TW202227441A - 喹唑啉化合物、包含其的藥物組合物及其應用 - Google Patents

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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems

Abstract

本發明關於一種新型化合物，其具有癌症治療活性。本發明還關於這些化合物的製備方法以及包含其的藥物組合物。

Description

喹唑啉化合物、包含其的藥物組合物及其應用
本發明關於一種新型化合物，其具有癌症治療活性。本發明還關於這些化合物的製備方法以及包含其的藥物組合物。
臨床資料顯示，RAS是人類腫瘤中發生突變率最高的基因，所有腫瘤中，約20-30%有RAS突變，大約98%的胰腺癌，52%的結腸癌，43%的多發性骨髓瘤，及32%的肺腺癌中存在RAS基因突變。RAS最常見的突變方式是點突變，經常發生在12、13、61 密碼子，其中又以第12 位密碼子突變最常見。KRAS-G12C突變占KRAS突變的約10-20%，在非小細胞肺癌中占14%。
40多年來，科學家一直在嘗試開發靶向KRAS藥物。AMGEN公司開發的AMG510是首個進入臨床的KRAS G12C抑制劑。2020年12月，AMGEN公司向美國FDA遞交AMG510的新藥上市申請，用於治療KRAS G12C突變的晚期轉移性非小細胞肺癌。此前，FDA已經授予其突破性療法認證資格。2021年5月，FDA批准全球首個KRAS靶向藥AMG510上市。
ARAXES公司專利WO2015054572A1記載一種具有特定軸手性片段的KRAS抑制劑，為外消旋體形式。該分子理論上具有R/S兩種手性，但是專利未記載何種為優勢活性構型。
Figure 02_image003
勁方公司專利WO2020177629A1公開了特定手性分子的活性資料（表1）。根據說明書記載，具有相同軸手性片段的兩對手性分子Z2-1/Z2-2和Z25-1/Z25-2，其活性較優的分子Z2-1和Z25-2的構型完全相反。
Figure 02_image005
[表1]
Figure 02_image007
本發明提供一種新型結構的手性KRAS抑制劑。預料不到的是，該手性分子活性優於其對應軸手性異構體，活性差異大於100倍。使用活性更優的手性分子，能夠有效降低藥物用量和避免藥物不良反應，具有重要臨床意義。
本發明提供一種通式(I)所示的手性化合物、氘代物或藥用鹽，
Figure 02_image009
(I) 其中X選自C 3-14環烷基、3-14員雜環基、3-14員雜環基氨基；X任選地進一步被 1-4 個取代基取代，其中每個取代基獨立地選自 C 1-6烷基、氨基、C 1-6氨基烷基、氨基甲醯基、C 1-6氨基甲醯基烷基、羧基、C 1-6羧基烷基、氰基、C 1-6氰基烷基、鹵素、C 1-6鹵代烷基、羥基、C 1-6羥烷基，所述C 1-6烷基可任選地被一個或多個選自氨基、氨基甲醯基、羧基、氰基、鹵素、羥基、氧代基所取代； R 1為丙烯醯基、取代的丙烯醯基或
Figure 02_image011
； R 2選自H、C 2-6烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6烷基、4-10員雜環基取代的 C 1-6烷基、C 1-6烷基磺醯基、C 1-6烷基亞磺醯基、C 1-6烷硫基、C 2-6炔基、C 1-6烷基氨基、氨基、C 1-6氨基烷基、氨基甲醯基、C 1-6氨基甲醯基烷基、C 1-6羧基烷基、氰基、C 1-6氰基烷基、鹵素、C 1-6鹵代烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的5-10員雜芳基、取代或未取代的C 3-7環烷基、取代或未取代的4-10員雜環基、羥基或氧代基，所述C 1-6烷基可任選地被一個或多個選自氨基、氨基甲醯基、羧基、氰基、鹵素、羥基、氧代基所取代； R 3選自H、鹵素、C 1-6烷基、取代的C 1-6烷基、C 2-6烯基、取代的C 2-6烯基、C 3-6環烷基或取代的C 3-6環烷基； R 4或R 5獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、取代的C 1-6烷基、C 3-6環烷基、取代的C 3-6環烷基； R 6選自羥基、氧代基、C 1-6烷氧基、C 3-10環烷基氧基、氰基取代的環丙基C 1-6亞烷基氧基，所述C 1-6烷氧基任選地進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、C 1-6烷氧基、C 3-8環烷基的取代基所取代； m或n獨立地選自0、1、2、3、4； Y選自3-14員雜環基，所述雜環基通過環上C原子與喹唑啉環直連相連，所述雜環基任選地進一步被1-4個選自R 7或R 8的取代基所取代；R 7或R 8獨立地選自H、=O、=S、氰基、鹵素、硝基、C 1-6烷基、-C 0-6亞烷基-OR a、 -C 0-6亞烷基-OC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aS(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aS(O) 2R a、-C 0-6亞烷基-S(=O)R a、-C 0-6亞烷基-S(=O) 2R a、-C 0-6亞烷基-SR a、-C 0-6亞烷基-S(R a) 5、-C 0-6亞烷基-C(=O)R a、-C 0-6亞烷基-C(=O)OR a、-C 0-3亞烷基-C(=O)N（R a） 2、C 2-6烯基、C 2-6炔基、丙烯醯基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)，所述C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)任選地還可被1個或多個R a所取代；每個R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、氨基、氧代基、硝基、氰基、羧基、C 1-6烷基、C 1-6羥基烷基、C 1-6氨基烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6雜烷基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 1-6醯基或
Figure 02_image013
。
一些實施方式中，式（I）中的 X選自4-10員雜環基，所述4-10員雜環基任選地進一步被1-4個選自C 1-6烷基、氰基、C 1-6氰基烷基、C 1-6羥基烷基的取代基所取代；較佳為
Figure 02_image015
、
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、
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、
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、
Figure 02_image023
、
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、
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、
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、
Figure 02_image031
、
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、
Figure 02_image035
、
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、
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、
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、
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、
Figure 02_image045
、
Figure 02_image047
、
Figure 02_image049
、
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、
Figure 02_image053
、
Figure 02_image055
、
Figure 02_image057
、
Figure 02_image059
、
Figure 02_image061
、
Figure 02_image063
或
Figure 02_image065
；更佳為
Figure 02_image047
。
一些實施方式中，式（I）中的 R 1選自
Figure 02_image067
、
Figure 02_image069
、
Figure 02_image071
、
Figure 02_image073
、
Figure 02_image075
、
Figure 02_image077
、
Figure 02_image079
、
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、
Figure 02_image083
、
Figure 02_image085
、
Figure 02_image087
或
Figure 02_image089
；較佳為
Figure 02_image067
。
一些實施方式中，式（I）中的 R 2選自H、鹵素或C 1-3烷基；較佳為H。
一些實施方式中，式（I）中的 R 3選自H、C 1-6烷基、取代的C 1-6烷基、C 2-6烯基、取代的C 2-6烯基、C 3-6環烷基或取代的C 3-6環烷基；較佳C 1-3烷基、C 3-6環烷基或C 2-4烯基；更佳為乙基、乙烯基或環丙基。
一些實施方式中，式（I）中的 R 4或R 5選自H、鹵素或C 1-6烷基；較佳R 4為H且R 5為甲基。
一些實施方式中，式（I）中的 R 6選自C 1-6烷氧基、C 3-8環烷基氧基、氰基取代的環丙基C 1-6亞烷基氧基，所述C 1-6烷氧基任選地進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、甲氧基、C 3-8環烷基的取代基所取代；較佳R 6選自
Figure 02_image091
、
Figure 02_image093
、
Figure 02_image095
、
Figure 02_image097
、
Figure 02_image099
、
Figure 02_image101
、
Figure 02_image103
、
Figure 02_image105
、
Figure 02_image107
、
Figure 02_image109
或
Figure 02_image111
。
一些實施方式中，式（I）中的 Y選自
Figure 02_image113
、
Figure 02_image115
、
Figure 02_image117
、
Figure 02_image119
或
Figure 02_image121
；較佳為
Figure 02_image119
或
Figure 02_image121
；更佳為
Figure 02_image119
。
一些實施方式中，式（I）中的 R 7選自H、氰基、鹵素、C 1-6烷基、-C 0-6亞烷基-OR a、 -C 0-6亞烷基-OC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aS(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aS(O) 2R a、-C 0-6亞烷基-S(=O)R a、-C 0-6亞烷基-S(=O) 2R a、-C 0-6亞烷基-SR a、-C 0-6亞烷基-S(R a) 5、-C 0-6亞烷基-C(=O)R a、-C 0-6亞烷基-C(=O)OR a、-C 0-3亞烷基-C(=O)N（R a） 2、丙烯醯基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)，所述C 1-6烷基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)任選地還可被1個或多個R a所取代；每個R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、氨基、氧代基、氰基、羧基、C 1-6烷基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 1-6醯基或
Figure 02_image013
；較佳R 7選自H、丙烯醯基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6醯基、 -C 0-3亞烷基-C 1-6烷氧基、C 1-6羥基烷基、C 1-6氰基烷基、-C 0-3亞烷基-S(=O) 2-C 1-6烷基、C 3-6酮基、
Figure 02_image123
、 、
Figure 02_image125
、
Figure 02_image127
、-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-8雜環基、-C 0-3亞烷基-苯基、-C 0-3亞烷基-吡唑基，所述-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-8雜環基、-C 0-3亞烷基-苯基、-C 0-3亞烷基-吡唑基任選地進一步被一個或多個選自C 1-6醯基、羥基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、鹵素、
Figure 02_image013
或氰基地取代基所取代，所述C 3-8雜環基含有一個選自O或N的雜原子；更佳R 7選自H、C 1-6烷基、乙醯基、
Figure 02_image129
、
Figure 02_image131
、
Figure 02_image133
、
Figure 02_image135
、
Figure 02_image137
、
Figure 02_image139
、
Figure 02_image141
、
Figure 02_image143
、
Figure 02_image123
、
Figure 02_image145
、
Figure 02_image147
、
Figure 02_image149
、
Figure 02_image151
、
Figure 02_image153
、
Figure 02_image155
、
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、
Figure 02_image159
、
Figure 02_image161
、
Figure 02_image163
、
Figure 02_image165
、
Figure 02_image167
、
Figure 02_image169
、
Figure 02_image171
、
Figure 02_image127
、
Figure 02_image173
、
Figure 02_image175
、
Figure 02_image177
或
Figure 02_image179
。
一些實施方式中，式（I）中的 R 8選自H或C 1-6烷基；較佳為H。
一些實施方式中，通式（I）所示的手性化合物選自式(IA)-(ID)化合物，
Figure 02_image181
Figure 02_image183
(IA)                                       (IB)
Figure 02_image185
Figure 02_image187
(IC)                                          (ID) ；較佳為
Figure 02_image181
(IA) 其中，取代基如通式（I）所定義。
本發明還提供一種手性化合物、氘代物或藥用鹽，其選自：
Figure 02_image189
Figure 02_image191
Figure 02_image193
；較佳為
Figure 02_image195
、
Figure 02_image197
或
Figure 02_image199
。
本發明提供一種藥物組合物，所述藥物組合物含有式（I）中的任一項所述的手性化合物、氘代物或藥用鹽和至少一種藥學上可接受的輔料，藥物組合物中所述手性化合物含量比其對應軸手性異構體含量更高。
本發明還提供一種藥物組合物，藥物組合物中所述通式(I)所示的手性化合物、氘代物、藥用鹽在活性成分中的含量高於51%、61%、71%、81%、91%、99%或更高。
本發明還提供一種藥物組合物，藥物組合物中治療有效量的至少一種式（I）所示的化合物、氘代物、藥用鹽和藥學上可接受的輔料的質量百分比為0.0001:1-10。
本發明還提供通式(I)中手性化合物、氘代物、藥用鹽或含有結構式（I）所示化合物的藥物組合物在製備藥物中的應用；較佳所述藥物為抗癌藥物。
作為較佳，所述應用為製備用於治療由KRAS G12C介導的疾病的藥物的應用。作為較佳，所述疾病是癌症。
作為較佳，所述癌症選自乳腺癌、多發性骨髓瘤、膀胱癌、子宮內膜癌、胃癌、宮頸癌、橫紋肌肉瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食道癌、黑色素瘤、結腸直腸癌、肝細胞瘤、頭頸部腫瘤、肝膽管細胞癌、骨髓增生異常症候群、惡性膠質瘤、***癌、甲狀腺癌、許旺氏細胞瘤、肺鱗狀細胞癌、苔蘚樣角化病、滑膜肉瘤、皮膚癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
本發明還提供一種治療和/或預防癌症的方法，包括向治療物件施用治療有效量的通式(I)中手性化合物、氘代物、藥用鹽或含有結構式（I）所示化合物的藥物組合物；較佳所述癌症是由KRAS G12C，HRAS G12C或NRAS G12C突變介導的。
作為較佳，在上述方法中，所述的癌症選自乳腺癌、多發性骨髓瘤、膀胱癌、子宮內膜癌、胃癌、宮頸癌、橫紋肌肉瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食道癌、黑色素瘤、結腸直腸癌、肝細胞瘤、頭頸部腫瘤、肝膽管細胞癌、骨髓增生異常症候群、惡性膠質瘤、***癌、甲狀腺癌、許旺氏細胞瘤、肺鱗狀細胞癌、苔蘚樣角化病、滑膜肉瘤、皮膚癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
除非另有說明，所述結構通式中使用的一般化學術語具有通常的含義。
例如，除非另有說明，本發明所用的術語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
在本發明中，除非另有說明，“烷基”包括直鏈或支鏈的一價飽和烴基。 例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基、2-甲基戊基等。類似的，“C 1-8烷基”中的“ 1-8”是指包含有1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子的直鏈或支鏈形式排列的基團。
“C 1-3亞烷基”是指包括直鏈或支鏈的二價飽和烴基。例如亞甲基、1,2-亞乙基、1,3-亞丙基或1,2-亞異丙基。類似的，“C 1-6亞烷基”中的“ 1-6”是指包含有1、2、3、4、5或6個碳原子的直鏈或支鏈形式排列的基團。
在本發明中，“一”、“一個”、“該”、“至少一個”和“一個或多個”可互換使用。因此，例如，包含“一種”藥學上可接受的賦形劑的組合物可以被解釋為表示該組合物包括“一種或多種”藥學上可接受的賦形劑。
術語“芳基”，在本發明中，除非另有說明，是指未取代或取代的包括碳環的原子的單環或稠環芳香基團，具有完全共軛的π電子體系。較佳芳基為6-14員的單環或多環的芳香環基團。較佳為苯基、萘基。最佳為苯基。所述芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環。
術語“雜環基”，在本發明中，除非另有說明，是指由碳原子和1-3個選自N、O或S的雜原子組成的未取代或取代的3-14員穩定環系統，其為飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，如螺環或橋環。雜環基中氮或硫雜原子可以選擇性地被氧化，並且氮雜原子可以選擇性地被季銨化。該雜環基可以被連接到任何的雜原子或碳原子上以形成穩定的結構。這些雜環基的實例包括但不限於氮雜環丁烷基、吡咯烷基、呱啶基、呱嗪基、氧代呱嗪基、氧代呱啶基、四氫呋喃基、二氧戊環基、四氫咪唑基、四氫噻唑基、四氫噁唑基、四氫吡喃基、嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基亞碸、硫代嗎啉基碸基和四氫噁二唑基。所述雜環基可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基。
術語“螺環基”，在本發明中，除非另有說明，是指兩個單環共用一個碳原子的多環化合物，這些螺環基的實例包括但不限於
Figure 02_image201
、
Figure 02_image203
、
Figure 02_image205
、
Figure 02_image207
、
Figure 02_image209
、
Figure 02_image211
、
Figure 02_image213
、
Figure 02_image215
、
Figure 02_image217
、
Figure 02_image219
、
Figure 02_image221
、
Figure 02_image223
、
Figure 02_image225
、
Figure 02_image227
、
Figure 02_image229
Figure 02_image231
、
Figure 02_image233
或
Figure 02_image235
。
術語“橋環基”，在本發明中，除非另有說明，是指兩個單環共用兩個或兩個以上碳原子的多環化合物，這些橋環基的實例包括但不限於
Figure 02_image063
或
Figure 02_image065
。
術語“雜芳基”，在本發明中，除非另有說明，是指未取代或取代的穩定的5員或6員單環芳族環系統或未取代或取代的9-14員苯并稠合雜芳族環系統或多環雜芳族環系統，其由碳原子和1-4個選自N、O或S的雜原子組成，並且其中所述氮或硫雜原子可以選擇性地被氧化，所述氮雜原子可以選擇性地被季銨化。雜芳基可以連接在任何雜原子或碳原子上以形成穩定的結構。雜芳基的實例包括但不限於噻吩基、呋喃基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、***基、吡啶基、噠嗪基、吲哚基、氮雜吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并***基腺嘌呤、喹啉基或異喹啉基。所述雜芳基可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環。
術語“環烷基”是指具有3-14個碳原子的環狀飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，例如，環丙基、環丁基、環戊基或環己基。所述環烷基可以稠合於芳基、雜環基或雜芳基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基。
術語“取代的”是指基團中的一個或多個氫原子分別被相同的或者不同的取代基所取代。典型的取代基包括但不限於H、=O、=S、氰基、鹵素、硝基、C 1-6烷基、-C 0-6亞烷基-OR a、 -C 0-6亞烷基-OC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aS(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aS(O) 2R a、-C 0-6亞烷基-S(=O)R a、-C 0-6亞烷基-S(=O) 2R a、-C 0-6亞烷基-SR a、-C 0-6亞烷基-S(R a) 5、-C 0-6亞烷基-C(=O)R a、-C 0-6亞烷基-C(=O)OR a、-C 0-3亞烷基-C(=O)N（R a） 2、C 2-6烯基、C 2-6炔基、丙烯醯基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)，所述C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)任選地還可被1個或多個R a所取代；每個R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、氨基、氧代基、硝基、氰基、羧基、C 1-6烷基、C 1-6羥基烷基、C 1-6氨基烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6雜烷基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 1-6醯基或
Figure 02_image013
。在一些實施例中，取代基獨立地選自包含-F、-Cl、-Br、-I、-OH、三氟甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、-SCH 3、-SC 2H 5、甲醛基、-C(OCH 3)、氰基、硝基、-CF 3、-OCF 3、氨基、二甲基氨基、甲硫基、磺醯基和乙醯基的基團。
取代烷基的實例包括但不限於2,3-二羥基丙基、2-氨基乙基、2-羥乙基、五氯乙基、三氟甲基、甲氧基甲基、五氟乙基、苯基甲基、二噁茂基甲基和呱嗪基甲基。
取代烷氧基的實例包括但不限於2-羥基乙氧基、2-氟乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2-甲氧基乙氧基、2-氨基乙氧基、2,3-二羥基丙氧基、環丙基甲氧基、氨基甲氧基、三氟甲氧基、2-二乙基氨基乙氧基、2-乙氧基羰基乙氧基、3-羥基丙氧基。
術語“羥基烷基”是指一個或多個羥基取代的烷基，例如-(亞烷基)-OH。
術語“鹵代烷基”是指一個或多個鹵素取代的烷基，例如-(亞烷基)-鹵素。
術語“烷氧基”是指-O-(烷基)。
術語“藥學上可接受的鹽”是指從藥學上可接受的無毒的鹼或酸製備的鹽。
由於式（I）所示化合物將作為藥物應用，較佳地，使用一定純度，例如，至少為60%純度，比較合適的純度為至少75%，特別合適地純度為至少98%（%是重量比）。
本發明化合物的藥物前體包含在本發明的保護範圍內。通常，所述藥物前體是指很容易在體內轉化成所需化合物的功能性衍生物。例如，本發明化合物的任何藥學上可接受的鹽、酯、酯的鹽或其它衍生物，其在向受體施用後能夠直接或間接地提供本發明的化合物或其具有藥學活性的代謝物或殘基。特別較佳的衍生物或前藥是在施用於患者時可以提高本發明化合物生物利用度的那些化合物(例如，可以使口服的化合物更易於被吸收到血液中)，或者促進母體化合物向生物器官或作用位點(例如腦部或淋巴系統)遞送的那些化合物。因此，本發明提供的治療方法中的術語“給藥”是指施用能治療不同疾病的本發明公開的化合物，或雖未明確公開但對受試者給藥後能夠在體內轉化為本發明公開的化合物的化合物。
顯然的，一個分子中任何取代基或特定位置的變數的定義是獨立於分子中其他位置的。很容易理解，本領域技術人員可以通過現有技術手段及本發明中所述的方法來選擇本發明中的化合物的取代基或取代形式，以獲得化學上穩定且易於合成的化合物。
本發明所述化合物可能含有一個或多個不對稱中心，並可能由此產生非對映異構體和光學異構體。本發明包括所有可能的非對映異構體及其外消旋混合物、其基本上純的拆分對映異構體、所有可能的幾何異構體及其藥學上可接受的鹽。
當式（I）所示化合物存在互變異構體時，除非特別聲明，本發明包括任何可能的互變異構體和其藥學上可接受的鹽，及它們的混合物。
當式（I）所示化合物用較重的同位素（例如氘）替代可能提供某些治療優勢，這是由於更大的代謝穩定性，例如增加體內半衰期或減少劑量要求。
當式（I）所示化合物及其藥學上可接受的鹽存在溶劑化物或多晶型時，本發明包括任何可能的溶劑化物和多晶型。形成溶劑化物的溶劑類型沒有特別的限定，只要該溶劑是藥學上可以接受的。例如，水、乙醇、丙醇、丙酮等類似的溶劑都可以採用。
術語“組合物”，在本發明中，是指包括包含指定量的各指定成分的產品，以及直接或間接地由指定量的各指定成分的組合生產的任何產品。因此，含有本發明的化合物作為活性成分的藥物組合物以及製備本發明化合物的方法也是本發明的一部分。此外，化合物的一些結晶形式可以多晶型存在，並且此多晶型包括在本發明中。另外，一些化合物可以與水（即水合物）或常見的有機溶劑形成溶劑化物，並且此類溶劑化物也落入本發明的範圍內。
本發明提供的藥物組合物包括作為活性組分的式（I）所示化合物（或其藥學上可接受的鹽）、一種藥學上可接受的賦形劑及其他可選的治療組分或輔料。儘管任何給定的情況下，最適合的活性組分給藥方式取決於接受給藥的特定的主體、主體性質和病情嚴重程度。本發明的藥物組合物可以方便地以本領域公知的單位劑型存在和藥學領域公知的任何製備方法製備。
本發明的藥物組合物包括藥學上可接受的載體和式（I）所示化合物或其立體異構體、互變異構體，多晶型物、溶劑化物、其藥學上可接受的鹽、其藥物前體。式（I）所示化合物或其藥學上可接受的鹽，與其他一種或多種具有治療活性的化合物的聯合用藥也包括在本發明的藥物組合物中。
本發明的藥物組合物包括適於口腔、直腸、局部和不經腸道（包括皮下給藥、肌肉注射、靜脈給藥）給藥的藥物組合物。含有本發明化合物或藥物組合物的片劑或膠囊可含有一種或多種輔助組分。較佳地，每個片劑或膠囊含有大約0.05mg到5g的活性組分。本發明還提供適用於注射的藥物組合物，包括無菌水溶液或分散體系。進一步地，上述藥物組合物可以製備成無菌粉末形式以用於即時配製無菌注射液或分散液。本發明提供的藥物組合物可以是適於局部用藥的形式，例如，氣溶膠、乳劑、軟膏、洗液、撒粉或其他類似的劑型。進一步地，本發明提供的藥物組合物可以採用適於經皮給藥設備使用的形式。本發明提供的藥物組合物，可以以固體為載體，適用於直腸給藥的形式。單位劑量的栓劑是最典型的劑型。栓劑可以方便地製備，首先藥物組合物與軟化或熔化的輔料混合，然後冷卻和模具成型而制得。
上述製劑配方還可以包括，適當的，一種或多種附加的輔料組分，如稀釋劑、緩衝劑、調味劑、黏合劑、表面活性劑、增稠劑、潤滑劑和防腐劑（包括抗氧化劑）等。進一步地，其他的輔藥還可以包括調節藥物與血液等滲壓的促滲劑。包含式（I）所示化合物，或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，可以製備成粉劑或濃縮液的形式。
一般情況下，治療上述所示的狀況或不適，藥物的劑量水平約為每天0.01mg/kg體重到150mg/kg體重，或者每個病人每天0.5mg到7g。但是，可以理解，可能需要比上述那些更低或更高的劑量。任何特定病人的具體劑量水平和治療方案將取決於多種因素，包括所用具體化合物的活性、年齡、體重、綜合健康狀況、性別、飲食、給藥時間、給藥途徑、***率、藥物聯用的情況和接受治療的特定疾病的嚴重程度。
為使上述內容更清楚、明確，本發明將用以下實施例來進一步闡述本發明的技術方案。以下實施例僅用於說明本發明的具體實施方式，以使本領域的技術人員能夠理解本發明，但不用於限制本發明的保護範圍。本發明的具體實施方式中，未作特別說明的技術手段或方法等為本領域的常規技術手段或方法等。
除非另有說明，本發明所有的一部分和百分比均按重量計算，所有溫度均指攝氏度。
實施例中使用了下列縮略語： BOP：卡特縮合劑； CDI：羰基二咪唑； DBU:   1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯； DIEA：N，N-二異丙基乙胺； DMF：N，N-二甲基甲醯胺； DCM: 二氯甲烷； Dioxane：二氧六環； ESI-MS：電噴霧電離質譜； EtOH：乙醇； HOAc：冰醋酸； MeOH：甲醇； NIS：N-碘代丁二醯亞胺； NCS：N-氯代丁二醯亞胺； PE:EA：石油醚和乙酸乙酯的比值； POCl 3：三氯氧磷； SOCl 2：二氯亞碸； THF ：四氫呋喃； TFA：三氟乙酸； TEA：三乙胺； Toluene：甲苯； Sphos Pd G2：氯(2-二環己基膦基-2,6-二甲氧基-1,1-聯苯基)(2-氨基-1,1-聯苯-2-基)鈀(II)； Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2：[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物； Pd(PPh 3) 4：四（三苯基膦）鈀； Pre-TLC: 薄層層析矽膠板。
中間體化合物M1合成
Figure 02_image237
步驟1：化合物M1-2的合成
在室溫下，向化合物M1-1(40g)，HOAc (76.8g)，EtOH (400mL)與H 2O(160mL)的混合物中逐份添加鐵粉(26.52g)。所得混合物在室溫下攪拌2小時，隨後用NaOH (5N)溶液中和。隨後用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮得褐色油狀的所要粗品產物(34g，98%產率)，即化合物M1-2。
ESI-MS m/z: 190.02 [M+H] +。
步驟2：化合物M1-3的合成
將2,2,2-三氯乙烷-1,1-二醇(66.4g)與Na 2SO 4(503.4g)溶於水（560mL）中，然後升溫熱至55℃。添加含有化合物M1-2(34g)的水（240mL）和35% HC1（72mL），再添加鹽酸羥胺(81.4g)的水溶液（100mL）。所得混合物在90℃攪拌3小時且形成黃色沉澱物。將混合物冷卻至室溫。通過過濾收集固體,用水沖洗,且風乾,得到黃褐色固體產物(47g，99%產率) ，即化合物M1-3。
ESI-MS m/z: 261.03 [M+H] +。
步驟3：化合物M1-4的合成
在60℃，向濃硫酸(300mL)中添加化合物M1-3(47g),將溫度升高至90℃且維持3小時，反應完全，將反應混合物冷卻至室溫且傾注入冰水中。通過過濾收集黃色沉澱物且乾燥，得到黑色固體產物(43g，99%產率) ，即化合物M1-4。
步驟4：化合物M1-5的合成
在0℃，將化合物M1-4(43g)於NaOH (2N, 500mL)中的溶液中添加H 2O 2溶液(30%，80mL)且所得混合物在0℃攪拌30分鐘。再移至室溫下攪拌2小時，反應完全，將混合物傾注入冰水中再用濃HCI溶液酸化，通過過濾收集沉澱物且風乾，得到呈白色固體狀產物(20g，48.9%產率)，即化合物M1-5。
ESI-MS m/z: 233.97 [M+H] +。
步驟5：化合物M1-6的合成
在室溫下，向化合物M1-5(20g)於DMF (200mL)中的溶液中添加NIS (29g)且所得混合物在70℃攪拌過夜。反應完全，將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮得褐色固體狀的所要粗品產物(30g，98%產率) ，即化合物M1-6。
ESI-MS m/z: 359.87[M+H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.34 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 6.87 (s, 2H)。
步驟6：化合物M1的合成
在室溫下，將二（咪唑-1-基）甲酮(2.70g)加入到粗品化合物M1-6(4.0g)的THF(20mL)中，再將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(1.44g，1.94mL)加入其中，混合物移至50℃反應，約反應2小時化合物M1-6基本完全轉化為中間產物，接著將混合物逐滴加入到冰的氨水(35mL)中，攪拌5min即反應完全。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（石油醚/乙酸乙酯=70:30）純化，得到褐色固體狀的所要目標產物化合物M1(1.64g)。
中間體化合物M2合成
Figure 02_image239
步驟1：化合物M2-1的合成
在室溫條件下，將化合物M1-5(3.6g)溶於DMF(20mL)中，加入NCS (2.05g)，在70℃反應1.5 h。反應完全，降到室溫，加水稀釋，用EA萃取三次，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾得棕色固體M2-1 (3.86 g，粗品)。
ESI-MS m/z: 267.91 [M+H] +。
步驟2：化合物M2-2的合成
在室溫條件下，將化合物M2-1(3.7g)溶於THF（20mL）中，依次加入CDI(2.98g，)，DIEA (5.34g)，在50℃反應1.5h後，在冰浴條件下將反應液逐滴到氨水(40mL)中，攪拌5min即反應完全。加水稀釋，用EA萃取三次，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾。矽膠柱分離純化（PE:EA=2:1）得黃色固體M2-2 (2.32 g，62.93%產率)。
ESI-MS m/z: 266.93 [M+H] +。
步驟3：化合物M2-3的合成
在室溫條件下，將化合物1-1 (4.17g)溶於THF(10mL)中，加入M2-2(2.3g)，40℃反應4h。降到室溫，加水淬滅，用EA萃取三次，合併有機相並用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾。得棕色固體M2-3（3.4 g，粗品）。
ESI-MS m/z: 392.01 [M+H] +。
步驟4：化合物M2-4的合成
在室溫條件下，將甲醇鈉(2.34g)加入到化合物M2-3(3.4g)的甲苯(50mL)中，移至110℃回流攪拌5小時。降到室溫，加水稀釋，用3N HCl調節pH至6，用EA萃取三次，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾，得到棕色固體M2-4（2.63g，粗品）。
ESI-MS m/z: 374.01 [M+H] +。
步驟5：化合物M2-5的合成
在室溫條件下，氮氣保護下，將DIEA(5mL)加入到化合物M2-4(2.6g)的POCl 3(50mL)中，移至110℃攪拌2小時。待反應完全後，直接濃縮除去POCl 3，得到棕褐色固體M2-5（2.8 g，粗品）。
ESI-MS m/z: 391.97 [M+H] +。
步驟6：化合物M2的合成
在室溫條件下，將DIEA(4.60g)加入到化合物M2-5(2.8g)，2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(1.93g)的二氧六環(30mL)中，室溫反應5min。加水淬滅，用EA萃取三次，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾，矽膠柱分離純化（DCM:MeOH=10:1），得到棕色固體M2(3.4g，81.9%產率)。
ESI-MS m/z: 582.16 [M+H] +。
實施例1：化合物1（1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image241
步驟1：化合物1-1的合成
在室溫下，氮氣保護下，將1-甲基呱啶-4-羧酸(500mg)溶於SOCl 2(2mL)中，移至70℃下，攪拌反應1h。真空濃縮，除去氯化亞碸，得到白色固體狀目標產物，即化合物1-1(520mg，粗品)。
步驟2：化合物1-2的合成
在室溫下，將化合物1-1(405.27mg)加入到化合物M1(450mg)的THF(10mL)中，移至40℃攪拌4小時。待反應完全後，直接濃縮出去THF，得到白色固體狀粗品目標產物，即化合物1-2（600mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 483.94 [M+H] +。
步驟3：化合物1-3的合成
在室溫下，將甲醇鈉(200.87mg)加入到化合物1-2(600mg)的甲苯(15mL)中，移至110℃回流攪拌5小時。待反應完全後，將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機相經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到白色固體狀粗品目標產物，即化合物1-3（600mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 465.96 [M+H] +。
步驟4：化合物1-4的合成
在室溫下，氮氣保護下，將DIEA(0.5mL)加入到化合物1-3(600mg)的POCl 3(5mL)中，移至110℃攪拌3小時。待反應完全後，直接濃縮除去POCl 3，得到棕褐色固體狀粗品目標產物，即化合物1-4（600mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 483.96 [M+H] +。
步驟5：化合物1-5的合成
在室溫下，將DIEA(480.12mg)加入到化合物1-4(600mg)，2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(280.25mg)的1,4-二氧六環(10mL)中，室溫攪拌3小時。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯/甲醇=10:1萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（DCM:MeOH=10:1）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物1-5(750mg，89.81%產率)。
ESI-MS m/z: 674.10 [M+H] +。
步驟6：化合物1-6的合成
在氮氣保護下，將三氟乙醇(244.76mg)加入到化合物1-5(550mg)，Cs 2CO 3(531.45mg，)的1,4-二氧六環(5mL)中，移至100℃反應30min。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯/甲醇=10:1萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物1-6(590mg，粗品)。
ESI-MS m/z: 755.30 [M+H] +。
步驟7：化合物1-7的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(63.82mg)加入到化合物1-6(590mg)，K 2CO 3(216.17mg)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(120.45mg)的1,4-二氧六環(5.0mL)，H 2O(0.5mL)混合溶液中，在70℃攪拌1h。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物1-7(329mg，64.27%產率)。
ESI-MS m/z: 655.63 [M+H] +。
步驟8：化合物1-8的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(116.16mg)加入到化合物1-7(329mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(344.04mg)，K 3PO 4(213.38mg，)的1,4-二氧六環(3mL)，H 2O(0.75mL)溶液中，移至85℃反應反應約3小時。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物1-8(244mg，61.45%產率)。
ESI-MS m/z: 874.10 [M+H] +。
步驟9：化合物1-9的合成
在室溫下，將化合物1-8(244mg)溶於DCM(4mL)和TFA(2mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀粗品目標產物，即化合物1-9（190mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 606.38 [M+H] +。
步驟10：化合物1的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(17.03mg)的THF溶液加入到化合物1-9(95mg)，THF(4mL)，飽和Na 2CO 3(1mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化,得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物1(24.1mg，22.96%產率) 。
ESI-MS m/z: 660.37 [M+H]+。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 8.08 (s, 1H), 7.52 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.43 – 7.32 (m, 2H), 6.40 (d, J= 17.0, 10.3 Hz, 1H), 6.32 – 6.17 (m, 2H), 5.78 – 5.69 (m, 2H), 5.09 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 4.86 – 4.75 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.15 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.72 (td, J= 6.4, 5.2, 3.0 Hz, 4H), 3.02 (d, J= 11.4 Hz, 2H), 2.85 (t, J= 11.5 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.25 (m, 2H), 2.13 (m, 5H), 2.06 (m, 3H), 1.90 – 1.83 (m, 4H).
實施例1A：化合物1的拆分與異構體結構解析
使用色譜條件：CHIRALCEL OD（2.5 cm I.D. ×25 cm L, 10μm），UV 254 nm，流動相Hexane/IPA/DEA=70/30/0.1(V/V/V)，流速20 ml/min，拆分92mg化合物1，獲得異構體1a（56.3mg）和異構體1b（34.3mg）。
Figure 02_image243
Figure 02_image245
1a                            1b
異構體1a： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ 13.00 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.49 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.32 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.35 (dd, J= 17.0, 10.3 Hz, 1H), 6.18 – 6.06 (m, 2H), 5.79 – 5.66 (m, 2H), 5.11 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 4.97 (dq, J= 12.3, 9.1 Hz, 1H), 4.68 (dq, J= 12.3, 9.1 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.81 – 3.72 (m, 6H), 2.86 (dt, J= 11.5, 3.1 Hz, 2H), 2.68 (tt, J= 11.4, 3.6 Hz, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.98 (dt, J= 6.7, 4.1 Hz, 8H), 1.85 (qd, J= 13.0, 3.9 Hz, 2H).ESI-MS m/z: 660.4 [M+H]+。色譜條件：CHIRALCEL OD（2.5 cm I.D. ×25 cm L, 10μm），UV 254 nm，流動相Hexane/IPA/DEA=70/30/0.1(V/V/V)，流速20 ml/min，保留時間6.39min（後出峰）。
異構體1b： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ 13.01 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.50 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.32 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.35 (dd, J= 17.0, 10.3 Hz, 1H), 6.19 – 6.06 (m, 2H), 5.80 – 5.60 (m, 2H), 5.11 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 4.98 (dq, J= 12.2, 9.1 Hz, 1H), 4.69 (dq, J= 12.2, 9.2 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.76 (d, J= 7.1 Hz, 6H), 2.85 (dd, J= 8.9, 5.8 Hz, 2H), 2.68 (tt, J= 11.6, 3.7 Hz, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.02 – 1.96 (m, 8H), 1.85 (qd, J= 13.2, 4.0 Hz, 2H).ESI-MS m/z: 660.4 [M+H]+。色譜條件：CHIRALCEL OD（2.5 cm I.D. ×25 cm L, 10μm），UV 254 nm，流動相Hexane/IPA/DEA=70/30/0.1(V/V/V)，流速20 ml/min，保留時間4.09min（先出峰）。
通過在DMSO/H 2O體系液面擴散方法進行單晶培養，得到異構體1a的DMSO溶劑合物的單晶。晶體繞射實驗用晶體尺寸為0.03×0.19×0.23mm，採用Bruker D8 Venture Photon II 繞射儀進行單晶測試，光源為CuKα輻射，掃描方式為φ/ w掃描。採用直接法(Shelxs97)解析晶體結構，獲得全部100個非氫原子位置，晶體屬於單斜晶系，空間群為 P21，晶胞參數：a=18.4614(13)，b=11.8865(8)，c=18.9132(13)Å，α=γ=90°，β=110.112(3)°，晶胞體積V=3897.3(5)Å 3，晶胞內不對稱單位數Z=2。使用最小二乘法修正結構參數和判別原子種類，使用幾何計算法和差值Fourier法獲得全部氫原子位置。單晶結構解析結果表明：晶態下分子排列屬第一類空間群，化合物應具有旋光活性，Flack係數0.044(12)，可確定晶體中化合物的絕對構型為S構型。
實施例2：化合物2（1-（7-（2-環己基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image247
步驟1：化合物2-1的合成
在室溫下，將環己甲醯氯(367.63mg)加入到化合物M1(300mg)的THF(10mL)中，移至40℃攪拌4小時。待反應完全後，直接濃縮出去THF，得到白色固體狀粗品目標產物，即化合物2-1（390mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 469.00 [M+H] +。
步驟2：化合物2-2的合成
在室溫下，將甲醇鈉(224.56mg)加入到2-1(390mg)的甲苯 (15mL)中，移至110℃回流攪拌5小時。待反應完全後，將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機相經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到白色固體狀粗品目標產物，即化合物2-2（350mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 450.94 [M+H] +。
步驟3：化合物2-3的合成
在室溫下，氮氣保護下，將DIEA(1.0mL)加入到化合物2-2(350mg)的POCl 3(10.0mL)中，移至110℃攪拌12小時。待反應完全後，直接濃縮除去POCl 3，得到棕褐色固體狀粗品目標產物，即化合物2-3（340mg，粗品）。
ESI-MS m/z:468.87[M+H]+。
步驟4：化合物2-4的合成
在室溫下，將DIEA(279mg)加入到化合物2-3(340mg)，2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(163mg)的1,4-二氧六環(10mL)中，室溫攪拌5分鐘。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（PE:EA=10:1-15:1）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物2-4(348mg，42.62%產率)。
ESI-MS m/z: 659.06 [M+H] +。
步驟5：化合物2-5的合成
在氮氣保護下，將三氟乙醇(158.4mg)加入到化合物2-4(348mg)，Cs 2CO 3(343.92mg，)的1,4-二氧六環(5mL)中，移至100℃反應30min。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物2-5(400mg，粗品)。
ESI-MS m/z: 739.01 [M+H] +。
步驟6：化合物2-6的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(63.82mg)加入到化合物2-5(400mg)，K 2CO 3(149.53mg)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(83.32mg，)的1,4-二氧六環(4.0mL)，H 2O(0.4mL)混合溶液中，在70℃攪拌1h。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（PE:EA=10:1-15:1）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物2-6(213mg，61.56%產率)。
ESI-MS m/z: 639.01 [M+H] +。
步驟7：化合物2-7的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(116.16mg)加入到化合物2-6(213mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(227.96mg)，K 3PO 4(141.39mg，)的1,4-二氧六環(2mL), H 2O(0.5mL)溶液中，移至85℃反應反應約3小時。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(PE:EA=2:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物2-7(180mg，69.74%產率)。ESI-MS m/z: 775.42 [M+H] +。
步驟8：化合物2-8的合成
在室溫下，將化合物2-7(180mg)溶於DCM(6mL)和TFA(3mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀粗品目標產物，即化合物2-8（135mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 591.40 [M+H] +。
步驟9：化合物2-9的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(17.03mg)的THF溶液加入到化合物2-8(135mg，)，THF(4mL)，飽和Na 2CO 3(1mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物2(66.71mg，44.36%產率) 。ESI-MS m/z: 645.44 [M+H] +。 1HNMR(500MHz, CDCl 3) δ：7.94 (s, 1H), 7.45-7.48 (m, 2H), 7.36-7.36 (m, 1H),  6.37-6.41 (m, 1H), 6.22-6.28 (m, 2H), 5.70-5.73 (m, 1H), 5.62-5.66 (m, 1H), 5.05-5.07 (m, 1H), 4.83-4.91 (m, 1H), 4.47-4.54 (m, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.94 (s, 2H), 3.70-3.79 (m, 4H), 2.81-2.87 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.07-2.09 (m, 2H), 1.85-1.87 (m, 2H), 1.74-1.77 (m, 1H), 1.61-1.71 (m, 3H), 1.41-1.48 (m, 3H), 1.25-1.37 (m, 3H)。
實施例3：化合物3（1-（7-（2-四氫呋喃-3-基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image249
步驟1：化合物3-1的合成
在室溫下，將四氫呋喃-3-甲醯氯(402mg)加入到化合物M1(300mg)的THF(10mL)中，移至40℃攪拌4小時。待反應完全後，直接濃縮出去THF，得到黃色固體狀粗品目標產物，即化合物3-1（460mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 456.94 [M+H] +。
步驟2：化合物3-2的合成
在室溫下，將甲醇鈉(224.56mg)加入到化合物3-1(460mg，0.83mmol)的甲苯 (10mL)中，移至110℃回流攪拌8小時。待反應完全後，將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機相經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到白色固體狀粗品目標產物，即化合物3-2（200mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 438.96 [M+H]+。
步驟3：化合物3-3的合成
在室溫下，氮氣保護下，將DIEA(1.0mL)加入到化合物3-2(200mg)的POCl 3(10.0mL)中，移至110℃攪拌12小時。待反應完全後，直接濃縮除去POCl 3，得到棕褐色固體狀粗品目標產物，即化合物3-3（230 mg，粗品）。
ESI-MS m/z:456.87[M+H] +。
步驟4：化合物3-4的合成
在室溫下，將DIEA(279mg)加入到化合物3-3(200mg)，2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(90mg)的1,4-二氧六環(2mL)中，室溫攪拌5分鐘。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過矽膠板分離純化，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物3-4(88mg，34.1 %產率)。
ESI-MS m/z: 647.14 [M+H] +。
步驟5：化合物3-5的合成
在氮氣保護下，將三氟乙醇(68mg)加入到化合物3-4(88mg)，Cs 2CO 3(88mg)的1,4-二氧六環(2mL)中，移至100℃反應30min。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物3-5(97mg，粗品)。
ESI-MS m/z: 727.08 [M+H] +。
步驟6：化合物3-6的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(10mg)加入到化合物3-5(90mg)，K 2CO 3(34mg，)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(19mg)的1,4-二氧六環(2.5mL)，H 2O(0.5mL)混合溶液中，在70℃攪拌1h。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（PE:EA=10:1-3:1）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物3-6(213mg，64.4 %產率)。
ESI-MS m/z: 627.21 [M+H] +。
步驟7：化合物3-7的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(18.5mg)加入到化合物3-6(50mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(54.6mg)，K 3PO 4(34mg)的1,4-二氧六環(2mL), H 2O(0.5mL)溶液中，移至85℃反應反應約4小時。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(PE:EA=2:1)純化,得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物3-7(45 mg，73.8 %產率)。
ESI-MS m/z: 763.39 [M+H] +。
步驟8：化合物3-8的合成
在室溫下，將化合物3-7(45mg)溶於DCM(1mL)和TFA(0.5mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀粗品目標產物，即化合物3-8（56 mg，粗品）。ESI-MS m/z: 579.32 [M+H] +。
步驟9：化合物3-9的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(5.85mg)的THF溶液加入到化合物3-8(56mg，)，THF(2mL)，飽和Na 2CO 3(0.5mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物3(12.05mg，32.2 %產率) 。ESI-MS m/z: 633.41 [M+H]+。
1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 7.88 (s, 1H), 7.40 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.19 (s, 1H), 6.32 (dd, J = 17.0, 1.9 Hz, 1H), 6.18 (m, J = 17.0, 10.6, 4.9 Hz, 2H), 5.65 (dd, J = 10.3, 1.9 Hz, 1H), 5.58 (dd, J = 17.4, 1.0 Hz, 1H), 5.01 (dd, J = 10.9, 1.0 Hz, 1H), 4.78 – 4.64 (m, 1H), 4.34 (m, 1H), 4.20 (td, J = 8.1, 3.7 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 8.3, 6.8 Hz, 1H), 4.02 – 3.95 (m, 3H), 3.94 – 3.89 (m, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.75 (td, J = 10.0, 9.0, 5.5 Hz, 2H), 3.71 – 3.62 (m, 3H), 2.41 (m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.18 (d, J = 7.2 Hz, 4H)。
實施例4：化合物4（1-（7-（6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image251
步驟1：化合物4-1的合成
在室溫下，在氫氣氛圍中，將Pd/C (80 mg)  加入到化合物1-9 (95mg)  的MeOH (10mL)  的溶液中，在室溫攪拌2小時。待反應完全後，過濾除去Pd/C，並用MeOH洗滌Pd/C，將濾液濃縮，即得黃色固體粗品，即化合物4-1（70mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 608.43 [M+H] +。
步驟2：化合物4的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(12.51mg)的THF溶液加入到化合物4-1(70mg)，THF(4mL)，飽和Na 2CO 3(1mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物4(18.3mg，23.79%產率)。
ESI-MS m/z: 662.37 [M+H] +。
實施例5：化合物5（1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（四氫-2H-吡喃-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image253
步驟1：化合物5-1的合成
在室溫下，將四氫吡喃-4-甲醯氯(248.38mg，1.67mmol)加入到化合物M1(300mg，)的THF(3mL)中，移至40℃攪拌4小時。待反應完全後，直接濃縮出去THF，得到白色固體狀粗品目標產物，即化合物5-1（390mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 470.92 [M+H] +。
步驟2：化合物5-2的合成
在室溫下，將甲醇鈉(224.56mg)加入到化合物5-1(390mg)的甲苯 (4mL)中，移至110℃回流攪拌5小時。待反應完全後，將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機相經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到白色固體狀粗品目標產物，即化合物5-2（350mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 452.96 [M+H] +。
步驟3：化合物5-3的合成
在室溫下，氮氣保護下，將DIEA(0.4mL)加入到化合物5-2(350mg, 0.77mmol)的POCl 3(4mL)中，移至110℃攪拌12小時。待反應完全後，直接濃縮除去POCl 3，得到棕褐色固體狀粗品目標產物，即化合物5-3（210mg，粗品）。
ESI-MS m/z:470.95 [M+H] +。
步驟4：化合物5-4的合成
在室溫下，將DIEA(115.13mg)加入到化合物5-3(210mg)，2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(120.96mg)的1,4-二氧六環(3mL)中，室溫攪拌30分鐘。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（PE:EA=10:1-15:1）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物5-4(110mg，37.34%產率)。
ESI-MS m/z: 661.17 [M+H] +。
步驟5：化合物5-5的合成
在氮氣保護下，將三氟乙醇(49.92mg)加入到化合物5-4(110mg)，Cs 2CO 3(108.39mg，)的1,4-二氧六環(2mL)中，移至100℃反應30min。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物5-5(105mg，粗品)。
ESI-MS m/z: 741.14 [M+H] +。
步驟6：化合物5-6的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(11.56mg)加入到化合物5-5(105mg)，K 2CO 3(39.15mg)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(21.81mg)的1,4-二氧六環(2mL)，H 2O(0.4mL)混合溶液中，在70℃攪拌1h。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（PE:EA=10:1-15:1）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物，即化合物5-6(60mg，66.04%產率)。ESI-MS m/z: 641.25 [M+H] +。
步驟7：化合物5-7的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(21.60mg)加入到化合物5-6(60mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(64.02mg)，K 3PO 4(39.71mg，)的1,4-二氧六環(2mL), H 2O(0.2mL)溶液中，移至85℃反應反應約3小時。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(PE:EA=2:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物5-7(25mg，34.41%產率)。
ESI-MS m/z: 777.42 [M+H] +。
步驟8：化合物5-8的合成
在室溫下，將化合物5-7(25mg)溶於DCM(1mL)和TFA(0.5mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到黃色油狀粗品目標產物，即化合物5-8（20mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 593.33 [M+H] +。
步驟9：化合物5的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(3.20mg)的THF溶液加入到化合物5-8(20mg，)，THF(2mL)，飽和Na 2CO 3(0.5mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物，即化合物5 (5.2mg，33.48 %產率)。
ESI-MS m/z: 647.33 [M+H] +。
實施例6：化合物6（1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（N-甲基吡咯-3-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image255
步驟1：化合物6-1的合成
在室溫、氮氣保護下，將N-甲基吡咯-3-羧酸(600mg)溶於SOCl 2(5.5mL)中，升溫至70℃，攪拌反應1h。真空濃縮，除去氯化亞碸，得到白色固體目標產物，即化合物6-1(68mg，粗品)。
步驟2：化合物6-2的合成
在室溫下，將化合物6-1(369mg)加入到化合物M1(300mg)的THF(5mL)中，攪拌16小時。待反應完全後，旋蒸除去THF。使用二氯甲烷：甲醇=90:10作為展開劑，柱層析分離得到淡黃色固體目標產物，即化合物6-2（262mg）。
ESI-MS m/z: 469.93, 471.94 [M+H] +。
步驟3：化合物6-3的合成
在室溫下，將甲醇鈉(151mg)加入到化合物6-2(262mg)的甲苯 (10mL)中，升溫至110℃回流攪拌16小時。待反應完全後，將混合物傾入40mL冰水中，用乙酸乙酯萃取該混合物，有機相經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到淡黃色固體目標產物，即化合物6-3（240mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 451.96, 453.91 [M+H] +。
步驟4：化合物6-4的合成
在室溫、氮氣保護下，將DIEA(0.5mL)加入到化合物6-3(226mg)的POCl 3(5mL)溶液中，升溫至110℃攪拌3小時。待反應完全後，旋蒸除去POCl 3，將混合物倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，收集有機相，用飽和鹵水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到棕黃色固體目標產物，即化合物6-4（116mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 469.96 ,471.94 [M+H] +。
步驟5：化合物6-5的合成
在室溫下，將DIEA(96mg)加入到化合物6-4(116mg)，2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(56mg)的二氧六環(5mL)溶液中，室溫攪拌2小時。反應結束後，旋乾二氧六環，加入冰水，用乙酸乙酯/甲醇=10:1萃取混合物，收集有機相旋乾。剩餘物通過矽膠柱層析色譜（展開劑為DCM:MeOH=10:1）純化，得到黃色固體目標產物，即化合物6-5(58mg)。
ESI-MS m/z: 660.08, 662.07 [M+H] +。
步驟6：化合物6-6的合成
向充分乾燥的反應瓶中加入化合物6-5(56mg)，用二氧六環(3mL)溶解，隨後加入三氟乙醇(42mg)及Cs 2CO 3(55mg)，升溫至100℃反應1h。反應結束後，用THF稀釋反應液，過濾除去Cs 2CO 3。濾液旋乾後，使用隔膜泵乾燥樣品，得到黃色固體目標產物，即化合物6-6 (60mg)。
ESI-MS m/z: 740.03,742.07 [M+H] +。
步驟7：化合物6-7的合成
N 2保護下，向乾燥反應瓶中加入化合物6-6(60mg)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷 (13mg)，用二氧六環(5mL)溶解，隨後加入K 2CO 3(22.40mg)、H 2O(0.5mL)，分散均勻後，加入1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀 (5.93mg)，N 2置換體系三次。升溫至70℃攪拌1h。反應結束後，將反應液冷卻至室溫，加入水後用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，飽和食鹽水反萃取，收集有機相，經Na 2SO 4乾燥、過濾、旋乾，濃縮物通過pre-TLC(展開劑為DCM/MeOH=10:1)純化,得到黃色固體產物，即化合物6-7(44mg)。
ESI-MS m/z: 640.11,642.13 [M+H] +。
步驟8：化合物6-8的合成
向氮氣保護的反應瓶中加入化合物6-7(44mg)，用二氧六環(5mL) 溶解後，依次加入5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(47mg)、K 3PO 4(29mg)、去離子水(0.5mL)以及Pd(PPh 3) 4(8mg)。升溫至85℃反應3小時。將反應混合物冷卻至室溫，加入水後用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，飽和食鹽水反萃取，收集有機相，經Na 2SO 4乾燥、過濾、旋乾，濃縮物通過pre-TLC(展開劑為DCM/MeOH=10:1)純化，得到黃色固體產物，即化合物6-8(18mg)。ESI-MS m/z: 776.87 [M+H] +。
步驟9：化合物6-9的合成
在室溫下，將化合物6-8(18mg)溶於DCM(2mL)和TFA(1mL)的混合溶劑中，升溫至40℃反應1h。待反應完全後，濃縮除去溶劑，得到黃色固體粗品產物，即化合物6-9（21mg，粗品）直接用於下一步投料。ESI-MS m/z: 592.94 [M+H] +。
步驟10：化合物6的合成
在氮氣保護、冰水浴下，將丙烯醯氯(2.0mg)的THF(1mL)溶液滴加到化合物6-9(13mg，)的THF(4mL)與飽和NaHCO 3(1mL)混合溶液中，攪拌10分鐘。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，飽和食鹽水反萃取，收集有機相，經Na 2SO 4乾燥、過濾、旋乾，濃縮物通過pre-TLC(展開劑為DCM/MeOH=10:1)純化，得到淡黃色固體產物，即化合物6(7mg，LC-MS 純度96.2%) 。
ESI-MS m/z: 646.34 [M+H] +。
實施例7：化合物7（1-（7-（2-（1-乙基呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮螺環[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image257
步驟1：化合物7-1的合成
在室溫下，將碘乙烷(3.27g)，K 2CO 3(2.89g)加入到甲基呱啶-4-羧酸甲酯(1.5g, )的EtOH(15mL)溶液中，移至85°C回流反應1h。真空濃縮，除去EtOH，得到白色固體狀目標產物7-1(1.7g，粗品)。
ESI-MS m/z: 172.06 [M+H] +。
步驟2：化合物7-2的合成
在室溫下，將LiOH(447.57mg)加入到化合物7-1(1.7g)的MeOH(10mL)溶液中，移至50°C反應1小時。向其中加入與LiOH等當量的稀鹽酸溶液，使目標產物游離，直接旋乾，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（DCM:MeOH= 92:8-90:10）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物7-2(700mg，44.85%產率)。
ESI-MS m/z: 158.15[M+H] +。
步驟3：化合物7-3的合成
在室溫下，氮氣保護下，將化合物7-2(400mg)溶於SOCl 2(3mL)中，移至70°C下，攪拌反應1h。真空濃縮，除去氯化亞碸，得到白色固體狀目標產物7-3(450 mg，粗品)。
步驟4：化合物7-4的合成
在室溫下，將化合物7-3(293.63mg)加入到化合物M1(300mg)的THF(10mL)中，移至45℃攪拌12小時。反應有大量固體析出，抽濾，固體即是目標產物7-4（150mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 498.00 [M+H] +。
步驟5：化合物7-5的合成
在室溫下，將甲醇鈉(81.34mg)加入到化合物7-4(150mg)的toluene (5mL)中，移至110℃回流攪拌4小時。待反應完全後，將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機相經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到棕色固體狀粗品目標產物7-5（150mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 480.00 [M+H] +。
步驟6：化合物7-6的合成
在室溫下，氮氣保護下，將DIEA(1.0mL)加入到化合物7-5(150mg)的POCl 3(5mL)中，移至110℃攪拌3小時。待反應完全後，直接濃縮除去POCl 3，加入EA稀釋，用水萃取三次，合併有機相，乾燥濃縮，得到白色固體狀目標產物7-6（150mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 497.99 [M+H] +。
步驟7：化合物7-7的合成
在室溫下，將DIEA(116.65mg)加入到化合物7-6(150mg)，2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(68.09mg)的二氧六環(5 mL)中，移至45℃攪拌1小時。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯/甲醇=10:1萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（DCM:MeOH=10:1）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物7-7(50mg, 24.14%產率)。
ESI-MS m/z: 688.14 [M+H] +。
步驟8：化合物7-8的合成
在氮氣保護下，將三氟乙醇(21.80mg)加入到化合物7-7(50mg)，Cs 2CO 3(47.33mg)的二氧六環(1mL)中，移至100℃反應3h。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯/甲醇=10:1萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到黃色固體狀的所要目標產物7-7(55mg，粗品)。
ESI-MS m/z: 768.18[M+H] +。
步驟9：化合物7-9的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(5.84mg)加入到化合物7-8(55mg)，K 2CO 3(19.78mg)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(11.02mg)的二氧六環(1.0mL)，H 2O(0.1mL)混合溶液中，在70℃攪拌1h。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物7-9(25mg, 37.39μmol, 52.24%產率)。
ESI-MS m/z: 668.18 [M+H] +。
步驟10：化合物7-10的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(8.64mg)加入到化合物7-9(25mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(25.59mg)，K 3PO 4(15.87mg, )的二氧六環(1mL)，H 2O(0.25mL)溶液中，移至85℃反應反應約3小時。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化,得到呈黃色固體狀的所要產物7-10(20mg,66.53%產率)。ESI-MS
m/z: 804.56 [M+H] +。
步驟11：化合物7-11的合成
在室溫下，將化合物7-10(20mg)溶於DCM(1mL)和TFA(0.5mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀目標產物7-11（18mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 620.28 [M+H] +。
步驟12：化合物7的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(3.15mg)的THF溶液加入到化合物9-11(18mg, )，THF(2mL)，飽和Na 2CO 3(0.5mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物7(10.7mg，52.69%產率)。
ESI-MS m/z: 674.37 [M+H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ 13.05 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.50 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.33 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.18 – 6.05 (m, 2H), 5.82 – 5.66 (m, 2H), 5.11 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.68 (m, 1H), 3.23 – 3.05 (m, 4H), 2.80 (m, 1H), 2.25 (m, 2H), 2.05 (d, J= 6.7 Hz, 5H), 1.95 (m, 6H), 1.62 – 1.55 (m, 1H), 1.32 (m, 1H), 1.07 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.94 (t, J= 7.3 Hz, 2H).
實施例8：化合物8（1-（7-（6-氯-8-乙氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image259
步驟1：化合物8-1的合成
在氮氣保護下，將乙醇(395mg)加入到化合物M2(1.0g)，Cs 2CO 3(1.68g)的二氧六環(10mL)中，移至80℃反應1h。降到室溫，緩慢加入水，析出固體，過濾，烘乾得到黃色固體8-1 (0.96g，粗品)。
ESI-MS m/z: 608.19 [M+H] +。
步驟2：化合物8-2的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(341mg)加入到化合物8-1 (900mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(758.6mg)，K 3PO 4(941.1mg，)的二氧六環(20mL)，H 2O(5mL)溶液中，移至85℃反應4h。降到室溫，加水稀釋，用EA萃取三次萃取，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾，矽膠柱分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得黃色固體8-2 (665mg，49.9% 產率)。
ESI-MS m/z: 744.39 [M+H] +。
步驟3：化合物8-3的合成
在室溫條件下，將化合物8-2 (120mg)溶於DCM(6mL)和TFA(3mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到棕色油粗品8-3（73mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 560.28 [M+H] +。
步驟4：化合物8的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(12.1mg)的THF（1mL）溶液加入到化合物8-3 (73mg)，THF(4mL)，飽和Na 2CO 3(1mL)溶液中，保持溫度攪拌5min。加水稀釋，用EA萃取三次萃取，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾， pre-TLC分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得白色固體8 (36.5mg，43.3%產率) 。
ESI-MS m/z: 614.40 [M+H] +。
實施例9：化合物9（1-（7-（8-乙氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image261
步驟1：化合物9-1的合成
在氮氣保護下，將Sphos Pd G2 (51.7mg)加入到化合物8-2 (300mg)，K 3PO 4(228.4mg，)，乙烯基硼酸酯 (110.49mg)的二氧六環(4mL)，H 2O(1mL)混合溶液中，在100 ℃攪拌4h。降至室溫，加水稀釋，用EA萃取三次萃取，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾，pre-TLC分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得白色固體9-1(185mg，70.08% 產率)。
ESI-MS m/z: 736.45 [M+H] +。
步驟2：化合物9-2的合成
在室溫條件下，將化合物9-1 (185mg)溶於DCM(4mL)和TFA(2mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到棕色油粗品9-2（138mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 552.34 [M+H] +。
步驟3：化合物9的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(22.6mg)的THF（1mL）溶液加入到化合物9-2 (138mg)，THF(4 mL)，飽和Na 2CO 3(1mL)溶液中，保持溫度攪拌5min。加水稀釋，用EA萃取三次萃取，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾，pre-TLC分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得白色固體9 (62.5mg，38.2%產率) 。
ESI-MS m/z: 606.45 [M+H] +。
1H NMR (500 MHz, Chloroform- d) δ 7.90 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.46 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.37 – 7.34 (m, 1H), 6.39 (dd, J= 17.0, 1.9 Hz, 1H), 6.24 (m, 2H), 5.71 (dd, J= 10.2, 1.9 Hz, 1H), 5.62 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 5.03 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.91 – 3.84 (m, 1H), 3.75 (m, 4H), 3.00 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 2.87 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.12 – 2.08 (m, 5H), 2.03 (m, 4H), 1.33 (m, 4H).
實施例10：化合物10（1-（7-（6-氯-8-甲氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image263
步驟1：化合物10-1的合成
在氮氣保護下，將甲醇(275mg)加入到化合物M2 (1.0g)，Cs 2CO 3(1.68g)的二氧六環(10mL)中，移至70℃反應 5h。降到室溫，緩慢加入水，析出固體，過濾，烘乾得到黃色固體10-1 (0.91 g，粗品)。
ESI-MS m/z: 594.18 [M+H] +。
步驟2：化合物10-2的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(77.69mg)加入到化合物10-1 (200mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(172.5mg)，K 3PO 4(214.1mg，)的二氧六環(4mL)，H 2O(1mL)溶液中，移至85℃反應4h。降到室溫，加水稀釋，用EA萃取三次萃取，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾，矽膠柱分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得黃色固體10-2（202mg，79.8% 產率)。
ESI-MS m/z: 730.38 [M+H] +。
步驟3：化合物12-3的合成
在室溫條件下，將化合物10-2 (200mg)溶於DCM(6mL)和TFA(3mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到棕色油粗品10-3（149mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 546.27 [M+H] +。
步驟4：化合物10的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(24.7mg)的THF（1mL）溶液加入到化合物12-3 (149mg)，THF(4mL)，飽和Na 2CO 3(1mL)溶液中，保持溫度攪拌5min。加水稀釋，用EA萃取三次萃取，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾， pre-TLC分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得白色固體10 (80.3mg，47.27%產率，96.39%純度) 。
ESI-MS m/z: 600.35 [M+H] +。
實施例11：化合物11（1-（7-（8-甲氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image265
步驟1：化合物11-1的合成
在氮氣保護下，將Sphos Pd G2 (59.2mg)加入到化合物10-2 (300mg)，K 3PO 4(261.5mg)，乙烯基硼酸酯 (126.53mg)的二氧六環(4mL)，H 2O(1mL)混合溶液中，在100℃攪拌4h。降至室溫，加水稀釋，用EA萃取三次萃取，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾，pre-TLC分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得白色固體11-1(205mg，69.13% 產率)。
ESI-MS m/z: 722.43 [M+H] +。
步驟2：化合物11-2的合成
在室溫條件下，將化合物11-1 (205mg)溶於DCM(6mL)和TFA(3mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到棕色油粗品11-2（152mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 538.32 [M+H] +。
步驟3：化合物11的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(25.4mg)的THF（1mL）溶液加入到化合物11-2 (152mg)，THF(4mL)，飽和Na 2CO 3(1mL)溶液中，保持溫度攪拌5min。加水稀釋，用EA萃取三次萃取，合併有機相並用無水Na 2SO 4乾燥，過濾，旋乾， pre-TLC分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得黃色固體11 (87.2mg，52.1%產率) 。
ESI-MS m/z: 592.43 [M+H] +。
1H NMR (500 MHz, Chloroform- d) δ 7.90 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.47 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.39 (dd, J= 17.0, 2.0 Hz, 1H), 6.22 (m, 2H), 5.72 (dd, J= 10.2, 2.0 Hz, 1H), 5.62 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 5.03 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.75 (m, 8H), 3.00 (m, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (d, J= 7.1 Hz, 5H), 2.04 (m, 4H).
實施例12：化合物12（1-（7-（2 -（1-乙醯呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image267
步驟1：化合物12-1的合成
在室溫下，將1乙醯基呱啶-4-碳醯氯(567mg)加入到化合物M1(300mg)的THF(10mL)中，移至40℃攪拌4小時。待反應完全後，直接濃縮出去THF，得到黃色固體狀目標產物12-1（460mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 512.14 [M+H] +。
步驟2：化合物12-2的合成
在室溫下，將甲醇鈉(224.56mg)加入到化合物12-1(460mg)的toluene (10mL)中，移至110℃回流攪拌8小時。待反應完全後，將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機相經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到白色固體狀目標產物12-2（210mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 494.06 [M+H] +。
步驟3：化合物12-3的合成
在室溫下，將化合物12-2（170mg）加到DMF(5mL)中，接著加入2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(92mg)、BOP(376mg)、DBU(258mg)，40度反應6h。反應到後期原料剩30%不再進行，向反應物中加入水，用乙酸乙酯萃取，有機相經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(展開劑為DCM/MeOH=15:1)純化,得到黃色固體產物12-3（150mg，62.2%收率）。
ESI-MS m/z: 702.28 [M+H] +。
步驟4：化合物12-4的合成
在氮氣保護下，將三氟乙醇(106mg)加入到化合物12-3(150mg)，Cs 2CO 3(139mg，)的二氧六環(3mL)中，移至100℃反應3 h。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(展開劑為DCM/MeOH=15:1)純化，得到黃色油狀的所要目標產物12-4(120mg，71.9%收率)。
ESI-MS m/z: 782.48 [M+H] +。
步驟5：化合物12-5的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(12mg)加入到化合物12-4(115mg)，K 2CO 3(41mg，)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(22.7mg)的二氧六環(2.5mL)，H 2O(0.5mL)混合溶液中，在70℃攪拌6h。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，剩餘物通過快速矽膠柱色譜（PE:EA=1:2）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物12-5(65mg，65.4 %產率)。
ESI-MS m/z: 682.58 [M+H] +。
步驟6：化合物12-6的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(22mg)加入到化合物12-5(65mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(65mg)，K 3PO 4(40mg)的二氧六環(2mL)，H 2O(0.5mL)溶液中，移至85℃反應反應約4小時。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(PE:EA=2:1)純化，得到呈黃色油狀的所要產物12-6(70mg，89.7 %產率)。
ESI-MS m/z: 818.94 [M+H] +。
步驟7：化合物12-7的合成
在室溫下，將化合物14-6(70mg，85.7μmol)溶於DCM(1mL)和TFA(0.5mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀目標產物12-7（93mg，粗品）。
ESI-MS m/z: 634.32 [M+H] +。
步驟8：化合物12的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(8.4mg，94μmol)的THF溶液加入到化合物14-7(54mg)，THF(2mL)，飽和Na 2CO 3(0.5mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化,得到呈黃色固體狀的所要產物12(25.7mg，43.2 %產率) 。
ESI-MS m/z: 688.49 [M+H] +。
編號 結構與命名
1
Figure 02_image269
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮螺環[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮；ESI-MS m/z: 660.37 [M+H] +
2
Figure 02_image271
1-（7 -（2 -環己基）- 7 -（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮螺環[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮；ESI-MS m/z: 645.44 [M+H] +
3
Figure 02_image273
1 -（7 -（7 -（5 -甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（四氫呋喃-3-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮螺環[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮；ESI-MS m/z: 633.41 [M+H] +
4
Figure 02_image275
1 -（7 -（6 - 乙基-7-（5 -甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮螺環[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮；ESI-MS m/z: 662.37 [M+H] +
5
Figure 02_image277
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（四氫-2H-吡喃-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮螺環[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮；ESI-MS m/z: 647.33 [M+H] +
6
Figure 02_image279
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基吡咯烷-3-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮螺環[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 646.34 [M+H] +
7
Figure 02_image281
1-（7-（2-（1 -乙基呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮螺環[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 674.37 [M+H] +
8
Figure 02_image283
1-（7-（6-氯-8-乙氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 614.40 [M+H] +
9
Figure 02_image285
1-（7-（8-乙氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2 -（1-甲基呱啶-4-基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 606.45 [M+H] +
10
Figure 02_image287
1-（7-（6-氯-8-甲氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2 -（1-甲基呱啶-4-基）-喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 600.35 [M+H] +
11
Figure 02_image289
1-（7-（8-甲氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2 -（1-甲基呱啶-4-基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 592.43 [M+H] +
12
Figure 02_image291
1-（7-（2 -（1-乙醯呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 688.49 [M+H] +
實施例13：化合物13（1-（7-（6-環丙基-8-（2-甲氧基乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基 ）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image293
步驟1：化合物13-1的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf) 2Cl 2DCM(112 mg)加入到碳酸鉀(378 mg), 化合物1-6(1 g )和環丙基硼酸 (124 mg)的甲苯(10 mL)和水(1 mL)的溶液中，100度攪拌3小時，TLC和LCMS顯示反應完畢，冷卻至室溫，乙酸乙酯稀釋，飽和食鹽水洗滌兩次，乾燥，過濾，濃縮得粗產物，柱層析（DCM/MeOH=15:1）得目標產物(530 mg, 60% 產率)。ESI-MS m/z: 668.30 [M+H]+
步驟2：化合物13-2的合成
在氮氣保護下，將Pd 2(dba) 3(9.9 mg)和SPhos(8.8 mg)加入到13-1(72 mg), 5-甲基-1-（四氫-2H-吡喃-2-基）-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基）-1H-吲唑(37 mg)和磷酸鉀(46 mg)的二氧六環(3 mL)和水(0.4 mL)的溶液中，加熱至110度反應2小時，TLC和LCMS顯示反應完畢，冷卻至室溫，濃縮，柱層析(DCM/MeOH=15:1)得產物(38 mg, 45%收率)。ESI-MS m/z: 804.50 [M+H]+
步驟3：化合物13-3的合成
在室溫下，將13-2 (200 mg)溶於DCM(4mL)和TFA(2mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀粗品目標產物13-3(100 mg)。ESI-MS m/z: 620.38 [M+H]+。
步驟4：化合物13的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(22 mg)的THF溶液加入到13-3 (100mg)的THF(4mL)和飽和Na2CO3(1mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化，得到呈黃色固體狀的所要產物13(24.1mg，22%產率)。ESI-MS m/z: 674.40 [M+H]+。
實施例14：化合物14（1-（7-（6-環丙基-8-（2-甲氧基乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基 ）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image295
在氮氣保護下，將乙二醇甲醚(762 mg)加入到1-5(1.35 g)，Cs 2CO 3(1.96 g)的Dioxane(15mL)中，移至100℃反應30 min。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯/甲醇=10:1萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到黃色固體狀的所要目標產物14-1 (1.3 g，粗產物)。ESI-MS m/z: 730.15 [M+H]+
之後按照化合物13的合成步驟合成14-2，14-3和14-4，最終得到目標產物14。 ESI-MS m/z: 650.4 [M+H]+
實施例15：化合物15（1-（7-（6-環丙基-8-（2,2-二氟乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4 –基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image297
步驟1：化合物15-1的合成
在氮氣保護下，將二氟乙醇(201 mg)加入到1-5(550mg)，Cs 2CO 3(531.45mg)的Dioxane(5mL)中，移至100℃反應30 min。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯/甲醇=10:1萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到黃色固體狀的所要目標產物15-1 (550mg，crude)。ESI-MS m/z: 736.30 [M+H]+
之後按照化合物13的合成步驟合成15-2，15-3和15-4，最終得到目標產物15。 ESI-MS m/z: 656.4 [M+H]+
編號 結構與命名
13
Figure 02_image299
1-（7-（6-環丙基-8-（2-甲氧基乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基 ）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 674.40 [M+H]+
14
Figure 02_image301
1-（7-（6-環丙基-8-（2-甲氧基乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基 ）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 650.45 [M+H]+
15
Figure 02_image303
1-（7-（6-環丙基-8-（2,2-二氟乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4 –基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 656.35 [M+H]+
實施例16：化合物16（1-（7-（8-乙氧基-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image305
步驟1：化合物16-1的合成
在氮氣保護下，將乙醇(112 mg)加入到1-5(550mg), Cs 2CO 3(531 mg)的Dioxane(5mL)中，移至100℃反應30 min。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯/甲醇=10:1萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到黃色固體狀的所要目標產物16-1(590mg，crude)。ESI-MS m/z: 700.3 [M+H]+。
步驟2：化合物16-2的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(67 mg)加入到16-1 (粗品590mg)，K 2CO 3(226 mg )，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(126 mg)的dioxane (5.0mL)，H 2O(0.5mL)混合溶液中，在70℃攪拌1h。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化,得到呈黃色固體狀的所要產物16-2 (329mg，66%產率).ESI-MS m/z: 600.6 [M+H]+。
步驟3：化合物16-3的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(116.16mg)加入到16-3 (329mg)，5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(344.04mg)，K 3PO 4(213.38mg)的dioxane(3mL), H 2O(0.75 mL)溶液中，移至85℃反應約3小時。將反應混合物冷卻至室溫，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化,得到呈黃色固體狀的所要產物16-3(244mg，65%產率)。ESI-MS m/z: 736.60 [M+H]+。
步驟4：化合物16-4的合成
在室溫下，將16-3 (100 mg)溶於甲醇，加入鈀碳300 mg，置換氫氣，移至40℃反應過夜。待反應完全後，矽藻土助濾，濾液濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀粗品目標產物16-4（150 mg，crude）。ESI-MS m/z:738.60 [M+H]+。
步驟5：化合物16-5的合成
在室溫下，將16-4 (150 mg, crude)溶於DCM(4mL)和TFA(2mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀粗品目標產物16-5（100 mg，crude）。ESI-MS m/z: 554.60 [M+H]+。
步驟6：化合物16的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(17.03mg)的THF溶液加入到16-5 (100 mg)，THF(4mL)，飽和Na2CO3(1mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯:甲醇=10:1萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化,得到呈黃色固體狀的所要產物16 (21 mg，20%產率) 。ESI-MS m/z: 608.40 [M+H]+。
實施例17-22分別採用環丁醇，異丙醇，二氟乙醇，2-氟乙醇，乙二醇甲醚和環丙甲醇與化合物1-5反應得到相應的產物，然後按照16的合成步驟合成相應的最終產物化合物17-22。
編號 結構與命名
16
Figure 02_image307
1-（7-（8-乙氧基-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 608.46 [M+H]+
17
Figure 02_image309
1-（7-（8-環丁氧基-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 634.51 [M+H]+
18
Figure 02_image311
1-（7-（6-乙基-8-異丙氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 622.52 [M+H]+
19
Figure 02_image313
1-（7-（8-（2,2-二氟乙氧基）-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4 -基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 644.45 [M+H]+
20
Figure 02_image315
1-（7-（6-乙基-8-（2-氟乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基 ）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 626.50 [M+H]+
21
Figure 02_image317
1-（7-（6-乙基-8-（2-甲氧基乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基 ）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 638.53 [M+H]+
22
Figure 02_image319
1-（7-（8-（環丙基甲氧基）-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基）- 2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 633.38 [M+H]+
實施例23：化合物23（1-（7-（6-氯-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉 -4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image321
步驟1：化合物23-1的合成
在室溫下,向2-氨基-4-溴-3-氟苯甲酸(20 g)於DMF (200 mL)中的溶液中添加NCS (13.8 g)且所得混合物在70℃攪拌過夜。反應完全，將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且真空濃縮得褐色固體狀的所要粗品產物(22 g, 98%產率) 。ESI-MS m/z: 267.10 [M+H]+。
步驟2：化合物23-2的合成
在室溫下，將1-1(2.42 g)加入到M1-5 (2.33 g)的THF(20 mL)中，移至40℃攪拌過夜。待反應完全後，加入氨水30 mL，調節溶液PH至11，35度攪拌，檢測直至反應完全，有大量不溶物析出，過濾得不溶物，即粗品23-2（3.5 g，crude）。ESI-MS m/z: 374.2 [M+H]+。
步驟3：化合物23-3的合成
室溫氮氣保護下，在反應瓶中加入化合物23-2(1 g)和2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(725 mg)，加入DMF(10 mL)和DBU(2.44 g)，冰水浴降溫，加入BOP(2.95 g)，升溫至45度反應2小時,檢測反應完畢，冷卻至室溫，乙酸乙酯稀釋，水稀釋，水相乙酸乙酯萃取一次，有機相合併，0.5N鹽酸和Brine（1:1）洗滌3次，aq. NaHCO 3洗滌一次，食鹽水洗滌一次，硫酸鈉乾燥，濃縮得目標產物23-3（1.2 g，粗產物）。
參照化合物13的合成步驟，用三氟乙醇鹼性條件下取代氟原子合成23-4, 23-4用Suzuki偶聯的方法合成23-5, 23-5在三氟乙酸作用下脫掉保護基得到化合物23-6, 23-6在鹼性條件下與丙烯醯氯反應合成目標產物23。
參照化合物23的合成方法完成化合物24和25的合成，24和25分別用環丁醇和二氟乙醇代替三氟乙醇取代氟原子得到相應的產物，之後按照23的步驟合成目標產物24和25。
編號 結構與命名
23
Figure 02_image323
1-（7-（6-氯-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉 -4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 668.26 [M+H]+
24
Figure 02_image325
1-（7-（6-氯-8-環丁氧基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 321.22 [M+2H/2]+
25
Figure 02_image327
1-（7-（6-氯-8-（2,2-二氟乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）喹唑啉-4 -基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 650.67 [M+H]+
實施例26：化合物26（1-（7-（6-乙基-2-（1-（2-甲氧基乙基）呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2， 2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image329
步驟1：化合物26-1的合成
室溫下，將呱啶-4-羧酸(7.000 g) 加入THF (200 mL)和水 (40 mL) 中，加入三乙胺 (16.45 g)，加入(2,5-二氧雜吡咯烷-1-基）2-三甲基甲矽烷基乙基碳酸酯(15.46 g)，室溫攪拌至反應完畢，濃縮掉THF，降溫，1N HCl酸化至PH2-3左右，DCM萃取三次，有機相鹽水洗兩次，乾燥，濃縮得目標產物26-1(16 g, 粗品)。
步驟2：化合物26-2的合成
室溫下，將化合物26-1 (2.73 g) 加入DCM (30 mL)  中，加入2滴DMF, 滴入草醯氯 (3.81 g) ，有氣泡冒出，反應完畢，濃縮得26-2(3 g, 粗產物) ，直接用於下一步。
步驟3：化合物26-3和26-4的合成
在室溫下，將26-2(3 g)加入到M1 (1.8 g)的THF(40 mL)中，移至40℃攪拌過夜，檢測直至反應完全後得26-3，加入氨水30 mL，調節溶液PH至11，40度攪拌，檢測直至反應完全，有大量不溶物析出，過濾得不溶物，即26-4（1.9 g，63%收率）。ESI-MS m/z: 374.2 [M+H]+。
步驟4：化合物26-5的合成
室溫氮氣保護下，在反應瓶中加入化合物26-4(1.22 g)和2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(695 mg)，加入DMF(12 mL)和DBU(1.87 g)，冰水浴降溫，加入BOP(2.2 g)，升溫至45度反應2小時,檢測反應完畢，冷卻至室溫，乙酸乙酯稀釋，水稀釋，水相乙酸乙酯萃取一次，有機相合併，0.5N鹽酸和Brine（1:1）洗滌3次，aq. NaHCO 3洗滌一次，Brine洗滌一次，硫酸鈉乾燥，濃縮得目標產物26-5（1 g，粗產物）。
步驟5：化合物26-6的合成
在氮氣保護下，將三氟乙醇(2.77 g)加入到26-5(2.23 g), Cs 2CO 3(2.7 g)的Dioxane(25 mL)中，移至100℃反應30 min。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到固體狀的所要目標產物26-6(4.6 g，crude)。ESI-MS m/z: 784.30 [M+H]+
步驟6：化合物26-7的合成
在氮氣保護下，將Pd(dppf) 2Cl 2DCM(1.82 g)加入到碳酸鉀( 6.16 g), 化合物26-6(19.7 g)和乙烯基硼酸酯(3.43 g)的二氧六環(200 mL)和水(20 mL)的溶液中,100度攪拌3小時，TLC和LCMS顯示反應完畢，冷卻至室溫，乙酸乙酯稀釋，飽和食鹽水洗滌兩次，乾燥，過濾，濃縮得粗產物，柱層析得(DCM/EA=20:1)目標產物(9.6 g, 55% 產率)。ESI-MS m/z: 895.33 [M+H]+
步驟7：化合物26-8的合成
在氮氣保護下，將Pd(PPh 3) 4(2.94 g)加入到D1-7(10 g), 5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基）吲唑(7.85 g)和磷酸鉀(5.41 g)的二氧六環(100 mL)和水(20 mL)的溶液中，加熱至85度反應4小時，TLC和LCMS顯示反應完畢，冷卻至室溫，乙酸乙酯稀釋，水洗，飽和食鹽水洗滌，乾燥濃縮得粗品，柱層析得黃色泡沫狀固體（10 g，85%收率） 。ESI-MS m/z: 920.40 [M+H]+
步驟8：化合物26-9的合成 在室溫下，將26-8 ( 1 g)溶於甲醇，加入鈀碳（1 g），置換氫氣，移至40℃反應過夜。待反應完全後，矽藻土助濾，濾液濃縮除去溶劑，得到黃色固體狀粗品目標產物26-9（1 g，crude）。ESI-MS m/z: 922.50 [M+H]+。
步驟9：化合物26-10的合成
室溫下，將化合物26-9（1.6 g）溶於THF（10 mL），加入TBAF（4 mL， 1 M in THF），35度攪拌4小時，濃縮，乙酸乙酯稀釋，水洗2次，飽和食鹽水洗滌兩次，硫酸鈉乾燥，濃縮得產品（912 mg， 67%收率）。
步驟10：化合物26-11的合成
室溫下將化合物26-10（100 mg）溶於DMF（5 mL），加入碳酸銫（126  mg），加入2-溴乙基甲基醚（54 mg）室溫攪拌過夜，LCMS監控反應完畢，乙酸乙酯稀釋，水洗一次，飽和食鹽水洗滌兩次，乾燥，濃縮得粗品，製備板（DCM/MeOH=10:1）製備得26-11（37 mg，34%收率）ESI-MS m/z: 836.46 [M+H]+
步驟11：化合物26-12的合成
在室溫下，將26-11 (37 mg)溶於DCM(2 mL)和TFA(1 mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得粗品目標產物26-12。ESI-MS m/z: 652.40 [M+H]+。
步驟12：化合物26的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(4 mg)的THF溶液加入到26-12 (29 mg， 粗品)的THF(2mL)和飽和Na 2CO 3(0.5mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化,得到所要產物26 (3.1 mg，6%產率)。ESI-MS m/z: 706.45 [M+H]+。
實施例27：化合物27（1-（7-（6-乙基-2-（1-（2-羥基-2-甲基丙基）呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（ 2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image331
步驟1：化合物27-11的合成
將化合物27-10（100 mg， 0.13 mmol）溶於乙醇（2 mL），加入甲基環氧丙烷（93 mg，）和三乙胺（40 mg），100度微波反應0.5小時，LCMS檢測反應完畢，直接濃縮得粗品27-11。
參照實施例26的合成方法在三氟乙酸作用下脫去保護基，然後鹼性條件下與丙烯醯氯反應得目標產物27（8.8 mg）。ESI-MS m/z: 720.35 [M+H]+
實施例28：化合物28（1-（7-（6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（氧雜環丁-3-基）呱啶-4-基）-8-（2， 2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image333
步驟1：化合物28-11的合成
將化合物26-10（165 mg）溶於1，2-二氯乙烷（10 mL），加入3-氧雜環丁酮（76.4 mg， ）和醋酸硼氫化鈉（225 mg），室溫35度攪拌過夜，反應完畢，乙酸乙酯稀釋，水洗，飽和食鹽水洗滌，乾燥濃縮得粗品。
參照實施例26的合成步驟在三氟乙酸作用下脫去保護基，然後鹼性條件下與丙烯醯氯反應得目標產物28（13.5 mg）。ESI-MS m/z: 704.50 [M+H]+
編號 結構與命名
26
Figure 02_image335
1-（7-（6-乙基-2-（1-（2-甲氧基乙基）呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2， 2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 706.87 [M+H]+
27
Figure 02_image337
1-（7-（6-乙基-2-（1-（2-羥基-2-甲基丙基）呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（ 2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 720.41 [M+H]+
28
Figure 02_image339
1-（7-（6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（氧雜環丁-3-基）呱啶-4-基）-8-（2， 2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 704.38 [M+H]+
實施例29：化合物29（1-（7-（6-乙基-2-（1-（2-羥基-2-甲基丙基）氮雜環丁烷-3-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（ 2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成。
Figure 02_image341
參照實施例26和27的合成步驟。
化合物29-1操作參考化合物26-1的合成操作，將3-吖丁啶羧酸的氮原子進行保護。化合物29-2操作參考化合物26-2的合成操作，將化合物26-2的羧酸轉變成醯氯，然後與化合物M1反應得到化合物29-3，化合物29-3不經過處理直接加入氨水調節pH至11關環合成化合物29-4。化合物29-4在DBU和BOP作用下引入螺環合成化合物29-5，然後用三氟乙醇取代其氟原子得到化合物29-6，化合物29-6進行兩次Suzuki偶聯反應合成化合物29-8，之後雙鍵還原，脫掉氮原子的保護基得到共用中間體29-10。化合物29-10參考27-11的合成步驟，在三乙胺和乙醇體系中與甲基環氧丙烷微波反應即可得到化合物29-11,之後三氟乙酸脫保護得到化合物29-12，在鹼性條件下與丙烯醯氯反應得到化合物29。
實施例30：化合物30（3-（3-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺并[3.5]壬南-7-基）-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8- （2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-2-基）氮雜環丁烷-1-基）丙腈）的合成
Figure 02_image343
步驟1；化合物30-11合成
將化合物29-10（50 mg）溶於乙醇（3 mL），加入丙烯腈（34 mg）和三乙胺（7mg），室溫35度反應4小時，濃縮，乙酸乙酯稀釋，水洗，飽和3食鹽水洗滌，乾燥濃縮，製備板（DCM/MeOH=20:1）純化得產物（26 mg）。ESI-MS m/z: 830.20 [M+H]+
之後參照實施例26的合成方法在三氟乙酸條件下脫掉保護基，鹼性條件下引入丙烯醯基，得到化合物30。
實施例31，33，34,  35和37參考實施例28的方法合成，共用中間體29-10分別與氧雜環丁酮，四氫吡喃酮，環丁酮，環戊酮和乙醛在還原胺化的條件下反應製備相應的目標化合物，然後分別進行脫保護和引入丙烯醯基最終得到目標化合物31，33，34,  35和37。
實施例32的合成操作參照實施例30的合成操作，採用1，4-加成的方法，甲基乙烯碸與共用中間體29-10反應得到相應產物，然後脫保護和引入丙烯醯基最終得到目標化合物實施例32。
實施例36的合成步驟是：用共用中間體29-10與環丙基甲醯氯在二氯甲烷和碳酸氫鈉水溶液體系中反應得到相應化合物，然後脫保護和引入丙烯醯基最終得到目標化合物實施例36。
編號 結構與命名
29
Figure 02_image345
1-（7-（6-乙基-2-（1-（2-羥基-2-甲基丙基）氮雜環丁烷-3-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（ 2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 692.37 [M+H]+
30
Figure 02_image347
3-（3-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺并[3.5]壬南-7-基）-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8- （2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-2-基）氮雜環丁烷-1-基）丙腈;ESI-MS m/z: 673.35 [M+H]+
31
Figure 02_image349
1-（7-（6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（氧雜環丁-3-基）氮雜環丁烷-3-基）-8-（2， 2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 338.84 [M+2H/2]+
32
Figure 02_image351
1-（7-（6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（2-（甲基磺醯基）乙基）氮雜環丁烷-3-基）-8-（2 ，2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮; ESI-MS m/z: 726.78 [M+H]+
33
Figure 02_image353
1-（7-（6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（四氫-2H-吡喃-4-基）氮雜環丁烷-3-基）-8 -（2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 352.89 [M+2H/2]+
34
Figure 02_image355
1-（7-（2-（1-環丁基氮雜環丁烷-3-基）-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 337.86 [M+2H/2]+
35
Figure 02_image357
1-（7-（2-（1-環戊基氮雜環丁烷-3-基）-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉 -4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 344.89 [M+2H/2]+
36
Figure 02_image359
1-（7-（2-（1-（環丙烷羰基）氮雜環丁烷-3-基）-6-乙基-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2- 三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 688.39 [M+H]+
37
Figure 02_image361
1-（7-（6-乙基-2-（1-乙基氮雜環丁烷-3-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）喹唑啉 -4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 325.09 [M+2H/2]+
實施例38：化合物38（1-（7-（8-（2-羥基-2-甲基丙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-6-乙烯基喹唑啉- 4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image363
實施例38的合成操作參考實施例16的操作，用2-甲基-1,2-丙二醇與共用中間體1-5反應得到化合物38-1，之後按照實施例16進行兩次偶聯反應，脫保護和上丙烯醯基步驟完成38的合成。
實施例39和40分別用二氟乙醇和1-(羥基甲基)環丙烷甲腈與共用中間體1-5反應得到相應的目標化合物，之後按照實施例16的步驟進行最終產物39和40的合成
編號 結構與命名
38
Figure 02_image365
1-（7-（8-（2-羥基-2-甲基丙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-6-乙烯基喹唑啉- 4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 650.50 [M+H]+
39
Figure 02_image367
1-（7-（8-（2,2-二氟乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-6-乙烯基喹唑啉-4- 基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 642.36 [M+H]+
40
Figure 02_image369
1-（（（（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬南-7-基] -7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶- 4-基）-6-乙烯基喹唑啉-8-基）氧基）甲基）環丙烷-1-甲腈;ESI-MS m/z: 657.50 [M+H]+
實施例41：化合物41（1-（6-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉- 4-基）-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image371
步驟1：化合物41-1的合成
在室溫下，將DIEA(480 mg)加入到1-4(600mg)，2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(245 mg)的二氧六環溶液（10 mL)中，室溫40度攪拌。將混合物傾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，粗產物通過快速矽膠柱色譜（DCM:MeOH=10:1）純化，得到黃色固體狀的所要目標產物41-1 (680mg，85 %產率)。
之後參照實施例16的合成步驟完成目標產物41的合成。
實施例42、43和44的合成，參考41-1的合成分別用2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯、(S)-4-N-叔丁氧羰基-2-甲基呱嗪和叔丁基（S）-2-（氰基甲基）呱嗪-1-羧酸鹽與共用中間體1-4反應得到相應的化合物，之後參考25的合成步驟完成目標產物42、43和44的合成。
編號 結構與命名
41
Figure 02_image373
1-（6-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉- 4-基）-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 632.36 [M+H]+
42
Figure 02_image375
1-（2-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉- 4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 660.50 [M+H]+
43
Figure 02_image377
1-（（3S）-3-甲基-4-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2 -三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）呱嗪-1-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 634.45 [M+H]+
44
Figure 02_image379
2-（（2S）-1-丙烯醯-4-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）呱嗪-2-基）乙腈；ESI-MS m/z: 659.20 [M+H]+
實施例45：化合物45（1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（2-（甲基磺醯基）乙基）呱啶-4-基）-8-（2,2,2 -三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image381
步驟1:化合物45-1的合成
室溫下，將化合物26-8（340 mg）溶於THF（5 mL），加入TBAF（2 mL， 1 M in THF），35度攪拌過夜，濃縮，乙酸乙酯稀釋，水洗2次，飽和食鹽水洗滌兩次，硫酸鈉乾燥，濃縮得產品（311 mg， 粗產品）。
步驟2：化合物45-2的合成
室溫下將化合物45-1（50 mg）溶於乙醇（3 mL），加入甲基乙烯碸（68 mg），室溫攪拌過夜，LCMS監控反應完畢，濃縮，乙酸乙酯稀釋，水洗一次，飽和食鹽水洗滌兩次，乾燥，濃縮得粗品，製備板（DCM/MeOH=20:1）製備得45-2（32 mg， 36% 收率）。ESI-MS m/z: 882.46 [M+H]+
步驟3：化合物45-3的合成
在室溫下，將45-2 (32 mg)溶於DCM(2 mL)和TFA(1 mL)的混合溶劑中，移至40℃反應約1h。待反應完全後，直接濃縮除去溶劑，得粗品目標產物45-3。ESI-MS m/z: 698.40 [M+H]+。
步驟4：化合物45的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(4 mg)的THF溶液加入到45-3 (25 mg 粗品)的THF(2mL)和飽和Na 2CO 3(0.5mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮物通過pre-TLC(DCM/MeOH=10:1)純化,得到所要產物45 (6.6 mg，24%產率)。ESI-MS m/z: 752.45 [M+H]+。
實施例51：化合物51（1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4- 基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image383
步驟1: 化合物51-1的合成
將化合物26-8（100 mg）溶於二氯甲烷（2 mL），加入鹽酸二氧六環溶液（0.5 mL， 4 N in dioxane），反應液濃縮得粗品（50 mg），直接用於下一步。
步驟2：化合物51-2的合成
在氮氣保護下，冰水浴中，將丙烯醯氯(6 mg)的THF溶液加入到51-1 (50 mg， 粗品)的THF(2mL)和飽和Na 2CO 3(1 mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮得粗品（30 mg）。
步驟3：化合物51的合成
將化合物51-2（30 mg）溶於二氯甲烷（1 mL），加入TFA（1 mL），室溫攪拌2小時，反應完畢，濃縮，製備板製備（DCM/MeOH=10：1）得目標產物（2.6 mg，11%收率）。
實施例47參考實施例1的步驟進行合成，用丙烯腈與共用中間體45-1反應即可得相應的目標產物，然後進行脫保護和引入丙烯醯基最終得到目標化合物47。
實施例46，53，54，55，56，57，59，60，61，62，65，66，67，68，70和71參考實施例28採用還原胺化的方法，用不同的酮或者醛與共用中間體45-1反應得到相應的產物，之後再脫保護和引入乙醯基合成最終目標產物；實施例48參考實施例27，用共用中間體45-1與甲基環氧丙烷反應生成對應的產物，然後脫保護和引入丙烯醯基最終得到目標化合物48；實施例49，58，63，64，69採用烷基化的策略與共用中間體45-1反應生成對應的產物，然後脫保護和引入丙烯醯基最終得到最終目標產物。對應的合成中間體如下表:
編號 中間體
45
Figure 02_image385
46
Figure 02_image387
47
Figure 02_image389
48
Figure 02_image391
49
Figure 02_image393
50
Figure 02_image395
51 /
52
Figure 02_image397
53
Figure 02_image399
54
Figure 02_image401
55
Figure 02_image403
56
Figure 02_image405
57
Figure 02_image407
58
Figure 02_image409
59
Figure 02_image411
60
Figure 02_image413
61
Figure 02_image415
62
Figure 02_image417
63
Figure 02_image419
64
Figure 02_image421
65
Figure 02_image423
66
Figure 02_image425
67
Figure 02_image427
68
Figure 02_image429
69
Figure 02_image431
70
Figure 02_image433
71
Figure 02_image435
編號 結構與命名
45
Figure 02_image437
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（2-（甲基磺醯基）乙基）呱啶-4-基）-8-（2,2,2 -三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 752.79 [M+H]+
46
Figure 02_image439
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（四氫-2H-吡喃-4-基）呱啶-4-基）-8-（2， 2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 730.82 [M+H]+
47
Figure 02_image441
3-（4-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬南-7-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2 ，2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-2-基）呱啶-1-基）丙腈;ESI-MS m/z: 699.77 [M+H]+ 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.01 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.31 (m, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.16 – 6.02 (m, 2H), 5.72 (m, 2H), 5.11 (m, 1H), 4.98 (m, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.77 (s, 6H), 3.01 (m, 2H), 2.76 – 2.64 (m, 3H), 2.60 (m, 2H), 2.14 (m, 2H), 2.07 – 1.93 (m, 9H), 1.84 (m, 2H).
48
Figure 02_image443
1-（7-（2-（1-（2-（2-羥基-2-甲基丙基））呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2， 2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮; ESI-MS m/z: 718.40 [M+H]+
49
Figure 02_image445
1-（7-（2-（1-（2-（羥乙基））呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基） -6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 690.36 [M+H]+
50
Figure 02_image447
甲基4-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-7-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2 -三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-2-基）呱啶-1-甲酸;ESI-MS m/z: 704.73 [M+H]+
51
Figure 02_image449
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4- 基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 646.36 [M+H]+
52
Figure 02_image451
1-（4-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬南-7-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2 ，2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-2-基）呱啶-1-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 700.80 [M+H]+
53
Figure 02_image453
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（氧雜環丁-3-基）呱啶-4-基）-8-（2,2,2- 三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 702.47 [M+H]+
54
Figure 02_image455
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1'-甲基-[1,4'-聯呱啶] -4-基）-8-（2,2 ，2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 743.89 [M+H]+
55
Figure 02_image457
4-（4-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬南-7-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2 ，2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-2-基）呱啶-1-基）環己烷-1-甲腈;ESI-MS m/z: 753.90 [M+H]+
56
Figure 02_image459
1-（7-（2-（1-（1-（1-羥基丙烷-2-基）呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2， 2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 704.34 [M+H]+ 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.02 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.33 (m, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.17 – 6.03 (m, 2H), 5.73 (m, 2H), 5.12 (m, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.77 (s, 8H), 2.89 (m, 2H), 2.26 – 1.81 (m, 15H), 1.07 (m, 3H).
57
Figure 02_image461
1-（7-（2-（1-環丁基呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉- 4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 700.36 [M+H]+ 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.03 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.33 (m, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.17 – 6.07 (m, 2H), 5.73 (m, 2H), 5.12 (m, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.75 – 4.54 (m, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.77 (s, 6H), 2.81 (m, 3H), 2.41 – 1.82 (m, 17H), 1.64 (m, 3H).
58
Figure 02_image463
1-（4-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-7-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2 ，2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-2-基）呱啶-1-基）-3,3-二甲基丁烷-2-酮;ESI-MS m/z: 744.43 [M+H]+ 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.01 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.55 – 7.48 (m, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.17 – 6.05 (m, 2H), 5.81 – 5.65 (m, 2H), 5.11 (m, 1H), 4.98 (m, 1H), 4.68 (m, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.77 (m, 6H), 2.89 (m, 2H), 2.73 (s, 1H), 2.08 – 1.78 (m, 13H), 1.16 – 1.04 (m, 11H).
59
Figure 02_image465
1-（7-（2-（1-異丙基呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉- 4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 688.50 [M+H]+
60
Figure 02_image467
1-（7-（2-（1'-乙醯基-[1,4'-雙呱啶] -4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2 ，2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 801.59 [M+H]+
61
Figure 02_image469
1-（7-（2-（1-（4-（羥基羥己基））呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基） -6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 744.54 [M+H]+
62
Figure 02_image471
1-（7-（2-（1'-環丙基-[1,4'-雙呱啶] -4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2 ，2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 769.62 [M+H]+
63
Figure 02_image473
1-（7-（2-（1-（2-（氟乙基））呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基） -6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 692.48 [M+H]+
64
Figure 02_image475
1-（7-（2-（1-（（（3,3-二氟環丁基）甲基）呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2 ，2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 750.77[M+H]+
65
Figure 02_image477
1-（7-（2-（1-苄基呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉- 4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 736.48 [M+H]+
66
Figure 02_image479
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（（（1-甲基-1H-吡唑-4-基）甲基）呱啶-4-基]- 8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮; ESI-MS m/z: 740.40 [M+H]+
67
Figure 02_image481
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（四氫呋喃-3-基）呱啶-4-基）-8-（2,2,2- 三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 715.41 [M+H]+ 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.01 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.32 (m, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.19 – 6.02 (m, 2H), 5.87 – 5.61 (m, 2H), 5.11 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.74 – 4.53 (m, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.85 – 3.73 (m, 8H), 3.65 (m, 1H),3.15-2.70 (m, 4H) 2.20 – 1.72 (m, 16H).
68
Figure 02_image483
1-（7-（2-（1-（3-（羥基環丁基））呱啶-4-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基） -6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 716.77 [M+H]+
69
Figure 02_image485
1-    乙基2-（4-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬南-7-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2， 2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-2-基呱啶-1-基乙酸酯;ESI-MS m/z: 732.81 [M+H]+ 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.03 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.32 (m, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.19 – 6.05 (m, 2H), 5.82 – 5.64 (m, 2H), 5.11 (m, 1H), 4.98 (m, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.19 – 3.99 (m, 4H), 3.74 (m, 6H), 3.34 (s, 2H), 2.94 (m 2H), 2.71 (m, 1H), 2.32 (m, 2H), 2.08 –1.75 (m, 11H), 1.21 (m, 3H).
70
Figure 02_image487
乙基4-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-7-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8-（2,2,2 -三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-2-基）-[1,4'-聯呱啶] -1'-羧酸鹽;ESI-MS m/z: 801.59 [M+H]+
71
Figure 02_image489
1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-（8-甲基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛丹-3-基]呱啶-4- 基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮; ESI-MS m/z: 769.41 [M+H]+
實施例72：化合物72（2-氟-1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）- 6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image491
將化合物2-8（120 mg）溶於DMF（5 mL），加入2-氟丙烯酸（54 mg），HATU（226 mmol），DIEA（77 mg），攪拌2小時，反應完畢，乙酸乙酯稀釋，飽和食鹽水洗滌三次，乾燥濃縮得粗品，製備板製備（DCM/MeOH=10/1）得目標產物（3 mg）。
實施例75: 化合物75（（E）-1-（7-（6-氯-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2 -三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）-4-（二甲基氨基）丁-2-烯-1-酮）的合成
Figure 02_image493
在氮氣保護下，冰水浴中，將新鮮製備的反式-4-二甲基胺基巴豆醯氯鹽酸鹽（12 mg）的THF溶液加入到23-6 (100 mg， 粗品)的THF(2mL)和飽和Na 2CO 3(1 mL)溶液中，加入即反應完全。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，濃縮得粗品，粗品製備板製備（DCM/MeOH=10：1）（6 mg， 5%收率）.
實施例73合成參考50的合成步驟，不同點是用二氟乙醇替代三氟乙醇。
實施例74合成參考72的合成步驟。
編號 結構與命名
72
Figure 02_image495
2-氟-1-（7-（7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2-三氟乙氧基）- 6-乙烯基喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）丙-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 678.43 [M+H]+
73
Figure 02_image497
甲基4-（4-（2-丙烯醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-7-基）-8-（2,2-二氟乙氧基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基 ）-6-乙烯基喹唑啉-2-基）呱啶-1-甲酸;ESI-MS m/z: 686.50 [M+H]+
74
Figure 02_image499
3-（4-（4-（2-（2-氟丙烯醯基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬南-7-基）-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-8- （2,2,2-三氟乙氧基）-6-乙烯基喹唑啉-2-基）呱啶-1-基）丙腈;ESI-MS m/z: 717.75 [M+H]+
75
Figure 02_image501
（E）-1-（7-（6-氯-7-（5-甲基-1H-吲唑-4-基）-2-（1-甲基呱啶-4-基）-8-（2,2,2 -三氟乙氧基）喹唑啉-4-基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬基-2-基）-4-（二甲基氨基）丁-2-烯-1-酮;ESI-MS m/z: 725.32 [M+H]+
參照實施例1A，採用基本相同的方法對實施例2~75化合物進行了拆分，分別獲得了對應的手性異構體2a~75a。例如，化合物9a結構式為
Figure 02_image197
；化合物47a結構式為
Figure 02_image199
。
對比化合物1（D1）的合成
AMG510（D1）合成參考WO2018217651A1。
Figure 02_image504
D1。
對比化合物2（D2）的合成
D2合成參考WO2018143315A1。
Figure 02_image506
D2。
藥理實驗
實施例A：細胞增殖抑制實驗
將CALU-1細胞按1000細胞、190μL/孔鋪96孔超低吸附板。培養隔夜後，配製梯度濃度的化合物溶液，分別向各孔細胞中加入10μL各濃度的待測化合物DMSO溶液，化合物終濃度為30000、10000、3333.3、1111.1、370.4、123.5、41.2、13.7、4.6、0nM（DMSO終濃度均為0.25%）。37℃，5% CO 2培養120小時。向各孔中加入60μL Cell-titer Glo工作液，震盪混勻後室溫培養10分鐘，多功能酶標儀讀取Luminescence發光值，將發光值讀數轉換為抑制百分數： 抑制百分數=（最大值-讀數）/（最大值-最小值）* 100。 “最大值”為DMSO對照；“最小值”表示無細胞對照組。
用Graphpad Prism軟體進行曲線擬合併得到IC 50值。
實施例化合物對CALU-1細胞具有良好的抑制活性，特別是Y取代基選自
Figure 02_image508
或
Figure 02_image510
時，相對於其他通過環上C原子與喹唑啉環直連相連的環結構分子具有更優活性。實施例合物對CALU-1細胞抑制的IC 50資料參見表2。
[表2]
化合物名稱 IC 50（nM）
化合物1 2.7
化合物2 776.1
化合物3 277.6
化合物4 2.9
化合物5 45.7
化合物6 4.6
實施例B：細胞增殖抑制實驗
將MIA-PACA-2細胞按600細胞、160μL/孔鋪96孔超低吸附板。培養隔夜後，配製梯度濃度的化合物溶液，分別向各孔細胞中加入40μL各濃度的待測化合物DMSO溶液，化合物終濃度為10000、2000、400、80、16、3.2、0.64、0.12、 0.025、0nM（DMSO終濃度均為0.25%）。37℃，5% CO 2培養96h。向各孔中加入50μL Cell-titer Glo工作液，震盪混勻後室溫培養10min，多功能酶標儀讀取Luminescence發光值，將發光值讀數轉換為抑制百分數： 抑制百分數=（最大值-讀數）/（最大值-最小值）* 100。 “最大值”為DMSO對照；“最小值”表示無細胞對照組。
用Graphpad Prism軟體進行曲線擬合併得到IC 50值。 實施例部分化合物對MIA-PACA-2細胞抑制的IC 50資料參見表3。
實施例C：細胞增殖抑制實驗
將H358細胞按2000細胞、190μL/孔鋪96孔超低吸附板。培養隔夜後，配製梯度濃度的化合物溶液，分別向各孔細胞中加入10μL各濃度的待測化合物DMSO溶液，化合物終濃度為10000、3333.3、1111.1、370.4、123.5、41.2、13.7、4.6、 1.5、0nM（DMSO終濃度均為0.25%）。37℃，5% CO 2培養96h。向各孔中加入50μL Cell-titer Glo工作液，震盪混勻後室溫培養10min，多功能酶標儀讀取Luminescence發光值，將發光值讀數轉換為抑制百分數： 抑制百分數=（最大值-讀數）/（最大值-最小值）* 100。 “最大值”為DMSO對照；“最小值”表示無細胞對照組。
用Graphpad Prism軟體進行曲線擬合併得到IC 50值。
實施例部分化合物對H358細胞抑制的IC 50資料參見表3。
[表3]
化合物名稱 IC 50（nM） 化合物名稱 IC 50（nM）
MIA-PACA-2 H358 MIA-PACA-2 H358
7 2.1 3.7 51 406 187
8 25 / 52 57.1 16.6
9 4.8 4.7 53 8.9 4.4
10 107.3 76.2 54 8.5 11.5
11 22 26.3 55 6.9 4.6
12 40.6 6.4 56 2.4 1.6
13 4.8 3.2 57 3.7 3.4
14 21.0 49.6 58 13.7 15.5
15 14.5 17.7 59 8.3 7.4
16 32.6 13.0 60 5.9 5.2
17 68.2 24.9 61 24.1 24.3
18 388 392 62 10.3 6.7
19 61.4 44.7 63 3.6 2.6
20 455 1083 6+4 21.4 19.3
21 170.9 60.5 65 33.7 37.6
22 91.9 20.4 66 62.8 27.2
23 16.7 17.9 67 3.5 2.7
24 42.9 69.7 68 46.1 14.9
25 36.9 39 69 88.0 89.7
26 10.9 9.6 70 12.5 7.6
27 10.1 10.6 71 136 159
28 23.4 18.4 72 60.3 16.5
29 74.2 59.3 73 91.7 124
30 78.0 97.8 74 208 85.8
31 47.7 39.0 75 2188 1939
32 988 881 1a ＜1 ＜1
33 29.6 19.6 1b 485 513
34 378 315         
35 169 155         
36 778 466         
37 34 37         
38 47.7 39.0         
39 9.8 11.5         
40 9.8 11.5         
41 278 243         
42 188 462         
43 114 104         
44 525 /         
45 6.8 7.3         
46 2.6 4.4         
47 6.9 6.4         
48 4.0 4.1         
49 8.0 4.9         
50 43.5 29.3         
實施例D：異構體活性
使用色譜條件：CHIRALCEL OD（2.5 cm I.D. ×25 cm L, 10μm），UV 254 nm，流動相Hexane/IPA/DEA=70/30/0.1(V/V/V)，流速20 ml/min，將化合物進行拆分，然後採用實施例B和實施例C方法測定異構體活性。
結果表明，本發明通式(I)所示手性化合物的代表性異構體活性優於其對應軸手性異構體，活性差異大於100倍。
[表4]
化合物 活性比值
MIA-PACA-2 H358
1a/1b ＞500倍 ＞500倍
9a/9b ＞100倍 ＞100倍
47a/47b ＞100倍 ＞100倍
[表5]
Figure 02_image243
1a
Figure 02_image245
1b
Figure 02_image197
9a
Figure 02_image513
9b
Figure 02_image199
47a
Figure 02_image515
47b
實施例E：人胰腺癌MIA PaCa-2 CDX腫瘤模型上的體內藥效學研究
用經典的小鼠腫瘤模型試驗，觀察灌胃給藥後，目標化合物抑瘤率TGI（%），以評價其抗腫瘤活性。
實驗方法：人胰腺癌MIA PaCa-2細胞體外單層培養，培養條件為DMEM/F12培養基中加10％胎牛血清，1%雙抗，37℃ 5%CO 2孵箱培養。一周兩次進行常規處理傳代。當細胞飽和度為80%-90%，數量到達要求時，收取細胞，計數，接種。將 0.2 mL（5×10 6個）MIA PaCa-2細胞（加基質膠，體積比為1:1）皮下接種於每只小鼠的右後背，腫瘤平均體積達到約149 mm 3時開始分組給藥。
實驗結果：目標化合物1a和AMG510均可有效降低腫瘤TGI，與溶劑對照組有顯著差異（圖4）。目標化合物1a處理小鼠體重變化情況更優，顯示出更好安全性潛力（圖5）。
實施例F：人非小細胞肺癌PDX腫瘤模型的體內藥效學研究
用經典的小鼠腫瘤模型試驗，觀察灌胃給藥後，目標化合物抑瘤率TGI（%），以評價其抗腫瘤活性。
實驗方法：人源肺癌LU-01-0030 PDX模型的建立最初來源於外科手術切除的G12C突變陽性患者臨床樣本，在植入裸鼠體內後被定義為P0代。將P0代的腫瘤組織植入下一代被稱為P1代。以此類推持續在裸鼠體內植入。其中FP3的腫瘤是通過P2代重新復蘇得到的。由FP3代產生的下一代被定為FP4，以此類推。FP5代的腫瘤組織皮下接種於每只小鼠的右上肢，腫瘤平均體積達到約141 mm3時開始分組給藥。
實驗結果：人非小細胞肺癌LU-01-0030 PDX模型上，給予10 mg/kg AMG 510觀察到微弱抑瘤效果，TGI為3.3%； 給予3 mg/kg、10 mg/kg或30 mg/kg 的目標化合物1a, TGI%分別為32%、28%和52%，效果優於AMG 510（圖6）。化合物1a顯示出良好耐藥性。
實施例G：hERG測試
1穩轉細胞準備
細胞株來源於過表達hERG 鉀離子通道HEK293 細胞，細胞在37°C、5 % CO2 培養箱中培養。當細胞密度達培養皿80 %時，先用磷酸鹽緩衝液（PBS）預清洗，然後用胰蛋白酶/ EDTA 消化細胞2-3 分鐘，加入細胞培養基停止消化，輕輕用移液管吹打並轉移到離心管中，1000 轉/ 分鐘離心3 分鐘，上清液倒掉，加入細胞培養基，輕輕吹打將細胞混勻，隨後轉移到培養皿中進行傳代培養，或將細胞滴於圓形玻片上在細胞培養液中培養待細胞貼壁用於實驗。
細胞培養基組成：DMEM、15 %胎牛血清和1 % 100x 青黴素-鏈黴素。
2溶液配製
細胞內液和外液的組成成分見表4。
[表6]
Figure 02_image517
3電生理手動膜片鉗系統實驗方案
將穩轉的細胞滴於圓形玻片上並置於培養皿中，細胞密度低於50%，培養過夜。將實驗用細胞轉移到一個嵌於倒置顯微鏡平臺的細胞浴槽中，灌流細胞外液，灌流速度為2.7ml/分鐘。穩定5 分鐘後即可開始實驗。採用HEKA EPC-10 膜片鉗放大器和PATCHMASTER 採集系統記錄膜電流（HEKA Instruments Inc., D - 67466 Lambrecht， Pfalz，Germany）。所有實驗均在室溫（22 -24°C）下完成。實驗中使用P-97 微電極拉制儀（Sutter Instrument Company，One Digital Drive，Novato，CA 94949）拉直電極（BF150-110-10）。電極內徑為1-1.5 mm，充滿內液後的入水電阻為2-4 MΩ。
hERG 鉀通道的電生理刺激方案，是首先將膜電壓鉗制在-80 mV，給予細胞持續2 s, +20 mV 電壓刺激，啟動hERG 鉀通道，再複極化至-50 mV, 持續5 s，產生外向尾電流，刺激頻率每15 s 一次。電流值為尾電流的峰值。
實驗中採用全細胞記錄模式記錄通道電流。首先灌流細胞外液（大約每分鐘2 毫升）並持續記錄，並等待電流穩定(5 分鐘內電流衰減（Run-Down）小於5 %)，此時尾電流峰值即為對照電流值。接著灌流含待測藥物的細胞外液並持續記錄直到藥物對hERG 電流的抑制作用到達穩定狀態，此時尾電流峰值即為加藥後電流值。穩定狀態的標準以最近的連續3 個電流記錄線是否重合來判斷。達到穩定態勢以後如果以細胞外液灌流沖洗後hERG 電流回復或接近加藥物之前的大小，則可以繼續灌流測試其它濃度或藥物。30 μM Quinidine（奎尼丁）被用於實驗中作為陽性對照以保證所使用的細胞反應正常。
4化合物準備
用DMSO 稀釋母液至下列濃度（次級母液），分別為： 3.3、1.1、0.37、0.12 mM，取母液和次級母液各30 μl 稀釋至10 ml 細胞外液中，用於電生理檢測； 化合物的終濃度為30, 10, 3.3, 1.1, 0.37 μM； DMSO 的終濃度為3: 1000。
5資料分析
實驗資料使用PATCHMASTER V2X60（HEKA Instruments Inc., D-67466 Lambrecht，Pfalz ，Germany ） 採集， 並採用Origin 8.5 （ OriginLab Corporation ， Northampton ， MA ） 軟體以及Microsoft Excel 進行分析和統計。
通過測量對照組與藥物處理組的電流最大值，計算處理組最大電流值所占對照組最大電流值的比率，評估待測化合物在測試濃度下對hERG鉀離子通道的作用效果（Mean ± SE）。
6質量控制
本研究按照科瑞斯實驗室標準操作規程（近似GLP 規範）執行，同時所有實驗方法均參考同行評議期刊發表的文獻，並按照科瑞斯生物的標準實驗操作規程執行。
報告中的試驗資料需要滿足以下標準： 電生理記錄參數 封接電阻＞ 500 MΩ 直聯電阻(Rs) ＜10 MΩ 初始尾電流幅度＞ 300 pA 電流rundown（自發性減小）＜ 2 %/每分鐘 漏電流＜ 200 pA 或者hERG電流峰值的10%（在90%的記錄時間之內）
7實驗結果：
[表7]
化合物 hERG IC 50（uM）
1a ＞30
D2 8.12
8實驗結論：
藥物對於心臟hERG鉀離子通道的抑制是藥物導致QT延長綜合症的主要原因。化合物1a在測試濃度範圍內對hERG 鉀通道幾乎無阻滯作用（ IC 50＞30 μM）；化合物D2在測試濃度範圍內對hERG 鉀通道有中度的阻滯作用（3 μM＜ 預測IC 50＜ 10 μM），化合物存在一定程度的因為對hERG 的作用而導致的心臟風險。
實施例H：體外CYP酶抑制測試
採用人肝微粒體孵化體系，通過代謝物的生成量來反映各種酶的活性。
實驗方法：稱取適量的待測物標準品，用DMSO稀釋至2 mM，得到工作液；探針底物用純乙腈配製，陽性對照抑制劑用DMSO配製，濃度詳見表8。取待測化合物/陽性對照抑制劑1μL、探針底物1μL、人肝微粒體(20 mg/ mL)1 μL和PBS緩衝液177 μL製備反應混合物(孵化反應待測化合物/陽性對照抑制劑終濃度為10 μM)。上述混合物在37℃預培養5分鐘。向反應混合物加入20 μL NADPH溶液(10 mM，PBS配製)，在37℃條件下CYP2C8、CYP2C9酶孵化10分鐘，CYP2C19酶孵化30分鐘。所有培養樣品設雙樣本。加入200 μL冰冷含內標的乙腈終止反應。在3200 rpm離心15分鐘。上清液轉移至LC-MS/MS分析。通過代謝物的生產量來反映各種酶的活性。採用單點法計算，公式如下： Inhibiton%=100%*(1-Test compound Aear ratio/Control Aear ratio)，實驗結果見表9。
表8
代謝酶 探針底物/濃度 陽性對照/濃度
CYP2C8 Paclitaxel/2 mM Quercertin/2 mM
CYP2C9 Diclofenac/1 mM Sulfaphenazole /2 mM
CYP2C19 S-Mephenytoin/10 mM (+)-N-3-Benzylnirvanol /2 mM
表9  %Inhibition on major CYP isoforms @10 µM
化合物 CYP2C8 Paclitaxel CYP2C9 Diclofenac CYP2C19 S-Mephenytoin
1a 29.05 35.60 34.64
D2 67.36 73.60 50.22
實驗結果：本發明的較佳化合物對於CYP2C8、CYP2C9和CYP2C19酶具有較弱程度的抑制作用，因此在臨床給藥時，藥物代謝性相互作用可能性較低。
雖然本發明已通過其實施方式進行了全面的描述，但是值得注意的是，各種變化和修改對於本領域技術人員都是顯而易見的。這樣的變化和修改都應該包括在本發明所附申請專利範圍的範圍內。
無。
圖1 為實施例1A制得化合物1a的X射線單晶繞射譜圖A。
圖2 為實施例1A制得化合物1a的X射線單晶繞射譜圖B。
圖3 為實施例1A制得化合物1a的絕對構型圖。
圖4 為人胰腺癌MIA PaCa-2 CDX腫瘤模型上的體內藥效學研究A。
圖5 為人胰腺癌MIA PaCa-2 CDX腫瘤模型上的體內藥效學研究B。
圖6 為人肺癌PDX腫瘤模型的體內藥效學研究。

Claims (14)

  1. 一種通式(I)所示之手性化合物、氘代物或藥用鹽，
    Figure 03_image009
    (I) 其中X選自C 3-14環烷基、3-14員雜環基、3-14員雜環基氨基；X任選地進一步被 1-4 個取代基取代，其中每個取代基獨立地選自 C 1-6烷基、氨基、C 1-6氨基烷基、氨基甲醯基、C 1-6氨基甲醯基烷基、羧基、C 1-6羧基烷基、氰基、C 1-6氰基烷基、鹵素、C 1-6鹵代烷基、羥基、C 1-6羥烷基； R 1為丙烯醯基、取代的丙烯醯基或
    Figure 03_image011
    ； R 2選自H、C 2-6烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6烷基、4-10員雜環基取代的 C 1-6烷基、C 1-6烷基磺醯基、C 1-6烷基亞磺醯基、C 1-6烷硫基、C 2-6炔基、C 1-6烷基氨基、氨基、C 1-6氨基烷基、氨基甲醯基、C 1-6氨基甲醯基烷基、C 1-6羧基烷基、氰基、C 1-6氰基烷基、鹵素、C 1-6鹵代烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的5-10員雜芳基、取代或未取代的C 3-7環烷基、取代或未取代的4-10員雜環基、羥基或氧代基; R 3選自H、鹵素、C 1-6烷基、取代的C 1-6烷基、C 2-6烯基、取代的C 2-6烯基、C 3-6環烷基或取代的C 3-6環烷基； R 4或R 5獨立地選自H、鹵素、C 1-6烷基、取代的C 1-6烷基、C 3-6環烷基、取代的C 3-6環烷基； R 6選自羥基、氧代基、C 1-6烷氧基、C 3-10環烷基氧基、氰基取代的環丙基C 1-6亞烷基氧基，所述C 1-6烷氧基任選地進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、C 1-6烷氧基、C 3-8環烷基的取代基所取代； m或n獨立地選自0、1、2、3、4； Y選自3-14員雜環基，所述雜環基通過環上C原子與喹唑啉環直連相連，所述雜環基任選地進一步被1-4個選自R 7或R 8的取代基所取代；R 7或R 8獨立地選自H、=O、=S、氰基、鹵素、硝基、C 1-6烷基、-C 0-6亞烷基-OR a、 -C 0-6亞烷基-OC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aS(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aS(O) 2R a、-C 0-6亞烷基-S(=O)R a、-C 0-6亞烷基-S(=O) 2R a、-C 0-6亞烷基-SR a、-C 0-6亞烷基-S(R a) 5、-C 0-6亞烷基-C(=O)R a、-C 0-6亞烷基-C(=O)OR a、-C 0-3亞烷基-C(=O)N（R a） 2、C 2-6烯基、C 2-6炔基、丙烯醯基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)，所述C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)任選地還可被1個或多個R a所取代；每個R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、氨基、氧代基、硝基、氰基、羧基、C 1-6烷基、C 1-6羥基烷基、C 1-6氨基烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6雜烷基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 1-6醯基或
    Figure 03_image013
    。
  2. 如請求項1所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述X選自4-10員雜環基，所述4-10員雜環基任選地進一步被1-4個選自C 1-6烷基、氰基、C 1-6氰基烷基、C 1-6羥基烷基的取代基所取代；較佳為
    Figure 03_image015
    、
    Figure 03_image017
    、
    Figure 03_image019
    、
    Figure 03_image021
    、
    Figure 03_image023
    、
    Figure 03_image025
    、
    Figure 03_image027
    、
    Figure 03_image029
    、
    Figure 03_image031
    、
    Figure 03_image033
    、
    Figure 03_image035
    、
    Figure 03_image037
    、
    Figure 03_image039
    、
    Figure 03_image041
    、
    Figure 03_image043
    、
    Figure 03_image045
    、
    Figure 03_image047
    、
    Figure 03_image049
    、
    Figure 03_image051
    、
    Figure 03_image053
    、
    Figure 03_image055
    、
    Figure 03_image057
    、
    Figure 03_image059
    、
    Figure 03_image061
    、
    Figure 03_image063
    或
    Figure 03_image065
    ；更佳為
    Figure 03_image047
    。
  3. 如請求項1或2所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述R 1選自
    Figure 03_image067
    、
    Figure 03_image069
    、
    Figure 03_image071
    、
    Figure 03_image073
    、
    Figure 03_image075
    、
    Figure 03_image077
    、
    Figure 03_image079
    、
    Figure 03_image081
    、
    Figure 03_image083
    、
    Figure 03_image085
    、
    Figure 03_image087
    或
    Figure 03_image089
    ；較佳為
    Figure 03_image067
    。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述R 2選自H、鹵素或C 1-3烷基；較佳為H。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述R 3選自H、C 1-6烷基、取代的C 1-6烷基、C 2-6烯基、取代的C 2-6烯基、C 3-6環烷基或取代的C 3-6環烷基；較佳C 1-3烷基、C 3-6環烷基或C 2-4烯基；更佳為乙基、乙烯基或環丙基。
  6. 如請求項1至5中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述R 4或所述R 5選自H、鹵素或C 1-6烷基；較佳所述R 4為H且所述R 5為甲基。
  7. 如請求項1至6中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述R 6選自C 1-6烷氧基、C 3-8環烷基氧基、氰基取代的環丙基C 1-6亞烷基氧基，所述C 1-6烷氧基任選地進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、甲氧基、C 3-8環烷基的取代基所取代；較佳所述R 6選自
    Figure 03_image091
    、
    Figure 03_image093
    、
    Figure 03_image095
    、
    Figure 03_image097
    、
    Figure 03_image099
    、
    Figure 03_image101
    、
    Figure 03_image103
    、
    Figure 03_image105
    、
    Figure 03_image107
    、
    Figure 03_image109
    或
    Figure 03_image111
    。
  8. 如請求項1至7中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述Y選自
    Figure 03_image113
    、
    Figure 03_image115
    、
    Figure 03_image117
    、
    Figure 03_image119
    或
    Figure 03_image121
    ；較佳為
    Figure 03_image119
    或
    Figure 03_image121
    ；更佳為
    Figure 03_image119
    。
  9. 如請求項1至8中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述R 7選自H、氰基、鹵素、C 1-6烷基、-C 0-6亞烷基-OR a、-C 0-6亞烷基-OC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aC(O)N（R a） 2、-C 0-6亞烷基-NR aS(O)R a、-C 0-6亞烷基-NR aS(O) 2R a、-C 0-6亞烷基-S(=O)R a、-C 0-6亞烷基-S(=O) 2R a、-C 0-6亞烷基-SR a、-C 0-6亞烷基-S(R a) 5、-C 0-6亞烷基-C(=O)R a、-C 0-6亞烷基-C(=O)OR a、-C 0-3亞烷基-C(=O)N（R a） 2、丙烯醯基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)，所述C 1-6烷基、-C 0-6亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-6亞烷基-(3-14員雜環基)、-C 0-6亞烷基-C 6-14芳基或-C 0-6亞烷基-(5-14員雜芳基)任選地還可被1個或多個R a所取代；每個R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、氨基、氧代基、氰基、羧基、C 1-6烷基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 1-6醯基或
    Figure 03_image013
    ；較佳所述R 7選自H、丙烯醯基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6醯基、 -C 0-3亞烷基-C 1-6烷氧基、C 1-6羥基烷基、C 1-6氰基烷基、-C 0-3亞烷基-S(=O) 2-C 1-6烷基、C 3-6酮基、
    Figure 03_image123
    、 、
    Figure 03_image125
    、
    Figure 03_image127
    、-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-8雜環基、-C 0-3亞烷基-苯基、-C 0-3亞烷基-吡唑基，所述-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-8雜環基、-C 0-3亞烷基-苯基、-C 0-3亞烷基-吡唑基任選地進一步被一個或多個選自C 1-6醯基、羥基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、鹵素、
    Figure 03_image013
    或氰基地取代基所取代，所述C 3-8雜環基含有一個選自O或N的雜原子；更佳所述R 7選自H、C 1-6烷基、乙醯基、
    Figure 03_image129
    、
    Figure 03_image131
    、
    Figure 03_image133
    、
    Figure 03_image135
    、
    Figure 03_image137
    、
    Figure 03_image139
    、
    Figure 03_image141
    、
    Figure 03_image143
    、
    Figure 03_image123
    、
    Figure 03_image145
    、
    Figure 03_image147
    、
    Figure 03_image149
    、
    Figure 03_image151
    、
    Figure 03_image153
    、
    Figure 03_image155
    、
    Figure 03_image157
    、
    Figure 03_image159
    、
    Figure 03_image161
    、
    Figure 03_image163
    、
    Figure 03_image165
    、
    Figure 03_image167
    、
    Figure 03_image169
    、
    Figure 03_image171
    、
    Figure 03_image127
    、
    Figure 03_image173
    、
    Figure 03_image175
    、
    Figure 03_image177
    或
    Figure 03_image179
    。
  10. 如請求項1至9中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，所述R 8選自H或C 1-6烷基；較佳為H。
  11. 如請求項1至10中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽，其中，通式(I)所示的所述手性化合物選自式(IA)-(ID)化合物，
    Figure 03_image181
    Figure 03_image183
    (IA)                                      (IB)
    Figure 03_image185
    Figure 03_image187
    (IC)                                         (ID) ；較佳為
    Figure 03_image181
    (IA) 其中，取代基如請求項1至10所定義。
  12. 一種手性化合物、氘代物或藥用鹽，其選自：
    Figure 03_image189
    Figure 03_image191
    Figure 03_image193
    ；較佳為
    Figure 03_image195
    、
    Figure 03_image197
    或
    Figure 03_image199
    。
  13. 一種藥物組合物，所述藥物組合物含有如請求項1至12中任一項所述之手性化合物、氘代物或藥用鹽；和至少一種藥學上可接受的輔料，所述藥物組合物中之所述手性化合物含量比其對應軸手性異構體含量更高；較佳所述藥物組合物中之通式(I)所示的所述手性化合物在活性成分中的含量高於51%、61%、71%、81%、91%、99%或更高。
  14. 一種如請求項1至12中任一項所述之手性化合物、氘代物、藥用鹽或如請求項13所述之藥物組合物在製備藥物中的應用，較佳所述藥物為抗癌症藥物，更佳所述癌症是由KRAS G12C，HRAS G12C或NRAS G12C突變介導的。
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