TW202233661A - 多功能及多價介白素-TGF-β受體融合多肽 - Google Patents

多功能及多價介白素-TGF-β受體融合多肽 Download PDF

Info

Publication number
TW202233661A
TW202233661A TW110138767A TW110138767A TW202233661A TW 202233661 A TW202233661 A TW 202233661A TW 110138767 A TW110138767 A TW 110138767A TW 110138767 A TW110138767 A TW 110138767A TW 202233661 A TW202233661 A TW 202233661A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
polypeptide
leu
lys
cells
ser
Prior art date
Application number
TW110138767A
Other languages
English (en)
Inventor
迪亞茲 克勞迪亞 阿尼亞 佩納富爾特
Original Assignee
美商克拉治療股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商克拉治療股份有限公司 filed Critical 美商克拉治療股份有限公司
Publication of TW202233661A publication Critical patent/TW202233661A/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5443—IL-15
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/55—IL-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本發明提供多功能及多價融合多肽，其包含介白素多肽及兩種或更多種TGFβ配位體結合多肽。本文中所提供之組合物及方法適用於預防腫瘤形成(tumorigenesis)及治療癌症之應用。

Description

多功能及多價介白素-TGF-β受體融合多肽
驅動及導致癌症發展之腫瘤形成一般具有異常細胞過程的特點，該等異常細胞過程會導致例如持續的增殖傳訊、對生長抑止因子之反應降低、對細胞死亡之抵抗力增加、複製性永生及血管生成增加。此等過程被認為會促進腫瘤侵襲及轉移。因此，靶向與此等過程相關之分子的能力對於癌症治療劑之研發係為重要的。
轉化生長因子-β (TGF-β)家族或蛋白質係在致瘤環境中促進血管生成及/或免疫抑止之多效性細胞介素。TGF-β蛋白質最初因其使正常成纖維細胞轉化為能夠進行非錨定依賴性生長之細胞的能力而命名。TGF-β蛋白質主要由造血細胞及腫瘤細胞產生，可調控(例如，刺激或抑制)來自多種正常或贅生性組織來源的細胞之生長及分化。值得注意地，已知TGF-β蛋白質參與許多增殖及非增殖細胞過程，諸如(例如)細胞增殖及分化、胚胎發育、胞外基質形成、骨骼發育、傷口癒合、造血以及免疫及發炎反應。TGF-β表現及活性水準的增加與大量病理學病狀(包括但不限於腫瘤形成)有關，其中已知TGF-β蛋白質家族之成員具有與致瘤過程(例如，血管生成及免疫抑止)及轉移相關的多種生物活性。
介白素-2 (IL-2)為作用於免疫系統以主要產生細胞介導之免疫反應的強效細胞介素。一般而言，IL-2係由免疫細胞在抗原位點附近以較高濃度局部產生，以提供必要的共刺激訊息以用於產生針對抗原之免疫系統反應。因此，IL-2為免疫活化分子且可持有在治療腫瘤時促進免疫治療反應之潛力。舉例而言，除刺激T細胞以外，亦已展示IL-2刺激淋巴球(T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞)。然而，高劑量的基於IL-2之療法先前與使用IL-2全身性投與觀測到的毒性相關。此類有害作用為成功利用IL-2作為有效治療劑帶來障礙。
本文中提供融合蛋白，其用以活化免疫反應且抑制促致瘤免疫抑止傳訊。如本文中所描述，免疫活化及免疫抑止之抑制一般藉由融合蛋白來實現，該等融合蛋白包含與抑制TGF-β活性之兩種或更多種多肽(例如，結合於TGF-β蛋白質之兩種或更多種多肽)融合(例如，連接)的介白素多肽。本文中所提供之組合物亦適用於腫瘤形成之抑制或在腫瘤形成(例如，血管生成或轉移)之抑制中適用。因此，本文中亦揭示使用本文中所揭示之融合蛋白抑制及/或治療癌症之方法。
本文中提供融合多肽，其包含：介白素(interleukin；IL)多肽；第一TGFβ超家族受體多肽；及第二TGFβ超家族受體多肽。亦提供融合多肽，其包含：結合至IL受體及且促效IL受體之IL多肽；結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第一TGFβ超家族受體多肽；及結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第二TGFβ超家族受體多肽。
在一些實施例中，該IL多肽包含IL-2多肽或IL-15多肽。在一些實施例中，該IL多肽包含IL-2多肽。在一些實施例中，該IL-2多肽包含SEQ ID NO: 2。在一些實施例中，該IL-2多肽包含與SEQ ID NO: 2具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，該IL-2多肽由SEQ ID NO: 2組成。在一些實施例中，該IL多肽包含IL-2多肽或IL-15多肽。在一些實施例中，該IL多肽包含IL-2多肽。在一些實施例中，該IL-2多肽包含SEQ ID NO: 3。在一些實施例中，該IL-2多肽包含與SEQ ID NO: 3具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，該IL-2多肽由SEQ ID NO: 3組成。在一些實施例中，該IL多肽包含IL-15多肽。在一些實施例中，該IL-15多肽包含SEQ ID NO: 5。在一些實施例中，該IL-15多肽包含與SEQ ID NO: 5具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，該IL-15多肽由SEQ ID NO: 5組成。
在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含活化素受體多肽或其片段、骨成形性蛋白質(bone morphogenetic protein；BMP)受體多肽或其片段、神經膠細胞衍生之神經營養因子(glial cell-derived neurotrophic factor；GDNF)受體多肽或其片段，或TGFβ受體II多肽或其片段。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含TGFβ受體II (TBRII)多肽或其片段。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II (TGFβ receptor II；TBRII)多肽或其片段。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽，該可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9或其組合。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列，且該第二TGFβ超家族受體多肽包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之截斷。在一些實施例中，該可溶性TGFβ受體II多肽包含與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽結合TGF-β1多肽、TGF-β2多肽、TGF-β3多肽、活化素βA多肽、活化素βB多肽、活化素βC多肽、活化素βE多肽、骨成形性蛋白質(BMP) 2多肽、BMP 3多肽、BMP4多肽、BMP 5多肽、BMP 6多肽、BMP 7多肽、BMP 8多肽、BMP 9多肽、BMP 10多肽、BMP 11多肽、BMP 12多肽、BMP 13多肽、BMP 14多肽、BMP 15多肽、生長分化因子(GDF) 1多肽、GDF 3多肽、GDF 8多肽、GDF 9多肽、GDF 15多肽、節點(Nodal)多肽、抑制素α多肽、抗苗勒激素(anti-Mullerian Hormone)多肽、左翼分子(Lefty) 1多肽、左翼分子2多肽、阿特曼(arteman)多肽、珀瑟芬(Persephin)多肽或神經營養因子(Neurturin)多肽。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽、TGFβ 2多肽、TGFβ 3多肽或其任何組合。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及該第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽。
在一些實施例中，截斷TGFβ超家族受體多肽包含N端截斷、C端截斷或其組合。在一些實施例中，該截斷TGFβ超家族受體多肽為截斷可溶性TGFβ受體II (sTβRII)多肽。在一些實施例中，該截斷包含大於2、5、7、10、15、20、25或30個胺基酸。在一些實施例中，該IL多肽包含截斷IL多肽。在一些實施例中，該截斷IL多肽包含N端截斷、C端截斷或其組合。在一些實施例中，該截斷IL多肽包含截斷IL-2多肽或IL-15多肽。在一些實施例中，該等融合多肽包含連接該第一TGFβ超家族受體多肽及該第二TGFβ超家族受體多肽之連接子多肽或連接子分子。在一些實施例中，該等融合多肽包含融合該IL多肽及該第一TGFβ超家族受體多肽之連接子多肽。在一些實施例中，該等融合多肽包含藥物動力學(pharmacokinetic；PK)調節子。
在一些實施例中，該藥物動力學調節子包含免疫球蛋白恆定(immunoglobulin constant；Fc)區多肽。在一些實施例中，該免疫球蛋白Fc區多肽為人類免疫球蛋白Fc區多肽。在一些實施例中，該免疫球蛋白Fc區為IgG Fc區。在一些實施例中，該IgG Fc區為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區。在一些實施例中，該PK調節子包含白蛋白多肽。在一些實施例中，該白蛋白多肽為人類白蛋白多肽。
在一些實施例中，該融合多肽包含與SEQ ID NO: 10至25中之任一者具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。在一些實施例中，該融合多肽由SEQ ID NO: 10至25中之任一者組成。在一些實施例中，該融合多肽活化表現IL-2或IL-15受體之目標細胞。在一些實施例中，該目標細胞為免疫細胞。在一些實施例中，該免疫細胞為T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。進一步提供包含融合多肽之醫藥組合物，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
本發明亦提供抑制或減少患有癌症之個體中腫瘤生長及/或進展的方法，其包含向該個體投與包含以下之融合多肽：介白素(IL)多肽；第一TGFβ超家族受體多肽；及第二TGFβ超家族受體多肽，藉此抑制或減少該個體中之腫瘤生長及/或進展。在一些實施例中，該腫瘤為原發性腫瘤。在一些實施例中，該腫瘤為轉移性腫瘤。在一些實施例中，該癌症包含實體腫瘤。在一些實施例中，該融合多肽活化腫瘤微環境內之免疫細胞。在一些實施例中，該等免疫細胞表現IL-2。
在一些實施例中，該等免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。在一些實施例中，該融合多肽抑制或減少腫瘤微環境內之免疫細胞之免疫抑止，及/或減少或抑制該腫瘤微環境中之免疫抑止細胞之活化。在一些實施例中，該癌症為血液癌症。在一些實施例中，該癌症為包含實體腫瘤之癌症。提供中和或殺死患有癌症之個體中腫瘤細胞的方法，其包含向該個體投與包含以下之融合多肽：介白素(IL)多肽；第一TGFβ超家族受體多肽；及第二TGFβ超家族受體多肽；藉此中和或殺死該個體中之腫瘤細胞。在一些實施例中，該腫瘤為原發性腫瘤。在一些實施例中，該腫瘤為轉移性腫瘤。在一些實施例中，該癌症包含實體腫瘤。在一些實施例中，該融合多肽活化腫瘤微環境內之免疫細胞。在一些實施例中，該等免疫細胞表現IL-2或IL-15受體。在一些實施例中，該等免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。在一些實施例中，該融合多肽抑制或減少腫瘤微環境內之免疫細胞之免疫抑止，及/或減少或抑制該腫瘤微環境中之免疫抑止細胞之活化。在一些實施例中，該癌症為血液癌症。在一些實施例中，該癌症包含實體腫瘤。
另外，提供治療或減輕患有癌症之個體中癌症的方法，其包含向該個體投與包含以下之融合多肽：介白素(IL)多肽；第一TGFβ超家族受體多肽；及第二TGFβ超家族受體多肽；藉此治療或減輕該個體之該癌症。在一些實施例中，該腫瘤為原發性腫瘤。在一些實施例中，該腫瘤為轉移性腫瘤。在一些實施例中，該癌症包含實體腫瘤。在一些實施例中，該融合多肽活化腫瘤微環境內之免疫細胞。在一些實施例中，該等免疫細胞表現IL-2或IL-15受體。在一些實施例中，免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。在一些實施例中，該融合多肽抑制或減少腫瘤微環境內之免疫細胞之免疫抑止，及/或減少或抑制該腫瘤微環境中之免疫抑止細胞之活化。在一些實施例中，該癌症為血液癌症。在一些實施例中，該癌症包含實體腫瘤。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽、TGFβ 2多肽、TGFβ 3多肽或其任何組合。
進一步提供活化表現IL受體之細胞的方法，其包含：使細胞與融合多肽接觸，該融合多肽包含：介白素(IL)多肽；第一TGFβ超家族受體多肽；及第二TGFβ超家族受體多肽。在一些實施例中，該細胞為免疫細胞。在一些實施例中，該免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。在一些實施例中，使該等免疫細胞活體內接觸。在一些實施例中，使該等免疫細胞離體接觸。在一些實施例中，白細胞層或白血球分離術產物包含該等免疫細胞。在一些實施例中，該等免疫細胞衍生自血球分離術樣本。在一些實施例中，該等免疫細胞隨後用於基於細胞之療法。在一些實施例中，IL多肽為IL-2或IL-15。在一些實施例中，該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽或片段。一種包含核酸分子之宿主細胞，該核酸分子包含編碼如本文中所描述之重組融合多肽的核酸序列。 參考文獻併入
本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案均以引用之方式併入本文中，其引用之程度如同各個別公開案、專利或專利申請案經特定地及單獨地指示以引用之方式併入一般。
交叉參考
本申請案主張2020年10月20日申請之美國臨時申請案第63/094,277號之權益，該申請案以引用之方式併入本文中。 序列表
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式以電子方式提交且特此以全文引用之方式併入。2021年10月15日創建之該ASCII複本命名為57949-701_601_SL.txt且大小為82,739位元組。
本文提供多功能融合蛋白，其能夠例如活化免疫反應，抑制及/或減少免疫抑止傳訊，及/或抑止或抑制血管生成或侵襲性傳訊。在癌症之情形下，認為免疫活化為促進在轉化細胞生長為腫瘤之前識別且中和轉化細胞或在腫瘤形成之後殺死(例如，中和)腫瘤的生理功能。認為基於外源性、分子量、複雜性、表現量及可降解性對抗原之特異性識別提高了免疫系統限制腫瘤擴增之能力。相反，認為腫瘤細胞具有經由各種機制，例如經由產生免疫抑止因子或分子(例如，免疫抑止細胞介素)限制反應性之能力。
為了活化免疫反應且抑制免疫抑止傳訊，本文中所揭示之融合蛋白一般包含與抑制TGFβ活性之兩種或更多種多肽(例如結合TGFβ蛋白質之兩種或更多種多肽)融合(例如，連接)的介白素多肽。活化訊息與抑制訊息之間的平衡為維持免疫穩態之重要因素。在腫瘤形成期間，免疫刺激(例如，免疫活化)訊息(例如，促發炎細胞介素)藉由腫瘤衍生之免疫抑止傳訊分子(例如，免疫抑止細胞介素)拮抗。在被認為在驅使腫瘤形成方面至關重要的免疫抑止細胞介素之群組當中的係蛋白質之TGF超家族(例如，TGFβ)之成員。
轉化生長因子β (TGFβ)超家族包括TGFβ蛋白質、骨成形性蛋白質(BMP)、生長分化因子(GDF)、膠質細胞衍生之神經營養因子(GDNF)、活化素、抑制素、節點、左翼分子及苗勒抑制物質(Mülllerian Inhibiting Substance；MIS)。一般而言，TGFβ超家族之配位體形成結合於異二聚受體複合物之二聚體，該等異二聚受體複合物由具有絲胺酸/蘇胺酸激酶域之I型及II型受體次單元組成。
蛋白質之轉化生長因子β (TGFβ)超家族為參與基本細胞功能之細胞介素，該等基本細胞功能諸如增殖、分化、細胞凋亡、組織重塑、血管生成、免疫反應及細胞黏附(參見例如Massagué, J. TGFβ signaling in context. Nat Rev Mol Cell Biol 13, 616-630 (2012))。TGFβ超家族蛋白質亦為諸如慢性發炎病狀及癌症的疾病病況之病理生理學中之重要因子。此家族之成員包括TGFβ之三種同功型β1、β2、β3；骨成形性蛋白質(BMP)及活化素。除免疫抑止以外，TGFβ蛋白質亦可藉由構成性誘導上皮細胞向間葉細胞轉化(EMT)及腫瘤相關血管生成而充當晚期癌症中之促轉移及促血管生成因子。
已廣泛探索出於治療性目的而阻斷腫瘤衍生之活性TGFβ。許多治療方法靶向用於治療諸如乳癌及黑素瘤的侵襲性癌症之TGFβ路徑。舉例而言，TGFβ結合於其異質受體之拮抗劑已在三個乳癌實驗模型中展現出腫瘤細胞活動性降低、內滲及轉移。然而，此等治療策略一般並不影響細胞增殖，從而指示TGFβ阻斷劑不足以促進腫瘤細胞之中和或殺死。
除抑制TGFβ以外，在本文中所揭示之融合蛋白中利用介白素多肽(例如，介白素-2或介白素-15)亦適用於活化免疫反應。蛋白質之介白素家族一般促進免疫細胞(例如，T細胞、NK細胞及其他淋巴球)之活化、發育及分化，且在先天性及後天性免疫兩者中發揮必要作用。因此，免疫細胞活化、發育及分化可藉由本文中所揭示之融合蛋白來實現。
促發炎或免疫刺激介白素(例如，介白素-2或介白素-15)構成用於活化免疫反應之適用佐劑。舉例而言，介白素-2 (IL-2)為用於淋巴球活化及純系擴增的因子，從而促進細胞毒性T細胞之活化、發育及分化。IL-2及IL-15亦刺激NK細胞增殖及細胞毒性。然而，IL-2可作為免疫刺激(例如，免疫活化)及免疫抑止劑兩者起作用。作為免疫抑止劑，IL-2藉由誘導調控細胞之產生來維持周邊耐受性。出於此等原因，IL-2被視為雙刃劍。介白素功能之變通性受環境及與傳訊劑之相互作用影響。
因此，本文中所揭示之融合蛋白的多功能性在於，該等融合蛋白適用於免疫活化、免疫抑止之抑制及/或血管生成或侵襲性傳訊之抑止或抑制。在一些實施例中，免疫活化、免疫抑止之抑制及/或血管生成或侵襲性傳訊之抑止或抑制可用於治療腫瘤。在一些實施例中，在個體中活化免疫(例如，活化表現IL-2受體之細胞)、抑制免疫細胞之免疫抑止(例如，阻斷或抑制細胞與TGFβa之間的相互作用)及/或血管生成或侵襲性傳訊之抑止或抑制可用於治療腫瘤或癌症。如所揭示，免疫反應之活化及免疫抑止反應之抑制至少部分地藉由介白素多肽實現。進而，免疫抑止傳訊或傳訊分子之抑制或減少及/或血管生成或侵襲性傳訊或傳訊分子之抑制至少部分地經由使用一或多種抑制TGFβ蛋白質之活性的多肽來實現。
如本文中所使用，術語「融合蛋白」一般係指包括衍生自超過一種親本蛋白質或多肽之多肽組分的蛋白質。一般而言，融合蛋白由融合基因表現，其中編碼來自一種蛋白質之多肽序列的核苷酸序列與編碼來自不同蛋白質之多肽序列的核苷酸序列框內附加且視情況藉由連接子與編碼來自不同蛋白質之多肽序列的核苷酸序列分離。融合基因接著可藉由重組宿主細胞表現為單一蛋白質。
如本文中所使用，蛋白質之「域」一般為完整蛋白質之任何部分，至多且包括完整蛋白質，但通常包含少於完整蛋白質。域可(但無需)獨立於蛋白質鏈之剩餘部分摺疊及/或與特定生物性、生物化學性或結構性功能或位置(例如，配位體結合域，或胞質、跨膜或胞外域)有關。
術語「重組」指示已藉由人工干預以人工方式或以合成方式(例如，非天然地)改變之物質(例如，核酸或多肽)。可對在其天然環境或狀態內或自其天然環境或狀態移除之物質進行改變。舉例而言，「重組核酸」為例如在選殖、DNA改組或其他熟知分子生物程序期間藉由重組核酸製得之核酸。「重組DNA分子」由藉助於此類分子生物技術接合在一起之DNA區段構成。如本文中所使用之術語「重組蛋白質」或「重組多肽」係指使用重組DNA分子表現之蛋白質分子。「重組宿主細胞」為含有及/或表現重組核酸之細胞。
如在本文中互換使用之「聚核苷酸序列」或「核苷酸序列」或「核酸序列」為核苷酸之聚合物，視情形而定，包括寡核苷酸、DNA及RNA、核酸或表示核苷酸聚合物之字符串。根據任何指定聚核苷酸序列，可確定給定核酸或互補聚核苷酸序列。包括基因體或合成來源之DNA或RNA，其可為單股或雙股，且表示有義股或反義股。
本發明之聚核苷酸及多肽序列可根據與本文中所描述之某些聚核苷酸及多肽的特定一致性及/或相似性來定義。在一些實施例中，序列一致性將通常大於60%、大於75%、大於80%、大於90%及/或大於95%。與本文中所揭示之序列相比，序列之一致性及/或相似性可為49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。最佳比對可藉由使用用於比對序列之任何適合演算法來確定，該演算法之非限制性實例包括史密斯-沃特曼演算法(Smith-Waterman algorithm)、尼德曼-翁施演算法(Needleman-Wunsch algorithm)、基於巴羅斯-惠勒變換(Burrows-Wheeler Transform)之演算法(例如，巴羅斯惠勒比對器(Burrows Wheeler Aligner))、ClustalW、Clustal X、BLAST、Novoalign (Novocraft Technologies, ELAND (Illumina, San Diego, Calif.)、SOAP (可在soap.genomics.org.cn獲得)及Maq (可在maq.sourceforge.net獲得)。在一些實施例中，使用BLAST程式進行BLAST搜索，得分=100，字長=12，以獲得具有所需序列一致性百分比之序列。在一些實施例中，為獲得用於比較目的之間隙式比對，可使用間隙式BLAST。當利用BLAST及間隙式BLAST程式時，可使用各別程式(NBLAST及XBLAST)之預設參數。在一些實施例中，使用Clustal Omega。
如本文中所使用，術語「編碼…之核酸分子」、「編碼…之DNA序列」、「編碼…之核酸序列」或「編碼…之DNA」係指沿去氧核糖核酸股的去氧核糖核苷酸之次序或序列。此等去氧核糖核苷酸之次序確定沿mRNA鏈的核糖核苷酸之次序，且亦確定沿多肽(蛋白質)鏈的胺基酸之次序。DNA序列因此編碼RNA序列且編碼胺基酸序列。
「基因之表現」或「核酸之表現」意謂DNA轉錄成RNA(視情況包括RNA之修飾，例如剪接)、RNA轉譯成多肽(有可能包括多肽之後續轉譯後修飾)或轉錄及轉譯兩者，如由上下文所指示。
術語「基因」廣泛地用於指與生物功能相關之任何核酸。基因通常包括表現此類編碼序列所需之編碼序列及/或調控序列。術語「基因」適用於特定基因體或重組序列，以及由彼序列編碼之cDNA或mRNA。「融合基因」含有編碼轉基因之編碼區。基因亦包括例如形成其他蛋白質之識別序列的未表現核酸區段。包括結合於調控蛋白質(諸如轉錄因子)之轉錄控制元件的未表現調控序列引起相鄰或鄰近序列之轉錄。
如本文中所使用，當參考結構基因使用時，術語「編碼區」或「編碼序列」係指編碼由於mRNA分子之轉譯而在新生多肽中發現之胺基酸的核苷酸序列。在真核生物中，編碼區在5'側上藉由編碼起始甲硫胺酸之核苷酸三聯體「ATG」及在3'側上藉由指定終止密碼子之三個三聯體(例如，TAA、TAG、TGA)中之一者來限定。真核生物中之轉錄控制訊息包含「啟動子」及「強化子」元件。啟動子及強化子由與參與轉錄之細胞蛋白質特異性相互作用的DNA序列之短陣列組成。啟動子及強化子元件已自包括酵母菌、昆蟲以及哺乳動物細胞及病毒中之基因的多種真核來源分離(類似控制元件(例如啟動子)亦發現於原核生物中)。特定啟動子及強化子之選擇視待用於表現所關注蛋白質之細胞類型而定。一些真核啟動子及強化子具有廣泛宿主範圍，而其他者在細胞類型之受限子集中具有功能性。
術語「表現載體」係指含有表現特定宿主細胞中之可操作連接之編碼序列所必需的所需編碼序列及適當核酸序列的重組DNA分子。原核生物中之表現所必需的核酸序列包括啟動子、視情況存在之操縱序列、核糖體結合位點及可能的其他序列。已知真核細胞利用啟動子、強化子以及終止及聚腺苷酸化訊息。分泌訊息肽序列亦可視情況由表現載體編碼，可操作地連接至本發明毒素肽類似物之編碼序列，使得所表現毒素肽類似物可由重組宿主細胞分泌，若需要，用於更容易地自細胞分離毒素肽類似物。此類技術為此項技術中所熟知。
如本文中所使用，個體(individual)與患者及/或個體(subject)同義，且包括及/或係指人類，且可為已診斷為需要治療如本文中所揭示之疾病或病狀的人類。然而，實例不限於人類，且包括黑猩猩、狨猴、乳牛、馬、綿羊、山羊、豬、家兔、犬、貓、大鼠、小鼠、天竺鼠及其類似者。個體通常為人類，且可為已診斷為需要治療如本文中所揭示之疾病或病狀的人類。
如本文中所使用，術語「抑制(inhibition/inhibiting)」包括及/或係指減少或抑止給定病狀、症狀、病症或疾病，及/或生物活動或過程之基線活性降低。
如本文中所使用，術語「治療(treating/treatment)」包括及/或係指減輕疾病或病症或其症狀(例如，減緩或遏制或減少疾病或其臨床症狀中之至少一者的發展)。在某些實施例中，「治療(treating/treatment)」亦包括及/或係指緩解或減輕至少一種生理及/或生物參數，包括可能並不可由患者辯別的彼等參數。在某些實施例中，「治療(treating/treatment)」包括及/或係指在生理上(例如，穩定可辯別症狀)、生理學上(例如，穩定生理及/或生物參數)或兩者上調節疾病、病症或生物過程。在某些實施例中，「治療(treating/treatment)」包括及/或係指預防或延緩疾病或病症之發作或發展或進展。在某些實施例中，「治療(treating/treatment)」包括及/或係指預防或延緩或抑制(i)健康生理學狀態或(ii)基線生理學狀態之惡化(例如，疾病或病症之進展)。
如本文中所使用，當在申請專利範圍及/或說明書中結合術語「包含」使用時，「一(a/an)」包括及/或係指「一個/種」，且亦與「一或多個/種」、「至少一個/種」及「一個/種或超過一個/種」之含義一致。類似地，字組「另一」可意謂至少第二或更多。
如本文種所使用，字組「包含(comprising)」(及包含之任何形式，諸如「包含(comprise)」及「包含(comprises)」)、「具有(having)」(及具有之任何形式，諸如「具有(have)」及「具有(has)」)、「包括(including)」(及包括之任何形式，諸如「包括(include)」及「包括(includes)」)或「含有(containing)」(及含有之任何形式，諸如「含有(contain)」及「含有(contains)」)為包括性或開放性的且不排除額外未列出之要素或過程步驟。
如本文中所使用，在給定值或範圍之情形下，術語「約」包括及/或係指在給定值或範圍之20%內、10%內及/或5%內的值或範圍。
如本文中所使用，術語「及/或」應視為在具有或不具有另一者之情況下兩種指定特徵或組分中之每一者之特定揭示內容。舉例而言，「A及/或B」應視為(i) A、(ii) B及(iii) A及B中之每一者之特定揭示內容，正如各自在本文中單獨地闡述那般。
如本文中所使用，「樣本」包括及/或係指經分析以便偵測及/或定量分析物之任何液體或液體樣本。在一些實施例中，樣本為生物樣本。樣本之實例包括但不限於體液、提取物、含有蛋白質及/或DNA之溶液、細胞提取物、細胞溶解物或組織溶解物。體液之非限制性實例包括尿液、唾液、血液、血清、血漿、腦脊髓液、淚液、***、汗液、肋膜積液、液化糞便物質及淚腺分泌物。
如本文中所使用，在本文中所描述之任何個例或實施例中，「包含」可由「基本上由…組成」及/或「由…組成」置換。如本文中所使用，在本文中所描述之任何實例或實施例中，「包含」可由「基本上由……組成」及/或「由……組成」置換。 介白素
本文中提供之融合蛋白一般包含與抑制TGFβ活性之兩種或更多種多肽(例如，結合TGFβ蛋白質之兩種或更多種多肽)融合(例如，連接)的介白素多肽。介白素(IL)為首次被認為由白血球單獨表現之一類細胞介素，但隨後已發現係由許多其他體細胞產生。介白素在例如免疫細胞之活化及分化以及細胞增殖、成熟、遷移及黏附中起重要作用。因此，介白素之功能為在發炎及免疫反應期間調節生長、分化及活化。因此，融合蛋白之介白素多肽適用於調控(例如，活化)免疫反應。
介白素-2 (IL-2)為適用於在融合蛋白之情形下活化免疫反應的介白素，該融合蛋白包含與抑制TGFβ活性之兩種或更多種多肽融合(例如，連接)的介白素多肽。介白素-2 (IL-2)為藉由抗原刺激誘導之多效性細胞介素且因此在調控免疫反應中起顯著作用(參見例如，Spolski, R., Li, P. & Leonard, W.J. Biology and regulation of IL-2: from molecular mechanisms to human therapy. Nat Rev Immunol 18, 648-659 (2018))。舉例而言，IL-2可促進先天性抗腫瘤反應，由於其在誘導局部腫瘤排異、作為T細胞之自分泌因子及支持細胞毒性T細胞之發育、刺激NK細胞增殖及溶胞活性方面之有效性。
IL-2為一種小的15.5-kDa四α-螺旋束細胞介素。其主要由抗原刺激之CD4+ T細胞產生，但其亦可由CD8+細胞、自然殺手(NK)細胞及活化樹突狀細胞(DC)產生。IL-2為維持CD4+調控T細胞之重要因子，且在CD4+ T細胞分化為多種T細胞子集中起關鍵作用。其可促進CD8+ T細胞及NK細胞細胞毒性活性，且回應於抗原調節T細胞分化程序，從而促進原始CD4+ T細胞分化為T輔助-1 (Th1)及T輔助-2 (Th2)細胞，同時抑制T輔助-17 (Th17)分化。值得注意地，IL-2為首批FDA批准的用於轉移性黑素瘤及腎細胞癌之免疫療法藥物中之一者。然而，IL-2免疫療法由於其較短活體內半衰期及在治療劑量下之嚴重毒性而尚未得到廣泛應用。
除非另外指示，否則術語「介白素-2」或「IL-2」係指來自任何脊椎動物來源之任何原生IL-2，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如，人類)及嚙齒動物(例如，小鼠及大鼠)。IL-2包括未處理IL-2以及由在細胞中處理產生的任何形式之IL-2。該術語亦涵蓋天然存在之IL-2變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。例示性人類IL-2之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 1中。未處理人類IL-2另外包含不存在於成熟IL-2分子中之N端20胺基酸訊息肽。IL-2亦包括「野生型IL-2」或天然存在之IL-2。原生人類IL-2分子之序列展示於SEQ ID NO: 1中。出於本發明之目的，術語野生型亦涵蓋包含一或多種胺基酸突變之IL-2形式。舉例而言，本文中描述之融合蛋白可包含與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的IL-2多肽。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 1具有約85%至約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 1具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 1具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 1具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的IL-2序列。
IL-2多肽可包含全長原生序列或其截斷。在一些實施例中，IL-2多肽為截斷IL-2多肽。截斷IL-2多肽可包含N端截斷、C端截斷或其組合。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸至約20個胺基酸(例如，相對於全長IL-2多肽)之IL-2。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸至約5個胺基酸、約2個胺基酸至約7個胺基酸、約2個胺基酸至約8個胺基酸、約2個胺基酸至約10個胺基酸、約2個胺基酸至約15個胺基酸、約2個胺基酸至約20胺基酸、約5個胺基酸至約7個胺基酸、約5個胺基酸至約8個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約7個胺基酸至約8個胺基酸、約7個胺基酸至約10個胺基酸、約7個胺基酸至約15個胺基酸、約7個胺基酸至約20個胺基酸、約8個胺基酸至約10個胺基酸、約8個胺基酸至約15個胺基酸、約8個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約15個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸或約15個胺基酸至約20個胺基酸(例如，相對於全長IL-2多肽)之IL-2。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸、約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸、約15個胺基酸或約20個胺基酸(例如，相對於全長IL-2多肽)之IL-2。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷至少約2個胺基酸、約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸或約15個胺基酸(例如，相對於全長IL-2多肽)之IL-2。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷至多約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸、約15個胺基酸或約20個胺基酸(例如，相對於全長IL-2多肽)之IL-2。在一些實施例中，融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的IL-2多肽。在一些實施例中，融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的IL-2多肽。適合的IL-2序列或變異體序列(例如，具有一或多個胺基酸缺失、取代及/或***)可藉由本文中所描述(例如，如實例1至3中之任一者中所描述)之方法中之任一者來鑑別。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 2具有約85%至約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 2具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 2具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 2具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的IL-2序列。適合的IL-2序列或變異體序列(例如，具有一或多個胺基酸缺失、取代及/或***)可藉由本文中所描述(例如，如實例1至3中之任一者中所描述)之方法中之任一者來鑑別。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 3具有約85%至約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 3具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 3具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的IL-2序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 3具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的IL-2序列。適合的IL-2序列或變異體序列(例如，具有一或多個胺基酸缺失、取代及/或***)可藉由本文中所描述(例如，如實例1至3中之任一者中所描述)之方法中之任一者來鑑別。
介白素-15 (IL-15)亦為適用於在融合蛋白之情形下活化免疫反應之介白素，該融合蛋白包含與抑制TGFβ活性之兩種或更多種多肽融合(例如，連接)的介白素多肽。介白素15 (IL-15)為包含四α螺旋結構之約12至14千道爾頓之細胞介素。IL-15屬於由介白素IL-2、IL-4、IL-7、IL-9及IL-21組成之細胞介素家族。IL-15經由由IL-2/IL-15受體β (IL-15Rβ) (CD122)次單元構成之受體複合物傳訊，該次單元與IL-2及共同γ鏈(γC) (CD132)受體次單元共用，其亦由所有額外家族成員利用。值得注意地，IL-15為T細胞及NK細胞之生長因子，且在此等免疫細胞之發育、增殖及活化中起重要作用。儘管IL-15具有醫療用途之潛能，但天然IL-15具有治療研發問題，亦即較低生物效力及較短半衰期。
除非另外指示，否則術語「介白素-15」或「IL-15」係指來自任何脊椎動物來源之任何原生IL-15，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如，人類)及嚙齒動物(例如，小鼠及大鼠)。IL-15包括未處理之IL-15以及由在細胞中處理產生的任何形式之IL-15。術語亦涵蓋天然存在之IL-15變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。例示性人類IL-15之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 4中。IL-15亦包括「野生型IL-15」或天然存在之IL-15。原生人類IL-15分子之序列展示於SEQ ID NO: 4中。出於本發明之目的，術語野生型IL-15亦涵蓋包含一或多種胺基酸突變之IL-15形式。舉例而言，本文中描述之融合蛋白可包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的IL-15多肽。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 4具有約85%至約100%之序列一致性的IL-15序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 4具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的IL-15序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 4具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的IL-15序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 4具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的IL-15序列。適合的IL-15序列或變異體序列(例如，具有一或多個胺基酸缺失、取代及/或***之IL-15多肽序列)可藉由本文中所描述(例如，如實例1至3中之任一者中所描述)之方法中之任一者來鑑別。
IL-15多肽可包含全長原生序列或其截斷。在一些實施例中，IL-15多肽為截斷IL-15多肽。截斷IL-15多肽可包含N端截斷、C端截斷或其組合。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸至約20個胺基酸(例如，相對於全長IL-15多肽)之IL-15。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸至約5個胺基酸、約2個胺基酸至約7個胺基酸、約2個胺基酸至約8個胺基酸、約2個胺基酸至約10個胺基酸、約2個胺基酸至約15個胺基酸、約2個胺基酸至約20胺基酸、約5個胺基酸至約7個胺基酸、約5個胺基酸至約8個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約7個胺基酸至約8個胺基酸、約7個胺基酸至約10個胺基酸、約7個胺基酸至約15個胺基酸、約7個胺基酸至約20個胺基酸、約8個胺基酸至約10個胺基酸、約8個胺基酸至約15個胺基酸、約8個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約15個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸或約15個胺基酸至約20個胺基酸(例如，相對於全長IL-15多肽)之IL-15。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸、約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸、約15個胺基酸或約20個胺基酸(例如，相對於全長IL-15多肽)之IL-15。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷至少約2個胺基酸、約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸或約15個胺基酸(例如，相對於全長IL-15多肽)之IL-15。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷至多約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸、約15個胺基酸或約20個胺基酸(例如，相對於全長IL-15多肽)之IL-15。在一些實施例中，融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的IL-15多肽。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 5具有約85%至約100%之序列一致性的IL-15序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 5具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的IL-15序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 5具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的IL-15序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 5具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的IL-15序列。 TGFβ抑制多肽
如本文中所描述，本文中提供之融合蛋白一般包含與抑制TGFβ活性之兩種或更多種多肽(例如，結合TGFβ蛋白質之兩種或更多種多肽)融合(例如，連接)的介白素多肽(例如，IL-2或IL-15)。轉化生長因子β (TGFβ)超家族為可溶因子(例如，蛋白質)之較大群組，該等可溶因子引發且控制許多細胞類型之活化、增殖及分化，因此在胚胎發育及穩態中起重要作用。TGFβ超家族包括若干亞科：活化素/抑制素家族、骨成形性蛋白質(BMP)、生長分化因子(GDF)、TGFβ亞科及神經膠細胞株衍生之神經營養因子(GDNF)家族。TGFβ超家族具有三種類型：TGFβ 1、TGFβ 2及TGFβ 3。TGFβ超家族蛋白質已發現於多種物種中，包括無脊椎動物以及脊椎動物。TGFβ功能障礙可導致發育病症、器官功能之嚴重缺陷，且與包括各種類型之癌症的若干疾病相關。
TGFβ超家族活性之抑制及抑止可經由使用融合蛋白來實現，除介白素多肽以外，該等融合蛋白亦包含兩種或更多種TGFβ超家族受體多肽。在本文中描述之融合蛋白之情形下，兩種或更多種TGFβ超家族受體多肽產生能夠結合兩種或更多種TGFβ蛋白質之多價單鏈多肽。一般而言，TGFβ超家族之配位體結合於由I型及II型受體次單元組成之受體複合物。如本文中所揭示，衍生自TGFβ超家族受體之多肽適用於抑制或抑止TGFβ超家族配位體。舉例而言，在一些實施例中，TGFβ超家族受體選自由以下組成之群：活化素受體多肽或其片段、骨成形性蛋白質(BMP)受體多肽或其片段、神經膠細胞衍生之神經營養因子(GDNF)受體多肽或其片段及TGFβ受體多肽或其片段。
在蛋白質之TGFβ超家族內，蛋白質之TGFβ亞科包含TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3。TGFβ蛋白質之生物作用中之一者為使用自分泌作用機制抑制大部分正常上皮細胞之增殖，且此表明TGFβ之腫瘤抑止因子作用。自分泌TGFβ活性及/或對外源TGFβ之反應性的喪失似乎為一些上皮細胞提供導致惡性進展之生長優勢。此表明除其腫瘤抑止因子作用以外的TGFβ之促致癌作用。在TGFβ β1、β2、β3當中，TGFβ1為迄今所描述之最強效免疫抑止細胞介素，對針對癌細胞之免疫系統反應的若干組分起不利作用(例如，免疫抑止)，且最頻繁地由癌瘤過度表現。值得注意地，TGFβ蛋白質(例如，TGFβ1)減弱或減少巨噬細胞、B細胞、細胞毒性T細胞、樹突狀細胞及NK細胞之效應功能，其中TGFβ經由其介體SMAD2、SMAD3及SMAD4充當IFNγ產生之負調控因子。除免疫抑止以外，TGFβ蛋白質亦可藉由構成性誘導上皮細胞向間葉細胞轉化(EMT)及腫瘤相關血管生成而充當晚期癌症中之促轉移及促血管生成因子。
大部分細胞類型表現命名為I型(53 kDa)、II型(70至85 kDa)及III型(250至350 kDa)之三種大小的TGFβ受體。I型受體為膜結合絲胺酸/蘇胺酸激酶，其明顯需要存在結合於TGFβ之II型受體。II型受體亦為膜結合絲胺酸/蘇胺酸激酶，其以較高親和力結合TGFβ1及TGFβ3，且以低得多的親和力結合TGFβ2。I型及II型受體一起形成轉導TGFβ之抗增殖訊息所必須的異二聚傳訊複合物。III型受體為具有較大胞外域及43個胺基酸殘基細胞質域之跨膜蛋白聚醣。III型受體之細胞質域缺少明顯的傳訊模體，且該受體可並不直接參與傳訊。值得注意地，由受體之胞外域組成的TβRII之可溶性胞外域以較高親和力結合TGF-β1及TGF-β3。
因此，TGFβ受體TβRII多肽適用於本文中描述的多功能融合蛋白之TGFβ結合多肽。特定言之，TGFβ受體TβRII多肽適用於抑制或降低TGFβ1活性或與其相關之傳訊。如本文中所使用之術語「可溶性轉化生長因子(TGF) β受體II B型或sTβRII」係指替代地剪接之轉化生長因子β II型受體之可溶性或非膜形式，較佳為來自任何物種或來源的TGFβ II型受體之胞外域且包括全長胞外域以及胞外域之片段或部分。在一些實施例中，sTβRIIB為人類或小鼠者。人類TGFβ受體II具有SEQ ID NO: 5或6之胺基酸序列(分別為短同功型及長同功型)。如本文中所使用之術語「sTβRII片段」意謂參考多肽之整個長度之至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更大。在一個實施例中，IL-2在N端或C端末端處經截斷以便能夠選殖。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 6具有約85%至約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 6具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 6具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 6具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的sTBRII序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 7具有約85%至約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 7具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 7具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 7具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的sTBRII序列。
如本文中所描述，兩種或更多種sTBRII受體多肽利用原生sTBRII受體之胞外域。因此，本文中使用之sTBRII受體多肽包含SEQ ID NO: 8 (例如，sTBRII之短同功型)、SEQ ID NO: 9 (例如，sTBRII之長同功型)或其組合。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 8具有約85%至約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 8具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 8具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 8具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的TBRII序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 9具有約85%至約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 9具有約85%至約90%、約85%至約95%、約85%至約96%、約85%至約97%、約85%至約98%、約85%至約99%、約85%至約100%、約90%至約95%、約90%至約96%、約90%至約97%、約90%至約98%、約90%至約99%、約90%至約100%、約95%至約96%、約95%至約97%、約95%至約98%、約95%至約99%、約95%至約100%、約96%至約97%、約96%至約98%、約96%至約99%、約96%至約100%、約97%至約98%、約97%至約99%、約97%至約100%、約98%至約99%、約98%至約100%或約99%至約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 9具有約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%之序列一致性的sTBRII序列。在一些實施例中，融合蛋白包含與SEQ ID NO: 9具有至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之序列一致性的TBRII序列。
SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9之sTBRII多肽可包含其額外截斷。在一些實施例中，sTBRII多肽為截斷sTBRII多肽。截斷sTBRII多肽可包含N端截斷、C端截斷或其組合。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸至約20個胺基酸(例如，相對於全長sTBRII多肽)之sTBRII。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸至約5個胺基酸、約2個胺基酸至約7個胺基酸、約2個胺基酸至約8個胺基酸、約2個胺基酸至約10個胺基酸、約2個胺基酸至約15個胺基酸、約2個胺基酸至約20胺基酸、約5個胺基酸至約7個胺基酸、約5個胺基酸至約8個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約7個胺基酸至約8個胺基酸、約7個胺基酸至約10個胺基酸、約7個胺基酸至約15個胺基酸、約7個胺基酸至約20個胺基酸、約8個胺基酸至約10個胺基酸、約8個胺基酸至約15個胺基酸、約8個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約15個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸或約15個胺基酸至約20個胺基酸(例如，相對於全長sTBRII多肽)之sTBRII。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷約2個胺基酸、約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸、約15個胺基酸或約20個胺基酸之sTBRII。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷至少約2個胺基酸、約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸或約15個胺基酸之sTBRII。在一些實施例中，融合蛋白包含截斷至多約5個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約10個胺基酸、約15個胺基酸或約20個胺基酸(例如，相對於全長sTBRII多肽)之sTBRII。
適合的sTBRII序列或變異體序列(例如，具有一或多個胺基酸缺失、取代及/或***之sTBRII多肽序列)可藉由本文中所描述(例如，如實例1至3中之任一者中所描述)的用於螯合或結合TGFβ之方法中之任一者來鑑別。 多功能及多價融合蛋白質組合物
本文提供融合多肽，其包含：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽。本發明亦提供融合多肽，其包含：結合至IL受體及促效IL受體之第一IL多肽；結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第二多肽；及結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第三多肽。
在一些實施例中，IL多肽為IL-2。在一些實施例中，IL多肽為IL-15。在某些實施例中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 2。在某些實施例中，IL-2多肽包含與SEQ ID NO: 2具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，IL多肽為IL-2。在一些實施例中，IL多肽為IL-15。在某些實施例中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 3。在某些實施例中，IL-2多肽包含與SEQ ID NO: 3具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，IL-15多肽包含SEQ ID NO: 5。在某些實施例中，IL-15多肽包含與SEQ ID NO: 5具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，IL多肽為截斷多肽。在一些實施例中，IL-2序列包含位置62處之丙胺酸(例如，如在SEQ ID NO: 3中)。
在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及/或第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II多肽。在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II多肽，該可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9或其組合。在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列，且第二TGFβ超家族受體多肽包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之截斷。在某些實施例中，可溶性TGFβ受體II多肽包含與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一實施例中，結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第二多肽及/或結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第三多肽包含可溶性TGFβ受體II多肽。在一些實施例中，結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第二多肽及/或結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第三多肽包含可溶性TGFβ受體II多肽，該可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9或其組合。在某些實施例中，可溶性TGFβ受體II多肽包含與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及/或第二TGFβ超家族受體多肽靶向TGF-β1多肽、TGF-β2多肽、TGF-β3多肽、活化素βA多肽、活化素βB多肽、活化素βC多肽、活化素βE多肽、骨成形性蛋白質(BMP) 2多肽、BMP 3多肽、BMP4多肽、BMP 5多肽、BMP 6多肽、BMP 7多肽、BMP 8多肽、BMP 9多肽、BMP 10多肽、BMP 11多肽、BMP 12多肽、BMP 13多肽、BMP 14多肽、BMP 15多肽、生長分化因子(GDF) 1多肽、GDF 3多肽、GDF 8多肽、GDF 9多肽、GDF 15多肽、節點多肽、抑制素α多肽、抗苗勒激素多肽、左翼分子1多肽、左翼分子2多肽、阿特曼多肽、珀瑟芬多肽或神經營養因子多肽。在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及/或第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽、TGFβ 2多肽、TGFβ 3多肽或其任何組合。在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及/或第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽。
在另一實施例中，第二多肽及/或第三多肽結合至TGFβ 1多肽、TGFβ 2多肽、TGFβ 3多肽或其任何組合及螯合TGFβ 1多肽、TGFβ 2多肽、TGFβ 3多肽或其任何組合。在某些實施例中，第二多肽及/或第三多肽結合至TGFβ 1多肽及螯合TGFβ 1多肽。
融合多肽之多肽可經由連接子胺基酸序列「融合」或「連接」。連接子可為多肽連接子或具有適合可撓性之其他連接子，以便不抑制任一靶向多肽(例如，IL2多肽或TBRII受體多肽)之結合。連接子多肽可為未結構化的(例如，缺少二級結構)、結構化的或其組合。在一些實施例中，連接子序列為IL多肽或可溶性TBRII多肽之天然胺基酸序列。在一些實施例中，連接子對於IL多肽或TGF受體多肽不為原生的。舉例而言，非原生連接子可包含聚甘胺酸、聚丙胺酸、聚絲胺酸胺基酸或其組合(例如，GSSG (SEQ ID NO: 26)、GGSS (SEQ ID NO: 27)、GSAGG (SEQ ID NO: 28)等)。
在一些實施例中，連接子為非天然或合成連接子。如本文中所使用之術語「合成連接子」包括包含或衍生自共價連接至靶向劑且亦共價連接至細胞毒性部分的一組原子之化學部分。連接子包括包含或衍生自以下之化合物：二價基團，諸如伸烷基、伸芳基、伸雜芳基；部分，諸如：-(CR2)nO(CR2)n-，其中R2獨立地為烷氧基(例如，聚伸乙基氧基、PEG、聚亞甲基氧基)及烷胺基(例如，聚伸乙基胺基、聚醚胺，諸如Jeffamine™)之重複單元，且n獨立地＞1，特定言之，n可為1至15；化合物，其包括實例1中所描述之連接子、4-(順丁烯二醯亞胺基甲基)環己甲酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)及4-(2-吡啶基二硫基)丁酸N-丁二醯亞胺酯(SPDB)；及二酸酯及醯胺，其包括丁二酸酯、丁二醯胺、二羥乙酸酯、丙二酸酯及己醯胺；以及肽，諸如但不限於G、A及C (例如，至多10個)與一或多個lys殘基或用於連接至靶向劑及細胞毒性部分之其他適合化學基團之重複單元。連接子視情況為Cl-30伸烷基，未經取代或經一或多個取代基取代，及/或視情況間雜有獨立地選自O、S、NR1之一或多個雜部分，及/或視情況間雜有C(O)及C(S)中之一或多者，其中Rl獨立地選自H及Cl-6烷基。連接子可包含不可裂解(穩定連接子)或可裂解單元(不穩定連接子)，諸如肽鍵或雙硫鍵。連接子可經由反應性官能基結合至靶向劑及/或細胞毒性部分。
可裂解及不可裂解連接子皆可用於合成融合蛋白(ADC)。可裂解連接子包括對溶酶體蛋白酶敏感或對酸性pH敏感之模體(諸如腙，其經水解以裂解吉妥珠單抗奧佐米星(gemtuzumab ozogamicin)及英妥珠單抗奧佐米星(inotuzumab ozogamicin)中之連接子)，或其可含有可藉由麩胱甘肽還原之二硫橋鍵。二硫橋鍵之位阻可經最佳化以限制細胞內部之過早裂解。一般而言，二硫鍵連接子初始裂解以釋放硫醇化合物。諸如腙之酸可裂解連接子經設計以在血液循環中在中性pH下保持穩定，但在酸性細胞區室中，其可經歷水解且釋放細胞毒性藥物。
在一些實施例中，連接子(例如，肽連接子)包含約10個胺基酸至約100個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含約10個胺基酸至約15個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約25個胺基酸、約10個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約75個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸、約15個胺基酸至約20個胺基酸、約15個胺基酸至約25個胺基酸、約15個胺基酸至約30個胺基酸、約15個胺基酸至約40個胺基酸、約15個胺基酸至約50個胺基酸、約15個胺基酸至約75個胺基酸、約15個胺基酸至約100個胺基酸、約20個胺基酸至約25個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約20個胺基酸至約50個胺基酸、約20個胺基酸至約75個胺基酸、約20個胺基酸至約100個胺基酸、約25個胺基酸至約30個胺基酸、約25個胺基酸至約40個胺基酸、約25個胺基酸至約50個胺基酸、約25個胺基酸至約75個胺基酸、約25個胺基酸至約100個胺基酸、約30個胺基酸至約40個胺基酸、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約30個胺基酸至約75個胺基酸、約30個胺基酸至約100個胺基酸、約40個胺基酸至約50個胺基酸、約40個胺基酸至約75個胺基酸、約40個胺基酸至約100個胺基酸、約50個胺基酸至約75個胺基酸、約50個胺基酸至約100個胺基酸或約75個胺基酸至約100個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含約10個胺基酸、約15個胺基酸、約20個胺基酸、約25個胺基酸、約30個胺基酸、約40個胺基酸、約50個胺基酸、約75個胺基酸或約100個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含至少約10個胺基酸、約15個胺基酸、約20個胺基酸、約25個胺基酸、約30個胺基酸、約40個胺基酸、約50個胺基酸或約75個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含至多約15個胺基酸、約20個胺基酸、約25個胺基酸、約30個胺基酸、約40個胺基酸、約50個胺基酸、約75個胺基酸或約100個胺基酸。
一般而言，融合多肽之不同多肽元件可自N端至C端以任何數目個不同組合進行排列或排序。舉例而言，本文中描述融合多肽，其自N端至C端包含IL多肽、第一TGFβ超家族受體多肽及第二TGFβ超家族受體多肽。藉助於另一實例，如本文中所描述之融合多肽亦可自N端至C端包含第一TGFβ超家族受體多肽、IL多肽及第二TGFβ超家族受體多肽。在一些實施例中，融合多肽進一步包含藥物動力學增效劑多肽(例如，Fc多肽或HSA多肽)，其中進一步包含藥物動力學增效劑之融合多肽可自N端至C端以任何數目個不同組合進行排列或排序。 圖 3展示包含IL多肽、第一TGFβ超家族受體多肽及第二TGFβ超家族受體多肽(例如，SEQ ID NO: 10至25)的融合多肽之例示性實施例之非限制性示意性表示。
在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10至20中之任一者具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 10。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 11具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 11具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 11具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 11具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 11具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 11具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 11。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 12具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 12具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 12具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 12具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 12具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 12具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 12。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 13具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 13具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 13具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 13具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 13具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 13具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 13具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 13。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 14具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 14具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 14具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 14具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 14具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 14具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 14具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 14。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 15具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 15具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 15具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 15具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 15具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 15具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 15具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 15。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 16具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 16具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 16具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 16具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 16具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 16具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 16具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 16。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 17具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 17具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 17具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 17具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 17具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 17具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 17具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 17。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 18具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 18具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 18具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 18具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 18具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 18具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 18具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 18。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 19具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 19具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 19具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 19具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 19具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 19具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 19具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 19。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 20具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 20具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 20具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 20具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 20具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 20具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 20具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 20。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 21具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 21具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 21具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 21具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 21具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 21具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 21具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 21。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 22具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 22具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 22具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 22具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 22具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 22具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 22具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 22。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 23具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 23具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 23具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 23具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 23具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 23具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 23具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 23。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 24具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 24具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 24具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 24具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 24具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 24。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 25具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 25具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 25具有至少85%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 25具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 25具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 25具有至少98%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 25具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 25。
在一些實施例中，二價FIST融合多肽包含一或多個胺基酸修飾(例如，取代、缺失、截斷等)。在一些實施例中，融合多肽序列包含大於約5個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約25個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)。在一些實施例中，融合多肽序列包含大於約5個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約10個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約5個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約15個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約5個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約20個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約5個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約25個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約10個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約15個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約10個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約20個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約10個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約25個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約15個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約20個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約15個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約25個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)或約20個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)至約25個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)。在一些實施例中，融合多肽序列包含大於約5個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約10個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約15個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)、約20個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)或約25個胺基酸修飾突變(例如，取代、缺失、截斷等)。在一些實施例中，修飾增加IL-2受體之親和力。在某些實施例中，IL-2受體包含IL-2Rα (稱為CD25)。在某些實施例中，IL-2受體包含IL-2Rβ。在某些實施例中，IL-2受體包含IL-2Rγ。在某些實施例中，修飾增加IL-2Rβ之親和力且減少IL-2Rα之親和力。用於影響IL-2受體之IL-2親和力之此類突變包括此項技術中已知之彼等突變。適合的二價FIST序列或變異體序列(例如，具有一或多個胺基酸缺失、取代及/或***之融合多肽序列)可藉由本文中所描述(例如，如實例1至5中之任一者中所描述)的用於活化免疫細胞(例如，增加的IFN-γ分泌、增加的增殖等)及螯合或結合TGFβ (例如，TGFβ結合等)之方法中之任一者來鑑別。
在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 10之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 11之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 12之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 13之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 14之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 15之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 16之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 17之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 18之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 19之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 20之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 21之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 22之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 23之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 24之胺基酸序列組成。在一些實施例中，融合多肽由SEQ ID NO: 25之胺基酸序列組成。
本文中所揭示之融合多肽可進一步包含藥物動力學調節多肽(例如，改善治療劑之藥物動力學概況的多肽)。舉例而言，融合蛋白可進一步包含與IL多肽之N端融合的免疫球蛋白Fc多肽或人類血清白蛋白(HAS)多肽。在一些實施例中，免疫球蛋白Fc區多肽為人類免疫球蛋白Fc區多肽。在一些實施例中，免疫球蛋白Fc區為IgG Fc區。在一些實施例中，IgG Fc區為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區。在一些實施例中，PK調節子包含白蛋白多肽。在一些實施例中，白蛋白多肽為人類白蛋白多肽。
在某些實施例中，本發明之融合多肽包括於醫藥組合物中，該醫藥組合物包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑、載劑及稀釋劑。在某些實施例中，本發明之融合蛋白係懸浮於無菌溶液中投與。在某些實施例中，溶液包含約0.9% NaCl。在某些實施例中，溶液包含約5.0%右旋糖。在某些實施例中，溶液進一步包含以下中之一或多者：緩衝液，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽、組胺酸、丁二酸鹽、磷酸鹽、碳酸氫鹽及羥基甲胺基甲烷(Tris)；界面活性劑，例如聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20及泊洛沙姆(poloxamer) 188；多元醇/雙醣/多醣，例如葡萄糖、右旋糖、甘露糖、甘露糖醇、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖及聚葡萄糖40；胺基酸，例如甘胺酸或精胺酸；抗氧化劑，例如抗壞血酸、甲硫胺酸；或螯合劑，例如乙二胺四乙酸或乙二醇-雙(β-胺基乙基醚)-N,N,N′,N′-四乙酸。
在某些實施例中，本發明之融合蛋白在投與之前經凍乾及復原運送/儲存。在某些實施例中，凍乾融合多肽調配物包含膨化劑，諸如甘露糖醇、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖、聚葡萄糖40或其組合。凍乾調配物可含於由玻璃或其他適合非反應性物質構成之小瓶中。不論復原抑或不復原，融合蛋白在調配時均可在某一pH (一般小於7.0)下進行緩衝。在某些實施例中，pH可在4.5與6.5、4.5與6.0、4.5與5.5、4.5與5.0或5.0與6.0之間。
在某些實施例中，本文中描述一種製備癌症治療劑之方法，其包含摻合一或多種醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑及本發明之融合多肽。在某些實施例中，本文中描述一種製備用於儲存或運送之癌症治療劑的方法，其包含凍乾本發明之一或多種融合多肽。
本文中描述之融合多肽(例如，SEQ ID NO: 10至25)可由核酸編碼。核酸為包含兩個或更多個核苷酸鹼基之聚核苷酸類型。在某些實施例中，核酸為可用於將編碼聚核苷酸之多肽轉移至細胞中的載體之組分。如本文中所使用，術語「載體」係指能夠運輸其已連接之另一種核酸的核酸分子。一種類型之載體為基因體整合載體或「整合載體」，其可整合至宿主細胞之染色體DNA中。另一類型之載體為「游離型」載體，例如能夠進行染色體外複製之核酸。能夠導引其可操作地連接之基因之表現的載體在本文中稱為「表現載體」。適合載體包含質體、細菌人工染色體、酵母人工染色體、病毒載體及其類似者。在表現載體中，用於控制轉錄之調控元件(諸如啟動子、強化子、聚腺苷酸化訊息)可衍生自哺乳動物、微生物、病毒或昆蟲基因。可另外併入通常由複製起點賦予之宿主中複製的能力及促進識別轉化體之選擇基因。可採用衍生自病毒之載體，該等病毒諸如慢病毒、反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒及其類似者。質體載體可經線性化以整合至染色體位置中。載體可包含將位點特異性導引整合至基因體中之限定位置或限制位點集合中的序列(例如，AttP-AttB重組)。另外，載體可包含衍生自轉位元件之序列。 使用方法
本文中所揭示之融合多肽適用作用於癌症療法之有效血管生成抑制性及抗癌化合物。舉例而言，所揭示融合多肽為誘導無法藉由其單一組分或組合實現的在IL-2受體下游之獨特基因表現圖譜之有效免疫療法，此產生新的藥理學特性。此等新穎多功能蛋白質可同時活化協同作用以有效消除癌細胞之若干免疫系統機制及傳訊路徑。在細胞水準下，免疫療法平台活化全套淋巴樣細胞(例如，T、B、NK及NK-T細胞)，且部分由於觸發針對惡性細胞之特異性免疫反應級聯的GM-CSF誘導而間接激活抗原呈遞細胞(例如，樹突狀細胞及巨噬細胞)。在分子水準下，其活化關鍵轉錄因子以及對增強先天性及適應性免疫反應至關重要的傳訊分子。本文中所描述之融合多肽靶向且同步針對癌症的免疫系統之各個臂。
因此，本文中揭示抑制或減少患有癌症之個體中腫瘤生長、血管生成及/或進展的方法，其包含向個體投與包含以下之融合多肽：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽；藉此抑制或減少個體中之腫瘤生長及/或進展。此外，提供在抑制或減少患有癌症之個體中的腫瘤生長、血管生成及/或進展之方法中使用的融合多肽，該方法包含向個體投與包含以下之融合多肽：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽；藉此抑制或減少個體中之腫瘤生長及/或進展。
本文中亦揭示抑制或減少患有癌症之個體中腫瘤生長、血管生成及/或進展的方法，其包含向個體投與包含以下之融合多肽：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽；其中融合多肽活化免疫細胞。此外，提供在抑制或減少患有癌症之個體中的腫瘤生長、血管生成及/或進展之方法中使用的融合多肽，該方法包含向個體投與包含以下之融合多肽：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽；其中融合多肽活化免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞選自由以下組成之群：T細胞、NK細胞、B細胞或其組合。在某些實施例中，活化包含增加細胞增殖，增加細胞介素傳訊(例如，IFNγ)及/或減少TGFβ1介導之抑止。
另外，揭示中和或殺死患有癌症之個體中腫瘤細胞的方法，其包含向個體投與包含以下之融合多肽：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽；藉此中和或殺死個體中之腫瘤細胞。此外，提供在中和或殺死患有癌症之個體中的腫瘤細胞之方法中使用的融合多肽，該方法包含向個體投與包含以下之融合多肽：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽，藉此中和或殺死個體中之腫瘤細胞。
亦揭示治療或減輕患有癌症之個體中癌症的方法，其包含向個體投與包含以下之融合多肽：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽；藉此治療或減輕個體之癌症。此外，提供在治療或減輕患有癌症之個體中的癌症之方法中使用的融合多肽，該方法包含向個體投與包含以下之融合多肽：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽；藉此治療或減輕個體之癌症。
亦提供活化表現IL受體之細胞的方法，其包含：使細胞與融合多肽接觸，該融合多肽包含：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽。在一些實施例中，細胞為免疫細胞。免疫細胞可活體內或離體接觸，且隨後活化。在活體內，免疫細胞可駐留於腫瘤微環境內。此外，提供在活化表現IL受體之細胞之方法中使用的融合多肽，該方法包含：使細胞與融合多肽接觸，該融合多肽包含(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽。
亦實施使用本文中所揭示之融合多肽利用免疫細胞之離體活化的方法。舉例而言，揭示離體活化免疫細胞之方法，其包含使免疫細胞與包含以下之組合物接觸：(a)介白素(IL)多肽；(b)第一TGFβ超家族受體多肽；及(c)第二TGFβ超家族受體多肽；藉此產生活化免疫細胞。此類方法可藉由向患有癌症或腫瘤之個體投與活化免疫細胞而應用於治療癌症或腫瘤。舉例而言，本文中所描述之融合多肽在用於免疫細胞之離體活化的方法中適用。免疫細胞之離體處理亦適用於產生且擴增用於產生嵌合抗原受體細胞療法之免疫細胞(例如，CAR-T或CAR-NK細胞及B細胞)。舉例而言，包含免疫細胞之白細胞層(例如，白血球分離術產物)可與本文中所揭示之融合多肽接觸以擴增待用於嵌合抗原受體細胞療法中之T細胞或NK細胞。在一些實施例中，免疫細胞表現IL-2或IL-15受體。在一些實施例中，免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。在一些實施例中，融合多肽抑制或減少腫瘤微環境內之免疫細胞之免疫抑止，及/或減少或抑制腫瘤微環境中之免疫抑止細胞之活化。在一些實施例中，癌症為血液癌症。
在一些實施例中，IL多肽為IL-2。在一些實施例中，IL多肽為IL-15。在某些實施例中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 2。在某些實施例中，IL-2多肽包含與SEQ ID NO: 2具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，IL多肽為IL-2。在一些實施例中，IL多肽為IL-15。在某些實施例中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 3。在某些實施例中，IL-2多肽包含與SEQ ID NO: 3具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，IL-15多肽包含SEQ ID NO: 5。在某些實施例中，IL-15多肽包含與SEQ ID NO: 5具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，IL多肽為截斷多肽。
在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及/或第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II多肽。在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II多肽，該可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9或其組合。在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列，且第二TGFβ超家族受體多肽包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之截斷。在某些實施例中，可溶性TGFβ受體II多肽包含與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及/或第二TGFβ超家族受體多肽靶向TGF-β1多肽、TGF-β2多肽、TGF-β3多肽、活化素βA多肽、活化素βB多肽、活化素βC多肽、活化素βE多肽、骨成形性蛋白質(BMP) 2多肽、BMP 3多肽、BMP4多肽、BMP 5多肽、BMP 6多肽、BMP 7多肽、BMP 8多肽、BMP 9多肽、BMP 10多肽、BMP 11多肽、BMP 12多肽、BMP 13多肽、BMP 14多肽、BMP 15多肽、生長分化因子(GDF) 1多肽、GDF 3多肽、GDF 8多肽、GDF 9多肽、GDF 15多肽、節點多肽、抑制素α多肽、抗苗勒激素多肽、左翼分子1多肽、左翼分子2多肽、阿特曼多肽、珀瑟芬多肽或神經營養因子多肽。在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及/或第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽、TGFβ 2多肽、TGFβ 3多肽或其任何組合。在一些實施例中，第一TGFβ超家族受體多肽及/或第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽。
在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在一些實施例中，融合多肽包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合多肽包含與SEQ ID NO: 10至20中之任一者具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的胺基酸序列。
術語「癌症」包括原發性惡性腫瘤(例如，其細胞尚未遷移至個體體內除原始腫瘤位點以外之位點的彼等原發性惡性腫瘤)及繼發性惡性腫瘤(例如，由轉移(腫瘤細胞遷移至不同於原始腫瘤位點之第二位點)產生的彼等繼發性惡性腫瘤)。
「腫瘤」係指贅生性細胞生長及增殖(不論惡性抑或良性)以及所有癌前及癌細胞及組織。
本文中所揭示之方法適用於治療包含實體腫瘤之癌症或治療實體腫瘤。術語「實體腫瘤」係指例如乳癌；卵巢癌；結腸癌，且一般而言GI (胃腸)道癌；子宮頸癌；肺癌，特定言之小細胞肺癌及非小細胞肺癌；頭頸癌；膀胱癌；***癌或卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)。融合多肽中和及/或抑制實體腫瘤之生長。此外，視所用腫瘤類型及特定組合而定，可獲得腫瘤體積之減小。本文中所揭示之組合亦適合於預防腫瘤之轉移性擴散及微轉移之生長或發展。本文中所揭示之組合尤其適用於治療預後不佳的患者，尤其患有轉移性黑素瘤或胰臟癌之此類預後不佳的患者。
此外，本文中所揭示之方法適用於治療血液癌症。術語「血液癌症」係指血液之癌症，且包括白血病及惡性淋巴增生性病症以及其他者。「白血病」係指血液之癌症，其中形成過多白血球或紅血球，因此擠出構成血液之其他部分，諸如血小板及正常紅血球。應理解，白血病之病例分類為急性或慢性。急性白血病中之癌細胞在未成熟階段阻斷，但其持續倍增。慢性白血病進展更緩慢，其中癌細胞發育至完全成熟。此外，白血球可為骨髓性或淋巴樣的。因此，藉助於實例，某些形式之白血病可為急性淋巴球性(或淋巴母細胞性)白血病(ALL)；急性骨髓性白血病(AML)；慢性淋巴球性白血病(CLL)；或慢性骨髓性白血病(CML)；及骨髓發育不良症候群。「惡性血液病症」可指淋巴瘤，諸如霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)及非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)或多發性骨髓瘤以及其他者。
在某些實施例中，本文中揭示適用於治療癌症或腫瘤之融合蛋白。治療係指試圖改善或減輕所治療之病狀的方法。相對於癌症，治療包括但不限於減小腫瘤體積、減少腫瘤體積生長、增加無進展存活期或總體預期壽命。在某些實施例中，治療可影響所治療之癌症之緩解。在某些實施例中，治療涵蓋作為意欲預防先前所治療癌症或腫瘤之復發或進展的防治性或維持性劑量之用途。熟習此項技術者應理解，並非所有個體均將同等或完全地對所投與之治療起反應，但此等個體仍被視為經治療。
本文中所提供之融合多肽適用於活化免疫反應(例如，抗腫瘤免疫反應)。在一些實施例中，免疫細胞表現IL-2或IL-15受體。在一些實施例中，免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。在一些實施例中，融合多肽抑制或減少腫瘤微環境內之免疫細胞之免疫抑止，及/或減少或抑制腫瘤微環境中之免疫抑止細胞之活化。因此，在一些實施例中，治療(treating/treatment)包含活化靶向腫瘤細胞之免疫效應細胞及/或減少免疫抑止細胞(例如，Treg細胞、腫瘤相關巨噬細胞(TAM)、骨髓衍生之抑止細胞(MDSC)、腫瘤相關嗜鹼性球(TAN)及癌症相關成纖維細胞(CAF))之活化。
術語「T細胞」係指存在於PBMC中且表現「CD3」之表面標記物(T細胞受體)的淋巴球性細胞之子集。除非另外指示，否則T細胞意欲包括CD4+ (例如，T輔助細胞)及CD8+ (例如，細胞毒性殺手細胞)。
本文中所提供之方法亦適用於抑止或減少免疫抑止性免疫細胞，諸如T調控細胞。術語「Treg」或「調控T細胞」係指抑止CD4+CD25−及CD8+ T細胞增殖及/或效應功能或以其他方式下調免疫反應的CD4+CD25+FOxP3+ T細胞。值得注意地，Treg可下調由CD8 T細胞、自然殺手細胞、自然殺手T細胞以及其他免疫細胞介導之免疫反應。在一些實施例中，進一步涵蓋阻斷或預防免疫抑止細胞分化或活化。
在某些實施例中，癌症或腫瘤為實體癌症或腫瘤。在某些實施例中，癌症或腫瘤為血液癌症或腫瘤。在某些實施例中，癌症或腫瘤包含***腫瘤、心臟腫瘤、肺腫瘤、小腸腫瘤、結腸腫瘤、脾腫瘤、腎臟腫瘤、膀胱腫瘤、頭部腫瘤、頸部腫瘤、卵巢腫瘤、***腫瘤、腦腫瘤、胰臟腫瘤、皮膚腫瘤、骨骼腫瘤、骨髓腫瘤、血液腫瘤、胸腺腫瘤、子宮腫瘤、睾丸腫瘤及肝臟腫瘤。在某些實施例中，可使用本文中所描述之融合蛋白治療的腫瘤包含腺瘤、腺癌、血管肉瘤、星形細胞瘤、上皮癌、胚細胞瘤、神經膠母細胞瘤、神經膠質瘤、血管內皮瘤、血管肉瘤、血腫、肝母細胞瘤、白血病、淋巴瘤、神經管胚細胞瘤、黑素瘤、神經母細胞瘤、骨肉瘤、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤及/或畸胎瘤。在某些實施例中，腫瘤/癌症選自以下之群：肢端雀斑痣性黑素瘤、光化性角化症、腺癌、腺樣囊性癌瘤、腺瘤、腺肉瘤、腺鱗癌瘤、星形膠細胞腫瘤、白托令氏腺癌瘤(Bartholin gland carcinoma)、基底細胞癌、支氣管腺癌瘤、毛細管類癌、癌瘤、癌肉瘤、膽管癌、軟骨肉瘤、囊腺瘤、內胚層竇瘤、子宮內膜增生、子宮內膜基質肉瘤、子宮內膜樣腺癌、室管膜肉瘤、斯文氏肉瘤(Swing's sarcoma)、局灶性結節性增生、胃癌瘤、生殖細胞系腫瘤、神經膠母細胞瘤、升糖素瘤、血管母細胞瘤、血管內皮瘤、血管瘤、肝臟腺瘤、肝腺瘤病、肝細胞癌、胰島素瘤(insulinite)、上皮內贅瘤形成、上皮內鱗狀細胞贅瘤形成、侵襲性鱗狀細胞癌、大細胞癌、脂肪肉瘤、肺臟癌瘤、淋巴母細胞性白血病、淋巴球性白血病、平滑肌肉瘤、黑素瘤、惡性黑素瘤、惡性間皮腫瘤、神經鞘腫瘤、神經管胚細胞瘤、髓上皮瘤、間皮瘤、黏液表皮樣癌瘤、骨髓白血病、神經母細胞瘤、神經上皮腺癌、結節性黑素瘤、骨肉瘤、卵巢癌、乳頭狀漿液性腺癌、腦垂體腫瘤、漿細胞瘤、假性肉瘤、***癌、肺母細胞瘤、腎細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、漿液性癌瘤、鱗狀細胞癌、小細胞癌瘤、軟組織癌瘤、生長抑素分泌腫瘤、鱗狀癌瘤、鱗狀細胞癌、未分化性瘤、葡萄膜黑素瘤、疣狀癌、***/外陰癌瘤、舒血管腸肽瘤(VIPpoma)及威爾姆氏腫瘤(Wilm's tumor)。在某些實施例中，待使用本文中所描述之一或多種融合蛋白治療的腫瘤/癌症包含腦癌；頭頸癌；結腸直腸癌；急性骨髓性白血病；前B細胞急性淋巴母細胞性白血病；膀胱癌；星形細胞瘤，較佳為II級、III級或IV級星形細胞瘤；神經膠母細胞瘤；多形性神經膠母細胞瘤；小細胞癌及非小細胞癌，較佳為非小細胞肺癌；肺腺癌；轉移性黑素瘤；雄激素非依賴性轉移性***癌；雄激素依賴性轉移性***癌；***腺癌；及乳癌，較佳為乳腺管癌及/或***癌。在某些實施例中，使用本發明之融合蛋白治療的癌症包含神經膠母細胞瘤。在某些實施例中，使用一或多種本發明之融合蛋白治療之癌症包含胰臟癌。在某些實施例中，使用一或多種本發明之融合蛋白治療的癌症包含卵巢癌。在某些實施例中，使用一或多種本發明之融合蛋白治療的癌症包含肺癌。在某些實施例中，使用一或多種本發明之融合蛋白治療的癌症包含***癌。在某些實施例中，使用一或多種本發明之融合蛋白治療的癌症包含結腸癌。在某些實施例中，所治療之癌症包含神經膠母細胞瘤、胰臟癌、卵巢癌、結腸癌、***癌或肺癌。在某一實施例中，癌症難以用其他治療劑治療。在某一實施例中，所治療之癌症為復發性的。在某一實施例中，癌症為復發性/難治性神經膠母細胞瘤、胰臟癌、卵巢癌、結腸癌、***癌或肺癌。
術語「腫瘤微環境」係指在實體腫瘤中及周圍支持腫瘤細胞之生長及轉移的微環境(例如，其中惡性細胞或惡性細胞簇所定位之區/區域)。腫瘤微環境包括周圍血管、免疫細胞、成纖維細胞、其他細胞、可溶因子、傳訊分子、胞外基質，及可促進贅生性轉化、支持腫瘤生長及侵襲、保護腫瘤免受宿主免疫、培養治療抗性且為休眠轉移成長提供生態棲位的機械線索。腫瘤與其周圍微環境密切相關且不斷相互作用。腫瘤可藉由釋放細胞外訊息、促進腫瘤血管生成及誘導周邊免疫耐受性來影響其微環境，而微環境中之免疫細胞可影響癌細胞之生長及進化。
在某些實施例中，可藉由適用於投與含融合蛋白之醫藥組合物的任何途徑向有需要之個體投與融合蛋白，該途徑諸如(例如)皮下、腹膜內、靜脈內、肌內、瘤內或大腦內等。在某些實施例中，靜脈內投與融合蛋白。在某些實施例中，皮下投與融合蛋白。在某些實施例中，瘤內投與融合蛋白。在某些實施例中，融合蛋白按適合的劑量時程進行投與，該劑量時程例如每週、每週兩次、每月、每月兩次、每兩週一次、每三週一次或每月一次等。在某些實施例中，每三週一次投與融合蛋白。融合蛋白可以任何治療有效量進行投與。在某些實施例中，治療可接受之量在約0.1 mg/kg與約50 mg/kg之間。在某些實施例中，治療可接受之量在約1 mg/kg與約40 mg/kg之間。在某些實施例中，治療可接受之量在約5 mg/kg與約30 mg/kg之間。治療有效量包括足以減輕與待治療之疾病或病痛相關之一或多種症狀的量。
除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術術語、標記法以及其他技術及科學術語意欲具有與一般熟習所主張主題的所屬技術者通常所理解相同的含義。在一些情況下，為清楚起見及/或為便於參考，本文中定義具有通常所理解含義之術語，且本文中包括此類定義不應必須解釋為表示與此項技術中一般所理解之實質性差異。
如本文中所使用，術語「治療(treatment/treating)」參考用於在接受者中獲得有益或所需結果之藥物或其他干預方案來使用。有益或所需結果包括但不限於治療益處及/或防治益處。治療益處可指所治療之症狀或潛在病症的根除或減輕。另外，可藉由根除或減輕與潛在病症相關之生理學症狀中之一或多者以使得在個體中觀測到改善來實現治療益處，儘管彼個體可能仍罹患潛在病症。防治作用包括延緩、預防或消除疾病或病狀之出現；延緩或消除疾病或病狀之症狀之發作；減緩、阻止或逆轉疾病或病狀之進展；或其任何組合。對於防治益處，處於罹患特定疾病之風險下的個體或報導疾病之生理學症狀中之一或多者的個體可進行治療，即使可能尚未作出此疾病之診斷。
術語本申請案之化合物之「治療有效量」係指將引發個體之生物或醫學反應的本申請案之化合物之量，該生物或醫學反應例如減少或抑制腫瘤細胞增殖，或減輕症狀、緩解病狀、減緩或延緩疾病進展或預防疾病等在一個非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指當向個體投與時，可有效至少部分地緩解、抑制、預防及/或減輕病狀或病症或疾病，或至少部分地抑制靶向酶或受體之活性的本申請案之化合物之量。
術語「目標細胞」係指為待藉由本發明收集、分離(isolated)或分離(separated)之所需細胞的細胞類型、細胞群體或細胞組成。目標細胞表示本文中所描述之各種程序所需要或經設計以進行純化、收集、工程改造等的細胞。何為特異性細胞將視使用該術語之情形而定。舉例而言，若程序之目標為分離特定種類之幹細胞，則彼細胞將為程序之目標細胞。術語「目標細胞」及「所需細胞」可互換，且具有關於本發明之相同含義。目標細胞可以屬-種關係存在。舉例而言，若目標細胞包含白細胞，則目標細胞將包括T細胞。
本文中所揭示之方法尤其適用於或包含免疫細胞之活化。術語「免疫細胞」一般係指免疫系統之細胞。免疫細胞衍生自骨髓或淋巴樣細胞系。一般而言，本文中所揭示之方法係針對但不限於免疫效應細胞之活化。
術語「免疫效應細胞」係指參與免疫反應，例如參與促進免疫效應反應的細胞。免疫效應細胞之實例包括T細胞，例如α/β T細胞及γ/δ T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T (NKT)細胞、肥大細胞及骨髓衍生之吞噬細胞。在某些實施例中，T細胞、NK細胞、B細胞、NKT細胞及γ/δ T細胞或其組合藉由融合多肽活化。
如本文中所使用之術語「免疫效應功能」或「免疫效應反應」係指例如免疫效應細胞的增強或促進免疫攻擊目標細胞的功能或反應。例如，免疫效應功能或反應係指T細胞或NK細胞的促進殺死目標細胞或抑制目標細胞之生長或增殖的特性。免疫效應功能包括導引細胞毒性、細胞介素釋放、趨化細胞素釋放、噬菌作用，或激活或延續免疫反應之其他免疫功能。
術語「效應功能」係指細胞之特殊功能。T細胞之效應功能例如可為溶胞活性或輔助活性，包括分泌細胞介素。
術語「骨髓細胞」係指骨髓系之終末分化細胞。此等細胞包括嗜中性球、嗜酸性球及單核球/巨噬細胞、骨髓樹突狀細胞。在本發明之任何態樣之一個實施例中，骨髓細胞為嗜中性球、嗜酸性球或單核球/巨噬細胞/樹突狀細胞。
術語「巨噬細胞」及/或「巨噬細胞樣細胞」一般係指巨噬細胞、單核球及巨噬細胞/單核球系之細胞，以及執行一般與巨噬細胞相關之功能的任何其他類似細胞，該等功能諸如噬菌作用或向諸如T細胞及B細胞的其他類別之免疫細胞進行抗原呈遞以便使此等細胞對特定目標敏感，該特定目標包括但不限於病毒、細菌細胞、其他外來細胞、癌細胞及其他非所需增殖性細胞。
如本文中所用之術語「淋巴球」包括自然殺手(NK)細胞、T細胞或B細胞。NK細胞為表示固有免疫系統之主要組分的細胞毒性(cytotoxic/cell toxic)淋巴球之一種類型。NK細胞殺死腫瘤及受病毒感染之細胞。
術語「自然殺手(NK)細胞」係指不存在特異性抗原刺激之情況下且在無根據MHC類別之限制的情況下殺死目標細胞的免疫系統之細胞。目標細胞可為腫瘤細胞或攜帶病毒之細胞。NK細胞之特徵在於存在CD56及不存在CD3表面標記物。
術語「T細胞」係指表現「CD3」(T細胞受體)之表面標記物的淋巴球性細胞之子集。除非另外指示，否則T細胞意欲包括CD4 +(例如，T輔助細胞)及CD8 +(例如，細胞毒性殺手細胞)。
術語「內源性細胞」用於指衍生自供體(或患者)之細胞，與來自細胞株之細胞進行區別。內源性細胞一般為特異性細胞類型可自其分離或富集之異質細胞群。內源性細胞可意欲用於患者之自體或同種異體治療。
在本申請案通篇中，各種實施例可以範圍格式呈現。應理解，範圍格式中之描述僅為方便及簡潔起見且不應視為對本發明之範疇的不靈活限制。因此，範圍之描述應被視為已特定揭示所有可能的子範圍以及彼範圍內之個別數值。舉例而言，對諸如1至6之範圍的描述應視為已特定揭示子範圍，諸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及在彼範圍內之個別數值，例如1、2、3、4、5及6。不管範圍之廣度如何，此均適用。
除非上下文另外明確規定，否則如本說明書及申請專利範圍中所用，單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個參考物。舉例而言，術語「一樣本」包括複數個樣本，包括其混合物。
術語「測定」、「量測」、「評估」、「評定」、「分析(assaying)」及「分析(analyzing)」通常可在本文中互換使用以指量測之形式。該等術語包括確定要素是否存在(例如，偵測)。此等術語可包括定量、定性或定量及定性測定。評定可為相對或絕對的。「偵測…之存在」可視上下文而定，包括除測定某物是否存在以外，測定其存在之量。
術語「個體(subject)」、「個體(individual)」或「患者」通常在本文中互換使用。「個體」可為含有所表現遺傳物質之生物性實體。生物性實體可為植物、動物或微生物，包括例如細菌、病毒、真菌及原蟲。個體可為活體內獲得或活體外培養的生物性實體之組織、細胞及其後代。個體可為哺乳動物。哺乳動物可為人類。在一些實施例中，個體可經診斷或疑似處於癌症之高風險下。在一些實施例中，個體可經診斷或疑似處於患有腫瘤之高風險下。在一些實施例中，個體未必經診斷或疑似處於癌症之高風險下。
術語「活體內」用以描述發生於個體體內之事件。
術語「離體」用以描述發生於個體體外之事件。離體分析不在個體上進行。相反，其在自個體分離之樣本上進行。在樣本上進行的活體外分析之一實例為「離體」分析。
術語「活體外」用於描述在用於容納實驗室試劑以使得其與自其獲得物質之生物來源分離的容器中所含之位置中發生的事件。活體外分析可涵蓋基於細胞之分析，其中採用活細胞或死亡的細胞。活體外分析亦可涵蓋無細胞分析，其中不採用完整細胞。
如本文中所使用，術語「約」某數字係指彼數字加或減彼數字之10%。術語「約」某範圍係指彼範圍減去其最低值之10%及加上其最大值之10%。
本文中所使用之章節標題僅用於組織目的，且不應解釋為限制所描述主題。 實例
以下實例僅出於說明性目的而包括，且並不意欲限制本發明之範疇。 實例1 - 免疫細胞之經改良IL-2活化
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示，與包含介白素-2 (IL-2)多肽及單一sTBRII受體多肽(單價FIST)之融合蛋白相比，包含IL-2多肽、第一sTBRII受體多肽及第二sTBRII受體多肽(bFIST)之融合多肽活化人類NK細胞中之更高含量的IFN-γ及CXCL10。
藉由負向選擇自PBMC分離人類T細胞及NK細胞，且用FIST (IL2-sTBRII，單價)或具有二價sTBRII陷阱(IL2-sTBRII-sTBRII)之FIST變異體刺激48小時。在48h培育之後，收集經調節之培養基以藉由ELISA對來自T細胞之IFN-γ及來自NK細胞之CXCL10之含量進行定量。如 圖 1之資料中所展示，bFIST顯示比FIST (單價FIST)顯著更高的IL-2受體活化。 實例2 - 經改良的TGFβ1結合
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示，與包含介白素-2 (IL-2)多肽及單一sTBRII受體多肽(單價FIST)之融合蛋白相比，包含IL-2多肽、第一sTBRII受體多肽及第二sTBRII受體多肽(bFIST)之融合多肽更有效地結合活性TGFβ1。
在RT下，將用含有0.1%人類或牛血清蛋白(BSA)之4 mM HCl預先活化之人類活性TGFβ1 (2 ng/mL)與sTBRII同功型2 (長)、FIST (單價FIST)或bFIST (5-20 nmoL)一起培育30分鐘，且藉由ELISA (用於人類TGFβ1免疫分析之ELISA)對溶液中之游離活性TGFβ進行定量。
bFIST以比sTBRII顯著更低的濃度有效阻斷溶液中之活性TGFβ1，如彼 圖 2中所示。此等結果指示作為融合蛋白之部分的IL-2亦修飾sTBRII部分及其與活性TGFβ之結合特性。此外，二價sTBRII陷阱變異體具有更有效的TGFβ阻斷活性。 實例3 - 阻斷溶液中之TGFβ同功型
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示，包含介白素-2 (IL-2)多肽、第一sTBRII受體多肽及第二sTBRII受體多肽之融合多肽更有效地結合TGFβ同功型。
比較等莫耳濃度之bFISTv3與FIST (單價FIST)抑制TGFβ1介導的CTLL-2增殖(IL-2依賴性T淋巴球細胞株)之抑止的能力。藉由將bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照與1 ng/mL活性TGFβ同功型一起培育來測定藉由bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(TbRII同功型2)對溶液中TGFβ同功型之阻斷活性。比較等莫耳濃度(5-5×10 -6nmoL之範圍)之bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(TβRII同功型2)阻斷溶液中之活性TGFβ同功型的能力。將bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照與稀釋於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之1 ng/mL活性TGFβ同功型一起培育30分鐘，且藉由對各TGFβ同功型具有特異性之ELISA對游離TGFβ (未阻斷)進行定量。
與FIST及對照TβRII同功型2相比，bFISTv3顯示出在皮莫耳效力下對TGFb1 (9皮莫耳)及TGFβ3 (70皮莫耳)之親和力顯著增加( 圖 4A 至圖 4 C)。 圖 4A展示TGFb1結合之阻斷。 圖 4B展示TGFb2結合之阻斷。 圖 4C展示TGFb3結合之阻斷。 表 1展示溶液中之TGFβ阻斷活性的結合值。TGFβ1及TGFβ3同功型為最致癌同功型以及腫瘤免疫抗性、血管生成、轉移及免疫抑止之強效誘導子。TGFβ1及TGFβ3同功型亦為纖維化疾病之已知誘導子。相比之下，TGFβ2未藉由融合蛋白或對照阻斷。TGFβ2為造血、心臟血管功能以及葡萄糖及脂肪酸代謝之重要調控因子。
表 1 ： 溶液中之活性 TGFβ 阻斷活性的 IC50 值
分子 TGFβ 1 TGFβ 2 TGFβ 3
TbRII ( 同功型II) 0.02 nM NA 0.26 nM
FIST 1.29 nM NA 3.6 nM
bFISTv3 0.009 nM NA 0.07 nM
實例4 - 抑制TGFb1介導的CTLL-2增殖之抑止
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示，包含介白素-2 (IL-2)多肽、sTβRII受體多肽及第二sTβRII受體多肽之融合多肽更有效地誘導細胞毒性T細胞增殖且預防TGFβ1介導之抑止。
比較等莫耳濃度(50-5×10 -5nmoL之範圍)之bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(IL-2及TβRII同功型體2)抑制活性TGFβ1介導的CTLL-2增殖之抑止的能力。將CTLL-2細胞(5×10 3個細胞/孔)在37℃下在具有/不具有活性TGFβ1 (1 ng/mL)之情況下用等莫耳濃度之bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照刺激72小時。在培育期之後，藉由發光細胞活力分析來測定細胞增殖。藉由劑量-反應曲線使用非線性回歸模型用S形劑量反應來測定絕對IC50。存活率(%)=(Lum Test article-Lum Medium control)/(Lum Vehicle control-Lum Medium control)×100%。藉由發光訊息與細胞劑量曲線來定量細胞數目。bFISTv3誘導CTLL-2細胞增殖，但比FIST (單價FIST)更有效地預防TGFβ1介導的CTLL-2增殖之抑止。 圖 5A：用bFISTv3刺激之CTLL-2增殖。 圖 5B：在存在活性TGFβ1 (1 ng/mL)之情況下用bFISTv3刺激之CTLL-2增殖。 圖 5C：用FIST (單價FIST)刺激之CTLL-2增殖。 圖 5D：在存在活性TGFβ1 (1 ng/mL)之情況下用FIST (單價FIST)刺激之CTLL-2增殖。 圖 5E：用IL-2刺激之CTLL-2增殖。 圖 5F：在存在活性TGFβ1 (1 ng/mL)之情況下用IL-2刺激之CTLL-2增殖。資料展示為平均值 +SD，**p＜0.005。TGFβ1已知經由多種路徑抑制IL-2傳訊及T細胞增殖。TGFβ1抑制IL-2R下游之JAK/STAT級聯之組分之磷酸化及活化，以及在核能階下對IL-2目標基因之子集(包括c-Myc、週期素D2及週期素)發揮抑制活性。
表 2 ： 回應於融合蛋白或對照之刺激的 CTLL-2 細胞增殖之 IC50 值
分子 IC50 頂部 底部 斜率
IL-2 0.057 106 1.04 ~12
IL2+Tβ RII 0.131 116 1.26 1.6
FIST 0.063 121 3.8 1.56
bFISTv3 0.459 137 0.07 0.69
表 3 ： 抑制 CTLL-2 細胞增殖之 TGFb1- 依賴性抑止的 IC50 值
分子 IC50 頂部 底部 斜率
IL-2 ~0.051 37 1.22 ~6.85
IL2+Tβ RII 0.322 94 2.21 1.01
FIST 0.120 54 -3.4 0.39
bFISTv3 0.650 106 0 0.90
實例5 - 效應記憶T細胞及終末分化效應記憶細胞之bFIST增殖
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示，包含介白素-2 (IL-2)多肽、sTβRII受體多肽及第二sTβRII受體多肽之融合多肽更有效地誘導效應記憶(T EM)及終末分化效應記憶(T EMRA)CD8 T細胞兩者之細胞介素產生及增殖。
將衍生自經CEF肽池刺激之PBMC的純化人類T細胞用CellTrace TM紫色標記以追蹤T細胞增殖(CellTrace TM意謂螢光(MFI)隨細胞增殖增加而減少)。用等莫耳濃度之bFISTv3、FIST (單價FIST)或TbRII同功型2刺激CD8 +T細胞、效應記憶T細胞(CCR7 -CD45RA -CD62L -CD8 +T細胞)及終末分化效應記憶CD8 T細胞(CCR7 -CD45RA +CD62L -CD8 +T細胞)之增殖。 用CEF肽池將來自健康供體之人類PBMC刺激整夜以誘導抗原特異性T細胞之產生。藉由免疫磁性負向選擇使用人類T細胞分離套組自衍生自健康供體之PBMC純化T細胞(CD3 +)。在用5 nmoL之bFISTv3、FIST (單價FIST)及IL-2刺激48小時之前，用CellTrace TM紫色標記純化T細胞。用對記憶T細胞群具有特異性之螢光結合抗體來標記經刺激之T細胞。在培育期之後，收集細胞上清液以藉由ELISA定量IFNγ之濃度，且收集細胞以藉由流式細胞量測術測定各T細胞亞群之細胞增殖。bFISTv3誘導自T細胞之IFNγ產生以及顯著更高的效應記憶(T EM)及終末分化效應記憶(T EMRA) CD8 T細胞兩者之增殖(例如，在與FIST進行比較時)。 圖 6A展示bFISTv3誘導的效應記憶T細胞(T EM)及終末分化效應記憶細胞(T EMRA)之增殖。 圖 6B展示FIST誘導的效應記憶T細胞(T EM)及終末分化效應記憶細胞(T EMRA)之增殖。 圖 6C展示IL-2誘導的效應記憶T細胞(T EM)及終末分化效應記憶細胞(T EMRA)之增殖。 圖 6D展示衍生自兩個供體的經刺激T EM之CellTrace TMMFI值之平均值(MFI之減小表示增殖增加)。 圖 6E展示衍生自兩個供體之經刺激T EMRA之平均CellTrace TMMFI值(MFI之減小表示增殖增加)。 圖 6F展示對藉由用bFISTv3、FIST (單價FIST)或IL-2刺激48小時之T細胞進行的IFNγ產生之定量。資料展示為平均值 +SD，*p＜0.05。效應記憶T淋巴球為激活抗原之淋巴球，其可在用腫瘤相關抗原進行第二次攻擊時賦予快速免疫保護。記憶T細胞亞群CCR7 -可遷移至發炎組織(例如，腫瘤部位)且發揮即時效應功能，如針對癌細胞之細胞毒性。CCR7 -記憶CD8 +T細胞之特徵在於IFNγ之產生及為其抗腫瘤溶胞活性所必需的含穿孔蛋白之細粒。特定言之，穿孔蛋白表現在終末分化效應記憶T細胞(CD45RA +CCR7 -CD62L -)中為顯著的。 實例6 - bFIST抑制TGFb1介導的原發性NK細胞增殖之抑止且增加IFNγ產生
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示，包含介白素-2 (IL-2)多肽、sTβRII受體多肽及第二sTβRII受體多肽之融合多肽更有效地抑制及/或減少TGFb1介導的原發性NK細胞增殖之及IFNγ產生。
藉由免疫磁性負向選擇使用人類NK細胞分離套組自衍生自健康供體之PBMC純化人類NK細胞。經純化NK細胞經標記為用等莫耳濃度(25 nM、12.5 nM及6.25 nM)之bFISTv3、FIST (單價FIST)及IL-2刺激5天。在培育期之後，收集細胞培養物上清液以藉由ELISA定量IFNγ之濃度。藉由基於螢光之分析使用細胞數目/發光曲線定量活細胞之數目，且相對於陽性對照(IL-2+TbRII)作為用於此等實驗條件之NK細胞增殖之最大刺激計算細胞增殖之百分比。
將衍生自周邊單核細胞(PBMC)之經純化人類NK細胞在具有或不具有活性TGFb1 (1 ng/mL)之情況下用等莫耳濃度之bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(IL-2+TbRII)刺激5天。收集培養物上清液以藉由ELISA定量IFNγ之量，且藉由定量所存在之ATP之量來測定培養物中活細胞之數目，其指示代謝活性細胞。 圖 7A展示在不存在活性TGFb1之情況下NK細胞增殖之百分比。 圖 7B展示在存在活性TGFb1之情況下NK細胞增殖之百分比。 圖 7C展示對由在不存在活性TGFb1之情況下培養的經刺激NK細胞產生的IFNγ之定量。 圖 7D，對由用活性TGFb1 (1 ng/mL)培養之經刺激NK細胞產生的IFNγ之定量。 圖 7E，對由用活性TGFb1 (1 ng/mL)培養之經刺激NK細胞產生的CXCL10之定量。資料表示一式兩份進行之兩個獨立實驗。指示bFISTv3與FIST之間的統計比較(資料展示為平均值 +SD，*p＜0.05，**p＜0.005，***p＜0.0005)。 實例7 -bFIST增加NK細胞介導的細胞毒性及活化
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示，包含介白素-2 (IL-2)多肽、sTβRII受體多肽及第二sTβRII受體多肽之融合多肽更有效地增加及/或刺激自然殺手(NK)細胞介導的細胞毒性及活化。
在存在或不存在活性TGFβ1 (1 ng/mL)之情況下用等莫耳濃度之bFISTv3、FIST (單價FIST)及TβRII同功型2 (對照)刺激48小時之前，使NK92細胞無血清9小時。在培育期之後，藉由ELISA定量IFNγ之量。收集NK92細胞，且以不同效應子:目標比率(1:1、3:1、6:1)與目標細胞(K-562細胞、慢性骨髓性白血病)共培養。藉由在37℃、5% CO 2培育箱下進行NK:K-562共培養持續三個小時之後，藉由經由固定存活率染料染色量測特異性腫瘤目標死亡%來測定針對癌細胞之NK92溶胞活性。基於以下等式來計算死亡細胞%：
Figure 02_image001
TGF-β為強效的免疫抑止細胞介素，其嚴重影響免疫細胞功能，包括NK細胞活化、IFN-γ產生以及活化受體NKG2D及NKp30之表現，藉此降低NK細胞之細胞毒性能力且削弱其抗腫瘤功能。bFIST誘導穩固的免疫細胞活化及活性TGFb1之有效阻斷(在皮莫耳效力下)兩者。此兩種作用聯合促進更高的NK細胞增殖、活化及針對癌細胞之細胞毒性。圖8A展示對藉由作為NK92細胞活化之指示物的NK92細胞進行的IFNγ產生之定量(如上文所描述，在具有或不具有活性TGFβ1 (1 ng/mL)之情況下，用等莫耳濃度之bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(IL-2+TβRII)刺激48小時之前，使人類NK92細胞無血清9小時，且收集細胞上清液)。 圖 8B展示在6:1比率(效應子:目標)下經bFISTv3或FIST刺激之NK92細胞針對K-562細胞之經誘導細胞毒性。指示bFISTv3與FIST之間的統計比較。資料展示為平均值 +SD，*p＜0.05。 實例8 - bFIST刺激且增加B細胞成熟、增殖及IFNγ產生
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示，包含介白素-2 (IL-2)多肽、sTβRII受體多肽及第二sTβRII受體多肽之融合多肽更有效地(1)刺激及/或增加B細胞成熟、增殖及IFNγ產生，且(2)減少及/或抑制B細胞成熟、增殖及IFNγ產生之TGFb1抑止。
藉由免疫磁性負向選擇使用人類B細胞分離套組自衍生自健康供體之PBMC純化人類B細胞。用CFSE預標記經純化B細胞以在用等莫耳濃度(20 nM、10 nM及5 nM)之bFISTv3、FIST及IL-2刺激5天之前追蹤細胞增殖(標記物強度隨細胞增殖增加而減小)。在培育期之後，用CD86及HLA-DR標記B細胞，且藉由流式細胞量測術定量雙陽性(CD86 +HLA-DR +) B細胞之百分比及增殖。收集細胞培養物上清液以藉由ELISA定量IFNγ之濃度。指示bFISTv3與FIST之間的統計比較。資料展示為平均值 +SD，*p＜0.05，**p＜0.005，***p＜0.0005。
二價FIST有效地增加及/或刺激B細胞活化、增殖及IFNγ產生(例如，與FIST或IL-2相比)。二價FIST亦誘導指示B細胞對二價FIST刺激效應之反應性的共刺激分子(CD86)及HLA-DR (II類MHC)分子表現之上調。此外，二價FIST亦使B細胞活化為具有抗原呈遞細胞(APC)成熟標記物之高表現及IFNγ產生的效應細胞。
圖 9A 至圖 9D展示來自衍生自周邊單核細胞(PBMC)之經純化人類B細胞(CD19 -CD3 -)在具有及不具有活性TGFb1 (1 ng/mL)之情況下用等莫耳濃度之bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(IL-2+TbRII)刺激5天之前經羧基螢光素丁二醯亞胺基酯(CFSE)標記以追蹤細胞增殖的資料。用對HLA-DR及CD86具有特異性之結合抗體標記經刺激之B細胞以藉由流式細胞量測術定量成熟B細胞之百分比。 圖 9A展示在誘導在具有/不具有活性TGFb1之情況下培養的雙陽性CD86 +HLA-DR +B細胞時bFISTv3 (20 nmoL)與FIST (20 nmoL)之間比較。 圖 9B展示用在具有/不具有活性TGFb1之情況下培養的20、10、5 nmoL bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(IL-2+TbRII)刺激的CD86 +HLA-DR +B細胞之百分比。 圖 9C展示在誘導在具有/不具有活性TGFb1的情況下CD86 +HLA-DR +B細胞增殖時bFISTv3 (20 nmoL)與FIST (20 nmoL)之間的比較。指示CFSE (細胞示蹤劑)之平均螢光強度(MFI)值。 圖 9D展示對在具有或不具有活性TGFb1之情況下培養的經刺激B細胞之上清液中進行的IFNγ產生之定量。 實例9 - bFIST抑制肺癌細胞上的上皮細胞向間葉細胞轉化(EMT)標記物之上調
例示本文中所揭示之融合多肽組合物及方法，以下實例顯示包含介白素-2 (IL-2)多肽、sTβRII受體多肽及第二sTβRII受體多肽之融合多肽更有效地抑制及/或降低肺癌細胞上的上皮細胞向間葉細胞轉化(EMT)標記物之上調。
將A-549肺癌細胞在具有/不具有活性TGFb1之情況下用等莫耳濃度之bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(IL-2及IL-2+TbRII)處理72小時。在培育期之後，收集細胞且用對E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白及PD-L1具有特異性之結合抗體進行標記。藉由流式細胞量測術定量表現此等EMT標記物的細胞之百分比。 上皮-間葉細胞轉化(EMT)使得癌細胞能夠抑止其上皮特徵變為間葉細胞特徵。作為EMT過程之結果，癌細胞將獲得移動性及自原發性腫瘤位點遷移至遠端器官且形成轉移之能力。E-鈣黏蛋白表現之喪失為EMT中之關鍵步驟及間葉細胞表現型之標誌，該間葉細胞表現型表徵自非轉移性細胞向轉移性癌細胞之轉化。用bFIST進行處理降低了TGFb1介導的EMT標記物之上調(E-鈣黏蛋白減少，N-鈣黏蛋白增加，且PD-L1表現增加)。 圖 10A展示在具有/不具有活性TGFb1之情況下用等莫耳濃度之bFISTv3、FIST (單價FIST)或對照(IL-2及IL-2+TbRII)處理72小時之後表現E-鈣黏蛋白的A-549細胞(肺癌細胞)之百分比。 圖 10B展示表現N-鈣黏蛋白的A-549細胞之百分比，且 圖 10C展示表現PD-L1的A-549細胞之百分比。資料表示一式兩份進行之兩個獨立實驗。如所展示，用bFIST治療肺癌細胞增加了E-鈣黏蛋白表現，減少了N-鈣黏蛋白，且減少了PD-L1表現。
雖然本文中已展示且描述本發明之較佳實施例，但熟習此項技術者將顯而易見，僅藉助於實例提供此類實施例。熟習此項技術者現將在不脫離本發明之情況下想到眾多變化、改變及取代。應理解，本文中所描述之本發明之實施例的各種替代方案可在實踐本發明時採用。意欲以下申請專利範圍限定本發明之範疇，且藉此涵蓋此等申請專利範圍及其等效物之範疇內的方法及結構。 序列
SEQ ID NO 序列 描述
1 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT 人類IL2
2 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTL FIST_IL2
3 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTL FIST_IL2M IL-2突變 F62A
4 MVLGTIDLCSCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS 人類_IL15
5 CFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS FIST_IL15
6 MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSTWETGKTRKLMEFSEHCAIILEDDRSDISSTCANNINHNTELLPIELDTLVGKGRFAEVYKAKLKQNTSEQFETVAVKIFPYEEYASWKTEKDIFSDINLKHENILQFLTAEERKTELGKQYWLITAFHAKGNLQEYLTRHVISWEDLRKLGSSLARGIAHLHSDHTPCGRPKMPIVHRDLKSSNILVKNDLTCCLCDFGLSLRLDPTLSVDDLANSGQVGTARYMAPEVLESRMNLENVESFKQTDVYSMALVLWEMTSRCNAVGEVKDYEPPFGSKVREHPCVESMKDNVLRDRGRPEIPSFWLNHQGIQMVCETLTECWDHDPEARLTAQCVAERFSELEHLDRLSGRSCSEEKIPEDGSLNTTK 人類TGFBR
7 MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSDVEMEAQKDEIICPSCNRTAHPLRHINNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSTWETGKTRKLMEFSEHCAIILEDDRSDISSTCANNINHNTELLPIELDTLVGKGRFAEVYKAKLKQNTSEQFETVAVKIFPYEEYASWKTEKDIFSDINLKHENILQFLTAEERKTELGKQYWLITAFHAKGNLQEYLTRHVISWEDLRKLGSSLARGIAHLHSDHTPCGRPKMPIVHRDLKSSNILVKNDLTCCLCDFGLSLRLDPTLSVDDLANSGQVGTARYMAPEVLESRMNLENVESFKQTDVYSMALVLWEMTSRCNAVGEVKDYEPPFGSKVREHPCVESMKDNVLRDRGRPEIPSFWLNHQGIQMVCETLTECWDHDPEARLTAQCVAERFSELEHLDRLSGRSCSEEKIPEDGSLNTTK 人類TGFBR長
8 IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD bFIST_TGFBR_短
9 IPPHVQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD bFIST_TGFBR_長
10 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.2
11 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPDIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.2.1
12 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.3
13 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQIPPHVKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPDIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.3.1
14 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFIPPHVQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.4
15 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPDIPPHVQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.4.1
16 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFIPPHVKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.5
17 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQIPPHVKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPDIPPHVKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.5.1
18 MYRMQLLSCIALSLALVTNSISAMVRSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.6
19 MYRMQLLSCIALSLALVTNSISAMVRSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.7
20 MYRMQLLSCIALSLALVTNSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPDAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.8
21 MYRMQLLSCIALSLALVTNSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPDAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.9
22 MYRMQLLSCIALSLALVTNSIPPHVKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPDAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD bFISTv.10
23 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD FISTv.11
24 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSDVEMEAQKGEMICVTCNRTAHPLKHVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEDYNTSNPD FISTv.12
25 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLQKSVNNDMIVTDNNGAVKLPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPHEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKKPGETFFMCSCSADECNDNIIFSEDYNTSNPD FISTv.13
本發明之新穎特徵在所附申請專利範圍中細緻闡述。將參考闡述利用本發明原理之說明性實施例及其隨附圖式的以下詳細描述來獲得對本發明之特徵及優點的較佳理解：
圖 1A 及圖 1B展示描繪對藉由經人類單價FIST (包含介白素-2 (IL-2)多肽、單一sTBRII受體多肽之融合蛋白)或二價FIST (亦稱為bFIST，一種包含介白素-2 (IL-2)多肽、第一sTBRII受體多肽及第二sTBRII受體多肽之融合多肽)預先刺激之人類T細胞進行的IFN-γ產生及藉由用人類FIST (單價FIST)或人類二價FIST刺激之人類NK細胞進行的CXCL10產生之定量的資料。
圖 2展示描繪在用5至20奈莫耳人類單價FIST (單價FIST)、二價FIST (bFIST)或sTBRII進行30分鐘培育期之後在溶液中偵測到的活性TGFβ1之定量的資料。
圖 3展示例示性二價FIST (bFIST)融合多肽之示意性圖示。
圖 4A 、 圖 4B 及圖 4C展示在阻斷TGFβ同功型方面二價FIST蛋白質與單價FIST之間的比較。
圖 5A 、 圖 5B 、 圖 5C 、 圖 5D 、 圖 5E 及圖 5F展示對TGFb1介導的細胞毒性T細胞增殖之抑止的抑制。
圖 6A 、圖 6B 、圖 6C 、圖 6D 、圖 6E 及圖 6F展示效應記憶T細胞及末端分化效應記憶細胞之增殖，及對藉由使用二價FIST、單價FIST (單價FIST)及對照的受刺激T細胞進行的IFNγ產生之定量。
圖 7A 、 圖 7B 、 圖 7C 、 圖 7D 及圖 7E展示TGFb1介導的原代NK細胞增殖以及IFNγ及CXC10產生之抑止的二價FIST抑制及/或減少。
圖 8A 及圖 8B展示使用二價FIST處理NK細胞增加NK細胞細胞毒性及活化以及對癌細胞之細胞毒性。
圖 9A 、 圖 9B 、 圖 9C 及圖 9D展示使用二價FIST處理B細胞增加成熟、增殖及IFNγ產生。
圖 10A 、 圖 10B 及圖 10C展示使用二價FIST處理肺癌細胞抑制肺癌細胞上TGFb1誘導的上皮細胞向間葉細胞轉化(Epithelial to Mesenchymal transition；EMT)標記物之上調。 

          <![CDATA[<110> 美商克拉治療股份有限公司(CURA THERAPEUTICS)]]>
          <![CDATA[<120> 多功能及多價介白素-TGF-β受體融合多肽]]>
          <![CDATA[<130> 57949-701.601]]>
          <![CDATA[<140> TW 110138767]]>
          <![CDATA[<141> 2021-10-19]]>
          <![CDATA[<150> 63/094,277]]>
          <![CDATA[<151> 2020-10-20]]>
          <![CDATA[<160> 28    ]]>
          <![CDATA[<170> PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
          <![CDATA[<211> 153]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 
          145                 150             
          <![CDATA[<210> 2]]>
          <![CDATA[<211> 152]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu 
          145                 150         
          <![CDATA[<210> 3]]>
          <![CDATA[<211> 152]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 3]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu 
          145                 150         
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 135]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 4]]>
          Met Val Leu Gly Thr Ile Asp Leu Cys Ser Cys Phe Ser Ala Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Pro Lys Thr Glu Ala Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys 
                      20                  25                  30          
          Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr 
                  35                  40                  45              
          Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile 
          65                  70                  75                  80  
          His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu 
                      100                 105                 110         
          Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val 
                  115                 120                 125             
          Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser 
              130                 135 
          <![CDATA[<210> 5]]>
          <![CDATA[<211> 125]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Cys Phe Ser Ala Gly Leu Pro Lys Thr Glu Ala Asn Trp Val Asn Val 
          1               5                   10                  15      
          Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile 
                      20                  25                  30          
          Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val 
                  35                  40                  45              
          Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln 
                      100                 105                 110         
          Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser 
                  115                 120                 125 
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 567]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu 
          1               5                   10                  15      
          Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val 
                      20                  25                  30          
          Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro 
                  35                  40                  45              
          Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr 
                          85                  90                  95      
          Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile 
                      100                 105                 110         
          Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys 
                  115                 120                 125             
          Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn 
              130                 135                 140                 
          Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Leu Val Ile Phe Gln Val Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu 
                          165                 170                 175     
          Gly Val Ala Ile Ser Val Ile Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn 
                      180                 185                 190         
          Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys 
                  195                 200                 205             
          Leu Met Glu Phe Ser Glu His Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg 
              210                 215                 220                 
          Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu 
                      260                 265                 270         
          Thr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile 
              290                 295                 300                 
          Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Arg His Val Ile Ser Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser 
                      340                 345                 350         
          Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys 
                  355                 360                 365             
          Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser 
                          405                 410                 415     
          Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser 
                      420                 425                 430         
          Arg Met Asn Leu Glu Asn Val Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr 
                  435                 440                 445             
          Ser Met Ala Leu Val Leu Trp Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val 
              450                 455                 460                 
          Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu 
          465                 470                 475                 480 
          His Pro Cys Val Glu Ser Met Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly 
                          485                 490                 495     
          Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met 
                      500                 505                 510         
          Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg 
                  515                 520                 525             
          Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu 
              530                 535                 540                 
          Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys 
                          565         
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 592]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu 
          1               5                   10                  15      
          Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn 
                  35                  40                  45              
          Arg Thr Ala His Pro Leu Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr 
              50                  55                  60                  
          Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys 
                          85                  90                  95      
          Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro 
              130                 135                 140                 
          Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu Leu Leu Val Ile Phe Gln Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu Gly Val Ala Ile Ser Val Ile 
                  195                 200                 205             
          Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser 
              210                 215                 220                 
          Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys Leu Met Glu Phe Ser Glu His 
          225                 230                 235                 240 
          Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys 
                          245                 250                 255     
          Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp 
                      260                 265                 270         
          Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu 
                  275                 280                 285             
          Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu Thr Val Ala Val Lys Ile Phe 
              290                 295                 300                 
          Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu 
                          325                 330                 335     
          Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe 
                      340                 345                 350         
          His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr Leu Thr Arg His Val Ile Ser 
                  355                 360                 365             
          Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala 
              370                 375                 380                 
          His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile 
          385                 390                 395                 400 
          Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu 
                          405                 410                 415     
          Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr 
                      420                 425                 430         
          Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg 
                  435                 440                 445             
          Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser Arg Met Asn Leu Glu Asn Val 
              450                 455                 460                 
          Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr Ser Met Ala Leu Val Leu Trp 
          465                 470                 475                 480 
          Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu 
                          485                 490                 495     
          Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu His Pro Cys Val Glu Ser Met 
                      500                 505                 510         
          Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe 
                  515                 520                 525             
          Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu 
              530                 535                 540                 
          Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser 
                          565                 570                 575     
          Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys 
                      580                 585                 590         
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 136]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr 
          1               5                   10                  15      
          Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys 
                  35                  40                  45              
          Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val Cys Val Ala Val 
              50                  55                  60                  
          Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met 
                      100                 105                 110         
          Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu 
                  115                 120                 125             
          Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
              130                 135     
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 161]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Lys 
                      20                  25                  30          
          His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys 
                  35                  40                  45              
          Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp 
              50                  55                  60                  
          Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn 
                          85                  90                  95      
          Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly 
                      100                 105                 110         
          Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys 
                  115                 120                 125             
          Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu 
              130                 135                 140                 
          Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Asp 
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 409]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys 
                          165                 170                 175     
          Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met 
                      180                 185                 190         
          Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val Cys 
                  195                 200                 205             
          Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr 
                          245                 250                 255     
          Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile 
                      260                 265                 270         
          Phe Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val 
                  275                 280                 285             
          Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys 
              290                 295                 300                 
          Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val Cys Val Ala 
                          325                 330                 335     
          Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His 
                      340                 345                 350         
          Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser 
                  355                 360                 365             
          Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe 
              370                 375                 380                 
          Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
                          405                 
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 424]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu 
                          165                 170                 175     
          Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn 
                      180                 185                 190         
          Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro His Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile 
              210                 215                 220                 
          Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys 
                          245                 250                 255     
          Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys 
                      260                 265                 270         
          Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
                  275                 280                 285             
          Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr 
              290                 295                 300                 
          Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys 
                          325                 330                 335     
          Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val Cys Val Ala Val 
                      340                 345                 350         
          Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp 
                  355                 360                 365             
          Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro 
              370                 375                 380                 
          Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met 
          385                 390                 395                 400 
          Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu 
                          405                 410                 415     
          Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
                      420                 
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 434]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His 
                          165                 170                 175     
          Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly 
                      180                 185                 190         
          Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser 
                  195                 200                 205             
          Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser 
              210                 215                 220                 
          Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr 
                          245                 250                 255     
          Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met 
                      260                 265                 270         
          Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser 
                  275                 280                 285             
          Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ile Pro Pro His Val Gln 
              290                 295                 300                 
          Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys 
                          325                 330                 335     
          Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys 
                      340                 345                 350         
          Glu Lys Pro His Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu 
                  355                 360                 365             
          Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His 
              370                 375                 380                 
          Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp 
                          405                 410                 415     
          Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn 
                      420                 425                 430         
          Pro Asp 
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 449]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Ile Pro Pro His Val Lys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys 
                          165                 170                 175     
          Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys 
                  195                 200                 205             
          Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn 
              210                 215                 220                 
          Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His 
                          245                 250                 255     
          Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser 
                      260                 265                 270         
          Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser 
              290                 295                 300                 
          Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile Pro Pro His Val Gln Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys 
                          325                 330                 335     
          Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp 
                      340                 345                 350         
          Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu 
                  355                 360                 365             
          Lys Pro His Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn 
              370                 375                 380                 
          Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys 
                          405                 410                 415     
          Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu 
                      420                 425                 430         
          Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro 
                  435                 440                 445             
          Asp 
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 434]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys 
                          165                 170                 175     
          Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met 
                      180                 185                 190         
          Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val Cys 
                  195                 200                 205             
          Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr 
                          245                 250                 255     
          Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile 
                      260                 265                 270         
          Phe Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln 
                  275                 280                 285             
          Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu 
              290                 295                 300                 
          Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys 
                          325                 330                 335     
          Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys 
                      340                 345                 350         
          Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu 
                  355                 360                 365             
          Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His 
              370                 375                 380                 
          Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp 
                          405                 410                 415     
          Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn 
                      420                 425                 430         
          Pro Asp 
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 449]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu 
                          165                 170                 175     
          Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn 
                      180                 185                 190         
          Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro His Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile 
              210                 215                 220                 
          Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys 
                          245                 250                 255     
          Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys 
                      260                 265                 270         
          Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
                  275                 280                 285             
          Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys 
              290                 295                 300                 
          Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Lys 
          305                 310                 315                 320 
          His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys 
                          325                 330                 335     
          Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp 
                      340                 345                 350         
          Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu 
                  355                 360                 365             
          Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn 
              370                 375                 380                 
          Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys 
                          405                 410                 415     
          Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu 
                      420                 425                 430         
          Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro 
                  435                 440                 445             
          Asp 
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 458]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His 
                          165                 170                 175     
          Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly 
                      180                 185                 190         
          Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser 
                  195                 200                 205             
          Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser 
              210                 215                 220                 
          Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr 
                          245                 250                 255     
          Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met 
                      260                 265                 270         
          Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser 
                  275                 280                 285             
          Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ile Pro Pro His Val Lys 
              290                 295                 300                 
          Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile 
                          325                 330                 335     
          Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe 
                      340                 345                 350         
          Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser 
                  355                 360                 365             
          Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val 
              370                 375                 380                 
          Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys 
          385                 390                 395                 400 
          His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala 
                          405                 410                 415     
          Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe 
                      420                 425                 430         
          Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe 
                  435                 440                 445             
          Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
              450                 455             
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 473]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Ile Pro Pro His Val Lys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys 
                          165                 170                 175     
          Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys 
                  195                 200                 205             
          Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn 
              210                 215                 220                 
          Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His 
                          245                 250                 255     
          Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser 
                      260                 265                 270         
          Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser 
              290                 295                 300                 
          Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile Pro Pro His Val Lys Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys 
                          325                 330                 335     
          Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val 
                      340                 345                 350         
          Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys 
                  355                 360                 365             
          Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His 
                          405                 410                 415     
          Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser 
                      420                 425                 430         
          Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe 
                  435                 440                 445             
          Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
          465                 470             
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 664]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ile Ser Ala Met Val Arg Ser Val Glu Cys Pro Pro 
                      20                  25                  30          
          Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              50                  55                  60                  
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          85                  90                  95      
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      100                 105                 110         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  115                 120                 125             
          Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              130                 135                 140                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          165                 170                 175     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      180                 185                 190         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  195                 200                 205             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              210                 215                 220                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ala Pro Thr Ser Ser Ser 
                          245                 250                 255     
          Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 
                      260                 265                 270         
          Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 
                  275                 280                 285             
          Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 
              290                 295                 300                 
          His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 
                      340                 345                 350         
          Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 
                  355                 360                 365             
          Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys 
              370                 375                 380                 
          Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr 
          385                 390                 395                 400 
          Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile 
                          405                 410                 415     
          Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe 
                      420                 425                 430         
          Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser 
                  435                 440                 445             
          Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val 
              450                 455                 460                 
          Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys 
          465                 470                 475                 480 
          His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala 
                          485                 490                 495     
          Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe 
                      500                 505                 510         
          Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe 
                  515                 520                 525             
          Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr 
              530                 535                 540                 
          Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp 
          545                 550                 555                 560 
          Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys 
                          565                 570                 575     
          Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val Cys Val Ala Val 
                      580                 585                 590         
          Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp 
                  595                 600                 605             
          Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro 
              610                 615                 620                 
          Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met 
          625                 630                 635                 640 
          Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu 
                          645                 650                 655     
          Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
                      660                 
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 639]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ile Ser Ala Met Val Arg Ser Val Glu Cys Pro Pro 
                      20                  25                  30          
          Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              50                  55                  60                  
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          85                  90                  95      
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      100                 105                 110         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  115                 120                 125             
          Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              130                 135                 140                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          165                 170                 175     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      180                 185                 190         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  195                 200                 205             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              210                 215                 220                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ala Pro Thr Ser Ser Ser 
                          245                 250                 255     
          Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 
                      260                 265                 270         
          Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 
                  275                 280                 285             
          Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 
              290                 295                 300                 
          His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 
                      340                 345                 350         
          Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 
                  355                 360                 365             
          Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys 
              370                 375                 380                 
          Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp 
                          405                 410                 415     
          Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu 
                      420                 425                 430         
          Lys Pro His Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn 
                  435                 440                 445             
          Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly 
              450                 455                 460                 
          Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys 
          465                 470                 475                 480 
          Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu 
                          485                 490                 495     
          Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val 
                      500                 505                 510         
          Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro 
                  515                 520                 525             
          Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln 
              530                 535                 540                 
          Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro 
          545                 550                 555                 560 
          His Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr 
                          565                 570                 575     
          Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys 
                  595                 600                 605             
          Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn 
              610                 615                 620                 
          Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
          625                 630                 635                 
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 419]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp 
                      20                  25                  30          
          Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys 
                  35                  40                  45              
          Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys 
              50                  55                  60                  
          Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val 
          65                  70                  75                  80  
          Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr 
                          85                  90                  95      
          Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp 
                      100                 105                 110         
          Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu 
                  115                 120                 125             
          Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile 
              130                 135                 140                 
          Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ala Pro Thr Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu 
                  195                 200                 205             
          Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu 
              210                 215                 220                 
          Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu 
                          245                 250                 255     
          Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu 
                      260                 265                 270         
          Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu 
                  275                 280                 285             
          Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala 
              290                 295                 300                 
          Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile 
                          325                 330                 335     
          Cys Glu Lys Pro His Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp 
                      340                 345                 350         
          Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr 
                  355                 360                 365             
          His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys 
              370                 375                 380                 
          Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser 
                          405                 410                 415     
          Asn Pro Asp 
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 444]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp 
                      20                  25                  30          
          Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys 
                  35                  40                  45              
          Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys 
              50                  55                  60                  
          Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val 
          65                  70                  75                  80  
          Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr 
                          85                  90                  95      
          Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp 
                      100                 105                 110         
          Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu 
                  115                 120                 125             
          Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile 
              130                 135                 140                 
          Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ala Pro Thr Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu 
                  195                 200                 205             
          Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu 
              210                 215                 220                 
          Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu 
                          245                 250                 255     
          Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu 
                      260                 265                 270         
          Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu 
                  275                 280                 285             
          Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys 
              290                 295                 300                 
          Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys 
                          325                 330                 335     
          Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys 
                      340                 345                 350         
          Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val 
                  355                 360                 365             
          Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr 
              370                 375                 380                 
          Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu 
                          405                 410                 415     
          Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile 
                      420                 425                 430         
          Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
                  435                 440                 
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 468]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ile Pro Pro His Val Lys Ser Asp Val Glu Met Glu 
                      20                  25                  30          
          Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His 
                  35                  40                  45              
          Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly 
              50                  55                  60                  
          Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser 
                          85                  90                  95      
          Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn 
                      100                 105                 110         
          Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr 
                  115                 120                 125             
          Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met 
              130                 135                 140                 
          Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr 
                          165                 170                 175     
          Ser Asn Pro Asp Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      180                 185                 190         
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  195                 200                 205             
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe 
              210                 215                 220                 
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          245                 250                 255     
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      260                 265                 270         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  275                 280                 285             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              290                 295                 300                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His 
                          325                 330                 335     
          Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly 
                      340                 345                 350         
          Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser 
                  355                 360                 365             
          Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser 
              370                 375                 380                 
          Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met 
                      420                 425                 430         
          Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser 
                  435                 440                 445             
          Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr 
              450                 455                 460                 
          Ser Asn Pro Asp 
          465             
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 308]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His 
                          165                 170                 175     
          Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly 
                      180                 185                 190         
          Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser 
                  195                 200                 205             
          Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser 
              210                 215                 220                 
          Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr 
                          245                 250                 255     
          Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met 
                      260                 265                 270         
          Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser 
                  275                 280                 285             
          Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr 
              290                 295                 300                 
          Ser Asn Pro Asp 
          305             
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 308]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Gln Lys Gly Glu Met Ile Cys Val Thr Cys Asn Arg Thr Ala His 
                          165                 170                 175     
          Pro Leu Lys His Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly 
                      180                 185                 190         
          Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser 
                  195                 200                 205             
          Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser 
              210                 215                 220                 
          Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Thr 
                          245                 250                 255     
          Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Val Met 
                      260                 265                 270         
          Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser 
                  275                 280                 285             
          Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr 
              290                 295                 300                 
          Ser Asn Pro Asp 
          305             
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 283]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 
                      20                  25                  30          
          Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 
              130                 135                 140                 
          Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Leu Pro Gln Leu Cys Lys 
                          165                 170                 175     
          Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met 
                      180                 185                 190         
          Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro His Glu Val Cys 
                  195                 200                 205             
          Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Cys His Asp Pro Lys Leu Thr Tyr His Gly Phe Thr Leu Glu Asp Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Ser Pro Lys Cys Val Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr 
                          245                 250                 255     
          Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ala Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile 
                      260                 265                 270         
          Phe Ser Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
                  275                 280             
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 4]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Gly Ser Ser Gly 
          1               
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 4]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          Gly Gly Ser Ser 
          1               
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Gly Ser Ala Gly Gly 
          1               5
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045
Figure 12_A0101_SEQ_0046
Figure 12_A0101_SEQ_0047
Figure 12_A0101_SEQ_0048
Figure 12_A0101_SEQ_0049
Figure 12_A0101_SEQ_0050
Figure 12_A0101_SEQ_0051
Figure 12_A0101_SEQ_0052
Figure 12_A0101_SEQ_0053

Claims (111)

  1. 一種融合多肽，其包含： 介白素(interleukin；IL)多肽； 第一TGFβ超家族受體多肽；及 第二TGFβ超家族受體多肽。
  2. 一種融合多肽，其包含： 結合至IL受體及促效IL受體之IL多肽；結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第一TGFβ超家族受體多肽；及結合至可溶性TGFβ及螯合可溶性TGFβ之第二TGFβ超家族受體多肽。
  3. 如請求項1至2中任一項之融合多肽，其中該IL多肽包含IL-2多肽或IL-15多肽。
  4. 如請求項1至3中任一項之融合多肽，其中該IL多肽包含IL-2多肽。
  5. 如請求項4之融合多肽，其中該IL-2多肽包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3。
  6. 如請求項4之融合多肽，其中該IL-2多肽包含與SEQ ID NO: 2具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 3具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。
  7. 如請求項4之融合多肽，其中該IL-2多肽由SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3組成。
  8. 如請求項1至3中任一項之融合多肽，其中該IL多肽包含IL-15多肽。
  9. 如請求項8之融合多肽，其中該IL-15多肽包含SEQ ID NO: 5。
  10. 如請求項8之融合多肽，其中該IL-15多肽包含與SEQ ID NO: 5具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。
  11. 如請求項8之融合多肽，其中該IL-15多肽由SEQ ID NO: 5組成。
  12. 如請求項1至11中任一項之融合多肽，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含活化素受體多肽或其片段、骨成形性蛋白質(bone morphogenetic protein；BMP)受體多肽或其片段、神經膠細胞衍生之神經營養因子(glial cell-derived neurotrophic factor；GDNF)受體多肽或其片段，或TGFβ受體II多肽或其片段。
  13. 如請求項1至12中任一項之融合多肽，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含TGFβ受體II (TGFβ receptor II；TBRII)多肽或其片段。
  14. 如請求項1至13中任一項之融合多肽，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽或其片段。
  15. 如請求項1至14中任一項之融合多肽，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽，該可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽包含SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9或其組合。
  16. 如請求項1至15中任一項之融合多肽，其中該第一TGFβ超家族受體多肽包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列，且該第二TGFβ超家族受體多肽包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之截斷。
  17. 如請求項14至16中任一項之融合多肽，其中該可溶性TGFβ受體II多肽包含與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9具有大於80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。
  18. 如請求項1至17中任一項之融合多肽，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽結合TGF-β1多肽、TGF-β2多肽、TGF-β3多肽、活化素βA多肽、活化素βB多肽、活化素βC多肽、活化素βE多肽、骨成形性蛋白質(BMP) 2多肽、BMP 3多肽、BMP4多肽、BMP 5多肽、BMP 6多肽、BMP 7多肽、BMP 8多肽、BMP 9多肽、BMP 10多肽、BMP 11多肽、BMP 12多肽、BMP 13多肽、BMP 14多肽、BMP 15多肽、生長分化因子(GDF) 1多肽、GDF 3多肽、GDF 8多肽、GDF 9多肽、GDF 15多肽、節點(Nodal)多肽、抑制素α多肽、抗苗勒激素(anti-Mullerian Hormone)多肽、左翼分子(Lefty) 1多肽、左翼分子2多肽、阿特曼(arteman)多肽、珀瑟芬(Persephin)多肽或神經營養因子(Neurturin)多肽。
  19. 如請求項1至18中任一項之融合多肽，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽、TGFβ 2多肽、TGFβ 3多肽或其任何組合。
  20. 如請求項1至19中任一項之融合多肽，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及該第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽。
  21. 如請求項1至20中任一項之融合多肽，其中該截斷TGFβ超家族受體多肽包含N端截斷、C端截斷或其組合。
  22. 如請求項21之融合蛋白，其中該截斷TGFβ超家族受體多肽為截斷可溶性TGFβ受體II (sTβRII)多肽。
  23. 如請求項22之融合多肽，其中該截斷包含大於2、5、7、10、15、20、25或30個胺基酸。
  24. 如請求項1至23中任一項之融合多肽，其中該IL多肽包含截斷IL多肽。
  25. 如請求項24之融合多肽，其中該截斷IL多肽包含N端截斷、C端截斷或其組合。
  26. 如請求項24之融合多肽，其中該截斷IL多肽包含截斷IL-2多肽或IL-15多肽。
  27. 如請求項1至26中任一項之融合多肽，其進一步包含連接該第一TGFβ超家族受體多肽及該第二TGFβ超家族受體多肽之連接子多肽或連接子分子。
  28. 如請求項1至27中任一項之融合多肽，其進一步包含融合該IL多肽及該第一TGFβ超家族受體多肽之連接子多肽。
  29. 如請求項1至28中任一項之融合多肽，其進一步包含藥物動力學(pharmacokinetic；PK)調節子。
  30. 如請求項29之融合多肽，其中該藥物動力學調節子包含免疫球蛋白恆定(immunoglobulin constant；Fc)區多肽。
  31. 如請求項30之融合多肽，其中該免疫球蛋白Fc區多肽為人類免疫球蛋白Fc區多肽。
  32. 如請求項30之融合多肽，其中該免疫球蛋白Fc區為IgG Fc區。
  33. 如請求項30之融合多肽，其中該IgG Fc區為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區。
  34. 如請求項29之融合多肽，其中該PK調節子包含白蛋白多肽。
  35. 如請求項34之融合多肽，其中該白蛋白多肽為人類白蛋白多肽。
  36. 如請求項1至35中任一項之融合多肽，其中該融合多肽包含與SEQ ID NO: 10至25中之任一者具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性之胺基酸序列。
  37. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。
  38. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列。
  39. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。
  40. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。
  41. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。
  42. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。
  43. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。
  44. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。
  45. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  46. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列。
  47. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
  48. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
  49. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列。
  50. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列。
  51. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。
  52. 如請求項36之融合多肽，其中該融合多肽包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。
  53. 如請求項1至52中任一項之融合多肽，其中該融合多肽由SEQ ID NO: 10至25中之任一者組成。
  54. 如請求項1至53中任一項之融合多肽，其中該融合多肽活化表現IL-2或IL-15受體之目標細胞。
  55. 如請求項54之融合多肽，其中該目標細胞為免疫細胞。
  56. 如請求項55之融合多肽，其中該免疫細胞為T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。
  57. 一種包含如請求項1至56中任一項之融合多肽之醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
  58. 一種抑制或減少患有癌症之個體中腫瘤生長及/或進展的方法，其包含向該個體投與包含以下之融合多肽： (a)介白素(IL)多肽； (b)第一TGFβ超家族受體多肽；及 (c)第二TGFβ超家族受體多肽； 藉此抑制或減少該個體中之腫瘤生長及/或進展。
  59. 如請求項58之方法，其中該腫瘤為原發性腫瘤。
  60. 如請求項58至59中任一項之方法，其中該腫瘤為轉移性腫瘤。
  61. 如請求項58至60中任一項之方法，其中該癌症包含實體腫瘤。
  62. 如請求項58至61中任一項之方法，其中該融合多肽活化腫瘤微環境內之免疫細胞。
  63. 如請求項62之方法，其中該等免疫細胞表現IL-2。
  64. 如請求項63之方法，其中該等免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。
  65. 如請求項58至64中任一項之方法，其中該融合多肽抑制或減少腫瘤微環境內之免疫細胞之免疫抑止，及/或減少或抑制該腫瘤微環境中之免疫抑止細胞之活化。
  66. 如請求項58至65中任一項之方法，其中該癌症為血液癌症。
  67. 如請求項58至66中任一項之方法，其中該癌症為包含實體腫瘤之癌症。
  68. 一種中和或殺死患有癌症之個體中腫瘤細胞的方法，其包含向該個體投與包含以下之融合多肽： (a)介白素(IL)多肽； (b)第一TGFβ超家族受體多肽；及 (c)第二TGFβ超家族受體多肽； 藉此中和或殺死該個體中之腫瘤細胞。
  69. 如請求項68之方法，其中該腫瘤為原發性腫瘤。
  70. 如請求項68至69中任一項之方法，其中該腫瘤為轉移性腫瘤。
  71. 如請求項68至70中任一項之方法，其中該癌症包含實體腫瘤。
  72. 如請求項68至71中任一項之方法，其中該融合多肽活化腫瘤微環境內之免疫細胞。
  73. 如請求項72之方法，其中該等免疫細胞表現IL-2或IL-15受體。
  74. 如請求項72之方法，其中該免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。
  75. 如請求項68至74中任一項之方法，其中該融合多肽抑制或減少腫瘤微環境內之免疫細胞之免疫抑止，及/或減少或抑制該腫瘤微環境中之免疫抑止細胞之活化。
  76. 如請求項68至75中任一項之方法，其中該癌症為血液癌症。
  77. 如請求項68至76中任一項之方法，其中該癌症包含實體腫瘤。
  78. 一種治療或減輕患有癌症之個體中癌症的方法，其包含向該個體投與包含以下之融合多肽： (a)介白素(IL)多肽； (b)第一TGFβ超家族受體多肽；及 (c)第二TGFβ超家族受體多肽； 藉此治療或減輕該個體之該癌症。
  79. 如請求項78之方法，其中該腫瘤為原發性腫瘤。
  80. 如請求項78至79中任一項之方法，其中該腫瘤為轉移性腫瘤。
  81. 如請求項78至80中任一項之方法，其中該癌症包含實體腫瘤。
  82. 如請求項78至81中任一項之方法，其中該融合多肽活化腫瘤微環境內之免疫細胞。
  83. 如請求項82之方法，其中該等免疫細胞表現IL-2或IL-15受體。
  84. 如請求項82之方法，其中該等免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。
  85. 如請求項78至84中任一項之方法，其中該融合多肽抑制或減少腫瘤微環境內之免疫細胞之免疫抑止，及/或減少或抑制該腫瘤微環境中之免疫抑止細胞之活化。
  86. 如請求項78至85中任一項之方法，其中該癌症為血液癌症。
  87. 如請求項78至86中任一項之方法，其中該癌症包含實體腫瘤。
  88. 如請求項78至87中任一項之方法，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽結合TGFβ 1多肽、TGFβ 2多肽、TGFβ 3多肽或其任何組合。
  89. 一種活化表現IL受體之細胞的方法，其包含：使細胞與包含以下之融合多肽接觸： (a)介白素(IL)多肽； (b)第一TGFβ超家族受體多肽；及 (c)第二TGFβ超家族受體多肽。
  90. 如請求項89之方法，其中該細胞為免疫細胞。
  91. 如請求項90之方法，其中該免疫細胞包含T細胞、自然殺手細胞、NKT細胞、B細胞或γ δ T細胞。
  92. 如請求項89至91中任一項之方法，其中該等免疫細胞係活體內接觸。
  93. 如請求項89至91中任一項之方法，其中該等免疫細胞係離體接觸。
  94. 如請求項93之方法，其中白細胞層或白血球分離術產物包含該等免疫細胞。
  95. 如請求項93之方法，其中該等免疫細胞衍生自血球分離術樣本。
  96. 如請求項93之方法，其中該等免疫細胞隨後用於基於細胞之療法。
  97. 如請求項89至96中任一項之方法，其中該IL多肽為IL-2或IL-15。
  98. 如請求項89至97中任一項之方法，其中該第一TGFβ超家族受體多肽及/或該第二TGFβ超家族受體多肽包含可溶性TGFβ受體II (TBRII)多肽或片段。
  99. 一種包含核酸分子之宿主細胞，該核酸分子包含編碼如請求項1至56中任一項之重組融合多肽的核酸序列。
  100. 一種如請求項1至56中任一項之融合多肽的用途，其用於抑制或減少患有癌症之個體中的腫瘤生長及/或進展。
  101. 一種如請求項1至56中任一項之融合多肽的用途，其用於中和或殺死患有癌症之個體中的腫瘤細胞。
  102. 一種如請求項1至56中任一項之融合多肽的用途，其用於治療或減輕患有癌症之個體的癌症。
  103. 一種如請求項1至56中任一項之融合多肽的用途，其用於活化表現IL受體之細胞。
  104. 一種如請求項1至56中任一項之融合多肽的用途，其用於製造用於抑制或減少患有癌症之個體中腫瘤生長及/或進展的藥劑。
  105. 一種如請求項1至56中任一項之融合多肽的用途，其用於製造用於中和或殺死患有癌症之個體中腫瘤細胞的藥劑。
  106. 一種如請求項1至56中任一項之融合多肽的用途，其用於製造用於治療或減輕患有癌症之個體之癌症的藥劑。
  107. 一種如請求項1至56中任一項之融合多肽的用途，其用於製造用於活化表現IL受體之細胞的藥劑。
  108. 如請求項1至56中任一項之融合多肽，其用於抑制或減少患有癌症之個體中的腫瘤生長及/或進展。
  109. 如請求項1至56中任一項之融合多肽，其用於中和或殺死患有癌症之個體中的腫瘤細胞。
  110. 如請求項1至56中任一項之融合多肽，其用於治療或減輕患有癌症之個體的癌症。
  111. 如請求項1至56中任一項之融合多肽，其用於活化表現IL受體之細胞。
TW110138767A 2020-10-20 2021-10-19 多功能及多價介白素-TGF-β受體融合多肽 TW202233661A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063094277P 2020-10-20 2020-10-20
US63/094,277 2020-10-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202233661A true TW202233661A (zh) 2022-09-01

Family

ID=81291281

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110138767A TW202233661A (zh) 2020-10-20 2021-10-19 多功能及多價介白素-TGF-β受體融合多肽

Country Status (2)

Country Link
TW (1) TW202233661A (zh)
WO (1) WO2022086988A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023546298A (ja) 2020-10-20 2023-11-01 キュラ セラピューティクス， インコーポレイテッド 多機能性及び多価インターロイキン－ｔｇｆ－ベータ受容体融合ポリペプチド
CN117120075A (zh) * 2021-02-17 2023-11-24 库拉治疗股份有限公司 抗病原体白细胞介素-TGF-β受体融合多肽

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009152610A1 (en) * 2008-06-20 2009-12-23 The Royal Institution For The Advancement Of Learning/Mcgill University Interleukin-2/soluble tgf-beta type ii receptor b conjugates and methods and uses thereof
US20180155439A1 (en) * 2015-06-10 2018-06-07 Emory University Compositions and Conjugates Comprising an Interleukin and Polypeptides That Specifically Bind TGF-beta
CA3109139A1 (en) * 2018-08-30 2020-03-05 HCW Biologics, Inc. Methods of treating aging-related disorders
CN114787196A (zh) * 2019-08-29 2022-07-22 南特生物科学公司 修饰的n-810及其方法
KR102402276B1 (ko) * 2019-11-15 2022-05-26 주식회사 제넥신 변형된 인터루킨-7 및 tgf 베타 수용체 ii를 포함하는 융합단백질 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022086988A1 (en) 2022-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110461871B (zh) 白蛋白结合结构域融合蛋白
JP2021073260A (ja) 血管漏出症候群の発生を抑制するサイトカイン治療
US20100021421A1 (en) Fusion proteins and methods for modulation of immune response
ES2222463T3 (es) Uso de anticuerpos monoclonales o ligandos oligomericos solubles en la fabricacion de un medicamento para la prevencion o tratamiento de trastornos neoplasicos.
WO2019201161A1 (zh) 一种ifn与抗pd-l1抗体的融合蛋白及其应用
CN105848674A (zh) 将白细胞介素-10用于治疗疾病和病症的方法
TWI821287B (zh) 介白素－２突變形成之蛋白質與第ｉ型干擾素所構成之融合蛋白質
KR20080112232A (ko) 포유동물 환자의 면역기능의 개선 방법 및 질병의 예방 또는 치료 방법
KR20050114211A (ko) 폐 질환의 치료 방법
US20070299026A1 (en) Immunosuppressive Cytokine
TW202233661A (zh) 多功能及多價介白素-TGF-β受體融合多肽
JP2021513570A (ja) サイトカインをコードするｒｎａを用いた治療
JP2021512104A (ja) 癌の治療のためのＳＴＩＮＧアゴニスト及びＩＬ−１５／ＩＬ１５−Ｒａの組合せ
TW202219060A (zh) 醣基化il-2蛋白及其用途
US20230023954A1 (en) Multi-functional and multi-valent interleukin-tgf-beta receptor fusion polypeptides
US20230364186A1 (en) Method of treating or ameliorating a pathogenic infection by administering an interleukin-2/tgf-beta receptor fusion polypeptide
JP2023510870A (ja) Ｉｃｄ ｓｔａｔシグナル伝達が改変されたｃｄ１２２
JP4989850B2 (ja) ＴＧＦ−βの遮断により腫瘍再発を防ぐ方法
CN101027079B (zh) 嵌合蛋白