%)。m/z: [ESI+] 1184.6 (M+H) +, (C 64H 67N 5O 13SF 2)。
N-(5-(4-(2-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 ) -4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸酯之合成
Figure 02_image561
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(160 mg，0.14 mmol)於甲醇(3 mL)中之溶液中添加鈀/碳(100 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在65℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌10 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量110 mg (70%)。m/z: [ESI+] 1094.2 (M+H) +, (C 57H 61O 13N 5SF 2)。
N-(6-(4-(N-(2-(2-(2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- 1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 92 ) 之合成
Figure 02_image563
將N-(5-(4-(2-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(110 mg，0.094 mmol)於4 M HCl/甲醇(6 mL)中之溶液在15℃下攪拌12 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以35% B運行梯度，梯度：35%-65% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量18 mg (21%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.12 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.94-7.85 (m, 3H), 7.67-7.61 (m, 2H), 7.45-7.34 (m, 2H), 7.27 (dd, J= 5.6, 8.4 Hz, 3H), 7.15 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.01 (t, J= 8.8 Hz, 4H), 4.20-4.10 (m, 2H), 3.86-3.79 (m, 2H), 3.63 (dd, J= 3.2, 5.6 Hz, 2H), 3.54-3.50 (m, 2H), 3.46 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.08 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 2.43 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 1.72-1.65 (m, 2H), 1.29-1.25 (m, 2H), 0.69 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 894.4 (M+H) +, (C 47H 45O 9N 5SF 2)。 實例58：N-(6-(4-(N-(2-(2-(2-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子93)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image565
向N-(5-(4-(2-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(341 mg，0.2 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加TEA (41 mg，0.41 mmol)及DMAP (2.5 mg，0.02 mmol)。將混合物冷卻至0℃，添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(100 mg，0.2 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液，且繼續攪拌2 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate XB-CN 250 ×50×10 μm；移動相：[溶劑A：己烷，溶劑B：乙醇]；以20% B運行梯度，梯度：20%-68% B，在15 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之標題化合物。
產量142 mg (57%)。m/z: [ESI+] 615.1 (M/2+H) +, (C 66H 71N 5O 14SF 2)。
N-(5-(4-(2-(2-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image567
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(142 mg，0.12 mmol)於甲醇(3 mL)中之溶液中添加鈀/碳(30 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在65℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌10 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量120 mg (88%)。m/z: [ESI+] 1138.2 (M+H) +, (C 59H 65O 14N 5SF 2)。
N-(6-(4-(N-(2-(2-(2-(2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 93 ) 之合成
Figure 02_image569
將N-(5-(4-(2-(2-(2-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(120 mg，0.1 mmol)於4 M HCl/甲醇(8 mL)中之溶液在15℃下攪拌12 h且藉由Prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以35% B運行梯度，梯度：35%-65% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量74 mg (78%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.11 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.91 (d, J= 8.4 Hz, 3H), 7.69-7.60 (m, 2H), 7.44-7.35 (m, 2H), 7.30-7.23 (m, 3H), 7.15 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.05-6.96 (m, 4H), 4.15 (br d, J= 4.8 Hz, 2H), 3.89-3.80 (m, 2H), 3.75-3.66 (m, 2H), 3.65-3.60 (m, 2H), 3.59-3.53 (m, 2H), 3.51-3.41 (m, 4H), 3.07 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 2.42 (br d, J= 7.6 Hz, 2H), 1.69 (d, J= 2.6 Hz, 2H), 1.33-1.23 (m, 2H), 0.69 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 938.1 (M+H) +, (C 49H 49O 10N 5SF 2)。 實例59：N-(6-(3-(N-(15-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-15-側氧基-3,6,9,12-四氧雜十五烷基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子22)
(5-(4-(3-(4-(1-(9H- 茀 -9- 基 )-3- 側氧基 -2,7,10,13,16- 五側氧基 -4- 氮雜十九烷 -19- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )( 三級丁氧基羰基 ) 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image571
向N-[5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基]哌𠯤-1-基]丙氧基]苯基]-3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(150 mg，0.13 mmol)於二氯甲烷(0.5 mL)中之溶液中添加TEA (26.2 mg，0.26 mmol)及DMAP (1.6 mg，0.013 mmol)。將混合物冷卻至0℃且添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(67 mg，0.14 mmol)於二氯甲烷(0.5 mL)中之溶液。將混合物在25℃下攪拌1 h且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液溶劑B：乙腈]；以68% B運行梯度，梯度：68%-98% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化。合併含有產物之溶離份，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1 mL)調節至pH 7，且用二氯甲烷(2 × 50 mL)萃取。有機萃取物經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量70 mg (36%)。m/z: [ESI+] 726.1 (M/+H) +, (C 75H 97F 2N 7O 16SSi)。
N-(6-(4-(N-(15-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-15- 側氧基 -3,6,9,12- 四氧雜十五烷基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 22) 之 合成
Figure 02_image573
在20℃下將(5-(4-(3-(4-(1-(9H-茀-9-基)-3-側氧基-2,7,10,13,16-五氧雜-4-氮雜十九烷-19-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)(三級丁氧基羰基)胺基甲酸三級丁酯(70 mg，0.047 mmol)於4 M HCl/甲醇(4 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以29% B運行梯度，梯度：29%-59% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物且凍乾，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量16 mg (30%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.26 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 8.11-8.03 (m, 5H), 7.89 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.44 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.39-7.36 (m, 1H), 7.33-7.27 (m, 3H), 7.16 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.06 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.01 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 4.70 (d, J= 14.8 Hz, 1H), 4.32 (d, J= 14.8 Hz, 1H), 4.19 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.77-3.67 (m, 4H), 3.62-3.55 (m, 11H), 3.52-3.41 (m, 6H), 3.24-3.02 (m, 5H), 2.87-2.83 (m, 1H), 2.61-2.56 (m, 1H), 2.44 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.38-2.31 (m, 2H), 1.79 (q, J= 4.4 Hz, 2H), 1.39 (q, J= 4.0 Hz, 2H), 0.70 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.83 (s). m/z: [ESI+] 1136.3 (M+H) +, (C 59H 67F 2N 7O 12S)。 實例60：N-(6-(4-(N-(18-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-18-側氧基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子23)
(5-(4-(3-(4-(1-(9H- 茀 -9- 基 )-3- 側氧基 -2,7,10,13,16,19- 六氧雜 -4- 氮雜二十二烷 -22- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )( 三級丁氧基羰基 ) 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image575
向N-(5-(4-(3-(4-(1-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜-18-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(250 mg，0.24 mmol)於二氯甲烷(1.5 mL)中之溶液中添加TEA (49 mg，0.48 mmol)及DMAP (2.9 mg，0.024 mmol)。將混合物冷卻至0℃，且添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(125 mg，0.25 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液。將混合物在25℃下攪拌1 h，在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以63% B運行梯度，梯度：63%-93% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量130 mg (30%)。m/z: [ESI+] 1180.3 (M+H) +, (C 77H 101F 2N 7O 17SSi)。
N-(6-(4-(N-(18-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-18- 側氧基 -3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 23 ) 之合成
Figure 02_image577
將(5-(4-(3-(4-(1-(9H-茀-9-基)-3-側氧基-2,7,10,13,16,19-六氧雜-4-氮雜二十二烷-22-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)(三級丁氧基羰基)胺基甲酸三級丁酯(130 mg，0.072 mmol)於4 M HCl/甲醇(3 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h且真空移除溶劑。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以28% B運行梯度，梯度：28%-58%B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量22 mg (25%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.17 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 8.10-8.00 (m, 5H), 7.84 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.44 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.39-7.37 (m, 1H), 7.35-7.31 (m, 3H), .7.17 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.08 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.02 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 4.72 (d, J= 13.2 Hz, 1H), 4.33 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 4.19 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.79-3.68 (m, 4H), 3.63-3.56 (m, 15H), 3.52-3.42 (m, 6H), 3.25-3.17 (m, 1H), 3.14-3.05 (m, 4H), 2.88-2.82 (m, 1H), 2.59-2.55 (m, 1H), 2.44 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.37-2.30 (m, 2H), 1.77 (q, J= 4.0 Hz, 2H), 1.37 (q, J= 4.0 Hz, 2H), 0.72 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.79 (s). m/z: [ESI+] 1180.3 (M+H) +, (C 61H 71F 2N 7O 13S)。 實例61：N-(6-(3-(N-(21-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子24)
(5-(4-(3-(4-(1-(9H- 茀 -9- 基 )-3- 側氧基 -2,7,10,13,16,19,22- 七氧雜 -4- 氮雜二十五烷 -25- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )( 三級丁氧基羰基 ) 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image579
向N-(5-(4-(3-(4-(1-胺基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸酯(250 mg，0.23 mmol)於二氯甲烷(0.5 mL)中之溶液中添加TEA (47 mg，0.46 mmol)及DMAP (2.8 mg，0.023 mmol)。將反應混合物冷卻至0℃，添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(120 mg，0.24 mmol)於二氯甲烷(0.5 mL)中之溶液，且將混合物在25℃下攪拌1 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以63% B運行梯度，梯度：63%-93% B，在10 min內，在95% B 下保持5 min)純化混合物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量130 mg (35%)。m/z: [ESI+] 770.2 (M/2+H) +, (C 79H 105F 2N 7O 18SSi)。
N-(6-(3-(N-(21-(4-(3-(4-(6- 胺基-4- 乙基 -5-(4- 羥苯基) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基)丙基) 哌 𠯤 -1- 基 )-21- 側氧基 -3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷基) 胺磺醯基)苯基) 吡啶 -2- 基 )-1-(2,2- 二氟苯并[d][1,3] 二氧雜環戊烯-5-基) 環丙烷甲醯胺( 嵌合分子24)
Figure 02_image581
將(5-(4-(3-(4-(1-(9H-茀-9-基)-3-側氧基-2,7,10,13,16,19,22-七氧雜-4-氮雜二十五烷-25-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)(三級丁氧基羰基)胺基甲酸三級丁酯(130 mg，0.08 mmol)於4 M HCl/甲醇(6 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以29% B運行梯度，梯度：29%-59% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量34 mg (34%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.35 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 8.10-8.06 (m, 4H), 8.04-8.02 (m, 1H), 7.96 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.44 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.39-7.37 (m, 1H), 7.32 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.28 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.17-7.15 (m, 2H), 7.07 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.01 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 4.71 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 4.33 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.19 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.77-3.69 (m, 4H), 3.62-3.56 (m, 19H), 3.52-3.42 (m, 6H), 3.25-3.06 (m, 5H), 2.87-2.82 (m, 1H), 2.61-2.56 (m, 1H), 2.44 (q, J= 7.6 Hz, 2H), 2.39-2.32 (m, 2H), 1.83 (q, J= 4.4 Hz, 2H), 1.42 (q, J= 4.0 Hz, 2H), 0.71 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.79 (s). m/z: [ESI+] 612.9 (M/2+H) +, (C 63H 75F 2N 7O 14S)。 實例62：N-(6-(4-(N-(2-(3-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙氧基)乙基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子97)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-5-(4-(3-(4-(3-(2-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 ) 乙氧基 ) 丙醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image583
在25℃下向3-[2-[[4-[6-[[1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基)環丙基羰基]胺基]-2-吡啶基]苯基]磺醯基胺基]乙氧基]丙酸(230 mg，0.39 mmol)及N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(350 mg，0.47 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加HATU (222 mg，0.59 mmol)及TEA (3 mL)。將混合物在25℃下攪拌3 h且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150×40 mm×15µm；移動相：[溶劑A：0.05%TFA水溶液，溶劑B：乙腈]；以60% B運行梯度，梯度：60%-90% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量292 mg (57%)。m/z: [ESI+] 1318.4 (M+H) +, (C 69H 85F 2N 7O 13SSi)。
N-(6-(4-(N-(2-(3-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -3- 側氧基丙氧基 ) 乙基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- 1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 97) 之 合成
Figure 02_image585
在25℃下向N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-5-(4-(3-(4-(3-(2-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)乙氧基)丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(292 mg，0.22 mmol)於甲醇(5 mL)中之混合物中添加4 M HCl/甲醇(10 mL)。將混合物在25℃下攪拌3 h且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (中性條件，管柱：Waters XBridge 150 × 25 mm × 5µm；移動相：[溶劑A：水(10mM碳酸氫銨水溶液)，溶劑B：乙腈]；以48% B運行梯度，梯度：48%-78% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量80 mg (35%產率)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.13 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.94-7.83 (m, 3H), 7.68-7.62 (m, 2H), 7.42-7.33 (m, 2H), 7.27-7.18 (m 3H), 7.09 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.99-6.91 (m, 4H), 4.04 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.65-3.55 (m, 4H), 3.53-3.47 (m, 2H), 3.44 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.06 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 2.53 (t, J= 6.4 Hz, 4H), 2.45-2.39 (m, 4H), 2.34 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.01-1.89 (m, 2H), 1.75-1.61 (m, 2H), 1.28-1.21 (m, 2H), 0.68 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 19 F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.84 (s). m/z: [ESI+] 1004.3 (M+H) +, (C 53H 55F 2N 7O 9S)。 實例63：N-(5-(3-((17-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子14)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((17-(3-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image587
向1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)-N-(5-(3-羥苯基)吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺(90 mg，0.22 mmol)及4-甲基苯磺酸17-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基酯(267 mg，0.26 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(61 mg，0.44 mmol)。將混合物在70℃下攪拌4 h且過濾。濃縮濾液且藉由prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm 10µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量170 mg (61%) m/z: [ESI+] 1253.4 (M+H) +, (C 70H 78F 2N 4O 15)。
N-(5-(4-((17-(3-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 ) 苯基 ) -4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image589
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((17-(3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(170 mg，0.14 mmol)於甲醇(1 mL)中之溶液中添加鈀/碳(17 mg，10% w/w)。將混合物在真空中脫氣且用氫吹掃三次且在20℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾反應混合物且濃縮，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量200 mg (粗產物) m/z: [ESI+] 582.4 (M/2+H) +, (C 63H 72F 2N 4O 15)。
N-(5-(3-((17-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- 1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 14) 之合成
Figure 02_image591
將N-(5-(4-((17-(3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(200 mg，0.17 mmol)於4 M HCl/甲醇(1 mL)中之溶液在20℃下攪拌13 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以40% B運行梯度，梯度：40%-70% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量72 mg (43%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.51 (s, 1H), 8.33 (m, 1H), 8.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.44-7.36 (m, 3H), 7.28 (m, 3H), 7.24 (m, 2H), 7.16 (m, 2H), 6.99 (m, 5H), 4.20 (m, 2H), 4.17 (m, 2H), 3.85 (m, 4H), 3.71 (m, 4H), 3.66 (m, 4H), 3.63 (m, 8H), 2.46-2.40 (m, 2H), 1.77-1.74 (m, 2H), 1.37-1.34 (m, 2H), 0.70 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.93 (s). m/z: [ESI+] 963.2 (M+H) +, (C 53H 56F 2N 4O 11)。 實例64：N-(5-(3-((20-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子15) N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((20-(3-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image593
向1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)-N-(5-(3-羥苯基)吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺(90 mg，0.22 mmol)及4-甲基苯磺酸20-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基酯(279 mg，0.26 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(61 mg，0.44 mmol)。將混合物在70℃下攪拌4 h且過濾。在真空中濃縮濾液且藉由prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm 10 µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在1 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量169 mg (59%) m/z: [ESI+] 1297.3 (M+H) +, (C 72H 82F 2N 4O 16)。
N-(5-(4-((20-(3-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 ) -4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image595
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((20-(3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(169 mg，0.13 mmol)於甲醇(1 mL)中之溶液中添加鈀/碳(17 mg，10% w/w)。將混合物在真空中脫氣，用氫吹掃三次且在20℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾且真空濃縮，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量173 mg (粗物質) m/z: [ESI+] 604.5 (M/2+H) +, (C 65H 76F 2N 4O 16)。
N-(5-(3-((20-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- 1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 15) 之 合成
Figure 02_image597
將N-(5-(4-((20-(3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(173 mg，0.14 mmol)於4 M HCl/甲醇(1 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h，在真空中移除溶劑，且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以40% B運行梯度，梯度：40%-70% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量98 mg (67%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.57-8.53 (m, 2H), 7.89 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.43-7.41 (m, 2H), 7.37-7.34 (m, 1H), 7.29-7.24 (m, 5H), 7.16-7.13 (m, 2H), 7.07-6.98 (m, 5H), 4.22-4.19 (m, 2H), 4.17-4.14 (m, 2H), 3.87-3.83 (m, 4H), 3.71-3.68 (m, 4H), 3.66-3.58 (m, 16H), 2.47-2.41 (m, 2H), 1.81-1.78 (m, 2H), 1.42-1.39(m, 2H), 0.71 (t, J = 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.92 (s). m/z: [ESI+] 1007.2 (M+H) +, (C 55H 60F 2N 4O 12)。 實例65：N-(6-(4-(N-(14-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子19)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((14-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image599
向N-(5-(4-((14-胺基-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(200 mg，0.19 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液中添加TEA (37 mg，0.36 mmol)及DMAP (2 mg，0.018 mmol)。將混合物冷卻且在0至5℃下將4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(91 mg，0.18 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液添加至混合物中。將混合物在25℃下攪拌1.5 h，傾入水(10 mL)中，且用二氯甲烷(2 × 5 mL)萃取。真空濃縮經合併之有機層。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物。濃縮含有產物之溶離份以移除乙腈。用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取水溶液。有機萃取物經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈無色膠狀之標題化合物。
產量100 mg (粗物質)。m/z: [ESI+] 636.9 (M/2+H) +, (C 68H 75N 5O 15SF 2)。
N-(5-(4-((14-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 ) 苯基 ) -4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image601
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((14-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(90 mg，0.071 mmol)於甲醇(0.9 mL)中之溶液中添加鈀/碳(27 mg，0.071 mmol)。將混合物在30℃下在氫氛圍下攪拌12 h且經由Celite ®過濾。在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量80 mg (90%)。m/z: [ESI+] 1182.4 (M+H) +, (C 61H 69N 5O 15SF 2)。
N-(6-(4-(N-(14-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- 1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 19 ) 之合成
Figure 02_image603
將N-(5-(4-((14-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(80 mg，0.064 mmol)於4 M HCl/甲醇(2 mL)中之溶液在20℃下攪拌12 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以40% B運行梯度，梯度：40%-70% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物。在真空中濃縮含有產物之溶離份以移除大部分乙腈且凍乾，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量31 mg (46%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.12 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.92-7.88 (m, 3H), 7.67 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.43 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.39-7.37 (m, 1H), 7.29-7.26 (m, 3H), 7.15 (d, J= 8.4Hz, 2H), 7.03-6.99 (m, 4H), 4.15-4.13 (m, 2H), 3.84 (m, 2H), 3.69 (m, 2H), 3.65 (m, 3H), 3.62 (m, 3H), 3.59 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.47-3.42 (m, 2H), 3.08-3.05 (m, 2H), 2.46-2.40 (m, 2H), 1.69 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 0.70 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.90 (s). m/z: [ESI+] 982.5 (M+H) +, (C 51H 53N 5O 11SF 2)。 實例66：N-(6-(4-(N-(17-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子20)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((17-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image605
向N-(5-(4-((17-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(200 mg，0.2 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液中添加TEA (38 mg，0.37 mmol)及DMAP (2 mg，0.019 mmol)。將混合物冷卻至0℃且添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(94 mg，0.19 mmol)。將混合物在25℃下攪拌2 h，傾入水(10 mL)中，且用二氯甲烷(2 × 5 mL)萃取。合併之有機層經濃縮，且藉由prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm 10 µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以55% B運行梯度，梯度：55%-85% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物。在真空中濃縮含有產物之溶離份且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取所得水層。有機萃取物經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈淺黃色膠狀之標題化合物。
產量180 mg (73%)。m/z: [ESI+] 1316.3 (M+H) +, (C 70H 79O 16N 5SF 2)。
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((14-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 ) 苯基 ) -4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image607
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((17-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(180 mg，0.14 mmol)於甲醇(1 mL)中之溶液中添加鈀/碳(54 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在30℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌2 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量210 mg (粗物質)。m/z: [ESI+] 1227.8 (M+H) +, (C 63H 73N 5O 16SF 2)。
N-(6-(4-(N-(17-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- 1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 20 ) 之合成
Figure 02_image609
將N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((14-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(210 mg，0.17 mmol)於4 M HCl/甲醇(2 mL)中之溶液在15℃下攪拌2 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以67% B運行梯度，梯度：67%-67% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量172 mg (96%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.05 (m, 4H), 7.97 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.79-7.78 (m, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.38 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 8.4 Hz, 3H), 7.15 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.04-6.99 (m, 4H), 4.16 (d, J= 4.0 Hz, 2H), 3.85 (d, J= 4.0 Hz, 2H), 3.69-3.68 (m, 2H), 3.69-3.59 (m, 10H), 3.55-3.54 (m, 2H), 3.48-3.44 (m, 4H), 3.09-3.07 (m, 2H), 2.47-2.42 (m, 2H), 1.74 (s, 2H), 1.34 (s, 2H), 0.71 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.87 (s). m/z: [ESI+] 1027.8 (M+H) +, (C 53H 57N 5O 12SF 2)。 實例67：N-(6-(4-(N-(20-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)胺磺醯基)苯基)吡啶-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺(嵌合分子21)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((20-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image611
向N-(5-(4-((20-胺基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-3-(4-(苯甲氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(200 mg，0.19 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液中添加TEA (36 mg，0.35 mmol)及DMAP (2 mg，0.018 mmol)將溶液冷卻至0℃，且添加4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯-1-磺醯基氯化物(89 mg，0.018 mmol)。將混合物在25℃下攪拌2 h，傾入水(10 mL)中，且用二氯甲烷(2 × 5 mL)萃取。真空濃縮經合併之有機層。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物。在真空中濃縮含有產物之溶離份且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取所得水層。有機萃取物經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈無色膠狀之標題化合物。
產量120 mg (49%)。m/z: [ESI+] 1360.5 (M+H) +, (C 72H 83N 5O 17SF 2)。
N-(5-(4-((20-(4-(6-(1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 苯基磺醯胺基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image613
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((20-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(120 mg，0.088 mmol)於甲醇(1 mL)中之溶液中添加鈀/碳(36 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在30℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌12 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量120 mg (93%)。m/z: [ESI+] 1270.4 (M+H) +, (C 65H 77N 5O 17SF 2)。
N-(6-(4-(N-(20-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- 1-(2,2- 二氟苯并 [d][1,3] 二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 環丙烷甲醯胺 ( 嵌合分子 21 ) 之合成
Figure 02_image615
將N-(5-(4-((20-(4-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)環丙烷甲醯胺基)吡啶-2-基)苯基磺醯胺基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(120 mg，0.083 mmol)於4 M HCl/甲醇(2 mL)中之溶液在20℃下攪拌12 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以40% B運行梯度，梯度：40%-70% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量65 mg (72%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.10-7.94 (m, 6H), 7.73 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.39-7.37 (m, 1H), 7.28 (d, J= 8.4 Hz, 3H), 7.15 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.04-6.99 (m, 4H), 4.17-4.14 (m, 2H), 3.86-3.83 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 2H), 3.65-3.63 (m, 2H), 3.60-3.57 (m, 12H), 3.55-3.53 (m, 2H), 3.48-3.43 (m, 4H), 3.09-3.06 (m, 2H), 2.47-2.41 (m, 2H), 1.73-1.71 (m, 2H), 1.32-1.30 (m, 2H), 0.71 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -51.87 (s). m/z: [ESI+] 1070.5 (M+H) +, (C 55H 61N 5O 13SF 2)。 實例68：(S)-6-(3-((14-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子31)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((14-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image617
向4-甲基苯磺酸14-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基酯(205 mg，0.21 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(100 mg，0.21 mmol)及碳酸鉀(58 mg，0.42 mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16 h，過濾且用DMF (3×0.5 mL)洗滌濾餅。在真空中濃縮濾液且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量151 mg (53%) m/z: [ESI+] 637.1 (M/2+H) +, (C 67H 85N 9O 14S)。
N-(5-(4-((14-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image619
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((14-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁基酯(151 mg，0.11 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加鈀/碳(30 mg，10% w/w)。將混合物脫氣且用氫吹掃三次，在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h，經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量128 mg (89%) m/z: [ESI+] 1182.8 (M+H) +, (C 60H 79N 9O 14S)。
(S)-6-(3-((14-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 31) 之合成
Figure 02_image621
將N-(5-(4-((14-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(128 mg，0.099 mmol)於4 M HCl/甲醇(4 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。在真空中移除溶劑且將殘餘物溶解於DMF (1 mL)中，且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量44 mg (45%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.24 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.26-7.24 (m, 2H), 7.17-7.12 (m, 2H), 7.02 (s, 1H), 7.00-6.99 (m, 2H), 6.98-6.96 (m, 2H), 5.99 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.38-4.36 (m, 2H), 4.15-4.12(m, 2H), 3.87-3.83 (m, 7H), 3.70-3.63 (m, 12H), 2.73 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.46-2.40 (m, 5H), 2.30-2.22 (m, 1H), 1.90-1.89 (m, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 1.49 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.69 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。m/z: [ESI+] 982.6 (M+H)+, (C 50H 63N 9O 10S)。 實例69：(S)-6-(3-(2-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子115)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image623
在25℃下向(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(100 mg，0.21 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加4-甲基苯磺酸2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙酯(177 mg，0.21 mmol)及碳酸鉀(58 mg，0.42 mmol)。將反應物在50℃下攪拌12 h且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化。在真空中濃縮含有產物之溶離份以移除大部分乙腈。凍乾水溶液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量130 mg (52%)。m/z: [ESI+] 1140.4 (M+H) +, (C 61H 73N 9O 11S)。
N-(5-(4-(2-(2-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯
Figure 02_image625
在25℃向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯((130 mg，0.11 mmol)於甲醇(15 mL)中之溶液中添加鈀/碳(79 mg，10% w/w)。將混合物在30℃下在氫氣氛圍(15 psi)下攪拌12 h。藉由過濾移除催化劑且用二氯甲烷(2 × 100 mL)洗滌。在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量76 mg (65%)。m/z: [ESI+] 1050.4 (M+H) +, (C 54H 67N 9O 11S)。
(S)-6-(3-(2-(2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 115 ) 之合成
Figure 02_image627
將N-(5-(4-(2-(2-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(76 mg，0.072 mmol)於4 M HCl/甲醇(2 mL)中之溶液在20℃下攪拌12 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物。在真空中濃縮含有產物之溶離份以移除大部分乙腈。凍乾水溶液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量40 mg (64%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 13.58-13.45 (m, 1H), 12.38-12.10 (m, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.19 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.77-7.72 (m, 2H), 7.30-7.28 (m, 2H), 7.12 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 7.05-7.03 (m, 3H), 6.95-6.90 (m, 3H), 6.12 (s, 1H), 4.36 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 3.84-3.80 (m, 7H), 2.50-2.39 (m, 2H), 2.32 (s, 5H), 2.22-2.17 (m, 1H), 1.90-1.73 (m, 1H), 1.55-1.53 (m, 6H), 1.45-1.39 (m, 1H), 0.82 (d, J= 4.8 Hz, 3H), 0.63-0.60 (m, 3H). m/z: [ESI+] 850.4 (M+H) +(C 44H 51O 7N 9S)。 實例70：(S)-6-(3-((17-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子32)
N-[3-(4- 苯甲氧基苯基 )-5-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[1-[5-[(1,3- 二甲基吡唑 -4- 基 ) 磺醯基胺甲醯基 ]-6-[(4S)-2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ]-2- 吡啶基 ] 吡唑 -3- 基 ] 氧基乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 苯基 ]-4- 乙基 -2- 吡啶基 ]-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image629
向4-甲基苯磺酸17-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基酯(214 mg，0.21 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(100 mg，0.21 mmol)及碳酸鉀(58 mg，0.42 mmol)。將混合物在50℃下攪拌16 h，過濾，蒸發濾液且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以40% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量129 mg (44%) m/z: [ESI+] 659.2 (M/2+H) +, (C 69H 89N 9O 15S)。
N-(5-(4-((17-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image631
向N-[3-(4-苯甲氧基苯基)-5-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[1-[5-[(1,3-二甲基吡唑-4-基)磺醯基胺甲醯基]-6-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基]-2-吡啶基]吡唑-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]苯基]-4-乙基-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(129 mg，0.093 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加鈀/碳(30 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌6 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量113 mg (95%) m/z: [ESI+] 1226.8 (M+H) +, (C 62H 83N 9O 15S)。
(S)-6-(3-((17-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 32) 之 合成
Figure 02_image633
將N-(5-(4-((17-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(113 mg，0.088 mmol)於4 M HCl/甲醇(4 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量43 mg (46%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.24 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.28-7.25 (m, 2H), 7.16-7.13 (m, 2H), 7.03 (s, 1H), 7.01-6.98 (m, 4H), 5.98 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.38-4.36 (m, 2H), 4.15-4.13 (m, 2H), 3.87-3.82 (m, 7H), 3.70-3.67 (m, 4H), 3.65-3.61 (m, 12H), 2.73 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 2.61-2.59 (m, 1H), 2.46-2.40 (m, 5H), 2.30-2.22(m, 1H), 1.94-1.89 (m, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.60 (s, 3H), 1.50 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.69 (t, J = 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 1026.6 (M+H) +, (C 52H 67N 9O 11S)。 實例71：(S)-6-(3-(2-(2-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子116)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-(2-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image635
向(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(100 mg,0.21 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯(187 mg，0.21 mmol)及碳酸鉀(58 mg，0.42 mmol)。接著將反應混合物在50℃下攪拌16 h，過濾且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以63% B運行梯度，梯度：63%-93% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量131 mg (51%)。m/z: [ESI+] 1184.4 (M+H) +, (C 63H 77N 9O 12S)。
N-(5-(4-(2-(2-(2-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 ) -6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )- 1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 - 3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )- N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯之合成
Figure 02_image637
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-(2-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(131 mg，0.11 mmol)於甲醇(15 mL)中之溶液中添加鈀/碳(79 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌12 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量110 mg (91%)。m/z: [ESI+] 1094.4 (M+H) +, (C 56H 71N 9O 12S)。
(S)-6-(3-(2-(2-(2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 116 ) 之合成
Figure 02_image639
將N-(5-(4-(2-(2-(2-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(110 mg，0.1 mmol)於25℃的4 M HCl/甲醇(2 mL)中之溶液在20℃下攪拌12 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物。在真空中濃縮含有產物之溶離份以移除大部分乙腈。凍乾水溶液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量52 mg (55%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 13.56-13.13 (m, 1H), 12.35-12.04 (m, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.19 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.76-7.71 (m, 2H), 7.29-7.26 (m, 2H), 7.12 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.04-7.02 (m, 3H), 6.95-6.89 (m, 3H), 6.12 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 4.33-4.31 (m, 2H), 4.13-4.11 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.78-3.75 (m, 4H), 3.62 (s, 4H), 2.43-2.39 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.29-2.27 (m, 2H), 2.21-2.13 (m, 1H), 1.89-1.85 (m, 1H), 1.55-1.49 (m, 6H), 1.44-1.38 (m, 1H), 0.81 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.61 (t, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 894.4 (M+H) +(C 46H 55O 8N 9S)。 實例72：(S)-6-(3-((17-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子33)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((20-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁酯之 合成
Figure 02_image641
向4-甲基苯磺酸20-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基酯(224 mg，0.21 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(100 mg，0.21 mmmol)及碳酸鉀(58 mg，0.42 mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16 h且過濾，且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量140 mg (47%) m/z: [ESI+] 1361.0 (M+H) +, (C 71H 93N 9O 16S)。
N-(5-(4-((20-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯之合成
Figure 02_image643
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((20-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(140 mg，0.099 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加鈀/碳(30 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣且用氫(15 psi)吹掃三次且在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌6 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量120 mg (91%) m/z: [ESI+] 1270.9 (M+H) +, (C 64H 87N 9O 16S)。
(S)-6-(3-((17-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 33) 之 合成
Figure 02_image645
將N-(5-(4-((20-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(120 mg，0.09 mmol)於4 M HCl/甲醇(4 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。在真空中濃縮反應混合物，將殘餘物溶解於DMF (1 mL)中，且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量57 mg (57%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.24 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.28-7.25 (m, 2H), 7.16-7.13 (m, 2H), 7.03 (s, 1H), 7.01-6.98 (m, 4H), 5.98 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.38-4.36 (m, 2H), 4.15-4.13 (m, 2H), 3.87-3.82 (m, 7H), 3.70-3.67 (m, 4H), 3.65-3.61 (m, 12H), 2.73 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 2.61-2.59 (m, 1H), 2.46-2.40 (m, 5H), 2.30-2.22(m, 1H), 1.94-1.89 (m, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.60 (s, 3H), 1.50 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.70 (t, J = 7.2 Hz, 3H).. m/z: [ESI+] 1070.7 (M+H) +, (C 54H 71N 9O 11S)。 實例73：(S)-6-(3-(2-(2-(2-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子117)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-(2-(2-(2-(2-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image647
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯(195 mg，0.21 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(100 mg，0.21 mmol)及碳酸鉀(58 mg，0.42 mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16 h且過濾，用DMF (3×0.5 mL)洗滌濾餅。在真空中濃縮濾液且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量154 mg (57%)。m/z: [ESI+] 1228.9 (M+H) +, (C 65H 81N 9O 13S)。
N-(5-(4-(2-(2-(2-(2-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯之合成
Figure 02_image649
向N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-(2-(2-(2-(2-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(154 mg，0.12 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加鈀/碳(30 mg，10% w/w)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量130 mg (89%)。m/z: [ESI+] 1138.7 (M+H) +, (C 58H 75N 9O 13S)。
(S)-6-(3-(2-(2-(2-(2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 117) 之合成
Figure 02_image651
將N-(5-(4-(2-(2-(2-(2-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(130 mg，0.12 mmol)於4 M HCl/甲醇(4 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。在真空中濃縮反應混合物，將殘餘物溶解於DMF (1 mL)中，且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量16 mg (15%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.24 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.23-7.21 (m, 2H), 7.16-7.14 (m, 2H), 7.00-6.96 (m, 5H), 5.99 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.38-4.37 (m, 2H), 4.13-4.12 (m, 2H), 3.87-3.84 (m, 7H), 3.72-3.67 (m, 8H), 2.74 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.46-2.42 (m, 5H), 2.41-2.39 (m, 1H), 1.90-1.89 (m, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 1.50 (t, J = 13.6 Hz, 1H), 0.91 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.68 (t, J = 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 938.5(M+H) +, (C 48H 59N 9O 9S)。 實例74：(S)-6-(3-((14-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)十四基)氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子118)
N-(3-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-5-(4-((14-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 ) 十四基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁酯之 合成
Figure 02_image653
將(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(120 mg，0.25 mmol)、4-甲基苯磺酸14-[4-[5-(4-苯甲氧基苯基)-6-[雙(三級丁氧基羰基)胺基]-4-乙基-3-吡啶基]苯氧基]十四烷基酯(269 mg，0.28 mmol)及碳酸鉀(70 mg，0.51 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物在50℃下攪拌16 h。將反應混合物傾入水(10 mL)中，且用二氯甲烷(3 × 20 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由prep-TLC (SiO 2，石油醚:乙酸乙酯2:1)純化殘餘物，得到呈淺黃色膠狀之標題化合物。
產量200 mg (54%) m/z: [ESI+] 1265.4 (M+H) +, (C 71H 93N 9O 10S)。
N-(5-(4-((14-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 ) 十四烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁酯之 合成
Figure 02_image655
在氮氣下向鈀/碳(25 mg，0.14 mmol，10% w/w)之甲醇(10 mL)中添加N-(3-(4-(苯甲氧基)苯基)-5-(4-((14-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(200 mg，0.14 mmol)。將混合物在真空下脫氣，用氫(15 psi)吹掃三次且在50℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌3 h。經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈淡黃色膠狀之標題化合物。
產量150 mg (85%)。m/z: [ESI+] 1174.5 (M+H) +, (C 64H 87N 9O 10S)。
(S)-6-(3-((14-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 十四烷基 ) 氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 118) 之合成
Figure 02_image657
將N-(5-(4-((14-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(150 mg，0.12 mmol)於4 M HCl/甲醇(21 mL)中之溶液在25℃下攪拌24 h。將反應混合物在真空中濃縮。將殘餘物溶解於DMSO (1 mL)中且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 10 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以60% B運行梯度，梯度：60%-90% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量36 mg (29%) 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.66-12.11 (m, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.18 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.11 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.00 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.94 (d, J= 8.4 Hz, 3H), 6.90 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.09 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 4.18 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.97 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.55-2.54 (m, 1H), 2.41 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 2.32-2.27 (m, 5H), 2.23-2.14 (m, 1H), 1.89-1.85 (m, 1H), 1.74-1.68 (m, 4H), 1.54 (d, J= 10.8 Hz, 6H), 1.44 (s, 1H), 1.41-1.38 (m 2H), 1.25 (s, 18H), 0.81 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.62 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 974.5 (M+H) +, (C 54H 71N 9O 6S)。 實例75：(S)-6-(3-((15-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-15-側氧基-3,6,9,12-四氧雜十五烷基)氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子34)
N-(5-(4-(3-(4-(1-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十五烷 -15- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image659
向N-[(5-(4-(3-(4-(1-溴-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(220 mg，0.2 mmol)於DMF (1.5 mL)中之溶液中添加(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(94 mg，0.2 mmol)及碳酸鉀(55 mg，0.4 mmol)。將反應混合物在70℃下攪拌5 h，使其冷卻且過濾，用DMF (3 × 0.5 mL)洗滌濾餅。藉由prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm 10µm；移動相：[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨水溶液)，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量100 mg (38%) (C 68H 93N 11O 15S)。
(S)-6-(3-((15-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-15- 側氧基 -3,6,9,12- 四氧雜十五烷基 ) 氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 34) 之合成
Figure 02_image661
將N-(5-(4-(3-(4-(1-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(100 mg，0.075 mmol)於4 M HCl/甲醇(6 mL)中之溶液在20℃下攪拌3 h。將反應混合物在真空中濃縮，且將殘餘物溶解於DMF (2 mL)中且藉由Prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm×10µm；移動相：[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以20% B運行梯度，梯度：20%-50% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量48 mg (17%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.22 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.68 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.13-7.09 (m, 4H), 6.96-6.87 (m, 5H), 5.98 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.38-4.37 (m, 2H), 4.06-4.03 (m, 2H), 3.86-3.84 (m, 5H), 3.75-3.72 (m, 2H), 3.69-3.66 (m, 2H), 3.65-3.57 (m, 14H), 2.95-2.83 (m, 2H), 2.70-2.63 (m, 6H), 2.59-2.56 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.37-2.28 (m, 2H), 2.26-2.20 (m, 1H), 2.06-1.99 (m, 2H), 1.90-1.86 (m, 1H), 1.57 (d, J= 8.4 Hz, 6H), 1.51-1.44 (m, 1H), 0.91 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.67 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 1137.3 (M+H) +, C 58H 77N 11O 11S)。 實例76：(S)-6-(3-((18-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-18-側氧基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷基)氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子35)
N-(5-(4-(3-(4-(1-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷 -18- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image663
向4-甲基苯磺酸18-(4-(3-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-18-側氧基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷基酯(282 mg，0.19 mmol)及(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(89 mg，0.19 mmol)於DMF (1.5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(52.0 mg，0.38 mmol)。將混合物在25℃下攪拌5 h且過濾。在真空中蒸發濾液，且藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以52% B運行梯度，梯度：52%-82% B，在20 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量56 mg (20%)。m/z: [ESI+] 1381.7 (M+H) +,  (C 70H 97N 11O 16S)。
(S)-6-(3-((18-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-18- 側氧基 -3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷基 ) 氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 35) 之合成
Figure 02_image665
將N-(5-(4-(3-(4-(1-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(56 mg，0.038 mmol)於4 M HCl/甲醇(6 mL)中之溶液在20℃下攪拌2 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC(管柱：Waters XBridge 150×25 mm 10µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以20% B運行梯度，梯度：20%-50% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量13 mg (28%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.22 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.15-7.08 (m, 4H), 6.96-6.89 (m, 5H), 5.98 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 4.39-4.37 (m, 2H), 4.07-4.04 (m, 2H), 3.86-3.84 (m, 5H), 3.75-3.72 (m, 2H), 3.69-3.68 (m, 2H), 3.66-3.63 (m, 6H), 3.62-3.58 (m, 12H), 2.94-2.82 (m, 2H), 2.71-2.65 (m, 6H), 2.59-2.57 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.38-2.32 (m, 2H), 2.26-2.22 (m, 1H), 2.07-2.00 (m, 2H), 1.90-1.86 (m, 1H), 1.58 (d, J= 8.0 Hz, 6H), 1.51-1.45 (m, 1H), 0.91 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.67 (t, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 1181.3 (M+H) +, (C 60H 81N 11O 12S)。 實例77：(S)-6-(3-((21-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷基)氧基)-1H-吡唑-1-基)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(嵌合分子36)
N-(5-(4-(3-(4-(1-((1-(5-(((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 ) 胺甲醯基 )-6-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷 -21- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 (S)- 三級丁 酯 之 合成
Figure 02_image667
向4-甲基苯磺酸21-(4-(3-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷基酯(281 mg，0.18 mmol)及(S)-N-((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)-6-(3-羥基-1H-吡唑-1-基)-2-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)菸鹼醯胺(86.5 mg，0.18 mmol)於DMF (1.5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(50.5 mg，0.36 mmol)。將混合物在70℃下攪拌5 h且過濾，且藉由prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm 10 µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量94 mg (33%) m/z: [ESI+] 1425.7 (M+H) +, (C 72H 101N 11O 17S)。
(S)-6-(3-((21-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-21- 側氧基 -3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷基 ) 氧基 )-1H- 吡唑 -1- 基 )-N-((1,3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 磺醯基 )-2-(2,2,4- 三甲基吡咯啶 -1- 基 ) 菸鹼醯胺 ( 嵌合分子 36) 之合成
Figure 02_image669
將N-(5-(4-(3-(4-(1-((1-(5-(((1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)磺醯基)胺甲醯基)-6-(2,2,4-三甲基吡咯啶-1-基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基)氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸(S)-三級丁酯(94 mg，0.061 mmol)於4 M HCl/甲醇(6 mL)中之溶液在20℃下攪拌2 h，藉由Prep-HPLC (管柱：Waters XBridge 150×25 mm×10µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以20% B運行梯度，梯度：20%-50% B，在11 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量18 mg (23%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.22 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.16-7.15 (m, 2H), 7.14-7.08 (m, 2H), 6.96-6.90 (m, 5H), 5.97 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 4.39-4.38 (m, 2H), 4.07-4.04 (m, 2H), 3.86-3.84 (m, 5H), 3.75-3.72 (m, 2H), 3.69-3.68 (m, 2H), 3.66-3.58 (m, 22H), 2.93-2.81 (m, 2H), 2.71-2.63 (m, 6H), 2.59-2.57 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.38-2.32 (m, 2H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.06-2.00 (m, 2H), 1.90-1.86 (m, 1H), 1.58 (d, J= 10.8 Hz, 6H), 1.51-1.45 (m, 1H), 0.91 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.67 (t, J= 7.2 Hz , 3H). m/z: [ESI+] 1225.4 (M+H) +, (C 62H 85N 11O 13S)。 實例78：5-((14-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸(嵌合分子43)
5-((14-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 )-8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 甲 酯 之合成
Figure 02_image671
向4-甲基苯磺酸14-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-5-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基酯(120 mg，0.12 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(33 mg，0.24 mmol)及5-羥基-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(46 mg，0.12 mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16 h，傾入水(5 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 5 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(4 × 5 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量400 mg (粗物質) m/z: [ESI+] 1056.3 (M+H) +, (C 60H 69N 3O 14)。
5-((14-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 )-8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 甲 酯 之合成
Figure 02_image673
將5-((14-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(400 mg，0.38 mmol)於4 M HCl/乙酸乙酯(1.42 mL)中之溶液在20℃下攪拌9 h。向反應混合物中添加DMF (3 mL)且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05%氨水溶液，溶劑B：乙腈]；以65% B運行梯度，梯度：65%-95%B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化所得混合物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量40 mg (12%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.93 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.61 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 7.56-7.52 (m, 2H), 7.38 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.30 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.08 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.06-7.02 (m, 2H), 6.70-6.95 (m, 2H), 6.90 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.28-4.25 (m, 2H), 4.04-4.02 (m, 5H), 3.90-3.87 (m, 2H), 3.80-3.76 (m, 2H), 3.71-3.69 (m, 4H), 3.63 (s, 8H), 2.85 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 2.30-2.24 (m, 2H), 0.60 (t, d, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 856.2 (M+H) +, (C 50H 53N 3O 10)。
5-((14-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 ) 氧基 )-8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 ( 嵌合分子 43) 之 合成
Figure 02_image675
向5-((14-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(40 mg，0.046 mmol)於水(0.3 mL)、THF (0.3 mL)及甲醇(0.3 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(49 mg，1.16 mmol)。將反應混合物在70℃下攪拌32 h且在真空中濃縮。將殘餘物用水(3 mL)溶解，用1 M鹽酸(2 mL)調節至pH 2至3，且用乙酸乙酯(3 × 3 mL)萃取混合物。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150×25 mm×10µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以39% B運行梯度，梯度：39%-69% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量9 mg (23%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.93 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.54-7.51 (m, 3H), 7.37 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.30 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.10-7.07 (m, 2H), 7.04-7.01 (m, 2H), 6.96-6.93 (m, 3H), 6.89-6.82 (m, 2H), 4.26 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 4.10-4.02 (m, 2H), 3.94-3.92 (m, 2H), 3.80-3.74 (m, 4H), 3.72-3.70 (m, 2H), 3.66-3.64 (m, 8H), 2.85 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 2.34-2.28 (m, 2H), 0.61-0.56 (m, 3H). m/z: [ESI+] 842.2 (M+H) +, (C 49H 51N 3O 10)。 實例79：5-((17-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸(嵌合分子44)
5-((17-(4-(5-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 乙基吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 )-8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 甲 酯 之合成
Figure 02_image677
向4-甲基苯磺酸17-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基酯(218 mg，0.22 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加5-羥基-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(62 mg，0.18 mmol)及碳酸鉀(50 mg，0.36 mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16 h，傾入水(5 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 5 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(2 × 5 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150×25 mm×10 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量130 mg (61%) m/z: [ESI+] 1190.4 (M+H) +, (C 69H 79N 3O 15)。
5-((17-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 )-8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 甲 酯 之合成
Figure 02_image679
向5-((17-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(130 mg，0.11 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加鈀/碳(20 mg，10% w/w)。將反應混合物在25℃下在氫氛圍(15 psi)下攪拌16 h且經由Celite ®過濾。在真空中濃縮濾液且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以70% B運行梯度，梯度：70%-100% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量80 mg (67%) m/z: [ESI+] 1100.0 (M+H) +, (C 62H 73N 3O 15)。
5-((17-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 ) 氧基 )-8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 ( 嵌合分子 44) 之 合成
Figure 02_image681
向5-((17-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(80 mg，0.073 mmol)於甲醇(0.5 mL)、THF (0.5 mL)及水(0.5 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(61 mg，1.45 mmol)。將混合物在70℃下攪拌16 h，在真空中濃縮，且將殘餘物溶解於水(3 mL)中。用1 M鹽酸(2 mL)將水溶液調節至pH 5至6，且用二氯甲烷(3 × 5 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以45% B運行梯度，梯度：45%-75% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化粗產物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量31 mg (44%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.96 (s, 1H), 7.70 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.59-7.55 (m, 3H), 7.42-7.38 (m, 1H), 7.34-7.30 (m, 1H), 7.15-7.13 (m, 2H), 7.07-7.03 (m, 2H), 7.00-6.98 (m, 1H), 6.97-6.94 (m, 2H), 6.93-6.91 (m, 2H), 4.28 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 4.05 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.94 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.77-3.75 (m, 4H), 3.72-3.70 (m, 2H), 3.67-3.60 (m, 12H), 2.88 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 2.38-2.32 (m, 2H), 0.62 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 886.2 (M+H) +, (C 51H 55N 3O 11)。 實例80：5-((20-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸(嵌合分子163)
5-((20-(4-(5-(4-( 苯甲氧基 ) 苯基 )-6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 乙基吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷基氧基 )-8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 甲 酯 之合成
Figure 02_image683
向4-甲基苯磺酸20-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基酯(228 mg，0.22 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加5-羥基-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(62 mg，0.18 mmol)及碳酸鉀(50 mg，0.36 mmol)。將混合物在50℃下攪拌16 h且過濾，且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-70% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液。
產量130 mg (59%) m/z: [ESI+] 1234.5 (M+H) +, (C 71H 83N 3O 16)。
5-((20-(4-(6-( 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 )-8- 甲基 -2-( 3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 甲 酯 之合成
Figure 02_image685
向5-((20-(4-(5-(4-(苯甲氧基)苯基)-6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(130 mg，0.11 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加鈀/碳(20 mg，10% w/w)。將混合物在真空中脫氣且用氫(15 psi)吹掃三次。將反應混合物在25℃下在氫氣(15 psi)下攪拌16 h且經由Celite ®過濾，且在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量80 mg (66%) m/z: [ESI+] 1144.3 (M+H) +, (C 64H 77N 3O 16)。
5-((20-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 ) 氧基 )-8- 甲基 -2-(3- 甲基苯并呋喃 -2- 基 ) 喹啉 -4- 甲酸 ( 嵌合分子 163) 之 合成
Figure 02_image687
向5-((20-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)-8-甲基-2-(3-甲基苯并呋喃-2-基)喹啉-4-甲酸甲酯(80 mg，0.07 mmol)於甲醇(0.5 mL)、THF (0.5 mL)及水(0.5 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(59 mg，1.4 mmol)。將反應混合物在70℃下攪拌16 h。在真空中移除溶劑且將殘餘物溶解於水(3 mL)中，用1 M鹽酸(2 mL)調節至pH 5至6，且用二氯甲烷(3 × 5mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以45% B運行梯度，梯度：45%-75% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量35 mg (46%) 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.96 (s, 1H), 7.71 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.60-7.55 (m, 3H), 7.43-7.39 (m, 1H), 7.34-7.30 (m, 1H), 7.13-7.10 (m, 2H), 7.05-7.02 (m, 2H), 6.99-6.97 (m, 1H), 6.97-6.94 (m, 2H), 6.91-6.89 (m, 2H), 4.30 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 4.05-4.03 (m, 2H), 3.96-3.93 (m, 2H), 3.79-3.71 (m, 6H), 3.68-3.65 (m, 2H), 3.63-3.60 (m, 4H), 3.60-3.57 (m, 6H), 3.55 (s, 4H), 2.89 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 2.37-2.31 (m, 2H), 0.61 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 930.2 (M+H) +,  (C 53H 59N 3O 12)。 實例81：N-(14-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)-3-苯基異㗁唑-5-甲醯胺(嵌合分子49)
N-(4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 )-5-(4-((1- 側氧基 -1-(3- 苯基異㗁唑 -5- 基 )-5,8,11,14- 四氧雜 -2- 氮雜十六烷 -16- 基 ) 氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image689
向3-苯基異㗁唑-5-甲酸(40 mg，0.21 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加HATU (121 mg，0.32 mmol)及DIEA (54.7 mg，0.42 mmol)。將混合物在25℃下攪拌30 min且添加N-(5-(4-((14-胺基-3,6,9,12-四氧雜十四烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(184 mg，0.25 mmol)。將混合物在25℃下攪拌1.5 h且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以51% B運行梯度，梯度：51%-81% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物。在真空中濃縮含有產物之溶離份以移除大部分乙腈。凍乾水溶液，得到呈淡黃色膠狀之標題化合物。
產量100 (51%)。m/z: [ESI+] 897.2 (M+H) +, (C 49H 60N 4O 12)。
N-(14-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十四烷基 )-3- 苯基異㗁唑 -5- 甲醯胺 ( 嵌合分子 49) 之 合成
Figure 02_image691
將N-(4-乙基-3-(4-羥基苯基)-5-(4-((1-側氧基-1-(3-苯基異㗁唑-5-基)-5,8,11,14-四氧雜-2-氮雜十六烷-16-基)氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(100 mg，0.11 mmol)於4 M HCl/甲醇(1 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。將混合物在真空中濃縮且藉由Prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以25% B運行梯度，梯度：25%-55% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物。在真空中濃縮含有產物之溶離份以移除大部分乙腈。凍乾水溶液，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量22 mg (29%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.87 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.50 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 7.19 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.09 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.98-6.92 (m, 4H), 4.13 (m, 2H), 3.84-3.82 (m, 2H), 3.70-3.65 (m, 14H), 3.58 (m, 2H), 2.37-2.32 (m, 2H), 0.68 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 697.3 (M+H) +, (C 39H 44N 4O 8)。 實例82：N-(17-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)-3-苯基異㗁唑-5-甲醯胺(嵌合分子50)
N-(4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 )-5-(4-((1- 側氧基 -1-(3- 苯基異㗁唑 -5- 基 )-5,8,11,14,17- 五氧雜 -2- 氮雜十九烷 -19- 基 ) 氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image693
向3-苯基異㗁唑-5-甲酸(50 mg，0.27 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加HATU (144 mg，0.38 mmol)及DIEA (65 mg，0.088 mmol)。將混合物在25℃下攪拌0.5 h，且添加N-(5-(4-((17-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(249 mg，0.25 mmol)且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 100 ×30 mm×5 µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以55% B運行梯度，梯度：55%-85% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量154 mg (62%)。m/z: [ESI+] 941.5 (M+H) +, (C 51H 64O 13N 4)。
N-(17-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十七烷基 )-3- 苯基異㗁唑 -5- 甲醯胺 ( 嵌合分子 50) 之 合成
Figure 02_image695
將N-(4-乙基-3-(4-羥基苯基)-5-(4-((1-側氧基-1-(3-苯基異㗁唑-5-基)-5,8,11,14,17-五氧雜-2-氮雜十九烷-19-基)氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(154 mg，0.16 mmol)於4 M HCl/甲醇(2 mL)中之溶液在20℃下攪拌12 h且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以23% B運行梯度，梯度：23%-53%B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化。在真空中濃縮含有產物之溶離份以移除乙腈且凍乾所得溶液，得到呈棕色固體狀之標題化合物。
產量13 mg (14%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 9.82 (s, 1H), 9.04 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.90 (m, 2H), 7.78 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.50 (d, J= 2.8 Hz, 3H), 7.29 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.11 (d, J= 8.4 Hz, 4H), 7.03 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.94 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 4.13 (m, 2H), 3.76 (m, 2H), 3.58-3.35 (m, 20H), 2.33-2.27 (m, 2H), 0.61 (t, J= 7.6 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 741.3 (M+H) +, (C 41H 48N 4O 9)。 實例83：N-(20-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)-3-苯基異㗁唑-5-甲醯胺(嵌合分子51)
N-(4- 乙基 -3-(4- 羥基苯基 )-5-(4-((1- 側氧基 -1-(3- 苯基異㗁唑 -5- 基 )-5,8,11,14,17,20- 六氧雜 -2- 氮雜二十二烷 -22- 基 ) 氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image697
向3-苯基異㗁唑-5-甲酸(49 mg，0.26 mmol)於DMF (2.5 mL)中之溶液中添加HATU (140 mg，0.37 mmol)及DIEA (63 mg，0.49 mmol)。將混合物在25℃下攪拌30 min，且添加N-(5-(4-((20-胺基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十烷基)氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-羥基苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(254 mg，0.25 mmol)且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 100×30 mm×5 µm；移動相[溶劑A：水(10 mM碳酸氫銨)，溶劑B：乙腈]；以55% B運行梯度，梯度：55%-85% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量113 mg (46%)。m/z: [ESI+] 985.5 (M+H) +, (C 53H 66O 14N 4)。
N-(20-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十烷基 )-3- 苯基異㗁唑 -5- 甲醯胺 ( 嵌合分子 51 ) 之合成
Figure 02_image699
將N-(4-乙基-3-(4-羥基苯基)-5-(4-((1-側氧基-1-(3-苯基異㗁唑-5-基)-5,8,11,14,17,20-六氧雜-2-氮雜二十二烷-22-基)氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(113 mg，0.11 mmol)於4 M HCl/甲醇(2 mL)中之溶液在20℃下攪拌12 h且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以23% B運行梯度，梯度：23%-53% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量45 mg (48%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.89-7.86 (m, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.51-7.49 (m, 3H), 7.39 (s, 1H), 7.27 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.15 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.04-6.98 (m, 4H), 4.16 (d, J= 4.0 Hz, 2H), 3.86-3.85 (m, 2H), 3.65-3.58 (m, 24H), 2.46-2.41 (m, 2H), 0.72-0.68 (m, 3H). m/z: [ESI+] 785.4 (M+H) +, (C 43H 52N 4O 10) 實例84：N-(15-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-15-側氧基-3,6,9,12-四氧雜十五烷基)-3-苯基異㗁唑-5-甲醯胺(嵌合分子52)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(1- 側氧基 -1-(3- 苯基異㗁唑 -5- 基 )-5,8,11,14- 四氧雜 -2- 氮雜十七烷 -17- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image701
向3-苯基異㗁唑-5-甲酸(40 mg，0.21 mmol)於DMF (3mL)中之溶液中添加DIEA (54.6 mg，0.42 mmol)及HATU (120 mg，0.32 mmol).將混合物在25℃下攪拌30 min，添加N-[5-[4-[3-[4-[3-[2-[2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙醯基]哌𠯤-1-基]丙氧基]苯基]-3-[4-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基苯基]-4-乙基-2-吡啶基]-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(292 mg，0.22 mmol)，且繼續攪拌10 h。添加水(10 mL)，且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取混合物。有機萃取物經合併，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以50% B運行梯度，梯度：50%-80% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，接著凍乾，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量160 mg (65%)。m/z: [ESI+] 1051.3 (M+H) +, (C 57H 74N 6O 13)。
N-(15-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-15- 側氧基 -3,6,9,12- 四氧雜十五烷基 )-3- 苯基異㗁唑 -5- 甲醯胺 ( 嵌合分子 52) 之合成
Figure 02_image703
將N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(1-側氧基-1-(3-苯基異㗁唑-5-基)-5,8,11,14-四氧雜-2-氮雜十七烷-17-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(160 mg，0.14 mmol)於4 M HCl/甲醇(5 mL)中之溶液在25℃下攪拌12 h。濃縮混合物，且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150×25mm×10µm；移動相：[溶劑A：10 mM碳酸氫銨水溶液，溶劑B：乙腈]；以55% B運行梯度，梯度：32%-62% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化粗產物，得到呈黃色膠狀之標題化合物。
產量22 mg (19%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.89-7.87 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.50-7.48 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 7.19 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.09 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.94 (t, J= 9.6 Hz, 4H), 4.06 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.71 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.68-3.65 (m, 2H), 3.63-3.60 (m, 4H), 3.59-3.58 (m, 4H), 3.58-3.57 (m, 6H), 3.56-3.50 (m, 4H), 2.64-2.56 (m, 4H), 2.52-2.45 (m, 4H), 2.38-2.32 (m, 2H), 2.03-1.96 (m, 2H), 0.69 (t, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 851.5 (M+H) +, (C 47H 58N 6O 9)。 實例85：N-(18-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-18-側氧基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷基)-3-苯基異㗁唑-5-甲醯胺(嵌合分子53)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(1- 側氧基 -1-(3- 苯基異㗁唑 -5- 基 )-5,8,11,14,17- 五氧雜 -2- 氮雜二十烷 -20- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image705
向3-苯基異㗁唑-5-甲酸(40 mg，0.21 mmol)於DMF (3mL)中之溶液中添加HATU (121 mg，032 mmol)及DIEA (55 mg，0.42 mmol)。將混合物在25℃下攪拌0.5 h，添加N-(5-(4-(3-(4-(1-胺基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(301 mg，0.22 mmol)，且繼續攪拌12 h。將混合物傾入水(20 mL)中，且用乙酸乙酯(4 × 20 mL)萃取。合併之有機萃取物用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且過濾。在真空中濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量138 mg (54%)。m/z: [ESI+] 1095.3 (M+H) +, (C 59H 78O 14N 6)。
N-(18-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-18- 側氧基 -3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷基 )-3- 苯基異㗁唑 -5- 甲醯胺 ( 嵌合分子 53) 之合成
Figure 02_image707
將N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(1-側氧基-1-(3-苯基異㗁唑-5-基)-5,8,11,14,17-五氧雜-2-氮雜二十烷-20-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(138 mg，0.11 mmol)於4 M HCl/甲醇(5 mL)中之溶液在15℃下攪拌12 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以13% B運行梯度，梯度：13%-43% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色膠狀之標題化合物。
產量27 mg (26%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.89-7.87 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.50-7.48 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 7.19 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.09 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.94 (t, J= 8.4 Hz, 4H), 4.06 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.71 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.68-3.55 (m, 24H), 2.64-2.56 (m, 4H), 2.52-2.45 (m, 4H), 2.38-2.32 (m, 2H), 2.03-1.96 (m, 2H), 0.69 (t, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 895.5 (M+H) +,  (C 49H 62N 6O 10)。 實例86：N-(21-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷基)-3-苯基異㗁唑-5-甲醯胺(嵌合分子54)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(1- 側氧基 -1-(3- 苯基異㗁唑 -5- 基 )-5,8,11,14,17,20- 六氧雜 -2- 氮雜二十三烷 -23- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image709
向3-苯基異㗁唑-5-甲酸(40 mg，0.21 mmol)於DMF (3mL)中之溶液中添加HATU (121 mg，032 mmol)及DIEA (55 mg，0.42 mmol)。將混合物在25℃下攪拌0.5 h，添加N-(5-(4-(3-(4-(1-胺基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(288 mg，0.22 mmol)且繼續攪拌12 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量160 mg (65%)。m/z: [ESI+] 1051.3 (M+H) +, (C 61H 82O 15N 6)。
N-(21-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-21- 側氧基 -3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷基 )-3- 苯基異㗁唑 -5- 甲醯胺 ( 嵌合分子 54) 之 合成
Figure 02_image711
將N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(1-側氧基-1-(3-苯基異㗁唑-5-基)-5,8,11,14,17,20-六氧雜-2-氮雜二十三烷-23-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(150 mg，0.12 mmol)於4 M HCl/甲醇(7 mL)中之溶液在15℃下攪拌12 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以53% B運行梯度，梯度：53%-83% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色膠狀之標題化合物。
產量34 mg (31%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 7.89-7.87 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.50-7.48 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 7.19 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.09 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.94 (t, J= 8.4 Hz, 4H), 4.06 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.71 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.68-3.55 (m, 28H), 2.64-2.56 (m, 4H), 2.52-2.45 (m, 4H), 2.38-2.32 (m, 2H), 2.03-1.96 (m, 2H), 0.69 (t, J= 7.2 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 939.5 (M+H) +, (C 51H 66N 6O 11)。 實例87：N-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙基)-10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺(嵌合分子164)
N-(4- 乙基 -5-(4-(2-(10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-10- 側氧基癸醯胺基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁 酯之 合成
Figure 02_image713
在20℃下向10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸酸( L9A-10C-2) (200 mg,0.36 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加HATU (162 mg，043 mmol)及DIEA (69 mg，0.53 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min，添加N-(5-(4-(2-胺基乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(369 mg，0.39 mmol)，且繼續攪拌1 h。過濾混合物，且在真空中濃縮濾液。藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以59% B運行梯度，梯度：59%-89% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量250 mg (62%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.38-8.36(m, 1H), 8.20 (m, 1H), 7.94-7.87 (m, 1H), 7.85-7.82 (m, 2H), 7.32-7.30 (m, 1H), 7.22-7.20 (m, 1H), 7.12-7.11 (m, 2H), 7.11-7.06 (m, 2H), 5.23 (s, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.13-4.10 (m, 2H), 4.10-4.09 (m, 2H), 3.64-3.58 (m, 4H), 3.50-3.31 (m, 4H), 2.53-2.51 (m, 2H), 2.51-2.35 (m, 2H), 2.35-2.20 (m, 2H), 2.01 (s, 2H), 1.63-1.56 (m, 4H), 1.38-1.35 (m, 18H), 1.35-1.32 (m, 9H), 0.73 (t, J= 8.0 Hz, 3H). m/z: [ESI+] 1126.4 (M+) +, (C 63H 76FN 7O 11)。
N-(2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -10- 側氧基癸醯胺 ( 嵌合分子 164 ) 之 合成
Figure 02_image715
將N-(4-乙基-5-(4-(2-(10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)乙氧基)苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(250 mg，0.22 mmol)於4 M HCl/甲醇(5 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h且在真空中濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[水(0.05% HCl)-乙腈]；B%：22%-52%，10 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量158 mg (81%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.37 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.94-7.86 (m, 1H), 7.86-7.85 (m, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.31-7.29 (m, 1H), 7.29-7.17 (m, 1H), 7.16 (m, 2H), 7.15-7.06 (m, 3H), 7.05 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.99 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.09 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.65-3.60 (m, 2H), 3.60-3.57 (m, 4H), 3.50-3.46 (m, 2H), 3.31-3.25 (m, 2H), 2.45 (m, 3H), 2.42 (m, 1H), 2.21 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 1.60-1.55 (m, 4H), 1.32 (s, 8H), 0.72 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.64 (s). m/z: [ESI+] 882.3 (M+H) +, (C 51H 56FN 7O 6)。 實例88：N-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙基)-12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基十二醯胺(嵌合分子165)
N-(4- 乙基 -5-(4-(2-(12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-12- 側氧基十二烷胺基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁 酯之 合成
Figure 02_image717
在20℃下向12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基-十二酸(200 mg，0.34 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加HATU (155 mg，0.41 mmol)及DIEA (65.7 mg，508 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min，添加N-(5-(4-(2-胺基乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(351 mg，0.37 mmol)，且繼續攪拌1 h。藉由(管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以65% B運行梯度，梯度：65%-95% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量267 mg (68%)。m/z: [ESI+] 1154.4 (M+H) +, (C 65H 80FN 7O 11)。
N-(2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙基 )-12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-12- 側氧基十二醯胺 ( 嵌合分子 165) 之合成
Figure 02_image719
將N-(4-乙基-5-(4-(2-(12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基十二烷胺基)乙氧基)苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(270 mg，0.23 mmol)於4 M HCl/甲醇(5 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以26% B運行梯度，梯度：26%-56% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量153 mg (72%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.37 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.94-7.87 (m, 1H), 7.87-7.85 (m, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.31-7.29 (m, 1H), 7.29 -7.17 (m, 1H), 7.16-7.15 (m, 2H), 7.15-7.06 (m, 3H), 7.05 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.99 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.09 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.80-3.70 (m, 4H), 3.65-3.60 (m, 2H), 3.50-3.46 (m, 2H), 3.31-3.25 (m, 2H), 2.48 -2.34 (m, 4H), 2.21 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 1.60-1.55 (m, 4H), 1.29 (s, 12H), 0.72 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.65 (s). m/z: [ESI+] 910.3 (M+H) +, (C 53H 60FN 7O 6)。 實例89：N-(2-((2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙基)胺基)乙基)-10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺(嵌合分子166)
N-(4- 乙基 -5-(4-(2-((2-(10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-10- 側氧基癸醯胺基 ) 乙基 ) 胺基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁 酯之 合成
Figure 02_image721
向N-(5-(4-(2-胺基乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(750 mg，1.11 mmol)於乙腈(10 mL)中之溶液中添加N-(2-氯乙基)-10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺(1.01 g，1.34 mmol)及碘化鉀(369 mg，2.23 mmol)。將混合物在70℃下攪拌4 h，藉由過濾移除固體，且在真空中濃縮濾液。藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex C18 250×50 mm×10 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以3% B運行梯度，梯度3%-63% B，在20 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量200 mg (粗物質)。m/z: [ESI+] 1169.5 (M+H) +, (C 65H 81FN 8O 11)。
N-(2-((2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙基 ) 胺基 ) 乙基 )-10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-10- 側氧基癸醯胺 ( 嵌合分子 166 ) 之 合成
Figure 02_image723
將N-(4-乙基-5-(4-(2-((2-(10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)乙基)胺基)乙氧基)苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(200 mg，0.17 mmol)於4 M HCl/甲醇(2 mL)中之溶液在25℃下攪拌2 h。在真空中濃縮反應混合物，且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以14% B運行梯度，梯度：14%-44% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量71 mg (44%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.39 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.96-7.87 (m, 1H), 7.87-7.85 (m, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.37-7.35 (m, 1H), 7.19-7.17 (m, 3H), 7.13-7.10 (m, 3H), 7.10-7.09 (m, 2H), 7.03-7.01 (m, 2H), 4.41 (s, 2H), 4.29-4.28 (m, 2H), 3.90-3.78 (s, 1H), 3.77-3.45 (m, 12H), 3.45-3.40 (m, 1H), 2.71-2.66 (m, 2H), 2.48-2.44 (m, 4H), 1.61-1.46 (m, 4H), 1.46-1.35 (m, 8H), 0.73 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.78 (s). m/z: [ESI+] 925.3 (M+H) +, (C 53H 61FN 8O 6)。 實例90：N-(2-((2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙基)胺基)乙基)-12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基十二醯胺(嵌合分子167)
N-(2- 氯乙基 )-12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3H- 呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-12- 側氧基 - 十二醯胺之合成
Figure 02_image725
向12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基-十二酸(5.77 g，9.97 mmol)及HOBt (1.48 g，11 mmol)於DMF (60 mL)中之溶液中添加EDCI (2.1 g，11 mmol)及DIEA (3.82 mL，21.9 mmol)。將混合物在25℃下攪拌15 min，添加2-氯乙胺鹽酸鹽(1.39 g，12.0 mmol)，且繼續攪拌2 h。將混合物傾入水(300 mL)中且且用乙酸乙酯(4 × 150 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3× 500 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且過濾。濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之標題化合物。 產量5 g (79%)。m/z: [ESI +] 640.1 (M+H) +, (C 32H 39FN 4O 5)。
N- 三級丁氧基羰基 -N-(4- 乙基 - 5-(4-(2-(2-((12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 - 3H- 呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -12- 側氧基 - 十二醯基 ) 胺基 ) 乙胺基 ) 乙氧基 ) 苯基 ) -3-(4- 羥苯基 )-2- 吡啶基 ) 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image727
向N-(5-(4-(2-胺基乙氧基)苯基)-4-乙基-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(750 mg，1.11 mmol)於乙腈(10 mL)中之溶液中添加N-(2-氯乙基)-12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基-十二醯胺(1.08 g，1.34 mmol)及碘化鉀(369 mg，2.23 mmol)。將混合物在70℃下攪拌4 h。過濾混合物且藉由Prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250×50 mm×10 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以33% B運行梯度，梯度：33%-63% B，在20 min內，在95% B下保持5 min)純化濾液，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量200 mg (14%)。m/z: [ESI+] 1153.6 (M+H) +, (C 65H 81FN 8O 10)。
N-(2-((2-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 乙基 ) 胺基 ) 乙基 )-12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-12- 側氧基十二醯胺 ( 嵌合分子 167) 之合成
Figure 02_image729
將N-三級丁氧基羰基-N-(4-乙基-5-(4-(2-(2-((12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基-十二醯基)胺基)乙胺基)乙氧基)苯基)-3-(4-羥苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯( 167-A) (200 mg，0.16 mmol)於4 M HCl/甲醇(1.87 mL)中之溶液在25℃下攪拌2 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以17% B運行梯度，梯度：17%-47% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量31 mg (20 %)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.39 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.96-7.87 (m, 1H), 7.87-7.85 (m, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.35-7.19 (m, 1H), 7.19-7.17 (m, 3H), 7.17-7.13 (m, 3H), 7.13-7.10 (m, 2H), 7.08-7.01 (m, 2H), 4.41 (s, 2H), 4.29-4.28 (m, 2H), 3.89-3.79 (s, 1H), 3.78-3.45 (m, 12H), 3.45-3.44 (m, 1H), 2.71-2.67 (m, 2H), 2.48-2.44 (m, 4H),1.60-1.59 (m, 5H), 1.43-1.31 (m, 11H), 0.75-0.71 (m, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.79 (s). m/z: [ESI+] 963.3 (M+H) +, (C 55H 65FN 8O 6)。 實例91：4-(3-(4-(1-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯基)哌𠯤-1-羰基)-4-氟苯甲基)呔𠯤-1(2H)-酮(嵌合分子168)
N-(4- 乙基 -5-(4-((15-(4 -(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-15- 側氧基 -3,6,9,12- 四氧雜十五烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯之合成
Figure 02_image731
向1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酸(797 mg，1 mmol)於DMF (8 mL)中之溶液中添加HATU (455 mg，1.2 mmol)及DIEA (193 mg，1.5 mmol)。將混合物在25℃下攪拌10 min，添加4-((4-氟-3-(哌𠯤-1-羰基)苯基)甲基)-2H-呔𠯤-1-酮(402 mg，1.1 mmol)，且繼續攪拌1 h。將混合物傾入水(50 mL)中且且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(2× 50 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥且過濾。在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物。
產量1.05 g (粗物質)。m/z: [ESI+] 799.2 (M+H) +, (C 62H 75FN 6O 14)。
4-(3-(4-(1-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12- 四氧雜十五烷 -15- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 羰基 )-4- 氟苯甲基 ) 呔 𠯤 -1(2H)- 酮 ( 嵌合分子 168) 之 合成
Figure 02_image733
將N-(4-乙基-5-(4-((15-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-15-側氧基-3,6,9,12-四氧雜十五烷基)氧基)苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.05 g，0.65 mmol)於4 M HCl/甲醇(10 mL)中之溶液在25℃下攪拌12 h，在真空中濃縮，且藉由prep-HPLC純化殘餘物兩次，第一次(管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：[水(0.05% HCl)-乙腈]；B%：30%-60%，10 min)，接著(管柱：Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 µm；移動相：[水(0.05% HCl)-乙腈]；B%：19%-49%，10 min)，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量24 mg (30%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.38 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.99-7.92 (m, 1H), 7.91-7.78 (m, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.42-7.33 (m, 1H), 7.29 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.20-7.17 (m, 3H), 7.05-6.96 (m, 4H), 4.40 (s, 2H), 4.17-4.16 (m, 2H), 3.80-3.76 (m, 4H), 3.75-3.64 (m, 8H), 3.62-3.60 (m, 5H), 3.56-3.46 (m, 5H), 3.40-3.34 (m, 1H), 3.28-3.23 (m, 1H), 2.74-2.59 (m, 2H), 2.49-2.45 (m, 2H), 0.73 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.67 (s). m/z: [ESI+] 903.2 (M+H) +, (C 50H 55FN 6O 9)。 實例92：4-(3-(4-(1-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-醯基)哌𠯤-1-羰基)-4-氟苯甲基)呔𠯤-1(2H)-酮(嵌合分子169)
N-(4- 乙基 -5-(4-((18-(4 -(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-18- 側氧基 -3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁 酯之 合成
Figure 02_image735
向1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷-18-酸(540 mg，0.64 mmol)於DMF (5 ml)中之溶液中添加HATU (293 mg，0.77 mmol)及DIEA (125 mg，0.96 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min，添加4-((4-氟-3-(哌𠯤-1-羰基)苯基)甲基)-2H-呔𠯤-1-酮(259 mg，0.71 mmol)，且繼續攪拌1 h。將混合物傾入水(50 mL)中且用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(2×50 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中移除溶劑，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量824 mg (粗物質)。m/z: [ESI+] 1020.4 (M+H) +, (C 64H 79FN 6O 15)
4-(3-(4-(1-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15- 五氧雜十八烷 -18- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 羰基 )-4- 氟苯甲基 ) 呔 𠯤 -1(2H)- 酮 ( 嵌合分子 169) 之 合成
Figure 02_image737
將N-(4-乙基-5-(4-((18-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-18-側氧基-3,6,9,12,15-五氧雜十八烷基)氧基)苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(820 mg，0.58 mmol)於4 M HCl/甲醇(8 mL)中之溶液在20℃下攪拌12 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以30% B運行梯度，梯度：30%-60% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量153 mg (27%)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.38 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 8.00-7.95 (m, 1H), 7.92-7.80 (m, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.55-7.51 (m, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.30 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.18 (m, 3H), 7.06-7.01 (m, 4H), 4.40 (s, 2H), 4.26-4.18 (m, 2H), 3.89-3.85 (m, 2H), 3.84-3.68 (m, 8H), 3.68-3.59 (m, 9H), 3.59-3.49 (m, 7H), 3.38 (m, 1H), 3.29 (m, 1H), 2.76-2.63 (m, 2H), 2.49-2.44 (m, 2H), 0.73 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.61 (s). m/z: [ESI+] 947.2 (M+H) +, (C 52H 59FN 6O 10)。 實例93：4-(3-(4-(1-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯基)哌𠯤-1-羰基)-4-氟苯甲基)呔𠯤-1(2H)-酮(嵌合分子170)
N- 三級丁氧基羰基 -N-(4- 乙基 -5-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(3-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3H- 呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-3- 側氧基 - 丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-3-(4-( 甲氧基甲氧基 ) 苯基 )-2- 吡啶基 ) 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image739
向1-(4-(6-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-乙基-5-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)吡啶-3-基)苯氧基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-酸(520 mg，0.57 mmol)於DMF (6 mL)中之溶液中添加HATU (260 mg，0.68 mmol)及DIEA (110 mg，0.85 mmol)。將混合物在25℃下攪拌20 min，添加4-((4-氟-3-(哌𠯤-1-羰基)苯基)甲基)-2H-呔𠯤-1-酮(219 mg，0.6 mmol)，且繼續攪拌2 h。將混合物傾入水(20 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 30 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液，得到呈無色膠狀之標題化合物。
產量724 mg (98%)。m/z: [ESI+] 1235.5 (M+H) +, (C 64H 79FN 6O 15)
4-(3-(4-(1-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 )-3,6,9,12,15,18- 六氧雜二十一烷 -21- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 羰基 )-4- 氟苯甲基 ) 呔 𠯤 -1(2H)- 酮 ( 嵌合分子 170) 之合成
Figure 02_image741
將N-三級丁氧基羰基-N-(4-乙基-5-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(3-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基-丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(720 mg，0.56 mmol)於4 M HCl/甲醇(1 mL)中之溶液在20℃下攪拌1 h。藉由Prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150×25 mm×10 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以67% B運行梯度，梯度：67%-97% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量207 mg (37%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.36 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.95-7.83 (m, 3H), 7.65 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.28 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.17-7.14 (m, 3H), 7.05-6.99 (m, 4H), 4.38 (s, 2H), 4.17-4.15 (m, 2H), 3.85-3.82 (m, 2H), 3.70-3.49 (m, 28H), 3.40-3.37 (m, 1H), 3.30-3.28 (m, 1H), 2.70-2.64 (m, 2H), 2.46-2.42 (m, 2H), 0.73-0.69 (m, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.68 (s).m/z: [ESI+] 991.5 (M+H) +, (C 54H 63FN 6O 11)。 實例94：N-(3-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙基)-10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺(嵌合分子171)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(3-(10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-10- 側氧基癸醯胺基 ) 丙醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image743
向10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸酸(250 mg，0.44 mmol)於DMF (2.5 mL)中之溶液中添加HATU (203 mg，0.53 mmol)及DIEA (86 mg，0.67 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min添加N-(5-(4-(3-(4-(3-胺基丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-2-吡啶基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(397 mg，0.44 mmol)，且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以50% B運行梯度，梯度：50%-80% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量195 mg (32%)。m/z: [ESI+] 1350.5 (M+H) +, (C 75H 100FN 9O 11Si)。
N-(3-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -3- 側氧基丙基 )-10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -10- 側氧基癸醯胺 ( 嵌合分子 171) 之 合成
Figure 02_image745
將N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(3-(10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(195 mg，0.14 mmol)於4 M HCl/甲醇(5 mL)中之溶液在20℃下攪拌16 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以13% B運行梯度，梯度：13%-43% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量153 mg (72%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.37 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.96-7.88 (m, 1H), 7.85-7.83 (m, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.33-7.31 (m, 1H), 7.31-7.17 (m, 1H), 7.17-7.16 (m, 2H), 7.16-7.14 (m, 3H), 7.06 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.99 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 4.87-4.67 (m, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.20-4.17 (m, 3H), 3.77-3.71 (m, 1H), 3.68-3.64 (m, 5H), 3.50-3.48 (m, 2H), 3.46-3.42 (m, 6H), 3.31-3.09 (m, 3H), 2.75-2.70 (m, 2H), 2.45-2.42 (m, 3H), 2.35-2.32 (m, 3H), 2.18-2.16 (m, 2H), 1.59 (s, 4H), 1.33 (s, 8H), 0.71 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.62 (s). m/z: [ESI+] 1036.3 (M+H) +, (C 59H 70FN 9O 7)。 實例95：N-(3-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙基)-12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基十二醯胺(嵌合分子172)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(3-(12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-12- 側氧基十二烷胺基 ) 丙醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 三級丁 酯之 合成
Figure 02_image747
在20℃下向12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基-十二酸(250 mg，0.42 mmol)於DMF (2.5 mL)中之溶液中添加HATU (193 mg，0.51 mmol)及DIEA (82 mg，0.64 mmol)。將混合物攪拌10 min，添加N-(5-(4-(3-(4-(3-胺基丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-2-吡啶基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(378 mg，0.43 mmol)，且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：YMC-Triart C18 250×50 mm×7 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以55% B運行梯度，梯度：55%-85% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物。
產量335 mg (56%)。m/z: [ESI+] 1378.5 (M+H) +, (C 77H 104FN 9O 11Si)。
N-(3-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-3- 側氧基丙基 )-12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-12- 側氧基十二醯胺 ( 嵌合分子 172) 之合成
Figure 02_image749
向N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(3-(12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基十二烷胺基)丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(340 mg，0.24 mmol)於甲醇(3 mL)中之溶液中添加4 M HCl/甲醇(10 mL)。將混合物在20℃下攪拌1 h，在真空中移除溶劑，且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150×25 mm×10 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以16% B運行梯度，梯度：16%-46% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量59 mg (24%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.37 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.94-7.88 (m, 1H), 7.88-7.83 (m, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.61-7.49 (m, 1H), 7.34-7.31 (m, 1H), 7.31-7.29 (m, 2H), 7.17-7.14 (m, 3H), 7.07 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.00 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 4.86-4.67 (m, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.20-4.17 (m, 3H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.68-3.65 (m, 5H), 3.46-3.45 (m, 2H), 3.45-3.44 (m, 6H), 3.31-3.10 (m, 3H), 2.75-2.70 (m, 2H), 2.45-2.42 (m, 3H), 2.35-2.32 (m, 3H), 2.18-2.16 (m, 2H), 1.59 (s, 4H), 1.32 (s, 12H), 0.71 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.66 (s). m/z: [ESI+] 1064.3 (M+H) +, (C 61H 74FN 9O 7)。 實例96：N-(2-((3-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)-10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺(嵌合分子173)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(3-((2-(10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-10- 側氧基癸醯胺基 ) 乙基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image751
向N-(5-(4-(3-(4-(3-胺基丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.2 g，1.40 mmol)於乙腈(15 mL)中之溶液中添加N-(2-氯乙基)-10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺(1.27 g，1.68 mmol)及碘化鉀(466 mg，2.81 mmol)。將混合物在70℃下攪拌4 h，藉由過濾移除固體，且在真空中濃縮濾液。藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250×50 mm×10 µm；移動相：[水(0.05% HCl)-乙腈]；B%：33%-63%，20min)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量400 mg (18%)。m/z: [ESI+] 1393.7 (M+H) +, (C 77H 105FN 10O 11Si)。
N-(2-((3-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-3- 側氧基丙基 ) 胺基 ) 乙基 )-10-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-10- 側氧基癸醯胺 ( 嵌合分子 173 ) 之 合成
Figure 02_image753
將N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(3-((2-(10-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)乙基)胺基)丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(400 mg，0.25 mmol)於4 M HCl/甲醇(3.5 mL)中之溶液在25℃下攪拌2 h。將混合物真空濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以10% B運行梯度，梯度：10%-40% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。
產量74 mg (27%產率)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): 8.37 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.97-7.82 (m, 3H), 7.64 (s, 1H), 7.51-7.48 (m, 1H), 7.38-7.31 (m, 3H), 7.19-7.14 (m, 3H), 7.06 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.02-6.99 (m, 2H), 4.72-4.69 (m, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.22-4.17 (m, 3H), 3.75-3.43 (m, 19H), 3.25-3.10 (m, 3H), 2.93-2.84 (m, 2H), 2.69-2.58 (m, 2H), 2.48-2.32 (m, 6H), 1.71-1.60 (m, 4H), 1.38 (br s, 8H), 0.71 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19 F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.79 (s). m/z: [ESI+] 1079.4 (M+H) +, (C 61H 75FN 10O 7)。 實例97：N-(2-((3-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)-12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基十二醯胺(嵌合分子174)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(3-((2-(12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-12- 側氧基十二烷胺基 ) 乙基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image755
向N-(5-(4-(3-(4-(3-胺基丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)-3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(1.25 g，1.46 mmol)於乙腈(15 mL)中之溶液中添加N-(2-氯乙基)-12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基-十二醯胺(1.42 g，1.75 mmol)及碘化鉀(485 mg，2.92 mmol)。將混合物在70℃下攪拌4 h。藉由過濾移出固體，且在真空中濃縮濾液。藉由Prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250×50 mm×10 µm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以33% B運行梯度，梯度：33%-63% B，在20 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量450 mg (20%)。m/z: [ESI+] 1421.7 (M+H) +, (C 79H 109FN 10O 11Si)。
N-(2-((3-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -3- 側氧基丙基 ) 胺基 ) 乙基 )-12-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -12- 側氧基十二醯胺 ( 嵌合分子 174) 之 合成
Figure 02_image757
將N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(3-((2-(12-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-12-側氧基十二烷胺基)乙基)胺基)丙醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(450 mg，0.3 mmol)於4 M HCl/甲醇(10.5 mL)中之溶液在25℃下攪拌16 h。將混合物真空濃縮。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以11% B運行梯度，梯度：11%-41% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量39 mg (11%產率)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ): 8.37 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.96-7.94 (m, 1H), 7.90-7.81 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.51-7.48 (m, 1H), 7.37-7.31 (m, 3H), 7.19-7.14 (m, 3H), 7.07 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.01-6.99 (m, 2H), 4.71-4.69 (m, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.22-4.17 (m, 3H), 3.78-3.40 (m, 19H), 3.16-3.13 (m, 3H), 2.93-2.84 (m, 2H), 2.69-2.58 (m, 2H), 2.48-2.32 (m, 6H), 1.69-1.59 (m, 4H), 1.44-1.34 (m, 12H), 0.71 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19 F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.78 (s). m/z: [ESI+] 1107.5 (M+H) +, (C 63H 79FN 10O 7)。 實例98：1-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-16-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-4,7,10,13-四氧雜十六烷-1,16-二酮(嵌合分子175)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(16-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-16- 側氧基 -4,7,10,13- 四氧雜十六烷 -1- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image759
在20℃下向3-(2-(2-(2-(3-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸( L9C-1) (312 g，0.45 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物中添加HATU (205 mg，0.54 mmol)及DIEA (87 mg，0.67 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min，添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(343 mg，449 mmol)，且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以49% B運行梯度，梯度：49%-79% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量180 mg (27%)。m/z: [ESI+] 1064.3 (M+H) +, (C 74H 99FN 8O 14Si)。
1-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 -5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-16-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-4,7,10,13- 四氧雜十六烷 -1,16- 二酮 ( 嵌合分子 175) 之 合成
Figure 02_image761
向N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(16-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-16-側氧基-4,7,10,13-四氧雜十六烷-1-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(180 mg，0.13 mmol)於甲醇(1 mL)中之溶液中添加4 M HCl/甲醇(1 mL)。將混合物在20℃下攪拌16 h，在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以10% B運行梯度，梯度：10%-40% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量19 mg (14%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.35 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.83-7.65 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.36 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.16 (m, 3H), 7.05 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.01 (m, 2H), 4.71 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.39-4.34 (m, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.77-3.73 (m, 10H), 3.61-3.20 (m, 15H), 3.19-3.18 (m, 3H), 2.72 (m, 4H), 2.66 (m, 1H), 2.44-2.40 (m, 2H), 2.43 (m, 1H), 2.41-2.38 (m, 2H), 2.34-2.31 (m, 2H), 0.70 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.64 (s). m/z: [ESI+] 1057.3 (M+H) +, (C 58H 69FN 8O 10)。 實例99：1-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-19-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-4,7,10,13,16-五氧雜十九烷-1,19-二酮(嵌合分子176)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(19-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-19- 側氧基 -4,7,10,13,16- 五氧雜十九烷 -1- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸 三級丁 酯之 合成
Figure 02_image763
在20℃下向3-(2-(2-(2-(2-(3-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(224 mg，0.33 mmol)於DMF (2.5 mL)中之溶液中添加HATU (149 mg，0.39 mmol)及DIEA (63.2 mg，0.49 mmol)。將混合物攪拌10 min，添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(249 mg，0.33 mmol)，且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以49% B運行梯度，梯度：49%-79% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量277 mg (53%)。m/z: (ESI+) 1415.5 (M+H) +, (C 76H 103FN 8O 15Si)。
1-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -19-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -4,7,10,13,16- 五氧雜十九烷 -1,19- 二酮 ( 嵌合分子 176) 之合成
Figure 02_image765
向N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(19-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-19-側氧基-4,7,10,13,16-五氧雜十九烷-1-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(277 mg，0.20 mmol)於甲醇(1 mL)中之溶液中添加4 M HCl/甲醇(5 mL)。將混合物在20℃下攪拌16 h，在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以10% B運行梯度，梯度：10%-40% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量22 mg (10%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.35 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.97-7.95 (m, 1H), 7.86-7.83 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.15 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.06 (d, J= 8.0 Hz, 3H), 7.01 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.00-6.98 (m, 2H), 4.71 (d, J= 12 Hz, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.25-4.22 (m, 2H), 4.20 (s, 1H), 3.85-3.65 (m, 10H), 3.62-3.48 (m, 19H), 3.38-3.31 (m, 3 H), 3.26-3.02 (m, 4H), 2.95-2.78 (m, 1H), 2.72-2.66 (m, 2H), 2.42 (s, 1H), 2.48-2.44 (m, 2H), 2.34 (s, 2H), 0.70 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.63 (s). m/z: [ESI+] 1101.3 (M+H) +, (C 60H 73FN 8O 11)。 實例100：1-(4-(3-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)丙基)哌𠯤-1-基)-22-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-4,7,10,13,16,19-六氧雜二十二烷-1,22-二酮(嵌合分子177)
N-(3-(4-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 乙基 -5-(4-(3-(4-(22-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 )-22- 側氧基 -4,7,10,13,16,19- 六氧雜二十二烷 -1- 醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 丙氧基 ) 苯基 ) 吡啶 -2- 基 )-N- 三級丁氧基羰基 - 胺基甲酸三級丁酯 之 合成
Figure 02_image767
在20℃下向3-(2-(2-(2-(2-(2-(3-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3H-呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(273 mg，0.37 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液中添加HATU (169 mg，0.45 mmol)及DIEA (72 mg，0.56 mmol)。將混合物在20℃下攪拌10 min，添加N-三級丁氧基羰基-N-(3-(4-(三級丁基(二甲基)矽基)氧基苯基)-4-乙基-5-(4-(3-哌𠯤-1-基丙氧基)苯基)-2-吡啶基)胺基甲酸三級丁酯(284 mg，0.37 mmol)，且繼續攪拌1 h。藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以49% B運行梯度，梯度：49%-79% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化混合物，得到呈黃色固體狀之標題化合物。
產量178 mg (29%)。m/z: [ESI+] 1459.6 (M+H) +, (C 78H 107FN 8O 16Si)。
1-(4-(3-(4-(6- 胺基 -4- 乙基 - 5-(4- 羥苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 苯氧基 ) 丙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -22-(4-(2- 氟 -5-((4- 側氧基 -3,4- 二氫呔 𠯤 -1- 基 ) 甲基 ) 苯甲醯基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) -4,7,10,13,16,19- 六氧雜二十二烷 -1,22- 二酮 ( 嵌合分子 177) 之合成
Figure 02_image769
向N-(3-(4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)苯基)-4-乙基-5-(4-(3-(4-(22-(4-(2-氟-5-((4-側氧基-3,4-二氫呔𠯤-1-基)甲基)苯甲醯基)哌𠯤-1-基)-22-側氧基-4,7,10,13,16,19-六氧雜二十二烷-1-醯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)苯基)吡啶-2-基)-N-三級丁氧基羰基-胺基甲酸三級丁酯(178 mg，0.11 mmol)於甲醇(1 mL)中之溶液中添加4 M HCl/甲醇(10 mL)。將混合物在20℃下攪拌16 h。在真空中移除溶劑且藉由prep-HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 150 × 25 mm× 5 μm；移動相：[溶劑A：0.05% HCl水溶液，溶劑B：乙腈]；以12% B運行梯度，梯度：12%-42% B，在10 min內，在95% B下保持5 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之標題化合物。
產量15 mg (12%)。 1H NMR(400 MHz, 甲醇- d 4 ): δ 8.36 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.95-7.88 (m, 1H), 7.86-7.83 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.25-7.21 (m, 2H), 7.18-7.14 (m, 3H), 7.10-7.08 (m, 2H), 7.05-7.02 (m, 2H), 4.89 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.36 -4.25 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.84-3.71 (m, 10H), 3.65-3.49 (m, 23H), 3.46-3.41 (m, 3H), 3.25-3.01 (m, 4H), 2.80 (s, 1H), 2.76-2.66 (m , 2H), 2.59 (s, 1H), 2.49-2.42 (m, 2H), 2.34-2.33 (m, 2H), 0.70 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4 ): δ -120.62 (s). m/z: [ESI+] 1145.4 (M+H) +, (C 62H 77FN 8O 12)。 實例101：SURTAC拯救CFTR突變蛋白質
目標：本文所描述之SURTAC效應依賴於SURTAC分子(亦即，本文所描述之USP7結合嵌合分子)與目標蛋白(例如但不限於CFTR或PARP1)及DUB (亦即USP7酶)之一致結合，由此使其極為接近且有效地增加針對DUB之目標的局部濃度。由於目標蛋白經泛素化，SURTAC-結合之DUB將能夠更容易地定位、結合及移除目標之泛素分子( 圖 2)。結合於目標及DUB蛋白質兩者之SURTAC誘導經由近距離驅動之泛素受質識別及後續泛素鏈裂解增加而增強之去泛素化反應。
DUB及目標蛋白上之SURTAC的結合位點的物理位置將影響SURTAC活性之量值及性質，但目標或DUB蛋白質之任何區中發生的一致可逆結合將促進共定位及增加去泛素化事件之機率。
此等泛素分子之移除將使得目標蛋白不大可能進行細胞過程，其滅活或破壞目標蛋白。去泛素化目標蛋白將有效地具有增加之半衰期。在本文提供之實例中，SURTAC效應已直接量測細胞中蛋白質量之增加或間接地量測為直接歸因於目標蛋白功能之細胞現象的增加。
方法：在至少一個基於生物細胞之分析中測試總共358個SURTAC分子。合成及測試之SURTAC包含由一些連接子連接的可變目標結合端及USP7-DUB結合端。具有相同的目標及DUB結合端但不同連接子之SURTAC之間的分析差異活性解釋為特定活性SURTAC系列內之結構活性關係(SAR)。在USP7結合SURTAC視為具有活性時，藉由比較分離之SURTAC之目標結合『端』的活性與完整USP7結合SURTAC分子之活性將其如此歸類。
此處呈現之結果描述45個USP7結合SURTAC分子(參見實例52至100)，其積極地影響細胞環境中的目標蛋白之量或目標蛋白活性，且吾等將此等效應中之任一者或全部歸因於SURTAC效應。觀測到的任何及全部效應歸結於SURTSC效應。本文中亦包括一些結構上相關之化合物所產生的分析資料，該等化合物提供直接支持活性SURTAC分子之觀測結果的SAR資訊。
CFTR 導引之 SURTAC 分析及資料彙總
以下為用於測試SURTAC分子對突變del508CFTR離子通道之影響的分析：
PathHunter® del508 CFTR- 膜運輸分析
PathHunter®分析量測於細胞質膜處(跨越形成孔隙之膜)之del508CFTR的量及測試化合物之作用。此分析中之值經報導為所觀測的與所關注SURTAC內所包括之標準CFTR結合化合物相比之運輸百分比。
高含量 CFTR 離子通道傳導率、細胞定位及細胞量分析 ：
此高含量分析採用含有經螢光標記之del508CFTR的細胞的數千個單獨影像及若此等資料返回以下CFTR表現及功能之量測的值時的分析： 1.    離子通過del508CFTR通道之傳導率。 2.    每個細胞中之del508CFTR的量的分佈，其可視為所偵測之del508CFTR與膜的一般接近度。 3.    個別細胞中之del508CFTR的量的增加或減少。
del508CFTR蛋白質量測值2及3視為每個細胞之蛋白質表現及存活率的準確量測，此係因為其各自以不受SURTAC過程影響的內部蛋白質對照之表現進行標準化。(Prins等人，(2020) JBC 259(49):16529-16544)。
PathHunter® del508 CFTR分析係基於酶片段互補(EFC)技術，且在Eurofins DiscoverX Corporation (Fremont，CAUSA)進行。該分析系統由分成兩種失活組分之β-半乳糖(β-gal)酶、酶供體肽(ED或ProLink™ (PK))及酶受體(EA)組成。當結合在一起時，ED與EA互補形成活性β-gal複合物。在添加受質的情況下，活性β-gal催化化學發光產物之形成(量測為RLU或相對發光單位)。對於PathHunter® CFTR-ΔF508分析，EA經由PM標籤定位於質膜，且CFTR離子通道之N端部分用ED Prolink (PK)標記。 圖 3A展示用於CFTR靶向配位體之分析的示意圖。 圖 3B展示標準CFTR靶向藥物魯瑪卡托之濃度增加使CFTR-ΔF508之可偵測細胞表面含量增加，如藉由相對光單位(RLU)所量測。
分析設計 ： 醫藥伴護蛋白運輸 (EA- 膜 ) 方法
細胞處理及化合物添加：根據標準程序自冷凍儲備液擴增PathHunter®細胞株。將細胞以20 μL總體積接種於白壁384孔微量盤中，且在測試之前在37℃下培育隔夜。將5 μL之5×樣本添加至細胞中且在37℃下培育16小時，接著在室溫下培育3小時。
訊號偵測及資料分析：經由單次添加30 μL PathHunter®急驟偵測試劑混合液，接著在室溫下培育一小時來產生分析訊號。在訊號產生之後藉由用於化學發光訊號偵測之PerkinElmer Envision™儀器讀取微量盤。使用CBIS資料分析套件(ChemInnovation, CA)分析化合物活性。
高含量 CFTR 離子通道傳導率、 CFTR 細胞量及位置分析 ：
藉由Prins等人2020( 同上)中描述之方法測試化合物對毛喉素刺激之del508CFTR傳導率的影響。
藉由與細胞預培育24小時的測試化合物以10 µM化合物在96孔培養盤上一式三份地進行全部實驗。在不存在及存在以3 uM之固定濃度急性投與del508CFTR增強劑依伐卡托(VX-770)的情況下進行傳導率之量測。由各三份培養盤報導之平均傳導率值形成傳導率之單一實驗量度，表示為『培養盤傳導率』。重複培養盤傳導以確定在統計學上有意義的比較SURTAC化合物對突變del508CFTR通道之傳導率的影響的資料。在本文中表示SURTAC效應，藉此SURTAC提供傳導率之顯著增加，其遠遠超過藉由SURTAC分子中使用之del508CFTR結合劑所見到的傳導率。
結果：
表4彙總使用CFTR靶向之SURTAC所觀測到的效應。結果展示衍生自圖表中鑑別之CFTR靶向配位體的USP7結合SURTAC之效應。該等效應展示為相比於單獨配位體之效應的相對增加。
表 4 ： SURTAC 對 del508CFTR 之影響的 彙總表
   SURTAC 中使用之 CFTR 配位體
分析 魯瑪卡托 埃克斯卡托 帕森納卡托 勒瑟利卡托
del508CFTR傳導率 增加    增加 增加
del508CFTR總量及/或膜蛋白    增加    增加
表4中所示之結果反映了對一系列USP7結合SURTAC之分析。測試USP7結合SURTAC對del508CFTR之影響，提供其結論的包括嵌合分子14、15、19、20、21、22、23、24、31、32、33、34、35、36、43、44、49、50、51、52、53、54、91、92、93、97、115、116、117、118及163 (參見以上表2及表3)。
在存在SURTAC分子的情況下觀測del508CFTR之保護及/或活化。使用衍生自表4中所示之CFTR配位體的4個單獨化學類別之SURTAC觀測del508CFTR之傳導活性、量及膜接近度的增加。根據類別分析及分組之USP7 SURTAC包括：基於魯瑪卡托之SURTAC：91、92、93、22、23、24、97、14、15、19、20及21；基於帕森納卡托之SURTAC：43、44及163；基於埃克斯卡托之SURTAC：31、115、32、116、33、117、118、34、35、36；及基於勒瑟利卡托之SURTAC：49、50、51、52、53及54 (參見表2及表3)。增加描述了使SURTAC系列分析中之量測值顯著高於針對單獨CFTR配位體所量測的值的作用。
代表性SURTAC嵌合分子19、20及21之SURTAC效應呈現於 圖 5中提供之表5中。對於各SURTAC，所使用之CFTR結合劑為魯瑪卡托(VX-809)。
表5 ( 圖 5)之第1列展示在針對所列舉之每一種SURTAC化合物(嵌合分子)的96孔培養盤實驗中所計算的del508CFTR傳導率之中值。各培養盤產生三個重複孔之傳導率值的平均值。在此實例集中，在添加del508CFTR增強劑VX-770後，嵌合分子19、20及21重複地得到與單獨的SURTAC親本del508CFTR配位體[魯瑪卡托]相比時始終更高的傳導率值。此傳導率活性之增加歸結於突變del508CFTR通道之去泛素化及拯救，同時該通道位於細胞膜處。該效應在添加VX-770之情況下更明顯。VX-770使del508CFTR通道增強且不穩定，並且致使其易於經泛素驅動之自細胞膜移除。所描述之SURTAC化合物能對抗此移除且允許更長的del508CFTR之活性持續時間。
為控制活性SURTAC分子之DUB結合端的作用，測試對照分子- 𠰌啉-4-甲酸2-(2-(4-(6-胺基-4-乙基-5-(4-羥苯基)吡啶-3-基)苯氧基)乙氧基)乙酯
Figure 02_image771
，其代表結合於DUB結合部分(式(6))且結合於𠰌啉基團之小連接子(連接子ii)，且在所有條件下返回＜2 ns的值。
使用先前在表5第2列中描述及展示之PathHunter® del508 CFTR-膜運輸分析的資料，可基於膜處存在多少CFTR將針對各條件之資料標準化且由此估算等量之del508CFTR通道在細胞膜中的相對傳導率(表5第3列)。針對於膜處的del508CFTR之量調節的此等資料展示用SURTAC化合物處理之del508CFTR通道的傳導率與魯瑪卡托相比時甚至更大的增加(＞10倍)。
進行大量實驗，其中針對表5 (第19號、第20號及第21號)中所列出之每一種嵌合分子所量測的培養盤傳導率之分佈顯著大於在單獨的魯瑪卡托下量測的培養盤傳導率(表5，第4列及第5列) (資料未展示)。
表6彙總了在存在及不存在3 µM VX-770增強劑的情況下測試時所量測的SURTAC [嵌合分子第14號、第15號、第19至24號、第43號、第44號、第91至93號及第163號]之培養盤傳導率。在各個情況下，該等值係由至少2個獨立的實驗盤傳導率值推導而出。由單獨VX-770誘導之傳導率超過背景小於0.5 nS；其基本上為零。
表 6 ： SURTAC 分子對膜 del508CFTR 傳導率之影響。
嵌合分子編號 僅 SURTAC 下之 del508CFTR 培養盤傳導率中值 (nS) 3 uM VX-770 下之 del508CFTR 培養盤傳導率中值 (nS)
91 - ++
92 - +++
93 - +++
22 + ++
23 + ++
24 + +++
97 - +++
14 + -
15 + +
19 + +++
20 - +++
21 + +++
魯瑪卡托 - +
        
43 - +
44 + +++
163 - +++
帕森納卡托 - +++
傳導率值(nS) 符號  
＜2 -  
2-5 +  
5-10 ++  
10+ +++  
每一組SURTAC之標準CFTR結合化合物的值展示為各組資料中之最後一列。
針對於膜處的del508CFTR之量，類似地調節所有化合物之資料。此資料呈現於表7中。
表 7 ： 使用來自 PathHunter® del508 CFTR 分析之值將膜運輸之 del508CFTR 標準化的 del508CFTR 培養盤傳導率中值。
嵌合分子編號 僅 SURTAC 下之 del508CFTR 膜密度之標準化培養盤傳導率中值 (nS) +3 uM VX-770 下之 del508CFTR 膜密度之標準化培養盤傳導率中值 (nS)
91 + +++
92 + +++
93 + +++
22 ++ +++
23 ++ +++
24 ++ +++
97 - +++
14 +++ ++
15 +++ +++
19 ++ +++
20 - +++
21 ++ +++
魯瑪卡托 - +
43 - +++
44 +++ ++++
163 ++ ++++
帕森納卡托 + +++
標準化傳導率(nS) 符號  
＜2 -  
2-5 +  
5-10 ++  
10-50 +++  
50+ ++++  
每一組SURTAC之標準CFTR結合化合物的值展示為各組資料中之最後一列。
SURTAC 活性細胞量及 CFTR 定位分析之結果
用於傳導率量測之高含量分析亦提供螢光讀數，其量測各個別細胞中之del508CFTR總量及對照旁觀者蛋白質之總量。藉由直接以各分析條件之旁觀者蛋白質使del508CFTR標準化，吾等計算個別細胞及細胞群體中的CFTR之量的直接量度。含有野生型CFTR之細胞包括在全部分析中以提供正常細胞中所見的CFTR之量的基準。在減去各細胞讀數之平均背景強度之後，各細胞之del508CFTR及對照蛋白質螢光強度以相同培養盤上表現WT-CFTR之細胞的中值強度標準化。蛋白質表現之此等標準化值允許藉由僅將標準化del508CFTR訊號除以每個細胞之標準化對照訊號來直接分析所有細胞中或整個細胞培養盤區域中的del508CFTR之量。整個孔的細胞之總CFTR的此標準化量度表示為NT CFTR。對於含有野生型CFTR之細胞，此值固定為1.0，且在含有del508CFTR之細胞中，所偵測的總細胞CFTR蛋白質通常少得多，其中NT CFTR值為0.35。
為估算分析中各細胞之CFTR膜密度，將所成像的各細胞之膜區域內之平均標準化del508CFTR強度除以整個細胞中的平均標準化對照蛋白質螢光。此提供細胞膜附近之del508CFTR之量的量度。每次添加化合物時，同時量測到每孔超過3000個細胞。將孔中各細胞之結果合併成分佈且此分佈之中位值給出定義為ρ之值。因為該等值接近對數正態分佈，所以在執行分析之前將值進行對數轉換，從而允許資料之參數測試。表8展示SURTAC分子對膜定位之del508CFTR的影響，如藉由log ρ所量測(Prins等人, 2020, 同上)。對於此分析中之野生型CFTR，分析中之典型值量測為-0.20，且對於未處理之del508CFTR為-0.65。
下表8展示SURTAC化合物對總(NT CFTR)及del508CFTR之膜接近度(ρ)的影響。
表 8 ： SURTAC 嵌合分子對總 (NT CFTR) 及 del508CFTR 之 膜接近度 (ρ) 的影響。
嵌合分子編號 NT CFTR log rho (ρ)
31 + -
115 + +
32 + +
116 + +
33 + +
117 + +
118 - -
34 ++ ++
35 ++ ++
36 ++ ++
埃克斯卡托 - -
49 + -
50 + -
51 + -
52 + +
53 + -
54 + -
勒瑟利卡托 - -
符號 總CFTR值 Log p值
- ＜ 0.45 ＜ -0.5
+ 0.45-0.90 ＞ -0.5 ＜ - 0.3
++ ＞ 0.9 ＞ - 0.3
總結：
已產生包含一系列CFTR結合劑之嵌合SURTAC分子。此等化合物展示SURTAC蛋白質拯救效應。特定del508CFTR蛋白質拯救在4種不同化學類別之SURTAC分子中顯現為在基於細胞之分析中所觀測到的多種不同表型，其中所量測的值明顯高於針對單獨親本CFTR結合劑所量測的彼等值。4種化學類別之SURTAC分子包括不同的CFTR接合目標結合劑，亦即魯瑪卡托、帕森納卡托、埃克斯卡托及勒瑟利卡托。
對於魯瑪卡托(VX-809) SURTAC，在添加SURTAC時觀測到CFTR通道之傳導率的增加且此效應在添加增強化合物VX-770時變得高度顯著且具有高量值，且在針對細胞表面處之CFTR通道數目的量度調節傳導率資料時具有甚至更高的量值及顯著性。
對於帕森納卡托(PTI-801) SURTAC，在添加SURTAC時觀測到CFTR通道之傳導率的增加，且此效應在添加增強化合物VX-770時及針對細胞表面處之CFTR通道數目之量度調節傳導率資料時為顯著的且具有高量值。
對於埃克斯卡托(VX-445) SURTAC，在存在SURTAC化合物的情況下直接觀測到del508CFTR之量及膜接近度的增加。親本埃克斯卡托分子對此兩個參數中之任一者無影響。
對於勒瑟利卡托(PTI-428) SURTAC，在添加SURTAC時觀測到CFTR通道之傳導率的增加，且此效應在添加增強化合物VX-770時以及在針對細胞表面處之CFTR通道數目之量度調節傳導率資料時為更顯著的且具有更高量值。除傳導效應以外，在存在勒瑟利卡托SURTAC化合物的情況下直接觀測到del508CFTR之量及膜接近度的增加。親本勒瑟利卡托分子對此兩個參數中之任一者無影響。 實例102：PARP SURTAC之活性
目標：諸如奧拉帕尼之PARP1抑制劑結合於DNA上之PARP1且誘導『經捕獲』PARP-DNA複合物之累積。『經捕獲』PARP-DNA複合物之累積導致潛在毒性DNA股斷裂之累積。在一些腫瘤細胞類型中，一系列核心腫瘤驅動因子突變使細胞在基因上易受經捕獲PARP-DNA複合物(例如BRCA1、PALB2、RAD51)、范康尼氏貧血基因缺陷及同源重組DNA修復路徑中之其他缺陷的影響。此等腫瘤不能恰當地修復此等經捕獲PARP-DNA複合物且因此，腫瘤細胞被DNA股斷裂擊敗並且死亡。經捕獲PARP-DNA複合物之量與PARP抑制劑藥物之臨床功效有關。
目標為測試SURTAC藥物，例如基於PARP捕獲劑(諸如奧拉帕尼)之彼等藥物，及觀測其是否具有相同或類似的活性。待分析之活性包括：
(1)以類似於奧拉帕尼之方式接合PARP1，亦即兩者抑制催化活性且在此操作中亦用以增加藥物-PARP及DNA之捕獲複合物中DNA上之PARP1駐留的持續時間；
(2)藉由使PARP1去泛素化及經由蛋白質水解機制減少其移除增加細胞核中的PARP1之量；
(3)繼續誘導PARP之去泛素化，同時將其捕獲於DNA上且因此藉由抑制泛素依賴性DNA修復過程而減少此等複合物之分解。此將增加有毒PARP複合物之數目及壽命，該等複合物接著經轉化成DNA損壞，諸如DNA雙股斷裂；及
(4)由於核上的過量DNA應力，使得與單獨奧拉帕尼相比，細胞生長更緩慢或死亡更迅速。
此機制在癌症中將具有臨床效用，因為其在細胞為PARP抑制劑不敏感(例如但不限於因為腫瘤中缺乏PARP酶)的環境中會擴增PARP抑制之效應。
方法：
選擇用於SURTAC分析之細胞株為骨肉瘤細胞株U2OS。此細胞株對奧拉帕尼誘導細胞死亡不具有基因敏感性，但將展示奧拉帕尼誘導之DNA損壞的生物標記標誌。有意選擇此不敏感性以展示在分析之時間過程中未丟失大量細胞的情況下，化合物對PARP1的機制生物標記作用。另外，藉由SURTAC之中靶效應誘導的任何額外細胞毒性效應在對奧拉帕尼不敏感之細胞株中更易於進行區分。
關於14種SURTAC分子之資料(全部基於臨床上使用之PARP抑制劑奧拉帕尼)提供於本文中(參見表9)。亦包括結構上相關之化合物產生的一些分析資料，其提供支持活性SURTAC分子之觀測結果的直接結構活性關係(SAR)資訊。此等化合物亦可在理論上接合任何由奧拉帕尼靶向之PARP酶且誘導對其的SURTAC效應，但基於現有文獻，其將主要為PARP1或PARP2 (參見圖1，Carney等人(2018) Nat Commun 9, 176)。亦可經由其他臨床上使用之PARP抑制劑或正在開發的臨床前PARP抑制劑中之任一者利用治療性SURTAC活性之原理。
PARP 分析材料及方法 ：
PARP1化學發光分析套組(384孔) (目錄#80569)係購自BPS Bioscience (San Diego, CA, USA)；奧拉帕尼(CAS編號# 763113-22-0)係購自MedChemExpress (Monmouth Junction, NJ, USA)；10 × PBS (目錄# 11666789001)係購自Roche (Basel, Switzerland)；Tween-20 (目錄# P1379)係購自Sigma (St. Louis, MO, USA)。讀取器為來自PerkinElmer (Waltham, MA, USA)之Envision 2105。
PARP1 抑制劑 IC 50 測定
根據製造商之說明書，將BPS (目錄#80569)之商業套組用於PARP1生物化學分析。簡言之，該分析係基於三個步驟，包括塗佈、核糖基化反應及偵測。首先，在4℃下用1×組蛋白塗佈分析盤隔夜，接著用100 μL之PBST緩衝液(含有0.05% Tween-20之1×PBS)洗滌三次且使用100 μL之阻斷緩衝液3阻斷。其次，將主反應混合物與以3倍稀釋之9個劑量的化合物稀釋液一起添加至各孔中。藉由向各孔中添加10 μL之經稀釋之PARP1酶，或10 μL之用於空白對照的1×緩衝液來引發反應。將培養盤在室溫下培育1小時且如上文所描述洗滌三次。第三，將1×鏈黴抗生物素蛋白-HRP添加至各孔中且將培養盤在室溫下培育30分鐘。如上文所描述將培養盤洗滌三次，之後在Envision 2105上使用ELISA ECL偵測套組進行讀取。
用於資料分析之等式描述如下： ●  抑制百分比 = (AVG 0% 抑制– 訊號) / (AVG 0% 抑制- AVG 100% 抑制) * 100% ●  IC 50測定(IDBS, XLfit)：模式205：擬合= (A + ((B-A) / (1 + ((C/x)^D)))) ○  A：底部；B：頂部；C：IC 50；D：希爾斜率(Hillslope) ●  Z-因子 = 1 - 3 * (SD 0% 抑制+ SD 100% 抑制) / (AVG 0% 抑制- AVG 100% 抑制)
免疫螢光染色劑影像分析。
對於核γ-H2AX及PARP1定量，將U2OS細胞以8000個/孔接種於96孔盤中隔夜。在化合物處理後24小時之後，在室溫(RT)下將細胞用4%多聚甲醛固定溶液(Beyotime，P0099-100ml)固定15 min，用DPBS洗滌三次且接著用含0.25% (v/v) Triton X-100 (T8787-50ML，Sigma)之DPBS滲透15min。在三次額外洗滌之後，在室溫下將細胞用含3% (w/v) BSA (Beyotime，ST023-200g)的含有0.5% Tween-20 (P1379，Sigma)之DPBS (阻斷緩衝液)阻斷1小時。接著將細胞在4℃下用含有抗PARP (HPA045168-100UL，Sigma)或γH2AX (80312S，Cell Signaling)之初級抗體的阻斷緩衝液培育隔夜。接著將細胞用DPBS洗滌三次，每次3 min，接著在室溫下用含有Alexa Fluor 568-結合之小鼠(A21124，Thermo Fisher Scientific)或Alexa Fluor 488-結合之兔二級抗體(A11008，Thermo Fisher Scientific)及2.5 μg/ml DAPI (62248，Thermo Fisher Scientific)的阻斷緩衝液培育1h。最後用DPBS洗滌細胞三次，且最後在成像之前將100 μl PBS添加至各孔中。使用共焦定量影像細胞計數器CQ1(Yokogawa)將培養盤成像且使用由製造商提供之軟體分析核訊號。
CellTiter-Glo 細胞存活率分析 . 將U2OS細胞以2000個/孔接種於384孔培養盤中，其中使用Echo 650液體處置器(Beckman Coulter)將化合物自10 uM之最高濃度以10個劑量及3倍梯級進行預稀釋。在化合物處理後72小時，根據製造商之說明書在Envision 2104 (Perkinelmer)上使用CellTitre-Glo ®套組(G7573，Promega)量測發光。藉由將經化合物處理之孔的發光訊號除以DMSO對照孔來計算標準化細胞存活率。使用GraphPad Prism軟體計算IC 50。
結果：
測試SURTAC化合物對PARP1酶活性之影響以及在U2OS細胞中之細胞環境中的影響。預期SURTAC分子將以類似於親本配位體奧拉帕尼之方式與PARP1相互作用。若存在SURTAC效應，則預期其表現為PARP1蛋白質拯救，如藉由以下所示：(1)經處理之細胞的細胞核中的PARP1酶之量增加，(2)經由SURTAC捕獲DNA上之PARP1分子的數目增加而增加DNA損壞，(3) SURTAC促進經捕獲之PARP的去泛素化，及(4)延長經捕獲之PARP-SURTAC-DNA複合物之壽命。此等複合物將隨後導致DNA單股及雙股斷裂增加。雙股斷裂之增加可藉由雙股斷裂之標準生物標記量測，諸如組蛋白變異體H2AX之Ser-139殘基之磷酸化，形成稱為γ-H2AX之蛋白質標記物(Mah, LJ., El-Osta, A. & Karagiannis, T. γH2AX: a sensitive molecular marker of DNA damage and repair. Leukemia 24, 679-686 (2010)。https://doi.org/10.1038/leu.2010.6)。
PARP 活體外酶抑制分析：
根據上文之方法部分，在PARP1酶活性之活體外分析中測試全部化合物之效價。對於PARP1，各SURTAC使活體外酶IC 50值返回在1至10 nM範圍內，與針對奧拉帕尼返回之值相當(2至4 nM)，其在分析中作為標準與SURTAC分子一起運行。
PARP 核免疫螢光 (IF) 分析 ：
此分析經由共焦定量影像細胞測量術直接量測細胞核中的PARP之量，如上文之方法部分中所描述。在96孔盤格式中與U2OS骨肉瘤一起培育24小時之後，執行由SURTAC誘導之PARP1之量的量測。對於資料分析，將每個實驗之六個重複孔與12個含有一致濃度之奧拉帕尼的重複孔對照進行比較。用SURTAC分子處理前及處理後的細胞核中的PARP1酶之量的顯著增加指示此等化合物之SURTAC效應。
γ-H2AX 變異區分析：
此分析經由如材料及方法部分中所描述之標記蛋白γ-H2AX之共焦定量影像細胞測量術直接量測細胞核中的DNA雙股斷裂之數目。在96孔盤格式中與U2OS骨肉瘤一起培育24小時之後，執行由SURTAC誘導之γ-H2AX變異區之數目的量測。對於資料分析。在至少兩個獨立實驗中，將每個實驗之兩個重複孔與含有一致濃度之奧拉帕尼的兩個重複孔對照進行比較。用SURTAC分子處理前及處理後，每個細胞核中的γ-H2AX變異區之數目的顯著增加指示此等化合物之SURTAC效應。
細胞生長及存活率分析：
在394孔微量盤格式上使用CellTiter-Glo分析計算針對各SURTAC化合物之3天化合物暴露對細胞數目之影響，且將其直接與如上文方法部分中所描述之奧拉帕尼之效應進行比較。對於資料分析，將每個實驗之兩個重複孔與兩個含有一致濃度之奧拉帕尼的重複孔對照進行比較。用SURTAC分子處理後的細胞數目與親體分子奧拉帕尼相比時顯著減少指示經由此等化合物之SURTAC效應增加的細胞毒性。
圖 4及表9展示單一高活性SURTAC之彙總資料及所主張之所有SURTAC之彙總資料。
圖 4展示如上文所描述之U2OS細胞分析格式中之SURTAC 168效應(實心條形圖嵌合分子編號 168)。對於執行的各分析，奧拉帕尼存在於相同的培養盤上且來自該盤之所有資料經標準化回針對奧拉帕尼所量測的值，因此，奧拉帕尼值展示為『1倍』反應(空心條形圖)。在執行多個孔及/或實驗的情況下，展示出顯示n值的誤差杠及/或標準差誤差杠。
圖4中之資料展示SURTAC如所預期表現，因為其(1)明顯地增加細胞核中的PARP之量，(2)誘導DNA損壞增加，如藉由γ-H2AX變異區增加所量測，及(3)與單獨奧拉帕尼相比時，誘導大量細胞生長抑制。亦展示在10 µM 168下之資料，指示相對於10 µM奧拉帕尼，該化合物在10 µM下誘導較大的細胞毒性效應，與該化合物具有遠高於奧拉帕尼之附加細胞表型效應的理論一致。
表 9 ： PARP-USP7 結合 SURTAC 之資料表
嵌合分子編號 IF 分析比 IF 分析 (n=6) 與 奧拉帕尼對照 (n=12) 之 P 值 γ-H2AX 變異區分析比 U2OS 3 天細胞存活率分析比
164 + - - ++
165 ++ ++ ++ +
166 ++ ++ - -
167 ++ - - +
168 ++ ++ ++ -
169 + ++ + ++
170 ++ ++ ++ ++
171 + - + ++
172 ++ ++ + ++
173 - - - -
174 - - - -
175 - - - -
176 ++ ++ - -
177 ++ ++ - -
圖例
符號 IF分析比 IF分析之P值 γ-H2AX變異區分析比 U2OS 3天細胞存活率分析比
- ＜ 1.13倍 ＞ 0.05 ＜ 1.5倍 ＞ 88%
+ ＞ 1.13倍 ＜ 0.05 ＞ 1.5倍 ＜ 88% (2個標準差)
++ ＞ 1.20倍 ＜ 0.01 ＞2.0倍 ＜ 82% (3個標準差)
表9彙總了在所示的14種不同SURTAC之範圍內的此等分析中以3 µM SURTAC獲得的資料。活性之截止點在可能的情況下係基於奧拉帕尼對照之標準差且指示將以至少95%機率位於預期對照值之外的值。
總結：表9中所列出之全部SURTAC嵌合分子類似於奧拉帕尼結合且抑制PARP1。許多已展示積極地影響細胞環境中之目標PARP1蛋白質之量及目標蛋白質活性，且吾等將此等效應中之任一者及全部歸因於SURTAC效應。
儘管已在本文中說明及描述USP7結合嵌合分子(SURTAC)之某些特徵，但一般熟習此項技術者現將想到多種修改、替代、變化及等效物。因此，應理解隨附申請專利範圍意欲涵蓋屬於本文所揭示之USP7結合嵌合分子及其用途之真實精神範圍內的全部此類修改及變化。
關於本文揭示之嵌合分子的主題被特別地指出且在本說明書之結論部分清楚地主張。然而，關於操作的組織及方法以及其對象、特徵以及優點兩方面的嵌合分子可以藉由在與隨附圖式一起閱讀時參考以下詳細描述來最佳地瞭解，在此等隨附圖式中：
圖 1A、 1B、 1C 及 1D表示本文所描述之嵌合分子之實施例。 圖 1A呈現包含USP7結合劑域之嵌合分子。 圖 1B呈現包含USP7結合劑域及目標結合劑域之嵌合分子。 圖 1C呈現包含USP7結合劑域-連接子域之嵌合分子。 圖 1D呈現包含USP7結合劑域-連接子域-目標結合劑域之嵌合分子。
圖 2呈現展示SURTAC活性之原理的示意圖。
圖 3A 及圖 3B呈現PathHunter® del508 CFTR分析之分析設計及對照結果。 圖 3A展示在細胞內並且進行量測之功能性，而 圖 3B展示使用已知CFTR-結合劑魯瑪卡托(Lumacaftor) (VX-809)之結果。
圖 4展示代表性高活性SURTAC (168)之資料。白色條形圖對照用單獨的奧拉帕尼(Olaparib)治療；黑色條形圖包括SURTAC嵌合分子168。條形圖展示核PARP1、µ-H2AX DNA損壞變異區之量及細胞數目的資料量測，作為將細胞與單獨的奧拉帕尼或SURTAC嵌合分子一起培育時可見之量測值的比率。
圖 5展示提供離子通道傳導率分析中之SURTAC活性結果的表5。
Figure 111100833-A0101-11-0002-1

Claims (30)

  1. 一種包含第一結合域之嵌合分子，該第一結合域包含結合泛素特異性加工蛋白酶7 (USP7)酶之USP7結合劑，其中該第一結合域由 式 (1)之結構或其醫藥學上可接受之鹽表示：
    Figure 03_image001
    (1) 其中 W 1至W 13各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺基、CN、-NHC(O)R 6、-C(O)OR 6、-OC(O)R 6、C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH、-C(O)-烷基、-C(O)O-烷基、-C(O)NH-烷基或SH； X 1至X 12各自獨立地為C或N； R 1為鍵結、烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、C(O)-烷基、-烷基-O-烷基、烷基-NH-烷基、烷基-雜環-環-R 3或
    Figure 03_image774
    ； n為0與10之間的整數； R 3為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、-C(O)、-C(NH)、-C(O)S、-SO 2、-S(O)、C(O)OC(O)、酯或醯胺基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基； 其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基中之每一者視情況經取代；且 其中若X 1至X 12各自獨立地為N，則對應取代基W 2至W 13不存在。
  2. 如請求項1之嵌合分子，其中包含該USP7結合劑之該第一結合域由 式 (2)之結構表示：
    Figure 03_image776
    (2)， 其中： W 2至W 5及W 8至W 13各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、胺、-CN、-NHC(O)R 6、-OC(O)R 6、-C(O)NHR 6、NH-烷基、-NH-芳基、NH-環烷基、NH-雜環烷基、NH-烷基-COOH、NH-CH 2-COOH、NO 2、CF 3、烷氧基、COOH、OH或SH； R 2為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜環烷基-CO、胺、醯胺基、酯、-O-烷基、烷基-COOH、-CH 2-COOH、-NH-烷基、-CH 2-芳基、-雜環-環-R 3或
    Figure 03_image778
    ； n為0與10之間的整數； R 3為鍵結、烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、-C(O)、-C(NH)、-C(O)S、-SO 2、-S(O)、C(O)OC(O)、酯或醯胺基； R 4及R 5各自獨立地為氫、鹵化物、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、羥基、-C(O)-烷基、-C(O)O-烷基或-C(O)NH-烷基； R 6為烷基、芳基、環烷基或雜環烷基；且 其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環-環或雜環烷基中之每一者視情況經取代。
  3. 如請求項1之嵌合分子，其中包含該USP7結合劑之該第一結合域由 式 (6)之結構表示：
    Figure 03_image780
    (6)。
  4. 如請求項1之嵌合分子，其中包含該USP7結合劑之該第一結合域由 式 (7)之結構表示：
    Figure 03_image782
    (7)。
  5. 如請求項1之嵌合分子，其進一步包含第二結合域，其中該第二結合域包含經設計以結合於泛素化蛋白質之目標結合劑。
  6. 如請求項5之嵌合分子，其中該目標結合劑包含 (i)     結合於該泛素化蛋白質之抗體或其抗原結合片段；或 (ii)    結合於該泛素化蛋白質之配位體。
  7. 如請求項5之嵌合分子，其中該目標結合劑直接結合於該泛素化蛋白質。
  8. 如請求項5之嵌合分子，其中該目標結合劑結合與該泛素化蛋白質結合之中間分子。
  9. 如請求項5之嵌合分子，其中該泛素化蛋白質包含CFTR (囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白)蛋白質或PARP1 (聚(ADP-核糖)聚合酶-1)蛋白質。
  10. 如請求項5之嵌合分子，其中包含該目標結合劑之該第二結合域包含由 式 A 至 N中之任一者表示的結構：
    Figure 03_image784
    Figure 03_image786
    Figure 03_image788
    。
  11. 如請求項1之嵌合分子，其進一步包含經設計以將該第一結合域連接至該第二結合域之連接子域。
  12. 如請求項11之嵌合分子，其中該連接子域將該第一結合域共價連接至該第二結合域。
  13. 如請求項11之嵌合分子，其中該連接子域將該第一結合域非共價連接至該第二結合域。
  14. 如請求項11之嵌合分子，其中該連接子域包含 (a)    選自由以下組成之群的結構：聚乙二醇、芳族基、烷基、烯基、磷酸烷基酯、烷基矽氧烷、環氧基、醯基鹵化物、縮水甘油基、羧酸酯、烷基胺、烷基醯胺、酸酐或其任何組合；或 (b)    天然或合成來源之多肽，其具有2至18個碳原子之間的鏈長。
  15. 如請求項11之嵌合分子，其中該連接子由式 (i) 至 (xxiii)之結構中之任一者表示：
    Figure 03_image790
    Figure 03_image792
    Figure 03_image794
    。
  16. 如請求項1之嵌合分子，其由以下任一者之結構表示： 嵌合分子 I：
    Figure 03_image796
    ， 嵌合分子 II：
    Figure 03_image798
    ， 嵌合分子 III：
    Figure 03_image800
    ， 嵌合分子 IV：
    Figure 03_image802
    ， 嵌合分子 V：
    Figure 03_image804
    ， 嵌合分子 VI：
    Figure 03_image806
    ， 嵌合分子 VII：
    Figure 03_image808
    ， 嵌合分子 VIII：
    Figure 03_image810
    ， 嵌合分子 IX：
    Figure 03_image812
    ， 嵌合分子 X ：
    Figure 03_image814
    ， 嵌合分子 XI ：
    Figure 03_image816
    ， 嵌合分子 XII ：
    Figure 03_image818
    ， 嵌合分子 XIII ：
    Figure 03_image820
    ， 嵌合分子 XIV ：
    Figure 03_image822
    ， 嵌合分子 XV ：
    Figure 03_image824
    ， 嵌合分子 XVI ：
    Figure 03_image826
    , 嵌合分子 XVII ：
    Figure 03_image828
    ， 嵌合分子 XVIII ：
    Figure 03_image830
    ， 嵌合分子 XIX
    Figure 03_image832
    或 嵌合分子 XX
    Figure 03_image834
    。
  17. 如請求項1之嵌合分子，其由表2及表3之嵌合分子1至177中之任一者之結構表示。
  18. 如請求項17之嵌合分子，其中該結構包含嵌合分子19、20、21或168。
  19. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至18中任一項之嵌合分子及醫藥學上可接受之載劑。
  20. 一種如請求項1至18中任一項之嵌合分子的用途，其用於製備用於預防或減少泛素化蛋白質活體內降解之藥劑。
  21. 一種如請求項1至18中任一項之嵌合分子的用途，其用於製備用於自泛素化蛋白質活體內移除至少一個泛素分子的藥劑。
  22. 如請求項20之用途，其中該泛素化蛋白質包含該泛素蛋白酶之非天然目標。
  23. 如請求項21之用途，其中該泛素化蛋白質包含該泛素蛋白酶之非天然目標。
  24. 一種如請求項19之醫藥組合物的用途，其用於製備用於治療性治療疾病之藥劑。
  25. 如請求項24之用途，其中該疾病包含癌症、神經退化性疾病或病症、貧血症、代謝症候群、自體免疫、發炎性疾病或病症、感染、囊腫纖維化、成骨不全或肌肉萎縮。
  26. 如請求項24之用途，其中該疾病包含囊腫纖維化。
  27. 如請求項26之用途，其中該治療性治療與至少一種額外的囊腫纖維化治療性化合物或治療組合進行。
  28. 如請求項24之用途，其中該疾病包含癌症。
  29. 如請求項28之用途，其中該癌症對用PARP抑制劑治療具有抗性。
  30. 如請求項28之用途，其中該治療性治療與至少一種額外的癌症治療性化合物或治療組合進行。
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