TW202216758A - 抗人類免疫缺陷病毒-1抗體、包含其的細胞、核酸、組合物及套組 - Google Patents
抗人類免疫缺陷病毒-1抗體、包含其的細胞、核酸、組合物及套組 Download PDFInfo
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Abstract
本發明提供一種包含輕鏈之抗HIV-1抗體,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21以及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NOs: 15、18或21,L-CDR2之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22以及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NOs: 16、19或22,且L-CDR3之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23以及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NOs: 17、20或23。
Description
本發明關於針對特異性結合至HIV-1 p24蛋白之人類免疫缺陷病毒-1的抗體(抗HIV-1)。本發明亦關於使用前述抗體偵測樣品中的HIV-1之方法及檢定。
人類免疫缺陷病毒1 (HIV-1)為逆轉錄病毒,可感染全球3790萬人,每年導致約100萬個體死亡,尤其是在無法獲得診斷及治療之易感人群中(
Soliman, M. 等人 Mechanisms of HIV Control. Current HIV/AIDS Reports 2017, 第 14(3) 卷 ;101-9)。HIV-1為後天性免疫缺陷症候群(AIDS)之主要原因,此是一種無法治癒之疾病,經由HIV-1感染個體之性接觸或藉由暴露於血液或血源性污染產品而傳播。此病毒藉由破壞及削弱免疫細胞之功能來靶向免疫系統。受感染之個體變得免疫缺陷,且易受到其他機會性感染以及某些類型之癌症的影響(
WHO 網站來源 - https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hiv-aids)。目前,僅46%之HIV-1感染個體知曉他們的感染狀況。因此,在急性感染中偵測HIV-1是重要的公共衛生問題(
Stone, M. 等人 Comparison of detection limits of fourth- and fifth-generation combination HIV antigen-antibody, p24 antigen, and viral load assays on diverse HIV isolates. Journal of Clinical Microbiology 2018, 第 56(8) 卷 ;1-12) 。
在此特殊背景下,目標是在個體受感染(急性期)後的數周內立即診斷出HIV-1,由此可能會防止二次傳播並允許及早獲得治療及照護(
Lewis J. 等人 Field accuracy of fourth-generation rapid diagnostic tests for acute HIV-1: a systematic review. AIDS 2015, 第 29(18) 卷 ;2465-71)。為了及時達成此目標,使用早期生物標記進行HIV-1偵測是關鍵的。最常用於診斷HIV-1感染之生物標記是針對病毒結構蛋白之抗體。在此,p24被視為早期HIV-1偵測之重要生物標記,因為它是HIV-1病毒包膜中最豐富的結構蛋白,並且在感染之初始階段在血清中以高水平分泌。p24為聚合的衣殼蛋白(capsid protein),其是充當病毒RNA分子周圍HIV-1包膜之主要結構組分。p24為源自Gag多聚蛋白前體的24-25 kDa之蛋白,與HIV-1 RNA一樣,其可在血清轉化之前偵測到(
Gray, E.R. 等人 p24 revisited: a landscape review of antigen detection for early HIV diagnosis. AIDS. 2018, 第 32(15) 卷 ;2089-102)。
疾病控制與預防中心(CDC)及世界衛生組織(WHO)之當前指南推薦使用***抗體-抗原檢定作為 HIV-1篩檢之較佳方法。此等測試偵測p24抗原及抗HIV-1抗體,並將診斷窗口期自暴露後4週縮短至2週(
Gray, E.R. 等人 p24 revisited: a landscape review of antigen detection for early HIV diagnosis.AIDS.2018, 第 32(15) 卷 ;2089-102 ; Codoner, F. 等人 Gag protease coevolution analyses define novel structural surfaces in the HIV-1 matrix and capsid involved in resistance to Protease Inhibitors. Scientific Reports 2017, 第 7(3717) 卷 ;1-10 ; Alexander TS. Human Immunodeficiency Virus Diagnostic Testing: 30 Years of Evolution. Clinical and Vaccine Immunology 2016, 第 23(4) 卷 ;249-53 ; WHO. World Health Organization Model List of Essential In Vitro Diagnostics. 第 1 版 Geneva.2018 ; Centers for Disease Control and Prevention. 2017. National HIV testing day and new testing recommendations. Morbidity and Mortality Weekly Report 第 63(25) 卷 ;537-37)。
然而,仍需要具有高結合能力及良好製造特徵的與p24抗原特異性結合之抗HIV-1抗體,因為目前市售的一些抗體對早期p24偵測之敏感性較低。
因此,本發明提供與類似的商業試劑相比具有經改良之針對HIV-1 p24蛋白之結合能力的抗HIV-1抗體。此等抗體識別新穎、非交叉反應性表位,並且可在多種HIV-1免疫檢定(諸如免疫診斷或血液篩檢平台)中用作單個實體或捕獲/偵測夥伴。
當本說明書涉及CDR X之序列或與CDR X相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列時,應理解此類取代、缺失或添加可出現在由CDR X定義之胺基酸範圍的任何胺基酸處。本說明書將由CDR X定義之胺基酸範圍內的每個特定胺基酸個體化為適合於此類取代、缺失或添加。
作為非限制性說明,抗體#A之L-CDR1可定義為包含胺基酸序列(1)-(11),RASQDISNYLH [如SEQ ID NO: 15所示]。除非另有規定或後來藉由修正而完善,否則位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10及11中之每個皆被視為適合於取代、缺失或添加。
在第一態樣中,本發明揭露一種包含輕鏈之抗HIV-1抗體,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21以及與以下序列中之任一者相差一個或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 15、18或21,L-CDR2之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22以及與以下序列中之任一者相差一個或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 16、19或22,且L-CDR3之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23以及與以下序列中之任一者相差一個或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 17、20或23。
在其他實施例中,本發明之抗HIV-1抗體包含重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 30以及與以下序列中之任一者相差一個或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 24、27或30,H-CDR2之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 31以及與以下序列中之任一者相差一個或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 25、28或31,H-CDR3之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 32以及與以下序列中之任一者相差一個或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 26、29或32。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體之輕鏈包含與以下胺基酸序列具有約90%同源性之序列:SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9。在其他實施例中,輕鏈包含以下胺基酸序列:SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體之重鏈包含與以下胺基酸序列具有約90%同源性之序列:SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12。在其他實施例中,重鏈包含以下胺基酸序列:SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12。
在一些實施例中,L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 15或與SEQ ID NO: 15相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 16或與SEQ ID NO: 16相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 17或與SEQ ID NO: 17相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。在其他實施例中,L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 18或與SEQ ID NO: 18相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 19或與SEQ ID NO: 19相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 20或與SEQ ID NO: 20相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。在其他實施例中,L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 21或與SEQ ID NO: 21相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 22或與SEQ ID NO: 22相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 23或與SEQ ID NO: 23相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
在一些實施例中,H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 24或與SEQ ID NO: 24相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 25或與SEQ ID NO: 25相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 26或與SEQ ID NO: 26相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。在其他實施例中,H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 27或與SEQ ID NO: 27相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 28或與SEQ ID NO: 28相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 29或與SEQ ID NO: 29相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。在其他實施例中,H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 30或與SEQ ID NO: 30相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 31或與SEQ ID NO: 31相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 32或與SEQ ID NO: 32相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
在一些實施例中,L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 15或與SEQ ID NO: 15相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 16或與SEQ ID NO: 16相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 17或與SEQ ID NO: 17相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 24或與SEQ ID NO: 24相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 25或與SEQ ID NO: 25相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 26或與SEQ ID NO: 26相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
在一些實施例中,L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 18或與SEQ ID NO: 18相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 19或與SEQ ID NO: 19相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 20或與SEQ ID NO: 20相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 27或與SEQ ID NO: 27相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 28或與SEQ ID NO: 28相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 29或與SEQ ID NO: 29相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
在一些實施例中,L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 21或與SEQ ID NO: 21相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 22或與SEQ ID NO: 22相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 23或與SEQ ID NO: 23相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 30或與SEQ ID NO: 30相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 31或與SEQ ID NO: 31相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 32或與SEQ ID NO: 32相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體之輕鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體之重鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體特異性結合至包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列的HIV-1 p24蛋白之表位。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 21或與SEQ ID NO: 21相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 22或與SEQ ID NO: 22相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 23或與SEQ ID NO: 23相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 30或與SEQ ID NO: 30相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 31或與SEQ ID NO: 31相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 32或與SEQ ID NO: 32相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
在一些較佳實施例中,前述抗體之輕鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3,且前述抗體之重鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體為單株抗體或重組抗體。在其他實施例中,前述抗體為抗體片段。當抗HIV-1抗體為抗體片段時,其選自可變片段(Fv)、單鏈Fvs (scFv)、雙特異性抗體(sc(Fv)2)、單鏈抗體、單域抗體、Fab片段、F(ab')2片段、Fab’片段、二硫鍵連接之Fv (dsFv)、化學偶聯之Fv (ccFv)、雙抗體、抗獨特型(抗Id)抗體、親和體、奈米抗體及單抗體。
在一些實施例中,抗HIV-1抗體包含鼠IgG1類或鼠IgG2a類之恆定區。
在一些實施例中,抗HIV-1抗體結合至固體支撐體。
在一些態樣中,本發明揭露一種細胞,其包含本發明之抗HIV-1抗體。
在其他態樣中,本發明揭露一種核酸,其包含編碼抗HIV-1抗體之核苷酸序列、可操作地連接至前述核苷酸序列之啟動子、及可選標記。本發明亦揭露一種包含前述核酸之細胞。
本發明亦揭露包含如本文所述之抗HIV-1抗體及固體支撐體的組合物,其中前述抗HIV-1抗體共價地或非共價地結合至固體支撐體。在一些實施例中,固體支撐體包含顆粒、珠粒、膜、表面、多肽晶片、微量滴定盤或層析管柱之固相。
本發明亦揭露用於偵測樣品中HIV-1之存在的套組,前述套組包含至少一種根據本發明之抗HIV-1抗體及固體支撐體,其中前述至少一種抗體共價地或非共價地結合至固體支撐體。
以下描述僅旨在說明本發明之各種實施例。因此,所討論之具體修改不旨在限制。對熟習此項技術者顯而易見的是,在不脫離本文提出之主題的精神或範疇之情況下,可進行各種等同、改變及修改,並且應理解,此類等同實施例將包括在本文中。
除非上下文另有明確規定,否則在本說明書及隨附申請專利範圍中使用的單數形式「一」、「一個」及「前述」包括複數個指示物。
本說明書通篇,除非上下文另有要求,否則詞語「包含」或諸如「包括」或「含有」之變型將應理解為暗示包括所陳述之元素或整數或元素或整數之組,但不排除任何其他元素或整數或元素或整數之組。
除非另有定義,否則本文使用的所有技術及科學術語與本發明所屬領域之普通技術者通常理解之含義相同。示範性方法及材料在下面描述,儘管亦可使用與本文描述之彼等相似或等效的方法及材料並且對於熟習此項技術者而言將為顯而易見的。在此提及之所有出版物及其他參考文獻均以引用方式全部併入。如有衝突,則以本說明書,包括定義為準。材料、方法及實例僅為說明性且不旨在限制。
除非另有明確說明,否則本說明書中之每個實施例將在加以必要修正的情況下應用於每個其他實施例。
除非另有說明,否則以下術語應理解為具有以下含義。
如本文所用,術語「核酸」是指由DNA或RNA構成之任何材料。核酸可以合成方式或由活細胞製成。
如本文所用,「核苷酸」為由磷酸基團、5-碳糖及含氮鹼基組成之核酸次單元。見於RNA中的5-碳糖為核糖。在DNA中,5-碳糖為2'-去氧核糖。前述術語亦包括此類次單元之類似物。
如本文所用,術語「多核苷酸」是指核苷酸之聚合鏈。前述術語包括DNA分子(例如,cDNA或基因組或合成DNA)及RNA分子(例如,mRNA 或合成RNA),以及包含非天然核苷酸類似物、非天然核苷間鍵、或這兩者的DNA或RNA之類似物。核酸可呈任何拓撲構形。例如,核酸可為單股、雙股、三股、四股、部分雙股、分支、髮夾、環狀或呈掛鎖構形。
如本文所用,術語「蛋白」或指由一或多條胺基酸殘基鏈組成的大生物分子或大分子。許多蛋白為催化生化反應之酶,且對新陳代謝至關重要。蛋白亦具有結構或機械功能,諸如肌肉中的肌動蛋白及肌凝蛋白以及細胞骨架中之蛋白,它們形成維持細胞形狀之支架系統。其他蛋白在細胞訊號傳導、免疫反應、細胞黏附及細胞週期中很重要。然而,蛋白可為完全人工的或重組的,亦即,並非天然存在於生物系統中。
如本文所用,術語「多肽」是指天然存在及非天然存在之蛋白以及其片段、突變體、衍生物及類似物。多肽可為單體的或聚合的。多肽可包含許多不同的結構域(肽),每個結構域具有一或多種不同活性。
如本文所用,術語「重組」是指生物分子,例如基因或蛋白,其(1)已自其天然存在之環境中移除,(2)不與其中基因見於自然界中的多核苷酸之全部或一部分結合,(3)與其在自然界中未連接的多核苷酸可操作地連接,或(4)在自然界中不存在。術語「重組」可用於指代選殖的DNA分離物、化學合成之多核苷酸類似物或由異源系統生物合成之多核苷酸類似物,以及由此類核酸編碼之蛋白及/或mRNA。
如本文所用,術語「融合蛋白」是指包含兩個或更多個在天然存在之蛋白中不共存的胺基酸序列之蛋白。融合蛋白可包含來自相同或不同生物體的兩個或更多個胺基酸序列。融合蛋白之兩個或更多個胺基酸序列通常在框內,它們之間沒有終止密碼子,並且通常作為融合蛋白之一部分自mRNA轉譯。
當提及根據(3)之蛋白時,術語「融合蛋白」及術語「重組」在本文中可互換使用。
如本文所用,術語「抗體」或「免疫球蛋白」具有相同含義,並且在本發明中等同使用。如本文所用,術語「抗體」是指免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分,亦即含有特異性結合抗原之抗原結合位點的分子。因此,術語抗體不僅涵蓋完整抗體分子,而且亦包括抗體片段或衍生物。
在天然抗體中,兩條重鏈經由二硫鍵相互連接,且每條重鏈經由二硫鍵連接至輕鏈。有兩種類型之輕鏈,λ(lambda)及κ(kappa)。有五種主要的重鏈類別(或同型),它們決定抗體分子之功能活性:IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。每條鏈包含不同的序列域。輕鏈包括兩個域,亦即可變域(VL)及恆定域(CL)。重鏈包括四個域,亦即一個可變域(VH)及三個恆定域(CH1、CH2及CH3,統稱為CH)。輕鏈(VL)及重鏈(VH)兩者之可變區決定對抗原之結合識別及特異性。輕鏈(CL)及重鏈(CH)之恆定區結構域賦予重要的生物學特性,諸如抗體鏈結合、分泌、跨胎盤移動、補體結合以及與Fc受體(FcR)之結合。Fv片段為免疫球蛋白Fab片段之N端部分,且由一條輕鏈及一條重鏈之可變部分組成。抗體之特異性在於抗體結合位點與抗原決定位之間的結構互補性。抗體結合位點由主要來自高變區或互補決定區(CDR)之殘基構成。有時,來自非高變區或框架區(FR)之殘基會影響整體域結構,從而影響結合位點。互補決定區或CDR是指共同定義天然免疫球蛋白結合位點之天然Fv區的結合親和力及特異性的胺基酸序列。免疫球蛋白之輕鏈及重鏈各有三個CDR,分別命名為L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3及H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3。因此,抗原結合位點通常包括六個CDR,包含來自重鏈V區及輕鏈V區各自之CDR組。框架區(FR)是指***CDR之間的胺基酸序列。
CDR可根據Kabat、Chothia之定義、Kabat及Chothia兩者之累積、AbM、接觸、IMGT獨特編號及/或構形定義或此項技術中熟知的任何CDR確定方法來鑑定。抗體CDR可經鑑定為最初由 Kabat等人定義之高變區。參見,例如Kabat等人, 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, NIH, Washington D.C.。CDR之位置亦可經鑑定為最初由Chothia及其他人描述之結構環結構(參見,例如Chothia等人, Nature 342:877-883, 1989)。CDR鑑定之其他方法包括「AbM定義」,其是Kabat與Chothia之間的折衷並且是使用Oxford Molecular之AbM抗體建模軟體(現為Accelrys0)導出的;CDR之「contact定義」,其是基於觀察到的抗原接觸,闡述於MacCallum等人,J. Mol.Biol., 262:732-745, 1996中;或「IMGT獨特編號」,其依賴於可變區結構之高度保守性(參見Lefranc, M.-P. Nucl.Acids Res., 33, D593-D597, 2005)。在本文中稱為CDR之「構形定義」的另一種方法中,CDR之位置可經鑑定為對抗原結合做出焓貢獻之殘基。參見,例如Makabe等人, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166, 2008。其他CDR邊界定義可不嚴格遵循以上方法中之一種,但將仍然與Kabat CDR之至少一部分重疊,儘管鑒於特定殘基或殘基組或甚至整個CDR不顯著影響抗原結合之預測或實驗研究結果,其可能縮短或延長。如本文所用,CDR可指代由此項技術中已知之任何方法定義的CDR,包括方法之組合。本文所用之方法可利用根據此等方法中之任一種定義的CDR。對於含有多於一個CDR之任何給定實施例,除非另有規定,否則CDR可根據Kabat、Chothia、extended、AbM、contact、IMGT獨特編號及/或構形定義中之任一種來定義。
抗體序列之示範性資料庫描述於「Abysis」網站 www.bioinf.org.uk/abs(由A. C. Martin in the Department of Biochemistry & Molecular Biology University College London, London, England維護)及VBASE2網站www.vbase2.org中並可經由其訪問,如Retter等人, Nucl. Acids Res., 33 (Database issue): D671-D674 (2005)中所述。較佳使用Abysis資料庫分析序列,該資料庫將來自Kabat、IMGT及Protein Data Bank (PDB)之序列資料與來自PDB之結構資料整合在一起。除非另有說明,否則本文中列出之所有CDR均根據Abysis資料庫網站,按照所示方案得出。
如本文所用,術語「抗體」包括經分離之抗體、多株抗體、單株抗體、多特異性抗體、人類抗體、人源化抗體(完全或部分人源化)、動物抗體、重組抗體、嵌合抗體及抗體片段。
如本文所用,術語「單株抗體」或「mAb」是指具有結合相同表位之同質抗體群的抗體組合物。前述術語不限於抗體之種類或來源,亦不旨在受其製備方式之限制。因此,前述術語包括由鼠融合瘤獲得之抗體,以及使用人類而非鼠融合瘤獲得之人類單株抗體。前述術語亦涵蓋藉由此項技術已知的用於產生單株抗體之其他方法獲得的抗體,諸如藉由瞬時或穩定轉染建立真核細胞株。
如本文所用,術語「重組抗體」是指自用一或多種包含抗體編碼序列之表現載體轉染的細胞或細胞株表現的抗體,其中前述編碼序列不與細胞天然相關。重組抗體或其片段藉由熟練技術人員熟知之任何重組方式來製備、表現、產生或分離。
在一些實施例中,當「重組抗體」源自結合相同表位之同質抗體群時,它亦可為「單株抗體」。
因此,本文所用之術語「抗體片段」包括但不限於可變片段(Fv)、單鏈Fvs (scFv)、雙特異性抗體(sc(Fv)
2)、單鏈抗體、單域抗體、 Fab片段、F(ab')
2片段、Fab’片段、二硫鍵連接之Fv (dsFv)、化學偶聯之Fv (ccFv)、雙抗體及抗獨特型(抗Id)抗體以及以上任一者之具有功能活性的表位結合片段。在某些實施例中,抗體亦包括親和體、奈米抗體及單抗體。在某些實施例中,具體抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性片段,亦即含有抗原結合位點之分子。免疫球蛋白分子可為任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgAi及IgA2)或子類。
如本文所用,術語「抗原結合片段(Fab)」是指包含重鏈及輕鏈中之各者的一個恆定域及一個可變域的抗體片段。可變域含有抗原結合位點。通常,抗體包含一個片段可結晶區(Fc)及兩個抗原結合片段(Fab)。Fab片段可與Fc區分開,產生兩個Fab片段,亦稱為F(ab')
2片段或二聚片段抗原結合。
術語「經分離」是指實質上不含其他細胞材料及/或化學品之蛋白(例如,抗體)或核酸。例如,當經分離之抗體由來自不同物種之細胞表現時,例如在鼠細胞中表現之人類抗體,並且實質上不含來自不同物種之其他蛋白。可使用此項技術中熟知之蛋白純化技術,藉由分離使蛋白實質上不含天然相關組分(或與用於產生抗體之細胞表現系統相關之組分)。
如本文所用,術語「抗原」是指與相應抗體特異性結合之生物分子。來自不同圖譜之抗體藉助於其可變區相互作用結合特定的抗原結構。
如本文所用,術語「表位」是指抗體特異性結合至的抗原部分。因此,術語「表位」包括能夠與免疫球蛋白或T細胞受體特異性結合之任何蛋白決定子。
當多肽由於抗體識別多肽中包含的特定表位而與抗體結合時,多肽與抗體具有「免疫反應性」。免疫反應性可藉由抗體結合,更具體地藉由抗體結合動力學,及/或藉由使用包含抗體所針對的表位之已知多肽作為競爭劑之結合競爭來確定。判定多肽是否與抗體具有免疫反應性之技術是此項技術中已知的。
如本文所用,術語「樣品」是指自受試者或患者獲得之任何生物材料。在一個態樣,樣品可包含血液、腹膜液、CSF、唾液或尿液。在其他態樣,樣品可包含全血、血漿、血清、自血液樣品富集之B細胞、及經培養之細胞(例如,來自受試者之B細胞)。樣品亦可包括生檢或組織樣品,包括神經組織。在其它態樣,樣品可包含全細胞及/或細胞裂解物。
可對樣品進行處理以便以物理或機械方式破壞組織或細胞結構,從而將細胞內組分釋放至溶液中,該溶液可進一步含有酶、緩衝液、鹽、清潔劑及其類似物,其是用於使用標準方法製備生物樣品以供分析。樣品亦可包括經處理之樣品,諸如藉由使樣品穿過或通過過濾裝置,或在離心之後,或藉由黏附於介質、基質或支撐體而獲得的彼等樣品。
術語「患者」或「個體」在本文中可互換地使用,且是指待診斷或治療之哺乳動物受試者,較佳為人類患者。在一些情況下,本發明之方法可用於實驗動物、獸醫應用及疾病動物模型之開發,包括但不限於齧齒動物,包括小鼠、大鼠及倉鼠;以及靈長類動物。
術語「載體」是指可用於將與其連接之另一核酸引入細胞中的核酸。一種類型之載體為「質體」,其是指線性或環狀雙股DNA分子,其中可連接額外的核酸段。另一種類型之載體為病毒載體(例如,複製缺陷型反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒),其中可將額外的DNA段引入病毒基因組中。某些載體能夠在它們被引入之宿主細胞中自主複製(例如,包含細菌複製起點之細菌載體及附加型哺乳動物載體)。其他載體(例如非附加型哺乳動物載體)在引入至宿主細胞中時整合至宿主細胞之基因組中,藉此連同宿主基因組一起複製。
「表現載體」為一種可指導所選多核苷酸之表現的載體類型。「表現細胞」為包含表現載體之細胞。
若調控序列影響核苷酸序列之表現(例如,表現之水平、時間或位置),則核苷酸序列與調控序列「可操作地連接」。「調控序列」為影響與其可操作連接之核酸的表現(例如,表現之水平、時間或位置)之核酸。例如,調控序列可直接或經由一或多種其他分子(例如,與調控序列及/或核酸結合之多肽)之作用對受調控之核酸發揮其作用。調控序列之實例包括啟動子、強化子及其他表現控制元件。
如本文所用,術語「診斷」或「經診斷」意謂鑑定病理狀況或易患疾病之患者的存在或性質。診斷方法之敏感性及特異性不同。診斷檢定之「靈敏度」為測試呈陽性之患病個體的百分比(「真陽性」之百分比)。由檢定未偵測到的患病個體為「假陰性」。未患病且在檢定中測試呈陰性之受試者稱為「真陰性」。診斷檢定之「特異性」為1減去假陽性率,其中「假陽性」率定義為測試呈陽性之彼等非疾病患者的比例。儘管特定診斷方法可能不提供對病狀之確定性診斷,但若該方法提供有助於診斷之陽性指示,則其足矣。
如本文所用,術語「結合親和力」是指抗原表位與抗體抗原結合位點之間相互作用的強度。
本發明關於特異性用於偵測人類免疫缺陷病毒1(HIV-1)p24蛋白的新穎抗體。此等抗體識別HIV-1 p24蛋白之新穎及非交叉反應性表位,並且與其他市售產品相比,呈現出更高的親和力及敏感性。因此,本文所述之抗體可用作早期HIV-1偵測之免疫檢定中的診斷試劑、標準品或陽性對照。它們可用於偵測三個主要HIV-1組(M組(主要)、N組(新)及O組(離群))中之任一個。
本發明亦關於包含前述抗HIV-1抗體之組合物及套組,其用於偵測樣品中HIV-1之存在。
[I. 抗HIV-1抗體]
如本文所用,在兩個或更多個核酸或多肽序列之上下文中,術語「同源性」、「相似性」或「一致性」是指當進行比較及比對以獲得最大對應時,相同或具有特定百分比之相同核苷酸或胺基酸殘基的兩個或更多個序列或子序列。為了測定同源性/一致性百分比,出於最佳比較目的比對序列(例如,可在第一胺基酸或核酸序列之序列中引入空隙以與第二胺基酸或核酸序列進行最佳比對)。隨後比較相應胺基酸位置或核苷酸位置處之胺基酸殘基或核苷酸。當第一序列中之位置由與第二序列中相應位置相同的胺基酸殘基或核苷酸佔據時,則分子在彼位置處為一致的。兩個序列之間的一致性百分比為序列共享之相同位置之數量的函數(亦即,一致性%=相同位置之數量# / 位置總數#(例如重疊位置)x 100)。在一些實施例中,所比較的兩個序列在適當時在序列內引入空隙之後具有相同長度(例如,排除延伸超出所比較序列之額外序列)。對於兩個序列之間的序列比較,「對應」CDR是指兩個序列中相同位置的CDR(例如各序列之CDR-H1)。
可使用數學算法來測定兩個序列之間的一致性百分比、相似性百分比或相似性百分比。用於比較兩個序列的數學算法之較佳非限制性實例為以下之算法:Karlin及Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268,如中Karlin及Altschul, 1993, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877中所修改。此類算法併入以下之NBLAST及XBLAST程式中:Altschul等人 , 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410。BLAST核苷酸搜索可利用NBLAST程式、記分= 100、字長= 12來執行,以獲得與編碼感興趣之蛋白的核酸同源之核苷酸序列。BLAST蛋白搜索可利用XBLAST程式、記分= 50、字長= 3來執行,以獲得與感興趣之蛋白同源的胺基酸序列。為了獲得用於比較目的之空隙比對,可使用空隙BLAST,如 Altschul等人,1997,Nucleic Acids Res.25:3389-3402中所述。當利用BLAST及空隙化BLAST程式時,可使用各個程式(例如,XBLAST及NBLAST)之預設參數。用於序列比較的數學算法之另一較佳非限制性實例為Myers及Miller, CABIOS (1989)之算法。此類演算法併入ALIGN程式(2.0版)中,該程式為GCG序列比對軟體包之部分。當利用ALIGN程式來比較胺基酸序列時,可使用PAM120權重殘餘表、12之間隙寬度罰分及4之間隙罰分。
在本文所述之一實施例中,重組抗體包含輕鏈及重鏈。在本文所述之其他實施例中,重組抗體包含兩條輕鏈及兩條重鏈。本發明之重組抗體的輕鏈可包含兩個域,亦即一個可變域(VL)及一個恆定域(CL)。本發明之重組抗體的重鏈可包含四個域,亦即一個可變域(VH)及三個恆定域(CH1、CH2及CH3,統稱為CH)。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體為單株抗體。在其他實施例中,本發明之抗HIV-1抗體為重組抗體。在其他實施例中,抗HIV-1抗體為根據本發明之定義的重組單株抗體。在其他實施例中,抗HIV-1抗體為經分離之抗體。
在一些實施例中,抗HIV-1抗體為抗體片段。在較佳實施例中,前述抗體片段選自可變片段(Fv)、單鏈Fvs (scFv)、雙特異性抗體(sc(Fv)2)、單鏈抗體、單域抗體、Fab片段、F(ab')
2片段、Fab’片段、二硫鍵連接之Fv (dsFv)、化學偶聯之Fv (ccFv)、雙抗體、抗獨特型(抗Id)抗體、親和體、奈米抗體及單抗體。
在本文所述之一實施例中,抗HIV-1抗體包含Fc區及兩個Fab片段。在本文所述之其他實施例中,抗HIV-1抗體為片段抗原結合並且不含Fc區。在本文所述之其他實施例中,抗HIV-1抗體由一個Fab片段組成。在本文所述之其他實施例中,抗HIV-1抗體由兩個Fab片段(F(ab)
2)組成。
在本文所述之一實施例中,抗HIV-1抗體可為熟習此項技術者已知的任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、或熟習此項技術者已知的任何類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgAi及IgA2)或任何已知子類。
在本文所述之一實施例中,抗HIV-1抗體為IgG類型。在較佳實施例中,抗HIV-1抗體為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4類別。在另一較佳實施例中,抗HIV-1抗體為IgG1或IgG2類別。在另一較佳實施例中,抗HIV-1抗體為IgG2a類別。
本發明之抗體恆定區的物種可為人類、小鼠、兔、大鼠、倉鼠、豚鼠、山羊、綿羊、馬、雞或任何前述物種之嵌合體,儘管本發明之抗體的物種不受特別限制。在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體包含鼠IgG1類別或鼠IgG2a類別之恆定區。
[A. 輕鏈]
在本文所述之一些實施例中,抗HIV-1抗體包含含有互補決定區(CDR)之輕鏈。前述CDR對應於熟習此項技術者已知的任何CDR定義方法鑑定之序列。在一些較佳實施例中,CDR區對應於根據Kabat編號方案所鑑定之序列。在其他較佳實施例中,CDR區可對應於根據其他編號方法或Kabat與其他編號方法之組合所鑑定之序列。例如,CDR區可對應於根據Chothia編號方案所鑑定之序列。
在本文所述之一些實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,它們各自包含選自由以下之胺基酸序列的至少五個連續胺基酸之序列:SEQ ID NO:7、或SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9。在一些較佳實施例中,L-CDR1之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18及SEQ ID NO: 21。在一些較佳實施例中,L-CDR2之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 22。在一些較佳實施例中,L-CDR3之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20及SEQ ID NO: 23。在其他較佳實施例中,L-CDR1之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18及SEQ ID NO: 21,L-CDR2之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 22,且L-CDR3之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20及SEQ ID NO: 23。
在本文所述之另一實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的輕鏈之可變區包含以下之胺基酸序列:SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9。在又一實施例中,重組抗體之輕鏈之可變區可與由以下組成之胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大同源性:SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9。在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的輕鏈包含與以下之胺基酸序列具有約90%同源性的序列:SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9。
在本文所述之另一實施例中,重組抗體包含含有以下之胺基酸序列的輕鏈:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3。在其他實施例中,重組抗體之輕鏈可與由以下組成之胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大同源性:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3。在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的輕鏈包含與以下之胺基酸序列具有約90%同源性的序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3。
[B. 重鏈]
在本文所述之一些實施例中,抗HIV-1抗體包含含有互補決定區(CDR)之重鏈。前述CDR對應於熟習此項技術者已知的任何CDR定義方法鑑定之序列。在一些較佳實施例中,CDR區對應於根據Kabat編號方案所鑑定之序列。在其他較佳實施例中,CDR區可對應於根據其他編號方法或Kabat與其他編號方法之組合所鑑定之序列。例如,CDR區可對應於根據Chothia編號方案所鑑定之序列。
在本文所述之一些實施例中,抗HIV-1抗體包含重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,它們各自包含選自由以下之胺基酸序列的至少五個連續胺基酸之序列:SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12。在一些較佳實施例中,H-CDR1之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 30。在一些較佳實施例中,H-CDR2之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 31。在一些較佳實施例中,H-CDR3之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29及SEQ ID NO: 32。在一些較佳實施例中,H-CDR1之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 30,H-CDR2之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 31,H-CDR3之序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29及SEQ ID NO: 32。
在本文所述之另一實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的重鏈之可變區包含以下之胺基酸序列:SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12。在又一實施例中,重組抗體之重鏈之可變區可與由以下組成之胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大同源性:SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12。在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體之重鏈包含與以下胺基酸序列具有約90%同源性之序列:SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12。
在本文所述之另一實施例中,重組抗體包含含有以下之胺基酸序列的重鏈:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6。在其他實施例中,重組抗體之輕鏈可與由以下組成之胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大同源性:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6。在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體之重鏈包含與以下胺基酸序列具有約90%同源性之序列:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6。
[C. 示範性抗HIV-1抗體]
在本文所述之一實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 15,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 16,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 17。
在本文所述之其他實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 18,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 19,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 20。
在本文所述之其他實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 21,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 22,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 23。
在本文所述之一實施例中,抗HIV-1抗體包含重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 24,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 25,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 26。
在本文所述之其他實施例中,抗HIV-1抗體包含重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 27,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 28,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 29。
在本文所述之其他實施例中,抗HIV-1抗體包含重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 30,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 31,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 32。
本發明之抗HIV-1抗體可包含如本文所述之輕鏈及重鏈的CDR區之任何組合。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 15,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 16,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 17;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 24,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 25,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 26。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 15,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 16,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 17;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 27,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 28,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 29。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 15,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 16,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 17;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 30,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 31,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 32。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 18,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 19,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 20;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 24,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 25,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 26。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 18,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 19,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 20;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 27,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 28,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 29。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 18,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 19,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 20;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 30,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 31,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 32。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 21,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 22,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 23;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 24,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 25,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 26。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 21,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 22,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 23;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 27,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 28,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 29。
在本文所述之一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 21,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 22,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 23;及重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 30,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 31,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 32。
在本文所述之一實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9;及重鏈,前述重鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的重鏈。
在其他較佳實施例中,抗HIV-1抗體之輕鏈可與由以下組成之胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大同源性:SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9且抗HIV-1抗體之重鏈可與由以下組成之胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大同源性:SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12。
在本文所述之一實施例中,抗HIV-1抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3;及重鏈,前述重鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的重鏈。
在一較佳實施例中,抗HIV-1抗體包含含有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈及含有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的重鏈。
在其他較佳實施例中,抗HIV-1抗體之輕鏈可與由以下組成之胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大同源性:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3,且抗HIV-1抗體之重鏈可與由以下組成之胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大同源性:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6。
在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體特異性結合至HIV-1 p24蛋白。在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體結合至HIV-1 p24蛋白之表位。在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體結合至HIV-1 p24蛋白之線性表位。在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體結合至包含至少五個連續胺基酸之線性表位,前述連續胺基酸選自HIV-1 p24蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO; 35)或與前述序列具有至少90%同源性之祖列。在其他實施例中,HIV-1 p24蛋白之胺基酸序列列於SEQ ID NO: 36。
在其他較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體結合至HIV-1 p24蛋白之表位,其中前述表位包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。
在更佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體結合至HIV-1 p24蛋白之表位,其中前述表位包含選自由SEQ ID NO: 33組成之群的胺基酸序列且其中前述抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18及SEQ ID NO: 21,L-CDR2之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 22,且L-CDR3之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20及SEQ ID NO: 23;且進一步包含重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 30,H-CDR2之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 31,且H-CDR3之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29及SEQ ID NO: 32。
在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體結合至HIV-1 p24蛋白之表位,其中前述表位包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列且其中前述抗體包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3,其中L-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 18,L-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 19,且L-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 20;且進一步包含重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3,其中H-CDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 27,H-CDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 28,且H-CDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 29。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體結合至固體支撐體。
[D. 親和標籤]
根據本發明之抗HIV-1抗體可視情況包括親和標籤。親和標籤適用於純化。示範性親和標籤包括聚組胺酸、麩胱甘肽S-轉移酶(GST)、幾丁質結合蛋白、麥芽糖結合蛋白(MBP)、鏈黴親和素結合肽(Strep-tag)、異肽鍵形成、FLAG-標籤、V5-標籤、Myc-標籤、 HA-標籤、NE-標籤、AviTag、調鈣蛋白-標籤、聚麩胺酸、S-標籤、SBP-標籤、Softag 1、Softag 3、TC標籤、VSV-標籤、Xpress標籤、Isopeptag、SpyTag、SnoopTag、生物素羧基載體蛋白、綠色螢光蛋白標籤、HaloTag、Nus-標籤及硫氧還蛋白標籤,儘管親和標籤之選擇不受特別限制。然而,抗HIV-1抗體可能缺少親和標籤,例如,若在使用後移除親和標籤,或者若使用不需要親和標籤之策略來純化抗體。示範性親和標籤為聚組胺酸,其通常包括含有4至10個連續組胺酸之胺基酸序列。
本發明之抗HIV-1抗體可視情況包括親和標籤並且可視情況使用前述親和標籤進行純化。純化抗HIV-1抗體之若干種方法是先前技術中可得的並且熟練技術人員充分瞭解它們。包含或不包含親和標籤的抗HIV-1抗體之示範性純化方法為固定化金屬親和層析 (IMAC)、蛋白A/G親和層析、交換層析(IEX或IEC)、疏水相互作用層析 (HIC)及/或額外使用IMAC或蛋白A/G之外的標籤及親和層析技術。所使用的純化方法及標籤不應視為限制性的。
[II. 核酸、選殖細胞及表現細胞]
本發明亦關於包含核苷酸序列之核酸,前述核苷酸序列編碼如本文所述之抗HIV-1抗體。核酸可為經分離之核酸。核酸可為DNA或RNA。包含編碼本文所述之抗HIV-1抗體的核苷酸序列之DNA通常包含與核苷酸序列可操作連接之啟動子。啟動子較佳能夠在感興趣之表現細胞中驅動核苷酸序列之組成型或誘導型表現。前述核酸亦可包含適用於選擇含有前述感興趣之核酸的細胞之可選標記。適用的可選標記是熟練技術人員熟知的。核酸之精確核苷酸序列不受特別限制,只要核苷酸序列編碼本文所述之抗HIV-1抗體即可。例如,可選擇密碼子以匹配感興趣之表現細胞(例如哺乳動物細胞,諸如人類細胞)的密碼子偏好及/或為了在選殖過程中之便利。DNA可為例如質體,其可包含複製起點(例如,用於質體在原核細胞中之複製)。
在本文所述之一實施例中,前述核酸包含編碼本發明之抗HIV-1抗體的核苷酸序列、可操作地連接至前述核苷酸序列之啟動子、及可選標記。
在一些較佳實施例中,核酸包含選自由以下組成之群的核苷酸序列:SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41及SEQ ID NO: 42。在更佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的輕鏈之核酸包含選自由以下組成之群的核苷酸序列:SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 39及SEQ ID NO: 41,且本發明之抗HIV-1抗體的重鏈之核酸包含選自由以下組成之群的核苷酸序列:SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40及SEQ ID NO: 42。
在一些實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的輕鏈及重鏈之核酸分別包含SEQ ID NO: 37之核苷酸序列及SEQ ID NO: 38之核苷酸序列。在其他實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的輕鏈及重鏈之核酸分別包含SEQ ID NO: 39之核苷酸序列及SEQ ID NO: 40之核苷酸序列。在其他實施例中,本發明之抗HIV-1抗體的輕鏈及重鏈之核酸分別包含SEQ ID NO: 41之核苷酸序列及SEQ ID NO: 42之核苷酸序列。
本發明之各種態樣亦關於一種包含核酸之細胞,前述核酸包含編碼如本文所述之抗HIV-1抗體的核苷酸序列。細胞可為表現細胞或選殖細胞。核酸通常在大腸桿菌中選殖,但亦可使用其他選殖細胞。
若細胞為表現細胞,則核酸視情況為染色體之核酸,亦即其中核苷酸序列整合至染色體中,儘管核酸可存在於表現細胞中,例如,作為染色體外DNA或載體,諸如質體、黏接質體、噬菌體等。載體之形式不應視為限制性的。
在本文所述之一實施例中,細胞通常為表現細胞。表現細胞之性質不受特別限制。哺乳動物表現細胞可允許重組抗體或寡聚重組抗體之有利折疊、轉譯後修飾及/或分泌,儘管其他真核細胞或原核細胞可用作表現細胞。示範性表現細胞包括CHO細胞株,諸如TunaCHO或ExpiCHO、Expi293、BHK、NS0、Sp2/0、COS、C127、HEK、HT-1080、PER.C6、HeLa及Jurkat細胞。亦可選擇細胞用於載體之整合,更佳用於質體DNA之整合。
本發明之抗HIV-1抗體可藉由將包含編碼抗HIV-1抗體之核苷酸序列的核酸適當轉染至哺乳動物細胞中來產生。熟練技術人員知曉可用於將核酸轉染至所選細胞株中的不同技術(脂質轉染、電穿孔等)。因此,哺乳動物細胞株及轉染策略之選擇不應視為限制性的。可進一步選擇細胞株以整合質體DNA。
在本文所述之一較佳實施例中,細胞包含本發明之抗HIV-1抗體。
[III. 組合物及套組]
本發明之各種態樣關於包含本文所述之抗HIV-1抗體之組合物。
在本文所述之一實施例中,組合物包含本發明之抗HIV-1抗體及固體支撐體。
在其他實施例中,組合物包含本發明之抗HIV-1抗體及固體支撐體,其中抗HIV-1抗體共價地或非共價地結合至固體支撐體。如本文所用,術語「非共價結合」是指諸如抗體與其抗原、配位體與其受體、或酶與其受質之間的特異性結合,例如藉由鏈黴親和素結合蛋白與鏈黴親和素或抗體與其抗原之間的相互作用所例示。
在其他實施例中,組合物包含本發明之抗HIV-1抗體及固體支撐體,其中抗HIV-1抗體直接或間接結合至固體支撐體。如本文所用,術語「直接」結合是指分子與固體支撐體的直接偶聯,例如將抗HIV-1抗體之半胱胺酸硫醇結合至金表面之金-硫醇相互作用。如本文所用,術語「間接」結合包括抗HIV-1抗體與直接結合至固體支撐體的另一分子之特異性結合,例如,抗HIV-1抗體可結合直接結合至固體支撐體上的抗體,從而使抗HIV-1抗體間接結合至固體支撐體上。術語「間接」結合與抗HIV-1抗體與固體支撐體之間的分子數量無關,只要(a)分子菊鏈之間的每個相互作用皆為特異性或共價相互作用,及(b)菊鏈之末端分子直接與固體支撐體結合。
固體支撐體可包含顆粒、珠粒、膜、表面、多肽晶片、微量滴定盤或層析管柱之固相。較佳地,固體支撐體可為乳膠珠粒。
組合物可包含複數個珠粒或顆粒,其中複數個珠粒或顆粒中之每個珠粒或顆粒直接或間接地結合至至少一種如本文所述之抗HIV-1抗體。組合物可包含複數個珠粒或顆粒,其中複數個珠粒或顆粒中之每個珠粒或顆粒共價地或非共價地結合至至少一種如本文所述之抗HIV-1抗體。
實施例之各個態樣關於一種用於偵測樣品中HIV-1之存在的套組,前述套組包含至少一種如本文所述之抗HIV-1抗體及固體支撐體或組合物。在一些實施例中,前述至少一種抗體共價地或非共價地結合至固體支撐體。
在此描述之抗HIV-1抗體、組合物及套組可用於例如偵測樣品中HIV-1之存在或量測樣品中HIV-1之濃度的檢定中,但它們不限於前述檢定。本發明之抗HIV-1抗體、組合物及套組亦可用於僅或與用於偵測其他病原體之其他抗體組合(諸如多重檢定及方法)來偵測HIV-1。
在一些較佳實施例中,本發明之抗HIV-1抗體用於其中亦偵測其他RNA病毒之方法及檢定中。在其他實施例中,前述抗HIV-1抗體及其他抗HIV-2抗體用於同時偵測樣品中之HIV-1及HIV-2的方法及檢定中。在更佳實施例中,前述抗HIV-1抗體及其他抗HIV-2抗體用於特異性偵測樣品中之HIV-1 p24蛋白及HIV-2 p26蛋白的方法及檢定中。
在本發明之範疇內亦涵蓋在用於偵測樣品中之HIV-1的方法及檢定中使用一種以上如本文所述之抗HIV-1抗體。
在下文中,藉由說明性實施例對更詳細地描述本發明,但並不構成對本發明之限制。
[例證]
[實例1:較佳的抗HIV抗體及穩定的細胞株產生]
本發明之輕鏈與重鏈的特定組合產生較佳抗體,如本文所揭露:
[表1. 抗HIV-1抗體之輕鏈與重鏈的較佳組合]
抗體 | 輕鏈 | 重鏈 |
#A | SEQ ID NO: 1 | SEQ ID NO: 4 |
#B | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 5 |
#D | SEQ ID NO: 3 | SEQ ID NO: 6 |
將各抗體之可變區及恆定區選殖至雙順反子載體中,並在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中表現。基於為各抗體生成穩定的細胞株純系之能力以及功能性抗體之可再現表現及純化來評估各抗體之製造特徵。
[池開發]
轉染:在包含每種抗體之重鏈及輕鏈的雙順反子表現載體中生成包含抗體#A、#B及#D之核苷酸序列(SEQ ID NOs: 37至42)的三種構築體之表現。為了表現抗體,用200 µg DNA對CHO細胞進行電穿孔以創建穩定的細胞株。二十四小時後,對經轉染之細胞進行計數並置於選擇培養基下以穩定整合蛋白質基因。
池生成:將經轉染之細胞以0.5 x 10
6個細胞/mL之細胞密度接種至250 mL搖瓶中工作體積為50 mL之選擇培養基中,並在37℃及5% CO
2下培育。在選擇過程中,每2-3天將細胞離心並重懸浮於新鮮的選擇培養基中,直到池恢復其生長速度及活力。藉由活細胞密度(VCD)及存活百分比以及效價監測細胞培養物之生長。
產生池:自穩定池進行一公升生產運行以評估VCD、效價及活力。將細胞在3 L搖瓶(1 L工作體積)中的產生培養基中放大。自每個穩定池生產運行中收穫的條件培養基上清液藉由離心旋轉澄清,並使用蛋白A管柱,藉由親和純化來純化蛋白質(表2-4)。
細胞株庫:使細胞生長至2.5 x 10
6個細胞/ml。在收穫細胞庫時,存活率高於 95%。接著將細胞離心,並將細胞沉澱重懸在含有7.5%二甲亞碸 (DMSO) (Sigma-Aldrich, D1435)之CHO完全培養基中,直至細胞計數為每毫升每瓶15 x 10
6個細胞。每個池共產生五個小瓶並冷凍保存在液氮中。
[表2. 抗體#A池1及2之產生及純化]
[表3. 抗體#B池1及2之產生及純化過程]
[表4. 抗體#D池1及2之產生及純化過程]
[穩定抗體之產生]
抗體 #A | 穩定池 評估之步驟 | 池 1 | 池 2 |
細胞培養 | 產生輪次之持續時間 | 17天 | 15天 |
收穫時的表現效價 | 9 mg/L | 2.63 mg/L | |
純化 | 純化樹脂上的負載容積 | 1L | 1 L |
自純化獲得之產量 | 8.45 mg | 3.85 mg | |
純化效價 | 8.45 mg/L | 4.13 mg/L |
抗體 #B | 穩定池 評估之步驟 | 池 1 | 池 2 |
細胞培養 | 產生輪次之持續時間 | 18天 | 15天 |
收穫時的表現效價 | 209 mg/L | 1.9 mg/L | |
純化 | 純化樹脂上的負載容積 | 1L | 1 L |
自純化獲得之產量 | 97.74 mg | 0.88 mg | |
純化效價 | 97.74 mg/L | 1.16 mg/L |
抗體 #D | 穩定池 評估之步驟 | 池 1 | 池 2 |
細胞培養 | 生產運行之持續時間 | 18天 | 17天 |
收穫時的表現效價 | 34.4 mg/L | 4.15 mg/L | |
純化 | 純化樹脂上的負載容積 | 1L | 1 L |
自純化獲得之產量 | 84.45 mg | 5.70 mg | |
純化效價 | 84.45 mg/L | 6.71 mg/L |
自抗體#A、#B及#D之最佳庫池細胞株開始,經由單細胞選殖獲得穩定純系。每種抗體之最佳純系是根據生產運行中抗體#A、#B及#D之純化材料的表現水平及生物分析表徵來選擇的。生物分析表徵包括SE-UPLC及SDS-PAGE (圖1-3)。
[實例2:抗體建模及評估]
使用計算及建模軟體Bioiluminate (Schrodinger), 3.5版,藉由抗體同源性建立抗體#A、#B及#D之三維結構模型。簡而言之,將抗體#A、#B及#D之VH及VL區的胺基酸序列加載至Bioiluminate。藉由在蛋白質資料庫(PDB)中搜索抗體結構並基於高序列相似性及結構適合度選擇PDB模板來鑑定框架區及CDR(表5)。本發明之每種抗體的預測CDR序列示於表5中且抗體#A、#B及#D之PDB預測結構分別示於圖4之A、B及D中。對於抗體#A,PDB結構代碼2XKN用於同源性查詢,而代碼5OPY及1F3D分別用於抗體B#及#D。
抗體#A及#B由IgG1k同型產生,而抗體#D由IgG2ak同型產生。
[表5. 根據Abysis資料庫網站得出之抗體#A、#B及#D之輕鏈及重鏈的Chothia CDR序列]
抗體 | CDR | 輕鏈 | 重鏈 |
#A | CDR1 | RASQDISNYLH | GFTFSSY |
CDR2 | YTSRLHS | TSGGN | |
CDR3 | QQGNSFPWT | EVLSVPFAY | |
#B | CDR1 | RASQSISDNLH | GFAFSSY |
CDR2 | YSSQSIS | TSGVGN | |
CDR3 | QQSNSWPFT | PPSYFGSSYDAMDY | |
#D | CDR1 | RSSQSLVNSDGNTFLQ | GYAFTSY |
CDR2 | KVSNRFS | DPYNGG | |
CDR3 | SQSTHVPWT | PRWLPAGDY |
三種抗體之核苷酸序列分析顯示,當針對IgBLAST查詢時,所有生成的重鏈(VH)及輕鏈(VL)皆具有獨特的互補決定區(CDR),IgBLAST是由美國國家生物技術資訊中心(NCBI)開發的一種算法,以促進針對ImMunoGeneTics Database (IMGT)資料庫(
Lefranc M-P. Lefranc G. IMGT® and 30 years of Immunoinformatics Insight in Antibody V and C Domain Structure and Function.In Jefferis R ; Strohl W. R., Kato K. Antibodies 2019, 第 8(29) 卷 ; 1-21)對免疫球蛋白可變域序列之分析。
[實例3:表位作圖mAb D]
HIV-p24之序列經由C及N端處之中性GSGSGSG連接子延長以避免經截短之肽。將經延長之抗原序列轉譯成15個胺基酸之線性肽,其中肽-肽重疊14個胺基酸。生成的HIV-p24肽微陣列包含232種不同的線性肽,一式兩份打印(464個點),並由額外的 HA(YPYDVPDYAG,38個點)及 c-Myc(EQKLISEEDL,38個點)控制肽構成。
洗滌緩衝液:PBS, pH 7.4及0.05 % Tween 20;在每個培育步驟之後洗滌3 x 10秒
阻斷緩衝液:Rockland阻斷緩衝液MB-070 (第一檢定之前30 min)
培育緩衝液:含10%阻斷緩衝液之洗滌緩衝液
檢定條件:培育緩衝液中之抗體濃度為1 µg/ml、10 µg/ml及100 µg/ml;在4℃下培育16 h;在140 rpm下搖動
二級抗體:山羊抗小鼠IgG (H+L) DyLight680 (0.2 µg/ml);在 RTControl Antibody之培育緩衝液中染色45 min:小鼠單株抗HA (12CA5) DyLight800 (0.5 µg/ml);在RT下在培育緩衝液中染色45 min
掃描器:LI-COR Odyssey成像系統;掃描偏移0.65 mm,解析度21 µm,掃描強度7/7(紅色 = 680 nm/綠色 = 800 nm)
HIV-p24肽微陣列之預染色是用二級山羊抗小鼠IgG (H+L) DyLight680抗體在培育緩衝液中進行,以研究與可能干擾主要檢定的抗原衍生肽之背景相互作用。隨後將其他HIV-p24肽微陣列副本與單株抗體D以1 µg/ml、10 µg/ml及100 µg/ml之濃度在培育緩衝液中培育,接著用二級抗體及對照抗體染色並讀出掃描強度為7/7(紅/綠)。構成肽微陣列之額外的HA肽隨後經染色作為內部品質控制,以確認檢定品質及肽微陣列之完整性。
mAb D的針對HIV-p24之表位作圖,以及隨後的表位置換掃描突出了保守的7個胺基酸之核心模體PIAPGQM (SEQ ID NO:33)。
[實例4:表位分箱研究]
抗體#A、#B及#D之分子對接及西方墨點評估表明,此等抗體分別識別HIV-1 p24蛋白之1、4及7區的線性表位。為了進一步證實此等觀察結果,使用生物層干涉儀(BLI)進行串聯表位分箱檢定。將酵母衍生版本之HIV-1 p24抗原生物素化(bt-p24)並加載至鏈黴親和素(SA)生物感測器上持續300 秒。將經加載之感測器浸入飽和抗體 (100 µg/mL) 中600秒,繼之浸入競爭性抗體(25 µg/mL)中300秒。結果顯示,當抗體#A與HIV-1 p24結合時,抗體#B及#D增加BLI訊號反應,表明與抗體A相比,抗體#B及#D與不同的表位結合。類似地,若抗體#A或#D用作飽和抗體,則其餘抗體不會顯示對相同表位之競爭(圖9-10)。
表6總結抗體#A、#B及#D之表位分箱數據。簡言之,競爭及飽和抗體之BLI訊號針對緩衝液進行歸一化。將確定抗體阻斷或結合之閾值設置為0.02,以便可在矩陣之對角線上識別自阻斷對(灰色表示結合,粗體表示自阻斷)。使用Microsoft Excel中的PEARSON函數針對第一抗體#A計算PEARSON相關係數(
Liao-Chan S. 等人 , Monoclonal Antibody Binding-site Diversity Assessment with a Cell-based Clustering Assay.Journal of Immunological Methods 2014, 第 405 卷 ;1-14)。針對抗體#A、#B及#D鑑定三個不同的箱。未觀察到抗體阻斷。
[表6. 抗HIV-1抗體#A、#B及#D之表位分箱矩陣]
[實例5:抗HIV-1抗體#A、#B及#D之親和力評估]
競爭性抗體 | ||||||
#A | #B | #D | Pearson | |||
飽和抗體 | #A | 0.019 | 0.663 | 0.625 | 1.000 | |
#B | 0.854 | 0.025 | 0.899 | -0.506 | ||
#D | 0.697 | 0.778 | 0.008 | -0.357 | ||
Pearson | 1.000 | -0.522 | -0.041 |
為了更詳細地研究抗體#A、#B及#D與HIV-1 p24抗原之間的相互作用,藉由BLI進行親和力分析。將抗體#A、#B及#D與商用單株抗體(商用mAb #1)進行比較。使用抗小鼠Fc特異性包被之生物感測器尖端(ForteBio)來捕獲抗體#A、#B及#D以及商用mAb #1。用於每種抗體之濃度梯度範圍為0.1至33 nM,且每種稀釋液均在含有0.01 % (w/v)牛血清白蛋白(BSA)及0.02 % (v/v)清潔劑Tween-20之磷酸鹽緩衝液(PBS)中製備。記錄的傳感圖是使用1:1結合模型擬合,並且平衡常數KD由解離率與結合率之比率(kd/ka)計算。測試的抗體基於計算的親和力常數進行如下排序:抗體#B~抗體#D>抗體#A>商用mAb#1。儘管由於觀察到的解離曲線較長,無法計算抗體#B及#D之準確KD值,但提供的數據顯示抗體#A、#B及#D之計算KD值低於針對商用mAb #1所觀察到的值(表7)。此數據支持如下觀察結果:抗體#A、#B及#D對HIV-1 p24之親和力高於商用mAb #1。
[表7. 藉由BLI,抗體#A、#B、#D及商用mAb #1與HIV-1 p24蛋白之結合。K
D,平衡解離常數;Ka,結合速率常數及Kd,解離速率常數]
[實例6:抗HIV-1抗體#A、#B及#D之結合能力]
抗體 ID | K D(nM) | Ka (1/Ms) | Kd (1/s) | Rank | 全 R 2 |
A | 0.2 | 2.41 x 10 5 | 5.90 x 10 -5 | 2 | 0.9982 |
B | < 2.4 x 10 -4 | 4.08 x 105 | < 1.0 x 10 -7 | 1 | 0.9993 |
D | < 5.2 x 10 -4 | 1.94 x 105 | < 1.0 x 10 -7 | 1 | 0.9986 |
( 商用 mAb #1) | 1.3 | 1.28 x 105 | 1.62 x 10 -4 | 3 | 0.9974 |
為了進一步評估抗體#A、#B及#D 對HIV-1 p24抗原之結合,完成間接ELISA檢定。使用2 µg/mL之起始濃度並進行連續1:10稀釋直至達到2x10
-2ng/mL之較低抗體濃度,為每種抗體生成滴定曲線。將每種抗體之性能與商用純系(商用mAb #2)進行比較(圖10,左)。數據顯示抗體#A、#B及#D與商用抗體相比具有更高的訊噪比(S/N),主要針對介於20與2000 ng/mL之間的濃度而言,並且此等與商用mAb #2相比亦呈現較低的EC50值(圖10,右)。
[結論]
已進行功能檢定,其中將抗HIV-1抗體#A、#B及#D與來自商用mAb#1及#2之商用抗HIV-1 p24抗體進行比較。藉由BLI及間接ELISA評估每種抗體之結合親和力及效力。在這兩個實驗中,與測試的商用抗體相比,HIV-1抗體#A、#B及#D顯示出更好的親和力及更好的EC50值(關於動力學分析,參見圖9及表7,關於ELISA資料,參見圖10)。
在此提供之實驗資料證明本發明之抗HIV-1抗體可用於偵測HIV-1結構p24蛋白。與市場上的類似產品相比,前述抗體在親和力、敏感性、效力、表現、溶解性及可製造性方面顯示出改良的特性,並且它們在血清學中之應用有助於縮短HIV-1感染與診斷事件之間的時程;因此,防止繼發性病毒傳播。
[重要語彙索引表]
* 除非另有說明,否則所有CDR序列皆是根據Chothia,利用Abysis資料庫得出的。
名稱 | 序列 | SEQ ID NO: |
輕鏈mAb A | DIQMTQTTSSLSASLGDRVTINCRASQDISNYLHWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEKEDIATYFCQQGNSFPWTFGGGTKVEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC | 1 |
輕鏈mAb B | DIVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISDNLHWYRQKSHESPRLLIKYSSQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQSNSWPFTFGSGTNLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC | 2 |
輕鏈mAb D | DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVNSDGNTFLQWLLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC | 3 |
重鏈mAb A | EVKLVESGGGLVKPGGSLQLSCVASGFTFSSYAMSWVRQTPEKGLEWVASITSGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAGNILYLQMSSLRSEDTAMFYCAREVLSVPFAYWGQGTLVTVSTAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG | 4 |
重鏈mAb B | EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSSYDMSWVRQTPDKRLEWVAYITSGVGNLNYLDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYFCLRPPSYFGSSYDAMDYWGRGTSVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG | 5 |
重鏈mAb D | QIQLQQSGPELVKPGASVKVSCKASGYAFTSYQLYWVKQSHGKSLEWIGYIDPYNGGTGYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMHLNSLTSEDSAVYYCASPRWLPAGDYWGQGTSVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK | 6 |
VL鏈 mAb A | DIQMTQTTSSLSASLGDRVTINCRASQDISNYLHWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEKEDIATYFCQQGNSFPWTFGGGTKVEIK | 7 |
VL鏈 mAb B | DIVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISDNLHWYRQKSHESPRLLIKYSSQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQSNSWPFTFGSGTNLELK | 8 |
VL鏈 mAb D | DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVNSDGNTFLQWLLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK | 9 |
VH鏈 mAb A | EVKLVESGGGLVKPGGSLQLSCVASGFTFSSYAMSWVRQTPEKGLEWVASITSGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAGNILYLQMSSLRSEDTAMFYCAREVLSVPFAYWGQGTLVTVST | 10 |
VH鏈 mAb B | EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSSYDMSWVRQTPDKRLEWVAYITSGVGNLNYLDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYFCLRPPSYFGSSYDAMDYWGRGTSVTVSS | 11 |
VH鏈 mAb D | QIQLQQSGPELVKPGASVKVSCKASGYAFTSYQLYWVKQSHGKSLEWIGYIDPYNGGTGYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMHLNSLTSEDSAVYYCASPRWLPAGDYWGQGTSVTVSS | 12 |
CL鏈mAb A、B及D | RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC | 13 |
CH鏈mAb A及B | AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG | 14 |
CDR 1 VL mAb A | RASQDISNYLH | 15 |
CDR 2 VL mAb A | YTSRLHS | 16 |
CDR 3 VL mAb A | QQGNSFPWT | 17 |
CDR 1 VL mAb B | RASQSISDNLH | 18 |
CDR 2 VL mAb B | YSSQSIS | 19 |
CDR 3 VL mAb B | QQSNSWPFT | 20 |
CDR 1 VL mAb D | RSSQSLVNSDGNTFLQ | 21 |
CDR 2 VL mAb D | KVSNRFS | 22 |
CDR 3 VL mAb D | SQSTHVPWT | 23 |
CDR 1 VH mAb A | GFTFSSY | 24 |
CDR 2 VH mAb A | TSGGN | 25 |
CDR 3 VH mAb A | EVLSVPFAY | 26 |
CDR 1 VH mAb B | GFAFSSY | 27 |
CDR 2 VH mAb B | TSGVGN | 28 |
CDR 3 VH mAb B | PPSYFGSSYDAMDY | 29 |
CDR 1 VH mAb D | GYAFTSY | 30 |
CDR 2 VH mAb D | DPYNGG | 31 |
CDR 3 VH mAb D | PRWLPAGDY | 32 |
表位mAb D | PIAPGQM | 33 |
CH鏈mAb D | AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK | 34 |
P24抗原 變異體1 | ALDKIEEEQNKSKKKAQXAAAADAGNSSQVSQNYPIVQNLQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDRLHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQEQIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVLAEAMSQVTNNSATI | 35 |
P24抗原 變異體2 | MPIVQNLQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWRDVHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQEQIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQDVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVL | 36 |
VL mAb A之核苷酸序列 | ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACATCCAGATGACCCAGACCACCAGCTCCCTGAGCGCCAGCCTGGGCGACAGGGTGACCATCAACTGCAGGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGCACTGGTATCAACAGAAGCCCGACGGCACGGTGAAACTGCTGATCTACTATACCAGCAGGCTGCACAGCGGCGTGCCCAGCCGCTTCTCCGGTAGCGGCAGCGGCACCGACTACTCTCTGACCATTAGCAACCTGGAGAAGGAGGACATTGCCACCTACTTCTGTCAGCAGGGCAACAGCTTCCCCTGGACCTTCGGCGGAGGAACCAAAGTGGAAATCAAGCGGGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTGA | 37 |
VH mAb A之核苷酸序列 | ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCGAGGTGAAGCTCGTGGAGAGCGGCGGTGGCCTGGTTAAGCCTGGGGGAAGCCTGCAGCTGAGCTGCGTGGCCAGCGGCTTCACGTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGACCCCCGAGAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCAAGCATCACCAGCGGGGGTAACACCTACTACCCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCTGGCAACATCCTGTACCTGCAGATGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCATGTTCTACTGCGCCAGGGAGGTGCTGAGCGTCCCCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACAGTGAGCACCGCCAAGACCACTCCACCTTCCGTGTACCCTCTGGCTCCTGGATCTGCCGCCCAGACCAACTCCATGGTCACCCTGGGCTGCCTCGTGAAGGGCTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTGACCTGGAACTCCGGCTCTCTGTCCTCTGGCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCGACCTGTACACCCTGTCCTCCAGCGTGACCGTGCCTTCCTCTACCTGGCCCTCCGAGACAGTGACCTGCAACGTGGCCCACCCTGCCAGCTCTACCAAGGTGGACAAGAAAATCGTGCCCCGGGACTGCGGCTGCAAGCCCTGTATCTGTACCGTGCCCGAGGTGTCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCAAGCCCAAGGACGTGCTGACCATCACCCTGACCCCCAAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACATCTCCAAGGACGACCCCGAGGTGCAGTTCAGTTGGTTCGTGGACGACGTGGAAGTGCACACCGCTCAGACCCAGCCCAGAGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCAGATCCGTGTCCGAGCTGCCCATCATGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTTCAAGTGCAGAGTGAACTCCGCCGCCTTCCCAGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCAGACCCAAGGCCCCCCAGGTGTACACAATCCCGCCACCCAAAGAACAGATGGCCAAGGACAAGGTGTCCCTGACCTGCATGATCACCGATTTCTTCCCAGAGGATATTACCGTGGAATGGCAGTGGAACGGCCAGCCCGCCGAGAACTACAAGAACACCCAGCCTATCATGGACACCGACGGCTCCTACTTCGTGTACTCCAAGCTGAACGTGCAGAAGTCCAACTGGGAGGCCGGCAACACCTTCACCTGTAGCGTGCTGCACGAGGGCCTGCACAATCACCACACCGAGAAGTCCCTGTCCCACTCCCCTGGCTAG | 38 |
VL mAb B之核苷酸序列 | ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACATCGTGCTGACCCAGAGCCCTGCCACCCTGAGCGTGACCCCTGGCGACAGCGTGAGCCTGAGCTGCAGGGCCAGCCAGAGCATTAGCGACAACCTGCACTGGTACAGGCAGAAAAGCCACGAAAGCCCCAGGCTTCTGATCAAGTACAGCAGCCAAAGCATCTCAGGCATCCCCAGCAGGTTCAGTGGGAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGTCCATCAACAGCGTTGAGACCGAGGACTTCGGCATGTACTTCTGCCAGCAGAGCAACAGCTGGCCGTTTACCTTCGGCTCCGGCACTAACCTGGAGCTGAAGCGGGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTGA | 39 |
VH mAb B之核苷酸序列 | ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGGGGTGGACTTGTGAAGCCCGGTGGCTCACTGAAGCTGAGCTGCGCGGCAAGCGGCTTCGCCTTCAGCAGCTACGACATGAGCTGGGTGAGGCAGACCCCCGACAAGAGGCTGGAGTGGGTGGCCTACATCACCAGTGGCGTGGGCAACCTGAACTACCTGGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAGCAGCTTGAGGAGCGAAGACACCGCCATGTACTTCTGCCTGAGACCGCCCAGCTACTTCGGCTCTAGCTATGATGCCATGGACTACTGGGGCAGGGGTACTAGCGTGACCGTGAGCTCTGCCAAGACCACTCCACCTTCCGTGTACCCTCTGGCTCCTGGATCTGCCGCCCAGACCAACTCCATGGTCACCCTGGGCTGCCTCGTGAAGGGCTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTGACCTGGAACTCCGGCTCTCTGTCCTCTGGCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCGACCTGTACACCCTGTCCTCCAGCGTGACCGTGCCTTCCTCTACCTGGCCCTCCGAGACAGTGACCTGCAACGTGGCCCACCCTGCCAGCTCTACCAAGGTGGACAAGAAAATCGTGCCCCGGGACTGCGGCTGCAAGCCCTGTATCTGTACCGTGCCCGAGGTGTCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCAAGCCCAAGGACGTGCTGACCATCACCCTGACCCCCAAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACATCTCCAAGGACGACCCCGAGGTGCAGTTCAGTTGGTTCGTGGACGACGTGGAAGTGCACACCGCTCAGACCCAGCCCAGAGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCAGATCCGTGTCCGAGCTGCCCATCATGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTTCAAGTGCAGAGTGAACTCCGCCGCCTTCCCAGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCAGACCCAAGGCCCCCCAGGTGTACACAATCCCGCCACCCAAAGAACAGATGGCCAAGGACAAGGTGTCCCTGACCTGCATGATCACCGATTTCTTCCCAGAGGATATTACCGTGGAATGGCAGTGGAACGGCCAGCCCGCCGAGAACTACAAGAACACCCAGCCTATCATGGACACCGACGGCTCCTACTTCGTGTACTCCAAGCTGAACGTGCAGAAGTCCAACTGGGAGGCCGGCAACACCTTCACCTGTAGCGTGCTGCACGAGGGCCTGCACAATCACCACACCGAGAAGTCCCTGTCCCACTCCCCTGGCTAG | 40 |
VL mAb D之核苷酸序列 | ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTGGTGATGACCCAGACACCCCTGAGTCTGCCCGTGAGCTTGGGCGACCAGGCCAGCATCAGCTGTAGGAGCTCACAGAGCCTGGTGAACAGCGACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGCTCCTGCAAAAACCCGGCCAAAGCCCGAAGCTGCTTATATACAAGGTGAGCAATAGGTTCAGTGGTGTGCCCGACCGCTTCAGCGGCAGCGGTAGCGGCACCGACTTCACCCTGAGGATCAGCAGGGTGGAGGCCGAGGACCTGGGCGTGTACTTCTGCAGCCAGAGCACCCACGTGCCCTGGACCTTCGGCGGAGGAACCAAACTGGAAATCAAGCGGGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTGA | 41 |
VH mAb D之核苷酸序列 | ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGACAGATCCAGCTGCAACAAAGCGGCCCTGAGCTGGTGAAGCCCGGTGCTAGCGTGAAGGTGAGCTGTAAGGCAAGCGGCTACGCCTTCACAAGTTACCAGCTGTACTGGGTAAAGCAAAGCCACGGCAAGAGCCTGGAGTGGATCGGCTATATCGACCCCTACAACGGCGGCACCGGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGTAAGGCCACCTTGACCGTGGACAAGAGCAGCAGCACCGCCTACATGCATCTGAACAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCCAGCCCCAGGTGGCTTCCCGCTGGCGACTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACTGTGAGCTCTGCTAAAACAACAGCCCCATCGGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGATACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGTTCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACCCTCAGCTCAAGCGTGACTGTAACCAGCTCGACCTGGCCCAGCCAGTCCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGGGCCCACAATCAAGCCCTGTCCTCCATGCAAATGCCCAGCACCTAACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATAGTCACATGTGTAGTCGTTGATGTGAGCGAGGATGACCCAGATGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTGCACACTGCTCAGACACAGACGCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTTGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAAAGACCTCCCAGCGCCCATCGAGAGAACCATCTCAAAACCCAAAGGGTCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGAAGAGGAGATGACTAAGAAACAGGTCACTCTGACCTGCATGGTCACAGACTTCATGCCTGAAGACATTTACGTGGAGTGGACCAACAACGGGAAAACAGAGCTAAACTACAAGAACACTGAACCAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTGAGAGTGGAGAAGAAGAACTGGGTGGAGAGAAATAGCTACTCCTGTTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGGACTCCGGGTTAG | 42 |
無。
圖1為SE-UPLC分析,顯示抗體#A之單體百分比%;及SDS-PAGE,顯示抗體#A單純系(泳道1、2及3分別表示在還原及非還原條件下運行的次純系)。
圖2為SE-UPLC分析,顯示抗體#B之單體百分比%;及SDS-PAGE,顯示抗體#B單純系(泳道1、2及3分別表示在還原及非還原條件下運行的次純系)。
圖3為SE-UPLC分析,顯示抗體#D之單體百分比%;及SDS-PAGE,顯示抗體#D單純系(泳道1、2及3分別表示在還原及非還原條件下運行的次純系)。
圖4為PDB,顯示抗體#A、#B及#D(分別為圖4之A、B及D)之預測結構。對於抗體#A,PDB結構代碼2XKN用於同源性查詢中,而代碼5OPY及1F3D分別用於抗體B#及#D。
圖5為飽和抗體#A與競爭性#B及#D之傳感圖。抗體#B及#D向#A中添加訊號,表明此等抗體不會在相同表位區內競爭結合。
圖6為飽和抗體#B與競爭性#A及#D之傳感圖。抗體#A及#D向#B中添加訊號,表明此等抗體不會在相同表位區內競爭結合。
圖7為飽和抗體#D與競爭性#A及#B之傳感圖。抗體#A及#B向#D中添加訊號,表明此等抗體不會在相同表位區內競爭結合。
圖8為在不存在競爭性抗體之情況下,抗體#A、#B及#D與HIV-1 p24結合之傳感圖。每個抗體皆獲得其完整的結合訊號(實驗對照)。
圖9為抗體#A、#B及#D以及商用mAb #1 與抗原HIV-1 p24之結合動力學,藉由生物層干涉儀(BLI)計算。對0.1-33 nM之梯度濃度繪製傳感圖並擬合1:1結合模型以計算 ka(結合速率常數)、kd(解離速率常數)及KD(平衡解離常數)。
圖10為藉由間接ELISA,抗體#A、#B及#D以及商用mAb #2與HIV-1 p24衣殼蛋白之結合。每個抗體之滴定曲線自2 µg/mL之濃度開始,隨後按1:10稀釋(左)。200 ng/mL抗體濃度之訊噪比資料顯示在右側,表明與抗體#A、#B及#D相比,商用mAb #2之性能較差。
Claims (32)
- 一種抗HIV-1抗體,包含輕鏈,前述輕鏈包含互補決定區L-CDR1、互補決定區L-CDR2及互補決定區L-CDR3,其中, 前述互補決定區L-CDR1之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 15、18及21, 前述互補決定區L-CDR2之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 16、19及22, 前述互補決定區L-CDR3之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 17、20及23。
- 如請求項1所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體包含重鏈,前述重鏈包含互補決定區H-CDR1、互補決定區H-CDR2及互補決定區H-CDR3,其中, 前述互補決定區H-CDR1之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 30及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 24、27及30, 前述互補決定區H-CDR2之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 31及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 25、28及31,且 前述互補決定區H-CDR3之胺基酸序列選自由以下組成之群:SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 32及與以下序列中之任一者相差一或兩個取代、缺失或添加的序列:SEQ ID NO: 26、29及32。
- 如前述請求項中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述輕鏈包含與以下之胺基酸序列具有約90%同源性的序列:SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8及SEQ ID NO: 9。
- 如請求項3所述之抗HIV-1抗體,其中,前述輕鏈包含以下之胺基酸序列:SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8及SEQ ID NO: 9。
- 如前述請求項中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述重鏈包含與以下之胺基酸序列具有約90%同源性的序列:SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 12。
- 如請求項5所述之抗HIV-1抗體,其中,前述重鏈包含以下之胺基酸序列:SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 12。
- 如前述請求項中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 15及與SEQ ID NO: 15相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 16及與SEQ ID NO: 16相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 17及與SEQ ID NO: 17相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至6中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 18及與SEQ ID NO: 18相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 19及與SEQ ID NO: 19相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 20及與SEQ ID NO: 20相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至6中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 21及與SEQ ID NO: 21相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 22及與SEQ ID NO: 22相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 23及與SEQ ID NO: 23相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至7中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 24及與SEQ ID NO: 24相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 25及與SEQ ID NO: 25相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 26及與SEQ ID NO: 26相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至6或8中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 27及與SEQ ID NO: 27相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 28及與SEQ ID NO: 28相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 29及與SEQ ID NO: 29相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至6或9中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 30及與SEQ ID NO: 30相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 31及與SEQ ID NO: 31相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 32及與SEQ ID NO: 32相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至6中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 15及與SEQ ID NO: 15相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 16及與SEQ ID NO: 16相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 17及與SEQ ID NO: 17相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 24及與SEQ ID NO: 24相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 25及與SEQ ID NO: 25相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 26及與SEQ ID NO: 26相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至6中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 18及與SEQ ID NO: 18相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 19及與SEQ ID NO: 19相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 20及與SEQ ID NO: 20相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 27及與SEQ ID NO: 27相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 28及與SEQ ID NO: 28相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 29及與SEQ ID NO: 29相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至6中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述互補決定區L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 21及與SEQ ID NO: 21相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 22及與SEQ ID NO: 22相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 23及與SEQ ID NO: 23相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 30及與SEQ ID NO: 30相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 前述互補決定區H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 31及與SEQ ID NO: 31相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 前述互補決定區H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 32及與SEQ ID NO: 32相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項1至6中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體之前述輕鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2及SEQ ID NO: 3。
- 如請求項1至6中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體之前述重鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5及SEQ ID NO: 6。
- 如請求項1至6中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體之前述輕鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2及SEQ ID NO: 3,且前述抗HIV-1抗體之前述重鏈包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5及SEQ ID NO: 6。
- 如前述請求項中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體為單株抗體或重組抗體。
- 如前述請求項中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體為抗體片段。
- 如請求項20所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗體片段係選自可變片段(Fv)、單鏈Fvs (scFv)、雙特異性抗體(sc(Fv)2)、單鏈抗體、單域抗體、Fab片段、F(ab')2片段、Fab’片段、二硫鍵連接之Fv (dsFv)、化學偶聯之Fv (ccFv)、雙抗體、抗獨特型(抗Id)抗體、親和體、奈米抗體及單抗體。
- 如前述請求項中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體包含鼠IgG1類及鼠IgG2a類之恆定區。
- 如前述請求項中任一項所述之抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體結合至固體支撐體。
- 一種細胞,其包含如請求項1至23中任一項所述之抗HIV-1抗體。
- 一種核酸,其包含編碼如請求項1至20中任一項所述之抗HIV-1抗體的核苷酸序列;可操作地連接至前述核苷酸序列之啟動子;及可選標記。
- 一種細胞,其包含如請求項25所述之核酸。
- 一種組合物,其包含如請求項1至20中任一項所述之抗HIV-1抗體;及固體支撐體,其中,前述抗HIV-1抗體共價地或非共價地結合至前述固體支撐體。
- 如請求項27所述之組合物,其中,前述固體支撐體包含顆粒、珠粒、膜、表面、多肽晶片、微量滴定盤及層析管柱之固相。
- 一種用於偵測樣品中HIV-1之存在的套組,前述套組包含至少一種如請求項1至23中任一項所述之抗HIV-1抗體;及固體支撐體,其中,至少一種前述抗HIV-1抗體共價地或非共價地結合至前述固體支撐體。
- 一種抗HIV-1抗體,其中,前述抗HIV-1抗體特異性結合至HIV-1 p24蛋白之表位,前述蛋白包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。
- 如請求項30所述之抗HIV-1抗體,其中,互補決定區L-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 21及與SEQ ID NO: 21相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 互補決定區L-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 22及與SEQ ID NO: 22相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 互補決定區L-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 23及與SEQ ID NO: 23相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
- 如請求項30或31所述之抗HIV-1抗體,其中,互補決定區H-CDR1之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 30及與SEQ ID NO: 30相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列, 互補決定區H-CDR2之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 31及與SEQ ID NO: 31相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列,且 互補決定區H-CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO: 32及與SEQ ID NO: 32相差一個或兩個取代、缺失或添加之序列。
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