TW202214704A - 蛋白酶活化ｔ細胞雙特異性抗體 - Google Patents

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Abstract

本發明大致上涉及新穎蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子及獨特型特異性多肽。本發明亦涉及編碼此類蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子及獨特型特異性多肽之多核苷酸，以及包含此類多核苷酸之載體和宿主細胞。本發明進一步涉及製造本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子及獨特型特異性多肽之方法，以及使用這些蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子及獨特型特異性多肽治療疾病之方法。

Description

蛋白酶活化　T　細胞雙特異性抗體
本發明大致上涉及新穎蛋白酶可活化之抗原結合分子，其包含可逆地遮蔽分子的抗原結合的抗獨特型結合部分。具體地，本發明涉及具有抗獨特型結合部分的 T 細胞結合分子，該抗獨特型結合部分掩蓋 CD3 結合部分直到被蛋白酶截切。這使得 CD3 結合部分無法接近或“被遮蔽”，直到它靠近標靶組織，諸如腫瘤，例如腫瘤浸潤性 T 細胞。此外，本發明涉及編碼此類蛋白酶活化 T 細胞結合分子和獨特型特異性多肽之多核苷酸，以及包含此類多核苷酸之載體和宿主細胞。本發明進一步涉及製造本發明的蛋白酶活化 T 細胞結合分子之方法，以及將其使用於例如治療疾病之方法。
在各種臨床環境中，選擇性破壞個別標靶細胞或特定標靶細胞類型是常為所欲者。例如，癌症療法的主要目標是特異性破壞腫瘤細胞，同時使健康細胞和組織完整且無損。
實現此事的引人關注方法是誘導針對腫瘤的免疫反應，使諸如自然殺手 (NK) 細胞或細胞毒性 T 淋巴細胞 (CTL) 之免疫效應細胞攻擊和破壞腫瘤細胞。在這方面，近年來，設計用來以一個“臂”結合標靶細胞上的表面抗原、且以第二個“臂”結合 T 細胞受體 (TCR) 複合體的活化的、不變的組件之雙特異性抗體，已成為所關注者。此類抗體與其兩個標靶的同時結合將迫使標靶細胞與 T 細胞之間暫時交互作用，從而導致任何細胞毒性 T 細胞之活化及隨後標靶細胞之裂解。因此，免疫反應被重新定向到標靶細胞，並且與標靶細胞的肽抗原呈現或 T 細胞的特異性無關，這與正常的 MHC 限制性 CTL 活化有關。
在這種情境下，至關重要的是，CTL 僅在靠近標靶細胞時才被活化，即模擬免疫突觸。特定而言，不需要淋巴細胞預處理或共刺激來引發標靶細胞有效裂解的 T 細胞活化雙特異性分子。幾種雙特異性抗體形式業經開發，且它們對 T 細胞介導的免疫療法的適用性已有研究。這些包括 BiTE (雙特異性 T 細胞接合劑) 分子 (Nagorsen 和 Bäuerle, Exp Cell Res 317, 1255-1260 (2011))、雙功能抗體 (Holliger 等人，Prot Eng 9, 299-305 (1996)) 及其衍生物，諸如串聯雙功能抗體 (Kipriyanov 等人，J Mol Biol 293, 41-66 (1999))、DART (雙重親和力重新標靶) 分子， (Moore 等人，Blood 117, 4542-51 (2011))、和三功能抗體 (triomab) (Seimetz 等人，Cancer Treat Rev 36, 458-467 (2010))。
產生適用於治療的雙特異性分子的任務提供必須滿足的與效力、毒性、可應用性和可產生性相關的若干技術挑戰。在雙特異性分子標靶亦在非標靶組織中表現的標靶細胞 (例如癌細胞) 上之抗原的情況下，毒性會發生。因此，需要有效的 T 細胞活化雙特異性分子，其在標靶細胞存在下而不是在正常細胞或組織的存在下釋放完全的 T 細胞活化。
本發明大致上涉及在標靶細胞存在下被選擇性活化的 T 細胞活化雙特異性分子。
在一個態樣中，提供一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 能夠與 CD3 結合的第一抗原結合部分，其中該第一抗原結合部分包含： (i) 重鏈可變區 (VH)，其包含   SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 (HCDR) 1，SEQ ID NO: 4 之 HCDR 2 和       SEQ ID NO: 10 之 HCDR 3；以及 (ii) 輕鏈可變區 (VL)，其包含   SEQ ID NO: 20 之輕鏈互補決定區 (LCDR) 1，SEQ ID NO: 21 之 LCDR 2 和 SEQ ID NO: 22 之 LCDR 3； (b) 能夠與標靶細胞抗原結合的第二抗原結合部分；以及 (c) 透過蛋白酶可截切之連接子與 T 細胞雙特異性結合分子共價接附之遮蔽部分，其中該遮蔽部分能夠與該第一抗原結合部分的獨特型結合，從而可逆地隱匿該第一抗原結合部分或該第二抗原結合部分。
在一個態樣中，該 VH 包含與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列，及/或該 VL 包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個態樣中，該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分並且可逆地隱匿該第一抗原結合部分。
在一個態樣中，該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分的重鏈可變區。
在一個態樣中，該遮蔽部分是抗獨特型 scFv。
在一個態樣中，該第二抗原結合部分是交換型 Fab 分子，其中該 Fab 輕鏈和該 Fab 重鏈的可變區或恆定區是經交換的。
在一個態樣中，該第一抗原結合部分是習用 Fab 分子。
在一個態樣中，所提供的是如上所述的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含不多於一個能夠與 CD3 結合的抗原結合部分。
在一個態樣中，所提供的是如上所述的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含第三抗原結合部分，該第三抗原結合部分為能夠與標靶細胞抗原結合的 Fab 分子。
在一個態樣中，該第三抗原結合部分與該第二抗原結合部分相同。
在一個態樣中，該第二抗原結合部分能夠與選自由 FolR1 和 TYRP1 所組成之群組之標靶細胞抗原結合。
在一個態樣中，該第一抗原結合部分和該第二抗原結合部分視情況經由肽連接子彼此融合。
在一個態樣中，該第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與該第一抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合。
在一個態樣中，該第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與該第二抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合。
在一個態樣中，所提供的是如上所述的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其另外地包含由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元所構成之 Fc 域。
在一個態樣中，該 Fc 域為 IgG Fc 域，具體地為 IgG1 或 IgG4 Fc 域。
在一個態樣中，與天然 IgG1 Fc 域相比，該 Fc 域表現出降低的對 Fc 受體的結合親和力及/或降低的效應子功能。
在一個態樣中，該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) CDR H2 胺基酸序列，其選自    由 WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59)、WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 和 WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 所組成之群組； (c) EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) 輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列，其選自由 RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 和 KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 所組成之群組； (e) YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  CDR L3 胺基酸序列，其選自由 QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 和 QQSREFPYT (SEQ ID NO:88) 所組成之群組。
在一個態樣中，該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:59) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該蛋白酶可截切之連接子包含至少一個蛋白酶辨識序列。
在一個態樣中，該蛋白酶辨識序列是選自由以下所組成之群組： (a) RQARVVNG (SEQ ID NO:100)； (b) VHMPLGFLGPGRSRGSFP (SEQ ID NO:101)； (c) RQARVVNGXXXXXVPLSLYSG (SEQ ID NO:102)； (d) RQARVVNGVPLSLYSG (SEQ ID NO:103)； (e) PLGLWSQ (SEQ ID NO:104)； (f)  VHMPLGFLGPRQARVVNG (SEQ ID NO:105)； (g) FVGGTG (SEQ ID NO:106)； (h) KKAAPVNG (SEQ ID NO:107)； (i)  PMAKKVNG (SEQ ID NO:108)； (j)  QARAKVNG (SEQ ID NO:109)； (k) VHMPLGFLGP (SEQ ID NO:110)； (l)  QARAK (SEQ ID NO:111)； (m)       VHMPLGFLGPPMAKK (SEQ ID NO:112)； (n) KKAAP (SEQ ID NO:113)；及 (o) PMAKK (SEQ ID NO:114)，其中 X 是任何胺基酸。
在一個態樣中，該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 PMAKK (SEQ ID NO:114)。
在一個態樣中，該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，並且包含重鏈可變區，其包含： a)   NAWMS (SEQ ID NO:54) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； b)  RIKSKTDGGTTDYAAPVKG (SEQ ID NO:55) 之 CDR H2 胺基酸序列；及 c)   PWEWSWYDY (SEQ ID NO:56) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： d)  GSSTGAVTTSNYAN (SEQ ID NO:20) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； e)   GTNKRAP (SEQ ID NO:21) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 f)   ALWYSNLWV (SEQ ID NO:22) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，並且包含重鏈可變區，其包含： a)   DYFLH (SEQ ID NO:24) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； b)  WINPDNGNTVYAQKFQG (SEQ ID NO:25) 之 CDR H2 胺基酸序列；及 c)   RDYTYEKAALDY (SEQ ID NO:26) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： d)  RASGNIYNYLA (SEQ ID NO:28) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； e)   DAKTLAD (SEQ ID NO:29) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 f)   QHFWSLPFT (SEQ ID NO:30) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在另一態樣中，所提供的是獨特型特異性多肽，用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含： (a) DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) CDR H2 胺基酸序列，其選自    由 WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59)、WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 和 WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 所組成之群組； (c) EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) 輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列，其選自由 RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 和 KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 所組成之群組； (e) YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  CDR L3 胺基酸序列，其選自由以下所組成之群組： QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 和 QQSREFPYT (SEQ ID NO:88)。
在一個態樣中，該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含： (a) DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:59) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
在一個態樣中，該獨特型特異性多肽是抗獨特型 scFv。
在一個態樣中，該獨特型特異性多肽透過連接子共價接附於該分子。
在一個態樣中，該連接子是肽連接子。
在一個態樣中，該連接子是蛋白酶可截切之連接子。
在一個態樣中，該肽連接子包含至少一個蛋白酶辨識位點。
在一個態樣中，該蛋白酶辨識序列是選自由以下所組成之群組： (a) RQARVVNG (SEQ ID NO:100)； (b) VHMPLGFLGPGRSRGSFP (SEQ ID NO:101)； (c) RQARVVNGXXXXXVPLSLYSG (SEQ ID NO:102)； (d) RQARVVNGVPLSLYSG (SEQ ID NO:103)； (e) PLGLWSQ (SEQ ID NO:104)； (f)  VHMPLGFLGPRQARVVNG (SEQ ID NO:105)； (g) FVGGTG (SEQ ID NO:106)； (h) KKAAPVNG (SEQ ID NO:107)； (i)  PMAKKVNG (SEQ ID NO:108)； (j)  QARAKVNG (SEQ ID NO:109)； (k) VHMPLGFLGP (SEQ ID NO:110)； (l)  QARAK (SEQ ID NO:111)； (m)       VHMPLGFLGPPMAKK (SEQ ID NO:112)； (n) KKAAP (SEQ ID NO:113)；及 (o) PMAKK (SEQ ID NO:114)，其中 X 是任何胺基酸。
在一個態樣中，該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 PMAKK (SEQ ID NO:114)。
在一個態樣中，該獨特型特異性多肽是 T 細胞活化雙特異性分子之一部分。
在另一態樣中，所提供的是醫藥組成物，其包含如上文所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或如上文所述之獨特型特異性多肽及醫藥上可接受之載劑。
在另一態樣中，所提供的是經分離之多核苷酸，其編碼如上文所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性抗原結合分子或如上文所述之獨特型特異性多肽。
在一個態樣中，所提供的是載體，特定而言表現載體，其包含如上文所述之多核苷酸。
在一個態樣中，所提供的是宿主細胞，其包含如上文所述之多核苷酸或如上文所述之載體。
在另一態樣中，所提供的是製造蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之方法，其包含下列步驟：a) 在適合表現蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的條件下培養如上文所述之宿主細胞和 b) 回收該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。
在另一態樣中，所提供的是如上文所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子、如上文所述之獨特型特異性多肽、或如上文所述之醫藥組成物，其用為藥物。
在一個態樣中，該藥物用於治療癌症或延緩癌症的進展、治療免疫相關疾病或延緩免疫相關疾病的進展、或增強或刺激受試者的免疫反應或功能。
在另一態樣中，所提供的是如上文所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或如上文所述之獨特型特異性多肽之用途，其用於製造供治療疾病的藥物。
在一個態樣中，該疾病為癌症。
在一個態樣中，所提供的是治療受試者疾病之方法，其包含將治療有效量之包含如前所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的組成物投予該個體。
在一個態樣中，該方法是用於治療癌症或延緩癌症的進展、治療免疫相關疾病或延緩免疫相關疾病的進展、或增強或刺激受試者的免疫反應或功能。
定義
定義除非在下文中另外定義，否則本文所用的術語為本技術領域中的一般使用。
如本文中所使用的術語「抗原結合分子」，在其最寬廣意義上係指特異性結合抗原決定子之分子。抗原結合分子之實例為免疫球蛋白及其衍生物 (例如片段)。
術語「雙特異性」意指抗原結合分子能夠特異性結合至少二個不同的抗原決定子。通常，雙特異性抗原結合分子包含二個抗原結合位點，各該抗原結合位點對不同抗原決定子具有特異性。在某些實施例中，該雙特異性抗原結合分子能夠同時結合二個抗原決定子，特定而言在二種不同細胞上表現之二個抗原決定子。
如本文中所使用的術語「價數 (valent)」，表示抗原結合分子中存在指定數量之抗原結合位點。因此，術語「單價結合抗原 (monovalent binding to an antigen)」表示抗原結合分子中存在對抗原具有特異性之一個 (且不超過一個) 抗原結合位點。
「抗原結合位點 (antigen binding site)」係指提供與抗原相互作用的抗原結合分子之位點，即一個或多個胺基酸殘基。例如，抗體之抗原結合位點包含來自互補決定區 (CDR) 之胺基酸殘基。未處理之 (native) 免疫球蛋白分子通常具有二個抗原結合位點，Fab 分子通常具有單個抗原結合位點。
如本文中所使用的術語「抗原結合部分 (antigen binding moiety)」，係指特異性結合抗原決定子之多肽分子。在一個實施例中，抗原結合部分能夠將其所接附的實體 (例如第二抗原結合部分) 導引至標靶位點，例如導引至載有抗原決定子的特定類型之腫瘤細胞或腫瘤間質。在另一個實施例中，抗原結合部分能夠藉由其標靶抗原 (例如 T 細胞受體複合體抗原) 活化傳訊。抗原結合部分包括如本文進一步定義的抗體及其片段。特定抗原結合部分包括抗體之抗原結合域，其包含抗體重鏈可變區及抗體輕鏈可變區。在某些實施例中，抗原結合部分可包括如本文進一步定義及本技術中已知之抗體恆定區。可用之重鏈恆定區包括五種同型 (isotype) α、δ、ε、γ、或 μ中之任一者。可用之輕鏈恆定區包括二種同型中之任一者：κ 及 λ。
如本文中所使用的術語「抗原決定子 (antigenic determinant)」與「抗原」及「表位 (epitope)」同義，且係指抗原結合部分結合的多肽大分子上的形成抗原結合部分-抗原複合體之位點 (例如，胺基酸之連續延伸或由非連續胺基酸之不同區域構成的構象構型)。例如，可用之抗原決定子可存在於腫瘤細胞之表面上、受病毒感染之細胞之表面上、其他患病細胞之表面上、免疫細胞的表面上，不存在於血清中，及/或存在於細胞外基質 (ECM) 中。除非另有說明，否則本文中稱為抗原的蛋白質 (例如 FolR1、HER1、HER2、CD3、間皮素 (Mesothelin)) 可以是來自任何脊椎動物來源的任何天然形式的蛋白質，該脊椎動物包括哺乳動物，諸如靈長類動物 (例如人) 和囓齒類動物 (例如小鼠和大鼠)。在特定實施例中，該抗原為人蛋白質。在本文中提及特異性蛋白質的情況下，該術語涵蓋「全長」、未處理之蛋白質及由在細胞中處理所產生之任何蛋白質形式。該術語亦涵蓋天然生成之蛋白質變異體，例如，剪接變異體或對偶基因變異體。可用作為抗原的例示性人蛋白質包括但不限於：FolR1、HER1 及 CD3，特定言之，CD3 之 ε 次單元 (就人序列而言，參見 UniProt 編號 P07766 (第 130 版)，NCBI RefSeq 編號 NP_000724.1，SEQ ID NO: 54；或就食蟹獼猴序列而言， UniProt 編號 Q95LI5 (第 49 版)，NCBI GenBank 編號 BAB71849.1)。在某些實施例中，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子與 CD3 或標靶細胞抗原的表位結合，該表位在不同物種的 CD3 或標靶抗原中是保守的。在某些實施例中，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子與 CD3 和 FolR1 結合，但不與 FolR2 或 FolR3 結合。在某些實施例中，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子與 CD3 和 HER1 結合。在某些實施例中，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子與 CD3 和間皮素結合。在某些實施例中，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子與 CD3 和 HER2 結合。「特異性結合」意指結合對抗原具有選擇性且可區分出非所欲或非特異性之相互作用。抗原結合部分結合特異性抗原決定子之能力可藉由酶聯免疫吸附測定 (ELISA) 或熟習此項技術者熟悉的其他技術，例如表面電漿子共振 (SPR) 技術 (於 BIAcore 儀器上分析) (Liljeblad 等人，Glyco J 17，323-329 (2000)) 及傳統的結合測定 (Heeley，Endocr Res 28，217-229 (2002)) 來測定。在一個實施例中，抗原結合部分結合不相關的蛋白質之程度小於抗原結合部分結合抗原的約 10%，例如藉由 SPR 測定。在某些實施例中，結合抗原之抗原結合部分或包含該抗原結合部分之抗原結合分子具有 ≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM 或 ≤ 0.001 nM (例如 10 -8M 或更小，例如 10 -8M 至 10 -13M，例如，10 -9M 至 10 -13M) 之解離常數 (K D)。
「親和力」指分子 (例如受體) 之單個結合位點與其結合搭配物 (例如配體) 之間的非共價相互作用總和的強度。除非另有說明，否則如本文中所使用的「結合親和力」，是指反映結合對成員 (例如，抗原結合部分及抗原或受體及其配體) 之間 1:1 相互作用之內在結合親和力。分子 X 對其搭配物 Y 之親和力通常可以解離常數 (K D)表示，其是解離速率常數與締合速率常數 (分別為 k off及 k on) 之比。因此，等效親和力可包括不同速率常數，只要速率常數比保持相同即可。可透過本領域已知的既定方法測量親和力，該方法包括本文所述之方法。用於測定親和力之特定方法為表面電漿子共振 (SPR)。
「減少結合」，例如減少結合 Fc 受體，係指 (例如) 藉由 SPR 測得各自相互作用之親和力降低。為清楚起見，該術語亦包括將親和力降低至零 (或低於分析方法的檢測限度)，即交互作用完全廢除。相反，「增加結合」是指各自相互作用之結合親和力增加。
如本文中所使用的「T 細胞活化」，係指 T 淋巴細胞 (特定而言細胞毒性 T 淋巴細胞) 之一或多種細胞反應，選自：增殖、分化、細胞介素分泌、細胞毒性效應分子釋放、細胞毒性活性及活化標記之表現。本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子能夠誘導 T 細胞活化。測定 T 細胞活化之適當測定是本技術領域中已知的並在本文中描述。
如本文中所使用的「標靶細胞抗原 (target cell antigen)」，係指存在於標靶細胞 (例如腫瘤中的細胞，諸如癌細胞或腫瘤基質之細胞) 之表面上之抗原決定子。
如本文所用之關於抗原結合部分等的術語「第一」及「第二」，是用於在每種類型的部分中有多於一個時方便區分。除非明確說明，否則使用此等術語並非旨在賦予蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子特定之順序或方向。
「Fab 分子」係指由免疫球蛋白之重鏈之 VH 及 CH1 域 (「Fab 重鏈」) 及輕鏈之 VL 及 CL 域 (「Fab 輕鏈」) 組成之蛋白質。
「融合」意指組件 (例如 Fab 分子及 Fc 域次單元) 經肽鍵直接或經由一或多個肽連接子連接。
如本文所用，術語「單鏈」是指包含藉由肽鍵線性連接的胺基酸單體的分子。在某些實施例中，抗原結合部分之一者是單鏈 Fab 分子，即其中 Fab 輕鏈和 Fab 重鏈藉由肽連接子連接以形成單一肽鏈的 Fab 分子。在特定的此類實施例中，單鏈 Fab 分子中，Fab 輕鏈的 C 端連接至 Fab 重鏈的 N 端。
「交換型 (crossover)」Fab 分子 (亦稱為「Crossfab」) 意指的 Fab 分子，是其中 Fab 重鏈及輕鏈之可變區或恆定區被交換，即，交換型 Fab 分子包含由輕鏈可變區及重鏈恆定區構成之肽鏈、及由重鏈可變區及輕鏈恆定區構成之肽鏈。為清楚起見，在 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變區被交換之交換型 Fab 分子中，包含重鏈恆定區之肽鏈在本文中稱為交換型 Fab 分子之「重鏈」。相反地，在 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之恆定區被交換之交換型 Fab 分子中，包含重鏈可變區之肽鏈在本文中稱為交換型 Fab 分子之「重鏈」。
與此相反，「習用 (conventional)」 Fab 分子意指其自然形式 (即包含由重鏈可變區及恆定區構成之重鏈 (VH-CH1)，及由輕鏈可變區及恆定區構成之輕鏈 (VL-CL)) 之 Fab 分子。
術語「免疫球蛋白分子 (immunoglobulin molecule)」是指具有天然生成之抗體之結構之蛋白質。例如，IgG 類的免疫球蛋白為約 150,000 道耳頓、由二條輕鏈及二條重鏈經二硫鍵鍵合所構成之異四聚體醣蛋白。從 N 端至 C 端，每條重鏈具有可變區 (VH)，亦稱為可變重鏈域或重鏈可變域，接著三個恆定域 (CH1、CH2 及 CH3)，亦稱為重鏈恆定區。類似地，從 N 端至 C 端，每條輕鏈具有可變區 (VL)，亦稱為可變輕鏈域或輕鏈可變域，接著恆定輕鏈 (CL) 域，亦稱為輕鏈恆定區。免疫球蛋白之重鏈可被歸類為五種類型中的一種，稱為 α (IgA)、δ (IgD)、ε (IgE)、γ (IgG) 或μ (IgM)，其中一些可進一步分為亞型，例如γ 1(IgG 1)、γ 2(IgG 2)、γ 3(IgG 3)、γ 4(IgG 4)、α 1(IgA 1) 及 α 2(IgA 2)。基於其恆定域之胺基酸序列，免疫球蛋白之輕鏈可被歸類為兩種類型中的一種，稱為卡帕 (κ) 及蘭姆達 (λ)。免疫球蛋白基本上由經由免疫球蛋白鉸合區連接的二個 Fab 分子及一個 Fc 域組成。
術語「抗體」在本文中是在最寬廣的意義上使用，且涵蓋各種抗體結構，其包括但不限於單株抗體、多株抗體及抗體片段，只要其等展現出所需抗原結合活性即可。
「抗體片段」是指除完整抗體以外的分子，其包含完整抗體的一部分，該完整抗體結合完整抗體所結合的抗原。抗體片段之實例包括但不限於 Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F (ab') 2、雙功能抗體、線性抗體、單鏈抗體分子 (例如 scFv) 及單域抗體。關於某些抗體片段的綜述，參見 Hudson 等人，Nat Med 9，129-134 (2003)。關於 scFv 片段的綜述，請參見 Plückthun，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第 113 卷，Rosenburg 及 Moore 編，Springer-Verlag，New York，第 269-315 頁 (1994)；亦可參見 WO 93/16185；及美國專利第 5,571,894 號及第 5,587,458 號。關於包含補救受體結合抗原決定基殘基且具有增加的體內半衰期之 Fab 及 F(ab') 2片段的論述，參見美國第 5,869,046 號專利。雙功能抗體為具有兩個抗原結合位點 (其可為二價或雙特異性的) 之抗體片段。參見例如 EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson 等人，Nat Med 9，129-134 (2003)；及 Hollinger 等人，Proc Natl Acad Sci USA 90，6444-6448 (1993)。Hudson 等人，Nat Med 9，129-134 (2003) 中亦描述三功能抗體及四功能抗體。單域抗體為包含抗體之全部或部分重鏈可變域或抗體之全部或部分輕鏈可變域的抗體片段。在某些實施例中，單域抗體為人單域抗體 (Domantis, Inc.，Waltham, MA；參見例如美國專利第 6,248,516 B1 號)。抗體片段可藉由各種技術製造，其包括但不限於如本文所述之完整抗體的蛋白水解消化以及藉由重組宿主細胞 (例如大腸桿菌或噬菌體) 製造。
術語「抗原結合域 (antigen binding domain)」是指抗體之部分，其包含特異性結合抗原之部分或全部且與其互補之區。抗原結合域可由例如一個或多個抗體可變域 (亦稱為抗體可變區) 提供。特定而言，抗原結合域包含抗體輕鏈可變區 (VL) 及抗體重鏈可變區 (VH)。
術語「可變區 (variable region)」或「可變域 (variable domain)」是指參與抗體與抗原結合的抗體重鏈或輕鏈之結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈（分別為 VH 及 VL）之可變域通常具有類似的結構，且每個結構域均包含四個保守性骨架區 (FR) 及三個高度可變區 (HVR)。請參見 Kindt 等人，Kuby Immunology，第 6 版，W.H. Freeman 和 Co.，第 91 頁 (2007)。單個 VH 或 VL 域可能足以賦予抗原結合特異性。
如本文中所使用，術語「高度可變區 (hypervariable region)」或「HVR」係指抗體可變域中序列高度可變及/或形成結構測定之環 (「高度可變環 (hypervariable loops)」) 的各區域。一般而言，天然四鏈抗體包含六個 HVR；三個在 VH 中 (H1、H2、H3)，及三個在 VL 中 (L1、L2、L3)。HVR 通常包含來自高度可變環及/或來自互補決定區 (CDR) 的胺基酸殘基，後者具有最高的序列變異性及/或參與抗原辨識。除 VH 中的 CDR1 外，CDR 一般包含形成高度可變環的胺基酸殘基。高度可變區 (HVR) 亦稱為“互補決定區”(CDR)，且這些術語在本文中可互換使用，指的是形成抗原結合區的可變區部分。此特殊區域業經描述於 Kabat 等人，US Dept. of Health and Human Services, Sequences of Proteins of Immunological Interest (1983) 和 Chothia 等人，J Mol Biol 196:901-917 (1987)，其中當相互比較時，定義包括胺基酸殘基的重疊或次集合。然而，應用任一定義來指代抗體或其變異體的 CDR 旨在落入本文所定義和使用的術語的範圍內。作為比較，下表 1 中列出涵蓋由上述引用的參考文獻中的各者所定義的 CDR 的合適的胺基酸殘基。涵蓋特定 CDR 的確切殘基編號將根據 CDR 的序列和大小而變化。依抗體的可變區胺基酸序列，熟習本技術領域者可常規地測定哪些殘基包含特定的 CDR。
表 1.CDR 定義 1
CDR Kabat Chothia AbM 2
V HCDR1 31-35 26-32 26-35
V HCDR2 50-65 52-58 50-58
V HCDR3 95-102 95-102 95-102
V LCDR1 24-34 26-32 24-34
V LCDR2 50-56 50-52 50-56
V LCDR3 89-97 91-96 89-97
1表 1 中所有 CDR 定義的編號是根據 Kabat 等人提出的編號約定 (見下文)。 2表 1 中使用的“AbM”的小寫字母“b”是指由 Oxford Molecular 的“AbM”抗體模擬軟體所定義的 CDR。
Kabat 等人亦定義適用於任何抗體的可變區序列編號系統。所屬技術領域中具有通常知識者可無歧異地將這種“Kabat 編號”系統分配給任何可變區序列，而不依賴於序列本身之外的任何實驗資料。如本文所用，“Kabat 編號”是指 Kabat 等人，U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983) 提出的編號系統。除非另有說明，否則對抗體可變區中特異性胺基酸殘基位置編號的引用是根據 Kabat 編號系統。
序列表的多肽序列未根據 Kabat 編號系統來編號。然而，將序列表的序列編號轉換為 Kabat 編號完全所屬技術領域中具有通常知識者的範圍內。
「骨架 (framework)」或「FR」是指除高度可變區 (hypervariable region) (HVR) 殘基之外的可變域殘基。可變域之 FR 通常由四個 FR 域組成：FR1、FR2、FR3、及 FR4。因此，HVR 及 FR 序列通常以如下順序出現在 VH (或 VL) 中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
抗體或免疫球蛋白之「類別 (class)」是指為其重鏈所具有的恆定域或恆定區之類型。有五大類主要抗體：IgA、IgD、IgE、IgG 及 IgM，且彼等中的幾種可進一步分為次類 (同型 (isotype))，例如 IgG 1、IgG 2、IgG 3、IgG 4、IgA 1及 IgA 2。對應於不同類別之免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為 α、δ、ε、γ 及 μ。
本文中的術語「Fc 區」，用於定義包含至少一部分恆定區的免疫球蛋白重鏈的 C 端區。該術語包括天然序列 Fc 區及變異體 Fc 區。在一個態樣，人 IgG 重鏈 Fc 區域從 Cys226 或 Pro230 延伸至重鏈的羧基端。但是，由宿主細胞產生的抗體可能經歷重鏈 C 端的一種或多種，特定而言一種或兩種胺基酸之轉譯後切割。因此，由宿主細胞藉由表現編碼全長重鏈的特異性核酸分子而產生的抗體可包括全長重鏈，或者可包括全長重鏈的經截切之變異體。重鏈的最後兩個 C 端胺基酸為甘胺酸 (G446) 及離胺酸 (K447，EU 編號系統)，可能為此情況。因此，可以存在或可以不存在 Fc 區域之 C 端離胺酸 (Lys447) 或 C 端甘胺酸 (Gly446) 及離胺酸 (Lys447)。除非另有說明，否則包括 Fc 區域之重鏈之胺基酸序列在本文中表示不含 C 端甘胺酸-離胺酸二肽。在一個態樣中，包含在根據本發明之抗體中的包括本文所述之 Fc 區的重鏈，包含另外的 C 端甘胺酸-離胺酸二肽 (G446 和 K447，EU 編號系統)。在一個態樣中，包含在根據本發明之抗體中的包括本文所述之 Fc 區的重鏈，包含另外的 C 端甘胺酸殘基 (G446，根據 EU 索引)。除非本文另有說明，否則 Fc 區域或恆定區中胺基酸殘基之編號根據 EU 編號系統（亦稱為 EU 索引）進行，如 Kabat 等人所述 ( Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)（另見上文）。如本文中所使用的 Fc 域之「次單元」，是指形成二聚體 Fc 域之兩個多肽之一，即包含能夠穩定自締合之免疫球蛋白重鏈之 C 端恆定區之多肽。例如，IgG Fc 域之次單元包含 IgG CH2 及 IgG CH3 恆定域。
「融合」意指組件 (例如 Fab 分子及 Fc 域次單元) 經肽鍵直接或經由一或多個肽連接子連接。
「促進 Fc 域之第一次單元及第二次單元之締合之修飾」係對肽主鏈的操作或對 Fc 域次單元之轉譯後修飾，其減少或阻止包含 Fc 域次單元之多肽與相同多肽之締合形成同型二聚體。本文所用之促進締合之修飾，特別包括對期望締合之兩個 Fc 域次單元 (即 Fc 域之第一次單元及第二次單元) 中的每一個所進行之單獨修飾，其中該修飾彼此互補，以便促進兩個 Fc 域次單元之締合。例如，促進締合之修飾可改變一個或兩個 Fc 域次單元之結構或電荷，以分別使其在空間或靜電上有利。因此，(異源)二聚化發生在包含第一 Fc 域次單元之多肽與包含第二 Fc 域次單元之多肽之間，就進一步融合到每個次單元 (例如，抗原結合部分) 的組件而言是不同的意義上，可能有所不同。在一些實施例中，促進締合之修飾包括 Fc 域中之胺基酸突變，具體地是胺基酸取代。在一個特定實施例中，促進締合之修飾包括 Fc 域之兩個次單元的每一個中之單獨的胺基酸突變，特定而言胺基酸取代。
術語「效應子功能」，係指歸因於抗體的 Fc 區域的那些生物活性，其隨抗體同種型而變化。抗體效應子功能的實例包括：C1q 結合及補體依賴性細胞毒性 (CDC)、Fc 受體結合、抗體依賴型細胞介導的細胞毒性 (ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP)、細胞介素分泌、藉由抗原呈現細胞的免疫複合物介導之抗原攝取、細胞表面受體 (例如，B 細胞受體) 降調、及 B 細胞活化。
如本文中所使用的術語「工程改造 (engineer、engineered、engineering)」，被認為包括對肽主鏈的任何操作或天然存在的或重組的多肽或其片段的轉譯後修飾。工程改造包括修改胺基酸序列、醣化模式、或單個胺基酸的側鏈基團，以及這些方法的組合。
如本文所用的術語「胺基酸突變」，意指涵蓋胺基酸取代、缺失、***和修飾。可實施取代、缺失、***和修飾之任意組合以得到最終構建體，前提條件為最終構建體具有所需之特徵，例如，與 Fc 受體之結合減少或與另一種肽之締合增加。胺基酸序列缺失和***包括胺基酸之胺基及/或羧基端之缺失和***。特定之胺基酸突變為胺基酸取代。為改變例如 Fc 區域之結合特徵，特佳的是非保守胺基酸取代，即，將一種胺基酸取代爲具有不同結構及/或化學性質之另一種胺基酸。胺基酸取代包括用二十種標準胺基酸之非天然存在之胺基酸或天然存在之胺基酸衍生物 (例如，4-羥基脯胺酸、3-甲基組胺酸、鳥胺酸、升絲胺酸、5-羥基離胺酸) 取代。可使用本領域中熟知的遺傳或化學方法產生胺基酸突變。遺傳方法可包括定點突變、PCR、基因合成等。預期透過遺傳工程以外之方法諸如化學修飾改變胺基酸之側鏈基團的方法亦可能有用。本文可使用各種名稱指示同一胺基酸突變。例如，Fc 域位置 329 處之脯胺酸取代為甘胺酸，可表示為 329G、G329、G 329、P329G 或 Pro329Gly。
如本文所用，術語「多肽」是指由透過醯胺鍵 (亦稱為肽鍵) 線性連接的單體 (胺基酸) 所組成的分子。該術語「多肽」是指兩個或多個胺基酸的任何鏈，並不表示產物的特定長度。因此，在「多肽」的定義中包括肽、二肽、三肽、寡肽、「蛋白質」、「胺基酸鏈」或用於指代兩個或多個胺基酸鏈的任何其他術語，並且可以使用「多肽」代替或與這些術語中的任何術語互換。該術語「多肽」亦指多肽的表現後修飾的產物，包括但不限於醣化、乙醯化、磷酸化、醯胺化、透過已知保護/阻斷基團衍生化、蛋白水解切割或非天然出現的胺基酸修飾。多肽可以源自天然生物來源或透過重組技術產生，但不一定是從指定的核酸序列轉譯而來的。它可以以任何方式產生，包括透過化學合成。本發明的多肽可具有約 3 個或更多、5 個或更多、10 個或更多、20 個或更多、25 個或更多、50 個或更多、75 個或更多、100 個或更多、200 個或更多、500 個或更多、1,000 個或更多、或 2,000 個或更多胺基酸。多肽可以具有測定的三維結構，儘管它們不一定具有此類結構。具有測定的三維結構的多肽稱為折疊的，而不具有測定的三維結構但可以採用大量不同構象的多肽稱為未折疊的。
「分離的」多肽或其變異體或衍生物是指非天然環境中的多肽。不需要特定純化水平。例如，一個分離的多肽可自其天然或自然環境中移除。出於本發明之目的，在宿主細胞中表現的重組產生之抗體和蛋白質被視作經分離的，視為已透過任何適宜技術分離、分級、或部分或實質上純化之天然或重組多肽 。
相對於參比多肽序列所述之「百分比 (%) 胺基酸序列同一性」，定義為候選序列中胺基酸殘基與參比多肽序列中之胺基酸殘基相同之百分比，在比對序列並引入差異後 (如有必要)，可實現最大的序列同一性百分比，並且不考慮將任何保守取代作為序列同一性之一部分。為測定胺基酸百分比序列同一性之目的而進行的比對可透過本領域中技術範圍內之各種方式實現，例如，使用公眾可取得的電腦軟體諸如 BLAST、BLAST-2、ALIGN 或 Megalign (DNASTAR) 軟件。本領域之技術人員可測定用於比對序列之合適參數，包括在所比較之序列全長上實現最大比對所需之任何演算法。然而，出於本文的目的，使用序列比較電腦程式 ALIGN-2 產生 % 胺基酸序列同一值。ALIGN-2 序列比較電腦程式由建南德克公司編寫，原始程式碼已與用戶文檔一起存檔於美國版權局，華盛頓特區，20559，並以美國版權註冊號 TXU510087 進行註冊。ALIGN-2 程式可從加利福尼亞南三藩市的建南德克公司公眾可取得，亦可以從原始程式碼進行編譯。ALIGN-2 程式應編譯為在 UNIX 作業系統 (包括數位 UNIX V4.0D) 上使用。所有序列比較參數均由 ALIGN-2 程式設置，並且沒有變化。在使用 ALIGN-2 進行胺基酸序列比較的情況下，既定胺基酸序列 A 對、與、或相對於既定胺基酸序列 B 的 % 胺基酸序列同一性 (其視情況表述為既定胺基酸序列 A，其對、與、或相對於既定胺基酸序列 B 具有或包含一定 % 的胺基酸序列同一性) 計算如下： 100 乘以分數 X/Y 其中 X 是序列比對程式 ALIGN-2 在 A 與 B 程式比對中評分為同一匹配的胺基酸殘基數，且其中 Y 是 B 中胺基酸殘基的總數。應理解的是，在胺基酸序列 A 的長度不等於胺基酸序列 B 的長度的情況下，A 與 B 的胺基酸序列同一性 % 將不等於 B 與 A 的胺基酸序列同一性 %。除非另有特別說明，否則如前一段所述，本文使用的所有胺基酸序列同一性值 % 是使用 ALIGN-2 電腦程式而獲得。
術語「多核苷酸 (polynucleotide)」，是指經分離之核酸分子或構建體，例如傳訊 RNA (mRNA)、病毒來源的 RNA 或質體 DNA (pDNA)。多核苷酸可包含習用的磷酸二酯鍵或非習用的鍵 (例如醯胺鍵，諸如肽核酸 (PNA) 中所見)。術語「核酸分子」，是指任何存在於多核苷酸中之一個或多個核酸片段，例如 DNA 或 RNA 片段。
「經分離之」核酸分子或多核苷酸，是指已從其天然環境中分離出之核酸分子 (DNA 或 RNA)。例如，就本發明而言，編碼載體中所含之多肽的重組多核苷酸被視爲是經分離。經分離之多核苷酸之更多實例包括在異源性宿主細胞中保持之重組多核苷酸或溶液中經純化之 (部分或基本上) 多核苷酸。經分離之多核苷酸包括通常包含多核苷酸分子之細胞中所含之多核苷酸分子，但是多核苷酸分子存在於染色體外或與自然染色體位置不同之染色體位置。經分離之 RNA 分子包括本發明之活體內或活體外 RNA 轉錄物，以及正鏈和負鏈形式及雙鏈形式。根據本發明之經分離之多核苷酸或核酸進一步包括合成產生之此等分子。此外，多核苷酸或核酸可以為或可以包括調控元件，諸如啟動子、核醣體結合位點或轉錄終止子。
藉由與本發明的參考核苷酸序列具有至少例如 95% 的「同一性」的核苷酸序列的核酸或多核苷酸，意指該多核苷酸的核苷酸序列與參考序列具有同一性，除了參考核苷酸序列的每 100 個核苷酸，多核苷酸序列最多可包含五個點突變。換句話說，為了獲得與參考核苷酸序列具有至少 95% 的同一性的核苷酸序列的多核苷酸，可以刪除參考序列中最多 5% 的核苷酸或用另一個核苷酸取代，或者將參考序列中核苷酸總數最多 5% 的核苷酸數***到參考序列中。參考序列的這些改變可能發生在參考核苷酸序列的 5’ 端或 3’ 端位置或這些末端位置之間的任何位置，既散佈在參考序列的殘基之間，亦散佈在參考序列內的一個或多個連續基團中。實際上，任何特定的多核苷酸序列是否與本發明的核苷酸序列具有至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的同一性可使用已知的電腦程式常規地測定，諸如如上討論用於多肽的程式 (例如，ALIGN-2)。
術語「表現匣」是指重組或合成產生之多核苷酸，其具有一系列允許特定核酸在標靶細胞中轉錄之特定核酸元件。重組表現匣可被引入質體、染色體、粒線體 DNA、色素體 DNA、病毒或核酸片段中。通常，表現載體之重組表現匣部分除其他序列外還包括待轉錄之核酸序列和啟動子。在某些實施例中，本發明之表現匣包含多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼本發明的雙特異性抗原結合分子或其片段。
術語「載體 (vector)」或「表現載體」是與「表現構建體」同義，且指用於在標靶細胞中引入並導引與其可操縱地連接的特定基因之表現的 DNA 分子。該術語包括作為自我複製核酸結構之載體以及摻入已引入該宿主細胞的基因組中的載體。本發明之表現載體包含表現匣。表現載體轉錄大量穩定的 mRNA。一旦表現載體進入標靶細胞內部，由該基因所編碼的核糖核酸分子或蛋白質即藉由細胞轉錄及/或轉譯機構而產生。在一個實施例中，本發明之表現載體包含表現匣，該表現匣包含多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼本發明的雙特異性抗原結合分子或其片段。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」和「宿主細胞培養物」可互換使用，是指已向其中引入外源性核酸的細胞，包括此類細胞的子代細胞。宿主細胞包括「轉形體」和「轉形細胞」，其包括原代轉形細胞及由其衍生的子代細胞，與傳代次數無關。子代細胞之核酸含量可能與親代細胞不完全相同，但可能含有突變。本文中包括從原始轉形細胞中篩選或選擇具有相同功能或生物學活性的突變子代細胞。宿主細胞為可用於產生本發明的雙特異性抗原結合分子的任何類型的細胞系統。宿主細胞包括培養的細胞，例如培養的哺乳動物細胞，諸如 CHO 細胞、BHK 細胞、NS0 細胞、SP2/0 細胞、YO 骨髓瘤細胞、P3X63 小鼠骨髓瘤細胞、PER 細胞、PER.C6 細胞或融合瘤細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、和植物細胞等，還包括基因轉殖動物、基因轉殖植物或培養的植物或動物組織內的細胞。
「活化 Fc 受體」為在抗體之 Fc 域參與之後引發刺激受體攜帶細胞執行效應子功能的傳訊事件的 Fc 受體。人活化 Fc 受體包括 FcγRIIIa (CD16a)、FcγRI (CD64)、FcγRIIa (CD32) 和 FcαRI (CD89)。
抗體依賴型細胞介導的細胞毒性 (ADCC) 為一種免疫機制，其導致免疫效應細胞裂解抗體包被的標靶細胞。標靶細胞為抗體或其衍生物包含 Fc 區的細胞，其通常透過作為 N 端的蛋白質部分與 Fc 區特異性結合。如本文中所使用的術語「減少 ADCC」，是指透過上文定義的 ADCC 機制在給定時間內以標靶細胞周圍之培養基中給定濃度的抗體在給定時間內裂解的標靶細胞數量的減少，及/或透過 ADCC 機制在給定時間內實現給定數量的標靶細胞之裂解所需的標靶細胞周圍之培養基中抗體濃度的增加。ADCC 的減少相對於使用相同標準產生、純化、配製和儲存方法 (本技術領域具有通常知識者已知的方法) 由相同類型的宿主細胞所產生的相同抗體 (但尚未工程改造) 所介導的 ADCC。例如，由 Fc 域中包含減少 ADCC 的胺基酸取代的抗體所介導的 ADCC 的減少為相對於在 Fc 域中不含此胺基酸取代的相同抗體所介導的 ADCC。用於測量 ADCC 的適合的測定為本技術領域中熟知的 (參見例如 PCT 公開號 WO 2006/082515 或 PCT 公開號 WO 2012/130831)。
藥劑之「有效量」是指在其所投予的細胞或組織中引起生理變化所需的量。
藥劑例如醫藥組成物的「治療有效量」指在所需之給藥劑量和時間段內有效實現所需的治療或預防效果的量。治療有效量的藥劑例如消除、減少、延遲、最小化或防止疾病的不利影響。
「受試者」或「個體」為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於馴養的動物 (例如牛、綿羊、貓、狗和馬)、靈長類動物 (例如人及非人靈長類動物諸如猴)、兔以及囓齒類動物 (例如小鼠及大鼠)。特定而言，受試者或個體為人。
術語「醫藥組成物」是指以下製劑：其呈允許其中所含之活性成分之生物活性有效之形式，且不含對將投予調配物之個體具有不可接受毒性之另外的組件。
「醫藥上可接受之載劑」指醫藥組成物中除對個體無毒之活性成分以外的成分。醫藥上可接受之載劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本文所用，「治療」(及其語法變體，諸如「治療過程」或「治療中」)，係指試圖改變受治療受試者之疾病自然病程的臨床干預，並且可進行預防或在臨床病理過程中執行。期望之治療效果包括但不限於預防疾病之發生或複發、減輕症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理後果、預防轉移、降低疾病進展之速度、改善或減輕疾病狀態、及緩解或改善預後。在一些實施例中，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子是用於延遲疾病之發展或減慢疾病之進展。
術語「藥品說明書」用於指代通常包含在治療性產品的商業包裝中的說明，該說明含有有關使用此等治療性產品的適應症、用法、劑量、投予、組合療法、禁忌症及/或警告等資訊。
如本文所用，「獨特型特異性多肽 (idiotype-specific polypeptide)」是指辨識抗原結合部分的獨特型的多肽，例如對 CD3 具有特異性的抗原結合部分。獨特型特異性多肽能夠特異性結合抗原結合部分的可變區，且由此減少或阻止抗原結合部分與其同源抗原的特異性結合。當與包含抗原結合部分的分子締合時，獨特型特異性多肽可用作分子的遮蔽部分。本文具體揭示對抗 CD3 結合分子的獨特型具特異性的抗獨特型抗體或抗獨特型結合抗體片段。
如本文所用，「蛋白酶」或「蛋白水解酵素 (proteolytic enzyme)」是指在辨識位點截切連接子並由標靶細胞所表現的任何蛋白水解酵素。此類蛋白酶可能由標靶細胞分泌或保持與標靶細胞締合，例如在標靶細胞表面上。蛋白酶的實例包括但不限於金屬蛋白酶，例如基質金屬蛋白酶 1-28 及解整聯蛋白和金屬蛋白酶 (ADAM) 2、7-12、15、17-23、28-30 和 33、絲胺酸蛋白酶，例如尿激酶型血纖維蛋白溶酶原活化物和間質蛋白酶 (Matriptase)、半胱胺酸蛋白酶、天冬胺酸蛋白酶、和組織蛋白酶 (cathepsin) 家族的成員。
如本文所用，「蛋白酶可活化 (protease activatable)」就 T 細胞活化雙特異性分子而言，是指經降低或經消除活化 T 細胞能力之 T 細胞活化雙特異性分子，此由於減少或消除 T 細胞活化雙特異性分子的結合 CD3 的能力之遮蔽部分所致。在藉由蛋白水解切割解離遮蔽部分，例如藉由蛋白水解切割將遮蔽部分連接到 T 細胞活化雙特異性分子的連接子，與 CD3 的結合被恢復，且從而活化 T 細胞活化雙特異性分子。
如本文所用，「可逆地隱匿 (reversibly concealing)」是指遮蔽部分或獨特型特異性多肽與抗原結合部分或分子的結合，諸如以防止抗原結合部分或分子與其抗原 (例如 CD3) 接觸。此隱匿是可逆的，因為獨特型特異性多肽可從抗原結合部分或分子中例如藉由蛋白酶截切而被釋出，且由此釋放抗原結合部分或分子以與其抗原結合。
實施方式
在一個態樣中，本發明涉及一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 能夠與 CD3 結合的第一抗原結合部分； (b) 能夠與標靶細胞抗原結合的第二抗原結合部分；以及 (c) 透過蛋白酶可截切之連接子與 T 細胞雙特異性結合分子共價接附之遮蔽部分，其中該遮蔽部分能夠與該第一抗原結合部分或第二抗原結合部分的獨特型結合，從而可逆地隱匿該第一抗原結合或第二抗原結合部分。
能夠與 CD3 結合的第一抗原結合部分包含獨特型。在一個實施例中，該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分。在一個實施例中，該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分的重鏈可變區。在一個實施例中，該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分的輕鏈可變區。此共價鍵與遮蔽部分與獨特型第一抗原結合位點的特異性結合 (其較佳的是非共價結合) 是分開的。第一抗原結合部分的獨特型包含其可變區。在一個實施例中，當第一抗原結合部分與 CD3 結合時，遮蔽部分結合至與 CD3 接觸的胺基酸殘基。在一較佳實施例中，遮蔽部分不是第一抗原結合部分的同源抗原或其片段，即遮蔽部分不是 CD3 或其片段。在一個實施例中，該遮蔽部分是抗獨特型抗體或其片段。在一個實施例中，該遮蔽部分是抗獨特型 scFv。抗獨特型 scFv 的遮蔽部分的例示性實施例，以及包含此等遮蔽部分的蛋白酶可活化之 T 細胞活化分子，詳細描述於實例中。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含 (i) 第一抗原結合部分，其為能夠與 CD3 結合的 Fab 分子，且其包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，和至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22 所組成之群組； (ii) 第二抗原結合部分，其為能夠與標靶細胞抗原結合的 Fab 分子。
在一個實施例中，該第一抗原結合部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個實施例中，該第一抗原結合部分包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO:16 之胺基酸序列，及該輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO:23 之胺基酸序列。
在一具體實施例中，該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，並包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組。
在另一具體實施例中，該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，並包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 53 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。
在另一具體實施例中，該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，並且包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 26 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30 所組成之群組。
在另一具體實施例中，該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，並且包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含與 SEQ ID NO: 27 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列，及該輕鏈包含與 SEQ ID NO: 31 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個實施例中，本發明提供一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (i) 第一抗原結合部分，其是能夠與 CD3 結合的 Fab 分子，包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22 所組成之群組； (ii) 第二抗原結合部分，其是能夠與 FolR1 結合的 Fab 分子，包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22 所組成之群組。
在一個實施例中，本發明提供一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (i) 第一抗原結合部分，其是能夠與 CD3 結合的 Fab 分子，並包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區序列包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列， (ii) 第二抗原結合部分，其是能夠與 FolR1 結合的 Fab 分子，並包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 53 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區序列包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個實施例中，本發明提供一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (i) 第一抗原結合部分，其是能夠與 CD3 結合的 Fab 分子，包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22 所組成之群組； (ii) 第二抗原結合部分，其是能夠結合 TYRP1 的 Fab 分子，其包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 26 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30 所組成之群組。
在一個實施例中，本發明提供一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (i) 第一抗原結合部分，其是能夠與 CD3 結合的 Fab 分子，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。 (ii) 第二抗原結合部分，其是能夠與 TYRP1 結合的 Fab 分子，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 27 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 31 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個實施例中，該第二抗原結合部分是習用 Fab 分子。
在一特定實施例中，該第一抗原結合部分是交換型 Fab 分子，其中該 Fab 輕鏈和該 Fab 重鏈的恆定區被交換，並且該第二抗原結合部分是習用 Fab 分子。在另一實施例中，該第一抗原結合部分與該第二抗原結合部分視情況透過肽連接子彼此融合。
在特定實施例中，該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子進一步包含由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元所構成之 Fc 域。
在另一特定實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子中存在不多於一個能夠結合 CD3 的抗原結合部分 (即蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子提供與 CD3 的單價結合)。
蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子形式
蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的組件可以以多種構型彼此融合。例示性構型描繪於圖 1A 至 1Z、圖2、圖 9A 至 9C 和圖 17A 至 17DH 中。
在特定實施例中，該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元所構成之 Fc 域。在一些實施例中，該第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第一次單元或第二次單元之 N 端融合。
在一個此類實施例中，該第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與第二抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合。在一具體此等實施例中，該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子基本上由第一抗原結合部分及第二抗原結合部分、由第一次單元及第二次單元構成之 Fc 域、以及視情況的一個或多個肽連接子組成，其中該第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與第二抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合，並且該第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第一次單元或第二次單元之 N 端融合。視情況，該第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈可另外彼此融合。
在另一此等實施例中，該第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第一次單元或第二次單元之 N 端融合。在一具體此類實施例中，該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子基本上由第一抗原結合部分及第二抗原結合部分、由第一次單元及第二次單元構成之 Fc 域、以及視情況的一個或多個肽連接子組成，其中該第一抗原結合部分及該第二抗原結合部分各在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第一次單元或第二次單元之 N 端融合。
在其他實施例中，該第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第一次單元或第二次單元之 N 端融合。
在一特定此類實施例中，該第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與該第一抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合。在一具體此等實施例中，該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子基本上由第一抗原結合部分及第二抗原結合部分、由第一次單元及第二次單元構成之 Fc 域、以及視情況的一個或多個肽連接子組成，其中該第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與第一抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合，並且該第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第一次單元或第二次單元之 N 端融合。視情況，該第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈可另外彼此融合。
抗原結合部分可與 Fc 域直接融合或彼此融合，或者透過肽連接子與 Fc 融合或彼此融合，該肽連接子包含一個或多個胺基酸，通常約 2-20 個胺基酸。肽連接子為本領域中所公知的並且如本文所述。合適的非免疫原性肽連接子包括例如 (G 4S) n、(SG 4) n、(G 4S) n或 G 4(SG 4) n肽連接子。“n”大致上是介於 1 和 10 之間的數字，通常介於 2 和 4 之間。一種用於使第一抗原結合部分及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈彼此融合的特別適合的肽連接子為 (G 4S) 2。一種適用於連接第一抗原結合部分及第二抗原結合部分之 Fab 重鏈的例示性肽連接子是 EPKSC(D)-(G 4S) 2(SEQ ID NO: 105 及 106)。另外，連接子可包含免疫球蛋白鉸合區 (的一部分)。特定而言，在其中抗原結合部分與 Fc 域次單元之 N 端融合的情況下，可經由具有或未有另外的肽連接子的免疫球蛋白鉸合區或其一部分融合。
具有能夠結合標靶細胞抗原的單一抗原結合部分的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子是可用的，特定而言在結合高親和力抗原結合部分後預期標靶細胞抗原內化的情況下。在此等情況下，針對特定標靶細胞抗原的一種以上之抗原結合部分的存在可增強標靶細胞抗原的內在化，從而降低其可用性。
但是，在許多其他情況下，具有包含兩個或更多個針對標靶細胞抗原的抗原結合部分之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (例如，如圖 1B、1C、1E、1F、1G、1H、1I、1J、1K、1L、1M、1N、1Q、1R、1U、1V 所示) 將為有利的，例如有利於優化標靶至標靶位點或使標靶細胞抗原交聯。
因此，在某些實施例中，本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子進一步包含第三抗原結合部分，其為能夠與標靶細胞抗原結合的 Fab 分子。在一個實施例中，第三抗原結合部分為習用 Fab 分子。在一個實施例中，第三抗原結合部分能夠結合與第二抗原結合部分相同的標靶細胞抗原。在一特定實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，並且第二抗原結合部分和第三抗原結合部分能夠與標靶細胞抗原結合。在一特定實施例中，第二抗原結合部分和第三抗原結合部分是相同的 (即它們包含相同的胺基酸序列)。
在一特定實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，並且該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，其中該第二抗原結合部分和第三抗原結合包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組。
在一特定實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，且包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22 所組成之群組；並且該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，其中該第二抗原結合部分和第三抗原結合包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組。
在一特定實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，且包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22 所組成之群組；並且該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，其中該第二抗原結合部分和第三抗原結合包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組。
在一特定實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，且包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，並且該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，其中該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 53 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，且該第二抗原結合部分及第三抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，其中該第二抗原結合部分及第三抗原結合部分包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組。
在一個實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，且包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22 所組成之群組；並且該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，其中該第二抗原結合部分和第三抗原結合包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 26 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30 所組成之群組。
在一個實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，其包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組；並且該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，其中該第二抗原結合部分和第三抗原結合包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 26 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30 所組成之群組。
在一個實施例中，該第一抗原結合部分能夠與 CD3 結合，且包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，並且該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，其中該第二抗原結合部分和第三抗原結合部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 27 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 31 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。
第二抗原結合部分和第三抗原結合部分可直接或透過肽連接子與 Fc 域融合。在一特定實施例中，第二抗原結合部分和第三抗原結合部分各自透過免疫球蛋白鉸合區與 Fc 域融合。在一具體實施例中，免疫球蛋白鉸合區是人 IgG 1鉸合區。在一個實施例中，第二和第三抗原結合部分以及 Fc 域是免疫球蛋白分子的一部分。在一個特別實施例中，免疫球蛋白分子為 IgG 類免疫球蛋白。在更具體的實施例中，免疫球蛋白為 IgG 1亞類免疫球蛋白。在另一個實施例中，免疫球蛋白為 IgG 4亞類免疫球蛋白。在另一個特定實施例中，免疫球蛋白為人免疫球蛋白。在其他實施例中，免疫球蛋白為嵌合免疫球蛋白或人源化免疫球蛋白。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子基本上由能夠結合標靶細胞抗原的免疫球蛋白分子和能夠結合 CD3 的抗原結合部分組成，其中該抗原結合部分是 Fab 分子，特定而言交換型 Fab 分子，其視情況經由肽連接子與免疫球蛋白重鏈之一者的 N 端融合。
在一特定實施例中，第一抗原結合部分及第三抗原結合部分各自在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的次單元中之一個的 N 端融合，並且第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與第一抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合。在一特定此類實施例中蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子基本上由第一抗原結合部分、第二抗原結合部分及第三抗原結合部分、由第一次單元及第二次單元構成之 Fc 域、以及視情況的一個或多個肽連接子組成，其中第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與第一抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合，並且第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第一次單元中的 N 端融合，且其中第三抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第二次單元之 N 端融合。視情況，該第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈可另外彼此融合。
在一個實施例中，本發明提供一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (i) 第一抗原結合部分，其是能夠與 CD3 結合的 Fab 分子，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 (CDR) 1、SEQ ID NO: 4 之重鏈 CDR 2、SEQ ID NO: 10 之重鏈 CDR 3、SEQ ID NO: 20 之輕鏈 CDR 1、SEQ ID NO: 21 之輕鏈 CDR 2 和 SEQ ID NO: 22 之輕鏈 CDR 3，其中第一抗原結合部分是交換型 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈和 Fab 重鏈的可變區或恆定區、特定而言恆定區被交換； (ii) 第二和第三抗原結合部分，其各自是能夠與 FolR1 結合的 Fab 分子，其包含 SEQ ID NO: 54 的重鏈 CDR 1、SEQ ID NO: 55 的重鏈 CDR 2、SEQ ID NO: 56 的重鏈 CDR 3、SEQ ID NO: 20 的輕鏈 CDR 1、SEQ ID NO: 21 的輕鏈 CDR 2 和 SEQ ID NO: 22 的輕鏈 CDR3。
在一個實施例中，本發明提供一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (i) 第一抗原結合部分，其是能夠與 CD3 結合的 Fab 分子，並包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，其中第一抗原結合部分是交換型 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈和 Fab 重鏈的可變區或恆定區、特定而言恆定區被交換； (ii) 第二和第三抗原結合部分，其各自是能夠與 FolR1 結合的 Fab 分子，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 53 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個實施例中，本發明提供一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (i) 第一抗原結合部分，其是能夠與 CD3 結合的 Fab 分子，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 (CDR) 1、SEQ ID NO: 4 之重鏈 CDR 2、SEQ ID NO: 10 之重鏈 CDR 3、SEQ ID NO: 20 之輕鏈 CDR 1、SEQ ID NO: 21 之輕鏈 CDR 2 和 SEQ ID NO: 22 之輕鏈 CDR 3，其中第一抗原結合部分是交換型 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈和 Fab 重鏈的可變區或恆定區、特定而言恆定區被交換； (ii) 第二和第三抗原結合部分，其各自是能夠與 TYRP1 結合的 Fab 分子，其包含 SEQ ID NO: 24 的重鏈 CDR 1、SEQ ID NO: 25 的重鏈 CDR 2、重鏈 SEQ ID NO: 26 的鏈 CDR 3、SEQ ID NO: 28 的輕鏈 CDR 1、SEQ ID NO: 29 的輕鏈 CDR 2 和 SEQ ID NO: 30 的輕鏈 CDR3。
根據上述十個實施例中的任一者之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，可進一步包含 (iii) 由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元所構成之 Fc 域，其中第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與第一抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合，並且第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第一次單元中的 N 端融合，且其中第三抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與 Fc 域的第二次單元之 N 端融合。
在本發明之一些蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子中，第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈與第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈視情況經由肽連接子彼此融合。取決於第一抗原結合部分及第二抗原結合部分的構型，第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈可在其 C 端與第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈之 N 端融合，或第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈可在其 C 端與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈之 N 端融合。第一抗原結合部分及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈的融合進一步減少 Fab 重鏈與輕鏈之錯配，並且亦減少表現本發明的一些蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子所需的質體數量。
在某些實施例中，根據本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含：多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (即第一抗原結合部分包含交換型 Fab 重鏈，其中重鏈可變區被輕鏈可變區取代)，其繼而與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VL (1)-CH1 (1)-CH2-CH3(-CH4))；及多肽，其中第二抗原結合部分之 Fab 重鏈與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VH (2)-CH1 (2)-CH2-CH3(-CH4))。在一些實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子進一步包含：多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 重鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (VH (1)-CL (1))；及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽 (VL (2)-CL (2))。在某些實施例中，多肽透過例如二硫鍵共價連結。
在替代實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含：多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 重鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (即第一抗原結合部分包含交換型 Fab 重鏈，其中重鏈恆定區被輕鏈恆定區取代)，其繼而與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VH (1)-CL (1)-CH2-CH3(-CH4))；及多肽，其中第二抗原結合部分之 Fab 重鏈與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VH (2)-CH1 (2)-CH2-CH3(-CH4))。在一些實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子進一步包含：多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (VL (1)-CH1 (1))；及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽 (VL (2)-CL (2))。在某些實施例中，多肽透過例如二硫鍵共價連結。
在一些實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含：多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (即第一抗原結合部分包含交換型 Fab 重鏈，其中重鏈可變區被輕鏈可變區取代)，其繼而與第二抗原結合部分之 Fab 重鏈共享羧基端肽鍵，其繼而與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VL (1)-CH1 (1)-VH (2)-CH1 (2)-CH2-CH3(-CH4))。在其他實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 重鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (即第一抗原結合部分包含交換型 Fab 重鏈，其中重鏈恆定區被輕鏈恆定區替換)，其繼而與第二抗原結合部分之 Fab 重鏈共享羧基端肽鍵，其繼而與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VH (1)-CL (1)-VH (2)-CH1 (2)-CH2-CH3(-CH4))。又在其他實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含多肽，其中第二抗原結合部分之 Fab 重鏈與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈可變區共享羧基端肽鍵，其繼而與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (即第一抗原結合部分包含交換型 Fab 重鏈，其中重鏈可變區被輕鏈可變區替換)，其繼而與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VH (2)-CH1 (2)-VL (1)-CH1 (1)-CH2-CH3(-CH4))。在其他實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含多肽，其中第二抗原結合部分之 Fab 重鏈與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈可變區共享羧基端肽鍵，其繼而與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (即第一抗原結合部分包含交換型 Fab 重鏈，其中重鏈恆定區被輕鏈恆定區替換)，其繼而與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VH (2)-CH1 (2)-VH (1)-CL (1)-CH2-CH3(-CH4))。
在一些這類實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子進一步包含第一抗原結合部分之交換型 Fab 輕鏈多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 重鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (VH (1)-CL (1))；及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽 (VL (2)-CL (2))。在其他這類實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子進一步包含：交換型 Fab 輕鏈多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (VL (1)-CH1 (1))；及第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽 (VL (2)-CL (2))。又在其他這類實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子進一步包含：多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈恆定區共享羧基端肽鍵，其繼而與第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽共享羧基端肽鍵 (VL (1)-CH1 (1)-VL (2)-CL (2))；多肽，其中第一抗原結合部分之 Fab 重鏈可變區與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈恆定區共享羧基端肽鍵，其繼而與第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽共享羧基端肽鍵 (VH (1)-CL (1)-VL (2)-CL (2))；多肽，其中第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈恆定區共享羧基端肽鍵，其繼而與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (VL (2)-CL (2)-VL (1)-CH1 (1))，或多肽，其中第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽與第一抗原結合部分之 Fab 重鏈可變區共享羧基端肽鍵，其繼而與第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈恆定區共享羧基端肽鍵 (VL (2)-CL (2)-VH (1)-CL (1))。
根據這些實施例之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可進一步包含 (i) Fc 域次單元多肽 (CH2-CH3(-CH4))，或 (ii) 多肽，其中第三抗原結合部分之 Fab 重鏈與 Fc 域次單元共享羧基端肽鍵 (VH (3)-CH1 (3)-CH2-CH3(-CH4))，及第三抗原結合部分之 Fab 輕鏈多肽 (VL (3)-CL (3))。在某些實施例中，多肽透過例如二硫鍵共價連結。
根據任一上述實施例，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的組件 (例如抗原結合部分，Fc 域) 可直接融合或透過各種連接子融合，特定而言透過本文所述或本領域中所公知的包含一個或多個胺基酸 (通常約 2-20 個胺基酸) 的肽連接子融合。適合的非免疫原性肽連接子包括例如 (G 4S) n、(SG 4) n、(G 4S) n或 G 4(SG 4) n肽連接子，其中 n 大致上是介於 1 和 10 之間的數字，通常介於 2 和 4 之間。
Fc 域
蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之 Fc 域由包含免疫球蛋白分子之重鏈域的一對多肽鏈組成。例如，免疫球蛋白 G (IgG) 分子之 Fc 域為二聚體，其每個次單元包含 CH2 及 CH3 IgG 重鏈恆定域。Fc 域之兩個次單元能夠彼此穩定締合。在一個實施例中，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含不多於一個 Fc 域。
在根據本發明的一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的 Fc 域是 IgG Fc 域。在一個特定實施例中，該 Fc 域為 IgG 1Fc 域。在另一個實施例中，Fc 域為 IgG 4Fc 域。在一更具體之實施例中，Fc 域為 IgG 4Fc 域，其包含在位置 S228 (Kabat 編號) 的胺基酸取代，特定而言胺基酸取代 S228P。該胺基酸取代減少體內 IgG 4抗體之 Fab 臂交換 (參見 Stubenrauch 等人，Drug Metabolism and Disposition 38，84-91 (2010))。在一進一步特定實施例中，該 Fc 域為人 Fc 域。
促進異源二聚化的 Fc 域修飾
根據本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含不同的抗原結合部分，其與 Fc 域之兩個次單元中的一個或另一個融合，因此 Fc 域之兩個次單元通常包含在兩個不同的多肽鏈中。這些多肽的重組共表現及隨後的二聚化導致兩種多肽具有若干可能的組合。為改善重組產生中蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之產率和純度，在蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之 Fc 域中引入促進所需之多肽締合的修飾將為有利的。
因此，在特定實施例中，根據本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的 Fc 域包含促進 Fc 域之第一次單元及第二次單元的締合的修飾。人 IgG Fc 域之兩個次單元之間最廣泛的蛋白質-蛋白質相互作用位點在 Fc 域之 CH3 結構域中。因此，在一個實施例中，該修飾在 Fc 域之 CH3 結構域中。
在一具體實施例中，該修飾為所謂的「杵臼 (knob-into-hole)」修飾，其包含在 Fc 域之兩個次單元中的一個的「杵」修飾及 Fc 域之兩個次單元中的另一個的「臼」修飾。
「杵臼」技術描述於例如：US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway 等人，Prot Eng 9，617-621 (1996)；及 Carter，J Immunol Meth 248，7-15 (2001)。通常，該方法包括在第一多肽之界面處引入一個突起 (「杵」)，並且在第二多肽之界面中引入一個對應的空腔 (「臼」)，以使該突起可定位於空腔中，從而促進異源二聚體形成並阻礙同源二聚體形成。藉由用較大側鏈 (例如酪胺酸或色胺酸) 替換第一多肽界面上之較小的胺基酸側鏈來構建突起。透過將較大胺基酸側鏈替換為較小的胺基酸側鏈 (例如丙胺酸或蘇胺酸)，在第二多肽之界面中形成與突起具有相同或相近大小的互補空腔。
因此，在一個特定實施例中，在蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的 Fc 域的第一次單元的 CH3 結構域中，胺基酸殘基被具有較大側鏈體積的胺基酸殘基替代，從而在其內產生突起，第一次單元的 CH3 結構域可定位在第二次單元的 CH3 結構域內的空腔中，並且在 Fc 域的第二次單元的 CH3 結構域中，胺基酸殘基被具有較小側鏈的胺基酸殘基取代，從而在第二次單元的 CH3 結構域內產生空腔，第一次單元的 CH3 結構域中的突起可在其中定位。
可透過改變編碼多肽的核酸 (例如藉由針對特定位點之突變或藉由肽合成) 來製備突起和空腔。
在一具體實施例中，該 Fc 域之第一次單元的 CH3 結構域中，在位置 366 的蘇胺酸殘基被色胺酸殘基替換 (T366W)，並且在該 Fc 域之第二次單元的 CH3 結構域中的在位置 407 酪胺酸殘基被纈胺酸殘基取代 (Y407V)。在一個實施例中，在 Fc 域之第二次單元中，位置 366 的蘇胺酸殘基另外地被絲胺酸殘基取代 (T366S)，並且位置 368 的白胺酸殘基被丙胺酸殘基取代 (L368A)。
在又一進一步實施例中，在該 Fc 域之第一次單元中，另外地於位置 354 的絲胺酸殘基被半胱胺酸殘基取代 (S354C)，並且在該 Fc 域之第二次單元中，另外地於位置 349 的酪胺酸殘基被半胱胺酸殘基取代 (Y349C)。引入這兩個半胱胺酸殘基導致在 Fc 域之兩個次單元之間形成二硫鍵，從而進一步穩定二聚體 (Carter，J Immunol Methods 248，7-15 (2001))。
在一具體實施例中，能夠與 CD3 結合的抗原結合部分與 Fc 域的第一次單元 (包含“杵”修飾) 融合 (視情況經由能夠結與標靶細胞抗原結合的抗原結合部分)。不希望被理論束縛，能夠與 CD3 結合的抗原結合部分與 Fc 域之含杵次單元的融合，將 (進一步) 最大限度減少包含兩個能夠與 CD3 結合的抗原結合部分之抗原結合分子的產生 (兩個含杵多肽之空間碰撞)。
在一個替代實施例中，促進 Fc 域之第一次單元及第二次單元的締合的修飾包括介導靜電轉向作用的修飾，例如 PCT 公開 WO 2009/089004 中所述。通常，此方法涉及用帶電荷的胺基酸殘基取代兩個 Fc 域次單元界面上的一個或多個胺基酸殘基，從而使同源二聚體調配物在靜電上不利，但異源二聚化在靜電上有利。
減少 Fc 受體結合及 / 或效應子功能之 Fc 域修飾
Fc 域賦予蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子有利的藥物動力學特性，包括較長之血清半衰期，其有助於在標靶組織中獲得良好的蓄積和有利的組織-血液分配比。但是，與此同時，這可能導致不希望地將蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子標靶表現 Fc 受體之細胞，而不是標靶較佳的攜帶抗原的細胞。此外，Fc 受體傳訊途徑的共活化可能導致細胞介素釋放，這在與 T 細胞活化特性和抗原結合分子的長半衰期相結合的情況下，導致在全身投予後細胞介素受體的過度活化和嚴重的副作用。由於 T 細胞的潛在破壞 (例如藉由 NK 細胞)，因此非 T 細胞的 (攜帶 Fc 受體的) 免疫細胞的活化甚至可能降低蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的功效。
因此，在特定實施例中，與天然 IgG 1Fc 域相比，根據本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之 Fc 域表現出降低的對 Fc 受體的結合親和力及/或效應子功能降低。在一個此類實施例中，Fc 域 (或包含所述 Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 相比於天然 IgG 1Fc 域 (或包含 IgG 1Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 展現出小於 50%、較佳的是小於 20%、更佳的是小於 10% 且最佳的是小於 5% 的對 Fc 受體的結合親和力，及/或相比於天然 IgG 1Fc 域 (或包含 IgG 1Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 展現出小於 50%、較佳的是小於 20%、更佳的是小於 10% 且最佳的是小於 5% 的效應子功能。在一個實施例中，Fc 域 (或包含所述 Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 實質上不與 Fc 受體結合及/或誘導效應子功能。在一個特定實施例中，Fc 受體為 Fcγ 受體。在一個實施例中，Fc 受體為人 Fc 受體。在一個實施例中，Fc 受體為活化 Fc 受體。在一個具體實施例中，Fc 受體為活化人 Fcγ 受體，更具體地為人 FcγRIIIa、FcγRI 或 FcγRIIa，最具體地為 FcγRIIIa。在一個實施例中，效應子功能為選自 CDC、ADCC、ADCP 和細胞介素分泌所組成之群組之一種或多種。在一個特定實施例中，該效應子功能為 ADCC。在一個實施例中，與天然 IgG 1Fc 域相比，Fc 域對新生 Fc 受體 (FcRn) 表現出基本類似的結合親和力。當 Fc 域 (或包含所述 Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 展現天然 IgG 1Fc 域 (或包含 IgG 1Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 對 FcRn 的結合親和力的大於約 70%、特定而言大於約 80%、更特定而言大於約 90% 時，將達到實質上類似與 FcRn 的結合。
在某些實施例中，與非工程改造 Fc 域相比，工程改造的 Fc 域對 Fc 受體具有降低的結合親和力及/或降低的效應子功能。在特定實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之 Fc 域包含一種或多種胺基酸突變，其降低 Fc 域對 Fc 受體的結合親和力及/或效應子功能。通常，在 Fc 域之兩個次單元中的每個中都存在相同的一個或多個胺基酸突變。在一個實施例中，該胺基酸突變降低 Fc 域 與 Fc 受體的結合親和力。在一個實施例中，該胺基酸突變將 Fc 域與 Fc 受體的結合親和力降低至少 2 倍、至少 5 倍或至少 10 倍。在存在多於一種降低胺基酸對 Fc 受體的結合親和力的胺基酸突變的實施例中，這些胺基酸突變的組合可使 Fc 域對 Fc 受體的結合親和力降低至少 10 倍、至少 20 倍或甚至至少 50 倍。在一個實施例中，與包含非工程改造 Fc 域之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子相比，包含工程改造 Fc 域之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子展現與 Fc 受體的結合親和力少於 20%、特定而言少於 10%、更特定而言少於 5%。在一個特定實施例中，Fc 受體為 Fcγ 受體。在一些實施例中，該 Fc 受體為人 Fc 受體。在一些實施例中，該 Fc 受體為活化的 Fc 受體。在一個具體實施例中，Fc 受體為活化人 Fcγ 受體，更具體地為人 FcγRIIIa、FcγRI 或 FcγRIIa，最具體地為 FcγRIIIa。較佳地，減少與這些受體中的每個之結合。在一些實施例中，亦降低與互補成分的結合親和力，即與 C1q 的特異性結合親和力。在一個實施例中，不降低與新生 Fc 受體 (FcRn) 之結合親和力。當 Fc 域 (或包含所述 Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 展現出非工程改造形式的 Fc 域 (或包含所述非工程形式的 Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 對 FcRn 的結合親和力的大於約 70% 時，將達到實質上類似與 FcRn 的結合，即保留 Fc 域對所述受體的結合親和力。Fc 域或包含所述 Fc 域的本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可展現出此等親和力的大於約 80% 且甚至大於約 90%。在某些實施例中，與未經工程改造 Fc 域相比，對蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之 Fc 域進行工程改造以獲得降低的效應子功能。降低的效應子功能可包括但不限於以下一種或多種：降低補體依賴性細胞毒性 (CDC)、抗體依賴型細胞介導的細胞毒性 (ADCC)、降低抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP)、減少細胞介素分泌、減少抗原呈遞細胞的免疫複合體介導的抗原攝取、減少與 NK 細胞的結合、減少與巨噬細胞的結合、減少與單核細胞的結合、減少與多形核細胞的結合、減少直接傳訊誘導的細胞凋亡、減少靶標結合抗體的交聯、降低樹突狀細胞成熟度或減少 T 細胞引發。在一個實施例中，降低的效應子功能選自由降低的 CDC、降低的 ADCC、降低的 ADCP 和減少的細胞介素分泌所組成之群組之一種或多種。在一個特定實施例中，降低的效應子功能為降低的 ADCC。在一個實施例中，降低的 ADCC 小於非工程改造 Fc 域 (或包含非工程改造 Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子) 誘導的 ADCC 的 20%。
在一個實施例中，降低該 Fc 域與 Fc 受體的結合親和力及/或效應子功能的胺基酸突變為胺基酸取代。在一個實施例中，該 Fc 域包含在選自由 E233、L234、L235、N297、P331 及 P329 所組成之群組之位置的胺基酸取代。在一個更具體之實施例中，該 Fc 域包含在選自 L234、L235 及 P329 的位置的胺基酸取代。在一些實施例下，Fc 域包含胺基酸取代 L234A 或 L235A。在一個此類實施例中，Fc 域為 IgG 1Fc 域，特定而言人 IgG 1Fc 域。在一個實施例中，Fc 域包含在位置 P329 的胺基酸取代。在一更具體之實施例中，胺基酸取代為 P329A 或 P329G，特定而言 P329G。在一個實施例中，Fc 域包含在位置 P329 的胺基酸取代，以及在選自 E233、L234、L235、N297 和 P331 的位置的另一個胺基酸取代。在一個更具體之實施例中，該另一個胺基酸取代為 E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D 或 P331S。在特定實施例中，Fc 域包含在位置 P329、L234 和 L235 的胺基酸取代。在更特定的實施例中，Fc 域包含胺基酸突變 L234A、L235A 和 P329G (「P329G LALA」)。在一個此類實施例中，Fc 域為 IgG 1Fc 域，特定而言人 IgG 1Fc 域。胺基酸取代的「P329G LALA」組合幾乎完全消除了人 IgG 1Fc 域的 Fcγ 受體 (以及補體) 結合，如 PCT 公開號 WO 2012/130831 所述，其全文以引用方式併入本文。WO 2012/130831 還描述了用於製備此等突變 Fc 域的方法及測定其性質 (例如 Fc 受體結合或效應子功能) 的方法。
IgG 4抗體與 IgG 1抗體相比，表現出與 Fc 受體的降低的結合親和力和降低的效應子功能。因此，在一些實施例中，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的 Fc 域為 IgG 4Fc 域，特定而言人 IgG 4Fc 域。在一個實施例中，IgG 4Fc 域包含在位置 S228 的胺基酸取代，具體地包含胺基酸取代 S228P。為進一步降低其與 Fc 受體的結合親和力及/或其效應子功能，在一個實施例中，IgG 4Fc 域包含在位置 L235 的胺基酸取代，具體地胺基酸取代 L235E。在另一實施例中，IgG 4Fc 域包含在位置 P329 的胺基酸取代，具體地包含胺基酸取代 P329G。在一特定實施例中，IgG 4Fc 域包含位置 S228、L235 和 P329 的胺基酸取代，具體地包含胺基酸取代 S228P、L235E 和 P329G。此等 IgG 4Fc 域突變體及其 Fcγ 受體結合性質描述於 PCT 公開號 WO 2012/130831中，其全文以引用方式併入本文。
在一特定實施例中，與天然 IgG 1Fc 域相比，表現出降低的對 Fc 受體的結合親和力及/或降低的效應子功能的 Fc 域，為包含胺基酸取代 L234A、L235A 及視情況 P329G 的人 IgG 1Fc 域，或包含胺基酸取代 S228P、L235E 及視情況 P329G 的人 IgG 4Fc 域。
在某些實施例中，已消除 Fc 域的 N-醣化。在一個此類實施例中，Fc 域包含位置 N297 的胺基酸突變，特定而言天冬醯胺酸被丙胺酸取代 (N297A) 或天冬胺酸取代 (N297D) 之胺基酸取代。
除上文及 PCT 公開號 WO 2012/130831 中所述的 Fc 域以外，具有降低的 Fc 受體結合及/或效應子功能的 Fc 域亦包括被 Fc 域殘基 238、265、269、270、297、327 和 329 中的一個或多個取代者 (美國專利號 6,737,056)。此類 Fc 突變體包括在胺基酸位置 265、269、270、297 和 327 中的兩個或更多個取代的 Fc 突變體，包括所謂的「DANA」Fc 突變體，其中殘基 265 和 297 被丙胺酸所取代 (美國專利號 7,332,581)。
可使用此領域中所公知遺傳或化學方法，透過胺基酸缺失、取代、***或修飾來製備變異型 Fc 域。遺傳方法可包括編碼 DNA 序列的位點特異性突變、PCR、基因合成等。可透過例如測序來驗證核苷酸變化是否正確。
與 Fc 受體之結合可易於藉由 ELISA 測定，或藉由表面電漿子共振 (SPR) 使用標準儀器例如 BIAcore 儀器 (GE Healthcare) 測定，並且 Fc 受體可藉由諸如重組表現來獲得。本文描述了適合的此類結合測定。可替代地，Fc 域或包含 Fc 域的細胞活化雙特異性抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力可使用已知表現特定 Fc 受體的細胞株 (例如表現 FcγIIIa 受體的人 NK 細胞) 來評估。
Fc 域或包含 Fc 域的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的效應子功能可藉由此領域中所公知的方法進行測量。本文描述了用於測量 ADCC 的適合測定。其他用於評估所關注之分子之 ADCC 活性的活體外測定的實例描述於例如：美國專利號 5,500,362；Hellstrom 等人，Proc Natl Acad Sci USA 83，7059-7063 (1986)；及 Hellstrom 等人，Proc Natl Acad Sci USA 82，1499-1502 (1985)；美國專利號 5,821,337；Bruggemann 等人，J Exp Med 166，1351-1361 (1987)。可替代地，可採用非放射性測定方法 (參見例如用於流式細胞術之 ACTI™ 非放射性細胞毒性測定 (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA)；及 CytoTox 96 ®非放射性細胞毒性測定 (Promega, Madison, WI))。用於此等測定的有用的效應細胞包括外周血單核細胞 (PBMC) 及自然殺手 (NK) 細胞。可替代地或另外地，所關注之分子之 ADCC 活性可在例如 Clynes 等人在 Proc Natl Acad Sci USA 95，652-656 (1998) 中揭示的動物模式中在體內評估。
在一些實施例中，減少 Fc 域與互補成分之結合，具體地減少與 C1q 之結合。因此，在一些實施例中，其中 Fc 域被工程改造為具有降低的效應子功能，該降低的效應子功能包括降低的 CDC。可進行 C1q 結合測定以測定蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子能否結合 C1q 並因此具有 CDC 活性。參見例如 WO 2006/029879 及 WO 2005/100402 中的 C1q 和 C3c 結合 ELISA。為評估補體活化，可實施 CDC 測定 (參見例如：Gazzano-Santoro 等人，J Immunol Methods 202，163 (1996)；Cragg 等人，Blood 101，1045-1052 (2003)；及 Cragg 和 Glennie，Blood 103，2738-2743 (2004))。
抗原結合部分
本發明的抗原結合分子是雙特異性的，即它包含至少兩個能夠特異性結合兩個不同抗原決定子的抗原結合部分。根據本發明，抗原結合部分為 Fab 分子 (即，由重鏈和輕鏈構成的抗原結合域，重鏈和輕鏈各均包含變異區和恆定區)。在一個實施例中，該 Fab 分子為人 Fab 分子。在另一實施例中，該 Fab 分子是人源化的。在另一實施例中，該 Fab 分子包含人重鏈及輕鏈恆定區。
抗原結合部分中之至少一個為交換型 Fab 分子。此類修飾防止來自不同 Fab 分子的重鏈和輕鏈錯配，從而在重組產生中提高本發明的蛋白酶可活化 T 細胞活化雙特異性分子的產率和純度。在可用於本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的特定交換型 Fab 分子中，Fab 輕鏈和 Fab 重鏈的恆定區被交換。在另一可用於本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的特定交換型 Fab 分子中，Fab 輕鏈和 Fab 重鏈的可變區被交換。
在根據本發明的一具體實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子能夠同時結合標靶細胞抗原 (特定而言腫瘤細胞抗原) 和 CD3。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子能夠藉由同時結合標靶細胞抗原和 CD3 來交聯 T 細胞和標靶細胞。在一更具體實施例中，此等同時結合導致標靶細胞、特定而言腫瘤細胞的裂解。在一個實施例中，此等同時結合導致 T 細胞活化。在其他實施例中，此等同時結合導致 T 淋巴細胞、特定而言細胞毒性 T 淋巴細胞之細胞回應，該細胞回應選自：增殖、分化、細胞介素分泌、細胞毒性效應分子釋放、細胞毒性活性及活化標記物之表現。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子與 CD3 的結合而未同時與標靶細胞抗原結合不會導致 T 細胞活化。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子能夠將 T 細胞之細胞毒活性再導引至標靶細胞。在一個特定實施例中，所述重定向不依賴於標靶細胞之 MHC 介導的肽抗原呈遞及/或 T 細胞之特異性。
特定而言，根據本發明之任何實施例的 T 細胞為細胞毒性 T 細胞。在一些實施例中，T 細胞為 CD4 +或 CD8 +細胞，特定而言 CD8 +T 細胞。
CD3 結合部分
本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含至少一個能夠與 CD3 結合的抗原結合部分 (本文亦稱為“CD3 抗原結合部分”或“第一抗原結合部分”)。在一具體實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含不多於一個能夠與 CD3 結合的抗原結合部分。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子提供與 CD3 單價結合。CD3 抗原結合是交換型 Fab 分子，即 Fab 分子，其中 Fab 重鏈和輕鏈的可變區或恆定區被交換。在其中有多於一個能夠與標靶細胞抗原結合之抗原結合部分包含於蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之實施例中，與 CD3 結合之抗原結合部分較佳的為交換型 Fab 分子，並且與標靶細胞抗原結合之第二抗原結合部分為習用 Fab 分子。
在一特定實施例中，CD3 是 人 CD3 或食蟹獼猴 CD3，最特定的是人 CD3。在一特定實施例中，CD3 抗原結合部分與人及食蟹獼猴 CD3 交叉反應 (即與之特異性結合)。在一些實施例中，第一抗原結合部分能夠與 CD3 的ε次單元結合。
CD3 抗原結合部分包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4 和 SEQ ID NO: 10 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22 所組成之群組。
在一個實施例中，CD3 抗原結合部分包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈 CDR1、重鏈 CDR2 之 SEQ ID NO: 4、重鏈 CDR3 之 SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 20 之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 21 之輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 22 之輕鏈 CDR3。
在一個實施例中，CD3 抗原結合部分包含重鏈可變區序列及輕鏈可變區序列，該重鏈可變區序列是與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同，且該輕鏈可變區序列是與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同。
在一個實施例中，CD3 抗原結合部分包含 SEQ ID NO:16 之重鏈可變區序列，及 SEQ ID NO:23 之輕鏈可變區序列。
標靶細胞抗原結合部分
本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含至少一個能夠與標靶細胞抗原結合的抗原結合部分 (本文亦稱為“標靶細胞抗原結合部分”或“第二抗原結合部分”或“第三抗原結合部分”)。在某些實施例中，本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含二個能夠與標靶細胞抗原結合的抗原結合部分。在一特定此等實施例中，這些抗原結合部分之各者與相同之抗原決定子特異性結合。在一甚至更特定實施例中，所有這些抗原結合部分都是相同的。在一個實施例中，本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含能夠與標靶細胞抗原結合的免疫球蛋白分子。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含不多於二個能夠與標靶細胞抗原結合的抗原結合部分。
在一較佳實施例中，標靶細胞抗原結合部分是 Fab 分子，特定而言習用 Fab 分子，其結合特定抗原決定子，並且能夠將蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子引導至標靶位點，例如帶有抗原決定子之特定類型的腫瘤細胞。
在某些實施例中，標靶細胞抗原結合部分與細胞表面抗原特異性結合。在一特定實施例中，標靶細胞抗原結合部分特異性結合至標靶細胞表面上的葉酸受體 1 (FolR1)。在另一特定此類實施例中，標靶細胞抗原結合部分特異性結合至酪胺酸酶相關蛋白 1 (TYRP1)，特定而言人 TYRP1。
在某些實施例中，標靶細胞抗原結合部分針對與病理狀況相關的抗原，諸如呈現在腫瘤細胞或病毒感染細胞上的抗原。適合的抗原是細胞表面抗原，例如但不限於細胞表面受體。在特定實施例中，該抗原為人抗原。在一特定實施例中，標靶細胞抗原是選自葉酸受體 1 (FolR1) 和酪胺酸酶相關蛋白 1 (TYRP1)。
在特定實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含至少一個對 FolR1 具特異性的抗原結合部分。在一個實施例中，FolR1 為人 FolR1。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含至少一個對人 FolR1 具特異性並且不與人 FolR2 或人 FolR3 結合的抗原結合部分。在一個實施例中，對 FolR1 具特異性的抗原結合部分包含至少一個重鏈互補決定區 (CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組。
在一個實施例中，對 FolR1 具特異性的抗原結合部分包含 SEQ ID NO: 54 的重鏈 CDR1、SEQ ID NO: 55 的重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 56 的重鏈 CDR3、SEQ ID NO: 20 的輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 21 的輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 22 的輕鏈 CDR3。
在進一步實施例中，對 FolR1 具特異性的抗原結合部分包含重鏈可變區序列及輕鏈可變區序列，該重鏈可變區序列是與 SEQ ID NO: 53 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同，且該輕鏈可變區序列是與 SEQ ID NO: 23 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同，或保有功能性之其變異體。
在一個實施例中，對 FolR1 具特異性的抗原結合部分包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO:53 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO:23 之胺基酸序列。
遮蔽部分
本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含至少一個遮蔽部分。其他人已試圖藉由用結合部分所辨識的抗原片段覆蓋結合部分來遮蔽抗體的結合 (例如，WO2013128194)。此方法有數種限制。例如，使用該抗原使降低結合部分的親和力的靈活性較小。這是因為親和力必須足夠高才能被抗原遮蔽所可靠地遮蔽。此外，解離的抗原可能在體內與其同源受體結合並交互作用，並造成對表現此受體的細胞的非所欲訊息。相反地，本文描述的方法使用抗獨特型抗體或其片段作為遮蔽。設計有效遮蔽部分的兩個相衝突的考慮是 1. 遮蔽的有效性和 2. 遮蔽的可逆性。如果親和力太低，遮蔽將是無效的。然而，如果親和力太高，遮蔽過程可能不容易可逆。無法預測高親和力的抗獨特型遮蔽或低親和力的抗獨特型遮蔽運作更好。如本文所述，更高親和力的遮蔽部分在遮蔽抗原結合方面總體表現更好，同時，可以有效移去以活化分子。在一個實施例中，抗獨特型遮蔽的KD 為1-8 nM。在一個實施例中，抗獨特型遮蔽在 37°C 下具有 2 nM 的 KD。在一個具體實施例中，遮蔽部分辨識能夠結合 CD3 (例如人 CD3) 的第一抗原結合部分的獨特型。在一個具體實施例中，遮蔽部分辨識能夠結合標靶細胞抗原的第二抗原結合部分的獨特型。
在一個實施例中，遮蔽部分遮蔽 CD3 結合部分並包含以下的至少一者：SEQ ID NO: 2 之重鏈 CDR1、SEQ ID NO: 4 之重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 10 之重鏈 CDR3、SEQ ID NO: 20 之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 21 之輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 22 之輕鏈 CDR3。在一個實施例中，遮蔽部分包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈 CDR1、SEQ ID NO: 4 之重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 10 之重鏈 CDR3、SEQ ID NO: 20 之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 21 之輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 22 之輕鏈 CDR3。
在一個實施例中，遮蔽部分遮蔽 CD3 結合部分並包含與 SEQ ID NO: 16 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。在一個實施例中，遮蔽部分遮蔽 CD3 結合部分並包含 SEQ ID NO: 23 的多肽序列。
在一個實施例中，遮蔽部分包含以下的至少一者： SEQ ID NO: 58 的重鏈 CDR1、選自由 SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 84 和 SEQ ID NO: 86 所組成之群組之重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 60 的 重鏈 CDR3、選自由 SEQ ID NO: 62 和 SEQ ID NO: 82 所組成之群組之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 63 的輕鏈 CDR2、和選自由 SEQ ID NO: 64 和 SEQ ID NO: 88 所組成之群組之輕鏈 CDR3。
在一個實施例中，遮蔽部分包含以下的至少一者：SEQ ID NO: 58 之重鏈 CDR1、SEQ ID NO: 59 之重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 60 之重鏈 CDR3、SEQ ID NO: 62 之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 63 之輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 64 之輕鏈 CDR3。在一個實施例中，遮蔽部分包含與 SEQ ID NO: 57 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 61 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的輕鏈可變區序列，或保有功能性之其變異體。
在一個實施例中，遮蔽部分包含以下的至少一者：SEQ ID NO: 58 之重鏈 CDR1、SEQ ID NO: 59 之重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 60 之重鏈 CDR3、SEQ ID NO: 82 之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 63 之輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 64 之輕鏈 CDR3。
在一個實施例中，遮蔽部分包含以下的至少一者：SEQ ID NO: 58 之重鏈 CDR1、SEQ ID NO: 84 之重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 60 之重鏈 CDR3、SEQ ID NO: 82 之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 63 之輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 64 之輕鏈 CDR3。
在一個實施例中，遮蔽部分包含以下的至少一者：SEQ ID NO: 58 之重鏈 CDR1、SEQ ID NO: 86 之重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 60 之重鏈 CDR3、SEQ ID NO: 82 之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 63 之輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 64 之輕鏈 CDR3。
在一個實施例中，遮蔽部分包含以下的至少一者：SEQ ID NO: 59 之重鏈 CDR1、SEQ ID NO: 86 之重鏈 CDR2、SEQ ID NO: 60 之重鏈 CDR3、SEQ ID NO: 62 之輕鏈 CDR1、SEQ ID NO: 63 之輕鏈 CDR2 和 SEQ ID NO: 88 之輕鏈 CDR3。
在一較佳實施例中，遮蔽部分是人源化的。在一較佳實施例中，用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽是人源化的。人源化免疫球蛋白的方法在本領域是眾所周知的且於本文中說明。
在一個實施例中，所提供的是獨特型特異性多肽，其用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區序列及輕鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與選自由 SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85 和 SEQ ID NO:89 所組成之群組之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同，且該輕鏈可變區序列是與選自由 SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:87 和 SEQ ID NO:90 所組成之群組之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同。
在一較佳實施例中，所提供的是獨特型特異性多肽，其用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區序列及輕鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與選自由 SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO:83 和 SEQ ID NO:85 所組成之群組之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同，且該輕鏈可變區序列與選自由 SEQ ID NO: 80 和 SEQ ID NO:81 所組成之群組之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同。
在一個實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含與 SEQ ID NO: 79 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 80 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之輕鏈可變區序列，在一較佳實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含 SEQ ID NO: 79 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 80 之輕鏈可變區序列，
在一個實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含與 SEQ ID NO: 79 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之輕鏈可變區序列，在一較佳實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含 SEQ ID NO: 79 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 81 之輕鏈可變區序列，
在一個實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含與 SEQ ID NO: 83 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之輕鏈可變區序列，在一較佳實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含 SEQ ID NO: 83 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 81 之輕鏈可變區序列，
在一個實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含與 SEQ ID NO: 85 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之輕鏈可變區序列，在一較佳實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含 SEQ ID NO: 85 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 81 之輕鏈可變區序列，
在一個實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含與 SEQ ID NO: 84 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 87 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之輕鏈可變區序列，在一較佳實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含 SEQ ID NO: 84 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 87 之輕鏈可變區序列，
在一個實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含與 SEQ ID NO: 89 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 90 至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之輕鏈可變區序列，在一較佳實施例中，所提供的是用於可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點的獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含 SEQ ID NO: 89 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 90 之輕鏈可變區序列，
在一個實施例中，遮蔽部分是抗獨特型 scFv，其包含與 SEQ ID NO: 91 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。在一個實施例中，該抗獨特型 scFv 包含 SEQ ID NO: 91 之多肽序列。
在一個實施例中，遮蔽部分是抗獨特型 scFv，其包含與 SEQ ID NO: 92 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。在一個實施例中，該抗獨特型 scFv 包含 SEQ ID NO: 92 之多肽序列。
在一個實施例中，遮蔽部分是抗獨特型 scFv，其包含與 SEQ ID NO: 93 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。在一個實施例中，該抗獨特型 scFv 包含 SEQ ID NO: 93 之多肽序列。
在一個實施例中，遮蔽部分是抗獨特型 scFv，其包含與 SEQ ID NO: 94 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。在一個實施例中，該抗獨特型 scFv 包含 SEQ ID NO: 94 之多肽序列。
能夠與 CD3 和 FolR1 結合的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子
上文所述的能夠與 CD3 結合的第一抗原結合部分、上文所述的能夠與 FolR1 結合的第二抗原結合部分、上文所述的 Fc 域和上文所述的遮蔽部分可以以各種構型彼此融合。例示性構型和序列在下文揭示。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含與 SEQ ID NO: 65 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、與 SEQ ID NO: 66 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、以及與 SEQ ID NO: 67 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含 SEQ ID NO: 65 的多肽序列、SEQ ID NO: 66 的多肽序列和 SEQ ID NO: 67 的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含與 SEQ ID NO: 74 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、與 SEQ ID NO: 66 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、以及與 SEQ ID NO: 67 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含 SEQ ID NO: 74 的多肽序列、SEQ ID NO: 66 的多肽序列和 SEQ ID NO: 67 的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含與 SEQ ID NO: 76 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、與 SEQ ID NO: 66 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、以及與 SEQ ID NO: 67 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含 SEQ ID NO: 76 的多肽序列、SEQ ID NO: 66 的多肽序列和 SEQ ID NO: 67 的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含與 SEQ ID NO: 95 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、與 SEQ ID NO: 66 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、以及與 SEQ ID NO: 67 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含 SEQ ID NO: 95 的多肽序列、SEQ ID NO: 66 的多肽序列和 SEQ ID NO: 67 的多肽序列。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含一個 SEQ ID NO: 95 的多肽、一個 SEQ ID NO: 66 的多肽和二個 SEQ ID NO: 67 的多肽。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含與 SEQ ID NO: 96 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、與 SEQ ID NO: 66 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、以及與 SEQ ID NO: 67 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含 SEQ ID NO: 96 的多肽序列、SEQ ID NO: 66 的多肽序列和 SEQ ID NO: 67 的多肽序列。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含一個 SEQ ID NO: 96 的多肽、一個 SEQ ID NO: 66 的多肽和二個 SEQ ID NO: 67 的多肽。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含與 SEQ ID NO: 97 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、與 SEQ ID NO: 66 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、以及與 SEQ ID NO: 67 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含 SEQ ID NO: 97 的多肽序列、SEQ ID NO: 66 的多肽序列和 SEQ ID NO: 67 的多肽序列。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含一個 SEQ ID NO: 97 的多肽、一個 SEQ ID NO: 66 的多肽和二個 SEQ ID NO: 67 的多肽。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含與 SEQ ID NO: 98 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、與 SEQ ID NO: 66 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列、以及與 SEQ ID NO: 67 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含 SEQ ID NO: 98 的多肽序列、SEQ ID NO: 66 的多肽序列和 SEQ ID NO: 67 的多肽序列。在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含一個 SEQ ID NO: 98 的多肽、一個 SEQ ID NO: 66 的多肽和二個 SEQ ID NO: 67 的多肽。
連接子
在一個態樣中，本發明涉及可逆地隱匿分子的抗原結合之抗原結合之獨特型特異性多肽。在一個實施例中，本發明涉及可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點之獨特型特異性多肽。這種可逆地隱匿抗 CD3 抗原結合位點之獨特型特異性多肽必須能夠結合抗 CD3 抗原結合位點的獨特型，從而減少或取消抗 CD3 抗原結合位點與 CD3 的結合。在一個實施例中，該獨特型特異性多肽是抗獨特型 scFv。在一個實施例中，該獨特型特異性多肽透過連接子共價接附於該分子。在一個實施例中，該獨特型特異性多肽透過多於一個連接子共價接附於該分子。在一個實施例中，該獨特型特異性多肽透過二個連接子共價接附於該分子。在一個實施例中，該連接子是肽連接子。在一個實施例中，該連接子是蛋白酶可截切之連接子。
在一個實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子包含具有蛋白酶辨識序列之連接子，其包含與 SEQ ID: 68、70、75、99、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126 或 127 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的多肽序列。在一個實施例中，蛋白酶辨識位點包含 SEQ ID NO: 100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113 或 114 之多肽序列。在一較佳實施例中，該蛋白酶辨識序列包含 SEQ ID NO: 114 之多肽序列。
在一個實施例中，蛋白酶是選自由以下所組成之群組：金屬蛋白酶，例如基質金屬蛋白酶 (MMP)1-28 及解整聯蛋白和金屬蛋白酶 (ADAM) 2、7-12、15、17-23、28-30 和 33、絲胺酸蛋白酶，例如尿激酶型血纖維蛋白溶酶原活化物和間質蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、天冬胺酸蛋白酶、和組織蛋白酶家族的成員。在一個具體實施例中，蛋白酶是 MMP9 或 MMP2。在一進一步具體實施例中，蛋白酶是間質蛋白酶。
多核苷酸
本發明進一步提供編碼本文所述的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或其片段的經分離之多核苷酸。在一些實施例中，該片段為抗原結合片段。
編碼本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的多核苷酸可為編碼整個蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的單一多核苷酸來表現或為共表現多個 (例如兩個或多個) 多核苷酸。共表現的由多核苷酸編碼的多肽可透過例如二硫鍵或其他方式締合以形成功能性蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。例如，抗原結合部分的輕鏈部分可由與蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的部分分開的多核苷酸編碼，所述部分包含抗原結合部分的重鏈部分、Fc 域次單元和視情況另一抗原結合部分 (的一部分)。當共表現時，重鏈多肽將與輕鏈多肽締合以形成抗原結合部分。在另一實例中，包含兩個 Fc 域次單元之一和視情況一個或多個抗原結合部分 (的一部分) 的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的部分，可由與包含兩個 Fc 域次單元之另一個和視情況抗原結合部分 (的一部分) 的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的部分不同的多核苷酸來編碼。當共表現時，Fc 域次單元將締合以形成 Fc 域。
在一些實施例中，經分離之多核苷酸編碼根據本文所述之本發明的整個蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。在其他實施例中，經分離之多核苷酸編碼根據本文所述之本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子中所包含的多肽。
在另一實施例中，本發明涉及編碼本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或其片段的經分離之多核苷酸，其中該多核苷酸包含編碼可變區序列的序列。在另一實施例中，本發明涉及編碼本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或其片段的經分離之多核苷酸，其中該多核苷酸包含編碼如 SEQ ID NO: 65、66、67、69、74、76、91、92、93、94、95、96、97、98 所示的多肽序列或其片段之序列。
本發明之編碼獨特型特異性多肽之多核苷酸可表現為編碼完整的獨特型特異性多肽的單一多核苷酸，或為經共表現的多個 (例如兩個或更多個) 多核苷酸。由共表現的多核苷酸所編碼之多肽可透過例如二硫鍵或其他方式締合以形成功能性獨特型特異性多肽，例如遮蔽部分。例如，在一個實施例中，獨特型特異性多肽是抗獨特型 scFv (單鏈可變片段)，其中抗獨特型 scFv 的輕鏈可變部分可由與包含抗獨特型 scFv 的重鏈可變部分的抗獨特型 scFv 的部分分開的多核苷酸編碼。當共表現時，重鏈多肽將與輕鏈多肽締合以形成抗獨特型 scFv。在一些實施例中，經分離之多核苷酸編碼根據本發明所述之獨特型特異性多肽。
在某些實施例中，多核苷酸或核酸為 DNA。在其他實施例中，本發明之多核苷酸為 RNA，例如，呈信使 RNA (mRNA) 的形式。本發明之 RNA 可以為單鏈或雙鏈 RNA。
重組方法
本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可例如藉由固態肽合成 (例如 Merrifield 固相合成) 或重組產生獲得。在重組產生時，將例如上文所述之編碼蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (片段) 的一種或多種多核苷酸分離並***一種或多種載體中，以在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此等多核苷酸可易於使用習用方法進行分離和測序。在一個實施例中，提供了包含本發明之多核苷酸中的一種或多種的載體，較佳的是包含表現載體。熟習本技術領域者所公知的方法可用來構建含有蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (片段) 的編碼序列以及適當的轉錄/轉譯控制訊息的表現載體。這些方法包括活體外重組 DNA 技術、合成技術及體內重組/基因重組。參見例如在 Maniatis 等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，N.Y.(1989)；及 Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing Associates and Wiley Interscience，N.Y (1989) 中所述之技術。表現載體可以為質體、病毒的一部分，亦可以為核酸片段。表現載體包括表現匣，其中將編碼蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (片段) (即編碼區) 的多核苷酸是經選殖與啟動子及/或其他轉錄或轉譯控制元件以可操作地締合。如本文所用的「編碼區」，為由轉譯成胺基酸的密碼子組成的核酸的一部分。儘管 「終止密碼子」 (TAG、TGA 或 TAA) 不轉譯成胺基酸，但可以將其視為編碼區的一部分 (如果存在)，但是任何側翼序列 (例如啟動子、核醣體結合位點、轉錄終止子、內含子、5’ 和 3’ 非轉譯區等) 不屬於編碼區的一部分。兩個或更多個編碼區可存在於單個多核苷酸構建體中，例如，存在於單一載體上，或存在於分開的多核苷酸構建體中，例如，存在於分開的 (不同的) 載體上。此外，任何載體可含有單一編碼區，或可包含兩個或更多個編碼區，例如，本發明之載體可編碼一種或多種多肽，該多肽經由蛋白水解切割為轉譯後或共轉譯分開成最終蛋白。另外，本發明之載體、多核苷酸、或核酸可編碼異源編碼區，其與編碼本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (片段) 的多核苷酸或其變異體或衍生物融合或未融合。異源編碼區包括但不限於專門的元件或基序 (諸如分泌傳訊肽) 或異源功能域。可操作締合 (operable association) 是指當基因產物 (例如，多肽) 的編碼區與一個或多個調控序列相締合，從而使基因產物的表現處於調控序列的影響或控制之下。如果啟動子功能的誘導導致編碼所需基因產物的 mRNA 轉錄，並且兩個 DNA 片段之間的連接子性質不干擾表現調控序列指導基因產物表現的能力，亦不干擾 DNA 模板被轉錄的能力，則兩個 DNA 片段 (例如多肽編碼區以及與之相締合的啟動子) 「可操作地締合」。因此，如果啟動子能夠影響核酸的轉錄，則該啟動子區將與編碼多肽的核酸可操作地締合。啟動子可以為細胞特異性啟動子，其僅指導預定細胞中 DNA 的大量轉錄。除啟動子外，其他轉錄控制元件，例如增強子、操縱子、抑制子和轉錄終止信號，可與多核苷酸可操作地締合以指導細胞特異性轉錄。本文公開了合適的啟動子及其他轉錄控制區。各種轉錄控制區為本領域的技術人員所公知的。這些包括但不限於在脊椎動物細胞中起作用的轉錄控制區，諸如但不限於來自巨細胞病毒 (例如，立即早期啟動子，與內含子-A 接合)、猿猴病毒 40 (例如，早期啟動子) 和反轉錄病毒 (例如，勞氏肉瘤病毒) 之啟動子和增強片段。其他轉錄控制區包括來源於脊椎動物基因者，例如肌動蛋白、熱休克蛋白、牛生長激素和兔 â-球蛋白以及能夠控制真核細胞中基因表現的其他序列。另外適合的轉錄控制區包括組織特異性啟動子和增強子以及可誘導型啟動子 (例如，啟動子可誘導的四環素)。類似地，各種轉譯控制元件為本領域的普通技術人員所公知的。其中包括但不限於核醣體結合位點、轉譯起始和終止密碼子以及來源於病毒體系的元件 (特定而言內部核醣體進入位點或 IRES，亦稱為 CITE 序列)。表現匣還可包含其他特徵，例如複製起點及/或染色體整合元件，例如反轉錄病毒長末端重複序列 (LTR) 或腺相關病毒 (AAV) 反向末端重複序列 (ITR)。
本發明之多核苷酸及核酸編碼區可與編碼分泌或傳訊肽的另外的編碼區締合，該分泌或傳訊肽指導由本發明之多核苷酸編碼的多肽的分泌。例如，如果蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之分泌為所欲，可將編碼訊息序列的 DNA 置於編碼本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或其片段的核酸的上游。根據訊息假說，哺乳動物細胞所分泌之蛋白質具有傳訊肽或分泌前導序列，其在增長的蛋白質鏈透過粗內質網輸出時從成熟蛋白質上裂解下來。本領域的普通技術人員將認識到，脊椎動物細胞所分泌之多肽通常具有與多肽之 N 端融合的傳訊肽，其從轉譯後的多肽上裂解下來以產生分泌或「成熟」形式的多肽。在某些實施例中，使用天然傳訊肽，例如免疫球蛋白重鏈或輕鏈傳訊肽或該序列的功能性衍生物，該功能性衍生物保留導引與之可操作地締合的分泌之能力 。可替代地，可使用異源哺乳動物傳訊肽或其功能性衍生物。例如，野生型前導序列可被人組織胞漿素原活化物 (TPA) 或小鼠 β-葡萄醣醛酸苷酶的前導序列取代。
編碼可用於促進以後的純化 (例如組胺酸標籤) 或輔助標記蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的短蛋白質序列的 DNA 可包括在編碼多核苷酸的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (片段) 的內部或末端。
在另一個實施例中，提供了包含本發明之一種或多種多核苷酸的宿主細胞。在某些實施例中，提供了包含本發明之一種或多種載體的宿主細胞。多核苷酸和載體可分別單獨或組合結合本文中相對於多核苷酸和載體所述的任何特徵。在一個此類實施例中，宿主細胞包含載體 (例如已用該載體轉形或轉染)，該載體包含編碼本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (的一部分) 的多核苷酸。如本文所用的術語「宿主細胞」，係指可被工程改造以產生本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或其片段的任何類型的細胞系統。適於複製並支持蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的表現的宿主細胞為本技術領域中所公知。可在適當情況下用特定的表現載體轉染或轉導此等細胞，並且可生長大量包含載體的細胞以接種大規模發酵槽，獲得足夠量的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子以用於臨床應用。合適的宿主細胞包括原核微生物 (例如大腸桿菌) 或各種真核細胞 (例如中國倉鼠卵巢細胞 (CHO)、昆蟲細胞等)。例如，多肽可能在細菌中產生，特定而言在無需醣化的情況下。在表現後，多肽可與細菌細胞糊中的可溶性部分分離，並可經過進一步純化。除原核生物以外，真核微生物 (如絲狀真菌或酵母菌) 亦為合適的多肽編碼載體的克隆或表現宿主，包括其醣化途徑已被「人源化」的真菌和酵母菌株，從而導致具有部分或完全人醣化模式的多肽的產生。參見：Gerngross，Nat Biotech 22，1409-1414 (2004)；及 Li 等人，Nat Biotech 24，210-215 (2006)。用於表現 (醣化) 多肽的合適的宿主細胞亦來源於多細胞生物 (無脊椎動物和脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物和昆蟲細胞。已鑑定出許多桿狀病毒株，它們可以與昆蟲細胞結合使用，特特定而言用於轉染草地貪夜蛾 ( Spodoptera frugiperda) 細胞。植物細胞培養物亦可以用作宿主。參見例如美國專利第 5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978 及 6,417,429 號 (描述在基因轉殖植物中產生抗體的 PLANTIBODIES TM技術)。脊椎動物細胞亦可用作宿主。例如，可使用適於在懸浮液中生長的哺乳動物細胞株。可用的哺乳動物宿主細胞株的其他實例包括：由 SV40 (COS-7) 轉形的猴腎 CV1 系；人胚胎腎系 (如 Graham 等人，J Gen Virol 36，59 (1977) 中所述之 293 或 293T 細胞)；幼地鼠腎細胞 (BHK)；小鼠睾丸支持細胞 (如 Mather，Biol Reprod 23，243-251 (1980) 中所述之 TM4 細胞)；猴腎細胞 (CV1)；非洲綠猴腎細胞 (VERO-76)；人宮頸癌細胞 (HELA)；犬腎細胞 (MDCK)；Buffalo 大鼠肝細胞 (BRL 3A)；人肺細胞 (W138)；人肝細胞 (Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤細胞 (MMT 060562)；TRI 細胞 (如 Mather 等人，Annals N.Y.Acad Sci 383，44-68 (1982) 所述)；MRC 5 細胞；及 FS4 細胞。其他可用的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞，包括 dhfr -CHO 細胞 (Urlaub 等人，Proc Natl Acad Sci USA 77，4216 (1980))；及骨髓瘤細胞株，例如 YO、NS0、P3X63 和 Sp2/0。有關某些適用於蛋白質產生的哺乳動物宿主細胞株的綜述，參見例如：Yazaki 和 Wu，Methods in Molecular Biology，Vol. 248 (B.K.C. Lo 主編，Humana Press，Totowa, NJ)，pp. 255-268 (2003)。宿主細胞包括培養的細胞，例如哺乳動物培養細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、細菌細胞和植物細胞等，還包括轉基因動物、轉基因植物或培養的植物或動物組織內的細胞。在一個實施例中，宿主細胞為真核細胞，較佳的是哺乳動物細胞，例如中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞、人胚腎 (HEK) 細胞或淋巴樣細胞 (例如，Y0、NS0、Sp20 細胞)。
標準技術為此領域中所公知，可在這些系統中表現外源基因。可對表現包含抗原結合域 (例如抗體) 的重鏈或輕鏈的多肽的細胞進行工程改造，使其亦表現其他抗體鏈，從而使表現的產物為兼有重鏈和輕鏈的抗體。
在一個實施例中，提供製造如本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之方法，其中該方法包含在適合表現蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的條件下，培養包含編碼如本文所提供之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的多核苷酸之宿主細胞，以及從該宿主細胞 (或宿主細胞培養基) 回收該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。
蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的組件是彼此基因融合。蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可設計為使其組件直接彼此融合或透過連接子序列間接融合。可根據此領域中所公知的方法測定連接子的組成和長度，並可以對其效力進行測試。蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的不同組件之間的連接子序列的實例見於本文提供的序列中。如果需要，還可以包括另外的序列以摻入切割位點，以分離融合體的各種組件，例如內肽酶識別序列。
在某些實施例中，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的一個或多個抗原結合部分至少包含能夠結合抗原決定子的抗體可變區。可變區可形成並來源於天然或非天然存在的抗體及其片段的一部分。產生多株抗體和單株抗體的方法為此技術領域中所公知 (參見例如 Harlow 和 Lane，"Antibodies, a laboratory manual"，Cold Spring Harbor Laboratory，1988)。非天然存在的抗體可使用固相肽合成來構建，可重組產生 (例如，如美國專利號 4,186,567 中所述)，或者可例如藉由篩選包含可變重鏈和可變輕鏈的組合庫來獲得 (參見例如授予 McCafferty 的美國專利號 5,969,108)。
任何動物物種的抗體、抗體片段、抗原結合域或可變區均可用於本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。可用於本發明之非限制性抗體、抗體片段、抗原結合域或可變區可來源於鼠、靈長類或人。如果蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子旨在供人使用，則可以使用抗體的嵌合形式，其中抗體的恆定區來源於人。抗體的人源化或完全人化形式亦可以根據本領域中熟知的方法進行製備 (參見例如授予 Winter 的美國專利號 5,565,332)。人源化可以透過多種方法實現，這些方法包括但不限於：(a) 將非人 (例如供體抗體) CDR 移植到人 (例如受體抗體) 骨架和恆定區上，其中保留或不保留關鍵骨架殘基 (例如，對於保有良好的抗原結合親和力或抗體功能很重要者)，(b) 僅將非人特異性決定區 (SDR 或 a-CDR；對抗體-抗原交互作用至關重要的殘基) 移植到人骨架和恆定區，或 (c) 移植整個非人可變域，但藉由替換表面殘基將其「隱藏」(cloaking) 在仿人區段中。人源化抗體及其製造方法綜述於例如 Almagro 及 Fransson，Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008) 中，且進一步描述於例如以下各者中：Riechmann 等人，Nature 332, 323-329 (1988)；Queen 等人，Proc Natl Acad Sci USA 86, 10029-10033 (1989)；美國專利第 5,821,337、7,527,791、6,982,321、及 7,087,409號；Jones 等人，Nature 321, 522-525 (1986)；Morrison 等人，Proc Natl Acad Sci 81, 6851-6855 (1984)；Morrison 及 Oi，Adv Immunol 44, 65-92 (1988)；Verhoeyen 等人，Science 239, 1534-1536 (1988)；Padlan，Molec Immun 31(3), 169-217 (1994)；Kashmiri 等人，Methods 36:25-34 (2005) (描述 SDR (a-CDR) 移植)；Padlan，Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (描述「表面重修 (resurfacing)」)；Dall’Acqua 等人，Methods 36:43-60 (2005) (描述「FR 改組 (FR shuffling)」)；及 Osbourn 等人，Methods 36:61-68 (2005) 及 Klimka 等人，Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (描述 FR 改組之「導向選擇」方法)。可使用此領域中所公知的各種技術產生人抗體及人可變區。人抗體一般性描述於：van Dijk 和 van de Winkel，Curr Opin Pharmacol 5，368-74 (2001)；及 Lonberg，Curr Opin Immunol 20，450-459 (2008)。人可變區可形成人單株抗體的一部分並源自人單株抗體，該人單株抗體由融合瘤方法製備 (參見例如 Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第 51-63 頁 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987))。可藉由對基因轉殖動物投予免疫原來製備人抗體及人可變區，該基因轉殖動物已被修飾以反應於抗原挑激而產生完整的人抗體或具有人可變區的完整抗體 (參見例如 Lonberg, Nat Biotech 23, 1117-1125 (2005))。人抗體和人可變區亦可藉由分離選自人源噬菌體展示庫的 Fv 殖株可變區序列來產生 (參見例如 Hoogenboom 等人在 Methods in Molecular Biology 178, 1-37 (O'Brien 等人編，Human Press, Totowa, NJ, 2001)；和 McCafferty 等人，Nature 348, 552-554；Clackson 等人，Nature 352, 624-628 (1991))。噬菌體通常以單鏈 Fv (scFv) 片段或 Fab 片段展示抗體片段。
在某些實施例中，可用於本發明的抗原結合部分是經工程改造以具有增強的結合親和力，例如，根據美國專利公開號 2004/0132066 中所揭示之方法，其全部內容以引用方式併入本文。本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子結合特異性抗原決定子之能力可藉由酶聯免疫吸附測定 (ELISA) 或熟習此項技術者熟悉的其他技術，例如表面電漿子共振技術 (例如於 BIACORE T100 系統上分析) (Liljeblad 等人，Glyco J 17，323-329 (2000)) 及傳統的結合測定 (Heeley，Endocr Res 28，217-229 (2002)) 來測定。競爭測定可用於鑑定與參考抗體競爭結合特定抗原的抗體、抗體片段、抗原結合域或可變域，例如與 V9 抗體競爭結合 CD3 的抗體。在某些實施例中，此類競爭抗體與參考抗體所結合的相同表位 (例如，線性或構象表位) 結合。用於將表位定位至抗體結合的詳細例示性方法提供於 Morris (1996) 「Epitope Mapping Protocols」 (在 Methods in Molecular Biology 第 66 卷 (Humana Press, Totowa, NJ) 中)。在一例示性競爭測定中，將固定化抗原 (例如 CD3) 置於包含與抗原 (例如，V9 抗體，描述於 US 6,054,297) 結合之第一標記抗體及第二未標記的抗體 (正在測試其與第一抗體競爭與抗原結合的能力) 的溶液中進行培育。第二抗體可存在於融合瘤上澄液中。作為對照，將固定化抗原置於包含第一標記抗體但不包含第二未標記抗體的溶液中進行培育。在允許第一抗體與抗原結合的條件下培育後，去除多餘的未結合抗體，並測量與固定化抗原相關聯之標記物的量。如果試驗樣品中與固定抗原相關的標記物的數量相對於對照樣品而言明顯減少，則表明第二抗體正在與第一抗體競爭與抗原的結合。參見 Harlow 和 Lane (1988) Antibodies:A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。
按照本文所述之方法製備的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可藉由本領域中已知的技術來純化，例如高效能液相層析法、離子交換層析法、凝膠電泳、親和力層析法、粒徑篩析層析法等。用於純化特定蛋白質之實際條件將部分取決於淨電荷、疏水性、親水性等因素，並且對本領域的技術人員而言為顯而易見的。對於親和力層析純化，可使用抗體、配體、受體或抗原以結合蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。例如，對於本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的親和力層析純化，可使用具有蛋白質 A 或蛋白質 G 的介質。可使用順序蛋白質A 或蛋白質 G 親和力層析法和粒徑篩析層析法，以分離基本上如實例中所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的純度可藉由多種熟知的分析方法 (包括凝膠電泳法、高壓液相層析法等) 中的任一種來測定。例如，如實例中所述表現的重鏈融合蛋白顯示為完整且正確組裝，如藉由還原性 SDS-PAGE 所證實者 (參見例如圖 8-12)。三個條帶在大約 Mr 25,000、Mr 50,000 和 Mr 75,000 處解析出，對應於蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子輕鏈、重鏈和重鏈/輕鏈融合蛋白的預測分子量。
測定
本文所提供之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可藉由本技術領域中所公知的各種測定來鑑別、篩選或表徵物理/化學性質及/或生物活性。
親和力測定
蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子對 Fc 受體或標靶抗原的親和力可藉由如實例中所述之表面電漿子共振 (SPR) 來測定，其中使用標準儀器諸如 BIAcore 儀器 (GE Healthcare) 和受體或標靶蛋白 (諸如可藉由重組表現所獲得者)。或者，可例如藉由流式細胞術 (FACS)，使用表現特定受體或標靶抗原的細胞株，評估蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子對不同受體或標靶抗原的結合。下面及實例描述用於測量結合親和力的具體的說明性和例示性實施例。
根據一個實施例，在 25℃ 下使用 BIACORE® T100 儀器 (GE Healthcare) 透過表面等離振子共振法測量 K D。
為分析 Fc部分與 Fc 受體之間的相互作用，利用固定在 CM5 芯片上的抗 Penta His 抗體 (Qiagen) 捕獲 His 標記的重組 Fc 受體，並使用雙特異性構建體作為分析物。簡言之，根據供應商的說明，用 N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽 (EDC) 和 N-羥基琥珀醯亞胺 (NHS) 激活羧甲基化葡聚醣生物傳感器芯片 (CM5, GE Healthcare)。用 10 mM 乙酸鈉 (pH 5.0) 將抗 Penta-His 抗體稀釋至 40 μg/ml，然後以 5 μl/min 的流速注入，以獲得大約 6500 響應單位 (RU) 的偶合蛋白。注入配體後，注入 1 M 乙醇胺以封閉未反應的基團。隨後，捕獲 Fc 受體 60 s，使其濃度達到 4 nM 或 10 nM。針對動力學測量，在 25℃ 下，將雙特異性構建體之四倍系列稀釋 (濃度範圍介於 500 nM 和 4000 nM 之間) 以 30 μl/min 的流速在 120 s 內注入 HBS-EP (GE Healthcare，10 mM HEPES，150 mM NaCl，3 mM EDTA，0.05 % 界面活性劑 P20，pH 7.4) 中。
為測定對標靶抗原的親和力，雙特異性構建體由抗人 Fab 特異性抗體 (GE Healthcare) 捕捉，該抗體固定在活化 CM5 感測晶片表面上，如針對抗 Penta-His 抗體所述。偶合蛋白的最終量大約為 12000 RU。雙特異性構建體在 300 nM 下捕捉 90 s。在 180 s 內，標靶抗原以 250 nM 至 1000 nM 的濃度範圍通過流通池，其流速為 30 μL/min。監測解離 180 s。
扣除參比流通池取得的回應，以校正本本體折射率差。穩態回應用於透過 Langmuir 結合等溫線的非線性曲線擬合得出解離常數 K D。透過同時擬合締合和解離感測圖，使用簡單的一對一 Langmuir 結合模型 (BIACORE®T100 評估軟體版本 1.1.1) 計算結合速率 (k on) 和解離速率 (k off)。平衡解離常數 (K D) 藉由 k off/k on比率計算得出。參見例如：Chen 等人，J Mol Biol 293，865-881 (1999)。
活性測定
本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的生物活性可藉由如實例中所述的各種測定來量測。生物活性可例如包括誘導 T 細胞的增殖、誘導 T 細胞中的傳訊、誘導 T 細胞中活化標記物的表現、誘導 T 細胞分泌細胞介素、誘導標靶細胞 (如腫瘤細胞) 裂解以及誘導腫瘤消退及/或改善生存率。
組成、調配物和投予途徑
在另一態樣中，本發明提供包含本文所提供之任何蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的醫藥組成物，其用於以下任何治療方法。在一個實施例中，醫藥組成物包含本文所提供之任何蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子及醫藥上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥組成物包含本文所提供之任何蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子及至少一種另外的治療劑 (如下文所述)。
進一步提供以適合於體內投予的形式製造本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之方法，該方法包含 (a) 獲得根據本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，及 (b) 將蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子與至少一種醫藥上可接受之載劑配製，由此配製用於體內投予之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的製劑。
本發明之醫藥組成物包含治療有效量之溶解或分散在醫藥上可接受之載劑中的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。短語「醫藥上或藥理學上可接受」是指在採用的劑量和濃度下通常對受體無毒的分子實體和組成物，即投予動物 (例如人) 時不產生不利的、過敏或其他不良反應 (在適當情況下)。根據本揭示，包含至少一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子及視情況之另外的活性成分的醫藥組成物的製備是本技術領域具有通常知識者已知，例如 Remington's Pharmaceutical Sciences 第 18 版 (Mack Printing Company，1990) 例示，該文獻以引用方式併入本文。此外，對於動物 (例如，人) 投予，應當理解，製劑應符合 FDA 生物製品標準辦公室或其他國家/地區的有關部門所要求的無菌性、熱原性、一般安全性和純度標準。較佳的組成物為凍乾製劑或水溶液。如本文所使用的「醫藥上可接受之載劑」，包括任何及所有溶劑、緩衝液、分散介質、包衣、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑 (例如抗細菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、抗氧化劑、蛋白質、藥物、藥物穩定劑、聚合物、凝膠、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料，諸如本技術領域具有通常知識者已知的材料及其組合 (參見例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，第 18 版，Mack Printing Company，1990，pp. 1289-1329，該文獻以引用方式併入本文)。除非任何習用載劑與活性成分不相容，否則考慮將其用於治療或醫藥組成物中。
該組成物可包含不同類型的載劑，這取決於它是以固體、液體或氣霧劑形式投予，以及對於諸如注射這樣的投予途徑是否需要無菌。本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (和任何另外的治療劑) 可以靜脈內、皮內、動脈內、腹膜內、病灶內、顱內、關節內、***內、脾內、腎內、胸膜內、氣管內、鼻內、玻璃體內、***內、直腸內、腫瘤內、肌肉內、腹膜內、皮下、結膜下、膀胱內、黏膜、心包內、臍內、眼內、口服、局部 (topically)、定位 (locally)、藉由吸入 (例如，氣霧劑吸入)、注射、輸注、連續輸注、直接定位灌注浸浴標靶細胞、經由導管、經由灌洗、在乳膏中、在脂質組成物 (例如，脂質體) 中、或藉由所屬技術領域中具有通常知識者已知的其他方法或前述方法的任何組合來投予 (參見例如 Remington's Pharmaceutical Sciences, 第 18 版，Mack Printing Company, 1990，其以引用方式併入本文)。腸胃外投予，特定而言靜脈內注射，最常用於投予多肽分子，諸如本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。
腸胃外組成物包括設計用於注射投予的組成物，例如皮下、皮內、病灶內、靜脈內、動脈內、肌肉內、鞘內或腹膜內注射。對於注射，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可配製在水溶液中，較佳地在生理相容性緩衝液中，如 Hanks 溶液、Ringer 溶液或生理鹽水緩衝液。該溶液可包含配製劑，例如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。或者，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可以呈粉末形式，以便在使用前與適合的載體 (例如無菌無熱原水) 一起配製。無菌注射溶液是藉由將透過將所需量的本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子併入依所需而具有以下列舉的各種其他成分的適當溶劑來製備。無菌性可易於例如透過無菌濾膜過濾來實現。通常，透過將各種滅菌後的活性成分摻入含有基本分散介質及/或其他成分的無菌載體中來製備分散液。對於用於製備無菌注射液、混懸劑或乳劑的無菌粉末，優選的製備方法是真空乾燥或冷凍乾燥技術，該技術可從先前過濾後的無菌液體介質中得到活性成分與任何另外所需成分的粉末。如有必要，應適當緩衝液體介質，並且在注射足夠的鹽水或葡萄糖之前先使液體稀釋劑等滲。組成物必須在製造和儲存條件下保持穩定，並且必須能夠抵抗諸如細菌和真菌等微生物的污染作用。應當理解，內毒素污染應最小限度地保持在安全濃度，例如，小於 0.5 ng/mg 蛋白質。適合的醫藥上可接受之載劑包括但不限於：緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑 (例如氯化十八基二甲基苄基銨；己烷-1,6-雙(氯化三甲基銨) (hexamethonium chloride)；氯化烷基二甲基苄基銨；氯化苯索寧；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇和；間甲酚)；低分子量 (小於約 10 個殘基) 多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸、或離胺酸；單醣類、雙醣類、及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合劑，諸如 EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、繭糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬複體 (例如鋅蛋白複體)；及/或非離子界面活性劑，諸如聚乙二醇 (PEG)。水性注射懸浮液可包含提高混懸劑黏度的化合物，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、右旋葡萄聚糖等。視情況，懸浮液還可包含合適的穩定劑或提高化合物溶解度的試劑，以製備高濃度溶液。另外，可將活性化合物的懸浮液製備為合適的油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或載劑包括脂肪油 (例如芝麻油) 或合成脂肪酸酯 (例如油酸乙酯或甘油三酯) 或脂質體。
活性成分可以包載在例如透過凝聚技術或透過介面聚合製備的微囊 (例如，分別為羥甲基纖維素微囊或明膠微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊) 中、膠體藥物遞送系統 (例如脂質體、白蛋白微球、微乳、奈米顆粒和奈米囊 (nanocapsule)) 中或粗滴乳狀液中。此等技術公開於 Remington’s Pharmaceutical Sciences (第 18 版，Mack Printing Company，1990) 中。可以製備緩釋製劑。合適的緩釋製劑的實例包括含有多肽的固體疏水聚合物的半透性基質，該基質是成形物品的形式，例如膜或微囊。在特定實施例中，可以透過在組成物中使用延遲吸收的物質 (例如單硬脂酸鋁、明膠或其組合) 來產生可注射組成物的延長吸收。
除先前描述的組成物外，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子亦可配製為儲存製劑。此等長效製劑可以透過植入 (例如皮下或肌內) 或透過肌內注射投予。因此，例如，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可用適合的聚合物質或疏水物質 (例如作為在可接受之油中的乳狀液) 或離子交換樹脂配製，或作為微溶的衍生物，例如作為微溶的鹽配製。
包含本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的醫藥組成物可以利用習用的混合、溶解、乳化、包囊、包埋 (entrapping) 或凍乾方法來製備。可使用一種或多種有助於將蛋白質加工成可藥用製劑的生理上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或助劑以習用方式配製醫藥組成物。適宜的製劑視所選的投予途徑而定。
蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可以游離酸或鹼、中性或鹽形式配製成組成物。醫藥上可接受之鹽是基本上保留游離酸或鹼的生物活性的鹽。這些包括酸加成鹽，例如與蛋白質組成物的游離胺基形成的那些，或與無機酸 (例如，鹽酸或磷酸) 或有機酸 (諸如乙酸、草酸、酒石酸或扁桃酸) 形成的那些。與游離羧基形成的鹽類還可以衍生自：無機鹼，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵；或有機鹼，諸如異丙胺、三甲胺、組胺酸或普魯卡因。藥用鹽趨向於比對應的游離鹼形式更易溶於水性溶劑和其他質子性溶劑。
治療方法和組成物
本文提供的任何蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可用於治療方法。本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可以用作免疫治療劑，例如用於癌症的治療中。
為在治療方法中使用，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子將以符合良好醫療規範的方式予以配製、給藥、和投予。在這種情況下，考慮的因素包括待治療的具體障礙、待治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床病症、障礙的原因、遞送藥物的部位、投予方法、施用日程及醫療從業者已知的其他因素。
在一個態樣中，提供的是本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其用為藥物。在進一步態樣中，提供的是本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其用於治療疾病。在某些實施例中，提供的是本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其用於治療方法中。在一個實施例中，本發明提供本文中所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子用於在有需要的受試者中治療疾病。在某些實施例中，本發明提供蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其用於治療患有疾病的受試者的方法，該方法包含對該受試者投予治療有效量的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。在某些實施例中，待治療之疾病為增生性疾病。在一個特定實施例中，疾病為癌症。在某些實施例中，該方法進一步包括對該受試者投予治療有效量的至少一種另外的治療劑，例如抗癌劑 (如果該待治療的疾病為癌症)。在另外的實施例中，本發明提供如本文所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其用於誘導標靶細胞、特定而言腫瘤細胞裂解。在某些實施例中，本發明提供蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其用於在受試者中誘導標靶細胞、特定而言腫瘤細胞裂解的方法中，該方法包括對受試者投予有效量的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子以誘導標靶細胞裂解。根據上述任一實施例中的「受試者」為哺乳動物，較佳地為人。
在進一步態樣中，本發明提供蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之用途，其用於製造或製備藥物。在一個實施例中，該藥物是用於治療有需要的受試者的疾病。在另一個實施例中，藥物用於治療疾病的方法中，該方法包括向患有疾病的受試者投予治療有效量的藥物。在某些實施例中，待治療之疾病為增生性疾病。在一個特定實施例中，疾病為癌症。在一個實施例中，該方法進一步包括對該受試者投予治療有效量的至少一種另外的治療劑，例如抗癌劑 (如果待治療的疾病為癌症)。在另一個實施例中，藥物用於誘導標靶細胞、特定而言腫瘤細胞裂解。在又一個實施例中，藥物用於在受試者中誘導標靶細胞、特定而言腫瘤細胞裂解的方法中，該方法包括對受試者投予有效量的藥物以誘導標靶細胞裂解。根據上述任一實施例中「受試者」可為哺乳動物，較佳地為人。
本發明之另一態樣提供了一種治療疾病的方法。在一個實施例中，該方法包含向患有此類疾病的受試者投予治療有效量的本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。在一個實施例中，將組成物投予該個體，該組成物包含呈醫藥上可接受之形式的本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的組成物。在某些實施例中，待治療之疾病為增生性疾病。在一個特定實施例中，疾病為癌症。在某些實施例中，該方法進一步包括對該受試者投予治療有效量的至少一種另外的治療劑，例如抗癌劑 (如果該待治療的疾病為癌症)。根據上述任一實施例中「受試者」可為哺乳動物，較佳地為人。
本發明之另一態樣提供了一種誘導標靶細胞、特定而言腫瘤細胞裂解的方法。在一個實施例中，該方法包括在 T 細胞、特定而言細胞毒性 T 細胞的存在下，使標靶細胞與本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子接觸。在另一態樣，提供了一種誘導受試者中標靶細胞、特定而言腫瘤細胞裂解的方法。在一個此類實施例中，該方法包括對受試者投予有效量的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子以誘導標靶細胞裂解。在一個實施例中，「受試者」為人。
在某些實施例中，待治療之疾病為增生性疾病，特定而言癌症。癌症的非限制性實例包括膀胱癌、腦癌、頭頸癌、胰腺癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、子宮癌、宮頸癌、子宮內膜癌、食道癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、胃癌、***癌、血癌、皮膚癌、鱗狀細胞癌、骨癌和腎癌。可使用本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子治療的其他細胞增殖性疾病包括但不限於定位在以下部位中的贅生物：腹部、骨骼、***、消化系統、肝、胰、腹膜、內分泌腺 (腎上腺、副甲狀腺、腦垂體、睾丸、卵巢、胸腺、甲狀腺)、眼、頭和頸、神經系統 (中樞和周邊)、淋巴系統、骨盆、皮膚、軟組織、脾、胸部、和泌尿生殖系統。還包括癌前狀況或病變和癌症轉移。在某些實施例中，癌症選自由腎細胞癌、皮膚癌、肺癌、大腸直腸癌、乳癌、腦癌、和頭頸癌所組成之群組。熟習本技術領域者容易地理解到，在許多情況下，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可能無法提供治癒，而只能提供部分益處。在一些實施例中，具有某些益處的生理變化亦被認為是治療上有益的。因此，在一些實施例中，認為提供生理變化的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的量被認為是「有效量」或「治療有效量」。需要治療的受試者、患者或個體通常為哺乳動物，更具體而言人。
在一些實施例中，對細胞投予有效量的本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。在其他實施例中，對受試者投予有效量的本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子以治療疾病。
對於疾病的預防或治療，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的適當劑量 (當單獨使用或與一種或多種另外的治療劑組合使用時) 將取決於待治療的疾病的類型、投予途徑、患者的體重、T 細胞活化雙特異性分子的類型、疾病的嚴重程度和病程、該 T 細胞活化雙特異性分子的投予是否為了預防或是治療的目的、之前或並行的治療介入、患者的臨床病史和對該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性抗原結合分子的反應、及主治醫師的判斷。在任何情況下，負責投予的從業者將測定組成物中一種或多種活性成分的濃度以及單個個體的合適劑量。本文中考慮各種給藥方案，其包括但不限於在多種時間點單次或多次投予、快速注射投予及脈衝輸注。
該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子是適合一次或一系列的治療中投予患者。取決於疾病的類型和嚴重程度，約 1 μg/kg 至 15 mg/kg (例如 0.1 mg/kg – 10 mg/kg) 的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可為例如藉由一次或多次分開的投予或藉由連續輸注來對患者投予的初始候選劑量。根據上述因素，一種典型的日劑量可在約 1 μg/kg 至 100 mg/kg 或更多的範圍內。對於在幾天或更長時間內重複投予，視病症而定，治療通常將持續直至出現所需的疾病症狀抑制。蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性抗原結合分子的一種例示性劑量會是從約 0.005 mg/kg 至約 10 mg/kg 的範圍內。在其他非限制性實例中，劑量亦可包含每次投予從約 1 微克/公斤體重、約 5 微克/公斤體重、約 10 微克/公斤體重、約 50 微克/公斤體重、約 100 微克/公斤體重、約 200 微克/公斤體重、約 350 微克/公斤體重、約 500 微克/公斤體重、約 1 毫克/公斤體重、約 5 毫克/公斤體重、約 10 毫克/公斤體重、約 50 毫克/公斤體重、約 100 毫克/公斤體重、約 200 毫克/公斤體重、約 350 毫克/公斤體重、約 500 毫克/公斤體重、至約 1000 毫克/公斤體重或更多，及其衍生的任何範圍。在從本文中所列的數字衍生的範圍的非限制性實例中，可基於上述數字投予約 5 毫克/公斤體重至約 100 毫克/公斤體重，約 5 微克/公斤體重至約 500 毫克/公斤體重範圍內的劑量。因此，可以對患者投予約 0.5 mg/kg、2.0 mg/kg、5.0 mg/kg 或 10 mg/kg 中的一種或多種劑量 (或其任意組合)。此等劑量可間歇投予，例如每週或每三週投予 (例如，使得患者接受約二劑至約二十劑、或例如約六劑的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子)。可以投予初始較高的負荷劑量，然後投予一種或多種較低的劑量。但是，可以使用其他劑量方案。透過習用技術和測定很容易監測此治療的進展。
本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子通常將以對達到預期目的有效的量來使用。為用於治療或預防疾病狀況，以治療有效量投予或應用本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或其醫藥組成物。尤其是鑒於本文中提供的詳細揭露，測定治療有效量完全在本技術領域具有通常知識者的能力範圍之內。
對於全身投予，最初可以從諸如細胞培養物測定的 活體外測定估計治療有效劑量。然後可以在動物模型中製定劑量，以達到包括細胞培養物中測定的 IC 50在內的循環濃度範圍。此等資訊可用於更準確地測定對人體有用的劑量。
亦可以使用本技術領域中熟知的技術，根據體內資料 (例如動物模型) 估計初始劑量。該技術領域中具有通常知識者可以根據動物資料易於優化對人的投予。
可以單獨調節劑量和間隔來提供足以維持治療效果的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的血漿濃度。透過注射投予的常見患者劑量在約 0.1-50 mg/kg/天的範圍內，典型範圍為 0.5-1 mg/kg/天。可以透過每天投予多種劑量來達到治療有效的血漿濃度。血漿中的濃度可以例如透過 HPLC 來測量。
在局部投予或選擇性吸收的情況下，蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的有效局部濃度可能與血漿濃度無關。本技術領域的習知者將能夠在無需過度實驗的情況下優化治療有效的局部劑量。
本文所述之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的治療有效劑量通常將提供治療益處而不會引發實質性毒性。可藉由標準製藥程序在細胞培養或實驗動物中測定蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的毒性和治療功效。可以用細胞培養物測定和動物研究來測定 LD 50(致死群體的 50% 的劑量) 和 ED 50(在群體的 50% 中治療有效的劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比是治療指數，其可以表示為比值 LD 50/ED 50。展現大的治療指數的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子是較佳的。在一個實施例中，根據本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子展現高治療指數。從細胞培養測定法和動物研究中得到的資料可用於配製適用於人的一系列劑量。劑量較佳地在包括很小毒性或無毒性的 ED 50的循環濃度範圍內。劑量可根據多種因素 (例如所採用的劑型、所利用的投予途徑、個體的狀況等) 在此範圍內變化。精確的製劑、投予途徑和劑量可以由個別醫師基於患者的病症來選擇 (參見例如 Fingl 等人，1975，在：The Pharmacological Basis of Therapeutics，第 1 章第 1 頁，該文獻全文以引用方式併入本文)。
用本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子治療的患者的主治醫師會了解如何及何時由於毒性、器官功能障礙等而終止、中斷、或調整投予。相反，主治醫師還將知道在臨床反應不充分 (排除毒性) 時如何將治療調整至更高的水平。在目標疾病的治療中，投予劑量的大小將隨待治療疾病的嚴重程度、投予途徑等而變化。病症的嚴重程度可部分地透過例如標準預後評價法來評價。此外，劑量以及可能的給藥頻率亦將根據個體患者的年齡、體重和反應而變化。
其他藥物和治療
本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可以在治療中與一種或多種其他劑組合投予。例如，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子可與至少一種另外的治療劑共同投予。術語「治療劑」涵蓋為治療需要此等治療的受試者中的症狀或疾病而投予的任何藥劑。此等另外的治療劑可包含適合於所治療的特定適應症的任何活性成分，較佳地，為那些相互無不利影響的具有互補活性成分。在某些實施例中，該另外的治療劑為免疫調節劑、細胞生長抑制劑、細胞黏附抑制劑、細胞毒劑、細胞凋亡啟動劑或增加細胞對凋亡誘導劑敏感性的藥物。在一個特定實施例中，該另外的治療劑為抗癌劑，例如微管破壞劑、抗代謝藥、拓撲異構酶抑制劑、DNA 嵌入劑、烷化劑、激素療法、激酶抑制劑、受體拮抗劑、腫瘤細胞凋亡啟動劑或抗血管發生劑。
此等其他藥物適宜地以對預期目的有效的量組合存在。此等其他藥物的有效量取決於所使用的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的量、疾病或治療的類型、以及上文討論的其他因素。蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子通常以與本文中所述相同的劑量和投予途徑，或本文中所述劑量的約 1% 至 99%，或以經驗上/臨床上測定為適當的任意劑量和透過任意途徑使用。
如上文所述之此類組合療法涵蓋組合投予 (即兩種或多種治療劑包括在同一或分別的組成物中)，以及分別投予，在這種情況下，本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的投予可在投予另外的治療劑及/或佐劑之前、同時及/或之後發生。本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子亦可與放射療法組合使用。
製品
本發明的另一態樣提供包含用於治療、預防及/或診斷上述疾病的製成品。該製品包括容器及容器上或與容器相關的標籤或藥品說明書。合適的容器包括例如，瓶、小瓶、注射器、IV 溶液袋等。該等容器可以由多種材料例如，玻璃或塑膠形成。該容器可容納組成物，該組成物本身或與有效治療、預防及/或診斷症狀的另一組成物結合使用，並可能具有無菌入口 (例如，容器可為具有可透過皮下注射針頭穿孔的塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中的至少一種活性劑是本發明的蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。該標籤或藥品說明書指示該組成物用於治療所選擇的症狀。此外，該製品可包含 (a) 第一容器，其內含有組成物，其中該組成物包含本發明之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子；及 (b) 第二容器，其內含有組成物，其中該組成物包含進一步之細胞毒性劑或其他治療劑。本發明之此實施例中的製成品可以進一步包含指示組成物可以用於治療具體疾病的藥品說明書。可替代地或另外地，製成品可以進一步包含第二 (或第三) 容器，該容器包含醫藥上可接受之緩衝劑，例如抑菌注射用水 (BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、Ringer 溶液和葡萄糖溶液。從商業和使用者的角度來看，它可以進一步包含其他材料，其中包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭和注射器。
例示性實施例1.一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 能夠與 CD3 結合的第一抗原結合部分，其中該第一抗原結合部分包含： (a) 能夠與 CD3 結合的第一抗原結合部分，其中該第一抗原結合部分包含： (i) 重鏈可變區 (VH)，其包含   SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 (HCDR) 1，SEQ ID NO: 4 之 HCDR 2 和       SEQ ID NO: 10 之 HCDR 3；以及 (ii) 輕鏈可變區 (VL)，其包含   SEQ ID NO: 20 之輕鏈互補決定區 (LCDR) 1，SEQ ID NO: 21 之 LCDR 2 和 SEQ ID NO: 22 之 LCDR 3； (b) 能夠與標靶細胞抗原結合的第二抗原結合部分；以及 (c) 透過蛋白酶可截切之連接子與 T 細胞雙特異性結合分子共價接附之遮蔽部分，其中該遮蔽部分能夠與該第一抗原結合部分或第二抗原結合部分的獨特型結合，從而可逆地隱匿該第一抗原結合部分。 2.如實施例 1 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該 VH 包含與 SEQ ID NO: 16 的胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列，及/或該 VL 包含與 SEQ ID NO: 23 的胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列。 3.如實施例 1 或 2 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分並且可逆地隱匿該第一抗原結合部分。 4.如實施例 1-3 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分的該重鏈可變區。 5.如實施例 1-3 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分的該輕鏈可變區。 6.如實施例 1-5 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分是 scFv。 7.如實施例 2-6 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可活化 T 細胞活化雙特異性分子包含可逆地隱匿該第二抗原結合部分的第二遮蔽部分。 8.如實施例 1-7 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶是藉由該標靶細胞所表現。 9.如實施例 1-8 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分是交換型 Fab 分子，其中該 Fab 輕鏈和該 Fab 重鏈的可變區或恆定區是經交換的。 10.如實施例 1-9 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分是交換型 Fab 分子，其中該 Fab 輕鏈和該 Fab 重鏈的恆定區是經交換的。 11.如實施例 1‑10 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第一抗原結合部分是習用 Fab 分子。 12.如實施例 1‑11 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含不多於一個能夠與 CD3 結合的抗原結合部分。 13.如實施例 1‑12 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含第三抗原結合部分，其為能夠與標靶細胞抗原結合的 Fab 分子。 14.如實施例 13 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第三抗原結合部分與該第二抗原結合部分相同。 15.如實施例 1‑14 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 或 TYRP1 結合。 16.如實施例 1‑14 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合。 17.如實施例 1-14 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合。 18.如實施例 1-17 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第一抗原結合部分和該第二抗原結合部分視情況經由肽連接子彼此融合。 19.如實施例 1-18 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與該第一抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合。 20.如實施例 1‑18 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第一抗原結合部分在 Fab 重鏈之 C 端與該第二抗原結合部分的 Fab 重鏈之 N 端融合。 21.如實施例 1-20 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第一抗原結合部分之 Fab 輕鏈與該第二抗原結合部分之 Fab 輕鏈視情況經由肽連接子彼此融合。 22.如實施例 1-21 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其另外地包含由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元所構成之 Fc 域。 23.如實施例 22 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該 Fc 域是 IgG Fc 域，具體地為 IgG1 或 IgG4 Fc 域。 24.如實施例 22 或 23 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該 Fc 域是人 Fc 域。 25.如實施例 22-24 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中與天然 IgG1 Fc 域相比，該 Fc 域表現出降低的對 Fc 受體的結合親和力及/或降低的效應子功能。 26.如實施例 25 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該 Fc 域包含降低與 Fc 受體之結合及/或效應子功能之一個或多個胺基酸取代。 27.如實施例 26 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該一個或多個胺基酸取代是在選自由 L234、L235 及 P329 (Kabat 編號) 所組成之群組之一個或多個位置。 28.如實施例 27 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該 Fc 域的各次單元包含降低與 Fc 受體之結合及/或效應子功能之三個胺基酸取代，其中該胺基酸取代是 L234A、L235A 和 P329G。 29.如實施例 25‑28 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該 Fc 受體是 Fcγ 受體。 30.如實施例 25‑28 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該效應子功能是抗體依賴型細胞介導之細胞毒性 (ADCC)。 31.如實施例 1‑30 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含以下中的至少一者： (a) DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) CDR H2 胺基酸序列，其選自    由 WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59)、WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 和 WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 所組成之群組； (c) EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列。 32.如實施例 1-31 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含輕鏈可變區，其包含以下中的至少一者： (d) 輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列，其選自由 RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 和 KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 所組成之群組； (e) YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  CDR L3 胺基酸序列，其選自由以下所組成之群組： QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 和 QQSREFPYT (SEQ ID NO:88)。 33.如實施例 1‑30 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) CDR H2 胺基酸序列，其選自    由 WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59)、WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 和 WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 所組成之群組； (c) EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) 輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列，其選自由 RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 和 KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 所組成之群組； (e) YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  CDR L3 胺基酸序列，其選自由以下所組成之群組： QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 和 QQSREFPYT (SEQ ID NO:88)。 34.如實施例 1-30 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。 35.如實施例 1-30 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:59) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。 36.如實施例 1-30 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。 37.如實施例 1-30 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，其包含： (a) SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c) GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e) AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。 38.如實施例 1-37 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分是人源化的。 39.如實施例 1-38 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分是人的。 40.如實施例 1-39 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可截切之連接子包含至少一個蛋白酶辨識序列。 41.如實施例 40 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列。 42.如實施例 41 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶辨識序列是選自由以下所組成之群組： (a) RQARVVNG (SEQ ID NO:100)； (b) VHMPLGFLGPGRSRGSFP (SEQ ID NO:101)； (c) RQARVVNGXXXXXVPLSLYSG (SEQ ID NO:102)，其中 X 是任何胺基酸； (d) RQARVVNGVPLSLYSG (SEQ ID NO:103)； (e) PLGLWSQ (SEQ ID NO:104)； (f)  VHMPLGFLGPRQARVVNG (SEQ ID NO:105)； (g) FVGGTG (SEQ ID NO:106)； (h) KKAAPVNG (SEQ ID NO:107)； (i)  PMAKKVNG (SEQ ID NO:108)； (j)  QARAKVNG (SEQ ID NO:109)； (k) VHMPLGFLGP (SEQ ID NO:110)； (l)  QARAK (SEQ ID NO:111)； (m)       VHMPLGFLGPPMAKK (SEQ ID NO:112)； (n) KKAAP (SEQ ID NO:113)；及 (o) PMAKK (SEQ ID NO:114)。 43.如實施例 40 或 41 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 PMAKK (SEQ ID NO:114)。 44.如實施例 40 或 41 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 VHMPLGFLGPPMAKK (SEQ ID NO:112)。 45.如實施例 40 或 41 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 VHMPLGFLGPRQARVVNG (SEQ ID NO:105)。 46.如實施例 40 或 41 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 RQARVVNG (SEQ ID NO:100) 或蛋白酶辨識序列 VHMPLGFLGPRQARVVNG (SEQ ID NO:105)。 47.如實施例 1 至 46 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶是選自由金屬蛋白酶、絲胺酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、天冬胺酸蛋白酶、和組織蛋白酶蛋白酶所組成之群組。 48.如實施例 47 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該金屬蛋白酶是基質金屬蛋白酶 (MMP)，較佳的是 MMP9 或 MMP2。 49.如實施例 47 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該絲胺酸蛋白酶是間質蛋白酶 (Matriptase)。 50.如實施例 1 至 49 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，並且包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 所組成之群組，及/或至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組。 51.如實施例 1-49 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，並且包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO: 22 所組成之群組。 52.如實施例 1-51 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，並且包含重鏈可變區，其包含： a)   NAWMS (SEQ ID NO:54) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； b)  RIKSKTDGGTTDYAAPVKG (SEQ ID NO:55) 之 CDR H2 胺基酸序列；及 c)   PWEWSWYDY (SEQ ID NO:56) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： d)  GSSTGAVTTSNYAN (SEQ ID NO:20) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； e)   GTNKRAP (SEQ ID NO:21) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 f)   ALWYSNLWV (SEQ ID NO:22) 之 CDR L3 胺基酸序列。 53.如實施例 1-52 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區序列包含與 SEQ ID NO: 53 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區序列包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。 54.如實施例 1-53 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合，並且包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 53 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列。 55.如實施例 1-49 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，並且包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 26 所組成之群組，及/或至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30 所組成之群組。 56.如實施例 1-49 及 55 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，並且包含至少一個重鏈互補決定區(CDR)，其選自由 SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 26 所組成之群組，及至少一個輕鏈 CDR，其選自由 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30 所組成之群組。 57.如實施例 1-49 及 55-56 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，並且包含重鏈可變區，其包含： a)   NAWMS (SEQ ID NO:24) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； b)  RIKSKTDGGTTDYAAPVKG (SEQ ID NO:25) 之 CDR H2 胺基酸序列；及 c)   PWEWSWYDY (SEQ ID NO:26) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： d)  GSSTGAVTTSNYAN (SEQ ID NO:28) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； e)   GTNKRAP (SEQ ID NO:29) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 f)   ALWYSNLWV (SEQ ID NO:30) 之 CDR L3 胺基酸序列。 58.如實施例 1-49 及 55-57 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區序列包含與 SEQ ID NO: 27 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列，且該輕鏈可變區序列包含與 SEQ ID NO: 31 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。 59.如實施例 1-53 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合，並且包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 27 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 31 之胺基酸序列。 60.如實施例 1-54 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： a)   至少一個重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列； b)  至少一個輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 61.如實施例 1-50 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 第一重鏈，其包含 SEQ ID NO: 65 之胺基酸序列； (b) 第二重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列；和 (c) 輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 62.如實施例 1-54 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 第一重鏈，其包含 SEQ ID NO: 69 之胺基酸序列； (b) 第二重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列；和 (c) 輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 63.如實施例 1-54 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 第一重鏈，其包含 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列； (b) 第二重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列；和 (c) 輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 64.如實施例 1-54 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 第一重鏈，其包含 SEQ ID NO: 76 之胺基酸序列； (b) 第二重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列；和 (c) 輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 65.如實施例 1-54 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 第一重鏈，其包含 SEQ ID NO: 95 之胺基酸序列； (b) 第二重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列；和 (c) 輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 66.如實施例 1-54 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 第一重鏈，其包含 SEQ ID NO: 96 之胺基酸序列； (b) 第二重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列；和 (c) 輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 67.如實施例 1-54 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 第一重鏈，其包含 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列； (b) 第二重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列；和 (c) 輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 68.如實施例 1-54 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 第一重鏈，其包含 SEQ ID NO: 98 之胺基酸序列； (b) 第二重鏈，其包含 SEQ ID NO: 66 之胺基酸序列；和 (c) 輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 69.如實施例 60-68 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (c) 二個輕鏈，其包含 SEQ ID NO: 67 之胺基酸序列。 70.如實施例 1-69 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含 scFv，其包含與 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。 71.如實施例 1-69 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含 scFv，其包含與 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。 72.如實施例 1-69 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含 scFv，其包含與 SEQ ID NO: 93 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。 73.如實施例 1-69 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含 scFv，其包含與 SEQ ID NO: 94 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同之胺基酸序列。 74.如實施例 70-73 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中藉由如 SPR 所測量的該遮蔽部分與該第一抗原結合部分的結合親和力，與包含選自由 SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:93 和 SEQ ID NO:94 所組成之群組之胺基酸序列的遮蔽部分的結合親和力相比，是大約相同或者較高。 75.一種獨特型特異性多肽，其能夠可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區序列及輕鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與選自由 SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO:83 和 SEQ ID NO:85 所組成之群組之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同，且該輕鏈可變區序列與選自由 SEQ ID NO: 80 和 SEQ ID NO:81 所組成之群組之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99 % 或 100% 相同。 76.如請求項 28 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 79 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 80 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。 77.如請求項 28 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 79 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。 78.如請求項 28 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 83 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。 79.如請求項 28 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 85 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。 80.如實施例 75 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽是抗獨特型 scFv、抗獨特型 Fab 或抗獨特型 scFab。 81.如實施例 75-80 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽是 scFv。 82.如實施例 75-80 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽透過連接子共價接附於該分子。 83.如實施例 82 之獨特型特異性多肽，其中該連接子是肽連接子。 84.如實施例 82 或 83 之獨特型特異性多肽，其中該連接子是蛋白酶可截切之連接子。 85.如實施例 82 至 84 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該肽連接子包含至少一個蛋白酶辨識位點。 86.如實施例 85 之獨特型特異性多肽，其中該蛋白酶是選自由金屬蛋白酶、絲胺酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、天冬胺酸蛋白酶、和組織蛋白酶蛋白酶所組成之群組。 87.如實施例 91 之獨特型特異性多肽，其中該金屬蛋白酶是基質金屬蛋白酶 (MMP)，較佳的是 MMP9 或 MMP2。 88.如實施例 86 之獨特型特異性多肽，其中該絲胺酸蛋白酶是間質蛋白酶。 89.如實施例 85-88 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該蛋白酶辨識序列是選自由以下所組成之群組： (a) RQARVVNG (SEQ ID NO:100)； (b) VHMPLGFLGPGRSRGSFP (SEQ ID NO:101)； (c) RQARVVNGXXXXXVPLSLYSG (SEQ ID NO:102)，其中 X 是任何胺基酸； (d) RQARVVNGVPLSLYSG (SEQ ID NO:103)； (e) PLGLWSQ (SEQ ID NO:104)； (f)  VHMPLGFLGPRQARVVNG (SEQ ID NO:105)； (g) FVGGTG (SEQ ID NO:106)； (h) KKAAPVNG (SEQ ID NO:107)； (i)  PMAKKVNG (SEQ ID NO:108)； (j)  QARAKVNG (SEQ ID NO:109)； (k) VHMPLGFLGP (SEQ ID NO:110)； (l)  QARAK (SEQ ID NO:111)； (m)  VHMPLGFLGPPMAKK (SEQ ID NO:112)； (n) KKAAP (SEQ ID NO:113)；及 (o) PMAKK (SEQ ID NO:114)。 90.如實施例 80-83 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 PMAKK (SEQ ID NO:114)。 91.如實施例 80-90 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽是 T 細胞活化雙特異性分子之一部分。 92.如實施例 75-92 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 79 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 80 之胺基酸序列。 93.如實施例 75-92 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 79 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 81 之胺基酸序列。 94.如實施例 75-92 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 84 之胺基酸序列。 95.如實施例 75-92 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 85 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 86 之胺基酸序列。 96.如實施例 75-92 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 84 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 87 之胺基酸序列。 97.如實施例 75-92 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 89 之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO: 90 之胺基酸序列。 98.如實施例 75 至 97 之獨特型特異性多肽，其中該抗 CD3 抗原結合位點包含重鏈可變區，其包含 SEQ ID NO:16 之胺基酸序列，及該輕鏈可變區，其包含 SEQ ID NO:23 之胺基酸序列。 99.如實施例 75 至 98 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽是人源化的。 100.一種經分離之多核苷酸，其編碼如實施例 1-74 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性抗原結合分子或如實施例 75-99 中任一項之獨特型特異性多肽。 101.一種由實施例 100 之多核苷酸所編碼之多肽。 102.一種載體，具體地為表現載體，其包含如實施例 100 之多核苷酸。 103.一種宿主細胞，其包含如實施例 99 之多核苷酸或如實施例 102 之載體。 104.一種製造蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之方法，其包含下列步驟：a) 在適合表現蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的條件下培養如實施例 103 之宿主細胞和 b) 回收該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。 105.一種藉由實施例 104 之方法所製造之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。 106.一種製造獨特型特異性多肽之方法，其包含下列步驟：a) 在適合表現獨特型特異性多肽的條件下培養如實施例 103 之宿主細胞和 b) 回收該獨特型特異性多肽。 107.一種獨特型特異性多肽，其藉由如實施例 106 之方法所製造。 108.一種醫藥組成物，其包含如實施例 1 至 74 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子以及醫藥上可接受之載劑。 109.一種醫藥組成物，其包含如實施例 75 至 99 中任一項之獨特型特異性多肽以及醫藥上可接受之載劑。 110.如實施例 1 至 74 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子、或如實施例 75 至 99 中任一項之獨特型特異性多肽、或如實施例 108 之醫藥組成物，其用為藥物。 111.如實施例 110 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該藥物是用於治療癌症或延緩癌症的進展、治療免疫相關疾病或延緩免疫相關疾病的進展、或增強或刺激受試者的免疫反應或功能。 112.如實施例 1 至 74 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或如實施例 75 至 99 中任一項之獨特型特異性多肽，其用以治療有需要的受試者的疾病。 113.如實施例 112 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或獨特型特異性多肽，其用以治療有需要的受試者的疾病，其中該疾病是癌症。 114.一種如實施例 1 至 74 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或如實施例 75 至 99 中任一項之獨特型特異性多肽之用途，其用於製造供治療疾病的藥物。 115.如實施例 114 之用途，其中該疾病為癌症。 116.一種治療受試者疾病之方法，其包含將包含如實施例 1 至 74 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之治療有效量之組成物或如實施例 108 之組成物投予該個體。 117.一種誘導標靶細胞裂解之方法，其包含在 T 細胞存在下使標靶細胞與實施例 1 至 74 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或實施例 108 之組成物接觸。 118.如實施例 117 之方法，其中該標靶細胞是癌細胞。 119.如實施例 117 或 118 之方法，其中該標靶細胞表現能夠活化蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之蛋白酶。 120.一種人源化抗獨特型 CD3 抗體或其抗原結合片段，其對抗 CD3 抗原結合分子的獨特型具有特異性，其中該抗獨特型 CD3 抗體或其片段當與抗 CD3 抗原結合分子結合時，特異性地阻斷抗 CD3 抗原結合分子與 CD3 的結合。 121.如實施例 120 之抗獨特型 CD3 抗體或其抗原結合片段，其中該抗獨特型 CD3 抗體或其片段透過包含蛋白酶辨識位點的肽連接子與抗 CD3 抗原結合分子可逆地結合。 122.如實施例 120 或 121 之抗獨特型 CD3 抗體或其抗原結合片段，其中該 CD3 是小鼠、猴或人 CD3。 123.一種降低 T 細胞活化雙特異性分子體內毒性之方法，其包含將實施例 75 至 99 中任一項之獨特型特異性多肽用蛋白酶可截切之連接子接附至T 細胞活化雙特異性分子，以形成蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中，與 T 細胞活化雙特異性分子的毒性相比，該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的體內毒降低。 124.如上文所闡述之本發明。
例示性序列
根據 Kabat 的 CDR 定義
CD3 原始HCDR1 TYAMN 1
CD3 優化HCDR1 (P033.078) (P035.093) (P021.045) SYAMN 2
CD3 優化HCDR1 (P035.064) (P004.042) NYAMN 3
CD3 原始HCDR2， CD3 優化HCDR2 (P035.093) (P021.045) RIRSKYNNYATYYADSVKG 4
CD3 優化HCDR2 (P033.078) RIRSKYNEYATYYADSVKG 5
CD3 優化HCDR2 (P035.064) RIRSKHNGYATYYADSVKG 6
CD3 優化HCDR2 (P004.042) RIRTKYNEYATYYADSVKG 7
CD3 原始HCDR3 HGNFGNSYVSWFAY 8
CD3 優化HCDR3 (P033.078) ASNFPSSFVSYFGY 9
CD3 優化HCDR3 (P035.093) ASNFPASYVSYFAY 10
CD3 優化HCDR3 (P035.064) ASNFPSSYVSYFGY 11
CD3 優化HCDR3 (P021.045) ASNFPSSYVSYFAY 12
CD3 優化HCDR3 (P004.042) ASNFPQSYVSYFGY 13
CD3 原始VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS 14
CD3 優化VH (P033.078) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFESYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNEYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPSSFVSYFGYWGQGTLVTVSS 15
CD3 優化VH (P035.093) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSS 16
CD3 優化VH (P035.064) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFDNYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKHNGYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPSSYVSYFGYWGQGTLVTVSS 17
CD3 優化VH (P021.045) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPSSYVSYFAYWGQGTLVTVSS 18
CD3 優化VH (P004.042) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFQFDNYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRTKYNEYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPQSYVSYFGYWGQGTLVTVSS 19
CD3 原始/ CD3 優化LCDR1 GSSTGAVTTSNYAN 20
CD3 原始/ CD3 優化LCDR2 GTNKRAP 21
CD3 原始/ CD3 優化LCDR3 ALWYSNLWV 22
CD3 原始/ CD3 優化VL QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAFRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL 23
TYRP1 HCDR1 DYFLH 24
TYRP1 HCDR2 WINPDNGNTVYAQKFQG 25
TYRP1 HCDR3 RDYTYEKAALDY 26
TYRP1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYFLHWVRQAPGQGLEWMGWINPDNGNTVYAQKFQGRVTMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRRDYTYEKAALDYWGQGTLVTVSS 27
TYRP1 LCDR1 RASGNIYNYLA 28
TYRP1 LCDR2 DAKTLAD 29
TYRP1 LCDR3 QHFWSLPFT 30
TYRP1 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIYNYLAWYQQKPGKVPKLLIYDAKTLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQHFWSLPFTFGQGTKLEIK 31
TYRP1 VH-CH1(EE) – CD3 原始/CD3 優化VL-CH1 – Fc (杵，PGLALA) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYFLHWVRQAPGQGLEWMGWINPDNGNTVYAQKFQGRVTMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRRDYTYEKAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDGGGGSGGGGSQAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAFRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 32
TYRP1 VH-CH1(EE) –Fc (臼，PGLALA) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYFLHWVRQAPGQGLEWMGWINPDNGNTVYAQKFQGRVTMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRRDYTYEKAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 33
TYRP1 VL-CL(RK) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIYNYLAWYQQKPGKVPKLLIYDAKTLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQHFWSLPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 34
CD3 原始VH-CL EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 35
CD3 優化(P033.078) VH-CL EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFESYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNEYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPSSFVSYFGYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 36
CD3 優化(P035.093) VH-CL EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 37
CD3 優化(P035.064) VH-CL EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFDNYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKHNGYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPSSYVSYFGYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 38
CD3 優化(P021.045) VH-CL EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPSSYVSYFAYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 39
CD3 優化(P004.042) VH-CL EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFQFDNYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRTKYNEYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPQSYVSYFGYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 40
人 CD3 ε 柄 – Fc (杵) – Avi QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVSENCVDEQLYFQGGSPKSADKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGLNDIFEAQKIEWHE 41
人 CD3 δ 柄 - Fc (臼) – Avi FKIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMCRSEQLYFQGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGLNDIFEAQKIEWHE 42
食蟹獼猴 CD3 ε 柄 – Fc (杵) – Avi QDGNEEMGSITQTPYQVSISGTTVILTCSQHLGSEAQWQHNGKNKEDSGDRLFLPEFSEMEQSGYYVCYPRGSNPEDASHHLYLKARVSENCVDEQLYFQGGSPKSADKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGLNDIFEAQKIEWHE 43
食蟹獼猴 CD3 δ 柄 - Fc (臼) – Avi FKIPVEELEDRVFVKCNTSVTWVEGTVGTLLTNNTRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESAVQVHYRMSQNCVDEQLYFQGGSPKSADKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGLNDIFEAQKIEWHE 44
人 CD3 QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI 45
食蟹獼猴 CD3 QDGNEEMGSITQTPYQVSISGTTVILTCSQHLGSEAQWQHNGKNKEDSGDRLFLPEFSEMEQSGYYVCYPRGSNPEDASHHLYLKARVCENCMEMDVMAVATIVIVDICITLGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQQDLYSGLNQRRI 46
hIgG1 Fc 區域 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 47
連接子 GGGGSGGGGS 48
連接子 DGGGGSGGGGS 49
人 κ CL 結構域 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 50
人 λ CL 結構域 QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 51
人 IgG1 重鏈恆定區 (CH1-CH2-CH3) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 52
蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，具有經改善之抗 CD3 (P035.093) 結合物
根據 Kabat 的 CDR 定義
CD3 P035.093
CD3 優化VH (P035.093) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSS 16
CDRH1 SYAMN 2
CDRH2 RIRSKYNNYATYYADSVKG 4
CDRH3 ASNFPASYVSYFAY 10
VL QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAFRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL 23
CDRL1 GSSTGAVTTSNYAN 20
CDRL2 GTNKRAP 21
CDRL3 ALWYSNLWV 23
FOLR1_16D5
VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSS 53
CDRH1 NAWMS 54
CDRH2 RIKSKTDGGTTDYAAPVKG 55
CDRH3 PWEWSWYDY 56
VL QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAFRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL 23
CDRL1 GSSTGAVTTSNYAN 20
CDRL2 GTNKRAP 21
CDRL3 ALWYSNLWV 22
ID_4.24.72
VH QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTVTDYSMNWVKQAPGKCLKWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDSATYFCAREGDYDVFDYWGHGTTLKVSS 57
CDRH1 DYSMN 58
CDRH2 WINTETGEPRYTDDFKG 59
CDRH3 EGDYDVFDY 60
VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIK 61
CDRL1 RASKSVSTSSYSYMH 62
CDRL2 YVSYLES 63
CDRL3 QHSREFPYT 64
FOLR1 proTCB ，具有蛋白酶連接子和抗 CD3 P035.093
K 鏈             QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTVTDYSMNWVKQAPGKCLKWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDSATYFCAREGDYDVFDYWGHGTTLKVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKSGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 65
H 鏈 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 66
L 鏈 QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAFRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 67
間質蛋白酶連接子 SGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGS 68
FOLR1proTCB ，具有蛋白酶連接子 CD3 ：P035.093
K 鏈             QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTVTDYSMNWVKQAPGKCLKWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDSATYFCAREGDYDVFDYWGHGTTLKVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSVHMPLGFLGPRQARVVNGGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 69
連接子 GGGGSVHMPLGFLGPRQARVVNGGGGGSGGGGS 70
H 鏈 As in FOLR1 proTCB with protease linker anti-CD3 P035.093 66
L 鏈 As in FOLR1 proTCB with protease linker anti-CD3 P035.093 67
FOLR1proTCB ，具有不可截切連接子 CD3 ：P035.093
K 鏈          QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTVTDYSMNWVKQAPGKCLKWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDSATYFCAREGDYDVFDYWGHGTTLKVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 71
連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGGGGSGGGGSGGGGS 72
H 鏈 As in FOLR1 proTCB with protease linker anti-CD3 P035.093 66
L 鏈 As in FOLR1 proTCB with protease linker anti-CD3 P035.093 67
FOLR1 TCB CD3 ：P035.093
K 鏈             EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 73
H 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 66
L 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 67
FOLR1proTCB ，帶有間質蛋白酶連接子 CD3 ：CH2527
K 鏈    QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTVTDYSMNWVKQAPGKCLKWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDSATYFCAREGDYDVFDYWGHGTTLKVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSRQARVVNGGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 74
連接子 GGGGSGGGGSRQARVVNGGGGGSGGGGSGGGGS 75
H 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 66
L 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 67
FOLR1proTCB ，具有 MMP2/9- 間質蛋白酶連接子 CD3:CH2527
K 鏈    QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTVTDYSMNWVKQAPGKCLKWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDSATYFCAREGDYDVFDYWGHGTTLKVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSVHMPLGFLGPRQARVVNGGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 76
連接子 GGGGSVHMPLGFLGPRQARVVNGGGGGSGGGGS 77
H 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 66
L 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 67
FOLR1 proTCB ，具有不可截切連接子 CD3 ：CH2527
K 鏈    QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTVTDYSMNWVKQAPGKCLKWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDSATYFCAREGDYDVFDYWGHGTTLKVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 78
H 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 66
L 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 67
遮蔽部分人源化變異體
遮蔽人源化變異體 H1L1
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQGLEWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSS 79
CDRH1 DYSMN 58
CDRH2 WINTETGEPRYTDDFKG 59
CDRH3 EGDYDVFDY 60
VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGQGTKLEIK 80
CDRL1 RASKSVSTSSYSYMH 62
CDRL2 YVSYLES 63
CDRL3 QHSREFPYT 64
遮蔽人源化變異體 H1L2
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQGLEWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSS 79
CDRH1 DYSMN 58
CDRH2 WINTETGEPRYTDDFKG 59
CDRH3 EGDYDVFDY 60
VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGQGTKLEIK 81
CDRL1 KSSKSVSTSSYSYMH 82
CDRL2 YVSYLES 63
CDRL3 QHSREFPYT 64
遮蔽人源化變異體 H2L2
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQGLEWMGWINTETGEPRYTDDFTGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSS 83
CDRH1 DYSMN 58
CDRH2 WINTETGEPRYTDDFTG 84
CDRH3 EGDYDVFDY 60
VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGQGTKLEIK 81
CDRL1 KSSKSVSTSSYSYMH 82
CDRL2 YVSYLES 63
CDRL3 QHSREFPYT 64
遮蔽人源化變異體 H3L2
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQGLEWMGWINTETGEPRYTQGFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSS 85
CDRH1 DYSMN 58
CDRH2 WINTETGEPRYTQGFKG 86
CDRH3 EGDYDVFDY 60
VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGQGTKLEIK 81
CDRL1 KSSKSVSTSSYSYMH 82
CDRL2 YVSYLES 63
CDRL3 QHSREFPYT 64
遮蔽人源化變異體 H3L3
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQGLEWMGWINTETGEPRYTQGFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSS 84
CDRH1 DYSMN 58
CDRH2 WINTETGEPRYTQGFKG 86
CDRH3 EGDYDVFDY 60
VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSREFPYTFGQGTKLEIK 87
CDRL1 RASKSVSTSSYSYMH 62
CDRL2 YVSYLES 63
CDRL3 QQSREFPYT 88
遮蔽人源化變異體 H7L5
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQGLEWMGWINTETGEPRYTDDFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSS 89
CDRH1 DYSMN 58
CDRH2 WINTETGEPRYTDDFKG 59
CDRH3 EGDYDVFDY 60
VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGQGTKLEIK 90
CDRL1 RASKSVSTSSYSYMH 62
CDRL2 YVSYLES 63
CDRL3 QHSREFPYT 64
遮蔽部分 scFv
H1L1 scFv QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQCLEWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIK 91
H1L2 scFv QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQCLEWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIK 92
H2L2 scFv QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQCLEWMGWINTETGEPRYTDDFTGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIK 93
H3L2 scFv QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQCLEWMGWINTETGEPRYTQGFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIK 94
FolR1 蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子 (proTCB) ，具有人源化遮蔽和 PMAKK 蛋白酶辨識序列
FolR1 pro TCB P035.093 H1L1
K 鏈    QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQCLEWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 95
H 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 66
L 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 67
間質蛋白酶連接子 SGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGS 68
FolR1 pro TCB P035.093 H1L2
K 鏈       QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQCLEWMGWINTETGEPRYTDDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 96
H 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 66
L 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 67
間質蛋白酶連接子 SGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGS 68
FolR1 pro TCB P035.093 H2L2
K 鏈 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQCLEWMGWINTETGEPRYTDDFTGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 97
H 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 66
L 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 67
間質蛋白酶連接子 SGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGS 68
FolR1 pro TCB P035.093 H3L2
K 鏈    QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTVTDYSMNWVRQAPGQCLEWMGWINTETGEPRYTQGFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAREGDYDVFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSKSVSTSSYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYVSYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREFPYTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRASNFPASYVSYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTPWEWSWYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP 98
H 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 66
L 鏈 同於 FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子抗 CD3 P035.093 67
間質蛋白酶連接子 SGGGSGGGGSPMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGS 68
例示性連接子和辨識序列
MMP 蛋白酶連接子 ggggsggggsg plglwsqggggsggggsggggsgg 99
蛋白酶辨識位點 1 RQARVVNG 100
蛋白酶辨識位點 2 VHMPLGFLGPGRSRGSFP 101
蛋白酶辨識位點 3 RQARVVNGXXXXXVPLSLYSG 102
蛋白酶辨識位點 4 RQARVVNGVPLSLYSG 103
蛋白酶辨識位點 5 plglwsq 104
蛋白酶辨識位點 6 VHMPLGFLGPRQARVVNG 105
蛋白酶辨識位點 7 FVGGTG 106
蛋白酶辨識位點 8 KKAAPVNG 107
蛋白酶辨識位點 9 PMAKKVNG 108
蛋白酶辨識位點 10 QARAKVNG 109
蛋白酶辨識位點 11 VHMPLGFLGP 110
蛋白酶辨識位點 12 QARAK 111
蛋白酶辨識位點 13 VHMPLGFLGPPMAKK 112
蛋白酶辨識位點 14 KKAAP 113
蛋白酶辨識位點 15 PMAKK 114
組合 MMP9 MK062，33 AA，用於 CD3 GGGGS VHMPLGFLGPRQARVVNGGGGGSGGGGS 115
組織蛋白酶 S/B GGGGSGGGGSGGGGS FVGGTGGGGSGGGGSGGS 116
KKAAPVNG GGGGSGGGGS KKAAPVNGGGGGSGGGGSGGGGS 117
PMAKKVNG GGGGSGGGGS PMAKKVNGGGGGSGGGGSGGGGS 118
QARAKVNG GGGGSGGGGS QARAKVNGGGGGSGGGGSGGGGS 119
MMP9 GGGGSGGGGS VHMPLGFLGPGGGGSGGGGSGGS 120
QARAK GGGGSGGGGS QARAKGGGGSGGGGSGGGGSGGS    121
MMP9-PMAKK GGGGSVHMPLGFLGP PMAKKGGGGSGGGGSGGS 122
KKAAP GGGGSGGGGS KKAAPGGGGSGGGGSGGGGSGGS    123
PMAKK GGGGSGGGGS PMAKKGGGGSGGGGSGGGGSGGS    124
組合 NF9/Mat5 連接子 GGGGSVHMPLGFLGPGRSRGSFPGGGGS    125
組合 MK062 MMP9 GGGGSGGGGSRQARVVNGGGGGSVPLSLYSGGGGGSGGGGS 126
組合 MK062 MMP9 GGGGSGGGGSRQARVVNGVPLSLYSGGGGGSGGGGS 127
實例
以下為本發明之方法和組成物的實例。應當理解，鑒於上文給出的一般描述，可以實施各種其他實施例。
實例 1 – 製備優化之抗 CD3 ( 多特異性 ) 抗體
所有優化的抗 CD3 抗體 (P033.078、P035.093、P035.064、P021.045、P004.042 殖株) 均藉由噬菌體展示選擇活動、使用源自先前描述的庫 (參見例如 WO 2014/131712，以引用方式併入本文) CD3 結合子，在本文中稱為“CD3 原始”，且分別包含 SEQ ID NO: 14 和 23 的 VH 和 VL 序列。在這些庫中，位於重鏈 CDR3 區的位置 N97 和 N100 (Kabat 編號) 被緘默或移除。為了直接比較，使用抗 TYRP1 抗體作為例示性標靶細胞抗原結合部分 (SEQ ID NO: 24-31)，將所有分子轉化為 T 細胞雙特異性抗體 (TCB) 形式，如 圖 2A所示。
次選殖重鏈和輕鏈 的可變區 DNA 序列，而與經預***各自受體哺乳動物表現載體的恆定重鏈或恆定輕鏈為同框 (in frame)，如 圖 2 B-E所示。
優化的抗 CD3 抗體的序列在 表 1所示的 SEQ ID NO 中給出。
表 1.在本實例中產生的優化的抗 CD3 抗體的序列。
殖株 HCDR1 HCDR2 HCDR3 VH LCDR1 LCDR2 LCDR3 VL
P033.078 2 5 9 15 20 21 22 23
P035.093 2 4 10 16 20 21 22 23
P035.064 3 6 11 17 20 21 22 23
P021.045 2 4 12 18 20 21 22 23
P004.042 3 7 13 19 20 21 22 23
CD3 原始 1 4 8 14 20 21 22 23
為了改善輕鏈與相應重鏈的正確配對，在結合 TYRP1 Fab 分子的人 CL (E123R、Q124K) 和人 CH1 (K147E、K213E) 中引入突變。
為了正確配對重鏈 (形成異源二聚體分子)，在抗體重鏈的恆定區中引入了杵臼突變 (分別為 T366W/S354C 和 T366S/L368A/Y407V/Y349C)。
此外，將 P329G、L234A 和 L235A 突變引入抗體重鏈的恆定區，以消除與 Fcγ 受體的結合。
所製備的 TCB 分子的完整序列在 SEQ ID NO: 32、33、34 和 36 (P033.078)、SEQ ID NO: 32、33、34 和 37 (P035.093)、SEQ ID NO: 32、33、34 和 38 (P035.064)、SEQ ID NO: 32、33、34 和 39 (P021.045)、SEQ ID NO: 32、33、34 和 40 (P004.042) 中給出。
亦製備包含 CD3 原始作為 CD3 結合子的對應分子。
該等 TCB 構建體是由 Evitria (Switzerland) 使用其專有的載體系統和習用 (非以 PCR 為基礎) 選殖技術及使用懸浮適應的 CHO K1 細胞所製備 (最初從 ATCC 及適應於 Evitria 懸浮培養的無血清生長中取得)。在產生過程中，Evitria 使用其專有的、不含動物成分和無血清的培養基 (eviGrow 及 eviMake2) 及其專有的轉染試劑 (eviFect)。細胞用對應的表現載體以 1:1:2:1 (“載體杵重鏈”：“載體臼重鏈”：“載體 CD3 輕鏈”：“載體 TYRP1 輕鏈”) 的比例轉染。通過離心和隨後的過濾 (0.2 μm 過濾器) 收穫上澄液，並通過標準方法從收穫的上清液中純化蛋白質。
簡而言之，含 Fc 的蛋白質是藉由蛋白質 A-親和力層析法從經過濾之細胞培養上澄液純化 (平衡緩衝液：20 mM 檸檬酸鈉、20 mM 磷酸鈉、pH 7.5；洗脫緩衝液：20 mM 檸檬酸鈉，pH 3.0) 。在 pH 3.0 下完成洗脫，然後立即中和樣品的 pH。通過離心 (Millipore Amicon® ULTRA-15, #UFC903096) 濃縮蛋白質，並通過粒徑篩析層析法在 20 mM 組胺酸，140 mM 氯化鈉，pH 6.0 中將聚集的蛋白質與單體蛋白質分離。
通過使用根據 Pace 等人，Protein Science, 1995, 4, 2411-1423 基於胺基酸序列計算的質量消光係數來量測在 280 nm 處的吸收來測定純化蛋白質之濃度。蛋白質的純度和分子量是在存在和不存在還原劑的情況下，使用 LabChipGXII (Perkin Elmer)，藉由 CE-SDS 來分析。聚集體含量的測定是使用於運行緩衝液 (分別為 25 mM K 2HPO 4，125 mM NaCl，200 mM L-精胺酸單鹽酸鹽，pH 6.7 或 200 mM KH 2PO 4，250 mM KCl pH 6.2) 中平衡之分析型粒徑篩析管柱 (TSKgel G3000 SW XL 或 UP-SW3000)，在 25°C 下藉由 HPLC 層析來進行。
所製備的 TCB 分子的生化和生物物理分析結果於 表 2中給出。
所有 TCB 分子都可以高品質來製造。
表 2.TCB 形式的抗 CD3 抗體的生化和生物物理分析。
抗 CD3 抗體 產量 [mg/l] 分析型粒徑篩析層析 [%] CE-SDS ( 主峰) [%]
HMW 單體 LMW
P033.078 32.8 0 100 0 100
P035.093 26.8 0 100 0 100
P035.064 46.4 0 100 0 100
P021.045 25.9 0 100 0 100
P004.042 28.7 0.4 99.6 0 100
CD3 原始 18.7 0 100 0 100
實例 2 – 經優化之抗 CD3 ( 多特異性 ) 抗體的熱穩定性之測定
實例 1 中所製備之抗 CD3 抗體 (TCB 形式) 之熱穩定性的監測，是藉由動態光散射 (DLS)、且藉由應用溫度斜坡，使用 Optim 2 儀器 (Avacta Analytical, UK)，藉由監測溫度依賴性固有蛋白質螢光監測而進行。
將 10 μg 過濾蛋白質樣品以 1 mg/ml 的濃度一式兩份加到 Optim 2 上。溫度以 0.1°C/min 從 25°C 上升到 85°C，收集在 350 nm/330 nm 處的螢光強度比和 266 nm 處的散射強度。
結果顯示於 表 3中。所有實例 1 中所製造的優化的 CD3 結合子的聚集溫度 (T agg) 和所觀察之溫度誘導的未摺疊轉變的中點 (T m) 與先前描述的 CD3 結合子 CD3 原始相當或更高。
表 3.TCB 形式的抗 CD3 抗體之熱穩定性，藉由動態光散射和溫度依賴性固有蛋白質螢光的變化來測量。
抗 CD3 抗體 T m[°C] T agg[°C]
P033.078 57 56
P035.093 58.5 57
P035.064 57.5 54
P021.045 58.5 54
P004.042 59 56
CD3 原始 57 54
實例 3 – 藉由表面電漿子共振 (SPR) 功能表徵優化的抗 CD3 ( 多特異性 ) 抗體
所有表面電漿子共振 (SPR) 實驗是在 Biacore T200 上於 25°C 下以具有 HBS-EP+ 作為運行緩衝液 (0.01 M HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、3 mM EDTA、0.005% 界面活性劑 P20；Biacore, Freiburg/Germany) 的進行。
對於親和力測量，TCB 分子是在 C1 感測晶片 (GE Healthcare) 表面上被捕獲 ，該表面以固定化抗 Fc (P329G) IgG (特異性結合人 IgG 1Fc(P329G) 的抗體；“抗 PG 抗體” - 參見 WO 2017/072210，其藉由引用併入本文)。實驗裝置如 圖 3所示。捕獲 IgG 是使用標準胺偶合套組 (GE Healthcare Life Sciences) 藉由直接固定約 400 個共振單位 (RU) 而偶合到感測晶片表面。
為了分析與 CD3 的交互作用，以 10 μl/min 的流速在 25 nM 下捕獲 TCB 分子 80 s。人和食蟹獼猴 CD3ɛ 柄-Fc(杵)-Avi/CD3δ 柄-Fc(臼) (CD3ɛ/δ, 參見 SEQ ID NO: 41 和 42 (人) 以及 SEQ ID NO: 43 和 44 (食蟹獼猴)) 以濃度為 0.122 – 125 nM、流速為 30 μl/min 穿過流動槽 300 s。解離監測 800 s。
藉由扣除參考流動槽所取得的反應，以校正本體折射率差 (bulk refractive index difference)。在此，抗原飛過具有固定化抗 PG 抗體的表面，但在該表面上注射 HBS-EP，而不是 TCB 分子。
使用 Biacore T200 評估軟體 (GE Healthcare Life Sciences) 推導出動力學常數，以藉由數值積分擬合 1:1 朗謬結合的速率方程式。使用公式 t 1/2= ln2/k off.計算交互作用的半衰期 (t 1/2)。
在 表 4中，列出相較於先前描述的結合物 CD3 原始相比的優化的抗 CD3 抗體結合的所有動力學參數。優化的抗 CD3 抗體 (TCB 形式) 與 CD3ɛ/δ 結合的 K D值在低 nM 範圍至高 pM 範圍內，對人 CD3ɛ/δ 的 K D值為 600 pM 達至 1.54 nM，且對食蟹獼猴 CD3ɛ/δ 為 200 pM 至 700 pM。在相同條件下藉由 SPR 測量，相較於 CD3 原始，優化的抗 CD3 抗體與人 CD3ɛ/δ 的結合親和力增加了 7 到 10 倍。
抗 CD3 抗體殖株 P033.078 與人 CD3ɛ/δ 單價結合的半衰期為 11.6 min，比 CD3 原始的結合半衰期高 6 倍。
表 4.抗 CD3 抗體 (TCB 形式) 對人和食蟹獼猴 CD3ɛ/δ 的親和力。
T = 25°C 時的動力學值
抗原 抗 CD3 抗體 k on[1/Ms] k off[1/s] K D(M) t 1/2[min]
人 CD3ɛ/δ P033.078 1.66E+06 9.96E-04 6.00E-10 11.6
P035.093 3.75E+06 1.53E-03 4.10E-10 7.55
P035.064 1.83E+06 1.15E-03 6.30E-10 10
P021.045 3.10E+06 1.33E-03 4.30E-10 8.69
P004.042 1.92E+06 2.95E-03 1.54E-09 3.92
CD3 原始 5.17E+05 3.38E-03 6.54E-09 3.42
食蟹獼猴 CD3ɛ/δ P033.078 2.20E+06 8.02E-04 3.70E-10 14.4
P035.093 4.89E+06 1.04E-03 2.10E-10 11.1
P035.064 2.44E+06 9.21E-04 3.80E-10 12.5
P021.045 4.88E+06 9.67E-04 2.00E-10 11.9
P004.042 3.85E+06 2.72E-03 7.10E-10 4.25
CD3 原始 1.14E+06 2.52E-03 2.21E-09 4.58
實例 4 – 在應激後藉由表面電漿子共振 (SPR) 表徵優化的抗 CD3 ( 多特異性 ) 抗體
為了評估脫醯胺位點去除的效果及其對抗體穩定性的效果，將優化的抗 CD3 抗體 (TCB 形式) 在 37°C、pH 7.4 和 40°C、pH 6 下培育 14 天， 並藉由 SPR 進一步分析它們與人 CD3ɛ/δ 的結合能力。儲存在 -80°C pH 6 的樣品用作參考。在 40°C 下應激的參考樣品和樣品是在 20 mM His、140 mM NaCl、pH 6.0 中，而在 37°C 下應激的樣品是在 PBS、pH 7.4 下，所有濃度均為 1.0 mg/ml。在應激期 (14 天) 後，將 PBS 中的樣品透析回 20 mM His、140 mM NaCl、pH 6.0 以進一步分析。
所有 SPR 實驗均在 Biacore T200 儀器 (GE Healthcare) 上於 25℃ 以 HBS-P+ (10 mM HEPES，150 mM NaCl pH 7.4，0.05% 界面活性劑 P20) 作為運行及稀釋緩衝液來執行。生物素化的人 CD3ɛ/δ (參見實例 3，SEQ ID NO: 41 和 42) 以及生物素化的抗 huIgG (Capture Select，Thermo Scientific，#7103262100) 固定在 S 系列感測晶片 SA (GE Healthcare，#29104992) 上，導致表面密度至少為 1000 個共振單位 (RU)。濃度為 2 μg/ml 的抗 CD3 抗體以 5 μl/min 的流速注射 30 s，並監測解離 120 s。表面是藉由注射 10 mM 甘胺酸 pH 1.5 60 秒來再生。藉由減去空白注射和減去從空白對照流動槽所獲得的反應來校正本體折射率差異。為了評估，取注射結束後 5 秒的結合反應。為了歸一化結合訊號，將 CD3 結合除以抗 huIgG 反應 (在固定化抗 huIgG 抗體上捕獲 CD3 抗體所獲得的訊號 (RU))。藉由將每個溫度應激樣品與對應的非應激樣品進行比較，計算相對結合活性。
如 表 5所示，相較於 CD3 原始，實例 1 中所製備的所有抗 CD3 抗體均顯示出在應激時與 CD3ɛ/δ 的結合改善。
表 5.在 pH 6/40°C 或 pH 7.4/37°C 下培育 2 週後，抗 CD3 抗體 (TCB 形式) 與人 CD3ɛ/δ 的結合活性。
抗 CD3 抗體 結合活性 [%]
   在 pH 6.0/40°C 下 2 週 在 pH 7.4/37°C 下 2 週
P033.078 99 99
P035.093 97 95
P035.064 97 96
P021.045 99 95
P004.042 98 98
CD3 原始 95 65
實例 5 – 使用優化的抗 CD3 ( 多特異性 ) 抗體的 Jurkat NFAT 報導細胞測定
含有優化的抗 CD3 抗體的 (TYRP1 標靶) TCB，在存在 CHO-K1 TYRP1 殖株 76 (細胞是藉由穩定轉導 CHO-K1 細胞所產生) 作為標靶細胞下，在 Jurkat NFAT 報導細胞測定中來測試。Jurkat NFAT 報導細胞 (Promega) 在含有 10% FBS、2 g/l 葡萄糖 (Sigma)、2 g/l NaHCO 3(Sigma)、25 mM HEPES (Gibco)、1% GlutaMax (Gibco)、1 x NEAA (Sigma)、1% SoPyr (Sigma) 的 RPMI 1640 (Gibco) (Jurkat NFAT 培養基) 中培養，濃度為 0.1-0.5 百萬細胞/ml。CHO-K1 TYRP1 殖株 76 細胞在含有 10% FBS 和 6 μg/ml 嘌黴素 (Invivogen) 的 DMEM/F12 + GlutaMAX (1x) (Gibco) 中培養。該測定在 Jurkat NFAT 培養基中進行。
使用胰蛋白酶 (Gibco) 脫附 CHO-K1 TYRP1 殖株 76 細胞。對細胞進行計數並檢查存活性。將標靶細胞重新懸浮在測定培養基中，並在白色平底 384 孔板中每孔接種 10 000 個細胞。然後，添加指定濃度的 TCB。對 Jurkat NFAT 報導細胞進行計數，檢查存活性，每孔接種 20 000 個細胞，對應於 2:1 的效應子與靶標 (E:T) 比。此外，將 2% 終體積的 GloSensor cAMP 試劑 (E1291，Promega) 添加到每個孔中。在指定的培育時間之後，使用 Tecan Spark10M 裝置測量發光。
如 圖 4A-B所示，含有優化的抗 CD3 抗體的 TCB 對 Jurkat NFAT 報導細胞具有與含有親代結合子 CD3 原始的 TCB 相似的功能活性。測試的 TCB 以濃度依賴性方式誘導 CD3 活化。
實例 6 - 以優化的抗 CD3 ( 多特異性 ) 抗體之初代黑色素瘤細胞的腫瘤細胞殺除
(TYRP1 標靶) TCB 形式的優化之抗 CD3 抗體在腫瘤細胞殺除測定中測試，使用新鮮分離的人 PBMC，與人黑色素瘤細胞株 M150543 (初代黑色素瘤細胞株，從蘇黎世大學的皮膚病學細胞庫獲得) 共培育。腫瘤細胞裂解是藉由定量 24 h 和 48 h 後細胞凋亡或壞死細胞所釋放到細胞上澄液中的 LDH 來測定。CD4 和 CD8 T 細胞的活化是藉由 48 h 後兩個細胞次群上 CD69 和 CD25 的上調來分析。
在測定開始前一天，使用胰蛋白酶 (Gibco) 脫附標靶細胞 (M150543)，用 PBS 洗滌一次並以 0.3 百萬細胞/ml 的密度重新懸浮在生長培養基 (含有 10% FBS、1% GlutaMax (Gibco) 和 1% SoPyr (Sigma) 的RPMI 1640 (Gibco)) 中。將 100 μl 細胞懸浮液 (含 30 000 個細胞) 接種到 96 孔平底板中。將細胞在培養箱中在 37°C 下培養過夜。
第二天，PBMC 從健康供體的血液中分離，並檢查其存活性。從接種的標靶細胞中去除培養基，並將 100 μl 測定培養基 (RPMI 1640 (Gibco)，含有 2% FBS 和 1% GlutaMax (Gibco)) 加入孔中。將抗體以指定濃度在測定培養基中稀釋，並將每孔 50 μl 添加到標靶細胞中。將測定培養基添加到對照孔中。分離的 PBMC 以 6 百萬細胞/ml 的密度重新懸浮，每孔加入 50 μl，導致 300 000 個細胞/孔 (E:T 10:1)。為了測定自發的 LDH 釋放 (最小裂解 = 0%)，將 PBMC 僅和標靶細胞共培育。為了測定最大 LDH 釋放 (最大裂解 = 100%)，僅將測定培養基添加到標靶細胞中。使用在不存在標靶細胞下具有 PBMC 和 TCB 的對照孔來測試 TCB 的特異性。為了測定在沒有表現標靶的標靶細胞下 CD8 和 CD4 T 細胞是否被活化，48 小時後分析 CD25 的表現。
在第一次 LDH 測量前幾小時，將 50 μl 含有 4% Triton X-100 (Bio-Rad) 的測定培養基加入僅含有標靶細胞的孔中 (導致每孔終濃度為 1% Triton X-100) 以獲得最大的 LDH 釋放。該測定在培養箱中在 37°C 下總共培養 48 h。在測定開始後 24 h 進行第一次 LDH 測量。為此，在測量前將細胞毒性檢測套組 (LDH) (Roche/Sigma, #11644793001) 調整至室溫。將測定板以 420 x g 離心 4 min，並將每孔 50 μl 上澄液轉移到 96 孔平底板上進行分析。然後製備每孔 1.25 μl LDH 催化劑和 56.25 μl LDH 受質的反應混合物。隨後將 50 μl LDH 反應混合物加入每個孔中，並立即使用 TECAN Infinite F50 儀器測量吸光度。測定開始後 48 h 重複測量。
然後收穫 PBMC，並藉由測量 CD25 和 CD69 上調來分析活化。細言之，每孔加入 100 μl 的 FACS 緩衝液，並將細胞轉移至 96 孔 U 底板進行 FACS 染色。將板以 400 x g 離心 4 min，去除上澄液，且每孔用 150 μl 的 FACS 緩衝液洗滌細胞。將板再次以 400 x g 離心 4 min 並去除上澄液。隨後將每孔 30 μl 含有 CD4 APC (RPA-T4 株，BioLegend) 、CD8 FITC (SK1 殖株，BioLegend) 、CD25 BV421 (BC96 株，BioLegend) 和 CD69 PE (FN50 殖株，BioLegend) 的抗體混合物加入到細胞。細胞在冰箱中培育 30 分鐘。然後將細胞用 FACS 緩衝液洗滌兩次，並重新懸浮在每孔含有 1% PFA 的 100 μl FACS 緩衝液中。測量前，將細胞重新懸浮於 150 μl FACS 緩衝液中。使用 BD LSR Fortessa 裝置來分析。
相較於含有親代結合子 CD3 原始的 TCB，用含有抗 CD3 抗體殖株 P035.093 和殖株 P021.045 的 TCB 處理導致最高的腫瘤細胞殺除，殖株 P033.078 和殖株 P035.064 導致中等程度的腫瘤細胞殺除，其次是殖株 P004.042，誘導類似的腫瘤細胞殺除 ( 圖 5A-B)。當用含有抗 CD3 抗體殖株 P035.093 和株 P021.045 的 TCB 處理時，T 細胞的活化最高，而含有其他抗 CD3 抗體殖株的 TCB 導致與含有親代結合子 CD3 原始的 TCB 相似的 T 細胞活化 ( 圖 6A-D)。
如 圖 7A-B所示，在沒有腫瘤標靶細胞下，測試的 TCB 不會誘導在 CD8 和 CD4 T 細胞上的 CD25 上調。此結果顯示，測試的 CD3 結合子依賴於交聯，例如經由與腫瘤細胞結合來誘導 T 細胞活化，並且不能以單價形式誘導 T 細胞活化。
實例 7 – 製備優化之抗 CD3 抗體
優化的抗 CD3 抗體殖株 P033.078、P035.093 和 P004.042 被轉化為單價人 IgG 1形式，CD3 結合部分上具有交換的 VH 和 VL 域，如 圖 8A所繪示。
次選殖重鏈和輕鏈的可變區 DNA 序列，而與經預***各自受體哺乳動物表現載體的恆定重鏈或恆定輕鏈為同框 (in frame)，如 圖 8 B-D所示。
為了正確配對重鏈 (形成異源二聚體分子)，在抗體重鏈的恆定區中引入了杵臼突變 (分別為 T366W/S354C 和 T366S/L368A/Y407V/Y349C)。
此外，將 P329G、L234A 和 L235A 突變引入抗體重鏈的恆定區，以消除與 Fcγ 受體的結合。
亦製備包含 CD3 原始作為 CD3 結合子的對應分子。
單價 IgG 分子在 Evitria (瑞士) 製備，如實例 1 中對 TCB 分子所述來純化和分析。對於細胞的轉染，以 1:1:1 (“載體杵重鏈”：“載體臼重鏈”：“載體輕鏈”) 的比例施加相應的表現載體。
所製備的單價 IgG 分子的生化和生物物理分析結果於 表 6中給出。
所有單價 IgG 分子都可以高品質產生。
表 6單價 IgG 形式的抗 CD3 抗體的生化和生物物理分析。
抗 CD3 抗體 產量 [mg/l] 分析型粒徑篩析層析 [%] CE-SDS ( 主峰) [%]
HMW 單體 LMW
P033.078 1560 0 98.9 1.1 94.6
P035.093 2250 0 98.2 1.8 92.1
P004.042 3360 0 100 0 84.5
CD3 原始 1447.5 0.9 99.1 0 90.5
實例 8 – 優化之抗 CD3 抗體的熱穩定性之測定
如實例 2 中所述，藉由動態光散射 (DLS) 和藉由監測溫度依賴性固有蛋白質螢光來監測單價 IgG 形式 (實例 19 中製備) 的抗 CD3 抗體的熱穩定性。
結果顯示於 表 7中。所有單價 IgG 形式的優化的 CD3 結合子的聚集溫度 (T agg) 和所觀察之溫度誘導的未摺疊轉變的中點 (T m) 與先前描述的 CD3 結合子 CD3 原始相當或更高。
表 7.單價 IgG 形式的抗 CD3 抗體之熱穩定性，藉由動態光散射和溫度依賴性固有蛋白質螢光的變化來測量。
抗 CD3 抗體 T m[°C] T agg[°C]
P033.078 57.0 55.5
P035.093 58.0 55.5
P004.042 58.5 56.0
CD3 原始 55 53.0
實例 9 – 藉由表面電漿子共振 (SPR) 功能表徵優化的抗 CD3 抗體
SPR 實驗如實例 3 所述進行，使用實例 7 中所製備的單價 IgG 分子。
為了分析與 CD3 的交互作用，以 5 μl/min 的流速在 50 nM 下捕獲 IgG 分子 240 s。人和食蟹獼猴 CD3ɛ 柄-Fc(杵)-Avi/CD3δ 柄-Fc(臼) 以濃度為 0.061 - 250 nM、流速為 30 μl/min 穿過流動槽 300 s。解離監測 800 s。
在 表 8中，列出相較於先前描述的結合物 CD3 原始相比的優化的抗 CD3 抗體結合的所有動力學參數。優化的抗 CD3 抗體 (單價 IgG 形式) 與 CD3ɛ/δ 結合的 K D值在低 nM 範圍至高 pM 範圍內，對人 CD3ɛ/δ 的 K D值為 770 pM 達至 1.36 nM，且對食蟹獼猴 CD3ɛ/δ 為 200 pM 至 400 pM。在相同條件下藉由 SPR 測量，相較於 CD3 原始，優化的抗 CD3 抗體與人 CD3ɛ/δ 的結合親和力增加了 3.5 到 15 倍。
抗 CD3 抗體殖株 P033.078 與人 CD3ɛ/δ 單價結合的半衰期為 8.69 min，比 CD3 原始的結合半衰期大於 2 倍多。
表 8.抗 CD3 抗體 (單價 IgG 形式) 對人和食蟹獼猴 CD3ɛ/δ 的親和力。從三重複測量所獲得的資料。
T = 25°C 時的動力學值
抗原 抗 CD3 抗體 k on[1/Ms] k off[1/s] K D(M) t 1/2[min]
人 CD3ɛ/δ P033.078 1.73 E+06 1.33 E-03 7.71 E-10 8.69
P035.093 3.08 E+06 1.40 E-03 4.56 E-10 8.25
P004.042* 6.28 E+06 8.52 E-03 1.36 E-09 1.36
CD3 原始 5.87 E+05 2.90 E-03 4.94 E-09 3.98
食蟹 獼猴 CD3ɛ/δ P033.078 2.60 E+06 1.04 E-03 4.03 E-10 11.11
P035.093 4.38 E+06 9.81 E-04 2.24 E-10 11.78
P004.042* 1.85 E+07 8.09 E-03 4.39 E-10 1.43
CD3 原始 1.20 E+06 2.45 E-03 2.03 E-09 4.72
* 由於擬合品質不佳，動力學和親和力值可能不完全可靠
實例 10 – 產生抗獨特型遮蔽
作為嵌合 IgG 的抗獨特型遮蔽的製造和評估
本文中所述之嵌合 IgG 是由 Evitria 使用其專有的載體系統和習用 (非以 PCR 為基礎) 選殖技術及使用懸浮適應的 CHO K1 細胞 (最初從 ATCC 接收及適應於 Evitria 懸浮培養的無血清生長中) 來製備。在產生過程中，Evitria 使用其專有的、不含動物成分和無血清的培養基 (eviGrow 及 eviMake2) 及其專有的轉染試劑 (eviFect)。藉由離心和隨後的過濾 (0.2 μm 過濾器) 收穫上澄液，並藉由標準方法純化。
抗獨特型遮蔽的表徵 - 與不同 CD3 mAb 的結合
在具有 HBS-EP+ 作為運行緩衝液 (0.01 M HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、0.005% 界面活性劑 P20 (BR-1006-69，GE Healthcare)) 的 Biacore T200 上進行 SPR 實驗。藉由胺偶合將三個抗獨特型抗體直接固定在 CM5 晶片 (GE Healthcare) 上。不同 T 細胞雙特異性物 (TCB) 的三倍稀釋系列以 30 μl/min 下通過配體 180 sec，以記錄締合相。監測解離相 600 s，並通過從樣品溶液切換到 HBS-EP+ 來觸發解離相。在每個循環後，注射一次 10 mM 甘胺酸 pH 2.1 持續 60 sec、接以二次注射 30 sec 使晶片表面再生。藉由扣除參考流動槽 1 所取得的反應，以校正本體折射率差。通過使用 Biaeval 軟體 (GE Healthcare) 擬合 1:1 朗謬結合來從動力學速率常數中得出親和力常數。該測量用單一稀釋系列進行。
抗獨特型 IgG CD3 結合子 ka [1/Ms] kd [1/s] KD [nM]
4.15.64 P035.093 1.44E+04 1.74E-04 12.0
CH2527 1.69E+04 4.43E-04 26.2
   4.24.72 P035.093 1.48E+05 3.09E-04 2.1
CH2527 1.41E+05 6.75E-04 4.7
   4.32.63 P035.093 無結合
CH2527 2.92E+04 2.99E-04 10.0
表 9: 不同遮蔽對不同 CD3 結合子的結合親和力。SPR 分析以作為 IgG 的遮蔽 (固定在 CM5 晶片上) 和具有不同 CD3 結合 Fab 的 TCB 作為分析物來評估。
抗獨特型遮蔽的表徵 - 可開發性
由於其中一個抗獨特型遮蔽 (4.15.64) 在 CDRL1 (NYS) 中展現 N-醣化位點，因此不再考慮該分子，但只有 4.24.72 和 4.32.63 遮蔽被進一步評估為它們可用於阻斷不同的 CD3 結合子
在 40°C 下的 20 mM His/HCl、140 mM NaCl pH 6.0 或 37°C 下的 1xPBS pH 7.4 中培育 14 天後，抗獨特型抗體 4.32.63 和 4.24.72 的結合是使用 Biacore T200 儀器 (GE Healthcare) 藉由表面電漿子共振來研究。簡而言之，使用標準胺偶合化學，將單體 FolR1-Fc (在流動槽 2 上) 和抗 PGLALA 抗體 (在流動槽 4 上) 固定在 S 系列感測晶片 CM5 (CE Healthcare) 上，導致表面密度高於 10000 共振單位 (RU)。流動槽 1 和 3 用作假擬對照。含有 CD3-CH2527 結合域的 FolR1 TCB-D-16D5 以 10 μg/ml 的濃度以 5 μl/min 的流速僅注射到 FolR1-Fc 表面，持續 120 s，導致表面密度超過 1000 RU。隨後，將抗獨特型抗體以 1 μg/ml 的濃度以 5 μl/min 的流速注射到所有流動槽中，持續 60 秒和 120 秒。監測解離 60s。FolR1-Fc 表面藉由注射 10 mM 甘胺酸 pH 1.7 60 s 再生，抗 PGLALA 表面藉由注射 10 mM NaOH 60 s 再生。藉由扣除來自流動槽1 及 3 (假擬表面) 所取得的反應，以校正本體折射率差。
為了歸一化抗獨特型抗體的結合訊號，將 FOLR1 TCB-D-16D5 表面的結合反應除以抗 PGLALA 表面的結合反應。藉由將每個分子應激樣品的歸一化反應除以的未應激參考樣品的歸一化反應，獲得相對活性濃度。
4.32.63 4.24.72
熱穩定性 [Tagg °C] 67.7 61.7
應激後剩餘的分子完整性和活性 [%] ：
CE-SDS；非還原
40 °C pH6.0 96 97
37 °C pH7.4 94 94
CE-SDS；還原
40 °C pH6.0 98 99
37 °C pH7.4 98 98
單體含量 [%]
40 °C pH6.0 99 98
37 °C pH7.4 99 98
相對活性濃度 [%]
40 °C pH6.0 73 96
37 °C pH7.4 96 92
表 10:親代嵌合抗獨特型遮蔽的分子穩定性比較 (應激條件後的熱穩定性和分子完整性/活性，例如在不同緩衝液中培育 14 天)。
對於 4.32.63 遮蔽，在 40°C、pH6.0 下培育 14 天後，觀察到相對活性濃度顯著降低 (73% 的剩餘標靶結合)，而 4.24.72 在這些條件下具有 96% 的剩餘標靶結合活性穩定。
實例 11 – 篩選抗 CD3 結合子 P035.093 的抗獨特型殖株
使用 Jurkat NFAT 活化測定和 TYRP1 TCB (不同的 CD3 結合子) 測試抗獨特型 (抗 ID) 殖株 (4.24.72、4.32.63、4.21 和 4.15.64) 針對 CD3 結合子的結合和阻斷能力。由於阻斷 CD3 結合子，可在 Jurkat NFAT 活化的減少中看到抗 ID IgG 的阻斷 ( 圖 10)。
TYRP1 標靶 T 細胞雙特異性抗體 (TCB) 同時與標靶細胞上的 TYRP1 和 T 細胞上的 CD3ε 結合 (Jurkat NFAT)，從而誘導 T 細胞活化。T 細胞活化與發光相關，因為 Jurkat NFAT 細胞在經由 CD3ε 活化後表現螢光素酶。Jurkat-NFAT 報導細胞株 (Promega) 是人急性淋巴白血病報導細胞株，具有 NFAT 啟動子，表現人 CD3ε。如果 TCB 結合腫瘤標靶並且 CD3 (交聯) 結合 CD3ε，螢光素酶表現可在添加 One-Glo 受質 (Promega) 後測量發光。
Jurkat NFAT 測定培養基：RPMI1640、2 g/l 葡萄糖、2 g/l NaHCO3、10% FCS、25 mM HEPES、2 mM L-麩醯胺酸、1 x NEAA、1 x 丙酮酸鈉
Jurkat NFAT 培養基：RPMI1640、2 g/l 葡萄糖、2 g/l NaHCO3、10% FCS、25 mM HEPES、2 mM L-麩醯胺酸、1 x NEAA、1 x 丙酮酸鈉；新鮮加入的潮黴素 B 200 μg/ml。
收穫 TYRP1 陽性標靶細胞 (CHO-huTYRP1 cl 76) 和效應細胞 (Jurkat NFAT)，計數並檢查存活性。TCB 在 Jurkat 測定培養基中稀釋 (最終濃度：先前測定中測定的 EC90 濃度，50 μl/孔)。TCB、標靶細胞 (20.000 個/孔，50 μl/孔) 和 Jurkat NFAT 效應細胞與 cAMP (2% 終體積) (50.000 個細胞/孔，50 μl/孔) 混合並加入 96 孔白壁平底板 (Greiner BioOne)。因此 E:T 比為 2.5:1。在製備稀釋行之前，抗獨特型 IgG 在 Jurkat 測定培養基中稀釋，每孔加入 50 μl。細胞在 37°C 下在加濕培養箱中培育 22 h，然後將它們從培養箱中取出約 10 min 以適應室溫，然後在 Tecan Spark 中使用 0.5 秒/孔作為檢測時間讀取發光值。TYRP1 TCB (不同的 CD3 結合子) 會誘導 Jurkat NFAT 活化，而非標靶 TCB (CD3 CH2527) 則不會 ( 圖 10A)。當抗 ID IgG 與 CD3 結合子結合時，它可以阻斷 Jurkat NFAT 活化，如抗 ID 4.24.72 IgG 所示，該 IgG 阻斷此處使用的所有 CD3 結合子，但 CD3 殖株 22 和 CD3 P033.005 除外 (圖 3B)。抗 ID 4.32.63 IgG 僅阻斷 CD3 結合子 CH2527 ( 圖 10C)。除 CD3 殖株 22 外，抗 ID 4.15.64 IgG 阻斷此處使用的所有 CD3 結合子 ( 圖 10D)。  除 CD3 殖株 22 外，抗 ID 4.21 IgG 阻斷此處使用的所有 CD3 結合子，而對 CD3 CH2527 觀察到的阻斷最強 ( 圖 10E)。  總之，抗 ID 4.24.72 在該測定設置中顯示出最佳阻斷能力，因此使用 CD3 P035.093 轉化為 pro-TCB 形式。
實例 12 – FOLR1 pro-TCB 形式中的抗 ID 4.24.72 的遮蔽效率
FOLR1 proTCB 與不同 CD3 結合子的比較
為了比較不同 CD3 結合子與抗獨特型遮蔽 4.24.72 的遮蔽，製造 FOLR1 proTCB 和對應的 FOLR1 TCB 分子。proTCB 分子包含遮蔽和 CD3 Fab 之間的不可截切的 GS 連接子或可被 MMP2/9 和間質蛋白酶截切的連接子序列。
所有分子都以足夠的量和良好的品量製造。正如預期，相較於親代 TCB，proTCB 分子通常表現出較低的產量。
說明 產量 [mg/L] 產物峰值 SEC [%] 主峰 CE-SDS [%] 內毒素 [EU/ml]
FOLR1proTCB_CH2527_MT 0.6 93.6 94.4 ＜ 0.59
FOLR1proTCB_CH2527_MMP-MT 4.3 100.0 95.4 ＜ 0.17
FOLR1proTCB_CH2527_不可截切的連接子 8.3 96.9 97.5 ＜ 0.11
FOLR1 TCB_CH2527 12.9 97.3 100.0 ＜ 0.04
FOLR1proTCB_P035.093_MMP-MT 6.9 94.0 91.3 0.19
FOLR1proTCB_P035.093_不可截切的連接子 3.1 97.6 100.0 n.d.
FOLR1 TCB_P035.093 5.6 96.0 98.6 ＜ 0.14
FOLR1proTCB_P021.045_MMP-MT 3.7 93.1 94.2 ＜ 0.1
FOLR1proTCB_P021.045_不可截切的連接子 1.0 95.8 100.0 n.t.
FOLR1 TCB_P021.045 4.4 94.1 100.0 n.t.
FOLR1proTCB_P035.093_新 MT 1.9 98.4 97.4 ＜ 0.45
表 11 ：包含不同 CD3 結合單位的 FOLR1 TCB 和 FOLR1 proTCB 的製造和表徵。MMP：hu MMP2/9 的截切位點；MT：hu 間質蛋白酶的截切位點
FOLR1 TCB 和 FOLR1 pro-TCB 用 Jurkat NFAT 活化測定來測試，以查看抗 ID 遮蔽 4.24.72 是否阻斷 pro-TCB 形式的 CD3 結合體 (抗 ID 二硫鍵穩定的 scFv N 端融合到 CD3 結合子)。Jurkat NFAT 測定是用 huFOLR1 塗覆的珠代替標靶細胞來進行。2x30 μl Streptavidin Dynabeads 分別用 5 ml DPBS 稀釋。珠在 400 rcf 下離心 4 min，並吸出上澄液。珠在 1 ml 中用 20 μg 生物素化 FolR1 抗原在 4°C 下緩慢旋轉塗覆 1 hr。溫育後，珠-ag 結合體各用 5 ml DPBS 洗滌並重新懸浮於 4 ml 測定培養基中。收穫效應細胞 (Jurkat NFAT)，計數並檢查存活性。TCB 在 Jurkat 測定培養基中稀釋。TCB (10 μl/孔)、經塗覆的珠 (10 μl/孔)、及 Jurkat NFAT 效應細胞與 cAMP (2% 終體積) (20.000 個細胞/孔，20 μl/孔) 混合並加入 384 孔白壁平底板 (Falcon/Corning)。板在 37°C 下在加濕培養箱中培養 5-6 h，然後將它們從培養箱中取出，然後在 Tecan Spark 中使用 0.5 秒/孔作為檢測時間讀取發光值。
具有抗 ID 遮蔽 4.24.72 的 FOLR1 pro-TCB 在指定濃度範圍內不會介導 Jurkat NFAT 活化，而 FOLR1 TCB 會介導劑量依賴性 Jurkat NFAT 活化 ( 圖 11A)，這意味著抗 ID 4.24.72 就阻斷方面亦適用於pro-TCB 形式。
下一步是測試具有可截切連接子的 FOLR1 pro-TCB，以測試在殺除 (比 Jurkat NFAT 更敏感) 和在連接子截切時釋放遮蔽的遮蔽效率。使用 HeLa (FolR1+++) 細胞評估由 FOLR1 (pro-) TCB 介導的 T 細胞殺除。人 PBMC 用作效應細胞，E:T 比為 10:1。人周圍血液單核細胞 (PBMC) 從健康人供體獲得的膚色血球層中分離。膚色血球層用無菌 PBS 1:1 稀釋並以 Histopaque 梯度 (Sigma, #H8889) 分層。在離心 (450 x g, 30 分鐘，無間斷，室溫) 後，將含有 PBMC 的中間相 轉移到新的離心管中，隨後用 50 ml PBS 填充。將混合物離心 (400 x g，10 分鐘，室溫)，棄去上澄液，將 PBMC 沉澱重新懸浮在 2 ml ACK 緩衝液中用於紅血球裂解。在 37°C 下培育約 2-3 分鐘後，將管中裝入無菌 PBS 至 50 ml，並以 350 x g 離心 10 分鐘。在將 PBMC 重新懸浮在含有 10% FCS、1X GlutaMax 和 10% DMSO 的 RPMI1640 培養基中之前，該洗滌步驟重複一次。PBMC 在 CoolCell® 細胞冷凍容器 (BioCision) 中於 -80°C 緩慢冷凍，然後轉移到液態氮中。在測定開始前一天，用胰蛋白酶/EDTA 收集貼附標靶細胞，計數，檢查存活性並重新懸浮於測定培養基 (RPMI1640，2% FCS，1X GlutaMax) 中。測定開始前約 24 h，PBMC 在進階 RPMI1640 培養基 (+2% FCS，1X GlutaMax) 中解凍。PBMC 以 350 g 離心 7 min，然後重新懸浮在新鮮培養基 (進階 RPMI1640、2% FCS、1X GlutaMax) 中。PBMC 在用於測定之前最多保留 24 小時。使用 96 孔平底板以 20 000 個細胞/孔的密度接種標靶細胞。將分子在測定培養基 (RPMI1640、2% FCS、1X GlutaMax) 中稀釋，並以指定濃度一式三份加入。將板在加濕培養箱中在 37°C 下培養約 20 h。收穫 PBMCS 並以 350 g 離心 7 min，然後將它們重新懸浮在測定培養基 (RPMI1640、2% FCS、1X GlutaMax) 中。在將板在 37°C 下培育 48 小時之前，0.2 百萬個 PBMC 加入 100 μl/孔中 (E:T 10:1，基於接種的標靶細胞數量)。在 37°C、5% CO2 下培育 48 h 後，通過定量細胞凋亡/壞死細胞釋放到細胞上澄液中的 LDH (LDH 檢測套組，Roche Applied Science，#11 644 793 001) 來評估標靶細胞殺除情況。標準反應是指標靶細胞與效應細胞共培育而沒有任何 TCB。
FOLR1 TCB 誘導劑量依賴性 HeLa 細胞殺除，EC50 值 ~0.29 pM。活化的 pro-TCB (與重組間質蛋白酶預培育用於連接子截切) 的效力與 FOLR1 TCB 相當。含有不可截切連接子的 pro-TCB 介導的標靶細胞殺除降低 (EC50 增加約 239 倍) ( 圖 11C)。除了殺除標靶細胞之外，在 37°C、5% CO2 下培育 48 h 後，藉由定量 CD8 陽性 T 細胞上的 CD69 來評估 T 細胞活化。關於 CD8 陽性 T 細胞上 CD69 的 MFI，FOLR1 TCB 和預活化的 FOR1 pro-TCB 的效力是相當的，並且對於遮蔽的 pro-TCB (不可截切) 檢測不到 CD8 T 細胞活化。關於 CD69 陽性 CD8 T 細胞的百分比，遮蔽的 pro-TCB 顯示 CD69 陽性 CD8 T 細胞增加 ＞ 5nM，在此處使用的最高濃度下增加到約 30%。針對具有不同 FOLR1 表現量的不同細胞株，比較抗 ID 4.24.72 的遮蔽效率。
在 huPBMC 培育 48 h 後測量劑量依賴性標靶細胞殺除 (Hela 高 FOLR1 表現、Ovcar-3 和 Skov-3 中等 FOLR1 表現以及 HT-29 具有低 FOLR1 表現) 以分析抗 ID 4.24.72 在 pro-TCB 形式具有 CD3 P035.093 的遮蔽效率。TCB 和 FOLR1 陽性標靶細胞 (E:T = 10:1，效應子是人 PBMC)。FOLR1 TCB 在所有細胞株 (Hela、Skov-3、Ovcar-3、HT-29) 上誘導劑量依賴性標靶細胞殺除，而遮蔽的 FOLR1 pro-TCB 顯示標靶細胞殺除降低 ( 圖 12A 及 12B)。遮蔽效率似乎取決於 FOLR1 表現量。對於具有較低 FOLR1 表現量的細胞，由 FOLR1 pro-TCB (不可截切) 所誘導的標靶細胞殺除似乎減少最多。FOLR1 TCB 與 CD3 結合子 CH2527 和 FOLR1 TCB 與 CD3 結合子 P035.93 的比較顯示具有 CD3 P035.093 的 TCB 的效力略高 ( 圖 12B)。用抗 ID 4.24.72 遮蔽兩種 CD3 結合子是可能的。
實例 13 – 遮蔽 4.24.72 之人源化
如實例 12 所示，FOLR1 proTCB 被遮蔽 4.24.72 有效阻斷，如 Jurkat NFAT T 細胞活化測定所示。連接子截切後，此 proTCB 分子在標靶細胞殺除測定中完全活化。因此，由於該遮蔽可與不同的 CD3 結合子一起使用，因此選擇此抗獨特型抗體進行人源化。十種不同的可變重鏈和八種不同的可變輕鏈被設計和製造為單體單臂 IgG ( 圖 13)。分子的異源二聚化藉由應用杵臼技術而實現。單臂 IgG 在 Expi293F 細胞中以 2 ml 小規模瞬時製造 (根據製造商的建議進行轉染)。使用含有單臂分子的產生上澄液直接評估與 CD3 IgG (P035.093) 的初始結合和 Jurkat NFAT 報導基因測定 (如下所述) 中 T 細胞活化的阻斷。
篩選人源化變異體以阻斷 CD3 P035.093 - Jukat NFAT 活化測定
使用上述 Jurkat NFAT 測定篩選人源化變異體 (IgG 形式) 對 CD3 結合子 P035.093 (和 CH2527) 的阻斷能力。TCB 以 EC90 濃度 (在之前的測定中測定) 使用，並抗 ID IgG 作力價鑑定。親代 4.24.72 IgG 用作對照。親代 4.24.72 阻斷了 CD3 CH2527 和 P035.09。人源化變異體亦阻斷 CD3 CH2527 和 P035.093，而相較於 CD3 CH2527，它們似乎阻斷 P035.093 稍佳 ( 圖 14)。總之，它們都遮蔽 CD3 P035.093。根據結果，選擇和製造六個變異體，並如上所述將其純化為 IgG 和 proTCB (在 proTCB 形式下具有不可截切的連接子)，用於與親代殖株比較。
可開發性抗 CD3 P035.093 4.24.72 抗獨特型抗體和對應的人源化變異體
遮蔽 4.24.72 的人源化變異體包含可能導致分子不穩定的潛在序列熱點。因此，在 14 d 應激條件 (pH6.0 時為 40°C 或 pH7.4 時為 37°C) 後，分析它們的熱穩定性和剩餘標靶結合。
在 40°C 下的 20 mM His/HCl、140 mM NaCl pH 6.0 或 37°C 下的 1xPBS pH 7.4 中培育 14 天後，抗獨特型抗體 4.24.72 和其人源化變異體 H1L1、H1L2、H2L2、H3L2、H3L3 和 H7L5 的結合是使用 Biacore T200 儀器 (GE Healthcare) 藉由表面電漿子共振來研究。簡而言之，根據製造商的說明，使用 Biotin CAPture Kit (GE Healthcare)，將生物素化抗人 CD3 IgG (抗 CD3 P035.093) 和生物素化抗人 IgG (ThermoScientific) 固定在一系列 CAP 晶片上。藉由以 5 μl/min 的流速注射 5 μg/ml 各 120 秒，將抗體固定在流動槽 2 和 3 上，導致表面密度高於 1000 共振單位 (RU)。流動槽 1 保持為假擬表面。隨後，將抗獨特型抗體以 1μg/ml 的濃度注射到所有流動槽上 30 秒。監測解離 30 s，流速設置為 5 μl/min。CAP 晶片藉由注射生物素捕獲套組中提供的 NaOH 和胍鹽酸鹽的混合物 120 s 來再生。藉由扣除來自流動槽1 (假擬表面) 所取得的反應，以校正本體折射率差。
為了歸一化抗獨特型抗體的結合訊號，將抗人 CD3 IgG 表面的結合反應除以抗人 IgG 表面的結合反應。藉由將每個分子應激樣品的歸一化反應除以的未應激參考樣品的歸一化反應，獲得相對活性濃度。
H1L1 H1L2 H2L2 H3L2 H3L3 H7L5
熱穩定性 Tagg °C 61.0 60.2 59.3 60.0 64.2 61.0
應激後剩餘的分子完整性和活性 [%] ：
CE-SDS；非還原
40 °C pH6.0 97 96 97 97 97 97
37 °C pH7.4 95 95 95 95 94 97
CE-SDS；還原
40 °C pH6.0 99 99 99 99 99 99
37 °C pH7.4 98 98 98 98 98 98
單體 (SEC)
40 °C pH6.0 99 99 99 99 99 99
37 °C pH7.4 98 99 99 98 98 98
相對活性濃度
40 °C pH6.0 99 97 98 97 97 98
37 °C pH7.4 93 94 93 94 87 80
表 12:人源化抗獨特型遮蔽 4.24.72 的選定變異體在聚集溫度和應激測試後的穩定性/活性方面的比較。高於 58°C 的聚集溫度和 HIC 管柱上小於 0.35 min 的相對保留時間被視為非臨界值。除了樣品 H3L3 和 H7L5 僅具有 87% 和 80% 的相對活性濃度外，所有其他分子在測試條件下都是穩定的。
使用 SPR 的抗獨特型抗體與抗 CD3 P035-093 的結合動力學
親代抗 CD3 P035.093 抗獨特型抗體 4.24.72 相較於人源化變異體 H1L1、4.24.72 H1L2、H2L2 和 4.24.72 H3L2 的結合，是使用 Biacore T200 儀器 (GE Healthcare) 藉由表面電漿子共振來研究。簡而言之，根據製造商的說明，使用標準胺偶合化學將 FOLR1-Fc 固定在系列感測晶片 C1 上。最終表面密度在 700 到 1000 RU 之間。  隨後，將 FOLR1 CD3 TCB P035.093 注入第二流動槽 30 s。第一流動槽保留為假擬表面。將抗獨特型抗體以 1.2 至 100 nM (1:3 稀釋系列) 的濃度注射到兩個流動槽上 120 s。監測解離 300 秒，流速設定為 30 μl/min。表面是藉由注射 10 mM 甘胺酸 pH 2.0 60 s、接以在 5 μl/min 流速下注射 5 mM NaOH 60 s 來再生。藉由扣除來自流動槽一 (假擬表面) 所取得的反應和藉由扣除緩衝液注射 (雙重參考)，以校正本體折射率差。  使用 BIAevaluation 軟體 (GE Healthcare)，將導出的曲線擬合到 1:1 朗謬結合模型。獲得的擬合結果顯示 Rmax 值介於 1 和 4 RU 之間。所有實驗均在 37°C 下使用 HBS-N (10 mM HEPES、150 mM NaCl pH 7.4、0.05% 界面活性劑 P-20) 進行。
結果 (n=5) ：
ID 代稱 KD (nM) Stdev (nM) t1/2 diss (s) Stdev (s)
4.24.72 1.5 0.4 446 140
H1L1 1.8 0.6 371 66
H1L2 1.2 0.5 396 198
H2L2 1.8 1.0 372 156
H3L2 1.1 0.5 460 222
表 13:CD3 P035.093 抗獨特型親代嵌合抗體 4.24.72 及其人源化變異體的結合親和力。
實例 14 – 由 FOLR1 pro-TCB (CD3 P035.93 和人源化變異體作為遮蔽 ) 介導的標靶細胞殺除
進行標靶細胞殺除以測試 pro-TCB 形式的 4.24.72 抗 ID 遮蔽的人源化變異體的遮蔽效率。FOLR1 陽性標靶細胞 (具有中等 FOLR1 表現量的 Ovcar-3) 與 huPBMC 和 TCB 如上所述培育。FOLR1 TCB 用作陽性對照 ( 圖 15)。與 FOLR1 TCB 相比，所有 FOLR1 pro-TCB (不同的人源化變異體作為遮蔽和不可截切的連接子) 都顯示出減少的標靶細胞殺除。在此測定設置中，所有人源化變異體的遮蔽效率相當 (圖 7)。另外，分析了 T 細胞活化。FOLR1 TCB 誘導劑量依賴性 T 細胞活化 (CD8 陽性 T 細胞的 CD69 增加)。含有不可截切連接子的經遮蔽之 FOLR1 pro-TCB (CD3 P035.093，遮蔽 4.24.72 scFv 的人源化變異體) 在指定的濃度範圍內顯示出降低的 T 細胞活化 (CD8 T 細胞的 CD69)，並且針對人源化變異體未有偵測到遮蔽效率差異。
實例 15 – 在應激後藉由表面電漿子共振 (SPR) 表徵優化的抗 CD3 抗體
實驗如實例 4 所述進行，使用實例 7 中所製備的單價 IgG 分子。如 表 14所示，與 CD3 原始相比，所有優化的抗 CD3 抗體都顯示在應激時對 CD3ɛ/δ 的結合改善。
表 14.在 pH 6/40°C 或 pH 7.4/37°C 下培育 2 週後，抗 CD3 抗體 (單價 IgG 形式) 與人 CD3ɛ/δ 的結合活性。
抗 CD3 抗體 結合活性 [%]
   在 pH 6.0/40°C 下 2 週 在 pH 7.4/37°C 下 2 週
CD3 原始 97 60
P033.078 98 95
P035.093 100 93
P004.042 101 98
儘管為了清楚理解起見，藉由圖示及實例的方式對上述發明進行了詳細描述，但是這些描述及實例不應解釋為限製本發明的範圍。本文引用的所有專利和科學文獻的揭示內容均以引用的方式明確納入其全部內容。 *     *     *
圖 1.本發明的 (多特異性) 抗體的例示性構型。(A、D)「1+1 CrossMab」分子之圖示。(B、E)「2+1 IgG Crossfab」分子之圖示，具有 Crossfab 和 Fab 組成之順序替換 (「反向 (inverted)」)。(C、F)「2+1 IgG Crossfab」分子之圖示。(G、K)「1+1 IgG Crossfab」分子之圖示，具有 Crossfab 和 Fab 組成之順序替換 (「反向」)。(H、L)「1+1 IgG Crossfab」分子之圖示。(I、M)「2+1 IgG Crossfab」分子之圖示，具有二個 CrossFab。(J、N)「2+1 IgG Crossfab」分子之圖示，具有二個 CrossFab 及 Crossfab 和 Fab 組成之順序替換 (「反向」)。(O、S)「Fab-Crossfab」分子之圖示。(P、T)「Crossfab-Fab」分子之圖示。(Q、U)「(Fab) 2-Crossfab」分子之圖示。(R、V)「Crossfab-(Fab) 2」分子之圖示。(W、Y)「Fab-(Crossfab) 2」分子之圖示。(X、Z)「(Crossfab) 2-Fab」分子之圖示。黑點：Fc 域中的可選修飾，其促進異源二聚化 (heterodimerization)。++、--：在 CH1 和 CL 域中視情況引入相反電荷的胺基酸。Crossfab 分子描述為包含 VH 和 VL 區域的交換，但可以 (在其中 CH1 和 CL 域中沒有引入電荷修飾的態樣中) 交替地包含 CH1 和 CL 域的交換。 圖 2.(A) 在實例中所使用的 T 細胞雙特異性抗體 (TCB) 分子的示意圖。所有經測試之 TCB 抗體分子均以「2+1 IgG CrossFab，反向」的形式製造，具有電荷修飾 (CD3 結合子中之 VH/VL 交換、標靶細胞抗原結合子中之電荷修飾，EE = 147E、213E；RK = 123R、124K)。(B 至 E) 用於組裝 TCB 的組件：抗 TYRP1 Fab 分子的輕鏈，在 CH1 和 CL 中有電荷修飾 (B)、抗 CD3 交換型 Fab 分子的輕鏈 (C)、Fc 區中具有杵和 PG LALA 突變的重鏈 (D)、Fc 區中具有臼和 PG LALA 突變的重鏈 (E)。 圖 3.在實例 3 中所使用的表面電漿子共振 (SPR) 設置的示意圖。抗 PG 抗體與 C1 感測晶片偶合。人和食蟹獼猴 CD3(與 Fc 區融合) 通過表面以分析 TCB 中的抗 CD3 抗體與 CD3 的交互作用。 圖 4.用 CHO-K1 TYRP1 殖株 76 作為標靶細胞，在 Jurkat NFAT 報導基因測定中，測試含有優化的抗 CD3 抗體的 TCB。與包含 CD3 原始的 TCB 進行比較。Jurkat NFAT 報導細胞的活化藉由測量處理後 4 小時 (A) 和 24 小時 (B) 後的發光來測定。 圖 5.當以含有優化之抗 CD3 抗體或親代結合子 CD3 原始的 TCB 處理時，評估以來自健康供體的 PBMC 黑色素瘤細胞株M150543 的腫瘤細胞殺除。藉由定量 24 小時 (A) 和 48 小時 (B) 後的 LDH 釋放來測量腫瘤細胞殺除。 圖 6.在存在 M150543 黑色素瘤細胞株作為標靶細胞下，針對以含有優化的抗 CD3 抗體或親代結合子 CD3 原始的 TCB 處理的來自健康供體的 PBMC，分析 CD8 T 細胞 (A，B) 和 CD4T 細胞 (C，D) 的 CD25 和 CD69 上調。48 小時後藉由流式細胞術進行分析。 圖 7.在未有腫瘤標靶細胞下，針對以含有優化的抗 CD3 抗體或親代結合子 CD3 原始的 TCB 處理的來自健康供體的PBMC，分析 CD8 T 細胞上 (A) 和 CD4 T 細胞上 (B) 的 CD25 表現。48 小時後藉由流式細胞術進行分析。 圖 8.(A) 實例19中所產生的單價 IgG 分子的示意圖。製造單價 IgG 分子以作為人 IgG 1，在 CD3 結合子中具有VH/VL 交換。(B 至 D) 用於組裝單價 IgG 的組件：抗 CD3 交換型 Fab 分子的輕鏈 (B)、Fc 區中具有杵和 PG LALA 突變的重鏈 (C)、Fc 區中具有臼和 PG LALA 突變的重鏈 (D)。 圖 9.(A)：典型 2+1 TCB 分子，具有 CD3 Fab，經由 (G4S)2 連接子 (L1) 與內 FOLR1 Fab 的 VH 融合。 藉由杵臼技術的異源二聚化，Fc 中的 PGLALA 突變。(B)：FOLR1 proTCB，其中 CD3 抗獨特型 scFv (VH-VL 方向) 與 CD3 VH 融合。連接子 (L2；總共 33 個 aa) 含有特定的蛋白酶可截切之序列。(G4S)4 連接子 (L3)，介於 scFv 的 VH 和 VL 之間。(C)：與 B 中的 proTCB 相同，但在 scFv 和 CD3 Fab 之間的連接子中沒有蛋白酶截切位點。分子中的輕鏈在每個 Fab 中是相同的 (共同輕鏈)。 圖 10.(A)：由含有不同 CD3 結合子的 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化。顯示由具有不同 CD3 結合子的 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化。TYRP1 TCB (以先前測定中測定的 EC90 濃度使用) 與 TYRP1 陽性標靶細胞 (CHO-huTYRP1 殖株 76) 和 Jurkat NFAT 效應細胞 (E:T 2.5:1) 在 37°C 下培育 22 小時。虛線顯示與標靶細胞一起培育但沒有任何 TCB 的 Jurkat NFAT 活化。DP47 非標靶 TCB 用作陰性對照。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。 (B)：藉由減少由 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化來測量抗獨特型 4.24.72 IgG 的阻斷能力。 顯示由具有不同CD3 結合子的 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化。TYRP1 TCB (以先前測定中測定的 EC90 濃度使用) 與 TYRP1 陽性標靶細胞 (CHO-huTYRP1 殖株 76) 和 Jurkat NFAT 效應細胞 (E:T 2.5:1) 在 37°C 下培育 22 小時。顯示抗獨特型 (抗 ID) 4.24.72 IgG 對 CD3 結合子的劑量依賴性阻斷。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。虛線顯示與標靶細胞一起培育但沒有任何 TCB 的 Jurkat NFAT 活化。DP47 非標靶 TCB 用作陰性對照。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 (C)：藉由減少由 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化來測量抗 ID 4.32.63 IgG 的阻斷能力。顯示由具有不同 CD3 結合子的 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化。TYRP1 TCB (以先前測定中測定的 EC90 濃度使用) 與 TYRP1 陽性標靶細胞 (CHO- huTYRP1殖株 76) 和 Jurkat NFAT 效應細胞 (E:T 2.5:1) 在 37°C 下培育 22 小時。顯示抗獨特型 4.32.63 IgG 對 CD3 結合子的劑量依賴性阻斷。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。虛線顯示與標靶細胞一起培育但沒有任何 TCB 的 Jurkat NFAT 活化。DP47 非標靶 TCB 用作陰性對照。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 (D)：藉由減少由 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化來測量抗 ID 4.15.64 IgG 的阻斷能力。顯示由具有不同 CD3 結合子的 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化。TYRP1 TCB (以先前測定中測定的 EC90 濃度使用) 與 TYRP1 陽性標靶細胞 (CHO- huTYRP1殖株 76) 和 Jurkat NFAT 效應細胞 (E:T 2.5:1) 在 37°C 下培育 22 小時。顯示抗獨特型 4.15.64 IgG 對 CD3 結合子的劑量依賴性阻斷。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。虛線顯示與標靶細胞一起培育但沒有任何 TCB 的 Jurkat NFAT 活化。DP47 非標靶 TCB 用作陰性對照。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 (E)：藉由減少由 TYRP1 TCB介導的 Jurkat NFAT 活化來測量抗 ID 4.21 IgG 的阻斷能力。顯示由具有不同 CD3 結合子的 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化。TYRP1 TCB (以先前測定中測定的 EC90 濃度使用) 與 TYRP1 陽性標靶細胞 (CHO-huTYRP1 殖株 76) 和 Jurkat NFAT 效應細胞 (E:T 2.5:1) 在 37°C 下培育 22 小時。顯示抗獨特型 4.21 IgG 對 CD3 結合子的劑量依賴性阻斷。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。虛線顯示與標靶細胞一起培育但沒有任何 TCB 的 Jurkat NFAT 活化。DP47 非標靶 TCB 用作陰性對照。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 圖 11.(A)：顯示由具有不同 CD3 結合子的 FOLR1 TCB 或 FOLR1 pro-TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化。FOLR1 (pro-)TCB 與 huFOLR1 塗覆的珠和 Jurkat NFAT 效應細胞在 37°C 下培育 5-6 小時。具有抗 ID 遮蔽 4.24.72 的 FOLR1 pro-TCB 在指定濃度範圍內不會介導 Jurkat NFAT 活化。然而，FOLR1 TCB 介導劑量依賴性 Jurkat NFAT 活化。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。虛線顯示與標靶細胞一起培育但沒有任何 TCB 的 Jurkat NFAT 活化。 (B)：在 huPBMC、TCB 和 FOLR1 陽性標靶細胞 (E:T = 10:1，效應子是人 PBMC) 培育 48 小時後， 測量劑量依賴性標靶細胞殺除(具有非常高 FOLR1 表現的 HeLa 細胞)。FOLR1 TCB 和活化的 FOLR1 pro-TCB 誘導劑量依賴性標靶細胞殺除，EC50 約為 0.29 pM。當比較 EC50 值時，含有不可截切連接子的遮蔽 FOLR1 pro-TCB (CD3 P035.093，遮蔽 4.24.72 scFv) 顯示標靶細胞裂解減少約 239 倍。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。虛線顯示與 huPBMC 但沒有任何 TCB 培育的標靶細胞的自發釋放。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 (C)：藉由定量 CD69 分析 CD8 T 細胞的劑量依賴性 T 細胞活化。對於 CD8 陽性 T 細胞，針對 CD69 的中位數螢光強度作圖。將標靶細胞 (具有非常高 FOLR1 表現的 HeLa 細胞) 與 huPBMC和 TCB 在 37°C 下培育 48 h (E:T = 10:1，效應子是人 PBMC)。FOLR1 TCB 和活化的 FOLR1 pro-TCB 誘導劑量依賴性 T 細胞活化。含有不可截切連接子的經遮蔽之 FOLR1 pro-TCB (CD3 P035.093，遮蔽 4.24.72 scFv) 在指定濃度範圍內未顯示 T 細胞活化 (CD8 T 細胞為 CD69)。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 (D)：藉由定量 CD69 測量 CD8 T 細胞的劑量依賴性 T 細胞活化。顯示 CD69 陽性 CD8 T 細胞的百分比。將標靶細胞 (具有非常高 FOLR1 表現的 HeLa 細胞) 與 huPBMC 和 TCB 在 37°C 下培育 48 h (E:T = 10:1，效應子是人 PBMC)。FOLR1 TCB 和活化的 FOLR1 pro-TCB 誘導劑量依賴性 T 細胞活化。含有不可截切連接子的經遮蔽之 FOLR1 pro-TCB (CD3 P035.093，遮蔽 4.24.72 scFv) 在指定濃度範圍內顯示 T 細胞活化 (CD8 T 細胞為 CD69) 減少。然而，從 5nM 開始，可以偵測到一些 CD69 陽性 CD8 T 細胞，在此處使用的最高濃度下增加到約 30%。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 圖 12.(A)：在 huPBMC 培育 48 h 後測量劑量依賴性標靶細胞殺除 (Hela 高 FOLR1 表現、Ovcar-3 和 Skov-3 中等 FOLR1 表現以及 HT-29 具有低 FOLR1 表現) 以分析抗 ID 4.24.72 在 pro-TCB 形式具有 CD3 P035.093 的遮蔽效率。TCB 和 FOLR1 陽性標靶細胞 (E:T = 10:1，效應子是人 PBMC)。FOLR1 TCB 在所有細胞株 (Hela、Skov-3、Ovcar-3) 上誘導劑量依賴性標靶細胞殺除，而遮蔽的 FOLR1 pro-TCB 顯示標靶細胞殺除降低。 (B)：在 huPBMC 培育 48 h 後測量劑量依賴性標靶細胞殺除 (Skov-3，中等 FOLR1 表現；和 HT-29，具有低 FOLR1 表現) (E:T = 10:1)。FOLR1 TCB 在兩者細胞株 (Skov-3、HT-29) 上誘導劑量依賴性標靶細胞殺除，而遮蔽的 FOLR1 pro-TCB 顯示標靶細胞殺除降低。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。虛線顯示與 huPBMC但沒有任何 TCB 培育的標靶細胞的自發釋放。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 圖 13 ：抗獨特型遮蔽 4.24.72 的人源化變異體的單臂 IgG 形式。異源二聚化是藉由使用杵臼技術實現。 圖 14.顯示由具有不同 CD3 結合子的 TYRP1 TCB 介導的 Jurkat NFAT 活化。TYRP1 TCB (以先前測定中測定的 EC90 濃度使用) 與 TYRP1 陽性標靶細胞 (M150543 ) 和 Jurkat NFAT 效應細胞 (E:T 2.5:1) 在 37°C 下培育 5 小時。對於 CD3 CH2527 (圖14A) 和 CD3 P035.093 (圖14B)，顯示抗獨特型 (抗 ID) 4.24.72 IgG (親代和人源化變異體) 對 CD3 結合子的劑量依賴性阻斷。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 圖 15.(A)：在 huPBMC 培育 48 h 後測量劑量依賴性標靶細胞殺除 (Ovcar-3 培養基 FOLR1 表現)，以分析具有 CD3 P035.093 的 pro-TCB 形式的抗 ID 4.24.72 的人源化變異體的遮蔽效率。TCB 和 FOLR1 陽性標靶細胞 (E:T = 10:1，效應子是人 PBMC)。FOLR1 TCB 在 Ovcar-3 細胞上誘導劑量依賴性標靶細胞殺除，而遮蔽的 FOLR1 pro-TCB 顯示標靶細胞殺除降低。 (B) 及 (C)：藉由定量 CD69 測量 CD8 T 細胞的劑量依賴性 T 細胞活化。顯示 CD69 陽性 CD8T 細胞的百分比 (圖 16B) 和中位數螢光強度 (圖 16C)。將標靶細胞 (Ovcar-3 細胞，具有中等 FOLR1 表現) 與 huPBMC 和 TCB 在 37°C 下培育 48 h (E:T = 10:1，效應子是人 PBMC)。FOLR1 TCB 誘導劑量依賴性 T 細胞活化。含有不可截切連接子的經遮蔽之 FOLR1 pro-TCB (CD3 P035.093，遮蔽 4.24.72 scFv 人源化變異體) 在指定濃度範圍內顯示 T 細胞活化 (CD8 T 細胞為 CD69) 減少。關於 T 細胞活化，沒有檢測到人源化變異體的遮蔽效率差異。每個點代表三次重複的平均值。標準偏差由誤差線表示。對於 EC-50 值的計算，計算非線性擬合“log (促效劑) 與反應-變數斜率 (四個參數) ”(GraphPad Prism6)。 圖 16.描繪具有人源化遮蔽部分的不同蛋白酶可活化 FolR1 TCB 分子的示意圖。 圖 16A：抗 CD3 P035.093 遮蔽 scFv H1L1 間質蛋白酶位點 抗 FolR1 16D5，具有共同輕鏈 P329G LALA 2+1 Fc (杵) Fc (臼)，SEQ ID No: 95、66、67。 圖 16B：抗 CD3 P035.093 遮蔽 scFv H1L2 間質蛋白酶位點 抗 FolR1 16D5，具有共同輕鏈 P329G LALA 2+1 Fc (杵) Fc (臼)，SEQ ID No: 96、66、67。 圖 16C：抗 CD3 P035.093 遮蔽 scFv H2L2 間質蛋白酶位點 抗 FolR1 16D5，具有共同輕鏈 P329G LALA 2+1 Fc (杵) Fc (臼)，SEQ ID No: 97、66、67。 圖 16D：抗 CD3 P035.093 遮蔽 scFv H3L2 Matriptase 位點抗 FolR1 16D5，具有共同輕鏈 P329G LALA 2+1 Fc (杵) Fc (臼)，SEQ ID No: 98、66、67。 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 優化 VH (P033.078)]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Glu Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ser Ser Phe Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125 
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  125]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 優化 VH (P035.093)]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125 
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  125]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 優化 VH (P035.064)]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys His Asn Gly Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ser Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125 
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  125]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 優化 VH (P021.045)]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ser Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125 
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  125]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 優化 VH (P004.042)]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Gln Phe Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Thr Lys Tyr Asn Glu Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Gln Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125 
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 原始 / CD3 優化 LCDR1]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 原始 / CD3 優化 LCDR2]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 原始 / CD3 優化 LCDR3]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  109]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 原始 / CD3 優化 VL]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 HCDR1]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Asp Tyr Phe Leu His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 HCDR2]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 HCDR3]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 VH]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 LCDR1]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 LCDR2]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 LCDR3]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Phe Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 VL]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Phe 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  674]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 VH-CH1(EE) - CD3 原始 / CD3 優化 VL-CH1 - Fc (杵, PGLALA)]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr 
                          245                 250                 255     
          Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 
                      260                 265                 270         
          Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr 
                  275                 280                 285             
          Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu 
              290                 295                 300                 
          Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly 
                          325                 330                 335     
          Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 
                  355                 360                 365             
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
              370                 375                 380                 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 
                      420                 425                 430         
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 
                  435                 440                 445             
          Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 
              450                 455                 460                 
          Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                          485                 490                 495     
          His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                      500                 505                 510         
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 
                  515                 520                 525             
          Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 
              530                 535                 540                 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro 
          545                 550                 555                 560 
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                          565                 570                 575     
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 
                      580                 585                 590         
          Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
                  595                 600                 605             
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
              610                 615                 620                 
          Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
          625                 630                 635                 640 
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                          645                 650                 655     
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                      660                 665                 670         
          Ser Pro 
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 VH-CH1(EE) -Fc (臼, PGLALA)]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro 
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  TYRP1 VL-CL(RK)]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Phe 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  232]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 原始 VH-CL]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 
                      100                 105                 110         
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230         
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  232]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 優化 (P033.078) VH-CL]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Glu Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ser Ser Phe Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230         
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  232]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 優化 (P035.093) VH-CL]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230         
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  232]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD3 優化 (P035.064) VH-CL]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys His Asn Gly Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ser Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230         
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          <![CDATA[<400>  39]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ser Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val 
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          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
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          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
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                          165                 170                 175     
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
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          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230         
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          <![CDATA[<220>]]>
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          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Gln Phe Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Thr Lys Tyr Asn Glu Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Gln Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
          225                 230         
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          Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys 
          1               5                   10                  15      
          Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro 
                      20                  25                  30          
          Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp 
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          Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg 
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          Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg 
                          85                  90                  95      
          Val Ser Glu Asn Cys Val Asp Glu Gln Leu Tyr Phe Gln Gly Gly Ser 
                      100                 105                 110         
          Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
                  115                 120                 125             
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              130                 135                 140                 
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          145                 150                 155                 160 
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                          165                 170                 175     
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                      180                 185                 190         
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
                  195                 200                 205             
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
              210                 215                 220                 
          Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
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          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
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          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
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          Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu 
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          Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu 
                  355                 360 
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          <![CDATA[<400>  42]]>
          Phe Lys Ile Pro Ile Glu Glu Leu Glu Asp Arg Val Phe Val Asn Cys 
          1               5                   10                  15      
          Asn Thr Ser Ile Thr Trp Val Glu Gly Thr Val Gly Thr Leu Leu Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Ile Thr Arg Leu Asp Leu Gly Lys Arg Ile Leu Asp Pro Arg Gly 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Asp Ile Tyr Lys Asp Lys Glu Ser Thr 
              50                  55                  60                  
          Val Gln Val His Tyr Arg Met Cys Arg Ser Glu Gln Leu Tyr Phe Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 
                          85                  90                  95      
          Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                  115                 120                 125             
          His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
              130                 135                 140                 
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 
                          165                 170                 175     
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 
                      180                 185                 190         
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                  195                 200                 205             
          Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 
              210                 215                 220                 
          Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr 
                      260                 265                 270         
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                  275                 280                 285             
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
              290                 295                 300                 
          Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Glu Trp His Glu 
                          325 
          <![CDATA[<210>  43]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  食蟹獼猴 CD3 ε 柄 - Fc (杵) - Avi]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Ser Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Gln 
          1               5                   10                  15      
          Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Ser Gln His Leu 
                      20                  25                  30          
          Gly Ser Glu Ala Gln Trp Gln His Asn Gly Lys Asn Lys Glu Asp Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Asp Arg Leu Phe Leu Pro Glu Phe Ser Glu Met Glu Gln Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Asn Pro Glu Asp Ala Ser His 
          65                  70                  75                  80  
          His Leu Tyr Leu Lys Ala Arg Val Ser Glu Asn Cys Val Asp Glu Gln 
                          85                  90                  95      
          Leu Tyr Phe Gln Gly Gly Ser Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr 
                      100                 105                 110         
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
                  115                 120                 125             
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
              130                 135                 140                 
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                          165                 170                 175     
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
                      180                 185                 190         
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
              210                 215                 220                 
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val 
                          245                 250                 255     
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
                      260                 265                 270         
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
                  275                 280                 285             
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
              290                 295                 300                 
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
          305                 310                 315                 320 
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly 
                          325                 330                 335     
          Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu 
                      340                 345                 350     
          <![CDATA[<210>  44]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  食蟹獼猴 CD3 δ 柄 - Fc (臼)- Avi]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Phe Lys Ile Pro Val Glu Glu Leu Glu Asp Arg Val Phe Val Lys Cys 
          1               5                   10                  15      
          Asn Thr Ser Val Thr Trp Val Glu Gly Thr Val Gly Thr Leu Leu Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Asn Thr Arg Leu Asp Leu Gly Lys Arg Ile Leu Asp Pro Arg Gly 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Asp Ile Tyr Lys Asp Lys Glu Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Val Gln Val His Tyr Arg Met Ser Gln Asn Cys Val Asp Glu Gln Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Phe Gln Gly Gly Ser Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys 
                          85                  90                  95      
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
                      100                 105                 110         
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                  115                 120                 125             
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
              130                 135                 140                 
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser 
              210                 215                 220                 
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
                      260                 265                 270         
          Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                  275                 280                 285             
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
              290                 295                 300                 
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu 
                          325                 330                 
          <![CDATA[<210>  45]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys 
          1               5                   10                  15      
          Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro 
                      20                  25                  30          
          Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg 
                          85                  90                  95      
          Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met Ser Val Ala Thr Ile 
                      100                 105                 110         
          Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu Leu Leu Leu Val Tyr 
                  115                 120                 125             
          Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys Pro Val Thr Arg Gly 
              130                 135                 140                 
          Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn Lys Glu Arg Pro Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly Gln Arg Asp 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile 
                      180                 185     
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  177]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  食蟹獼猴]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Ser Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Gln 
          1               5                   10                  15      
          Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Ser Gln His Leu 
                      20                  25                  30          
          Gly Ser Glu Ala Gln Trp Gln His Asn Gly Lys Asn Lys Glu Asp Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Asp Arg Leu Phe Leu Pro Glu Phe Ser Glu Met Glu Gln Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Asn Pro Glu Asp Ala Ser His 
          65                  70                  75                  80  
          His Leu Tyr Leu Lys Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp 
                          85                  90                  95      
          Val Met Ala Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Gly Leu Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys 
                  115                 120                 125             
          Ala Lys Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly 
              130                 135                 140                 
          Gln Asn Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Arg Lys Gly Gln Gln Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg 
                          165                 170                 175     
          Ile 
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  225]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hIgG1 Fc 區域]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro 
          225 
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子 GGGGSGGGGS]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子 DGGGGSGGGGS]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人 κ CL 結構域]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
          1               5                   10                  15      
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
                      20                  25                  30          
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                          85                  90                  95      
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  105]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人 λ CL 結構域]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 
                      20                  25                  30          
          Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 
                  35                  40                  45              
          Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 
              50                  55                  60                  
          Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 
          65                  70                  75                  80  
          His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 
                          85                  90                  95      
          Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 
                      100                 105 
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  328]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人 IgG1 重鏈恆定區 (CH1-CH2-CH3)]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          325             
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  16D5 VH]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  16D5 CDRH1]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Asn Ala Trp Met Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  16D5 CDRH2]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro 
          1               5                   10                  15      
          Val Lys Gly 
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  16D5 CDRH3]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Pro Trp Glu Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ID_4.24.72 VH]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Lys Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ID_4.24.72 CDRH1]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Asp Tyr Ser Met Asn 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ID_4.24.72 CDRH2]]>
          <![CDATA[<400>  59]]>
          Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  60]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ID_4.24.72 CDRH3]]>
          <![CDATA[<400>  60]]>
          Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ID_4.24.72 VL]]>
          <![CDATA[<400>  61]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  62]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ID_4.24.72 CDRL1]]>
          <![CDATA[<400>  62]]>
          Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ID_4.24.72 CDRL2]]>
          <![CDATA[<400>  63]]>
          Tyr Val Ser Tyr Leu Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ID_4.24.72 CDRL3]]>
          <![CDATA[<400>  64]]>
          Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子和抗 CD3 P035.093 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  65]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Gly Gly Ser Pro Met Ala Lys Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      260                 265                 270         
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  66]]>
          <![CDATA[<211>  448]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FOLR1 proTCB，具有蛋白酶連接子和抗 CD3 P035.093 H 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210>  67]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  67]]>
          Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro 
                      100                 105                 110         
          Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 
                  115                 120                 125             
          Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro 
              130                 135                 140                 
          Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 
                          165                 170                 175     
          Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg 
                      180                 185                 190         
          Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 
                  195                 200                 205             
          Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  68]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  間質蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Met Ala Lys Lys Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  69]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FOLR1proTCB，具有蛋白酶連接子 CD3 P035.093 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Val His 
                          245                 250                 255     
          Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Arg Gln Ala Arg Val Val Asn Gly 
                      260                 265                 270         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  70]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子 GGGGSVHMPLGFLGPRQARVVNGGGGGSGGGGS]]>
          <![CDATA[<400>  70]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Gln Ala Arg Val Val Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  71]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FOLR1proTCB，具有不可截切連接子 CD3 P035.093 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  71]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser 
                      260                 265                 270         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  72]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGGGGSGGGGSGGGGS]]>
          <![CDATA[<400>  72]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  73]]>
          <![CDATA[<211>  687]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FOLR1 TCB CD3 P035.093 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  73]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 
                  115                 120                 125             
          Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 
              130                 135                 140                 
          Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 
                          165                 170                 175     
          Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 
                  195                 200                 205             
          Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 
              210                 215                 220                 
          Pro Lys Ser Cys Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser 
                          245                 250                 255     
          Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp 
                      260                 265                 270         
          Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 
                  275                 280                 285             
          Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro 
              290                 295                 300                 
          Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 
                          325                 330                 335     
          Cys Thr Thr Pro Trp Glu Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                  355                 360                 365             
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
              370                 375                 380                 
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                          405                 410                 415     
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
                      420                 425                 430         
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                  435                 440                 445             
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 
              450                 455                 460                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          485                 490                 495     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      500                 505                 510         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  515                 520                 525             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
              530                 535                 540                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          545                 550                 555                 560 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys 
                          565                 570                 575     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 
                      580                 585                 590         
          Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 
                  595                 600                 605             
          Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          645                 650                 655     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      660                 665                 670         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  675                 680                 685         
          <![CDATA[<210>  74]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FOLR1proTCB，具有間質蛋白酶連接子 CD3 CH2527 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  74]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Gly Gly Ser Arg Gln Ala Arg Val Val Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser 
                      260                 265                 270         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  75]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子 GGGGSGGGGSRQARVVNGGGGGSGGGGSGGGGS]]>
          <![CDATA[<400>  75]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Gln Ala Arg Val Val 
          1               5                   10                  15      
          Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  76]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FOLR1proTCB，具有 MMP2/9-間質蛋白酶連接子 CD3 CH2527 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  76]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Val His 
                          245                 250                 255     
          Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Arg Gln Ala Arg Val Val Asn Gly 
                      260                 265                 270         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  77]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子 GGGGSVHMPLGFLGPRQARVVNGGGGGSGGGGS]]>
          <![CDATA[<400>  77]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Gln Ala Arg Val Val Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  78]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FOLR1 proTCB，具有不可截切連接子 CD3 CH2527 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  78]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser 
                      260                 265                 270         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  79]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H1L1 VH]]>
          <![CDATA[<400>  79]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  80]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H1L1 VL]]>
          <![CDATA[<400>  80]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  81]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  81]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  82]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H1L2 CDRL1]]>
          <![CDATA[<400>  82]]>
          Lys Ser Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  83]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H2L2 VH]]>
          <![CDATA[<400>  83]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  84]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
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          <![CDATA[<400>  84]]>
          Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe Thr 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  85]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H3L2 VH]]>
          <![CDATA[<400>  85]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Gln Gly Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  86]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H3L2 CDRH2]]>
          <![CDATA[<400>  86]]>
          Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Gln Gly Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H3L3 VL]]>
          <![CDATA[<400>  87]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  88]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          <![CDATA[<223>  H3L3 CDRL3]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Gln Gln Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  89]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H7L5 VH]]>
          <![CDATA[<400>  89]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  90]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H7L5 VL]]>
          <![CDATA[<400>  90]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  91]]>
          <![CDATA[<211>  249]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  H1L1 scFv]]>
          <![CDATA[<400>  91]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
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          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
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          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
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          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
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          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
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          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln 
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          Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Lys Ser Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp 
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          Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
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          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
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          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
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          Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
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                          85                  90                  95      
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          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
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          Cys Lys Ser Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
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          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp 
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          Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
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          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                          245                 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
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          Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
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          145                 150                 155                 160 
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                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
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          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                          245                 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
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          145                 150                 155                 160 
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                          165                 170                 175     
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                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp 
              210                 215                 220                 
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          225                 230                 235                 240 
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              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  96]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FolR1 pro TCB P035.093 H1L2 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Lys Ser Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Gly Gly Ser Pro Met Ala Lys Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      260                 265                 270         
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  97]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FolR1 pro TCB P035.093 H2L2 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  97]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Lys Ser Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Gly Gly Ser Pro Met Ala Lys Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      260                 265                 270         
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  98]]>
          <![CDATA[<211>  969]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FolR1 pro TCB P035.093 H3L2 K 鏈]]>
          <![CDATA[<400>  98]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Thr Gln Gly Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Lys Ser Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His 
                          165                 170                 175     
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Gly Gly Ser Pro Met Ala Lys Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      260                 265                 270         
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
                  435                 440                 445             
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
              450                 455                 460                 
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                          485                 490                 495     
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  515                 520                 525             
          Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 
              530                 535                 540                 
          Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr 
                          565                 570                 575     
          Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      580                 585                 590         
          Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Pro Trp Glu 
              610                 615                 620                 
          Trp Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 
                          645                 650                 655     
          Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
                      660                 665                 670         
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
              690                 695                 700                 
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                          725                 730                 735     
          Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
                      740                 745                 750         
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
                  755                 760                 765             
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
              770                 775                 780                 
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
          785                 790                 795                 800 
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                          805                 810                 815     
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
                      820                 825                 830         
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
                  835                 840                 845             
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
              850                 855                 860                 
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                          885                 890                 895     
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                      900                 905                 910         
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
                  915                 920                 925             
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
              930                 935                 940                 
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                          965                 
          <![CDATA[<210>  99]]>
          <![CDATA[<211>  35]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  MMP 蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  99]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Pro Leu Gly Leu Trp 
          1               5                   10                  15      
          Ser Gln Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser Gly Gly 
                  35  
          <![CDATA[<210>  100]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 1]]>
          <![CDATA[<400>  100]]>
          Arg Gln Ala Arg Val Val Asn Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  101]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 2]]>
          <![CDATA[<400>  101]]>
          Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Gly Arg Ser Arg Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Phe Pro 
          <![CDATA[<210>  102]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 3]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 可以為任何天然出現之胺基酸]]>
          <![CDATA[<400>  102]]>
          Arg Gln Ala Arg Val Val Asn Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Tyr Ser Gly 
                      20      
          <![CDATA[<210>  103]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 4]]>
          <![CDATA[<400>  103]]>
          Arg Gln Ala Arg Val Val Asn Gly Val Pro Leu Ser Leu Tyr Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  104]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 5]]>
          <![CDATA[<400>  104]]>
          Pro Leu Gly Leu Trp Ser Gln 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  105]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 6]]>
          <![CDATA[<400>  105]]>
          Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Arg Gln Ala Arg Val Val 
          1               5                   10                  15      
          Asn Gly 
          <![CDATA[<210>  106]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 7]]>
          <![CDATA[<400>  106]]>
          Phe Val Gly Gly Thr Gly 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  107]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 8]]>
          <![CDATA[<400>  107]]>
          Lys Lys Ala Ala Pro Val Asn Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  108]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 9]]>
          <![CDATA[<400>  108]]>
          Pro Met Ala Lys Lys Val Asn Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  109]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 10]]>
          <![CDATA[<400>  109]]>
          Gln Ala Arg Ala Lys Val Asn Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  110]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 11]]>
          <![CDATA[<400>  110]]>
          Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  111]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 12]]>
          <![CDATA[<400>  111]]>
          Gln Ala Arg Ala Lys 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  112]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 13]]>
          <![CDATA[<400>  112]]>
          Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Pro Met Ala Lys Lys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  113]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 14]]>
          <![CDATA[<400>  113]]>
          Lys Lys Ala Ala Pro 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  114]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蛋白酶辨識位點 15]]>
          <![CDATA[<400>  114]]>
          Pro Met Ala Lys Lys 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  115]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  組合 MMP9 MK062，33 AA，用於 CD3]]>
          <![CDATA[<400>  115]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Gln Ala Arg Val Val Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  116]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  組織蛋白酶 S/B]]>
          <![CDATA[<400>  116]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe 
          1               5                   10                  15      
          Val Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  117]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  KKAAPVNG]]>
          <![CDATA[<400>  117]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Lys Lys Ala Ala Pro Val 
          1               5                   10                  15      
          Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  118]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  PMAKKVNG]]>
          <![CDATA[<400>  118]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Met Ala Lys Lys Val 
          1               5                   10                  15      
          Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  119]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  QARAKVNG]]>
          <![CDATA[<400>  119]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Arg Ala Lys Val 
          1               5                   10                  15      
          Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  120]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  MMP9]]>
          <![CDATA[<400>  120]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val His Met Pro Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Phe Leu Gly Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  121]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  QARAK]]>
          <![CDATA[<400>  121]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Arg Ala Lys Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  122]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  MMP9-PMAKK]]>
          <![CDATA[<400>  122]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Pro 
          1               5                   10                  15      
          Met Ala Lys Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  123]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  KKAAP]]>
          <![CDATA[<400>  123]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Lys Lys Ala Ala Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  124]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  PMAKK]]>
          <![CDATA[<400>  124]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Met Ala Lys Lys Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Ser 
          <![CDATA[<210>  125]]>
          <![CDATA[<211>  28]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  組合 NF9/Mat5 連接子]]>
          <![CDATA[<400>  125]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Val His Met Pro Leu Gly Phe Leu Gly Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Arg Ser Arg Gly Ser Phe Pro Gly Gly Gly Gly Ser 
                      20                  25              
          <![CDATA[<210>  126]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  組合 MK062 MMP9]]>
          <![CDATA[<400>  126]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Gln Ala Arg Val Val 
          1               5                   10                  15      
          Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ser Val Pro Leu Ser Leu Tyr Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  35                  40      
          <![CDATA[<210>  127]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  組合 MK062 MMP9]]>
          <![CDATA[<400>  127]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Gln Ala Arg Val Val 
          1               5                   10                  15      
          Asn Gly Val Pro Leu Ser Leu Tyr Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Gly Ser 
                  35
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Claims (51)

  1. 一種蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含： (a) 能夠與 CD3 結合的第一抗原結合部分，其中該第一抗原結合部分包含： (i) 重鏈可變區 (VH)，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 (HCDR) 1，SEQ ID NO: 4 之 HCDR 2 和 SEQ ID NO: 10 之 HCDR 3；以及 (ii) 輕鏈可變區 (VL)，其包含 SEQ ID NO: 20 之輕鏈互補決定區 (LCDR) 1，SEQ ID NO: 21 之 LCDR 2 和 SEQ ID NO: 22 之 LCDR 3； (b) 能夠與標靶細胞抗原結合的第二抗原結合部分；以及 (c) 透過蛋白酶可截切之連接子與 T 細胞雙特異性結合分子共價接附之遮蔽部分，其中該遮蔽部分能夠與該第一抗原結合部分的獨特型結合，從而可逆地隱匿該第一抗原結合部分。
  2. 如請求項 1 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該 VH 包含與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列，及/或該 VL 包含與 SEQ ID NO: 23 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。
  3. 如請求項 1 或 2 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分並且可逆地隱匿該第一抗原結合部分。
  4. 如請求項 1 至 3 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分共價接附於該第一抗原結合部分的該重鏈可變區。
  5. 如請求項 1 至 4 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分是 scFv。
  6. 如請求項 1 至 5 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分是交換型 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈和 Fab 重鏈的可變區或恆定區是經交換的。
  7. 如請求項 1 至 6 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第一抗原結合部分是習用 Fab 分子。
  8. 如請求項 1 至 7 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含不多於一個能夠與 CD3 結合的抗原結合部分。
  9. 如請求項 1 至 8 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其包含第三抗原結合部分，該第三抗原結合部分為能夠與標靶細胞抗原結合的 Fab 分子。
  10. 如請求項 9 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第三抗原結合部分與該第二抗原結合部分相同。
  11. 如請求項 1 至 10 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與選自由 FolR1 和 TYRP1 所組成之群組之標靶細胞抗原結合。
  12. 如請求項 1 至 11 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第一抗原結合部分和該第二抗原結合部分視情況經由肽連接子彼此融合。
  13. 如請求項 1 至 12 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分在該 Fab 重鏈之 C 端與該第一抗原結合部分的該 Fab 重鏈之 N 端融合。
  14. 如請求項 1 至請求項 1-13 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第一抗原結合部分在該 Fab 重鏈之 C 端與該第二抗原結合部分的該 Fab 重鏈之 N 端融合。
  15. 如請求項 1 至 14 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其另外地包含由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元所構成之 Fc 域。
  16. 如請求項 15 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該 Fc 域是 IgG Fc 域，具體地為 IgG1 或 IgG4 Fc 域。
  17. 如請求項 15 或 16 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中，與天然 IgG1 Fc 域相比，該 Fc 域表現出降低的對 Fc 受體的結合親和力及/或降低的效應子功能。
  18. 如請求項 1 至 17 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含： (a)  DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) CDR H2 胺基酸序列，其選自由 WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59)、WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 和 WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 所組成之群組； (c)  EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) 輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列，其選自由 RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 和 KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 所組成之群組； (e)  YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  CDR L3 胺基酸序列，其選自由 QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 和 QQSREFPYT (SEQ ID NO:88) 所組成之群組。
  19. 如請求項 1 至 17 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含： (a)  DYSMN (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTDDFKG (SEQ ID NO:59) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c)  EGDYDVFDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) RASKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:62) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e)  YVSYLES (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHSREFPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
  20. 如請求項 1 至 17 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含： (a)  SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:59) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c)  GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e)  AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
  21. 如請求項 1 至 17 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含： (a)  SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTDDFTG (SEQ ID NO:84) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c)  GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e)  AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
  22. 如請求項 1 至 17 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該遮蔽部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含： (a)  SYGVS (SEQ ID NO:58) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； (b) WINTETGEPRYTQGFKG (SEQ ID NO:86) 之 CDR H2 胺基酸序列； (c)  GITTVVDDYYAMDY (SEQ ID NO:60) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： (d) KSSKSVSTSSYSYMH (SEQ ID NO:82) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； (e)  AATFLAD (SEQ ID NO:63) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 (f)  QHYYSTPYT (SEQ ID NO:64) 之 CDR L3 胺基酸序列。
  23. 如請求項 1 至 22 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可截切之連接子包含至少一個蛋白酶辨識序列。
  24. 如請求項 1 至 23 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶辨識序列選自由以下所組成之群組： (a)  RQARVVNG (SEQ ID NO:100)； (b) VHMPLGFLGPGRSRGSFP (SEQ ID NO:101)； (c)  RQARVVNGXXXXXVPLSLYSG (SEQ ID NO:102)，其中 X 是任何胺基酸； (d) RQARVVNGVPLSLYSG (SEQ ID NO:103)； (e)  PLGLWSQ (SEQ ID NO:104)； (f)  VHMPLGFLGPRQARVVNG (SEQ ID NO:105)； (g) FVGGTG (SEQ ID NO:106)； (h) KKAAPVNG (SEQ ID NO:107)； (i)  PMAKKVNG (SEQ ID NO:108)； (j)  QARAKVNG (SEQ ID NO:109)； (k) VHMPLGFLGP (SEQ ID NO:110)； (l)  QARAK (SEQ ID NO:111)； (m) VHMPLGFLGPPMAKK (SEQ ID NO:112)； (n) KKAAP (SEQ ID NO:113)；及 (o) PMAKK (SEQ ID NO:114)。
  25. 如請求項 23 或 24 之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 PMAKK (SEQ ID NO:114)。
  26. 如請求項 1 至 25 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 FolR1 結合並且包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含： a)   NAWMS (SEQ ID NO:54) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； b)   RIKSKTDGGTTDYAAPVKG (SEQ ID NO:55) 之 CDR H2 胺基酸序列；及 c)   PWEWSWYDY (SEQ ID NO:56) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： d)   GSSTGAVTTSNYAN (SEQ ID NO:20) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； e)   GTNKRAP (SEQ ID NO:21) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 f)   ALWYSNLWV (SEQ ID NO:22) 之 CDR L3 胺基酸序列。
  27. 如請求項 1 至 21 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該第二抗原結合部分能夠與 TYRP1 結合並且包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含： a)   DYFLH (SEQ ID NO:24) 之重鏈互補決定區 (CDR H) 1 胺基酸序列； b)   WINPDNGNTVYAQKFQG (SEQ ID NO:25) 之 CDR H2 胺基酸序列；及 c)   RDYTYEKAALDY (SEQ ID NO:26) 之 CDR H3 胺基酸序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含： d)   RASGNIYNYLA (SEQ ID NO:28) 之輕鏈 (CDR L)1 胺基酸序列； e)   DAKTLAD (SEQ ID NO:29) 之 CDR L2 胺基酸序列；及 f)   QHFWSLPFT (SEQ ID NO:30) 之 CDR L3 胺基酸序列。
  28. 一種獨特型特異性多肽，其能夠可逆地隱匿分子的抗 CD3 抗原結合位點，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與選自由 SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO:83 和 SEQ ID NO:85 所組成之群組之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與選自由 SEQ ID NO: 80 和 SEQ ID NO:81 所組成之群組之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
  29. 如請求項 28 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 79 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 80 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
  30. 如請求項 28 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 79 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
  31. 如請求項 28 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 83 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
  32. 如請求項 28 之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽包含：重鏈可變區序列，該重鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 85 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，該輕鏈可變區序列與 SEQ ID NO: 81 至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
  33. 如請求項 28 至 32 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽是 scFv。
  34. 如請求項 28 至 33 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽是透過連接子與該分子共價接附。
  35. 如請求項 34 之獨特型特異性多肽，其中該連接子是肽連接子。
  36. 如請求項 34 或 35 之獨特型特異性多肽，其中該連接子是蛋白酶可截切之連接子。
  37. 如請求項 34 至 36 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該肽連接子包含至少一個蛋白酶辨識位點。
  38. 如請求項 37 之獨特型特異性多肽，其中該蛋白酶辨識序列是選自由以下所組成之群組： (a)  RQARVVNG (SEQ ID NO:100)； (b) VHMPLGFLGPGRSRGSFP (SEQ ID NO:101)； (c)  RQARVVNGXXXXXVPLSLYSG (SEQ ID NO:102)，其中 X 是任何胺基酸； (d) RQARVVNGVPLSLYSG (SEQ ID NO:103)； (e)  PLGLWSQ (SEQ ID NO:104)； (f)  VHMPLGFLGPRQARVVNG (SEQ ID NO:105)； (g) FVGGTG (SEQ ID NO:106)； (h) KKAAPVNG (SEQ ID NO:107)； (i)  PMAKKVNG (SEQ ID NO:108)； (j)  QARAKVNG (SEQ ID NO:109)； (k) VHMPLGFLGP (SEQ ID NO:110)； (l)  QARAK (SEQ ID NO:111)； (m) VHMPLGFLGPPMAKK (SEQ ID NO:112)； (n) KKAAP (SEQ ID NO:113)；及 (o) PMAKK (SEQ ID NO:114)。
  39. 如請求項 37 之獨特型特異性多肽，其中該蛋白酶可截切之連接子包含蛋白酶辨識序列 PMAKK (SEQ ID NO:114)。
  40. 如請求項 28 至 39 中任一項之獨特型特異性多肽，其中該獨特型特異性多肽是 T 細胞活化雙特異性分子的一部分。
  41. 一種醫藥組成物，其包含：如請求項 1 至 27 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或如請求項 28 至 40 中任一項之獨特型特異性多肽；及醫藥上可接受之載劑。
  42. 一種經分離之多核苷酸，其編碼如請求項 1 至 27 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性抗原結合分子或如請求項 28 至 40 中任一項之獨特型特異性多肽。
  43. 一種載體，具體地為表現載體，其包含如請求項 42 之多核苷酸。
  44. 一種宿主細胞，其包含如請求項 42 之多核苷酸或如請求項 43 之載體。
  45. 一種製造蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子之方法，其包含下列步驟：a) 在適合表現該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的條件下培養如請求項 44 之宿主細胞；及 b) 回收該蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子。
  46. 如請求項 1 至 27 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子、如請求項 28 至 40 中任一項之獨特型特異性多肽或如請求項 41 之醫藥組成物，其用為藥物。
  47. 如請求項 46 所使用之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子，其中該藥物用於治療癌症或延緩癌症之進展、治療免疫相關疾病或延緩免疫相關疾病之進展、或增強或刺激受試者的免疫反應或功能。
  48. 一種如請求項 1 至 27 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子或如請求項 28 至 40 中任一項之獨特型特異性多肽之用途，其用於製造供治療疾病的藥物。
  49. 如請求項 48 之用途，其中該疾病為癌症。
  50. 一種治療受試者之疾病的方法，其包含將治療有效量之包含如請求項 1 至 28 中任一項之蛋白酶可活化之 T 細胞活化雙特異性分子的組成物投予該受試者。
  51. 如請求項 50 之方法，其用於治療癌症或延緩癌症之進展、治療免疫相關疾病或延緩免疫相關疾病之進展、或增強或刺激受試者的免疫反應或功能。
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