TW202031292A - 改良的聚集微粒 - Google Patents

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傑佛瑞 Ｌ 克雷蘭德
余韻
于葦凌
喬許華 凱斯
貞 奇斯荷姆
盧清韻
丹尼爾 路易斯 薩藍
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Abstract

本發明係屬於活體內聚集微粒之經改良方法及組合物之領域，該等聚集微粒最佳地係經以活性藥物或活性藥物之前藥負載，以供眼部藥物遞送用。

Description

改良的聚集微粒
本發明係屬於活體內產生聚集微粒的經改良方法及組合物之領域，該等聚集微粒可經以用於眼部療法的活性藥物或活性藥物之前藥負載。
眼睛之結構可分為稱為前部及後部的兩個區段。眼前段包括眼睛的前三分之一並包括在玻璃體液前面的結構：角膜、虹膜、睫狀體(包括睫狀體平坦部)及晶狀體。眼後段包括眼睛的後三分之二並包括鞏膜、脈絡膜、視網膜色素上皮、神經視網膜、視神經及玻璃體液。
影響眼睛前段之重要疾病包括青光眼、過敏性結膜炎、前葡萄膜炎及白內障。影響眼睛後段之疾病包括乾性及濕性年齡相關黃斑變性(AMD)、巨大細胞病毒(CMV)感染、糖尿病性視網膜病、脈絡膜新生血管生成、急性黃斑視神經視網膜病、黃斑水腫(諸如囊狀黃斑水腫及糖尿病性黃斑水腫)、貝西氏病(Behcet’s disease)、視網膜疾病、糖尿病性視網膜病(包括增生性糖尿病性視網膜病)、視網膜動脈閉塞性疾病、視網膜中央靜脈阻塞、葡萄膜炎性視網膜疾病、視網膜脫離、眼外傷、由眼雷射治療或光動力療法(光凝固)引起之損傷、輻射視網膜病、視網膜前膜疾病、視網膜分支靜脈阻塞、前部缺血性視神經病、非視網膜病糖尿病性視網膜功能障礙及色素性視網膜炎。青光眼有時亦被視為後部眼病狀，因為青光眼治療之治療性目標係預防或減少由於視網膜細胞或視神經細胞之損傷或喪失而導致的視力喪失。
典型的眼睛藥物投與途徑包括局部、全身、玻璃體內、眼內、前房內、結膜下、眼球筋膜囊下(sub-tenon)、眼球後及近後部鞏膜。(Gaudana, R.等人，「Ocular Drug Delivery」，The American Association of Pharmaceutical Scientist Journal ，12(3)348-360，2010)。
已開發多種類型之遞送系統以將治療劑遞送至眼睛。此類遞送系統包括習知(溶液、懸浮液、乳液、軟膏、***物及凝膠)、囊泡性(脂質體、類脂質體(niosome)、盤狀體(discome)及藥質體)、先進材料(鞏膜栓塞、基因遞送、siRNA及幹細胞)、及受控釋放系統(植入物、水凝膠、樹枝狀化合物(dendrimer)、離子導入法、膠原罩(collagen shield)、聚合物溶液、治療性隱形眼鏡、環糊精載劑、微針、微乳液及顆粒(微粒及奈米粒子))。
眼後段疾病之治療仍係調配科學家的艱巨挑戰。通常藉由玻璃體內注射、眼周途徑、植入物或藉由全身投藥來達成將藥物遞送至眼睛的後段。藉助於眼周途徑將藥物遞送至眼後段可涉及將藥物溶液施覆至鞏膜的緊密近接處，從而導致高的視網膜及玻璃體濃度。
玻璃體內注射通常係用30號或更小的針進行。儘管玻璃體內注射可對玻璃體腔及視網膜提供高濃度的藥物，但其等係與各種短期併發症(諸如視網膜脫離、眼內炎及玻璃體內出血)相關。經歷顯示，小顆粒之注射導致會阻塞視力的顆粒快速散佈(患者會體驗為「漂浮物(floaty)」或「浮子(floater)」)並會從注射部位快速去除顆粒(此可經由淋巴引流系統或藉由吞噬作用發生)。此外，免疫原性可在由巨噬細胞及免疫系統之其他細胞及介體識別微球時發生。
眼周注射之併發症包括眼內壓增高、白內障、斜視及角膜代償失調。眼周投藥之經鞏膜遞送被視為玻璃體內注射的替代。然而，諸如鞏膜、脈絡膜、視網膜色素上皮、淋巴流及一般血流之眼障壁會損及功效。全身投藥(考慮到眼睛體積與整個身體體積之比，此係不利的)可導致潛在全身毒性。
許多公司已開發用於治療眼睛疾病之微粒。例如，Allergan已揭示一種可生物降解之微球，其用以遞送調配在適於眼內注射之高黏度載劑中之治療劑或治療非眼部疾病(美國公開案2010/0074957及美國公開案2015/0147406主張返回至2003年12月16日之一系列申請案之優先權)。在一個實施例中，該‘957申請案描述一種生物相容的眼內藥物遞送系統，其包括複數個可生物降解之微球、治療劑及黏性載劑，其中該載劑於25℃在0.1/秒之剪切速率下具有至少約10 cp之黏度。
Allergan亦已揭示可被注射至患者眼睛中之複合藥物遞送材料，其包含分散在介質中之複數個微粒，其中該等微粒包含藥物及可生物降解或可生物溶蝕之塗層及該介質包含分散在形成儲積物(depot)之材料中之藥物，其中該介質組合物可在注射至眼睛中時凝膠化或固化(WO 2013/112434 A1，主張2012年1月23日之優先權)。Allergan指出，本發明可用於提供儲積裝置以將固體持續藥物遞送系統植入至眼睛中而無需切口。一般而言，注射時的儲積轉變成具有可能難以或不可能藉由注射投與的黏度之材料。
此外，Allergan已揭示直徑在40 μm與200 μm之間，平均直徑在60 μm與150 μm之間之可生物降解之微球，其可有效地保留在眼睛前房中而不會產生充血(US 2014/0294986)。微球包含對眼部疾病有效之藥物，在投與至眼睛前房後可釋放超過7天。投與此等大顆粒旨在克服注射一般耐受不良之1至30 μm顆粒的缺點。
Regentec Limited已就製備可用作組織支架之多孔顆粒申請一系列專利申請案(WO 2004/084968及美國公開案2006/0263335 (2003年3月27日申請)及美國公開案2008/0241248 (2005年9月20日申請)及WO 2008/041001 (2006年10月7日申請))。顆粒之孔隙率必須足以接收要固持在顆粒中之細胞。可在植入基質之時或之前或在從內源細胞原位募集情況下在植入之後將細胞添加至基質。Regentec亦公開一篇關於具有多孔顆粒的組織支架的文章(Qutachi等人「Injectable and porous PLGA microspheres that form highly porous scaffolds at body temperature」，Acta Biomaterialia ，10，5080-5098，(2014))。
此外，Regentec Limited亦申請關於可用於藥物遞送中之大多孔顆粒之製備之專利申請案(WO 2010/100506及美國公開案2012/0063997 (2009年3月5日申請))。顆粒之孔隙率允許快速遞送治療劑。此等顆粒旨在形成會填充藉由觸發器(諸如溫度變化)將其等註入的空間之支架。
關於高度多孔微粒之其他參考文獻包括Rahman及Kim之公開案。Rahman等人「PLGA/PEG-hydrogel composite scaffolds with controllable mechanical properties」J. of Biomedical Materials Research ，101，648-655，(2013)描述約50%孔隙率之水凝膠及其對應之力學性質。Kim等人「Biodegradable polymeric microspheres with 「open/closed」 pores for sustained release of human growth hormone」J. of Controlled Release ，112，167-174，(2006)描述具有用於遞送人類生長激素之孔之PLGA聚合物。
Locate Therapeutics Limited申請之EP 2125048 (2007年2月1日申請)以及Regentec Limited申請之WO 2008/093094、美國公開案2010/0063175 (2007年2月1日申請)及WO 2008/093095 (2007年2月1日申請)揭示顆粒之製備，該等顆粒不一定係多孔但在暴露於觸發器(諸如溫度)時會形成可用於修復宿主中受損或缺失組織之組織支架。
2015年10月20日頒與給Warsaw Orthopedic之美國專利9,161,903及Warsaw Orthopedic Inc.申請之美國公開案2016/0038407揭示用於在皮膚下方的靶組織部位注射之可流動組合物，該可流動組合物包括在靶組織部位處或在靶組織部位附近硬化之可流動組合物。
Bible等人「Attachment of stem cells to scaffold particles for intra-cerebral transplantation」，Nat. Protoc. ，10，1440-1453，(2009)描述一種製造不結塊或不聚集的PLGA微粒之詳細方法。
Liquidia Technologies申請的標題為「Degradable compounds and methods of use thereof, particularly with particle replication in non-wetting templates」之美國專利申請公開案2011/0123446描述利用矽基核心並可形成快速降解基質之可降解聚合物。
關於用於眼部遞送之顆粒之其他參考文獻包括以下。Ayalasomayajula, S.P.及Kompella, U.B.已揭示大鼠中結膜下投與塞來昔布(celecoxib)-聚(丙交酯-共聚-乙交酯) (PLGA)微粒(Ayalasomayajula, S.P.及Kompella, U.B.，「Subconjunctivally administered celecoxib-PLGA microparticles sustain retinal drug levels and alleviate diabetes-induced oxidative stress in a rat model」，Eur. J. Pharm. ，511，191-198 (2005))。Danbiosyst UK Ltd.已揭示一種包含可生物降解之聚合物、8,000道耳頓或更高之水溶性聚合物及活性劑之混合物之微粒(美國專利5,869,103)。Poly-Med, Inc.已揭示一種包含水凝膠塊體及載劑之組合物，該載劑具有沈積於載劑上之生物活性劑 (美國專利6,413,539)。MacroMed Inc.已揭示一種包含微粒及可生物降解之凝膠之藥劑遞送系統之用途(美國專利6,287,588及美國專利6,589,549)。Novartis已揭示用於眼周或結膜下投藥之眼用儲積調配物，其中該醫藥上可接受之聚合物係多元醇之聚乳酸交酯-共聚-乙交酯(美國公開案2004/0234611、美國公開案2008/0305172、美國公開案2012/0269894及美國公開案2013/0122064)。Universidad De Navarra已揭示用於攜載包含聚乙二醇化可生物降解聚合物之生物活性分子之口服聚乙二醇化奈米粒子(美國專利8,628,801)。Surmodics, Inc.已揭示包含用於藥物遞送之基質之微粒(美國專利8,663,674)。Minu, L.L.C.已揭示一種呈奈米粒子形式微粒之藥劑於促進跨膜輸送之用途。Emory University及Georgia Tech Research Corporation已揭示促進治療性顆粒從脈絡膜上腔的***部位遷移至治療部位之分散在非牛頓流體中之顆粒(U.S. 2016/0310417)。Pfizer已揭示用作可注射儲積調配物之奈米粒子(美國公開案2008/0166411)。Abbott已揭示包含用於遞送酪胺酸激酶抑制劑之醫藥上可接受之聚合物之醫藥劑型(美國公開案2009/0203709)。The Brigham and Woman’s Hospital, Inc.已揭示改性聚(乳酸-共聚-乙醇酸)聚合物，其具有共價結合至該聚合物之治療劑(U.S. 2012/0052041)。BIND Therapeutics, Inc.已揭示包含約50至99.75重量%之二嵌段聚(乳酸)-聚(伸乙基)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共聚-乙醇酸)-聚(伸乙基)二醇共聚物之治療性奈米粒子，其中該治療性奈米粒子包含10至約30重量%之聚(伸乙基)二醇(美國公開案2014/0178475)。受讓給BIND Therapeutics, Inc.的其他公開案包括美國公開案2014/0248358及美國公開案2014/0249158。Allergan已揭示一種包含藥物之可生物降解之微球於治療眼部病狀之用途(美國公開案2010/0074957、美國公開案2014/0294986、美國公開案2015/0147406、EP 1742610及WO 2013/112434)。Allergan亦已揭示生物相容性植入物，其包含前列醯胺組分(其可以顆粒形式存在)及允許在1週至6個月的時間內緩慢釋放藥物以治療眼部病狀(諸如青光眼)之可生物降解之聚合物(美國申請案2015/0157562及美國申請案2015/0099805)。Jade Therapeutics已揭示可直接遞送至靶組織或放置在適宜遞送裝置中之包含活性劑及聚合物基質之調配物(美國公開案2014/0107025)。Bayer Healthcare已揭示包含舒尼替尼(sunitinib)及至少一種醫藥上可接受之媒劑之局部用眼科醫藥組合物(WO 2013/188283)。
pSivida Us, Inc.已揭示包含供眼內使用的微孔或中孔矽體之可生物降解之藥物洗脫顆粒(美國專利9,023,896)。受讓給pSivida Us, Inc.的其他專利包括：美國專利8,871,241；美國專利8,815,284；美國專利8,574,659；美國專利8,574,613；美國專利8,252,307；美國專利8,192,408及美國專利7,998,108。ForSight Vision4, Inc.已揭示用於植入眼睛中之治療性裝置(美國專利8,808,727)。受讓給ForSight Vision4, Inc.的其他專利包括：美國專利9,125,735；美國專利9,107,748；美國專利9,066,779；美國專利9,050,765；美國專利9,033,911；美國專利8,939,948；美國專利9,905,963；美國專利8,795,712；美國專利8,715,346；美國專利8,623,395；美國專利8,414,646；美國專利8,399,006；美國專利8,298,578；美國專利8,277,830；美國專利8,167,941；美國專利7,883,520；美國專利7,828,844及美國專利7,585,075。名古屋工業科學研究所(Nagoya Industrial Science Research Institute)已最新揭示一種脂質體於遞送藥物至眼睛後段之用途(美國專利9,114,070)。
關於聚合物顆粒及植入物之其他參考文獻包括Jain等人  「Controlled release of drugs from injectable in situ formed biodegradable PLGA microspheres: effect of various formulation variables」 European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics (2000) 50: 257-262；Mownika等人「Formulation and Evaluation of Simvastatin Injectable in situ Implants」 American Journal of Drug Discovery and Development，(2012) 2: 87-100；Do等人「In situ forming implants for periodontitis treatment with improved adhesive properties」 European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics (2014) 88: 342-350；Kranz等人「Physiocomechanical Properties of Biodegradable Poly(D,L-lactide) and Poly(D,L-lactide-co-glycolide) Films in the Dry and Wet States」 Journal of Pharmaceutical Sciences (2000) 89: 1558-1566；Dinarvand等人  「Polylactide-co-glycolide nanoparticles for controlled delivery of anticancer agents」 International Journal of Nanomedicine (2011) 6: 877-895；Dong等人  「Stability of poly(D,L-lactide-co-glycolide) and leuprolide acetate in in-situ forming drug delivery systems」 (2006)，115: 158-167；Patil等人  「Sustained-Release Delivery System of a Slow Hydrogen Sulfide Donor, GYY 4317, for Potential Application」，Glaucoma (2017) 18: 2291-2302；Pietro等人「The influence of triethylcitrate on the biological properties of poly(L-lactic-co-glycolic acid) membranes」 J Mater Sci: Mater Med (2006) 17:849-857。
Johns Hopkins University已申請主張用於眼部注射之調配物之許多專利，包括標題為「Controlled Release Formulations for the Delivery of HIF-1 Inhibitors」之WO2013/138343、標題為「Non-linear Multiblock Copolymer-drug Conjugates for the Delivery of Active Agents」之WO2013/138346、標題為「Sustained Delivery of Therapeutic Agents to an Eye Compartment」之WO2011/106702、標題為「Glucorticoid-loaded Nanoparticles for Prevention of Corneal Allograft Rejection and Neovascularization」之WO2016/025215、標題為「Sunitinib Formulations and Methods for Use Thereof in Treatment of Ocular Disorders」之WO2016/100392、標題為「Sunitinib Formulation and Methods for Use Thereof in Treatment of Glaucoma」之WO2016/100380、標題為「Compositions for the Sustained Release of Anti-Glaucoma Agents to Control Intraocular Pressure」之WO2016/118506、標題為「Nanocrystals, Compositions, and Methods that Aid Particle Transport in Mucus」之WO2013/166385、標題為「Drug and Gene Carrier Particles that Rapidly move Through Mucus Barriers」之WO2005/072710、標題為「Compositions and Methods for Enhancing Transport through Mucus」之WO2008/030557、標題為「Compositions and Methods Relating to Reduced Mucoadhesion」之WO2012/061703、標題為「Large Nanoparticles that Penetrate Tissue」之WO2012/039979、標題為「Mucus Penetrating Gene Carriers」之WO2012/109363、標題為「Biodegradable Stealth Nanoparticles Prepared by a Novel Self-Assembly Emulsification Method」之WO2013/090804、標題為「Nanoparticles Formulations with Enhanced Mucosal Penetration」之WO2013/110028、及標題為「Lipid-based Drug Carriers for Rapid Penetration through Mucus Linings」之WO2013/166498。
GrayBug Vision, Inc.揭示在授予的美國專利第9,808,531號；第9,956,302號；第10,098,965號；第10,117,950號；第10,111,964號；第10,159,747號；及第10,458,876號及PCT申請案WO2017/053638；WO2018/175922；WO 2019/118924；及WO 2019/210215中揭示用於眼部療法治療之前藥。用於眼部療法之聚集微粒描述於美國專利第10,441,548號及美國申請案第US 2018-0326078號中。PCT申請案WO2017/083779；WO2018/209155；及WO 2019/209883描述聚集微粒及用於製造聚集微粒之方法。
為治療眼部疾病，及特別是眼後段之疾病，藥物必須以治療含量且持續足夠長的時間遞送以達成功效。在實務中很難達成該看似直接的目標。
本發明之目標係改良的製備活體內聚集微粒以供受控式藥物遞送活性劑至眼睛用之組合物及方法。
申請人在PCT/US2016/61706及PCT/US2018/32167中揭示製備治療性聚集微粒之某些方法及組合物。現提供對此等方法及組合物之改善，使得可增加活體內聚集微粒之硬度並因此提高其耐久性，此可導致更穩定之長期眼部療法。
在一個態樣中，提供至少500微米之視需要可生物降解並具有可選治療劑之改良的聚集微粒，其展現在活體內眼睛(例如人類眼睛)玻璃體中為壓縮該顆粒成30%應變時需至少5公克力之硬度等級，及在一些實施例中，至少約10、15、20或25公克力之硬度等級。在一個實施例中，與注射後立即投與的微粒相比，該改良的聚集微粒在玻璃體中注射後之硬度在注射後四小時或更短時間內增加至少兩倍，至少三倍，至少四倍，至少五倍，或更多倍。在一個實施例中，硬度在三小時或更短時間，在兩小時或更短時間，在一小時或更短時間，在三十分鐘或更短時間，在十五分鐘或更短時間，在十分鐘或更短時間，在五分鐘或更短時間，在兩分鐘或更短時間，或在一分鐘或更短時間內增加。
已發現當一起使用時對多種因素之組合進行協調控制會導致該活體內明顯更硬且更耐久之聚集微粒。在一個實施例中，該等因素包括使用最佳化微粒製劑及組合物以及改良的投藥方法。
由於眼部疾病隨著年齡而增加，因此重要的是提供在較低黏度的玻璃體液中仍聚集成至少500微米集結粒之顆粒懸浮液。本發明提高在具有較低黏度玻璃體液之眼睛中產生堅硬且耐久之聚集微粒的能力，並因此特別適用於患有眼部疾病之老年患者。最佳化微粒製劑
在一個實施例中，提供最佳化微粒製劑及組合物，其包括在製備活體內聚集之微粒之過程中，在製備微粒後藉由離心或其他小顆粒去除手段從微粒懸浮液或溶液實質上去除小於約5或10微米之較小微粒，使得實質上消除較小微粒。在某些實施例中，較小微粒之去除可視需要藉由系列離心步驟，例如以系列或連續方式的2、3、4或5個離心步驟來達成。一般而言，離心係在可達成所需結果之任何條件下進行，並通常係取決於批次大小。例如，對於某些批次大小，離心可以約1000-3000 rpm，且更通常介於1500 rpm至2500 rpm之間進行。離心時間亦係批次大小的函數；批次越大，需要的離心過程越長。在某些情況下，實施一或多個離心步驟，直到上清液達成所需澄清度，及在一些情況下，若藥物具有顏色，則達成所需無色化程度。如以下進一步描述，此可藉由透光率來測量。
有助於在眼睛玻璃體內活體內產生聚集微粒之能力之另一個因素係在單個微粒形成期間微粒之表面處理，此有助於聚集過程。已發現，經含在約55%至75%乙醇水溶液 (且更通常約60%至75%乙醇水溶液，或甚至約70%乙醇)之溶劑中之大於約1.0或1.5 mM且小於10 mM之NaOH處理單個微粒超過20分鐘，會在玻璃體內活體內產生改良的硬化聚集微粒。在某些實施例中，表面處理係進行大於約60、90或120分鐘之時間。表面處理係在低於18℃，且通常低於15、12、10或5℃下進行。
在另一個實施例中，將經溫和表面處理之固體可生物降解微粒之懸浮液置於包含添加劑之稀釋劑中，其在活體內注射後有助於聚集以形成較大顆粒或集結粒。已發現在注射之前，含在稀釋劑中之微粒懸浮液中可包括軟化微粒表面之添加劑之添加。例如，增加表面聚合物之塑性，降低表面聚合物之黏度或玻璃化轉變溫度或部分溶解表面聚合物之添加劑可用於幫助活體內聚集過程。非限制性實例包括苄醇及檸檬酸三乙酯。添加至經溫和表面處理之微粒之懸浮液之稀釋劑中之添加劑可改良經表面處理之微粒之活體內顆粒聚集。在一個實施例中，與懸浮在不含此種添加劑之稀釋劑中之微粒相比，懸浮在包含添加劑之稀釋劑中之微粒更快且更強地活體內聚集。實例14論述含在稀釋劑中之苄醇對經溫和表面處理之微粒之顆粒聚集之影響及實例15論述含在稀釋劑中之檸檬酸三乙酯對顆粒聚集之影響。如此等實例中所討論及圖16、圖17、圖18、圖19A、圖19B、圖20、圖21A及圖21B中所示，經表面處理之微粒之懸浮液中包含此等添加劑導致更佳且更快之聚集。
因此，在一個實施例中，本發明係一種包含表面活性劑、至少一種可生物降解之聚合物及治療劑之固體聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該固體聚集用微粒 (i) 具有具有小於10%孔隙率(以孔隙空間與總體積之比計)之實芯； (ii) 包含約0.001%至約1%之表面活性劑並已在表面改性之前經表面改性以包含相比微粒更少的表面活性劑，其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性； (iii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間； (iv) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒；及 (v) 視需要，其中該懸浮液已在小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托、或小於5托之壓力下經真空處理1至90分鐘。
在一個替代實施例中，本發明係一種包含表面活性劑、至少一種可生物降解之聚合物及治療劑之聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該固體聚集用微粒 (i) 包含約0.001%至約1%之表面活性劑並已在表面改性之前經表面改性以包含相比微粒更少的表面活性劑，其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性； (ii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間； (iii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒；及 (iv) 視需要，其中該懸浮液已在小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托、或小於5托之壓力下經真空處理1至90分鐘。
在一個實施例中，改良的聚集微粒懸浮液或溶液包含平均直徑在20至40微米之間的微粒，該微粒產生至少500微米之改良的聚集微粒，其展現在活體內眼睛玻璃體中為壓縮該顆粒成30%應變時需至少5公克力、10公克力、15公克力或20公克力之硬度等級。在一個替代實施例中，與注射後立即投與的微粒相比，改良的聚集微粒在玻璃體中注射後之硬度在注射後四小時或更短時間內，在三小時或更短時間內，在兩小時或更短時間內，在一小時或更短時間內，在三十分鐘或更短時間內，在十五分鐘或更短時間內，在十分鐘或更短時間內，在五分鐘或更短時間內，在兩分鐘或更短時間內，或在一分鐘或更短時間內增加至少兩倍，至少三倍、至少四倍，至少五倍，至少六倍，至少七倍，至少八倍，至少九倍，至少十倍或更多倍。
在一個實施例中，改良的聚集微粒包含PLGA-PEG。在一個實施例中，改良的聚集微粒包含PLGA。在一個實施例中，改良的聚集微粒包含PLGA及PLGA-PEG。在一個實施例中，改良的聚集微粒包含PLGA、PLA及PLGA-PEG。
在一個實施例中，改良的聚集微粒係可生物降解的。
在一個實施例中，該微粒包含活性劑。在一個實施例中，該活性劑係酪胺酸激酶抑制劑。在一個實施例中，該活性劑係舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。在一個實施例中，該活性劑係蘋果酸舒尼替尼。在一個實施例中，該活性劑係選自呋塞米(furosemide)、布美他尼(bumetanide)、吡咯他尼(piretanide)、依他尼酸(ethacrynic acid)、依托唑啉(etozolin)及奧唑林酮(ozolinone)或其醫藥上可接受之鹽。在一個實施例中，該活性劑係選自噻嗎洛爾(timolol)、溴莫尼定(brimonidine)、布林佐胺(brinzolamide)、多佐胺(dorzolamide)或其醫藥上可接受之鹽。在一個實施例中，該活性劑係舒尼替尼、噻嗎洛爾、溴莫尼定、布林佐胺、多佐胺或其醫藥上可接受之鹽之前藥。最佳化投藥方法
對會導致活體內注射時顯著更硬且耐久之聚集微粒的因素之組合之協調控制包括改良的投藥方法。
在一種投藥方法中，將最佳化聚集微粒溶液或懸浮液裝載至注射用裝置中，該裝置包括長度小於7 mm之針，並注射至仰望至少15°，且通常至少20°的患者眼睛中，使得針約3至5 mm在玻璃體內。將該針從角膜緣以使溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近的角度注射穿透眼睛睫狀體平坦部約3至6 mm之間(有時約4 mm) (圖1係眼睛之說明，其中睫狀體平坦部、角膜緣及玻璃體腔已作標記)。該方法繪示於圖10A、圖10B、圖10C及圖10D中。
在一種替代投藥方法中，將最佳化聚集微粒溶液或懸浮液裝載至注射用裝置中，該裝置包括長度在約13至18 mm之間的針，並注射至仰望約20°至約30°，通常約25°的患者眼睛中，使得針約10至15 mm在玻璃體內。將該針從角膜緣以使溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近的角度注射穿透眼睛睫狀體平坦部約3至6 mm之間(有時約4 mm)。該方法繪示於圖9A、圖9B及圖9C中。
此等改良的投藥方法有助於顆粒聚集並使聚集之前個別微粒之滑動、散佈及分散最小化(實例11及實例12，圖12C至12F及圖13A至13B)。在某些實施例中，注射用裝置係注射器及針頭係具有正常壁或薄壁的約31、30、29、28、27、26或25號。
已發現當微粒藉由本文所述的方法注射及/或被懸浮在包含添加劑之稀釋劑中時，可改良此種聚集。
在某些實施例中，提供一種用於增加活體內聚集微粒之硬度及/或耐久性之方法，以出於治療目的將活性劑受控式遞送至患者眼睛。
在一個實施例中，在玻璃體中注射時，相對於注射後立即 (或例如在投與後少於一分鐘或甚至30秒)的微粒，硬度增加。在一個實施例中，在玻璃體中注射時，相對於注射後立即投與的微粒，在注射後約兩小時或更短時間內微粒之硬度增加至少兩倍。用於增加活體內聚集微粒之硬度之一種非限制性方法包括： (a) 提供如本文所述的最佳化聚集用微粒之溶液或懸浮液； (b) 將包括小於約7 mm的針之注射用裝置裝載選定量之聚集微粒溶液或懸浮液； (c)患者以至少約15度角的近似仰望坐姿就位； (d) 注射該聚集微粒溶液或懸浮液： i. 穿透眼睛睫狀體平坦部於眼睛角膜緣後3至6 mm之間； ii. 其中針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔約5:30點鐘與9點鐘之間，且通常在約6點鐘與8點鐘之間； iii. 以將溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近之角度並以使玻璃體內的針不超過約4 mm之方式；及 (e) 在若需要則更換椅子的短暫移動時期後，使患者保持坐姿一段足夠的時間以使聚集用微粒聚集成至少500微米之至少一個聚集微粒。
用於增加活體內聚集微粒之硬度之另一種非限制性方法包括： (a) 提供如本文所述的最佳化聚集用微粒之溶液或懸浮液； (b) 將包括約10 mm至約18 mm的針之注射用裝置裝載選定量之聚集用微粒之溶液或懸浮液； (c) 患者以至少約15度角的近似仰望坐姿就位； (d) 注射該聚集用微粒之溶液或懸浮液： i. 穿透眼睛眼睛睫狀體平坦部於眼睛角膜緣後3至6 mm之間； ii. 其中針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔約4:00點鐘與8點鐘之間，並通常約6點鐘； iii. 以將溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近之角度；及 (e) 在若需要則更換椅子的短暫移動時期後，使患者保持坐姿一段足夠的時間以使聚集用微粒聚集成至少500微米之至少一個聚集微粒。
在一個實施例中，用於增加硬度及/或耐久性之方法之微粒展現在活體內眼睛玻璃體中之硬度等級為壓縮該顆粒成30%應變時需至少5公克力、10公克力、15公克力、或20公克力。
在一個替代實施例中，與注射後立即投與的微粒相比，用於增加硬度及/或耐久性之方法之微粒之硬度在注射後四小時或更短時間內，在三小時或更短時間內，在兩小時或更短時間內，在一小時或更短時間內，在三十分鐘或更短時間內，在十五分鐘或更短時間內，在十分鐘或更短時間內，在五分鐘或更短時間內，在兩分鐘或更短時間內，或在一分鐘或更短時間內增加至少兩倍，至少三倍，至少四倍，至少五倍，至少六倍，至少七倍，至少八倍，至少九倍，至少十倍或更多倍。
在一個實施例中，用於增加硬度及/或耐久性之方法之微粒包含至少一種可生物降解之聚合物及封裝在該可生物降解之聚合物中之治療劑，其中該微粒之平均直徑係在10 μm與60 μm之間，其： (i) 具有具有小於10%孔隙率(以孔隙空間與總體積之比計)之實芯； (ii) 包含約0.001%至約1%之表面活性劑並已在表面改性之前經表面改性以包含相比微粒更少的表面活性劑，其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性；及 (iii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少一個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
在一個替代實施例中，用於增加硬度及/或耐久性之方法之微粒包含至少一種可生物降解之聚合物及封裝在該可生物降解之聚合物中之治療劑，其中該微粒之平均直徑係在10 μm與60 μm之間，其： (ii) 包含約0.001%至約1%之表面活性劑並已在表面改性之前經表面改性以包含相比微粒更少的表面活性劑，其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性；及 (iii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少一個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
在一個實施例中，該聚集用微粒溶液或懸浮液已在小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托、或小於5托之壓力下經真空處理1至90分鐘。
因此，根據本發明，提供用於增加活體內聚集微粒之硬度及/或耐久性之組合物及方法以受控式藥物遞送至有此需要之患者的眼睛。
該方法係注射聚集用微粒之溶液或懸浮液，其中將該溶液或懸浮液裝載至包括小於約7 mm的針之注射用裝置中並注射至向上看的患者的眼睛中。將該溶液或懸浮液以使該溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔或玻璃體腔附近的角度注射穿透眼睛睫狀體平坦部於角膜緣後3 mm與6 mm之間。在一種替代方法中，針係在約13 mm與18 mm之間及溶液或懸浮液係以使該溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔或玻璃體腔附近的角度注射穿透眼睛睫狀體平坦部於角膜緣後10 mm與15 mm之間。
如實例11中所論述，要求患者向後傾斜其頭部或躺下之先前方法使微粒向眼睛後部而不是在玻璃體腔處沈積。然後要求微粒向玻璃體腔底部「滑動」，當聚集用微粒從眼睛後部移至玻璃體腔時，此會導致該聚集用微粒之散佈及拖尾。
在本發明之一個實施例中，用於本文所述的方法之微粒懸浮液或含在包含添加劑之稀釋劑中之微粒係在包含添加劑之適宜稀釋劑中復水之後如U.S.S.N. 15/976,847 (該案係以引用的方式併入)中所述進行真空處理。在本發明之一個實施例中，用於本文所述的方法之微粒懸浮液或含在包含添加劑之稀釋劑中之微粒係在包含添加劑之適宜稀釋劑中復水之後如U.S.S.N.15/976,847 (該案係以引用的方式併入)中所述進行超音波處理。
在本發明之一個態樣中，用於製備導致活體內聚集集結粒之微粒懸浮液之方法可與描述於U.S.S.N.15/349,985、PCT/US16/61706、U.S.S.N.15/976,847及PCT/US18/32167中之所選擇的用於形成聚集微粒之方法(及其所得的材料)組合使用。
在本發明之一個態樣中，用於製備微粒之方法可與除了洗滌及濃縮顆粒外的用於分離小顆粒之連續離心組合使用。在一個實施例中，使微粒經過一輪、二輪或三輪離心。在一個實施例中，連續離心去除小於約10 μm之顆粒。
舉例來說，本發明進一步包括一種用於製備經表面改性之固體聚集用微粒懸浮液之方法，該等懸浮液提供活體內聚集以形成集結粒之微粒，該方法包括： A. 製備包含一或多種可生物降解之聚合物之微粒之第一步驟，其藉由將聚合物及治療劑溶解或分散在一或多種溶劑中以形成聚合物及治療劑溶液或分散液，將該聚合物及治療劑溶液或懸浮液與包含表面活性劑之水相混合以產生溶劑負載之微粒，並然後去除該(等)溶劑以產生包含治療劑、聚合物及表面活性劑之聚合物微粒；及 B. 溫和處理步驟(i)之微粒之表面之第二步驟，其在約18、15、10、8或5℃或低於其之溫度下用會去除或部分去除表面活性劑、表面聚合物或表面寡聚物之試劑以不會顯著產生內部孔之方式視需要處理長達約1、2、3、4、5、10、30、40、50、60、70、80、90、100、11、120或140分鐘； C. 用包含賦形劑(視需要甘露醇)之溶液洗滌該等微粒； D. 分離並凍乾該等經表面處理之微粒； E. 將該等經表面處理之微粒再懸浮於包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之適宜稀釋劑中； F. 視需要，藉由使顆粒經受選自1)真空處理及2)超音波處理之至少一種製程而進一步改良該等顆粒之聚集潛力。
在一個實施例中，步驟B)部分地去除表面活性劑、表面聚合物或表面寡聚物，從而得到包含相比表面處理之前的微粒更少的表面活性劑之微粒。此等步驟之製程可在連續生產線中或藉由一個步驟或適當地以逐步方式來達成。以上步驟F)之製程可在分離微粒之後及/或在注射之前復水時進行。在一個實施例中，經表面處理之固體可生物降解微粒在製造製程期間不會顯著聚集。在另一個實施例中，當再懸浮並裝載至注射器中時，經表面處理之固體可生物降解微粒不顯著聚集。
在一個實施例中，步驟B)之後係連續離心以去除約小於10 μm之顆粒。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2018年11月15日申請之美國臨時申請案第62/767,911號；2018年12月21日申請之美國申請案第62/783,936號；及2019年2月8日申請之美國申請案第62/803,273號之權益。此等申請案之全文係以引用的方式併入。
本發明係改良的活體內聚集微粒之組合物及方法以受控式藥物遞送活性劑至眼睛。在一個態樣中，提供至少500微米之改良的聚集微粒，其展現在活體內眼睛(例如人類眼睛)玻璃體中壓縮該顆粒成30%應變時需至少5公克立之硬度等級，及在一些實施例中，至少約10、15、20或25公克力之硬度等級。在一個實施例中，與注射後立即投與的微粒相比，在玻璃體中注射時，微粒之硬度在注射後四小時或更短時間內，在三小時或更短時間內，在兩小時或更短時間內，在一小時或更短時間內，在三十分鐘或更短時間內，在十五分鐘或更短時間內，在十分鐘或更短時間內，在五分鐘或更短時間內，在兩分鐘或更短時間內，或在一分鐘或更短時間內增加至少兩倍，至少三倍，至少四倍，至少五倍或更多倍。
已發現對當一起使用時的多種因素之組合進行協調控制會導致該活體內明顯更硬且更耐久之聚集微粒。該等因素包括使用最佳化微粒製劑及組合物以及改良的投藥方法。I . 最佳化投藥方法
在某些實施例中，提供一種用於增加活體內聚集微粒之硬度及/或耐久性之方法，以出於治療目的將活性劑受控式遞送至患者眼睛。
在一個實施例中，在玻璃體中注射時，相對於注射後立即 (或例如在投與後少於一分鐘或甚至30秒)的微粒，硬度增加。在一個實施例中，在玻璃體中注射時，相對於注射後立即投與的微粒，在注射後約兩小時或更短時間內微粒之硬度增加至少兩倍。用於增加活體內聚集微粒之硬度之一種非限制性方法包括： (a) 提供如本文所述的最佳化聚集用微粒之溶液或懸浮液； (b) 將包括小於約7 mm的針之注射用裝置裝載選定量之聚集用微粒溶液或懸浮液； (c) 患者以至少約15度角的近似仰望坐姿就位； (d) 注射該聚集用微粒溶液或懸浮液： i. 穿透眼睛睫狀體平坦部於眼睛角膜緣後3至6 mm之間； ii. 其中針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔約5:30點鐘與9點鐘之間，且通常在約6點鐘與8點鐘之間； iii. 以將溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近之角度及以使玻璃體內的針不超過約4 mm之方式；及 (e) 在若需要則更換椅子的短暫移動時期後，使患者保持坐姿一段足夠的時間以使聚集微粒聚集成至少500微米之至少一個聚集微粒。
用於增加活體內聚集微粒之硬度之另一種非限制性方法包括： (a) 提供如本文所述的最佳化聚集用微粒之溶液或懸浮液； (b) 將包括在約10 mm與約18 mm之間的針之注射用裝置裝載選定量之聚集微粒溶液或懸浮液； (c) 患者以至少約15度角的近似仰望坐姿就位； (d) 注射該聚集微粒溶液或懸浮液： i. 穿透眼睛睫狀體平坦部於眼睛角膜緣後3至6 mm之間； ii. 其中針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔約4:00點鐘與8點鐘之間，且通常約6點鐘； iii. 以將溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近之角度；及 (e) 在若需要則更換椅子的短暫移動時期後，使患者保持坐姿一段足夠的時間以使聚集微粒聚集成至少500微米之至少一個聚集微粒。
在一個實施例中，至少500微米之改良的聚集微粒展現在活體內眼睛玻璃體中之硬度等級為壓縮該顆粒成30%應變時需至少5公克力、10公克力、15公克力、或20公克力。在一個實施例中，與注射後立即相比，在玻璃體中注射時，微粒之硬度在注射後在三小時或更短時間內，在兩小時或更短時間內，在一小時或更短時間內，在三十分鐘或更短時間內，在十五分鐘或更短時間內，在十分鐘或更短時間內，在五分鐘或更短時間內，在兩分鐘或更短時間內，或在一分鐘或更短時間內增加至少三倍，至少四倍，至少五倍，至少六倍，至少七倍，至少八倍，至少九倍，至少十倍或更多倍。
如實例11中所述，本發明之方法優於用於注射微粒之先前方法。在先前方法中，患者被引導將其頭部向上傾斜約45°並再抬頭20-30°。然後用13 mm針將聚集用微粒之溶液或懸浮液注射穿透睫狀體平坦部於眼睛內部10 mm(圖8A及圖8B)。由於針的長度及患者眼睛的角度(由頭部傾斜及眼睛向上位置引起)，微粒向眼睛後部沈積。為到達玻璃體腔底部，當患者坐起並將其眼睛再定向回至垂直位置時，微粒必須自眼睛後部中之最初沈積物移動(圖8B)。此將導致聚集微粒之散佈及拖尾。實例11及圖12A及12B論述並描繪由於先前注射方法(如方法A所描述)而產生的散佈及拖尾。圖12A係玻璃眼睛的底視圖及箭頭指向散佈。圖12B係玻璃眼睛的側視圖及箭頭指向微粒之拖尾。
與先前方法相反，令人驚訝地發現本發明之方法不會導致注射後微粒之拖尾或散佈。
如實例11中所論述及圖9A至9F中所示，實例11中的一種本發明方法(稱為方法B)要求患者坐起並僅向上看20-30°，但不向上傾斜其頭部(圖9A)。然後用13 mm針將微粒之懸浮液或溶液注射穿透睫狀體平坦部於眼睛內部3至6 mm。由於患者係坐起並不向後傾斜其頭部，因此微粒不會沈積在眼睛後部，而是沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近(圖9C至9F)。
實例11中的本發明之第二方法(稱為方法C)要求患者僅向上看20-30°，但不向上傾斜其頭部(圖10A至10B)。然後用6 mm針將微粒之懸浮液或溶液注射穿透睫狀體平坦部於眼睛內部3至6 mm。由於針短及患者不向後傾斜其頭部，因此微粒不會沈積在眼睛後部，而是沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近(圖10D)。因為針短，故微粒在眼睛底部之沈積並不重度取決於針的角度。
當使用方法B或方法C來投與微粒時，一旦患者將其眼睛再定向回至垂直位置，微粒僅最小化地移動或根本不會移動以到達底部玻璃體腔。此種最小化移動導致微粒之最小化滑動及拖尾或沒有微粒之滑動及拖尾。
當比較圖12A至12B及圖12C至12F時，本發明之優越性係明顯的。如上所述，圖12A至12B係先前方法(實例11中之方法A)的結果。顯示滑動及拖尾。相比之下，圖12C至12D及圖12E至12F係已藉由本發明之方法(分別為實例11中之方法B及方法C)注射微粒溶液之玻璃眼睛的圖像。圖12C及圖12E分別為方法B及方法C之後的玻璃眼睛的底視圖。未觀察到微粒之散佈。圖12D及圖12F分別為方法B及方法C投藥之後的玻璃眼睛的側視圖。未觀察到拖尾。
在一個實施例中，注射用裝置係注射器及針頭係具有正常壁或薄壁的約31、30、29、28、27、26或25號。在一實施例中，針的長度為約3 mm、約4 mm、約5 mm、約6 mm或約7 mm。在一實施例中，針的長度為6 mm。在一個替代實施例中，針為約8 mm、約9 mm、約10 mm、約11 mm、約12 mm、約13 mm、約14 mm、約15 mm、約16 mm、約17 mm或約18 mm。在一個實施例中，針的長度為6 mm並規格為27號。在一個實施例中，針的長度為13 mm並且規格為27號。
在一些實施例中，長度小於7 mm的短針令人驚訝地優於長度更長的針。當將長度小於7 mm的針注射至眼睛中於角膜緣後3 mm至6 mm時，短的長度允許將聚集用微粒遞送至玻璃體腔底部，而不論針被定位的角度。在注射期間，患者向上看並眼睛向上傾斜約15°的角度，但在注射之後，患者將其眼睛恢復至沒有角度的位置。由於微粒已經沈積在玻璃體腔底部，因此當患者將其眼睛恢復直視的正常位置時，聚集微粒之滑動或分散最小化，與使用更長針的注射方法相比，導致改良的活體內微粒聚集。在一個實施例中，針以允許不超過約4 mm的針在玻璃體內之方式注射。在一個實施例中，針以允許不超過約3 mm的針在玻璃體內之方式注射。
在一個實施例中，將針注射於角膜緣後約3 mm、約3.5 mm、約4 mm、約4.5 mm、約5 mm、約5.5 mm或約6 mm。
在一個實施例中，該微粒溶液或懸浮液在裝載至注射裝置中之前已在小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托、或小於5托之壓力下經真空處理1至90分鐘。
在一個實施例中，微粒溶液或懸浮液在裝載至注射裝置中之前已經過渦旋或振盪。在一個實施例中，進行渦旋或振盪少於10分鐘，少於8分鐘，少於5分鐘，少於3分鐘，或少於1分鐘。
在一個實施例中，微粒溶液或懸浮液之注射在約3至10秒內進行。在一個實施例中，微粒溶液或懸浮液之注射在約3至8秒內進行。在一個實施例中，微粒溶液或懸浮液之注射在約3至5秒內進行。
在一個實施例中，針進入點係在相對於直視的眼睛的瞳孔5:30點鐘與9點鐘之間。在一個實施例中，針進入點係在相對於直視的眼睛的瞳孔4:00點鐘與8:00點鐘之間。在一個實施例中，針進入點係在相對於直視的眼睛的瞳孔3:30點鐘與7:00點鐘之間。在一個實施例中，針進入點係在相對於直視的眼睛的瞳孔3:00點鐘與6:00點鐘之間。在一個實施例中，相對於直視的眼睛的瞳孔，針進入點係約6:00點鐘。
圖1係眼睛之解剖學之標記圖像。除了眼睛的其他部分外，已標記睫狀體平坦部、角膜緣及玻璃體腔。睫狀體平坦部為約4 mm長並位於虹膜及鞏膜之交界處附近。其係扇形且與玻璃體腔相鄰。角膜緣係角膜及鞏膜相遇之邊界。玻璃體腔係玻璃體液佔據的空間。其包括介於晶狀體與視神經前之間的空間。如圖10D中所顯示，本發明之方法將微粒沈積在玻璃體腔的底部處。瞳孔(其係針注射部位的參考點)係位於虹膜中心的孔。
在一個實施例中，微粒包含至少一種可生物降解之聚合物及封裝在該可生物降解之聚合物中之治療劑，其中該微粒之平均直徑係在10 μm與60 μm之間，其： (i) 具有具有小於10%孔隙率(以孔隙空間與總體積之比計)之實芯； (ii) 包含約0.001%至約1%之表面活性劑並已在表面改性之前經表面改性以包含相比微粒更少的表面活性劑，其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性；及 (iii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少一個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
在一個替代實施例中，微粒包含至少一種可生物降解之聚合物及封裝在該可生物降解之聚合物中之治療劑，其中該微粒之平均直徑係在10 μm與60 μm之間，其： (i) 包含約0.001%至約1%之表面活性劑並已在表面改性之前經表面改性以包含相比微粒更少的表面活性劑，其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性；及 (ii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少一個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
在一個實施例中，該等微粒包含PLGA。在一個實施例中，該等微粒包含PLA。在一個實施例中，該等微粒包含PLGA-PEG。在一個實施例中，該等微粒包含PLGA及PLGA-PEG。在一個實施例中，該等微粒包含PLGA、PLA及PLGA-PEG。
在一個實施例中，該活性劑係舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。在一個實施例中，該活性劑係蘋果酸舒尼替尼。在一個實施例中，該活性劑係選自噻嗎洛爾、溴莫尼定、布林佐胺、多佐胺或其前藥或醫藥上可接受之鹽。
在一個實施例中，本發明之微粒具有大於約90%、92%、94%、96%、98%或99%之透光率百分比。
在一個實施例中，本發明之微粒具有大於約5%、約10%或15%之藥物負載。
在一個實施例中，該等微粒係在約10 μm與約60 μm之間。在一個實施例中，該等微粒係在約20 μm與約40 μm之間。在一個實施例中，該等微粒係在約20 μm與約35 μm之間。在一個實施例中，該等微粒係在約20 μm與約30 μm之間。
本發明之另一個態樣包括一種用於眼部注射至眼睛玻璃體腔中之藥物遞送系統，該藥物遞送系統包括 (a) 在小瓶中的包含至少一種可生物降解之聚合物、表面活性劑及治療劑之凍乾的經溫和表面處理之微粒； (b) 包含添加劑之稀釋劑； (c) 包括鎖定在適當位置以產生真空之柱塞之真空壓力注射器； (d) 連接真空注射器(c)及小瓶(a)之轉接子。
在一種替代方法中，患者直立坐著而無頭部傾斜。在用13 mm針注射之前，患者將其眼睛水平轉向鼻子(內收運動)。可在相對於直視的左眼瞳孔約2點鐘與3點鐘之間進入眼睛。在向下約30至45°注射針。在一個實施例中，將針在約2點鐘注射至左眼中並將針指向向下45°。在一個實施例中，將針在約3點鐘注射至左眼中並將針指向向下30°。或者，將針在約10點鐘注射至右眼中並將針指向向下45°或將針在約9點鐘注射至右眼中並向下30°注射。該方法顯示於圖12A及12B中。該方法係有利的，因為其沈積微粒於靠近玻璃體底部處，當患者將其頭部再定向回至垂直位置時，此將拖尾及滑動最小化。其亦有助於最小化注射後患者頭部或眼睛的運動。II . 最佳化微粒製劑
本發明亦包括與最佳化微粒製劑有關的以下態樣： I. 一種經溫和表面處理之微粒含在稀釋劑中之懸浮液，其中該等微粒活體內聚集以形成較大集結粒及其中該稀釋劑包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑。 II. 一種經溫和表面處理之聚集微粒含在稀釋劑中之懸浮液，其中該稀釋劑包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑，及一種用於製造其之方法，其中該等微粒係負載有醫藥活性劑，包括彼等列於以下者，其以本文所提供的非限制性實例之遞送之形式或作為前藥用於活體內治療有此需要之患者時可具有活性。
因此，在一個實施例中，本發明係包含表面活性劑、至少一種可生物降解之聚合物及治療劑之固體聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該固體聚集用微粒 (i) 具有具有小於10%孔隙率(以孔隙空間與總體積之比計)之實芯； (ii) 已經表面改性以使表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性； (iii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間；及 (iv) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
在一個替代實施例中，本發明包括聚集用微粒，其包含表面活性劑、至少一種可生物降解之聚合物及選自毛果芸香鹼(pilocarpine)及α-硫辛酸(alpha lipoic acid)之治療劑，其中該等固體聚集用微粒 (i) 已經表面改性以使表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性； (ii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間；及 (iii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
在一個實施例中，該懸浮液已在小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托、或小於5托之壓力下經真空處理1至90分鐘。
在一個實施例中，該治療劑係選自毛果芸香鹼及α-硫辛酸。
在一個實施例中，該等固體聚集用微粒包含約0.001%至約1%表面活性劑。在一個實施例中，該微粒包含約0.01%至約0.5%表面活性劑、約0.05%至約0.5%表面活性劑、約0.1%至約0.5%表面活性劑、或約0.25%至約0.5%表面活性劑。在一個實施例中，該微粒包含約0.001%至約1%表面活性劑、約0.005%至約1%表面活性劑、約0.075%至約1%表面活性劑、或約0.085%至約1%表面活性劑。在一個實施例中，該微粒包含約0.01%至約5.0%表面活性劑、約0.05%至約5.0%表面活性劑、約0.1%至約5.0%表面活性劑、約0.50%至約5.0%表面活性劑。在一個實施例中，該微粒包含約0.10%至約1.0%表面活性劑或約0.50%至約1.0%。在一個實施例中，該微粒包含至多約0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.40或0.5%表面活性劑。
因此，根據本發明，提供一種固體聚集用微粒含在包含添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其具有聚集至用於藥物療法之集結粒之改良的聚集。非限制性添加劑之實例包括檸檬酸三乙酯、苄醇、聚乙二醇、N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)、2-吡咯啶酮、DMSO、三乙酸甘油酯(triacetin)、乙酸苄酯、苯甲酸苄酯、檸檬酸乙醯基三丁酯、癸二酸二丁酯、二甲基鄰苯二甲酸酯、O-乙醯基檸檬酸三丁酯、乙醇、甲醇、聚山梨醇酯80、乙酸乙酯、碳酸丙二酯、乙酸異丙酯、乙酸甲酯、甲基乙基酮、乳酸丁酯及異戊酸。
本發明之微粒可用於在至少兩個月、三個月、四個月、五個月或六個月或更多個月的時期內以維持至少對於待治療的疾病有效之眼睛中濃度之方式受控式投與活性化合物至眼睛。在一個實施例中，微粒提供線性之受控式釋放。在另一個實施例中，釋放不係線性的；然而，甚至在指定時間段內之最低釋放濃度係在治療有效劑量或高於治療有效劑量。在一個實施例中，此係藉由包含至少乳酸、乙醇酸、環氧丙烷或環氧乙烷之部分之微粒來達成。在一個特定實施例中，該微粒包含具有或不具有共價連接或混合的聚乙二醇之PLGA、PLA或PGA。例如，該微粒係PLGA與PLGA-PEG、PEG、PLA或PLA-PEG之混合物。該微粒可係PLA與PLGA-PEG、PEG、PLGA或PLA-PEG之混合物。
在某些實施例中，本發明之前藥係以微粒或奈米粒子遞送，該微粒或奈米粒子係兩種聚合物(例如(i) 如本文所述的PLGA聚合物或PLA聚合物及(ii) PLGA-PEG或PLA-PEG共聚物)之摻合物。在另一個實施例中，該微粒或奈米粒子係三種聚合物(諸如(例如) (i) PLGA聚合物；(ii) PLA聚合物；及(iii) PLGA-PEG或PLA-PEG之共聚物)之摻合物。在另一個實施例中，該微粒或奈米粒子係(i) PLA聚合物；(ii) PLGA聚合物；(iii) 具有不同於(ii)中的PLGA之丙交酯單體與乙交酯單體比之PLGA聚合物；及(iv) PLGA-PEG或PLA-PEG共聚物之摻合物。可使用PLGA中之任何丙交酯與乙交酯比來達成所需治療效應。在某些例示性非限制性實施例中，如所述的聚合物摻合物中之PLA與PLGA(以重量計)比為77/22、69/30、49/50、54/45、59/40、64/35、69/30、74/25、79/20、84/15、89/10、94/5或99/1。
在某些實施例中， (i) PLA (ii) PLGA (iii) 具有不同於(ii)中的PLGA之丙交酯單體與乙交酯單體比的PLGA之三種聚合物之摻合物，其中該比為74/20/5(以重量計)、69/20/10(以重量計)、69/25/5(以重量計)或64/20/15(以重量計)。在某些實施例中，(ii)中的PLGA之丙交酯與乙交酯比為85/15、75/25或50/50。在某些實施例中，(iii)中的PLGA之丙交酯與乙交酯比為85/15、75/25或50/50。
在某些態樣中，可以PLGA或PLA及PEG-PLGA之摻合物遞送藥物，包括但不限於(i) PLGA+約1重量% PEG-PLGA或(ii) PLA+約1重量% PEG-PLGA。在某些態樣中，藥物可以(iii) PLGA/PLA+約1重量% PEG-PLGA之摻合物遞送。在某些實施例中，PLA、PLGA或PLA/PGA與PLGA-PEG之摻合物大致包含約0.5重量%至約10重量%之PEG-PLGA、約0.5重量%至約5重量%之PEG-PLGA、約0.5重量%至約4重量%之PEG-PLGA、約0.5重量%至約3重量%之PEG-PLGA、約1.0重量%至約3.0重量%之PEG-PLGA、約0.1%至約10%之PEG-PLGA、約0.1%至約5%之PEG-PLGA、約0.1%至約1% PEG-PLGA、或約0.1%至約2% PEG-PLGA。
在某些非限制性實施例中，如所述的兩種聚合物摻合物中PLGA與PEG-PLGA比(以重量百分比計)係在約40/1、45/1、50/1、55/1、60/1、65/1、70/1、75/1、80/1、85/1、90/1、95/1、96/1、97/1、98/1、99/1之範圍內或在其等之範圍之間。PLGA可經酸或酯封端。在非限制性態樣中，可以PLGA75:25 4A+約1% PEG-PLGA50:50；PLGA85:15 5A+約1% PEG-PLGA5050；PLGA75:25 6E+約1% PEG-PLGA50:50；或PLGA50:50 2A+約1% PEG-PLGA50:50之兩種聚合物摻合物遞送藥物。
在某些非限制性實施例中，如所述的聚合物摻合物中之PLA/PLGA-PEG比(以重量百分比計)係在約40/1、45/1、50/1、55/1、60/1、65/1、70/1、75/1、80/1、85/1、90/1、95/1、96/1、97/1、98/1、99/1之範圍內或在其等之範圍之間。PLA可經酸封端或酯封端。在某些態樣中，該PLA係PLA 4.5A。在非限制性態樣中，該藥物係以PLA 4.5A+1% PEG-PLGA之摻合物遞送。
在非限制性實施例中，PEG-PLGA之PEG片段可具有例如至少約1 kDa、2 kDa、3 kDa、4 kDa、5 kDa、6 kDa、7 kDa、8 kDa、9 kDa或10 kDa或介於其之間，且通常不大於10 kDa、15 kDa、20 kDa或50 kDa，或在一些實施例中為6 kDa、7 kDa、8 kDa或9kDa之分子量。在某些實施例中，PEG-PLGA之PEG片段具有在約3 kDa與約7 kDa之間或在約2 kDa與約7 kDa之間之分子量。PEG-PLGA之PLGA片段之非限制性實例為PLGA50:50、PLGA75:25或PLGA85:15。在一個實施例中，PEG-PLGA片段為PEG (5 kDa)-PLGA50:50。
當藥物以PLGA+PEG-PLGA之摻合物遞送時，可使用PLGA或PLGA-PEG中之任何丙交酯與乙交酯比來達成所需治療效應。PLGA或PLGA-PEG中丙交酯/乙交酯比之非限制性例示性實施例係在約5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10或95/5之範圍內或在其等之範圍之間。在一個實施例中，PLGA係嵌段共聚物，例如，二嵌段、三嵌段、多嵌段或星形嵌段。在一個實施例中，PLGA係無規共聚物。在某些態樣中，PLGA係PLGA75:25 4A；PLGA85:15 5A；PLGA75:25 6E；或PLGA50:50 2A。
在另一個實施例中，該微粒包含聚環氧乙烷(PEO)或聚環氧丙烷(PPO)。在某些態樣中，該等微粒之聚合物可係無規、嵌段、二嵌段、三嵌段或多嵌段共聚物(例如，聚丙交酯、聚丙交酯-共聚-乙交酯、聚乙交酯或普洛尼克(Pluronic))。為注射至眼睛中，該聚合物係醫藥上可接受的並通常係可生物降解的，因此不必將其去除。
在本發明之一個態樣中，提供一種用於眼部注射至眼睛玻璃體腔中之醫藥上可接受之套組，其包括 (a) 在小瓶中的包含至少一種可生物降解之聚合物、表面活性劑及治療劑之凍乾的經溫和表面處理之微粒； (b) 稀釋劑； (c) 包括鎖定在適當位置以產生真空之柱塞之真空壓力注射器；及 (d) 連接真空注射器(c)及小瓶(a)之轉接子。
在一個實施例中，該稀釋劑包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑。在一個實施例中，真空注射器(c)係包含柱塞之60 mL VacLok注射器(如圖15中所說明)。在一個實施例中，該稀釋劑係在小瓶中。在另一個實施例中，該稀釋劑係在注射器中。
在本發明之一個態樣中，用於製備會導致活體內聚集集結粒之微粒懸浮液之改良的方法可與描述於U.S.S.N.15/349,985、PCT/US16/61706、U.S.S.N.15/976,847、PCT/US18/32167及PCT/US2019/028803中之所選擇的用於形成聚集微粒之方法(及其所得的材料)組合使用。例如，方法包括提供固體聚集用微粒含在包含添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等微粒包含至少一種可生物降解之聚合物，具有實芯，包含治療劑，具有已在溫和條件下於可視需要在或小於約18℃之溫度下處理以去除表面活性劑或部分去除表面活性劑之改性表面，小到足以進行活體內注射，及能夠活體內聚集以活體內形成至少500 μm之至少一個集結粒以提供活體內持續藥物遞送至少三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月或以上。在某些實施例中，提供活體內持續藥物遞送長達一年。固體聚集用微粒適用於例如玻璃體內注射、植入物(包括眼部植入物)、眼周遞送、或眼睛外部之活體內遞送。在某些實施例中，該治療劑係如本文所述的前藥。
舉例來說，本發明包括一種用於製備表面改性固體聚集用微粒懸浮液之方法，該等懸浮液提供活體內聚集以形成集結粒之微粒，該方法包括： A. 製備包含一或多種可生物降解之聚合物之微粒之第一步驟，其藉由將聚合物及治療劑溶解或分散在一或多種溶劑中以形成聚合物及治療劑溶液或分散液，將該聚合物及治療劑溶液或懸浮液與包含表面活性劑之水相混合以產生溶劑負載之微粒，並然後去除該(等)溶劑以產生包含治療劑、聚合物及表面活性劑之聚合物微粒；及 B. 溫和處理步驟(i)之微粒之表面之第二步驟，其在約18、15、10、8或5℃或低於其之溫度下用會去除或部分去除表面活性劑、表面聚合物或表面寡聚物之試劑以不會顯著產生內部孔之方式視需要長達約1、2、3、4、5、10、30、40、50、60、70、80、90 100、11、120或140分鐘； C. 用包含賦形劑(視需要甘露醇)之溶液洗滌該等微粒； D. 分離並凍乾該等經表面處理之微粒； E. 將該等經表面處理之微粒再懸浮於包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之適宜稀釋劑中； F. 視需要，藉由使顆粒進行選自1)真空處理；2)超音波處理；及3)渦旋之至少一種製程而進一步改良該等顆粒之聚集潛力。
在一個實施例中，步驟(F)包括真空處理及渦旋。
在一個實施例中，該方法亦包括在步驟(C)之前的連續離心。
在另一個非限制性實施例中，一種用於製備包含微粒及封裝在該微粒中之醫藥活性化合物之懸浮液之方法及其所得的材料，該方法包括： (a) 製備包含以下之溶液或懸浮液(有機相)：(i) PLGA或PLA或PLA及PLGA、(ii) PLGA-PEG或PLA-PEG (iii) 醫藥活性化合物(例如，如本文所述)及(iv) 一或多種有機溶劑； (b) 藉由將有機相添加至水相中並將其等混合直至顆粒形成(例如在約3,000至約10,000 rpm下持續約1至約30分鐘)，製備含在聚乙烯醇(PVA)水溶液中之乳液(水相)； (c) 根據需要使用已知技術去除其他溶劑； (d) 離心或引起負載有醫藥活性化合物或其前藥之微粒沉降； (e) 視需要去除其他溶劑及/或用水洗滌負載有醫藥活性化合物或其前藥之微粒； (f) 過濾負載有醫藥活性化合物或其前藥之微粒以去除大於所需尺寸之聚集物或顆粒； (g) 視需要凍乾包含醫藥活性化合物之微粒並將該微粒呈乾燥粉末以維持安定性長達約6、8、10、12、20、22或24個月或以上之方式儲存； (h) 將該等經表面處理之微粒再懸浮於包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之適宜稀釋劑中； (i) 視需要，藉由使顆粒經受選自1)真空處理；2)超音波處理；及3)渦旋之至少一種製程而進一步改良該等顆粒之聚集潛力。
在一個實施例中，步驟(e)包括用包含糖(視需要甘露醇)之溶液洗滌負載醫藥活性化合物或前藥之微粒。
在一個實施例中，該用於懸浮顆粒之稀釋劑係ProVisc。在一個實施例中，該用於懸浮顆粒之稀釋劑係透明質酸鈉。在一個實施例中，該用於懸浮顆粒之稀釋劑係透明質酸。在一些實施例中，該等微粒係經稀釋約10倍至約40倍、約15倍至約35倍或約20倍至約25倍。在一些實施例中，用於懸浮顆粒之稀釋劑係10X稀釋的ProVisc (0.1% HA含於PBS中)溶液、20X稀釋的ProVisc (0.05% HA含於PBS中)溶液、或40X稀釋的ProVisc (0.025% HA含於PBS中)溶液。在一些實施例中，該等顆粒係以至少約100 mg/mL、200 mg/mL、300 mg/mL、400 mg/mL或500 mg/mL之濃度懸浮於稀釋劑中。
在一個實施例中，該添加劑係苄醇。在一個實施例中，該添加劑係檸檬酸三乙酯。在一個實施例中，該添加劑係選自聚乙二醇、N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)、2-吡咯啶酮及DMSO。在一個實施例中，該添加劑係選自三乙酸甘油酯、乙酸苄酯、苯甲酸苄酯及檸檬酸乙醯基三丁酯。在一個實施例中，該添加劑係選自癸二酸二丁酯、二甲基鄰苯二甲酸酯、O-乙醯基檸檬酸三丁酯、乙醇及甲醇。在一個實施例中，該添加劑係選自聚山梨醇酯80、乙酸乙酯、碳酸丙二酯及乙酸異丙酯。在一個實施例中，該添加劑係選自乙酸甲酯、甲基乙基酮、乳酸丁酯及異戊酸。
在某些實施例中，步驟(h)中的微粒係再懸浮於包含苄醇之ProVisc中。在某些實施例中，步驟(h)中的微粒係再懸浮於包含檸檬酸三乙酯之ProVisc中。在某些實施例中，步驟(h)中的微粒係再懸浮於包含苄醇之透明質酸鈉中。在某些實施例中，步驟(h)中的微粒係再懸浮於包含檸檬酸三乙酯之透明質酸鈉中。在某些實施例中，步驟(h)中的微粒係再懸浮於包含苄醇之透明質酸中。在某些實施例中，步驟(h)中的微粒係再懸浮於包含檸檬酸三乙酯之透明質酸中。
在某些實施例中，該稀釋劑大致包含約0.01重量%至約10重量%之添加劑、約0.01重量%至約0.1重量%之添加劑、約0.05重量%至約0.5重量%之添加劑、約0.1重量%至約1.0重量%之添加劑、約0.1重量%至約10重量%之添加劑、約0.5重量%至約5重量%之添加劑、約0.5重量%至約4重量%之添加劑、約0.5重量%至約3重量%之添加劑、約0.5重量%至約2.0重量%之添加劑、約0.1重量%至約0.5重量%之添加劑、約0.1重量%至約0.25重量%之添加劑、約0.2重量%至約2重量%之添加劑、或約0.01重量%至約0.05重量%之添加劑。
在一個實施例中，一種用於製備改良的微粒懸浮液之方法包括將凍乾的微粒懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並在約小於約500、400、300、200、150、100、75、50、40、35、34、33、32、31、30、29、28或25托之壓力下歷時一段適宜長的時間以實質上去除附著至顆粒之空氣，在一些實施例中此舉可長達3、5、8、10、20、30、40、50、60、70、80或90分鐘或長達2、3、4、5、或6、10、15或24小時或以上。在一個實施例中，用尺寸多至為至少10、20、30或60 mL之VacLock注射器實施真空處理。
在某些非限制性實施例中，將該等微粒以小於40托之強度抽真空約3、5、8、10、20、30、45、60、75或90分鐘。在某些非限制性實施例中，將該等微粒以小於40托之強度抽真空約1至90分鐘、約1至60分鐘、約1至45分鐘、約1至30分鐘、約1至15分鐘、或約1至5分鐘。III . 術語
儘管本文採用特定術語，但其等僅在一般性及描述性意義上使用而不是出於限制之目的。除非另有定義，否則本文所用的所有技術及科學術語具有與熟習該當前描述的標的所屬技術者通常所瞭解相同的含義。
使用標準命名法描述化合物。除非另有定義，否則本文所用的所有技術及科學術語具有與熟習本發明所屬技術者通常所瞭解相同的含義。
術語「一」及「一個」不表示量限制，而是表示存在至少一個所引用的條目。
除非本文另有說明，否則數值範圍的列舉僅旨在用作分別指落在該範圍內的每個單獨值的簡寫方法，並每個單獨值係如同其經單獨引述於本文中般併入本說明書中。所有範圍的端點均包含在該範圍內並可獨立組合。除非本文另有說明或與上下文明顯矛盾，否則本文所述的所有方法可以適宜順序進行。除非另有聲明，否則使用實例或例示性語言(例如，「諸如」)僅旨在更佳地說明本發明而不對本發明範疇構成限制。
術語「載劑」係指稀釋劑、賦形劑或媒劑。
「劑型」意指包含經表面處理之微粒及治療活性化合物之組合物之投藥單位。劑型之實例包括注射液、懸浮液、液體、乳液、植入劑、顆粒、球劑、霜劑、軟膏、可吸入形式、經皮形式、頰形式、舌下形式、局部形式、凝膠形式、黏膜形式及類似者。「劑型」亦可包括例如含在載劑中之包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒。
術語「微粒」意指尺寸以微米(μm)測得的顆粒。通常，微粒之平均直徑為約1 μm至100 μm。在一些實施例中，微粒之平均直徑為約1 μm至60 μm，例如，約1 μm至40 μm；約10 μm至40 μm；約20 μm至40 μm；約25 μm至40 μm；約25 µm至約30 µm；約20 μm至35 μm。例如，微粒之平均直徑可為20 μm至40 μm，及在某些實施例中，為20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33。如本文所用，術語「微球」意指實質上球形微粒。
「患者」或「宿主」或「個體」通常係人類，然而，更一般而言可係哺乳動物。在一個替代實施例中，其可指例如牛、羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、鳥及類似者。除非另有說明，否則個體係人類。
當用於描述微粒之表面改性時，術語「溫和」或「溫和地」意指相比利用其他相同條件在室溫下進行時改性(通常係從顆粒之表面(相對於內部核心)去除或部分去除表面活性劑)不嚴重，不顯著或不徹底。一般而言，本發明之固體微粒之表面改性係以不產生明顯通道或大孔之方式進行，該通道或大孔將顯著加速活體內微粒降解，但可用於軟化及減少表面之親水性以促進活體內聚集。
用於表徵經溫和表面處理之微粒的術語「固體」意指顆粒之材料結構係實質上連續的，與具有明顯通道及大孔而會非所欲地縮短生物降解時間之異質相對。
術語「超音波處理」意指使微粒懸浮液經受超音波振動或高頻聲波。
術語「渦旋」意指藉助於快速旋轉或圓周運動進行混合。
術語「添加劑」用於描述增加聚合物之塑性，降低聚合物之黏度或玻璃化轉變溫度，或部分溶解聚合物之任何試劑或溶劑。在一些實施例中，該添加劑係塑化劑。本發明添加劑之非限制性實例包括檸檬酸三乙酯、苄醇、聚乙二醇、N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)、2-吡咯啶酮、DMSO、三乙酸甘油酯、乙酸苄酯、苯甲酸苄酯、檸檬酸乙醯基三丁酯、癸二酸二丁酯、二甲基鄰苯二甲酸酯、O-乙醯基檸檬酸三丁酯、乙醇、甲醇、聚山梨醇酯80、乙酸乙酯、碳酸丙二酯、乙酸異丙酯、乙酸甲酯、甲基乙基酮、乳酸丁酯及異戊酸。
「硬度」係衡量抗變形之量度，單位為壓縮微粒聚集物成30%應變時所需要的公克力(gf)。在一個實施例中，本發明之聚集微粒展現至少約5公克力、至少10公克力、或15公克力、至少約20公克力、或至少約25公克力之硬度。
「耐久性」係顯著抵禦環境損害之能力之可檢測之提高。
「公克力」係力的度量單位(gf)，並在本申請案中用作衡量微粒硬度之量度。
如本文所用，「聚集微粒」係單個微粒之固體聚集，其中在聚集之前該等單個微粒之平均直徑係在約10 μm與約60微米之間，且更通常在約20與約40微米之間(或在約15與約40之間或在約25與約40微米之間)。本發明之聚集微粒係不同於經活體內注射已經形成之形狀之眼部植入物或其他聚合物***物，且亦不同於藉由儲積形成材料(諸如凝膠)或旨在將微粒本身以外的微粒保持在一起的其他材料保持在一起之微粒。
「透光率」係透射穿透懸浮在稀釋劑中之微粒之溶液(例如，如實例7中所述的透明質酸鹽溶液)的光的百分比。在一個實施例中，懸浮在稀釋劑中之微粒之溶液之透光率為大於約90%、大於約92%、大於約94%、大於約96%、大於98%、或大於99%。
圖1係眼睛之解剖學之標記圖像。除了眼睛的其他部分外，已標記睫狀體平坦部、角膜緣及玻璃體腔。睫狀體平坦部為約4 mm長並位於虹膜及鞏膜之交界處附近。其係扇形且與玻璃體腔相鄰。在本發明之方法中，將針注射穿透睫狀體平坦部進入至玻璃體腔中。角膜緣係角膜及鞏膜相遇之邊界。在本發明之方法中，將針注射於角膜緣後。玻璃體腔係玻璃體液佔據的空間。其包括介於晶狀體後與視神經前之間的空間。瞳孔係位於虹膜中心的孔。IV . 包含會改良顆粒聚集之添加劑之稀釋劑
在一個實施例中，該等微粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之10X ProVisc稀釋的(0.1% HA含於PBS中)溶液之稀釋劑中。在一個實施例中，該等微粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之20X稀釋的ProVisc (0.05% HA含於PBS中)之稀釋劑中。在一個實施例中，該等微粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之40X稀釋的ProVisc (0.025% HA含於PBS中)之稀釋劑中。
添加劑之非限制性實例包括檸檬酸三乙酯、苄醇、聚乙二醇、N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)、2-吡咯啶酮、DMSO、三乙酸甘油酯、乙酸苄酯、苯甲酸苄酯、檸檬酸乙醯基三丁酯、癸二酸二丁酯、二甲基鄰苯二甲酸酯、O-乙醯基檸檬酸三丁酯、乙醇、甲醇、聚山梨醇酯80、乙酸乙酯、碳酸丙二酯、乙酸異丙酯、乙酸甲酯、甲基乙基酮、乳酸丁酯及異戊酸。
在一個實施例中，該等微粒係懸浮在包含苄醇之10X ProVisc稀釋的(0.1% HA含在PBS中)溶液之稀釋劑中。在一個實施例中，該等微粒係懸浮在包含苄醇之20X稀釋的ProVisc (0.05% HA含於PBS中)之稀釋劑中。在一個實施例中，該等微粒係懸浮在包含苄醇之40X稀釋的ProVisc (0.025% HA含於PBS中)之稀釋劑中。
在一個實施例中，該等微粒係懸浮在包含檸檬酸三乙酯之10X ProVisc稀釋的(0.1% HA含於PBS中)溶液之稀釋劑中。在一個實施例中，該等微粒懸浮在包含檸檬酸三乙酯之20X稀釋的ProVisc (0.05% HA含於PBS中)之稀釋劑中。在一個實施例中，該等微粒懸浮在包含檸檬酸三乙酯之40X稀釋的ProVisc (0.025% HA含於PBS中)之稀釋劑中。
在一個實施例中，該等顆粒係以100 mg/mL、150 mg/mL、200 mg/mL、250 mg/mL、300 mg/mL、350 mg/mL、400 mg/mL、450 mg/mL或500 mg/mL之濃度懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之10X稀釋的ProVisc (0.1% HA含於PBS中)溶液中並該懸浮液具有200 mg/mL之最終濃度。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之10X稀釋的ProVisc (0.1% HA含於PBS中)溶液中並該懸浮液具有400 mg/mL之最終濃度。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之20X稀釋的ProVisc (0.05% HA含於PBS中)溶液中並該懸浮液具有200 mg/mL之最終濃度。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之20X稀釋的ProVisc (0.05% HA含於PBS中)溶液中並該懸浮液具有400 mg/mL之最終濃度。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之40X稀釋的ProVisc (0.025% HA含於PBS中)溶液中並該懸浮液具有200 mg/mL之濃度。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之40X稀釋的ProVisc (0.025% HA含於PBS中)溶液中並該懸浮液具有400 mg/mL之濃度。
在某些實施例中，該用於懸浮顆粒之稀釋劑係包含會改良顆粒聚集之添加劑之ProVisc。在一個實施例中，該用於懸浮顆粒之稀釋劑係包含會改良顆粒聚集之添加劑之透明質酸鈉。在一些實施例中，該等微粒係經稀釋約10倍至約40倍、約15倍至約35倍、或約20倍至約25倍。在一些實施例中，該用於懸浮顆粒之稀釋劑係包含添加劑之10X稀釋的ProVisc (0.1% HA含於PBS中)溶液、20X稀釋的ProVisc (0.05% HA含於PBS中)溶液、或40X稀釋的ProVisc (0.025% HA含於PBS中)溶液。在一些實施例中，該等顆粒係以至少約100 mg/mL、200 mg/mL、300 mg/mL、400 mg/mL或500 mg/mL之濃度懸浮在包含添加劑之稀釋劑中。在其他實施例中，該添加劑係苄醇。在其他實施例中，該添加劑係檸檬酸三乙酯。在一些實施例中，該稀釋劑包含超過一種添加劑，例如苄醇及檸檬酸三乙酯。
在一個實施例中，該添加劑係苄醇。在一個實施例中，該添加劑係檸檬酸三乙酯。在一個實施例中，該添加劑係選自聚乙二醇、N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)、2-吡咯啶酮及DMSO。在一個實施例中，該添加劑係選自三乙酸甘油酯、乙酸苄酯、苯甲酸苄酯及檸檬酸乙醯基三丁酯。在一個實施例中，該添加劑係選自癸二酸二丁酯、二甲基鄰苯二甲酸酯、O-乙醯基檸檬酸三丁酯、乙醇及甲醇。在一個實施例中，該添加劑係選自聚山梨醇酯80、乙酸乙酯、碳酸丙二酯及乙酸異丙酯。在一個實施例中，該添加劑係選自乙酸甲酯、甲基乙基酮、乳酸丁酯及異戊酸。
在某些實施例中，該稀釋劑大致包含約0.01重量%至約10重量%之添加劑、約0.01重量%至約0.1重量%之添加劑、約0.05重量%至約0.5重量%之添加劑、約0.1重量%至約1.0重量%之添加劑、約0.1重量%至約10重量%之添加劑、約0.5重量%至約5重量%之添加劑、約0.5重量%至約4重量%之添加劑、約0.5重量%至約3重量%之添加劑、約0.5重量%至約2.0重量%之添加劑、約0.1重量%至約0.5重量%之添加劑、約0.1重量%至約0.25重量%之添加劑、約0.2重量%至約2重量%之添加劑、或約0.01重量%至約0.05重量%之添加劑。
稀釋劑之存在量係佔藥物遞送顆粒之約0.5重量%至約95重量%之範圍內。該稀釋劑亦可係水性稀釋劑。水性稀釋劑之實例包括但不限於水性溶液或懸浮液，諸如鹽水、血漿、骨髓抽吸液、緩衝液(諸如漢克氏(Hank's)緩衝鹽溶液(HBSS))、HEPES (4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、林格氏緩衝液(Ringers buffer)、ProVisc®、稀釋的ProVisc®、經PBS稀釋之ProVisc®、Krebs緩衝液、杜貝卡氏(Dulbecco's) PBS、尋常PBS；透明質酸鈉溶液(HA，5 mg/mL含於PBS中)、模擬體液、血漿血小板濃縮物及組織培養基或包含有機溶劑之水性溶液或懸浮液。
在一個實施例中，該稀釋劑係PBS。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，5 mg/mL含於PBS中。
在一個實施例中，該稀釋劑係經水稀釋之ProVisc®。
在一個實施例中，該稀釋劑係含在PBS中之ProVisc®稀釋液。
在一個實施例中，該稀釋劑係經水5倍稀釋之ProVisc®。
在一個實施例中，該稀釋劑係含在PBS中之ProVisc® 5倍稀釋液。
在一個實施例中，該稀釋劑係經水10倍稀釋之ProVisc®。
在一個實施例中，該稀釋劑係含在PBS中之ProVisc® 10倍稀釋液。
在一個實施例中，該稀釋劑係水之ProVisc® 20倍稀釋液。
在一個實施例中，該稀釋劑係含在PBS中之ProVisc® 20倍稀釋液。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，1.25 mg/mL含在具有中性pH之等滲緩衝溶液中。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，0.625 mg/mL含在具有中性pH之等滲緩衝溶液中。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，0.1-5.0 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，0.5-4.5 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，1.0-4.0 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，1.5-3.5 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，2.0-3.0 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該稀釋劑係HA，2.5-3.0 mg/mL含在PBS中。V . 用於製備用於治療目的之經表面處理之聚集用微粒之改良的懸浮液之方法
在一個實施例中，本發明提供用於製備在活體內聚集以形成集結粒的經表面處理之聚集用微粒之懸浮液之方法。該方法包括將經溫和表面處理之微粒懸浮在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中。視需要，亦對該懸浮液進行選自1)真空處理及2)超音波處理之至少一種製程。
因此，在一個實施例中，本發明係固體聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等經表面改性之固體聚集用微粒包含至少一種可生物降解之聚合物，具有實芯，包含治療劑，具有改性的表面，該表面已在溫和條件下於在或低於約18℃之溫度下進行處理以去除全部或部分表面活性劑或引起表面聚合物部分降解，足夠小以進行活體內注射，及活體內聚集以活體內形成至少500 μm之至少一個集結粒，其方式為提供活體內持續藥物遞送至少一、二、三、四、五、六或七個月或以上。在一個實施例中，已藉由選自真空處理及超音波處理之至少一種或多種製程來處理微粒之懸浮液以進一步改良注射時之潤濕性。該等經表面改性之固體聚集用微粒係適用於例如玻璃體內注射、植入物(包括眼部植入物)、眼周遞送、或眼睛外部之活體內遞送。
本發明進一步包括用於製備經表面改性之固體聚集用微粒之方法，該方法亦已經處理以提高潤濕性，該方法包括 A. 製備包含一或多種可生物降解之聚合物之微粒之第一步驟，其藉由將聚合物及治療劑溶解或分散在一或多種溶劑中以形成聚合物及治療劑溶液或分散液，將該聚合物及治療劑溶液或懸浮液與包含表面活性劑之水相混合，以產生溶劑負載之微粒並然後去除該(等)溶劑以產生包含治療劑、聚合物及表面活性劑之聚合物微粒；及 B. 溫和處理步驟(i)之微粒之表面之第二步驟，其在約18、15、10、8或5℃或其以下之溫度下用去除或部分去除表面活性劑、表面聚合物或表面寡聚物之試劑以不會顯著產生內部孔之方式視需要處理長達約1、2、3、4、5、10、30、40、50、60、70、80、90 100、11、120或140分鐘； C. 用包含賦形劑(視需要甘露醇)之溶液洗滌該等微粒； D. 分離並凍乾該等經表面處理之微粒； E. 將該等經表面處理之微粒再懸浮於包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之適宜稀釋劑中； F. 藉由使顆粒進行選自1)真空處理及2)超音波處理之至少一種製程而進一步改良該等顆粒之聚集潛力。
在某些實施例中，以上步驟(ii)係在低於17℃、15℃、10℃或5℃之溫度下進行。此外，步驟(iii)係視需要在低於25℃、低於17℃、15℃、10℃、8℃或5℃之溫度下進行。例如，步驟(ii)可進行少於8分鐘、少於6分鐘、少於4分鐘、少於3分鐘、少於2分鐘、或少於1分鐘。在一個實施例中，步驟(ii)係進行少於60、50、40、30、20或10分鐘。
在一個實施例中，以上步驟(ii)係進行約少於140、120、110、100、90、60、40、30、20、10、3、2或1分鐘的時間。VI . 經溫和表面處理之聚集用微粒及方法
改良的微粒懸浮液係由經溫和表面處理之固體可生物降解微粒製成，該等微粒在活體內注射後聚集成較大顆粒(集結粒)，其方式為減少較小顆粒之非所欲副作用並適於長期(例如，長達或至少三個月、長達四個月、長達五個月、長達六個月、長達七個月、長達八個月、長達九個月或更長)持續治療劑遞送。在一個實施例中，經溫和表面處理之固體可生物降解微粒係適於眼部注射，此時該等顆粒聚集以形成集結粒並因此保留在視軸外以免顯著損害視力。該等顆粒可聚集成一個或幾個集結粒。聚集物之大小取決於所注射的顆粒之質量(重量)。
本文所提供的經溫和表面處理之可生物降解之微粒區別於「支架」微粒，其係藉由細胞或組織材料可佔據的孔用於組織再生長。相反地，本發明微粒係經設計為具有足夠低的孔隙率之固體材料，因此其等可聚集以形成較大組合顆粒(其主要藉由表面侵蝕而侵蝕)來進行長期可控式藥物遞送。
本發明之經表面改性之固體聚集用微粒係適於例如玻璃體內注射、植入、眼周遞送、或眼睛外部之活體內遞送。
本發明之經表面改性之固體聚集用微粒亦適於全身性、非經腸、跨膜、經皮、頰、皮下、內皮、腹腔內、關節內、軟骨內、腦內、冠狀內、牙齒、椎間盤內、肌肉內、腫瘤內、局部、或可用於活體內遞送的任何方式之***遞送。
因此，在一個實施例中，本發明係一種經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其包含含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之至少一種可生物降解之聚合物，其中該經表面改性之固體聚集用微粒具有實芯，包含治療劑，具有已在溫和條件下於在或低於約18℃之溫度下處理以去除或部分去除表面活性劑或引起表面聚合物部分降解之改性表面，小到足以進行活體內注射，及活體內聚集以活體內形成至少500 μm之至少一個集結粒，其聚集方式為提供活體內持續藥物遞送至少一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、十二個月或以上。該等經表面改性之的固體聚集用微粒係適用於例如玻璃體內注射、植入物(包括眼部植入物)、眼周遞送、或眼睛外部之活體內遞送。在某些實施例中，該治療劑係如本文所述的前藥。在某些實施例中，亦藉由對微粒懸浮液進行真空或超音波處理來處理微粒以提高潤濕性。
在一些實施例中，該表面處理係在不超過5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18℃之溫度下，在約5至約18℃、約5至約16℃、約5至約15℃、約0至約10℃、約0至約8℃、或約1至約5℃、約5至約20℃、約1至約10℃、約0至約15℃、約0至約10℃、約1至約8℃、或約1至約5℃之降低的溫度下進行。此等條件中各者之每種組合均被視為獨立地揭示，如同每種組合被單獨列出般。或者，表面處理係在在或低於約10℃、8℃或5℃之溫度下進行。
表面處理之pH當然將根據處理是在鹼性、中性還是酸性條件下進行而變化。當在鹼中進行處理時，pH可在約7.5至約14之範圍內，包括不超過約8、9、10、11、12、13或14。當在酸中進行處理時，pH可在約6.5至約1之範圍內，包括不小於1、2、3、4、5、6、7或8。當在中性條件下進行時，pH通常可在約6.4或6.5至約7.4或7.5之範圍內。在一個實施例中，表面處理係在6.5至8.5、7.5至9.5、或8.5至10.5之pH下進行。
表面處理可在達成所需目的之任何pH下進行。pH之非限制性實例為約6至約8、6.5至約7.5、約1至約4；約4至約6；及6至約8。在一個實施例中，可在約8至約10之pH下進行表面處理。在一個實施例中，可在約10.0至約13.0之pH下進行表面處理。在一個實施例中，可在約10.0至約12.0之pH下進行表面處理。在一個實施例中，可在約12至約14之pH下進行表面處理。在一個實施例中，可用有機溶劑進行表面處理。在一個實施例中，可用乙醇進行表面處理。在其他各種實施例中，表面處理係在選自甲醇、乙酸乙酯及乙醇之溶劑中進行。非限制性實例係乙醇與有機鹼水溶液；乙醇及無機鹼水溶液；乙醇及氫氧化鈉；乙醇及氫氧化鉀；含在乙醇中之酸性水溶液；含在乙醇中之鹽酸水溶液；及含在乙醇中之氯化鉀水溶液。
在一個實施例中，該表面處理包括用鹼水溶液(例如氫氧化鈉)及溶劑(諸如醇(例如乙醇或甲醇)或有機溶劑(諸如DMF、DMSO或乙酸乙酯))處理微粒，如以上另作描述。更一般而言，使用氫氧化物鹼，例如，氫氧化鉀。亦可使用有機鹼。在其他實施例中，如上所述的表面處理係在酸水溶液(例如鹽酸)中進行。在一個實施例中，表面處理包括用磷酸鹽緩衝鹽水及乙醇處理微粒。
一個重要態樣係處理無論是在鹼性、中性還是酸性條件下進行均包括時間、溫度、pH劑及溶劑之組合之選擇，該選擇會導致溫和處理而不會顯著損害顆粒，其處理方式為形成孔、洞或通道。本文所述的此等條件中之各者之每種組合均被認為係獨立地揭示，如同每種組合被單獨列出般。
處理條件應簡單地溫和地處理表面，其處理方式為允許顆粒保持呈固體顆粒，可注射而不會過度聚集或結塊，並形成至少500 μm之至少一個聚集顆粒。在一個實施例中，該處理部分地去除表面活性劑。
本發明中包括的實芯之實例包括包含具有小於10%孔隙率、8%孔隙率、7%孔隙率、6%孔隙率、5%孔隙率、4%孔隙率、3%孔隙率或2%孔隙率之可生物降解之聚合物之實芯。如本文所用，孔隙率係由經表面改性之固體聚集用微粒之空隙空間與總體積比定義。
本發明之經表面改性之固體聚集用微粒提供持續遞送至少一個月、或至少兩個月、或至少三個月、或至少四個月、或至少五個月、或至少六個月、或至少七個月、或至少八個月、或至少九個月、或至少十個月、或至少十一個月、或至少十二個月。
在一個實施例中，經表面改性之固體聚集用微粒之平均直徑為10至60 μm、20至50 μm、20至40 μm、20至30 μm、25至40 μm、或25至35 μm。
此外，當活體內投與時，本發明之經表面改性之固體聚集用微粒可聚集以產生直徑為至少約300 μm、400μm、500μm、600 μm、700 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、3 mm、4 mm或5 mm之至少一個集結粒。
在一個實施例中，本發明之經表面改性之固體聚集用微粒產生活體內集結粒，該集結粒在一個一週、或五天、四天、三天、兩天或一天時間內釋放治療劑而不會突釋治療劑之超過約10%或15%之總有效負載。
在一些實施例中，藉由在幾個月(例如，一個月、兩個月、三個月、或四個月或以上)內聚集微粒之表面侵蝕，然後侵蝕聚集微粒之剩餘部分，然後在從聚集顆粒長期釋放期間從其所結合的活體內蛋白質緩慢釋放活性物質之組合來達成長期受控式藥物遞送。在另一個實施例中，微粒在至少約一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月或六個月或以上的時間內藉由表面侵蝕而實質上降解。
在另一個實施例中，本發明之經表面改性之固體聚集用微粒之藥物負載為1至40%、5至25%、或5至15% (重量/重量)。
包含於本發明之經表面改性之固體聚集用微粒中之聚合物組合物之實例包括但不限於：聚(丙交酯-共聚-乙交酯)；共價連接至聚乙二醇之聚(丙交酯-共聚-乙交酯)；混合在一起的超過一種可生物降解之聚合物或共聚物，例如，聚(丙交酯-共聚-乙交酯)及共價連接至聚乙二醇之聚(丙交酯-共聚-乙交酯)之混合物、聚(乳酸)及共價連接至聚乙二醇之聚(丙交酯-共聚-乙交酯)之混合物、或聚(乳酸)、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)及共價連接至聚乙二醇之聚(丙交酯-共聚-乙交酯)之混合物；聚(乳酸)；表面活性劑，諸如聚乙烯醇(其可係經水解之聚乙酸乙烯酯)。
在一個實施例中，該稀釋劑之經表面改性之固體聚集用微粒之濃度範圍為約50至700 mg/ml、500 mg/ml或更小、400 mg/ml或更小、300 mg/ml或更小、200 mg/ml或更小、或150 mg/ml或更小。
在一個實施例中，表面處理包括在約1至約10℃、約1至約15℃、約5至約15℃、或約0至約5℃之降低的溫度下用pH=6.6至7.4或7.5之水溶液及乙醇處理微粒。在一個實施例中，表面處理包括在約0至約10℃、約5至約8℃、或約0至約5℃之降低的溫度下用pH=6.6至7.4或7.5之水溶液及有機溶劑處理微粒。在一個實施例中，表面處理包括在約0至約10℃、約0至約8℃、或約0至約5℃之降低的溫度下用pH=1至6.6之水溶液及乙醇處理微粒。在一個實施例中，表面處理包括在約0至約18℃、約0至約16℃、約0至約15℃、約0至約10℃、約0至約8℃、或約0至約5℃之降低的溫度下用有機溶劑處理微粒。處理之降低的溫度(低於室溫，且通常低於18℃)有助於確保顆粒僅進行「溫和」表面處理。
在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包括使用去除或部分去除表面活性劑之試劑。非限制性實例包括例如彼等選自以下者：酸水溶液、磷酸鹽緩衝鹽水、水、NaOH水溶液、鹽酸水溶液、氯化鉀水溶液、醇或乙醇。
在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包括使用去除表面活性劑之試劑，該試劑包括例如選自醇，例如，乙醇；醚、丙酮、乙腈、DMSO、DMF、THF、二甲基乙醯胺、二硫化碳、氯仿、1,1-二氯乙烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、庚烷、己烷、甲醇、乙酸甲酯、甲基第三丁基醚(MTBE)、戊烷、丙醇、2-丙醇、甲苯、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、乙醯胺、哌嗪、三伸乙基二胺、二醇及CO2 之溶劑。
該會去除表面活性劑之試劑可包括鹼性緩衝溶液。此外，該會去除表面活性劑之試劑可包含選自氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂、醯胺鋰、醯胺鈉、碳酸鋇、氫氧化鋇、氫氧化鋇水合物、碳酸鈣、碳酸銫、氫氧化銫、碳酸鋰、碳酸鎂、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸鍶、氨、甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、二甲胺、二乙胺、二丙胺、二異丙胺、三甲胺、三乙胺、三丙胺、三異丙胺、苯胺、甲基苯胺、二甲基苯胺、吡啶、氮雜久洛尼定(azajulolidine)、苄胺、甲基苄胺、二甲基苄胺、DABCO、1,5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]壬-7-烯、2,6-二甲基吡啶(lutidine)、嗎啉、哌啶、哌嗪、質子-海綿、1,5,7-三氮雜雙環[4.4.0]癸-5-烯、去敏靈(tripelennamine)、氫氧化銨、三乙醇胺、乙醇胺及Trizma之鹼。
在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包括使用去除表面活性劑之試劑，例如，彼等選自以下者：酸水溶液、磷酸鹽緩衝鹽水、水、或NaOH，其在存在溶劑，諸如醇，例如乙醇、醚、丙酮、乙腈、DMSO、DMF、THF、二甲基乙醯胺、二硫化碳、氯仿、1,1-二氯乙烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、庚烷、己烷、甲醇、乙酸甲酯、甲基第三丁基醚(MTBE)、戊烷、乙醇、丙醇、2-丙醇、甲苯、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、乙醯胺、哌嗪、三伸乙基二胺、二醇及CO2 下。
在一個實施例中，去除表面活性劑之試劑可包含酸水溶液。去除表面活性劑之試劑可包含衍生自無機酸，包括但不限於鹽酸、氫溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸、硝酸及類似者；或有機酸，包括但不限於乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、麩胺酸、苯甲酸、水楊酸、甲磺酸、乙磺酸(esylic)、苯磺酸(besylic)、磺胺基、2-乙醯氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙磺酸、HOOC-(CH2 )n -COOH(其中n為0至4)及類似者之酸。
在一個實施例中，在反應條件下，去除表面活性劑之試劑不係可生物降解之聚合物之降解劑。可藉由去除表面活性劑來降低微粒之親水性。
在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包括使用會去除表面活性劑之試劑，該試劑包括選自醇(例如乙醇)、醚、丙酮、乙腈、DMSO、DMF、THF、二甲基乙醯胺、二硫化碳、氯仿、1,1-二氯乙烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、庚烷、己烷、甲醇、乙酸甲酯、甲基第三丁基醚(MTBE)、戊烷、乙醇、丙醇、2-丙醇、甲苯、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、乙醯胺、哌嗪、三乙二胺、二醇及CO2 之溶劑。在一個典型實施例中，表面處理之製程包括去除包含乙醇之表面活性劑之試劑。
製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法之封裝效率取決於微粒形成條件及治療劑之性質。在某些實施例中，封裝效率可為大於約50%、大於約75%、大於約80%、或大於約90%。
在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包含作為可生物降解之聚合物之5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5 PLGA。在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包含作為可生物降解之聚合物之50/50 PLGA。
在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包含作為可生物降解之聚合物之PLA。在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包含作為可生物降解之聚合物之PLA及PLGA。在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包含作為可生物降解之聚合物之PLA及75/25 PLGA。在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包含作為可生物降解之聚合物之PLA及50/50 PLGA。在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法包含作為可生物降解之聚合物之PLGA。
在一個實施例中，製造經表面改性之固體聚集用微粒之方法係在低於約14之pH且高於12之pH、低於12之pH且高於10之pH、低於約10之pH且高於8之pH、低於約8之pH且高於約6之pH、中性pH、低於約7之pH且高於4之pH、低於約4之pH且高於約1.0之pH下進行。
在又另一個實施例中，提供一種用於治療眼部疾病之方法，該方法包括對有此需要的宿主投與包含改善本文所述的活體內顆粒聚集及固體聚集用微粒之添加劑之懸浮液，該添加劑包含有效量之治療劑，其中該等固體聚集用微粒係被注射至眼睛中並活體內聚集以形成至少500 μm之至少一個集結粒，該集結粒可提供持續藥物遞送至少約一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、十二個月或更多個月，其遞送方式為使該集結粒實質上停留在視軸之外以免顯著損害視力。在一個實施例中，該等固體可生物降解微粒在頭24小時時間內釋放約1至約20%、約1至約15%、約1至約10%、或約5至20%，例如，至多約1、5、10、15或20%之治療劑。
在一個替代實施例中，以所投與的總重量計，未活體內聚集成較大集結粒之經表面改性之固體聚集用微粒之重量百分比為約10%或更少、7%或更少、5%或更少、或2%或更少。
在一個實施例中，該經表面改性之固體聚集用微粒不會在眼睛中引起實質性發炎。
在另一個實施例中，該經表面改性之固體聚集用微粒不會在眼睛中引起免疫反應。
在一個實施例中，與未經表面處理之微粒相比，經表面改性之固體聚集用微粒能夠在更長的時間期內釋放治療劑。
在一個實施例中，經表面改性之固體聚集用微粒相比表面改性前微粒包含更少的表面活性劑。
在一個實施例中，經表面改性之固體聚集用微粒相比表面改性前微粒更具疏水性。
在一個實施例中，如本文所述，本發明之經表面改性之微粒係用於治療醫學疾病，該疾病係青光眼、由碳酸酐酶介導之疾病、與眼內壓升高(IOP)有關之疾病或異常、由一氧化氮合成酶(NOS)介導之疾病、或需要神經保護(諸如)以再生/修復視神經之疾病。在另一個實施例中，更一般而言，所治療的疾病係過敏性結膜炎、前葡萄膜炎、白內障、濕性或乾性年齡相關黃斑變性、新生血管性年齡相關黃斑變性或糖尿病性視網膜病。
提供另一個實施例，其包括對宿主投與包含有效量之醫藥活性化合物或其醫藥上可接受之鹽之經表面處理之微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液以治療可自局部(topical/local)遞送獲益之眼部或其他疾病。該療法可經遞送至眼睛的前房或後房。在特定態樣中，投與包含有效量之醫藥活性化合物之經表面處理之微粒以治療角膜、結膜、房水、虹膜、睫狀體、晶狀體鞏膜、脈絡膜、視網膜色素上皮、神經視網膜、視神經或玻璃體液之疾病。
任何所述組合物可如本文進一步所述以任何所需投藥形式，包括經玻璃體內、基質內、前房內、眼球筋膜囊下、視網膜下、眼球後、眼球周、脈絡膜上、脈絡膜下、結膜、結膜下、鞏膜外、近後部鞏膜、角膜周、淚管注射、或藉由黏液、黏蛋白、或黏膜障壁，以立即釋放或可控式釋放方式投與至眼睛。
藉由經表面改性之固體聚集用微粒遞送之治療劑在一個實施例中係藥品或生物藥物。在一個非限制性實例中，藥品包括舒尼替尼、另一酪胺酸激酶抑制劑、抗發炎藥物、抗生素、免疫抑制劑、抗VEGF劑、抗PDGF劑、或如以下所述的其他治療劑。在一個實施例中，該酪胺酸激酶抑制劑係選自替伐辛尼(Tivosinib)、伊馬替尼(Imatinib)、吉非替尼(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib)、拉帕替尼(Lapatinib)、卡納替尼(Canertinib)、司馬沙尼(Semaxinib)、凡他拉尼(Vatalaninib)、索拉非尼(Sorafenib)、阿西替尼(Axitinib)、帕唑帕尼(Pazopanib)、達沙替尼(Dasatinib)、尼洛替尼(Nilotinib)、克唑替尼(Crizotinib)、魯索替尼(Ruxolitinib)、凡德他尼(Vandetanib)、維羅非尼(Vemurafenib)、博舒替尼(Bosutinib)、卡博替尼(Cabozantinib)、瑞格菲尼(Regorafenib)、維莫德吉(Vismodegib)、及帕納替尼(Ponatinib)。在一個實施例中，藥品係選自阿托品(Atropine)、毛果芸香鹼(Pilocarpine)、及α-硫辛酸或其醫藥上可接受之鹽。
在一個實施例中，本發明提供用於眼部療法之β-腎上腺素能拮抗劑，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
在一個實施例中，本發明提供用於眼部療法之***素或其前藥，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
在一個實施例中，本發明提供用於眼部療法之腎上腺素能促效劑，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
在一個實施例中，本發明提供用於眼部療法之碳酸酐酶抑制劑，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
在一個實施例中，本發明提供用於眼部療法之擬副交感神經藥，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
在一個實施例中，本發明提供用於眼部療法之雙重抗-VEGF/抗-PDGF劑，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
在一個實施例中，本發明提供用於眼部療法之環利尿劑，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
在一個實施例中，本發明提供用於眼部療法之Rho激酶(ROCK)抑制劑，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
在一個實施例中，本發明提供如本文所述的用於眼部療法之前藥，其可從經表面處理之微粒釋放，同時在一段延長的時間內維持功效諸如長達至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個月。
揭示治療或預防眼部疾病(包括青光眼、近視、老花眼、由碳酸酐酶介導之疾病、與眼內壓升高(IOP)有關之疾病或異常、由一氧化氮合成酶(NOS)介導之疾病、需要神經保護(諸如)以再生/修復視神經之疾病、過敏性結膜炎、前葡萄膜炎、白內障、乾性或濕性年齡相關黃斑變性(AMD)或糖尿病性視網膜病)之方法，該方法包括對需要此種治療的宿主(包括人類)投與治療有效量之包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒。在一個實施例中，該宿主係人類。
在另一個實施例中，提供有效量之包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒以降低由青光眼引起的眼內壓(IOP)。在一個替代實施例中，包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒可用於降低眼內壓(IOP)，無論其是否與青光眼有關。
在一個實施例中，該疾病係與由潛在或先前不良的患者對青光眼治療之順服性引起的眼內壓升高(IOP)有關。在又另一個實施例中，該疾病係與藉由神經元一氧化氮合成酶(NOS)之潛在或不良神經保護有關。因此，包含本文所提供的醫藥活性化合物之經表面處理之微粒可藉由以適宜方式投與有效量至有此需要的宿主(通常是人類)來阻遏或抑制宿主之青光眼。
亦揭示提供用於治療與青光眼、眼內壓升高(IOP)、由高眼內壓(IOP)或神經元一氧化氮合成酶(NOS)引起的視神經損傷有關之疾病之方法，該等方法包括投與有效量之包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒。
在本發明之一個態樣中，例如，為方便遞送及/或持續釋放遞送，將有效量之如本文所述的醫藥活性化合物併入至經表面處理之微粒中。微米級材料之使用提供修改基本物理特性(諸如溶解度、擴散性及藥物釋放特性)之能力。此等微米級試劑可提供更有效及/或更方便之投藥途徑，降低治療毒性，延長產品壽命，及最終降低醫療護理成本。作為治療性遞送系統，經表面處理之微粒可允許靶向遞送及持續釋放。
在本發明之另一個態樣中，經表面處理之微粒係塗佈有表面劑。本發明進一步包括一種製備包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒之方法。本發明進一步包括使用包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒以治療患者之方法。
在一個實施例中，藉由形成乳液並如(例如) US 8,916,196中所述使用珠粒管柱獲得包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒。
在一個實施例中，藉由使用振動網或微篩獲得包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒。
在一個實施例中，藉由使用漿液篩分獲得包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒。
本文所述的製備微球之方法係適合於使所得顆粒之尺寸分佈變窄之製造方法。在一個實施例中，藉由利用聲激發(振動)經由噴嘴噴灑材料以產生均勻液滴之方法來製造顆粒。亦可經由噴嘴利用載劑流以允許進一步控制液滴尺寸。此類方法詳細描述於以下：Berkland, C.、K. Kim等人(2001)。「Fabrication of PLG microspheres with precisely controlled and monodisperse size distributions。」J Control Release 73(1): 59-74；Berkland, C.、M. King等人(2002)。「Precise control of PLG microsphere size provides enhanced control of drug release rate。」J Control Release 82(1): 137-147；Berkland, C.、E. Pollauf等人(2004)。「Uniform double-walled polymer microspheres of controllable shell thickness。」J Control Release 96(1): 101-111。
在另一個實施例中，可藉由利用所需尺寸之微篩之方法來製造均勻尺寸之微粒。微篩可在生產期間直接使用以影響所形成的微粒之尺寸，或替代地在生產後純化微粒至均勻尺寸。微篩可係機械性(無機材料)或生物性(有機材料，諸如膜)。一種該方法詳細描述於美國專利8,100,348中。
在一個實施例中，經表面處理之微粒包含治療活性化合物並具有25＜Dv50＜40 µm、Dv90＜45 µm之粒徑。
在一個實施例中，經表面處理之微粒包含治療活性化合物並具有Dv10＞10 µm之粒徑。
在一個實施例中，經表面處理之微粒包含治療活性化合物並僅具有醫藥上可接受之殘留溶劑。
在一個實施例中，經表面處理之微粒包含治療活性化合物並在第14天提供大於80%之總釋放。
在一個實施例中，經表面處理之微粒包含治療活性劑並具有200 mg/ml之規則壁的26-、27-、28-、29-或30號針之可注射性(不會堵塞注射器)。
在一個實施例中，經表面處理之微粒包含治療活性劑並具有200 mg/ml之薄壁的26-、27-、28-、29-或30號針之可注射性(不會堵塞注射器)。
在一個實施例中，經表面處理之微粒包含舒尼替尼，具有25 ＜Dv50＜ 40 µm、Dv90 ＜45 µm之粒徑。
在一個實施例中，包含舒尼替尼之經表面處理之微粒具有Dv10＞10 µm之粒徑。
在一個實施例中，包含舒尼替尼之經表面處理之微粒僅具有醫藥上可接受之殘留溶劑。
在一個實施例中，包含舒尼替尼之經表面處理之微粒在第14天提供大於80%之總釋放。
在一個實施例中，包含舒尼替尼之經表面處理之微粒具有200 mg/ml之規則壁的26-、27-、28-、29-或30號針之可注射性(不會堵塞注射器)。
在一個實施例中，包含舒尼替尼之經表面處理之微粒具有200 mg/ml之薄壁的26-、27-、28-、29-或30號針之可注射性(不會堵塞注射器)。
在一個實施例中，包含舒尼替尼之經表面處理之微粒具有小於0.02 EU/mg之內毒素水平。
在一個實施例中，包含舒尼替尼之經表面處理之微粒具有小於10 CFU/g之生物負荷水平。VII . 洗滌期間賦形劑之添加
在一個實施例中，用於製備在注射之前改良的微粒懸浮液之方法係通常在凍乾之前藉由洗滌來添加至少一種賦形劑，從而減少附著至顆粒之空氣量。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在糖水溶液中，該糖水溶液係約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%糖。在一個實施例中，該糖係蔗糖。在一個實施例中，該糖係甘露醇。在一個實施例中，該糖係海藻糖。在一個實施例中，該糖係葡萄糖。在一個實施例中，該糖係選自***糖(arabinose)、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖、木糖、D-木糖、葡萄糖、果糖、核糖、D-核糖、半乳糖、右旋糖、右旋糖酐、乳糖、麥芽糊精、麥芽糖、甘油、赤藻糖醇、蘇糖醇、***糖醇、木糖醇、核糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、果糖醇、艾杜糖醇(iditol)、肌醇、勒米糖醇(volemitol)、異麥芽酮糖醇(isomalt)、麥芽糖醇、乳糖醇、麥芽三糖醇、麥芽四糖醇及聚乙二醇。在一個替代實施例中，該糖係選自阿斯巴甜(aspartame)、糖精、甜葉菊(stevia)、乙醯磺胺酸鉀、愛德萬甜(advantame)、阿力甜(alitame)、紐甜(neotame)及蔗糖素。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在糖水溶液中，該糖水溶液係約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%蔗糖。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在1%蔗糖溶液中。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在10%蔗糖溶液中。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在糖水溶液中，該糖水溶液係約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%甘露醇。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在1%甘露醇溶液中。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在10%甘露醇溶液中。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在1%海藻糖溶液中。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在10%海藻糖溶液中。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在糖水溶液中，該糖水溶液係約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%海藻糖。在一個替代實施例中，該等顆粒係懸浮在小表面活性劑分子(包括但不限於Tween 20或Tween 80)中。在一個實施例中，顆粒係懸浮在水溶液中，並經超音波處理，然後在-80℃乙醇中快速冷凍並凍乾過夜。在一個替代實施例中，該等顆粒係在-80℃甲醇或異丙醇中快速冷凍。VIII . 真空處理
在一個實施例中，用於在注射之前提供改良的微粒懸浮液之方法包括真空處理，其中該等顆粒係懸浮在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中並經過負壓以去除微粒表面上非所欲的空氣。負壓之非限制性實例可為約或小於300、200、100、150、145、143、90、89、88、87、86、85、75、50、35、34、33、32、31或30托，持續任何適宜時間以達成所需結果，包括但不限於120、110、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10、8、5或3分鐘。
在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約143托之強度經歷真空處理約至少10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘、70分鐘、80分鐘、90分鐘、100分鐘或120分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以至少約90、89、88、87、86或85托之強度經歷真空處理至少約10分鐘、20分鐘、30分鐘或40分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以至少約87托之強度經歷真空處理至少約10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、60分鐘、90分鐘或120分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以至少約35、34、33、32、31或30托之強度經歷真空處理至少5分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以至少約35、34、33、32、31或30托之強度經歷真空處理至少8分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以至少約35、34、33、32、31或30托之強度經歷真空處理至少10分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以至少約35、34、33、32、31或30托之強度經歷真空處理至少20分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以至少約35、34、33、32、31或30托之強度經歷真空處理至少30分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以至少約35、34、33、32、31或30托之強度經歷真空處理至少40分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並經歷30托至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85或90分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約35托之強度經歷真空處理至少90分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約35托之強度經歷真空處理至少60分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約35托之強度經歷真空處理至少30分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約35托之強度經歷真空處理至少15分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約35托之強度經歷真空處理至少5分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約32托之強度經歷真空處理至少30分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約32托之強度經歷真空處理至少15分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約32托之強度經歷真空處理至少5分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約30托之強度經歷真空處理至少30分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約30托之強度經歷真空處理至少15分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以约30托之強度經歷真空處理至少5分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以小於30托之強度經歷真空處理至少30分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以小於30托之強度經歷真空處理至少15分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以小於30托之強度經歷真空處理至少5分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約20托之強度經歷真空處理至少30分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約20托之強度經歷真空處理至少15分鐘。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以約20托之強度經歷真空處理至少5分鐘。
在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在小瓶內的包含添加劑之稀釋劑中，該小瓶係連接至小瓶轉接子，該小瓶轉接子係進一步連接至包含柱塞之60 mL VacLok注射器(如圖15中所顯示)，其中該柱塞係被拉至50 mL標記並鎖定以產生約30托之負壓並保持該壓力至少約3、5、8、10、15、20、25、30或35分鐘。在一個替代實施例中，該等顆粒係懸浮在小瓶內的包含添加劑之稀釋劑中，該小瓶係連接至小瓶轉接子，該小瓶轉接子係進一步連接至含有柱塞之60 mL VacLok注射器，其中該柱塞係被拉至45 mL標記，鎖定，並保持至少約3、5、8、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85或90分鐘。在一個替代實施例中，該等顆粒係懸浮在小瓶內的包含添加劑之稀釋劑中，該小瓶係連接至小瓶轉接子，該小瓶轉接子係進一步連接至含有柱塞之60 mL VacLok注射器，其中該柱塞係被拉至40 mL標記，鎖定，並保持該壓力至少約3、5、8、10、15、20、25、30或35分鐘。在一個替代實施例中，該等顆粒係懸浮在小瓶內的包含添加劑之稀釋劑中，該小瓶係連接至小瓶轉接子，該小瓶轉接子係進一步連接至含有柱塞之60 mL VacLok注射器，其中該柱塞係被拉至35 mL標記，鎖定，並保持約至少3、5、8、10、15、20、25、30或35分鐘。在一個替代實施例中，該等顆粒係懸浮在小瓶內的包含添加劑之稀釋劑中，該小瓶係連接至小瓶轉接子，該小瓶轉接子係進一步連接至含有柱塞之60 mL VacLok注射器，其中該柱塞係被拉至30 mL標記，鎖定，並保持至少約3、5、8、10、15、20、25、30或35分鐘。在一個替代實施例中，該等顆粒係懸浮在小瓶內的包含添加劑之稀釋劑中，該小瓶係連接至小瓶轉接子，該小瓶轉接子係進一步連接至含有柱塞之60 mL VacLok注射器，其中該柱塞係被拉至25 mL標記，鎖定，並保持至少約3、5、8、10、15、20、25、30或35分鐘。
在某些實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並將該懸浮液暴露於小於40托之壓力約90分鐘至1分鐘、約60分鐘至1分鐘、約45分鐘至1分鐘、約30分鐘至1分鐘、約15分鐘至1分鐘、或約5分鐘至1分鐘。
在某些實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並將該懸浮液暴露於小於30托之壓力約90分鐘至1分鐘、約60分鐘至1分鐘、約45分鐘至1分鐘、約30分鐘至1分鐘、約15分鐘至1分鐘、或約5分鐘至1分鐘。
在某些實施例中，該等凍乾微粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並在活體內注射之前至少1小時、活體內注射之前至少45分鐘、活體內注射之前至少30分鐘、活體內注射之前25分鐘、活體內注射之前至少20分鐘、活體內注射之前至少15分鐘、活體內注射之前至少10分鐘、或活體內注射之前至少5分鐘經歷真空處理。在一個實施例中，在活體內注射之前立即實施真空。在一個實施例中，該等顆粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並以小於35托之強度抽真空少於30分鐘並立即進行活體內注射。在一個替代實施例中，該等顆粒係以小於35托之強度抽真空少於20分鐘並立即進行活體內注射。在一個替代實施例中，該等顆粒係以小於35托之強度抽真空少於15分鐘並立即進行活體內注射。在一個替代實施例中，該等顆粒係以小於35托之強度抽真空少於10分鐘並立即進行活體內注射。IX . 超音波處理
在一個替代實施例中，用於提供在注射之前改良的微粒懸浮液之方法係超音波處理，其中該等顆粒係懸浮在包含會改良顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中並將該微粒懸浮液超音波處理至少30分鐘、至少25分鐘、至少20分鐘、至少15分鐘、至少10分鐘、至少8分鐘、至少5分鐘或至少3分鐘。在一個實施例中，該等顆粒懸浮液係以40 kHz之頻率進行超音波處理。在一個實施例中，該等顆粒係以100 mg/mL、150 mg/mL、200 mg/mL、250 mg/mL、300 mg/mL、350 mg/mL、400 mg/mL、450 mg/mL或500 mg/mL之濃度懸浮在稀釋劑中。在一個實施例中，該稀釋劑係透明質酸。在一個替代實施例中，該稀釋劑係選自透明質酸、羥丙基甲基纖維素、硫酸軟骨素、或選自透明質酸、羥丙基甲基纖維素及硫酸軟骨素之至少兩種稀釋劑之摻合物。在一個替代實施例中，該稀釋劑係選自金合歡膠(acacia)、黃蓍膠、海藻酸、角叉菜膠、刺槐豆膠、吉蘭糖膠(gellan gum)、瓜爾膠、明膠、澱粉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、Carbopol®均聚物(與烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇交聯之丙烯酸)、及Carbopol®共聚物(丙烯酸及與烯丙基季戊四醇交聯之丙烯酸C10 -C30 烷基酯)。
在某些實施例中，該等凍乾微粒係懸浮在包含添加劑之稀釋劑中並在活體內注射之前至少1小時、活體內注射之前至少45分鐘、活體內注射之前至少30分鐘、活體內注射之前25分鐘、活體內注射之前至少20分鐘、活體內注射之前至少15分鐘、活體內注射之前至少10分鐘、或活體內注射之前至少5分鐘經歷超音波處理。在一個實施例中，在活體內注射之前立即實施真空。
在某些實施例中，可在微粒之分離及復水之後使用真空處理及超音波處理之組合。X . 可生物降解之聚合物
經表面處理之微粒可包含一或多種可生物降解之聚合物或共聚物。該等聚合物應係生物相容的，因為其等可被投與患者而無非所欲的不利效應。可生物降解之聚合物係本領域技術人員熟知的並係大量文獻及專利之主題。可選擇可生物降解之聚合物或聚合物之組合，以提供微粒之標靶特性，包括疏水及親水品質之適宜混合、活體內半衰期及降解動力學、與待遞送的治療劑之相容性、在注射部位之適宜行為等。
例如，熟習此項技術者應明瞭，藉由用具有不同比之疏水，親水及生物可降解特性之多種聚合物製造微粒，可出於標靶用途來設計微粒之性質。舉例來說，用90% PLGA及10% PEG製造的微粒比用95% PLGA及5% PEG製造的微粒更具親水性。此外，一般而言，用較高含量之難生物降解之聚合物製造的微粒降解得更慢。此種自由度允許將本發明之微粒定制為所需水平之溶解度、藥劑釋放速率及降解速率。
在某些實施例中，該微粒包含聚(α-羥基酸)。聚(α-羥基酸)之實例包括聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚(D,L-丙交酯-共聚-乙交酯) (PLGA)及聚D,L-乳酸(PDLLA)、聚酯、聚(ε-己內酯)、聚(3-羥基丁酸酯)、聚(s-己酸)、聚(對-二氧環己酮)、聚(富馬酸丙二酯)、聚(原酸酯)、多元醇/二烯酮縮醛、聚酐、聚(癸二酸酐) (PSA)、聚(羧基雙-羧基苯氧基磷腈) (PCPP)、聚[雙(對-羧基苯氧基)甲烷] (PCPM)、SA、CPP及CPM之共聚物(如Tamat及Langer，Journal of Biomaterials Science Polymer 第3版，315-353，1992及Domb，The Handbook of Biodegradable Polymers ，第8章，編輯者Domb A J及Wiseman R M，Harwood Academic Publishers中所述)及聚(胺基酸)。
在一個實施例中，該微粒包含約至少90%之疏水性聚合物及約不超過10%之親水性聚合物。疏水性聚合物之實例包括聚酯，諸如聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚(D,L-丙交酯-共聚-乙交酯) (PLGA)及聚D,L-乳酸(PDLLA)；聚己酸內酯；聚酐，諸如聚癸二酸酐、聚(馬來酸酐)；及其共聚物。親水性聚合物之實例包括聚(烷二醇)，諸如聚乙二醇(PEG)、聚環氧乙烷(PEO)及聚(乙二醇)胺；多醣；聚(乙烯醇) (PVA)；聚吡咯啶酮；聚丙烯醯胺(PAM)；聚乙烯亞胺(PEI)；聚(丙烯酸)；聚(乙烯基吡咯啶酮) (PVP)；或其共聚物。
在一個實施例中，該微粒包含約至少85%之疏水性聚合物及至多15%之親水性聚合物。
在一個實施例中，該微粒包含約至少80%之疏水性聚合物及至多20%之親水性聚合物。
在一個實施例中，該微粒包含PLA。在一個實施例中，該PLA係酸封端的。在一個實施例中，該PLA係酯封端的。
在一個實施例中，該微粒包含PLGA及PLGA-PEG。
在一個實施例中，該微粒包含PLA及PLGA-PEG。
在一個實施例中，該微粒包含PLGA、PLGA-PEG及PVA。
在一個實施例中，該微粒包含PLA、PLGA-PEG及PVA。
在一個實施例中，該微粒包含PLGA、PLA及PLGA-PEG。
在一個實施例中，該微粒包含PLGA、PLA、PLGA-PEG及PVA。
在一個實施例中，該微粒包含PLGA。
在一個實施例中，該微粒包含PLGA及PEG之共聚物。
在一個實施例中，該微粒包含PLA及PEG之共聚物。
在一個實施例中，該微粒包含PLGA及PLGA-PEG、及其組合。
在一個實施例中，該微粒包含PLA及PLA-PEG。
在一個實施例中，該微粒包含PVA。
在一個實施例中，該等微粒包含PLGA、PLGA-PEG、PVA、或其組合。
在一個實施例中，該等微粒包含生物相容性聚合物PLA、PLA-PEG、PVA、或其組合。
在一個實施例中，在表面處理之前，微粒具有約20 µm至約50 µm、25 µm至約45 µm、25 µm至約30 µm之平均尺寸及約29 µm至約31 µm之中值尺寸。
在一個實施例中，表面處理後的微粒具有約相同的平均尺寸及中值尺寸。在另一個實施例中，表面處理後的微粒之平均尺寸大於中值尺寸。在另一個實施例中，表面處理後的微粒之平均尺寸小於中值尺寸。
在一個實施例中，該等微粒在用約0.0075 M NaOH/乙醇至0.75M NaOH/乙醇(30:70，v:v)進行表面處理後具有約20 µm至約50 µm、25 µm至約45 µm、25 µm至約30 µm、或30至33 µm之平均尺寸及約31 μm至約33 μm之中值尺寸。
在一個實施例中，該等微粒在用約0.75M NaOH/乙醇至2.5 M NaOH/乙醇(30:70，v:v)進行表面處理後具有約20 µm至約50 µm、25 µm至約45 µm、25 µm至約30 µm、或30至33 µm之平均尺寸及約31 μm至約33 μm之中值尺寸。
在一個實施例中，該等微粒在用約0.0075 M HCl/乙醇至0.75 M NaOH/乙醇(30:70，v:v)進行表面處理後具有約20 µm至約50 µm、約25 µm至約45 µm、約25 µm至約30 µm、或30至33 µm之平均尺寸及約31 μm至約33 μm之中值尺寸。
在一個實施例中，該等微粒在用約0.75M NaOH/乙醇至2.5 M HCl/乙醇(30:70，v:v)進行表面處理後具有約20 µm至約50 µm、約25 µm至約45 µm、約25 µm至約30 µm、或30至33 µm之平均尺寸及約31 μm至約33 μm之中值尺寸。
在一個實施例中，使用濕微粒來製造經表面改性之固體聚集用微粒。
在一個實施例中，當相比未經表面處理之微粒時，該經表面改性之固體聚集用微粒可在更長的時間期內釋放治療劑。
在一個實施例中，經表面改性之固體聚集用微粒相比表面改性前微粒包含更少的表面活性劑。
在一個實施例中，經表面改性之固體聚集用微粒相比表面改性前微粒更具疏水性。
在一個實施例中，相比未經表面處理之微粒，經表面改性之固體聚集用微粒發炎較少。
在一個實施例中，會去除經表面改性之固體聚集用微粒之表面活性劑之試劑包含部分溶解或溶脹經表面改性之固體聚集用微粒之溶劑。
在本發明之一個態樣中，例如，為方便遞送及/或持續釋放遞送，將有效量之如本文所述的醫藥活性化合物併入至經表面處理之微粒中。材料之使用提供修改基本物理特性(諸如溶解度、擴散性及藥物釋放特性)之能力。此等微米級試劑可提供更有效及/或更方便之投藥途徑，降低治療毒性，延長產品壽命，及最終降低醫療護理成本。作為治療性遞送系統，經表面處理之微粒可允許靶向遞送及持續釋放。XI . 表面活性劑
在一個實施例中，微粒之製造包括表面活性劑。表面活性劑之實例包括例如聚氧乙二醇、聚氧丙二醇、癸基葡萄糖苷、月桂基葡萄糖苷、辛基葡萄糖苷、聚氧乙二醇辛基苯酚、Triton X-100、甘油烷基酯、月桂酸甘油酯、椰油醯胺MEA、椰油醯胺DEA、氧化十二烷基二甲基胺及泊洛沙姆(poloxamer)。泊洛沙姆之實例包括泊洛沙姆188、237、338及407。此等泊洛沙姆係以商標名稱Pluronic®(可從BASF，Mount Olive，N.J.獲得)獲得並分別對應於Pluronic® F-68、F-87、F-108及F-127。泊洛沙姆188(對應於Pluronic® F-68)係平均分子質量為約7,000至約10,000 Da、或約8,000至約9,000 Da、或約8,400 Da之嵌段共聚物。泊洛沙姆237(對應於Pluronic® F-87)係平均分子質量為約6,000至約9,000 Da、或約6,500至約8,000 Da、或約7,700 Da之嵌段共聚物。泊洛沙姆338(對應於Pluronic® F-108)係平均分子質量為約12,000至約18,000 Da、或約13,000至約15,000 Da、或約14,600 Da之嵌段共聚物。泊洛沙姆407(對應於Pluronic® F-127)係約E101 P56 E101至約E106 P70 E106、或約E101 P56E101、或約E106 P70 E106之比之聚氧伸乙基-聚氧伸丙基三嵌段共聚物，其平均分子質量為約10,000至約15,000 Da、或約12,000至約14,000 Da、或約12,000至約13,000 Da、或約12,600 Da。
可用於本發明中的表面活性劑之其他實例包括但不限於聚乙烯醇(其可係水解的聚乙酸乙烯酯)、聚乙酸乙烯酯、維生素E-TPGS、泊洛沙姆、膽酸鈉鹽、二辛基磺基琥珀酸鈉、溴化十六烷基三甲基銨、皂素(saponin)、TWEEN® 20、TWEEN® 80、糖酯、Triton X系列、L-a-磷脂醯膽鹼(PC)、1,2-二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、油酸、山梨糖醇酐三油酸酯、山梨糖醇酐單油酸酯、山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚氧伸乙基(20)山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚氧伸乙基(20)山梨糖醇酐單油酸酯、天然卵磷脂、油基聚氧伸乙基(2)醚、硬脂基聚氧伸乙基(2)醚、月桂基聚氧伸乙基(4)醚、氧伸乙基及氧伸丙基之嵌段共聚物、合成卵磷脂、二乙二醇二油酸酯、四氫糠基油酸酯、油酸乙酯、肉荳蔻酸異丙酯、單油酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、單蓖麻油酸甘油酯、鯨蠟醇、硬脂醇、氯化鯨蠟基吡啶鎓、氯化苄二甲烴銨、橄欖油、單月桂酸甘油酯、玉米油、棉籽油、葵花籽油、卵磷脂、油酸及山梨糖醇酐三油酸酯。
在一個實施例中，該表面活性劑係聚乙烯醇(PVA)。可使用任何分子量之PVA來達成所需結果。在一個實施例中，該PVA具有至多約10、15、20、25、30、35或40 kd之分子量。在一些實施例中，該PVA係部分水解之聚乙酸乙烯酯，包括但不限於至多約70、75、80、85、88、90或甚至95%之水解的聚乙酸乙烯酯。在一個實施例中，該PVA係約88%之水解的聚乙酸乙烯酯。在一個實施例中，該PVA聚合物之分子量為20,000至40,000 g/mol。在一個實施例中，該PVA聚合物之分子量為24,000至35,000 g/mol。
熟習此項技術者應認識到，一些表面活性劑可用作製造微粒中之聚合物。熟習此項技術者亦應認識到，在一些製造中，該微粒可保留少量的表面活性劑，此允許根據需要進一步修改性質。XII . 包含可生物降解之聚合物之微粒
在某些態樣中，提供固體聚集用微粒，其包含聚(α-羥基酸)可生物降解聚合物(例如聚乳酸(PLA)可生物降解聚合物)及共價結合至親水性聚合物(例如PLGA-PEG可生物降解聚合物）之疏水性聚合物，其中該等固體聚集用微粒具有實芯，包含治療劑，小到足以進行活體內注射，及能夠活體內聚集。在一個實施例中，該等微粒活體內聚集以活體內形成至少500 μm之至少一個集結粒，以提供活體內持續藥物遞送至少一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月或以上。在一個實施例中，該等微粒為約10 μm至約50 μm、約20 μm至約45 μm、約25 μm至約35 μm。
已發現，某些微粒調配物中PLA之包含允許達成長期緩慢實質表面侵蝕，例如9個月、10個月、11個月、12個月或更長時間。在一些實施例中，可達成幾乎零階或線性釋放活體內藥物遞送。
如本文所預期，用於本發明中之PLA可包含任何已知變體，例如但不限於PLLA(聚-L-乳酸)、外消旋PLLA(聚-L-乳酸)、PDLA(聚-D-乳酸)、及PDLLA(聚-DL-乳酸)、或其混合物。在一個實施例中，PLA係聚-L-乳酸。該PLA可係酯封端的或酸封端的。
在一個實施例中，該PLA佔至少約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%之微粒。在一個實施例中，該PLA具有約30至60 kD、約35至55kD、或約40至50kD之分子量。該微粒進一步包含共價結合至親水可生物降解聚合物之疏水性聚合物。疏水性可降解聚合物係本技術中已知的，且包括但不限於聚乙醇酸(PGA)、聚(D,L-丙交酯-共聚-乙交酯) (PLGA)及聚D,L-乳酸(PDLLA)；聚己酸內酯；聚酐，諸如聚癸二酸酐、聚(馬來酸酐)；及其共聚物。親水性聚合物係本技術中已知的且包括例如聚(烷二醇)，諸如聚乙二醇(PEG)、聚環氧乙烷(PEO)及聚(乙二醇)胺；多醣；聚(乙烯醇) (PVA)；聚吡咯啶酮；聚丙烯醯胺(PAM)；聚乙烯亞胺(PEI)；聚(丙烯酸)；聚(乙烯基吡咯啶酮) (PVP)；或其共聚物。共價結合至親水性聚合物之疏水性聚合物包括例如PLGA-PEG、PLA-PEG、PCL-PEG，其量為約0.5%至約10%、約0.5%至約5%、約0.5%至約4%、約0.5%至約3%、或約0.1%至約1、2、5或10%。在一個實施例中，共價結合至親水性聚合物之疏水性聚合物係PLGA-PEG。
在一個實施例中，微粒中共價結合至親水性聚合物之PLA/疏水性聚合物之比為約40/1至約120/1(以重量計)。在一個實施例中，微粒中PLA/共價結合至親水性聚合物之疏水性聚合物之重量比為約45/1、50/1、55/1、60/1、65/1、70/1、75/1、80/1、85/1、90/1、95/1、96/1、97/1、98/1、99/1、99.5/1、99.9/1、100/1、101/1、102/1、103/1、104/1、105/1、或大於105/1。在一個實施例中，共價結合至親水性聚合物之疏水性聚合物係PLGA-PEG。
在一個實施例中，PLA/共價結合至親水性聚合物微粒之疏水性聚合物進一步包含另一疏水可生物降解聚合物，例如聚乙醇酸(PGA)、聚(D,L-丙交酯-共聚-乙交酯) (PLGA)及聚D,L-乳酸(PDLLA)；聚己酸內酯；聚酐，諸如聚癸二酸酐、聚(馬來酸酐)；及其共聚物。在一個實施例中，該另一疏水性生物可降解聚合物佔約1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%或55%之微粒。在一個實施例中，該另一疏水性聚合物係PLGA。在一個實施例中，該PLGA中丙交酯/乙交酯之重量比為約5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10或95/5。該PLGA可係酸封端的或酯封端的。該PLA可係酸封端的或酯封端的。
在一個實施例中，該微粒包含PLA、PLGA及PLGA-PEG。在一個實施例中，微粒中PLA/PLGA/PLGA-PEG之重量比為約5/95/1、10/90/1、15/85/1、20/80/1、25/75/1、30/70/1、35/65/1、40/60/1、45/55/1、40/60/1、45/55/1、50/50/1、55/45/1、60/40/1、65/35/1、70/30/1、75/25/1、80/20/1、85/15/1、90/10/1、95/5/1或100/1/1。在一個實施例中，PLA-PEG或PLC-PEG替代PLGA-PEG。
在一個實施例中，該等微粒包含PLA/PLGA45k-PEG5k。該PLA可係酯或酸封端的。在一個實施例中，該PLA係酸封端的。在一個實施例中，該等微粒包含重量比為約100/1至80/20、約100/1、95/5、90/10、85/15或80/20之PLA/PLGA45k-PEG5k。在一個實施例中，該等微粒包含比為約99/1/1至1/99/1、約99/1/1、95/5/1、90/10/1、85/15/1、80/20/1、75/25/1、70/30/1、65/35/1、60/40/1、55/45/1、50/50/1、45/55/1、40/60/1、35/65/1、30/70/1、25/75/1、20/80/1、15/85/1、10/90/1、5/95/1或1/99/1之PLA/PLGA7525/PLGA45k-PEG5k。PLGA7525及PLA可係經酸或酯封端。在一個實施例中，PLGA7525及PLA二者均經酸封端。在一個實施例中，該等微粒包含PLA/PLGA5050/PLGA45k-PEG5k。在一個實施例中，該等微粒包含重量比為約99/1/1、95/5/1、90/10/1、85/15/1、80/20/1、75/25/1、70/30/1、65/35/1、60/40/1、55/45/1、50/50/1、45/55/1、40/60/1、35/65/1、30/70/1、25/75/1、20/80/1、15/85/1、10/90/1、5/95/1或1/99/1之PLA/PLGA5050/PLGA45k-PEG5k。該PLA及PLGA5050可經酸或酯封端。在一個實施例中，PLA及PLGA二者均經酸封端。
在一個實施例中，本文所述的PLA微粒係經表面改性。在一個實施例中，該等微粒具有改性表面，該改性表面已在溫和條件下於在或小於約18℃之溫度下處理以去除表面活性劑或引起表面聚合物部分降解。固體聚集用微粒適用於例如玻璃體內注射、植入物(包括眼部植入物)、眼周遞送、或眼睛外之活體內遞送。
在一個實施例中，活體內形成的聚集物係微粒之摻合物或混合物，其中該等微粒中之至少一者包含聚乳酸(PLA)可生物降解聚合物及共價連接至親水性聚合物之疏水性可生物降解聚合物(例如PLGA-PEG可生物降解聚合物)。在一個實施例中，該混合物或摻合物包含由非PLA聚合物組成之一或多個微粒。在一個實施例中，該混合物或摻合物包含PLA/PLGA-PEG微粒及PLGA/PLGA-PEG微粒。在一個實施例中，該混合物或摻合物包含約1/99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA/PLGA-PEG與PLGA/PLGA-PEG重量比。在一個實施例中，該PLGA或PLGA-PEG中之丙交酯/乙交酯比為以重量計約5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10或95/5。PLGA可經酸封端或酯封端。在一個實施例中，該PLGA係嵌段共聚物，例如，二嵌段、三嵌段、多嵌段或星形嵌段。在一個實施例中，該PLGA係無規共聚物。
在一個實施例中，該混合物或摻合物包含PLA/PLGA-PEG微粒及PLA/PLGA/PLGA-PEG微粒。在一個實施例中，該混合物或摻合物包含約1/99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA/PLGA-PEG與PLA/PLGA/PLGA-PEG重量比。在一個實施例中，PLGA或PLGA-PEG中之丙交酯/乙交酯重量比為約1/99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或95/5之PLA/PLGA-PEG與PLGA/PLGA-PEG重量比。在一個實施例中，該PLGA之丙交酯/乙交酯重量比為95/5、90/10、85/15、80/20、75/25、70/30、65/35、60/40、55/45、50/50、45/55、40/60、35/65、30/70、25/75、20/80、15/85、10/90、5/95。PLGA可經酸封端或酯封端。在一個實施例中，該PLGA係嵌段共聚物，例如，二嵌段、三嵌段、多嵌段或星形嵌段。在一個實施例中，該PLGA係無規共聚物。
在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由PLA/PLGA-PEG微粒(其中該PLA佔微粒約80%至99.9%)及PLGA/PLGA-PEG微量(其中該PLGA佔微粒80%至99.9%)組成。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA7525/ PLGA45k-PEG5k微粒組成。在一個實施例中，PLA/PLGA45k-PEG5k微粒與PLGA7525/PLGA45k-PEG5k微粒之重量比為約20/80至40/60、約20/80、25/75、30/70、35/65或40/60。該PLA及PLGA可經酯或酸封端。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA 4A/PLGA45k-PEG5k微粒與PLGA7525 4A/PLGA45k-PEG5k微粒組成。在一個實施例中，PLA 4A/PLGA45k-PEG5k微粒與PLGA7525 4A/PLGA45k-PEG5k微粒之重量比為約20/80至40/60、約20/80、25/75、30/70、35/65或40/60。
在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA5050/ PLGA45k-PEG5k微粒組成。在一個實施例中，PLA/PLGA45k-PEG5k微粒與PLGA5050/PLGA45k-PEG5k微粒之重量比為約20/80至40/60、約20/80、25/75、30/70、35/65或40/60。該PLA及PLGA可係酯或酸封端。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA 4A/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA5050 4A/ PLGA45k-PEG5k微粒組成。在一個實施例中，PLA 4A/PLGA45k-PEG5k微粒與PLGA5050 4A/PLGA45k-PEG5k微粒之重量比為約20/80至40/60、約20/80、25/75、30/70、35/65或40/60。
在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由PLA/PLGA/PLGA-PEG微粒及PLGA/PLGA-PEG微粒組成。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA/PLGA/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA/PLGA45k-PEG5k微粒組成。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA/PLGA7525/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA7525/PLGA45k-PEG5k微粒組成。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA/PLGA7525/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA5050/PLGA45k-PEG5k微粒組成。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA/PLGA5050/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA7525/PLGA45k-PEG5k微粒組成。該PLA及PLGA可經酸封端或酯封端。
在一個實施例中，該微粒包含重量比之PLA4A/PLGA45k-PEG5k及PLGA7525 4A/PLGA45k-PEG5k之摻合物或混合物。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物包含約20/80至40/60、約20/80、25/75、30/70、35/65或40/60之重量比之PLA 4A/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA7525 4A/PLGA45k-PEG5k微粒。在一個實施例中，微粒之摻合物或混合物係由重量比為約1/99至約99/1、約1.99、5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10、95/5或99/1之PLA 4A/PLGA45k-PEG5k微粒及PLGA5050 4A/PLGA45k-PEG5k微粒組成。在一個實施例中，PLA 4A/PLGA45k-PEG5k微粒與PLGA5050 4A/PLGA45k-PEG5k微粒之重量比為約20/80至50/50、約20/80、25/75、30/70、35/65、40/60或50/50。
如本文所預期，如本文所用的PLA可經不同聚(α-羥基酸)可生物降解聚合物代替，例如聚乙醇酸(PGA)、聚(D,L-丙交酯-共聚-乙交酯) (PLGA)及聚D,L-乳酸(PDLLA)、聚酯、聚(ε-己內酯)、聚(3-羥基丁酸酯)、聚(s-己酸)、聚(對-二氧環己酮)、聚(富馬酸丙二酯)、聚(原酸酯)、多元醇/二烯酮縮醛、聚酐、聚癸二酸酐(PSA)、聚(羧基雙-羧基苯氧基磷腈) (PCPP)、聚[雙(對-羧基苯氧基)甲烷](PCPM)、SA、CPP、CPM及聚(胺基酸)。XIII . 待治療疾病之實例
在一個實施例中，本文所述的微粒及包封在該微粒中之醫藥活性化合物視需要與醫藥上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組合係用於治療疾病，包括人類疾病。在一個實施例中，該組合物係用於治療眼睛病症或眼睛疾病之醫藥組合物。
可用該組合物治療之非限制性例示性眼睛病症或疾病包括年齡相關黃斑變性、鹼性糜爛性角膜結膜炎、過敏性結膜炎、過敏性角膜炎、前葡萄膜炎、貝西氏病、瞼緣炎、血液-水障壁破壞、脈絡膜炎、慢性葡萄膜炎、結膜炎、接觸性晶狀體引起之角膜結膜炎、角膜擦傷、角膜創傷、角膜潰瘍、結晶性視網膜病、囊狀黃斑水腫、淚囊炎、糖尿病性角膜病、糖尿病性黃斑水腫、糖尿病性視網膜病、乾眼病、乾性年齡相關黃斑變性、嗜曙紅細胞肉芽腫、表層鞏膜炎、滲出性黃斑水腫、福克斯營養不良(Fuchs' Dystrophy)、巨細胞動脈炎、***頭狀結膜炎、青光眼、青光眼手術失敗、移植物排斥、帶狀皰疹、白內障手術後發炎、虹膜角膜內皮症候群、虹膜炎、乾燥性角膜結膜炎、角膜結膜炎發炎疾病、圓錐角膜、晶狀體營養不良、地圖點指紋(map-dot-fingerprint)營養不良、壞死性角膜炎、關於視網膜、葡萄膜或角膜之新生血管疾病，例如新生血管性青光眼、角膜新生血管形成、組合的玻璃體切除術及晶狀體切除術之後導致之新生血管形成、視神經之新生血管形成、及由於眼部穿透或挫傷性眼部損傷所致之新生血管形成、神經麻痺性角膜炎、非感染性葡萄膜炎、眼皰疹、眼淋巴瘤、眼酒渣鼻、眼科感染、眼科天皰瘡、視神經炎、胰腺炎、乳頭炎、睫狀體扁平部炎、持續性黃斑水腫、晶狀體過敏、後葡萄膜炎、手術後發炎、增生性糖尿病性視網膜病、增生性鐮狀細胞視網膜病、增生性玻璃體視網膜病、視網膜動脈阻塞、視網膜脫離、視網膜靜脈阻塞、色素性視網膜炎、早產兒視網膜病、虹膜發紅、鞏膜炎、Stevens-Johnson症候群、交感性眼炎、顳動脈炎、甲狀腺相關眼病、葡萄膜炎、春季結膜炎、維生素A功能不足引起之角膜軟化、玻璃體炎、濕性年齡相關黃斑變性、新血管性年齡相關黃斑變性、近視及老花眼。XIV . 待遞送之治療活性劑
可使用本發明以長期持續方式活體內遞送多種治療劑。
本發明之醫藥組合物/組合之「治療有效量」意指當投與患者時可有效提供治療益處(諸如改善所選擇疾病(通常是眼部疾病)之症狀)的量。在某些態樣中，該疾病係青光眼、由碳酸酐酶介導之疾病、與眼內壓升高(IOP)有關之疾病或異常、由一氧化氮合成酶(NOS)介導之疾病、需要神經保護諸如以再生/修復視神經之疾病、過敏性結膜炎、前葡萄膜炎、白內障、乾性或濕性年齡相關黃斑變性(AMD)、新生血管性AMD、新生血管性或糖尿病性視網膜病。
「醫藥上可接受之鹽」係當治療活性化合物藉由製備其無機或有機、無毒酸或鹼加成鹽改性時所形成的。鹽可藉由習知化學方法自包含鹼性或酸性部分之親本化合物合成。一般而言，此種鹽可藉由使化合物之游離酸形式與化學計量量之適宜鹼(諸如Na、Ca、Mg或K氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽或類似)反應或藉由使化合物之游離鹼形式與化學計量量之適當酸反應來製備。此等反應通常係在水中或在有機溶劑中或在二者之混合物中進行。一般而言，在可行的情況下，通常使用非水介質，例如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。醫藥上可接受之鹽之實例包括但不限於鹼性殘基(諸如胺)之無機或有機酸鹽；酸性殘基(諸如羧酸)之鹼性或有機鹽；及類似者。醫藥上可接受之鹽包括例如自無毒無機或有機酸形成的親本化合物之習知無毒鹽及四級銨鹽。例如，習知無毒酸鹽包括彼等衍生自無機酸(諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸、硝酸及類似者)者；及自有機酸(諸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、麩胺酸、苯甲酸、水楊酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、磺胺基、2-乙醯氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙磺酸、HOOC-(CH2 )n -COOH (其中n為0至4)及類似者)製備之鹽。其他適宜鹽之清單可在例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，第1418頁 (1985)中找到。
在一個實施例中，本發明之微粒可包含用於治療青光眼之化合物，例如β-腎上腺素能拮抗劑、***素類似物、腎上腺素能促效劑、碳酸酐酶抑制劑、擬副交感神經藥、雙重抗VEGF/抗PDGF治療劑或雙重白胺酸拉鏈激酶(DLK)抑制劑。在另一個實施例中，本發明之微粒可包含用於治療糖尿病性視網膜病之化合物。此類化合物可根據本發明以較低劑量投與，因為其等可在眼部疾病部位投與。
環利尿劑之實例包括呋塞米、布美他尼、吡咯他尼、依他尼酸、依托唑啉及奧唑林酮。
β-腎上腺素能拮抗劑之實例包括但不限於噻嗎洛爾(Timoptic®)、左布洛諾爾(levobunolol) (Betagan®)、卡替洛爾(carteolol) (Ocupress®)、倍他洛爾(Betaxolol) (Betoptic)及甲萘普洛爾(metipranolol) (OptiPranolol®)。
***素類似物之實例包括但不限於拉坦***素(latanoprost) (Xalatan®)、曲妥普***素(travoprost) (Travatan®)、比馬***素(bimatoprost) (Lumigan®)及他氟***素(tafluprost) (ZioptanTM )。
腎上腺素能促效劑之實例包括但不限於溴莫尼定(Alphagan®)、腎上腺素、地匹福林(dipivefrin) (Propine®)及安普樂定(apraclonidine) (Lopidine®)。
碳酸酐酶抑制劑之實例包括但不限於多佐胺(dorzolamide) (Trusopt®)、布林佐胺(brinzolamide) (Azopt®)、乙醯唑胺(acetazolamide) (Diamox®)及甲唑胺(methazolamide) (Neptazane®)，參見以下結構。
抗氧化劑之實例包括α-硫辛酸(ALA)。
酪胺酸激酶抑制劑之實例包括替伐辛尼、伊馬替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、卡納替尼、司馬沙尼、凡他拉尼、索拉非尼、阿西替尼、帕唑帕尼、達沙替尼、尼洛替尼、克唑替尼、魯索替尼、凡德他尼、維羅非尼、博舒替尼、卡博替尼、瑞格菲尼、維莫德吉及帕納替尼。在一個實施例中，酪胺酸激酶抑制劑係選自替伐辛尼、伊馬替尼、吉非替尼及厄洛替尼。在一個實施例中，酪胺酸激酶抑制劑係選自拉帕替尼、卡納替尼、司馬沙尼及凡他拉尼。在一個實施例中，酪胺酸激酶抑制劑係選自索拉非尼、阿西替尼、帕唑帕尼及達沙替尼。在一個實施例中，酪胺酸激酶抑制劑係選自尼洛替尼、克唑替尼、魯索替尼、凡德他尼及維羅非尼。在一個實施例中，酪胺酸激酶抑制劑係選自博舒替尼、卡博替尼、瑞格菲尼、維莫德吉及帕納替尼。
擬副交感神經藥之實例包括但不限於毛果芸香鹼及阿托品。
DLK抑制劑包括但不限於克唑替尼、KW-2449及妥色替(Tozasertib)，參見以下結構。
用於治療糖尿病性視網膜病之藥物包括但不限於蘭尼單抗(Lucentis®)。
在一個實施例中，雙重抗-VEGF/抗-PDGF治療劑係蘋果酸舒尼替尼(Sutent®)。
在一個實施例中，該化合物係針對青光眼之治療及可以可有效治療需要青光眼治療的宿主的量使用。
在另一個實施例中，該化合物藉由除彼等與青光眼有關者以外的機制起作用以治療宿主(通常是人類)之本文所述疾病。
在一個實施例中，該治療劑係選自磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑、布魯頓(Bruton’s)酪胺酸激酶(BTK)抑制劑、或脾酪胺酸激酶(Syk)抑制劑、或其組合。
可用於本發明中之PI3K抑制劑係熟知的。PI3激酶抑制劑之實例包括但不限於渥曼青黴素(Wortmannin)、去甲氧綠膠黴素(demethoxyviridin)、哌立福新(perifosine)、艾代拉里斯(idelalisib)、皮克里斯(Pictilisib)、Palomid 529、ZSTK474、PWT33597、CUDC-907、及AEZS-136、度維里斯(duvelisib)、GS-9820、BKM120、GDC-0032(塔西利昔(Taselisib)) (2-[4-[2-(2-異丙基-5-甲基-1,2,4-***-3-基)-5,6-二氫咪唑并[1,2-d][1,4]苯并氧氮呯-9-基]吡唑-1-基]-2-甲基丙醯胺)、MLN-1117((2R)-1-苯氧基-2-丁基氫(S)-甲基膦酸鹽；或甲基(側氧基){[(2R)-l-苯氧基-2-丁基]氧基}鏻))、BYL-719((2S)-N1-[4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基乙基)-4-吡啶基]-2-***基]-1,2-吡咯啶二甲醯胺)、GSK2126458(2,4-二氟-N-{2-(甲基氧基)-5-[4-(4-噠嗪基)-6-喹啉基]-3-吡啶基}苯磺醯胺) (米帕里斯(omipalisib))、TGX-221((±)-7-甲基-2-(嗎啉-4-基)-9-(l-苯基胺基乙基)-吡啶并[l,2-a]-嘧啶-4-酮)、GSK2636771(2-甲基-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苄基)-6-嗎啉基-lH-苯并[d]咪唑-4-羧酸二鹽酸鹽)、KIN-193((R)-2-((l-(7-甲基-2-嗎啉基-4-側氧基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-9-基)乙基)胺基)苯甲酸)、TGR-1202/RP5264、GS-9820((S)-l-(4-((2-(2-胺基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-羥基丙-1-酮)、GS-1101(5-氟-3-苯基-2-([S)]-1-[9H-嘌呤-6-基胺基]-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮)、AMG-319、GSK-2269557、SAR245409(N-(4-(N-(3-((3,5-二甲氧基苯基)胺基)喹噁啉-2-基)胺磺醯基)苯基)-3-甲氧基-4-甲基苯甲醯胺)、BAY80-6946(2-胺基-N-(7-甲氧基-8-(3-嗎啉基丙氧基)-2,3-二氫咪唑并[l,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺)、AS 252424(5-[l-[5-(4-氟-2-羥基-苯基)-呋喃-2-基]-亞甲-(Z)-基]-噻唑-2,4-二酮)、CZ 24832(5-(2-胺基-8-氟-[l,2,4]***并[l,5-a]吡啶-6-基)-N-第三丁基吡啶-3-磺醯胺)、布帕里斯(Buparlisib) (5-[2,6-二(4-嗎琳基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺)、GDC-0941(2-(lH-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺醯基)-l-哌嗪基]甲基]-4-(4-嗎啉基)噻吩并[3,2-d]嘧啶)、GDC-0980((S)-1-(4-((2-(2-胺基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-嗎啉基噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-l-基)-2-羥基丙-l-酮(亦稱為RG7422))、SF1126((8S,14S,17S)-14-(羧基甲基)-8-(3-胍基丙基)-17-(羥基甲基)-3,6,9,12,15-五側氧基-1-(4-(4-側氧基-8-苯基-4H-色烯-2-基)嗎啉-4-鎓)-2-氧雜-7,10,13,16-四氮雜十八酸-18-鹽)、PF-05212384(N-[4-[[4-(二甲基胺基)-1-哌啶基]羰基]苯基]-N'-[4-(4,6-二-4-嗎啉基-l,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲) (吉達里斯(gedatolisib))、LY3023414、BEZ235(2-甲基-2-{4-[3-甲基-2-側氧基-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氫-lH-咪唑并[4,5-c]喹啉-l-基]苯基}丙腈) (達克里斯(dactolisib))、XL-765(N-(3-(N-(3-(3,5-二甲氧基苯基胺基)喹噁啉-2-基)胺磺醯基)苯基)-3-甲氧基-4-甲基苯甲醯胺)及GSK1059615(5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亞甲基]-2,4-伸噻唑基二酮)、PX886([(3aR,6E,9S,9aR,10R,11aS)-6-[[雙(丙-2-烯基)胺基]亞甲基]-5-羥基-9-(甲氧基甲基)-9a,11a-二甲基-l,4,7-三側氧基-2,3,3a,9,10,ll-六氫茚并[4,5h]異色烯-10-基]乙酸鹽(亦稱為索諾里斯(sonolisib)))、LY294002、AZD8186、PF-4989216、皮拉里斯(pilaralisib)、GNE-317、PI-3065、PI-103、NU7441 (KU-57788)、HS 173、VS-5584 (SB2343)、CZC24832、TG100-115、A66、YM201636、CAY10505、PIK-75、PIK-93、AS-605240、BGT226 (NVP-BGT226)、AZD6482、伐他里斯(voxtalisib)、阿培里斯(alpelisib)、IC-87114、TGI100713、CH5132799、PKI-402、科帕里斯(copanlisib) (BAY 80-6946)、XL 147、PIK-90、PIK-293、PIK-294、3-MA(3-甲基腺嘌呤)、AS-252424、AS-604850、阿托里斯(apitolisib) (GDC-0980；RG7422)、及描述於WO2014/071109中之結構，其具有式：
Figure 02_image001
。
用於本發明中之BTK抑制劑係熟知的。BTK抑制劑之實例包括依布魯替尼(ibrutinib) (亦稱為PCI-32765) (Imbruvica™) (1-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基-苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮)、基於二苯胺基嘧啶之抑制劑，諸如AVL-101及AVL-291/292(N-(3-((5-氟-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺) (Avila Therapeutics) (US專利公開案第2011/0117073號，以全文引用之方式併入本文中)、達沙替尼([N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基胺基)噻唑-5-甲醯胺]、LFM-A13(α-氰基-β-羥基-β-甲基-N-(2,5-二溴苯基)丙烯醯胺)、GDC-0834 ([R-N-(3-(6-(4-(1,4-二甲基-3-側氧基哌嗪-2-基)苯基胺基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲醯胺]、CGI-560 4-(第三丁基)-N-(3-(8-(苯基胺基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)苯基)苯甲醯胺、CGI-1746(4-(第三丁基)-N-(2-甲基-3-(4-甲基-6-((4-(嗎啉-4-羰基)苯基)胺基)-5-側氧基-4,5-二氫吡嗪-2-基)苯基)苯甲醯胺)、CNX-774 (4-(4-((4-((3-丙烯基醯胺基苯基)胺基)-5-氟嘧啶-2-基)胺基)苯氧基)-N-甲基吡啶醯胺)、CTA056 (7-苄基-1-(3-(哌啶-1-基)丙基)-2-(4-(吡啶-4-基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-g]喹噁啉-6(5H)-酮)、GDC-0834 ((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-側氧基哌嗪-2-基)苯基)胺基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲醯胺)、GDC-0837 ((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-側氧基哌嗪-2-基)苯基)胺基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲醯胺)、HM-71224、ACP-196、ONO-4059 (Ono Pharmaceuticals)、PRT062607 (4-((3-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)胺基)-2-(((1R,2S)-2-胺基環己基)胺基)嘧啶-5-甲醯胺鹽酸鹽)、QL-47(1-(1-丙烯醯基吲哚啉-6-基)-9-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[h][1,6]萘啶-2(1H)-酮)、及RN486 (6-環丙基-8-氟-2-(2-羥基甲基-3-{1-甲基-5-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-2-基胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基}-苯基)-2H-異喹啉-1-酮)、及能夠抑制BTK活性之其他分子，例如揭示於Akinleye等人，Journal of Hematology & Oncology，2013，6:59中之其等BTK抑制劑，該案之全文係以引用的方式併入本文中。
用於本發明中之Syk抑制劑係熟知的，並包括例如賽度替尼(Cerdulatinib) (4-(環丙基胺基)-2-(((4-(4-(乙基磺醯基)哌嗪-1-基)苯基)胺基)嘧啶-5-甲醯胺)、恩特替尼(entospletinib) (6-(1H-吲唑-6-基)-N-(4-嗎啉基苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺)、福他替尼(fostamatinib) ([6-({5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)胺基]-4-嘧啶基}胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基-2,3-二氫-4H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-4-基]甲基二氫磷酸鹽)、福他替尼二鈉鹽(鈉(6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-4(3H)-基)甲基磷酸鹽)、BAY 61-3606(2-(7-(3,4-二甲氧基苯基)-咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基胺基)-菸鹼醯胺HCl)、RO9021(6-[(1R,2S)-2-胺基-環己基胺基]-4-(5,6-二甲基-吡啶-2-基胺基)-噠嗪-3-羧酸醯胺)、伊馬替尼(Gleevac；4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-N-(4-甲基-3-{[4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]胺基}苯基)苯甲醯胺)、星形孢菌素(staurosporine)、GSK143 (2-(((3R,4R)-3-胺基四氫-2H-吡喃-4-基)胺基-4-(對-甲苯基胺基)嘧啶-5-甲醯胺)、PP2(1-(第三丁基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)、PRT-060318 (2-(((1R,2S)-2-胺基環己基)胺基)-4-(間-甲苯基胺基)嘧啶-5-甲醯胺)、PRT-062607(4-((3-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)胺基)-2-(((1R,2S)-2-胺基環己基)胺基)嘧啶-5-甲醯胺鹽酸鹽)、R112(3,3'-((5-氟嘧啶-2,4-二基)雙(氮雜二基))二酚)、R348(3-乙基-4-甲基吡啶)、R406(6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,2-二甲基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮)、白皮杉醇(piceatannol) (3-羥基白藜蘆醇(3-Hydroxyresveratol))、YM193306 (Singh等人，Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643)、7-氮雜吲哚、白皮杉醇、ER-27319 (Singh等人，Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)、化合物D (Singh等人，Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)、PRT060318 (Singh等人，Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)、木樨草素(luteolin) (Singh等人，Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)、芹黃素(apigenin) (Singh等人，Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)、槲皮素(quercetin) (Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)、漆黃素(fisetin) (Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)、楊梅酮(myricetin) (Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)、桑色素(morin) (Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors，J. Med. Chem. 2012，55，3614-3643，以其全文引用之方式併入本文中)。
在一個實施例中，該治療劑係MEK抑制劑。用於本發明中之MEK抑制劑係熟知的，並包括例如曲美替尼(trametinib)/GSKl120212 (N-(3-{3-環丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-6,8-二甲基-2,4,7-三側氧基-3,4,6,7-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H-基}苯基)乙醯胺)、司美替尼(selumetinib) (6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-N-(2-羥基乙氧基)-3-甲基苯并咪唑-5-甲醯胺)、匹馬色替(pimasertib)/AS703026/MSC 1935369 ((S)-N-(2,3-二羥基丙基)-3-((2-氟-4-碘苯基)胺基)異菸鹼醯胺)、XL-518/GDC-0973(l-({3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]苯基}羰基)-3-[(2S)-哌啶-2-基]吖丁啶-3-醇)、瑞法替尼(refametinib)/BAY869766/RDEAl 19 (N-(3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基胺基)-6-甲氧基苯基)-1-(2,3-二羥基丙基)環丙烷-1-磺醯胺)、PD-0325901 (N-[(2R)-2,3-二羥基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-苯甲醯胺)、TAK733 ((R)-3-(2,3-二羥基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基胺基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮)、MEK162/ARRY438162 (5-[(4-溴-2-氟苯基)胺基]-4-氟-N-(2-羥基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲醯胺)、R05126766 (3-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)-4-吡啶基]甲基]-4-甲基-7-嘧啶-2-基氧基色烯-2-酮)、WX-554、R04987655/CH4987655 (3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)-N-(2-羥基乙氧基)-5-((3-側氧基-1,2-氧氮雜環己烷-2-基)甲基)苯甲醯胺)、或AZD8330 (2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)-N-(2-羥基乙氧基)-1、5-二甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醯胺)、U0126-EtOH、PD184352(CI-1040)、GDC-0623、BI-847325、考比替尼(cobimetinib)、PD98059、BIX 02189、BIX 02188、比尼替尼(binimetinib)、SL-327、TAK-733、PD318088、及如以下所述的其他MEK抑制劑。
在一個實施例中，該治療劑係Raf抑制劑。用於本發明中之Raf抑制劑係熟知的，並包括例如維羅非尼(Vemurafinib) (N-[3-[[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]羰基]-2,4-二氟苯基]-1-丙烷磺醯胺)、甲苯磺酸索拉非尼(4-[4-[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]胺甲醯基胺基]苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲醯胺；4-甲基苯磺酸鹽)、AZ628 (3-(2-氰基丙烷-2-基)-N-(4-甲基-3-(3-甲基-4-側氧基-3,4-二氫喹唑啉-6-基胺基)苯基)苯甲醯胺)、NVP-BHG712 (4-甲基-3-(1-甲基-6-(吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)苯甲醯胺)、RAF-265 (1-甲基-5-[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]吡啶-4-基]氧基-N-[4-(三氟甲基)苯基]苯并咪唑-2-胺)、2-溴生物鹼(2-Bromoaldisine) (2-溴-6,7-二氫-1H,5H-吡咯并[2,3-c]氮雜環庚三烯-4,8-二酮)、Raf激酶抑制劑IV (2-氯-5-(2-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-咪唑-4-基)苯酚)、索拉非尼N-氧化物(4-[4-[[[[4-氯-3(三氟甲基)苯基]胺基]羰基]胺基]苯氧基]-N-甲基-2-吡啶甲醯胺1-氧化物)、PLX-4720、達拉菲尼(dabrafenib) (GSK2118436)、GDC-0879、RAF265、AZ 628、SB590885、ZM336372、GW5074、TAK-632、CEP-32496、LY3009120及GX818 (恩可非尼(Encorafenib))。
在一個實施例中，該治療劑係程式化死亡蛋白1 (PD-1)抑制劑、程式化死亡蛋白配位體1 (PDL1)抑制劑、或程式化死亡蛋白配位體2 (PDL2)抑制劑。PD-1、PDL1及PDL2抑制劑係本技術中已知的，並包括例如納武單抗(nivolumab) (BMS)、帕姆單抗(pembrolizumab) (Merck)、彼地利株單抗(pidilizumab) (CureTech/Teva)、AMP-244 (Amplimmune/GSK)、BMS-936559 (BMS)、及MEDI4736 (Roche/Genentech)、及MPDL3280A (Genentech)。
在一個實施例中，可以持續方式投與治療劑。
在一個實施例中，該治療劑係單株抗體(MAb)。一些MAb刺激破壞癌細胞之免疫反應。類似於B細胞天然產生的抗體，此等MAb「覆蓋」癌細胞表面，觸發其被免疫系統破壞。例如，貝伐單抗(bevacizumab)靶向血管內皮生長因子(VEGF) (腫瘤微環境中腫瘤細胞及其他細胞所分泌的蛋白質)可促進腫瘤血管之發育。當結合至貝伐單抗時，VEGF不能與其細胞受體相互作用，從而阻止導致新血管生長之信號傳導。類似地，西妥昔單抗(cetuximab)及盤尼圖單抗(panitumumab)靶向表皮生長因子受體(EGFR)，及曲妥珠單抗(trastuzumab)靶向人類表皮生長因子受體2(HER-2)。結合至細胞表面生長因子受體之MAb可阻止標靶受體發送其尋常促生長信號。其等亦可觸發細胞凋亡並活化免疫系統以破壞腫瘤細胞。
其他藥劑可包括但不限於以下中之至少一者：他莫昔芬(tamoxifen)、咪達唑侖(midazolam)、來曲唑(letrozole)、硼替佐米(bortezomib)、阿那曲唑(anastrozole)、戈瑟瑞林(goserelin)、mTOR抑制劑、如以上所述的PI3激酶抑制劑、雙重mTOR-PI3K抑制劑、MEK抑制劑、RAS抑制劑、ALK抑制劑、HSP抑制劑(例如，HSP70及HSP 90抑制劑、或其組合)、如以上所述的BCL-2抑制劑、誘導凋亡之化合物、AKT抑制劑，包括但不限於MK-2206、GSK690693、哌立福新(Perifosine)、(KRX-0401)、GDC-0068、曲西立濱(Triciribine)、AZD5363、和厚樸酚(Honokiol)、PF-04691502、及米替福新(Miltefosine)、如以上所述的PD-1抑制劑，包括但不限於納武單抗、CT-011、MK-3475、BMS936558、及AMP-514、或FLT-3抑制劑，包括但不限於P406、多韋替尼(Dovitinib)、奎扎替尼(Quizartinib) (AC220)、阿莫伐替尼(Amuvatinib) (MP-470)、坦度替尼(Tandutinib) (MLN518)、ENMD-2076、及KW-2449、或其組合。mTOR抑制劑之實例包括但不限於雷帕黴素(rapamycin)及其類似物、依維莫司(everolimus) (Afinitor)、替西羅莫司(temsirolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)、西羅莫司(sirolimus)及地福莫司(deforolimus)。MEK抑制劑之實例包括但不限於曲美替尼/GSKl120212(N-(3-{3-環丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-6,8-二甲基-2,4,7-三側氧基-3,4,6,7-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-l(2H-基}苯基)乙醯胺)、司美替尼(6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-N-(2-羥基乙氧基)-3-甲基苯并咪唑-5-甲醯胺)、匹馬色替/AS703026/MSC1935369((S)-N-(2,3-二羥基丙基)-3-((2-氟-4-碘苯基)胺基)異菸鹼醯胺)、XL-518/GDC-0973(l-({3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]苯基}羰基)-3-[(2S)-哌啶-2-基]吖丁啶-3-醇) (考比替尼)、瑞法替尼(refametinib)//BAY869766/RDEAl19 (N-(3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基胺基)-6-甲氧基苯基)-1-(2,3-二羥基丙基)環丙烷-1-磺醯胺)、PD-0325901 (N-[(2R)-2,3-二羥基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-苯甲醯胺)、TAK733((R)-3-(2,3-二羥基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基胺基)-8-甲基吡啶并[2,3d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮)、MEK162/ARRY438162(5-[(4-溴-2-氟苯基)胺基]-4-氟-N-(2-羥基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲醯胺)、R05126766(3-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)-4-吡啶基]甲基]-4-甲基-7-嘧啶-2-基氧基色烯-2-酮)、WX-554、R04987655/CH4987655(3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)-N-(2-羥基乙氧基)-5-((3-側氧基-l,2-氧氮雜環己烷-2-基)甲基)苯甲醯胺)、或AZD8330(2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)-N-(2-羥基乙氧基)-1,5-二甲基-6-側氧基-l,6-二氫吡啶-3-甲醯胺)。RAS抑制劑之實例包括但不限於瑞利星(Reolysin)及siG12D LODER。ALK抑制劑之實例包括但不限於克唑替尼(Crizotinib)、色瑞替尼(Ceritinib) (Zykadia)、AP26113、及LDK378。HSP抑制劑包括但不限於格爾德黴素(Geldanamycin)或17-N-烯丙基胺基-17-去甲氧基格爾德黴素(17AAG)、及根赤殼菌素(Radicicol)。
在某些態樣中，該治療劑係抗炎劑、化療劑、放射性治療劑、另一治療劑、或免疫抑制劑。
在一個實施例中，化療劑係選自但不限於甲磺酸伊馬替尼(Gleevac®)、達沙替尼(Sprycel®)、尼洛替尼(Tasigna®)、博舒替尼(Bosulif®)、曲妥珠單抗(Herceptin®)、曲妥珠單抗-DM1、皮妥珠單抗(pertuzumab) (PerjetaTM)、拉帕替尼(Tykerb®)、吉非替尼(Iressa®)、厄洛替尼(Tarceva®)、西妥昔單抗(Erbitux®)、盤尼圖單抗(Vectibix®)、凡德他尼(Caprelsa®)、維羅非尼(Zelboraf®)、伏立諾他(vorinostat) (Zolinza®)、羅咪酯肽(romidepsin) (Istodax®)、貝沙羅汀(bexarotene) (Tagretin®)、阿曲諾英(alitretinoin) (Panretin®)、維甲酸(tretinoin) (Vesanoid®)、卡非替米(carfilizomib) (KyprolisTM)、普雷西酯(pralatrexate) (Folotyn®)、貝伐單抗(bevacizumab) (Avastin®)、ziv-aflibercept(ziv-阿柏西普) (Zaltrap®)、索拉非尼(Nexavar®)、舒尼替尼(Sutent®)、帕唑帕尼(Votrient®)、瑞格菲尼(Stivarga®)及卡博替尼(CometriqTM )。
另外化療劑包括但不限於放射性分子、毒素(亦稱為細胞毒素或細胞毒性劑，其包括對細胞之存活率有害之任何試劑)、及脂質體或包含化療化合物之其他囊泡。一般抗癌藥劑包括：長春新鹼(vincristine) (Oncovin®)或脂質體長春新鹼(Marqibo®)、柔紅黴素(daunorubicin) (道諾黴素(daunomycin)或Cerubidine®)或多柔比星(doxorubicin) (Adriamycin®)、阿糖胞苷(cytarabine) (胞嘧啶***糖苷(cytosine arabinoside)、ara-C、或Cytosar®)、L-天冬醯胺酸酶(Elspar®)或PEG-L-天冬醯胺酸酶(培門冬酶(pegaspargase)或Oncaspar®)、依托泊苷(etoposide) (VP-16)、替尼泊苷(teniposide) (Vumon®)、6-巰基嘌呤(6-MP或Purinethol®)、甲胺喋呤、環磷醯胺(Cytoxan®)、強的松(Prednisone)、***(dexamethasone) (Decadron)、伊馬替尼(Gleevec®)、達沙替尼(Sprycel®)、尼洛替尼(Tasigna®)、博舒替尼(Bosulif®)及帕納替尼(Iclusig™)。其他適宜化療劑之實例包括但不限於1-去氫睾固酮、5-氟尿嘧啶達卡巴嗪(decarbazine)、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、放線菌素D、阿黴素、阿地介白素(aldesleukine)、烷基化劑、異嘌呤醇鈉(allopurinol sodium)、六甲蜜胺、阿米福汀(amifostine)、阿那曲唑、蒽黴素(AMC)、抗有絲***劑、順-二氯二胺鉑(II) (DDP) (順鉑)、二胺基二氯鉑、蒽環黴素(anthracycline)、抗生素、抗代謝物、天冬醯胺酸酶、活性BCG(膀胱內)、倍他米松磷酸鈉(betamethasone sodium phosphate)及乙酸倍他米松(betamethasone acetate)、比卡魯胺(bicalutamide)、硫酸博來黴素(bleomycin sulfate)、白消安(busulfan)、白細胞生成素鈣(calcium leucouorin)、卡奇黴素(calicheamicin)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑(carboplatin)、洛莫司汀(lomustine) (CCNU)、卡莫司汀(carmustine) (BSNU)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑、克拉屈濱(cladribine)、秋水仙鹼(colchicin)、共軛***、環磷醯胺、阿糖胞苷、細胞鬆弛素B(cytochalasin B)、癌得星(cytoxan)、達卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素(dactinomycin)、放線菌素D(前名放線菌素)、道諾黴素HCL(daunirubicin HCL)、檸檬酸道諾黴素、地尼白介素(denileukin diftitox)、右雷佐生(Dexrazoxane)、二溴甘露醇、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、多烯紫杉醇(docetaxel)、甲磺酸多拉司瓊(dolasetron mesylate)、多柔比星HCL、屈***酚(dronabinol)、大腸桿菌L-天冬醯胺酸酶(E. coli L-asparaginase)、依米丁(emetine)、依泊汀-α(epoetin-α)、歐文氏L-天冬醯胺酸酶(Erwinia L-asparaginase)、酯化***、***、雌氮芥磷酸鈉(estramustine phosphate sodium)、溴化乙錠(ethidium bromide)、乙炔***、依替膦酸鹽(etidronate)、檸檬酸依托泊苷因子(etoposide citrororum factor)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、惠爾血(filgrastim)、氟尿苷(floxuridine)、氟康唑(fluconazole)、磷酸氟達拉濱(fludarabine phosphate)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟他胺(flutamide)、亞葉酸、吉西他濱HCL(gemcitabine HCL)、糖皮質激素、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、短桿菌肽D(gramicidin D)、格拉司瓊HCL(granisetron HCL)、羥基脲、伊達比星HCL(idarubicin HCL)、異環磷醯胺(ifosfamide)、干擾素α-2b、伊立替康HCL(irinotecan HCL)、來曲唑(letrozole)、亞葉酸鈣(leucovorin calcium)、乙酸亮丙瑞林、左美索HCL(levamisole HCL)、利多卡因(lidocaine)、洛莫司汀(lomustine)、類美登素(maytansinoid)、氮芥HCL(mechlorethamine HCL)、乙酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、美法崙HCL(melphalan HCL)、巰基嘌呤(mercaptipurine)、美司那(mesna)、甲胺蝶呤、甲基睪酮、光輝黴素(mithramycin)、絲裂黴素C、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、尼魯米特(nilutamide)、乙酸奧曲肽(octreotide acetate)、昂丹司瓊HCL(ondansetron HCL)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、帕米膦酸二鈉(pamidronate disodium)、噴托他丁(pentostatin)、毛果芸香鹼HCL(pilocarpine HCL)、普利黴素(plimycin)、具有卡莫司汀(carmustine)植入物之聚苯丙生20 (polifeprosan 20)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、普魯卡因(procaine)、丙卡巴肼HCL(procarbazine HCL)、普萘洛爾(propranolol)、利妥昔單抗(rituximab)、沙格司亭(sargramostim)、鏈尿黴素(streptozotocin)、他莫昔芬(tamoxifen)、紫杉醇(taxol)、替尼泊苷(teniposide)、替尼泊苷(tenoposide)、睾內酯(testolactone)、地卡因(tetracaine)、噻替哌苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、噻替哌(thiotepa)、拓樸替康HCL (topotecan HCL)、檸檬酸托瑞米芬(toremifene citrate)、曲妥珠單抗、維甲酸、伐蘆比星(valrubicin)、硫酸長春花鹼(vinblastine sulfate)、硫酸長春新鹼(vincristine sulfate)及酒石酸長春瑞濱(vinorelbine tartrate)。
其他治療劑可包括貝伐單抗、舒替尼(sutinib)、索拉非尼、2-甲氧基***或2ME2、非那舒那(finasunate)、凡他拉尼、凡德他尼、阿柏西普、伏洛昔單抗(volociximab)、伊瑞西珠單抗(etaracizumab) (MEDI-522)、西侖吉肽(cilengitide)、厄洛替尼、西妥昔單抗、盤尼圖單抗、吉非替尼、曲妥珠單抗、多韋替尼、氟吉妥單抗(figitumumab)、阿塞西普(atacicept)、利妥昔單抗(rituximab)、阿來組單抗(alemtuzumab)、阿地介白素、介白素-6 (atlizumab)、托珠單抗(tocilizumab)、替西羅莫司、依維莫司、魯卡木單抗(lucatumumab)、達西珠單抗(dacetuzumab)、HLL1、huN901-DM1、阿替莫德(atiprimod)、那他株單抗(natalizumab)、硼替佐米、卡非佐米(carfilzomib)、瑪利佐米(marizomib)、坦螺旋黴素(tanespimycin)、沙奎那韋甲磺酸鹽(saquinavir mesylate)、利托那韋(ritonavir)、奈非那韋甲磺酸鹽(nelfinavir mesylate)、因地那韋硫酸鹽(indinavir sulfate)、貝林司他(belinostat)、帕比司他(panobinostat)、麥妥木單抗(mapatumumab)、來沙木單抗(lexatumumab)、杜拉樂明(dulanermin)、ABT-737、奧利默森(oblimersen)、匹利地辛(plitidepsin)、他匹莫德(talmapimod)、P276-00、因紮他寧(enzastaurin)、替吡法尼(tipifarnib)、哌立福新、伊馬替尼、達沙替尼、來那度胺(lenalidomide)、撒利多胺(thalidomide)、辛伐他汀(simvastatin)、塞來昔布、巴多昔芬(bazedoxifene)、AZD4547、利妥木單抗(rilotumumab)、奧沙利鉑(oxaliplatin) (樂沙定(Eloxatin))、PD0332991(帕布昔利布(palbociclib))、瑞博西尼(ribociclib) (LEE011)、阿巴西尼(amebaciclib) (LY2835219)、HDM201、氟維司群(fulvestrant) (Faslodex)、依西美坦(exemestane) (Aromasin)、PIM447、魯索替尼(ruxolitinib) (INC424)、BGJ398、奈西木單抗(necitumumab)、培美曲塞(pemetrexed) (Alimta)、及雷莫蘆單抗(ramucirumab) (IMC-1121B)。
在本發明之一個態樣中，使用免疫抑制劑，其較佳係選自由以下組成之群：鈣調神經磷酸酶抑制劑，例如環孢菌素(cyclosporin)或子囊黴素(ascomycin)，例如環孢菌素A(NEORAL®)、FK506(他克莫司(tacrolimus))、吡美莫司(pimecrolimus) (mTOR抑制劑)，例如雷帕黴素(rapamycin)或其衍生物，例如西羅莫司(Sirolimus) (RAPAMUNE®)、依維莫司(Everolimus) (Certican®)、替西羅莫司(temsirolimus)、佐他莫司(zotarolimus)、拜利莫斯-7(biolimus-7)、拜利莫斯-9、雷帕洛(rapalog)，例如地磷莫司(ridaforolimus)、硫唑嘌呤(azathioprine)、卡帕什 1H(campath 1H)、S1P受體調節劑，例如芬格莫德(fingolimod)或其類似物、抗IL-8抗體、麥考酚酸(mycophenolic acid)或其鹽(例如鈉鹽)或其前藥，例如嗎替麥考酚酯(Mycophenolate Mofetil) (CELLCEPT®)、OKT3 (ORTHOCLONE OKT3®)、強的松、ATGAM®、THYMOGLOBULIN®、布雷喹納酸鈉(Brequinar Sodium)、OKT4、T10B9.A-3A、33B3.1、15-去氧斯匹胍素(deoxyspergualin)、曲培莫司(tresperimus)、來氟米特(來氟米特)ARAVA®、CTLAI-Ig、抗CD25、抗IL2R、巴利昔單抗(Basiliximab) (SIMULECT®)、達利珠單抗(Daclizumab) (ZENAPAX®)、咪唑立濱(mizorbine)、甲胺喋呤、***、ISAtx-247、SDZ ASM 981(吡美莫司(pimecrolimus)，Elidel®)、CTLA4lg(阿巴西普(Abatacept))、貝拉西普(belatacept)、LFA3lg、依那西普(etanercept) (由Immunex以Enbrel®出售)、阿達木單抗(adalimumab) (Humira®)、英夫利昔單抗(infliximab) (Remicade®)、抗LFA-1抗體、那他珠單抗(natalizumab) (Antegren®)、恩利瑪單抗(Enlimomab)、加維莫單抗(gavilimomab)、抗胸腺細胞免疫球蛋白、西普利珠單抗(siplizumab)、阿來福單抗(Alefacept efalizumab)、潘他沙(pentasa)、美沙拉嗪(mesalazine)，安莎可(asacol)、磷酸可待因(codeine phosphate)、貝諾酯(benorylate)、芬布芬(fenbufen)、萘普生(naprosyn)、雙氯芬酸(diclofenac)、依托度酸(etodolac)及吲哚美辛(indomethacin)、阿司匹林(aspirin)及布洛芬(ibuprofen)。
可從微粒洗脫之治療劑之類型之實例包括抗發炎藥、抗微生物劑、抗血管生成劑、免疫抑制劑、抗體、類固醇、眼用抗高血壓藥及其組合。治療劑之實例包括阿米卡星(amikacin)、乙酸阿奈可他(anecortane acetate)、蒽二酮(anthracenedione)、蒽環黴素(anthracycline)、唑類(azole)、兩性黴素B、貝伐單抗(bevacizumab)、喜樹鹼(camptothecin)、頭孢呋辛(cefuroxime)、氯黴素(chloramphenicol)、氯己定(chlorhexidine)、雙葡萄醣酸氯己定、克黴唑(clortrimazole)、克黴唑頭孢菌素(clotrimazole cephalosporin)、腎上腺皮質類固醇、***、地塞米宗(desamethazone)、益康唑(econazole)、頭孢齊定(eftazidime)、表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)、氟康唑(fluconazole)、氟胞嘧啶(flucytosine)、氟嘧啶、氟喹啉、加替沙星(gatifloxacin)、糖肽、咪唑、伊曲康唑(itraconazole)、伊佛黴素(ivermectin)、酮康唑(ketoconazole)、左氧氟沙星(levofloxacin)、大環內酯、咪康唑(miconazole)、硝酸咪康唑、莫西沙星(moxifloxacin)、納他黴素(natamycin)、新黴素(neomycin)、制黴菌素(nystatin)、氧氟沙星(ofloxacin)、聚六亞甲基雙胍、培尼皮質醇(prednisolone)、乙酸培尼皮質醇、哌加他尼(pegaptanib)、鉑類似物、多黏菌素B(polymicin B)、羥乙磺酸丙氧苯咪(propamidine isethionate)、嘧啶核苷、蘭尼單抗(ranibizumab)、乳酸角鯊胺(squalamine lactate)、磺醯胺、曲安西隴(triamcinolone)、曲安西隴丙酮化物(triamcinolone acetonide)、***、萬古黴素(vancomycin)、抗血管內皮生長因子(VEGF)藥物、VEGF抗體、VEGF抗體片段、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、噻嗎洛爾、倍他洛爾(betaxolol)、曲妥普前列素(travoprost)、拉坦***素(latanoprost)、百瑪***素(bimatoprost)、溴莫尼定、多佐胺(dorzolamide)、乙醯唑胺(acetazolamide)、毛果芸香鹼(pilocarpine)、環丙沙星(ciprofloxacin)、阿奇黴素(azithromycin)、健大黴素(gentamycin)、妥布黴素(tobramycin)、頭孢唑林(cefazolin)、伏立康唑(voriconazole)、更昔洛韋(gancyclovir)、西多福韋(cidofovir)、膦甲酸鹽(foscarnet)、雙氯芬酸(diclofenac)、萘帕芬胺(nepafenac)、酮咯酸(ketorolac)、布洛芬、吲哚美辛、氟米龍(fluoromethalone)、瑞美松隆(rimexolone)、阿奈可他(anecortave)、環孢黴素(cyclosporine)、甲胺喋呤、他克莫司及其組合。
免疫抑制劑之實例為鈣調神經磷酸酶抑制劑，例如環孢菌素或子囊黴素，例如環孢菌素A (NEORAL®)、FK506 (他克莫司)、吡美莫司(mTOR抑制劑)，例如雷帕黴素或其衍生物，例如西羅莫司(RAPAMUNE®)、依維莫司(Certican®)、替西羅莫司、佐他莫司、拜利莫斯-7、拜利莫斯-9、雷帕類似物，例如地磷莫司、硫唑嘌呤、卡帕什1H、S1P受體調節劑，例如芬格莫德或其類似物、抗IL-8抗體、麥考酚酸或其鹽(例如鈉鹽)或其前藥，例如嗎替麥考酚酯(CELLCEPT®)、OKT3 (ORTHOCLONE OKT3®)、強的松、ATGAM®、THYMOGLOBULIN®、布雷喹納酸鈉、OKT4、T10B9.A-3A、33B3.1、15-去氧斯匹胍素、曲培莫司、來氟米特(來氟米特)ARAVA®、CTLAI-Ig、抗CD25、抗IL2R、巴利昔單抗(SIMULECT®)、達利珠單抗(ZENAPAX®)、咪唑立濱、甲胺喋呤、***、ISAtx-247、SDZ ASM 981 (吡美莫司，Elidel®)、CTLA4lg(阿巴西普)、貝拉西普、LFA3lg、依那西普(由Immunex以Enbrel®出售)、阿達木單抗(Humira®)、英夫利昔單抗(Remicade®)、抗LFA-1抗體、那他珠單抗(Antegren®)、恩利瑪單抗、加維莫單抗、抗胸腺細胞免疫球蛋白、西普利珠單抗、阿來福單抗、潘他沙、美沙拉嗪，安莎可、磷酸可待因、貝諾酯、芬布芬、萘普生、雙氯芬酸、依托度酸及吲哚美辛、阿司匹林及布洛芬。
在某些實施例中，本發明之經表面處理之微粒可包含如以下所述的前藥。在描述於本說明書中之所有聚合物部分中，其中結構係被描述為嵌段共聚物(例如，「x」之嵌段接著係「y」之嵌段)，意指該聚合物可替代地係無規或交替共聚物(例如，「x」及「y」係隨機分佈或交替)。除非明確指出立體化學，否則具有對掌性中心之每個寡聚物之每個個別部分可以(R)或(S)構型或其混合物(包括外消旋混合物)於對掌性碳處呈現。
此外，具有具有對掌性碳之相同或不同單體之重複單元之前藥部分，例如包括但不限於聚乳酸、聚丙交酯-共聚-乙交酯或聚環氧丙烷之寡聚物，可與所有對掌性碳一起使用，均具有相同立體化學、無規立體化學(以單體或寡聚物計)、外消旋(以單體或寡聚物計)或有序但不同立體化學(諸如，在每個寡聚單元中，S對映異構體單元之嵌段接著係R對映異構體單元之嵌段)。在一些實施例中，乳酸係以其天然存在之S對映異構體形式使用。
表 A- 表 I 顯示包封在本發明之微粒中之示例性前藥。在本發明之一個態樣中，提供經溫和表面處理之微粒含在包含會改良微粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等微粒包含一或多種可生物降解聚合物及選自表A至表I之包封在可生物降解聚合物中之前藥。
本發明之一個態樣係一種用於治療疾病之方法，該方法包括對有此需要的宿主投與固體聚集用微粒含在包含添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等微粒包含有效量之選自本文所揭示的前藥之治療劑，其中該包含治療劑之固體聚集用微粒係注射至體內並活體內聚集以形成至少500 μm之至少一個集結粒，其提供持續藥物遞送至少一個月。表 A. 前藥之非限制性實例
化合物編號 結構
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表 B. 前藥之非限制性實例
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表 C. 前藥之非限制性實例
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表 D ： 前藥之非限制性實例
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表 E. 所選擇的本發明化合物
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表 F. 本發明之化合物
化合物編號 結構
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表 G. 本發明之化合物
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表 H. 本發明之其他化合物
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表 I. 本發明之其他化合物
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表 J. 合成化合物之非限制性實例
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表 K. 合成化合物之其他非限制性實例
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XV . 醫藥上可接受之載劑
根據本發明，可使用視需要包含會改良顆粒聚集之添加劑之任何適宜之醫藥上可接受之載劑，例如眼科上可接受之黏性載劑。載劑係以可有效提供所需黏度給藥物遞送系統之量存在。有利地，黏性載劑係以在佔藥物遞送顆粒之約0.5重量%至約95重量%之範圍內的量存在。所使用的黏性載劑之具體量取決於許多因素，包括例如但不限於所使用的特定黏性載劑、所使用的黏性載劑之分子量、所製備及/或所使用的本發明藥物遞送系統所需的黏度及類似因素。可用的黏性載劑之實例包括但不限於透明質酸、透明質酸鈉、卡波姆(carbomer)、聚丙烯酸、纖維素衍生物、聚卡波菲(polycarbophil)、聚乙烯吡咯啶酮、明膠、糊精、多醣、聚丙烯醯胺、聚乙烯醇(其可係部分水解之聚乙酸乙烯酯)、聚乙酸乙烯酯、其衍生物及其混合物。
載劑亦可係水性載劑。水性載劑之實例包括但不限於水性溶液或懸浮液，諸如鹽水、血漿、骨髓抽吸液、緩衝液(諸如漢克氏緩衝鹽溶液(HBSS))、HEPES (4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、林格氏緩衝液、ProVisc®、稀釋的ProVisc®、經PBS稀釋之ProVisc®、Krebs緩衝液、杜貝卡氏PBS、尋常PBS；透明質酸鈉溶液(HA，5 mg/mL含於PBS中)、模擬體液、血漿血小板濃縮物及組織培養基或包含有機溶劑之水性溶液或懸浮液。
在一個實施例中，該載劑係PBS。
在一個實施例中，該載劑係HA，5 mg/mL含於PBS中。
在一個實施例中，該載劑係經水稀釋之ProVisc®。
在一個實施例中，該載劑係含在PBS中之ProVisc®稀釋液。
在一個實施例中，該載劑係經水5倍稀釋之ProVisc®。
在一個實施例中，該載劑係含在PBS中之ProVisc® 5倍稀釋液。
在一個實施例中，該載劑係經水10倍稀釋之ProVisc®。
在一個實施例中，該載劑係含在PBS中之ProVisc® 10倍稀釋液。
在一個實施例中，該載劑係利用水之ProVisc® 20倍稀釋液。
在一個實施例中，該載劑係含在PBS中之ProVisc® 20倍稀釋液。
在一個實施例中，該載劑係HA，1.25 mg/mL含在具有中性pH之等滲緩衝溶液中。
在一個實施例中，該載劑係HA，0.625 mg/mL含在具有中性pH之等滲緩衝溶液中。
在一個實施例中，該載劑係HA，0.1-5.0 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該載劑係HA，0.5-4.5 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該載劑係HA，1.0-4.0 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該載劑係HA，1.5-3.5 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該載劑係HA，2.0-3.0 mg/mL含在PBS中。
在一個實施例中，該載劑係HA，2.5-3.0 mg/mL含在PBS中。
載劑可視需要包含一或多種懸浮劑。懸浮劑可係選自羧甲基纖維素(CMC)、甘露醇、聚山梨醇酯、聚丙二醇、聚乙二醇、明膠、白蛋白、藻酸鹽、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥乙基甲基纖維素(HEMC)、膨潤土、黃蓍膠、糊精、芝麻油、杏仁油、蔗糖、***膠(acacia gum)及黃原膠及其組合。
在一個實施例中，為進一步影響釋放速率，亦可包含一或多種其他賦形劑或遞送增強劑，例如表面活性劑及/或水凝膠。XVI . 醫藥上活性化合物之持續釋放
醫藥活性化合物之釋放速率與溶解在經表面處理之微粒中之醫藥活性化合物之濃度有關。在一些實施例中，經表面處理之微粒之聚合物組合物包含非治療劑，該非治療劑係經選擇以提供所需醫藥活性化合物溶解度。可進行聚合物組合物之選擇以提供醫藥活性化合物在經表面處理之微粒中之所需溶解度，例如，水凝膠可促進親水性材料之溶解度。在一些實施例中，可添加官能基至聚合物以增加醫藥活性化合物在經表面處理之微粒中之所需溶解度。在一些實施例中，添加劑可用於控制醫藥活性化合物之釋放動力學，例如，添加劑可用於藉由增加或降低醫藥活性化合物在聚合物中之溶解度來控制醫藥活性化合物之濃度，從而控制醫藥活性化合物之釋放動力學。溶解度可藉由包含會增加及/或降低醫藥活性化合物之溶解形式在經表面處理之微粒中之溶解度之適宜分子及/或物質來控制。醫藥活性化合物之溶解度可與經表面處理之微粒及醫藥活性化合物之疏水及/或親水性質有關。可添加油及疏水性分子至聚合物以增加醫藥活性化合物在經表面處理之微粒中之溶解度。
代替或除了基於溶解在經表面處理之微粒中之醫藥活性化合物之濃度來控制遷移速率之外，可控制聚合物組合物之表面積以達成藥物從包含醫藥活性化合物之經表面處理之微粒遷移出來所需的速率。例如，較大的暴露表面積將增加醫藥活性化合物向表面的遷移速率，而較小的暴露表面積將降低醫藥活性化合物向表面的遷移速率。可以任何多種方式，例如，藉由暴露表面之城堡形化(具有與淚液或淚膜連接之暴露通道之多孔表面)，暴露表面之凹痕化，或暴露表面之突起化，來增加暴露表面積。可藉由添加可溶解的鹽使暴露表面多孔且一旦鹽溶解就會離開多孔腔。在本發明中，可使用此等趨勢來藉由避免此等路徑降低活性物質自聚合物組合物之釋放速率以更快釋放。例如，可使表面積最小化，或可避免通道。
在使用超過一種類型之聚合物的情況下，每個經表面處理之微粒可具有不同固化或凝固性質。例如，經表面處理之微粒可自相似聚合物製備但可具有不同膠凝pH或不同熔融溫度或玻璃化轉變點。
為使經表面處理之微粒形成固結聚集物，顆粒周圍的溫度(例如，在投與組合物的人類或非人類動物中)約等於或高於聚合物顆粒之玻璃化轉變溫度(Tg )。在此等溫度下，聚合物顆粒將與一或多種其他聚合物顆粒交聯以形成固結聚集物。交聯意指相鄰聚合物顆粒接合在一起。例如，由於在一個顆粒之表面之聚合物鏈與在另一顆粒之表面處之聚合物鏈的纏結，顆粒可交聯。相鄰顆粒之間可存在黏著、黏聚或融合。
通常，由聚合物或聚合物摻合物形成之可注射之經表面處理之微粒之玻璃化轉變溫度(Tg )接近或剛好高於體溫(諸如約30℃至45℃，例如，約35℃至40℃，例如，約37℃至40℃)。因此，在室溫下，經表面處理之微粒低於其Tg 並表現為離散顆粒，但是在體內，經表面處理之微粒軟化並相互作用/黏附於自身。通常，聚結在溫度從室溫升高到體溫後的20秒至約15分鐘內開始。
經表面處理之微粒可由Tg 為約35℃至40℃，例如約37℃至40℃之聚合物形成，其中該聚合物為聚(α-羥基酸) (諸如PLA、PGA、PLGA或PDLLA或其組合)、或其與PLGA-PEG之摻合物。通常，此等顆粒在體溫下會聚結。可注射之經表面處理之微粒可僅包含聚(α-羥基酸)顆粒或可包含其他顆粒類型。微粒可由具有在體溫或高於體溫之Tg 之聚(D,L-丙交酯-共聚-乙交酯) (PLGA)、PLGA-PEG及PVA之摻合物形成。在一個實施例中，在體溫下，經表面處理之微粒將相互作用以形成固結聚集物。可注射之微粒可僅包含經PLGA/PLGA-PEG/PVA表面處理之微粒或可包含其他微粒類型。
該組合物可包含溫度敏感之經表面處理之微粒及非溫度敏感之經表面處理之微粒之混合物。非溫度敏感之經表面處理之微粒係具有高於意欲使用該組合物的溫度之玻璃化轉變溫度之顆粒。通常，在包含溫度敏感之經表面處理之微粒及非溫度敏感之顆粒之混合物之組合物中，溫度敏感之經表面處理之微粒與非溫度敏感之經表面處理之微粒之比為約3:1或更低，例如4:3。當組合物之溫度升高至或高於此等微粒之玻璃化轉變時，溫度敏感之經表面處理之微粒能夠有利地彼此交聯。藉由控制溫度敏感之經表面處理之微粒與非溫度敏感之經表面處理之微粒之比，可操縱所得固結聚集物之孔隙率。經表面處理之微粒可係固體，亦即具有固體外表面，或其等可係多孔。顆粒之形狀可係不規則的或實質上球形的。
經表面處理之微粒若其等係實質上球形則其最大尺寸或直徑可為小於約100 μm且大於約1 μm。經表面處理之微粒之最長尺寸或直徑可為小於約100 μm。經表面處理之微粒之最長尺寸或直徑可為約1 μm至約40 μm，更通常，為約20 μm至約40 μm。所需尺寸之聚合物顆粒將通過孔徑為約40 μm之篩或過濾器。
一旦投與給人類或非人類動物，自組合物形成固結聚集物通常需要約20秒至約24小時，例如，約1分鐘至約5小時、約1分鐘至約1小時、少於約30分鐘、少於約20分鐘。通常，固化在投藥後約1分鐘至約20分鐘之間發生。
通常，該組合物包含約20%至約80%之可注射之經表面處理之微粒材料及約20%至約80%之載劑；約30%至約70%之可注射之經表面處理之微粒材料及約30%至約70%之載劑；例如，該組合物可包含約40%至約60%之可注射之經表面處理之微粒材料及約40%至約60%之載劑；該組合物可包含約50%之可注射之經表面處理之微粒材料及約50%之載劑。前述百分比均指重量百分比。
經表面處理之微粒例如在該經表面處理之微粒中或呈該經表面處理之微粒上之塗層負載有醫藥活性化合物。
本發明之系統可允許醫藥活性化合物釋放持續一段時間，例如，釋放可持續至少約2小時、至少約4小時、至少約6小時、至少約10小時、至少約12小時、至少約24小時、至少48小時、至少一週、超過一週、至少一個月、至少兩個月、至少三個月、至少四個月、至少五個月、至少六個月、至少七個月、至少八個月、至少九個月、至少十個月、至少十一個月、至少十二個月或以上。
在一個實施例中，在24小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約1%至約5%之總有效負載。
在一個實施例中，在24小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約10%之總有效負載。
在一個實施例中，在24小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約15%之總有效負載。
在一個實施例中，在24小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約20%之總有效負載。
在一個實施例中，在12小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約1%至約5%之總有效負載。
在一個實施例中，在12小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約5%至約10%之總有效負載。
在一個實施例中，在12小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約10%之總有效負載。
在一個實施例中，在12小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約15%之總有效負載。
在一個實施例中，在12小時時間內，活體內產生集結粒之固體聚集用微粒釋放治療劑而不會突釋超過約20%之總有效負載。
在一個實施例中，醫藥活性化合物係以可有效具有所需局部或全身生理或藥理效應的量釋放。
在一個實施例中，醫藥活性化合物之遞送意指醫藥活性化合物從固結聚集物釋放至固結聚集物周圍的環境(例如玻璃體液)中。
在一個實施例中，一旦形成固結聚集物，本發明之包含醫藥活性化合物之微粒允許醫藥活性化合物自固結聚集物之釋放速率為實質上零或一階。零階釋放速率係醫藥活性化合物在指定時間內之恆定釋放；此種釋放係使用已知遞送方法難以達成的。
XVII . 固體聚集用微粒、注射液及懸浮液之非限制性實施例包括： (I) 一種經表面改性之聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在至少一種可生物降解之聚合物中之本文所揭示的治療劑，其中該等微粒： (i) 具有具有小於10%孔隙率(以孔隙空間與總體積之比計)之實芯； (ii) 已經表面改性以使表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已於溫和條件下在低於約18℃之溫度下進行處理； (iii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間；及 (iv) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
( II ) 一種經表面改性之聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在選自PLA及PLGA之至少一種可生物降解之聚合物、及共價結合至親水性聚合物之至少一種疏水性聚合物中之本文所揭示的治療劑，其中該等微粒： (i) 具有具有小於10%孔隙率(以孔隙空間與總體積之比計)之實芯； (ii) 已經表面改性以使表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已於溫和條件下在低於約18℃之溫度下進行處理； (iii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間；及 (iv) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
(III) 一種經表面改性之聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在至少一種可生物降解之聚合物中之本文所揭示的治療劑，其中該微粒： (i) 具有具有小於10%孔隙率(以孔隙空間與總體積之比計)之實芯； (ii) 已經表面改性以使表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已於溫和條件下在低於約18℃之溫度下進行處理； (iii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間； (iv) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒；及 (v) 其中該懸浮液已在小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托、或小於5托之壓力下經真空處理1至90分鐘。
(IV) 一種經表面改性之聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在至少一種可生物降解之聚合物中之本文所揭示的治療劑，其中該等微粒： (i) 已經表面改性以使表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已於溫和條件下在低於約18℃之溫度下進行處理； (ii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間；及 (iii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
(V) 一種經表面改性之聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在選自PLA及PLGA之至少一種可生物降解之聚合物、及共價結合至親水性聚合物之至少一種疏水性聚合物中之本文所揭示的治療劑，其中該等微粒： (i) 已經表面改性以使表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已於溫和條件下在低於約18℃之溫度下進行處理； (ii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間；及 (iii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
(VI) 一種經表面改性之聚集用微粒含在包含會改良活體內顆粒聚集之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在至少一種可生物降解之聚合物中之本文所揭示的治療劑，其中該微粒： (i) 已經表面改性以使表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已於溫和條件下在低於約18℃之溫度下進行處理； (ii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間； (iii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少三個月之至少500 μm之至少一個集結粒；及 (iv) 其中該懸浮液已在小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托、或小於5托之壓力下經真空處理1至90分鐘。
特定實施例包括： a. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其係適於選自由玻璃體內、基質內、前房內、眼球筋膜囊下、視網膜下、眼球後、眼球周、脈絡膜上、脈絡膜下、結膜、結膜下、鞏膜外、近後部鞏膜、角膜周及淚管注射組成之群之遞送途徑。 b. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該至少一個集結粒係能夠持續遞送至少四個月、至少五個月、至少六個月、至少七個月、至少八個月、至少九個月、或至少十個月。 c. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在約14至約12之pH下進行。 d. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在約12至約10之pH下進行。 e. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在約10至約8之pH下進行。 f. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在約6.5至約7.5之pH下進行。 g. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在約1至約6之pH下進行。 h. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在不大於9之pH下進行。 i. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於約16℃之溫度下進行。 j. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於約10℃之溫度下進行。 k. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於約8℃之溫度下進行。 l. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於約5℃之溫度下進行。 m. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於約2℃之溫度下進行。 n. 如(II)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該共價結合至親水性聚合物之疏水性聚合物係共價結合至聚乙二醇之聚(D,L-丙交酯-共聚-乙交酯) (PLGA-PEG)。 o. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLA及PLGA-PEG。 p. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLA及PLGA-PEG及PLA與PLGA-PEG之重量比為約99/1。 q. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLGA及PLGA-PEG。 r. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLGA及PLGA-PEG及PLA與PLGA-PEG之重量比為約99/1。 s. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLA/PLGA PLGA-PEG。 t. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLA/PLGA PLGA-PEG及PLA/PLGA/PLGA-PEG之重量比為約5/95/1、10/90/1、15/85/1、20/80/1、25/75/1、30/70/1、35/65/1、40/60/1、45/55/1、50/50/1、55/45/1、60/40/1、65/35/1、70/30/1、75/25/1、80/20/1、85/15/1、90/10/1、95/5/1或100/1/1。 u. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLA/PLGA PLGA-PEG及PLA/PLGA/PLGA-PEG之重量比為約95/5/1。 v. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLA/PLGA PLGA-PEG及PLA/PLGA/PLGA-PEG之重量比為約90/10/1。 w. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLA/PLGA PLGA-PEG及PLA/PLGA/PLGA-PEG之重量比為約70/30/1。 x. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含(i) PLGA；(ii) PLGA，其中(ii)中之PLGA具有不同於(i)中之PLGA之丙交酯與乙交酯比；及PLGA-PEG。 y. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLGA50:50、PLGA75:25、及PLGA-PEG。 z. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLGA50:50、PLGA85:15及PLGA-PEG。 aa. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含PLGA85:15、PLGA75:25及PLGA-PEG。 bb. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該PLA係酯封端的。 cc. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該PLA係酸封端的。 dd. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒之平均直徑係在約20 μm與30 μm之間。 ee. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒之平均直徑係在約20 μm與50 μm之間。 ff. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒之平均直徑係在約25 μm與35 μm之間。 gg. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒之平均直徑係在約20 μm與40 μm之間。 hh. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒之平均直徑係在約25 μm與40 μm之間。 ii. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係藥品。 jj. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係如本文所述的前藥。 kk. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 ll. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係蘋果酸舒尼替尼。 mm. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係阿托品、毛果芸香鹼或α-硫辛酸。 nn. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自替伐辛尼、伊馬替尼、吉非替尼及厄洛替尼。 oo. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自拉帕替尼、卡納替尼、司馬沙尼及凡他拉尼。 pp. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自索拉非尼、阿西替尼、帕唑帕尼及達沙替尼。 qq. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自尼洛替尼、克唑替尼、魯索替尼、凡德他尼及維羅非尼。 rr. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自博舒替尼、卡博替尼、瑞格菲尼、維莫德吉及帕納替尼。 ss. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自呋塞米、布美他尼、吡咯他尼、依他尼酸、依托唑啉及奧唑林酮。 tt. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面活性劑係聚乙烯醇。 uu. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自表A至I或其醫藥上可接受之鹽。 vv. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係
Figure 02_image845
或其醫藥上可接受之鹽。 ww. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係
Figure 02_image861
或其醫藥上可接受之鹽。 xx. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係
Figure 02_image863
或其醫藥上可接受之鹽。 yy. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係苄醇。 zz. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係檸檬酸三乙酯。 aaa. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係選自聚乙二醇、N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)、2-吡咯啶酮及DMSO。 bbb. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係選自三乙酸甘油酯、乙酸苄酯、苯甲酸苄酯及檸檬酸乙醯基三丁酯。 ccc. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係選自癸二酸二丁酯、二甲基鄰苯二甲酸酯、O-乙醯基檸檬酸三丁酯、乙醇及甲醇。 ddd. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係選自聚山梨醇酯80、乙酸乙酯、碳酸丙二酯及乙酸異丙酯。 eee. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係選自乙酸甲酯、甲基乙基酮、乳酸丁酯及異戊酸。 fff. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該稀釋劑進一步包含黏性增強劑。 ggg. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該稀釋劑係透明質酸。 hhh. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該稀釋劑係透明質酸鈉。 iii. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含約0.001%至約1%之表面活性劑 jjj. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLGA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 kkk. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含苄醇之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLGA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 lll. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含檸檬酸三乙酯之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLGA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 mmm. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 nnn. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含苄醇之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 ooo. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含檸檬酸三乙酯之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 ppp. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLGA、PLA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 qqq. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含苄醇之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLGA、PLA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 rrr. 如(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)之經表面改性之固體聚集用微粒含在包含檸檬酸三乙酯之稀釋劑中之懸浮液，其中該經表面改性之固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在PLGA、PLA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。 sss. 一種如以上實施例中任一項之藥物組合物，其係適於注射。 ttt. 一種如以上實施例中任一項之藥物組合物，其係適於選自由玻璃體內、基質內、前房內、眼球筋膜囊下、視網膜下、眼球後、眼球周、脈絡膜上、脈絡膜下、結膜、結膜下、鞏膜外、近後部鞏膜、角膜周及淚管注射組成之群之遞送途徑。XVIII . 微粒之製造 微粒之形成
可使用本技術中已知的用於形成聚合物微粒之任何適宜方法來形成微粒。用於顆粒形成之方法將取決於多種因素，包括存在於藥物或聚合物基質中之聚合物之特性、以及所需粒度及尺寸分佈。併入微粒中之藥物之類型亦可係一個因素，因為一些藥物在某些溶劑之存在下、在某些溫度範圍內及/或在某些pH範圍內係不穩定。
平均粒度在1微米與100微米之間的顆粒可用於本文所述的組合物中。在典型實施例中，顆粒之平均粒度係在1微米與40微米之間，更通常在約10微米與約40微米之間，更通常在約20微米與約40微米之間。顆粒可具有任何形狀但一般為球形。
在需要顆粒之單分散群體之情況下，可使用產生微粒之單分散群體之方法來形成顆粒。可替代地，可使用產生多分散微粒分佈之方法，及可在顆粒形成之後使用本技術中已知的方法(諸如篩分)來分離顆粒以提供具有所需平均粒度及粒度分佈之顆粒之群體。
用於製備微粒之常用的技術包括但不限於溶劑蒸發、熱熔顆粒形成、溶劑去除、噴霧乾燥、相轉化、凝聚及低溫澆鑄。以下簡述顆粒調配之適宜方法。醫藥上可接受之賦形劑(包括pH調節劑、崩解劑、防腐劑及抗氧化劑)可視需要在顆粒形成期間併入至顆粒中。
在一個實施例中，使用連續化學製造方法來製備經表面處理之微粒。在一個實施例中，使用逐步製造方法來製備經表面處理之微粒。
在一個實施例中，可如PCT/US2015/065894中所述製備包含治療劑之微粒。在一個實施例中，藉由以下製備微粒： (i) 將治療劑或其鹽溶解或分散在有機溶劑中，視需要與鹼性試劑一起； (ii) 將步驟(i)之溶液/分散液與具有至少約300 cP(或可能至少約350、400、500、600、700或800 cP或以上)之黏度之聚合物溶液混合； (iii) 將步驟(ii)之治療劑聚合物溶液/分散液與非酸性或鹼性水溶液(例如，pH為至少約7、8或9且通常不高於約10)，視需要與表面活性劑或乳化劑混合，以形成包封溶劑負載之治療劑之微粒， (iv) 分離該等微粒。
在一個實施例中，該治療劑係舒尼替尼。
已發現在有機溶劑中包含鹼性試劑可係有用的。然而，如PCT/US2015/065894中所述，已發現添加酸至有機溶劑可改良微粒之藥物負載。實例證實聚酯(諸如PLGA、PEG-PLGA (PLA)及PEG-PLGA/PLGA摻合物微粒)展現治療劑或其醫藥上可接受之鹽之持續釋放。使用單乳液溶劑蒸發法製備由負載有治療劑之共價結合至PLGA (Mw 45 kDa)的PLGA及PEG (PLGA45k-PEG5k)組成之聚合物微粒。藉由增加水溶液之pH進一步增加治療劑負載。藉由增加聚合物濃度或黏度，達成微粒中治療劑負載之再進一步顯著增加。在一個實施例中，該治療劑係舒尼替尼。溶劑蒸發
在該方法中，將藥物(或聚合物基質及藥物)溶解在揮發性有機溶劑中，諸如二氯甲烷、丙酮、乙腈、2-丁醇、2-丁酮、第三丁醇、苯、氯仿、環己烷、1,2-二氯乙烷、***、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、己烷、甲醇、甲基第三丁基醚、戊烷、石油醚、異丙醇、正丙醇、四氫呋喃或其混合物。然後將包含藥物之有機溶液懸浮在包含表面活性劑(諸如聚(乙烯醇))之水溶液中。攪拌所得乳液直到大部分有機溶劑蒸發，留下固體微粒。用水洗滌所得微粒並在凍乾機中乾燥過夜。可藉由該方法獲得具有不同尺寸及形態之微粒。
包含不穩定聚合物(諸如某些聚酸酐)之微粒可在製造製程期間由於存在水而降解。對於此等聚合物，可使用在完全無水有機溶劑中進行的以下兩種方法。油包油乳液技術
溶劑去除亦可用於自水解不穩定之藥物製備顆粒。在該方法中，將藥物(或聚合物基質及藥物)分散或溶解在揮發性有機溶劑中，諸如二氯甲烷、丙酮、乙腈、苯、2-丁醇、2-丁酮、第三丁醇、氯仿、環己烷、1,2-二氯乙烷、***、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、己烷、甲醇、甲基第三丁基醚、戊烷、石油醚、異丙醇、正丙醇、四氫呋喃或其混合物。然後藉由在有機油(諸如矽油、蓖麻油、石蠟油或礦物油)中攪拌懸浮該混合物以形成乳液。由乳液形成固體顆粒，其可於隨後自上清液分離。用該技術生產的球體之外部形態高度依賴於藥物之身份。水包油乳液技術
在該方法中，將藥物(或聚合物基質及藥物)分散或溶解在揮發性有機溶劑中，諸如二氯甲烷、丙酮、乙腈、苯、2-丁醇、2-丁酮、第三丁醇、氯仿、環己烷、1,2-二氯乙烷、***、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、己烷、甲醇、甲基第三丁基醚、戊烷、石油醚、異丙醇、正丙醇、四氫呋喃或其混合物。然後藉由在表面活性劑(諸如聚(乙烯醇))之水溶液中攪拌來懸浮該混合物以形成乳液。由乳液形成固體顆粒，其可於隨後自上清液分離。用該技術生產的球體之外部形態高度依賴於藥物之身份。
如PCT/US2015/065894中所述，可使用水包油乳液法製備具有治療劑之微粒。在一個實例中，藉由將100 mg PEG-PLGA (5K, 45)溶解在1 mL二氯甲烷中，並將20 mg蘋果酸舒尼替尼溶解在0.5 mL DMSO及三乙胺中，來製備舒尼替尼微粒。然後將該等溶液混合在一起，以5000 rpm均質化1分鐘，形成包含1%聚乙烯醇(PVA)之水溶液並攪拌2小時。收集顆粒，用雙蒸餾水洗滌，並冷凍乾燥。在另一個實例中，亦根據PCT/US2015/065894藉由將200 mg PLGA (2A，Alkermers)溶解在3 mL二氯甲烷中，並將40 mg蘋果酸舒尼替尼溶解在0.5 mL DMSO及三乙胺中，來製備舒尼替尼微粒。然後將該等溶液混合在一起並在1% PVA中以5000 rpm均質化1分鐘並攪拌2小時。收集顆粒，用雙蒸餾水洗滌，並冷凍乾燥。噴霧乾燥
在該方法中，將藥物(或聚合物基質及藥物)溶解在有機溶劑中，諸如二氯甲烷、丙酮、乙腈、2-丁醇、2-丁酮、第三丁醇、苯、氯仿、環己烷、1,2-二氯乙烷、***、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、己烷、甲醇、甲基第三丁基醚、戊烷、石油醚、異丙醇、正丙醇、四氫呋喃或其混合物。將該溶液泵送通過藉由壓縮氣體流驅動的微粉化噴嘴，並將所得氣溶膠懸浮在經加熱之空氣旋風中，使溶劑自微滴蒸發，形成顆粒。可使用該方法獲得在0.1至10微米範圍內之顆粒。相逆轉
可使用相逆轉方法自藥物形成顆粒。在該方法中，將藥物(或聚合物基質及藥物)溶解在溶劑中，並將該溶液倒入至強非溶劑中，以使藥物在有利條件下自發產生微粒或奈米粒子。該方法可用於生產各種尺寸(包括例如約100奈米至約10微米)之通常具有窄粒度分佈之奈米粒子。凝聚
使用凝聚形成顆粒之技術係本技術中(例如GB-B-929 406；GB-B-929 40 1；及美國專利第3,266,987號、第4,794,000號及第4,460,563號中)已知的。凝聚涉及將藥物(或聚合物基質及藥物)溶液分離成兩個不混溶液相。一個相係緻密凝聚物相，其包含高濃度之藥物，而第二相包含低濃度之藥物。在緻密凝聚物相中，藥物形成奈米級或微米級液滴，其硬化為顆粒。凝聚可藉由溫度變化、添加非溶劑或添加微鹽(簡單凝聚)，或藉由添加另一聚合物從而形成互聚物複合物(複合物凝聚)來誘導。低溫澆鑄
用於極低溫澆鑄受控式釋放微球之方法描述於Gombotz等人之美國專利第5,019,400號中。在該方法中，將藥物(或聚合物基質及舒尼替尼)溶解在溶劑中。然後將該混合物在低於藥物溶液凝固點(其會冷凍藥物液滴)之溫度下霧化至包含液體非溶劑之容器中。當藥物之液滴及非溶劑變熱時，液滴中之溶劑融化並被萃取至非溶劑中，從而硬化微球。擴大規模
描述於實例中之用於製備微粒之方法可藉由本技術中已知的方法來適合擴大規模。此類方法之實例包括美國專利4,822,534；美國專利5,271,961；美國專利5,945,126；美國專利6,270,802；美國專利6,361,798；美國專利8,708,159；及美國公開案2010/0143479。美國專利4,822,534描述一種可提供固體微球之製造方法，該方法涉及使用分散液。此等分散液可工業上生產並可擴大規模。美國專利5,271,961揭示蛋白質微球之生產，該生產涉及使用通常低於45℃之低溫。美國專利5,945,126描述以全生產規模生產微粒同時維持實驗室規模所觀察到的尺寸均勻性之製造方法。美國專利6,270,802及美國專利6,361,798描述在維持無菌區域的同時製造聚合物微粒之大規模方法。美國專利8,708,159描述使用水力旋流器設備以規模處理微粒。美國公開案2010/0143479描述以大規模製造專門用於緩慢釋放微粒之微粒之方法。
XSpray已揭示一種將超臨界流體用來生產尺寸低於10 µM之顆粒之裝置及用途(美國專利8,167,279)。XSpray之其他專利包括美國專利8,585,942及美國專利8,585,943。Sun Pharmaceuticals已揭示一種用於製造微球或微膠囊之方法，WO 2006/123359，以引用的方式併入本文中。舉例而言，方法A涉及五個步驟，其中包括1)製備包含治療活性成分、可生物降解之聚合物及有機溶劑之第一分散相，2)將該第一分散相與水相混合以形成乳液，3)將該乳液噴霧至經配備以去除有機溶劑之容器中及4)使所得微球或微膠囊通過第一及第二篩，從而收集分級尺寸之微球或微膠囊及5)乾燥該等微球或微膠囊。
Xu, Q.等人已揭示使用微流體流動聚焦裝置製備單分散之可生物降解聚合物微粒(Xu, Q.等人，「Preparation of Monodispersed Biodegradable Polymer Microparticles Using a Microfluidic Flow-Focusing Device for Controlled Drug Delivery」，Small，第5卷(13)：1575-1581，2009)。
Duncanson, W.J.等人已揭示一種將微流體裝置於產生微球之用途(Duncanson, W.J.等人「Microfluidic Synthesis of Monodisperse Porous Microspheres with Size-tunable Pores」，Soft Matter，第8卷，10636-10640, 2012)。
Evonik的美國專利第8,916,196號描述可與本發明結合使用的用於製備基於乳液之微粒之設備及方法。XX . 實例 縮寫
DCM、CH2 Cl2 二氯甲烷
DL 藥物負載
DMSO 二甲基亞碸
EtOH 乙醇
HA 透明質酸鈉
hr、h 小時
min 分鐘
NaOH 氫氧化鈉
NSTMP 未經表面處理之微粒
PBS 杜貝卡氏磷酸鹽緩衝鹽水
PCL 聚己酸內酯
PEG 聚乙二醇
PLA 聚(乳酸)
PLGA 聚(乳酸-共聚-乙醇酸)
PVA 聚乙烯醇
Rpm 每分鐘轉數
RT、r.t. 室溫
SD 標準偏差
STMP 經表面處理之微粒
UV 紫外線
實例1至4首先在U.S.S.N 15/349,985及PCT/US16/61706中提出並在本文中再次提供以作為本文所述的改良的本發明之背景資訊。圖14A至14C及圖15首次在U.S.S.N.15/976,847及PCT/US18/32167中提出並在本文中再次提供以作為本文所述的改良的本發明之背景資訊。一般方法
所有無水反應均在無水氬氣或氮氣氛圍下使用無水溶劑進行。起始材料、中間物及最終產物之結構係藉由包括NMR光譜及質譜之標準分析技術證實。材料
氫氧化鈉(NaOH，目錄號：S318-1，Fisher Chemical)、乙醇(EtOH，目錄號：A405-20，Fisher Chemical)、杜貝卡氏磷酸鹽緩衝鹽水(PBS，目錄號：SH3085003，GE Healthcare HyCloneTM )、透明質酸鈉(HA，目錄號：AC251770010，Acros Organics)及Tween 20(目錄號：BP337-100，Fisher BioReagents)係購自Fisher Scientific。聚乙烯醇(PVA) (88%水解，MW為約25kD) (目錄號：02975)係購自Polysciences, Inc.。舒尼替尼係購自LC Laboratories (目錄號：S-8803)。ProVisc® (10 mg/mL，0.85 mL，目錄號：21989，Alcon)係購自Besse Medical。聚(乳酸-共聚-乙醇酸) (PLGA)聚合物、聚(乳酸) (PLA)聚合物、及PLGA及聚乙二醇之二嵌段共聚物(PLGA-PEG)係購自Evonik Corporation (RESOMER Select 5050 DLG mPEG 5000 (10重量% PEG))。將FreeZone 4.5升臺式冷凍乾燥系統用於凍乾。
ProVisc® OVD (眼科黏彈性外科裝置(Ophthalmic Viscosurgical Device))係溶解在生理氯化鈉磷酸鹽緩衝液中之透明質酸鈉之無菌、無熱原、高分子量、非發炎性高度純化之餾份。其已獲FDA批准並被指定用作眼科手術輔助。透明質酸鈉係用於臨床用途之透明質酸(hyaluronan)之衍生物。透明質酸(亦稱為透明質酸(hyaluronic acid))係天然存在之葡糖胺聚醣，遍布全身，包含於眼睛的房水及玻璃體液中。實例 1. 製備包含 PLGA 之可生物降解之未經表面處理之微粒 (NSTMP)
使用單乳液溶劑蒸發法製備含或不含蘋果酸舒尼替尼之包含PLGA及PLGA及PEG之二嵌段共聚物之聚合物微粒。舉例而言，將PLGA (560 mg)及PLGA-PEG (5.6 mg)共溶解於二氯甲烷(DCM) (4 mL)中。將蘋果酸舒尼替尼(90 mg)溶解在二甲基亞碸(DMSO) (2 mL)中。將聚合物溶液及藥物溶液混合以形成均質溶液(有機相)。對於空白NSTMP，使用不含藥物之DMSO (2 mL)。對於負載藥物之NSTMP，將有機相添加至含在PBS (200 mL)中之1% PVA水溶液中並使用L5M-A實驗室混合器(Silverson Machines Inc.，East Longmeadow, MA)以5,000 rpm均質化1分鐘以獲得乳液。對於空白NSTMP，使用含在水(200 mL)中之1% PVA溶液。
然後藉由在室溫下攪拌超過2小時以允許DCM蒸發來硬化乳液(溶劑負載之微粒)。藉由沉降及離心收集微粒，在水中洗滌三次，並濾過40-µm無菌Falcon® 細胞過濾器(Corning Inc.，Corning, NY)。未經表面處理之微粒(NSTMP)係直接用於表面處理製程中或藉由凍乾乾燥並呈乾燥粉末儲存在-20℃下直至使用。實例 2. 使用 NaOH( 水溶液 )/EtOH 對未經表面處理之微粒 (NSTMP) 進行表面處理
將包含預定比之0.25M NaOH(水溶液)及乙醇之經預冷卻之溶液添加至在約4℃之冰浴中攪拌下之玻璃小瓶內的微粒以形成100 mg/mL之懸浮液。然後將該懸浮液在冰上攪拌預定時間(例如，3、6或10分鐘)並倒入至經預冷卻之過濾設備中以去除NaOH(水溶液)/EtOH溶液。用經預冷卻之水進一步沖洗微粒並轉移至50-mL離心管。然後將顆粒懸浮在經預冷卻之水中並在冰箱中放置30分鐘以允許顆粒沉降。移去上清液後，該等顆粒係經再懸浮並濾過40-µm細胞過濾器以去除大聚集物。隨後，在室溫下用水洗滌該等顆粒兩次並冷凍乾燥過夜。實例 3. 舒尼替尼微粒之製備 ( 未經表面處理 )
將PLGA (555 mg)及PLGA-PEG5K (5.6 mg)溶解在DCM (4 mL)中。將蘋果酸舒尼替尼(90 mg)溶解在DMSO (2 mL)中。然後將聚合物溶液及藥物溶液混合。將所得反應混合物濾過0.22 μm PTFE針筒過濾器。在250 mL燒杯中用含在PBS (200 mL)中之1% PVA稀釋所得反應混合物並然後以5,000 rpm均質化1分鐘。(使用均質化條件將聚合物/藥物溶液倒入至水相中並以5,000 rpm均質化1分鐘)。接下來在生物安全櫃中於室溫下以800 rpm攪拌該反應3小時。允許顆粒在燒杯中沉降30分鐘並傾析出約150 mL之上清液。將微粒懸浮液以56 X g離心4.5分鐘，去除溶劑，並然後用水洗滌微粒三次。在凍乾之前，使用Coulter Multisizer IV確定微粒尺寸及尺寸分佈。使用FreeZone 4.5公升臺式凍乾機將該等微粒凍乾。在整個製程中避免光暴露。實例 4. 用於製備經表面處理之舒尼替尼微粒之一般程序
稱量微粒乾燥粉末並置於小燒杯中然後添加攪拌棒。將該燒杯置於冰浴中並冷卻至約4℃。藉由將含在水中之NaOH (0.25M)與EtOH以3:7 (v/v)混合並冷卻至約4℃來製備NaOH/EtOH溶液。在攪拌下將冷NaOH/EtOH溶液添加至含有微粒之燒杯以提供100 mg/mL之顆粒懸浮液。在約4℃下攪拌該懸浮液3分鐘並倒入至過濾裝置中以快速去除NaOH/EtOH溶液。(使用前，過濾設備需要在-20℃冰箱中進行預冷卻。)過濾後，在過濾設備中用冰冷去離子水沖洗微粒並轉移至50 mL離心管。填充有冷水之各50 mL離心管提供濃度為5至10 mg/mL之40 mL顆粒懸浮液。將該等離心管置於再生器中並允許顆粒沉降30分鐘。然後傾倒出上清液。將該等顆粒再懸浮於冷水中並濾過40 μm細胞過濾器以去除任何大聚集物。藉由離心(56 X g，歷時4.5分鐘)收集該等顆粒並用水洗滌兩次。使用FreeZone 4.5公升臺式凍乾機將產物凍乾。表面處理製程係在約4℃下進行且整個製程中避免光暴露。實例 5. 以較大規模 (100 g 及更高 ) 生產經表面處理之微粒 (STMP)
使用連續流，水包油乳化法來生產NSTMP。批次的規模係200 g。表1中列出包括表面處理條件之詳細調配參數。
首先製備分散相(DP)及連續相(CP)。對於安慰劑微粒，藉由將PLGA及PLGA-PEG聚合物共溶解在DCM中製備DP且CP係含在水中之0.25% PVA溶液。對於負載藥物之微粒，藉由將蘋果酸舒尼替尼溶解在DMSO中並與含在DCM中之聚合物溶液混合來製備DP。該CP係含在PBS中之0.25% PVA溶液(pH約7)。
藉由使用直列式組裝之高剪切均質儀將DP及CP混合來生產乳液。藉由CP稀釋含在DP中之溶劑，導致乳液液滴固化並變成聚合物微粒。將來自批次A至H之微粒進行離心(將批次AA之微粒進行沉降以分離小顆粒)。分離微粒並收集在連續離心系統中，同時藉由連續離心去除上清液中之小顆粒。然後將微粒從離心系統排出並用新鮮水洗滌以使用離心系統去除含有溶劑之水、未包封之游離藥物及任何殘留小顆粒。隨後將經洗滌之微粒懸浮在包含NaOH及乙醇之溶液中以用於NSTMP之表面改性。該步驟係在夾套式容器中進行及懸浮液之溫度係保持在約8至11℃。在一個替代實施例中，表面處理係在5至12℃之間進行。
在水中另外洗滌後，將微粒懸浮液篩過50 µm過濾器。在測量處理中樣品之微粒質量濃度或藥物濃度後，將該STMP懸浮液調整至標靶濃度，然後填充於玻璃小瓶中。亦將甘露醇作為賦形劑添加至最終懸浮液。然後凍乾該等小瓶並密封。製造製程可無菌完成及亦可藉由電子束或伽馬照射對小瓶內的最終產物進行最終滅菌。表 1. 以 200 g 規模生產的 STMP 之調配及製程參數
Figure 02_image865
以下描述用於測定聚集物之強度之程序。圖3A中說明由STMP形成之聚集物之強度。培養微粒15分鐘或2小時。如圖3A中所顯示，聚集物之硬度受NaOH之濃度及EtOH之百分比的影響。圖2C係批次H及批次AA之硬度的圖。如圖2C中所示，在經過沉降及0.75 mM NaOH及60% EtOH之表面處理條件之批次A及經過離心及2.5 mM NaOH及70% EtOH之表面處理條件之批次H之微粒之間觀察到硬度提高700%。
然後在短期(圖3B)及長期(圖3C)聚集實驗中測試批次H及批次AA。如圖3B中所示，在短期實驗中培養微粒長達24小時及在長期實驗中培養長達4週(圖3C)。在短期及長期實驗之每個時間點，批次H相比批次AA更強。實例 6. 顆粒聚集物之機械測試
將顆粒懸浮在透明質酸鈉(HA)溶液中至200 mg/ml或400 mg/ml之濃度。將400 ul之顆粒懸浮液注射至2 mL平底透明玻璃小瓶內的於37℃下預熱之1.8 mL PBS中。然後在水浴中於37℃下培養該小瓶。在預定時間點，利用具有5 mm球形探針及5 kg稱重傳感器之TA.XT plus C Texture分析儀(Stable Micro Systems，UK)測量聚集物之強度。以0.4 mm/s之速度進行測試。記錄壓縮聚集物成30%應變時所需的力。實例 7. 連續離心作為分離製程去除小顆粒
在生產經表面處理之顆粒(STP)中作為分離方法併入連續離心以便去除小顆粒以及洗滌並濃縮該等顆粒。該製程藉由離心自較大顆粒連續地分離出小顆粒並在循環結束時排出所保留的較大顆粒。連續離心係利用來自Pneumatic Scale Angelus之UniFuge Pilot分離系統進行。
連續離心有效地去除小顆粒。例如，在任何離心之前，小於10 μm之顆粒佔總粒度分佈之6.8%(圖4A)。僅一輪離心後，小於10 μm之顆粒之百分比降低21%。小顆粒之比例隨隨後的離心進一步降低並在三輪後小於10 μm之顆粒僅佔總顆粒之2.7%。與不離心相比，此相當於小於10 μm之顆粒之百分比降低60%。
藉由每輪離心去除的上清液之粒度(圖4B)顯示在每輪離心中去除小顆粒之有效性。
在生產期間，在表面處理之後，利用連續離心系統再次洗滌顆粒，此可進一步減少小顆粒之比例。如圖4C中可看出，最終產物中小於10 μm之小顆粒的量比均質化之後不久且任何離心之前的量低69%。此亦反映d10尺寸從離心前的11.6 μm至最終產物中的15.30 μm的變化。實例 8. 微粒樣品之透光率及儲積硬度
計算兩個微粒懸浮液樣品之透光率百分比及結果顯示於表2中。藉由將微粒懸浮在透明質酸鈉(HA)溶液中至200 mg/ml或400 mg/ml之濃度來進行透光率之檢定。將50 ul之顆粒懸浮液注射至4.5 mL塑料比色皿內的於37℃下預熱之3 mL PBS中。PBS用作空白。使用動力學測試及百分比透射率測量模式，利用Genesys 10S UV-Vis (Thermo Scientific)在650 nm下測量透光率。在1分鐘的總時間內以1秒時間間隔進行測量。記錄1分鐘時間期內的平均透光率百分比。每個批次一式三份進行測量。
樣品1係藉由與批次AA(實例5)之其等方法相似的方法製備的微粒。樣品2係具有改良之硬度及/或耐久性之本發明之微粒。圖5A係來自樣品1之2 mg劑量微粒的圖像及圖5B係來自樣品2之2 mg劑量微粒的圖像。如表2中所顯示，來自樣品2之微粒在每個劑量下始終展現較高的透光率。表 2. 微粒懸浮液之透光率
劑量 透光率
樣品1 樣品2
0.5 mg 96.6% 99.4%
1 mg 92.6% 99.3%
2 mg 85.9% 99.6%
表3中顯示三種不同微粒樣品之儲積硬度、透光率、藥物負載及尺寸。樣品1係藉由與批次AA(實例5)之其等方法相似的方法製備的微粒。樣品2及樣品3具有改良之硬度及/或耐久性之本發明之微粒。如表3中所顯示，本發明之微粒之儲積硬度為16公克力及19公克力，而藉由批次AA之其等微粒之方法製備的微粒之硬度僅為2.5公克力。本發明之微粒比藉由先前方法製備的微粒顯著更硬(用於確定硬度之程序論述於實例6中)。
樣品2及3之透光率亦高於樣品1之透光率。如以上實例8中所述進行透光率。樣品1微粒之溶液之透光率僅為92.6%，但樣品2及樣品3微粒之透光率分別為99.7%及99.8%。
所有三個樣品之藥物負載及尺寸均係相當的，及因此改變表面處理及/或對微粒進行連續離心不會影響藥物負載或尺寸。來自所有三個樣品之微粒之藥物負載為約10%及尺寸在24至29 μm之範圍內。圖5C係在37℃下之來自樣品1、樣品2及樣品3之微粒之活體外藥物釋放。如圖5C中所顯示，所有三個樣品均展現相似的藥物釋放速率。為測量藥物釋放，將10 mg乾燥的顆粒添加至含有4 mL釋放介質(1% Tween 20含於1X PBS中)之玻璃閃爍小瓶並藉由渦旋將該等顆粒完全懸浮。在以150 rpm旋轉下於37℃下培養該等小瓶。在預定時間點，小心收集3 mL釋放介質並用3 ml新鮮釋放介質更換。測量所收集的釋放介質之UV吸光度並藉由與釋放介質中藥物之標準曲線比較確定每個時間點之藥物濃度。在最後收集釋放介質後，將玻璃閃爍小瓶內的剩餘內容物凍乾以量化小瓶內的任何剩餘藥物。將凍乾的固體在5分鐘超音波處理下溶解在1 mL DMSO中，然後以1000 rpm離心5分鐘以去除任何不溶解的鹽。收集懸浮液之上清液以用於UV吸光度測量。藉由與DMSO中藥物之標準曲線比較確定DMSO中藥物之濃度。表 3. 所選擇微粒樣品之儲積硬度及透光率之匯總
   樣品1 樣品2 樣品3
儲積硬度(公克力) 2.5 ± 0.2 16.8 ± 0.1 19.6 ± 0.3
透光率(%) 92.6 ± 7.4 99.7 ± 0.02 99.8 ± 0.2
藥物負載(%) 9.04 10.2 10.3
尺寸(μm) 26.8 ± 9.0 28.2 ± 9.9 24.5 ± 8.7
實例 9. 玻璃眼睛模型中批次 AA 及批次 E 之比較
人類玻璃體液佔眼睛後段最大域。人類眼睛包含約4 mL玻璃體液，其係充當用於治療眼部疾病之主要儲存庫。玻璃體主要由水(大於98%)、膠原蛋白及蛋白聚醣組成，其為玻璃體腔提供結構支撐。在年輕眼睛中，液相包含截留於富含膠原蛋白之透明質酸凝膠相中之約80%水含量，且20%呈游離水存在。然而，隨著老化，透明質酸隨著聚合物鏈解聚而簡併並分離，導致較高的游離水含量。年齡相關黃斑變性發生在老年患者(＞60歲)中，其中玻璃體凝膠微結構顯著惡化。此導致高游離水內容物(＞50%)，其對眼部後部空間內注射材料之沈積及運動具有顯著影響。然而，AMD之臨床前模型通常仰賴於具有完整玻璃體凝膠微結構之年幼動物模型。在該研究中，生成可再現之液化玻璃體模型(水含量~60%)以提供定性分析及評估老年人眼睛中微粒之聚集及分佈。
收穫牛玻璃體並置於50 mL錐形管中。使用Polytron PT 1600 E臺式均質機以25000 rpm均質化玻璃體凝膠1分鐘且上下運動以分解凝膠相並釋放水內容物。藉由稱重總均質化玻璃體液並提取凝膠內容物以確定游離水含量來測量凝膠含量。
直徑為2.5 cm之玻璃球體藉由經透明橡膠隔膜密封之4 mm開口填充液化牛玻璃體。使用可追蹤之壓力計測量球體內的內部壓力並經加壓至15至18 mm Hg之間。在37℃下培養該等眼睛1小時。
製備批次AA及批次E微粒調配物並負載至1 mL注射器(200 mg/mL顆粒濃度)中。玻璃眼睛以60至70o 向上之垂直間距傾斜，超過水平起始平面。注射部位係距角膜鞏膜角膜緣底部3至4 mm，以15至20o 角向下指向玻璃眼睛的下部區域。藉由13 mm 27G薄壁針將總體積為50 uL之顆粒懸浮液穿透橡膠隔膜注射至玻璃眼睛。該眼睛立即藉由使其向後下傾斜60至70o 水平再定向為水平面向。在37℃下培養該眼睛15分鐘。培養後，藉由向上90o 、向下90o 、向左90o 及向右90o 定向眼睛來引入眼部運動。此立即藉由步行30步進行。在注射後、運動前及運動後拍攝圖像。
注射後立刻觀察到批次AA(圖6A)及批次E(圖6C)微粒之聚集的顯著差異。在經批次AA處理之玻璃眼睛中，游離漂浮顆粒集中於主要儲積附近。針追蹤之拖尾效應亦高度集中於批次AA-玻璃眼睛中(圖6A)。相反地，在批次E微粒之後立即注射中沒有觀察到游離漂浮微粒(圖6C)。聚集物在眼睛後部附近迅速形成且在眼睛向後下旋轉至水平定向時，整個完整儲積均移位至眼睛底部，其保留在此。
運動後，批次AA微粒(圖6B)由於運動方案施加在儲積上的力而無法呈單個聚集物保留。此導致顆粒於玻璃眼睛內分散。相反地，批次E微粒(圖6D)甚至在引入運動力後仍保持為單個完整儲積且沒有觀察到游離漂浮顆粒。實例 10. 原位豬玻璃體液化模型中批次 AA 及批次 E 微粒之比較
對成年豬眼睛注射20 uL透明質酸酶(0.5 IU/mL)以用於玻璃體之酶促液化。將眼睛置於包含具有1%青黴素/鏈黴素之PBS之燒杯中並在37℃下培養24小時。培養後，藉由稱量凝膠及水內容物來確定包含約57至74%游離水含量之玻璃體。
豬眼睛向上傾斜30至45o 且在距角膜鞏膜緣底部3至4 mm以45o 角向上指向下部空間透過6 mm 27G薄壁針注射微粒(200 mg/mL顆粒濃度)。注射後，立即將眼睛置於含有具有1%青黴素/鏈黴素之PBS之燒杯中並在37℃下培養2小時。培養後，解剖眼睛且觀察並比較儲積。
該儲積係位於注射部位附近的下玻璃體腔內。最初觀察時，批次AA微粒形成完整儲積(圖7A，左)。然而，當從玻璃體凝膠切下儲積時，主要儲積很容易分解，其中大量游離漂浮顆粒及較小衛星聚集物包埋在圍繞該主要儲積部位之玻璃體凝膠中(圖7A中，右)。無法用鑷子撿取主要儲積而不在接觸時解體。相比而言，批次E微粒形成固體儲積，其可容易地用鑷子操作(圖7B，左)，及在初級聚集物附近僅可觀察到少量游離漂浮微粒(圖7B，右)。
批次E微粒形成明顯更強之聚集物，其抵抗由於玻璃眼睛模型中眼部運動引入力所致之分散。此外，在豬眼睛模型中，批次E微粒形成強、固體、完整儲積，可用鑷子進行操作而不會散落。微粒調配物之此等顯著改善導致優異聚集，該優異聚集可導致改良的臨床結果。實例 11. 用於注射聚集用微粒之方法
研究若干變量(包括注射部位、***角度、***深度、針規格、針長度及注射速度)對眼部損傷、射流、顆粒分佈、沈積及性能之影響。使用玻璃眼睛及原位豬液化玻璃體模型比較三種方法(方法A、方法B及方法C)以評估其對顆粒沈積及聚集之影響。
圖8A、圖8B、圖8C及圖8D描繪方法A之一般程序。如圖8A中所顯示，在方法A中，患者將其頭部向後傾斜約45°並向上看約20至25°。然後注射13 mm針。該方法亦顯示於圖8B中。再次指示患者在注射之時將其頭向後傾斜45°並向上看約20至25°。朝著眼睛後部(圖8B中的點A)注射該等微粒。一旦患者坐起並沿垂直軸將其眼睛再定向至起始位置，則微粒會從點A滑動至玻璃體腔底部(圖8B中的點B)。在該等微粒從點A運動至點B期間，該等微粒分散或散佈，導致微粒「蹤跡」。圖8C及圖8D係方法A之另外示意圖。圖8C係注射之時眼睛的位置。患者的頭部向後傾斜約45°並眼睛向上傾斜約20°。圖8C中的點A表示注射點及箭頭表示可***針的兩個潛在角度。點B表示玻璃體腔的底部及點C表示眼睛的後部。在方法A期間，微粒被引向眼睛的後部並必須移動以到達玻璃體腔底部。圖8D係注射後眼睛的示意圖，其中該等微粒仍在眼睛後部並必須向下滑動至玻璃體底部才能有效。
圖9A至圖9F描繪方法B之一般程序。患者以直立姿勢坐著並以約20至30°角向上凝視以暴露下部眼球表面。在相對於直視的瞳孔約6點鐘以約10°角穿透睫狀體平坦部(距角膜緣邊緣約3至4 mm)向下注射13 mm針。然後，患者將其眼睛沿著垂直軸再定向回至起始位置並該等微粒從點A移至點B。圖9B及圖9C係方法B之另外示意圖。圖9A係注射之時眼睛的位置。患者的眼睛向上傾斜約25°。圖9A中的點A表示注射點及箭頭表示可***針的兩個潛在角。點B表示玻璃體腔底部。在方法B期間，微粒被引向玻璃體腔底部且需要最小化運動才能到達玻璃體腔底部。圖9B係注射後眼睛的示意圖。微粒係在玻璃體腔底部，並需要最小化滑動。當該等微粒到達最終儲積位置(玻璃體腔底部)時，此導致較少的拖尾及分散。
方法B亦描繪於圖9D及9E中。注射部位係相對於直視的瞳孔6點鐘位置(如圖9G中所示)及針以約10°角向下指向。患者在沒有頭部傾斜下以約20至30°角向上看。此使得該等微粒沈積在靠近玻璃體腔底部處。圖9F係正在接受顯示於圖9D及9E中之注射程序之患者。
圖10A、圖10B、圖10C及圖10D描繪方法C之一般程序。如圖10A中所顯示，在方法C中，患者不向後傾斜其頭部，但向上看約20至30°。然後注射6 mm針。該方法亦顯示於圖10B中。再次指示患者在注射之時向上看約20至30°。在玻璃體腔底部或於玻璃體腔底部附近(圖10B中的點A)注射該等微粒。一旦患者坐起並沿著垂直軸將其眼睛再定向回至起始位置，該等微粒僅需要從點A點最小化移動至點B點，導致最小化滑動及分散。圖10C及圖10D係方法C之另外示意圖。圖10C係注射之時眼睛的位置。患者的眼睛向上傾斜約20°。圖10C中的點A表示注射點及箭頭表示可***針的兩個潛在角。點B表示玻璃體腔底部。在方法C期間，微粒被引向玻璃體腔底部且需要最小化運動才能到達玻璃體腔底部。圖10D係注射後眼睛的示意圖。該等微粒係在玻璃體腔底部，並需要最小化滑動從點A至點B。當該等微粒到達最終儲積位置(玻璃體腔底部)時，此導致較少的拖尾及分散。
將玻璃眼睛填充液化牛玻璃體並在37℃下培養1小時。如表4中所述，將來自批次G之微粒(200 mg/mL)負載至1 mL注射器中並注射至玻璃眼睛中。注射後立刻將眼睛再定向至水平起始位置並在37℃下培養15分鐘。培養後，藉由向上90o 、向下90o 、向左90o 及向右90o 定向眼睛，然後步行30步，來引入眼部運動。在注射後、運動前及運動後拍攝圖像。表 4. 方法 A 、方法 B 及方法 C 注射方法之比較
   方法 A 方法 B 方法 C
向上翻眼角度 25o 25o 25o
頭部傾斜角度 45o 無 無
注射部位 距角膜緣~3-4 mm 距角膜緣~3-4 mm 距角膜緣~3-4 mm
針穿透深度 ~10 mm ~10mm ~3 mm
注射角 向下~15-20o 向下0-10o 向上15-20o
針規格 27 G薄壁 27 G薄壁 27 G薄壁
針長度 13 mm 13 mm 6 mm
可觀察到方法A與方法B及方法C間的玻璃體腔內微粒聚集及沈積之顯著差異。利用13 mm針之方法A具有10 mm之較長穿透深度。針之長度及穿透之深度與眼睛之角度的組合導致直接沈積在眼睛後部之儲積。注射後，隨著眼睛沿著垂直軸再定向回至起始位置，儲積從眼睛後部滑動至眼睛底部。在顆粒殘餘物沿著滑動路徑沈積時，此會導致沿著垂直軸之顆粒「蹤跡」。此外，由於針穿透深度較長且顆粒沈積與初始注射位置之間的距離長，因此，隨著針的撤回，發生顆粒拖尾，導致一束顆粒從主儲積延伸至注射部位。圖12A係玻璃眼睛之底視圖的圖片，其中該等微粒係藉由方法A進行注射。圖12B係玻璃眼睛之底視圖的圖片，其中該等微粒係藉由方法A進行注射。圖12C及圖12D分別係藉由方法B注射微粒之玻璃眼睛的底視圖及側視圖。圖12E及圖12F分別係藉由方法C注射微粒之玻璃眼睛的底視圖及側視圖。
以下描述方法B注射之步驟之實例： 1. 將麻醉劑應用於患者的眼睛並使用無菌、固體眼瞼窺鏡穩定眼瞼並幫助暴露下部眼表面。 2. 患者向上凝視約20至30°以最佳地暴露下部眼球表面。 3. 在約6點鐘位置以針向下指向約10°角從距角膜緣邊緣3至4 mm注射注射器內的用於注射之0.05 mL體積。針朝玻璃體腔後部注射並歷時約5秒時程緩慢注射。 4. 約5秒後，將針從眼睛移除。 5. 患者應將其視線恢復至垂直位置但應安靜保持直坐15分鐘，避免任何劇烈頭部運動或顯著眼睛運動以使儲積完全固化並硬化。實例 12. 離體豬玻璃體液化模型中不同玻璃體內注射方法之評估
如實例10中所述液化成年豬眼睛中之玻璃體液。使用如表4中所述的方法A、方法B或方法C經玻璃體內注射經表面處理之微粒(200 mg/mL)。
注射後，在包含具有1%青黴素/鏈黴素之PBS之燒杯中於37℃下培養豬眼睛2小時。隨後解剖該等眼睛並分析微粒儲積位置及聚集完整性。
在離體豬玻璃體液化模型中，所獲得的結果證實方法B(圖13B)與方法C(圖13C)之間的顆粒聚集及沈積。在玻璃體腔底部附近發現單個固體儲積。比較而言，由於注射角及較長之針長度，方法A儲積的位置更接近眼睛的後部區域(圖513A)。此外，與藉由方法B或方法C注射所產生的儲積相比，主要儲積之形狀更可能係分段或不規則。實例 13 ： 顆粒真空處理程序
將顆粒填充至具有橡膠隔膜之2 mL玻璃小瓶中。將具有魯爾鎖(luer-lock)開口之小瓶轉接子連接至該小瓶並將稀釋劑(例如，透明質酸溶液(HA))經由該小瓶轉接子注射至該小瓶中。將60 mL VacLok注射器(Merit Medical，South Jordan，UT)連接至該小瓶轉接子且將其柱塞拉至預定體積並按照製造商說明書藉由旋轉柱塞鎖定(圖14A、圖14C及圖15)。
此會在該等小瓶中產生低至約30托之負壓，取決於柱塞鎖定位置。在藉由VacLok注射器所產生的真空下，藉由手動敲擊或渦旋將顆粒與稀釋劑在小瓶中混合以產生均質懸浮液。由於真空，在混合時在該懸浮液中產生較少氣泡。然後將該小瓶在直立位置靜置預定時間(亦即，10至60分鐘)。此進一步允許將所形成的氣泡從該懸浮液抽出，從而減少稍後注入時之顆粒漂浮。抽真空步驟後，鬆開60 mL注射器之柱塞並將該注射器從該小瓶轉接子取下。藉由輕輕敲擊將該懸浮液再混合並負載至定劑量注射器中以用於注射。實例 14. 苄醇對顆粒聚集之影響
在包含0%、0.25%、0.5%、0.75%或1%苄醇(BA) (以重量計)之透明質酸鈉(HA)溶液中製備以200 mg/ml或400 mg/ml之顆粒濃度懸浮之經表面處理之微粒(STMP)之代表性批次。如實例13中所述將該等顆粒懸浮液抽真空。將該等懸浮液注射至在37℃下預熱之PBS中並然後在水浴中於37℃下培養2分鐘、5分鐘、15分鐘、2小時或24小時。如實例6中所述測量所得聚集物之強度。
顯示添加BA於HA稀釋劑中會以濃度依賴方式改良聚集強度。例如，對於200 mg/ml顆粒懸浮液，添加濃度為0.5%及0.75%之BA於稀釋劑中會在最早2分鐘產生更強的聚集物(圖16)。僅培養2分鐘後，含在包含0.75% BA之HA中之顆粒懸浮液形成如培養15分鐘時的僅含在HA中之顆粒懸浮液般強的聚集物。就至少24小時的培養而言，顯示具有0.5%或0.75% BA之聚集物比不含或僅具有0.25% BA之聚集物強。對於以400 mg/ml之濃度懸浮的顆粒，添加BA於所測試的所有濃度之稀釋劑中均會增加聚集動力學，從而會在最早2分鐘產生更強的聚集物。就至少2小時的培養而言，聚集物強度之改良得以持續(圖17)。對於兩種顆粒濃度，添加1% BA於稀釋劑中均會由於注射器中之顆粒結塊及堵塞而導致注射性差，表明該BA濃度過高。此外，添加BA於稀釋劑中對顆粒之藥物釋放曲線影響最小(圖18)。
在包含0%、0.5%、1%或2% BA(以重量計)之HA溶液中製備200 mg/ml或400 mg/ml之未經表面處理之微粒(NSTMP)懸浮液。在任何一種顆粒濃度下，添加BA於稀釋劑中均不會改良NSTMP之聚集強度。培養2小時後，200及400 mg/ml兩種之NSTP顆粒積之強度仍低於檢測極限。另外，如圖19A及圖19B中所顯示，當被注射至在37℃下預熱之PBS試管中並培養15分鐘時，BA濃度為0% (S-A)、0.5% (S-B)、1% (S-C)及2% (S-D)的以200 mg/ml之顆粒濃度懸浮(圖7A)及BA濃度為0% (S-D)、0.5% (S-E)及1% (S-F)以400 mg/ml之顆粒濃度懸浮(圖19B)之NSTMP沉降在小瓶底部但沒有形成強聚集物，並在輕柔攪拌下變得分散。
在如表5中所詳述的各種表面處理條件下，針對所生產的五個不同顆粒批次測試BA對顆粒聚集之影響。添加BA於稀釋劑中在進行表面處理下增強所有顆粒批次之聚集強度，而利用NSTMP沒有改良聚集強度。表 5. 用含在稀釋劑中之苄醇 (BA) 測試的顆粒批次
顆粒ID 表面處理 顆粒濃度(mg/ml) BA濃度(w/w%)
NaOH (mM) EtOH%
1 -- -- 200 0、0.5、1、2
400 0、0.5、1、2
2 0.75 70 200 0、0.5
400 0、0.5
3 7.5 70 200 0、0.25、0.5、0.75、1
400 0、0.25、0.5、0.75、1
4 2 70 200 0、0.5
400 0、0.5、1
5 0.75 60 200 0、0.25、0.5、0.75
實例 15. 檸檬酸三乙酯對顆粒聚集之影響
在包含0%或0.57%檸檬酸三乙酯(TEC) (以重量計)之HA中製備以200 mg/ml之顆粒濃度懸浮之經表面處理之微粒(STMP)之代表性批次。如實例13中所述將該等顆粒懸浮液抽真空。將該等懸浮液注射至在37℃下預熱之PBS中並然後在水浴中於37℃下培養2、5或15分鐘。如實例6中所述測量所得聚集物之強度。
添加TEC於稀釋劑中產生相比僅懸浮在HA中之顆粒更快形成的更強聚集物。僅培養2分鐘後，具有TEC之顆粒懸浮液形成聚集物，而僅懸浮在HA中之顆粒之聚集強度低於檢測極限。僅培養5分鐘後，具有TEC之顆粒懸浮液形成如培養15分鐘後的僅具有HA之顆粒懸浮液般強的聚集物(圖20)。
在200及400 mg/ml兩種顆粒濃度下，添加TEC於稀釋劑中均未改良未經表面處理之微粒(NSTMP)之聚集。培養2小時後NSTP顆粒儲積之強度低於兩種濃度之檢測極限。此外，如圖21A及圖21B中所示，當被注射至在37℃下預熱之PBS試管中並培養15分鐘時，NSTP的TEC濃度為0% (S-H)及0.5% (S-I)的以200 mg/ml之顆粒濃度懸浮(圖21A)及TEC濃度為0% (S-J)、0.5% (S-K)、1% (S-L)及2% (S-M)的以400 mg/ml之顆粒濃度懸浮(圖21B)沒有保持聚集並在輕柔攪拌下變得分散。
利用如表6中所詳述的各種表面處理條件，針對所生產的三個不同顆粒批次測試TEC對顆粒聚集之影響。添加TEC於稀釋劑中在進行表面處理下增強所有顆粒批次之聚集強度，而利用NSTMP沒有改良聚集強度。表 6. 用含在稀釋劑中之檸檬酸三乙酯 (TEC) 測試的顆粒批次
顆粒ID 表面處理 顆粒濃度(mg/ml) TEC濃度(w/w%)
NaOH (mM) EtOH%
1 -- -- 200 0、0.5、1、2
400 0、0.5、1、2
3 7.5 70 200 0、0.5
5 0.75 60 200 0、0.5
已參考本發明之實施例描述本說明書。然而，熟習此項技術者應明瞭，可在不脫離如本文所述的本發明範疇下進行各種修改及改變。因此，本說明書欲被視作係在說明意義上而不是在限制意義上，且所有此類修改意欲被包括在本發明之範疇內。
1:注射器柱塞 2:60 mL可鎖定注射器 3:小瓶轉接子 4:2 mL玻璃小瓶
圖1係眼睛之解剖學之標記圖像。除了眼睛的其他部分外，已標記睫狀體平坦部、角膜緣及玻璃體腔。睫狀體平坦部為約4 mm長並位於虹膜及鞏膜之交界處附近。其係扇形且與玻璃體腔相鄰。在本發明之方法中，將針注射穿透睫狀體平坦部。角膜緣係角膜及鞏膜相遇之邊界。在本發明之方法中，如圖9G中所顯示，在6點鐘位置於角膜緣後3至6 mm注射針。玻璃體腔係玻璃體液佔據的空間。其包括介於晶狀體後與視神經前之間的空間。如圖9C及圖10D中所示，本發明之方法將微粒沈積在玻璃體腔的底部處。瞳孔係位於虹膜中心的孔。在本發明中，瞳孔係針進入的參考點，如圖9G中所示。
圖2A係注射前微粒之復水之說明。步驟1係藉由注射器將稀釋劑注射至微粒小瓶中。第二步驟係真空處理懸浮或溶解在稀釋劑中之微粒。此係藉由將真空注射器經由轉接子連接至小瓶並施加真空壓力來達成。於真空壓力之後渦旋約3秒。第三步驟係將微粒懸浮液或溶液負載至用於注射之注射器中。
圖2B係將本發明方法(方法C)與先前技術方法(方法A)進行比較的說明。在本發明之方法中，部分由於3至6 mm的較短針而致分散最小化。在先前方法(方法A)中，角度為13 mm並如所示，顆粒分散係顯著的。
圖2C係比較如實例5中所述的批次AA及批次H之微粒之硬度的圖。在2小時培養期處，批次H之硬度係700%高於批次AA。x軸標記批次。y軸係在30%應變時所測得的力(以公克力(g)計)。每批次的左側條係培養15分鐘後的硬度及每批次的右側條係培養2小時後的硬度。
圖2D係比較如實例5中所述的來自批次AA及批次H之微粒之藥物釋放的圖。此兩個批次之藥物釋放相似。此兩個批次之藥物釋放動力學相似。x軸係測得的時間(以天計)及y軸係測得的藥物釋放(以百分比計)。
圖3A係說明在培養15分鐘或2小時之後藉由如實例5中所述的方法製備的聚集微粒之硬度的圖(每批次的詳細內容提供於表1中)。x軸標記NaOH之濃度(mM)，EtOH之百分比(%)及批次。y軸係在30%應變時所測得的力(以公克力(gf)計)。每批次的左側條係培養15分鐘後的硬度及每批次的右側條係培養2小時後的硬度。每個批次均在約12℃之溫度下經受表面處理。
圖3B係比較如實例5中所述的批次AA及批次H之微粒之硬度的圖(微粒進行短期培養(最多24小時)時)。x軸標記測得的培養時間(以小時計)。y軸係在30%應變時所測得的力(以公克力(gf)計)。
圖3C係比較如實例5中所述的批次AA及批次H之微粒之硬度的圖(微粒進行長期培養(最多4週)時)。x軸標記測得的培養時間(以周計)。y軸係在30%應變時所測得的力(以公克力(gf)計)。
圖4A係說明如實例7中所述的連續離心之影響的圖。每次離心後，直徑小於10 μm之微粒之體積減小。在任何離心之前，小於10 μm之顆粒佔總尺寸分佈之8.6%，但在四輪離心之後，觀察到小於10 μm之顆粒之百分比降低68%。x軸係測得的粒徑(以μm計)，及y軸係測得不同尺寸之微粒之微分體積(以百分比計)。
圖4B係說明如實例7中所述的連續離心對微粒懸浮液之上清液之影響的圖。在每一輪離心之後，觀察到小於10 μm之顆粒之百分比。x軸係測得的粒徑(以μm計)，及y軸係測得不同尺寸之微粒之微分體積(以百分比計)。
圖4C係說明如實例7中所述的連續離心之影響的圖。連續離心後，直徑小於10 μm之微粒之體積減小。最終產物中小於10 μm之小顆粒的量比離心前的量降低69%。x軸係測得的粒徑(以μm計)，及y軸係測得不同尺寸之微粒之微分體積(以百分比計)。
圖5A係如實例8中所述的樣品1(劑量為2 mg)之微粒含在透明質酸鈉溶液中之懸浮液之比色皿。微粒展示85.9%透光率。
圖5B係如實例8中所述的樣品2(劑量為2 mg)之微粒含在透明質酸鈉溶液中之懸浮液之比色皿。微粒展示99.6%透光率。
圖5C係如實例8中所述的樣品1、樣品2及樣品3之微粒之藥物釋放。所有三個樣品均展示相當之藥物釋放。x軸係測得的時間(以天計)，及y軸係測得的藥物釋放(以百分比計)。
圖6A係經如實例9中所述的批次AA微粒注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的圖像。注射後拍攝圖像並觀察到聚集微粒散佈。
圖6B係經如實例9中所述的批次AA微粒注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的圖像。移動後拍攝圖像並觀察到聚集微粒分散。
圖6C係經如實例9中所述的批次E微粒注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的圖像。注射後拍攝圖像且未觀察到微粒散佈。
圖6D係經如實例9中所述的批次E微粒注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的圖像。移動後拍攝圖像且未觀察到聚集微粒分散。
圖7A係針對如實例10中所述的原位豬玻璃體液化模型所拍攝的圖像。眼睛係經批次AA微粒注射。微粒沈積在下玻璃體腔內(左)，但輕易地破碎成碎片並不能輕易用鑷子拾取(右)。
圖7B係針對如實例10中所述的原位豬玻璃體液化模型所拍攝的圖像。眼睛係經批次E微粒注射。微粒係一個固體片(左)，其可用鑷子拾取(右)。
圖8A係描繪如實例11中所述的方法A之注射部位、眼睛之傾斜及針尺寸的圖像。
圖8B係描繪如實例11中所述的方法A之用於注射之步驟之方案。該方法之第一步驟係在其中患者將其頭部向後傾斜並抬起。在第二步驟中，患者坐起並將其眼睛再定向至垂直位置。此時，微粒從眼睛後方(點A)移動至底部玻璃體腔(點B)。最後儲積位置顯示於最後一個圖像中。在該圖像中，微粒在其從點A移至點B時已散佈。
圖8C係如實例11中所述的方法A期間眼睛的圖像。A係注射部位，B係底部玻璃體腔，及C係眼睛後部。針自角膜緣約20度注射 (角膜緣後約3至5 mm)。箭頭表示可注射的針所處的角度。如圖像中所示，注射微粒並沈積在眼睛後部。
圖8D係如實例11中所述的方法A之注射後眼睛的圖像。A係注射部位，B係底部玻璃體腔，及C係眼睛後部。注射後，微粒保留在眼睛後部並必須向前移至底部玻璃體腔。
圖9A係描繪如實例11中所述的方法B之用於注射之步驟之方案。該方法之第一步驟係其中患者已抬頭。在第二步驟中，患者坐起並將其眼睛再定向至垂直位置。此時，微粒從點A移至底部玻璃體腔(點B)。最後儲積位置顯示於最後一個圖像中。
圖9B係如實例11中所述的方法B期間眼睛的圖像。A係注射部位，B係底部玻璃體腔，及C係眼睛後部。針自角膜緣約20度注射 (角膜緣後約3至5 mm)。箭頭表示可注射的針所處的角度。如圖像中所示，注射微粒並沈積於玻璃體底部。
圖9C係如實例11中所述的方法B之注射後眼睛的圖像。A係注射部位，B係底部玻璃體腔，及C係眼睛後部。注射後，微粒已經靠近底部玻璃體腔並僅當患者在注射後再定向其眼睛時才最小滑動。
圖9D係如實例11中所述的方法B期間眼睛的圖像。針在6點鐘位置以約10°角注射，患者向上看約20–30°。如圖像中所示，當患者使其瞳孔返回至垂直位置時，微粒沈積於靠近玻璃體底部處並需要最小滑動才能到達玻璃體底部。
圖9E係如實例11中所述的方法B期間眼睛的圖像。針在6點鐘位置以約10°角注射，患者向上看約20–30°。如圖像中所示，當患者使其瞳孔返回至垂直位置時，微粒沈積於靠近玻璃體底部處並需要最小滑動才能到達玻璃體底部。
圖9F係如實例11中所述的藉由方法B注射之患者的照片。患者抬頭約20–30°且注射部位係在6點鐘位置。
圖9G係顯示6點鐘位置為如實例11中所述的方法B及方法C之注射部位的圖像。該位置係相對於直視的眼睛。
圖10A係描繪如實例11中所述的方法C(本發明之注射方法)之注射部位、眼睛之傾斜及針尺寸的圖像。
圖10B係描繪如實例11中所述的方法C之步驟之方案。該方法之第一步驟係其中患者已抬頭。在第二步驟中，患者坐起並將其眼睛再定向至垂直位置。此時，微粒從點A略(或根本沒有)移動至底部玻璃體腔(點B)。最後儲積位置顯示於最後一個圖像中。與圖8B相比，在該圖像中，微粒具有最小散佈。
圖10C係如實例11中所述的方法C期間眼睛的圖像。A係注射部位，B係底部玻璃體腔，及C係眼睛後部。針自角膜緣約20度注射 (角膜緣後約3至5 mm)。箭頭表示可注射的針所處的角度。如圖像中所示，注射微粒並沈積在底部玻璃體腔或底部玻璃體腔附近。
圖10D係如實例11中所述的方法C之注射後眼睛的圖像。A係注射部位及B係底部玻璃體腔。注射後，微粒係在玻璃體腔底部或非常靠近玻璃體腔底部並僅需要最小化移動或不需要移動就可到達底部玻璃體腔。
圖11A係左眼及用於投與聚集用微粒之懸浮液之替代方法的圖像。在該替代方法中，患者直立坐著而無頭部傾斜。在用13 mm針注射之前，患者將其眼睛水平轉向鼻子(內收運動)。可在相對於直視的左眼瞳孔約2點鐘與3點鐘之間進入眼睛。針在向下約30至45°處注射。在一個實施例中，將針在約2點鐘注射至左眼中並將針指向向下45°。在一個實施例中，將針在約3點鐘注射至左眼中並將針指向向下30°。或者，將針在約10點鐘注射至右眼中並將針指向向下45°或將針在約9點鐘注射至右眼中並向下30°注射。
圖11B係左眼及用於投與聚集用微粒之懸浮液之替代方法的圖像，其中眼睛水平轉向鼻子(內收運動)並遠離瞳孔注射13 mm針。眼睛可在相對於直視的左眼瞳孔約2點鐘與3點鐘之間進入。針在向下約30至50°處注射。
圖12A係使用如實例11中所述的方法A注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的底視圖。箭頭指向由於方法A導致之散佈。
圖12B係使用如實例11中所述的方法A注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的側視圖。箭頭指向由於方法A導致之拖尾。
圖12C係使用如實例11中所述的方法B注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的底視圖。
圖12D係使用如實例11中所述的方法B注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的側視圖。
圖12E係使用如實例11中所述的方法C注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的底視圖。
圖12F係使用如實例11中所述的方法C注射之包含液化玻璃體之玻璃眼睛的側視圖。
圖13A係藉由如實例12中所述的方法A注射之微粒之微粒沈積及聚集的圖像。
圖13B係藉由如實例12中所述的方法B注射之微粒之微粒沈積及聚集的圖像。
圖13C係藉由如實例12中所述的方法C注射之微粒之微粒沈積及聚集的圖像。
圖14A係VacLock注射器之鎖定機構之示意圖，突出如實例13中所述的鎖定翼片及止動銷。
圖14B係當設備用於正常滑動使用時的VacLock注射器的示意圖。止動銷係以使得該銷不與如實例13中所述的鎖定翼片接觸的方式經定位。
圖14C係當設備能夠被鎖定以保持真空時的VacLock注射器的示意圖。止動銷係經定位以與如實例13中所述的鎖定翼片接觸。
圖15係藉由如實例13中所述的小瓶轉接子連接至懸浮液小瓶之60 mL VacLok注射器的圖像。將注射器柱塞鎖定在50 mL以在小瓶內部產生約40托之壓力。設備之部件如下：1) 注射器柱塞，其可經鎖定在不同位置以在玻璃小瓶內部產生不同壓力；2) 60 mL可鎖定注射器；3) 小瓶轉接子；及4) 包含顆粒懸浮液之2 mL玻璃小瓶。
圖16說明如實例14中所述的以各種濃度之苄醇(BA)添加至稀釋劑之以200 mg/ml懸浮之代表性批次的經表面處理之微粒(STMP)隨時間之聚集強度。x軸係測得的培養時間(以分鐘及小時計)，及y軸係在30%應變時所測得的力(以公克力(g)計)。
圖17說明如實例14中所述的以各種濃度之苄醇(BA)添加至稀釋劑之以400 mg/ml懸浮之代表性批次的經表面處理之微粒(STMP)隨時間之聚集強度。x軸係測得的培養時間(以分鐘及小時計)，及y軸係在30%應變時所測得的力(以公克力(g)計)。
圖18說明如實例15中所述的包含0%或0.5%苄醇(BA)在稀釋劑中之代表性批次的經表面處理之微粒(STMP)之活體外藥物釋放曲線。x軸係測得的時間(以天計)，及y軸係測得的累積釋放(以百分比計)。
圖19A說明如實例14中所述在注射至PBS中並在37℃下培養15分鐘之後苄醇(BA)對以200 mg/ml懸浮的未經表面處理之微粒(NSTMP)之聚集的影響。從左到右之樣品係含在稀釋劑中之0%、0.5%、1%及2% BA(分別為S-A、S-B、S-C及S-D)。
圖19B說明如實例14中所述在注射至PBS中並在37℃下培養15分鐘之後苄醇(BA)對以400 mg/ml懸浮的未經表面處理之微粒(NSTMP)之聚集的影響。從左到右之樣品係含在稀釋劑中之0%、0.5%及1% BA(分別為S-E、S-F及S-G)。
圖20說明如實例15中所述的以各種濃度之檸檬酸三乙酯(TEC)添加至稀釋劑之以200 mg/ml懸浮之代表性批次的經表面處理之微粒(STMP)隨時間之聚集強度。x軸係測得的培養時間(以分鐘計)，及y軸係在30%應變時所測得的力(以公克力(g)計)。
圖21A說明如實例15中所述在注射至PBS中並在37℃下培養15分鐘之後檸檬酸三乙酯(TEC)對以200 mg/ml懸浮的未經表面處理之微粒(NSTMP)之聚集的影響。從左到右之樣品係含在稀釋劑中之0%及0.5% TEC(分別為S-H及S-I)。
圖21B說明如實例15中所述在注射至PBS中並在37℃下培養15分鐘之後檸檬酸三乙酯(TEC)對未經表面處理之微粒(NSTMP)之聚集的影響。從左到右之樣品係含在稀釋劑中之0%、0.5%、1%及2% TEC(分別為S-J、S-K、S-L及S-M)。
圖22係利用用於製備本發明之經表面處理之聚集用微粒之懸浮液之步驟之方案。簡而言之，藉由將如本文所述的分散相(DP)及連續相(CP)混合(步驟1)並然後如本文所述經受表面處理(步驟2)來製備微粒。然後凍乾微粒並轉移至小瓶(步驟3)。將凍乾的微粒在適宜稀釋劑中復水以提供含在懸浮液中之復水產物(步驟4)。然後將懸浮液進行真空處理(步驟5)，然後進行注射器負載及投藥(步驟6)。

Claims (104)

  1. 一種至少500微米之聚集聚合物微粒，其展現在活體內眼睛玻璃體中為壓縮該顆粒成30%應變時需至少5公克力之硬度等級，該微粒係視需要可生物降解且視需要包含治療劑。
  2. 一種至少500微米之聚集聚合物微粒，其展現在活體內眼睛玻璃體中為壓縮該顆粒成30%應變時需至少10公克力之硬度等級，該微粒係視需要可生物降解且視需要包含治療劑。
  3. 一種至少500微米之聚集聚合物微粒，其展現在活體內眼睛玻璃體中為壓縮該顆粒成30%應變時需至少15公克力之硬度等級，該微粒係視需要可生物降解且視需要包含治療劑。
  4. 一種至少500微米之聚集聚合物微粒，其展現在活體內眼睛玻璃體中為壓縮該顆粒成30%應變時需至少20公克力之活體內硬度等級，該微粒係視需要可生物降解且視需要包含治療劑。
  5. 如請求項1之聚集聚合物微粒，其中該等微粒注射活體內眼睛玻璃體四小時或更短時間後之硬度與立即注射之硬度相比，增加至少兩倍。
  6. 如請求項5之聚集聚合物微粒，其中該硬度增加至少三倍。
  7. 如請求項5之聚集聚合物微粒，其中該硬度增加至少四倍。
  8. 如請求項5之聚集聚合物微粒，其中該硬度增加至少五倍。
  9. 如請求項5之聚集聚合物微粒，其中該硬度增加至少六倍。
  10. 如請求項5之聚集聚合物微粒，其中該硬度增加至少七倍。
  11. 如請求項5之聚集聚合物微粒，其中該硬度增加至少八倍。
  12. 如請求項5之聚集聚合物微粒，其中該硬度增加至少九倍。
  13. 如請求項5之聚集聚合物微粒，其中該硬度增加至少十倍。
  14. 如請求項5至13中任一項之聚集聚合物微粒，其中該硬度在三小時或更短時間內增加。
  15. 如請求項5至13中任一項之聚集聚合物微粒，其中該硬度在兩小時或更短時間內增加。
  16. 如請求項5至13中任一項之聚集聚合物微粒，其中該硬度在一小時或更短時間內增加。
  17. 如請求項5至13中任一項之聚集聚合物微粒，其中該硬度在三十分鐘或更短時間內增加。
  18. 如請求項5至13中任一項之聚集聚合物微粒，其中該硬度在十五分鐘或更短時間內增加。
  19. 如請求項5至13中任一項之聚集聚合物微粒，其中該硬度在十分鐘或更短時間內增加。
  20. 如請求項5至13中任一項之聚集聚合物微粒，其中該硬度在五分鐘或更短時間內增加。
  21. 如請求項1至13中任一項之聚集微粒，其包含PLGA。
  22. 如請求項1至13中任一項之聚集微粒，其包含PLGA及PLGA-PEG。
  23. 如請求項1至13中任一項之聚集微粒，其包含PLGA、 PLGA-PEG及PLA。
  24. 如請求項1至13中任一項之聚集微粒，其包含PLA。
  25. 如請求項1至13中任一項之聚集微粒，其包含舒尼替尼(sunitinib)或其醫藥上可接受之鹽。
  26. 如請求項25之聚集微粒，其包含蘋果酸舒尼替尼。
  27. 如請求項1至13中任一項之聚集微粒，其包含噻嗎洛爾(timolol)之前藥。
  28. 如請求項1至13中任一項之聚集微粒，其包含溴莫尼定(brimonidine)、布林佐胺(brinzolamide)或多佐胺(dorzolamide)之前藥。
  29. 如請求項1至13中任一項之聚集微粒，其包含選自替伐辛尼(tivosinib)、伊馬替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、索拉非尼(sorafenib)、阿西替尼(axitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、達沙替尼(asatinib)、尼洛替尼(nilotinib)克唑替尼(crizotinib)、魯索替尼(ruxolitinib)、凡德他尼(vandetanib)、維羅非尼(vemurafenib)、博舒替尼(bosutinib)、卡博替尼(cabozantinib)、瑞格菲尼(regorafenib)、維莫德吉(vismodegib)、帕納替尼(ponatinib)、呋塞米(furosemide)、布美他尼(bumetanide)、吡咯他尼(piretanide)、依他尼酸(ethacrynic acid)、依托唑啉(etozolin)、奧唑林酮(ozolinone)、噻嗎洛爾、溴莫尼定、布林佐胺、多佐胺或其醫藥上可接受之鹽之活性劑或其前藥。
  30. 一種聚集用聚合物微粒懸浮液或溶液，其中該等微粒平均直徑係介於20至40微米之間，其等產生至少500微米之經改良聚集微粒，該微粒展現在活體內眼睛玻璃體中為壓縮該顆粒成30%應變時需至少5公克力之硬度等級，且其中該等微粒係視需要可生物降解且視需要包含治療劑。
  31. 一種如請求項1至29之聚集用微粒溶液或懸浮液之用途，其係用於製造出於治療目的用以增加活體內聚集微粒之硬度及/或耐久性以將活性劑受控式遞送至患者眼睛之藥物，其中該藥物係用於藉由包括以下步驟之方法之投藥： (i) 以選定量之該等聚集用微粒之溶液或懸浮液裝載於注射用裝置，該注射用裝置包括小於約7 mm的針； (ii) 該患者以至少約15度角的近似仰望坐姿就位； (iii) 注射該聚集用微粒之溶液或懸浮液： a. 穿透眼睛睫狀體平坦部於眼睛角膜緣後3至6 mm之間； b. 其中針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔5:30點鐘與9點鐘之間； c. 以將該溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近之角度及以使玻璃體內的針不超過約4 mm之方式；及 (iv) 在若需要則更換椅子的短暫移動時期後，使該患者保持坐姿一段足夠的時間以使該聚集用微粒聚集成至少500微米之至少一個聚集微粒。
  32. 一種如請求項1至29之聚集用微粒溶液或懸浮液之用途，其係用於製造出於治療目的用以增加活體內聚集微粒之硬度及/或耐久性以將活性劑受控式遞送至患者眼睛之藥物，其中該藥物係用於藉由包括以下步驟之方法之投藥： (i) 以選定量之該等聚集用微粒之溶液或懸浮液裝載於將注射用裝置，該注射用裝置包括小於約18 mm的針； (ii) 該患者以至少約15度角的近似仰望坐姿較位； (iii) 注射該聚集用微粒之溶液或懸浮液： a. 穿透眼睛睫狀體平坦部於眼睛角膜緣後3至6 mm之間； b. 其中針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔4:00點鐘與8點鐘之間； c. 以將溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近之角度；及 (iv) 在若需要則更換椅子的短暫移動時期後，使該患者保持坐姿一段足夠的時間以使該等聚集用微粒聚集成至少500微米之至少一個聚集微粒。
  33. 如請求項31之用途，其中該針為約6 mm或更短。
  34. 如請求項32之用途，其中該針為約15 mm或更短。
  35. 如請求項32之用途，其中該針為約13 mm或更短。
  36. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該患者係以至少約20度角的近似仰望坐姿就位。
  37. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該患者係以至少約25度角的近似仰望坐姿就位。
  38. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該患者係以至少約30度角的近似仰望坐姿就位。
  39. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該聚集用微粒之溶液或懸浮液係穿透眼睛睫狀體平坦部於距眼睛角膜緣約4 mm處注射。
  40. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔約5:30點鐘至6:30點鐘之間。
  41. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔約6:00點鐘至7:30點鐘之間。
  42. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔約4:00點鐘至8:00點鐘之間。
  43. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該針進入點係在相對於直視眼睛瞳孔約6:00點鐘。
  44. 如請求項31及33至35中任一項之用途，其中該針係以將該溶液或懸浮液沈積在玻璃體腔底部或玻璃體腔底部附近之角度並以在玻璃體內之該針不超過約3 mm之方式注射。
  45. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該患者係保持坐姿至少約10分鐘。
  46. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該患者係保持坐姿至少約15分鐘。
  47. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該等微粒包含PLGA。
  48. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該等微粒包含PLGA及PLGA-PEG。
  49. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該等微粒包含PLGA、PLGA-PEG及PLA。
  50. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該活性劑包含舒尼替尼。
  51. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該活性劑包含蘋果酸舒尼替尼。
  52. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該等微粒在注射後約兩小時或更短時間內之硬度相對於立即注射後投與微粒之硬度，增加至少兩倍。
  53. 如請求項52之用途，其中該等微粒之硬度增加至少三倍。
  54. 如請求項52之用途，其中該等微粒之硬度增加至少四倍。
  55. 如請求項52之用途，其中該等微粒之硬度增加至少五倍。
  56. 如請求項52之用途，其中該等微粒之硬度在約一小時或更短時間內增加。
  57. 如請求項52之用途，其中該等微粒之硬度在約三十分鐘或更短時間內增加。
  58. 如請求項52之用途，其中該等微粒之硬度在約十五分鐘或更短時間內增加。
  59. 如請求項52之用途，其中該等微粒之硬度在約十分鐘或更短時間內增加。
  60. 如請求項52之用途，其中該等微粒之硬度在約五分鐘或更短時間內增加。
  61. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該聚集用微粒溶液或懸浮液在裝載至注射裝置之前已進行渦旋或以其他方式振盪。
  62. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該聚集用微粒溶液或懸浮液在裝載至注射裝置之前已置於真空下去除氣泡。
  63. 如請求項62之用途，其中該真空壓力係小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托或小於5托。
  64. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該等聚集用微粒包含至少一種可生物降解之聚合物、表面活性劑及包封在該可生物降解之聚合物中之活性劑，其中該等微粒之平均直徑係介於10 μm至60 μm之間。
  65. 如請求項31至35中任一項之用途，其中該等微粒係經表面改性且： (i) 包含約0.001%至約1%之表面活性劑並已經表面改性以包含相比在表面改性之前的微粒更少的表面活性劑，其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性；及 (ii) 能夠活體內聚集以活體內形成能夠在活體內持續藥物遞送至少一個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
  66. 一種經表面改性固體聚集用微粒在包含會軟化該微粒之表面聚合物之添加劑之稀釋劑中之懸浮液，軟化方式為與在不包含該添加劑之稀釋劑中之微粒相比以增加其聚集能力，其中該等經表面改性固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在至少一種可生物降解之聚合物中之治療劑，其中該等微粒： (i) 已經表面改性以使該表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性； (ii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間；及 (iii) 活體內聚集以活體內形成可在活體內持續藥物遞送至少一個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
  67. 如請求項66之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其係適於注射。
  68. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其係用於選自由玻璃體內、基質內、前房內、眼球筋膜囊下、視網膜下、眼球後、眼球周、脈絡膜上、脈絡膜下、結膜、結膜下、鞏膜外、近後部鞏膜、角膜周及淚管注射組成之群之眼部遞送途徑。
  69. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中至少一個集結粒可持續藥物遞送至少兩個月。
  70. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中至少一個集結粒可持續藥物遞送至少四個月。
  71. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中至少一個集結粒可持續藥物遞送至少六個月。
  72. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在介於約12與約10之pH下進行。
  73. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在介於約10與約8之pH下進行。
  74. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在介於約6與約8之pH下進行。
  75. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在介於約6.5與約7.5之pH下進行。
  76. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在不小於9之pH範圍下進行。
  77. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於10℃之溫度下進行。
  78. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於15℃之溫度下進行。
  79. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於8℃之溫度下進行。
  80. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面改性係在低於5℃之溫度下進行。
  81. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒之平均直徑係在20至30 μm之間。
  82. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒之平均直徑係在20至50 μm之間。
  83. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中當活體內投與時，至少一個集結粒之直徑為至少700 μm。
  84. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中當活體內投與時，至少一個集結粒之直徑為至少1 mm。
  85. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中當活體內投與時，至少一個集結粒之直徑為至少5 mm。
  86. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含5至15重量%之治療劑。
  87. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含0.1至5重量%之治療劑。
  88. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係酪胺酸激酶抑制劑。
  89. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑包含舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽。
  90. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係蘋果酸舒尼替尼。
  91. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自阿托品(Atropine)、毛果芸香鹼(Pilocarpine)及α-硫辛酸或其醫藥上可接受之鹽。
  92. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該治療劑係選自表A至表I。
  93. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含聚(丙交酯-共聚-乙交酯)。
  94. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含聚(丙交酯-共聚-乙交酯)及共價連接至聚乙二醇之聚(丙交酯-共聚-乙交酯)。
  95. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含聚(乳酸)。
  96. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含聚(乳酸)及共價連接至聚乙二醇之聚(丙交酯-共聚-乙交酯)。
  97. 如請求項66或67之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該等微粒包含聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、聚(乳酸)及共價連接至聚乙二醇之聚(丙交酯-共聚-乙交酯)。
  98. 一種經表面改性固體聚集用微粒在包含添加劑之稀釋劑中之懸浮液，其中該等經表面改性固體聚集用微粒包含表面活性劑及包封在至少PLGA及PLGA-PEG中之舒尼替尼或其醫藥上可接受之鹽，其中該等微粒： (i) 已經表面改性以使該表面上包含相比表面改性之前的微粒更少之表面活性劑且其中該表面已在低於約18℃之溫度下進行改性； (ii) 其平均直徑係在10 μm與60 μm之間；及 (iii) 活體內聚集以活體內形成可在活體內持續藥物遞送至少一個月之至少500 μm之至少一個集結粒。
  99. 如請求項98之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該表面活性劑包含聚乙烯醇。
  100. 如請求項98或99之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該懸浮液已在小於40托、小於30托、小於25托、小於20托、小於10托、或小於5托之壓力下經真空處理1至90分鐘。
  101. 如請求項98或99之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該稀釋劑係透明質酸鈉。
  102. 如請求項98或99之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該稀釋劑係透明質酸。
  103. 如請求項98或99之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係苄醇。
  104. 如請求項98或99之經表面改性之固體聚集用微粒之懸浮液，其中該添加劑係檸檬酸三乙酯。
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