TW202219067A - 用於表現抗體多聚體融合之方法 - Google Patents

用於表現抗體多聚體融合之方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202219067A
TW202219067A TW110126928A TW110126928A TW202219067A TW 202219067 A TW202219067 A TW 202219067A TW 110126928 A TW110126928 A TW 110126928A TW 110126928 A TW110126928 A TW 110126928A TW 202219067 A TW202219067 A TW 202219067A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
leu
amino acid
acid sequence
ser
Prior art date
Application number
TW110126928A
Other languages
English (en)
Inventor
艾咪 申
哈洛德 杜爾
寇勒 克勞蒂亞 伏拉拉
夏藍 米沙海
史戴李安尼 圖爾納維提
鍾姍樺
雪明 葉
Original Assignee
瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
美商建南德克公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司, 美商建南德克公司 filed Critical 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
Publication of TW202219067A publication Critical patent/TW202219067A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/245—IL-1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C07K2319/75—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor containing a fusion for activation of a cell surface receptor, e.g. thrombopoeitin, NPY and other peptide hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/30—Vector systems comprising sequences for excision in presence of a recombinase, e.g. loxP or FRT
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
    • C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
    • C12N2840/203—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES

Abstract

本文報導一種生產抗體多聚體融合多肽的方法， 其包含 (a) 抗體重鏈及抗體輕鏈，及 (b) 第一融合多肽，其在 N 端至 C 端方向包含非抗體多聚體多肽的第一部分、抗體重鏈 CH1 域或抗體輕鏈恆定域、抗體鉸鏈區、抗體重鏈 CH2 域和抗體重鏈 CH3 域，以及第二融合多肽，其在 N 端至 C 端方向包含非抗體多聚體多肽的第二部分及如果該第一多肽包含抗體重鏈 CH1 域則包含抗體輕鏈恆定域，或如果該第一多肽包含抗體輕鏈恆定域則包含抗體重鏈 CH1 域， 其中 (i) (a) 的該抗體重鏈和 (b) 的該第一融合多肽，(ii) (a) 的該抗體重鏈和 (a) 的該抗體輕鏈，以及 (iii) (b)的該第一融合多肽和 (b) 的該第二融合多肽各自彼此獨立地藉由至少一個雙硫鍵彼此共價連接， 其特徵在於該抗體多聚體融合藉由重組哺乳動物細胞表現，該重組哺乳動物細胞藉由以化學計量比率為 1:1:2:1 的該抗體重鏈、該抗體輕鏈、該第一融合多肽和該第二融合多肽的表現卡匣轉染哺乳動物細胞而獲得。

Description

用於表現抗體多聚體融合之方法
本發明屬於細胞株產生及多肽生產領域。更準確地說，本文報導藉由以用於抗體多聚體融合的個別多肽之確定比例的表現卡匣轉染非生產哺乳動物細胞來產生重組哺乳動物生產細胞。該細胞可用於生產抗體多聚體融合的方法中。
分泌的及醣基化的多肽 (例如抗體) 通常藉由在真核細胞中重組表現產生，無論是穩定表現或瞬時表現。
要產生的多肽的複雜性越高，即在細胞內形成所關注多肽所需的不同多肽或多肽鏈的數量越多，控制不同多肽或多肽鏈相對於彼此的表現比例就越為重要。需要控製表現比例來實現所關注多肽有效表現、正確組裝及以高表現產量成功分泌。
產生表現外源所關注多肽的重組細胞的一種策略涉及編碼所關注多肽的核苷酸序列的隨機整合，隨後是選擇和分離步驟。
藉由重組酶介導的盒式交換 (RMCE) 的靶向整合是一種將外源 DNA 特異性且有效地引導至真核宿主基因體中的預定位點的方法 (Turan et al., J. Mol. Biol. 407 (2011) 193-221)。
Crawford 等人報導使用組合的 φC31 整合酶和 CRE-Lox 技術從有限基因體篩選中快速鑑定出用於靶向細胞株開發的可靠宿主 (Biotechnol. Prog.29 (2013) 1307-1315)。
Rajendra 等人報導單一四元載體是一種簡單而有效的替代方法，可用於生成穩定的 CHO 細胞株，並可加速用於臨床異源 mAb 治療的細胞株生成 (Biotechnol. Prog.33 (2017) 469-477)。
Bahr 等人報導在中國倉鼠卵巢細胞中使用靶向整合開發的平台表現系統 (Cell Culture Engineering XVI, 2018 論文集)。
Carver 等人報導藉由優化次單位基因劑量和位置，在靶向整合宿主中最大化抗體的生產 (Biotechnol. Prog.(2020) e2967)。
本發明藉由以下獨立方面和從屬實施例定義： 1.  本發明的第一方面是一種產生抗體多聚體融合多肽之方法， 其包含 (a) 抗體重鏈及抗體輕鏈，及 (b) 第一融合多肽，其在 N 端至 C 端方向包含非抗體多聚體多肽的第一部分、抗體重鏈 CH1 域或抗體輕鏈恆定域、抗體鉸鏈區、抗體重鏈 CH2 域和抗體重鏈 CH3 域，以及第二融合多肽，其在 N 端至 C 端方向包含非抗體多聚體多肽的第二部分及如果該第一多肽包含抗體重鏈 CH1 域則包含抗體輕鏈恆定域，或如果該第一多肽包含抗體輕鏈恆定域則包含抗體重鏈 CH1 域， 其中 (i) (a) 的該抗體重鏈和 (b) 的該第一融合多肽，(ii) (a) 的該抗體重鏈和 (a) 的該抗體輕鏈，以及 (iii) (b)的該第一融合多肽和 (b) 的該第二融合多肽各自彼此獨立地藉由至少一個雙硫鍵彼此共價連接， 其中 該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與抗原特異性結合的結合位點， 其特徵在於該抗體多聚體融合多肽藉由重組哺乳動物細胞表現，該重組哺乳動物細胞藉由以化學計量比率為 1:1:2:1 的該抗體重鏈、該抗體輕鏈、該第一融合多肽和該第二融合多肽的表現卡匣轉染 (親代) 哺乳動物細胞而獲得。 2.  根據方面 1 的方法，其中該抗體多聚體融合多肽是瞬時或穩定表現的。 3.  根據方面 1 或實施例 2 中任一者之方法，其中該哺乳動物細胞是 CHO 細胞，較佳為 CHO-K1 細胞或 HEK 細胞。 4.  根據方面 1 及實施例 2 至 3 中任一者之方法，其中該轉染有四個載體，其中各載體精確地包含該等表現卡匣中之一者。 5.  根據方面 1 及實施例 2 至 3 中任一者之方法，其中該轉染有三個載體，其中兩個載體精確地包含該等表現卡匣中之兩者，一個載體精確地包含該等表現卡匣中之一者。 6.  根據實施例 4 之方法，其中該轉染有三個載體，其中該第一載體包含用於抗體重鏈和抗體輕鏈的表現卡匣，該第二表現載體包含用於該第一融合多肽和該第二融合多肽的表現卡匣，且該第三載體包含用於該第一融合多肽的一個表現卡匣。 7.  根據方面 1 及實施例 2 至 6 中任一者之方法，其中該第一融合多肽包含藉由肽連接子彼此連接的 TNF 配體家族成員或其片段的兩個胞外域作為非抗體多聚體多肽的第一部分，且第二融合多肽僅包含該 TNF 配體家族成員或其片段的一個胞外域作為非抗體多聚體多肽的第二部分，反之亦然。 8.  根據實施例 7 之方法，其中 (a) 該第一融合多肽包含作為該非抗體多聚體多肽的第一部分的 TNF 配體家族成員的第一胞外域或其片段、間隔域及該 TNF 配體家族成員的第二胞外域或其片段，其中 - 該間隔域為多肽且包含至少 25 個胺基酸殘基， - TNF 配體家族成員的該第一胞外域或其片段直接或經由第一肽連接子與該間隔域的 N 端融合，且 - TNF 配體家族成員的該第二胞外域或其片段直接或經由第二肽連接子與該間隔域的 C 端融合， (b) 該第二融合多肽包含作為該非抗體多聚體多肽的第二部分的該 TNF 配體家族成員的第三胞外域或其片段，該第三胞外域或其片段直接或經由第三肽連接子 - 融合至該第一融合多肽中該 TNF 配體家族成員的第二胞外域的 C 端或該第二融合多肽中間隔域的 C 端，或 - 在抗原結合域的第二部分與第二融合蛋白的間隔域之 C 端融合的情況下，融合至該第一融合多肽中該 TNF 配體家族成員的第二胞外域之 C 端。 9.  根據方面 1 及實施例 2 至 8 中任一者之方法，其中 該第一融合多肽在 N 端至 C 端方向包含非抗體多聚體多肽的第一部分、抗體輕鏈恆定域、抗體鉸鏈區、抗體重鏈 CH2 域及抗體重鏈 CH3 域，且 該第二融合多肽在 N 端至 C 端方向包含該非抗體多聚體多肽的第二部分及抗體重鏈 CH1 域。 10.      根據方面 1 及實施例 2 至 9 中任一者之方法，其中 該第一融合多肽包含杵突變，且 該抗體重鏈包含臼突變。 11.      根據方面 1 及實施例 2 至 10 中任一者之方法，其中 (a) 的該抗體重鏈與 (b) 的該第一融合多肽形成 Fc 區。 12.      根據方面 1 及實施例 2 至 11 中任一者之方法，其中 (a) 的該抗體重鏈與 (b) 的該第一融合多肽形成IgG1 Fc 區或 IgG4 Fc 區。 13.      根據方面 1 及實施例 2 至 12 中任一者之方法，其中該 Fc 區為 IgG1 Fc 區，且進一步包含在位置 234 和 235 及/或 329 (Kabat EU 編號) 處的胺基酸取代。 14.      根據方面 1 及實施例 2 至 13 中任一者之方法，其中該 Fc 區為 IgG1 Fc 區，且進一步包含胺基酸取代 L234A、L235A 及/或 P329G (Kabat EU 編號)。 15.      根據實施例 7 至 14 中任一者之方法，其中在該第一融合多肽中，TNF 配體家族成員的該兩個胞外域或其片段藉由第一肽連接子彼此連接並藉由第二肽連接子在其 C 端融合至 CH1 域，且在該第二融合多肽中，該 TNF 配體家族成員的一個胞外域或其片段在其 C 端藉由第三肽連接子與該抗體輕鏈恆定域融合。 16.      根據實施例 7 至 14 中任一者之方法，其中在該第一融合多肽中，TNF 配體家族成員的該兩個胞外域或其片段藉由第一肽連接子彼此連接並藉由第二肽連接子在其 C 端融合至輕鏈恆定域，且在該第二融合多肽中，該 TNF 配體家族成員的一個胞外域或其片段在其 C 端藉由第三肽連接子與重鏈 CH1 域融合。 17.      根據方面 1 及實施例 2 至 16 中任一者之方法，其中在與非抗體多聚體多肽部分相鄰的 CL 域中，位置 123 (Kabat EU 編號) 處的胺基酸已被精胺酸 (R) 替換，位置 124 (Kabat EU 編號) 處的胺基酸已被 離胺酸 (K) 取代，且其中在與非抗體多聚體多肽的部分相鄰的 CH1 域中，位置 147 (Kabat EU 編號) 及位置 213 (Kabat EU 編號) 處的胺基酸已被麩胺酸 (E) 取代。 18.      根據方面 1 及實施例 2 至 17 中任一者之方法，其中該抗體重鏈及抗體輕鏈的可變域形成與細胞表面抗原特異性結合的結合位點。 19.      根據方面 1 及實施例 2 至 18 中任一者之方法，其中該抗體重鏈和抗體輕鏈的可變域形成與細胞表面抗原特異性結合的結合位點，該細胞表面抗原選自纖維母細胞活化蛋白 (FAP)、黑色素瘤相關硫酸軟骨素蛋白多醣 (MCSP)、表皮生長因子受體 (EGFR)、癌胚抗原 (CEA)、CD19、CD20 及 CD33 所組成之群組。 20.      根據實施例 7 至 19 中任一者之方法，其中該 TNF 配體家族成員共同刺激人類 T 細胞活化。 21.       根據實施例 7 至 20 中任一者之方法，其中該 TNF 配體家族成員選自 4-1-BBL 及 OX40L。 22.      根據實施例 7 至 21 中任一者之方法，其中該 TNF 配體家族成員為 4-1-BBL。 23.      根據實施例 7 至 22 中任一者之方法，其中 TNF 配體家族成員的該胞外域包含選自由 SEQ ID NO：01、SEQ ID NO：02、SEQ ID NO：03、SEQ ID NO：04、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101 及 SEQ ID NO：102 所組成之群組的胺基酸序列。 24.      根據實施例 7 至 23 中任一者之方法，其中 TNF 配體家族成員的該胞外域包含 SEQ ID NO：01 或 SEQ ID NO：56 的胺基酸序列。 25.      根據方面 1 及實施例 2 至 24 中任一者之方法，其中 (a) 該抗體重鏈及該抗體輕鏈形成能夠與標靶細胞抗原特異性結合的結合位點，且 (b) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 05、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58 及 SEQ ID NO: 59 所組成之群組的胺基酸序列，且該第二融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 01、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 03 及 SEQ ID NO: 04 所組成之群組的胺基酸序列。 26.      根據實施例 7 至 21 中任一者之方法，其中該 TNF 配體家族成員為 OX40L。 27.      根據實施例 7 至 21 及 26 中任一者之方法，其中該 TNF 配體家族成員的該胞外域包含 SEQ ID NO：43 或 SEQ ID NO：44 之胺基酸序列，特別是 SEQ ID NO：43 之胺基酸序列。 28.      根據實施例 7 至 21 及 26 至 27 中任一者之方法，其中該抗體多聚體融合包含 (a) 能夠與標靶細胞抗原特異性結合的至少一個部分，及 (b) 該第一融合多肽與該第二融合多肽藉由雙硫鍵相互連接，其中抗原結合分子的特徵在於該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 99 或 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO: 43 或 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列。 29.      根據方面 1 及實施例 2 至 28 中任一者之方法，其中該抗原為纖維母細胞活化蛋白 (FAP)。 30.      根據方面 1 及實施例 2 至 29 中任一者之方法，其中該抗體重鏈的該可變域與抗體輕鏈的該可變域形成與 FAP 特異性結合的結合位點，且包含 VH 域及 VL 域，該 VH 域包含 (i) 包含 SEQ ID NO：06 或 SEQ ID NO：60 之胺基酸序列的 CDR-H1，(ii) 包含 SEQ ID NO：07 或 SEQ ID NO：61 之胺基酸序列的 CDR-H2，及 (iii) 包含 SEQ ID NO：08 或 SEQ ID NO：62 之胺基酸序列的 CDR-H3，且該 VL 域包含 (iv) 包含 SEQ ID NO：09 或 SEQ ID NO：63 之胺基酸序列的 CDR-L1，(v) 包含 SEQ ID NO：10 或 SEQ ID NO：64 之胺基酸序列的 CDR-L2，及 (vi) 包含 SEQ ID NO：11 或 SEQ ID NO：65 之胺基酸序列的 CDR-L3。 31.      根據方面 1 及實施例 2 至 30 中任一者之方法，其中其中該抗體重鏈的該可變域與該抗體輕鏈的該可變域形成與 FAP 特異性結合的結合位點，包含含有 SEQ ID NO：15 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO：16 之胺基酸序列的可變輕鏈域，或含有 SEQ ID NO：66 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有SEQ ID NO：67 之胺基酸序列的可變輕鏈域，或其中該第一融合多肽包含 SEQ ID NO：97 之胺基酸序列且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO：98 之胺基酸序列。 32.      根據方面 1 及實施例 2 至 31 中任一者之方法，其中 (i) 該抗體重鏈包含含有 SEQ ID NO：15 之胺基酸序列的 VH 域，且該抗體輕鏈包含含有 SEQ ID NO：16 之胺基酸序列的 VL 域，或該抗體重鏈包含含有 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列的 VH 域，且該抗體輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列的 VL 域，(ii) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 71 及 SEQ ID NO: 73 所組成之群組的胺基酸序列；且該第二融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72 及 SEQ ID NO: 74 所組成之群組的胺基酸序列。 33.根據方面 1 及實施例 2 至 32 中任一者之方法，其中 (i) 該抗體重鏈包含含有 SEQ ID NO：15 之胺基酸序列的 VH 域且該抗體輕鏈包含含有 SEQ ID NO：16 之胺基酸序列的 VL 域，或該抗體重鏈包含含有 SEQ ID NO：66 之胺基酸序列的 VH 域且該抗體輕鏈包含含有 SEQ ID NO：67 之胺基酸序列的 VL 域，(ii) 該第一融合多肽包含選自 SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79 及 SEQ ID NO：82 所組成之群組的胺基酸序列，且該第二融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80 及 SEQ ID NO: 83 所組成之群組的胺基酸序列。 34.      如請求項 1 至 28 及 42 至 47 中任一項之方法，其中該抗體重鏈與該抗體輕鏈形成與 (人類) FAP 特異性結合的結合位點，且該抗體重鏈具有 SEQ ID NO：141 的胺基酸序列且該輕鏈具有 SEQ ID NO：142 之胺基酸序列，其中該第一融合多肽包含 SEQ ID NO：79 之胺基酸序列，且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO：80 之胺基酸序列。 35.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 中任一者之方法，其中該抗原為 CEA。 36.      根據方面 1 及實施例 2 至 28 及 35 中任一者之方法，其中該抗體重鏈之可變域與該抗體輕鏈之可變域形成與 CEA 特異性結合的結合位點且包含 VH 域及 VL 域，該 VH 域包含 (i) 包含 SEQ ID NO：84 之胺基酸序列的 CDR-H1，(ii) 包含 SEQ ID NO：85 之胺基酸序列的 CDR-H2，及 (iii) 包含 SEQ ID NO：86 之胺基酸序列的 CDR-H3，且該 VL 域包含 (iv) 包含 SEQ ID NO：87 之胺基酸序列的 CDR-L1，(v) 包含 SEQ ID NO：88 之胺基酸序列的 CDR-L2，及 (vi) 包含 SEQ ID NO：89 之胺基酸序列的 CDR-L3。 37.      根據方面 1 及實施例 2 至 28 及 35 至 36 中任一者之方法，其中該抗體重鏈之可變域與該抗體輕鏈之可變域形成與 CEA 特異性結合的結合位點，且包含含有 SEQ ID NO：90 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO：91 之胺基酸序列的可變輕鏈域。 38.      根據方面 1 及實施例 2 至 28 及 35 至 37 中任一者之方法，其中抗體多聚體融合包含 (i) 包含該 VH 域之重鏈，該 VH 域包含 SEQ ID NO: 90 之胺基酸序列，及包含該 VL 域之輕鏈，該 VL 域包含 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列， (ii) 第一融合多肽，其包含選自由 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 71 及 SEQ ID NO: 73 所組成之群組的胺基酸序列，及 (iii) 第二融合多肽，其包含 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72 及 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列。 39.      根據方面 1 及實施例 2 至 28 及 35 至 38 中任一者之方法，其中抗體多聚體融合包含 (i) 包含該 VH 域之重鏈，該 VH 域包含 SEQ ID NO: 90 之胺基酸序列，及包含該 VL 域之輕鏈，該 VL 域包含 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列， (ii) 第一融合多肽，其包含選自由 SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 79 及 SEQ ID NO: 82 所組成之群組的胺基酸序列，及 (iii) 第二融合多肽，其包含選自由 SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80 及 SEQ ID NO: 83 所組成之群組的胺基酸序列。 40.      根據方面 1 及實施例 2 至 28 及 35 至 39 中任一者方法，其中抗體多聚體融合包含 (i) 包含 SEQ ID NO: 93 之胺基酸序列的第一重鏈、包含 SEQ ID NO: 94 之胺基酸序列的第二重鏈、及包含 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的兩條輕鏈，或 (ii) 包含 SEQ ID NO: 95 之胺基酸序列的第一重鏈、包含 SEQ ID NO: 96 之胺基酸序列的第二重鏈、及包含 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的兩條輕鏈。 41.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 及 35 至 40 中任一者之方法，其中該抗體重鏈與該抗體輕鏈形成與 (人類) CEA 特異性結合的結合位點，且該抗體重鏈具有 SEQ ID NO：143 之胺基酸序列且該輕鏈具有 SEQ ID NO：92 之胺基酸序列，其中該第一融合多肽包含 SEQ ID NO：79 之胺基酸序列，且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO：80 之胺基酸序列。 42.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 中任一者之方法，其中該抗原為 CD19。 43.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 及 42 中任一者之方法，其中該抗體重鏈之該可變域與該抗體輕鏈之該可變域形成與 CD19 特異性結合的結合位點，且包含 VH 域及 VL 域，該 VH 域包含 (i) 包含 SEQ ID NO：104 或 SEQ ID NO：105 之胺基酸序列的 CDR-H1，(ii) 包含 SEQ ID NO：106 或 SEQ ID NO：107 之胺基酸序列的 CDR-H2，及 (iii) 包含 SEQ ID NO：108 或 SEQ ID NO：109 之胺基酸序列的 CDR-H3，且該 VL 域包含 (iv) 包含 SEQ ID NO：110 或 SEQ ID NO：111 之胺基酸序列的 CDR-L1，(v) 包含 SEQ ID NO：112 或 SEQ ID NO：113 之胺基酸序列的 CDR-L2，及 (vi) 包含 SEQ ID NO：114 或 SEQ ID NO：115 之胺基酸序列的 CDR-L3。 44.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 及 42 至 43 中任一者之方法，其中該抗體重鏈之該可變域與該抗體輕鏈之該可變域形成與 CD19 特異性結合的結合位點，且包含含有 SEQ ID NO：116 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO：117 之胺基酸序列的可變輕鏈域，或包含含有 SEQ ID NO：118 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO：119 之胺基酸序列的可變輕鏈域。 45.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 及 42 至 44 中任一者方法，其中 (i) 該重鏈包含含有 SEQ ID NO: 116 之胺基酸序列的 VH 域，且該輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 117 之胺基酸序列的 VL 域，或該重鏈包含含有 SEQ ID NO: 118 之胺基酸序列的 VH 域，且該輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 119 之胺基酸序列的 VL 域， (ii) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 71 及 SEQ ID NO: 73 所組成之群組的胺基酸序列，及 (iii) 該第二融合多肽包含 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72 及 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列。 46.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 及 42 至 45 中任一者方法，其中 (i) 該重鏈包含含有 SEQ ID NO: 116 之胺基酸序列的 VH 域，且該輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 117 之胺基酸序列的 VL 域，或該重鏈包含含有 SEQ ID NO: 118 之胺基酸序列的 VH 域，且該輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 119 之胺基酸序列的 VL 域， (ii) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 79 及 SEQ ID NO: 82 所組成之群組的胺基酸序列，及 (iii) 該第二融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80 及 SEQ ID NO: 83 所組成之群組的胺基酸序列。 47.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 及 42 至 45 中任一者方法，其中 (i) 該重鏈包含 SEQ ID NO: 120 之胺基酸序列，該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 121 之胺基酸序列，且該輕鏈包含 SEQ ID NO: 122 之胺基酸序列，或 (ii) 該重鏈包含 SEQ ID NO: 123 之胺基酸序列，該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 124 之胺基酸序列，且該輕鏈包含 SEQ ID NO: 122 之胺基酸序列，或 (iii) 該重鏈包含 SEQ ID NO: 125 之胺基酸序列，該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 126 之胺基酸序列，且該輕鏈包含 SEQ ID NO: 127 之胺基酸序列，或 (iv) 該重鏈包含 SEQ ID NO: 128 之胺基酸序列，該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 129 之胺基酸序列，且該輕鏈包含 SEQ ID NO: 127 之胺基酸序列。 48.      根據方面 1 或實施例 2 至 28 及 42 至 47 中任一者之方法，其中該抗體重鏈與該抗體輕鏈形成與 (人類) CD19 特異性結合的結合位點，且該抗體重鏈具有 SEQ ID NO：144 之胺基酸序列且該輕鏈具有 SEQ ID NO：127 之胺基酸序列，其中該第一融合多肽包含 SEQ ID NO：79 之胺基酸序列，且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO：80 之胺基酸序列。 49.      根據方面 1 或實施例 2 至 48 中任一者之方法，其中該轉染 (親代) 哺乳動物細胞為靶向整合轉染。 50.      根據實施例 49 之方法，其中該靶向整合轉染為雙重組酶介導之盒式交換。 51.      根據實施例 49 至 50 中任一者之方法，其中該 (親代) 哺乳動物細胞為 CHO 細胞，具有整合在其基因體基因座內單個位點處的安放位點。 52.      根據實施例 51 之方法，其中該安放位點包含第一選擇標記和第二選擇標記，其兩側是兩個 RRS，其中該第一選擇標記不同於該第二選擇標記。 53.      根據實施例 52 之方法，其中第一選擇標記為麩醯胺合成酶選擇標記，且第二選擇標記為 GFP 螢光蛋白。 54.      根據實施例 52 之方法，其中該整合的安放位點包含胸苷激酶選擇標記及 HYG 選擇標記。 55.      根據實施例 52 至 54 中任一者之方法，其中兩個選擇標記側邊的該兩個 RRS 並不相同。 56.      根據實施例 51 至 55 中任一者之方法，其中該安放位點包含三個異種特異性 loxP 位點，用於 Cre 重組酶介導的 DNA 重組。 57.      根據實施例 56 之方法，其中該異種特異性 loxP 位點為 L3、LoxFas 及 2L。 58.      根據實施例 57 之方法，其中該L3 及該 2L 分別位於 5' 端及 3' 端安放位點的側邊，且 LoxFas 位於該 L3 及 2L 位點之間。 59.      根據實施例 51 至 58 中任一者之方法，其中安放位點進一步包含一個雙順反子單元，經由 IRES 將選擇標記的表現連接至螢光 GFP 蛋白的表現。 60.      根據方面 1 或實施例 2 至 59 中任一者之方法，其中該抗體多聚體融合多肽由整合在細胞基因體中的去氧核糖核酸表現，其在 5'-至 3'-方向包含 -    編碼該第一融合多肽的第一表現卡匣， -    編碼該第一融合多肽的第二表現卡匣， -    編碼該第二融合多肽的第三表現卡匣， -    編碼該抗體重鏈的第四表現卡匣，及 -    編碼該抗體輕鏈的第五表現卡匣。 61.      根據方面 1 或實施例 2 至 60 中任一者之方法，其中編碼該抗體多聚體融合多肽的該去氧核糖核酸在單一位點或基因座處被穩定整合至該哺乳動物細胞的基因體中。 62.      根據實施例 60 至 61 中任一者之方法，其中編碼該抗體多聚體融合多肽的該去氧核糖核酸進一步包含 -    第一重組識別序列，其位於第一 (最 5') 表現卡匣的 5’， -    第二重組識別序列，其位於第五 (最 3') 表現卡匣的 3’， -    第三重組識別序列，其位於 -    該第一重組識別序列與該第二重組識別序列之間，及 -    該第三表現卡匣與該第四表現卡匣之間， 且 其中所有重組識別序列皆不相同。 63.      根據實施例 60 至 62 中任一者之方法，其中編碼該抗體多聚體融合多肽的該去氧核糖核酸進一步包含編碼選擇標記的另一表現卡匣。 64.      根據實施例 63 之方法，其中編碼選擇標記的該表現卡匣位於該第三重組識別序列的 i) 5’，或 ii) 3’，或 iii) 部分在 5’ 且部分在 3’。 65.      根據實施例 63 至 64 中任一者之方法，其中編碼選擇標記的該表現卡匣部分位於該第三重組識別序列的 5’ 且部分位於 3'，其中位於該表現卡匣的該 5’ 部分包含該啟動子及起始密碼子，且位於該表現卡匣的該 3’ 部分包含沒有該起始密碼子的編碼序列及多腺苷酸化 (polyA) 信號。 66.      根據實施例 60 至 65 中任一者之方法，其中編碼該抗體多聚體融合多肽的去氧核糖核酸包含編碼選擇標記的另一表現卡匣，且編碼該選擇標記的該表現卡匣部分位於該第三重組識別序列的 5’ 且部分位於 3'，其中位於該表現卡匣的該 5’ 部分包含該啟動子及該起始密碼子，且位於該表現卡匣的該 3’ 部分包含沒有該起始密碼子的編碼序列及多腺苷酸化信號，其中該起始密碼子與該編碼序列可操作地連接。 67.      根據實施例 65 至 66 中任一者之方法，其中該起始密碼子為 ATG。
本發明至少部分基於對於抗體多聚體融合之表現的發現，該抗體多聚體融合體為一種包含不同多肽的複雜分子，即異源多聚體，使用經界定的表現卡匣比例使得在哺乳動物細胞 (例如 HEK 或 CHO 細胞) 中有效表現和生產抗體多聚體融合。
本發明至少部分基於對抗體多聚體融合的瞬時和穩定表現的發現，該抗體多聚體融合為一種包含不同多肽的複雜分子，即異源多聚體，使用相同經界定的表現卡匣比例產生最高的表現產率和產物品質。
I. 定義
如本文中所使用的重鏈及輕鏈之所有恆定區及域之胺基酸位置，係根據描述於 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991) 的 Kabat 編號系統，並本文中稱為「根據 Kabat 編號」。具體而言，Kabat 編號系統（參見 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD (1991) 的第 647-660 頁）係用於κ及λ同型之輕鏈恆定域 Cl，以及 Kabat EU 索引編號系統（參見第 661-723 頁）係用於重鏈恆定域（CH1、鉸鏈、CH2 及 Ch3，在此情況中，其於本文中藉由參考「根據 Kabat EU 索引編號」進一步闡明）。
隆突-入-穴 (knobs into holes) 二聚模組及其在抗體工程中的用途已描述於 Carter P.; Ridgway J.B.B.; Presta L.G.: Immunotechnology 2 (1996) 73-73(1)。
有關人免疫球蛋白輕鍊和重鏈核苷酸序列的一般資訊，請參見：Kabat, E.A. 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD (1991)。
用於進行本發明的有用方法和技術描述於例如 Ausubel, F.M.(ed.), Current Protocols in Molecular Biology, Volumes I to III (1997); Glover, N.D., and Hames, B.D., ed., DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II (1985), Oxford University Press; Freshney, R.I.(ed.), Animal Cell Culture – a practical approach, IRL Press Limited (1986)；Watson, J.D., et al., Recombinant DNA, Second Edition, CHSL Press (1992)；Winnacker, E.L., From Genes to Clones; N.Y., VCH Publishers (1987)；Celis, J., ed., Cell Biology, Second Edition, Academic Press (1998)；Freshney, R.I., Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, second edition, Alan R. Liss, Inc., N.Y.(1987)。
使用重組 DNA 技術能產生核酸衍生物。此類衍生物可例如在個別或數個核苷酸位置藉由取代、改變、交換、缺失或***而修飾。修飾或衍生化可例如藉由定點誘變的方式進行。此類修飾可容易地由熟習此項技術者進行 (參見例如 Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A laboratory manual (1999) Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA；Hames, B.D., and Higgins, S.G., Nucleic acid hybridization – a practical approach (1985) IRL Press, Oxford, England)。
亦必須注意，除非上下文另有明確規定，否則如本文中及隨附實施例中所使用，單數形式「一」、「一種」及「該」包括複數個提及物。因此，舉例而言，提及「一個細胞」包括複數個此類細胞及熟習此項技術者已知之其等效物，諸如此類。同樣，術語「一」 (或「一種」)、「一個或多個」及「至少一個」在本文中可互換使用。亦應注意，術語「包含」、「包括」及「具有」可互換使用。
術語「約」表示其後接著之數值 +/-20% 的範圍。在一個實施例中，術語約表示其後數值之 +/- 10% 的範圍。在一個實施例中，術語約表示其後數值之 +/- 5 % 的範圍。
術語「包含」亦包括術語「由…組成」。
如本文所使用之術語「重組細胞」表示最終遺傳修飾後的細胞，例如表現所關注多肽並可用於以任何規模生產該所關注多肽的細胞。例如，「包含外源核苷酸序列的哺乳動物細胞」已進行重組酶介導的盒式交換 (RMCE)，從而將用於所關注多肽的編碼序列導入宿主細胞的基因體中，即為「重組細胞」。儘管細胞仍能進行進一步的 RMCE 反應，但其並不欲進行。
如本文所使用之術語「重組哺乳動物細胞」表示包含能表現多肽的外源核苷酸序列的哺乳動物細胞。此類重組哺乳動物細胞是已導入一種或多種外源核酸的細胞，包括此類細胞的子代。因此，術語「包含編碼異源多肽之核酸的哺乳動物細胞」表示包含整合到哺乳動物細胞基因體中並能表現該異源多肽的外源核苷酸序列的細胞。在一個實施例中，包含外源核苷酸序列的哺乳動物細胞是包含整合在宿主細胞基因體之基因座內的單一位點處的外源核苷酸序列的細胞，其中該外源核苷酸序列包含側接至少一個第一選擇標記的第一重組識別序列及第二重組識別序列，以及位於第一和第二重組識別序列之間的第三重組識別序列，且所有重組識別序列皆不相同。
「包含外源核苷酸序列的哺乳動物細胞」與「重組細胞」皆為「轉化細胞」。此術語包括初級轉化細胞以及從其衍生的子代，而與繼代次數無關。例如，子代在核酸含量上可與親代細胞不完全相同，但可能含有突變。包含與在最初轉化的細胞中篩選或選擇的具有相同功能或生物活性的突變後代。
「整合位點」表示其中被***外源核苷酸序列的細胞基因體中的核酸序列。在某些實施例中，整合位點位於細胞基因體中兩個相鄰的核苷酸之間。在某些實施例中，整合位點包含一段核苷酸序列。在某些實施例中，整合位點位於哺乳動物細胞基因體的特定位點。在某些實施例中，整合位點在哺乳動物細胞的內源基因中。
如本文所使用，術語「載體」或「質體」可互換使用，是指能繁殖與其連接的另一核酸的核酸分子。該術語包括作為自我複制核酸結構之載體以及摻入已引入該宿主細胞的基因體中的載體。某些載體能夠指導與其可操作地連接的核酸的表現。此類載體在本文中稱為「表現載體」。
術語「結合至」表示結合位點與其標靶的結合，例如包含對於各自的抗原的抗體重鏈可變域及抗體輕鏈可變域的抗體結合位點。此結合可以使用例如 BIAcore® 測定 (GE Healthcare，Uppsala，Sweden) 來確定。即，術語「(與抗原) 結合」表示抗體在活體外測定中與其抗原的結合。在一個實施例中，結合是在結合測定中確定，其中該抗體與表面結合且抗原與抗體的結合藉由表面電漿子共振 (SPR) 測量。結合意指例如 10 -8M 或更小的結合親和力 (K D)，在一些實施例中為 10 -13至 10 -8M，在一些實施例中為 10 -13至 10 -9M。術語「結合」亦包括術語「特異性結合」。
例如，在 BIAcore® 測定的一個可能的實施例中，抗原與表面結合，且抗體的結合，即其結合位點，藉由表面電漿子共振 (SPR) 來測量。結合之親和力由術語 k a(締合常數：締合形成複合物的速率常數)、k d(解離常數；複合物解離的速率常數) 和 K D(k d/k a) 定義。或者，在共振信號高度和解離行為方面，SPR 感應圖的結合信號可直接與參考的反響信號比較。
術語「結合位點」表示對標靶顯示出結合特異性的任何蛋白質實體。這可為，例如，受體、受體配體、抗載運蛋白、親和體、抗體等。因此，如本文所使用之術語「結合位點」表示可特異性結合第二多肽或可被第二多肽特異性結合的多肽。
如本文所使用，術語「外源」是指核苷酸序列並非源自特定細胞，而是藉由 DNA 遞送方法導入該細胞中，例如藉由轉染、電穿孔或轉化方法。因此，外源核苷酸序列是人工序列，其中人造物可源自例如不同來源的子序列的組合 (例如重組酶識別序列與 SV40 啟動子和綠色螢光蛋白之編碼序列的組合為一種人工的核酸)，或部分序列的缺失 (例如僅編碼膜結合受體或 cDNA 的細胞外域的序列) 或核鹼基的突變。術語「內源」是指源自細胞的核苷酸序列。「外源」核苷酸序列可具有在鹼基組成上相同的「內源」對應物，但是其中「外源」序列例如經由重組 DNA 技術被導入細胞中。
如本文所使用，術語「選擇標記」表示一種基因，其允許攜帶該基因的細胞在對應的選擇劑的存在下被特異性地選擇或排除。例如，但並非限制性地，選擇標記可允許以選擇標記基因轉化的宿主細胞在各別的選擇劑存在下 (選擇性培養條件) 被明確選擇；未轉化的宿主細胞將不能在選擇性培養條件下生長或存活。選擇標記可為陽性、陰性或雙功能選擇標記。陽性選擇標記可選擇帶有標記的細胞，而陰性選擇標記則可以選擇性排除帶有標記的細胞。選擇標記可導致藥物抗性或補償宿主細胞中之代謝或分解代謝缺陷。在原核細胞中，可使用導致對氨芐青黴素、四環素、卡那黴素或氯黴素抗性的基因。在真核細胞中用作選擇標記的抗性基因包括但不限於胺基糖苷磷酸轉移酶 (APH) (例如，潮黴素磷酸轉移酶 (HYG)、新黴素和 G418 APH)、二氫葉酸還原酶 (DHFR)、胸苷激酶 (TK)、谷胺酰胺合成酶 (GS)、天冬酰胺合成酶、色胺酸合成酶 (吲哚)、組胺醇脫氫酶 (組胺醇 D) 以及編碼對嘌呤黴素、殺稻瘟素、博萊黴素、腐草黴素、氯黴素、Zeocin 和黴酚酸的抗性的基因。更多標記基因描述於 WO 92/08796 和 WO 94/28143 中。
除了在對應的選擇劑存在下促進選擇外，選擇標記另可為通常不存在於細胞中的分子，例如綠色螢光蛋白 (GFP)、增強型 GFP (eGFP)、合成 GFP、黃色螢光蛋白 (YFP)、增強型 YFP (eYFP)、青色螢光蛋白 (CFP)、mPlum、mCherry、tdTomato、mStrawberry、J-red、DsRed-monomer、mOrange、mKO、mCitrine、Venus、YPet、Emerald、CyPet、mCFPm、Cerulean 及 T-Sapphire。表現此類分子的細胞可與不攜帶此基因的細胞區別，例如分別藉由檢測或不存在編碼的多肽所發出的螢光。
除非另有說明外，否則術語「纖維母細胞活化蛋白 (FAP)」亦稱為脯胺醯內肽酶 FAP 或 Seprase (EC 3.4.21)，是指來自任何脊椎動物來源之任何天然 FAP，該脊椎動物包括哺乳動物，例如靈長類動物 (例如，人類)、非人靈長類動物 (例如，食蟹猴) 及囓齒動物 (例如，小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」、未處理之 FAP 以及在細胞處理中得到的任何形式 FAP。該術語亦涵蓋天然生成之 FAP 變異體，例如，剪接變異體或對偶基因變異體。在一個實施例中，本發明之抗原結合分子能特異性結合人類、小鼠及/或食蟹猴 FAP。人類 FAP 之胺基酸序列顯示在 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 Q12884 (版本 149，SEQ ID NO：17)，或 NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_004451.2 中。人 FAP 之胞外域 (ECD) 從胺基酸位置 26 處延伸至位置 760 處。帶有 His 標籤的人類 FAP ECD 的胺基酸及核苷酸序列分別顯示在 SEQ ID NO：14 及 SEQ ID NO：15 中。小鼠 FAP 之胺基酸序列顯示在 UniProt 登錄號 P97321 (版本 126, SEQ ID NO：18)，或 NCBI RefSeq NP_032012.1 中。小鼠 FAP 之胞外域 (ECD) 從胺基酸位置 26 處延伸至位置 761 處。SEQ ID NO：19 及 SEQ ID NO：20 分別顯示帶有 His 標籤之小鼠 FAP ECD 的胺基酸及核苷酸序列。SEQ ID NO：21 及 SEQ ID NO：22 分別顯示帶 His 標籤之食蟹猴 FAP ECD 的胺基酸及核苷酸序列。較佳地，本發明之抗 FAP 結合分子與 FAP 之胞外域結合。例示性抗 FAP 結合分子敘述於 WO 2012/020006 中。
術語「TNF 配體家族成員」或「TNF 家族配體」是指促炎性細胞介素。一般而言，細胞介素，特別是 TNF 配體家族的成員，在免疫系統的刺激和協調中扮演至關重要的角色。目前，根據序列、功能和結構的相似性，已將 19 種細胞介素界定為 TNF (腫瘤壞死因子) 配體超家族的成員。所有這些配體都是 II 型跨膜蛋白，具有 C 端細胞外域 (胞外域)、N 端細胞內域和單一跨膜域。C 端細胞外域，稱為 TNF 同源域 (THD)，在超家族成員之間具有 20-30% 的胺基酸同一性，負責與受體結合。TNF 胞外域亦負責使 TNF 配體形成被其特定受體識別的三聚體複合物。
TNF 配體家族的成員選自淋巴毒素 α (亦稱為 LTA 或 TNFSF1)、TNF (亦稱為 TNFSF2)、LTβ (亦稱為 TNFSF3)、OX40L (亦稱為 TNFSF4)、CD40L (亦稱為 CD154 或 TNFSF5)、FasL (亦稱為 CD95L、CD178 或 TNFSF6)、CD27L (亦稱為 CD70 或 TNFSF7)、CD30L (亦稱為 CD153 或 TNFSF8)、4-1-BBL (亦稱為 TNFSF9)、TRAIL (亦稱為 APO2L、CD253 或 TNFSF10)、RANKL (亦稱為 CD254 或 TNFSF11)、TWEAK (亦稱為 TNFSF12)、APRIL (亦稱為 CD256 或 TNFSF13)、BAFF (亦稱為 CD257 或 TNFSF13B)、LIGHT (亦稱為 CD258 或 TNFSF14)、TL1A (亦稱為 VEGI 或 TNFSF15)、GITRL (亦稱為 TNFSF18)、EDA-A1 (亦稱為外異蛋白 A1) 及 EDA-A2 (亦稱為外異蛋白 A2)。除另有說明外，該術語是指來自任何脊椎動物來源的任何天然 TNF 家族配體，包括哺乳動物，例如靈長類動物 (例如人類)、非人類靈長類動物 (例如食蟹猴) 和囓齒動物 (例如小鼠及大鼠)。在本發明之具體實施例中，TNF 配體家族成員選自由 OX40L、FasL、CD27L、TRAIL、4-1-BBL、CD40L 及 GITRL 所組成之群組。在一具體實施例中，TNF 配體家族成員選自 4-1-BBL 及 OX40L。
TNF 配體家族成員的進一步資訊，特別是序列，可從公開可存取資料庫獲得，例如 UniProt (www.uniprot.org)。舉例而言，人類 TNF 配體具有以下胺基酸序列：人類淋巴毒素 α (UniProt 登錄號 P01374，SEQ ID No：24)、人類 TNF (UniProt 登錄號 P01375，SEQ ID No：25)、人類淋巴毒素 α (UniProt 登錄號 Q06643，SEQ ID NO：26)、人類 OX40L (UniProt 登錄號 P23510，SEQ ID NO：27)、人類 CD40L (UniProt 登錄號 P29965、SEQ ID NO：28)、人類 FasL (UniProt 登錄號 P48023，SEQ ID NO：29)、人類 CD27L (UniProt 登錄號 P32970，SEQ ID NO：30)、人類 CD30L (UniProt 登錄號 P32971，SEQ ID NO：31)、4-1-BBL ( UniProt 登錄號 P41273，SEQ ID NO：32)、TRAIL (UniProt 登錄號 P50591，SEQ ID NO：33)、RANKL (UniProt 登錄號 O14788、SEQ ID NO：34)、TWEAK (UniProt 登錄號 O43508，SEQ ID NO：35)、APRIL (UniProt 登錄號 O75888，SEQ ID NO：36)、BAFF (UniProt 登錄號 Q9Y275，SEQ ID NO：37)、LIGHT (UniProt 登錄號 O43557，SEQ ID NO：38)、TL1A (UniProt 登錄號 O95150，SEQ ID NO：39)、GITRL (UniProt 登錄號 Q9UNG2，SEQ ID NO：40) 及外異蛋白 A (UniProt 登錄號 Q92838，SEQ ID NO：41)。
「胞外域」為膜蛋白質中延伸至細胞外空間 (亦即標靶細胞外之空間) 的域。胞外域通常是啟動與表面接觸的蛋白質部分，從而導致信號轉導。因此，本文所界定之 TNF 配體家族成員的胞外域是指 TNF 配體蛋白延伸到細胞外空間 (細胞外域) 的部分，但亦包括其負責三聚化和結合至對應 TNF 受體的較短部分或片段。因此，術語「TNF 配體家族成員的胞外域或其片段」是指形成細胞外域的 TNF 配體家族成員的細胞外域或其仍然能與受體結合的部分 (受體結合域)。
術語「共刺激 TNF 配體家族成員」或「共刺激 TNF 家族配體」是指能夠共同刺激 T 細胞增殖及細胞介素生產的 TNF 配體家族成員的子群。這些 TNF 家族配體在與其對應的 TNF 受體相互作用後可共同刺激 TCR 信號，且與其受體的相互作用導致 TNFR 相關因子 (TRAF) 的募集，從而啟動導致 T 細胞活化的信號級聯反應。共刺激 TNF 家族配體選自由 4-1-BBL、OX40L、GITRL、CD70、CD30L 及 LIGHT 所組成之群組，更具體地，共刺激 TNF 配體家族成員選自 4-1-BBL 及 OX40L。
如前所述，4-1-BBL 為 II 型跨膜蛋白且為 TNF 配體家族的一個成員。具有 SEQ ID NO：32 之胺基酸序列的完整或全長 4-1-BBL 已被敘述為在細胞表面形成三聚體。三聚體的形成能藉由 4-1-BBL 胞外域的特定目的促成。該動機在本文中被指定為「三聚化區域」。人類 4-1-BBL 序列 (SEQ ID NO：42) 的胺基酸 50-254 形成 4-1-BBL 的細胞外域，但即使是其片段也能形成三聚體。在本發明的具體實施例中，術語「4-1-BBL 的胞外域或其片段」是指具有選自 SEQ ID NO:04 (人類 4-1-BBL 的胺基酸 52-254)、SEQ ID NO：01 (人類 4-1-BBL 之胺基酸 71-254)、SEQ ID NO：03 (人類 4-1-BBL 之胺基酸 80-254) 及 SEQ ID NO：02 (人類 4-1-BBL 之胺基酸 85-254) 支安基酸的多肽，或具有選自 SEQ ID NO：56 (人類 4-1-BBL 之胺基酸 71-248)、SEQ ID NO：102 (人類 4-1-BBL 之胺基酸 52-248)、SEQ ID NO：101 (人類 4-1-BBL 的胺基酸 80-248) 及 SEQ ID NO：100 (人類 4-1-BBL 的胺基酸 85-248)，但本文亦包括能三聚化的胞外域的其他片段。
如前所述，OX40L 是另一種 II 型跨膜蛋白且為 TNF 配體家族的另一個成員。完整或全長人 OX40L 具有 SEQ ID NO：27 之胺基酸序列。人類 OX40L 序列 (SEQ ID NO：43) 的胺基酸 51-183 形成 OX40L 的細胞外域，但甚至是能形成三聚體的片段。在本發明的具體實施例中，術語「OX40L 之胞外域或其片段」是指具有選自SEQ ID NO：43 (人類 OX40L 之胺基酸 51-183) 或 SEQ ID NO：44 (人類 OX40L 的胺基酸 52-183) 之胺基酸序列的多肽，但本文亦包括能三聚化的胞外域的其他片段。
術語「肽連接子」是指包含一個或多個胺基酸，通常約 2 至 20 個胺基酸的肽。肽連接子為本領域中所知的或敘述於本文。合適的非免疫原性連接子肽例如是 (G4S)n、(SG4)n 或 G4(SG4)n 肽連接子，其中「n」一般介是於 1 和 10 之間的數字，通常介於 1 和 4 之間，特別是 2，即該肽選自由 GGGGS (SEQ ID NO：81)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO：12)、SGGGGSGGGG (SEQ ID NO：45) 及 GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO：46) 所組成之群組，但亦包括序列 GSPGSSSSGS (SEQ ID NO：47)、GSGSGSGS (SEQ ID NO：48)、GSGSGNGS (SEQ ID NO：49)、GGSGSGSG (SEQ ID NO：50)、GGSGSG (SEQ ID NO：51)、GGSG (SEQ ID NO：52)、GGSGNGSG (SEQ ID NO：53)、GGNGSGSG (SEQ ID NO：54) 及 GGNGSG (SEQ ID NO：55)。特別感興趣的肽連接子為 (G4S)1 或 GGGGS (SEQ ID NO：81)、(G4S)2 或 GGGGSGGGGS (SEQ ID NO：12) 及 GSPGSSSSGS (SEQ ID NO：47)，更特別地是 (G4S)2 或 GGGGSGGGGS (SEQ ID NO：12) 及 GSPGSSSSGS (SEQ ID NO：47)。
「融合」或「連接」意謂組分 (例如多肽及該 TNF 配體家族成員之胞外域) 直接或經由一個或多肽連接子由肽鍵連接。
有關人免疫球蛋白輕鍊和重鏈核苷酸序列的一般資訊，請參見：Kabat, E.A. 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD (1991)。
術語「重鏈」在本文中以其原始含義使用，即表示形成抗體的四個多肽鏈中的兩個較大的多肽鏈 (參見，例如，Edelman, G.M. and Gally J.A, J. Exp. Med. 116 (1962) 207-227)。在上下文中的術語「較大」可指分子量、長度和胺基酸數量的任一者。術語「重鏈」獨立於其中所存在之個別抗體域的序列和數量。它僅根據各個多肽的分子量進行指定。
術語「輕鏈」在本文中以其原始含義使用，即表示形成抗體的四個多肽鏈中的兩個較小的多肽鏈 (參見，例如，Edelman, G.M. and Gally J.A, J. Exp. Med. 116 (1962) 207-227)。在上下文中的術語「較小」可指分子量、長度和胺基酸數量的任一者。術語「輕鏈」獨立於其中所存在之個別抗體域的序列和數量。它僅根據各個多肽的分子量進行指定。
如本文中所使用的重鏈及輕鏈之所有恆定區及域之胺基酸位置，係根據描述於 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991) 的 Kabat 編號系統，並本文中稱為「根據 Kabat 編號」。具體而言，Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991) 的 Kabat 編號系統 (參見第 647-660 頁) 用於 κ 及 λ 同型之輕鏈恆定域 CL，而 Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991) 的 Kabat EU 索引編號系統 (參見第 661-723 頁) 用於重鏈恆定域 (CH1、鉸鏈、CH2 及 CH3，其藉由參考「根據 Kabat EU 索引編號」於本文中進一步闡明)。
本文中所使用之的術語「抗體」以最廣義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於全長抗體、單株抗體、多特異性抗體 (例如，雙特異性抗體）及抗體-抗體片段-融合體以及其之組合。
術語「抗體結合位點」表示一對的重鏈可變域及輕鏈可變域。為了確保與抗原的正確結合，這些可變域是同源可變域，即屬於一起。抗體結合位點包含至少三個 HVR (例如在 VHH 的情況下) 或三到六個 HVR (例如在天然存在的情況下，即具有 VH/VL 對的常規抗體)。一般而言，負責抗原結合之抗體的胺基酸殘基形成結合位點。此等殘基通常包含於一對抗體重鏈可變域與對應的抗體輕鏈可變域中。抗體之抗原結合位點包含來自「高變區」或「HVR」的胺基酸殘基。「骨架」或「FR」區為除如本文所定義之高變區殘基之外的彼等可變域區域。因此，抗體之輕鏈及重鏈可變域從 N 端至 C 端包含區域 FR1、HVR1、FR2、HVR2、FR3、HVR3 及 FR4。尤其是，重鏈可變域之 HVR3 區為對抗原結合貢獻最大且限定抗體結合特異性的區域。「功能結合位點」能特異性結合至其標靶。術語「特異性結合至」表示結合位點在活體外分析 (在一個實施例中，在結合分析中) 中結合至其標靶。此類結合分析可為任何分析，只要可偵測到結合事件。舉例而言，其中抗體結合至表面且藉由表面電漿子共振 (SPR) 量測抗原與抗體之結合的分析。或者，可使用橋式 ELISA。
如本文所使用，術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域的每個區域，其包含序列高度可變的胺基酸殘基片段 (「互補決定區」或「CDR」) 及/或形成結構上確定的環 (「高變環」)，及/或含有抗原接觸殘基 (「抗原接觸點」)。一般而言，抗體包含六個 HVR；三個在重鏈可變域 VH (H1、H2、H3) 中，且三個在輕鏈可變域VL (L1、L2、L3)中。
HVR 包括 (a) 高度變異環存在於胺基酸殘基 26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2) 及 96-101 (H3) 處 (Chothia and Lesk, A.M., J. Mol. Biol. 196 (1987) 901-917)； (b) CDR 存在於胺基酸殘基 24-34 (L1)、50-56 (L2)、89-97 (L3)、31-35b (H1)、50-65 (H2) 及 95-102 (H3) 處 (Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242.)； (c) 抗原接觸存在於胺基酸殘基 27c-36 (L1)、46-55 (L2)、89-96 (L3)、30-35b (H1)、47-58 (H2) 及 93-101 (H3) 處 (MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262：732-745 (1996))；及 (d) (a)、(b) 及/或 (c) 之組合，包括胺基酸殘基 46-56 (L2)、47-56 (L2)、48-56 (L2)、49-56 (L2)、26-35 (H1)、26-35b (H1)、49-65 (H2)、93-102 (H3) 及 94-102 (H3)。
除非另有說明，否則可變域中之 HVR 殘基及其他殘基 (例如 FR 殘基) 在本文中係根據 Kabat 等人 (同前述) 編號。
抗體之「類別」係指為其重鏈所具有的恆定域或恆定區之類型，較佳為 Fc 區。有五大類抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干者可進一步分成子類（同型），例如 IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 及 IgA2。對應於不同類別之免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為 α、δ、ε、γ 及 μ。
術語「重鏈恆定區」表示含有恆定域的免疫球蛋白重鏈區域，即對於天然免疫球蛋白為 CH1 域、鉸鏈區、CH2 域和 CH3 域，或對於全長免疫球蛋白為第一恆定區、鉸鏈區、第二恆定區和第三恆定區。在一個實施例中，人類 IgG 重鏈恆定區從 Ala118 延伸至該重鏈的羧基端 (根據 Kabat EU 索引編號)。然而，恆定區的 C 端離胺酸 (Lys447) 可以存在或可不存在 (根據 Kabat EU 索引編號)。術語「恆定區」表示包含兩個重鏈恆定區的二聚體，它們可經由鉸鏈區半胱胺酸殘基彼此共價連接形成鏈間雙硫鍵。
術語「重鏈 Fc 區」表示免疫球蛋白重鏈的 C 端區，其包含至少一部分鉸鏈區 (中間鉸鏈區和下鉸鏈區），第二恆定域 (例如 CH2 域) 及第三恆定域 (例如 CH3 域)。在一個實施例中，人類 IgG 重鏈 Fc 區從 Asp221 或 Cys226 或 Pro230 延伸至重鏈的羧基端 (根據 Kabat EU 索引編號)。因此，Fc 區比恆定區小但在 C 端部分相同。然而，重鏈 Fc 區的 C 端離胺酸 (Lys447) 可存在亦可不存在 (根據 Kabat EU 索引編號)。術語「Fc 區」表示包含兩個重鏈 Fc 區的二聚體，它們可經由鉸鏈區半胱胺酸殘基彼此共價連接形成鏈間雙硫鍵。
抗體的恆定區，更準確而言是 Fc 區 (以及同樣的恆定區) 直接參與補體活化、C1q 結合、C3 活化及 Fc 受體結合。儘管抗體對補體系統的影響取決於某些條件，但與 C1q 的結合是由 Fc 區域中定義的結合位點所引起的。此結合位點在現有技術中是習知的，並描述於例如Lukas, T.J.等人， J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560；Brunhouse, R.和 Cebra, J.J.，Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917；Burton, D.R.等人，Nature 288 (1980) 338-344；Thommesen, J.E.等人，Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004；Idusogie, E.E.等人，J. Immunol. 164 (2000) 4178-4184；Hezareh, M.等人，J. Virol. 75 (2001) 12161-12168；Morgan, A.等人，Immunology 86 (1995) 319-324；及EP 0 307 434。此類結合位點例如為 L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331 及 P329 (根據 Kabat EU 索引編號)。亞類 IgG1、IgG2 和 IgG3 的抗體通常顯示出補體活化、C1q 結合和 C3 活化，而 IgG4 不活化補體系統、不結合 C1q 及不活化 C3。「抗體的 Fc 區域」是技術人員眾所周知的術語，且由抗體之木瓜酶切割為基礎來定義。
如本文中所使用的術語「單株抗體 (monoclonal antibody)」，指代獲自實質上同質抗體群體之抗體，即群體中包含的個別抗體為相同的及/或結合相同抗原決定基，但不包括 (例如) 含有天然生成之突變或產生於單株抗體製劑生產過程中的可能的變異抗體，此等變異體通常以少量存在。與通常包括針對不同決定位 (抗原決定基) 之不同抗體之多株抗體製劑相反，單株抗體製劑之每個單株抗體係針對於抗原上的單一決定位。因此，修飾詞「單株」表示抗體之特徵係獲自實質上同質之抗體群體，且不應解釋為需要藉由任何特定方法產生抗體。例如，單株抗體可藉由多種技藝製備，包括，但不限於融合瘤方法、重組 DNA 方法、噬菌體呈現方法，及使用含有人類免疫球蛋白基因座之全部或一部分之轉殖基因動物的方法。
如本案中所使用，術語「價」表示抗體內存在特定數目個結合位點。因此，術語「二價」、「四價」及「六價」表示抗體分子內分別存在兩個結合位點、四個結合位點及六個結合位點。
「單特異性抗體」表示具有單一結合特異性的抗體，即與一種抗原特異性結合。單特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段 (例如 F(ab') 2) 或其組合 (例如全長抗體加上額外的 scFv 或 Fab 片段)。單特異性抗體不需要是單價的，即單特異性抗體可包含與一種抗原多於一個的特異性結合位點。例如，天然抗體為單特異性但為二價的。
「臼包杵 (knobs into holes)」 二聚模組及其在抗體工程中的用途敘述於 Carter P.; Ridgway J.B.B.; Presta L.G.：Immunotechnology 2 (1996) 73-73(1)。
抗體重鏈中的 CH3 結構域可藉由「臼包杵」技術進行改變，其以數個實例詳細敘述於例如 WO 96/027011、Ridgway, J.B., et al., Protein Eng. 9 (1996) 617-621; 及 Merchant, A.M., et al., Nat. Biotechnol. 16 (1998) 677-681。在此方法中，改變兩個 CH3 域的相互作用表面以增加這兩個 CH3 域的異二聚化，從而增加包含它們的多肽的異二聚化。兩個中的各個 (兩條重鏈的) CH3 域皆可為「杵 (knob)」，而另一個則為「臼 (hole)」。雙硫鍵的導入進一步穩定該異二聚體 (Merchant, A.M., et al., Nature Biotech. 16 (1998) 677-681; Atwell, S., et al., J. Mol. Biol. 270 (1997) 26-35) 並提高產量。
(抗體重鏈的) CH3 域中的突變 T366W 表示為「杵突變」或「突變杵」，且 (抗體重鏈的) CH3 域中的突變 T366S、L368A、Y407V 表示為「臼突變」或「突變臼」 (根據 Kabat EU 索引編號)。亦可使用 CH3 域之間的額外鏈間雙硫鍵 (Merchant, A.M., et al., Nature Biotech. 16 (1998) 677-681)，例如藉由以「杵突變」將 S354C 突變導入重鏈的 CH3 域 (表示為「杵-cys-突變」或「突變杵-cys」)，並藉由以「臼突變」將 Y349C 突變導入重鏈的 CH3 域 (表示為 「臼-cys-突變」或「突變臼-cys」) (根據 Kabat EU 索引編號)。
如本文所使用，術語「域交換」表示在一對抗體重鏈 VH-CH1 片段及其對應的同源抗體輕鏈中，即在抗體 Fab (片段抗原結合) 中，該域序列與天然抗體中的序列不同，因為至少一個重鏈域被其對應的輕鏈域取代，反之亦然。域交換一般存在三種類型：(i) CH1 域與 CL 域的交換，其藉由在輕鏈中的域交換導致 VL-CH1 域序列和藉由在重鏈片段中的域交換導致 VH-CL 域序列 (或具有 VH-CL-鉸鏈-CH2-CH3 域序列的全長抗體重鏈)，(ii) VH 域與 VL 域的域交換，其藉由在輕鏈中的域交換導致 VH-CL 結構域序列和藉由在重鏈片段中的域交換導致 VL-CH1 域序列，及 (iii) 完整輕鏈 (VL-CL) 和完整 VH-CH1 重鏈片段 (「Fab 交換」)，其導致藉由域交換成具有 VH-CH1 域序列的輕鏈和藉由域交換成具有 VL-CL 域序列的重鏈片段 (所有上述域序列均以 N 端到 C 端的方向表示)。
如本文所用，術語「彼此替換」結合相應的重鏈與輕鏈域而言，係指上述域交換。因此，當 CH1 與 CL 域「彼此替換」時，其是指在 (i) 項情況下所述之域交換，及所產生之得重鏈域序列及輕鏈域序列。因此，當 VH 與 VL「彼此替換」時，其是指在 (ii) 項其況下所述之域交換；且當 CH1 與 CL 域「彼此替換」且 VH 與 VL 域「彼此替換」時，其是指在 (iii) 項情況下所述之域交換。包括域互換的雙特異性抗體報導於例如 WO 2009/080251、WO 2009/080252、WO 2009/080253、WO 2009/080254 及 Schaefer, W., et al, Proc. Natl. Acad. Sci USA 108 (2011) 11187-11192。此類抗體通常稱為 CrossMab。
在一個實施例中，多特異性抗體亦包含至少一個 Fab 片段，該 Fab 片段包括如上 (i) 項情況中所述之 CH1 域和 CL 域的域交換，或如上 (ii) 項情況中所述之 VH 和 VL 域的域交換，或如上 (iii) 項情況中所述之 VH-CH1 和 VL-VL 域的域交換。在具有域交叉之多特異性抗體的情況下，特異性結合相同抗原的 Fab 被構建為具有相同域序列。因此，若多特異性抗體中包含多於一個具有域交換的 Fab，該 Fab 特異性結合相同的抗原。
「人源化」抗體係指包含來自非人類 HVR 之胺基酸殘基及來自人類 FR 之胺基酸殘基的抗體。在某些實施例中，人源化抗體將包含基本上所有的至少一個且典型上為兩個可變域，其中所有或基本上所有 HVR (例如CDR) 對應於非人類抗體的彼等 HVR，且所有或實質上所有 FR 對應於人類抗體的彼等 FR。人源化抗體視情況可包含衍生自人抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體 (例如非人抗體) 之「人源化形式 (humanized form)」係指已經歷人源化之抗體。
如本文所使用，術語「重組抗體」表示藉由重組方式，例如重組細胞，來製備、表現、產生或分離的所有抗體 (嵌合抗體、人源化抗體和人類抗體)。此包括從例如 NS0、HEK、BHK 或 CHO 細胞的重組細胞中分離的抗體。
如本文所使用，術語「抗體片段」是指除完整抗體以外的分子，其包含完整抗體的一部分，與該完整抗體所結合之抗原結合，即其為一種功能性片段。抗體片段之實例包括，但不限於 Fv；Fab；Fab'；Fab’-SH；F(ab')2；雙特異性 Fab；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子 (例如 scFv 或 scFab)。
如本文所使用，術語「抗體片段」是指除完整抗體以外的分子，其包含完整抗體的一部分，與該完整抗體所結合之抗原結合，即其為一種功能性片段。抗體片段之實例包括，但不限於 Fv；Fab；Fab'；Fab’-SH；F(ab')2；雙特異性 Fab；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子 (例如 scFv 或 scFab)。
如本文中所使用的「標靶細胞抗原 (target cell antigen)」，係指存在於標靶細胞 (例如腫瘤中的細胞，諸如癌細胞或腫瘤基質之細胞) 之表面上之抗原決定位。在某些實施例中，標靶細胞抗原為腫瘤細胞表面上的抗原。在一個實施例中，標靶細胞抗原選自由纖維母細胞活化蛋白 (FAP)、癌胚抗原 (CEA)、黑色素瘤相關硫酸軟骨素蛋白多醣 (MCSP)、表皮生長因子受體 (EGFR)、CD19、CD20 及 CD33 所組成之群組。特別地，標靶細胞抗原為纖維母細胞活化蛋白 (FAP)。
術語「CD19」是指 B 淋巴細胞抗原 CD19，亦稱為 B 淋巴細胞表面抗原 B4 或 T 細胞表面抗原 Leu-12，包括來自任何脊椎動物來源的任何天然 CD19，包括哺乳動物，例如靈長類動物 (例如，人類)、非人靈長類動物 (例如，食蟹猴) 及囓齒動物 (例如，小鼠及大鼠)，除非另有說明。人類 CD19 之胺基酸序列顯示在 UniProt 登錄編號 P15391 (160 版，SEQ ID NO：103)。該術語涵蓋「全長」未加工人類 CD19 及由細胞中處理所產生的任何形式的人類 CD19，只要本文所報導的抗體與其結合即可。CD19 是一種結構不同的細胞表面受體，表現於人類 B 細胞表面，包括，但不限於前 B 細胞、早期發育的 B 細胞 (即未成熟 B 細胞)、成熟 B 細胞通過最終分化為漿細胞、及惡性 B 細胞。CD19 藉由大多數B細胞前體急性淋巴白血病 (ALL)、非霍奇金淋巴瘤、B 細胞慢性淋巴球白血病 (CLL)、淋巴球前體白血病、毛細胞白血病、常見急性淋巴球白血病及一些 Null-急性淋巴球白血病表現。CD19 在漿細胞上的表現進一步表明其可在分化的 B 細胞腫瘤上表現，例如在多發性骨髓瘤。因此，CD19 抗原是治療非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴球白血病及/或急性淋巴球白血病的免疫療法的靶標。
除非另有說明外，否則術語「纖維母細胞活化蛋白 (FAP)」亦稱為脯胺醯內肽酶 FAP 或 Seprase (EC 3.4.21)，是指來自任何脊椎動物來源之任何天然 FAP，該脊椎動物包括哺乳動物，例如靈長類動物 (例如，人類)、非人靈長類動物 (例如，食蟹猴) 及囓齒動物 (例如，小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」、未處理之 FAP 以及在細胞中處理所產生之任何形式的 FAP。該術語亦涵蓋天然生成之 FAP 變異體，例如，剪接變異體或對偶基因變異體。在一個實施例中，本發明之抗原結合分子能特異性結合人類、小鼠及/或食蟹猴 FAP。人類 FAP 之胺基酸序列顯示在 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 Q12884 (版本 149，SEQ ID NO：17)，或 NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_004451.2 中。人 FAP 之胞外域 (ECD) 從胺基酸位置 26 處延伸至位置 760 處。帶有 His 標籤的人類 FAP ECD 的胺基酸及核苷酸序列分別顯示在 SEQ ID NO：14 及 15 中。小鼠 FAP 之胺基酸序列顯示在 UniProt 登錄號 P97321 (版本 126, SEQ ID NO：18)，或 NCBI RefSeq NP_032012.1 中。小鼠 FAP 之胞外域 (ECD) 從胺基酸位置 26 處延伸至位置 761 處。SEQ ID NO：19 及 20 分別顯示帶有 His 標籤之小鼠 FAP ECD 的胺基酸及核苷酸序列。SEQ ID NO：21 及 22 分別顯示帶有 His 標籤之食蟹猴 FAP ECD 的胺基酸及核苷酸序列。較佳地，本發明之抗 FAP 結合分子與 FAP 之胞外域結合。例示性抗 FAP 結合分子敘述於 WO 2012/020006 中。
術語「癌胚抗原 (CEA)」，亦稱為癌胚抗原相關細胞黏附分子 5 (CEACAM5)，是指來自任何脊椎動物來源的任何天然 CEA，包括來自哺乳動物，例如靈長類動物 (例如，人類)、非人靈長類動物 (例如，食蟹猴) 及囓齒動物 (例如，小鼠及大鼠)。人類 CEA 之胺基酸序列顯示在 UniProt 登錄編號 P06731 (151 版，SEQ ID NO：23)。CEA 早已被鑑定為腫瘤相關抗原 (Gold and Freedman, J Exp. Med., 121:439-462, 1965；Berinstein N. L., J Clin. Oncol.20:2197-2207, 2002)。最初，CEA 被歸類為僅在胎兒組織中表現的蛋白質，但現在已在數種正常成人組織中鑑定出來。這些組織主要起源於上皮細胞，包括胃腸道、呼吸道和泌尿生殖道的細胞，以及結腸、子宮頸、汗腺及***的細胞 (Nap et al., Tumour Biol., 9 (1988) 145-153；Nap et al., Cancer Res., 52 (1992) 2329-2339)。上皮來源的腫瘤及其轉移含有 CEA 作為腫瘤相關抗原。雖然 CEA 本身的存在並不表示轉化為癌細胞，但 CEA 的分佈是指示性的。在正常組織中，CEA 通常表現在細胞的頂端表面 (Hammarström S., Semin. Cancer Biol. 9 (1999) 67-81)，使其無法與血流中的抗體接觸。與正常組織相反，CEA 傾向於在癌細胞的整個表面表現 (Hammarström S., Semin Cancer Biol. 9 (1999) 67-81)。這種表現模式的變化使 CEA 可與抗體結合於癌細胞中。此外，CEA 表現在癌細胞中增加。此外，增加的 CEA 表現促進增加的細胞間黏附，其可導致轉移 (Marshall J., Semin Oncol., 30 (2003) (a Suppl. 8) 30-36)。CEA 表現在各種腫瘤實體中的普遍性通常非常高。與已發表的資料一致，自己在組織樣本中進行的分析證實其高患病率，在大腸直腸癌 (CRC) 約為 95%，胰腺癌約為 90%，胃癌約為 80%，非小細胞肺癌約為 60% (NSCLC，其中它與 HER3 共表現)，且在乳癌中約為 40%；在小細胞肺癌和神經膠質母細胞瘤中發現低表現。
CEA 易從細胞表面裂解，直接或經由***流入腫瘤的血流中。由於此一特性，血清 CEA 水平已被用作診斷癌症和篩檢癌症復發的臨床標誌物，特別是大腸直腸癌 (Goldenberg, D.M., Int. J. Biol. Mark.7 (1992) 183-188；Chau I., et al., J. Clin. Oncol.22 (2004) 420-1429；Flamini, et al., Clin. Cancer Res. 12 (2006) 6985-6988)。
如本文所使用，術語「異源的」表示多肽並不源自特定細胞且分別編碼的核酸已通過 DNA 遞送方法導入該細胞中，例如藉由轉染、電穿孔或轉化方法。因此，對於表現異源多肽的細胞，該異源多肽是人工化多肽，從而此與該多肽是源自不同細胞/生物的天然存在的多肽還是人造多肽無關。
如本文所用，術語「可操作地連接」係指兩個或更多個組分的並置，其中組分處於使其能夠以預期方式起作用的關係。例如，如果啟動子及/或增強子起到調節編碼序列轉錄的作用，則該啟動子及/或該增強子與編碼序列可操作地連接。在某些實施例中，「可操作地連接」的 DNA 序列在一條染色體上是連續且相鄰的。在某些實施例中，例如，當需要連接兩個蛋白質編碼區 (例如分泌前導區和多肽) 時，序列是連續、相鄰的，並且在同一讀框中。在某些實施例中，可操作連接的啟動子位於編碼序列的上游，並且可以與其相鄰。在某些實施例中，例如，關於調節編碼序列之表現的增強子序列，兩種組分儘管不相鄰，但是可操作地連接。如果增強子增加了編碼序列的轉錄，則該增強子可操作地連接至該編碼序列。可操作地連接的增強子可位於編碼序列的上游、內部或下游，且可位於距編碼序列之啟動子相當遠的距離。可操作地連接可透過本發明所屬技術領域中已知的重組方法來完成，例如，使用 PCR 方法及/或在方便的限制位點處連接。如果不存在方便的限制位點，則可以按照常規做法使用合成的寡核苷酸銜接子或接頭。如果內部核醣體進入位點 (IRES) 允許以 5' 末端獨立的方式在內部位置啟動 ORF 的翻譯，則認為其與開放讀框 (ORF) 可操作地連接。
II.組成物及方法
通常，對於感興趣的多肽的重組大規模生產，例如對於治療性多肽，需要穩定地表現和分泌該多肽的細胞。這種細胞被稱為「重組細胞」或「重組生產細胞」，用於生成這種細胞的方法被稱為「細胞株開發」。在細胞株開發過程的第一步中，將合適的宿主細胞 (例如 CHO 細胞) 以適於表現該感興趣多肽的核酸序列轉染。在第二步驟中，基於選擇標記的共表現來選擇穩定表現該感興趣多肽的細胞，該選擇標記已經與編碼感興趣多肽的核酸共轉染。
編碼多肽的核酸，即編碼序列，稱為結構基因。這種結構基因是簡單的資訊，且其表現需要額外的調控元件。因此，通常結構基因被整合到表現卡匣中。表現卡匣在哺乳動物細胞中起作用所需的最小調控元件是在該哺乳動物細胞中起作用的啟動子，其位於結構基因的上游，即 5'，以及在該哺乳動物細胞中起作用的聚腺苷酸化信號序列，其位於結構基因的下游，即 3'。啟動子、結構基因及聚腺苷酸化信號序列以可操作連接的形式排列。
如果感興趣的多肽是由不同 (單體) 多肽組成的異源多聚體多肽，則不僅需要單一表現卡匣，而且需要包含結構基因不同的多個表現卡匣，即對於各個異多聚體多肽的不同 (單體) 多肽，有至少一個表現卡匣。例如，抗體多聚體融合多肽是包含一個輕鏈、一個重鏈、一個重鏈恆定域融合多肽和一個輕鏈恆定域融合多肽的異源多聚體多肽。因此，抗體多聚體融合多肽由四種不同的多肽組成。因此，抗體多聚體融合多肽的表現需要四個表現卡匣，一個用於輕鏈，一個用於重鏈，一個用於重鏈恆定區融合多肽，且一個用於輕鏈恆定區融合多肽。
感興趣的多肽的表現卡匣依次被整合至所謂的「表現載體」中。「表現載體」是提供用於在細菌細胞中擴增該載體以及在哺乳動物細胞中表現所包含的結構基因所需之所有元件的核酸。典型地，表現載體包含原核質體增殖單元，例如對於大腸桿菌，包含複製起點和原核選擇標記，以及真核選擇標記，以及表現所關注結構基因所需的表現卡匣。「表現載體」是將表現卡匣導入哺乳動物細胞的運輸工具。
如先前段落所述，待表現的多肽越複雜，所需的不同表現卡匣的數量也越高。本質上隨著表現卡匣的數量增加，整合到宿主細胞基因體中的核酸的大小也會增加。伴隨地，表現載體的大小也增加。但是，在大約 15 kbps 範圍內，載體大小有實際的上限，超過此上限，處理和處理效率會大大降低。此問題可藉由使用兩個或多個表現載體來解決。因此，表現卡匣可在不同的表現載體之間分樣，每個表現載體僅包含一些表現卡匣。
通常，細胞株開發 (CLD) 依賴於所關注多肽的表現卡匣的隨機整合 (RI) 或靶向整合 (TI)。
II.a 根據本發明的方法
本發明至少部分基於對於抗體多聚體融合之表現的發現，該抗體多聚體融合體為一種包含不同多肽的複雜分子，即異源多聚體，使用經界定的表現卡匣比例使得在哺乳動物細胞 (例如 CHO 或 HEK 細胞) 中有效表現和生產抗體多聚體融合。
本發明至少部分基於對抗體多聚體融合的瞬時和穩定表現的發現，該抗體多聚體融合為一種包含不同多肽的複雜分子，即異源多聚體，使用相同經界定的表現卡匣比例產生最高的表現產率和產物品質。 本發明至少部分基於以下發現：對於由重組哺乳動物細胞表現抗體多聚體融合，使用化學計量比率必須為 1:1:2:1 的抗體重鏈、抗體輕鏈、第一融合多肽和第二融合多肽之表現卡匣的比例是有利的。藉由使用該比例，可以獲得關於產量和副產物形成上之改進的抗體多聚體融合表現。已進一步發現，此比例與表現方法無關，即以相同比例獲得瞬時和穩定細胞株，以及載體組織，即使用單一表現卡匣或多表現卡匣載體。
在下文中，本發明以異源多聚體抗體多聚體融合舉例說明，該異源多聚體抗體多聚體融合包含一對形成人類 FAP 結合位點的抗體重鏈和抗體輕鏈以及第一融合多肽和第二融合多肽，其中在多聚體中是三聚人類 4-1-BBL。這些實驗僅用於說明本發明的概念，不應被解釋為對本發明的限制。同樣可使用任何抗體鏈對和任何多聚多肽。
隨機整合、瞬時轉染、單一表現卡匣載體
在第一組實驗中，進行抗 FAP 抗體-4‑1‑BBL 多聚體融合的瞬時生產。一組載體，各僅包含用於抗體多聚體融合的單一多肽的單一表現卡匣，以不同的定義化學計量比率使用。結果呈現於下表中。HC = 抗體重鏈，LC = 抗體輕鏈，FH = 第一融合多肽，FL = 第二融合多肽，exp.= 實驗編號，eff. 力價 = 有效力價 (力價和主峰的產生)，rel. eff. 力價 = 相對有效力價 (相對力價標準化為 1:1:2:2 的表現卡匣比例)。
exp. HC LC FH FL 力價 [µg/mL] eff. 力價 rel. eff. 力價
1 1 1 1 1 16 14.38 107 %
2 1 1 2 1 19 18.11 135 %
3 1 1 2 2 14 13.38 100 %
4 1 1 3 2 16 14.54 109 %
可看出，1:1:2:1 的表現卡匣比例產生最好的結果，且與 1:1:2:2 表現卡匣比例相比，整體有效力價提高 20%，有效力價提高 35%。
隨機整合、瞬時轉染、多表現卡匣載體
在第二組實驗中，進行抗 FAP 抗體-4‑1‑BBL 多聚體融合的瞬時生產。一組載體，包含一個或兩個表現卡匣，各用於抗體多聚體融合的單一多肽，以不同的定義化學計量比率使用。結果呈現於下表中。HC = 抗體重鏈，LC = 抗體輕鏈，FH = 第一融合多肽，FL = 第二融合多肽，exp.= 實驗編號，eff. 力價 = 有效力價 (力價和主峰的產生)，rel. eff. 力價 = 相對有效力價 (相對力價標準化為 1:1:2:2 的表現卡匣比例)。
exp. 載體 1 載體 2 載體 3 HC LC FH FL 力價 [µg/mL] eff. 力價 rel. eff. 力價
1 1 1 1 1 1 2 1 17 14.6 167%
2 1 2 1 1 1 3 2 12 10.2 117 %
3 1 2 - 1 1 2 2 10 8.7 100 %
4 1 3 - 1 1 3 3 9 7.8 89%
載體 1 = 帶有 HC 和 LC 表現卡匣的雙表現卡匣載體； 載體 2 = 帶有 FH 和 FL 表現卡匣的雙表現卡匣載體； 載體 3 = 帶有 FH 表現卡匣的單表現卡匣載體
可看出，1:1:2:1 的表現卡匣比例產生最好的結果，且與 1:1:2:2 表現卡匣比例相比，整體有效力價提高 40 %，有效力價提高 67 %。
穩定的隨機整合，多表現卡匣載體
在第三組實驗中，進行抗 FAP 抗體-4‑1‑BBL 多聚體融合的穩定生產。一組載體，包含一個或兩個表現卡匣，各用於抗體多聚體融合的單一多肽，以不同的定義化學計量比率使用。結果呈現於下表中。HC = 抗體重鏈，LC = 抗體輕鏈，FH = 第一融合多肽，FL = 第二融合多肽，exp.= 實驗編號，eff. 力價 = 有效力價 (力價和主峰的產生)，rel. eff. 力價 = 相對有效力價 (相對力價標準化為 1:1:2:2 的表現卡匣比例)。
exp. 載體 1 載體 2 載體 3 HC LC FH FL
1 1 1 1 1 1 2 1
2 1 2 - 1 1 2 2
載體 1 = 帶有 HC 和 LC 表現卡匣的雙表現卡匣載體； 載體 2 = 帶有 FH 和 FL 表現卡匣的雙表現卡匣載體； 載體 3 = 帶有 FH 表現卡匣的單表現卡匣載體
對於實驗 1 和實驗 2 的各個比例，培養 60 個具有單一細胞殖株的培養盤。分析培養盤之小孔的回收率、力價及產物品質以及分批培養產物質量 (CE-SDS 中的%主峰)。結果呈現於下表中。
質體比例 力價陽性孔 分佈匯聚 [分類]
5-10% 10-20% 20-50% ≥50%
1:1+1 1748 4085 712 409 132
1:2 786 2658 298 170 57
質體比例 匯聚陽性孔 (≥20%） 篩選之孔的力價陽性孔% 分佈匯聚 [累計] 佔所有孔的 %
≥5% ≥10% ≥20% ≥50%
1:1+1 541 11 33.7 7.9 3.4 0.8
1:2 227 3.8 15.3 2.5 1.1 0.3
可看出，相較於 1:1:2:2 表現卡匣比例 (1:2 載體比例)，對於 1:1:2:1 的表現卡匣比例 (1:1+1 載體比例) 獲得更好的生長 (恢復)、20% 以上匯集的雙倍孔數以及雙倍數量的力價陽性殖株。
更詳細地，選擇是基於匯聚和力價 (＞5% 匯聚及 IgG 陽性)。將所有力價陽性殖株處理到下一個選擇步驟。雙倍數量的殖株源自包含以 1:1:2:1 表現卡匣比例 (1:1+1 載體比例) 轉染的細胞的培養盤。
總共選擇 1056 個殖株用於進一步的 ELISA 再測試分析。其中三分之一為表現卡匣比例為 1:1:2:2 的殖株 (載體比例為 1:2；352 個殖株)，三分之二為表現卡匣比例為 1:1:2:1 (載體比例 1:1+1，704 個殖株)。
第二個選擇基於 ELISA 結合及橋接測定。
在總共 1056 個殖株中，發現 220 個殖株表現抗體多聚體融合 (主要產物) 的兩個部分。衍生自 1:1:2:1 (載體比例 1:1+1) 表現卡匣比例的殖株多四倍：20% (45 個殖株) 為來自表現卡匣比例 1:1:2:2 (載體比例 1:2) 而 80% (175 個克隆) 為來自表現卡匣比率 1:1:2:1 (質體比率 1:1:1 (1:1+1))。
總之： 以 1:1:2:2：(質體比例1:2) 的表現盒比例所獲得之 (45/352)*100%=12.78% 殖株在 ELISA 複測中顯示具有良好的產物品質， 然而 以 1:1:2:1 (載體比例為 1:1:1) 的表現卡匣比例所獲得之 (175/704)*100%=24.86% 殖株在 ELISA 複測中顯示良好的產物品質。
因此，在穩定轉染中也證實在瞬時轉染中所獲得的結果。
隨機整合、瞬時轉染、單一表現卡匣載體
在第四組實驗中，進行抗 CEA 抗體-4‑1‑BBL 多聚體融合的瞬時生產。以不同定義的化學計量比率使用一組載體，各載體包含單一表現卡匣。結果呈現於下表中。HC = 抗體重鏈，LC = 抗體輕鏈，FH = 第一融合多肽，FL = 第二融合多肽，exp.= 實驗編號，eff. 力價 = 有效力價 (力價和主峰的產生)，rel. eff. 力價 = 相對有效力價 (相對力價標準化為 1:1:2:2 的表現卡匣比例)。
exp. HC LC FH FL 力價 [µg/mL] eff. 力價 rel. eff. 力價
1 1 1 1 1 144 108 107
2 1 1 2 1 148 124 124
3 1 1 2 2 117 101 100
4 2 1 2 2 62 53 52
5 1 1 3 2 121 103 102
6 2 1 3 1 92 80 80
可看出，1:1:2:1 的表現卡匣比例產生最好的結果，且與 1:1:2:2 表現卡匣比例相比，整體有效力價提高 15 %，有效力價提高 24 %。
靶向整合、穩定轉染、雙 RMCE
在第五組實驗中，使用靶向整合進行抗 FAP 抗體-4‑1‑BBL 多聚體融合的穩定生產。已經使用一組載體，即前載體和後載體。使用雙重組酶介導的盒式交換反應與 Cre 重組酶進行靶向整合。前載體和後載體包含如下表中概述的不同表現卡匣，其中 HC = 抗體重鏈，LC = 抗體輕鏈，FH = 第一融合多肽，FL = 第二融合多肽。
exp. 前載體 後載體
1 FH FL FL - HC LC -
2 FH FL FH FL HC LC -
3 FH FL FH FL HC LC LC
4 FH FH FL - HC LC -
基於分別包含在前載體和後載體中的不同數量的表現卡匣，使用不同的定義的化學計量比率。從穩定轉染細胞庫中所獲得的結果列於下表 (n=2)。HC = 抗體重鏈，LC = 抗體輕鏈，FH = 第一融合多肽，FL = 第二融合多肽，exp.= 實驗編號，eff. 力價 = 有效力價 (力價和主峰的產生)，rel. eff. 力價 = 相對有效力價 (相對力價標準化為 1:1:2:2 的表現卡匣比例)。
exp. HC LC FH FL 力價 [g/L] eff. 力價 rel. eff. 力價
1 1 1 1 2 0.60 0.48 68
2 1 1 2 2 0.89 0.71 100
3 1 2 2 2 0.91 0.43 61
4 1 1 2 1 1.29 1.03 145
可以看出，1:1:2:1 的表現卡匣比率導致最佳結果，且與 1:1:2:2 表現卡匣比例相比，整體有效力價高 45%，有效力價高 45%。
隨機整合、瞬時轉染、單一表現卡匣載體
在第六組實驗中，進行了抗 CD19 抗體-4‑1‑BBL 多聚體融合的瞬時生產。一組載體，各僅包含用於抗體多聚體融合的單一多肽的單一表現卡匣，以不同的定義化學計量比率使用。結果呈現於下表中。HC = 抗體重鏈，LC = 抗體輕鏈，FH = 第一融合多肽，FL = 第二融合多肽，exp.= 實驗編號，eff. 力價 = 有效力價 (力價和主峰的產生)，rel. eff. 力價 = 相對有效力價 (相對力價標準化為 1:1:2:2 的表現卡匣比例)。
exp. HC LC FH FL 力價 [µg/mL] eff. 力價 rel. eff. 力價
1 1 1 1 1 14 12.04 114 %
2 1 1 2 1 16 12.96 123 %
3 1 1 2 2 16 10.56 100 %
4 1 1 3 2 12 9.6 91 %
可看出，1:1:2:1 的表現卡匣比例產生最好的結果，且與 1:1:2:2 表現卡匣比例相比，整體有效力價提高 9 %，有效力價提高 23 %。
摘述
因此，獨立於用於生成細胞株的方法，1:1:2:1 (HC:LC:FH:FL) 的表現卡匣比例造成改善的產物品質，即有效力價。此外，在用於表現抗體多聚體融合的合適穩定殖株的數量上可獲得增加。
II.b 與 TNF 分子相互作用的配體
與 TNF (腫瘤壞死因子) 受體超家族分子相互作用的配體在免疫系統的組織和功能中具有關鍵作用。在調節例如免疫反應、造血和形態發生等正常功能的同時，TNF 家族配體 (亦稱為細胞介素) 在腫瘤發生、移植排斥、感染性休克、病毒複製、骨吸收、類風濕性關節炎和糖尿病中扮演重要的角色 (Aggarwal，2003)。TNF 配體家族包含 18 個基因，其編碼 19 個 II 型 (即細胞內 N 端和細胞外 C 端) 跨膜蛋白，其特徵為存在一個保守的 C 端域，稱為「TNF 同源域」 (THD)。該域負責受體結合，因此對 TNF 配體家族成員的生物活性至關重要。家族成員之間的序列同一性約為 20-30% (Bodmer，2002)。TNF 配體家族的成員以自組裝、非共價三聚體發揮其生物學功能 (Banner et al, Cell 73 (1993) 431-445)。因此，TNF 家族配體形成能夠結合並活化 TNFR 超家族之對應受體的三聚體。
4-1-BB (CD137) 是 TNF 受體超家族的一員，首先已被鑑定為一種藉由 T 細胞活化誘導表現的分子 (Kwon and Weissman, 1989)。隨後的研究證實，4-1-BB 在 T 和 B 淋巴細胞 (Snell et al., 2011; Zhang et al., 2010)、NK 細胞 (Lin et al., 2008)、NKT 細胞 (Kim et al., 2008)、單核細胞 (Kienzle and von Kempis, 2000；Schwarz et al., 1995)、嗜中性球 (Heinisch et al., 2000)、肥大細胞 (Nishimoto et al., 2005) 及樹突狀細胞以及非造血來源細胞，例如內皮細胞和平滑肌細胞 (Broll et al., 2001；Olofsson et al., 2008) 中的表現。4-1-BB 在不同細胞類型中的表現主要藉由各種刺激信號誘導和驅動，例如 T 細胞受體 (TCR) 或 B 細胞受體觸發，以及通過促炎性細胞介素之共刺激分子或受體所誘導的信號傳導 (Diehl et al., 2002；von Kempis et al., 1997；Zhang et al., 2010)。
4-1-BB 配體 (4-1-BBL 或 CD137L) 的表現受到更多限制，並在例如 B 細胞、樹突細胞 (DC) 和巨噬細胞之專職抗原呈現細胞 (APC)上觀察到。4-1-BBL 的誘導表現是 T 細胞 (包括 αβ 和 γδ T 細胞子集) 及內皮細胞的特徵 (評論於 Shao and Schwarz, 2011)。
已知 CD137 信號傳導可刺激 NK 細胞的 IFNγ 分泌和增殖 (Buechele et al., 2012；Lin et al., 2008; Melero et al., 1998) 以及如藉由其對於分泌細胞介素之增加的存活及能力以及上調共刺激分子所指出的促進 DC 活化 (Choi et al., 2009；Futagawa et al., 2002；Wilcox et al., 2002)。然而，CD137 的最佳特徵是作為一種共刺激分子，其在 T 細胞的 CD4+ 及 CD8+ 子集中調節經 TCR 誘導的活化。與 TCR 觸發相結合，促效性4-1-BB 特異性抗體可增強 T 細胞的增殖、刺激淋巴因子分泌並降低 T 淋巴細胞對經活化誘導之細胞死亡的敏感性 (評論於 Snell et al., 2011)。
與 4-1-BB 抗體在活體外對 T 細胞的這些共刺激作用一致，在許多實驗性腫瘤模型中，它們對荷瘤小鼠的給藥導致有效的抗腫瘤作用 (Melero et al., 1997；Narazaki et al., 2010)。然而，4-1-BB 通常僅在與其他免疫調節化合物 (Curran et al., 2011；Guo et al., 2013；Morales-Kastresana et al., 2013；Teng et al., 2009；Wei et al., 2013)，化療試劑 (Ju et al., 2008；Kim et al., 2009)，腫瘤特異性疫苗接種 (Cuadros et al., 2005；Lee et al., 2011) 或放射線療法 (Shi and Siemann, 2006) 聯合給藥時才表現出其作為抗腫瘤劑的效力。活體內耗竭實驗證實，CD8+ T 細胞在 4-1-BB 特異性抗體的抗腫瘤作用中扮演重要角色。然而，依據腫瘤模型或包括抗 4-1-BB 在內的聯合治療，已報導其他類型的細胞如 DC、NK 細胞或 CD4+ T 細胞 (Melero et al., 1997；Murillo et al., 2009；Narazaki et al., 2010；Stagg et al., 2011)。
除了對不同淋巴細胞子集的直接作用外，4-1-BB 激動劑亦可通過在腫瘤血管內皮上的細胞間黏附分子 1 (ICAM1) 及血管細胞黏附分子 1 (VCAM1) 之 4-1-BB 介導的上調，在腫瘤中誘導活化 T 細胞的浸潤和滯留 (Palazon et al., 2011)。
4-1-BB 觸發亦可逆轉由暴露於可溶性抗原引起的 T 細胞無反應狀態，這可能有助於破壞腫瘤微環境或慢性感染期間的免疫耐受性 (Wilcox et al., 2004)。
似乎 4-1-BB 激動性抗體的活體內免疫調節特性需要抗體分子上存在野生型 Fc 部分，從而暗示 Fc 受體結合是此類試劑藥理活性所需的重要事件，如針對 TNFR 超家族的其他凋亡誘導或免疫調節成員的特異性激動性抗體所描述的 (Li and Ravetch, 2011；Teng et al., 2009)。然而，具有功能活性 Fc 域的 4-1-BB 特異性激動性抗體的全身給藥亦會誘導與肝毒性相關的 CD8+ T 細胞的擴增 (Dubrot et al., 2010)，在小鼠中沒有功能性 Fc 受體時，這種情況會減少或顯著改善。在人類臨床試驗中 (ClinicalTrials.gov, NCT00309023)，每三週投予一次 Fc 潛能 4-1-BB 激動性抗體 (BMS-663513)，持續 12 週在患有黑色素瘤、卵巢癌或腎細胞癌患者中誘導疾病的穩定。然而，另一項試驗中提供的相同抗體 (NCT00612664) 造成 4 級肝炎而導致試驗終止 (Simeone and Ascierto, 2012)。
整體而言，可用的臨床前和臨床資料清楚地證實，對於有效的 4-1-BB 激動劑有很高的臨床需求。然而，新一代候選藥物不僅應該有效地與造血細胞和內皮細胞之表面的 4-1-BB 結合，而且還能通過與 Fc 受體結合以外的機制達成，以避免無法控制的副作用。後者可通過優先結合腫瘤特異性或腫瘤相關部分並使其寡聚化來實現。
已製造出由 4-1-BB 配體的一個細胞外域和單鏈抗體片段 (Mueller et al., 2008；Hornig et al., 2012) 或融合到重鏈 C 端的單一 4-1-BB 配體 (Zhang et al, 2007) 所構成的融合蛋白。WO 2010/010051 揭示融合蛋白的生成，該融合蛋白由三個相互連接並與抗體部分融合的 TNF 配體胞外域組成。
然而，仍然需要新的抗原結合分子，其將能較佳結合腫瘤特異性或腫瘤相關性標靶的部分與能形成共刺激性 TNF 配體三聚體的部分組合，並具有足夠的穩定性以用於藥學。本發明的抗原結合分子包含兩者且令人驚訝地其等提供一種三聚體，因此是具有生物活性的 TNF 配體，儘管三聚化 TNF 配體胞外域之一位於與該分子的其他兩個 TNF 配體胞外域不同的另一多肽上。
II.c 重組方法及組成物
可使用重組方法和組成物來生產抗體，例如 US 4,816,567 中所述。對於這些方法，提供一個或多個編碼抗體之分離的核酸。
在一個方面，提供一種製造抗體多聚體融合多肽的方法，其中該方法包括在適合表現該抗體多聚體融合多肽的條件下，培養包含編碼用根據本發明之方法所獲得之抗體多聚體融合多肽的核酸的宿主細胞，並視情況回收來自宿主細胞 (或宿主細胞培養基) 之抗體多聚體融合多肽。
對於抗體多聚體融合多肽的重組生產，編碼該抗體多聚體融合多肽的核酸，例如，如本文中所述，被分離並***一種或多種載體中，用於在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此類核酸可使用慣用程序容易地分離和定序，或藉由重組方法產生，或藉由化學合成獲得。
通常，對於所關注多肽的重組大規模生產，例如治療性抗體多聚體融合多肽，需要穩定表現和分泌該多肽的細胞。這種細胞被稱為「重組細胞」或「重組生產細胞」，用於生成這種細胞的方法被稱為「細胞株開發」。在細胞株開發過程的第一步驟中，合適的宿主細胞，例如 CHO 細胞，以適於表現該所關注多肽的核酸序列轉染。在第二步驟中，基於選擇標記的共表現來選擇穩定表現該感興趣多肽的細胞，該選擇標記已經與編碼感興趣多肽的核酸共轉染。
編碼多肽的核酸，即編碼序列，稱為結構基因。這種結構基因是簡單的資訊，且其表現需要額外的調控元件。因此，通常結構基因被整合到所謂的表現卡匣中。表現卡匣在哺乳動物細胞中起作用所需的最小調控元件是在該哺乳動物細胞中起作用的啟動子，其位於結構基因的上游，即 5'，以及在該哺乳動物細胞中起作用的聚腺苷酸化信號序列，其位於結構基因的下游，即 3'。啟動子、結構基因及聚腺苷酸化信號序列以可操作連接的形式排列。
如先前段落所述，待表現的多肽越複雜，所需的不同表現卡匣的數量也越高。本質上隨著表現卡匣的數量增加整合到宿主細胞基因體中的核酸的大小也會增加。伴隨地，表現載體的大小也增加。然而，在大約 15 kbps 範圍內，載體大小有實際的上限，超過此上限，處理和處理效率會大大降低。此問題可藉由使用兩個或多個表現載體來解決。因此，表現卡匣可在不同的表現載體之間分樣，每個表現載體僅包含一些表現卡匣，導致尺寸減小。
用於生成表現異源多肽 (例如抗體多聚體融合多肽) 之重組細胞的細胞株開發 (CLD)，採用核酸的隨機整合 (RI) 或靶向整合 (TI)，該核酸包含表現和生產所關注異源抗體多聚體融合多肽所需之各自的表現卡匣。
使用 RI，一般而言，幾個載體或其片段整合到細胞的基因體的相同或不同的基因座處。
通常，使用 TI，將包含不同表現卡匣的轉殖基因的單拷貝整合到宿主細胞基因體中的預定「熱點」。
用於表現 (醣基化) 抗體的合適宿主細胞通常源自多細胞生物，例如 脊椎動物。
II.d 宿主細胞
任何適於懸浮液中生長的哺乳動物細胞株均可用於根據本發明之方法中。此外，獨立於整合方法，即對於 RI 和 TI，可使用任何哺乳動物宿主細胞。
可用的哺乳動物宿主細胞株的實例為人類羊水細胞 (例如 CAP-T 細胞，例如敘述於 Woelfel, J. et al., BMC Proc. 5 (2011) P133)；經 SV40 (COS-7) 轉化的猴腎 CV1 系；人類胚腎系 (HEK293 或 HEK293T 細胞，例如敘述於 Graham, F.L. et al., J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74 )；幼地鼠腎細胞 (BHK)；小鼠睾丸支持細胞 (TM4 細胞，例如敘述於 Mather, J.P.，Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252)；猴腎細胞 (CV1)；非洲綠猴腎細胞 (VERO-76)；人類子宮頸癌細胞 (HELA)；犬腎細胞 (MDCK)；Buffalo 大鼠肝細胞 (BRL 3A)；人類肺細胞 (W138)；人類肝細胞 (Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤細胞 (MMT 060562)；TRI 細胞 (例如敘述於 Mather, J.P. et al., Annals N.Y.Acad. Sci. 383 (1982) 44-68 所述)；MRC 5 細胞；及 FS4 細胞。其他可用的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞，包括 DHFR-CHO 細胞 (Urlaub, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220)；及骨髓瘤細胞系，例如 Y0、NS0 及 Sp2/0。有關某些適用於抗體生產的哺乳動物宿主細胞系的綜述，參見例如：Yazaki, P. 和 Wu, A.M.，Methods in Molecular Biology，第 248 卷，Lo, B.K.C. 主編，Humana Press，Totowa，NJ (2004)，第 255-268 頁。
在一個實施例中，哺乳動物宿主細胞為例如，中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞 (例如 CHO K1、CHO DG44 等)、人類胚腎 (HEK) 細胞、淋巴樣細胞 (例如 Y0、NS0、Sp20 細胞)或人類羊水細胞 (例如 CAP-T 等)。在一個較佳實施例中，該哺乳動物宿主細胞為 CHO 細胞。
靶向整合允許將外源核苷酸序列整合到哺乳動物細胞基因體的預定位點。在某些實施例中，靶向整合藉由識別一種或多種重組識別序列 (RRS) 的重組酶介導，該重組識別序列存在於基因體和待整合的外源核苷酸序列中。在某些實施例中，靶向整合由同源重組介導。
「重組辨識序列」 (RRS) 是由重組酶辨識的核苷酸序列，並且對於重組酶介導的重組事件是必要和充分的。RRS 可用於定義核苷酸序列中發生重組事件的位置。
在某些實施例中，RRS 可由 Cre 重組酶辨識。在某些實施例中，RRS 可由 FLP 重組酶辨識。在某些實施例中，RRS 可由 Bxb1 整合酶辨識。在某些實施例中，RRS 可由 φC31 整合酶辨識。
在某些實施例中，當 RRS 為 LoxP 位點時，細胞需要 Cre 重組酶進行重組。在某些實施例中，當 RRS 為 FRT 位點時，細胞需要 FLP 重組酶進行重組。在某些實施例中，當 RRS 為 Bxb1 attP 或 Bxb1 attB 位點時，細胞需要 Bxb1 整合酶進行重組。在某些實施例中，當 RRS 為 φC31 attP 位點或 φC31 attB 位點時，細胞需要 φC31 整合酶進行重組。可使用包含酶的編碼序列或作為蛋白質或 mRNA 的表現載體將重組酶引入細胞中。
關於 Ti，任何已知的或未來的適用於 TI 的哺乳動物宿主細胞均可用於本發明，該宿主細胞包含整合在基因體基因座內之單一位點上的如本文所述之安放位點。這種細胞被稱為哺乳動物 TI 宿主細胞。在某些實施例中，哺乳動物 TI 宿主細胞是包含如本文所述之安放位點的倉鼠細胞、人類細胞、大鼠細胞或小鼠細胞。在一個較佳實施例中，該哺乳動物 TI 宿主細胞為 CHO 細胞。在某些實施例中，哺乳動物 TI 宿主細胞是中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞、CHO K1 細胞、CHO K1SV 細胞、CHO DG44 細胞、CHO DUKXB-11 細胞、CHO K1S 細胞或 CHO K1 M 細胞，該細胞包含整合在基因體基因座內的單一位點處的如本文所述的安放位點。
在某些實施例中，哺乳動物 TI 宿主細胞包含整合的安放位點，其中該安放位點包含一個或多個重組識別序列 (RRS)。RRS 可被重組酶識別，例如 Cre 重組酶、FLP 重組酶、Bxb1 整合酶或 φC31 整合酶。RRS 可相互獨立地選自由以下所組成之群組：LoxP 序列、LoxP L3 序列、LoxP 2L 序列、LoxFas 序列、Lox511 序列、Lox2272 序列、Lox2372 序列、Lox5171 序列、Loxm2 序列、Lox71 序列、Lox66 序列、FRT 序列、Bxb1 attP 序列、Bxb1 attB 序列、φC31 attP 序列及 φC31 attB 序列。如果必須存在多個 RRS，則在選擇不同 RRS 的情況下，每個序列的選擇取決於另一個。
在某些實施例中，安放位點包含一個或多個重組識別序列 (RRS)，其中該 RRS 可被重組酶識別。在某些實施例中，整合的安放位點包含至少兩個 RRS。在某些實施例中，整合的安放位點包含三個 RRS，其中第三 RRS 位於第一 RRS 和第二 RRS 之間。在某些較佳實施例中，所有三個 RRS 均不同。在某些實施例中，安放位點包括第一、第二和第三 RRS，及位於第一和第二 RRS 之間的至少一個選擇標記，且第三 RRS 不同於第一及/或第二 RRS。在某些實施例中，安放位點進一步包含第二選擇標記，且該第一和第二選擇標記不同。在某些實施例中，安放位點進一步包含第三選擇標記及內部核醣體進入位點 (IRES)，其中該 IRES 與第三選擇標記可操作地連接。在某些實施例中，第三選擇標記可不同於第一或第二選擇標記。
儘管本文以 HEK 和 CHO 細胞舉例說明本發明，但這僅是為了舉例說明本發明而不應以任何方式解釋為限制。本發明的真正範圍在申請專利範圍中闡述。
適用於根據本發明之方法的例示性哺乳動物 TI 宿主細胞是具有整合在其基因體基因座內之單一位點的安放位點的 CHO 細胞，其中該安放位點包含三個異種特異性 loxP 位點，用於 Cre 重組酶介導的 DNA 重組。
在此實例中，該異種特異性 loxP 位點為 L3、LoxFas 及 2L (see e.g. Lanza et al., Biotechnol. J. 7 (2012) 898-908；Wong et al., Nucleic Acids Res. 33 (2005) e147)，其中 L3 及 2L 分別位於 5' 端和 3' 端之安放位點的側邊，而 LoxFas 位於 L3 和 2L 位點之間。安放位點進一步包含雙順反子單元，經由 IRES 將選擇標記的表現與螢光 GFP 蛋白的表現聯繫起來，允許藉由正選擇穩定安放位點，以及在轉染和 Cre-重組 (負選擇) 後選擇不存在的位點。綠色螢光蛋白 (GFP) 用於監測 RMCE 反應。
上一段落中概述的安放點的這種配置允許同時整合兩個載體，例如包含 L3 和 LoxFas 位點的所謂前載體和包含 LoxFas 和 2L 位點的後載體。不同於安放位點的選擇標記基因的功能元件可分佈在兩個載體：啟動子之間，且起始密碼子可位於前載體上，而編碼區和多腺苷酸信號位於後載體上。只有來自兩個載體的該核酸的正確重組酶介導的整合才能誘導針對各自選擇劑的抗性。
通常，哺乳動物 TI 宿主細胞是包含整合在哺乳動物細胞基因體之基因座內單一位點處之安放位點的哺乳動物細胞，其中該安放位點包含位於至少一個第一選擇標記側翼的第一和第二重組識別序列，以及位於第一重組識別序列和第二重組識別序列之間的第三重組識別序列，且所有重組識別序列都不同。
該選擇標記可選自由下列所組成之群組：胺基糖苷磷酸轉移酶 (APH) (例如，潮黴素磷酸轉移酶 (HYG)、新黴素和 G418 APH)、二氫葉酸還原酶 (DHFR)、胸苷激酶 (TK)、谷胺醯胺合成酶 (GS)、天冬醯胺合成酶、色胺酸合成酶 (吲哚)、組胺醇脫氫酶 (組胺醇 D) 以及編碼對嘌呤黴素、殺稻瘟菌素、博萊黴素、腐草黴素、氯黴素、Zeocin 及黴酚酸的抗性的基因。選擇標記亦可為選自由下列所組成之群組的螢光蛋白：綠色螢光蛋白 (GFP)、增強型 GFP (eGFP)、合成 GFP、黃色螢光蛋白 (YFP)、增強型 YFP (eYFP)、青色螢光蛋白 (CFP)、mPlum、mCherry、tdTomato、mStrawberry、J-red、DsRed-單體、mOrange、mKO、mCitrine、Venus、YPet、Emerald6、CyPet、mCFPm、Cerulean 及 T-Sapphire。
外源核苷酸序列是不源自特定細胞但可藉由 DNA 遞送方法 (例如通過轉染、電穿孔或轉化方法) 導入該細胞的核苷酸序列。在某些實施例中，哺乳動物 TI 宿主細胞包含整合在哺乳動物細胞之基因體中的一個或多個整合位點處的至少一個安放位點。在某些實施例中，該安放位點被整合於哺乳動物細胞之基因體的特定基因座內的一個或多個整合位點處。
在某些實施例中，整合的安放位點包含至少一個選擇標記。在某些實施例中，整合的安放位點包含第一 RRS、第二 RRS 及第三 RRS 及至少一個選擇標記。在某些實施例中，選擇標記位於第一 RRS 和第二 RRS 之間。在某些實施例中，兩個 RRS 位於至少一個選擇標記之側翼，即第一 RRS 位於 5’ (上游)，且第二 RRS 位於選擇標記的 3’ (下游)。在某些實施例中，第一 RRS 與選擇標記之 5’ 端相鄰，並且第二 RRS 與選擇標記之 3’ 端相鄰。在某些實施例中，安放位點包含第一 RRS、第二 RRS 及第三 RRS，以及位於第一 RRS 和第三 RRS 之間的至少一個選擇標記。
在某些實施例中，選擇標記位於第一 RRS 和第二 RRS 之間，並且這兩個側翼 RRS 不同。在某些較佳實施例中，第一側翼 RRS 為 LoxP L3 序列，且第二側翼 RRS 為 LoxP 2L 序列。在某些實施例中，LoxP L3 序列位於選擇標記之 5’，且 LoxP 2L 序列位於選擇標記之 3’。在某些實施例中，第一側翼 RRS 為野生型 FRT 序列，並且第二側翼 RRS 為突變型 FRT 序列。在某些實施例中，第一側翼 RRS 為 Bxb1 attP 序列，並且第二側翼 RRS 為 Bxb1 attB 序列。在某些實施例中，第一側翼 RRS 為 φC31 attP 序列，並且第二側翼 RRS 為 φC31 attB 序列。在某些實施例中，兩個 RRS 處於相同的方向。在某些實施例中，兩個 RRS 均處於正向或反向。在某些實施例中，兩個 RRS 處於相反的方向。
在某些實施例中，整合的安放位點包含第一和第二選擇標記，其側接兩個 RRS，其中第一選擇標記不同於第二選擇標記。在某些實施例中，兩個選擇標記均相互獨立地選自由以下項所組成之群組：麩醯胺合成酶選擇標記、胸苷激酶選擇標記、HYG 選擇標記及嘌呤黴素抗性選擇標記。在某些實施例中，整合的安放位點包含胸苷激酶選擇標記及 HYG 選擇標記。在某些實施例中，第一選擇標記選自由下列所組成之群組：胺基糖苷磷酸轉移酶 (APH) (例如，潮黴素磷酸轉移酶 (HYG)、新黴素和 G418 APH)、二氫葉酸還原酶 (DHFR)、胸苷激酶 (TK)、麩醯胺合成酶 (GS)、天冬醯胺酸合成酶、色胺酸合成酶 (吲哚)、組胺醇脫氫酶 (組胺醇 D) 以及編碼對嘌呤黴素、殺稻瘟菌素、博萊黴素、腐草黴素、氯黴素、Zeocin 或黴酚酸的抗性的基因，且第二選擇標記選自由下列所組成之群組：GFP、eGFP、合成 GFP、YFP、eYFP、CFP、mPlum、mCherry、tdTomato、mStrawberry、J-red、DsRed 單體、mOrange、mKO、mCitrine、Venus、YPet、Emerald、CyPet、mCFPm、Cerulean、及 T-Sapphire 螢光蛋白。在某些實施例中，第一選擇標記為麩醯胺合成酶選擇標記，且第二選擇標記為 GFP 螢光蛋白。在某些實施例中，處於兩個選擇標記之側翼的這兩個 RRS 不同。
在某些實施例中，選擇標記可操作地連接至啟動子序列。在某些實施例中，選擇標記可操作地連接至 SV40 啟動子。在某些實施例中，選擇標記可操作地連接至人類巨細胞病毒 (CMV) 啟動子。
II.e 靶向整合
根據本發明的生成重組哺乳動物細胞的一種方法是靶向整合 (TI)。
在靶向整合中，採用位點特異性重組將外源核酸導入哺乳動物 TI 宿主細胞基因體中的特定基因座。此為一種酵素性過程，其中基因體中整合位點處的序列被交換成外源核酸。用於實現此類核酸交換的一種系統是 Cre-lox 系統。催化交換的酶是 Cre 重組酶。要交換的序列由基因體和外源核酸中兩個 lox(P) 位點的位置定義。這些 lox(P) 位點被 Cre 重組酶識別。不需要更多，即不需要 ATP 等。最初，Cre-lox 系統是在噬菌體 P1 中發現。
Cre-lox 系統在不同的細胞類型中運行，如哺乳動物、植物、細菌和酵母菌。
在一個實施例中，編碼抗體多聚體融合多肽的外源核酸已藉由單或雙重組酶介導的盒交換 (RMCE) 整合到哺乳動物 TI 宿主細胞中。從而獲得重組哺乳動物細胞，例如重組 CHO 細胞，其中確定的和特異性表現卡匣序列已整合至基因體中的單一基因座中，其反過來導致抗體多聚體融合多肽的有效表現和生產。
Cre-LoxP 位點特異性重組體系已廣泛用於許多生物學實驗系統中。Cre 重組酶是一種 38 kDa 位點特異性 DNA 重組酶，其可識別 34 bp LoxP 序列。Cre 重組酶源自噬菌體 P1，且屬於酪胺酸家族位點特異性重組酶。Cre 重組酶可以介導 LoxP 序列之間的分子內和分子間重組。LoxP 序列由 8 bp 非回文核心區側接兩個 13 bp 的反向重複序列構成。Cre 重組酶與 13 bp 重複序列結合，從而介導 8 bp 核心區內的重組。Cre-LoxP 介導的重組高效發生，且無需任何其他宿主因子。如果將兩個 LoxP 序列以相同的方向置於同一核苷酸序列上，則 Cre 重組酶介導的重組將切除位於兩個 LoxP 序列之間的 DNA 序列，使其成為共價閉合環。如果兩個 LoxP 序列位於同一核苷酸序列的反向位置上，則 Cre 重組酶介導的重組將顛倒位於兩個序列之間的 DNA 序列的方向。如果兩個 LoxP 序列位於兩個不同 DNA 分子上，且如果一個 DNA 分子是環狀，則 Cre 重組酶介導的重組將導致環狀 DNA 序列的整合。
術語「匹配 RRS」表示兩個 RRS 之間發生重組。在某些實施例中，兩個匹配 RRS 相同。在某些實施例中，兩個 RRS 均為野生型 LoxP 序列。在某些實施例中，兩個 RRS 均為突變型 LoxP 序列。在某些實施例中，兩個 RRS 均為野生型 FRT 序列。在某些實施例中，兩個 RRS 均為突變型 FRT 序列。在某些實施例中，兩個匹配 RRS 為不同序列，但是可藉由相同的重組酶進行辨識。在某些實施例中，第一匹配 RRS 為 Bxb1 attP 序列，且第二匹配 RRS 為 Bxb1 attB 序列。在某些實施例中，第一匹配 RRS 為 φC31 attB 序列，且第二匹配 RRS 為 φC31 attB 序列。
在本發明的某些實施例中，使用雙載體組合採用「雙質體 RMCE」策略或「雙 RMCE」。例如，但並非限制性地，整合之安放位點可包含三個 RRS，例如其排列方式為第三 RRS (「RRS3」) 存在於第一 RRS (「RRS1」) 與第二 RRS (「RRS2」) 之間，而第一載體包含兩個 RRS，這兩個 RRS 匹配整合之外源核苷酸序列上的第一 RRS 和第三 RRS，且第二載體包含兩個 RRS，這兩個 RRS 匹配整合之外源核苷酸序列上的第三 RRS 和第二 RRS。
雙質體 RMCE 策略涉及使用三個 RRS 位點同時進行兩個獨立的 RMCE。因此，使用雙質體 RMCE 策略在哺乳動物 TI 宿主細胞中的安放位點包括第三 RRS 位點 (RRS3)，其與第一 RRS 位點 (RRS1) 或第二 RRS 位點 (RRS2) 沒有交叉活性。要靶向的兩個質體需要相同的側翼 RRS 位點用以有效靶向，一個質體 (前) 位於 RRS1 及 RRS3 的側邊，另一個 (後) 位於 RRS3 及 RRS2。此外，雙質體 RMCE 中需要兩個選擇標記。一個選擇標記表現卡匣被分樣成兩部分。前質體將包含啟動子，之後是起始密碼子和 RRS3 序列。後質體將具有與選擇標記編碼區的 N 端融合的 RRS3 序列，減去起始密碼子 (ATG)。可能需要在 RRS3 位點與選擇標記序列之間***額外的核苷酸，以確保融合蛋白的框轉譯，即，可操作的連接。只有當兩個質體都被正確***時，才會組裝選擇標記的完整表現卡匣，因此使細胞對各自的選擇劑產生抗性。
二個質體的 RMCE 參與靶基因體基因座內兩個異種特異 RRS 與供體 DNA 分子之間的重組酶催化的雙重重組交換事件。雙質體 RMCE 被設計成將來自前和後載體的 DNA 序列副本導入哺乳動物 TI 宿主細胞基因體的預定位點。可實施 RMCE，使得原核載體序列不會被引入哺乳動物 TI 宿主細胞的基因體中，因此，減少及/或防止不必要地觸發宿主免疫或防禦機制。RMCE 程序可用多個 DNA 序列重複。
在某些實施例中，靶向整合是藉由兩個 RMCE 達成的，其中兩種不同的 DNA 序列都整合到與哺乳動物 TI 宿主細胞相匹配的 RRS 基因體的預定位點中，該兩個不同的 DNA 序列各包含至少一個表現卡匣，該表現卡匣編碼抗體多聚體融合多肽的一部分及/或至少一個選擇標記或其部分，側邊是兩個異源特異性 RRS。在某些實施例中，靶向整合是藉由多個 RMCE 達成的，其中來自多個載體的 DNA 序列都整合到哺乳動物 TI 宿主細胞基因體的預定位點，該DNA 序列各包含至少一個表現卡匣編碼抗體多聚體融合多肽的一部分及/或至少一個選擇標記或其部分，側翼有兩個異源特異性RRS。在某些實施例中，選擇標記可被部分編碼在第一載體上，及被部分編碼在第二載體上，從而只有藉由雙 RMCE 正確整合兩者才能表現選擇標記。
在某些實施例中，經由重組酶介導的重組的靶向整合導致抗體多聚體融合多肽的選擇標記及/或不同的表現卡匣整合到宿主細胞基因體的一個或多個預定整合位點中，該位點不含來自原核載體的序列。 SEQ ID NO：130：     L3 重組酶識別序列的例示性序列 SEQ ID NO：131：     2L 重組酶識別序列的例示性序列 SEQ ID NO：132：     LoxFas 重組酶識別序列的例示性序列 SEQ ID NO：133-5:     人類 CMV 啟動子之例示性變異體 SEQ ID NO：136：     例示性 SV40 聚腺苷酸化信號序列 SEQ ID NO：137：     例示性 bGH 多聚腺苷酸化信號序列 SEQ ID NO：138：     例示性 hGT 終止子序列 SEQ ID NO：139：     例示性 SV40 啟動子序列 SEQ ID NO：140：     例示性 GFP 核酸序列 ***
除所描繪和具體化的各種實施例之外，所揭示之標的亦涉及具有本文所揭示和具體化之特徵的其他組合的其他實施例。因此，本文所呈現之特定特徵可在本文所公開之主題範圍內以其他方式彼此組合，使得本文所公開之主題包括本文所公開之特徵的任何合適的組合。出於說明和描述的目的，已經提供了本文所公開之主題的特定實施例的前述描述。其並非旨在窮舉或將本文所公開之主題限制為所公開的那些實施例。
對於本發明所屬技術領域中具有通常知識者所顯而易見的是，在不脫離本文所公開之主題的精神或範圍的情況下，可以對本文所公開之主題的組成和方法進行各種修改和變型。因此，本文所揭示之標的旨在包括在所附之實施例及其等同形式的範圍內的修改和變型。
本文引用了各種出版物、專利和專利申請，這些文獻以引用方式整體併入本文。
提供以下實例及序列以幫助理解本發明，其真正的範圍在所附申請專利範圍中闡明。 引文 Ascierto, P. A., et al. Semin Oncol 37:508-516. Aggarwal B.B., Nat. Rev. Immunol. 3 (2003) 745-56. Banner D. et al., Cell 73 (1993) 431-445. Bodmer J., et al., Trends Biochem. Sci. 27(1), 19-26. Broll, K., et al., Am. J. Clin. Pathol. 115, 543-549. Buechele, C., et al., Eur. J. Immunol. 42, 737-748. Choi, B.K., et al., J. Immunol. 182, 4107-4115. Cuadros, C., et al., Int. J. Cancer 116, 934-943. Curran, M.A., et al., PLoS One 6, e19499. Diehl, L., et al., J. Immunol. 168, 3755-3762. Dubrot, J., et al., Cancer Immunol. Immunother. 59, 1223-1233. Futagawa, T., et al., Int. Immunol. 14, 275-286. Guo, Z., et al., J Transl.Med. 11, 215. Heinisch, I.V., et al., Eur. J. Immunol. 30, 3441-3446. Hornig, N., et al., J. Immunother. 35, 418-429. Ju, S.A., et al., Int. J. Cancer 122, 2784-2790. Kienzle, G., and von Kempis, J. Int. Immunol. 12, 73-82. Kim, D.H., et al., J. Immunol. 180, 2062-2068. Kim, Y.H., et al., Mol. Cancer Ther. 8, 469-478. Kwon, B.S., and Weissman, S.M.Proc. Natl. Acad. Sci USA 86, 1963-1967. Lee, H., et al., J. Surg.Res. 169, e43-50. Levitsky, V., et al., J. Immunol. 161, 594-601. Li, F., and Ravetch, J.V., Science 333, 1030-1034. Lin, W., et al., Blood 112, 699-707. Melero, I., et al., Cell Immunol. 190, 167-172. Melero, I., et al., Nat. Med. 3, 682-685. Merchant, A.M., et al., Nat. Biotechnol. 16, 677-681. Morales-Kastresana, A., et al., Clin. Cancer Res. 19, 6151-6162. Mueller, D., et al., J. Immunother. 31, 714-722. Murillo, O., et al., Eur. J. Immunol. 39, 2424-2436. Narazaki, H., et al., Blood 115, 1941-1948. Nishimoto, H., et al., Blood 106, 4241-4248. Olofsson, P.S., et al., Circulation 117, 1292-1301. Palazon, A., et al., Cancer Res. 71, 801-811. Schwarz, H., et al., Blood 85, 1043-1052. Shao, Z., and Schwarz, H. J. Leukoc.Biol. 89, 21-29. Shi, W., and Siemann, D.W.Anticancer Res. 26, 3445-3453. Simeone, E., and Ascierto, P.A.J Immunotoxicol.9, 241-247. Snell, L.M., et al., Immunol. Rev. 244, 197-217. Stagg, J., et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 108, 7142-7147. Teng, M.W., et al., J. Immunol. 183, 1911-1920. von Kempis, J., et al., Osteoarthritis Cartilage 5, 394-406. Wei, H., et al., PLoS One 8, e84927. Wilcox, R.A., et al., J. Immunol. 168, 4262-4267. Wilcox, R.A., et al., Blood 103, 177-184. Zhang, N., et al., Clin. Cancer Res. 13, 2758-2767. Zhang, X., et al., J. Immunol. 184, 787-795. 實例：
實例 1
一般技術
重組 DNA 技術。
使用如下所述之標準方法操作 DNA：Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y, (1989)。  根據製造商的說明書使用分子生物試劑。
基因合成
所需的基因片段在 Geneart GmbH (Regensburg, Germany) 以化學合成製備。將合成的基因片段選殖到大腸桿菌質體中用以繁殖/擴增。藉由 DNA 定序證實次選殖的基因片段的 DNA 序列。或者，藉由對化學合成的寡核苷酸進行降溫貼合或經由 PCR 來組裝短的合成 DNA 片段。藉由 metabion GmbH (Planegg-Martinsried, Germany) 製備各自的寡核苷酸。
DNA 序列的確定
DNA 序列藉由在 MediGenomix GmbH (Martinsried, Germany) 或 SequiServe GmbH (Vaterstetten, Germany) 進行的雙股定序確定。
DNA 和蛋白質序列分析和序列資料管理
EMBOSS (European Molecular Biology Open Software Suite) 軟體套件和Invitrogen’s Vector NTI 11.5 版或 Geneious prime 用於序列創建、定位、分析、註解和說明。
試劑
若無另外說明，所有商業化學品、抗體和套組均按照製造商的方案使用。
蛋白質確定
根據 Pace, et al., Protein Science 4 (1995) 2411-1423，使用基於胺基酸序列所計算的莫耳消光係數，藉由確定在 280 nm 處的光密度 (OD) 來確定純化的抗體及衍生物的蛋白質濃度。
上清液中的抗體濃度確定
1) 蛋白 A 珠粒
藉由以蛋白 A 瓊脂糖珠粒 (Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany) 免疫沉澱來估計細胞培養物上清液中的抗體濃度。因此，60 µL 蛋白 A 瓊脂糖珠粒在 TBS-NP40 (50 mM Tris 緩衝液，pH 7.5，補充有 150 mM NaCl 和 1% Nonidet-P40) 中洗滌 3 次。隨後，將 1-15 mL 細胞培養上清液加到在 TBS-NP40 中預平衡的蛋白 A 瓊脂糖珠粒上。在室溫下培育 1 小時後，將珠粒在 Ultrafree-MC 濾器管柱 (Amicon) 上以 0.5 mL TBS-NP40 洗滌一次，以 0.5 mL 2x 磷酸鹽緩衝鹽水 (2xPBS，Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany) 洗滌兩次並以 0.5 mL 100 mM 檸檬酸鈉緩衝液 (pH 5.0) 短暫洗滌四次。藉由添加 35 µL NuPAGE® LDS 樣品緩衝液 (Invitrogen) 溶析結合的抗體。一半的樣品分別與 NuPAGE® 樣品還原劑合併或保持未還原狀態，並在 70°C 加熱 10 分鐘。因此，將 5-30 µL 施用於 4-12% NuPAGE® Bis-Tris SDS-PAGE 凝膠 (Invitrogen) (以 MOPS 緩衝液用於非還原 SDS-PAGE，及MES 緩衝液與 NuPAGE® 抗氧化劑電泳緩衝液添加劑 (Invitrogen) 用於還原 SDS-PAGE) 並用考馬斯藍染色。
2) 親和力 HPLC
細胞培養上清液中抗體的濃度藉由親和力 HPLC 層析定量測量。簡而言之，將含有與蛋白 A 結合的抗體的細胞培養上清液施加到 Applied Biosystems Poros A/20 管柱中的 200 mM KH 2PO 4、100 mM 檸檬酸鈉，pH 7.4，並以 200 mM NaCl、100 mM 檸檬酸，pH 2.5 溶析 Agilent HPLC 1100 系統。藉由 UV 吸光度和峰面積積分對溶析的抗體進行定量。純化的標準 IgG1 抗體作為標準。
3) 三明治 ELISA 法
藉由三明治-IgG-ELISA 測量細胞培養上清液中抗體和衍生物的濃度。簡而言之，將 StreptaWell High Bind Streptavidin A-96 孔微量滴定盤 (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany) 以 100 μL/孔 生物素化抗人類 IgG 捕獲分子 F(ab’)2＜h-Fcγ＞ BI (Dianova) 0.1 µg/mL 在室溫下塗佈 1 小時，或者在 4°C 下隔夜，隨後以 200 µL/孔 PBS、0.05% Tween (PBST，Sigma) 洗滌 3 次。此後，將含有細胞培養上清液的各抗體在 PBS (Sigma) 中的 100 μL/孔系列稀釋液加入孔中，並在室溫下在振盪器上培育 1-2 小時。將孔以 200 μL/孔 PBST 洗滌 3 次，並以 0.1 μg/mL 的 100 μL F(ab')2＜hFcγ＞POD (Dianova) 作為檢測抗體，藉由在室溫下振盪器上培育 1-2 小時來檢測結合抗體。藉由以 200 µL/孔 PBST 洗滌 3 次去除未結合的檢測抗體。藉由添加 100 µL ABTS/孔，之後培孵育來檢測結合的檢測抗體。在 Tecan Fluor Spectrometer 上以 405 nm 的測量波長 (參考波長 492 nm) 確定吸光度。
CHO 宿主細胞株的培養
CHO 宿主細胞在 37°C 下在濕度為 85% 及 CO 2為 5% 的加濕培養箱中培養。它們在含有 300 µg/mL 潮黴素 B 和 4 µg/mL 第二選擇標記的專屬 DMEM/F12 培養基中培養。每 3 或 4 天以 0.3x10E6 細胞/ml 之濃度分樣細胞，總體積為 30 mL。使用 125 mL 無擋板錐形震盪瓶培養。以 150 rpm 以 5 cm 的振盪幅度振盪細胞。細胞計數以 Cedex HiRes Cell Counter (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany) 確定。將細胞保持在培養中直到它們達到 60 日齡。
轉化 10-β 潛能大腸桿菌細胞
對於轉化，將 10-β 潛能大腸桿菌細胞在冰上解凍。之後，將 2 µL 質體 DNA 直接移液至細胞懸液中。輕彈試管並置於冰上 30 分鐘。此後，將細胞放入 42°C 的溫熱塊中並精確熱休克 30 秒。緊接著，將細胞在冰上急冷 2 分鐘。將 950 µL 的 NEB 10-β Outgrowth Medium 添加至細胞懸浮液中。將細胞在 37 °C 下振盪培育一小時。然後，將 50-100 µL 移液至預熱 (37°C) 的 LB-Amp 瓊脂平盤上，並以一次性抹刀塗抹。將平盤在 37°C 下培育隔夜。只有成功併入質體並攜帶安比西林抗性基因的細菌才能在這些平盤上生長。第二天挑取單一菌落，在 LB-Amp 培養基中培養，用於後續的質體製備。
細菌培養
在 LB 培養基 (Luria Bertani 之縮寫) 中培養大腸桿菌，該培養基中攙入 1 mL/L 100 mg/mL 安比西林，導致安比西林濃度為 0.1 mg/mL。對於不同的質體製備量，以單一細菌菌落接種以下量。
表 : 大腸桿菌培養體積
數量質體製備 體積 LB-Amp 培養基 [mL] 培育時間 [h]
Mini-Prep 96 孔 (EpMotion) 1.5 23
Mini-Prep 15 mL 管 3.6 23
Maxi-Prep 200 16
對於 Mini-Prep，96 孔 2 mL 深孔盤，每孔填充 1.5 mL LB-Amp 培養基。挑取菌落並將牙籤塞入培養基中。當挑取所有菌落後，用黏性透氣膜將平盤密封。將平盤在 37 °C 培養箱中以 200 rpm 的振盪速率培養 23 小時。
對於 Mini-Preps，在 15 mL 試管 (帶有通風蓋) 中裝入 3.6 mL LB-Amp 培養基並同樣接種細菌菌落。在培育期間，牙籤並未被移除而是留在管中。與 96 孔盤一樣，試管在 37 °C、200 rpm 下培育 23 小時。
對於 Maxi-Prep，將 200 mL LB-Amp 培養基裝入高壓滅菌的 1 L Erlenmeyer 燒瓶中，並接種 1 mL 細菌日培養物，大約是 5 小時年齡的。錐形瓶以紙塞密閉並在 37 °C、200 rpm 下培育 16 小時。
質體製備
對於 Mini-Prep，將 50 µL 細菌懸浮液轉移到 1 mL 深孔盤中。之後，將細菌細胞在板中以 3000 rpm、4°C 離心 5 分鐘。去除上清液，將帶有細菌沉澱物的平盤置於 EpMotion 中。大約 90 分鐘後，運行完成，並可從 EpMotion 中取出溶析的質體 DNA 以供進一步使用。
對於 Mini-Prep，將 15 mL 試管從培養箱中取出，並將 3.6 mL 細菌培養物分樣兩個 2 mL Eppendorf 管。在室溫下，在台式微量離心機中以 6,800xg 將管離心 3 分鐘。之後，根據製造商的說明使用 Qiagen QIAprep Spin Miniprep Kit 進行 Mini-Prep。以 Nanodrop 測量質體 DNA 濃度。
Maxi-Prep 根據製造商的說明使用 Macherey-Nagel NucleoBond® Xtra Maxi EF Kit 進行。以 Nanodrop 測量 DNA 濃度。
乙醇沉澱
將一定體積的 DNA 溶液與 2.5 倍體積的 100% 乙醇混合。混合物在 -20°C 下培育 10 分鐘。然後將 DNA 在 14,000 rpm，4 °C 離心 30 分鐘。小心去除上清液並以 70% (v/v) 乙醇洗滌沉澱物。再次將管以14,000 rpm，在 4 °C 離心 5 分鐘。藉由移液小心除去上清液並乾燥沉澱物。當乙醇蒸發後，加入適量之無內毒素水。給予 DNA 時間在 4°C 下再溶於水中隔夜。取一小部分等分樣品並以 Nanodrop 裝置測量 DNA 濃度。
製備抗體純化
參照標準方案從過濾的細胞培養上清液中純化抗體。簡而言之，將抗體施加於蛋白 A Sepharose 管柱 (GE Healthcare) 並以 PBS 洗滌。在 pH 2.8 下達成抗體的溶析，然後立即中和。藉由粒徑篩析層析 (Superdex 200，GE Healthcare) 在 PBS 或含 150 mM NaCl (pH 6.0) 的 20 mM 組胺酸緩衝液中，將聚集的蛋白質與單體抗體分離。合併單體抗體濾分，使用例如 MILLIPORE Amicon Ultra (30 MWCO) 離心濃縮器濃縮 (如果需要)，冷凍並儲存在 -20 °C 或 -80 °C。部分樣品用於隨後的蛋白質分析，並例如藉由SDS-PAGE、粒徑篩析色譜 (SEC) 或質譜法分析特徵化。
SDS-PAGE
根據製造商之說明，使用 NuPAGE® Pre-Cast 凝膠系統 (Invitrogen)。特別是，使用 10% 或 4-12% NuPAGE® Novex® Bis-TRIS Pre-Cast 凝膠 (pH 6.4) 及 NuPAGE® MES (還原凝膠，具有 NuPAGE® 抗氧化劑運行緩衝液添加劑) 或 MOPS (非還原凝膠) 運行緩衝液。
CE-SDS
使用微流體 Labchip 技術 (PerkinElmer，USA)，藉由 CE-SDS 分析純度和抗體完整性。因此，根據製造商之說明，使用 HT Protein Express Reagent Kit 製備 5 µL 抗體溶液用於 CE-SDS 分析，並使用 HT Protein Express Chip 在 Labchip GXII 系統上進行分析。使用 Labchip GX 軟體分析資料。
分析粒徑篩析層析
藉由 HPLC 層析進行用於確定抗體聚集和寡聚狀態的粒徑篩析層析 (SEC)。簡而言之，將蛋白 A 純化抗體施加於 Dionex Ultimate® 系統 (Thermo Fischer Scientific) 上的 300 mM NaCl、50 mM KH 2PO 4/K 2HPO 4緩衝液 (pH 7.5）中的 Tosoh TSKgel G3000SW 管柱或Dionex HPLC 系統上的 2 x PBS 中的 Superdex 200 管柱 (GE Healthcare)。藉由 UV 吸光度和峰面積積分對溶析的抗體進行定量。以 BioRad Gel Filtration Standard 151–1901 作為標準。
質譜
本節描述抗體/融合蛋白的特徵，重點是它們的正確組裝。預期的一級結構藉由去醣基化完整抗體的電灑游離質譜 (ESI-MS) 和在去醣基化/限制性 LysC 消化之抗體的特殊情況下進行分析。
抗體/融合蛋白在磷酸鹽或 Tris 緩衝液中以 N-醣苷酶 F 在 37°C 下以 1 mg/mL 的蛋白質濃度去醣基化長達 17 小時。有限的 LysC (Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany) 消化以含 100 µg 去醣基化抗體之 Tris 緩衝液 (pH 8)，分別在室溫下進行 120 小時，或在 37°C 下進行 40 分鐘。在質譜分析之前，在 Sephadex G25 管柱 (GE Healthcare）上經由 HPLC 對樣品進行脫鹽。在配備 TriVersa NanoMate 源 (Advion) 的 maXis 4G UHR-QTOF MS 系統 (Bruker Daltonik) 上經由 ESI-MS 確定總質量。
實例 2
用於隨機整合的質體生成
對於抗體/融合蛋白的表現，可應用基於具有或不具有 CMV-內含子 A 啟動子的 cDNA 組織或基於具有 CMV 啟動子的基因體組織的瞬時表現 (例如在 HEK293 細胞中) 的表現載體。
表現卡匣組成
為了表現抗體鏈，使用包含以下功能元件的轉錄單元： -    來自包括內含子 A 的人類巨細胞病毒的直接早期增強子和啟動子， -    人重鏈免疫球蛋白 5'-非轉譯區 (5'UTR)， -    鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列， -    編碼各自抗體鏈之核酸， -    牛生長激素多腺苷酸化序列 (BGH pA)，和 -    視情況地，人類胃泌素終止子 (hGT)。
除了包含要表現的所需基因的表現單元/表現盒外，基本/標準哺乳動物表現質體還包含 -    來自載體 pUC18 的複製起點，其允許此質體在大腸桿菌中復製，和 -    β-內醯胺酶基因，其在大腸桿菌中賦予安比西林抗性。
編碼抗體鏈的融合基因藉由 PCR 及/或基因合成生成，並藉由已知的重組方法及技術藉由連接相應核酸片段來組裝，例如 在各自的載體中使用獨特的限制性位點。次選殖的核酸序列藉由 DNA 測序驗證。對於瞬時轉染，藉由從轉化的大腸桿菌培養物 (NucleoBond AX，Macherey-Nagel) 製備載體來製備更大量的載體。
對於所有構建體，使用臼包杵 (knob-into-hole) 異二聚化技術，在第一 CH3 域中以典型的杵 (T366W) 取代，在第二 CH3 域中使用對應的臼取代 (T366S、L368A 及 Y407V) (以及兩個額外導入的半胱胺酸 殘基 S354C/Y349C) (包含在上述各自對應的重鏈 (HC) 序列中)。
實例 3
瞬時表現
HEK 293 細胞
瞬時表現在懸浮適應的 HEK293F (FreeStyle 293-F 細胞；Invitrogen) 細胞中以無轉染試劑 293 (Novagen) 進行。
在 125 mL 震盪瓶中解凍後，細胞已藉由稀釋繼代至少四次 (體積 30 mL) (在 37 °C、7% CO 2、85% 濕度、135 rpm 下培育/搖動)。
在 250 mL 體積中將細胞擴增至 3x10E5 個細胞/mL。三天後，將細胞分樣並以 7*10 5個細胞/mL 之密度重新接種在 1 升震盪瓶中的 250 毫升體積中。在 24 小時後以大約 1.4 - 2.0 x 10 6個細胞/mL 的細胞密度進行轉染。
在轉染之前，以預熱 (水浴；37 °C) Opti-MEM (Gibco) 將 250 µg 質體-DNA 稀釋至 10 mL 的最終體積。輕輕混合溶液並在室溫下培育不超過 5 分鐘。然後將 333.3 µL 293-free 轉染試劑添加至 DNA-OptiMEM 溶液中。此後輕輕混合溶液並在室溫下培育 15-20 分鐘。將整個體積的混合物加入到 1 L 震盪瓶中。將細胞在 37°C、7% CO 2、85% 濕度、135 rpm 下培養 6 或 7 天。
藉由在 2,000 rpm、4°C 下進行第一次離心 10 分鐘收集上清液。然後將上清液轉移到新的離心瓶中，以 4,000 rpm、4 °C 進行第二次離心 20 分鐘。此後，無細胞上清液通過 0.22 µm 瓶頂過濾器過濾並儲存在冰箱 (‑20 °C) 中。
CHO-K1 細胞
在懸浮適應的 CHO-K1 細胞中進行瞬時表現，以轉染試劑 Nucleofector 溶液 V (Lonza) 和 Amaxa nucleoporator 進行電穿孔。
在 125 mL 震盪瓶中解凍後，細胞已藉由稀釋繼代至少四次 (體積 30 mL) (在 37 °C、7% CO 2、85% 濕度、140 rpm 下培育)。
將細胞在 250 mL 震盪瓶中以 60 mL 體積擴增至 3 x 10 5個細胞/mL。細胞將準備好以大約 1.2‑2.0 x 10 6個細胞/mL 的細胞密度進行轉染。藉由以 1000 rpm、室溫離心 10 分鐘收集總量 1x10 7個細胞。將細胞沉澱溶於 100 µL 預熱 (RT) 的 Nucleofector 溶液 (Lonza) 中。將總共 1.2 pmol 或 10 µg 最大質體 DNA (以水稀釋) 混合成 10 µL 的最終體積，之後與 100 µL 轉染試劑和 1x10 7個細胞混合。然後將質體 DNA、轉染試劑和細胞的混合物轉移到電穿孔比色管中。直接將比色管放入 Nucleofector 系統中，無需任何培育時間。使用程序「U-24」進行電穿孔後，將 500 µL 預熱 (37 °C) 的培養基添加到比色管中。將整個混合物轉移至具有 30 mL 預熱 (37°C) 之化學成分確定的培養基 (Invitrogen) 的 125 mL 震盪瓶中。
CHO-K1 TI 細胞
在懸浮適應的 CHO-K1 TI 宿主細胞中，以轉染試劑 PE 緩衝液和用於電穿孔之 MaxCyte (OC-400 處理組件) 進行瞬時表現。
在 125 mL 震盪瓶中解凍後，細胞繼代至少四次 (在 37 °C、5 % CO 2、85% 濕度、150 rpm 下培育)。
第一天在震盪瓶中將細胞擴增至 4x10 5個細胞/mL。在第三天，細胞將準備好以大約 1‑2 x 10 6個細胞/mL 的細胞密度進行轉染。
藉由以 1000 rpm、室溫離心 10 分鐘收集總量 3x10 6個細胞。將細胞沉澱物溶解在 300 µL PE 緩衝液 (MaxCyte) 中，然後加入最多 25 µg 的質體 DNA。然後將質體 DNA、轉染試劑和細胞的混合物轉移到電穿孔比色管中，然後使用「CHO-2」和製程組裝方案進行電穿孔。電穿孔後，將整個混合物在不攪拌的情況下轉移至 37°C 度的震盪瓶中 30 分鐘。30 分鐘後，添加 30 mL 回收的培養基。
將轉染的細胞在 37°C、5% CO 2、85% 濕度、100 rpm 下振盪培育 7 天。
ExpiCHO 細胞
使用 ExpiCHO-S Expression System (A29133；Gibco) 進行瞬時表現。
根據製造商的說明進行解凍、繼代和轉染 (參見 ExpiCHO Expression System (A29133) 使用者指南)。對於轉染，使用「標準方案」 (參見第 12 頁 A29133，手冊)。
將轉染的細胞在 37°C、7 % CO 2、85% 濕度、140 rpm 下振盪培育 7 天。
藉由在 1,000 rpm、4°C 下進行第一次離心 10 分鐘收集上清液。將上清液轉移到新的離心瓶中，以 4,000 rpm、4 °C 進行第二次離心 20 分鐘。此後，無細胞上清液通過 0.22 µm 瓶頂過濾器過濾並儲存在冰箱 (‑20 °C) 中直至進一步使用。
實例 4
穩定表現與純化
穩定細胞株生成
使用兩個雙質體和單個質體共轉染宿主細胞株 CHO K1-M。雙質體含有編碼 FAP 之 VL、VH 和 4‑1-BBL 融合蛋白單體和二聚體以及 FAP 和 4‑1-BBL 的 CH 和 CL 的 DNA 片段，而單一質體僅含有 4‑1-BBL 的二聚體。所有序列都是化學合成的，因此與異源 DNA 元件合併，其包括：a) 包括 5'‑Kozak 序列的 5'‑UTR，b) 編碼前導序列 (LL) 的 DNA 片段，c) 用於選殖的合適限制性內切核酸酶位點，其添加於要合成的 DNA 片段的 5'‑ 和 3'‑ 端。
宿主細胞源自脯胺酸營養缺陷型菌株 K1 (Kao and Puck, 1967)，其由 Puck 等人導入的 CHO 細胞株所建立的。CHO K1 細胞獲自美國典型培養物保藏中心 (ATCC)，作為冷凍原液 (註冊號 CCL-61)，隨後在 Roche Pharma, Penzberg 的化學成分確定之培養基和懸浮液中適應生長，然後表示為「CHO K1-M」。
使用一安瓿 CHO K1-M WCB 進行轉染。在化學成分確定的培養基中使用線性化 DNA 進行轉染。基於 DHFR/MTX 表現系統，選擇穩定整合重組 DNA 的植株。為了選擇穩定的轉染子，將細胞以 500 個細胞/孔的密度轉移到 384 孔板中，並在含有 400 nM MTX 的化學成分確定的培養基中培養。這些條件確保只有從雙質體和單質體中過表現 DHFR 基因的細胞才能存活。
轉染後三週，藉由抗人類 Fc ELISA 篩選上清液中是否存在人類 IgG。抗體力價陽性的植株被擴展到 96 孔形式，然後將 MTX 濃度降低至 250 nmol/L MTX。一週後，藉由 ELISA 測試植株與 FAP 抗原和 4-1-BB 受體的結合，以確保產生的 FAP 抗體-4‑1-BBL 融合蛋白分子的功能性。擴增陽性植株並儲存。
抗體的純化
藉由兩個層析步驟過濾和純化含有抗體的培養物上清液。使用以 PBS (1 mM KH 2PO 4、10 mM Na 2HPO 4、137 mM NaCl、2.7 mM KCl)，pH 7.4 平衡的 HiTrap MabSelectSuRe (GE Healthcare)，藉由親和層析捕獲抗體。藉由以平衡緩衝液洗滌去除未結合的蛋白質，並以 50 mM 檸檬酸鹽緩衝液 (pH 2.8) 回收抗體，並在洗脫後立即以 1 M Tris 鹼 (pH 9.0) 中和至 pH 6.0。Superdex 200TM (GE Healthcare) 上的粒徑篩析層析用作第二純化步驟。在 20 mM 組胺酸緩衝液、0.14 M NaCl、pH 6.0 中進行粒徑篩析層析。含有抗體的溶液以配備 Biomax-SK 膜 (Millipore，Billerica，MA) 的 Ultrafree-CL 離心過濾裝置濃縮，並儲存在 -80 °C。
實例 5
用於靶向整合的質體生成
為了構建雙質體抗體構建體，將各自的結構基因選殖到包含 L3 和 LoxFas 序列的前載體骨架，以及包含 LoxFas 和 2L 序列及 pac 可選擇標記的後載體中。將 Cre 重組酶質體 (參見，例如，Wong, ET, et al., Nucl. Acids Res. 33 (2005) e147；O'Gorman, S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94 ( 1997) 14602-14607) 用於所有 RMCE 過程。亦參見 WO 2019/126634，其全文藉由引用併入本文。
藉由基因合成 (Geneart，Life Technologies Inc.) 生成編碼各自多肽的 cDNA。基因合成和骨架載體在 37°C 下以 HindIII-HF 和 EcoRI-HF (NEB) 消化 1 小時，並藉由瓊脂糖凝膠電泳分離。從瓊脂糖凝膠中切下***片段和骨架的 DNA 片段，並藉由 QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen) 萃取。依據製造商的方案，經由 Rapid Ligation Kit (Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany)，以 3:1 的***物/骨架比例連接純化的***物和骨架片段。然後經由在 42°C 下熱休克 30 秒將連接方法轉化到潛能大腸桿菌 DH5α 中，並在 37°C 下培育 1 小時，然後將它們平盤培養鋪在含有安比西林的瓊脂平盤上進行選擇。平盤在 37 °C 培育隔夜。
第二天，挑選植株並在 37 °C 下振盪培養隔夜，用於 Mini 或 Maxi-Preparation，其分別以 EpMotion® 5075 (Eppendorf) 或以 QIAprep Spin Mini-Prep Kit (Qiagen)/NucleoBond Xtra Maxi EF Kit (Macherey & Nagel) 進行。將所有構建體定序以確保不存在任何不需要的突變。
在第二選殖步驟中，先前選殖的載體以 KpnI-HF/SalI-HF 及 SalI-HF/MfeI-HF 消化，條件與第一選殖相同。TI 骨架載體以 KpnI-HF 和 MfeI-HF 消化。如上所述進行分離和萃取。依據製造方案，以 1:1:1 之***物/***物/骨架比例，使用 T4 DNA 連接酶 (NEB) 連接純化的***物和骨架，在 4°C 進行隔夜，並在 65°C 下去活化 10 分鐘。如上所述進行以下選殖步驟。
實例 6
藉由靶向整合生成穩定細胞株
在 TI 安放位點中包含 GFP 表現卡匣的 CHO-K1 TI 宿主細胞在標準加濕條件 (95% rH、37 °C 和 5% CO 2) 下，在專屬基於 DMEM/F12 的培養基中，以 150 rpm 的恆定攪拌速率在一次性 125 mL 通風震盪瓶中增殖每 3-4 天將細胞以濃度為 3x10E5 個細胞/mL接種在化學成分確定的培養基中，該培養基含有有效濃度的選擇標記 1 和選擇標記 2。用 Cedex HiRes 細胞計數器 (F. Hoffmann-La Roche Ltd, Basel, Switzerland) 測量培養物的密度和生存力。
為了穩定轉染，將等莫耳量的前後載體混合。每 5 µg 混合物添加 1 µg Cre 表現質體，即將 5 µg Cre 表現質體或 Cre mRNA 添加至 25 µg 前載體與後載體之混合物中。
轉染前兩天，將 TI 宿主細胞以密度為 4x10E5 個細胞/mL 接種在新鮮培養基中。根據製造商的方案，使用 Nucleofector Kit V (Lonza，Switzerland)，以 Nucleofector 裝置進行轉染。3x10E7 個細胞以總共 30 µg 核酸轉染，即以 30 µg 質體 (5 µg Cre 質體和 25 µg 前載體與後載體之混合物)。轉染後，將細胞接種在不含選擇劑的 30 mL 培養基中。
接種後第 5 天，將細胞離心，並以用於選擇重組細胞的有效濃度 6x10E5 個細胞/ml 轉移到 80 mL 化學成分確定的培養基中，其中含有嘌呤黴素 (選擇劑 1) 和 1-(2'-去氧-2'-氟-1-β-D-***呋喃基-5-碘)尿嘧啶 (FIAU；選擇劑 2)。細胞從此日開始，在不分樣下，於 37°C、150 rpm，，5% CO 2和 85% 的濕度下培育。定期監測培養物的細胞密度和生存力。當培養物的生存力再次開始增加時，將選擇劑 1 和 2 的濃度減少至約之前使用量的大一半。更詳細而言，為了促進細胞的回收，如果生存力 ＞ 40% 且活細胞密度 (VCD) ＞ 0.5x10E6 個細胞/mL，則選擇壓力會降低。因此，將 4x10E5 個細胞/mL 離心並重懸浮於 40 ml 選擇培養基 II (化學成分確定的培養基，½ 選擇標記 1 和 2) 中。細胞在與之前相同的條件下培育並且亦不分樣。
開始選擇後 10 天，藉由流式細胞術測量細胞內 GFP 和結合到細胞表面的細胞外異源融合多肽的表現來檢查 Cre 介導的盒式交換是否成功。針對人類抗體輕鏈和重鏈的 APC 抗體 (異藻藍蛋白標記的 F(ab’)2 片段山羊抗人類 IgG) 用於 FACS 染色。使用 BD FACS Canto II 流式細胞儀 (BD，Heidelberg，Germany) 進行流式細胞術。測量每個樣品的一萬個事件。活細胞在前向散射 (FSC) 對側向散射 (SSC) 圖中閘控。活細胞閘門以未轉染的 TI 宿主細胞定義，並藉由使用 FlowJo 7.6.5 EN 軟體 (TreeStar，Olten，Switzerland) 應用於所有樣品。在 FITC 通道中量化 GFP 的螢光 (在 488 nm 激發，在 530 nm 檢測)。在 APC 通道中測量異源融合多肽 (在 645 nm 激發，在 660 nm 檢測)。親代 CHO 細胞，即用於產生 TI 宿主細胞的那些細胞，用作關於 GFP 和融合多肽表現的陰性對照。選擇開始後 14 天，生存力超過 90%，且選擇被視為完成。
實例 7
FACS 篩選
進行 FACS 分析以檢查轉染效率和轉染的 RMCE 效率。將經轉染方法的 4x10E5 細胞離心 (1200 rpm，4 分鐘) 並以 1 mL PBS 洗滌兩次。在以 PBS 洗滌步驟後，將沉澱物重新懸浮於 400 µL PBS 中，並轉移至 FACS 管中 (Falcon ® Round-Bottom Tubes 帶有細胞濾網蓋；Corning)。使用 FACS Canto II 進行測量，並藉由軟體 FlowJo 分析資料。
實例 8
饋料批式培養
在震盪瓶或 Ambr15 容器 (Sartorius Stedim) 中使用專屬化學成分確定的培養基進行饋料批式生產培養。在第 0 天以 1x10E6 個細胞/mL 接種細胞。培養物在第 3、7 和 10 天接受專屬進料培養基。在第 0、3、7、10 和 14 天，使用 Cedex HiRes 儀器 (Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany) 測量培養物中的活細胞計數 (VCC) 和細胞生存力百分比。使用 Cobas Analyzer (Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany)，在第 3、5、7、10、12 和 14 天測量葡萄糖、乳酸和產物力價濃度。在饋料批式開始後 14 天藉由離心 (10 分鐘，1,000 rpm 及 10 分鐘，4,000 rpm) 收集上清液，並藉由過濾 (0.22 µm) 清除。使用 protein-A 親和力層析和 UV 檢測確定第 14 天的力價。產物品質由 Caliper’s Labchip (Caliper Life Sciences) 確定。
實例 9
融合多肽定量
以抗人類 IgG 三明治 ELISA 測量培養基中的力價。簡而言之，以抗人類 Fc 抗體與 MaxiSorp 微量滴定盤 (Nunc TM，Sigma-Aldrich) 結合，從細胞培養液中捕獲的融合多肽，並以抗人類 Fc 抗體-POD 結合體檢測，其結合至與捕獲抗體不同的表位。藉由使用 BM Chemiluminescence ELISA Substrate (POD) (Sigma-Aldrich) 的化學發光對二抗進行定量。 
<![CDATA[<110>  瑞士商赫孚孟拉羅股份有限公司 (F. Hoffmann-La Roche AG)]]>
                 美商建南德克公司 (Genentech Inc.)
          <![CDATA[<120>  用於表現抗體多聚體融合之方法]]>
          <![CDATA[<130>  P36273]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/056468]]>
          <![CDATA[<151>  2020-07-24]]>
          <![CDATA[<160>  144   ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn 3.5 版]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  184]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                      180                 
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  170]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val 
          1               5                   10                  15      
          Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu 
                  35                  40                  45              
          Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu 
              50                  55                  60                  
          Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala 
                          85                  90                  95      
          Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala 
                      100                 105                 110         
          Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu 
                  115                 120                 125             
          Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu 
              130                 135                 140                 
          Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                          165                 170 
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  175]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val 
              50                  55                  60                  
          Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu 
                      100                 105                 110         
          Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg 
              130                 135                 140                 
          His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                          165                 170                 175 
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  203]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly 
                      20                  25                  30          
          Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn 
                  35                  40                  45              
          Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu 
                      100                 105                 110         
          Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser 
              130                 135                 140                 
          Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln 
                          165                 170                 175     
          Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                  195                 200             
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  378]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu 4-1BBL (71-254) 藉由 (G4S)2 連接至 hu 4-1BBL (71-254)]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu 
                      260                 265                 270         
          Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala 
                  275                 280                 285             
          Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu 
                          325                 330                 335     
          Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile 
                  355                 360                 365             
          Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
              370                 375             
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(28H1) CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Ser His Ala Met Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(28H1) CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(28H1) CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(28H1) CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser Tyr Leu Ala 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(28H1) CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(28H1) CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  (G4S)2 肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  718]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  二聚 hu 4-1BBL (71-254) 加 CH1 加 Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu 
                      260                 265                 270         
          Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala 
                  275                 280                 285             
          Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu 
                          325                 330                 335     
          Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile 
                  355                 360                 365             
          Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
              370                 375                 380                 
          Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
                          405                 410                 415     
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
                      420                 425                 430         
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                  435                 440                 445             
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
              450                 455                 460                 
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
                          485                 490                 495     
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 
                      500                 505                 510         
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                  515                 520                 525             
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
              530                 535                 540                 
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
                          565                 570                 575     
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
                      580                 585                 590         
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                  595                 600                 605             
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
              610                 615                 620                 
          Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val 
          625                 630                 635                 640 
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
                          645                 650                 655     
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
                      660                 665                 670         
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                  675                 680                 685             
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
              690                 695                 700                 
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
          705                 710                 715             
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  301]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu 4-1BBL (71-254) -CL]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 
              210                 215                 220                 
          Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys 
                          245                 250                 255     
          Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 
                      260                 265                 270         
          Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu 
                  275                 280                 285             
          Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              290                 295                 300     
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(28H1) VH]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Lys Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(28H1) VL]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Ile Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  760]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Met Lys Thr Trp Val Lys Ile Val Phe Gly Val Ala Thr Ser Ala Val 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ala Leu Leu Val Met Cys Ile Val Leu Arg Pro Ser Arg Val His 
                      20                  25                  30          
          Asn Ser Glu Glu Asn Thr Met Arg Ala Leu Thr Leu Lys Asp Ile Leu 
                  35                  40                  45              
          Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Phe Phe Pro Asn Trp Ile Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Ala Asp Asn Asn Ile Val Leu Tyr Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Glu Thr Gly Gln Ser Tyr Thr Ile Leu Ser Asn Arg Thr Met Lys 
                          85                  90                  95      
          Ser Val Asn Ala Ser Asn Tyr Gly Leu Ser Pro Asp Arg Gln Phe Val 
                      100                 105                 110         
          Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala 
                  115                 120                 125             
          Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Ser Asn Gly Glu Phe Val Arg Gly Asn 
              130                 135                 140                 
          Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys Trp Ser Pro Val Gly Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile Tyr Leu Lys Gln Arg Pro 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Phe Asn Gly Arg Glu Asn Lys Ile 
                      180                 185                 190         
          Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu Glu Glu Met Leu Ala Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asn Gly Lys Phe Leu Ala Tyr Ala 
              210                 215                 220                 
          Glu Phe Asn Asp Thr Asp Ile Pro Val Ile Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Glu Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile Pro Tyr Pro Lys Ala Gly 
                          245                 250                 255     
          Ala Lys Asn Pro Val Val Arg Ile Phe Ile Ile Asp Thr Thr Tyr Pro 
                      260                 265                 270         
          Ala Tyr Val Gly Pro Gln Glu Val Pro Val Pro Ala Met Ile Ala Ser 
                  275                 280                 285             
          Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp Val Thr Asp Glu Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn Val Ser Val Leu Ser Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp Gln Thr Trp Asp Cys Pro Lys Thr Gln 
                          325                 330                 335     
          Glu His Ile Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp Ala Gly Gly Phe Phe Val 
                      340                 345                 350         
          Ser Thr Pro Val Phe Ser Tyr Asp Ala Ile Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe 
                  355                 360                 365             
          Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His Tyr Ile Lys Asp Thr Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys Trp Glu Ala Ile Asn Ile 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr Ser Ser Asn Glu Phe Glu 
                          405                 410                 415     
          Glu Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg Ile Ser Ile Gly Ser Tyr 
                      420                 425                 430         
          Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His Leu Arg Lys Glu Arg Cys 
                  435                 440                 445             
          Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Asp Tyr Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu 
              450                 455                 460                 
          Val Cys Tyr Gly Pro Gly Ile Pro Ile Ser Thr Leu His Asp Gly Arg 
          465                 470                 475                 480 
          Thr Asp Gln Glu Ile Lys Ile Leu Glu Glu Asn Lys Glu Leu Glu Asn 
                          485                 490                 495     
          Ala Leu Lys Asn Ile Gln Leu Pro Lys Glu Glu Ile Lys Lys Leu Glu 
                      500                 505                 510         
          Val Asp Glu Ile Thr Leu Trp Tyr Lys Met Ile Leu Pro Pro Gln Phe 
                  515                 520                 525             
          Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile Gln Val Tyr Gly Gly Pro 
              530                 535                 540                 
          Cys Ser Gln Ser Val Arg Ser Val Phe Ala Val Asn Trp Ile Ser Tyr 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Ala Ser Lys Glu Gly Met Val Ile Ala Leu Val Asp Gly Arg Gly 
                          565                 570                 575     
          Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Leu Leu Tyr Ala Val Tyr Arg Lys Leu 
                      580                 585                 590         
          Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Ile Thr Ala Val Arg Lys Phe Ile 
                  595                 600                 605             
          Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Lys Arg Ile Ala Ile Trp Gly Trp Ser 
              610                 615                 620                 
          Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ser Gly Thr Gly Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr 
                          645                 650                 655     
          Ala Ser Val Tyr Thr Glu Arg Phe Met Gly Leu Pro Thr Lys Asp Asp 
                      660                 665                 670         
          Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val Met Ala Arg Ala Glu Tyr 
                  675                 680                 685             
          Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His Gly Thr Ala Asp Asp Asn 
              690                 695                 700                 
          Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala Lys Ala Leu Val Asn Ala 
          705                 710                 715                 720 
          Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser Asp Gln Asn His Gly Leu 
                          725                 730                 735     
          Ser Gly Leu Ser Thr Asn His Leu Tyr Thr His Met Thr His Phe Leu 
                      740                 745                 750         
          Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp 
                  755                 760 
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  761]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Met Lys Thr Trp Leu Lys Thr Val Phe Gly Val Thr Thr Leu Ala Ala 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ala Leu Val Val Ile Cys Ile Val Leu Arg Pro Ser Arg Val Tyr 
                      20                  25                  30          
          Lys Pro Glu Gly Asn Thr Lys Arg Ala Leu Thr Leu Lys Asp Ile Leu 
                  35                  40                  45              
          Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Tyr Phe Pro Asn Trp Ile Ser Glu 
              50                  55                  60                  
          Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Glu Asp Asp Asn Ile Val Phe Tyr Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Glu Thr Arg Glu Ser Tyr Ile Ile Leu Ser Asn Ser Thr Met Lys 
                          85                  90                  95      
          Ser Val Asn Ala Thr Asp Tyr Gly Leu Ser Pro Asp Arg Gln Phe Val 
                      100                 105                 110         
          Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala 
                  115                 120                 125             
          Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Gln Asn Gly Glu Phe Val Arg Gly Tyr 
              130                 135                 140                 
          Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys Trp Ser Pro Val Gly Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile Tyr Leu Lys Gln Arg Pro 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Tyr Thr Gly Arg Glu Asn Arg Ile 
                      180                 185                 190         
          Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu Glu Glu Met Leu Ala Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asp Gly Lys Phe Leu Ala Tyr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Phe Asn Asp Ser Asp Ile Pro Ile Ile Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Gly Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile Pro Tyr Pro Lys Ala Gly 
                          245                 250                 255     
          Ala Lys Asn Pro Val Val Arg Val Phe Ile Val Asp Thr Thr Tyr Pro 
                      260                 265                 270         
          His His Val Gly Pro Met Glu Val Pro Val Pro Glu Met Ile Ala Ser 
                  275                 280                 285             
          Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp Val Ser Ser Glu Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn Val Ser Val Leu Ser Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp His Ala Trp Glu Cys Pro Lys Asn Gln 
                          325                 330                 335     
          Glu His Val Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp Ala Gly Gly Phe Phe Val 
                      340                 345                 350         
          Ser Thr Pro Ala Phe Ser Gln Asp Ala Thr Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe 
                  355                 360                 365             
          Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His Tyr Ile Lys Asp Thr Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys Trp Glu Ala Ile Tyr Ile 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr Ser Ser Asn Glu Phe Glu 
                          405                 410                 415     
          Gly Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg Ile Ser Ile Gly Asn Ser 
                      420                 425                 430         
          Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His Leu Arg Lys Glu Arg Cys 
                  435                 440                 445             
          Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Tyr Lys Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu 
              450                 455                 460                 
          Val Cys Tyr Gly Pro Gly Leu Pro Ile Ser Thr Leu His Asp Gly Arg 
          465                 470                 475                 480 
          Thr Asp Gln Glu Ile Gln Val Leu Glu Glu Asn Lys Glu Leu Glu Asn 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Arg Asn Ile Gln Leu Pro Lys Val Glu Ile Lys Lys Leu Lys 
                      500                 505                 510         
          Asp Gly Gly Leu Thr Phe Trp Tyr Lys Met Ile Leu Pro Pro Gln Phe 
                  515                 520                 525             
          Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile Gln Val Tyr Gly Gly Pro 
              530                 535                 540                 
          Cys Ser Gln Ser Val Lys Ser Val Phe Ala Val Asn Trp Ile Thr Tyr 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Ala Ser Lys Glu Gly Ile Val Ile Ala Leu Val Asp Gly Arg Gly 
                          565                 570                 575     
          Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Phe Leu His Ala Val Tyr Arg Lys Leu 
                      580                 585                 590         
          Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Leu Thr Ala Val Arg Lys Phe Ile 
                  595                 600                 605             
          Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Glu Arg Ile Ala Ile Trp Gly Trp Ser 
              610                 615                 620                 
          Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ser Gly Thr Gly Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr 
                          645                 650                 655     
          Ala Ser Ile Tyr Ser Glu Arg Phe Met Gly Leu Pro Thr Lys Asp Asp 
                      660                 665                 670         
          Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val Met Ala Arg Ala Glu Tyr 
                  675                 680                 685             
          Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His Gly Thr Ala Asp Asp Asn 
              690                 695                 700                 
          Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala Lys Ala Leu Val Asn Ala 
          705                 710                 715                 720 
          Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser Asp Gln Asn His Gly Ile 
                          725                 730                 735     
          Ser Ser Gly Arg Ser Gln Asn His Leu Tyr Thr His Met Thr His Phe 
                      740                 745                 750         
          Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp 
                  755                 760     
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  749]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  鼠 FAP 胞外域+多-lys-tag+his6-tag]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Arg Pro Ser Arg Val Tyr Lys Pro Glu Gly Asn Thr Lys Arg Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Lys Asp Ile Leu Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Tyr Phe 
                      20                  25                  30          
          Pro Asn Trp Ile Ser Glu Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Glu Asp Asp 
                  35                  40                  45              
          Asn Ile Val Phe Tyr Asn Ile Glu Thr Arg Glu Ser Tyr Ile Ile Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Asn Ser Thr Met Lys Ser Val Asn Ala Thr Asp Tyr Gly Leu Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Asp Arg Gln Phe Val Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp 
                          85                  90                  95      
          Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Gln Asn Gly 
                      100                 105                 110         
          Glu Phe Val Arg Gly Tyr Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys 
                  115                 120                 125             
          Trp Ser Pro Val Gly Ser Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile 
              130                 135                 140                 
          Tyr Leu Lys Gln Arg Pro Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Tyr Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Arg Glu Asn Arg Ile Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Glu Met Leu Ala Thr Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asp Gly 
                      180                 185                 190         
          Lys Phe Leu Ala Tyr Val Glu Phe Asn Asp Ser Asp Ile Pro Ile Ile 
                  195                 200                 205             
          Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly Asp Gly Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile 
              210                 215                 220                 
          Pro Tyr Pro Lys Ala Gly Ala Lys Asn Pro Val Val Arg Val Phe Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Val Asp Thr Thr Tyr Pro His His Val Gly Pro Met Glu Val Pro Val 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Met Ile Ala Ser Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp 
                      260                 265                 270         
          Val Ser Ser Glu Arg Val Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn 
                  275                 280                 285             
          Val Ser Val Leu Ser Ile Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp His Ala Trp 
              290                 295                 300                 
          Glu Cys Pro Lys Asn Gln Glu His Val Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Gly Gly Phe Phe Val Ser Thr Pro Ala Phe Ser Gln Asp Ala Thr 
                          325                 330                 335     
          Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His 
                      340                 345                 350         
          Tyr Ile Lys Asp Thr Val Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys 
                  355                 360                 365             
          Trp Glu Ala Ile Tyr Ile Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr 
              370                 375                 380                 
          Ser Ser Asn Glu Phe Glu Gly Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg 
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Ile Gly Asn Ser Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His 
                          405                 410                 415     
          Leu Arg Lys Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Tyr Lys 
                      420                 425                 430         
          Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu Val Cys Tyr Gly Pro Gly Leu Pro Ile Ser 
                  435                 440                 445             
          Thr Leu His Asp Gly Arg Thr Asp Gln Glu Ile Gln Val Leu Glu Glu 
              450                 455                 460                 
          Asn Lys Glu Leu Glu Asn Ser Leu Arg Asn Ile Gln Leu Pro Lys Val 
          465                 470                 475                 480 
          Glu Ile Lys Lys Leu Lys Asp Gly Gly Leu Thr Phe Trp Tyr Lys Met 
                          485                 490                 495     
          Ile Leu Pro Pro Gln Phe Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile 
                      500                 505                 510         
          Gln Val Tyr Gly Gly Pro Cys Ser Gln Ser Val Lys Ser Val Phe Ala 
                  515                 520                 525             
          Val Asn Trp Ile Thr Tyr Leu Ala Ser Lys Glu Gly Ile Val Ile Ala 
              530                 535                 540                 
          Leu Val Asp Gly Arg Gly Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Phe Leu His 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Val Tyr Arg Lys Leu Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Leu Thr 
                          565                 570                 575     
          Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Glu Arg Ile 
                      580                 585                 590         
          Ala Ile Trp Gly Trp Ser Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu 
                  595                 600                 605             
          Ala Ser Gly Thr Gly Leu Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val 
              610                 615                 620                 
          Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr Ala Ser Ile Tyr Ser Glu Arg Phe Met Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Leu Pro Thr Lys Asp Asp Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val 
                          645                 650                 655     
          Met Ala Arg Ala Glu Tyr Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His 
                      660                 665                 670         
          Gly Thr Ala Asp Asp Asn Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala 
                  675                 680                 685             
          Lys Ala Leu Val Asn Ala Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser 
              690                 695                 700                 
          Asp Gln Asn His Gly Ile Leu Ser Gly Arg Ser Gln Asn His Leu Tyr 
          705                 710                 715                 720 
          Thr His Met Thr His Phe Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp Gly 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly His His His His His His 
                      740                 745                 
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  2247]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  鼠 FAP 胞外域+多-lys-tag+his6-tag]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          cgtccctcaa gagtttacaa acctgaagga aacacaaaga gagctcttac cttgaaggat       60
          attttaaatg gaacattctc atataaaaca tattttccca actggatttc agaacaagaa      120
          tatcttcatc aatctgagga tgataacata gtattttata atattgaaac aagagaatca      180
          tatatcattt tgagtaatag caccatgaaa agtgtgaatg ctacagatta tggtttgtca      240
          cctgatcggc aatttgtgta tctagaaagt gattattcaa agctctggcg atattcatac      300
          acagcgacat actacatcta cgaccttcag aatggggaat ttgtaagagg atacgagctc      360
          cctcgtccaa ttcagtatct atgctggtcg cctgttggga gtaaattagc atatgtatat      420
          caaaacaata tttatttgaa acaaagacca ggagatccac cttttcaaat aacttatact      480
          ggaagagaaa atagaatatt taatggaata ccagactggg tttatgaaga ggaaatgctt      540
          gccacaaaat atgctctttg gtggtctcca gatggaaaat ttttggcata tgtagaattt      600
          aatgattcag atataccaat tattgcctat tcttattatg gtgatggaca gtatcctaga      660
          actataaata ttccatatcc aaaggctggg gctaagaatc cggttgttcg tgtttttatt      720
          gttgacacca cctaccctca ccacgtgggc ccaatggaag tgccagttcc agaaatgata      780
          gcctcaagtg actattattt cagctggctc acatgggtgt ccagtgaacg agtatgcttg      840
          cagtggctaa aaagagtgca gaatgtctca gtcctgtcta tatgtgattt cagggaagac      900
          tggcatgcat gggaatgtcc aaagaaccag gagcatgtag aagaaagcag aacaggatgg      960
          gctggtggat tctttgtttc gacaccagct tttagccagg atgccacttc ttactacaaa     1020
          atatttagcg acaaggatgg ttacaaacat attcactaca tcaaagacac tgtggaaaat     1080
          gctattcaaa ttacaagtgg caagtgggag gccatatata tattccgcgt aacacaggat     1140
          tcactgtttt attctagcaa tgaatttgaa ggttaccctg gaagaagaaa catctacaga     1200
          attagcattg gaaactctcc tccgagcaag aagtgtgtta cttgccatct aaggaaagaa     1260
          aggtgccaat attacacagc aagtttcagc tacaaagcca agtactatgc actcgtctgc     1320
          tatggccctg gcctccccat ttccaccctc catgatggcc gcacagacca agaaatacaa     1380
          gtattagaag aaaacaaaga actggaaaat tctctgagaa atatccagct gcctaaagtg     1440
          gagattaaga agctcaaaga cgggggactg actttctggt acaagatgat tctgcctcct     1500
          cagtttgaca gatcaaagaa gtaccctttg ctaattcaag tgtatggtgg tccttgtagc     1560
          cagagtgtta agtctgtgtt tgctgttaat tggataactt atctcgcaag taaggagggg     1620
          atagtcattg ccctggtaga tggtcggggc actgctttcc aaggtgacaa attcctgcat     1680
          gccgtgtatc gaaaactggg tgtatatgaa gttgaggacc agctcacagc tgtcagaaaa     1740
          ttcatagaaa tgggtttcat tgatgaagaa agaatagcca tatggggctg gtcctacgga     1800
          ggttatgttt catccctggc ccttgcatct ggaactggtc ttttcaaatg tggcatagca     1860
          gtggctccag tctccagctg ggaatattac gcatctatct actcagagag attcatgggc     1920
          ctcccaacaa aggacgacaa tctcgaacac tataaaaatt caactgtgat ggcaagagca     1980
          gaatatttca gaaatgtaga ctatcttctc atccacggaa cagcagatga taatgtgcac     2040
          tttcagaact cagcacagat tgctaaagct ttggttaatg cacaagtgga tttccaggcg     2100
          atgtggtact ctgaccagaa ccatggtata ttatctgggc gctcccagaa tcatttatat     2160
          acccacatga cgcacttcct caagcaatgc ttttctttat cagacggcaa aaagaaaaag     2220
          aaaaagggcc accaccatca ccatcac                                         2247
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  748]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  食蟹猴 FAP 胞外域+多-lys-tag+his6-tag]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Arg Pro Pro Arg Val His Asn Ser Glu Glu Asn Thr Met Arg Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Lys Asp Ile Leu Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Phe Phe 
                      20                  25                  30          
          Pro Asn Trp Ile Ser Gly Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Ala Asp Asn 
                  35                  40                  45              
          Asn Ile Val Leu Tyr Asn Ile Glu Thr Gly Gln Ser Tyr Thr Ile Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Asn Arg Thr Met Lys Ser Val Asn Ala Ser Asn Tyr Gly Leu Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Asp Arg Gln Phe Val Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp 
                          85                  90                  95      
          Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Ser Asn Gly 
                      100                 105                 110         
          Glu Phe Val Arg Gly Asn Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys 
                  115                 120                 125             
          Trp Ser Pro Val Gly Ser Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile 
              130                 135                 140                 
          Tyr Leu Lys Gln Arg Pro Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Phe Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Arg Glu Asn Lys Ile Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Glu Met Leu Ala Thr Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asn Gly 
                      180                 185                 190         
          Lys Phe Leu Ala Tyr Ala Glu Phe Asn Asp Thr Asp Ile Pro Val Ile 
                  195                 200                 205             
          Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly Asp Glu Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile 
              210                 215                 220                 
          Pro Tyr Pro Lys Ala Gly Ala Lys Asn Pro Phe Val Arg Ile Phe Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Asp Thr Thr Tyr Pro Ala Tyr Val Gly Pro Gln Glu Val Pro Val 
                          245                 250                 255     
          Pro Ala Met Ile Ala Ser Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp 
                      260                 265                 270         
          Val Thr Asp Glu Arg Val Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn 
                  275                 280                 285             
          Val Ser Val Leu Ser Ile Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp Gln Thr Trp 
              290                 295                 300                 
          Asp Cys Pro Lys Thr Gln Glu His Ile Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Gly Gly Phe Phe Val Ser Thr Pro Val Phe Ser Tyr Asp Ala Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His 
                      340                 345                 350         
          Tyr Ile Lys Asp Thr Val Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys 
                  355                 360                 365             
          Trp Glu Ala Ile Asn Ile Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr 
              370                 375                 380                 
          Ser Ser Asn Glu Phe Glu Asp Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg 
          385                 390                 395                 400 
          Ile Ser Ile Gly Ser Tyr Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His 
                          405                 410                 415     
          Leu Arg Lys Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Asp Tyr 
                      420                 425                 430         
          Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu Val Cys Tyr Gly Pro Gly Ile Pro Ile Ser 
                  435                 440                 445             
          Thr Leu His Asp Gly Arg Thr Asp Gln Glu Ile Lys Ile Leu Glu Glu 
              450                 455                 460                 
          Asn Lys Glu Leu Glu Asn Ala Leu Lys Asn Ile Gln Leu Pro Lys Glu 
          465                 470                 475                 480 
          Glu Ile Lys Lys Leu Glu Val Asp Glu Ile Thr Leu Trp Tyr Lys Met 
                          485                 490                 495     
          Ile Leu Pro Pro Gln Phe Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile 
                      500                 505                 510         
          Gln Val Tyr Gly Gly Pro Cys Ser Gln Ser Val Arg Ser Val Phe Ala 
                  515                 520                 525             
          Val Asn Trp Ile Ser Tyr Leu Ala Ser Lys Glu Gly Met Val Ile Ala 
              530                 535                 540                 
          Leu Val Asp Gly Arg Gly Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Leu Leu Tyr 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Val Tyr Arg Lys Leu Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Ile Thr 
                          565                 570                 575     
          Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Lys Arg Ile 
                      580                 585                 590         
          Ala Ile Trp Gly Trp Ser Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu 
                  595                 600                 605             
          Ala Ser Gly Thr Gly Leu Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val 
              610                 615                 620                 
          Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr Ala Ser Val Tyr Thr Glu Arg Phe Met Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Leu Pro Thr Lys Asp Asp Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val 
                          645                 650                 655     
          Met Ala Arg Ala Glu Tyr Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His 
                      660                 665                 670         
          Gly Thr Ala Asp Asp Asn Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala 
                  675                 680                 685             
          Lys Ala Leu Val Asn Ala Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser 
              690                 695                 700                 
          Asp Gln Asn His Gly Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn His Leu Tyr Thr 
          705                 710                 715                 720 
          His Met Thr His Phe Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp Gly Lys 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Lys Lys Lys Gly His His His His His His 
                      740                 745             
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  2244]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  食蟹猴 FAP 胞外域+多-lys-tag+his6-tag]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          cgccctccaa gagttcataa ctctgaagaa aatacaatga gagcactcac actgaaggat       60
          attttaaatg ggacattttc ttataaaaca ttttttccaa actggatttc aggacaagaa      120
          tatcttcatc aatctgcaga taacaatata gtactttata atattgaaac aggacaatca      180
          tataccattt tgagtaacag aaccatgaaa agtgtgaatg cttcaaatta tggcttatca      240
          cctgatcggc aatttgtata tctagaaagt gattattcaa agctttggag atactcttac      300
          acagcaacat attacatcta tgaccttagc aatggagaat ttgtaagagg aaatgagctt      360
          cctcgtccaa ttcagtattt atgctggtcg cctgttggga gtaaattagc atatgtctat      420
          caaaacaata tctatttgaa acaaagacca ggagatccac cttttcaaat aacatttaat      480
          ggaagagaaa ataaaatatt taatggaatc ccagactggg tttatgaaga ggaaatgctt      540
          gctacaaaat atgctctctg gtggtctcct aatggaaaat ttttggcata tgcggaattt      600
          aatgatacag atataccagt tattgcctat tcctattatg gcgatgaaca atatcccaga      660
          acaataaata ttccataccc aaaggccgga gctaagaatc cttttgttcg gatatttatt      720
          atcgatacca cttaccctgc gtatgtaggt ccccaggaag tgcctgttcc agcaatgata      780
          gcctcaagtg attattattt cagttggctc acgtgggtta ctgatgaacg agtatgtttg      840
          cagtggctaa aaagagtcca gaatgtttcg gtcttgtcta tatgtgattt cagggaagac      900
          tggcagacat gggattgtcc aaagacccag gagcatatag aagaaagcag aactggatgg      960
          gctggtggat tctttgtttc aacaccagtt ttcagctatg atgccatttc atactacaaa     1020
          atatttagtg acaaggatgg ctacaaacat attcactata tcaaagacac tgtggaaaat     1080
          gctattcaaa ttacaagtgg caagtgggag gccataaata tattcagagt aacacaggat     1140
          tcactgtttt attctagcaa tgaatttgaa gattaccctg gaagaagaaa catctacaga     1200
          attagcattg gaagctatcc tccaagcaag aagtgtgtta cttgccatct aaggaaagaa     1260
          aggtgccaat attacacagc aagtttcagc gactacgcca agtactatgc acttgtctgc     1320
          tatggcccag gcatccccat ttccaccctt catgacggac gcactgatca agaaattaaa     1380
          atcctggaag aaaacaagga attggaaaat gctttgaaaa atatccagct gcctaaagag     1440
          gaaattaaga aacttgaagt agatgaaatt actttatggt acaagatgat tcttcctcct     1500
          caatttgaca gatcaaagaa gtatcccttg ctaattcaag tgtatggtgg tccctgcagt     1560
          cagagtgtaa ggtctgtatt tgctgttaat tggatatctt atcttgcaag taaggaaggg     1620
          atggtcattg ccttggtgga tggtcgggga acagctttcc aaggtgacaa actcctgtat     1680
          gcagtgtatc gaaagctggg tgtttatgaa gttgaagacc agattacagc tgtcagaaaa     1740
          ttcatagaaa tgggtttcat tgatgaaaaa agaatagcca tatggggctg gtcctatgga     1800
          ggatatgttt catcactggc ccttgcatct ggaactggtc ttttcaaatg tgggatagca     1860
          gtggctccag tctccagctg ggaatattac gcgtctgtct acacagagag attcatgggt     1920
          ctcccaacaa aggatgataa tcttgagcac tataagaatt caactgtgat ggcaagagca     1980
          gaatatttca gaaatgtaga ctatcttctc atccacggaa cagcagatga taatgtgcac     2040
          tttcaaaact cagcacagat tgctaaagct ctggttaatg cacaagtgga tttccaggca     2100
          atgtggtact ctgaccagaa ccacggctta tccggcctgt ccacgaacca cttatacacc     2160
          cacatgaccc acttcctaaa gcagtgtttc tctttgtcag acggcaaaaa gaaaaagaaa     2220
          aagggccacc accatcacca tcac                                            2244
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  702]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Met Glu Ser Pro Ser Ala Pro Pro His Arg Trp Cys Ile Pro Trp Gln 
          1               5                   10                  15      
          Arg Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr 
                      20                  25                  30          
          Thr Ala Lys Leu Thr Ile Glu Ser Thr Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly 
                  35                  40                  45              
          Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln His Leu Phe Gly 
              50                  55                  60                  
          Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Tyr Val Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Tyr Ser 
                          85                  90                  95      
          Gly Arg Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Ile 
                      100                 105                 110         
          Ile Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu His Val Ile Lys Ser Asp 
                  115                 120                 125             
          Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu 
              130                 135                 140                 
          Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val Glu Asp Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Ala Thr Tyr 
                          165                 170                 175     
          Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn Val Thr Arg Asn 
                  195                 200                 205             
          Asp Thr Ala Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Ala Arg 
              210                 215                 220                 
          Arg Ser Asp Ser Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Ile Ser Pro Leu Asn Thr Ser Tyr Arg Ser Gly Glu Asn Leu Asn 
                          245                 250                 255     
          Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Phe 
                      260                 265                 270         
          Val Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn 
                  275                 280                 285             
          Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Thr Cys Gln Ala His Asn Ser 
              290                 295                 300                 
          Asp Thr Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Thr Ile Thr Val Tyr Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Pro Pro Lys Pro Phe Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu 
                          325                 330                 335     
          Asp Glu Asp Ala Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Ile Gln Asn Thr 
                      340                 345                 350         
          Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg 
                  355                 360                 365             
          Leu Gln Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr 
              370                 375                 380                 
          Arg Asn Asp Val Gly Pro Tyr Glu Cys Gly Ile Gln Asn Lys Leu Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Val Asp His Ser Asp Pro Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp 
                          405                 410                 415     
          Asp Pro Thr Ile Ser Pro Ser Tyr Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Val Asn 
                      420                 425                 430         
          Leu Ser Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser 
                  435                 440                 445             
          Trp Leu Ile Asp Gly Asn Ile Gln Gln His Thr Gln Glu Leu Phe Ile 
              450                 455                 460                 
          Ser Asn Ile Thr Glu Lys Asn Ser Gly Leu Tyr Thr Cys Gln Ala Asn 
          465                 470                 475                 480 
          Asn Ser Ala Ser Gly His Ser Arg Thr Thr Val Lys Thr Ile Thr Val 
                          485                 490                 495     
          Ser Ala Glu Leu Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro 
                      500                 505                 510         
          Val Glu Asp Lys Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Ala Gln 
                  515                 520                 525             
          Asn Thr Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Gly Gln Ser Leu Pro Val Ser 
              530                 535                 540                 
          Pro Arg Leu Gln Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn 
          545                 550                 555                 560 
          Val Thr Arg Asn Asp Ala Arg Ala Tyr Val Cys Gly Ile Gln Asn Ser 
                          565                 570                 575     
          Val Ser Ala Asn Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asp Val Leu Tyr Gly 
                      580                 585                 590         
          Pro Asp Thr Pro Ile Ile Ser Pro Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Ser Gly 
                  595                 600                 605             
          Ala Asn Leu Asn Leu Ser Cys His Ser Ala Ser Asn Pro Ser Pro Gln 
              610                 615                 620                 
          Tyr Ser Trp Arg Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Phe Ile Ala Lys Ile Thr Pro Asn Asn Asn Gly Thr Tyr Ala Cys Phe 
                          645                 650                 655     
          Val Ser Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser Ile Val Lys Ser Ile 
                      660                 665                 670         
          Thr Val Ser Ala Ser Gly Thr Ser Pro Gly Leu Ser Ala Gly Ala Thr 
                  675                 680                 685             
          Val Gly Ile Met Ile Gly Val Leu Val Gly Val Ala Leu Ile 
              690                 695                 700         
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  205]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Met Thr Pro Pro Glu Arg Leu Phe Leu Pro Arg Val Cys Gly Thr Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu His Leu Leu Leu Leu Gly Leu Leu Leu Val Leu Leu Pro Gly Ala 
                      20                  25                  30          
          Gln Gly Leu Pro Gly Val Gly Leu Thr Pro Ser Ala Ala Gln Thr Ala 
                  35                  40                  45              
          Arg Gln His Pro Lys Met His Leu Ala His Ser Thr Leu Lys Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Ala His Leu Ile Gly Asp Pro Ser Lys Gln Asn Ser Leu Leu Trp Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Asn Thr Asp Arg Ala Phe Leu Gln Asp Gly Phe Ser Leu Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Asn Ser Leu Leu Val Pro Thr Ser Gly Ile Tyr Phe Val Tyr Ser Gln 
                      100                 105                 110         
          Val Val Phe Ser Gly Lys Ala Tyr Ser Pro Lys Ala Thr Ser Ser Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Tyr Leu Ala His Glu Val Gln Leu Phe Ser Ser Gln Tyr Pro Phe 
              130                 135                 140                 
          His Val Pro Leu Leu Ser Ser Gln Lys Met Val Tyr Pro Gly Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Trp Leu His Ser Met Tyr His Gly Ala Ala Phe Gln Leu Thr 
                          165                 170                 175     
          Gln Gly Asp Gln Leu Ser Thr His Thr Asp Gly Ile Pro His Leu Val 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Pro Ser Thr Val Phe Phe Gly Ala Phe Ala Leu 
                  195                 200                 205 
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  233]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Met Ser Thr Glu Ser Met Ile Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gln Gly Ser Arg Arg Cys Leu Phe 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr Thr Leu Phe 
                  35                  40                  45              
          Cys Leu Leu His Phe Gly Val Ile Gly Pro Gln Arg Glu Glu Phe Pro 
              50                  55                  60                  
          Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu Ala Gln Ala Val Arg Ser Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro 
                          85                  90                  95      
          Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu 
                      100                 105                 110         
          Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly 
              130                 135                 140                 
          Cys Pro Ser Thr His Val Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Tyr Gln Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro 
                          165                 170                 175     
          Cys Gln Arg Glu Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Pro Ile Tyr Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu 
                  195                 200                 205             
          Ser Ala Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu 
          225                 230             
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  244]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Met Gly Ala Leu Gly Leu Glu Gly Arg Gly Gly Arg Leu Gln Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Leu Leu Leu Ala Val Ala Gly Ala Thr Ser Leu Val Thr Leu 
                      20                  25                  30          
          Leu Leu Ala Val Pro Ile Thr Val Leu Ala Val Leu Ala Leu Val Pro 
                  35                  40                  45              
          Gln Asp Gln Gly Gly Leu Val Thr Glu Thr Ala Asp Pro Gly Ala Gln 
              50                  55                  60                  
          Ala Gln Gln Gly Leu Gly Phe Gln Lys Leu Pro Glu Glu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Asp Leu Ser Pro Gly Leu Pro Ala Ala His Leu Ile Gly Ala Pro 
                          85                  90                  95      
          Leu Lys Gly Gln Gly Leu Gly Trp Glu Thr Thr Lys Glu Gln Ala Phe 
                      100                 105                 110         
          Leu Thr Ser Gly Thr Gln Phe Ser Asp Ala Glu Gly Leu Ala Leu Pro 
                  115                 120                 125             
          Gln Asp Gly Leu Tyr Tyr Leu Tyr Cys Leu Val Gly Tyr Arg Gly Arg 
              130                 135                 140                 
          Ala Pro Pro Gly Gly Gly Asp Pro Gln Gly Arg Ser Val Thr Leu Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ser Leu Tyr Arg Ala Gly Gly Ala Tyr Gly Pro Gly Thr Pro Glu 
                          165                 170                 175     
          Leu Leu Leu Glu Gly Ala Glu Thr Val Thr Pro Val Leu Asp Pro Ala 
                      180                 185                 190         
          Arg Arg Gln Gly Tyr Gly Pro Leu Trp Tyr Thr Ser Val Gly Phe Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Leu Val Gln Leu Arg Arg Gly Glu Arg Val Tyr Val Asn Ile Ser 
              210                 215                 220                 
          His Pro Asp Met Val Asp Phe Ala Arg Gly Lys Thr Phe Phe Gly Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Val Met Val Gly 
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  183]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly Asn Ala Ala Arg 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys Leu Leu Leu Val Ala Ser Val Ile Gln 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu Gly Leu Leu Leu Cys Phe Thr Tyr Ile Cys Leu His Phe Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Leu Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val 
              50                  55                  60                  
          Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn 
                          85                  90                  95      
          Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu 
                      100                 105                 110         
          Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr 
              130                 135                 140                 
          Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn 
                          165                 170                 175     
          Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu 
                      180             
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  261]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Met Ile Glu Thr Tyr Asn Gln Thr Ser Pro Arg Ser Ala Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Leu Pro Ile Ser Met Lys Ile Phe Met Tyr Leu Leu Thr Val Phe Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Thr Gln Met Ile Gly Ser Ala Leu Phe Ala Val Tyr Leu His Arg 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Asp Lys Ile Glu Asp Glu Arg Asn Leu His Glu Asp Phe Val 
              50                  55                  60                  
          Phe Met Lys Thr Ile Gln Arg Cys Asn Thr Gly Glu Arg Ser Leu Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Leu Asn Cys Glu Glu Ile Lys Ser Gln Phe Glu Gly Phe Val Lys 
                          85                  90                  95      
          Asp Ile Met Leu Asn Lys Glu Glu Thr Lys Lys Glu Asn Ser Phe Glu 
                      100                 105                 110         
          Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser 
                  115                 120                 125             
          Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly 
              130                 135                 140                 
          Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr 
                          165                 170                 175     
          Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala 
                  195                 200                 205             
          Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His 
              210                 215                 220                 
          Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe 
                          245                 250                 255     
          Gly Leu Leu Lys Leu 
                      260     
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  281]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Met Gln Gln Pro Phe Asn Tyr Pro Tyr Pro Gln Ile Tyr Trp Val Asp 
          1               5                   10                  15      
          Ser Ser Ala Ser Ser Pro Trp Ala Pro Pro Gly Thr Val Leu Pro Cys 
                      20                  25                  30          
          Pro Thr Ser Val Pro Arg Arg Pro Gly Gln Arg Arg Pro Pro Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro 
              50                  55                  60                  
          Pro Leu Pro Leu Pro Pro Leu Lys Lys Arg Gly Asn His Ser Thr Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Cys Leu Leu Val Met Phe Phe Met Val Leu Val Ala Leu Val Gly 
                          85                  90                  95      
          Leu Gly Leu Gly Met Phe Gln Leu Phe His Leu Gln Lys Glu Leu Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Leu Arg Glu Ser Thr Ser Gln Met His Thr Ala Ser Ser Leu Glu 
                  115                 120                 125             
          Lys Gln Ile Gly His Pro Ser Pro Pro Pro Glu Lys Lys Glu Leu Arg 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Ala His Leu Thr Gly Lys Ser Asn Ser Arg Ser Met Pro Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Trp Glu Asp Thr Tyr Gly Ile Val Leu Leu Ser Gly Val Lys Tyr 
                          165                 170                 175     
          Lys Lys Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ser Lys Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Leu Pro Leu Ser 
                  195                 200                 205             
          His Lys Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Gln Asp Leu Val Met 
              210                 215                 220                 
          Met Glu Gly Lys Met Met Ser Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Met Trp Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Arg Ser Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His 
                          245                 250                 255     
          Leu Tyr Val Asn Val Ser Glu Leu Ser Leu Val Asn Phe Glu Glu Ser 
                      260                 265                 270         
          Gln Thr Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu 
                  275                 280     
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  193]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Met Pro Glu Glu Gly Ser Gly Cys Ser Val Arg Arg Arg Pro Tyr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Cys Val Leu Arg Ala Ala Leu Val Pro Leu Val Ala Gly Leu Val Ile 
                      20                  25                  30          
          Cys Leu Val Val Cys Ile Gln Arg Phe Ala Gln Ala Gln Gln Gln Leu 
                  35                  40                  45              
          Pro Leu Glu Ser Leu Gly Trp Asp Val Ala Glu Leu Gln Leu Asn His 
              50                  55                  60                  
          Thr Gly Pro Gln Gln Asp Pro Arg Leu Tyr Trp Gln Gly Gly Pro Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gly Arg Ser Phe Leu His Gly Pro Glu Leu Asp Lys Gly Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Arg Ile His Arg Asp Gly Ile Tyr Met Val His Ile Gln Val Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Ala Ile Cys Ser Ser Thr Thr Ala Ser Arg His His Pro Thr Thr Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Val Gly Ile Cys Ser Pro Ala Ser Arg Ser Ile Ser Leu Leu Arg 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Phe His Gln Gly Cys Thr Ile Ala Ser Gln Arg Leu Thr Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ala Arg Gly Asp Thr Leu Cys Thr Asn Leu Thr Gly Thr Leu Leu 
                          165                 170                 175     
          Pro Ser Arg Asn Thr Asp Glu Thr Phe Phe Gly Val Gln Trp Val Arg 
                      180                 185                 190         
          Pro 
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  234]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Met Asp Pro Gly Leu Gln Gln Ala Leu Asn Gly Met Ala Pro Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Thr Ala Met His Val Pro Ala Gly Ser Val Ala Ser His Leu Gly 
                      20                  25                  30          
          Thr Thr Ser Arg Ser Tyr Phe Tyr Leu Thr Thr Ala Thr Leu Ala Leu 
                  35                  40                  45              
          Cys Leu Val Phe Thr Val Ala Thr Ile Met Val Leu Val Val Gln Arg 
              50                  55                  60                  
          Thr Asp Ser Ile Pro Asn Ser Pro Asp Asn Val Pro Leu Lys Gly Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Cys Ser Glu Asp Leu Leu Cys Ile Leu Lys Arg Ala Pro Phe Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Ser Trp Ala Tyr Leu Gln Val Ala Lys His Leu Asn Lys Thr Lys 
                      100                 105                 110         
          Leu Ser Trp Asn Lys Asp Gly Ile Leu His Gly Val Arg Tyr Gln Asp 
                  115                 120                 125             
          Gly Asn Leu Val Ile Gln Phe Pro Gly Leu Tyr Phe Ile Ile Cys Gln 
              130                 135                 140                 
          Leu Gln Phe Leu Val Gln Cys Pro Asn Asn Ser Val Asp Leu Lys Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Leu Leu Ile Asn Lys His Ile Lys Lys Gln Ala Leu Val Thr Val 
                          165                 170                 175     
          Cys Glu Ser Gly Met Gln Thr Lys His Val Tyr Gln Asn Leu Ser Gln 
                      180                 185                 190         
          Phe Leu Leu Asp Tyr Leu Gln Val Asn Thr Thr Ile Ser Val Asn Val 
                  195                 200                 205             
          Asp Thr Phe Gln Tyr Ile Asp Thr Ser Thr Phe Pro Leu Glu Asn Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Ser Ile Phe Leu Tyr Ser Asn Ser Asp 
          225                 230                 
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  254]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Met Glu Tyr Ala Ser Asp Ala Ser Leu Asp Pro Glu Ala Pro Trp Pro 
          1               5                   10                  15      
          Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Cys Arg Val Leu Pro Trp Ala Leu Val 
                      20                  25                  30          
          Ala Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ala Val Phe 
                  35                  40                  45              
          Leu Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val 
                          85                  90                  95      
          Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp 
                      100                 105                 110         
          Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu 
                  115                 120                 125             
          Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe 
              130                 135                 140                 
          Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala 
                          165                 170                 175     
          Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala 
                      180                 185                 190         
          Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala 
                  195                 200                 205             
          Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His 
              210                 215                 220                 
          Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                          245                 250                 
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  281]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Met Ala Met Met Glu Val Gln Gly Gly Pro Ser Leu Gly Gln Thr Cys 
          1               5                   10                  15      
          Val Leu Ile Val Ile Phe Thr Val Leu Leu Gln Ser Leu Cys Val Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Thr Tyr Val Tyr Phe Thr Asn Glu Leu Lys Gln Met Gln Asp Lys 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Lys Ser Gly Ile Ala Cys Phe Leu Lys Glu Asp Asp Ser Tyr 
              50                  55                  60                  
          Trp Asp Pro Asn Asp Glu Glu Ser Met Asn Ser Pro Cys Trp Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Trp Gln Leu Arg Gln Leu Val Arg Lys Met Ile Leu Arg Thr Ser 
                          85                  90                  95      
          Glu Glu Thr Ile Ser Thr Val Gln Glu Lys Gln Gln Asn Ile Ser Pro 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile Thr Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser Lys Asn Glu 
              130                 135                 140                 
          Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser Ser Arg Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn Gly Glu Leu Val Ile 
                          165                 170                 175     
          His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gln Thr Tyr Phe Arg Phe 
                      180                 185                 190         
          Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys Asn Asp Lys Gln Met Val Gln 
                  195                 200                 205             
          Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys 
              210                 215                 220                 
          Ser Ala Arg Asn Ser Cys Trp Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Ile Tyr Gln Gly Gly Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile 
                          245                 250                 255     
          Phe Val Ser Val Thr Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala 
                      260                 265                 270         
          Ser Phe Phe Gly Ala Phe Leu Val Gly 
                  275                 280     
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  317]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Met Arg Arg Ala Ser Arg Asp Tyr Thr Lys Tyr Leu Arg Gly Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Glu Met Gly Gly Gly Pro Gly Ala Pro His Glu Gly Pro Leu His Ala 
                      20                  25                  30          
          Pro Pro Pro Pro Ala Pro His Gln Pro Pro Ala Ala Ser Arg Ser Met 
                  35                  40                  45              
          Phe Val Ala Leu Leu Gly Leu Gly Leu Gly Gln Val Val Cys Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Ala Leu Phe Phe Tyr Phe Arg Ala Gln Met Asp Pro Asn Arg Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Gly Thr His Cys Ile Tyr Arg Ile Leu Arg Leu His Glu Asn 
                          85                  90                  95      
          Ala Asp Phe Gln Asp Thr Thr Leu Glu Ser Gln Asp Thr Lys Leu Ile 
                      100                 105                 110         
          Pro Asp Ser Cys Arg Arg Ile Lys Gln Ala Phe Gln Gly Ala Val Gln 
                  115                 120                 125             
          Lys Glu Leu Gln His Ile Val Gly Ser Gln His Ile Arg Ala Glu Lys 
              130                 135                 140                 
          Ala Met Val Asp Gly Ser Trp Leu Asp Leu Ala Lys Arg Ser Lys Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ala Gln Pro Phe Ala His Leu Thr Ile Asn Ala Thr Asp Ile Pro 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Ser His Lys Val Ser Leu Ser Ser Trp Tyr His Asp Arg Gly 
                      180                 185                 190         
          Trp Ala Lys Ile Ser Asn Met Thr Phe Ser Asn Gly Lys Leu Ile Val 
                  195                 200                 205             
          Asn Gln Asp Gly Phe Tyr Tyr Leu Tyr Ala Asn Ile Cys Phe Arg His 
              210                 215                 220                 
          His Glu Thr Ser Gly Asp Leu Ala Thr Glu Tyr Leu Gln Leu Met Val 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Val Thr Lys Thr Ser Ile Lys Ile Pro Ser Ser His Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Lys Gly Gly Ser Thr Lys Tyr Trp Ser Gly Asn Ser Glu Phe His Phe 
                      260                 265                 270         
          Tyr Ser Ile Asn Val Gly Gly Phe Phe Lys Leu Arg Ser Gly Glu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ile Ser Ile Glu Val Ser Asn Pro Ser Leu Leu Asp Pro Asp Gln Asp 
              290                 295                 300                 
          Ala Thr Tyr Phe Gly Ala Phe Lys Val Arg Asp Ile Asp 
          305                 310                 315         
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  249]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Met Ala Ala Arg Arg Ser Gln Arg Arg Arg Gly Arg Arg Gly Glu Pro 
          1               5                   10                  15      
          Gly Thr Ala Leu Leu Val Pro Leu Ala Leu Gly Leu Gly Leu Ala Leu 
                      20                  25                  30          
          Ala Cys Leu Gly Leu Leu Leu Ala Val Val Ser Leu Gly Ser Arg Ala 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Ser Ala Gln Glu Pro Ala Gln Glu Glu Leu Val Ala Glu Glu 
              50                  55                  60                  
          Asp Gln Asp Pro Ser Glu Leu Asn Pro Gln Thr Glu Glu Ser Gln Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Ala Pro Phe Leu Asn Arg Leu Val Arg Pro Arg Arg Ser Ala Pro 
                          85                  90                  95      
          Lys Gly Arg Lys Thr Arg Ala Arg Arg Ala Ile Ala Ala His Tyr Glu 
                      100                 105                 110         
          Val His Pro Arg Pro Gly Gln Asp Gly Ala Gln Ala Gly Val Asp Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Val Ser Gly Trp Glu Glu Ala Arg Ile Asn Ser Ser Ser Pro Leu 
              130                 135                 140                 
          Arg Tyr Asn Arg Gln Ile Gly Glu Phe Ile Val Thr Arg Ala Gly Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Tyr Leu Tyr Cys Gln Val His Phe Asp Glu Gly Lys Ala Val Tyr 
                          165                 170                 175     
          Leu Lys Leu Asp Leu Leu Val Asp Gly Val Leu Ala Leu Arg Cys Leu 
                      180                 185                 190         
          Glu Glu Phe Ser Ala Thr Ala Ala Ser Ser Leu Gly Pro Gln Leu Arg 
                  195                 200                 205             
          Leu Cys Gln Val Ser Gly Leu Leu Ala Leu Arg Pro Gly Ser Ser Leu 
              210                 215                 220                 
          Arg Ile Arg Thr Leu Pro Trp Ala His Leu Lys Ala Ala Pro Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Tyr Phe Gly Leu Phe Gln Val His 
                          245                 
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  250]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Met Pro Ala Ser Ser Pro Phe Leu Leu Ala Pro Lys Gly Pro Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asn Met Gly Gly Pro Val Arg Glu Pro Ala Leu Ser Val Ala Leu Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Trp Gly Ala Ala Leu Gly Ala Val Ala Cys Ala Met Ala Leu 
                  35                  40                  45              
          Leu Thr Gln Gln Thr Glu Leu Gln Ser Leu Arg Arg Glu Val Ser Arg 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Thr Gly Gly Pro Ser Gln Asn Gly Glu Gly Tyr Pro Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Ser Leu Pro Glu Gln Ser Ser Asp Ala Leu Glu Ala Trp Glu Asn 
                          85                  90                  95      
          Gly Glu Arg Ser Arg Lys Arg Arg Ala Val Leu Thr Gln Lys Gln Lys 
                      100                 105                 110         
          Lys Gln His Ser Val Leu His Leu Val Pro Ile Asn Ala Thr Ser Lys 
                  115                 120                 125             
          Asp Asp Ser Asp Val Thr Glu Val Met Trp Gln Pro Ala Leu Arg Arg 
              130                 135                 140                 
          Gly Arg Gly Leu Gln Ala Gln Gly Tyr Gly Val Arg Ile Gln Asp Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val Tyr Leu Leu Tyr Ser Gln Val Leu Phe Gln Asp Val Thr Phe 
                          165                 170                 175     
          Thr Met Gly Gln Val Val Ser Arg Glu Gly Gln Gly Arg Gln Glu Thr 
                      180                 185                 190         
          Leu Phe Arg Cys Ile Arg Ser Met Pro Ser His Pro Asp Arg Ala Tyr 
                  195                 200                 205             
          Asn Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Val Phe His Leu His Gln Gly Asp Ile 
              210                 215                 220                 
          Leu Ser Val Ile Ile Pro Arg Ala Arg Ala Lys Leu Asn Leu Ser Pro 
          225                 230                 235                 240 
          His Gly Thr Phe Leu Gly Phe Val Lys Leu 
                          245                 250 
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  285]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Met Asp Asp Ser Thr Glu Arg Glu Gln Ser Arg Leu Thr Ser Cys Leu 
          1               5                   10                  15      
          Lys Lys Arg Glu Glu Met Lys Leu Lys Glu Cys Val Ser Ile Leu Pro 
                      20                  25                  30          
          Arg Lys Glu Ser Pro Ser Val Arg Ser Ser Lys Asp Gly Lys Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Cys Leu Thr Val Val 
              50                  55                  60                  
          Ser Phe Tyr Gln Val Ala Ala Leu Gln Gly Asp Leu Ala Ser Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Glu Leu Gln Gly His His Ala Glu Lys Leu Pro Ala Gly Ala Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Lys Ala Gly Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Thr Ala Gly Leu 
                      100                 105                 110         
          Lys Ile Phe Glu Pro Pro Ala Pro Gly Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asn 
                  115                 120                 125             
          Ser Arg Asn Lys Arg Ala Val Gln Gly Pro Glu Glu Thr Val Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Asp Cys Leu Gln Leu Ile Ala Asp Ser Glu Thr Pro Thr Ile Gln Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ser Tyr Thr Phe Val Pro Trp Leu Leu Ser Phe Lys Arg Gly Ser 
                          165                 170                 175     
          Ala Leu Glu Glu Lys Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Glu Thr Gly Tyr 
                      180                 185                 190         
          Phe Phe Ile Tyr Gly Gln Val Leu Tyr Thr Asp Lys Thr Tyr Ala Met 
                  195                 200                 205             
          Gly His Leu Ile Gln Arg Lys Lys Val His Val Phe Gly Asp Glu Leu 
              210                 215                 220                 
          Ser Leu Val Thr Leu Phe Arg Cys Ile Gln Asn Met Pro Glu Thr Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Asn Asn Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Ile Ala Lys Leu Glu Glu Gly 
                          245                 250                 255     
          Asp Glu Leu Gln Leu Ala Ile Pro Arg Glu Asn Ala Gln Ile Ser Leu 
                      260                 265                 270         
          Asp Gly Asp Val Thr Phe Phe Gly Ala Leu Lys Leu Leu 
                  275                 280                 285 
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  240]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Met Glu Glu Ser Val Val Arg Pro Ser Val Phe Val Val Asp Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Asp Ile Pro Phe Thr Arg Leu Gly Arg Ser His Arg Arg Gln Ser 
                      20                  25                  30          
          Cys Ser Val Ala Arg Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Met Gly 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Leu Ala Val Gln Gly Trp Phe Leu Leu Gln Leu His Trp Arg 
              50                  55                  60                  
          Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala 
                          85                  90                  95      
          His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu 
                      100                 105                 110         
          Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr 
                  115                 120                 125             
          His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr 
              130                 135                 140                 
          Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu 
                          165                 170                 175     
          Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His 
                  195                 200                 205             
          Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu 
              210                 215                 220                 
          Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val 
          225                 230                 235                 240 
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  251]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Met Ala Glu Asp Leu Gly Leu Ser Phe Gly Glu Thr Ala Ser Val Glu 
          1               5                   10                  15      
          Met Leu Pro Glu His Gly Ser Cys Arg Pro Lys Ala Arg Ser Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Ala Arg Trp Ala Leu Thr Cys Cys Leu Val Leu Leu Pro Phe Leu Ala 
                  35                  40                  45              
          Gly Leu Thr Thr Tyr Leu Leu Val Ser Gln Leu Arg Ala Gln Gly Glu 
              50                  55                  60                  
          Ala Cys Val Gln Phe Gln Ala Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser 
          65                  70                  75                  80  
          His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg 
                          85                  90                  95      
          Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn 
                      100                 105                 110         
          Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr 
                  115                 120                 125             
          Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser 
              130                 135                 140                 
          Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr 
                      180                 185                 190         
          Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp 
                  195                 200                 205             
          Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 
                          245                 250     
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  199]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Met Thr Leu His Pro Ser Pro Ile Thr Cys Glu Phe Leu Phe Ser Thr 
          1               5                   10                  15      
          Ala Leu Ile Ser Pro Lys Met Cys Leu Ser His Leu Glu Asn Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser His Ser Arg Thr Gln Gly Ala Gln Arg Ser Ser Trp Lys Leu 
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Phe Cys Ser Ile Val Met Leu Leu Phe Leu Cys Ser Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Trp Leu Ile Phe Ile Phe Leu Gln Leu Glu Thr Ala Lys Glu Pro Cys 
          65                  70                  75                  80  
          Met Ala Lys Phe Gly Pro Leu Pro Ser Lys Trp Gln Met Ala Ser Ser 
                          85                  90                  95      
          Glu Pro Pro Cys Val Asn Lys Val Ser Asp Trp Lys Leu Glu Ile Leu 
                      100                 105                 110         
          Gln Asn Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ala Pro Asn Ala Asn 
                  115                 120                 125             
          Tyr Asn Asp Val Ala Pro Phe Glu Val Arg Leu Tyr Lys Asn Lys Asp 
              130                 135                 140                 
          Met Ile Gln Thr Leu Thr Asn Lys Ser Lys Ile Gln Asn Val Gly Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Tyr Glu Leu His Val Gly Asp Thr Ile Asp Leu Ile Phe Asn Ser 
                          165                 170                 175     
          Glu His Gln Val Leu Lys Asn Asn Thr Tyr Trp Gly Ile Ile Leu Leu 
                      180                 185                 190         
          Ala Asn Pro Gln Phe Ile Ser 
                  195                 
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  391]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Met Gly Tyr Pro Glu Val Glu Arg Arg Glu Leu Leu Pro Ala Ala Ala 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Glu Arg Gly Ser Gln Gly Cys Gly Cys Gly Gly Ala Pro Ala 
                      20                  25                  30          
          Arg Ala Gly Glu Gly Asn Ser Cys Leu Leu Phe Leu Gly Phe Phe Gly 
                  35                  40                  45              
          Leu Ser Leu Ala Leu His Leu Leu Thr Leu Cys Cys Tyr Leu Glu Leu 
              50                  55                  60                  
          Arg Ser Glu Leu Arg Arg Glu Arg Gly Ala Glu Ser Arg Leu Gly Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Gly Thr Pro Gly Thr Ser Gly Thr Leu Ser Ser Leu Gly Gly Leu 
                          85                  90                  95      
          Asp Pro Asp Ser Pro Ile Thr Ser His Leu Gly Gln Pro Ser Pro Lys 
                      100                 105                 110         
          Gln Gln Pro Leu Glu Pro Gly Glu Ala Ala Leu His Ser Asp Ser Gln 
                  115                 120                 125             
          Asp Gly His Gln Met Ala Leu Leu Asn Phe Phe Phe Pro Asp Glu Lys 
              130                 135                 140                 
          Pro Tyr Ser Glu Glu Glu Ser Arg Arg Val Arg Arg Asn Lys Arg Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Asn Glu Gly Ala Asp Gly Pro Val Lys Asn Lys Lys Lys Gly 
                          165                 170                 175     
          Lys Lys Ala Gly Pro Pro Gly Pro Asn Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly 
                      180                 185                 190         
          Pro Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Ile Pro Gly Ile Pro Gly Ile 
                  195                 200                 205             
          Pro Gly Thr Thr Val Met Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly 
              210                 215                 220                 
          Pro Gln Gly Pro Pro Gly Leu Gln Gly Pro Ser Gly Ala Ala Asp Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Thr Arg Glu Asn Gln Pro Ala Val Val His Leu Gln Gly Gln 
                          245                 250                 255     
          Gly Ser Ala Ile Gln Val Lys Asn Asp Leu Ser Gly Gly Val Leu Asn 
                      260                 265                 270         
          Asp Trp Ser Arg Ile Thr Met Asn Pro Lys Val Phe Lys Leu His Pro 
                  275                 280                 285             
          Arg Ser Gly Glu Leu Glu Val Leu Val Asp Gly Thr Tyr Phe Ile Tyr 
              290                 295                 300                 
          Ser Gln Val Glu Val Tyr Tyr Ile Asn Phe Thr Asp Phe Ala Ser Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Val Val Val Asp Glu Lys Pro Phe Leu Gln Cys Thr Arg Ser Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Thr Gly Lys Thr Asn Tyr Asn Thr Cys Tyr Thr Ala Gly Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Leu Leu Lys Ala Arg Gln Lys Ile Ala Val Lys Met Val His Ala Asp 
                  355                 360                 365             
          Ile Ser Ile Asn Met Ser Lys His Thr Thr Phe Phe Gly Ala Ile Arg 
              370                 375                 380                 
          Leu Gly Glu Ala Pro Ala Ser 
          385                 390     
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  205]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro 
                      20                  25                  30          
          Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala 
                  35                  40                  45              
          Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro 
              50                  55                  60                  
          Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe 
                          85                  90                  95      
          Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala 
                  115                 120                 125             
          Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg 
              130                 135                 140                 
          Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala 
                          165                 170                 175     
          Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                  195                 200                 205 
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  133]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe 
          1               5                   10                  15      
          Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu 
                      20                  25                  30          
          Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn 
              50                  55                  60                  
          Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys 
                          85                  90                  95      
          Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp 
                      100                 105                 110         
          Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Glu Phe Cys Val Leu 
              130             
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  132]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr 
          1               5                   10                  15      
          Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp 
                      20                  25                  30          
          Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly 
                  35                  40                  45              
          Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe 
                      100                 105                 110         
          His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu 
                  115                 120                 125             
          Phe Cys Val Leu 
              130         
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子 (SG4)2]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Gly Ser Pro Gly Ser Ser Ser Ser Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Gly Ser Gly Ser Gly Asn Gly Ser 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Gly Gly Ser Gly Ser Gly 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Gly Gly Ser Gly 
          1               
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Gly Gly Ser Gly Asn Gly Ser Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Gly Gly Asn Gly Ser Gly Ser Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Gly Gly Asn Gly Ser Gly 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  178]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu 
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  366]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  藉由 (G4S)2 連接之二聚 hu 4-1BBL]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
                      180                 185                 190         
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
                  195                 200                 205             
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
              210                 215                 220                 
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
                      260                 265                 270         
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
                  275                 280                 285             
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
              290                 295                 300                 
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                          325                 330                 335     
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
                      340                 345                 350         
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
                  355                 360                 365     
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  360]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  藉由 (G4S)2 連接子連接之二聚 hu 4-1BBL (80-254)]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val 
              50                  55                  60                  
          Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu 
                      100                 105                 110         
          Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg 
              130                 135                 140                 
          His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
                      180                 185                 190         
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                  195                 200                 205             
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
              210                 215                 220                 
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
          225                 230                 235                 240 
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
                          245                 250                 255     
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                      260                 265                 270         
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                  275                 280                 285             
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
              290                 295                 300                 
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
          305                 310                 315                 320 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
                          325                 330                 335     
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                      340                 345                 350         
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                  355                 360 
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  416]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>   藉由 (G4S)2 連接子連接之二聚 hu 4-1BBL (52-254)]]>
          <![CDATA[<400>  59]]>
          Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly 
                      20                  25                  30          
          Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn 
                  35                  40                  45              
          Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu 
                      100                 105                 110         
          Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser 
              130                 135                 140                 
          Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln 
                          165                 170                 175     
          Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser 
                  195                 200                 205             
          Gly Gly Gly Gly Ser Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro 
              210                 215                 220                 
          Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr 
                      260                 265                 270         
          Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr 
                  275                 280                 285             
          Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala 
                          325                 330                 335     
          Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser 
                      340                 345                 350         
          Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala 
              370                 375                 380                 
          Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                          405                 410                 415     
          <![CDATA[<210>  60]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9) CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  60]]>
          Ser Tyr Ala Met Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9) CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  61]]>
          Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  62]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9) CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  62]]>
          Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9) CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  63]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Ala 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9) CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  64]]>
          Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9) CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  65]]>
          Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  66]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9) VH]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  67]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9) VL]]>
          <![CDATA[<400>  67]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  68]]>
          <![CDATA[<211>  718]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  二聚 hu 4-1BBL (71-254) - CH1* Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu 
                      260                 265                 270         
          Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala 
                  275                 280                 285             
          Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu 
                          325                 330                 335     
          Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile 
                  355                 360                 365             
          Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
              370                 375                 380                 
          Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
                          405                 410                 415     
          Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
                      420                 425                 430         
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                  435                 440                 445             
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
              450                 455                 460                 
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
                          485                 490                 495     
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 
                      500                 505                 510         
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                  515                 520                 525             
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
              530                 535                 540                 
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
                          565                 570                 575     
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
                      580                 585                 590         
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                  595                 600                 605             
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
              610                 615                 620                 
          Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val 
          625                 630                 635                 640 
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
                          645                 650                 655     
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
                      660                 665                 670         
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                  675                 680                 685             
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
              690                 695                 700                 
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
          705                 710                 715             
          <![CDATA[<210>  69]]>
          <![CDATA[<211>  301]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (71-254) -CL*]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 
              210                 215                 220                 
          Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys 
                          245                 250                 255     
          Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 
                      260                 265                 270         
          Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu 
                  275                 280                 285             
          Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              290                 295                 300     
          <![CDATA[<210>  70]]>
          <![CDATA[<211>  296]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (71-254) -(G4S)1- CL*]]>
          <![CDATA[<400>  70]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
              210                 215                 220                 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                          245                 250                 255     
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                      260                 265                 270         
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              290                 295     
          <![CDATA[<210>  71]]>
          <![CDATA[<211>  756]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  二聚 hu 4-1BBL (52-254) - CH1* Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  71]]>
          Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly 
                      20                  25                  30          
          Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn 
                  35                  40                  45              
          Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu 
                      100                 105                 110         
          Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser 
              130                 135                 140                 
          Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln 
                          165                 170                 175     
          Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser 
                  195                 200                 205             
          Gly Gly Gly Gly Ser Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro 
              210                 215                 220                 
          Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr 
                      260                 265                 270         
          Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr 
                  275                 280                 285             
          Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala 
                          325                 330                 335     
          Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser 
                      340                 345                 350         
          Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala 
              370                 375                 380                 
          Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                          405                 410                 415     
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                      420                 425                 430         
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 
                  435                 440                 445             
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
              450                 455                 460                 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                          485                 490                 495     
          Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 
                      500                 505                 510         
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser 
                  515                 520                 525             
          Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                          565                 570                 575     
          His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                      580                 585                 590         
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 
                  595                 600                 605             
          Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 
              610                 615                 620                 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro 
          625                 630                 635                 640 
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                          645                 650                 655     
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 
                      660                 665                 670         
          Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
                  675                 680                 685             
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
              690                 695                 700                 
          Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
          705                 710                 715                 720 
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                          725                 730                 735     
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                      740                 745                 750         
          Ser Pro Gly Lys 
                  755     
          <![CDATA[<210>  72]]>
          <![CDATA[<211>  320]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (52-254) -CL*]]>
          <![CDATA[<400>  72]]>
          Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly 
                      20                  25                  30          
          Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn 
                  35                  40                  45              
          Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu 
                      100                 105                 110         
          Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser 
              130                 135                 140                 
          Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln 
                          165                 170                 175     
          Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser 
                  195                 200                 205             
          Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val 
                          245                 250                 255     
          Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln 
                      260                 265                 270         
          Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser 
                  275                 280                 285             
          Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His 
              290                 295                 300                 
          Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          305                 310                 315                 320 
          <![CDATA[<210>  73]]>
          <![CDATA[<211>  700]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  二聚 hu 4-1BBL (80-254) - CH1* Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  73]]>
          Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val 
              50                  55                  60                  
          Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu 
                      100                 105                 110         
          Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg 
              130                 135                 140                 
          His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
                      180                 185                 190         
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                  195                 200                 205             
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
              210                 215                 220                 
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
          225                 230                 235                 240 
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
                          245                 250                 255     
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                      260                 265                 270         
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                  275                 280                 285             
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
              290                 295                 300                 
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
          305                 310                 315                 320 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
                          325                 330                 335     
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                      340                 345                 350         
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                  355                 360                 365             
          Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 
              370                 375                 380                 
          Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 
                          405                 410                 415     
          Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 
                      420                 425                 430         
          Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 
                  435                 440                 445             
          Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 
              450                 455                 460                 
          Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 
                          485                 490                 495     
          Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 
                      500                 505                 510         
          Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 
                  515                 520                 525             
          Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 
              530                 535                 540                 
          Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 
                          565                 570                 575     
          Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 
                      580                 585                 590         
          Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg 
                  595                 600                 605             
          Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly 
              610                 615                 620                 
          Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 
          625                 630                 635                 640 
          Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 
                          645                 650                 655     
          Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 
                      660                 665                 670         
          Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 
                  675                 680                 685             
          Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
              690                 695                 700 
          <![CDATA[<210>  74]]>
          <![CDATA[<211>  292]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (80-254) -CL*]]>
          <![CDATA[<400>  74]]>
          Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val 
              50                  55                  60                  
          Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu 
                      100                 105                 110         
          Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg 
              130                 135                 140                 
          His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser 
                      180                 185                 190         
          Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala 
                  195                 200                 205             
          Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 
              210                 215                 220                 
          Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr 
                          245                 250                 255     
          Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn 
                  275                 280                 285             
          Arg Gly Glu Cys 
              290         
          <![CDATA[<210>  75]]>
          <![CDATA[<211>  722]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  二聚 hu 4-1BBL (71-254) - CL* Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  75]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu 
                      260                 265                 270         
          Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala 
                  275                 280                 285             
          Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu 
                          325                 330                 335     
          Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile 
                  355                 360                 365             
          Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
              370                 375                 380                 
          Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 
                          405                 410                 415     
          Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 
                      420                 425                 430         
          Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 
                  435                 440                 445             
          Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 
              450                 455                 460                 
          Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp 
                          485                 490                 495     
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
                      500                 505                 510         
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                  515                 520                 525             
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
              530                 535                 540                 
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
          545                 550                 555                 560 
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
                          565                 570                 575     
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
                      580                 585                 590         
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                  595                 600                 605             
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
              610                 615                 620                 
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
                          645                 650                 655     
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
                      660                 665                 670         
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                  675                 680                 685             
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
              690                 695                 700                 
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
          705                 710                 715                 720 
          Gly Lys 
          <![CDATA[<210>  76]]>
          <![CDATA[<211>  297]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (71-254) -CH1*]]>
          <![CDATA[<400>  76]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu 
              210                 215                 220                 
          Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 
                      260                 265                 270         
          Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 
                  275                 280                 285             
          Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              290                 295         
          <![CDATA[<210>  77]]>
          <![CDATA[<211>  722]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (71-254) - CL Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  77]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu 
                      260                 265                 270         
          Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala 
                  275                 280                 285             
          Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu 
                          325                 330                 335     
          Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile 
                  355                 360                 365             
          Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
              370                 375                 380                 
          Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 
                          405                 410                 415     
          Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 
                      420                 425                 430         
          Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 
                  435                 440                 445             
          Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 
              450                 455                 460                 
          Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp 
                          485                 490                 495     
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
                      500                 505                 510         
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                  515                 520                 525             
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
              530                 535                 540                 
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
          545                 550                 555                 560 
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
                          565                 570                 575     
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
                      580                 585                 590         
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                  595                 600                 605             
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
              610                 615                 620                 
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
                          645                 650                 655     
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
                      660                 665                 670         
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                  675                 680                 685             
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
              690                 695                 700                 
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
          705                 710                 715                 720 
          Gly Lys 
          <![CDATA[<210>  78]]>
          <![CDATA[<211>  297]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (71-254) - CH1]]>
          <![CDATA[<400>  78]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 
              210                 215                 220                 
          Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 
                      260                 265                 270         
          Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 
                  275                 280                 285             
          Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              290                 295         
          <![CDATA[<210>  79]]>
          <![CDATA[<211>  710]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  二聚 hu 4-1BBL (71-248) - CL* Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  79]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
                      180                 185                 190         
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
                  195                 200                 205             
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
              210                 215                 220                 
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
                      260                 265                 270         
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
                  275                 280                 285             
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
              290                 295                 300                 
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                          325                 330                 335     
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
                      340                 345                 350         
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly 
                  355                 360                 365             
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val 
              370                 375                 380                 
          Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 
                          405                 410                 415     
          Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 
                  435                 440                 445             
          Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 
              450                 455                 460                 
          Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 
                          485                 490                 495     
          Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 
                      500                 505                 510         
          Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 
                  515                 520                 525             
          Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 
              530                 535                 540                 
          Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 
          545                 550                 555                 560 
          Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 
                          565                 570                 575     
          Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly 
                      580                 585                 590         
          Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 
                  595                 600                 605             
          Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 
              610                 615                 620                 
          Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 
          625                 630                 635                 640 
          Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 
                          645                 650                 655     
          Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 
                      660                 665                 670         
          Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 
                  675                 680                 685             
          Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
          705                 710 
          <![CDATA[<210>  80]]>
          <![CDATA[<211>  291]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (71-248) - CH1*]]>
          <![CDATA[<400>  80]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys 
                      180                 185                 190         
          Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 
              210                 215                 220                 
          Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 
                      260                 265                 270         
          Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro 
                  275                 280                 285             
          Lys Ser Cys 
              290     
          <![CDATA[<210>  81]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子 G4S]]>
          <![CDATA[<400>  81]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  82]]>
          <![CDATA[<211>  710]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  二聚 hu 4-1BBL (71-248) - CL Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  82]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
                      180                 185                 190         
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
                  195                 200                 205             
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
              210                 215                 220                 
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
                      260                 265                 270         
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
                  275                 280                 285             
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
              290                 295                 300                 
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                          325                 330                 335     
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
                      340                 345                 350         
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly 
                  355                 360                 365             
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val 
              370                 375                 380                 
          Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 
                          405                 410                 415     
          Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 
                  435                 440                 445             
          Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 
              450                 455                 460                 
          Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 
                          485                 490                 495     
          Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 
                      500                 505                 510         
          Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 
                  515                 520                 525             
          Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 
              530                 535                 540                 
          Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 
          545                 550                 555                 560 
          Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 
                          565                 570                 575     
          Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly 
                      580                 585                 590         
          Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 
                  595                 600                 605             
          Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 
              610                 615                 620                 
          Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 
          625                 630                 635                 640 
          Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 
                          645                 650                 655     
          Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 
                      660                 665                 670         
          Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 
                  675                 680                 685             
          Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
          705                 710 
          <![CDATA[<210>  83]]>
          <![CDATA[<211>  291]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu 4-1BBL (71-248) - CH1]]>
          <![CDATA[<400>  83]]>
          Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His 
                          85                  90                  95      
          Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val 
              130                 135                 140                 
          His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys 
                      180                 185                 190         
          Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 
              210                 215                 220                 
          Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 
                      260                 265                 270         
          Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 
                  275                 280                 285             
          Lys Ser Cys 
              290     
          <![CDATA[<210>  84]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA (T84.66-LCHA) CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  84]]>
          Asp Thr Tyr Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  85]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA)  CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  85]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  86]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA)  CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  86]]>
          Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA)  CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  87]]>
          Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe Gly Val Gly Phe Leu His 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  88]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA)  CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  89]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA) CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  89]]>
          Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  90]]>
          <![CDATA[<211>  242]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA) VH]]>
          <![CDATA[<400>  90]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 
              130                 135                 140                 
          Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met His Trp Val Arg Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn 
                          165                 170                 175     
          Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr 
                      180                 185                 190         
          Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg 
                  195                 200                 205             
          Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val 
              210                 215                 220                 
          Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Ser 
          <![CDATA[<210>  91]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA) VL]]>
          <![CDATA[<400>  91]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  92]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA (T84.66-LCHA) 輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  92]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  93]]>
          <![CDATA[<211>  838]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA) Fc 臼二聚 41-BBL (71-254) 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  93]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu 
                          645                 650                 655     
          Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg 
                      660                 665                 670         
          Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp 
                  675                 680                 685             
          Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu 
              690                 695                 700                 
          Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala 
          705                 710                 715                 720 
          Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val 
                          725                 730                 735     
          Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln 
                      740                 745                 750         
          Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp 
                  755                 760                 765             
          Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln 
              770                 775                 780                 
          Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu 
          785                 790                 795                 800 
          His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala 
                          805                 810                 815     
          Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
                      820                 825                 830         
          Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                  835             
          <![CDATA[<210>  94]]>
          <![CDATA[<211>  644]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA(T84.66-LCHA) Fc 杵單體 4-1BBL (71-254) 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  94]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Arg Ser Glu 
          <![CDATA[<210>  95]]>
          <![CDATA[<211>  826]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA (T84.66-LCHA) Fc 臼二聚 4-1BBL (71-248) 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  95]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro 
                          645                 650                 655     
          Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln 
                      660                 665                 670         
          Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr 
                  675                 680                 685             
          Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr 
              690                 695                 700                 
          Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr 
          705                 710                 715                 720 
          Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser 
                          725                 730                 735     
          Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala 
                      740                 745                 750         
          Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser 
                  755                 760                 765             
          Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu 
              770                 775                 780                 
          Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala 
          785                 790                 795                 800 
          Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe 
                          805                 810                 815     
          Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
                      820                 825     
          <![CDATA[<210>  96]]>
          <![CDATA[<211>  638]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA (T84.66-LCHA) Fc 杵單體 (71-248) 4-1BBL 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
          625                 630                 635             
          <![CDATA[<210>  97]]>
          <![CDATA[<211>  620]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  二聚 hu OX40L (51-183) - CL* Fc 杵鏈]]>
          <![CDATA[<400>  97]]>
          Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe 
          1               5                   10                  15      
          Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu 
                      20                  25                  30          
          Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asp Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asp 
              50                  55                  60                  
          Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys 
                          85                  90                  95      
          Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp 
                      100                 105                 110         
          Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Glu Phe Cys Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 
              130                 135                 140                 
          Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp 
                          165                 170                 175     
          Glu Ile Met Lys Val Gln Asp Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly 
                      180                 185                 190         
          Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asp Ile 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys 
              210                 215                 220                 
          Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe 
                          245                 250                 255     
          His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu 
                      260                 265                 270         
          Phe Cys Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr 
                  275                 280                 285             
          Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu 
              290                 295                 300                 
          Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 
          305                 310                 315                 320 
          Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 
                          325                 330                 335     
          Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 
                      340                 345                 350         
          Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 
                  355                 360                 365             
          Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 
              370                 375                 380                 
          Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 
                      420                 425                 430         
          Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 
                  435                 440                 445             
          Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 
              450                 455                 460                 
          Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 
                      500                 505                 510         
          Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg 
                  515                 520                 525             
          Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly 
              530                 535                 540                 
          Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 
          545                 550                 555                 560 
          Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 
                          565                 570                 575     
          Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 
                      580                 585                 590         
          Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 
                  595                 600                 605             
          Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
              610                 615                 620 
          <![CDATA[<210>  98]]>
          <![CDATA[<211>  246]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單體 hu OX40L (51-183) - CH1*]]>
          <![CDATA[<400>  98]]>
          Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe 
          1               5                   10                  15      
          Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu 
                      20                  25                  30          
          Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asp Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asp 
              50                  55                  60                  
          Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys 
                          85                  90                  95      
          Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp 
                      100                 105                 110         
          Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Glu Phe Cys Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala 
              130                 135                 140                 
          Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 
                      180                 185                 190         
          Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 
              210                 215                 220                 
          Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Val Glu Pro Lys Ser Cys 
                          245     
          <![CDATA[<210>  99]]>
          <![CDATA[<211>  276]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  藉由 (G4S)2 連接子連接之二聚 huOX40L (51-183)]]>
          <![CDATA[<400>  99]]>
          Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe 
          1               5                   10                  15      
          Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu 
                      20                  25                  30          
          Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn 
              50                  55                  60                  
          Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys 
                          85                  90                  95      
          Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp 
                      100                 105                 110         
          Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Glu Phe Cys Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 
              130                 135                 140                 
          Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp 
                          165                 170                 175     
          Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly 
                      180                 185                 190         
          Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys 
              210                 215                 220                 
          Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe 
                          245                 250                 255     
          His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu 
                      260                 265                 270         
          Phe Cys Val Leu 
                  275     
          <![CDATA[<210>  100]]>
          <![CDATA[<211>  164]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu 4-1BBL (85-248)]]>
          <![CDATA[<400>  100]]>
          Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val 
          1               5                   10                  15      
          Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu 
                  35                  40                  45              
          Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu 
              50                  55                  60                  
          Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala 
                          85                  90                  95      
          Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala 
                      100                 105                 110         
          Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu 
                  115                 120                 125             
          Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu 
              130                 135                 140                 
          Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Ala Gly Leu 
          <![CDATA[<210>  101]]>
          <![CDATA[<211>  169]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu 4-1BBL (80-248)]]>
          <![CDATA[<400>  101]]>
          Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val 
              50                  55                  60                  
          Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu 
                      100                 105                 110         
          Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg 
              130                 135                 140                 
          His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
                          165                 
          <![CDATA[<210>  102]]>
          <![CDATA[<211>  197]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu 4-1BBL (52-248)]]>
          <![CDATA[<400>  102]]>
          Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly 
                      20                  25                  30          
          Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn 
                  35                  40                  45              
          Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu 
                      100                 105                 110         
          Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser 
              130                 135                 140                 
          Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln 
                          165                 170                 175     
          Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile Pro Ala Gly Leu 
                  195         
          <![CDATA[<210>  103]]>
          <![CDATA[<211>  556]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  103]]>
          Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met 
          1               5                   10                  15      
          Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp 
                      20                  25                  30          
          Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln 
                  35                  40                  45              
          Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu 
                          85                  90                  95      
          Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro 
              130                 135                 140                 
          Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro 
                      180                 185                 190         
          Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser 
                  195                 200                 205             
          Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp 
          225                 230                 235                 240 
          Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu 
                      260                 265                 270         
          Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly 
                  275                 280                 285             
          Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu 
              290                 295                 300                 
          Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val 
                          325                 330                 335     
          Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu 
                      340                 345                 350         
          Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala 
                  355                 360                 365             
          Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp 
              370                 375                 380                 
          Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu 
                          405                 410                 415     
          Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu 
                      420                 425                 430         
          Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly 
                  435                 440                 445             
          Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu 
              450                 455                 460                 
          Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly 
                          485                 490                 495     
          Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln 
                      500                 505                 510         
          Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala 
                  515                 520                 525             
          Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp 
              530                 535                 540                 
          Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg 
          545                 550                 555     
          <![CDATA[<210>  104]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-018) CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  104]]>
          Asp Tyr Ile Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  105]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  105]]>
          Asp Tyr Ile Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  106]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-018) CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  106]]>
          Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  107]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  107]]>
          Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  108]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-018) CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  108]]>
          Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  109]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  109]]>
          Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  110]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-018) CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  110]]>
          Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Pro Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  111]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  111]]>
          Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  112]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-018) CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  112]]>
          Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  113]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  113]]>
          Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  114]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-018) CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  114]]>
          Leu Gln Leu Thr His Val Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  115]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  115]]>
          Leu Gln Leu Leu Glu Asp Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  116]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-018) VH]]>
          <![CDATA[<400>  116]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  117]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-018) VL]]>
          <![CDATA[<400>  117]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Pro 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210>  118]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) VH]]>
          <![CDATA[<400>  118]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  119]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) VL]]>
          <![CDATA[<400>  119]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210>  120]]>
          <![CDATA[<211>  838]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  抗-CD19(8B8-018) Fc 臼二聚配體鏈]]>
          <![CDATA[<400>  120]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu 
                          645                 650                 655     
          Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg 
                      660                 665                 670         
          Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp 
                  675                 680                 685             
          Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu 
              690                 695                 700                 
          Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala 
          705                 710                 715                 720 
          Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val 
                          725                 730                 735     
          Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln 
                      740                 745                 750         
          Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp 
                  755                 760                 765             
          Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln 
              770                 775                 780                 
          Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu 
          785                 790                 795                 800 
          His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala 
                          805                 810                 815     
          Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
                      820                 825                 830         
          Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                  835             
          <![CDATA[<210>  121]]>
          <![CDATA[<211>  644]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  抗-CD19(8B8-018) Fc 杵單體配體]]>
          <![CDATA[<400>  121]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Arg Ser Glu 
          <![CDATA[<210>  122]]>
          <![CDATA[<211>  219]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  抗-CD19(8B8-018) 輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  122]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Pro 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210>  123]]>
          <![CDATA[<211>  826]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  抗-CD19(8B8-018) Fc 臼二聚配體 (71-248) 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  123]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro 
                          645                 650                 655     
          Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln 
                      660                 665                 670         
          Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr 
                  675                 680                 685             
          Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr 
              690                 695                 700                 
          Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr 
          705                 710                 715                 720 
          Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser 
                          725                 730                 735     
          Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala 
                      740                 745                 750         
          Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser 
                  755                 760                 765             
          Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu 
              770                 775                 780                 
          Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala 
          785                 790                 795                 800 
          Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe 
                          805                 810                 815     
          Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
                      820                 825     
          <![CDATA[<210>  124]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-7H07) CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  124]]>
          Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  125]]>
          <![CDATA[<211>  838]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19(8B8-2B11) Fc 臼二聚配體鏈]]>
          <![CDATA[<400>  125]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu 
                          645                 650                 655     
          Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg 
                      660                 665                 670         
          Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp 
                  675                 680                 685             
          Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu 
              690                 695                 700                 
          Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala 
          705                 710                 715                 720 
          Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val 
                          725                 730                 735     
          Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln 
                      740                 745                 750         
          Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp 
                  755                 760                 765             
          Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln 
              770                 775                 780                 
          Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu 
          785                 790                 795                 800 
          His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala 
                          805                 810                 815     
          Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
                      820                 825                 830         
          Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                  835             
          <![CDATA[<210>  126]]>
          <![CDATA[<211>  644]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19(8B8-2B11) Fc 臼單體配體]]>
          <![CDATA[<400>  126]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Arg Ser Glu 
          <![CDATA[<210>  127]]>
          <![CDATA[<211>  219]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) 輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  127]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210>  128]]>
          <![CDATA[<211>  826]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19(8B8-2B11) Fc 臼二聚配體 (71-248) 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  128]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro 
                          645                 650                 655     
          Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln 
                      660                 665                 670         
          Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr 
                  675                 680                 685             
          Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr 
              690                 695                 700                 
          Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr 
          705                 710                 715                 720 
          Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser 
                          725                 730                 735     
          Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala 
                      740                 745                 750         
          Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser 
                  755                 760                 765             
          Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu 
              770                 775                 780                 
          Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala 
          785                 790                 795                 800 
          Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe 
                          805                 810                 815     
          Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
                      820                 825     
          <![CDATA[<210>  129]]>
          <![CDATA[<211>  638]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19(8B8-2B11) Fc 杵單體 (71-248) 配體]]>
          <![CDATA[<400>  129]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro 
              450                 455                 460                 
          Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala 
              530                 535                 540                 
          Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg 
                      580                 585                 590         
          Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val 
              610                 615                 620                 
          Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
          625                 630                 635             
          <![CDATA[<210>  130]]>
          <![CDATA[<211>  34]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  L3]]>
          <![CDATA[<400>  130]]>
          ataacttcgt ataaagtctc ctatacgaag ttat                                   34
          <![CDATA[<210>  131]]>
          <![CDATA[<211>  34]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  2L]]>
          <![CDATA[<400>  131]]>
          ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttat                                   34
          <![CDATA[<210>  132]]>
          <![CDATA[<211>  34]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  loxFas]]>
          <![CDATA[<400>  132]]>
          acaacttcgt atataccttt ctatacgaag ttgt                                   34
          <![CDATA[<210>  133]]>
          <![CDATA[<211>  608]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人類巨細胞病毒]]>
          <![CDATA[<400>  133]]>
          gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata       60
          gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc      120
          ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag      180
          ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac      240
          atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg      300
          cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg      360
          tattagtcat cgctattagc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat      420
          agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt      480
          tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc      540
          aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctccg tttagtgaac      600
          gtcagatc                                                               608
          <![CDATA[<210>  134]]>
          <![CDATA[<211>  696]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人類巨細胞病毒]]>
          <![CDATA[<400>  134]]>
          gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata       60
          gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc      120
          ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag      180
          ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac      240
          atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg      300
          cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg      360
          tattagtcat cgctattagc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat      420
          agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt      480
          tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc      540
          aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctccg tttagtgaac      600
          gtcagatcta gctctgggag aggagcccag cactagaagt cggcggtgtt tccattcggt      660
          gatcagcact gaacacagag gaagcttgcc gccacc                                696
          <![CDATA[<210>  135]]>
          <![CDATA[<211>  2125]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人類巨細胞病毒]]>
          <![CDATA[<400>  135]]>
          ctgcagtgaa taataaaatg tgtgtttgtc cgaaatacgc gttttgagat ttctgtcgcc       60
          gactaaattc atgtcgcgcg atagtggtgt ttatcgccga tagagatggc gatattggaa      120
          aaatcgatat ttgaaaatat ggcatattga aaatgtcgcc gatgtgagtt tctgtgtaac      180
          tgatatcgcc atttttccaa aagtgatttt tgggcatacg cgatatctgg cgatagcgct      240
          tatatcgttt acgggggatg gcgatagacg actttggtga cttgggcgat tctgtgtgtc      300
          gcaaatatcg cagtttcgat ataggtgaca gacgatatga ggctatatcg ccgatagagg      360
          cgacatcaag ctggcacatg gccaatgcat atcgatctat acattgaatc aatattggcc      420
          attagccata ttattcattg gttatatagc ataaatcaat attggctatt ggccattgca      480
          tacgttgtat ccatatcata atatgtacat ttatattggc tcatgtccaa cattaccgcc      540
          atgttgacat tgattattga ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca      600
          tagcccatat atggagttcc gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc      660
          gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat      720
          agggactttc cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt      780
          acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc      840
          cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta      900
          cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg      960
          atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc attgacgtca atgggagttt     1020
          gttttggcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac     1080
          gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa     1140
          ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga     1200
          ccgatccagc ctccgcggcc gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag     1260
          tgacgtaagt accgcctata gagtctatag gcccaccccc ttggcttctt atgcatgcta     1320
          tactgttttt ggcttggggt ctatacaccc ccgcttcctc atgttatagg tgatggtata     1380
          gcttagccta taggtgtggg ttattgacca ttattgacca ctcccctatt ggtgacgata     1440
          ctttccatta ctaatccata acatggctct ttgccacaac tctctttatt ggctatatgc     1500
          caatacactg tccttcagag actgacacgg actctgtatt tttacaggat ggggtctcat     1560
          ttattattta caaattcaca tatacaacac caccgtcccc agtgcccgca gtttttatta     1620
          aacataacgt gggatctcca cgcgaatctc gggtacgtgt tccggacatg ggctcttctc     1680
          cggtagcggc ggagcttcta catccgagcc ctgctcccat gcctccagcg actcatggtc     1740
          gctcggcagc tccttgctcc taacagtgga ggccagactt aggcacagca cgatgcccac     1800
          caccaccagt gtgccgcaca aggccgtggc ggtagggtat gtgtctgaaa atgagctcgg     1860
          ggagcgggct tgcaccgctg acgcatttgg aagacttaag gcagcggcag aagaagatgc     1920
          aggcagctga gttgttgtgt tctgataaga gtcagaggta actcccgttg cggtgctgtt     1980
          aacggtggag ggcagtgtag tctgagcagt actcgttgct gccgcgcgcg ccaccagaca     2040
          taatagctga cagactaaca gactgttcct ttccatgggt cttttctgca gtcaccgtcc     2100
          ttgacacggt ttaaacgccg ccacc                                           2125
          <![CDATA[<210>  136]]>
          <![CDATA[<211>  129]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  猴病毒 40]]>
          <![CDATA[<400>  136]]>
          aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca       60
          aataaagcat ttttttcacc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta      120
          tcatgtctg                                                              129
          <![CDATA[<210>  137]]>
          <![CDATA[<211>  225]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  歐洲牛]]>
          <![CDATA[<400>  137]]>
          ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc       60
          tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc      120
          tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt      180
          gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatgg                      225
          <![CDATA[<210>  138]]>
          <![CDATA[<211>  73]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  138]]>
          caggataata tatggtaggg ttcatagcca gagtaacctt tttttttaat ttttatttta       60
          ttttattttt gag                                                          73
          <![CDATA[<210>  139]]>
          <![CDATA[<211>  288]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  猴病毒 40]]>
          <![CDATA[<400>  139]]>
          agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca       60
          tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa      120
          ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag      180
          aggccgaggc cgcctctgcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag      240
          gcctaggctt ttgcaaaaag ctcccgggag cttgtatatc cattttcg                   288
          <![CDATA[<210>  140]]>
          <![CDATA[<211>  798]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  綠色螢光蛋白編碼核酸]]>
          <![CDATA[<400>  140]]>
          atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac       60
          ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac      120
          ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc      180
          ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag      240
          cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc      300
          ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg      360
          gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac      420
          aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac      480
          ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc      540
          gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac      600
          tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc      660
          ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtcc      720
          ggactcagat ctcgagctca agcttcgaat tctgcagtcg acggtaccgc gggcccggga      780
          tccaccggat ctagatga                                                    798
          <![CDATA[<210>  141]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9)HC]]>
          <![CDATA[<400>  141]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  142]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FAP(4B9)LC]]>
          <![CDATA[<400>  142]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  143]]>
          <![CDATA[<211>  451]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CEA (T84.66-LCHA) 重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  143]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Lys 
              450     
          <![CDATA[<210>  144]]>
          <![CDATA[<211>  451]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD19 (8B8-2B11) 重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  144]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Lys 
              450
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045
Figure 12_A0101_SEQ_0046
Figure 12_A0101_SEQ_0047
Figure 12_A0101_SEQ_0048
Figure 12_A0101_SEQ_0049
Figure 12_A0101_SEQ_0050
Figure 12_A0101_SEQ_0051
Figure 12_A0101_SEQ_0052
Figure 12_A0101_SEQ_0053
Figure 12_A0101_SEQ_0054
Figure 12_A0101_SEQ_0055
Figure 12_A0101_SEQ_0056
Figure 12_A0101_SEQ_0057
Figure 12_A0101_SEQ_0058
Figure 12_A0101_SEQ_0059
Figure 12_A0101_SEQ_0060
Figure 12_A0101_SEQ_0061
Figure 12_A0101_SEQ_0062
Figure 12_A0101_SEQ_0063
Figure 12_A0101_SEQ_0064
Figure 12_A0101_SEQ_0065
Figure 12_A0101_SEQ_0066
Figure 12_A0101_SEQ_0067
Figure 12_A0101_SEQ_0068
Figure 12_A0101_SEQ_0069
Figure 12_A0101_SEQ_0070
Figure 12_A0101_SEQ_0071
Figure 12_A0101_SEQ_0072
Figure 12_A0101_SEQ_0073
Figure 12_A0101_SEQ_0074
Figure 12_A0101_SEQ_0075
Figure 12_A0101_SEQ_0076
Figure 12_A0101_SEQ_0077
Figure 12_A0101_SEQ_0078
Figure 12_A0101_SEQ_0079
Figure 12_A0101_SEQ_0080
Figure 12_A0101_SEQ_0081
Figure 12_A0101_SEQ_0082
Figure 12_A0101_SEQ_0083
Figure 12_A0101_SEQ_0084
Figure 12_A0101_SEQ_0085
Figure 12_A0101_SEQ_0086
Figure 12_A0101_SEQ_0087
Figure 12_A0101_SEQ_0088
Figure 12_A0101_SEQ_0089
Figure 12_A0101_SEQ_0090
Figure 12_A0101_SEQ_0091
Figure 12_A0101_SEQ_0092
Figure 12_A0101_SEQ_0093
Figure 12_A0101_SEQ_0094
Figure 12_A0101_SEQ_0095
Figure 12_A0101_SEQ_0096
Figure 12_A0101_SEQ_0097
Figure 12_A0101_SEQ_0098
Figure 12_A0101_SEQ_0099
Figure 12_A0101_SEQ_0100
Figure 12_A0101_SEQ_0101
Figure 12_A0101_SEQ_0102
Figure 12_A0101_SEQ_0103
Figure 12_A0101_SEQ_0104
Figure 12_A0101_SEQ_0105
Figure 12_A0101_SEQ_0106
Figure 12_A0101_SEQ_0107
Figure 12_A0101_SEQ_0108
Figure 12_A0101_SEQ_0109
Figure 12_A0101_SEQ_0110
Figure 12_A0101_SEQ_0111
Figure 12_A0101_SEQ_0112
Figure 12_A0101_SEQ_0113
Figure 12_A0101_SEQ_0114
Figure 12_A0101_SEQ_0115
Figure 12_A0101_SEQ_0116
Figure 12_A0101_SEQ_0117
Figure 12_A0101_SEQ_0118
Figure 12_A0101_SEQ_0119
Figure 12_A0101_SEQ_0120
Figure 12_A0101_SEQ_0121
Figure 12_A0101_SEQ_0122
Figure 12_A0101_SEQ_0123
Figure 12_A0101_SEQ_0124
Figure 12_A0101_SEQ_0125
Figure 12_A0101_SEQ_0126
Figure 12_A0101_SEQ_0127
Figure 12_A0101_SEQ_0128
Figure 12_A0101_SEQ_0129
Figure 12_A0101_SEQ_0130
Figure 12_A0101_SEQ_0131
Figure 12_A0101_SEQ_0132
Figure 12_A0101_SEQ_0133
Figure 12_A0101_SEQ_0134
Figure 12_A0101_SEQ_0135
Figure 12_A0101_SEQ_0136
Figure 12_A0101_SEQ_0137
Figure 12_A0101_SEQ_0138
Figure 12_A0101_SEQ_0139
Figure 12_A0101_SEQ_0140
Figure 12_A0101_SEQ_0141
Figure 12_A0101_SEQ_0142
Figure 12_A0101_SEQ_0143
Figure 12_A0101_SEQ_0144
Figure 12_A0101_SEQ_0145
Figure 12_A0101_SEQ_0146
Figure 12_A0101_SEQ_0147
Figure 12_A0101_SEQ_0148
Figure 12_A0101_SEQ_0149
Figure 12_A0101_SEQ_0150
Figure 12_A0101_SEQ_0151
Figure 12_A0101_SEQ_0152
Figure 12_A0101_SEQ_0153
Figure 12_A0101_SEQ_0154
Figure 12_A0101_SEQ_0155
Figure 12_A0101_SEQ_0156
Figure 12_A0101_SEQ_0157
Figure 12_A0101_SEQ_0158
Figure 12_A0101_SEQ_0159
Figure 12_A0101_SEQ_0160
Figure 12_A0101_SEQ_0161
Figure 12_A0101_SEQ_0162
Figure 12_A0101_SEQ_0163
Figure 12_A0101_SEQ_0164
Figure 12_A0101_SEQ_0165
Figure 12_A0101_SEQ_0166
Figure 12_A0101_SEQ_0167
Figure 12_A0101_SEQ_0168
Figure 12_A0101_SEQ_0169
Figure 12_A0101_SEQ_0170
Figure 12_A0101_SEQ_0171
Figure 12_A0101_SEQ_0172
Figure 12_A0101_SEQ_0173
Figure 12_A0101_SEQ_0174
Figure 12_A0101_SEQ_0175
Figure 12_A0101_SEQ_0176
Figure 12_A0101_SEQ_0177
Figure 12_A0101_SEQ_0178
Figure 12_A0101_SEQ_0179
Figure 12_A0101_SEQ_0180
Figure 12_A0101_SEQ_0181
Figure 12_A0101_SEQ_0182
Figure 12_A0101_SEQ_0183
Figure 12_A0101_SEQ_0184
Figure 12_A0101_SEQ_0185
Figure 12_A0101_SEQ_0186
Figure 12_A0101_SEQ_0187
Figure 12_A0101_SEQ_0188
Figure 12_A0101_SEQ_0189
Figure 12_A0101_SEQ_0190
Figure 12_A0101_SEQ_0191
Figure 12_A0101_SEQ_0192
Figure 12_A0101_SEQ_0193
Figure 12_A0101_SEQ_0194
Figure 12_A0101_SEQ_0195
Figure 12_A0101_SEQ_0196
Figure 12_A0101_SEQ_0197
Figure 12_A0101_SEQ_0198
Figure 12_A0101_SEQ_0199
Figure 12_A0101_SEQ_0200
Figure 12_A0101_SEQ_0201
Figure 12_A0101_SEQ_0202
Figure 12_A0101_SEQ_0203
Figure 12_A0101_SEQ_0204
Figure 12_A0101_SEQ_0205
Figure 12_A0101_SEQ_0206
Figure 12_A0101_SEQ_0207
Figure 12_A0101_SEQ_0208
Figure 12_A0101_SEQ_0209

Claims (67)

  1. 一種產生抗體多聚體融合多肽之方法， 其包含 (a) 抗體重鏈及抗體輕鏈，及 (b) 第一融合多肽，其在 N 端至 C 端方向包含非抗體多聚體多肽的第一部分、抗體重鏈 CH1 域或抗體輕鏈恆定域、抗體鉸鏈區、抗體重鏈 CH2 域和抗體重鏈 CH3 域，以及第二融合多肽，其在 N 端至 C 端方向包含非抗體多聚體多肽的第二部分及如果該第一多肽包含抗體重鏈 CH1 域則包含抗體輕鏈恆定域，或如果該第一多肽包含抗體輕鏈恆定域則包含抗體重鏈 CH1 域， 其中 (i) (a) 的該抗體重鏈和 (b) 的該第一融合多肽，(ii) (a) 的該抗體重鏈和 (a) 的該抗體輕鏈，以及 (iii) (b)的該第一融合多肽和 (b) 的該第二融合多肽各自彼此獨立地藉由至少一個雙硫鍵彼此共價連接， 其中 該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與抗原特異性結合的結合位點， 其特徵在於該抗體多聚體融合多肽藉由重組哺乳動物細胞表現，該重組哺乳動物細胞藉由以化學計量比率為 1:1:2:1 的該抗體重鏈、該抗體輕鏈、該第一融合多肽和該第二融合多肽的表現卡匣轉染 (親代) 哺乳動物細胞而獲得。
  2. 如請求項 1 之方法，其中該抗體多聚體融合多肽是瞬時或穩定表現。
  3. 如請求項 1 或請求項 2 中任一項之方法，其中該哺乳動物細胞是 CHO 細胞，較佳為 CHO-K1 細胞，或 HEK 細胞。
  4. 如請求項 1 至 3 中任一項之方法，其中該轉染有四個載體，其中各載體精確地包含該等表現卡匣中之一者。
  5. 如請求項 1 至 3 中任一項之方法，其中該轉染有三個載體，其中兩個載體精確地包含該等表現卡匣中之兩者，且一個載體精確地包含該等表現卡匣中之一者。
  6. 如請求項 4 之方法，其中該轉染有三個載體，其中該第一載體包含用於抗體重鏈和抗體輕鏈的該等表現卡匣，該第二表現載體包含用於該第一融合多肽和該第二融合多肽的該等表現卡匣，且該第三載體包含用於該第一融合多肽的一個表現卡匣。
  7. 如請求項 1 至 6 中任一項之方法，其中該第一融合多肽包含作為該非抗體多聚體多肽的第一部分的藉由肽連接子彼此連接的 TNF 配體家族成員的兩個胞外域或其片段，且該第二融合多肽包含作為該非抗體多聚體多肽的第二部分的該 TNF 配體家族成員的僅一個胞外域或其片段，反之亦然。
  8. 如請求項 7 之方法，其中 (a) 該第一融合多肽包含作為該非抗體多聚體多肽的第一部分的 TNF 配體家族成員的第一胞外域或其片段、間隔域及該 TNF 配體家族成員的第二胞外域或其片段，其中 - 該間隔域為多肽且包含至少 25 個胺基酸殘基， - TNF 配體家族成員的第一胞外域或其片段直接或經由第一肽連接子與該間隔域的 N 端融合，且 - 該TNF 配體家族成員的第二胞外域或其片段直接或經由第二肽連接子與該間隔域的 C 端融合， (b) 該第二融合多肽包含作為該非抗體多聚體多肽的第二部分的該 TNF 配體家族成員的第三胞外域或其片段，該第三胞外域或其片段直接或經由第三肽連接子 - 融合至該第一融合多肽中該 TNF 配體家族成員的第二胞外域的 C 端或該第二融合多肽之間隔域的 C 端，或 - 在抗原結合域的第二部分與第二融合蛋白的間隔域之 C 端融合的情況下，融合至該第一融合多肽中該 TNF 配體家族成員的第二胞外域之 C 端。
  9. 如請求項 1 至 8 中任一項之方法，其中 該第一融合多肽在 N 端至 C 端方向包含非抗體多聚體多肽的第一部分、抗體輕鏈恆定域、抗體鉸鏈區、抗體重鏈 CH2 域及抗體重鏈 CH3 域，且 該第二融合多肽在 N 端至 C 端方向包含該非抗體多聚體多肽的第二部分及抗體重鏈 CH1 域。
  10. 如請求項 1 至 9 中任一項之方法，其中 該第一融合多肽包含杵突變，且 該抗體重鏈包含臼突變。
  11. 如請求項 1 至 10 中任一項之方法，其中 (a) 的該抗體重鏈與 (b) 的該第一融合多肽形成 Fc 區。
  12. 如請求項 1 至 11 中任一項之方法，其中 (a) 的該抗體重鏈與 (b) 的該第一融合多肽形成 IgG1 Fc 區或 IgG4 Fc 區。
  13. 如請求項 1 至 12 中任一項之方法，其中該 Fc 區為 IgG1 Fc 區，其進一步包含在位置 234 和 235 及/或 329 (Kabat EU 編號) 處的胺基酸取代。
  14. 如請求項 1 至 13 中任一項之方法，其中該 Fc 區為 IgG1 Fc 區，其進一步包含胺基酸取代 L234A、L235A 及/或 P329G (Kabat EU 編號)。
  15. 如請求項 7 至 14 中任一項之方法，其中在該第一融合多肽中，TNF 配體家族成員的該兩個胞外域或其片段藉由第一肽連接子彼此連接並在其 C 端藉由第二肽連接子融合至 CH1 域，且在該第二融合多肽中，該 TNF 配體家族成員的一個胞外域或其片段在其 C 端藉由第三肽連接子與該抗體輕鏈恆定域融合。
  16. 如請求項 7 至 14 中任一項之方法，其中在該第一融合多肽中，TNF 配體家族成員的該兩個胞外域或其片段藉由第一肽連接子彼此連接並在其 C 端藉由第二肽連接子融合至輕鏈恆定域，且在該第二融合多肽中，該 TNF 配體家族成員的一個胞外域或其片段在其 C 端藉由第三肽連接子與重鏈 CH1 域融合。
  17. 如請求項 1 至 16 中任一項之方法，其中在與非抗體多聚體多肽的部分相鄰的 CL 域中，位置 123 (Kabat EU 編號) 處的胺基酸已被精胺酸 (R) 替換，且位置 124 (Kabat EU 編號) 處的胺基酸已被離胺酸 (K) 取代，且其中在與非抗體多聚體多肽的部分相鄰的 CH1 域中，位置 147 (Kabat EU 編號) 及位置 213 (Kabat EU 編號) 處的胺基酸已被麩胺酸 (E) 取代。
  18. 如請求項 1 至 17 中任一項之方法，其中該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與細胞表面抗原特異性結合的結合位點。
  19. 如請求項 1 至 18 中任一項之方法，其中該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與細胞表面抗原特異性結合的結合位點，該細胞表面抗原選自由以下所組成之群組：纖維母細胞活化蛋白 (FAP)、黑色素瘤相關硫酸軟骨素蛋白多醣 (MCSP)、表皮生長因子受體 (EGFR)、癌胚抗原 (CEA)、CD19、CD20 及 CD33。
  20. 如請求項 7 至 19 中任一項之方法，其中該 TNF 配體家族成員共同刺激人類 T 細胞活化。
  21. 如請求項 7 至 20 中任一項之方法，其中該 TNF 配體家族成員選自 4-1-BBL 及 OX40L。
  22. 如請求項 7 至 21 中任一項之方法，其中該 TNF 配體家族成員為 4-1-BBL。
  23. 如請求項 7 至 22 中任一項之方法，其中 TNF 配體家族成員的該胞外域包含選自由 SEQ ID NO: 01、SEQ ID NO: 02、SEQ ID NO: 03、SEQ ID NO: 04、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 101 及 SEQ ID NO: 102 所組成之群組的胺基酸序列。
  24. 如請求項 7 至 23 中任一項之方法，其中 TNF 配體家族成員的該胞外域包含 SEQ ID NO: 01 或 SEQ ID NO: 56 的胺基酸序列。
  25. 如請求項 1 至 24 中任一項之方法，其中 (a) 該抗體重鏈及該抗體輕鏈形成能夠與標靶細胞抗原特異性結合的結合位點，且 (b) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 05、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58 及 SEQ ID NO: 59 所組成之群組的胺基酸序列，且該第二融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 01、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 03 及 SEQ ID NO: 04 所組成之群組的胺基酸序列。
  26. 如請求項 7 至 21 中任一項之方法，其中該 TNF 配體家族成員為 OX40L。
  27. 如請求項 7 至 21 及 26 中任一項之方法，其中 TNF 配體家族成員的該胞外域包含 SEQ ID NO: 43 或 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列，特定而言 SEQ ID NO: 43 之胺基酸序列。
  28. 如請求項 7 至 21 及 26 至 27 中任一項之方法，其中該抗體多聚體融合包含 (a) 能夠與標靶細胞抗原特異性結合的至少一個部分，及 (b) 該第一融合多肽與該第二融合多肽藉由雙硫鍵相互連接，其中抗原結合分子的特徵在於該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 99 或 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO: 43 或 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列。
  29. 如請求項 1 至 28 中任一項之方法，其中該抗原為纖維母細胞活化蛋白 (FAP)。
  30. 如請求項 1 至 29 中任一項之方法，其中該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與 FAP 特異性結合的結合位點，且包含 VH 域及 VL 域，該 VH 域包含 (i) 包含 SEQ ID NO: 06 或 SEQ ID NO: 60 之胺基酸序列的 CDR-H1，(ii) 包含 SEQ ID NO: 07 或 SEQ ID NO: 61 之胺基酸序列的 CDR-H2，及 (iii) 包含 SEQ ID NO: 08 或 SEQ ID NO: 62 之胺基酸序列的 CDR-H3，該 VL 域包含 (iv) 包含 SEQ ID NO: 09 或 SEQ ID NO: 63 之胺基酸序列的 CDR-L1，(v) 包含 SEQ ID NO: 10 或 SEQ ID NO: 64 之胺基酸序列的 CDR-L2，及 (vi) 包含 SEQ ID NO: 11 或 SEQ ID NO: 65 之胺基酸序列的 CDR-L3。
  31. 如請求項 1 至 30 中任一項之方法，其中該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與 FAP 特異性結合的結合位點，且包含含有 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的可變輕鏈域，或含有 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列的可變輕鏈域，或其中該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO: 98 之胺基酸序列。
  32. 如請求項 1 至 31 中任一項之方法，其中 (i) 該抗體重鏈包含含有 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列的 VH 域，且該抗體輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的 VL 域，或該抗體重鏈包含含有 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列的 VH 域，且該抗體輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列的 VL 域， (ii) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 71 及 SEQ ID NO: 73 所組成之群組的胺基酸序列；且該第二融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72 及 SEQ ID NO: 74 所組成之群組的胺基酸序列。
  33. 如請求項 1 至 32 中任一項之方法，其中 (i) 該抗體重鏈包含含有 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列的 VH 域且該抗體輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的 VL 域，或該抗體重鏈包含含有 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列的 VH 域且該抗體輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列的 VL 域，(ii) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 79 及 SEQ ID NO: 82 所組成之群組的胺基酸序列，且該第二融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80 及 SEQ ID NO: 83 所組成之群組的胺基酸序列。
  34. 如請求項 1 至 33 中任一項之方法，其中該抗體重鏈與該抗體輕鏈形成與 (人類) 纖維母細胞活化蛋白 (FAP) 特異性結合的結合位點，且該抗體重鏈具有 SEQ ID NO: 141 之胺基酸序列且該輕鏈具有 SEQ ID NO: 142 之胺基酸序列，其中該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 79 之胺基酸序列，且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO: 80 之胺基酸序列。
  35. 如請求項 1 至 28 中任一項之方法，其中該抗原為 CEA。
  36. 如請求項 1 至 28 及 35 中任一項之方法，其中該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與 CEA 特異性結合的結合位點且包含 VH 域及 VL 域，該 VH 域包含 (i) 包含 SEQ ID NO: 84 之胺基酸序列的 CDR-H1，(ii) 包含 SEQ ID NO: 85 之胺基酸序列的 CDR-H2，及 (iii) 包含 SEQ ID NO: 86 之胺基酸序列的 CDR-H3，該 VL 域包含 (iv) 包含 SEQ ID NO: 87 之胺基酸序列的 CDR-L1，(v) 包含 SEQ ID NO: 88 之胺基酸序列的 CDR-L2，及 (vi) 包含 SEQ ID NO: 89 之胺基酸序列的 CDR-L3。
  37. 如請求項 1 至 28 及 35 至 36 中任一項之方法，其中該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與 CEA 特異性結合的結合位點，且包含含有 SEQ ID NO: 90 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的可變輕鏈域。
  38. 如請求項 1 至 28 及 35 至 37 中任一項之方法，其中抗體多聚體融合包含 (i) 包含該 VH 域之重鏈，該 VH 域包含 SEQ ID NO: 90 之胺基酸序列，及包含該 VL 域之輕鏈，該 VL 域包含 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列， (ii) 第一融合多肽，其包含選自由 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 71 及 SEQ ID NO: 73 所組成之群組的胺基酸序列，及 (iii) 第二融合多肽，其包含 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72 及 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列。
  39. 如請求項 1 至 28 及 35 至 38 中任一項之方法，其中抗體多聚體融合包含 (i) 包含該 VH 域之重鏈，該 VH 域包含 SEQ ID NO: 90 之胺基酸序列，及包含該 VL 域之輕鏈，該 VL 域包含 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列， (ii) 第一融合多肽，其包含選自由 SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 79 及 SEQ ID NO: 82 所組成之群組的胺基酸序列，及 (iii) 第二融合多肽，其包含選自由 SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80 及 SEQ ID NO: 83 所組成之群組的胺基酸序列。
  40. 如請求項 1 至 28 及 35 至 39 中任一項之方法，其中抗體多聚體融合包含 (i) 包含 SEQ ID NO: 93 之胺基酸序列的第一重鏈、包含 SEQ ID NO: 94 之胺基酸序列的第二重鏈、及包含 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的兩條輕鏈，或 (ii) 包含 SEQ ID NO: 95 之胺基酸序列的第一重鏈、包含 SEQ ID NO: 96 之胺基酸序列的第二重鏈、及包含 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的兩條輕鏈。
  41. 如請求項 1 至 28 及 35 至 40 中任一項之方法，其中該抗體重鏈與該抗體輕鏈形成與 (人類) 癌胚抗原 (CEA) 特異性結合的結合位點，且該抗體重鏈具有 SEQ ID NO: 143 之胺基酸序列且該輕鏈具有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列，其中該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 79 之胺基酸序列，且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO: 80 之胺基酸序列。
  42. 如請求項 1 至 28 中任一項之方法，其中該抗原為 CD19。
  43. 如請求項 1 至 28 及 42 中任一項之方法，其中該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與 CD19 特異性結合的結合位點，且包含 VH 域及 VL 域，該 VH 域包含 (i) 包含 SEQ ID NO: 104 或 SEQ ID NO: 105 之胺基酸序列的 CDR-H1，(ii) 包含 SEQ ID NO: 106 或 SEQ ID NO: 107 之胺基酸序列的 CDR-H2，及 (iii) 包含 SEQ ID NO: 108 或 SEQ ID NO: 109 之胺基酸序列的 CDR-H3，該 VL 域包含 (iv) 包含 SEQ ID NO: 110 或 SEQ ID NO: 111 之胺基酸序列的 CDR-L1，(v) 包含 SEQ ID NO: 112 或 SEQ ID NO: 113 之胺基酸序列的 CDR-L2，及 (vi) 包含 SEQ ID NO: 114 或 SEQ ID NO: 115 之胺基酸序列的 CDR-L3。
  44. 如請求項 1 至 28 及 42 至 43 中任一項之方法，其中該抗體重鏈和該抗體輕鏈的可變域形成與 CD19 特異性結合的結合位點，且包含含有 SEQ ID NO: 116 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO: 117 之胺基酸序列的可變輕鏈域，或包含含有 SEQ ID NO: 118 之胺基酸序列的可變重鏈域及含有 SEQ ID NO: 119 之胺基酸序列的可變輕鏈域。
  45. 如請求項 1 至 28 及 42 至 44 中任一項之方法，其中 (i) 該重鏈包含含有 SEQ ID NO: 116 之胺基酸序列的 VH 域，且該輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 117 之胺基酸序列的 VL 域，或該重鏈包含含有 SEQ ID NO: 118 之胺基酸序列的 VH 域，且該輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 119 之胺基酸序列的 VL 域， (ii) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 71 及 SEQ ID NO: 73 所組成之群組的胺基酸序列，及 (iii) 該第二融合多肽包含 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72 及 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列。
  46. 如請求項 1 至 28 及 42 至 45 中任一項之方法，其中 (i) 該重鏈包含含有 SEQ ID NO: 116 之胺基酸序列的 VH 域，且該輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 117 之胺基酸序列的 VL 域，或該重鏈包含含有 SEQ ID NO: 118 之胺基酸序列的 VH 域，且該輕鏈包含含有 SEQ ID NO: 119 之胺基酸序列的 VL 域， (ii) 該第一融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 79 及 SEQ ID NO: 82 所組成之群組的胺基酸序列，及 (iii) 該第二融合多肽包含選自由 SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80 及 SEQ ID NO: 83 所組成之群組的胺基酸序列。
  47. 如請求項 1 至 28 及 42 至 45 中任一項之方法，其中 (i) 該重鏈包含 SEQ ID NO: 120 之胺基酸序列，該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 121 之胺基酸序列，且該輕鏈包含 SEQ ID NO: 122 之胺基酸序列，或 (ii) 該重鏈包含 SEQ ID NO: 123 之胺基酸序列，該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 124 之胺基酸序列，且該輕鏈包含 SEQ ID NO: 122 之胺基酸序列，或 (iii) 該重鏈包含 SEQ ID NO: 125 之胺基酸序列，該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 126 之胺基酸序列，且該輕鏈包含 SEQ ID NO: 127 之胺基酸序列，或 (iv) 該重鏈包含 SEQ ID NO: 128 之胺基酸序列，該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 129 之胺基酸序列，且該輕鏈包含 SEQ ID NO: 127 之胺基酸序列。
  48. 如請求項 1 至 28 及 42 至 47 中任一項之方法，其中該抗體重鏈與該抗體輕鏈形成與 (人類) CD19 特異性結合的結合位點，且該抗體重鏈具有 SEQ ID NO: 144 之胺基酸序列且該輕鏈具有 SEQ ID NO: 127 之胺基酸序列，其中該第一融合多肽包含 SEQ ID NO: 79 之胺基酸序列，且該第二融合多肽包含 SEQ ID NO: 80 之胺基酸序列。
  49. 如請求項 1 至 48 中任一項之方法，其中該轉染 (親代) 哺乳動物細胞為靶向整合轉染。
  50. 如請求項 49 之方法，其中該靶向整合轉染為雙重組酶介導的盒式交換。
  51. 如請求項 49 至 50 中任一項之方法，其中該 (親代) 哺乳動物細胞為 CHO 細胞，具有整合在其基因體的基因座內單個位點處的安放位點。
  52. 如請求項 51 之方法，其中該安放位點包含第一選擇標記和第二選擇標記，其側邊是兩個 RRS，其中該第一選擇標記不同於該第二選擇標記。
  53. 如請求項 52 之方法，其中該第一選擇標記為麩醯胺酸合成酶選擇標記，且該第二選擇標記為 GFP 螢光蛋白。
  54. 如請求項 52 之方法，其中整合的安放位點包含胸苷激酶選擇標記及 HYG 選擇標記。
  55. 如請求項 52 至 54 中任一項之方法，其中兩個選擇標記側邊的該兩個 RRS 並不相同。
  56. 如請求項 51 至 55 中任一項之方法，其中該安放位點包含三個異種特異性 loxP 位點，用於 Cre 重組酶介導的 DNA 重組。
  57. 如請求項 56 之方法，其中該異種特異性 loxP 位點為 L3、LoxFas 及 2L。
  58. 如請求項 57 之方法，其中該 L3 及該 2L 分別在 5' 端及 3' 端位於該安放位點的側邊，且 LoxFas 位於該 L3 與 2L 位點之間。
  59. 如請求項 51 至 58 中任一項之方法，其中該安放位點進一步包含雙順反子單元，該雙順反子單元經由 IRES 將選擇標記的表現連接至螢光 GFP 蛋白的表現。
  60. 如請求項 1 至 57 中任一項之方法，其中該抗體多聚體融合多肽由整合在細胞的基因體中的去氧核糖核酸表現，該去氧核糖核酸在 5'- 至 3'-方向包含 -   編碼該第一融合多肽的第一表現卡匣， -   編碼該第一融合多肽的第二表現卡匣， -   編碼該第二融合多肽的第三表現卡匣， -   編碼該抗體重鏈的第四表現卡匣，及 -   編碼該抗體輕鏈的第五表現卡匣。
  61. 如請求項 1 至 60 中任一項之方法，其中編碼該抗體多聚體融合多肽的該去氧核糖核酸在單一位點或基因座處被穩定整合至該哺乳動物細胞的基因體中。
  62. 如請求項 60 至 61 中任一項之方法，其中編碼該抗體多聚體融合多肽的該去氧核糖核酸進一步包含 -   第一重組識別序列，其位於第一 (最 5') 表現卡匣的 5’， -   第二重組識別序列，其位於第五 (最 3') 表現卡匣的 3’， -   第三重組識別序列，其位於 -   該第一重組識別序列與該第二重組識別序列之間，及 -   該第三表現卡匣與該第四表現卡匣之間， 且 其中所有重組識別序列皆不相同。
  63. 如請求項 60 至 62 中任一項之方法，其中編碼該抗體多聚體融合多肽的該去氧核糖核酸進一步包含編碼選擇標記的另一表現卡匣。
  64. 如請求項 63 之方法，其中編碼選擇標記的該表現卡匣位於該第三重組識別序列的 i) 5’，或 ii) 3’，或 iii) 部分在 5’ 且部分在 3’。
  65. 如請求項 63 至 64 中任一項之方法，其中編碼選擇標記的該表現卡匣部分位於該第三重組識別序列的 5’ 且部分位於 3'，其中位於該表現卡匣的該 5’ 部分包含啟動子及起始密碼子，且位於該表現卡匣的該 3’ 部分包含沒有起始密碼子及多腺苷酸化信號的編碼序列。
  66. 如請求項 60 至 65 中任一項之方法，其中編碼該抗體多聚體融合多肽的該去氧核糖核酸包含編碼選擇標記的另一表現卡匣，且編碼該選擇標記的該表現卡匣部分位於該第三重組識別序列的 5’ 且部分位於 3'，其中位於該表現卡匣的該 5’ 部分包含該啟動子及該起始密碼子，且位於該表現卡匣的該 3’ 部分包含沒有起始密碼子及多腺苷酸化信號的編碼序列，其中該起始密碼子與該編碼序列可操作地連接。
  67. 如請求項 65 至 66 中任一項之方法，其中該起始密碼子為 ATG。
TW110126928A 2020-07-24 2021-07-22 用於表現抗體多聚體融合之方法 TW202219067A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063056468P 2020-07-24 2020-07-24
US63/056,468 2020-07-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202219067A true TW202219067A (zh) 2022-05-16

Family

ID=77358205

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110126928A TW202219067A (zh) 2020-07-24 2021-07-22 用於表現抗體多聚體融合之方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20220162295A1 (zh)
EP (1) EP4185611A1 (zh)
JP (1) JP2023535090A (zh)
KR (1) KR20230066552A (zh)
AU (1) AU2021311034A1 (zh)
BR (1) BR112023001209A2 (zh)
CA (1) CA3189520A1 (zh)
IL (1) IL299627A (zh)
MX (1) MX2023000883A (zh)
TW (1) TW202219067A (zh)
WO (1) WO2022018178A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4148067A1 (en) * 2021-09-08 2023-03-15 F. Hoffmann-La Roche AG Method for the expression of an antibody-multimer-fusion

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
ATE159548T1 (de) 1990-11-13 1997-11-15 Immunex Corp Bifunktionelle wählbare fusionsgene
WO1994028143A1 (en) 1993-05-21 1994-12-08 Targeted Genetics Corporation Bifunctional selectable fusion genes based on the cytosine deaminase (cd) gene
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
SI2310509T1 (sl) 2008-07-21 2015-07-31 Apogenix Gmbh TNFSF enoverižne molekule
HUE036077T2 (hu) 2010-08-13 2018-06-28 Roche Glycart Ag Anti-FAP ellenanyagok és alkalmazásukra szolgáló eljárások
MY191428A (en) * 2014-11-14 2022-06-27 Hoffmann La Roche Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer
CN114751989A (zh) * 2015-03-31 2022-07-15 豪夫迈·罗氏有限公司 包含三聚体tnf家族配体的抗原结合分子
BR112020012591A2 (pt) 2017-12-22 2020-11-24 Genentech, Inc. células hospedeiras de integração direcionada (ti), células hospedeiras ti, métodos para preparar uma célula hospedeira ti, métodos para expressar um polipeptídeo de interesse e vetores

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022018178A1 (en) 2022-01-27
CA3189520A1 (en) 2022-01-27
JP2023535090A (ja) 2023-08-15
AU2021311034A1 (en) 2023-02-23
KR20230066552A (ko) 2023-05-16
BR112023001209A2 (pt) 2023-02-14
MX2023000883A (es) 2023-02-22
US20220162295A1 (en) 2022-05-26
IL299627A (en) 2023-03-01
EP4185611A1 (en) 2023-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10087254B2 (en) ASPGR antibodies and uses thereof
KR20190014525A (ko) 면역 조절 단백질과 종양 항원을 결합하는 이중특이적 결합 단백질
KR101528392B1 (ko) 글리코실화된 반복-모티프-분자 공액체
JP7008406B2 (ja) ポリペプチドを発現する宿主細胞を選択するための発現構築物および方法
KR20220016957A (ko) Sirt-1 유전자 녹아웃을 갖는 포유류 세포주
TW202223092A (zh) 具有基因剔除的哺乳動物細胞株
JP2024016181A (ja) 所定の構成の複数の発現カセットの標的指向性組込みによって多価二重特異性抗体発現細胞を作製するための方法
TW202219067A (zh) 用於表現抗體多聚體融合之方法
WO2019129138A1 (zh) 靶向ErbB受体家族且自表达PD-1抗体的CAR-T细胞及其用途
TW202340248A (zh) 促效性ｌｔｂｒ抗體及包含其之雙特異性抗體
WO2019129142A1 (zh) 自分泌CD40抗体且靶向ErbB受体家族的CAR-T细胞及其用途
JP2023036934A (ja) リコンビナーゼ媒介性カセット交換を使用した多重特異性抗体スクリーニング法
JP2024026208A (ja) 所定の構成の複数の発現カセットの標的化組込みによって三価の抗体を発現する細胞を生成するための方法
EP4148067A1 (en) Method for the expression of an antibody-multimer-fusion
JP2024063172A (ja) Ｓｉｒｔ－１遺伝子ノックアウトを有する哺乳類細胞株
KR20220010019A (ko) 정의된 조직에서 다중 발현 카세트의 표적화된 통합에 의해 2가 이중특이성 항체 발현 세포를 생성하는 방법
KR20220024636A (ko) 정의된 조직의 다수 발현 카세트들의 표적화 통합에 의한 다가, 다중특이성 항체 발현 세포의 생성 방법
KR20220010024A (ko) Cre mrna를 이용한 표적화된 통합에 의한 단백질 발현 세포의 산출을 위한 방법
RU2682884C2 (ru) Оптимизированная экспрессионная кассета для экспрессии полипептида с высоким выходом
KR102337049B1 (ko) 폴리펩티드 생성 방법
KR20210134932A (ko) 정의된 조직에서 다중 발현 카세트의 표적화된 통합에 의해 FcRn 발현 세포를 생성하는 방법
WO2019129143A1 (zh) 靶向ErbB受体家族的嵌合抗原受体修饰T细胞及其用途