TW202024131A - 抗-αvβ8抗體及組合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供抗體及其抗原結合片段，其特異性結合至αvβ8整合素。本發明包括用途，及使用該等抗體之相關方法。

Description

抗-αvβ8抗體及組合物及其用途
本發明係關於特異性結合αvβ8整合素之抗體及其抗原結合片段及其組合物、方法及用途。
轉型生長因子β (TGFβ)為後天性及先天性免疫之有效抑制因子及藉由子組調節性T細胞進行免疫抑制之重要介體。h17細胞的誘導需要TGFβ，TGFβ可經由誘導顆粒球性炎症來促進腫瘤惡化，且促進腫瘤細胞之上皮至間葉細胞轉化及纖維化腫瘤基質之分泌及積聚，該纖維化腫瘤基質可促進自一些實體腫瘤排出免疫細胞。對於所有此等原因，已研究TGFβ之抑制作為輔助免疫療法，尤其在所謂的「免疫排除」腫瘤中(Gorelik等人Nat . Med . 7 : 1118-1122, 2001；Tauriello等人Nature 554:538-543, 2018；Mariathasan等人Nature 554:544-548, 2018, Dodagatta等人J Immunother Cancer . 7: 62. 2019；美國專利第10,167,334號)。然而，因為TGFβ在多種生物系統中起重要體內恆定作用，由於非所需副作用，TGFβ信號傳導之全身性靶向呈現多個難題(Hata及AkhurstNat . Rev . Drug Dev . 11, 791-811, 2012；Akhurst等人Cold Spring Harbor Perspectives . 10, 2017；Flavell等人Nat . Rev . Immunol . 10:554-567, 2010)。
先前研究已展示，TGFβ信號傳導之抑制可增強對與檢查點抑制組合之輻射或疫苗療法的反應(Vanpouille-Box等人Cancer Res . 75:2232-2242, 2015；Terabe等人OncoImmunology 6(5):e1308616, 2017)。藉由幾種機制調控TGFβ之活體內活性。舉例而言，TGFβ分泌為無活性或潛伏複合物，其中斷裂潛伏相關肽(LAP)域包覆活性成熟肽。潛伏TGFβ可藉由潛伏TGFβ結合蛋白(LTBP)共價連接至胞外基質或藉由醣蛋白A重複主要蛋白(GARP)呈現於細胞表面上。早期活體外資料展示，TGFβ之潛伏複合物可由高溫、酸性pH及各種蛋白酶活化(Annes等人J Cell Sci . 116:217-24, 2003)，然而，此等活體內機制之重要性仍有待確定。
αv整合素家族之成員，尤其αvβ1、αvβ6及αvβ8之作用已證明潛伏TGFβ活化。整合素αvβ8為由ITGαV及ITGβ8子單元組成之跨膜非共價雜二聚體。αvβ8表現在αv整合素中為獨特的，其中其藉由免疫細胞，諸如樹突狀細胞、T調節性細胞及腫瘤相關巨噬細胞之表現已作為用於調節活性免疫反應之TGFβ之情活化劑出現。藉由樹突狀細胞(DC)之αvβ8表現充當T細胞刺激期間TGFβ產生之介體，且在免疫反應期間以Th1分化為代價強烈影響Treg及Th17細胞之分化及發展。在DC或所有白血球中具有Itgb8 之條件性刪除之小鼠證明抗原特異性Th17細胞之TGFβ依賴性誘導的顯著抑制，且隨後受某些自體免疫之臨床前模型的器官功能障礙，諸如多發性硬化症(實驗自體免疫腦脊髓炎)及過敏性哮喘保護(Travis等人Nature . 449(7160):361-5, 2007；Melton等人J Clin . Invest . 120(12):4436-44, 2010)。
TGFβ在免疫抑制細胞至腫瘤之分化及募集兩者中起作用，且作為有助於免疫遏制腫瘤微環境之腫瘤固有因子。在一些癌症中，TGFβ可藉由影響腫瘤微環境之多種態樣，包括血管生成、癌轉移、上皮間葉細胞轉變及可能最重要地，遏制浸潤性免疫細胞來促腫瘤。
因此，鑒於TGFβ在腫瘤微環境中之突出作用及與全身性靶向TGFβ信號傳導相關之多種難題(Hata及AkhurstNat . Rev . Drug Dev . 11, 791-811, 2012；Akhurst等人Cold Spring Harbor Perspectives 10, 2017；Flavell等人Nat . Rev . Immunol . 10:554-567, 2010)，需要發展選擇性抑制αvβ8依賴性潛伏TGFβ活化之策略。
本文揭示抗體(例如，人類化及嵌合抗體)及其抗原結合片段，其特異性結合至αvβ8整合素(亦在本文中互換地稱為「AVB8」、「αvβ8」或「avb8」) (例如，來自人類、小鼠、食蟹獼猴(cynomolgus monkey)及/或大鼠之αvβ8整合素)。在某些態樣中，抗體及其抗原結合片段結合至αvβ8整合素且最終減少例如腫瘤或腫瘤微環境中之TGFβ (例如，TGFβ1及TGFβ3)信號傳導。
成熟TGFβ以無活性或潛伏形式存在於具有潛伏相關肽(LAP)域之複合物中。將αvβ8整合素結合至LAP引起活性TGFβ (例如，TGFβ1及TGFβ3)之釋放。減少αvβ8整合素與LAP之結合可防止釋放活性TGFβ，從而減少TGFβ信號傳導。已知TGFβ例如在腫瘤微環境中具有免疫抑制作用，因此使用本文所述之抗體降低TGFβ活性及/或信號傳導會引起免疫反應，例如活體內抗腫瘤反應之活化。
由於免疫細胞(例如，樹突狀細胞、T調節性細胞、腫瘤相關巨噬細胞)及腫瘤細胞上αvβ8整合素之受限表現，本文所揭示之抗體會引起TGFβ信號傳導之更具靶向的非全身性減少。因此，本發明之抗體及其抗原結合片段能夠更加選擇性拮抗免疫系統及/或腫瘤微環境中之TGFβ活性，由此增強個體之抗腫瘤免疫反應。在本文所揭示之一些實施例中，已展示抗αvβ8整合素之抗體單獨或與其他免疫調節劑，諸如檢查點抑制劑之調節劑(例如，PD-1、PD-L1、CTLA-4之抑制劑或4-1BB之促效劑)或抗癌療法(例如放射線療法)組合在幾種癌症之動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退，該等癌症包括例如鱗狀細胞癌、乳癌及/或結腸癌。
因此，在某些態樣中，本發明提供結合至具有高親和力及特異性之αvβ8整合素的抗體及其抗原結合片段、編碼抗體及其抗原結合片段之核酸分子、表現載體、宿主細胞及用於製造其之方法。在某些態樣中，抗體及其抗原結合片段呈現變化的效應功能(例如，具有減少之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)活性及/或減少之補體依賴性細胞毒性(CDC)活性)。在某些態樣中，抗αvβ8整合素抗體及其抗原結合片段與其所衍生之鼠類融合瘤抗體及其抗原結合片段相比呈現增強的αvβ8整合素之結合親和力。本文所揭示之人類化抗αvβ8整合素抗體及其抗原結合片段可單獨或與其他藥劑或治療性模式(例如，免疫調節劑或抗癌療法)組合使用以治療、預防及/或診斷病症，諸如癌腫病症(例如，固體及軟組織腫瘤)。因此，揭示用於偵測αvβ8整合素之組合物和方法以及用於使用抗αvβ8整合素抗體及其抗原結合片段治療各種病症，包括癌症之方法。
熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗即可確定本文所述之本發明特定實施例的許多等效物。該等等效物意欲由以下實施例(E)涵蓋。
E1. 一種經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至αvβ8整合素，其中該抗體或其抗原結合片段具有以下特性中之至少一者： i.    表示為KD的人類αvβ8整合素之結合親和力，其低於如美國專利第9,969,804號中所揭示之鼠類抗體ADWA11之KD，該專利以全文引用之方式併入本文中，確認胺基酸序列且如例如本說明書之SEQ ID NO: 20-33及71-76中所闡述，例如，本發明之ADWA11抗體之KD低於536 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、500、510、520、530、531、532、533、534或535 pM)； ii.   人類αvβ8整合素之KD，其例如對於經純化人類αvβ8整合素低於或等於200 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、180、190或200 pM)； iii.  人類αvβ8整合素之KD，其對於經純化人類αvβ8整合素低於或等於100 pM； iv.  小鼠αvβ8整合素之KD，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於489 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、460、470、480、485、486、487或488 pM)； v.   小鼠αvβ8整合素之KD，其對於經純化小鼠αvβ8整合素為70.8 +/- 19.9 pM； vi.  食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於507 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、500、501、502、503、504、505或506 pM)； vii. 食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其對於經純化食蟹獼猴αvβ8整合素低於或等於100 pM； viii. 大鼠αvβ8整合素之KD，其為約160 pM； ix.   人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如低於100 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、95或98 pM)之KD，例如如使用Biacore親和力檢定測定； x.    抑制TGFβ反式活化之IC50，其低於鼠類抗體ADWA11之IC50，例如低於183 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、175、180、181或182 pM)； xi.   抑制U251細胞中之TGFβ反式活化之IC50，其為約199 +/- 93.6 pM； xii.  抑制TGFβ反式活化之IC50，其為約100 pM至約300 pM； xiii. U251細胞之EC50，其為約126 +/- 34 pM (例如，約50、60、70 80、90、100、110、115、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、140、150、160、170、180或190 pM)； xiv.  U251細胞之EC50，其為約256 +/- 115 pM (例如，約120、140、160、180、200、220、240、260、280、290、300、320、340、360、380、400 pM)； xv.  U251細胞之EC50，其為約80 pM至約400 pM； xvi. C8-S細胞之EC50，其為約115 pM； xvii. C8-S細胞之EC50，其為約145+/- 23.7 pM； xviii. C8-S細胞之EC50，其為約110 pM至約180 pM； xix. 至少一個所預測人類藥物動力學(PK)參數，其選自： a.    中央室(CL)之清除率，其為約0.12-0.15 mL/h/kg； b.   室間分佈清除率(CLF)，其為約0.15-0.51 mL/h/kg； c.    該中央室之分佈容積(V1)，其為約36-39 mL/kg； d.   該周邊室之分佈容積(V2)，其為約21-33 mL/kg；及/或 e.    終半衰期(t1 / 2 )，其為約12日； f.    終半衰期(t1 / 2 )，其為約15-17日；或 xx.  無與人類Fcγ受體或C1q之可偵測結合。
E2. 如實施例E1之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中人類αvβ8整合素之KD低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於536 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、500、510、520、530、531、532、533、534或535 pM)。
E3. 如實施例E1或E2之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中例如對於經純化人類αvβ8整合素，人類αvβ8整合素之KD低於或等於100 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90或100 pM)。
E4. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中人類αvβ8整合素之KD低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於489 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、460、470、480、485、486、487或488 pM)。
E5. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中小鼠αvβ8整合素之KD為約70.8 +/- 19.9 pM。
E6. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中食蟹獼猴αvβ8整合素之KD低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於507 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、500、501、502、503、504、505或506 pM)。
E7. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中食蟹獼猴αvβ8整合素之KD低於100 pM。
E8. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中大鼠αvβ8整合素之KD為約160 pM。
E9. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中經分離之抗體或其抗原結合片段展示人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如低於100 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、95 pM)之KD，例如如使用Biacore親和力檢定測定。
E10. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中經分離之抗體或其抗原結合片段展示人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如低於100 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、95或98 pM)之KD，例如如使用Biacore親和力檢定測定。
E11. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中抑制TGFβ反式活化之IC50低於鼠類抗體ADWA11，例如低於183 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、175、180、181或182 pM)。
E12. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中抑制U251細胞中之TGFβ反式活化之IC50為約199 +/- 93.6 pM。
E13. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中抑制TGFβ反式活化之IC50為約100 pM至約300 pM。
E14. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中U251細胞之EC50為約126 pM，其中標準差為加或減34 pM。
E15. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中U251細胞之EC50為約256 pM，其中標準差為加或減115 pM。
E16. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中U251細胞之EC50為約100 pM至約400 pM。
E17. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中C8-S細胞之EC50為約115 pM。
E18. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中C8-S細胞之EC50為約145 +/- 23.7 pM。
E19. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中C8-S細胞之EC50為約110 pM至約180 pM。
E20. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其具有至少一個所預測人類藥物動力學(PK)參數，其選自由以下組成之群： (i)       中央室(CL)之清除率，其為約0.12-0.15 mL/h/kg； (ii)     室間分佈清除率(CLF)，其為約0.15-0.51 mL/h/kg； (iii)    該中央室之分佈容積(V1)，其為約36-39 mL/kg； (iv)    該周邊室之分佈容積(V2)，其為約21-33 mL/kg；及/或 (v)      終半衰期(t1 / 2 )，其為約12-17日。
E21. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中經分離之抗體或其抗原結合片段展示無與人類Fcγ受體或C1q之可偵測結合。
E22. 如前述實施例中任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段進一步具有以下特性中之至少一者： (i)       特異性結合至αvβ8整合素(例如，來自人類、小鼠、食蟹獼猴及/或大鼠之αvβ8整合素)； (ii)     減少αvβ8整合素與潛伏相關肽(LAP)之間之相互作用； (iii)    減少TGF-β信號傳導； (iv)    有效地阻斷IC50 ≤10 nM的αvβ8整合素介導之TGFβ活化； (v)      對非人類靈長類(NHP)直系同源物具有相當的Kd (5倍內)； (vi)    選擇性結合人類αvβ8，且不可偵測地結合αvβ8之同源物(例如，αvβ1、αvβ3、αvβ5及αvβ6)； (vii)   單獨或與免疫調節劑，例如檢查點抑制劑之調節劑，例如PD-1、PD-L1、CTLA-4之抑制劑或刺激分子(例如4-1BB)之促效劑組合，在癌症之動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退； (viii) 與抗癌療法，例如放射線療法組合在癌症之動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退； (ix)    例如在單獨或與免疫調節劑(例如，PD-1、PD-L1或CTLA-4之抑制劑)組合以≤ 10 mg/kg投與時，在同基因型腫瘤移植模型中展示腫瘤生長之至少60%的減少； (x)      在向個體投與時在一或多種免疫調節劑，例如檢查點抑制劑之拮抗劑，例如PD-1、PD-L1或CTLA-4之拮抗劑或免疫反應之活化劑，例如4-1BB促效劑存在下增加抗腫瘤反應； (xi)    具有不視腫瘤模型中αvβ8整合素之表現而定之功效； (xii)   增加腫瘤微環境中CD8+ GzmB+ T細胞之豐度； (xiii) 在與檢查點抑制劑之拮抗劑(例如，抗PD-1或抗PD-L1抗體)組合使用時，例如在鱗狀細胞癌、乳癌及/或結腸癌之同基因型模型中展示腫瘤生長之減少，例如至少＞ 80%的減少； (xiv)  如藉由卡本-麥爾(Kaplan-Meier)分析所測定，展示個體之總存活率的統計學上顯著之提高； (xv)   具有高程度之熱穩定性； (xvi)  展示高濃度下之最少聚集；及 (xvii)  可在大規模製造條件下展示可再現表現及純度。
E23. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 一個、兩個或三個來自重鏈可變區之CDR (例如，H1、H2或H3)，及/或一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR (例如，L1、L2或L3)，其選自： (i)    包含SEQ ID NO: 8或14之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 9或15之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 10或16之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 11或17之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 12或18之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 13或19之胺基酸序列之CDR-L3，或 (ii)   相對於SEQ ID NO: 8或14包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H1， 相對於SEQ ID NO: 9或15包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H2， 相對於SEQ ID NO: 10或16包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H3， 相對於SEQ ID NO:11或17包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L1， 相對於SEQ ID NO: 12或18包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L2，或 相對於SEQ ID NO: 13或19包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L3，視情況其中： CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之任一者不包含以下中之任一者之胺基酸序列： (a)分別為SEQ ID NO: 22、23、24、25、26及27， (b)分別為SEQ ID NO: 28、29、30、31、32及33， (c)分別為SEQ ID NO: 22、23、24、71、72及73，或 (d)分別為SEQ ID NO: 28、29、30、74、75及76。
可替代地，或與本文所提供之實施例(例如，E1-E23)中之任一例組合，該抗體或其抗原結合片段具有以下態樣、特點及實施例中之一或多者。
E24. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 一個、兩個或三個來自重鏈可變區之CDR (例如，H1、H2或H3)，及/或一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR (例如，L1、L2或L3)，其選自： (i)    包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之CDR-L3，或 (ii)   相對於SEQ ID NO: 8包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H1， 相對於SEQ ID NO: 9包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H2， 相對於SEQ ID NO: 10包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H3， 相對於SEQ ID NO: 11包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L1， 相對於SEQ ID NO: 12包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L2，或 相對於SEQ ID NO: 13包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L3，視情況其中： CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之任一者不包含以下中之任一者之胺基酸序列： (a)分別為SEQ ID NO: 22、23、24、25、26及27，或 (b)分別為SEQ ID NO: 22、23、24、71、72及73。
E25. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 一個、兩個或三個一種重鏈可變區之互補決定區(CDR) (例如，H1、H2或H3)，及/或一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR (例如，L1、L2或L3)，其選自： 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之CDR-L3。
E26. 如實施例E24或E25之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR-H2，及 包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之CDR-H3。
E27. 如實施例E24至E26中任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之CDR-L3。
E28. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之CDR-L3。
E29. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自重鏈可變區之互補決定區(CDR) (例如，H1、H2或H3)，及/或一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR (例如，L1、L2或L3)： 包含DYYMN (SEQ ID NO: 8)之胺基酸序列之CDR-H1； 包含WIDPDX1 GNTIYX2 PKFQG (SEQ ID NO: 131)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或Q；且X2 可為以下中之任一者：胺基酸、除D外之胺基酸、D之保守性取代、D或E； 包含RLLMDY (SEQ ID NO: 10)之胺基酸序列之CDR-H3； 包含RSTKSLX3 HFNGNTYLF (SEQ ID NO: 132)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X3 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或S； 包含YYMSX4 LAS (SEQ ID NO: 133)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X4 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或S；及/或 包含X5 QSLEYPFT (SEQ ID NO: 134)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X5 可為以下中之任一者：胺基酸、除M外之胺基酸、M之保守性取代、M或Q； 例如其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3不包含分別為SEQ ID NO: 22、23、24、25、26及27或分別為SEQ ID NO: 22、23、24、71、72及73之胺基酸序列。
E30. 如實施例E29之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中X1 為Q，且X2 為E。
E31. 如實施例E29或E30之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中X3 為S。
E32. 如實施例E29至E31中任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中X4 為S。
E33. 如實施例E29至E32中任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中X5 為Q。
E34. 如實施例E29之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中X1 為Q，X2 為E，X3 為S，且X5 為Q。
E35. 如實施例E29之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中X1 為Q，X2 為E，且X3 為S。
E36.如實施例E29之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中X1 為Q，X2 為E，X3 為S，X4 為S，且X5 為Q。
E37. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自重鏈可變區之互補決定區(CDR) (例如，H1、H2或H3)，及/或一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR (例如，L1、L2或L3)： 包含DYYMN (SEQ ID NO: 8)之胺基酸序列之CDR-H1； 包含WIDPDX1 GX2 TIYX3 X4 X5 X6 X7 G (SEQ ID NO: 167)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或Q；X2 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或Q；X3 可為以下中之任一者：胺基酸、除D外之胺基酸、D之保守性取代、D或E；X4 可為以下中之任一者：胺基酸、除P外之胺基酸、P之保守性取代、P、Q、D或A；X5 可為以下中之任一者：胺基酸、除K外之胺基酸、K之保守性取代、K、S或A；X6 可為以下中之任一者：胺基酸、除F外之胺基酸、F之保守性取代、F或V；且X7 可為以下中之任一者：胺基酸、除Q外之胺基酸、Q之保守性取代、Q或K； 包含RLLMDY (SEQ ID NO: 10)之胺基酸序列之CDR-H3； 包含RSTKSX8 X9 HFNGNX10 YLF (SEQ ID NO: 168)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X8 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或I；X9 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或S；且X10 可為以下中之任一者：胺基酸、除T外之胺基酸、T之保守性取代、T或S； 包含YX11 X12 SX13 LX14 S (SEQ ID NO: 169)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X11 可為以下中之任一者：胺基酸、除Y外之胺基酸、Y之保守性取代、Y或A；X12 可為以下中之任一者：胺基酸、除M外之胺基酸、M之保守性取代、M或A；X13 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或S；且X14 可為以下中之任一者：胺基酸、除A外之胺基酸、A之保守性取代、A或Q；及/或 包含X15 QSX16 X17 X18 PX19 T (SEQ ID NO: 170)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X15 可為以下中之任一者：胺基酸、除M外之胺基酸、M之保守性取代、M或Q；X16 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或Y；X17 可為以下中之任一者：胺基酸、除E外之胺基酸、E之保守性取代、E或S；X18 可為以下中之任一者：胺基酸、除Y外之胺基酸、Y之保守性取代、Y或T；且X19 可為以下中之任一者：胺基酸、除F外之胺基酸、F之保守性取代、F、L或W； 例如其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3不包含分別為SEQ ID NO: 22、23、24、25、26及27或分別為SEQ ID NO: 22、23、24、71、72及73之胺基酸序列，視情況其中： X1 為Q，X2 為N，X3 為E，X4 為P，X5 為K，X6 為F，且X7 為Q， X8 為L，X9 為S，且X10 為T， X11 為Y，X12 為M，X13 為S，且X14 為A，及/或 X15 為Q，X16 為L，X17 為E，X18 為Y，且X19 為F。
E38. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自重鏈可變區之互補決定區(CDR) (例如，H1、H2或H3)，及/或一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR (例如，L1、L2或L3)： 包含DYYMN (SEQ ID NO: 8)之胺基酸序列之CDR-H1； 包含WIDPDX1 GNTIYX2 PKX3 QG (SEQ ID NO: 171)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或Q；X2 可為以下中之任一者：胺基酸、除D外之胺基酸、D之保守性取代、D或E；且X3 可為以下中之任一者：胺基酸、除F外之胺基酸、F之保守性取代、F或V； 包含RLLMDY (SEQ ID NO: 10)之胺基酸序列之CDR-H3； 包含RSTKSLX4 HFNGNTYLF (SEQ ID NO: 172)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X4 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或S； 包含YYX5 SX6 LAS (SEQ ID NO: 173)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X5 可為以下中之任一者：胺基酸、除M外之胺基酸、M之保守性取代、M或A；且X6 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或S；及/或 包含X7 QSX8 EYPFT (SEQ ID NO: 174)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X7 可為以下中之任一者：胺基酸、除M外之胺基酸、M之保守性取代、M或Q；且X8 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或Y； 例如其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3不包含分別為SEQ ID NO: 22、23、24、25、26及27或分別為SEQ ID NO: 22、23、24、71、72及73之胺基酸序列，視情況其中： X1 為Q，X2 為E，且X3 為F， X4 為S， X5 為M且X6 為S，及/或 X7 為Q且X8 為L。
E39. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VH區的CDR序列，其中CDR序列如根據Kabat所定義。
E40. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之VL區的CDR序列，其中CDR序列如根據Kabat所定義。
E41. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VH區的CDR序列及一個、兩個或三個來自包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之VL區的CDR-L1序列，其中CDR序列如根據Kabat所定義。
E42. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自由SEQ ID NO: 189、190或191之核酸序列編碼之多肽的CDR序列，其中CDR序列如根據Kabat所定義。
E43. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自由SEQ ID NO: 185或186之核酸序列編碼之多肽的CDR序列，其中CDR序列如根據Kabat所定義。
E44. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自由SEQ ID NO: 189、190或191之核酸序列編碼之多肽的CDR序列及一個、兩個或三個來自由SEQ ID NO: 185或186之核酸序列編碼之多肽的CDR序列，其中CDR序列如根據Kabat所定義。
E45. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一或多個選自以下之互補決定區(CDR)： (i)    包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列之CDR-L3；或 (ii)   相對於SEQ ID NO: 14包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H1， 相對於SEQ ID NO: 15包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H2， 相對於SEQ ID NO: 16包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-H3， 相對於SEQ ID NO: 17包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L1， 相對於SEQ ID NO: 18包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L2，或 相對於SEQ ID NO: 19包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)之CDR-L3，視情況其中： CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之任一者不包含以下中之任一者之胺基酸序列： (a)分別為SEQ ID NO: 28、29、30、31、32及33，或 (b)分別為SEQ ID NO: 28、29、30、74、75及76。
E46. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一或多個選自以下之互補決定區(CDR)： 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L1，及 包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之CDR-L2。
E47. 如實施例E45或E46之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之CDR-H2，及 包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之CDR-H3。
E48. 如實施例E45至E47中任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列之CDR-L3。
E49. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列之CDR-L3。
E50. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14)之胺基酸序列之CDR-H1； 包含WIDPDX1 GN (SEQ ID NO: 135)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或Q； 包含RLLMDY (SEQ ID NO: 16)之胺基酸序列之CDR-H3； 包含STKSLX2 HFNGNTYL (SEQ ID NO: 136)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X2 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或S； 包含YYMSX3 (SEQ ID NO: 137)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X3 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或S；及 包含QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)之胺基酸序列之CDR-L3； 例如其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3不包含分別為SEQ ID NO: 28、29、30、31、32及33或分別為SEQ ID NO: 28、29、30、74、75及76之胺基酸序列。
E51. 如實施例E50之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中X1 為Q，X2 為S，且X3 為S。
E52. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含GFNIX1 DYYMN (SEQ ID NO: 175)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X1 可為以下中之任一者：胺基酸、除K外之胺基酸、K之保守性取代、K或A； 包含WIDPDX2 GX3 (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X2 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或Q；且X3 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或Q； 包含RLLMDY (SEQ ID NO: 16)之胺基酸序列之CDR-H3； 包含STKSX4 X5 HFNGNX6 YL (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X4 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或I；X5 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或S；且X6 可為以下中之任一者：胺基酸、除T外之胺基酸、T之保守性取代、T或S； 包含YX7 X8 SX9 (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X7 可為以下中之任一者：胺基酸、除Y外之胺基酸、Y之保守性取代、Y或A；X8 可為以下中之任一者：胺基酸、除M外之胺基酸、M之保守性取代、M或A；且X9 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或S；及 包含QSX10 X11 X12 PX13 T (SEQ ID NO: 197)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X10 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或Y；X11 可為以下中之任一者：胺基酸、除E外之胺基酸、E之保守性取代、E或S；X12 可為以下中之任一者：胺基酸、除Y外之胺基酸、Y之保守性取代、Y或T；且X13 可為以下中之任一者：胺基酸、除F外之胺基酸、F之保守性取代、F、L或W； 例如其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3不包含分別為SEQ ID NO: 28、29、30、31、32及33或分別為SEQ ID NO: 28、29、30、74、75及76之胺基酸序列，視情況其中： X1 為Q，X2 為N，X3 為E，X4 為P，X5 為K，X6 為F，且X7 為Q， X8 為L，X9 為S，且X10 為T, X11 為Y，X12 為M，X13 為S，且X14 為A，及/或 X15 為Q，X16 為L，X17 為E，X18 為Y，且X19 為F。
E53. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14)之胺基酸序列之CDR-H1； 包含WIDPDX1 GN (SEQ ID NO: 135)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或Q； 包含RLLMDY (SEQ ID NO: 16)之胺基酸序列之CDR-H3； 包含STKSLX2 HFNGNTYL (SEQ ID NO: 136)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X2 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或S； 包含YYX3 SX4 (SEQ ID NO: 179)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X3 可為以下中之任一者：胺基酸、除M外之胺基酸、M之保守性取代、M或A；且X4 可為以下中之任一者：胺基酸、除N外之胺基酸、N之保守性取代、N或S；及 包含QSX5 EYPFT (SEQ ID NO: 180)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X5 可為以下中之任一者：胺基酸、除L外之胺基酸、L之保守性取代、L或Y； 例如其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3不包含分別為SEQ ID NO: 28、29、30、31、32及33或分別為SEQ ID NO: 28、29、30、74、75及76之胺基酸序列，視情況其中： X1 為Q， X2 為S， X3 為M且X4 為S，及/或 X5 為L。
E54. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VH區的CDR序列，其中CDR序列如根據Chothia所定義。
E55. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之VL區的CDR序列，其中CDR序列如根據Chothia所定義。
E56. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VH區的CDR序列及一個、兩個或三個來自包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之VL區的CDR-L1序列，其中CDR序列如根據Chothia所定義。
E57. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自由SEQ ID NO: 189、190或191之核酸序列編碼之多肽的CDR序列，其中CDR序列如根據Chothia所定義。
E58. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自由SEQ ID NO: 185或186之核酸序列編碼之多肽的CDR序列，其中CDR序列如根據Chothia所定義。
E59. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一個、兩個或三個來自由SEQ ID NO: 189、190或191之核酸序列編碼之多肽的CDR序列及一個、兩個或三個來自由SEQ ID NO: 185、186之核酸序列編碼之多肽的CDR序列，其中CDR序列如根據Chothia所定義。
E60. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，該VH構架區包含與VH區之VH構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列，該VH區包含SEQ ID NO: 6、34-46、88-91或93中之任一者之胺基酸序列。
E61. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，該VL構架區包含與VL區之VL構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列，該VL區包含SEQ ID NO: 7、47-69或92中之任一者之胺基酸序列。
E62. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，該VH構架區包含與IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48之生殖系胺基酸序列具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的胺基酸序列。
E63. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，該VL構架區包含與IGKV1-39、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11之生殖系胺基酸序列具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的胺基酸序列。
E64. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，該VH構架區包含相對於VH區之VH構架區包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23個取代的胺基酸序列，該VH區包含SEQ ID NO: 6、34-46、88-91或93中之任一者之胺基酸序列。
E65. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，該VL構架區包含相對於VL區之VL構架區包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23個取代的胺基酸序列，該VL區包含SEQ ID NO: 7、47-69或92中之任一者之胺基酸序列。
E66. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，該VH構架區包含相對於IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48之生殖系胺基酸序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23個取代的胺基酸序列。
E67. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，該VL構架區包含相對於IGKV1-39、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11之生殖系胺基酸序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23個取代的胺基酸序列。
E68. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含一或多個選自E233、E318、K320及R322之位置處之取代(例如，E233P、E318A、K320A及R322A)的鼠類IgG1 Fc區，例如其中如根據Eu編號方案(參見例如美國專利第5,624,821號)編號，該鼠類IgG1 Fc區包含233P、E318A、K320A及R322A取代中之一或多者。
E69. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含一或多個選自L234、L235及G237之位置處之取代(例如，L234A、L235A及G237A)的人類IgG1 Fc區，例如其中如根據Eu編號方案編號，人類IgG1 Fc區包含L234A、L235A及G237A取代中之一或多者。
E70. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體進一步包含VH區，該VH區包含IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48之生殖系VH胺基酸序列之變異體，其中如根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，VH區包含一或多個位置T28、F29、A49、R72、N74、A75及/或L79處之取代(例如，一或多個選自T28N、F29I、A49G、R72A、N74T、A75S及L79A之取代)，視情況其中VH區包含以下取代： (i) T28N及F29I； (ii) T28N、F29I及R72A； (iii) T28N、F29I、R72A、A49G及L79A； (iv) T28N、F29I、R72A、N74T及A75S；或 (v) T28N、F29I、R72A、A49G、L79A、N74T及A75S， 其中(i)-(v)如根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，視情況其中： 根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，VH區包含取代T28N、F29I、R72A、A49G、L79A、N74T及A75S。
E71. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體進一步包含VH區，其包含以下中之一或多個(例如，2、3、4、5、6個或所有)： (a)位置28處之Asn， (b)位置29處之Ile， (c)位置49處之Gly， (d)位置72處之Ala， (e)位置74處之Thr， (f)位置75處之Ser，及 (g)位置79處之Ala，其根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，視情況其中VH區包含： (i)位置28處之Asn及位置29處之Ile； (ii)位置28處之Asn、位置29處之Ile及位置72處之Ala； (iii)位置28處之Asn、位置29處之Ile、位置72處之Ala、位置49處之Gly及位置79處之Ala； (iv)位置28處之Asn、位置29處之Ile、位置72處之Ala、位置74處之Thr及位置75處之Ser；或 (v)位置28處之Asn、位置29處之Ile、位置721處之Ala、位置49處之Gly、位置79處之Ala、位置74處之Thr及位置75處之Ser，其根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，視情況其中： 根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，VH區包含位置28處之Asn、位置29處之Ile、位置72處之Ala、位置49處之Gly、位置79處之Ala、位置743處之Thr及位置75處之Ser。
E72. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體進一步包含VL區，其包含IGKV1-39、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11之生殖系VL胺基酸序列之變異體，其中如根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，VH區包含一或多個位置Y36及/或L46處之取代(例如，Y36F及/或L46R)，視情況其中VL區包含以下取代： (i) L46R；或 (ii) L46R及Y36F， 其中(i)-(v)如根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，視情況其中根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，VL區包含取代L46R。
E73. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體進一步包含含以下中之一個或兩個之VL區： (a)位置36處之Tyr，及 (b)位置46處之Leu，其根據SEQ ID NO:128之胺基酸序列編號，視情況其中VL區包含： (i)位置46處之Leu；或 (ii)位置46處之Leu及位置36處之Tyr，其根據SEQ ID NO:128之胺基酸序列編號，視情況其中： 根據SEQ ID NO:128之胺基酸序列編號，VL區包含位置46處之Leu。
E74. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含一或多個如前述實施例中之任一例之CDR，其中一或多個CDR包含至少一個胺基酸改變但不超過兩個、三個或四個改變(例如，取代、刪除或***，例如保守性取代)；其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3不包含分別為SEQ ID NO: 22、23、24、25、26及27、分別為SEQ ID NO: 22、23、24、71、72及73、分別為SEQ ID NO: 28、29、30、31、32及33或分別為SEQ ID NO: 28、29、30、74、75及76之胺基酸序列。
E75. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含含表1中所闡述之胺基酸序列之VH區。
E76. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含含表1中所闡述之胺基酸序列之VL區。
E77. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含與SEQ ID NO: 6、34-46、88-91或93中之任一者具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列的VH區。
E78. 如實施例E77之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VH區。
E79. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含與SEQ ID NO: 7、47-69或92中之任一者具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列的VL區。
E80. 如實施例E79之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性(例如，100%)的VL區。
E81. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含與SEQ ID NO: 6、34-46、88-91或93中之任一者具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列的VH區。
E82. 如實施例E81之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性(例如，100%)之VH區。
E83. 如實施例E81或E82之經分離之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性(例如，100%)之VL區。
E84. 如實施例E81之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VH區。
E85. 如實施例E84之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之VL區。
E86. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含與SEQ ID NO: 7、47-69或92中之任一者具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列的VL區。
E87. 如實施例E86之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性(例如，100%)之VL區。
E88. 如實施例E86或E87之經分離之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性(例如，100%)之VH區。
E89. 如實施例E86之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含選自SEQ ID NO: 7、47-69或92之胺基酸序列之VL區。
E90. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之VH區，其中根據SEQ ID NO: 39編號，一或多個該SEQ ID NO: 39之胺基酸殘基包含一或多個選自K30A、N55Q、N57Q、D61E、P62A、K63A及F64V之胺基酸取代。
E91. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含以下中之至少一者之VH區： (a)位置30處之Ala (b)位置55處之Gln， (c)位置57處之Gln， (d)位置61處之Glu， (e)位置62處之Ala， (f)位置63處之Ala，及 (g)位置64處之Val，其根據SEQ ID NO: 39編號。
E92. 如實施例E90之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該SEQ ID NO: 39包含： (i) N55Q及D61E；或 (ii) N55Q、D61E及F64V，其根據SEQ ID NO: 39編號，視情況其中根據SEQ ID NO: 39編號，該SEQ ID NO: 39包含N55Q及D61E取代。
E93. 如實施例E91之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中VH區包含： (i)位置55處之Gln及位置61處之Glu；或 (ii)位置55處之Gln、位置61處之Glu及位置64處之Val，其根據SEQ ID NO: 39編號，視情況其中根據SEQ ID NO: 39編號，VH區包含位置55處之Gln及位置61處之Glu。
E94. 如實施例E90或E92之經分離之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之VL區，其中根據SEQ ID NO: 47編號，一或多個該SEQ ID NO: 47之胺基酸殘基包含一或多個選自L30S、Y55A、M56A、N58S、A60Q、M94Q、L97Y、F101L、F101W及Q105G或其任何組合之胺基酸取代，視情況其中一或多個該SEQ ID NO: 47之胺基酸殘基包含一或多個選自L30S、M56A、N58S、M94Q、L97Y及Q105G之胺基酸取代。
E95. 如實施例E91或E93之經分離之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含含以下中之至少一者之VL區： (a)位置30處之Ser， (b)位置55處之Ala， (c)位置56處之Ala， (d)位置58處之Ser， (e)位置60處之Gln， (f)位置94處之Gln， (g)位置97處之Tyr， (h)位置101處之Leu， (i)位置101處之Trp，及 (j)位置105處之Gly，其根據SEQ ID NO: 47編號，視情況其中VL區包含以下中之至少一者： (a)位置30處之Ser， (b)位置56處之Ala， (c)位置58處之Ser， (d)位置94處之Gln， (e)位置97處之Tyr，及 (f)位置105處之Gly。
E96. 如實施例E94之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中根據SEQ ID NO: 47編號，該SEQ ID NO: 47包含L30S、M56A、N58S、M94Q、L97Y及/或Q105G取代。
E97. 如實施例E95之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中根據SEQ ID NO: 47編號，VL區包含位置30處之Ser、位置56處之Ala、位置58處之Ser、位置94處之Gln、位置97處之Tyr及/或位置105處之Gly。
E98. 如實施例E94之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中根據SEQ ID NO: 47編號，該SEQ ID NO: 47包含L30S、N58S、M94Q及/或Q105G取代，視情況其中該SEQ ID NO: 47包含L30S、N58S、M94Q及Q105G取代中之所有。
E99. 如實施例E95之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中根據SEQ ID NO: 47編號，VL區包含位置30處之Ser、位置58處之Ser、位置94處之Gln及/或位置105處之Gly，視情況其中VL區包含以下中之所有：位置30處之Ser、位置58處之Ser、位置94處之Gln及位置105處之Gly。
E100. 如實施例E94之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中根據SEQ ID NO: 39編號，該SEQ ID NO: 39包含N55Q及D61E取代，且根據SEQ ID NO: 47編號，該SEQ ID NO: 47包含L30S、N58S、M94Q及Q105G取代。
E101. 如實施例E95之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中根據SEQ ID NO: 39編號，VH區包含位置55處之Gln及位置61處之Glu，且根據SEQ ID NO: 47編號，VL區包含位置30處之Ser、位置58處之Ser、位置94處之Gln及位置105處之Gly。
E102. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之VL區，其中根據SEQ ID NO: 47編號，一或多個該SEQ ID NO: 47之胺基酸殘基包含一或多個選自L30S、Y55A、M56A、N58S、A60Q、M94Q、L97Y、F101L、F101W及Q105G或其任何組合(例如，L30S、M56A、N58S、M94Q、L97Y及Q105G中之所有)之胺基酸取代，視情況其中一或多個該SEQ ID NO: 47之胺基酸殘基包含一或多個選自L30S、M56A、N58S、M94Q、L97Y及Q105G之胺基酸取代。
E103. 如實施例E102之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中根據SEQ ID NO: 47編號，該SEQ ID NO: 47包含L30S、N58S、M94Q及/或Q105G取代。
E104. 如實施例E102之經分離之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之VH區，其中根據SEQ ID NO: 39編號，SEQ ID NO: 39之序列包含一或多個選自K30A、N55Q、N57Q、D61E、P62A、K63A及F64V或其任何組合之胺基酸取代。
E105. 如實施例E104之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該SEQ ID NO: 39包含N55Q及D61E取代。
E106. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含與SEQ ID NO: 2或3具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列之重鏈。
E107. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含含與SEQ ID NO: 5具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列之輕鏈。
E108. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的重鏈可變區及含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的輕鏈可變區。
E109. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含SEQ ID NO: 2或3之胺基酸序列的重鏈及含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的輕鏈。
E110. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： (a)      含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之輕鏈及 (b)      含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈，其有或無C端離胺酸殘基。
E111. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列編碼之胺基酸序列的重鏈、含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列編碼之胺基酸序列的輕鏈或兩者。
E112. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含與SEQ ID NO: 2或3具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (例如，100%)序列一致性之胺基酸序列的重鏈，視情況其中重鏈包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列。
E113. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含與SEQ ID NO: 5具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (例如，100%)序列一致性之胺基酸序列的輕鏈，視情況其中輕鏈包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列，視情況其中經分離之抗體或其抗原結合片段進一步包含含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之重鏈。
E114. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及含包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的輕鏈。
E115. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含含包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的重鏈及含包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的輕鏈。
E116. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或所有四者)，其包含與包含SEQ ID NO: 6、34-46、88-91或93中之任一者之胺基酸序列的VH區之VH構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列，或具有至少一個但少於二十個改變，例如整個VH構架區(包括FR1、FR2、FR3及FR4)之胺基酸序列之胺基酸取代或刪除的胺基酸序列。
E117. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4)，其包含與包含SEQ ID NO: 7、47-69或92中之任一者之胺基酸序列的VL區之VL構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、十個、十五個但少於二十個改變，例如整個VL構架區(包括FR1、FR2、FR3及FR4)之胺基酸序列之胺基酸取代或刪除的胺基酸序列。
E118. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4)，其包含與IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48之生殖系胺基酸序列內之VH構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的胺基酸序列，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、十個、十五個但少於二十個改變，例如整個VH構架區(包括FR1、FR2、FR3及FR4)之胺基酸序列之胺基酸取代或刪除的胺基酸序列。
E119. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1, 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2, 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3, 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1, 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體包含VH區，其包含IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48之生殖系VH胺基酸序列之變異體，其中如根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，VH區包含一或多個位置T28、F29、A49、R71、N73、A74及/或L78處之取代(例如，一或多個選自T28N、F29I、A49G、R72A、N74T、A75S及L79A之取代)，視情況其中VH區包含以下取代： (i) T28N及F29I； (ii) T28N、F29I及R72A； (iii) T28N、F29I、R72A、A49G及L79A； (iv) T28N、F29I、R72A、N74T及A75S；或 (v) T28N、F29I、R72A、A49G、L79A、N74T及A75S， 其中(i)-(v)如根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，視情況其中： 根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，VH區包含取代T28N、F29I、R72A、A49G、L79A、N74T及A75S。
E120. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體包含含以下中之一或多個(例如，2個、3個、4個、5個、6個或所有)之VH區： (a)位置28處之Asn， (b)位置29處之Ile， (c)位置49處之Gly， (d)位置72處之Ala， (e)位置74處之Thr， (f)位置75處之Ser，及 (g)位置79處之Ala，其根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，視情況其中VH區包含： (i)位置28處之Asn及位置29處之Ile； (ii)位置28處之Asn、位置29處之Ile及位置72處之Ala； (iii)位置28處之Asn、位置29處之Ile、位置72處之Ala、位置49處之Gly及位置79處之Ala； (iv)位置28處之Asn、位置29處之Ile、位置72處之Ala、位置74處之Thr及位置75處之Ser；或 (v)位置28處之Asn、位置29處之Ile、位置72處之Ala、位置49處之Gly、位置79處之Ala、位置74處之Thr及位置75處之Ser，其根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，視情況其中： 根據SEQ ID NO: 127之胺基酸序列編號，VH區包含位置28處之Asn、位置29處之Ile、位置72處之Ala、位置49處之Gly、位置79處之Ala、位置74處之Thr及位置75處之Ser。
E121. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4)，其包含與IGKV1-39、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11之生殖系胺基酸序列具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的胺基酸序列，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、十個、十五個但少於二十個改變，例如整個VL構架區(包括FR1、FR2、FR3及FR4)之胺基酸序列之胺基酸取代或刪除的胺基酸序列。
E122. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體包含VL區，其包含IGKV1-39、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11之生殖系VL胺基酸序列之變異體，其中如根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，VL區包含一或多個位置Y36及/或L46處之取代(例如，Y36F及/或L46R)，視情況其中VL區包含以下取代： (i) L46R；或 (ii) L46R及Y36F， 其中(i)及(ii)如根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，視情況其中根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，VL區包含取代L46R。
E123. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體包含含以下中之一個或兩個之VL區： (a)位置36處之Tyr，及 (b)位置46處之Leu，其根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，視情況其中VL區包含： (i)位置46處之Leu；或 (ii)位置46處之Leu及位置36處之Tyr，其根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，視情況其中： 根據SEQ ID NO: 128之胺基酸序列編號，VL區包含位置46處之Leu。
E124. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其進一步包含鼠類IgG1 Fc區，如根據Eu編號方案編號，該鼠類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之鼠類IgG1 Fc包含一或多個選自位置E233、E318、K320及R322之取代(例如，E233P、E318A、K320A及R322A)。
E125. 如實施例E124之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中如根據Eu編號方案編號，該鼠類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之鼠類IgG1 Fc包含E233P、E318A、K320A及R322A取代。
E126. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR-L3；且 其進一步包含人類IgG1 Fc區，如根據Eu編號方案編號，該人類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之人類IgG1 Fc包含一或多個選自位置L234、L235及G237之取代(例如，L234A、L235A及G237A)。
E127. 如實施例E126之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中如根據Eu編號方案編號，該人類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之人類IgG1 Fc包含L234A、L235A及G237A取代。
E128. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、二者、三者或四者)，其包含與包含SEQ ID NO: 6、34-46、88-91或93中之任一者之胺基酸序列的VH區之VH構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列。
E129. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、二者、三者或四者)，其包含與包含SEQ ID NO: 7、47-69或92中之任一者之胺基酸序列的VL區之VL構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列。
E130. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、二者、三者或四者)，其包含與IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48之生殖系胺基酸序列內之VH構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的胺基酸序列。
E131. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、二者、三者或四者)，其包含與IGKV1-39、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11之生殖系胺基酸序列具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的胺基酸序列。
E132. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之CDR-L3；且 其進一步包含鼠類IgG1 Fc區，如根據Eu編號方案編號，該鼠類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之鼠類IgG1 Fc包含一或多個選自位置E233、E318、K320及R322之取代(例如，E233P、E318A、K320A及R322A)。
E133. 如實施例E132之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中如根據Eu編號方案編號，該鼠類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之鼠類IgG1 Fc包含E233P、E318A、K320A及R322A取代。
E134. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之CDR-L3；且 其進一步包含人類IgG1 Fc區，如根據Eu編號方案編號，該人類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之人類IgG1 Fc包含L234A、L235A及G237A取代。
E135. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，其包含與包含SEQ ID NO: 6、34-46、88-91或93中之任一者之胺基酸序列的VH區之VH構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列。
E136. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，其包含與包含SEQ ID NO: 6、34-46、88-91或93中之任一者之胺基酸序列的VH區之VH構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列。
E137. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，其包含與包含SEQ ID NO: 7、47-69或92中之任一者之胺基酸序列的VL區之VL構架區具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列。
E138. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VH構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，其包含與IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48之生殖系胺基酸序列具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的胺基酸序列。
E139. 一種特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之CDR-L3；且 其中該抗體進一步包含VL構架區(例如，FR1、FR2、FR3或FR4中之一者、兩者、三者或四者)，其包含與IGKV1-39、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11之生殖系胺基酸序列具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的胺基酸序列。
E140. 一種經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含： 包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之CDR-H1， 包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之CDR-H2， 包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之CDR-H3， 包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之CDR-L1， 包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之CDR-L2，及 包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之CDR-L3；且 其進一步包含人類IgG1 Fc區，如根據Eu編號方案編號，該人類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之人類IgG1 Fc包含一或多個選自位置L234、L235及G237之取代(例如，L234A、L235A及G237A)。
E141. 如實施例E140之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中如根據Eu編號方案編號，該人類IgG1 Fc區例如相對於表1中所闡述之人類IgG1 Fc包含L234A、L235A及G237A取代。
E142. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)。
E143. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為多價抗體(例如，二價抗體)。
E144. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為人類化抗體、人類抗體、鼠類抗體、嵌合抗體或駱駝抗體。
E145. 一種特異性結合至αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含VH區及VL區，其中該VH區及VL區包含以下胺基酸序列： (i)分別為SEQ ID NO: 6及7，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (ii)分別為SEQ ID NO: 34及65，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (iii)分別為SEQ ID NO: 34及62，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (iv)分別為SEQ ID NO: 34及66，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (v)分別為SEQ ID NO: 34及63，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (vi)分別為SEQ ID NO: 34及64，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (vii)分別為SEQ ID NO: 37及65，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (viii)分別為SEQ ID NO: 37及62，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (ix)分別為SEQ ID NO: 37及66，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (x)分別為SEQ ID NO: 37及63，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xi)分別為SEQ ID NO: 37及64，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xii)分別為SEQ ID NO: 36及65，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xiii)分別為SEQ ID NO: 36及62，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xiv)分別為SEQ ID NO: 36及66，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xv)分別為SEQ ID NO: 36及63，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xvi)分別為SEQ ID NO: 36及64，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xvii)分別為SEQ ID NO: 35及65，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xviii)分別為SEQ ID NO: 35及62，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xix)分別為SEQ ID NO: 35及66，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xx)分別為SEQ ID NO: 35及63，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxi)分別為SEQ ID NO: 35及64，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxii)分別為SEQ ID NO: 38及65，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxiii)分別為SEQ ID NO: 38及62，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxiv)分別為SEQ ID NO: 38及66，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxv)分別為SEQ ID NO: 38及63，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxvi)分別為SEQ ID NO: 38及64，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxvii)分別為SEQ ID NO: 20及21，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxviii)分別為SEQ ID NO: 88及47，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxix)分別為SEQ ID NO: 89及47，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxx)分別為SEQ ID NO: 90及47，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxxi)分別為SEQ ID NO: 90及92，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxxii)分別為SEQ ID NO: 39及47，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxxiii)分別為SEQ ID NO: 6及67，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxxiv)分別為SEQ ID NO: 6及68，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxxv)分別為SEQ ID NO: 6及69，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxxvi)分別為SEQ ID NO: 93及67，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxxvii)分別為SEQ ID NO: 93及68，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列； (xxxviii)分別為SEQ ID NO: 93及69，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列；或 (xxxix)分別為SEQ ID NO: 93及7，或與其具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或較佳100%序列一致性的胺基酸序列，最佳其中： 該VH區及VL區包含以下之胺基酸序列： (i)分別為SEQ ID NO: 6及7； (ii)分別為SEQ ID NO: 34及65； (iii)分別為SEQ ID NO: 34及62； (iv)分別為SEQ ID NO: 34及66； (v)分別為SEQ ID NO: 34及63； (vi)分別為SEQ ID NO: 34及64； (vii)分別為SEQ ID NO: 37及65； (viii)分別為SEQ ID NO: 37及62； (ix)分別為SEQ ID NO: 37及66； (x)分別為SEQ ID NO: 37及63； (xi)分別為SEQ ID NO: 37及64； (xii)分別為SEQ ID NO: 36及65； (xiii)分別為SEQ ID NO: 36及62； (xiv)分別為SEQ ID NO: 36及66； (xv)分別為SEQ ID NO: 36及63； (xvi)分別為SEQ ID NO: 36及64； (xvii)分別為SEQ ID NO: 35及65； (xviii)分別為SEQ ID NO: 35及62； (xix)分別為SEQ ID NO: 35及66； (xx)分別為SEQ ID NO: 35及63； (xxi)分別為SEQ ID NO: 35及64； (xxii)分別為SEQ ID NO: 38及65； (xxiii)分別為SEQ ID NO: 38及62； (xxiv)分別為SEQ ID NO: 38及66； (xxv)分別為SEQ ID NO: 38及63； (xxvi)分別為SEQ ID NO: 38及64； (xxvii)分別為SEQ ID NO: 20及21； (xxviii)分別為SEQ ID NO: 88及47； (xxix)分別為SEQ ID NO: 89及47； (xxx)分別為SEQ ID NO: 90及47； (xxxi)分別為SEQ ID NO: 90及92； (xxxii)分別為SEQ ID NO: 39及47； (xxxiii)分別為SEQ ID NO: 6及67； (xxxiv)分別為SEQ ID NO: 6及68； (xxxv)分別為SEQ ID NO: 6及69； (xxxvi)分別為SEQ ID NO: 93及67； (xxxvii)分別為SEQ ID NO: 93及68； (xxxviii)分別為SEQ ID NO: 93及69；或 (xxxix)分別為SEQ ID NO: 93及7。
E146. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含或具有選自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD及IgE之重鏈恆定區的重鏈恆定區(Fc)。
E147. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體屬於選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其任何變異體之同型。
E148. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含IgG1或IgG2 (例如，人類IgG1或人類IgG2)之重鏈恆定區。
E149. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含或具有人類IgG1之重鏈恆定區。
E150. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含或具有選自例如κ或λ之輕鏈恆定區的輕鏈恆定區。
E151. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含或具有κ (例如，人類κ)輕鏈恆定區。
E152. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含具有變化的鉸鏈區以減少效應細胞功能的重鏈之Fc區。
E153. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其具有減少之抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及/或減少之補體依賴性細胞毒性(CDC)。
E154. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，根據Eu編號方案編號，該經分離之抗體或其抗原結合片段例如與人類IgG1相比包含具有L234、L235或G237中之至少一個位置處之取代的鉸鏈區。
E155. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含人類IgG1 Fc區，根據Eu編號方案編號，該人類IgG1 Fc區包含至少一個選自L234A、L235A及G237A之取代。
E156. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其具有包含EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAP (SEQ ID NO: 126)之胺基酸序列之鉸鏈區。
E157. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其經改變以移除免疫原性T細胞抗原決定基。
E158. 如實施例E157之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含VL，根據SEQ ID NO: 47編號，該VL包含至少一個選自由L30S、N58S、M56A、M94Q、L97Y及Q105G組成之群之取代。
E159. 如前述實施例中之任一例之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有以下特性中之至少一者： (i)       表示為KD的人類αvβ8整合素之結合親和力，其低於鼠類抗體ADWA11，例如低於536 pM； (ii)     人類αvβ8整合素之KD，其對於經純化人類αvβ8整合素低於或等於100 pM； (iii)    小鼠αvβ8整合素之KD，其低於100 pM； (iv)    食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於100 pM； (v)      大鼠αvβ8整合素之KD，其為約160 pM； (vi)    人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如低於100 pM之KD，例如如使用Biacore親和力檢定測定； (vii)   抑制TGFβ反式活化之IC50，其低於183 pM； (viii) 抑制U251細胞中之TGFβ反式活化之IC50，其為約100 pM至約300 pM； (ix)    U251細胞之EC50，其為約100 pM至約400 pM； (x)      C8-S細胞之EC50，其為約110 pM至約180 pM； (xi)    至少一個所預測人類藥物動力學(PK)參數，其選自： a.         中央室(CL)之清除率，其為約0.12-0.15 mL/h/kg； b.        室間分佈清除率(CLF)，其為約0.15-0.51 mL/h/kg； c.         該中央室之分佈容積(V1)，其為約36-39 mL/kg； d.        該周邊室之分佈容積(V2)，其為約21-33 mL/kg；及/或 e.         終半衰期(t1 / 2 )，其為約12-17日；及 (xii)   無與人類Fcγ受體或C1q之可偵測結合。
E160. 如前述實施例中之任一例之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有以下特性中之至少一者： (i)       特異性結合至αvβ8整合素而不結合至其他整合素； (ii)     減少αvβ8整合素與潛伏相關肽(LAP)之間之相互作用； (iii)    減少TGF-β信號傳導； (iv)    有效地阻斷IC50 ≤10 nM的αvβ8整合素介導之TGFβ活化； (v)      對非人類靈長類(NHP)直系同源物具有相當的Kd (5倍內)； (vi)    選擇性結合人類αvβ8，且不可偵測地結合αvβ8之同源物(例如，αvβ1、αvβ3、αvβ5及αvβ6)； (vii)   單獨或與免疫調節劑，例如檢查點抑制劑之調節劑，例如PD-1、PD-L1、CTLA-4之抑制劑或刺激分子(例如4-1BB)之促效劑組合，在癌症(例如鱗狀細胞癌、乳癌及/或結腸癌)之人類個體或動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退； (viii) 與抗癌療法，例如放射線療法組合在癌症之動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退； (ix)    例如在單獨或與免疫調節劑(例如，PD-1、PD-L1或CTLA-4之抑制劑)組合以≤ 10 mg/kg投與時，在同基因型腫瘤移植模型中展示腫瘤生長之至少60%的減少； (x)      在向個體(例如小鼠或人類個體)投與時在一或多種免疫調節劑，例如檢查點抑制劑之拮抗劑或檢查點活化劑之促效劑，例如PD-1、PD-L1或CTLA-4之拮抗劑或免疫反應之活化劑，例如4-1BB促效劑存在下增加抗腫瘤反應； (xi)    具有不視腫瘤模型中αvβ8整合素之表現而定之功效； (xii)   可增加腫瘤微環境中CD8+ GzmB+ T細胞之豐度，例如作為單一療法； (xiii) 在與檢查點抑制劑之拮抗劑(例如，抗PD-1或抗PD-L1抗體)組合使用時，例如在鱗狀細胞癌、乳癌及/或結腸癌之同基因型模型中展示腫瘤生長之減少，例如至少＞ 80%的減少； (xiv)  如藉由卡本-麥爾分析所測定，展示個體之總存活率的統計學上顯著之提高； (xv)   展示高程度之熱穩定性； (xvi)  展示高濃度下之最少聚集；及 (xvii)  可在大規模製造條件下展示可再現表現及純度。
E161. 如前述實施例中之任一例之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有以下特性中之至少一者： (i)       表示為KD的人類αvβ8整合素之結合親和力，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於536 pM； (ii)     人類αvβ8整合素之KD，其對於經純化人類αvβ8整合素低於或等於100 pM； (iii)    小鼠αvβ8整合素之KD，其低於100 pM； (iv)    食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於100 pM； (v)      大鼠αvβ8整合素之KD，其為約160 pM； (vi)    人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如低於100 pM之KD，如使用Biacore親和力檢定測定； (vii)   抑制TGFβ反式活化之IC50，其低於183 pM； (viii) 抑制U251細胞中之TGFβ反式活化之IC50，其為約100 pM至約300 pM； (ix)    U251細胞之EC50，其為約126 pM，其中標準差為加或減34 pM； (x)      U251細胞之EC50，其為約256 pM，其中標準差為加或減115 pM； (xi)    U251細胞之EC50，其為約80 pM至約400 pM； (xii)   C8-S細胞之EC50，其為約115 pM； (xiii) C8-S細胞之EC50，其為約145 pM，其中標準差為加或減23.7 pM； (xiv)  C8-S細胞之EC50，其為約110 pM至約180 pM； (xv)   至少一個所預測人類藥物動力學(PK)參數，其選自： a.         中央室(CL)之清除率，其為約0.12-0.15 mL/h/kg； b.        室間分佈清除率(CLF)，其為約0.15-0.51 mL/h/kg； c.         該中央室之分佈容積(V1)，其為約36-39 mL/kg； d.        該周邊室之分佈容積(V2)，其為約21-33 mL/kg；及/或 e.         終半衰期(t1 / 2 )，其為約12-17日；及 (xvi)  無與人類Fcγ受體或C1q之可偵測結合。
E162. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其結合對於經純化人類αvβ8整合素KD 低於或等於100 pM之人類αvβ8整合素。
E163. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其結合KD 低於536 pM之人類αvβ8整合素。
E164. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其抑制IC50低於183 pM之TGFβ活化。
E165. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其抑制IC50為100 pM至約300 pM之TGFβ活化。
E166.如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其抑制IC50為199 +/- 93.6 pM之U251細胞中之TGFβ活化。
E167. 一種醫藥組合物，其包含如前述實施例中之任一例之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
E168. 一種核酸分子，其編碼如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段。
E169. 一種核酸分子，其包含： (i)       與SEQ ID NO: 1、183、189或191具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性且編碼重鏈之核苷酸序列； (ii)     與SEQ ID NO: 190具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性且編碼重鏈可變區之核苷酸序列； (iii)    與SEQ ID NO: 192或193具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性且編碼重鏈恆定區之核苷酸序列；或 (iv)    與ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列之核酸序列具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的核苷酸序列。
E170. 一種核酸分子，其包含： (i)       與SEQ ID NO: 4或185具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性且編碼輕鏈之核苷酸序列； (ii)     與SEQ ID NO:186具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性且編碼輕鏈可變區之核苷酸序列； (iii)    與SEQ ID NO: 194具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性且編碼輕鏈恆定區之核苷酸序列；或 (iv)    與ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列之核酸序列具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性的核苷酸序列。
E171. 一種核酸分子，其包含與SEQ ID NO: 1或183具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性之核苷酸序列及與SEQ ID NO: 4具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性之核苷酸序列。
E172. 一種核酸分子，其包含與SEQ ID NO: 189或191具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性之核苷酸序列及與SEQ ID NO: 185具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性之核苷酸序列。
E173. 一種載體，其包含如實施例E168至E172中任一例之核酸分子。
E174. 一種宿主細胞，其包含如實施例E168至E172中任一例之核酸分子或如實施例E173之載體。
E175. 如實施例E174之宿主細胞，其中該宿主細胞為哺乳動物細胞，例如人類細胞。
E176. 如實施例E175之宿主細胞，其中該宿主細胞為CHO細胞、COS細胞、HEK-293細胞、NS0細胞、PER.C6®細胞或Sp2.0細胞。
E177. 一種製造特異性結合至人類αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段的方法，該方法包含在其中該抗體或抗原結合片段由該宿主細胞表現之條件下培養如實施例E174至E176中任一例之宿主細胞。
E178. 如實施例E177之方法，其進一步包含分離該抗體或其抗原結合片段。
E179. 一種減少有需要之個體之TGFβ信號傳導的方法，該方法包含向有需要之個體投與治療有效量之如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167中之任一例之醫藥組合物。
E180. 一種降低有需要之個體之αvβ8整合素活性的方法，該方法包含向有需要之個體投與治療有效量之如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167之醫藥組合物。
E181. 一種治療與異常(例如，增加之) TGFβ信號傳導相關或由其介導之疾病、病症或病況之方法，該方法包含向有需要之個體投與治療有效量之如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167之醫藥組合物。
E182. 一種誘導個體之抗腫瘤反應之方法，該方法包含向有需要之個體投與治療有效量之如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167中之任一例之醫藥組合物，視情況其中該抗體或其抗原結合片段與第二療法組合投與，視情況其中該抗體或其抗原結合片段與第二療法同時、依序或分開投與，視情況其中： (i)該抗體或其抗原結合片段在投與第二療法之前投與，或 (ii)該抗體或其抗原結合片段在投與第二療法之後投與。
E183. 如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167之醫藥組合物，其用於降低個體之αvβ8整合素之活性。
E184. 一種治療癌症之方法，該方法包含向有需要之個體投與治療有效量之如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167之醫藥組合物。
E185. 如實施例E184之方法，其中該抗體或其抗原結合片段具有以下特性中之至少一者： (i)       特異性結合至αvβ8整合素(例如，來自人類、小鼠、食蟹獼猴及/或大鼠之αvβ8整合素)； (ii)     減少αvβ8整合素與潛伏相關肽(LAP)之間之相互作用； (iii)    減少TGF-β信號傳導； (iv)    阻斷IC50 ≤10 nM之αvβ8整合素介導之TGFβ活化； (v)      對非人類靈長類(NHP)直系同源物具有相當的Kd (5倍內)； (vi)    選擇性結合人類αvβ8，且不可偵測地結合αvβ8之同源物(例如，αvβ1、αvβ3、αvβ5及αvβ6)； (vii)   單獨或與免疫調節劑，例如檢查點抑制劑之調節劑，例如PD-1、CTLA-4之抑制劑或刺激分子(例如4-1BB)之促效劑組合，在選自例如鱗狀細胞癌、乳癌及結腸癌之癌症之動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退； (viii) 與抗癌療法，例如放射線療法組合在癌症之動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退； (ix)    例如在以≤ 10 mg/kg投與時，在同基因型腫瘤移植模型中展示腫瘤生長之至少60%的減少； (x)      在向個體(例如小鼠或人類個體)投與時在一或多種免疫調節劑，例如檢查點抑制劑之拮抗劑，例如PD-1或CTLA-4之拮抗劑或免疫反應之活化劑，例如4-1BB促效劑存在下增加抗腫瘤反應； (xi)    具有不視腫瘤模型中αvβ8整合素之表現而定之功效； (xii)   足以增加腫瘤微環境中CD8+ GzmB+ T細胞之豐度，例如作為單一療法； (xiii) 在與檢查點抑制劑之拮抗劑(例如，抗PD-1或抗PD-L1抗體)組合使用時，例如在鱗狀細胞癌、乳癌及/或結腸癌之同基因型模型中展示腫瘤生長之至少80%的減少； (xiv)  如藉由卡本-麥爾分析所測定，展示個體(例如人類或小鼠)之總存活率的統計學上顯著之提高； (xv)   展示高程度之熱穩定性； (xvi)  展示高濃度下之最少聚集；及 (xvii)  可在大規模製造條件下展示可再現表現及純度。
E186. 如實施例E184或E185之方法，其中該抗體或其抗原結合片段具有以下特性中之至少一者： (i)       表示為KD的人類αvβ8整合素之結合親和力，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於536 pM； (ii)     人類αvβ8整合素之KD，其對於經純化人類αvβ8整合素低於或等於100 pM； (iii)    小鼠αvβ8整合素之KD，其低於100 pM； (iv)    食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於100 pM； (v)      大鼠αvβ8整合素之KD，其為約160 pM； (vi)    展示人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如低於100 pM之KD，例如如使用Biacore親和力檢定測定； (vii)   抑制TGFβ反式活化之IC50，其低於183 pM； (viii) 抑制U251細胞中之TGFβ反式活化之IC50，其為約199 +/- 93.6 pM； (ix)    抑制TGFβ反式活化之IC50，其為約100 pM至約300 pM； (x)      U251細胞之EC50，其為約126 pM，其中標準差為加或減34 pM； (xi)    U251細胞之EC50，其為約256 pM，其中標準差為加或減115 pM； (xii)   U251細胞之EC50，其為約80 pM至約400 pM； (xiii) C8-S細胞之EC50，其為約115 pM； (xiv)  C8-S細胞之EC50，其為約145 pM，其中標準差為加或減23.7 pM； (xv)   C8-S細胞之EC50，其為約110 pM至約180 pM； (xvi)  至少一個所預測人類藥物動力學(PK)參數，其選自： a.         中央室(CL)之清除率，其為約0.12-0.15 mL/h/kg； b.        室間分佈清除率(CLF)，其為約0.15-0.51 mL/h/kg； c.         該中央室之分佈容積(V1)，其為約36-39 mL/kg； d.        該周邊室之分佈容積(V2)，其為約21-33 mL/kg；及/或 e.         終半衰期(t1 / 2 )，其為約12-17日；及 (xvii)  展示無與人類Fcγ受體或C1q之可偵測結合。
E187. 如實施例E184至E186中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段係根據如實施例E1至E166中任一例或如實施例E167之醫藥組合物。
E188. 如實施例E184至E187中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以足以增加CD45+細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及/或顆粒酶B表現之細胞浸潤之量投與。
E189. 如實施例E184至E188中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以足以增加CD8+ T細胞浸潤之量投與。
E190. 如實施例E184至E189中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以足以增加CD8+ T細胞上顆粒酶B之表現之量投與。
E191. 如實施例E184至E190中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以足以增加具有升高的Ly6G表現量之發炎性巨噬細胞之積聚的量投與。
E192. 如實施例E184至E191中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以足以增加CD45+CD11b+CD11c-Ly6G-Ly6C高 CD206低 發炎性巨噬細胞之積聚之量投與。
E193. 如實施例E184至E192中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以足以增加第二療法之反應之量投與。
E194. 如實施例E184至E193中任一例之方法，其中在向動物腫瘤模型投與時，該抗體或其抗原結合片段之功效不視腫瘤模型之αvβ8整合素之表現而定。
E195. 如實施例E184至E194中任一例之方法，其中投與該抗體或其抗原結合片段與第二療法組合進行。
E196. 如實施例E195之方法，其中該第二療法包含抗癌療法、細胞毒性劑或細胞生長抑制劑，例如化學治療劑、激素治療、疫苗及/或免疫療法。
E197. 如實施例E195或E196之方法，其中該第二療法為或包含手術、輻射、冷凍手術及/或熱療法。
E198. 如實施例E195至E197中任一例之方法，其中該第二療法包含免疫檢查點分子之調節劑，例如抑制劑或促效劑，視情況其中該第二療法為或包含選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：PD1、PD-L1、4-1BB、OX40、CTLA-4、PD-L2、TIM-3、LAG-3、VISTA、CD160、BTLA、TIGIT、2B4、TGFβ、LAIR1及其組合。
E199. 如實施例E198之方法，其中免疫檢查點分子之抑制劑為PD1、PD-L1、CTLA-4、PD-L2、TIM-3、LAG-3、VISTA、BTLA、TIGIT、2B4、TGFβ或LAIR1之抑制劑。
E200. 如實施例E199之方法，其中免疫檢查點分子之抑制劑為PD1之抑制劑，例如抗PD1之抗體。
E201. 如實施例E199之方法，其中免疫檢查點分子之抑制劑為抑制劑CTLA-4，例如抗CTLA-4之抗體或可溶性CTLA-4融合物。
E202. 如實施例E195至E201之方法，其中該第二療法包含共刺激分子之促效劑。
E203. 如實施例E202之方法，其中共刺激分子之促效劑選自以下中之至少一者：4-1BB (CD137)、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS (CD278)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160或B7-H3。
E204. 如實施例E202之方法，其中共刺激分子之促效劑為41-BB促效劑。
E205. 如實施例E195至E204之方法，其中該第二療法包含PARP1之抑制劑(例如，奧拉帕尼(olaparib)、蘆卡帕尼(rucaparib)、尼拉帕尼(niraparib)、維利帕尼(veliparib)、依尼帕瑞(iniparib)、他拉柔帕尼(talazoparib)、3-胺基苯甲醯胺、CEP 9722、E7016、BSI-201、KU-0059436、AG014699、MK-4827或BGB-290)。
E206. 如實施例E184至E205之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：實體腫瘤、血液癌(例如，白血病、淋巴瘤、骨髓瘤，例如多發性骨髓瘤)及轉移性病灶。
E207. 如實施例E206之方法，其中該癌症為實體腫瘤。
E208. 如實施例E206或E207之方法，其中該癌症為實體腫瘤，且選自惡性病，例如肉瘤及癌瘤，例如各種器官系統之腺癌，諸如影響肺(例如，非小細胞肺癌(NSCLC))、***、卵巢、淋巴、胃腸道(例如，結腸)、肛門、生殖器及泌尿生殖道(例如，腎、尿道上皮、膀胱細胞、***)、咽、CNS (例如，腦、神經或膠細胞)、頭頸部(例如，頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)、皮膚(例如，黑素瘤，例如晚期黑素瘤)、胰臟、結腸、直腸、腎(例如，腎細胞癌)、肝之腺癌、小腸癌及食道癌、胃食道癌、甲狀腺癌及子宮頸癌。
E209. 如實施例E184至E208中任一例之方法，其中該癌症為淋巴增生疾病(例如，移植後淋巴增生疾病)或血液癌、T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)或白血病(例如，骨髓白血病或淋巴白血病)。
E210. 如實施例E184至E209中任一例之方法，其中該癌症為早期、中期、後期或轉移性癌症。
E211. 如實施例E184至E210中任一例之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：腎細胞癌、卵巢癌及頭頸部鱗狀細胞癌。
E212. 如實施例E211之方法，其進一步包含投與檢查點抑制劑之抑制劑，例如PD-1、PD-L1或CTLA-4之抑制劑。
E213. 如實施例E212之方法，其中PD-L1之抑制劑不為阿維魯單抗(avelumab)。
E214. 如實施例E211或E212之方法，其中該癌症為腎癌，例如腎細胞癌(RCC)。
E215. 如實施例E214之方法，其中該癌症為選自由以下組成之群之腎癌：轉移性RCC、透明細胞腎細胞癌(ccRCC)、非透明細胞腎細胞癌(ncRCC)及高危腎細胞癌。
E216. 如實施例E215之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以第1線或第2線療法投與。
E217. 如實施例E184至E216中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以第1線療法投與。
E218. 如實施例E184至E216中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以第2線療法投與。
E219. 如實施例E184至E212中任一例之方法，其中該癌症為卵巢癌。
E220. 如實施例E219之方法，其中該第二療法為PARP1之抑制劑(例如，奧拉帕尼、蘆卡帕尼、尼拉帕尼、維利帕尼、依尼帕瑞、他拉柔帕尼、3-胺基苯甲醯胺、CEP 9722、E7016、BSI-201、KU-0059436、AG014699、MK-4827或BGB-290)。
E221. 如實施例E219之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以第2線療法投與，視情況其中該個體為耐鉑的。
E222. 如實施例E219之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以第1線療法投與。
E223. 如實施例E184至E222中任一例之方法，其中該癌症為頭頸部鱗狀細胞癌。
E224. 如實施例E223之方法，其中該方法進一步包含投與輻射療法。
E225. 如實施例E223或E224之方法，其中該癌症為耐鉑的及/或復發性癌症。
E226. 如實施例E179至E225中任一例之方法，其中該個體為人類。
E227. 如實施例E179至E226中任一例之方法，其包含靜脈內投與該抗體或其抗原結合片段或醫藥組合物。
E228. 如實施例E179至E227中任一例之方法，其包含皮下投與該抗體或其抗原結合片段或醫藥組合物。
E229. 如實施例E179至E228中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段或醫藥組合物約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、每月兩次、每月一次、每兩月一次、每三月一次、每四月一次、每五月一次、每六月一次、每七月一次、每八月一次、每九月一次、每十月一次、每十一月一次或每十二月一次投與。
E230. 如實施例E179至E229中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段每兩週，例如至多12次(例如，至多10、8、6、5、4或3次)投與。
E231. 如實施例E230之方法，其中各投與包含5-10 mg/kg (例如，5、6、7、8、9或10 mg/kg)之該抗體或其抗原結合片段。
E232. 如實施例E231之方法，其中各投與包含約7 mg/kg。
E233. 如實施例E179至E229中任一例之方法，其中該抗體或其抗原結合片段每四週，例如至多6次(例如，至多6、5、4、3、2或1次)投與。
E234. 如實施例E233之方法，其中各投與包含10-15 mg/kg (例如，10、11、12、13、14或15 mg/kg)之該抗體或其抗原結合片段。
E235. 如實施例E234之方法，其中各投與包含約12 mg/kg。
E236. 一種使用如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167之醫藥組合物偵測樣品、組織或細胞中αvβ8整合素(例如，人類αvβ8整合素)之方法，該方法包含使樣品、組織或細胞與該抗體接觸且偵測該抗體。
E237. 一種套組，其包含如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167之醫藥組合物。
E238. 如實施例E1至E166中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E167之醫藥組合物，其例如在本文所述之方法實施例中之任一者中用作藥物。
E239. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或片段為至少一種選自由以下組成之群之抗體或片段： (a)包含以下之抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR-L1)；包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-L2；包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-L3；包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之重鏈CDR1 (CDR-H1)；包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之CDR-H3； (b)   包含以下抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列之CDR-L1；包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列之CDR-L2；包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-L3；包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-H3； (c)    包含可變輕鏈(VL)區及可變重鏈(VH)區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列編碼的胺基酸序列，該VH區包含由ATCC寄存、具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列編碼的胺基酸序列； (d)   包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，該VH區包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列； (e)    包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含選自由SEQ ID NO:62-66組成之群之胺基酸序列，該VH區包含選自由SEQ ID NO:34-38組成之群之胺基酸序列； (f)    包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含選自由SEQ ID NO:47及92組成之群之胺基酸序列，該VH區包含選自由SEQ ID NO:39及88-91組成之群之胺基酸序列； (g)   包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含選自由SEQ ID NO:7及67-69組成之群之胺基酸序列，該VH區包含選自由SEQ ID NO:6及93組成之群之胺基酸序列； (h)   包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含選自由SEQ ID NO:7、47-69及92組成之群之胺基酸序列，該VH區包含選自由SEQ ID NO:6、34-46、88-91及93組成之群之胺基酸序列； (i)    包含輕鏈(LC)區及重鏈(HC)區之抗體或其抗原結合片段，該LC區包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列，該HC區包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列； (j)    包含LC區及HC區之抗體或其抗原結合片段，該LC區包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列，該HC區包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列； (k)   包含LC區及HC區之抗體或其抗原結合片段，該LC區包含SEQ ID NO:123之胺基酸序列，該HC區包含SEQ ID NO:124或182之胺基酸序列； (l)    包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區由SEQ ID NO:186之核酸序列編碼，該VH區由SEQ ID NO:190之核酸序列編碼；及 (m)   包含LC區及HC區之抗體或其抗原結合片段，該LC區由SEQ ID NO:185之核酸序列編碼，該HC區由SEQ ID NO:189或191之核酸序列編碼。
E240. 如實施例E239之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含VL區及VH區，該VL區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，該VH區包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
E241. 如實施例E239或E240之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含VL區及VH區，該VL區包含與SEQ ID NO:7至少95%一致之胺基酸序列，該VH區包含與SEQ ID NO:6至少95%一致之胺基酸序列。
E242. 如實施例E239之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含LC區及HC區，該LC區包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列，該HC區包含SEQ ID NO:2或3之胺基酸序列。
E243. 如實施例E239或E242之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含LC區及HC區，該LC區包含與SEQ ID NO:5至少95%一致之胺基酸序列，該HC區包含與SEQ ID NO:2或3至少95%一致之胺基酸序列。
E244. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或片段包含VH區及/或VL區，該VH區包含與選自由SEQ ID NO:6、34-46、88-91及93組成之群之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，該VL區包含與選自由SEQ ID NO: 7、47-69及92組成之群之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。
E245. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或片段包含： (i)抗體HC，其包含與SEQ ID NO: 2或3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列；及/或 (ii)抗體LC，其包含與SEQ ID NO: 5具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列。
E246. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體，其包含LC及HC，該LC由SEQ ID NO:5之胺基酸序列組成，該HC由SEQ ID NO:2或3之胺基酸序列組成。
E247. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體，其包含： 抗體VL區，其包含來自包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列之該VL區之該CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；及 抗體VH區，其包含來自包含SED ID NO:6之胺基酸序列之該VH區之該CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
E248.如實施例E247之經分離之抗體，其包含抗體重鏈恆定區及抗體輕鏈恆定區，該抗體重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 181或184之胺基酸序列，且該抗體輕鏈恆定區包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列。
E249. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體，其包含： a)抗體VL區，其包含來自包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列之該VL區之該第一、第二及第三CDR； 抗體VH區，其包含來自包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列之該VH區之該第一、第二及第三CDR； 抗體輕鏈恆定(CL)區，其包含SEQ ID NO:83之胺基酸序列；及 抗體重鏈(CH)恆定區，其包含SEQ ID NO:181或184之胺基酸序列； b)抗體VL區，其包含與SEQ ID NO: 7至少95%一致之胺基酸序列；及抗體VH區，其包含與SEQ ID NO:6至少95%一致之胺基酸序列；或 c)抗體LC區，其包含與SEQ ID NO: 5至少95%一致之胺基酸序列；及抗體HC，其包含與SEQ ID NO: 2或3至少95%一致之胺基酸序列。
E250. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含抗體VH及抗體VL，該抗體VH包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124917之該***序列編碼的胺基酸序列，該抗體VL包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124918之該***序列編碼的胺基酸序列。
E251. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或片段具有以下特性中之至少一者： a.  表示為KD的人類αvβ8整合素之結合親和力，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於約536 pM； b.  人類整合素αvβ8之KD，其低於或等於約100 pM； c.  小鼠αvβ8整合素之KD，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於約489 pM； d.  小鼠αvβ8整合素之KD，其低於約100 pM； e.  食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於約507 pM； f.   食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於或等於約100 pM； g.  大鼠αvβ8整合素之KD，其為約160 pM； h.  人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如如使用Biacore親和力檢定測定，低於100 pM之KD； i.   抑制TGFβ反式活化之IC50，其為約100 pM至約300 pM； j.   U251細胞之EC30，其為約100 pM至約400 pM； k.  C8-S細胞之EC50，其為約110 pM至約180 pM；及 l.   至少一個所預測人類藥物動力學(PK)參數，其選自： i.   中央室(CL)之清除率，其為約0.12 mL/h/kg； ii.  室間分佈清除率(CLF)，其為約0.51 mL/h/kg； iii. 該中央室之分佈容積(V1)，其為約36 mL/kg； iv. 該周邊室之分佈容積(V2)，其為約33 mL/kg； v.  終半衰期(t1 / 2 )，其為約15至17日；及 vi. 無與人類Fcγ受體或C1q之可偵測結合。
E252. 如前述實施例中任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含人類IgG1 Fc區，如根據Kabat之Eu編號進行編號，該人類IgG1 Fc區包含一或多個選自位置L234、L235及G237之取代(例如，L234A、L235A及G237A中之一或多者)。
E253. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為人類化抗體、人類抗體、鼠類抗體、嵌合抗體或駱駝抗體。
E254. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體重鏈同型選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其任何變異體；及/或其中該輕鏈恆定區選自κ或λ。
E255. 如前述實施例中之任一例之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體重鏈同型為IgG1及/或其中該輕鏈恆定區為κ輕鏈。
E256. 一種抗體或其抗原結合片段，其與如實施例E242之抗體或其抗原結合片段為結合至αvβ8整合素而進行競爭。
E257. 一種醫藥組合物，其包含如前述實施例中之任一例之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
E258. 如實施例E257之醫藥組合物，其包含：i)包含抗體重鏈及抗體輕鏈之抗體或其抗原結合片段，該抗體重鏈由SEQ ID NO:2之胺基酸序列編碼且該抗體輕鏈由SEQ ID NO:5之胺基酸序列編碼，ii)包含抗體重鏈及抗體輕鏈之抗體或其抗原結合片段，該抗體重鏈由SEQ ID NO:3之胺基酸序列編碼且該抗體輕鏈由SEQ ID NO:5之胺基酸序列編碼，或iii)兩者。
E259. 一種經分離之核酸分子，其編碼如實施例E239至E256中任一例之抗體或其抗原結合片段。
E260. 如實施例E259之經分離之核酸，其中該經分離之核酸編碼該抗體或其抗原結合片段之VH區、VL區或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO:190之核酸序列、SEQ ID NO:186之核酸序列或兩者。
E261. 如實施例E259之經分離之核酸，其中該經分離之核酸編碼該抗體或其抗原結合片段之重鏈恆定區、輕鏈恆定區、或兩者，且其中該核酸包含SEQ ID NO: 192或193之核酸序列；SEQ ID NO: 194之核酸序列；或兩者。
E262. 如實施例E259之經分離之核酸，其中該經分離之核酸編碼該抗體或其抗原結合片段之該HC、LC或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO:189或190之核酸序列；SEQ ID NO:185之核酸序列；或兩者。
E263. 如實施例E259之經分離之核酸，其中該經分離之核酸包含ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列之核酸序列、ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列之核酸序列或兩者。
E264. 如實施例E259之經分離之核酸，其中該經分離之核酸包含與SEQ ID NO: 189或SEQ ID NO: 191具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性之核酸序列；與SEQ ID NO: 185具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性之核酸序列；或兩者。
E265. 一種載體，其包含如實施例E259至E264中任一例之核酸。
E266. 一種宿主細胞，其包含如實施例E259至E264中任一例之核酸或如實施例E265之載體。
E267. 如實施例E265之宿主細胞，其中該宿主細胞係選自由以下組成之群的哺乳動物細胞：CHO細胞、COS細胞、HEK-293細胞、NS0細胞、PER.C6®細胞及Sp2.0細胞。
E268. 一種製造經分離之抗體或其抗原結合片段之方法，其包含在其中該抗體或片段由如實施例266之宿主細胞表現之條件下培養該宿主細胞及分離該抗體或片段。
E269. 一種降低有需要之個體之αvβ8整合素活性之方法，該方法包含向該個體投與治療有效量之如實施例E239至E256中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E257或E258之醫藥組合物。
E270. 一種治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如實施例E239至E256中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E257或E258之醫藥組合物。
E271. 如實施例E270之方法，其進一步投與細胞毒性劑、細胞生長抑制劑、化學治療劑、激素治療劑、疫苗、免疫療法、手術、輻射、冷凍手術、熱療法或其組合。
E272. 如實施例E271之方法，其中該進一步投與與投與治療有效量之該抗體或其抗原結合片段或醫藥組合同時、依序或分開。
E273. 如實施例E271之方法，其中該免疫療法包含選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：抗PD1抗體、抗PD-L1抗體、抗PD-L2抗體、抗CTLA-4抗體、可溶性CTLA-4融合蛋白及其組合，且其中該抗PD-L1抗體不為阿維魯單抗。
E274. 如實施例E270至E273中任一例之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：頭頸部鱗狀細胞癌、透明細胞型或乳頭狀細胞型之腎細胞癌、卵巢癌、輸卵管癌、原發性腹膜癌、胃癌、胃食道接合處癌、食道癌、肺鱗狀細胞癌、胰管腺癌、膽管癌、子宮癌、黑素瘤、尿道上皮癌及其組合。
E275. 一種使用如實施例E239至E256之抗體或其抗原結合片段偵測樣品、組織或細胞中之αvβ8整合素之方法，其包含使該樣品、組織或細胞與該抗體或其抗原結合片段接觸及偵測該抗體或其抗原結合片段。
E276. 一種套組，其包含如實施例E239至E256中任一例之抗體或片段或如實施例E257或E258之醫藥組合物且視情況包含如實施例E273之調節劑。
E277. 如實施例E239至E256中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E257或E258之醫藥組合物，其用於降低有需要之個體之αvβ8整合素活性以治療癌症。
E278. 如實施例E239至E256中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E257或E258之醫藥組合物，其用於治療癌症，視情況其中該抗體或其抗原結合片段或該醫藥組合物用於與免疫療法組合同時、依序或分開投與，其中該組合視情況提供協同治療效果。
E279. 如實施例E278所使用之抗體或其抗原結合片段或醫藥組合物，其中該癌症選自由以下組成之群：頭頸部鱗狀細胞癌、透明細胞型或乳頭狀細胞型之腎細胞癌、卵巢癌、輸卵管癌、原發性腹膜癌、胃癌、胃食道接合處癌、食道癌、肺鱗狀細胞癌、胰管腺癌、膽管癌、子宮癌、黑素瘤、尿道上皮癌及其組合，視情況其中該抗體或其抗原結合片段或該醫藥組合物或組合用於與投與免疫療法或輻射療法一起使用。
E280. 一種如實施例E239至E256中任一例之抗體或其抗原結合片段或如實施例E257或E258之醫藥組合物的用途，其用於治療癌症。
E281. 一種如實施例E239至E256中任一例之抗體或其抗原結合片段的用途，其用於製造用以治療癌症之藥物。
E282.一種治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之(i)特異性結合αvβ8整合素之抗體或其抗原結合片段，及(ii)抗PD1、抗PD-L1或抗PD-L2免疫檢查點分子之調節劑。
E283. 如實施例E282之方法，其中該癌症為鱗狀細胞癌。
E284.如實施例E282之方法，其中該癌症為乳癌或結腸癌。
E285.如實施例E282至E284中任一例之方法，其中該調節劑選自由以下組成之群：抗PD1抗體、抗PD-L1抗體及抗PD-L2抗體。
相關申請案
本申請案主張2018年9月7日申請之美國第62/728,688號及2019年8月23日申請之美國第62/890,945號之優先權，其各者之內容以全文引用之方式併入本文中。 序列表
本說明書藉由引用進一步併入在2019年9月5日與其一起提交之序列表。依照37 C.F.R. § 1.52(e)(5)，鑑別為PC72413A_SequenceListing_ST25.txt之序列表文本文件係184,211字節且創建於2019年9月3日。以電子方式與其一起申請之序列表不會延伸超出說明書之範疇且因此不含有新主題。 達成聯合研究聲明之各方
當前所主張之本發明係由達成聯合研究協議之下列各方完成或以其為名義完成。聯合研究協議在所主張之本發明完成之日或該日期之前生效，且所主張之本發明係作為在聯合研究協議之範疇內進行的活動之結果而完成。達成聯合研究協議之各方係代表其SAN FRANCISCO CAMPUS及PFIZER INC之THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CALIFORNIA。
本文揭示特異性結合至αvβ8整合素(例如，人類αvβ8整合素)之抗體及其抗原結合片段，且進一步揭示拮抗αvβ8整合素活性(例如，拮抗TGFβ之活化、拮抗TGFβ產生之介導、拮抗Treg及Th17細胞之調節)或其與TGFβ1及TGFβ3之相互作用或活性TGFβ之釋放的抗體。提供製造抗αvβ8整合素抗體、包含抗αvβ8整合素抗體之組合物之方法及使用抗αvβ8整合素抗體之方法。在一些實施例中，提供重組(例如人類化)抗體，其結合αvβ8整合素(例如，人類αvβ8整合素)。在一些實施例中，亦提供能夠形成結合αvβ8整合素之抗體的人類化抗體重鏈及輕鏈。在一些實施例中，提供包含一或多個特定互補決定區(CDR)之人類化抗體、重鏈及輕鏈。在一些實施例中，人類化抗αvβ8整合素抗體具有變化的效應功能。在一些實施例中，相對於本發明之其他相同抗αvβ8整合素抗體，本發明之抗體具有降低之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)活性及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)活性。
提供編碼結合αvβ8整合素(例如，人類αvβ8整合素)之抗體或其抗原結合片段之聚核苷酸。亦提供編碼抗體重鏈或輕鏈之聚核苷酸。提供表現抗αvβ8整合素抗體(包括人類化抗體)之宿主細胞。提供使用抗αvβ8整合素抗體(包括人類化抗體)之治療方法。
抗αvβ8整合素抗體及其抗原結合片段，包括人類化抗體可用於預防、治療及/或改善由異常(例如，增加之) TGFβ信號傳導引起及/或與其相關之疾病、病症或病況。該等疾病、病症或病況包括癌症(例如，控制具有異常(例如，增加之) TGFβ信號傳導之癌細胞之增生)。
不希望受任何特定理論束縛，成熟TGFβ以無活性或潛伏形式存在於具有潛伏相關肽(LAP)域之複合物中。將αvβ8整合素結合至LAP引起活性TGFβ (例如，TGFβ1及TGFβ3)之釋放。減少αvβ8整合素與LAP之結合可防止釋放活性TGFβ，從而減少TGFβ信號傳導。已知TGFβ例如在腫瘤微環境中具有免疫抑制效果，因此使用本文所述之抗體降低TGFβ活性及/或信號傳導會引起免疫反應，例如活體內抗腫瘤反應之活化。因此，本發明之抗體及其抗原結合片段能夠選擇性拮抗免疫系統及/或腫瘤微環境中之TGFβ活性，因此增強個體之抗腫瘤免疫反應。在本文實例中所揭示之一些實施例中，已展示抗αvβ8整合素之抗體及其抗原結合片段單獨或與其他免疫調節劑(諸如檢查點抑制劑之調節劑(例如，PD-1、PD-L1、CTLA-4之抑制劑或4-1BB之促效劑))或抗癌療法(例如放射線療法)組合會引起動物模型中幾種癌症的生長遏制及/或完全腫瘤消退，該等癌症包括鱗狀細胞癌、乳癌及結腸癌。因此，包括人類化抗體之抗αvβ8整合素抗體及其抗原結合片段單獨或與第二療法組合可用於預防、治療及/或改善癌症，例如實體腫瘤，例如選自以下之實體腫瘤：腎細胞癌(RCC)、卵巢癌或頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)。
本文所使用之部分標題僅出於組織目的且不應理解為限制所描述之主題。
本文所引用之所有參考文獻(包括專利申請案、專利公開案及Genbank寄存編號)均以引用之方式併入本文中，如同各個別參考文獻具體地且單獨地指出以全文引用之方式併入本文中一般。
本文所述或所參考之技術及程序普遍有充分瞭解且通常由熟習此項技術者使用習知方法採用，諸如在以下各者中所述之廣泛採用的方法：Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 第3版 (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel等人編, (2003))；METHODS IN ENZYMOLOGY系列(Academic Press, Inc.)：PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames及G. R. Taylor編 (1995))、Harlow及Lane編 (1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL及ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney編 (1987))；Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait編, 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis編, 1998) Academic Press；Animal Cell Culture (R. I. Freshney編, 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather及P. E. Roberts, 1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths及D. G. Newell編, 1993-8) J. Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir及C. C. Blackwell編)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller及M. P. Calos編, 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等人編, 1994)；Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan等人編, 1991)；Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)；Immunobiology (C. A. Janeway及P. Travers, 1997)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty編, IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd及C. Dean編, Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow及D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999))；The Antibodies (M. Zanetti及J. D. Capra編, Harwood Academic Publishers, 1995)；及Cancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita等人編, J.B. Lippincott Company, 1993)；及其更新版本。 I.定義
參考以下本發明之例示性實施例之實施方式及其中包括之實例可更易於理解本發明。
除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術及科學術語具有與一般熟習本發明所屬之技術者通常所理解相同之意義。在有衝突之情況下，將以本說明書(包括定義)為準。
此外，除非情況另有需要或另外明確地指出，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。
應理解本文所述之本發明之態樣及實施例包括「由」態樣及實施例「組成」及/或「基本上由」態樣及實施例「組成」。除非另外指示，否則如本文所用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個參考物。
在本申請案中，除非明確地陳述或熟習此項技術者所理解，否則「或」之使用意謂「及/或」。在多重附屬項之情況下，「或」之使用重新提及一個以上前述獨立項或附屬項。
「約」或「大致」在與可量測數值變數連接使用時係指變數之指定值，且係指指定值之實驗誤差內(例如，平均值之95%信賴區間內)或指定值之10%內(無論哪個更大)的變數之所有值 數值範圍包括界定該範圍之數字。
儘管闡述本發明之廣泛範疇的數值範圍及參數為近似值，但應儘可能精確地報導具體實例中所闡述之數值。然而，任何數值均固有地含有某些必然由其各別測試量測中所發現之標準差造成之誤差。另外，本文中所揭示之所有範圍應理解為涵蓋其中所包含之任何及所有子範圍。舉例而言，「1至10」之所陳述範圍應視為包括最小值1與最大值10之間(且包括端值)之任何及所有子範圍；亦即，以最小值1或更大，例如1至6.1開始且以最大值10或更小，例如5.5至10結束之所有子範圍。
在整個本說明書及申請專利範圍中，詞語「包含(comprise)」或諸如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」之變化形式應理解為意謂著包括所陳述整數或整數群但不排除任何其他整數或整數群。除非另外為情況所需，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。在術語「例如(e.g.)」或「例如(for example)」之後的任何實例並不意謂窮盡性或限制性。
應理解在本文中任何地方之實施例皆用語言「包含」描述，或亦提供用術語「由……組成」及/或「基本上由……組成」所描述之類似實施例。
當本發明之態樣或實施例根據馬庫西群組(Markush group)或其他替代群組進行描述時，本發明不僅涵蓋整體列出之全部群組，而且涵蓋獨立群組之各成員及主群組之所有可能子組，且亦涵蓋缺乏一或多個群組成員之主群組。本發明亦設想明確排除所主張之發明中之任何群組成員中之一或多者。
應理解，本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的，且不意欲為限制性的。在本說明書及隨後的申請專利範圍中，將引用多個術語，該等術語應經定義而具有以下含義。
術語「經分離分子」 (其中分子係例如多肽、聚核苷酸或抗體或其片段)係以下分子：其藉助於其來源或衍生源(1)不與在其天然狀態下與其伴隨之天然的相關組分結合；(2)實質上不含來自同一物種之其他分子；(3)由來自不同物種之細胞表現，或(4)不在自然界中出現。因此，經化學合成或在與天然來源之細胞不同之細胞系統中表現之分子將與其天然相關組分「分離」。使用此項技術中熟知之純化技術，藉由分離亦可使分子實質上不含天然相關之組分。可藉由此項技術中熟知之多種方式檢定分子純度或均勻性。舉例而言，多肽樣品之純度可使用聚丙烯醯胺凝膠電泳及凝膠染色以使用此項技術中熟知之技術使多肽顯現來檢定。出於某些目的，可藉由使用HPLC或此項技術中用於純化之其他熟知方式提供更高解析度。
如本文所用，「實質上純的」意謂目標物種為所存在之主要物種(亦即，以莫耳計其比組合物中之任何其他個別物種更充足)，且較佳地，實質上經純化溶離份為其中目標物種(例如，糖蛋白，包括抗體或受體)包含至少約50% (以莫耳計)之所存在之所有巨分子物種的組合物。一般而言，實質上純的組合物將包含超過約80%、更佳超過約85%、90%、95%及99%之組合物中所存在之所有巨分子物種。最佳地，將目標物種純化至基本均勻性(無法藉由習知偵測方法在組合物中偵測到之污染物種)，其中組合物基本上由單一巨分子物種組成。在某些實施例中，實質上純的材料係至少50%純(亦即，不含污染物)、更佳至少90%純、更佳至少95%純、又更佳至少98%純、且最佳至少99%純。
如此項技術中已知，術語「一致性」係指兩個或更多個多肽分子或兩個或更多個核酸分子之序列之間的關係，如藉由比較該等序列所判定。在此項技術中，「一致性」亦意謂多肽或核酸分子序列之間的序列相關性程度，視具體情況而定，如藉由核苷酸或胺基酸序列串之間的匹配所判定。「一致性」量測間隙比對藉由電腦程式之特定數學模型(亦即「演算法」)定址之兩個或更多個序列之間的一致匹配百分比。
術語「類似性(similarity)」為相關概念，但相比於「一致性(identity)」，其係指包括一致匹配與保守取代匹配之類似性量度。由於保守取代適用於多肽而非核酸分子，故類似性僅涉及多肽序列比較。若兩個多肽序列具有例如10/20個一致胺基酸，且剩餘物為所有非保守取代，則一致性百分比及類似性兩者將均為50%。若在同一實例中，有5個更多存在保守取代的位置，則一致性百分比仍為50%，但類似性百分比將為75% (15/20)。因此，在存在保守取代之情況下，兩個多肽序列之間的類似性程度將高於彼兩個序列之間的一致性百分比。
根據本發明之多肽或抗體「片段」或「部分」可藉由自多肽之N端及/或C端末端截短，例如藉由移除一或多個胺基酸來製造。可以此方式自N端及/或C端移除至多10、至多20、至多30、至多40或更多個胺基酸。片段亦可由一或多個內部刪除產生。
變異抗體可包含如上文所討論之特定序列及片段的1、2、3、4、5、至多10、至多20、至多30個或更多個胺基酸取代及/或刪除及/或***。「刪除」變異體可包含刪除個別胺基酸；刪除較小胺基酸組，諸如2、3、4或5個胺基酸；或刪除較大胺基酸區，諸如刪除特定胺基酸域或其他特點。「***」變異體可包含***個別胺基酸；***較小胺基酸組，諸如2、3、4或5個胺基酸；或***較大胺基酸區，諸如***特定胺基酸域或其他特點。「取代」變異體較佳涉及用相同數目個胺基酸置換一或多個胺基酸及進行保守胺基酸取代。舉例而言，胺基酸可經具有類似特性之替代性胺基酸取代，例如另一種鹼性胺基酸、另一種酸性胺基酸、另一種中性胺基酸、另一種帶電荷胺基酸、另一種親水性胺基酸、另一種疏水性胺基酸、另一種極性胺基酸、另一種芳族胺基酸或另一種脂族胺基酸。
取代變異體將抗體分子中之至少一個胺基酸殘基移除且將不同殘基***其位置。最引人關注之取代型突變誘發之位點包括高變區，但亦涵蓋構架變化。保守取代展示於「保守取代」之標題下。若該等取代使得生物活性變化，則可引入以下所示之命名為「例示性取代」或如下文關於胺基酸類別所進一步描述之更實質性的變化，且篩檢產物。 胺基酸及取代
原始殘基 保守取代 例示性取代
丙胺酸Ala (A) Val Val；Leu；Ile
精胺酸Arg (R) Lys Lys；Gln；Asn
天冬胺酸Asn (N) Gln Gln；His；Asp, Lys；Arg
天冬胺酸Asp (D) Glu Glu；Asn
半胱胺酸Cys (C) Ser Ser；Ala
麩醯胺酸Gln (Q) Asn Asn；Glu
麩胺酸Glu (E) Asp Asp；Gln
甘胺酸Gly (G) Ala Ala
組胺酸His (H) Arg Asn；Gln；Lys；Arg
異白胺酸Ile (I) Leu Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸
白胺酸Leu (L) Ile Norleucine；Ile；Val；Met；Ala；Phe
離胺酸Lys (K) Arg Arg；Gln；Asn
甲硫胺酸Met (M) Leu Leu；Phe；Ile
***酸Phe (F) Tyr Leu；Val；Ile；Ala；Tyr
脯胺酸Pro (P) Ala Ala
絲胺酸Ser (S) Thr Thr
蘇胺酸Thr (T) Ser Ser
色胺酸Trp (W) Tyr Tyr；Phe
酪胺酸Tyr (Y) Phe Trp；Phe；Thr；Ser
纈胺酸Val (V) Leu Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正白胺酸
抗體生物特性之實質修飾係藉由選擇維持以下之作用顯著不同的取代來實現：(a)多肽主鏈在取代區域中的結構，例如呈β片狀或螺旋狀構形；(b)分子在目標位點處之電荷或疏水性；或(c)側鏈之堆積。基於常見側鏈特性將天然存在之殘基劃分成以下群組： i.   非極性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； ii.  極性，無電荷：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； iii. 酸性(帶負電)：Asp、Glu； iv. 鹼性(帶正電)：Lys、Arg； v.  影響鏈定向之殘基：Gly、Pro；及 vi. 芳族：Trp、Tyr、Phe、His。
藉由將此等類別之一者中之一成員交換成另一類別來進行非保守取代。
例如可進行之一種類型取代為將抗體中可化學反應之一或多個半胱胺酸改變成諸如但不限於丙胺酸或絲胺酸之另一殘基。舉例而言，可存在非典型(例如，不較佳或常見)半胱胺酸之取代。取代可在抗體可變域之CDR或構架區或恆定區中進行。在一些實施例中，半胱胺酸為典型的(例如，較佳或最常見的)。不參與維持抗體之適當構形之任何半胱胺酸殘基一般亦可經絲胺酸取代，以提高分子之氧化穩定性且防止異常交聯。相反，尤其當抗體為諸如Fv片段之抗體片段時，可將半胱胺酸鍵添加至抗體以提高其穩定性。
「抗體」為能夠經由至少一個位於免疫球蛋白分子之可變區之抗原識別位點特異性結合至諸如碳水化合物、聚核苷酸、脂質、多肽等目標之免疫球蛋白分子。如本文所用，該術語不僅涵蓋完整多株或單株抗體，而且除非另外指定，否則亦涵蓋其與完整抗體競爭特異性結合之任何抗原結合片段、包含抗原結合片段之融合蛋白，及包含抗原識別位點之免疫球蛋白分子之任何其他經修飾的組態。抗原結合片段包括例如Fab、Fab'、F(ab')2 、Fd、Fv、結構域抗體(dAb，例如鯊魚及駱駝抗體)、包括互補決定區(CDR)之片段、單鏈可變片段抗體(scFv)、最大抗體、微型抗體、內抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、v-NAR及雙scFv及含有足以使特定抗原結合至多肽的至少一部分免疫球蛋白的多肽。
抗體包括任何類別之抗體，諸如IgG、IgA或IgM (或其子類)，且該抗體無需為任何特定類別。免疫球蛋白可視其重鏈(HC)之恆定區之抗體胺基酸序列而歸為不同類別。存在五類主要免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等免疫球蛋白中之若干者可以進一步劃分成子類(同型)，例如IgG1 、IgG2 、IgG3 、IgG4 、IgA1 及IgA2 。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定區分別稱為α、δ、ε、γ及μ。不同類別之免疫球蛋白之子單位結構及三維組態為熟知的。
如本文中可互換地使用的術語抗體(或僅僅「抗體部分」)之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」係指保持特異性結合至抗原(例如，αvβ8整合素)之能力的抗體之一或多個片段。已展示，抗體之抗原結合功能可由全長抗體之片段來執行。術語抗體之「抗原結合片段」內涵蓋之結合片段之實例包括(i) Fab片段，由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段；(ii) F(ab')2 片段，包含兩個由鉸鏈區處之二硫橋鍵連接之Fab片段之二價片段；(iii)由VH及CH1域組成之Fd片段；(iv)由抗體之單個臂之VL及VH域組成之Fv片段，(v) dAb片段(Ward等人，(1989) Nature 341:544-546)，其由VH域組成；及(vi)經分離互補決定區(CDR)、二硫鍵連接之Fv (dsFv)及抗個體基因型(抗Id)抗體及內抗體。此外，儘管Fv片段之兩個域VL及VH係藉由單獨的基因編碼，但其可使用重組法藉由合成連接子接合，該合成連接子使得其能夠成為單個蛋白鏈，其中VL及VH區配對以形成單價分子(稱為單鏈Fv (scFv))；參見例如Bird等人, Science 242:423-426 (1988)及Huston等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988))。此類單鏈抗體亦意欲涵蓋於術語抗體之「抗原結合片段」內。亦涵蓋單鏈抗體之其他形式，諸如雙功能抗體。雙功能抗體為二價、雙特異性抗體，其中VH及VL域表現於單個多肽鏈上，但使用過短而不允許相同鏈上之兩個域之間配對的連接子，由此迫使該等域與其他鏈之互補域配對且形成兩個抗原結合位點(參見例如Holliger等人Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)；Poljak等人，1994, Structure 2:1121-1123)。
抗體可來源於任何包括但不限於人類、猴、豬、馬、兔、狗、貓、小鼠等之哺乳動物或其他動物，諸如鳥類(例如雞)、魚類(例如鯊魚)及駱駝(例如駱馬)。
抗體之「可變區」係指單獨或組合形式之抗體輕鏈(VL)之可變區或抗體重鏈(VH)之可變區。如此項技術中已知，重鏈及輕鏈之可變區各自由藉由三個「互補決定區(CDR)」 (亦稱為高變區(HVR)連接之四個構架區(FR)組成，且有助於抗體之抗原結合位點之形成。若需要個體可變區之變異體，特定言之在CDR區外部(亦即在構架區中)之胺基酸殘基中具有取代，則可藉由比較該個體可變區與其他抗體之可變區鑑別適當胺基酸取代，較佳保守胺基酸取代，該等其他抗體之可變區含有與該個體可變區相同典型類別之CDR1及CDR2序列(Chothia及Lesk, J. Mol. Biol. 196(4): 901-917, 1987)。
在某些實施例中，CDR之確定性劃定及包含抗體之結合位點之殘基的鑑別藉由求解抗體之結構及/或求解抗體-配位體複合物之結構來實現。在某些實施例中，其可藉由熟習此項技術者已知之各種技術中任一者來實現，諸如X射線結晶法。在某些實施例中，可採用各種分析方法以鑑別或近似鑑別CDR區。在某些實施例中，可採用各種分析方法以鑑別或近似鑑別CDR區。該等方法之實例包括但不限於Kabat定義、Chothia定義、AbM定義、接觸定義及構形定義。
對於編號形成CDR之胺基酸殘基，此項技術中存在幾種編號方法。Kabat編號方法為用於編號抗體中之殘基之標準且通常亦用以鑑別CDR。參見例如Johnson及Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8。Chothia定義類似於Kabat定義，但Chothia定義考慮某些結構迴路區之位置。參見例如Chothia等人, 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-17；Chothia等人, 1989, Nature, 342: 877-83。AbM定義使用藉由Oxford Molecular Group所產生之模擬抗體結構之電腦程式的整合套件。參見例如Martin等人, 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272；「AbM™, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies,」 Oxford, UK；Oxford Molecular, Ltd。AbM定義使用知識資料庫與全始算法(ab initio method)之組合模擬來自一級序列之抗體的三級結構，該等方法諸如藉由以下所描述者：Samudrala等人，1999，「Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach,」於PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198中。
接觸定義係基於可用複合晶體結構之分析。參見例如MacCallum等人, 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45。在另一方法(在本文中稱為CDR之「構形定義」)中，CDR之位置可鑑別為向抗原結合貢獻焓之殘基。參見例如Makabe等人, 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166。雖然其他CDR邊界定義可不嚴格遵循以上方法中之一者，但仍然將與Kabat CDR之至少一部分重疊，但其可根據以下預測或實驗發現而縮短或延長：具體殘基或殘基組並不顯著影響抗原結合。如本文所用，CDR可指由此項技術中已知之任何方法，包括方法之組合所定義之CDR。本文中所用之方法可利用根據此等方法中任一者所定義之CDR。對於任何含有超過一個CDR之給定實施例，CDR可根據Kabat定義、Chothia定義、擴展定義、AbM定義、接觸定義及/或構形定義中之任一者定義。
如本文所用之關於抗體或藉此特異性結合之抗原的「接觸殘基」係指包含至少一個重鏈原子(亦即，非氫)之抗體/抗原上存在之胺基酸殘基，該重鏈原子在同源抗體/抗原上所存在之4 Å或更小之胺基酸殘基之重鏈原子內。
「構架」 (FR)殘基為除了CDR殘基之外的抗體可變域殘基。VH或VL結構域構架包含四個構架子區FR1、FR2、FR3及FR4，穿插有呈以下結構之CDR： FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4。
可變域中之殘基通常係根據Kabat編號，Kabat提供用於抗體之編譯之重鏈可變域或輕鏈可變域之編號系統。參見Kabat等人，1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, 美國國家衛生研究院(National Institutes of Health), Bethesda, MD。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可含有對應於可變域之FR或CDR之縮短或向其中之***的較少或額外胺基酸。舉例而言，重鏈可變域可包括H2之殘基52後的單個胺基酸***序列(根據Kabat之殘基52a)及重鏈FR殘基82後的***殘基(例如，根據Kabat之殘基82a、82b及82c)。對於給定抗體，可藉由將抗體序列之同源區與「標準」Kabat編號序列比對來判定殘基之Kabat編號。用於指派Kabat編號之各種演算法係可用的。在Abysis之版本2.3.3 (www.abysis.org)中實施之演算法可用於將Kabat編號指派為可變區CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H2及CDR-H3，且AbM定義可隨後用於CDR-H1。
如本文所用，「單株抗體」係指自實質上均質之抗體(亦即包含該群體之個別抗體除可能以少量存在之可能的天然存在之突變外為一致的)群體獲得的抗體。單株抗體針對單一抗原位點具高度特異性。此外，與典型地包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相反，各單株抗體針對抗原上之單個決定子。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質之抗體群獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。舉例而言，根據本發明所使用之單株抗體可藉由首先由Kohler及Milstein, 1975, Nature 256:495所述之融合瘤方法製造，或可藉由諸如美國專利第4,816,567號中所述之重組DNA方法製造。舉例而言，單株抗體亦可與使用McCafferty等人, 1990, Nature 348:552-554中所述之技術產生的噬菌體庫中分離。如本文所用，「人類化」抗體係指非人類(例如鼠類)抗體之形式，其為含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(諸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2 或抗體之其他抗原結合子序列)。較佳地，人類化抗體為具有所要特異性、親和力及能力之人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體之CDR的殘基經來自諸如小鼠、大鼠或兔之非人類物種(供體抗體)之CDR的殘基置換。人類化抗體可包含以下殘基：既不存在於受體抗體中亦不存在於所導入之CDR或構架序列中，但包括該等殘基以進一步優化且最佳化抗體效能。
本發明之抗體或其抗原結合片段可係親和力成熟的。舉例而言，親和力成熟抗體可藉由此項技術中已知之程序產生(Marks等人, 1992, Bio/Technology, 10:`9-783；Barbas等人, 1994, Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813；Schier等人, 1995, Gene, 169:147-155；Yelton等人, 1995, J. Immunol., 155:1994-2004；Jackson等人, 1995, J. Immunol., 154(7):3310-9；Hawkins等人, 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896；及WO2004/058184)。
「人類抗體」為擁有以下胺基酸序列之抗體：對應於由人類所產生及/或已使用製造如本文所揭示之人類抗體之技術中之任一者所製造的抗體的胺基酸序列。人類抗體之此定義具體排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
術語「嵌合抗體」意欲指可變區序列來源於一個物種且恆定區序列來源於另一物種之抗體，諸如可變區序列來源於小鼠抗體且恆定區序列來源於人類抗體或反過來之抗體。術語亦涵蓋包含來自一個物種之一個個體(例如，第一小鼠)之V區及來自同一物種之另一個體(例如，第二小鼠)之恆定區的抗體。
術語「抗原(Ag)」係指用於免疫接種免疫活性的脊椎動物以產生識別Ag之抗體(Ab)或篩檢表現庫(例如噬菌體、酵母或核糖體呈現庫以及其他庫)的分子實體。在本文中，Ag稱為較概括的名稱且一般意欲包括藉由Ab特異性識別之目標分子，因此包括該分子之片段或模擬物，其用於產生Ab或篩檢選擇Ab之庫的免疫接種法。因此，對於結合至αvβ8整合素之本發明之抗體，來自哺乳動物物種(例如，人類、猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素)之全長αvβ8整合素，包括單體及多聚體，諸如其二聚體、三聚體等，以及αvβ8整合素之截短及其他變異體稱為抗原。
一般來說，術語「抗原決定基」係指抗體與其特異性結合之抗原(例如，蛋白質、核酸、碳水化合物或脂質等)之區域或區，亦即與抗體物理接觸之區域或區。因此，術語「抗原決定基」係指能夠由抗體之抗原結合區中一或多者處之抗體識別且與其結合的分子部分。通常，在「抗體或其抗原結合部分」(Ab)與其相應抗原之間之分子的相互作用之情況下定義抗原決定基。抗原決定基常常由諸如胺基酸或糖側鏈之分子之表面分組組成，且具有特定三維結構特徵以及特定電荷特徵。在一些實施例中，抗原決定基可為蛋白質抗原決定基。蛋白質抗原決定基可為線性的或構形的。在線性抗原決定基中，蛋白質與相互作用分子(諸如抗體)之間的所有相互作用點沿著蛋白質之一級胺基酸序列線性存在。「非線性抗原決定基」或「構形抗原決定基」包含在對抗原決定基具有特異性之抗體所結合之抗原蛋白質內的非相鄰多肽(或胺基酸)。如本文所用，術語「抗原抗原決定基」如藉由此項技術中熟知之任何方法所確定(例如藉由習知免疫檢定)，其定義為可與抗體特異性結合之抗原的一部分。或者，在探索過程期間，抗體之產生及特徵化可闡明關於所要抗原決定基之資訊。根據此資訊，隨後可競爭性篩選結合至同一抗原決定基之抗體。達成此之方法為執行競爭及交叉競爭研究以尋找為結合至αvβ8整合素而彼此競爭或交叉競爭之抗體，例如為結合至抗原而進行競爭之抗體。
「優先結合」或「特異性結合」 (在本文中可互換地使用)於抗原決定基之抗體為此項技術中已清楚理解之術語，且用以測定該特異性或優先結合之方法亦為此項技術中所熟知。若分子與特定細胞或物質之反應或締合比其與替代性細胞或物質更頻繁、更快速、持續時間更長及/或親和力更大，則稱其呈現「特異性結合」或「優先結合」。若與抗體與其他物質結合相比，其以更大親和力、親合力、更容易及/或以更長持續時間與目標結合，則抗體「特異性結合」或「優先結合」於目標。此外，若與抗體與樣品中存在之其他物質結合相比，其以更大親和力、親合力、更容易及/或以更長持續時間與樣品中之目標結合，則抗體「特異性結合」或「優先結合」於目標。舉例而言，特異性或優先結合至αvβ8整合素抗原決定基之抗體為與抗體與其他αvβ8整合素抗原決定基或非αvβ8整合素抗原決定基結合相比，以更大親和力、親合力、更容易及/或以更長持續時間結合此抗原決定基的抗體。藉由閱讀此定義亦應理解，例如特異性或優先結合至第一目標之抗體(或部分或抗原決定基)可或可不特異性或優先結合至第二目標。由此，「特異性結合」或「優先結合」未必需要(儘管其可包括)獨佔式結合。一般而言，但不一定，提及結合意謂優先結合。「特異性結合」或「優先結合」包括化合物，例如蛋白質、核酸、抗體及其類似物，其識別及結合至特定分子，但實質上不識別或結合樣品中之其他分子。舉例而言，識別且結合至樣品中之同源配位體或結合搭配物(例如結合αvβ8整合素之抗αvβ8整合素抗體)但實質上並不識別或結合樣品中之其他分子的抗體或肽受體特異性結合至該同源配位體或結合搭配物。因此，在指定檢定條件下，指定結合部分(例如，抗體或其抗原結合片段或受體或其配位體結合部分)優先結合至特定目標分子，且不以大量結合至測試樣品中存在之其他組分。
各種檢定格式可用以選擇特異性結合所關注之分子之抗體或肽。舉例而言，固相ELISA免疫檢定、免疫沈澱、Biacore™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ)、KinExA、螢光活化細胞分選(FACS)、Octet™ (FortéBio, Inc., Menlo Park, CA)及西方墨點分析(Western blot analysis)在可用於鑑別抗體或其抗原結合片段或受體或其配位體結合部分之多種檢定中，該抗體與抗原特異性反應，該受體或其配位體結合部分與同源配位體或結合搭配物特異性結合。通常，特異性或選擇性反應將為背景信號或雜訊之至少兩倍、更通常超過背景之10倍、甚至更通常超過背景之50倍、更通常超過背景之100倍、又更通常超過背景之500倍、甚至更通常超過背景之1000倍及甚至更通常超過背景之10,000倍。另外，當平衡解離常數(KD )≤1 µM、較佳≤100 nM、更佳≤10 nm、甚至更佳≤100 pM、又更佳地≤10 pM且甚至更佳≤1 pM時，稱抗體「特異性結合」抗原。在一些實施例中，當平衡解離常數(KD )≤7 nM時，稱抗體「特異性結合」抗原。
術語「結合親和力」在本文中用作兩個分子(例如與抗體或其片段及抗原)之間之非共價相互作用之強度的量度。術語「結合親和力」用於描述單價相互作用(固有活性)。
另外，為測定抗αvβ8整合素抗體與αvβ8整合素表現細胞之結合親和力，可進行細胞結合實驗以測定表觀親和力。抗體與表現目標之細胞的表觀親和力可計算為平衡結合滴定曲線之EC50 ，其中抗原結合群體之幾何平均螢光強度(gMFI)係藉由流動式細胞量測術定量。
藉由單價相互作用，兩個分子(例如，抗體或其片段及抗原)之間之結合親和力可藉由測定解離常數(KD )定量。反之，KD 可藉由使用例如表面電漿子共振(SPR)方法(Biacore)對複合物形成及解離進行動力學量測來測定。對應於單價複合物之締合及解離的速率常數分別稱為締合速率常數ka (或kon )及解離速率常數kd (或koff )。KD 經由等式KD =kd /ka 與ka 及kd 相關。解離常數值可直接藉由熟知方法測定，且甚至複合混合物之解離常數值可藉由諸如例如Caceci等人(1984, Byte 9: 340-362)中所闡述之彼等方法計算出。舉例而言，KD 可使用諸如由Wong及Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)所揭示之雙過濾片硝化纖維過濾器結合檢定來確立。用以評估配位體(諸如針對目標抗原之抗體)之結合能力之其他標準檢定為此項技術中已知的，包括例如ELISA、西方墨點法、RIA及流動式細胞量測術分析及在本文中之其他地方所例示之其他檢定。抗體之結合動力學及結合親和力亦可藉由此項技術中已知之標準檢定來評估，諸如例如藉由使用Biacore™系統或KinExA進行表面電漿子共振(SPR)。
可執行以下競爭性結合檢定：其中抗體結合至抗原與目標結合該目標之另一配位體(諸如以其他方式結合目標之另一抗體或可溶性受體)相比較。出現50%抑制之濃度稱為Ki 。在理想條件下，Ki 等於KD 。因為Ki 值應永不小於KD ，所以可宜由提供KD 之上限取代量測Ki 。
遵循上述定義，與不同分子相互作用相關之結合親和力(例如比較不同抗體對給定抗原之結合親和力)可藉由比較個別抗體/抗原複合物之KD 值來比較。抗體或其他結合搭配物之KD 值可使用此項技術中明確之方法測定。一種測定KD 之方法係藉由使用表面電漿子共振，通常使用生物感測器系統(諸如Biacore®系統)。
類似地，特異性相互作用可藉由測定及比較所關注之相互作用(例如抗體與抗原之間之特異性相互作用)之KD 值與非所關注之相互作用(例如已知並未結合αvβ8整合素之對照抗體)之KD 值來評估。
特異性結合其目標之抗體可以高親和力結合其目標，其如上文所論述顯示低KD ，且可以更低親和力結合至其他非目標分子。舉例而言，抗體可在KD 為1 × 10- 6 M或更大、更佳1 × 10- 5 M或更大、更佳1 × 10- 4 M或更大、更佳1 × 10- 3 M或更大、甚至更佳1 × 10- 2 M或更大之情況下結合至非目標分子。本發明之抗體較佳能夠結合至其目標，其具有與結合至另一非αvβ8整合素分子之其親和力相比至少兩倍、10倍、50倍、100倍、200倍、500倍、1,000倍或10,000倍或更大的親和力。
如本文所用之術語「競爭」關於抗體意謂第一抗體或其抗原結合片段以充分類似於第二抗體或其抗原結合片段之結合的方式結合至抗原決定基，使得第一抗體與其同源抗原決定基之結合的結果在第二抗體存在下相比於在第二抗體不存在下之第一抗體結合可偵測地減少。替代方案可能但不必如此：在第一抗體存在下第二抗體與其抗原決定基之結合亦可偵測地減少。亦即，第一抗體可抑制第二抗體與其抗原決定基之結合，而第二抗體並不抑制第一抗體與其各別抗原決定基之結合。然而，在各抗體可偵測地抑制另一抗體與其同源抗原決定基或配位體結合的情況下，無論程度相同、更大或更小，稱該等抗體彼此「交叉競爭」結合其各別抗原決定基。本發明涵蓋競爭及交叉競爭抗體兩者。無論該競爭或交叉競爭發生之機制(例如位阻、構形變化或結合至共同抗原決定基或其部分)如何，熟習此項技術者基於本文中所提供之教示內容將瞭解，該等競爭及/或交叉競爭抗體涵蓋於且可適用於本文所揭示之方法。
標準競爭檢定可用於判定兩個抗體是否與彼此競爭。一種用於抗體競爭之適合檢定涉及使用Biacore技術，其可使用表面電漿子共振(SPR)技術，通常使用生物感測器系統(諸如BIACORE®系統)量測相互作用之程度。舉例而言，SPR可用於活體外競爭性結合抑制檢定，以判定一個抗體抑制第二抗體之結合的能力。用於量測抗體競爭之另一檢定使用基於ELISA之方法。
此外，基於其競爭之抗體將其「分組」之高通量方法描述於國際專利申請案第WO2003/48731號中。若一種抗體(或片段)減少另一抗體(或片段)與αvβ8整合素之結合，則存在競爭。舉例而言，可使用依序結合競爭檢定，其中不同抗體經依序添加。可添加第一抗體以達成接近飽和之結合。隨後，添加第二抗體。若未偵測到第二抗體與αvβ8整合素之結合，或與在第一抗體不存在下之平行檢定相比顯著降低(例如至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%或至少約90%之競爭減少) (該等值可設定為100%)，則將兩種抗體視為彼此競爭。
另外，在實例9中提供例示性抗體抗原決定基分組檢定，其使用人類與小鼠αvβ8整合素蛋白質之間的結構域交換以評估數種抗體之間的可能抗原決定基。熟習此項技術者結合本文所提供之教示內容將理解，存在以下各種此項技術中已知之檢定：其可用於測定至少兩種相對於彼此與目標之結合，且本文中包括該等檢定。
抗αvβ8整合素抗體可使用本領域中熟知之方法表徵。舉例而言，一種方法為鑑別其結合之抗原決定基或「抗原決定基定位」。此項技術中已知許多對蛋白質上之抗原決定基位置進行定位及表徵的方法，包括求解抗體-抗原複合物之晶體結構、競爭檢定、基因片段表現檢定及基於合成肽之檢定，如例如Harlow及Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999之第11章中所述。在一額外實例中，抗原決定基定位可用於測定抗αvβ8整合素抗體所結合之序列。抗原決定基定位可購自各種來源，例如Pepscan Systems (Edelhertweg 15, 8219 PH Lelystad, The Netherlands)。抗原決定基可為線性抗原決定基，亦即含於胺基酸之單一鏈段中；或構形抗原決定基，其由可能不一定含於單一鏈段中之胺基酸的三維相互作用形成。不同長度(例如，至少4-6個胺基酸長)之肽可(例如，以重組方式)經分離或合成且用於抗αvβ8整合素抗體之結合檢定。
另外，抗αvβ8整合素抗體所結合之抗原決定基可藉由使用來源於αvβ8整合素序列(例如，人類αvβ8整合素序列)之重疊肽及測定抗體結合在系統篩檢中測定。根據基因片段表現檢定，可將編碼αvβ8整合素之開放閱讀框架隨機或藉由特異性基因構造分成片段且測定αvβ8整合素與待測試之抗體之表現片段的反應性。基因片段可例如藉由PCR產生，且隨後在放射性胺基酸存在下活體外轉錄且轉譯成蛋白質。隨後藉由免疫沈澱及凝膠電泳測定抗體與放射性標記之αvβ8整合素片段的結合。
某些抗原決定基亦可藉由使用呈現於噬菌體顆粒(噬菌體庫)或酵母(酵母展示)之表面上之隨機肽序列的大型庫來鑑別。可替代地，可在簡單結合檢定中測試重疊肽片段之所定義庫與測試抗體的結合。在一額外實例中，可進行抗原之突變誘發、域交換實驗及丙胺酸掃描突變誘發以鑑別抗原決定基結合所需、足夠及/或必需的殘基。舉例而言，可使用突變αvβ8整合素進行丙胺酸掃描突變誘發實驗，其中αvβ8整合素多肽之各種殘基已經丙胺酸置換。藉由評估抗體與突變αvβ8整合素之結合，可評估特定αvβ8整合素殘基對抗體結合之重要性。
可用於表徵抗αvβ8整合素抗體之又一方法應使用與其他抗體之競爭檢定，已知該等抗體結合至同一抗原，亦即αvβ8整合素上之各種片段，以判定抗αvβ8整合素抗體是否結合至與其他抗體相同之抗原決定基。競爭檢定已為熟習此項技術者所熟知。
此外，可以不同的詳細程度使用各種實驗及計算抗原決定基定位方法定義及表徵給定抗體/抗原結合對之抗原決定基。實驗方法包括突變誘發、X射線結晶法、核磁共振(NMR)光譜分析、氫/氘交換質譜分析(H/D-MS)及此項技術中熟知之各種競爭結合方法。由於各方法依賴於獨特原理，故對抗原決定基之描述與用於測定其之方法密切相關。因此，視所採用之抗原決定基定位方法而定，將以不同方式定義給定抗體/抗原對之抗原決定基。
在其最詳述之程度上，用於Ag與Ab之間之相互作用之抗原決定基可藉由定義存在於Ag-Ab相互作用中之原子接觸之空間座標以及關於其對結合熱力學之相對貢獻的資訊來定義。在不太詳細之程度上，抗原決定基之特徵可在於定義Ag與Ab之間原子接觸之空間座標。在更不詳細之程度上，抗原決定基之特徵可在於其包含之胺基酸殘基，如由特定準則，例如由Ab及Ag中之原子(例如，重鏈，亦即非氫原子)之間之距離所定義。在更不詳細之程度上，抗原決定基可由功能，例如由與其他Ab之競爭結合來表徵。抗原決定基亦可更一般地定義為包含胺基酸殘基，對於該等胺基酸殘基，由另一胺基酸取代將(例如使用丙胺酸掃描)改變Ab與Ag之間之相互作用之特徵。
根據視所使用之抗原決定基定位法而定在不同細節程度下獲得抗原決定基之描述及定義的事實，因此可類似地在不同細節水準下執行對同一Ag上之不同Ab之抗原決定基的比較。
若在胺基酸程度下描述，例如自X射線結構測定之抗原決定基含有同一組胺基酸殘基，則稱該等抗原決定基為一致的。若抗原決定基共用至少一個胺基酸，則稱該等抗原決定基為重疊的。若抗原決定基不共用胺基酸殘基，則將該等抗原決定基稱為獨立(獨特)的。
若相應抗體之結合為相互獨佔式的，亦即一個抗體之結合排除另一抗體之同時或連續結合，則稱特徵在於競爭結合之抗原決定基為重疊的。若抗原能夠同時容納兩個相應抗體之結合，則稱抗原決定基為獨立(獨特)的。
術語「互補位」之定義藉由將視角逆轉而來源於以上「抗原決定基」之定義。因此，術語「互補位」係指特異性結合抗原之抗體上之區域或區，亦即與抗原(αvβ8整合素或其一部分)進行接觸之抗體上之胺基酸殘基，正如在本文中之其他地方定義的「接觸」。
給定抗體/抗原對之抗原決定基及互補位可藉由常規方法來鑑別。舉例而言，抗原決定基之大體位置可藉由評估抗體結合至不同片段或變異型αvβ8整合素多肽之能力來確定。與抗體(抗原決定基)進行接觸之αvβ8整合素內之特定胺基酸及與αvβ8整合素(互補位)進行接觸之抗體中之特定胺基酸亦可使用常規方法，諸如實例中所述之方法確定。舉例而言，可將抗體及目標分子組合且可使抗體/抗原複合物結晶。可測定複合物之晶體結構且將其用於鑑別抗體與其目標之間相互作用的特定位點。
根據本發明之抗體可結合至與本文特定揭示之本發明之抗體相同的抗原決定基或αvβ8整合素(例如，人類αvβ8整合素)之域。可出於該鑑別之目的使用之分析及檢定包括評估如實例1-26中所述之生物活性檢定中所關注之抗體與αvβ8整合素受體之間之αvβ8整合素之結合競爭的檢定。
抗體或其抗原結合片段可具有與本發明之另一抗體為結合至如本文所述之αvβ8整合素(例如，人類αvβ8整合素)而進行競爭或交叉競爭的能力。舉例而言，本發明之抗體可與本文中所述之抗體為結合至αvβ8整合素或結合至與本文中所揭示之抗體結合之αvβ8整合素的適合片段或變異體而進行競爭或交叉競爭。
亦即，若第一抗體與第二抗體為結合至αvβ8整合素而進行競爭，但當第二抗體首先結合至αvβ8整合素時，該第一抗體並不進行競爭，則認為其與第二抗體競爭(亦稱為單向競爭)。在抗體與另一抗體競爭而不管哪個抗體首先結合至αvβ8整合素時，則該抗體與另一抗體「交叉競爭」結合至αvβ8整合素。可基於競爭或交叉競爭抗體在標準結合檢定中與本發明之已知抗體競爭/交叉競爭之能力鑑別該等競爭或交叉競爭抗體。舉例而言，可使用例如藉由使用Biacore™系統之SPR、ELISA檢定或流動式細胞量測術證明競爭/交叉競爭。該競爭/交叉競爭可表明兩個抗體結合至一致、重疊或類似的抗原決定基。
本發明之抗體因此可藉由包含結合檢定之方法鑑別，該結合檢定評估測試抗體是否能夠與參考抗體競爭/交叉競爭目標分子上之結合位點。用於進行競爭性結合檢定之方法揭示於本文中及/或為此項技術中所熟知。舉例而言，其可涉及使用以下條件使本發明之參考抗體結合至目標分子：在該等條件下，抗體可結合至目標分子。隨後可使抗體/目標複合物暴露於測試/第二抗體且可評估測試抗體能夠取代來自抗體/目標複合物之本發明之參考抗體的程度。替代性方法可涉及在允許抗體結合之條件下使測試抗體與目標分子接觸，隨後添加能夠結合目標分子之本發明之參考抗體，且評估本發明之參考抗體能夠自抗體/目標複合物取代測試抗體或同時結合至目標(亦即，非競爭抗體)之程度。
測試抗體抑制本發明之參考抗體與目標結合的能力證明，測試抗體可與本發明之參考抗體為結合至目標而進行競爭且因此該測試抗體結合至與本發明之參考抗體相同或實質上相同之αvβ8整合素蛋白質上的抗原決定基或區。在此類方法中經鑑別為與本發明之參考抗體競爭之測試抗體亦係本發明之抗體。測試抗體可結合與本發明之參考抗體相同區中的αvβ8整合素且可與本發明之參考抗體競爭，該事實表明測試抗體可充當與本發明之抗體相同之結合位點處的配位體且測試抗體因此可模擬參考抗體之作用，且因此係本發明之抗體。此可藉由在其他方面一致之條件下使用如本文中其他處更充分描述之檢定比較測試抗體存在下αvβ8整合素之活性與參考抗體存在下αvβ8整合素之活性來確認。
本發明之參考抗體或其抗原結合片段可為如本文所述之抗體，例如如本文所述之表1中之抗體及其任何變異體或片段，其保持結合至αvβ8整合素之能力。
如先前在本文中其他地方所述，特異性結合可參考抗體與並非目標之分子的結合來評估。此比較可藉由比較抗體結合至目標與結合至另一分子之能力來進行。此比較可如上文所述在對KD 或Ki 之評估中進行。用於此類比較之另一分子可為非目標分子之任何分子。較佳地，另一分子與目標分子並不一致。較佳地，目標分子並非目標分子之片段。
用以測定特異性結合之另一分子可在結構或功能方面與目標無關。舉例而言，另一分子可為環境中之無關材料或伴隨材料。
用於測定特異性結合之另一分子可為涉及與目標分子，例如αvβ8整合素(例如，人類αvβ8整合素)相同之活體內路徑的另一分子。藉由確保本發明之抗體相比於另一該分子對αvβ8整合素具有特異性，可避免非所需活體內交叉反應。
本發明之抗體可保持結合至與目標分子相關之一些分子的能力。
可替代地，本發明之抗體可具有對特定目標分子之特異性。舉例而言，其可結合至如本文中所述之一個目標分子，但可能並不結合或可能以顯著降低之親和力結合至如本文所述之不同的目標分子。舉例而言，全長成熟人類αvβ8整合素可用作目標，但結合至該目標之抗體可能無法結合至或可能以較低親和力結合至例如來自其他物種之其他αvβ8整合素蛋白質，諸如其他哺乳動物αvβ8整合素。在一些實施例中，抗體結合至人類及小鼠αvβ8整合素兩者。
「Fc融合」蛋白為其中一或多個多肽可操作地連接至Fc多肽之蛋白質。Fc融合將免疫球蛋白之Fc區與融合搭配物組合。
「天然序列Fc區」包含與自然界中所發現之Fc區之胺基酸序列一致的胺基酸序列。「變異Fc區」包含藉助於至少一個胺基酸修飾而與天然序列Fc區之胺基酸序列不同但又保留天然序列Fc區之至少一種效應功能的胺基酸序列。較佳地，與天然序列Fc區相比或與親本多肽之Fc區相比，在天然序列Fc區中或在親本多肽之Fc區中，變異Fc區具有至少一個胺基酸取代，例如約一至約十個胺基酸取代，且較佳約一至約五個胺基酸取代。在本文中，變異Fc區與天然序列Fc區及/或親本多肽之Fc區較佳具有至少約80%序列一致性，且與其最佳具有至少約90%序列一致性，與其更佳具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%序列一致性。
如此項技術中已知，抗體之「恆定區」係指單獨或組合形式之抗體輕鏈之恆定區或抗體重鏈之恆定區。
如本文中可互換地使用之術語「IgG Fc區」、「Fc區」、「Fc域」及「Fc」係指IgG分子之一部分，其與藉由IgG分子之木瓜蛋白酶(papain)消化獲得之可結晶片段相關。如本文所用，該等術語係關於排除第一恆定區免疫球蛋白域之抗體恆定區且進一步係關於彼區域之部分。因此，Fc係指IgA、IgD及IgG之最後兩個恆定區免疫球蛋白域，及IgE及IgM之最後三個恆定區免疫球蛋白域以及此等結構域之可撓性鉸鏈N端，或其部分。對於IgA及IgM，Fc可包括J鏈。對於IgG，Fc包含免疫球蛋白域Cγ2及Cγ3 (C伽瑪2及C伽瑪3)及Cγ1 (C伽瑪1)與Cγ2 (C伽瑪2)之間的鉸鏈。雖然可改變Fc區之邊界，但人類IgG重鏈Fc區通常經界定以包含相對於其羧基端之殘基C226或P230，其中編號係根據如Kabat等人, 1991所描述之Edelman等人, 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85之Eu索引。通常，Fc域包含人類IgG1恆定域之約胺基酸殘基236至約447。例示性人類野生型IgG1 Fc域胺基酸序列闡述於SEQ ID NO: 81及SEQ ID NO: 82 (包括視情況選用之末端離胺酸(K)殘基)中。Fc多肽可指代此獨立區域，或在抗體或其抗原結合片段、或Fc融合蛋白之情況下的此區域。
重鏈恆定域包含Fc區且進一步包含CH1域及鉸鏈以及IgG重鏈之CH2及CH3 (及視情況選用之IgA及IgE之CH4)域。
「功能性Fc區」擁有至少一種天然序列Fc區之效應功能。示例性的「效應功能」包括C1q結合；補體相依性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調等。該等效應功能一般需要Fc區與結合域(例如，抗體可變域或其抗原結合片段)組合，且可使用此項技術中已知用於評估該等抗體效應功能之各種檢定來評估。
「天然序列Fc區」包含與自然界中所發現之Fc區之胺基酸序列一致的胺基酸序列。天然序列人類Fc區包括天然序列人類IgG1 Fc區(非A及A異型)；天然序列人類IgG2 Fc區；天然序列人類IgG3 Fc區；及天然序列人類IgG4 Fc區，以及其天然存在之變異體。
「變異Fc區」包含與天然序列Fc區之胺基酸序列相差至少一個胺基酸修飾的胺基酸序列。
「Fc受體」或「FcR」描述結合至抗體之Fc區的受體。在一些實施例中，FcγR為天然人類FcR。在一些實施例中，FcR係結合IgG抗體之FcR (γ受體)且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子類之受體，包括彼等受體之對偶基因變異體及交替剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA (「活化受體」)及FcγRIIB (「抑制受體」)，其具有類似之胺基酸序列，不同之處主要在於其細胞質域。活化受體FcγRIIA在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化基元(IT AM)。抑制受體FcγRIIB在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制基元(ITIM) (參見Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997))。FcR例如在Ravetch及Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)；Capel等人, Immunomethods 4:25-34 (1994)；及de Haas等人, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)中有所綜述。其他FcR，包括將來鑑別之FcR，涵蓋於本文之術語「FcR」中。
術語「Fc受體」或「FcR」亦包括新生兒受體FcRn，其負責將母體IgG轉移至胎兒(Guyer等人, J. Immunol. 117:587 (1976)及Kim等人, J. Immunol. 24:249 (1994))且調節免疫球蛋白之穩態。與FcRn之結合之量測方法為已知的(參見例如Ghetie及Ward., Immunol. Today 18(12):592-598 (1997)；Ghetie等人, Nature Biotechnology, 15(7):637-640 (1997)；Hinton等人, J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004)；WO 2004/92219 (Hinton等人))。
「效應功能」係指可歸因於抗體Fc區之生物活性，其隨抗體同型變化。抗體效應功能之實例包括：Clq結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
「人類效應細胞」為表現一或多個FcR且執行效應功能之白血球。在某些實施例中，該等細胞至少表現FcγRIII且執行ADCC效應功能。介導ADCC之人類白血球的實例包括周邊血液單核細胞(PBMC)、自然殺手(NK)細胞、單核球、巨噬細胞、細胞毒性T細胞及嗜中性球。效應細胞可自天然來源，例如自血液分離。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指細胞毒性形式，其中結合至存在於某些細胞毒性細胞(例如，NK細胞、嗜中性球及巨噬細胞)上之Fc受體(FcR)上之分泌Ig使得此等細胞毒性效應細胞能夠特異性結合至攜帶抗原之目標細胞且隨後用細胞毒素殺死目標細胞。用於介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991)之第464頁之表3中。為評估所關注分子之ADCC活性，可進行活體外ADCC檢定，諸如美國專利第5,500,362號或第5,821,337號或美國專利第6,737,056號(Presta)中所述之活體外ADCC檢定。適用於該等檢定之效應細胞包括PBMC及NK細胞。可替代地或另外，可活體內評估所關注分子之ADCC活性，例如在動物模型中，諸如Clynes等人, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656 (1998)中所揭示之動物模型。例如在美國專利第7,923,538號及美國專利第7,994,290號中描述具有變化的Fc區胺基酸序列及提高或降低之ADCC活性的額外抗體。
具有「增強的ADCC活性」之抗體係指在活體外或活體內介導ADCC方面相比於親本抗體更有效之抗體，其中抗體及親本抗體不同之處在於至少一種結構態樣，且當用於檢定之該抗體及親本抗體之量基本上相同時。在一些實施例中，抗體及親本抗體具有相同胺基酸序列，但抗體經去岩藻糖基化而親本抗體經岩藻糖基化。在一些實施例中，ADCC活性將使用如本文所揭示之活體外ADCC檢定測定，但涵蓋用於測定ADCC活性之其他檢定或方法，例如在動物模型中等。在一些實施例中，具有增強的ADCC活性之抗體具有對Fcγ RIIIA增強的親和力。
具有「變化的」FcR結合親和力或ADCC活性之抗體係相比於親本抗體具有增強的或減弱之FcR結合活性及/或ADCC活性的抗體，其中抗體及親本抗體不同之處在於至少一種結構態樣。「展示」與FcR「提高之結合」的抗體以比親本抗體更高之親和力結合至少一種FcR。「展示」與FcR「減少之結合」的抗體以比親本抗體更低之親和力結合至少一種FcR。相比於天然序列IgG Fc區，展示與FcR減少之結合的該等抗體與FcR之結合可極少或無明顯結合，例如與FcR 0-20%結合。
「對Fcγ RIIIA增強的親和力」係指抗體相比親本抗體對Fcγ RIIIA (在一些實例中亦稱為CD 16a)具有更高之親和力，其中抗體及親本抗體不同之處在於至少一種結構態樣。
「糖型」係指複合物寡醣結構，其包含各種碳水化合物單元之鍵。該等結構描述於例如Essentials of Glycobiology Varki等人編, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1999)中，其亦提供標準糖生物學命名法之綜述。該等糖型包括但不限於G2、G1、G0、G-1及G-2 (參見例如國際專利公開案第WO 99/22764號)。
「糖基化型態」定義為碳水化合物單元之型態，該等碳水化合物單元共價附著於蛋白質(例如糖型)以及位點，在該(等)位點，糖型共價附著於蛋白質，更具體言之免疫球蛋白之肽主鏈。
「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指目標細胞在補體存在下溶解。經典補體路徑之活化藉由補體系統(Clq)之第一組分結合至(適當子類之)抗體起始，該等抗體結合至其同源抗原。為評估補體活化，可進行CDC檢定，例如如Gazzano-Santoro等人, J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)中所述。例如在美國專利第6,194,551 B l號、美國專利第7,923,538號、美國專利第7,994,290號及WO 1999/51642中描述具有變化的Fc區胺基酸序列及提高或降低之Clq結合能力的抗體。亦參見例如Idusogie等人, J。
如本文所用，術語「野生型胺基酸」、「野生型IgG」、「野生型抗體」或「野生型mAb」係指天然存在於某一群體(例如，人類、小鼠、大鼠、細胞等)內之胺基酸或核酸之序列。
如本文所用，術語「αvβ8整合素」一般係指包含α整合素子單元(例如，整合素α-V子單元，例如ITGAV，例如包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列)及β整合素子單元(例如，整合素子單元β 8，例如ITGB8，例如包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列)之蛋白複合物。如本文所用，「人類αvβ8整合素」一般係指αvβ8整合素，其例如包含人類ITGAV α子單元，例如包含SEQ ID NO: 77之序列；及人類ITGB8 β子單元，例如包含SEQ ID NO: 78之序列。如本文所用，「鼠類αvβ8整合素」或「小鼠αvβ8整合素」一般係指αvβ8整合素，其例如包含鼠類ITGAV α子單元，例如包含SEQ ID NO: 79之序列；及鼠類ITGB8 β子單元，例如包含SEQ ID NO: 80之序列。術語αvβ8整合素通常包括αvβ8整合素同源物及直系同源物，包括但不限於人類、食蟹獼猴、大鼠、兔及小鼠。如本文所用，「αvβ8整合素」通常係指哺乳動物αvβ8整合素，例如人類、大鼠、小鼠、非人類靈長類動物、牛、綿羊或豬αvβ8整合素(例如，包含分別來自人類、大鼠、小鼠、非人類靈長類動物、牛、綿羊或豬之整合素α-V子單元及整合素β 8子單元)。整合素α-V子單元之非限制性例示性實例包括人類(參見例如Genbank寄存編號P06756.2，SEQ ID NO: 77)、食蟹獼猴(參見例如SEQ ID NO:84)及小鼠(參見例如SEQ ID NO: 79) αvβ8整合素。整合素β 8子單元之非限制性例示性實例包括人類(參見例如Genbank寄存編號P26012.1，SEQ ID NO: 78)、食蟹獼猴(參見例如SEQ ID NO: 85)及小鼠(參見例如SEQ ID NO:80) αvβ8整合素。術語「αvβ8整合素」亦涵蓋該等αvβ8整合素子單元分子之片段、變異體、同功異型物及其他同源物。變異型αvβ8整合素分子之特徵一般會在於具有與天然存在之αvβ8整合素相同類型之活性，諸如結合αvβ8整合素配位體之能力，例如如本文中所述，誘導受體介導之活性之能力及結合或不結合本發明之抗體或其抗原片段之能力。
TGFβ及LAP之例示性胺基酸及核苷酸序列為此項技術中已知的。舉例而言，包含TGFβ1及LAP之前驅體多肽(例如，人類序列UniProt寄存編號P01137)經轉譯後處理成對應於LAP之UniProt寄存編號P01137之約胺基酸30-278及對應於人類TGFβ1之UniProt寄存編號P01137之約胺基酸279-390。類似地，包含TGFβ3及LAP之前驅體多肽(例如，人類序列UniProt寄存編號P10600)經轉譯後處理成對應於LAP之UniProt寄存編號P10600之約胺基酸24-300及對應於人類TGFβ3之UniProt寄存編號10600之約胺基酸301-412。
αvβ8整合素可包含一或多種、兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種、六種或更多種、七種或更多種、八種或更多種、九種或更多種、十種或更多種、十二種或更多種或十五種或更多種之表面可獲得的αvβ8整合素之殘基。目標分子可包含已知之來自αvβ8整合素之抗原決定基。
如在本文中其他地方所概述，抗體分子之某些位置可變化。如本文所用之「位置」意謂蛋白質序列中之位置。位置可依序或根據已建立之格式經編號，例如可使用EU索引及Kabat索引來編號抗體之胺基酸殘基。舉例而言，位置297為人類抗體IgG1中之位置。如以上所概述，相應位置一般藉由與其他親本序列比對來確定。
如本文所用之「殘基」意謂在蛋白質及其相關胺基酸一致性中之位置。舉例而言，天冬醯胺297 (亦稱為Asn297、亦稱為N297)為人類抗體IgG1中之殘基。
如此項技術中已知，如在本文中可互換地使用之「聚核苷酸」或「核酸」係指任何長度之核苷酸鏈，且包括DNA及RNA。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼及/或其類似物，或任何可藉由DNA或RNA聚合酶併入鏈中之受質。聚核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。若存在，則可在鏈組裝之前或之後對核苷酸結構進行修飾。核苷酸之序列可間雜有非核苷酸組分。聚核苷酸可在聚合之後進一步修飾，諸如藉由與標記組分結合。其他類型之修飾包括例如「帽」；天然存在之核苷酸中之一或多者經類似物取代；核苷酸間修飾，諸如具有不帶電鍵(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯等)及帶電鍵(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)之修飾、含有側接部分(諸如蛋白質(例如核酸酶、毒素、抗體、信號肽、聚-L-離胺酸等))之修飾、具有嵌入劑(例如吖啶、補骨脂素等)之修飾、含有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬等)之修飾、含有烷基化劑之修飾、具有經修飾之鍵(例如α變旋異構核酸等)之修飾，以及聚核苷酸之未修飾形式。另外，一般存在於糖中之羥基中之任一者可例如經膦酸酯基、磷酸酯基置換，由標準保護基保護，或經活化以製備與額外核苷酸之額外鍵，或可結合至固體支撐物。5'及3'端OH可經磷酸化或經1至20個碳原子之胺或有機封端基團取代。其他羥基亦可衍生成標準保護基。聚核苷酸亦可含有此項技術中一般已知之類似形式之核糖或脫氧核糖，包含例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-疊氮基-核糖、碳環糖類似物、α-或β-變旋異構糖、差向異構糖(諸如***糖、木糖或來蘇糖)；哌喃醣、呋喃醣、景天庚酮糖、非環類似物及無鹼基核苷類似物(諸如甲基核糖苷)。一或多個磷酸二酯鍵可經替代性鍵聯基團置換。此等替代性鍵聯基團包括但不限於其中磷酸酯經P(O)S(「硫代酸酯」)、P(S)S (「二硫代酸酯」)、(O)NR2 (「醯胺酯(amidate)」)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2 (「甲縮醛」)置換之實施例，其中各R或R'獨立地為H或經取代或未經取代之烷基(1-20個C)，其視情況含有醚(-O-)鍵、芳基、烯基、環烷基、環烯基或芳醛基。聚核苷酸中並非所有鍵需要一致。前述描述適用於本文所提及之所有聚核苷酸，包括RNA及DNA。
如本文所用，「載體」意謂一種構造體，其能夠遞送且較佳表現宿主細胞中所關注之一或多個基因或序列。載體之實例包括但不限於病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、質體、黏質體或噬菌體載體、與陽離子縮合劑締合之DNA或RNA表現載體、囊封於脂質體中之DNA或RNA表現載體及某些真核細胞，諸如生產細胞。
「宿主細胞」包括可為或已成為用於併入聚核苷酸***物之載體之受體的個別細胞或細胞培養物。宿主細胞包括單個宿主細胞之後代，且後代可能由於自然、偶然或故意突變而不一定與原始母細胞完全一致(在形態或基因組DNA補體方面)。宿主細胞包括經本發明之聚核苷酸在活體內轉染及/或轉型之細胞。
宿主細胞可為原核細胞或真核細胞。例示性真核細胞包括哺乳動物細胞，諸如靈長類動物或非靈長類動物細胞；真菌細胞，諸如酵母；植物細胞；及昆蟲細胞。
對細胞培養物敏感及蛋白質或多肽表現敏感之任何宿主細胞均可根據本發明使用。在某些實施例中，宿主細胞為哺乳動物。可作為宿主用於表現之哺乳動物細胞株為此項技術中所熟知且包括許多可獲自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection；ATCC)之永生化細胞株。非限制性例示性哺乳動物細胞包括但不限於NS0細胞、HEK 293及中國倉鼠卵巢(CHO)細胞及其衍生物，諸如293-6E及CHO DG44細胞，CHO DXB11，及Potelligent® CHOK1SV細胞(BioWa/Lonza, Allendale, NJ)。哺乳動物宿主細胞亦包括但不限於人類子宮頸癌細胞(HeLa，ATCC CCL 2)、嬰兒倉鼠腎(BHK，ATCC CCL 10)細胞、猴腎細胞(COS)及人類肝細胞癌細胞(例如Hep G2)。可根據本發明使用之哺乳動物細胞之其他非限制性實例包括人類視網膜母細胞(PER.C6®；CruCell, Leiden, The Netherlands)；經SV40 (COS-7，ATCC CRL 1651)轉型之猴腎CV1細胞株；經次選殖以用於在懸浮培養物中生長之人類胚胎腎細胞株293 (HEK 293)或293細胞(Graham等人, 1977, J. Gen Virol. 36:59)；小鼠塞特利氏細胞(TM4，Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251)；猴腎細胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76，ATCC CRL-1 587)；犬腎細胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠肝細胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人類肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人類肝細胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺腫瘤細胞(MMT 060562，ATCC CCL51)；TR1細胞(Mather等人, 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68)；MRC 5細胞；FS4細胞；人類肝癌細胞株(Hep G2)；及大量骨髓瘤細胞株，包括但不限於BALB/c小鼠骨髓瘤細胞株(NS0/1，ECACC號：85110503)、NS0細胞及Sp2/0細胞。
另外，任何數目個市售及不可市售的表現多肽或蛋白質之細胞株均可根據本發明使用。熟習此項技術者將瞭解，不同細胞株可具有不同營養需求及/或可需要不同培養條件以實現最佳生長及多肽或蛋白質表現，且將能夠視需要改變條件。
本發明包括此項技術中已知或本文所揭示之用於產生所關注之蛋白質之任何真核生物表現系統，諸如昆蟲細胞系統中之表現；酵母表現系統或哺乳動物細胞系統，諸如但不限於CHO細胞。
如本文所用，「表現控制序列」意謂引導核酸轉錄之核酸序列。表現控制序列可為啟動子，例如構組成性或誘導性啟動子；或強化子。表現控制序列可操作地連接至待轉錄之核酸序列。
如在本文中可互換地使用之術語「前導肽」或「前導序列」或「前導信號序列」或「信號序列」意謂任何由此經編碼之核酸序列或胺基酸序列，其可存在於核酸分子之5'端上及/或多肽之N端處或附近，其在存在時可介導多肽輸送至目的細胞器，包括但不限於自細胞分泌多肽。該等前導序列包括但不限於包含例如ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGCGTGCACTCC (SEQ ID NO: 187)之核酸序列及由此經編碼之胺基酸序列，諸如但不限於MGWSCIILFLVATATGVHS (SEQ ID NO: 188)。本發明涵蓋此項技術中已知或待鑑別之此等及任何其他前導信號(核酸及胺基酸序列)，其會使得多肽輸送至所要細胞器，例如內質網，及/或自細胞分泌。一般來說，信號肽自成熟多肽移除及/或不存在於成熟多肽中。
如本文所用，「治療」為用於獲得有益的或所要臨床結果之方法。出於本發明之目的，有益的或所要臨床結果包括但不限於以下中之一或多者：存活率提高(死亡率降低)、疾病之發炎反應減少、組織纖維化量減少、疾病病灶之外觀好轉、病理性病灶限制於局部位點、來自疾病之損害程度降低、疾病之持續時間降低及/或與疾病相關之症狀的數量、程度或持續時間降低。術語包括投與本發明之化合物或藥劑以預防或延遲疾病之症狀、併發症或生物化學標誌發作，緩解該等症狀或遏制或抑制疾病、病況或病症進一步發展。治療可為防治性(以預防或延遲疾病發作或預防其臨床或亞臨床症狀顯現)或治療性遏制或緩解在疾病顯現後之症狀。在一些實施例中，疾病、病況或病症為癌症。
如本文所使用，術語「癌症」意欲包括所有類型的癌腫生長或致癌過程、轉移性組織或惡性轉型細胞、組織或器官(無論組織病理型或侵襲階段)。癌腫病症之實例包括但不限於實體腫瘤、血液癌症、軟組織腫瘤及轉移性病灶。實體腫瘤之實例包括各種器官系統之惡性病，例如肉瘤及癌瘤(包括腺癌及鱗狀細胞癌)，諸如影響肝、肺、***、淋巴、胃腸道(例如，結腸)、泌尿生殖道(例如，腎、尿道上皮細胞)、***及咽之惡性病。腺癌包括諸如大部分結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝癌、非小細胞肺癌、小腸癌及食道癌之惡性病惡性病。鱗狀細胞癌包括例如肺、食道、皮膚、頭頸區、口腔、肛門及子宮頸中之惡性病。在一個實施例中，癌症為黑素瘤，例如晚期黑素瘤。亦可使用本發明之方法及組合物治療前述癌症之轉移性病灶。可使用本文中所揭示之抗體分子治療，例如減少生長之例示性癌症包括通常對免疫療法有反應之癌症。
「改善」意謂與未投與抗αvβ8整合素抗體相比，一或多種症狀減輕或好轉。「改善」亦包括症狀之持續時間縮短或減少。
如本文所用，藥物、化合物或醫藥組合物之「有效劑量」或「有效量」為足以影響一或多種有益或所要結果中之任何者之量。在更具體態樣中，有效量預防、緩解或改善疾病(例如癌症)之症狀及/或延長經治療之個體的存活期。對於防治性用途，有益或所要結果包括消除或降低疾病之風險、減輕疾病之嚴重程度或延遲疾病發作，其中疾病包括疾病、其併發症及在疾病發展期間所呈現之中間病理性表型之生物化學、組織及/或行為症狀。對於治療性用途，有益或所要結果包括諸如減輕αvβ8整合素介導之疾病、病症或病況之一或多種之症狀、降低治療疾病所要之其他藥物之劑量、增強另一藥物之效應及/或延遲患者之疾病惡化的臨床結果。有效劑量可以一或多種投藥形式投與。出於本發明之目的，藥物、化合物或醫藥組合物之有效劑量為足以直接或間接實現防治性或治療性治療之量。如在臨床情形下所理解，藥物、化合物或醫藥組合物之有效劑量可或不可連同另一種藥物、化合物或醫藥組合物一起達成。因此，「有效劑量」可視為處於投與一或多種治療劑之情況下，且若連同一或多種其他藥劑，可達成或已達成所要結果，則單一藥劑可視為以有效量給出。
抗體或其抗原結合片段可與一或多種療法(例如，在本文中稱為「第二療法」)組合投與。「與……組合」不欲意謂療法或治療劑必須同時投與及/或調配成一起遞送，但此等遞送方法屬於本文所述之範疇內。抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段可在與一或多種其他療法或治療劑同時、之前或之後投與。可以任何順序投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段及第二療法，例如其他藥劑或治療方案。一般而言，各藥劑將以針對該藥劑所測定之劑量及/或時間表來投與。另外應瞭解，此組合中所用之額外治療劑可在單一組合物中一起投與或在不同組合物中分開投與。在一些實施例中，組合用量將低於個別使用量。
「協同組合」或「協同」起作用之組合為呈現在與所組合之個別療法之唯一相加效應相比時未預測到的增加效應的組合。
「個體(individual)」或「個體(subject)」為哺乳動物，更佳為人類。哺乳動物亦包括但不限於農耕動物(例如母牛、豬、馬、雞等)、運動型動物、寵物、靈長類動物、馬、狗、貓、小鼠及大鼠。在一些實施例中，個體處於由結合至其受體之αvβ8整合素及由此介導之信號傳導介導或與其締合之疾病、病症或病況的風險下。在某些實施例中，個體患有如本文所述之病症或病況，例如癌症。
如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑」或「醫藥可接受之賦形劑」包括任何材料，其在與活性成分組合時使該成分保持生物活性且與個體之免疫系統無反應性。實例包括但不限於標準醫藥載劑中任一者，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液(諸如油/水乳液)及各種類型之濕潤劑。對於氣霧劑或非經腸投與之較佳稀釋劑為磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或生理鹽水(0.9%)。包含該等載劑之組合物藉由已知習知方法(參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版, A. Gennaro,編, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990；及Remington, The Science and Practice of Pharmacy 第20版 Mack Publishing, 2000)調配。
本文描述例示性方法及材料，但與本文所述之方法及材料類似或等效之方法及材料亦可用於實施或測試本發明。該等材料、方法及實例僅具說明性且不意欲具有限制性。 II.抗αvβ8整合素抗體
本發明係關於結合至αvβ8整合素之抗體及其抗原結合片段。較佳地，該等抗體特異性結合至αvβ8整合素，亦即，其結合至αvβ8整合素但其不可偵測地結合或以較低親和力結合至其他αv整合素(例如，αvβ3整合素、αvβ5整合素及αvβ6整合素)。本發明進一步係關於展現變化的效應功能之抗αvβ8整合素抗體。在一些實施例中，變化的效應功能係降低之ADCC。在一些實施例中，變化的效應功能係降低之CDC。本發明亦係關於包含該等抗體之組合物；以及該等抗體之用途，包括治療性及醫藥用途。
在一個實施例中，本發明提供以下中之任一者或組合物(包括醫藥組合物)，該等組合物包含具有輕鏈序列或其片段及來源於但不與小鼠融合瘤抗體ADWA-11 (亦稱為ADWA11、mADWA11、mADWA-11)一致之重鏈或其片段的抗體，如以全文引用之方式併入本文中之美國專利第9,969,804號中所揭示，且如例如本說明書之SEQ ID NO: 20-33及71-76中所闡述。
適用於本發明之抗體可涵蓋單株抗體、多株抗體、抗體片段(例如，Fab、Fab'、F(ab')2 、Fv、Fc等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、異結合抗體、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體片段(例如，結構域抗體)之融合蛋白、人類化抗體及包含所要特異性之抗原識別位點的免疫球蛋白分子之任何其他修飾組態，包括抗體之糖基化變異體、抗體之胺基酸序列變異體及共價修飾之抗體。抗體可為鼠類、大鼠、人類或任何其他來源(包括嵌合或人類化抗體)。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體為人類或人類化抗體。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體為嵌合抗體。
本發明之抗αvβ8整合素抗體可藉由此項技術中已知之任何方法製造。用於生產人類及小鼠抗體之通用技術為此項技術中已知的及/或描述於本文中。
初始鑑別之後，候選抗αvβ8整合素抗體之活性可藉由已知用於測試標靶生物活性之生物檢定來進一步證實及優化。在一些實施例中，使用活體外細胞檢定進一步表徵候選抗αvβ8整合素抗體。舉例而言，可使用生物檢定直接篩檢候選物。鑑別及表徵抗αvβ8整合素抗體之方法中之一些詳細描述於實例中。
下表1中為例如如本文所述之鼠類、嵌合及人類化抗αvβ8整合素抗體之胺基酸及核苷酸序列之概述，重鏈及輕鏈CDR之胺基酸及核苷酸序列、重鏈及輕鏈可變區之胺基酸及核苷酸序列以及重鏈及輕鏈之胺基酸及核苷酸序列顯示於此表中。一般而言，除非特定指示，否則本發明之抗αvβ8整合素抗體可包括如表1中所闡述之一或多個Kabat CDR及/或Chothia高變環之任何組合。在一些實施例中，本發明之抗αvβ8整合素抗體可包括如表1中所闡述之一或多個VH及/或VL序列之任何組合。在一些實施例中，本發明之抗αvβ8整合素抗體可包括如表1中所述之一或多個構架區(例如，FR1、FR2、FR3及FR4)之任何組合。一般可理解，且如表1所指示，各VH及VL序列通常包括三個CDR及四個FR，其自胺基端至羧基端按以下次序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
在抗αvβ8整合素抗體在重鏈多肽上包含C端離胺酸(K)胺基酸殘基(例如，人類IgG1重鏈包含末端離胺酸)之一些實施例中，熟習此項技術者將理解，可夾持離胺酸殘基，產生具有缺乏C端離胺酸殘基之重鏈的抗體。另外，該抗體重鏈可使用不編碼離胺酸之核酸產生。因此，在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體包含重鏈，其中不存在另外存在的末端離胺酸。表 1 ： α v β 8 整合素抗體及其他肽之胺基酸及核苷酸序列
名稱 SEQ ID NO. 序列
ADWA11 2.4 VL VL胺基酸序列 根據Kabat，帶下劃線的胺基酸殘基為CDR序列 (亦稱為ADWA11_VK01_2.4) 7 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLSHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSSLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLEYPFT FGGGTKVEIK   
ADWA11 2.4 根據Kabat，CDR-L1 11 RSTKSLSHFNGNTYLF
ADWA11 2.4 根據Kabat，CDR-L2 12 YYMSSLAS
ADWA11 2.4 根據Kabat，CDR-L3 13 QQSLEYPFT
ADWA11 2.4 根據Chothia，CDR-L1 17 STKSLSHFNGNTYL
ADWA11 2.4 根據Chothia，CDR-L2 18 YYMSS
ADWA11 2.4 根據Chothia，CDR-L3 19 QSLEYPFT
ADWA11 2.4 VH VH胺基酸序列 根據Kabat，帶下劃線的胺基酸殘基為CDR序列 6 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDQGNTIYEPKFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11 2.4 根據Kabat，CDR-H1 8 DYYMN
ADWA11 2.4 根據Kabat，CDR-H2 9 WIDPDQGNTIYEPKFQG
ADWA11 2.4 根據Kabat，CDR-H3 10 RLLMDY
ADWA11 2.4 根據Chothia，CDR-H1 14 GFNIKDYYMN
ADWA11 2.4 根據Chothia，CDR-H2 15 WIDPDQGN
ADWA11 2.4 根據Chothia，CDR-H3 16 RLLMDY
ADWA11 2.4 輕鏈(LC)胺基酸序列 VL序列帶下劃線 5 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLSHFNGNTYLFWYQQKPGKAPKRLIYYMSSLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLEYPFTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC   
ADWA11 2.4 重鏈(HC)胺基酸序列 VH序列帶下劃線 2 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMNWVRQAPGKGLEWVGWIDPDQGNTIYEPKFQGRFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK   
ADWA11 2.4 無末端離胺酸殘基之重鏈胺基酸序列 VH序列帶下劃線 3 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMNWVRQAPGKGLEWVGWIDPDQGNTIYEPKFQGRFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG   
ADWA11 2.4 輕鏈DNA序列 編碼VL之核酸殘基帶下劃線 編碼前導序列之核酸殘基呈小寫字母 4    atgggatggagctgtatcatcctcttcttggtagcaacagctacaggcgtgcactccGACATCCAGATGACCCAGTCCCCTTCCAGCCTGAGCGCTTCCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGTCCACCAAGTCCCTGTCCCACTTCAACGGCAACACCTACCTGTTCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGAGGCTGATCTACTACATGTCCTCCCTGGCCTCCGGAGTGCCCTCCAGGTTCTCCGGATCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGATTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTCCCTGGAGTACCCCTTCACCTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAA CGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT   
ADWA11 2.4 輕鏈DNA序列 編碼VL之核酸殘基帶下劃線 185 GACATCCAGATGACCCAGTCCCCTTCCAGCCTGAGCGCTTCCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGTCCACCAAGTCCCTGTCCCACTTCAACGGCAACACCTACCTGTTCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGAGGCTGATCTACTACATGTCCTCCCTGGCCTCCGGAGTGCCCTCCAGGTTCTCCGGATCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGATTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTCCCTGGAGTACCCCTTCACCTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAA CGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
ADWA11 2.4 VL DNA序列 186 GACATCCAGATGACCCAGTCCCCTTCCAGCCTGAGCGCTTCCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGTCCACCAAGTCCCTGTCCCACTTCAACGGCAACACCTACCTGTTCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGAGGCTGATCTACTACATGTCCTCCCTGGCCTCCGGAGTGCCCTCCAGGTTCTCCGGATCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGATTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTCCCTGGAGTACCCCTTCACCTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAA
ADWA11 2.4 輕鏈及重鏈前導DNA序列 187 ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGCGTGCACTCC
ADWA11 2.4 輕鏈及重鏈前導胺基酸序列 188 MGWSCIILFLVATATGVHS   
ADWA11 2.4 重鏈DNA序列(具有末端離胺酸) 編碼VH之核酸殘基帶下劃線 編碼前導序列之核酸殘基呈小寫字母 1    atgggatggagctgtatcatcctcttcttggtagcaacagctacaggcgtgcactccGAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGAGGAGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGAAGCCTGAGGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCAACATCAAGGACTACTACATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAGTGGGTGGGCTGGATCGACCCCGACCAGGGCAACACCATCTACGAGCCCAAGTTCCAGGGCAGGTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCAAGAACAGCGCCTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGCTGCTGATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACCGTCTCCTCA GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCCGGAAAA   
ADWA11 2.4 重鏈DNA序列(具有末端離胺酸) 編碼VH之核酸殘基帶下劃線 189 GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGAGGAGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGAAGCCTGAGGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCAACATCAAGGACTACTACATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAGTGGGTGGGCTGGATCGACCCCGACCAGGGCAACACCATCTACGAGCCCAAGTTCCAGGGCAGGTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCAAGAACAGCGCCTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGCTGCTGATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACCGTCTCCTCA GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCCGGAAAA
ADWA11 2.4 VH DNA序列 190 GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGAGGAGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGAAGCCTGAGGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCAACATCAAGGACTACTACATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAGTGGGTGGGCTGGATCGACCCCGACCAGGGCAACACCATCTACGAGCCCAAGTTCCAGGGCAGGTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCAAGAACAGCGCCTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGCTGCTGATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACCGTCTCCTCA
ADWA11 2.4 重鏈DNA序列 無末端離胺酸之核酸，編碼VH之殘基帶下劃線 編碼前導序列之核酸殘基呈小寫 183 atgggatggagctgtatcatcctcttcttggtagcaacagctacaggcgtgcactccGAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGAGGAGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGAAGCCTGAGGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCAACATCAAGGACTACTACATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAGTGGGTGGGCTGGATCGACCCCGACCAGGGCAACACCATCTACGAGCCCAAGTTCCAGGGCAGGTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCAAGAACAGCGCCTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGCTGCTGATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACCGTCTCCTCA GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCCGGA   
ADWA11 2.4 重鏈DNA序列 無末端離胺酸之核酸，編碼VH之殘基帶下劃線 191 GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGAGGAGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGAAGCCTGAGGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCAACATCAAGGACTACTACATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAGTGGGTGGGCTGGATCGACCCCGACCAGGGCAACACCATCTACGAGCCCAAGTTCCAGGGCAGGTTCACCATCAGCGCCGACACCAGCAAGAACAGCGCCTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGCTGCTGATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACCGTCTCCTCA GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCCGGA
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 VL胺基酸序列 根據Kabat，帶下劃線的胺基酸殘基為CDR序列 21 DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSTKSLLHFNGNTYLF WFLQRPGQSPQRLIYYMSNLAS GVPDRFSGRGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCMQSLEYPFT FGTGTKLEIK   
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 VH胺基酸序列 根據Kabat，帶下劃線的胺基酸殘基為CDR序列 20 EVQLQQSGAELVRPGAFVKLSCKASGFNIKDYYMN WVLQRPEQGLEWIGWIDPDNGNTIYDPKFQG KASITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTSVTVSS   
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Kabat，CDR-L1 25 RSTKSLLHFNGNTYLF
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Kabat，CDR-L2 26 YYMSNLAS
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Kabat，CDR-L3 27 MQSLEYPFT
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 替代 根據Kabat，替代CDR-L1 71 RSTKSLLHFNGNTYLF
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 替代 根據Kabat，替代CDR-L2 72 YYMSNLAS
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 替代 根據Kabat，替代CDR-L3 73 MQSLEYPFT
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Kabat，CDR-H1 22 DYYMN
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Kabat，CDR-H2 23 WIDPDNGNTIYDPKFQG
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Kabat，CDR-H3 24 RLLMDY
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Chothia，CDR-L1 31 STKSLLHFNGNTYL
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Chothia，CDR-L2 32 YYMSN
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Chothia，CDR-L3 33 QSLEYPFT
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 替代 根據Chothia，替代CDR-L1 74 STKSLLHFNGNTYL
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 替代 根據Chothia，替代CDR-L2 75 YYMSN
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 替代 根據Chothia，替代CDR-L3 76 QSLEYPFT
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Chothia，CDR-H1 28 GFNIKDYYMN
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Chothia，CDR-H2 29 WIDPDNGN
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 根據Chothia，CDR-H3 30 RLLMDY
ADWA11_VK01 (1) (在本文中亦稱為adwa_VL_1.1     L46R) VL胺基酸序列 47 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_1a (1) L29I VL胺基酸序列 48 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSILHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_1b (1) L30S VL胺基酸序列 49 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLSHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_1c (1) T36S VL胺基酸序列 50 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNSYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_2a (1) Y55A VL胺基酸序列 51 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYAMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_2b (1) M56A VL胺基酸序列 52 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYASNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_2c (1) N58S VL胺基酸序列 53 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSSLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_2d (1) A60Q VL胺基酸序列 54 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_3a (1) M94Q VL胺基酸序列 55 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_3b (1) L97Y VL胺基酸序列 56 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSYEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_3c (1) E98S VL胺基酸序列 57 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLSYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_3d (1) Y99T VL胺基酸序列 58 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLETPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_4a (1) F101L VL胺基酸序列 59 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPLT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_4b (1) F101W VL胺基酸序列 60 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPWT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_4c (1) Q105G VL胺基酸序列 61 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGGGTKVEIK    
ADWA11VK1 IGKV2-28 VL胺基酸序列 62 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSTKSLLHFNGNTYLF WYLQKPGQSPQLLIYYMSNLAS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11VK2 IGKV2-30 VL胺基酸序列 63 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSTKSLLHFNGNTYLF WFQQRPGQSPRRLIYYMSNLAS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11VK3 IGKV4-1 VL胺基酸序列 64 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGQPPKLLIYYMSNLAS GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11VK4 IGKV1-39 VL胺基酸序列 65 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKLLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11VK5 IGKV3-11 VL胺基酸序列 66 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGQAPRLLIYYMSNLAS GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11_VK01_2.1 VL胺基酸序列 67 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLSHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLEYPFT FGGGTKVEIK   
ADWA11_VK01_2.2 VL胺基酸序列 68 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLSHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSYEYPFT FGGGTKVEIK   
ADWA11_VK01_2.3 VL胺基酸序列 69 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLSHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKRLIYYASNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLEYPFT FGGGTKVEIK   
     
ADWA11VH1 IGHV1-46 VH胺基酸序列 34 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYYMN WVRQAPGQGLEWIGWIDPDNGNTIYDQKFQG RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH2 IGHV3-23 VH胺基酸序列 35 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWIGWIDPDNGNTIYDDSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH3 IGHV3-30 VH胺基酸序列 36 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWIGWIDPDNGNTIYDDSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH4 IGHV1-69 VH胺基酸序列 37 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDYYMN WVRQAPGQGLEWIGWIDPDNGNTIYDQKFQG RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH5 IGHV3-48 VH胺基酸序列 38 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWIGWIDPDNGNTIYDDSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11 VH05_VK1 (在本文中亦稱為adwa_VH_1.5     T28N + F29I + R72A + A49G + L79A + N74T + A75S) VH胺基酸序列 39 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDNGNTIYDPKFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH5 D61E VH胺基酸序列 40 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDNGNTIYEPKFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH5 N55Q VH胺基酸序列 41 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDQGNTIYDPKFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH5 N28Q VH胺基酸序列 42 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFQIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDQGNTIYDPKFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH5 K30A VH胺基酸序列 43 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIADYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDNGNTIYDPKFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH5 N57Q VH胺基酸序列 44 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDNGQTIYDPKFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH5 P62A VH胺基酸序列 45 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDNGNTIYDAKFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11VH5 K63A VH胺基酸序列    46 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDNGNTIYDPAFQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
例示性人類整合素子單元α-V (ITGAV)胺基酸序列 77 MLLGTLLLILYILMLCRMFLLVGAPKANTTQPGIVEGGQVLKCDWSSTRRCQPIEFDATGNRDYAKDDPLEFKSHQWFGASVRSKQDKILACAPLYHWRTEMKQEREPVGTCFLQDGTKTVEYAPCRSQDIDADGQGFCQGGFSIDFTKADRVLLGGPGSFYWQGQLISDQVAEIVSKYDPNVYSIKYNNQLATRTAQAIFDDSYLGYSVAVGDFNGDGIDDFVSGVPRAARTLGMVYIYDGKNMSSLYNFTGEQMAAYFGFSVAATDINGDDYADVFIGAPLFMDRGSDGKLQEVGQVSVSLQRASGDFQTTKLNGFEVFARFGSAIAPLGDLDQDGFNDIAIAAPYGGEDKKGIVYIFNGRSTGLNAVPSQILEGQWAARSMPPSFGYSMKGATDIDKNGYPDLIVGAFGVDRAILYRARPVITVNAGLEVYPSILNQDNKTCSLPGTALKVSCFNVRFCLKADGKGVLPRKLNFQVELLLDKLKQKGAIRRALFLYSRSPSHSKNMTISRGGLMQCEELIAYLRDESEFRDKLTPITIFMEYRLDYRTAADTTGLQPILNQFTPANISRQAHILLDCGEDNVCKPKLEVSVDSDQKKIYIGDDNPLTLIVKAQNQGEGAYEAELIVSIPLQADFIGVVRNNEALARLSCAFKTENQTRQVVCDLGNPMKAGTQLLAGLRFSVHQQSEMDTSVKFDLQIQSSNLFDKVSPVVSHKVDLAVLAAVEIRGVSSPDHIFLPIPNWEHKENPETEEDVGPVVQHIYELRNNGPSSFSKAMLHLQWPYKYNNNTLLYILHYDIDGPMNCTSDMEINPLRIKISSLQTTEKNDTVAGQGERDHLITKRDLALSEGDIHTLGCGVAQCLKIVCQVGRLDRGKSAILYVKSLLWTETFMNKENQNHSYSLKSSASFNVIEFPYKNLPIEDITNSTLVTTNVTWGIQPAPMPVPVWVIILAVLAGLLLLAVLVFVMYRMGFFKRVRPPQEEQEREQLQPHENGEGNSET   
例示性人類整合素子單元β 8 (ITGB8)胺基酸序列 78 MCGSALAFFTAAFVCLQNDRRGPASFLWAAWVFSLVLGLGQGEDNRCASSNAASCARCLALGPECGWCVQEDFISGGSRSERCDIVSNLISKGCSVDSIEYPSVHVIIPTENEINTQVTPGEVSIQLRPGAEANFMLKVHPLKKYPVDLYYLVDVSASMHNNIEKLNSVGNDLSRKMAFFSRDFRLGFGSYVDKTVSPYISIHPERIHNQCSDYNLDCMPPHGYIHVLSLTENITEFEKAVHRQKISGNIDTPEGGFDAMLQAAVCESHIGWRKEAKRLLLVMTDQTSHLALDSKLAGIVVPNDGNCHLKNNVYVKSTTMEHPSLGQLSEKLIDNNINVIFAVQGKQFHWYKDLLPLLPGTIAGEIESKAANLNNLVVEAYQKLISEVKVQVENQVQGIYFNITAICPDGSRKPGMEGCRNVTSNDEVLFNVTVTMKKCDVTGGKNYAIIKPIGFNETAKIHIHRNCSCQCEDNRGPKGKCVDETFLDSKCFQCDENKCHFDEDQFSSESCKSHKDQPVCSGRGVCVCGKCSCHKIKLGKVYGKYCEKDDFSCPYHHGNLCAGHGECEAGRCQCFSGWEGDRCQCPSAAAQHCVNSKGQVCSGRGTCVCGRCECTDPRSIGRFCEHCPTCYTACKENWNCMQCLHPHNLSQAILDQCKTSCALMEQQHYVDQTSECFSSPSYLRIFFIIFIVTFLIGLLKVLIIRQVILQWNSNKIKSSSDYRVSASKKDKLILQSVCTRAVTYRREKPEEIKMDISKLNAHETFRCNF   
例示性小鼠整合素子單元α-V (ITGAV)胺基酸序列 79 MAAPGRLLLRPRPGGLLLLLPGLLLPLADAFNLDVESPAEYAGPEGSYFGFAVDFFEPSTSSRMFLLVGAPKANTTQPGIVEGGQVLKCECSSSRRCQPIEFDSTGNRDYAKDDPLEFKSHQWFGASVRSKQDKILACAPLYHWRTEMKQEREPVGTCFLQDGTKTVEYAPCRSKNIDADGQGFCQGGFSIDFTKADRVLLGGPGSFYWQGQLISDQVAEIISKYDPNVYSIKYNNQLATRTAQAIFDDSYLGYSVAVGDFNGDGIEDFVSGVPRAARTLGMVYIYDGKNMSSLHNFTGEQMAAYFGFSVAATDINGDDYADVFIGAPLFMDRGSDGKLQEVGQVSVSLQRAVGDFQTTKLNGFEVFARFGSAIAPLGDLDQDGFNDIAIAAPYGGEDKKGLVYIFNGRSTGLNSVPSQILEGQWAAQSMPPSFGYSMKGATDVDRNGYPDLVVGAFGVDRAVLYRARPVVTVNAGLEVYPSILNQDNKICPLPGTALKVSCFNVRFCLKADGKGTLPRKLHFQVELLLDKLKQKGAIRRALFLHNRSPVHSKTMTVFRGGQMQCEELVAYLRDESEFRDKLTPITIFMEYRLDQRTAADATGLQPILNQFTPANVSRQAHILLDCGEDNVCKPKLEVSVNSDQKKIYIGDDNPLTLTVKAQNQGEGAYEAELIVSIPPQADFIGVVRNNEALARLSCAFKTENQTRQVVCDLGNPMKAGTQLLAGLRFSVHQQSEMDTSVKFDLKIQSSNSFDNVSPVVSYKVDLAVLAAVEIRGVSSPDHIFLPIPNWEYKENPETEEDVGPIVQHIYELRNNGPSSFSKAILNLQWPYKYNNNTLLYILHYDIDGPMNCTADTEINPLRIKTPEKNDTAAAGQGERNHLITKRDLTLREGDVHTLGCGIAKCLQITCQVGRLDRGKSAILYVKSLLWTETFMNKENQNHSYSLKSSASFNIIEFPYKNLPIEDLFNSTLVTTNITWGIQPAPMPVPVWVIILAVLAGLLLLAVLVFVMYRMGFFKRVRPPQEEQEREQLQPHENGEGNSET   
例示性小鼠整合素子單元β 8 (ITGB8)胺基酸序列 80 MCGSALAFLTAALLSLHNCQRGPALVLGAAWVFSLVLGLGQSEHNRCGSANVVSCARCLQLGPECGWCVQEDFVSGGSGSERCDTVSSLISKGCPVDSIEYLSVHVVTSSENEINTQVTPGEVSVQLHPGAEANFMLKVRPLKKYPVDLYYLVDVSASMHNNIEKLNSVGNDLSKKMALYSRDFRLGFGSYVDKTVSPYISIHPERIHNQCSDYNLDCMPPHGYIHVLSLTENITEFEKAVHRQKISGNIDTPEGGFDAMLQAAVCESHIGWRKEAKRLLLVMTDQTSHLALDSKLAGIVVPNDGNCHLKNNVYVKSTTMEHPSLGQLSEKLIDNNINVIFAVQGKQFHWYKDLLPLLPGAIAGEIESKAANLNNLVVEAYKKIISEVKVQLENQVHGVHFNITAICPDGARKPGISGCGNVTSNDEVLFNVTVVMKTCDIMGGKNYAIIKPIGFNETTKVHIHRSCSCQCENHRGLKGQCAEAAPDPKCPQCDDSRCHFDEDQFPSETCKPQEDQPVCSGRGVCICGKCLCHKTKLGRVYGQYCEKDDFSCPYLHGDVCAGHGECEGGRCQCFSGWEGDRCQCPSASAQHCVNSKGQVCSGRGTCVCGRCECTDPRSIGRLCEHCPTCHLSCSENWNCLQCLHPHNLSQAALDQCKSSCAVMEQHRMDQTSECLSGPSYLRIFFIIFIVTFLIGLLKVLIIRQVILQWNNNKIKSSSDYRMSASKKDKLILQSVCTRAVTYRREKPEEIKMDISKLNAQEAFRCNF   
例示性食蟹獼猴整合素子單元α-V (ITGAV)胺基酸序列 84 MASPPRRRLRLGPRGLPLLLSGLLLPLCRAFNLDVDSPAEYSGPEGSYFGFAVDFFVPSASSRMFLLVGAPKANTTQPGIVEGGQVLKCDWSSTRRCQPIEFDATGNRDYAKDDPLEFKSHQWFGASVRSKQDKILACAPLYHWRTELKQEREPVGTCFLQDGTKTVEYAPCRSQDIDADGQGFCQGGFSIDFTKADRVLLGGPGSFYWQGQLISDQVAEIVSKYDPNVYSIKYNNQLATRTAQAIFDDSYLGYSVAVGDFNGDGIDDFVSGVPRAARTLGMVYIYDGKNMSSIYNFTGDQMAAYFGFSVAATDINGDDYADVFIGAPLFMDRGSDGKLQEVGQVSVSLQRASGDFQTTKLNGFEVFARFGSAIAPLGDLDQDGFNDIAIAAPYGGEDKKGIVYIFNGRSTGLNAVPSQILEGQWAARSMPPSFGYSMKGATDIDKNGYPDLIVGAFGVDRAILYRARPVITVNAGLEVYPSILNQDNKTCSLPGTALKVSCFNVRFCLKADGKGVLPRKLNFQVELLLDKLKQKGAIRRALFLYSRSPSHSKNMTISRGGLMQCEELIAYLRDESEFRDKLTPITIFMEYWLDYRTAADTTGLQPILNQFTPANISRQAHILLDCGEDNVCKPKLEVFVDSDQKKIYIGDDNPLTLIVKAQNQGEGAYEAELIVSIPLQADFIGVVRNSEALARLSCAFKTENQTRQVVCDLGNPMKAGTQLLAGLRFSVHQQSEMDTSVKFDLQIQSSNLFDKVSPVVSHKVDLAVLAAVEIRGVSSPDHIFLPIPNWEHKENPETEEDVGPVVQHIYELRNNGPSSFSKAMLHLQWPYKYNNNTLLYILHYDIDGPMNCTSDMEINPLRIKISSLQATEKNDTVAGQGERDHLITKRDLALSEGDIHTLGCGVAQCLKIVCQVGRLDRGKSAILYVKSLLWTETFMNKENQNHSYSLKSSASFNVIEFPYKNLPIEDITNSTLVTTNVTWGIQPAPMPVPVWVIILAVLAGLLLLAVLVFVMYRMGFFKRVRPPQEEQEREQLQPHENGEGNSET   
例示性食蟹獼猴整合素子單元β 8 (ITGB8)胺基酸序列 85 MCGSALAFFTAAFVCLQNDRRGPASFLWAAWVLSLVLGLGQGEDNICASSNAASCARCLALGPECGWCVQEDFISGGSRSERCDIVSNLISKGCSVDSIEYPSVHVIIPTENEINTQVTPGEVSIQLRPGAEANFMLKIHPLKKYPVDLYYLVDVSASMHNNIEKLNSVGNDLSRKMAFFSRDFRLGFGSYVDKTVSPYISIHPERIHNQCSDYNLDCMPPHGYIHVLSLTENITEFEKAVHRQKISGNIDTPEGGFDAMLQAAVCESHIGWRKEAKRLLLVMTDQTSHLALDSKLAGIVVPNDGNCHLKNNVYVKSTTMEHPSLGQLSEKLIDNNINVIFAVQGKQFHWYKDLLPLLPGTIAGEIESKAANLNNLVVEAYQKLISEVKVHVENQVQGVYFNITAICPDGSRKPGMEGCRNVTSNHEVLFNVTVTMKKCDVTGGKNYAIIKPIGFNETAKIHIHRNCSCQCEDNRGPKGKCVDETFLDSKCFQCDENKCHFDEDQFSSESCKSHKDQPVCSGRGVCVCGKCSCHKIKLGKVYGKYCEKDDFSCPYHHGNLCAGHGECEAGRCQCFSGWEGDRCQCPSAAAQHCVNSKGQVCSGRGTCVCGRCECTDPRSIGRFCEHCPTCHTACKENWNCVQCLHPHNLSQAILDQCKTSCALMEQQHYVDQTSECFSSPSYLRIFFIIFIVTFLIGLLKVLIIRQVILQWNSNKIKSSSDYRVSASKKDKLILQSVCTRAVTYRREKPEEIKMDISKLNAHETFRCNF   
例示性人類野生型IgG1 Fc (包括CH 1及鉸鏈、CH 2及CH 3之一部分) 野生型LLGG效應功能序列以斜體指示 NST Asn297 N連接之糖基化位點 81 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG   
例示性人類IgG1恆定區 野生型LLGG效應功能序列以斜體指示 NST Asn297 N連接之糖基化位點 包括末端離胺酸 82 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK   
例示性人類無效應IgG1恆定區 184 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG   
例示性人類無效應IgG1恆定區核酸序列 192 GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCCGGA
例示性人類無效應IgG1恆定區 (具有末端離胺酸) 181 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK   
例示性人類無效應IgG1恆定區核酸序列(具有末端離胺酸) 193 GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCCGGAAAA
例示性人類 IgG2恆定區 70 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK   
例示性人類κ輕鏈恆定區(Cκ) 83 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC   
例示性人類κ輕鏈恆定區(Cκ)核酸序列 194 CGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
例示性鼠類IgG1重鏈恆定區 86 AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPPVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKAFACAVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK   
例示性鼠類輕鏈恆定區 87 RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC   
adwa_VH_1.1     T28N + F29I 88 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFniKDYYMN WVRQAPGKGLEWVAWIDPDNGNTIYDPKFQG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
adwa_VH_1.2     T28N + F29I + R72A 89 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFniKDYYMN WVRQAPGKGLEWVAWIDPDNGNTIYDPKFQG RFTISaDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
adwa_VH_1.3     T28N + F29I + R72A + A49G + L79A 90 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFniKDYYMN WVRQAPGKGLEWVgWIDPDNGNTIYDPKFQG RFTISaDNAKNSaYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
adwa_VH_1.4     T28N + F29I + R72A + N74T + A75S 91 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFniKDYYMN WVRQAPGKGLEWVAWIDPDNGNTIYDPKFQG RFTISaDtsKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
adwa_VL_1.2     L46R + Y36F 92 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WfQQKPGKAPKrLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
VH05-2(F64V) VK01 93 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWVGWIDPDQGNTIYEPKVQG RFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
5662_01 94 EPKFQGRFTISADTS
5662_02 95 TAVYYCARRLLMDYW
5662_03 96 TAVYYSARRLLXDYW
5662_04 97 KSLLHFNGNTYLFWY
5662_05 98 PKRLIYYMSNLASGV
5662_06 99 PKRLIYYXSNLASGV
5662_07 100 LIYYMSNLASGVPSR
5662_08 101 LIYYXSNLASGVPSR
5662_09 102 FATYYCMQSLEYPFT
5662_10 103 FATYYSXQSLEYPFT
5662_11 104 EYPFTFGQGTKVEIK
5662_12 105 EPKVQGRFTISADTS
5662_13 106 KSLSHFNGNTYLFWY
5662_14 107 FATYYCQQSLEYPFT
5662_15 108 FATYYSQQSLEYPFT
5662_16 109 FATYYCMQSYEYPFT
5662_17 110 FATYYSXQSYEYPFT
5662_18 111 EYPFTFGGGTKVEIK
5662_19 112 KRLIYYASNLASGVP
5662_20 113 KRLIYYMSSLASGVP
5662_21 114 KRLIYYXSSLASGVP
5662_22 115 QGDSLRTYYASWYQQ
5662_23 116 VLVIYGKHKRPSGIP
5662_24 117 EADYYCMSRSIWGNP
5662_25 118 EADYYSXSRSIWGNP
5662_26 119 SETLSLTCAVSGYST
5662_27 120 GLEWIGSISHTGNTY
5662_28 121 NPPLKSRVTISVDTS
5662_29 122 DTAVVYCARGGGISR
ADWA 11 VK01 123 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLFWYQQKPGKAPKRLIYYMSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC   
ADWA11 VH05 124 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMNWVRQAPGKGLEWVGWIDPDNGNTIYDPKFQGRFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK   
無末端離胺酸殘基之ADWA11 VH05 182 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMNWVRQAPGKGLEWVGWIDPDNGNTIYDPKFQGRFTISADTSKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG   
野生型人類IgG1鉸鏈 125 EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP
無效應(3m，三突變)變異人類IgG1鉸鏈 126 EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAP
IGHV3-07 (DP-54)重鏈生殖系 127 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR   
IGKV1-39 (DPK-9)輕鏈生殖系 128 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTP   
來源於A型流感紅血球凝集素之合成肽HA 129 PKYVKQNTLKLAT
來自破傷風類毒素之TET 830修飾/輔助T細胞抗原決定基 130 AQYIKANSKFIGITEL
IMGT -重鏈 195 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYWMSWVRQA PGKGLEWVAN IKQDGSEKYY VDSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR
IMGT -輕鏈 196 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSIS ----S—YLNW YQQKPGKAPK LLIYAASSLQ SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCQQSYSTP
*在一些肽中，甲硫胺酸經正白胺酸置換。表 14 ： 根據 Kabat 之例示性重鏈 CDR
VH (SEQ ID NO) CDR-H1 (SEQ ID NO) CDR-H2 (SEQ ID NO) CDR-H3 (SEQ ID NO)
小鼠ADWA-11 VH (SEQ ID NO: 20) DYYMN (SEQ ID NO: 22) WIDPDNGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 23) RLLMDY (SEQ ID NO: 24)
ADWA11 2.4 VH (SEQ ID NO: 6) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDQGNTIYEPKFQG (SEQ ID NO: 9) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH1 IGHV1-46 (SEQ ID NO: 34) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDQKFQG (SEQ ID NO: 157) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH2 IGHV3-23 (SEQ ID NO: 35) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDDSVKG (SEQ ID NO: 158) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH3 IGHV3-30 (SEQ ID NO: 36) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDDSVKG (SEQ ID NO: 158) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH4 IGHV1-69 (SEQ ID NO: 37) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDQKFQG (SEQ ID NO: 157) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH5 IGHV3-48 (SEQ ID NO: 38) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDDSVKG (SEQ ID NO: 158) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11 VH05_VK1 (在本文中亦稱為adwa_VH_1.5     T28N + F29I + R72A + A49G + L79A + N74T + A75S) (SEQ ID NO: 39) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 23) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH5 D61E (SEQ ID NO: 40) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYEPKFQG (SEQ ID NO: 160) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH5 N55Q (SEQ ID NO: 41) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDQGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 161) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH5 N28Q (SEQ ID NO: 42) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDQGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 161) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH5 K30A (SEQ ID NO: 43) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 23) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH5 N57Q (SEQ ID NO: 44) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGQTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 162) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH5 P62A (SEQ ID NO: 45) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDAKFQG (SEQ ID NO: 163) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
ADWA11VH5 K63A (SEQ ID NO: 46) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDPAFQG (SEQ ID NO: 165) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
adwa_VH_1.1     T28N + F29I (SEQ ID NO: 88) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 23) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
adwa_VH_1.2     T28N + F29I + R72A (SEQ ID NO: 89) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 23) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
adwa_VH_1.3     T28N + F29I + R72A + A49G + L79A (SEQ ID NO: 90) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 23) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
adwa_VH_1.4     T28N + F29I + R72A + N74T + A75S (SEQ ID NO: 91) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDNGNTIYDPKFQG (SEQ ID NO: 23) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
VH05-2(F64V) VK01 (SEQ ID NO: 93) DYYMN (SEQ ID NO: 8) WIDPDQGNTIYEPKVQG (SEQ ID NO: 166) RLLMDY (SEQ ID NO: 10)
表 15 ： 根據 Kabat 之例示性輕鏈 CDR
VL (SEQ ID NO) CDR-L1 (SEQ ID NO) CDR-L2 (SEQ ID NO) CDR-L3 (SEQ ID NO)
小鼠ADWA-11 VL (SEQ ID NO: 21) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11 2.4 (SEQ ID NO: 7) RSTKSLSHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 11) YYMSSLAS (SEQ ID NO: 12) QQSLEYPFT (SEQ ID NO: 13)
ADWA11_VK01 (1) (在本文中亦稱為adwa_VL_1.1     L46R) (SEQ ID NO: 47) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_1a (1) L29I (SEQ ID NO: 48) RSTKSILHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 138) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_1b (1) L30S (SEQ ID NO: 49) RSTKSLSHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 11) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_1c (1) T36S (SEQ ID NO: 50) RSTKSLLHFNGNSYLF (SEQ ID NO: 140) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_2a (1) Y55A (SEQ ID NO: 51) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YAMSNLAS (SEQ ID NO: 142) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_2b (1) M56A (SEQ ID NO: 52) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYASNLAS (SEQ ID NO: 144) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_2c (1) N58S (SEQ ID NO: 53) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSSLAS (SEQ ID NO: 12) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_2d (1) A60Q (SEQ ID NO: 54) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLQS (SEQ ID NO: 146) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_3a (1) M94Q (SEQ ID NO: 55) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) QQSLEYPFT (SEQ ID NO: 13)
ADWA11_VK01_3b (1) L97Y (SEQ ID NO: 56) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSYEYPFT (SEQ ID NO: 147)
ADWA11_VK01_3c (1) E98S (SEQ ID NO: 57) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLSYPFT (SEQ ID NO: 149)
ADWA11_VK01_3d (1) Y99T (SEQ ID NO: 58) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLETPFT (SEQ ID NO: 151)
ADWA11_VK01_4a (1) F101L (SEQ ID NO: 59) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPLT (SEQ ID NO: 153)
ADWA11_VK01_4b (1) F101W (SEQ ID NO: 60) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPWT (SEQ ID NO: 155)
ADWA11_VK01_4c (1) Q105G (SEQ ID NO: 61) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11VK1 IGKV2-28 (SEQ ID NO: 62) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11VK2 IGKV2-30 (SEQ ID NO: 63) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11VK3 IGKV4-1 (SEQ ID NO: 64) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11VK4 IGKV1-39 (SEQ ID NO: 65) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11VK5 IGKV3-11 (SEQ ID NO: 66) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
ADWA11_VK01_2.1 (SEQ ID NO: 67) RSTKSLSHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 11) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) QQSLEYPFT (SEQ ID NO: 13)
ADWA11_VK01_2.2 (SEQ ID NO: 68) RSTKSLSHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 11) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSYEYPFT (SEQ ID NO: 147)
ADWA11_VK01_2.3 (SEQ ID NO: 69) RSTKSLSHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 11) YYASNLAS (SEQ ID NO: 144) QQSLEYPFT (SEQ ID NO: 13)
adwa_VL_1.2     L46R + Y36F (SEQ ID NO: 92) RSTKSLLHFNGNTYLF (SEQ ID NO: 25) YYMSNLAS (SEQ ID NO: 26) MQSLEYPFT (SEQ ID NO: 27)
表 16 ： 根據 Chothia 之例示性重鏈 CDR
VH (SEQ ID NO) CDR-H1 (SEQ ID NO) CDR-H2 (SEQ ID NO) CDR-H3 (SEQ ID NO)
小鼠ADWA-11 VH (SEQ ID NO: 20) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 28) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 30)
ADWA11 2.4 VH (SEQ ID NO: 6) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDQGN (SEQ ID NO: 15) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH1 IGHV1-46 (SEQ ID NO: 34) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH2 IGHV3-23 (SEQ ID NO: 35) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH3 IGHV3-30 (SEQ ID NO: 36) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH4 IGHV1-69 (SEQ ID NO: 37) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH5 IGHV3-48 (SEQ ID NO: 38) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11 VH05_VK1 (在本文中亦稱為adwa_VH_1.5     T28N + F29I + R72A + A49G + L79A + N74T + A75S) (SEQ ID NO: 39) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH5 D61E (SEQ ID NO: 40) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH5 N55Q (SEQ ID NO: 41) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDQGN (SEQ ID NO: 15) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH5 N28Q (SEQ ID NO: 42) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDQGN (SEQ ID NO: 15) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH5 K30A (SEQ ID NO: 43) GFNIADYYMN (SEQ ID NO: 159) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH5 N57Q (SEQ ID NO: 44) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGQ (SEQ ID NO: 164) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH5 P62A (SEQ ID NO: 45) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
ADWA11VH5 K63A (SEQ ID NO: 46) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
adwa_VH_1.1     T28N + F29I (SEQ ID NO: 88) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
adwa_VH_1.2     T28N + F29I + R72A (SEQ ID NO: 89) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
adwa_VH_1.3     T28N + F29I + R72A + A49G + L79A (SEQ ID NO: 90) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
adwa_VH_1.4     T28N + F29I + R72A + N74T + A75S (SEQ ID NO: 91) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDNGN (SEQ ID NO: 29) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
VH05-2(F64V) VK01 (SEQ ID NO: 93) GFNIKDYYMN (SEQ ID NO: 14) WIDPDQGN (SEQ ID NO: 15) RLLMDY (SEQ ID NO: 16)
表 17 ： 根據 Chothia 之例示性輕鏈 CDR
VL (SEQ ID NO) CDR-L1 (SEQ ID NO) CDR-L2 (SEQ ID NO) CDR-L3 (SEQ ID NO)
小鼠ADWA-11 VL (SEQ ID NO: 21) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 33)
ADWA11 2.4 (SEQ ID NO: 7) STKSLSHFNGNTYL (SEQ ID NO: 17) YYMSS (SEQ ID NO: 18) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01 (1) (在本文中亦稱為adwa_VL_1.1     L46R) (47) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_1a (1) L29I (SEQ ID NO: 48) STKSILHFNGNTYL (SEQ ID NO: 139) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_1b (1) L30S (SEQ ID NO: 49) STKSLSHFNGNTYL (SEQ ID NO: 17) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_1c (1) T36S (SEQ ID NO: 50) STKSLLHFNGNSYL (SEQ ID NO: 141) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_2a (1) Y55A (SEQ ID NO: 51) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YAMSN (SEQ ID NO: 143) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_2b (1) M56A (SEQ ID NO: 52) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYASN (SEQ ID NO: 145) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_2c (1) N58S (SEQ ID NO: 53) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSS (SEQ ID NO: 18) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_2d (1) A60Q (SEQ ID NO: 54) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_3a (1) M94Q (SEQ ID NO: 55) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_3b (1) L97Y (SEQ ID NO: 56) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSYEYPFT (SEQ ID NO: 148)
ADWA11_VK01_3c (1) E98S (SEQ ID NO: 57) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLSYPFT (SEQ ID NO: 150)
ADWA11_VK01_3d (1) Y99T (SEQ ID NO: 58) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLETPFT (SEQ ID NO: 152)
ADWA11_VK01_4a (1) F101L (SEQ ID NO: 59) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPLT (SEQ ID NO: 154)
ADWA11_VK01_4b (1) F101W (SEQ ID NO: 60) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPWT (SEQ ID NO: 156)
ADWA11_VK01_4c (1) Q105G (SEQ ID NO: 61) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11VK1 IGKV2-28 (SEQ ID NO: 62) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11VK2 IGKV2-30 (SEQ ID NO: 63) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11VK3 IGKV4-1 (SEQ ID NO: 64) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11VK4 IGKV1-39 (SEQ ID NO: 65) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11VK5 IGKV3-11 (SEQ ID NO: 66) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_2.1 (SEQ ID NO: 67) STKSLSHFNGNTYL (SEQ ID NO: 17) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
ADWA11_VK01_2.2 (SEQ ID NO: 68) STKSLSHFNGNTYL (SEQ ID NO: 17) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSYEYPFT (SEQ ID NO: 148)
ADWA11_VK01_2.3 (SEQ ID NO: 69) STKSLSHFNGNTYL (SEQ ID NO: 17) YYASN (SEQ ID NO: 145) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
adwa_VL_1.2     L46R + Y36F (SEQ ID NO: 92) STKSLLHFNGNTYL (SEQ ID NO: 31) YYMSN (SEQ ID NO: 32) QSLEYPFT (SEQ ID NO: 19)
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 11-13、17-19、25-27、31-33或71-76中之至少一者之胺基酸序列中所闡述的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO: 8-10、14-16、22-24或28-30中之至少一者之胺基酸序列中所闡述的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 7之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 6之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 7之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 20之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 7之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 34-46、88-91或93中之任一者之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 21之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 6之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 47-69或92中之任一者之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 6之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 5之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 2之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 5之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 3之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 5之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 124或SEQ ID NO: 182之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 123之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 124或SEQ ID NO: 182之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如SEQ ID NO: 123之胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3及如SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如由ATCC寄存、具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列編碼的胺基酸序列中所闡述之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含如由ATCC寄存、具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列編碼的胺基酸序列中所闡述之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含由ATCC寄存、具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列編碼的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3胺基酸序列，及由ATCC寄存、具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列編碼的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3胺基酸序列。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含由ATCC寄存、具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列編碼的胺基酸序列。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含由ATCC寄存、具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列編碼的胺基酸序列。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之CDR-L1、含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-L2、含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-L3、含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之CDR-H1、含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之CDR-H2及含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含含SEQ ID NO:17之胺基酸序列之CDR-L1、含SEQ ID NO:18之胺基酸序列之CDR-L2、含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-L3、含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-H1、含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-H2及含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-H3。
在一些態樣中，抗體或其抗原結合片段可包含VH，其包含與SEQ ID NO: 6、34-46、88-91及93 (例如，SEQ ID NO: 6)中之任一者之胺基酸序列至少90%一致的胺基酸序列。VH可包含與SEQ ID NO: 6、34-46、88-91及93 (例如，SEQ ID NO: 6)中之任一者之胺基酸序列至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。VH可包含SEQ ID NO: 6、34-46、88-91及93 (例如，SEQ ID NO: 6)中之任一者之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體或其抗原結合片段可包含VH，其包含與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列至少90%一致之胺基酸序列。VH可包含與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。VH可包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含VH，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含由SEQ ID NO: 6之胺基酸序列組成之VH。
在一些態樣中，抗體或其抗原結合片段可包含VL，其包含與SEQ ID NO: 7、47-69及92 (例如，SEQ ID NO: 7)中之任一者之胺基酸序列至少90%一致的胺基酸序列。VL可包含與SEQ ID NO: 7、47-69及92 (例如，SEQ ID NO: 7)中之任一者之胺基酸序列至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。VL可包含SEQ ID NO: 7、47-69及92 (例如，SEQ ID NO: 7)中之任一者之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體或其抗原結合片段可包含VL，其包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列至少90%一致之胺基酸序列。VL可包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。VL可包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含VL，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含由SEQ ID NO: 7之胺基酸序列組成之VL。
在一些態樣中，抗體或其抗原結合片段可包含重鏈，其包含含SEQ ID NO: 6、34-46、88-91及93 (例如，SEQ ID NO: 6)中之任一者之胺基酸序列之VH，且其進一步包含IgG1恆定域(例如，包含SEQ ID NO: 81、82、181或184中之任一者之胺基酸序列之IgG1恆定域)。在一些態樣中，抗體或抗原結合片段變異體包含對全長重鏈之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守或非保守取代及/或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個添加及/或刪除。在另一態樣中，變異體與全長重鏈共用至少65%、至少75%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性，且其中該抗體或抗原結合片段特異性結合αvβ8整合素。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含重鏈且進一步包含IgG1恆定域，該重鏈包含含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VH，該IgG1恆定域包含SEQ ID NO: 181或SEQ ID NO: 184之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含由SEQ ID NO: 6之胺基酸序列組成之VH，且進一步包含由SEQ ID NO: 181或SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之IgG1恆定域。在一些實施例中，該抗體缺乏效應功能。在又其他實施例中，該抗體分子具有重鏈恆定區，該重鏈恆定區選自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD及IgE之重鏈恆定區；特定而言，選自例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之(例如人類)重鏈恆定區。在另一個實施例中，該抗體分子具有輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區選自例如κ (例如，由SEQ ID NO: 83之胺基酸序列編碼)或λ之(例如人類)輕鏈恆定區。恆定區可變化，例如突變以改變抗體之特性(例如，以增加或減少以下中之一或多者：Fc受體結合、抗體糖基化、半胱胺酸殘基之數目、效應細胞功能及/或補體功能)。在一個實施例中，該抗體具有：效應功能；且可以固定補體。在其他實施例中，該抗體不募集效應細胞或固定補體。在另一實施例中，抗體結合Fc受體之能力降低或無結合Fc受體之能力。舉例而言，其為不支持結合至Fc受體之同型或次型、片段或其他突變，例如其具有誘變或刪除之Fc受體結合區。
用於改變抗體恆定區之方法為此項技術中已知的。具有變化的功能，例如，效應配位體(諸如細胞上之FcR或補體之C1組分)之變化的親和力之抗體可藉由用不同殘基置換抗體之恆定部分中之至少一個胺基酸殘基來產生(參見例如EP 388151 A1、美國專利第5,624,821號及美國專利第5,648,260號，該等文獻中之所有之內容以引用之方式併入本文中)。可描述若應用於鼠類或其他物種則免疫球蛋白會降低或消除此等功能的類似變化類型。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，且進一步包含κ恆定域，該輕鏈包含含SEQ ID NO: 7、47-69及92 (例如，SEQ ID NO: 7)中之任一者之胺基酸序列，該κ恆定域包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，且進一步包含κ恆定域，該輕鏈包含由SEQ ID NO: 7之胺基酸序列組成之VL，該κ恆定域由SEQ ID NO: 83之胺基酸序列組成。
在一些態樣中，抗體或其抗原結合片段包含重鏈(HC)，該HC包含與SEQ ID NO: 2之胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含HC，該HC包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含由SEQ ID NO: 2之胺基酸序列組成之HC。在一些實施例中，該抗體缺乏效應功能。
在一些態樣中，抗體或其抗原結合片段包含重鏈(HC)，該HC包含與SEQ ID NO: 3之胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含HC，該HC包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含由SEQ ID NO: 3之胺基酸序列組成之HC。在一些實施例中，該抗體缺乏效應功能。在一些態樣中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈(LC)，該LC包含與SEQ ID NO: 5至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含LC，該LC包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含LC，該LC由SEQ ID NO: 5之胺基酸序列組成。在一些實施例中，該抗體缺乏效應功能。生殖系取代
在某些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包含以下重鏈CDR序列：(i)包含SEQ ID NO:22之CDR-H1、包含SEQ ID NO:23之CDR-H2及包含SEQ ID NO:24之CDR-H3；及/或(ii)以下輕鏈CDR序列：包含SEQ ID NO:25或71之CDR-L1、包含SEQ ID NO:26或72之CDR-L2及包含SEQ ID NO:27或73之CDR-L3。在某些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包含以下重鏈CDR序列：(i)包含SEQ ID NO:28之CDR-H1、包含SEQ ID NO:29之CDR-H2及包含SEQ ID NO:30之CDR-H3；及/或(ii)以下輕鏈CDR序列：包含SEQ ID NO:31或74之CDR-L1、包含SEQ ID NO:32或75之CDR-L2及包含SEQ ID NO:33或76之CDR-L3。此等係小鼠CDR且較佳地經接枝或在人類VH及VL域之情況下以其他方式添加。各種受體人類生殖系序列係可用的且用於「人類化」用於人類中之非人類物種抗體的製程將在此項技術中熟知的且亦在本文中其他地方論述。因此，熟習此項技術者將理解，以上小鼠CDR序列可在人類V域胺基酸序列之情況下置放。藉此，一般使受體人類生殖系序列發生變化以保存抗體結合及原始親本(亦即供體)抗體之其他所要特徵。CDR及構架區(FW)兩者可如下經工程改造。
在某些實施例中，相對於SEQ ID NO: 25、31、71或74，在CDR-L1中進行不超過11個、或不超過10個、不超過9個、不超過8個、不超過7個、不超過6個、不超過5個、不超過4個、不超過3個、不超過2個、或不超過1個取代。在某些實施例中，相對於SEQ ID NO: 26、32、72或75之胺基酸序列，在CDR-L2中進行不超過6個、不超過5個、不超過4個、不超過3個、不超過3個、不超過2個或不超過一個取代。在某些實施例中，相對於SEQ ID NO: 27、33、73、76之胺基酸序列，在CDR-L3中進行不超過8個、不超過7個、不超過6個、不超過5個、不超過4個、不超過3個、不超過3個、不超過2個或不超過一個取代。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 22或28之胺基酸序列，在CDR-H1中進行不超過10個、不超過9個、不超過8個、不超過7個、不超過6個、不超過5個、不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個取代。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 23或29之胺基酸序列，在CDR-H2中進行不超過17個、不超過16個、不超過15個、不超過14個、不超過13個、不超過12個、不超過11個、或不超過10個、不超過9個、不超過8個、不超過7個、不超過6個、不超過5個、不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個取代。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 24或30之胺基酸序列，在CDR-H3中進行不超過12個、不超過11個、或不超過10個、不超過9個、不超過8個、不超過7個、不超過6個、不超過5個、不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個取代。在某些實施例中，取代不將結合親和力(KD )值改變超過1000倍、超過100倍或10倍。在某些實施例中，取代為根據表1之保守取代。
在某些實施例中，如例如美國專利申請公開案第2017/0073395號及Townsend等人, 2015, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 112(50):15354-15359)中所述，取代為人類生殖系取代，其中(供體) CDR殘基經相應人類生殖系(受體)殘基置換，以提高人類胺基酸含量且可能減少抗體之免疫原性。
用於將人類生殖系殘基引入抗體CDR之方法及文庫詳細描述於美國專利申請公開案第2017/0073395號及Townsend等人, 2015, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 112(50):15354-15359中，且兩者以全文引用之方式併入本文中。
該抗體或其抗原結合片段可包含VH構架，該VH構架包含人類生殖系VH構架序列。VH構架序列可來自人類VH3生殖系、VH1生殖系、VH5生殖系或VH4生殖系。較佳的人類生殖系重鏈構架係衍生自VH1、VH3或VH5生殖系之構架。舉例而言，可使用來自以下生殖系之VH構架：IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48 (生殖系名稱係基於IMGT生殖系定義)。較佳的人類生殖系輕鏈構架係衍生自VK或Vλ生殖系之構架。舉例而言，可使用來自以下生殖系之VL構架：IGKV1-39、IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11 (生殖系名稱係基於IMGT生殖系定義)。可替代地或另外，構架序列可為人類生殖系共同構架序列，諸如以下各者之構架：人類Vλ1共同序列、VK1共同序列、VK2共同序列、VK3共同序列、VH3生殖系共同序列、VH1生殖系共同序列、VH5生殖系共同序列、或VH4生殖系共同序列。人類生殖系構架之序列可獲自各種公眾資料庫，諸如V-base、IMGT、NCBI或Abysis。
該抗體或其抗原結合片段可包含VL構架，該VL構架包含人類生殖系VL構架序列。VL構架可包含一或多個胺基酸取代、添加或刪除，同時仍保留與衍生該VL構架之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VL構架與人類生殖系VL構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含VL構架，該VL構架相對於人類生殖系VL構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或刪除。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9 或10個胺基酸取代、添加或刪除僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VL的類似性。
人類生殖系VL構架可為DPK9 (IMGT名稱：IGKV1-39，例如SEQ ID NO:128)之構架。人類生殖系VL構架可為IGKV2-28之構架。人類生殖系VL構架可為DPK18 (IMGT名稱：IGKV2-30)之構架。人類生殖系VL構架可為DPK24 (IMGT名稱：IGKV4-1)之構架。人類生殖系VL構架可為HK102_V1 (IMGT名稱：IGKV1-5)之構架。人類生殖系VL構架可為Vg_38K (IMGT名稱：IGKV3-11)之構架。人類生殖系VL構架可為人類Vλ共同序列之構架。人類生殖系VL構架可為人類Vλ1共同序列之構架。人類生殖系VL構架可為人類Vλ3共同序列之構架。人類生殖系VL構架可為人類VK共同序列之構架。人類生殖系VL構架可為人類VK1共同序列之構架。人類生殖系VL構架可為人類VK2共同序列之構架。人類生殖系VL構架可為人類VK3共同序列之構架。
在一些態樣中，VL構架為DPK9 (SEQ ID NO: 128)。亦預測其他類似構架區遞送本發明之有利抗體，該等抗體包含SEQ ID NO: 11-13及17-19之CDR；及由以下VL胺基酸序列指定之CDR：7、47-69及92，包括例如IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11，其可包含分別與DPK-9之FW區99、97、97、96、80、76、66、97、97、96、76及74%之一致性，及一個或更少個共同結構特點(Kabat編號)之胺基酸差異(A) CDR (游標區)正下方之殘基L2、L4、L35、L36、L46、L47、L48、L49、L64、L66、L68、L69、L71，(B) VH/VL鏈封裝殘基：L36、L38、L44、L46、L87及(C)典型CDR結構支撐殘基L2、L48、L64、L71 (參見Lo, 「Antibody Humanization by CDR Grafting」, (2004) Antibody Engineering, 第248卷, Methods in Molecular Biology第135-159頁及O'Brien及Jones, 「Humanization of Monoclonal Antibodies by CDR Grafting」, (2003) Recombinant Antibodies for Cancer Therapy, 第207卷, Methods in Molecular Biology第81-100頁)。尤其較佳的係分別與DPK9共用99、97、97、96、80、76、66%一致性之IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1或IGKV3-11之構架區，且在此等共同結構特點中無胺基酸差異。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VL的類似性。
該抗體或其抗原結合片段可包含VH構架，該VH構架包含人類生殖系VH構架序列。VH構架可包含一或多個胺基酸取代、添加或刪除，同時仍保留與衍生該VH構架之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VH構架與人類生殖系VH構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含VH構架，該VH構架相對於人類生殖系VH構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或刪除。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9 或10個胺基酸取代、添加或刪除僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VH的類似性。
人類生殖系VH構架可為例如IGHV3-07 (亦稱為DP-54)、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48之構架。人類生殖系VH構架可為人類VH生殖系共同序列之構架。人類生殖系VH構架可為人類VH3生殖系共同序列之構架。人類生殖系VH構架可為人類VH5生殖系共同序列之構架。人類生殖系VH構架可為人類VH1生殖系共同序列之構架。人類生殖系VH構架可為人類VH4生殖系共同序列之構架。
在一些態樣中，VH構架IGHV3-07 (SEQ ID NO: 127)。亦預測其他類似構架區遞送本發明之有利抗體，該等抗體包含SEQ ID NO:8-10及14-16之CDR及由以下VH胺基酸序列中之任一者指定之CDR：SEQ ID NO: 6、34-46、88-91及93，包括IGHV3-07、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69或IGHV3-48，其可包含分別與DP-54之FW區93、92、92、99、97、97、96、96、94、94、93、92%之一致性及一個或更少個共同結構特點(Kabat編號)之胺基酸差異(A) CDR (游標區)正下方之殘基H2、H47、H48及H49、H67、H69、H71、H73、H93、H94，(B) VH/VL鏈封裝殘基：H37、H39、H45、H47、H91、H93及(C)典型CDR結構支撐殘基H24、H71、H94 (參見Lo 2004，以及O'Brien及Jones 2003)。DP-50、IGHV3-30*09、IGHV3-30*15之例示性構架區分別與DP-54共用93、92及92%一致性，且在此等共同結構特點中無胺基酸差異。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VH的類似性。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含：(i) VH，其包含與SEQ ID NO:6之胺基酸序列至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，及/或(ii) VL，其包含與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少50%、至少60%、至少66%、至少70%、至少75%、至少76%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。本發明亦涵蓋此等VL及VH序列之任何組合。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含：(i) HC，其包含與SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；及/或(ii) LC，其包含與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。本發明亦涵蓋此等HC及LC序列之任何組合。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含Fc域。Fc域可衍生自IgA (例如IgA1 或IgA2 )、IgG、IgE或IgG (例如IgG1 、IgG2 、IgG3 或IgG4 )。
本發明進一步提供抗體或其抗原結合片段，其為結合至人類αvβ8整合素而與潛伏相關肽(LAP)進行競爭。舉例而言，若抗體或其抗原結合片段結合至人類αvβ8整合素阻止LAP後續結合至人類αvβ8整合素，則該抗體或其抗原結合片段為人類αvβ8整合素結合而LAP進行競爭。
本發明提供之抗體及抗原結合片段包括單株抗體、多株抗體、抗體片段(例如，Fab、Fab'、F(ab')2 、Fv、Fc等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、異結合抗體、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體片段之融合蛋白、結構域抗體(dAb)、人類化抗體及包含所要特異性之抗原識別位點之免疫球蛋白分子之任何其他修飾組態，包括抗體之糖基化變異體、抗體之胺基酸序列變異體及共價修飾抗體。抗體及抗原結合片段可為鼠類、大鼠、人類或任何其他來源(包括嵌合或人類化抗體)。在一些實施例中，抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗體為嵌合、人類化或人類抗體。在某些實施例中，該抗體為人類抗體。在某些實施例中，該抗體為人類化抗體。抗 α v β 8 整合素抗體之生物活性
除了將抗原決定基結合至αvβ8整合素上之外，本發明之抗體或其抗原結合片段可介導生物活性。亦即，本發明包括經分離之抗體或其抗原結合片段，其特異性結合αvβ8整合素且介導至少一種選自以下之可偵測活性： (i)      特異性結合至αvβ8整合素(例如，來自人類、小鼠、食蟹獼猴及/或大鼠之αvβ8整合素)； (ii)        減少αvβ8整合素與潛伏相關肽(LAP)之間之相互作用； (iii)      減少TGF-β信號傳導； (iv)       有效地阻斷IC50 ≤10 nM的αvβ8整合素介導之TGFβ活化； (v)        對非人類靈長類(NHP)直系同源物具有相當的Kd (5倍內)； (vi)       選擇性結合人類αvβ8，且不可偵測地結合αvβ8之同源物(例如，αvβ1、αvβ3、αvβ5及αvβ6)； (vii)     單獨或與免疫調節劑，例如檢查點抑制劑之調節劑，例如PD-1、PD-L1、CTLA-4之抑制劑或刺激分子(例如4-1BB)之促效劑組合，在選自鱗狀細胞癌、乳癌及結腸癌之癌症之動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退； (viii)   與抗癌療法，例如放射線療法組合在癌症之動物模型中引起生長遏制及/或完全腫瘤消退； (ix)       例如在以≤ 10 mg/kg投與時，在同基因型腫瘤移植模型中展示腫瘤生長之至少60%的減少； (x)        在向個體(例如小鼠或人類個體)投與時在一或多種免疫調節劑，例如檢查點抑制劑之拮抗劑或檢查點活化劑之促效劑，例如PD-1、PD-L1或CTLA-4之拮抗劑或免疫反應之活化劑，例如4-1BB促效劑存在下增加抗腫瘤反應； (xi)       具有不視腫瘤模型中αvβ8整合素之表現而定之功效； (xii)     增加腫瘤微環境中CD8+ GzmB+ T細胞之豐度，例如作為單一療法； (xiii)    在與檢查點抑制劑之拮抗劑(例如，抗PD-1或抗PD-L1抗體)組合使用時，例如在鱗狀細胞癌、乳癌及/或結腸癌之同基因型模型中展示腫瘤生長之減少，例如至少＞ 80%的減少； (xiv)    如藉由卡本-麥爾分析所測定，展示個體(例如人類或小鼠)之總存活率的統計學上顯著之提高； (xv)      展示適合調配物特性，包括高程度之熱穩定性及高濃度下之最少聚集；或 (xvi)    可在大規模製造條件下展示可再現表現及純度。
在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段具有以下特性中之至少一者： i.    表示為KD的人類αvβ8整合素之結合親和力，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於536 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、500、510、520、530、531、532、533、534或535 pM)； ii.   人類αvβ8整合素之KD，其例如對於經純化人類αvβ8整合素低於或等於100 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90或100 pM)； iii.  小鼠αvβ8整合素之KD，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於489 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、460、470、480、485、486、487或488 pM)； iv.   食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於507 pM (例如，1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、370、400、450、500、501、502、503、504、505或506 pM)； v.    大鼠αvβ8整合素之KD，其為約160 pM； vi.  展示人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如低於100 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90或95 pM)之KD，例如如使用Biacore親和力檢定測定； vii. 抑制TGFβ反式活化之IC50，其低於鼠類抗體ADWA11，例如低於183 pM (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、175、180、181或182 pM)； viii. 抑制U251細胞中之TGFβ反式活化之IC50，其為約100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320或340 pM； ix.   U251細胞之EC50，其為約126 pM，其中標準差為加或減34 pM； x.    U251細胞之EC50，其為約256 pM，其中標準差為加或減115 pM； xi.   C8-S細胞之EC50，其為約115 pM； xii.  C8-S細胞之EC50，其為約145 pM，其中標準差為加或減23.7 pM； xiii. 至少一個所預測人類藥物動力學(PK)參數，其選自： a.    中央室(CL)之清除率，其為約0.12-0.15 mL/h/kg； b.   室間分佈清除率(CLF)，其為約0.15-0.51 mL/h/kg； c.    該中央室之分佈容積(V1)，其為約36-39 mL/kg； d.   該周邊室之分佈容積(V2)，其為約21-33 mL/kg；及/或 e.    終半衰期(t1 / 2 )，其為約12-17日；或 xiv. 展示無與人類Fcγ受體或C1q之可偵測結合。
在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段結合具有高表觀親和力之αvβ8整合素+細胞(例如，表現αvβ8整合素之細胞)。可使用流動式細胞量測術評估表觀親和力結合以偵測抗體與表現目標蛋白(例如αvβ8整合素)之細胞的結合。細胞可用編碼αvβ8整合素之核酸短暫或穩定轉染。可替代地，細胞可為天然表現其表面上之αvβ8整合素之細胞。不管αvβ8整合素+細胞之來源如何，均可使用多種此項技術中公認的方法輕易評估抗體與細胞之結合。該抗體或其抗原結合片段結合人類αvβ8整合素、食蟹獼猴αvβ8整合素、小鼠αvβ8整合素、大鼠αvβ8整合素。
本發明包括抗體或其抗原結合片段，其特異性結合αvβ8整合素及拮抗由αvβ8整合素介導之活性(例如，TGFβ信號傳導，其可由抑制αvβ8整合素與潛伏相關肽(LAP)之相互作用介導)。存在許多此項技術中已知之檢定用以測定對TGFβ信號傳導所介導之活性的抑制。一種此類檢定為TGFβ路徑反式活化檢定。在此類檢定之一個實例中，表現SMAD，其藉由使用螢光素酶報導體可充當經監測之TGFβ信號傳導及路徑活化之標記物。抗αvβ8整合素抗體結合αvβ8整合素及拮抗TGFβ信號傳導之作用(例如，藉由抑制αvβ8整合素與LAP之相互作用)的能力因此藉由量測在該抗體存在或不存在下表現之SMAD之含量來評估。較佳地，該抗體可介導螢光素酶之劑量依賴型減少，其中EC50為約1 pM、約2 pM、約3 pM、約4 pM、約5 pM、約6 pM、約7 pM、約8 pM、約9 pM、約10 pM、約20 pM、約30 pM、約40 pM、約50 pM、約60 pM、約70 pM、約80 pM、約90 pM、約100 pM、約125 pM、約150 pM、約175 pM、約200 pM、約225 pM、約250 pM、約275 pM、約300 pM、約400 pM或約500 pM (例如，EC50在約1 pM與約100 pM之間，例如EC50在約1 pM與約200 pM之間，例如EC50在約1 pM與約300 pM之間，例如EC50在約1 pM與約400 pM之間，例如EC50在約1 pM與約500 pM之間)。更佳地，該抗體或其抗原結合片段抑制TGFβ信號傳導(例如，TGFβ反式活化，例如SMAD之TGFβ反式活化)，其中EC50為約100 pM (例如，EC50在約5 pM與約175 pM之間，例如EC50在約25 pM與約175 pM之間，例如EC50為約100 pM、約105 pM、約110 pM、約115 pM、約120 pM、約125 pM、約130 pM、約135 pM、約140 pM、約145 pM、約150 pM、約155 pM、約160 pM、約165 pM、約170 pM或約175 pM)。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段抑制TGFβ信號傳導(例如，TGFβ反式活化，例如SMAD之TGFβ反式活化)，其中EC50低於約5 nM (例如，低於約0.001、0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.1、5.5、6、7、8、9、10、15、20或25 nM)。在實施例中，該抗體或其抗原結合片段抑制TGFβ信號傳導(例如，TGFβ反式活化，例如SMAD之TGFβ反式活化)，其中EC50為約5 nM (例如，約0.001、0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.1、5.5、6、7、8、9、10、15、20或25 nM)。
在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段抑制TGFβ信號傳導，其中EC50為約145 +/- 23.7 pM。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段抑制C8-S中之TGFβ信號傳導，其中EC50為約145 +/- 23.7 pM。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段抑制C8-S細胞中之TGFβ信號傳導，其中EC50為約110 pM至約180 pM。
在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段抑制TGFβ信號傳導，其中EC50為約256 +/- 115 pM。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段抑制U251細胞中之TGFβ信號傳導，其中EC50為約256 +/- 115 pM。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段抑制U251細胞中之TGFβ信號傳導，其中EC50為約80 pM至約400 pM。
本發明涵蓋抗體或其抗原結合片段，其結合人類αvβ8整合素但不可偵測地結合人類蛋白質αvβ3整合素、αvβ5整合素或αvβ6整合素。 III.抗αvβ8整合素抗體表現及產生  編碼抗αvβ8整合素抗體之核酸
本發明亦提供編碼抗體中之任一者(包括本文所述之抗體片段及經修飾之抗體)的聚核苷酸。本發明亦提供製造本文所述之聚核苷酸中之任一者的方法。聚核苷酸可藉由此項技術中已知之程序製造及表現。
所要抗體、所定義抗體片段或其抗原結合片段及編碼該抗體或其片段之核酸的序列可使用標準定序技術測定。可將編碼所要抗體、所定義抗體片段或其抗原結合片段之核酸序列***至用於重組生產及表徵之各種載體(諸如選殖及表現載體)中。編碼重鏈、重鏈之所定義抗體片段或抗原結合片段之核酸，及編碼輕鏈、輕鏈之所定義抗體片段或抗原結合片段之核酸可選殖於相同載體，或不同載體中。
編碼以上胺基酸序列之聚核苷酸編碼與如本文所揭示之本發明之抗體或其抗原結合片段的胺基酸序列至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種包含選自由以下組成之群之胺基酸序列的蛋白質的聚核苷酸：SEQ ID NO:2、3及5-76 (例如，包含SEQ ID NO: 1、4、183、185、186、189、190或191中所闡述之序列之聚核苷酸)，或編碼與SEQ ID NO:2、3、5-76、88-93、123、124及182至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%且更佳一致之胺基酸序列的核苷酸序列。
本發明提供聚核苷酸，其包含如SEQ ID NO: 1、183、189或191中之一或多者所闡述及編碼抗體重鏈之核酸序列，或與SEQ ID NO: 1、183、189或191至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致及編碼抗體重鏈之核苷酸序列。
本發明提供聚核苷酸，其包含如SEQ ID NO: 4或185中之一或多者所闡述及編碼抗體輕鏈之核酸序列，或與SEQ ID NO: 4或185至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致及編碼抗體輕鏈之核苷酸序列。
本發明提供聚核苷酸，其包含如SEQ ID NO: 190中所闡述及編碼抗體重鏈可變區之核酸序列，或與SEQ ID NO: 190至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或一致及編碼抗體重鏈可變區之核苷酸序列。
本發明提供聚核苷酸，其包含如SEQ ID NO: 186中所闡述及編碼抗體輕鏈可變區之核酸序列，或與SEQ ID NO: 186至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或一致及編碼抗體輕鏈可變區之核苷酸序列。
本發明提供聚核苷酸，其包含如SEQ ID NO: 192或193中所闡述及編碼抗體重鏈恆定區之核酸序列，或與SEQ ID NO: 192或193至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或一致及編碼抗體重鏈恆定區之核苷酸序列。
本發明提供聚核苷酸，其包含如SEQ ID NO: 194中所闡述及編碼抗體輕鏈恆定區之核酸序列，或與SEQ ID NO: 194至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或一致及編碼抗體輕鏈恆定區之核苷酸序列。
本發明提供包含如SEQ ID NO: 189所闡述之核酸序列的聚核苷酸。本發明提供包含如SEQ ID NO: 190所闡述之核酸序列的聚核苷酸。本發明提供包含如SEQ ID NO: 185所闡述之核酸序列的聚核苷酸。
本發明提供聚核苷酸，其包含ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124917及/或寄存編號PTA-124918之質體之DNA***序列的核酸序列中之一或兩者。
本發明提供聚核苷酸，其包含ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124917及/或寄存編號PTA-124918之質體之***序列的核酸序列。
本發明提供包含如SEQ ID NO: 1、183及4中所闡述之一或多種核酸分子的細胞。
本發明提供包含如SEQ ID NO: 185、189及190中所闡述之一或多種核酸分子的細胞。
在另一態樣中，本發明提供編碼抗αvβ8整合素抗體(例如，抗人類αvβ8整合素抗體)之聚核苷酸及其變異體，其中該等變異聚核苷酸與本文所揭示之特定核酸序列中之任一者共用至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列一致性。此等量並不意謂為限制性的，且所敍述百分比之間的增量特定地設想為本發明之部分。
本發明提供由本文所述之核酸分子編碼之多肽。
在一個實施例中，VH及VL域或其抗原結合片段或全長HC或LC經獨立聚核苷酸編碼。可替代地，VH及VL兩者或其抗原結合片段或HC及LC經單個聚核苷酸編碼。
本發明亦涵蓋與任何該等序列互補之聚核苷酸。聚核苷酸可為單股(編碼或解碼)或雙股的，且可為DNA (染色體組、cDNA、或合成)或RNA分子。RNA分子包括HnRNA分子，其含有內含子且以一對一方式對應於DNA分子；及mRNA分子，其不含內含子。額外編碼或非編碼序列可(但未必)存在於本發明之聚核苷酸內，且聚核苷酸可(但未必)連接至其他分子及/或支撐材料。
聚核苷酸可包含天然序列(亦即，編碼抗體或其片段之內源序列)或可包含此類序列之變異體。聚核苷酸變異體含有一或多個取代、添加、刪除及/或***以使得經編碼之多肽之免疫反應性相對於天然免疫反應性分子不降低。對於經編碼之多肽之免疫反應性的影響可通常如本文所述評估。在一些實施例中，變異體呈現與編碼天然抗體或其片段之聚核苷酸序列至少約70%之一致性，在一些實施例中至少約80%之一致性，在一些實施例中至少約90%之一致性，且在一些實施例中至少約95%之一致性。此等量並不意謂為限制性的，且所敍述百分比之間的增量特定地設想為本發明之部分。
如下文所述，根據最大一致性比對時，若兩個序列中之核苷酸或胺基酸序列相同，則稱該兩個聚核苷酸或多肽序列「一致」。兩個序列之間的比較通常藉由在比較窗口比較序列以鑑別且比較局部區之序列相似性來進行。如本文所用，「比較窗口」係指具有至少約20個鄰接位置，通常30至約75個，或40至約50個鄰接位置之鏈段，其中一個序列與具有相同數目個鄰接位置的參考序列在該兩個序列最佳對準之後，可以進行比較。
用於比較之最佳序列比對可使用生物資訊軟體之Lasergene® 套件中之MegAlign® 程式(DNASTAR® , Inc., Madison, WI)使用預設參數來進行。此程式包含以下參考文獻中所述之若干比對方案：Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships。在Dayhoff, M.O. (編) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC 第5卷, 第3增刊, 第345-358頁；Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes 第626-645頁 Methods in Enzymology 第183卷, Academic Press, Inc., San Diego, CA；Higgins, D.G.及Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153；Myers, E.W.及Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17；Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105；Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425；Sneath, P.H.A.及Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA；Wilbur, W.J.及Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730中。
在一些實施例中，「序列一致性百分比」藉由比較具有至少20個位置之比較窗口內的兩個最佳比對序列來測定，其中與用於最佳比對兩個序列之參考序列(其不包含添加或刪除)相比，比較窗口中之聚核苷酸或多肽序列之部分可包含20%或更少、通常5至15%或10至12%之添加或刪除(亦即，間隙)。百分比藉由以下計算：測定一致核酸鹼基或胺基酸殘基在兩個序列中存在之位置的數目以產生匹配位置數，將匹配位置數除以參考序列之位置總數(亦即，窗口大小)，且將結果乘以100以產生序列一致性百分比。
變異體亦可或替代地實質上與天然基因或其部分或補體同源。該等聚核苷酸變異體在適當嚴格條件下能夠與編碼天然抗體(或互補序列)之天然存在之DNA序列雜交。
適合的「適當嚴格條件」包括在5× SSC、0.5% SDS、1.0 mM EDTA (pH 8.0)之溶液中預洗滌；在50℃至65℃下，5× SSC，雜交隔夜；隨後在65℃下用含有0.1%SDS之2×、0.5×及0.2× SSC中之各者洗滌兩次，持續20分鐘。
如本文所用，「高度嚴格條件」或「較高嚴格度條件」如下：(1)使用低離子強度及高溫用於洗滌，例如在50℃下0.015 M氯化鈉/0.0015 M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉；(2)在雜交期間使用變性劑，諸如甲醯胺，例如在42℃下具有0.1%牛血清白蛋白之50% (v/v)甲醯胺/0.1%菲科爾(Ficoll)/0.1%聚乙烯吡咯啶酮/具有750 mM氯化鈉、75 mM檸檬酸鈉之pH 6.5的50 mM磷酸鈉緩衝液；或(3)在42℃下使用50%甲醯胺、5 × SSC (0.75 M NaCl，0.075 M檸檬酸鈉)、50 mM磷酸鈉(pH 6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5 × Denhardt氏溶液、超音波處理鮭魚***DNA (50 µg/mL)、0.1% SDS及10%硫酸葡聚糖，其中在42℃下在0.2 × SSC (氯化鈉/檸檬酸鈉)中及在55℃下在50%甲醯胺中洗液，隨後在55℃下用由含EDTA之0.1 × SSC組成的較高嚴格度洗液洗滌。熟習此項技術者將知道如何視需要調節溫度、離子強度等以適應諸如探針長度及其類似物之因素。
一般熟習此項技術者將瞭解，由於基因密碼之簡併，存在許多編碼如本文所述之多肽之核苷酸序列。一些此等聚核苷酸與任何天然基因之核苷酸序列攜帶最小同源性。儘管如此，本發明尤其涵蓋因密碼子使用差異而改變之聚核苷酸。此外，包含本文所提供之聚核苷酸序列之基因的對偶基因在本發明之範疇內。對偶基因為由於核苷酸之一或多個突變或變化(諸如刪除、添加及/或取代)而變化的內源基因。所得mRNA及蛋白質可(但未必)具有變化的結構或功能。對偶基因可使用標準技術(諸如雜交、擴增及/或資料庫序列比較)來鑑別。
本發明之聚核苷酸可使用化學合成、重組方法或PCR獲得。化學聚核苷酸合成方法在此項技術中熟知且無需詳細描述於本文中。熟習此項技術者可使用本文所提供之序列及商用DNA合成器以產生所要DNA序列。
為使用重組方法製備聚核苷酸，包含所要序列之聚核苷酸可***適合載體中，且繼而載體可引入適合宿主細胞中進行複製及擴增，如本文中進一步論述。聚核苷酸可藉由此項技術中已知任何方式***宿主細胞中。細胞藉由利用直接吸收、內吞作用、轉染、F-配對或電穿孔將外源性聚核苷酸引入來轉型。一旦引入，外源性聚核苷酸可作為非整合載體(諸如質體)維持在細胞內或整合至宿主細胞基因組中。如此擴增之聚核苷酸可藉由此項技術中熟知之方法與宿主細胞分離。參見例如Sambrook等人, 1989。
可替代地，PCR允許DNA序列複製。PCR技術在此項技術中熟知且描述於美國專利第4,683,195、4,800,159、4,754,065及4,683,202號以及PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis等人編, Birkauswer Press, Boston, 1994中。
RNA可藉由使用適當載體中之經分離DNA且將其***適合宿主細胞內獲得。當細胞複製且DNA轉錄至RNA時，可隨後使用熟習此項技術者熟知方法分離RNA，例如，如Sambrook等人,1989中所闡述。
在一些實施例中，第一載體包含編碼重鏈之聚核苷酸且第二載體包含編碼輕鏈之聚核苷酸。在一些實施例中，第一載體及第二載體以類似量(諸如類似莫耳量或類似質量)轉染至宿主細胞中。在一些實施例中，介於5:1與1:5之間之莫耳比或質量比的第一載體及第二載體轉染至宿主細胞中。在一些實施例中，使用介於1:1與1:5之間之質量比的編碼重鏈之載體及編碼輕鏈之載體。在一些具體例中，使用1:2之質量比的編碼重鏈之載體及編碼輕鏈之載體。 載體
在一些實施例中，選擇最佳化的載體以便CHO或CHO源細胞或NSO細胞表現多肽。例示性該等載體描述於例如Running Deer等人, Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)中。
適合的選殖及表現載體可包括多種組分，諸如啟動子、強化子及其他轉錄調節序列。載體亦可經構造以允許抗體可變域後續選殖至不同載體中。適合選殖載體可根據標準技術構造，或可選自大量在此項技術中可用之選殖載體。雖然所選選殖載體可根據意欲使用之宿主細胞變化，但適用選殖載體將一般能夠自我複製，可具有特定限制性核酸內切酶之單一目標，及/或可載有可用於選擇含有載體之純系的標記物之基因。適合實例包括質體及細菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript (例如pBS SK+)及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA及穿梭載體，諸如pSA3及pAT28。此等及許多其他選殖載體可購自諸如BioRad、Strategene及Invitrogen之商業供應商。進一步提供表現載體。表現載體通常為含有根據本發明之聚核苷酸的可複製聚核苷酸構造體。此意謂表現載體作為游離基因體或作為染色體DNA之整體部分在宿主細胞中必須為可複製的。適合表現載體包括但不限於質體、病毒載體(包括腺病毒、腺相關病毒、逆轉錄病毒)、黏質體及PCT公開案第WO 87/04462號中所揭示之表現載體。載體組分可一般包括但不限於以下中之一或多者：信號序列；複製起點；一或多種標記物基因；適合轉錄控制元件(諸如啟動子、強化子及終止子)。對於表現(亦即轉譯)而言，通常亦需要一或多種轉譯控制元件，諸如核糖體結合位點、轉譯起始位點及終止密碼子。
含有所關注之聚核苷酸之載體及/或聚核苷酸本身可藉由多種適當方式中之任一者引入宿主細胞中，包括電穿孔、使用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-葡聚糖或其他物質轉染；微彈轟擊(microprojectile bombardment)；脂質體轉染；及感染(例如在載體為諸如痘苗病毒之感染物的情況下)。引入載體或聚核苷酸之選擇將常常視宿主細胞之特點而定。 宿主細胞
抗體或其抗原結合片段可使用適合的宿主細胞以重組方式製得。編碼抗體或其抗原結合片段之核酸可選殖至表現載體中，該表現載體隨後可經引入至宿主細胞中，諸如大腸桿菌(E. coli)細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞，其中該細胞並不會另外產生免疫球蛋白，以獲得重組宿主細胞中之抗體之合成。較佳宿主細胞包括CHO細胞、人類胎腎HEK-293細胞或Sp2.0細胞以及此項技術中熟知的其他多種細胞。抗體片段可藉由全長抗體之蛋白分解或其他降解、藉由重組方法或藉由化學合成而產生。抗體之多肽片段(尤其至多約50個胺基酸之較短多肽)可宜藉由化學合成來製造。用於蛋白質及肽之化學合成方法係此項技術中已知的且可商購的。
在各種實施例中，抗αvβ8整合素重鏈抗體重鏈及/或抗αvβ8整合素輕鏈可在諸如細菌細胞之原核細胞中；或在諸如真菌細胞(諸如酵母)、植物細胞、昆蟲細胞及哺乳動物細胞之真核細胞中表現。該表現可例如根據此項技術中已知之程序來進行。可用於表現多肽之例示性真核細胞包括但不限於COS細胞，包括COS 7細胞；293細胞，包括293-6E細胞；CHO細胞，包括CHO-S、DG44. Lecl3 CHO細胞及FUT8 CHO細胞；PER.C6®細胞(Crucell)；及NSO細胞。在一些實施例中，抗αvβ8整合素重鏈及/或抗αvβ8整合素輕鏈可在酵母中表現。參見例如美國公開案第2006/0270045 Al號。在一些實施例中，特定真核宿主細胞基於其對抗αvβ8整合素重鏈及/或抗αvβ8整合素輕鏈之進行所要轉譯後修飾之能力來進行選擇。舉例而言，在一些實施例中，CHO細胞產生多肽，該等多肽之唾液酸化程度高於293細胞中所產生之相同多肽。
向所要宿主細胞中引入一或多種核酸可藉由任何方法完成，包括但不限於磷酸鈣轉染、DEAE-聚葡萄糖介導之轉染、陽離子脂質介導之轉染、電穿孔、轉導、感染等。非限制性例示性方法描述於例如Sambrook等人, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 第3版 Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)中。核酸可根據任何適合方法短暫或穩定轉染於所要宿主細胞中。
抗αvβ8整合素抗體可藉由任何適合方法純化。此類方法包括但不限於使用親和基質或疏水相互作用層析。適合親和力配位體包括結合抗體恆定區之配位體。舉例而言，蛋白A、蛋白G、蛋白A/G或抗體親和管柱可用於結合恆定區及純化抗αvβ8整合素抗體。疏水相互作用層析(例如丁基或苯基管柱)亦可適於純化一些多肽。此項技術中已知多種用於純化多肽之方法。
在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體在無細胞系統中產生。非限制性例示性無細胞系統描述於例如Sitaraman等人, Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009)；Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004)；Endo等人, Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)中。 IV.用途及醫學療法治療性用途
在一些態樣中，本發明提供藉由使用抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段抑制αvβ8整合素活性之治療方法，其中治療方法包含投與治療有效量之包含抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物。所治療之病症為可藉由移除、抑制或降低αvβ8整合素活性或減少信號傳導而得到改良、改善、抑制或預防的任何疾病或病況。詳言之，本發明之抗αvβ8整合素抗體，包括人類化及嵌合抗體可用於預防、治療及/或改善由個體(例如，患有癌症之個體之腫瘤微環境內)之異常(例如，增加之) αvβ8整合素活性及/或TGFβ信號傳導引起及/或與其相關之疾病、病症或病況。在一些實施例中，疾病、病症或病況包含呼吸病況(例如，哮喘)、纖維化或貧血。在一些實施例中，疾病、病症或病況可用疫苗治療或預防。
在一些態樣中，本發明提供一種用於選擇性抑制腫瘤微環境中之細胞(包括例如樹突狀細胞、T調節細胞、腫瘤相關巨噬細胞及/或腫瘤自身細胞)之αvβ8依賴性潛伏TGFβ活化的方法。不受任何特定理論束縛，由投與本發明之抗αvβ8整合素抗體介導之免疫系統及/或腫瘤微環境內之TGFβ活化的更精確及選擇性拮抗作用可促進個體之抗腫瘤免疫反應而不干擾TGFβ之更廣泛體內恆定功能。可預期不干擾TGFβ之更廣泛體內恆定功能的個體內之此類抗腫瘤免疫反應會提供優於全身性TGFβ抑制之安全及治療優勢。
亦可使用本文所提供之方法以減少及/或減弱個體(例如，患有癌症之個體之腫瘤微環境內)之TGFβ活性(例如，促進TGFβ腫瘤之活性)。可藉由向個體(例如，患有癌症之個體)投與治療有效量之本發明之抗αvβ8整合素抗體來減少及/或減弱腫瘤微環境內影響血管生成、癌轉移、上皮-間葉細胞轉變及/或遏制浸潤性免疫細胞(例如，腫瘤浸潤性淋巴細胞，例如T細胞、B細胞、自然殺手細胞、巨噬細胞、嗜中性球、樹突狀細胞、肥大細胞、嗜酸性球及嗜鹼性球)的TGFβ活性。
在一些情況下，向患有癌症之個體投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段增加自個體獲得之腫瘤樣品(例如，實體腫瘤樣品)中之浸潤性免疫細胞，例如CD45總淋巴細胞及骨髓細胞、CD3 T細胞、CD4 T細胞、CD8 T細胞及顆粒酶B表現細胞(例如，活化的CD8及NK細胞)之量(例如，如藉由免疫組織化學(IHC)分析所測定之密度)。與自參考腫瘤樣品(例如，自患有類似癌症之相同個體或不同個體獲得腫瘤樣品，其中腫瘤樣品在投與(例如，第一次投與或後續投與)抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之前獲得)獲得之浸潤性免疫細胞之量(例如，密度)相比，浸潤性免疫細胞之量(例如，密度)之增加可例如藉由自患有癌症之個體獲得之腫瘤樣品(例如，實體腫瘤樣品)之免疫組織化學(IHC)分析測定。
在一個態樣中，本發明係關於使用抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段活體內治療個體，以使得癌腫腫瘤之生長得到抑制或減少。在一些實施例中，使用抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段活體內治療之個體患有原發癌，例如局部晚期癌。在一些實施例中，使用抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段活體內治療之個體患有復發性癌症，例如轉移性癌症。
在一個態樣中，本發明係關於使用抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段活體內治療患有表現αvβ8整合素、整合素β8 (ITGβ8)及/或整合素αV (ITGαV)之癌症或腫瘤的個體。在一些實施例中，αvβ8、β8整合素及/或αV整合素之表現為蛋白質表現。在一些實施例中，αvβ8、β8整合素及/或αV整合素之表現為mRNA表現。在一些實施例中，相對於正常組織或樣品中、對照組織或樣品中、治療前組織或樣品及/或治療後組織或樣品中αvβ8、β8整合素及/或αV整合素表現量，αvβ8、β8整合素及/或αV整合素之表現為增加之表現。在一個實施例中，用於測定αvβ8、β8整合素及/或αV整合素之相對表現量之組織或樣品可自患有癌症或腫瘤之個體、自患有同一類型之癌症或腫瘤或不同類型之癌症或腫瘤之不同個體或自無癌症或腫瘤之個體獲得。
在一些實施例中，相對於正常組織或樣品中、對照組織或樣品中、治療前組織或樣品及/或治療後組織或樣品中之表現量，αvβ8、β8整合素及/或αV整合素之mRNA表現為增加之表現。在一些實施例中，相對於正常組織或樣品、對照組織或樣品中、治療前組織或樣品及/或治療後組織或樣品中之αvβ8、β8整合素及/或αV整合素之mRNA表現量，αvβ8、β8整合素及/或αV整合素之mRNA表現增加約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約100%、約150%、約200%、約300%、約400%、約500%。
可單獨使用(例如，作為單一療法)抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段以抑制癌腫腫瘤之生長。可替代地，可與以下中之一或多者組合使用抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段：(例如，癌症或感染性病症之)醫療標準治療、另一種抗體或其抗原結合片段、免疫調節劑(例如，共刺激分子之活化劑或抑制分子之抑制劑)；疫苗，例如治療性癌症疫苗；或其他形式之細胞免疫療法。
因此，在一個實施例中，本發明提供一種抑制個體之腫瘤細胞之生長的方法，該方法包含向該個體投與治療有效量之本文所述之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。
在一個實施例中，該等方法適用於癌症之活體內治療。為實現免疫性增強，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段可與所關注之抗原一起投與。當抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與一或多種藥劑組合投與時，組合可以任一次序或同時投與。
在另一態樣中，提供一種治療個體之方法，例如減少或改善個體之過度增生性病況或病症(例如癌症)，例如實體腫瘤、血液癌、軟組織腫瘤或轉移性病灶。該方法包括單獨或與其他藥劑或治療模式組合向該個體投與一或多種本文所述之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，可投與本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段作為未治療個體中之第1線療法，或作為例如癌症復發或惡化後的第2線療法。
可使用本文中所揭示之抗體分子治療，例如減少生長之例示性癌症包括通常對免疫療法有反應之癌症。用於治療之癌症之非限制性實例包括黑素瘤(例如，轉移性惡性黑素瘤、皮膚黑素瘤)、腎細胞癌(RCC) (例如，透明細胞癌、乳頭狀細胞癌)、***癌(例如，激素難治性***腺癌)、乳癌、卵巢癌(例如，上皮卵巢癌、輸卵管或原發性腹膜癌)、頭頸癌(例如，頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、結腸癌、食道癌(例如，腺癌及鱗狀細胞癌)、胃癌(例如，胃及胃食道接合處之腺癌)、胰腺癌(例如胰管腺癌)、膽管癌(例如，膽管癌瘤)；子宮內膜癌(例如，子宮體子宮內膜癌)、尿道上皮癌及肺癌(例如，非小細胞肺癌、鱗狀細胞癌)。另外，可使用本文所述之抗體分子治療難治性或復發性惡性病。
可治療之其他癌症之實例包括骨癌、皮膚或眼內惡性黑素瘤、直腸癌、肛門癌、睪丸癌、子宮頸癌、***癌、外陰癌、梅克爾細胞癌(Merkel cell cancer)、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病(包括急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴細胞性白血病)、兒童實體腫瘤、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群、腎或尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊椎軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘發之癌症(包括由石棉誘發之癌症(例如，間皮瘤))及該等癌症之組合。在一些實施例中，癌症選自腎細胞癌、卵巢癌、頭頸部鱗狀細胞癌及皮膚癌(例如，黑素瘤，例如晚期黑素瘤)。
在一些情況下，癌症選自由以下組成之群：實體腫瘤、血液癌(例如，白血病、淋巴瘤、骨髓瘤，例如多發性骨髓瘤)及轉移性病灶。癌症可為實體腫瘤，例如實體腫瘤，諸如惡性病，例如肉瘤及癌瘤，例如各種器官系統之腺癌，諸如影響肺(例如，非小細胞肺癌(NSCLC))、***、卵巢、淋巴、胃腸道(例如，結腸)、肛門、生殖器及泌尿生殖道(例如，腎、尿道上皮、膀胱細胞、***)、咽、CNS (例如，腦、神經或膠細胞)、頭頸部(例如，頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)、皮膚(例如，黑素瘤，例如晚期黑素瘤)、胰臟、結腸、直腸、腎(例如，腎細胞癌)、肝之腺癌、小腸癌及食道癌、胃食道癌、甲狀腺癌及子宮頸癌。在一些情況下，癌症可為淋巴增生疾病(例如，移植後淋巴增生疾病)或血液癌、T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤或白血病(例如，骨髓白血病或淋巴白血病)。在一些情況下，癌症為早期、中期、晚期或轉移性癌症。在特定情況下，癌症為腎細胞癌、卵巢癌或頭頸部鱗狀細胞癌。
在其他實施例中，癌症為血液惡性病或癌症，包括但不限於白血病或淋巴瘤。舉例而言，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段可用於治療癌症及惡性病，包括但不限於例如急性白血病，包括但不限於例如B細胞急性淋巴白血病(「BALL」)、T細胞急性淋巴白血病(「TALL」)、急性淋巴白血病(ALL)；一或多種慢性白血病，包括但不限於例如慢性骨髓性白血病(CML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；其他血液學癌症或血液學病況，包括但不限於例如B細胞前淋巴細胞性白血病、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、伯基特氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、惡性淋巴組織增生性病況、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良及骨髓發育不良症候群、非霍奇金淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)及「白血病前驅症」，其為由骨髓血細胞之無效生產(或異常增生)聯合之血液學病況之多樣化集合及其類似者。
在一個實施例中，癌症選自肺癌(例如，非小細胞肺癌(NSCLC) (例如，鱗狀及/或非鱗狀組織學之NSCLC或NSCLC腺癌))、黑素瘤(例如，晚期黑素瘤)、皮膚鱗狀細胞癌(皮膚SCC) (例如，轉移性皮膚SCC)、腎癌(例如，腎細胞癌，例如透明細胞腎細胞癌)、肝癌、骨髓瘤(例如，多發性骨髓瘤)、***癌、乳癌(例如，不表現***受體、孕酮受體或Her2/neu中之一種、兩種或全部之乳癌，例如三陰性乳癌)、結直腸癌、胰臟癌、頭頸癌(例如，頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC))、肛門癌、胃食道癌、甲狀腺癌、子宮頸癌、淋巴增生疾病(例如，移植後淋巴增生疾病)或血液癌、T細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤或白血病(例如，骨髓白血病)。
在另一個實施例中，癌症選自癌瘤(例如，晚期或轉移性癌瘤)、黑素瘤或肺癌，例如非小細胞肺癌。
在一個實施例中，癌症為肺癌，例如非小細胞肺癌。
在另一實施例中，癌症為***癌，例如晚期***癌。
在又一實施例中，癌症為骨髓瘤，例如多發性骨髓瘤。
在又一實施例中，癌症為腎癌，例如腎細胞癌(RCC) (例如轉移性RCC或透明細胞腎細胞癌)。
在一些實施例中，當癌症為皮膚癌(例如，黑素瘤，例如晚期黑素瘤，例如皮膚鱗狀細胞癌，例如轉移性皮膚鱗狀細胞癌)時。
在一個實施例中，癌症為黑素瘤，例如晚期黑素瘤。在一個實施例中，癌症為對其他療法無反應的晚期或不可切除性黑素瘤。
在一些實施例中，癌症為腎癌，例如腎細胞癌(RCC)。在一些情況下，腎癌為轉移性RCC、透明細胞腎細胞癌(ccRCC)或非透明細胞腎細胞癌(ncRCC)。在一些情況下，當癌症為RCC，例如ccRCC時，可投與本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段作為第1線或第2線療法。
在一些實施例中，當癌症為卵巢癌時，可投與本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段作為耐鉑患者之第2線療法。
在一些實施例中，該癌症為耐鉑及/或復發性癌症。
本文所揭示之方法及組合物適用於治療與前述癌症相關之轉移性病灶。組合療法
腫瘤藉由多種機制逃避宿主免疫監視。可藉由經腫瘤表現且免疫抑制之蛋白質之不活化克服此等機制中之多者。此等尤其包括TGF-β (Kehrl, J.等人 (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050)、IL-10 (Howard, M.及O'Garra, A. (1992) Immunology Today 13: 198-200))及Fas配位體(Hahne, M.等人 (1996) Science 274: 1363-1365)。可與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段組合使用此等實體中之各者之抗體或其抗原結合片段以抵消免疫抑制劑之影響且有利於宿主之腫瘤免疫反應。
可以未結合形式或與第二藥劑(例如細胞毒性藥物)、放射性同位素或蛋白質(例如蛋白質毒素或病毒蛋白質)結合使用本文所揭示之抗體或抗原結合片段。此方法包括：向需要該療法之個體投與單獨或與細胞毒性藥物結合的抗體分子。該抗體分子可用於遞送各種治療劑，例如細胞毒性部分，例如治療藥物、放射性同位素、植物、真菌或細菌來源之分子或生物蛋白(例如，蛋白質毒素)或顆粒(例如，重組病毒顆粒，例如，藉由病毒外殼蛋白)或其混合物。
在某些實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段可與其他療法組合使用以提供意外的協同治療效果，其可提供比添加兩種個別療法之唯一相加效應更大的效果。舉例而言，組合療法可包括與一或多種額外治療劑(例如一或多種抗癌劑、細胞毒性劑或細胞生長抑制劑、激素療法、疫苗及/或其他免疫療法)共調配及/或共投與的本發明之組合物。在其他實施例中，抗體分子與其他治療性治療模式(包括手術、輻射、冷凍手術及/或熱療法)組合投與。該等協同組合療法可以有利地利用較低劑量之所投與治療劑，從而避免與各種單一療法相關之可能毒性或併發症。
在某些實施例中，本文所述之方法及組合物與其他抗體分子、化學療法、其他抗癌療法(例如，標靶抗癌療法或溶瘤藥物)、細胞毒性劑、基於免疫之療法(例如，細胞介素)、手術及/或輻射程序中之一或多者組合投與。可組合投與之例示性細胞毒性劑包括抗微管劑、拓樸異構酶抑制劑、抗代謝物、有絲***抑制劑、烷基化劑、蒽環黴素(anthracycline)、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、***劑、能夠干擾信號轉導路徑之藥劑、促進細胞凋亡之藥劑、蛋白酶體抑制劑及輻射(例如局部或全身照射)。
可替代地，或與前述組合組合，本文所述之方法及組合物可與以下中之一或多者組合投與：免疫調節劑(例如，共刺激分子之活化劑或抑制分子之抑制劑)；疫苗，例如治療性癌症疫苗；或其他形式之細胞免疫療法。
抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之例示性非限制性協同組合及用途包括以下。
在某些實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與共刺激分子或抑制分子，例如共同抑制配位體或受體之調節劑組合投與。
在一個實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與共刺激分子之調節劑，例如促效劑組合投與。在一個實施例中，共刺激分子之促效劑係選自4-1BB (CD137)、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS (CD278)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160或B7-H3之促效劑(例如，促效性抗體或其抗原結合片段，或可溶性融合物)。
在另一個實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與免疫調節劑，例如共刺激分子，例如與正信號(其包括4-1BB (CD137)、CD28、CD27、ICOS及GITR之共刺激域)相關之促效劑或調節劑組合使用。
例示性GITR調節劑包括例如GITR融合蛋白質及抗GITR抗體(例如二價抗GITR抗體)，諸如美國專利第6,111,090號、歐洲專利第090505B1號、美國專利第8,586,023號、PCT公開案第WO 2010/003118號及第2011/090754號中所描述之GITR融合蛋白質，或例如美國專利第7,025,962號、歐洲專利第1947183B1號、美國專利第7,812,135號、美國專利第8,388,967號、美國專利第8,591,886號、歐洲專利第EP 1866339號、PCT公開案第WO 2011/028683號、PCT公開案第WO 2013/039954號、PCT公開案第WO2005/007190號、PCT公開案第WO 2007/133822號、PCT公開案第WO2005/055808號、PCT公開案第WO 99/40196號、PCT公開案第WO 2001/03720號、PCT公開案第WO99/20758號、PCT公開案第WO2006/083289號、PCT公開案第WO 2005/115451號、美國專利第7,618,632號及PCT公開案第WO 2011/051726號中所描述之抗GITR抗體。
在一個實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與免疫檢查點分子之抑制分子之抑制劑組合投與。一般熟習此項技術者應理解，術語「免疫檢查點」意謂CD4及CD8 T細胞之細胞表面上之一組分子。此等分子可有效充當「閘」以下調或抑制抗腫瘤免疫反應。免疫檢查點分子包括但不限於計劃性死亡1 (PD-1)、細胞毒性T淋巴細胞抗原4 (CTLA-4)、B7H1、B7H4、OX-40、CD137、CD40、LAG-3及TIM-3，其直接抑制免疫細胞。可充當適用於本發明方法之免疫檢查點抑制劑之免疫治療劑包括但不限於PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM-3、LAG-3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CEACAM及/或TGF β之抑制劑。抑制分子之抑制作用可藉由在DNA、RNA或蛋白質層面的抑制作用來進行。在實施例中，可使用抑制核酸(例如dsRNA、siRNA或shRNA)抑制抑制分子之表現。在其他實施例中，抑制信號之抑制劑為多肽，例如可溶性配位體或抗體或其抗原結合片段，其結合至抑制分子。
在一個實施例中，抑制劑為可溶性配位體(例如，CTLA-4-Ig或TIM-3-Ig)或結合至PD-1、PD-L1、PD-L2或CTLA4之抗體或抗體片段。舉例而言，抗PD-1抗體分子可與抗CTLA-4抗體(例如伊派利單抗(ipilimumab))組合投與例如以治療癌症(例如，選自以下之癌症：黑素瘤，例如轉移性黑素瘤；肺癌，例如非小細胞肺癌；或***癌)。例示性抗CTLA4抗體包括曲美單抗(Tremelimumab) (可購自Pfizer之IgG2單株抗體，先前稱為替西單抗(ticilimumab)，CP-675,206)；及伊派利單抗(CTLA-4抗體，亦稱為MDX-010，CAS號477202-00-9)。在一個實施例中，治療後，例如在有或無BRAF抑制劑(例如，維羅非尼(vemurafenib)或達拉非尼(dabrafenib))下用抗CTLA4抗體(例如，伊派利單抗)治療黑素瘤後投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。抗CTLA-4抗體，例如伊派利單抗之例示性劑量為約3 mg/kg。
可用於活化宿主免疫反應性之其他抗體可與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段組合使用。此等抗體包括樹突狀細胞表面上之活化DC功能及抗原呈遞的分子。抗CD40抗體能夠有效取代T細胞輔助活性(Ridge, J.等人(1998) Nature 393: 474-478)，且可與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段結合使用。亦可提供針對T細胞共刺激分子(諸如CTLA-4 (例如美國專利第5,811,097號)、OX-40 (Weinberg, A.等人 (2000) Immunol 164: 2160-2169)、4-1BB (Melero, I.等人 (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997))及ICOS (Hutloff, A.等人 (1999) Nature 397: 262-266))之抗體以提高T細胞活化程度。
在某些實施例中，本文所述之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與此項技術中已知之PD-1、PD-L1及/或PD-L2之一或多種抑制劑組合投與。在一個實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1、抗PD-L1及/或抗PD-L2抗體或其抗原結合片段)向先前尚未用免疫檢查點抑制劑治療之個體同時投與。在一個實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1、抗PD-L1及/或抗PD-L2抗體或其抗原結合片段)向先前已用免疫檢查點抑制劑治療且癌症或腫瘤惡化(例如，局部晚期、轉移)之個體同時投與。在一個實施例中，在28天之週期中兩週一次(例如，每2週)投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段，且在各28天之週期之第1天每4週投與免疫檢查點抑制劑。在一個實施例中，在28天之週期向患有癌症或腫瘤之個體兩週一次投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段，且在各28天之週期之第1天每4週投與免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1、抗PD-L1及/或抗PD-L2抗體或其抗原結合片段)。在一個實施例中，免疫檢查點抑制劑為PCT公開案第WO2016/092419號中所述之抗PD1抗體或其抗原結合片段(例如，RN888，如稱作PF-06801591或薩山單抗(sasanlimab))。在一個實施例中，癌症或腫瘤為鱗狀細胞癌，例如頭部或頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、腎細胞癌(RCC)、乳癌或結腸癌。
PD-1、PD-L1及/或PD-L2之抑制劑可為抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白質或寡肽。在一些實施例中，抗PD-1抗體選自MDX-1106、Merck 3475或CT-011。在一個實施例中，抗PD-1抗體為納武單抗(nivolumab)/Opdivo® 、派立珠單抗(pembrolizumab)/Keytruda® 、斯帕塔利單抗(spartalizumab)、皮立珠單抗(pidilizumab)、緹勒珠單抗(tislelizumab)、AMP-224、AMP-514、賽咪單抗(cemiplimab)或薩山單抗(RN888、mAb7、PF-06801591)。在一個實施例中，抗PD-L1抗體為MEDI4736、MPDL3280A (YW243.55.s70)、BMS-936559 (MDX-1105)、阿特珠單抗(atezolizumab)/Tecentriq® 、德瓦魯單抗(durvalumab)/Imfizi® 或阿維魯單抗/Bavencio® 。在一個實施例中，抗PD-L1抗體不為阿維魯單抗。在一個實施例中，抗PD-1抗體描述於PCT公開案第WO2016/092419號中，包括但不限於mAb7 (亦稱為RN888、PF-06801591或薩山單抗)。
在一些實施例中，PD-1抑制劑為與恆定區(例如免疫球蛋白序列之Fc區)融合之免疫黏附素(例如包含PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1結合部分的免疫黏附素)。在一些實施例中，PD-1抑制劑為AMP-224。在一些實施例中，PD-L1抑制劑為抗PD-L1抗體。在一些實施例中，抗PD-L1結合拮抗劑選自YW243.55.s70 (亦稱為MPDL3280A，阿特珠單抗)、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105。亦稱為BMS-936559之MDX-1105為WO2007/005874中所述之抗PD-L1抗體。亦稱為MPDL3280A之抗體YW243.55.S70 (分別為SEQ ID No. 20及21中所示之重鏈及輕鏈可變區序列)為WO 2010/077634中所述之抗PD-L1。
MDX-1106 (亦稱為MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558)為WO 2006/121168中所描述之抗PD-1抗體。Merck 3745 (亦稱為MK-3475或SCH-900475)為WO2009/114335中所述之抗PD-1抗體。皮立珠單抗(CT-011；Cure Tech)為結合至PD-1之人類化IgG1k單株抗體。皮立珠單抗及其他人類化抗PD-1單株抗體揭示於WO2009/101611中。在其他實施例中，抗PD-1抗體為派立珠單抗。派立珠單抗(商標KEYTRUDA，先前為拉立珠單抗(lambrolizumab)，亦稱為MK-3475)揭示於例如Hamid, O.等人 (2013)New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44。AMP-224 (B7-DCIg；Amplimmune；例如揭示於WO2010/027827及WO2011/066342中)為PD-L2 Fc融合可溶性受體，其阻斷PD-1與B7-H1之間之相互作用。其他抗PD-1抗體包括AMP-514 (Amplimmune)，尤其例如US 8,609,089、US 2010028330及/或US 20120114649中所揭示之抗PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體為MDX-1106。MDX-1106之替代名稱包括MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558或納武單抗。在一些實施例中，抗PD-1抗體為納武單抗(CAS登記號：946414-94-4)。納武單抗(亦稱作BMS-936558或MDX1106；Bristol-Myers Squibb)為特異性阻斷PD-1之完全人類IgG4單株抗體。特異性結合至PD-1之納武單抗(純系5C4)及其他人類單株抗體揭示於US 8,008,449及WO2006/121168中。拉立珠單抗(亦稱為派立珠單抗或MK03475；Merck)為結合至PD-1之人類化IgG4單株抗體。派立珠單抗及其他人類化抗PD-1抗體揭示於US 8,354,509及WO2009/114335中。MDPL3280A (Genentech/Roche)為結合至PD-L1之人類Fc最佳化IgG1單株抗體。MDPL3280A (亦稱為YW243.55.s70)及其他抗PD-L1之人類單株抗體揭示於美國專利第7,943,743號及美國公開案第20120039906號中。YW243.55.s70 (重鏈及輕鏈可變區展示於SEQ ID NO 20及21中)之序列亦闡述於WO2010/077634及US 8,217,149中。MDX-1105 (亦稱為BMS-936559)及其他抗PD-L1結合劑揭示於WO2007/005874中。
在其他實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與細胞介素(例如介白素-21、介白素-2、介白素-12或介白素-15)組合投與。在某些實施例中，本文所述之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段及細胞介素之組合用於治療癌症，例如如本文所述之癌症(例如，實體腫瘤或黑素瘤)。
在所有本文所述之方法中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段可與其他形式之免疫療法，諸如細胞介素治療(例如，干擾素、GM-CSF、G-CSF、IL-2、IL-21)或雙特異性抗體療法(其提供增強的腫瘤抗原呈遞(參見例如Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448；Poljak (1994) Structure 2:1121-1123))組合。
可用於與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段組合之例示性免疫調節劑包括但不限於例如阿夫妥珠單抗(afutuzumab) (可購自Roche®)；派非格司亭(pegfilgrastim) (Neulasta®)；來那度胺(lenalidomide) (CC-5013，Revlimid®)；沙立度胺(thalidomide) (Thalomid®)、艾可米得(actimid) (CC4047)；及細胞介素，例如IL-21或IRX-2 (包括可購自IRX Therapeutics之介白素1、介白素2及干擾素γ CAS 951209-71-5之人類細胞介素之混合物)。
在一些實施例中，癌症為卵巢癌，且抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與PARP1之抑制劑(例如，奧拉帕尼(olaparib)、蘆卡帕尼(rucaparib)、尼拉帕尼(niraparib)、維利帕尼(veliparib)、依尼帕瑞(iniparib)、他拉柔帕尼(talazoparib)、3-胺基苯甲醯胺、CEP 9722、E7016、BSI-201、KU-0059436、AG014699、MK-4827或BGB-290)組合投與。
在一些實施例中，癌症為頭頸癌，例如頭頸部鱗狀細胞癌。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段與輻射療法組合投與。 診斷用途
本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段亦可用於例如出於診斷目的偵測及/或量度樣品中之αvβ8整合素或αvβ8整合素表現細胞。舉例來說，抗αvβ8整合素抗體或其片段可以用於診斷由αvβ8整合素之異常表現(例如過度表現、低表現、表現不足等)表徵之病況或疾病。αvβ8整合素之例示性診斷檢定可包含例如使自患者獲得之樣品與本發明之抗抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段接觸，其中抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段用可偵測標籤或報導體分子標記。
在一個態樣中，本發明提供用於偵測活體外(例如，在生物樣品中，諸如活組織檢查，例如來自癌腫組織)或活體內(例如，在個體中活體內成像) αvβ8整合素蛋白質之存在之診斷方法。該方法包括：(i)使樣品與本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸，或向該個體投與抗體或其抗原結合片段；(視情況) (ii)使參考樣品，例如對照樣品(例如，對照生物樣品，諸如血漿、組織、活組織檢查)或對照個體))接觸；及(iii)偵測抗體或其抗原結合片段與樣品或個體或對照樣品或個體之間之複合物之形成，其中變化，例如相對於對照樣品或個體在樣品或個體中之複合物之形成中統計學上顯著之變化指示αvβ8整合素在樣品中之存在。可藉由可偵測物質直接或間接標記抗體分子以促進結合或非結合抗體之偵測。適合之可偵測物質包括各種酶、輔基、螢光材料、發光材料及放射性材料，其如上文所述且更詳細地描述於下文中。
術語「樣品」，當其指偵測多肽所用的樣品時，包括但不限於細胞、細胞溶胞物、細胞之蛋白質或膜萃取物、體液或組織樣品。
抗體分子與αvβ8整合素之間的複合物形成可以藉由量測或目測結合至αvβ8整合素抗原之結合分子或未結合之結合分子來偵測。可以使用習知偵測檢定，例如酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)或組織免疫組織化學。替代標記該抗體或其抗原結合片段，αvβ8整合素之存在可藉由競爭免疫檢定利用用可偵測物質及未標記抗體分子標記之標準物在樣品中檢定。在此檢定中，合併生物樣品、經標記之標準物及抗體或其抗原結合片段，且測定結合至未標記結合分子之經標記之標準物之量。樣品中αvβ8整合素之量與結合至該抗體或其抗原結合片段之經標記之標準物之量成反比。 V.組合物
本發明亦提供包含有效量之本文所述之抗αvβ8整合素抗體之醫藥組合物。本文中亦描述該等組合物之實例以及如何調配該等組合物。在一些實施例中，組合物包含一或多種抗αvβ8整合素抗體。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體識別αvβ8整合素(例如，來自人類、小鼠、食蟹獼猴或大鼠之αvβ8整合素)。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體為人類化抗體。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體為嵌合抗體。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體包含能夠觸發所要免疫反應，諸如抗體介導之溶解或ADCC之恆定區。
本發明中所用之組合物可進一步包含呈凍乾調配物或水溶液形式之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑。
如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑」或「醫藥可接受之賦形劑」包括任何材料，其在與活性成分組合時使得成分保持生物活性且與個體之免疫系統無反應性。實例包括但不限於標準醫藥載劑中任一者，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液(諸如油/水乳液)及各種類型之濕潤劑。對於氣霧劑或非經腸投與之較佳稀釋劑為磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或生理鹽水(0.9%)。包含該等載劑之組合物藉由習知方法(參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版, A. Gennaro,編, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990；及Remington, The Science and Practice of Pharmacy 第20版 Mack Publishing, 2000)調配。
可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在劑量及濃度下對接受者無毒性，且可包含緩衝劑，諸如磷酸酯、檸檬酸酯及其他有機酸；包括抗壞血酸及甲硫胺酸之抗氧化劑；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；氯苄烷銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(低於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或右旋糖苷；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉離子；金屬複合物(例如，Zn-蛋白質複合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN™、PLURONICS™或聚乙二醇(PEG)。本文中將進一步描述醫藥學上可接受之賦形劑。
抗αvβ8整合素抗體及其組合物亦可與以增強及/或互補藥劑之有效性的其他藥劑(包括另一種治療劑(例如，免疫檢查點分子之抑制劑)結合使用。
本發明亦提供包括醫藥組合物、包含編碼本發明之抗體之聚核苷酸之組合物。在一些實施例中，組合物包含表現載體，其包含編碼如本文所述之抗體的聚核苷酸。在一些實施例中，組合物包含SEQ ID NO: 1或4之聚核苷酸中之任一者或兩者。在一些實施例中，組合物包含SEQ ID NO: 183或4之聚核苷酸中之任一者或兩者。在一些實施例中，組合物包含SEQ ID NO: 185或189之聚核苷酸中之任一者或兩者。在一些實施例中，組合物包含SEQ ID NO: 185或191之聚核苷酸中之任一者或兩者。
在另一態樣中，聚核苷酸可編碼本發明之抗體之VH、VL及/或VH及VL兩者。亦即，組合物包含編碼本發明之抗體或其抗原結合片段之一種聚核苷酸或超過一種聚核苷酸。
本發明之醫藥化合物可包括一或多種醫藥學上可接受之鹽。該等鹽之實例包括酸加成鹽及鹼加成鹽。酸加成鹽包括來源於無毒無機酸之彼等物，諸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸亞磷酸及其類似物；以及來源於無毒有機酸之彼等物，諸如脂族單甲酸及脂族二甲酸、經苯基取代之烷酸、羥基烷酸、芳族酸、脂族及芳族磺酸及其類似物。鹼加成鹽包括衍生自鹼土金屬(諸如鈉、鉀、鎂、鈣及其類似物)以及衍生自無毒有機胺(諸如N,N'-二苯甲基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因及其類似物)之鹽。
本發明之醫藥組合物亦可包括醫藥學上可接受之抗氧化劑。醫藥學上可接受之抗氧化劑之實例包括：(1)水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉及其類似物；(2)油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基大茴香醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚及其類似物；及(3)金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸及其類似物。
可用於本發明之醫藥組合物之適合水性及非水性載劑的實例包括水、乙醇、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇及其類似物)及其適合混合物、植物油(諸如橄欖油)及可注射有機酯(諸如油酸乙酯)。適當流動性可例如藉由使用包衣材料(諸如卵磷脂)、在分散液之情況下藉由維持所要粒度及藉由使用界面活性劑來維持。
此等組合物亦可含有佐劑，諸如防腐劑、濕潤劑、乳化劑及分散劑。防止微生物的存在可藉由滅菌程序與藉由包括各種抗細菌劑及抗真菌劑(例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸及其類似物)來確保。亦可能需要在組合物中包括等張劑，諸如糖、氯化鈉及其類似物。另外，可注射醫藥形式之延長吸收可藉由包含延遲吸收之藥劑(諸如單硬脂酸鋁及明膠)來達成。
醫藥組合物通常必須在製造及儲存條件下無菌且穩定。組合物可調配為溶液、微乳液、分散液、脂質體或適合於較高藥物濃度之其他有序結構。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物)及其適合混合物之溶劑或分散介質。適當流動性可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣、藉由在分散液之情況下維持所要粒度及藉由使用界面活性劑來維持。在多數情況下，組合物中適合包括等張劑，例如糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化鈉。可注射組合物之延長吸收可藉由在組合物中包括延遲吸收劑(例如單硬脂酸鹽及明膠)來達成。
無菌可注射溶液可藉由將所要量之活性化合物與一種上文所枚舉之成分或成分組合一起併入適當溶劑中，並視需要接著滅菌微過濾來製備。
一般而言，分散液藉由將活性化合物併入含有鹼性分散介質及來自以上所列舉的成分的所要其他成分的無菌媒劑中來製備。在無菌粉末用於製備無菌可注射溶液之情況下，較佳製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥(凍乾)，其自其預先無菌過濾溶液產生活性成分加任何額外所要成分之粉末。
本發明之醫藥組合物可以適用於經眼投與之調配物製備、封裝或出售。該等調配物在水溶液或油性液體載劑中可例如呈包括例如0.1%-1.0% (w/w)活性成分之溶液或懸浮液之滴眼劑形式。該等滴劑可進一步包含本文所述之緩衝劑、鹽或一或多種其他額外成分。適用之其他可經眼投與之調配物包括包含微晶形式或脂質體製備物中之活性成分的彼等物。
如本文所用，「額外成分」包括但不限於以下中之一或多者：賦形劑；界面活性劑；分散劑；惰性稀釋劑；粒化劑及崩解劑；結合劑；潤滑劑；甜味劑；調味劑；著色劑；防腐劑；生理學上可降解之組合物，諸如明膠；水性媒劑及溶劑；油性媒劑及溶劑；懸浮劑；分散劑或濕潤劑；乳化劑、緩和劑；緩衝劑；鹽；增稠劑；填充劑；乳化劑；抗氧化劑；抗生素；抗真菌劑；穩定劑；及醫藥學上可接受之聚合或疏水性材料。本發明之醫藥組合物可包括之其他「額外成分」為此項技術中已知且描述於例如Remington's Pharmaceutical Sciences, Genaro編, Mack出版公司, Easton, PA (1985)，其以引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，在含有100 mg抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之小瓶中於1 mL緩衝水溶液中調配抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。
在一個實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段在靜脈內調配物中投與，該靜脈內調配物呈含有約0.1 mg/mL、約1 mg/mL、約2 mg/mL、約3 mg/mL、約4 mg/mL、5 mg/mL、或在一些實施例中約10 mg/mL、或在一些實施例中約15 mg/mL、或在一些實施例中約20 mg/mL之抗體、或在一些實施例中約25 mg/mL、或在一些實施例中約50 mg/mL、或在一些實施例中約100 mg/mL及5%右旋糖之無菌水溶液。在一些實施例中，靜脈內調配物為含有0.1 mg/mL至15 mg/mL之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段於5%右旋糖中之無菌水溶液。在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段在含有乙酸鈉、聚山梨醇酯80及pH在約5至6之範圍內之氯化鈉的組合物中調配。在一些實施例中，靜脈內調配物係無菌水溶液，其含有5或10 mg/mL之抗體，以及20 mM醋酸鈉、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80及140 mM pH 5.5下之氯化鈉。此外，包含抗體或其抗原結合片段之溶液除多種其他化合物外可包含組胺酸、甘露糖醇、蔗糖、海藻糖、甘胺酸、聚(乙烯)二醇、EDTA、甲硫胺酸及其任何組合及相關技術中已知之多種其他化合物。
在一個實施例中，本發明之醫藥組合物包含以下組分：50 mg/mL本發明之本發明之抗αvβ8整合素抗體或抗原結合片段、20 mM組胺酸、8.5%蔗糖及0.02%聚山梨醇酯80、0.005% pH 5.8下之EDTA；在另一實施例中，本發明之醫藥組合物包含以下組分：100 mg/mL本發明之抗αvβ8整合素抗體或抗原結合片段、10 mM組胺酸、5%蔗糖及0.01% pH 5.8下之聚山梨醇酯80。此組合物可呈液體調配物或凍乾粉末形式提供。當粉末在完整體積時復原，組合物保持相同配方。可替代地，粉末可在一半體積時復原，在此情況下組合物包含100 mg本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段、20 mM組胺酸、10%蔗糖及0.02% pH 5.8下之聚山梨醇酯80。
在一個實施例中，部分劑量藉由靜脈內給藥投與且其餘藉由抗體調配物輸注。舉例而言，0.01 mg/kg靜脈內注射抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段可以給藥給出，且其餘抗體劑量可藉由靜脈內注射投與。可例如經1小時及半小時至兩小時至五小時之時段投與預定劑量之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。
關於其中試劑為例如小分子之治療劑，其可以生理學上可接受之酯或鹽形式存在於醫藥組合物中，諸如如此項技術中熟知與生理學上可接受之陽離子或陰離子組合。
本文所述之醫藥組合物之調配物可藉由藥理學技術中已知或此後研發之任何方法製備。一般而言，該等製備型方法包括使活性成分與載劑或一或多種其他附屬成分結合，且隨後必要時或需要時將產物塑形或封裝成所要單劑量單位或多劑量單位之步驟。
在一個實施例中，本發明之組合物為實質上不含內毒素及/或相關熱解物質之無熱原質調配物。內毒素包括限制於微生物內且當微生物分解或死亡時經釋放之毒素。熱解物質亦包括來自細菌及其他微生物外膜之致熱、熱穩定物質(糖蛋白)。若向人類投與，則兩種此等物質均可導致發熱、低血壓及休克。由於潛在有害影響，因此自靜脈內投與醫藥藥物溶液移除即使低量內毒素為有利的。食品與藥物管理局(「FDA」)已設定每劑量每公斤體重在一小時內用於靜脈內藥物應用之上限為5內毒素單位(EU) (The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000))。當以每公斤體重幾百毫克或幾千毫克之量投與治療蛋白時，即使移除痕量內毒素為有利的。在一個實施例中，組合物中之內毒素及熱原質含量小於10 EU/mg，或小於5 EU/mg，或小於1 EU/mg，或小於0.1 EU/mg，或小於0.01 EU/mg，或小於0.001 EU/mg。在另一實施例中，組合物中之內毒素及熱原質含量小於約10 EU/mg，或小於約5 EU/mg或，小於約1 EU/mg，或小於約0.1 EU/mg，或小於約0.01 EU/mg，或小於約0.001 EU/mg。
在一個實施例中，本發明包含投與組合物，其中該投與為口服、非經腸、肌肉內、鼻內、***、經直腸、經舌、舌下、經頰、頰內、靜脈內、皮膚、皮下或經皮投與。
在另一實施例中，本發明進一步包含投與組合物，其與其他治療組合，諸如手術、化學療法、激素療法、生物療法、免疫療法或輻射療法。 VI.給藥/投與
為製備包括本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之醫藥學或無菌組合物，該抗體與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑混合。治療劑及診斷劑之調配物可藉由與生理學上可接受之呈例如凍乾粉末、漿料、水溶液、洗劑或懸浮液形式的載劑、賦形劑或穩定劑(參見例如，Hardman, 等人 (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.；Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams及Wilkins, New York, N. Y.；Avis等人 (編) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY；Lieberman等人 (編) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY；Lieberman等人 (編) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY；Weiner及Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.)。
選擇用於治療之投與方案視若干因素而定，包括實體之血清或組織周轉率、症狀程度、實體之免疫原性及生物基質中之目標細胞之可接近性。在某些實施例中，投藥方案根據副作用之可接受含量來最大化遞送至患者之治療劑量。因此，所遞送之生物製劑量部分地視特定實體及所治療之病況嚴重程度而定。可獲得選擇適當抗體、細胞介素及小分子劑量之導引(參見例如，Wawrzynczak, 1996, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK；Kresina (編), 1991, Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y.；Bach (編),1993, Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N. Y.；Baert等人, 2003, New Engl. J. Med. 348:601-608；Milgrom等人, 1999, New Engl. J. Med. 341:1966-1973；Slamon等人, 2001, New Engl. J. Med. 344:783-792；Beniaminovitz等人, 2000, New Engl. J. Med. 342:613-619；Ghosh等人, 2003, New Engl. J. Med. 348:24-32；Lipsky等人, 2000, New Engl. J. Med. 343:1594-1602)。
適當劑量由臨床師例如使用此項技術中已知或懷疑影響治療或預測影響治療之參數或因素來確定。一般而言，初始劑量為稍微小於最佳劑量的量，且隨後以較小增量遞增，直至達成所要或最佳作用(相對於任何負面的副作用而言)。重要診斷量測包括例如，炎症或所產生發炎細胞激素之含量之症狀。
可改變本發明之醫藥組合物中之活性成分的實際劑量，以便獲得在對患者無毒性之情況下有效達成特定患者、組合物及投藥模式之所要治療反應的量的活性成分。所選劑量將視多種藥物動力學因素而定，包括本發明所用特定組合物或其酯、鹽或醯胺之活性；投藥途徑；投藥時間；所用特定化合物之***率；治療持續時間；與所用特定組合物組合使用之其他藥物、化合物及/或物質；所治療患者之年齡、性別、體重、病狀、一般健康狀況及先前病史；及醫藥技術中熟知之類似因素。
包含本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之組合物可由連續輸注或由以例如一天、一週之時間間隔或每週1-7次給藥提供。可經靜脈內、皮下、表面、經口、經鼻、經直腸、肌肉內、顱內或藉由吸入劑提供劑量。特定劑量方案為涉及避免大量不期望副作用之最大劑量或劑量頻率之協定。總週劑量可為至少0.05 μg/kg體重、至少0.2 μg/kg、至少0.5 μg/kg、至少1 μg/kg、至少10 μg/kg、至少100 μg/kg、至少0.2 mg/kg、至少1.0 mg/kg、至少2.0 mg/kg、至少10 mg/kg、至少15 mg/kg、至少20 mg/kg、至少25 mg/kg或至少50 mg/kg (參見例如Yang，等人，2003, New Engl. J. Med. 349:427-434；Herold，等人，2002, New Engl. J. Med. 346:1692-1698；Liu，等人，1999, J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456；Portielji，等人，2003, Cancer. Immunol. Immunother. 52: 133-144)。劑量可為至少15 μg、至少20 μg、至少25 μg、至少30 μg、至少35 μg、至少40 μg、至少45 μg、至少50 μg、至少55 μg、至少60 μg、至少65 μg、至少70 μg、至少75 μg、至少80 μg、至少85 μg、至少90 μg、至少95 μg或至少100 μg。向個體投與之劑量可共計至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12次或更多次。
對於本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段，向患者投與之劑量可為0.0001 mg/kg至100 mg/kg患者之體重。劑量可在0.0001 mg/kg與20 mg/kg之間、0.0001 mg/kg與10 mg/kg之間、0.0001 mg/kg與5 mg/kg之間、0.0001與2 mg/kg之間、0.0001與1 mg/kg之間、0.0001 mg/kg與0.75 mg/kg之間、0.0001 mg/kg與0.5 mg/kg之間、0.0001 mg/kg至0.25 mg/kg之間、0.0001至0.15 mg/kg之間、0.0001至0.10 mg/kg之間、0.001至0.5 mg/kg之間、0.01至0.25 mg/kg或0.01至0.10 mg/kg患者之體重。在一些實施例中，向有需要之患者投與之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量為約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約2 mg/kg或約3.0 mg/kg患者之體重。在一些實施例中，向有需要之患者投與之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量為約0.4 mg/kg、約4 mg/kg、約40 mg/kg或約100 mg/kg患者之體重。
在一些實施例中，每14日向有需要之患者投與之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量為約1 mg/kg至約12 mg/kg患者之體重。在一些實施例中，每14日向有需要之患者投與之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量為約2 mg/kg患者之體重。在一些實施例中，每14日向有需要之患者投與之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量為約7 mg/kg患者之體重。
在一些實施例中，每28日向有需要之患者投與之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量為約1 mg/kg至約20 mg/kg患者之體重。在一些實施例中，每28日向有需要之患者投與之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量為約4 mg/kg患者之體重。在一些實施例中，每28日向有需要之患者投與之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量為約12 mg/kg患者之體重。
抗αvβ8整合素抗體抗體或其抗原結合片段之劑量可使用以公斤(kg)為單位之患者體重乘以以mg/kg為單位之待投與劑量來計算。本發明之抗體劑量可為患者體重之150 μg/kg或更小、125 μg/kg或更小、100 μg/kg或更小、95 μg/kg或更小、90 μg/kg或更小、85 μ/kg或更小、80 μ/kg或更小、75 μ/kg或更小、70 μ/kg或更小、65 μ/kg或更小、60 μ/kg或更小、55 μ/kg或更小、50 μ/kg或更小、45 μ/kg或更小、40 μ/kg或更小、35 μ/kg或更小、30 μ/kg或更小、25 μ/kg或更小、20 μ/kg或更小、15 μ/kg或更小、10 μ/kg或更小、5 μ/kg或更小、2.5 μ/kg或更小、2 μ/kg或更小、1.5 μ/kg或更小、1 μ/kg或更小、0.5 μ/kg或更小、或0.1 μ/kg或更小。
本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之單位劑量可為0.1 mg至200 mg、0.1 mg至175 mg、0.1 mg至150 mg、0.1 mg至125 mg、0.1 mg至100mg、0.1 mg至75 mg、0.1 mg至50 mg、0.1 mg至30 mg、0.1 mg至20 mg、0.1 mg至15 mg、0.1 mg至12 mg、0.1 mg至10 mg、0.1 mg至8 mg、0.1 mg至7 mg、0.1 mg至5 mg、0.1至2.5 mg、0.25 mg至20 mg、0.25至15 mg、0.25至12 mg、0.25至10 mg、0.25至8 mg、0.25 mg至7 mg、0.25 mg至5 mg、0.5 mg至2.5 mg、1 mg至20 mg、1 mg至15 mg、1 mg至12 mg、1 mg至10 mg、1 mg至8 mg、1 mg至7 mg、1 mg至5 mg或1 mg至2.5 mg。在一個實施例中，本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段以約100 mg、約300 mg、約500 mg、約600 mg、約800 mg、約1200 mg、約1400 mg或約1600 mg之單位劑量投與。
本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量可實現個體之至少0.1 μg/mL、至少0.5 μg/mL、至少1 μg/mL、至少2 μg/mL、至少5 μg/mL、至少6 μg/mL、至少10 μg/mL、至少15 μg/mL、至少20 μg/mL、至少25 μg/mL、至少50 μg/mL、至少100 μg/mL、至少125 μg/mL、至少150 μg/mL、至少175 μg/mL、至少200 μg/mL、至少225 μg/mL、至少250 μg/mL、至少275 μg/mL、至少300 μg/mL、至少325 μg/mL、至少350 μg/mL、至少375 μg/mL或至少400 μg/mL之血清滴定濃度。可替代地，本發明之抗體之劑量可實現個體之至少0.1 μg/mL、至少0.5 μg/mL、至少1 μg/mL、至少2 μg/mL、至少5 μg/mL、至少6 μg/mL、至少10 μg/mL、至少15 μg/mL、至少20 μg/mL、至少25 μg/mL、至少50 μg/mL、至少100 μg/mL、至少125 μg/mL、至少150 μg/mL、至少175 μg/mL、至少200 μg/mL、至少225 μg/mL、至少250 μg/mL、至少275 μg/mL、至少300 μg/mL、至少325 μg/mL、至少350 μg/mL、至少375 μg/mL或至少400 μg/mL之血清滴定濃度。
可重複本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之劑量，且投與可由至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2個月、75天、3個月或至少6個月分隔開。
用於特定患者之有效量可視諸如所治療之病況、患者之整體健康狀況、投與之方法途徑及劑量及副作用之嚴重程度之因素而改變(參見例如Maynard，等人，1996, A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, FIa.；Dent, 2001, Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ, London, UK)。
投藥途徑可為經由例如表面或皮膚施加、經靜脈內、腹膜內、腦內、肌肉內、眼內、動脈內、腦脊髓內、病灶內注射或輸注或藉由持續釋放系統或植入物(參見例如Sidman等人，1983, Biopolymers 22:547-556；Langer，等人，1981, J. Biomed. Mater. Res. 15: 167-277；Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105；Epstein，等人，1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688-3692；Hwang，等人，1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030-4034；美國專利第6,350466號及第6,316,024號)。在一個實施例中，靜脈內投與本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，皮下投與本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。
必要時，組合物亦可包括增溶劑及諸如利多卡因(lidocaine)之局部麻醉劑以減輕注射位點之疼痛。另外，亦可採用經肺投與，例如使用吸入器或噴霧器，及具有氣霧劑之調配物。參見例如美國專利第6,019,968號、第5,985,320號、第5,985,309號、第5,934,272號、第5,874,064號、第5,855,913號、第5,290,540號及第4,880,078號；及PCT公開案第WO 92/19244號、第WO 97/32572號、第WO 97/44013號、第WO 98/31346號及第WO 99/66903號，其各者以其整體引用之方式併入本文中。在一個實施例中，使用AlkermesAIR™肺部藥物遞送技術(Alkermes, Inc., Cambridge, Mass.)投與本發明之抗αvβ8抗體或其抗原結合片段或組合物。
本發明之組合物亦可經由一或多種投與途徑來投與，該等投與途徑使用此項技術中已知多種方法中之一或多者。如熟習此項技術者所瞭解，投藥途徑及/或模式將視所要結果而變化。用於本發明之抗體之所選投與途徑包括靜脈內、肌肉內、皮內、腹膜內、皮下、脊髓或其他非經腸投與途徑，例如藉由注射或輸注。非經腸投藥可表示除經腸及表面投與外之通常藉由注射的投藥模式，且包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊椎內、硬膜外及胸骨內注射及輸注。或者，本發明之組合物可經由非經腸途徑投與，諸如表面、表皮或經黏膜投與途徑，例如鼻內、經口、經***、經直腸、舌下或表面。
若本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段在控制釋放或持續釋放系統中經投與，則泵可用於達成控制或持續釋放(參見Langer, 前述；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20；Buchwald等人, 1980, Surgery 88:501；Saudek等人, 1989, N. Engl. J. Med. 321:514)。
聚合材料可用於達成本發明之療法之控制或持續釋放(參見例如，Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (編), CRC出版社, Boca Raton, FL. (1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen及Ball (編), Wiley, New York (1984)；Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. ScL Rev. Macromol. Chem. 23:61；亦參見Levy等人, 1985, Science 11 225:190；During等人, 19Z9, Ann. Neurol. 25:351；Howard等人, 1989, J. Neurosurg. 71: 105)；美國專利第5,679,377號；美國專利第5,916,597號；美國專利第5,912,015號；美國專利第5,989,463號；美國專利第5,128,326號；PCT公開案第WO 99/15154號；及PCT公開案第WO 99/20253號。持續釋放調配物中所用之聚合物之實例包括但不限於聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚乳酸交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯) (PLGA)及聚原酸酯。在一個實施例中，持續釋放調配物中所用之聚合物呈惰性，不含可浸出雜質，儲存穩定，無菌且可生物降解。控制或持續釋放系統可接近預防或治療目標置放，因此僅需要全身劑量之部分(參見例如，Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, 前述,第2卷, 第115-138頁(1984))。
控制釋放系統論述於Langer, 1990, Science 249:1527-1533之綜述。熟習此項技術者已知之任何技術可用於產生包含本發明之一或多種抗體或其結合物之持續釋放調配物。參見例如，美國專利第4,526,938號；國際專利公開案第WO 91/05548、WO 96/20698號；Ning等人, 1996, 「Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel,」 Radiotherapy and Oncology 59:179-189；Song等人, 1995, 「Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions, 」PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology 50:372-397；Cleek等人, 1997, 「Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application,」 Pro. Ml. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854；及Lam等人, 1997, 「Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery,」 Proc. Ml. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-160，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。
若本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段經表面投與，則其可調配成軟膏、乳膏、經皮貼片、潤膚液、凝膠、洗髮劑、噴霧、氣霧劑、溶液、乳液形式或熟習此項技術者熟知之其他形式。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 第19版, Mack Pub. Co., Easton, Pa. (1995)。對於非可噴霧表面劑型，通常使用包含與表面應用相容的載劑或一或多種賦形劑且在一些情況下動態黏度大於水之黏稠-半固體或固體形式。適合調配物包括但不限於溶液、懸浮液、乳液、乳膏、軟膏、粉末、擦劑、油膏及其類似物，必要時其滅菌或與輔助劑(例如，防腐劑、穩定劑、濕潤劑、緩衝劑或鹽)混合以影響各種特性，諸如滲透壓。其他適合的表面劑型包括可噴霧氣溶膠製劑，其中在一些情況下，與固體或液體惰性載劑組合之活性成分封裝於具有加壓揮發物(例如氣態推進劑，諸如氟利昂(freon))之混合物或擠壓瓶中。必要時亦可將保濕劑或濕潤劑添加至醫藥組合物及劑型。該等額外成分之實例在此項技術中已熟知。
若包含抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之組合物經鼻內投與，則可調配成氣霧劑形式、噴霧、薄霧或成滴劑形式。特定言之，根據本發明使用的預防劑或治療劑可宜以自加壓包或噴霧器呈遞之氣霧劑噴霧形式遞送，其中使用適合推進劑(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合氣體)。在加壓氣霧劑之情況下，劑量單位可藉由提供遞送計量之量的閥來確定。可調配含有化合物與諸如乳糖或澱粉之適合粉末基質之粉末混合物的膠囊及藥筒(由例如明膠構成)用於吸入器或吹入器中。
用於共同投與或用另一種治療劑，例如免疫檢查點分子、細胞介素、類固醇、化學治療劑、抗生素或輻射療法治療之方法為此項技術中所熟知(參見例如Hardman,等人(編) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 第10版, McGraw-Hill, New York, N.Y.；Poole及Peterson (編) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice: A Practical Approach, Lippincott, Williams and Wilkins, Phila., Pa.；Chabner及Longo (編) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams and Wilkins, Phila., Pa.)。
有效量之治療劑可將症狀減少至少10%；至少20%；至少約30%；至少40%或至少50%。
可為與本發明之抗αvβ8整合素抗體或抗原結合片段組合投與之額外療法(例如，預防劑或治療劑)可與本發明之抗體相隔小於5分鐘投與，相隔小於30分鐘，相隔1小時，相隔約1小時，相隔約1至約2小時，相隔約2小時至約3小時，相隔約3小時至約4小時，相隔約4小時至約5小時，相隔約5小時至約6小時，相隔約6小時至約7小時，相隔約7小時至約8小時，相隔約8小時至約9小時，相隔約9小時至約10小時，相隔約10小時至約11小時，相隔約11小時至約12小時，相隔約12小時至18小時，相隔18小時至24小時，相隔24小時至36小時，相隔36小時至48小時，相隔48小時至52小時，相隔52小時至60小時，相隔60小時至72小時，相隔72小時至84小時，相隔84小時至96小時，或96小時至120小時。兩種或更多種療法可在同一患者問診內投與。
投與抗體分子之方法在此項技術中已知且描述於下文中。所用分子之適合劑量將取決於個體年齡及體重及所用特定藥物。可由熟習此項技術者確定抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段、抗體分子之劑量及治療方案。在某些實施例中，藉由以約1至30 mg/kg，例如約5至25 mg/kg、約10至20 mg/kg、約10至約14 mg/kg、約5至9 mg/kg、約7 mg/kg或約12 mg/kg之劑量(例如，皮下或靜脈內)注射投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，以約1 mg/kg、約2 mg/kg、約3 mg/kg、約4 mg/kg、約5 mg/kg、約6 mg/kg、約7 mg/kg、約8 mg/kg、約9 mg/kg或10 mg/kg、約11 mg/kg、約12 mg/kg、約13 mg/kg、約14 mg/kg、約15 mg/kg、約16 mg/kg、約17 mg/kg、約18 mg/kg、約19 mg/kg、約20 mg/kg、約30 mg/kg或約40 mg/kg之劑量投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，以約1-5 mg/kg、約5-10 mg/kg或約10-15 mg/kg之劑量投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，以約0.5-2、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8、2-9、2-10、2-15、5-15或5-20 mg/kg之劑量投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。
給藥時程可自例如一週一次至每2、3、4、5或6週一次變化。在一個實施例中，每隔一週(例如，每兩週或兩週一次)以約10至20 mg/kg(例如，約7 mg/kg或約12 mg/kg)之劑量投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，每月一次(例如，每四週)以約10至20 mg/kg(例如，約7 mg/kg或約12 mg/kg)之劑量投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，靜脈內投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段或包含其之醫藥組合物。在一些實施例中，皮下投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段或包含其之醫藥組合物。
在一些實施例中，基於兩週一次靜脈內或皮下投與本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，基於兩週一次靜脈內或皮下以約100 mg、約300 mg、約800 mg、約1200 mg或約1600 mg之單位劑量投與本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，向個體基於兩週一次以約100 mg、約300 mg、約800 mg、約1200 mg或約1600 mg之單位劑量靜脈內投與本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段且每四週投與抗PD1抑制劑。在一些實施例中，抗PD1抑制劑為以300 mg之單位劑量皮下投與之抗體。在一些實施例中，抗PD1抑制劑為PCT公開案第WO2016/092419號中所述之抗PD1抗體(例如mAb7，亦稱為RN888、PF-06801591或薩山單抗)。
在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段或包含其之醫藥組合物約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、每月兩次、每月一次、每兩月一次、每三月一次、每四月一次、每五月一次、每六月一次、每七月一次、每八月一次、每九月一次、每十月一次、每十一月一次或每十二月一次投與。在一些實施例中，每兩週，例如至多12次(例如，至多10次、8次、6次、5次、4次或3次)投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段或包含其之醫藥組合物。在一些實施例中，每四週，例如至多12次(例如，至多10次、8次、6次、5次、4次或3次)投與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段或包含其之醫藥組合物。
在一些實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之各投與包含5-10 mg/kg (例如，5、6、7、8、9或10 mg/kg)之該抗體或其抗原結合片段，例如各投與包含約7 mg/kg。
在一些實施例中，每四週，例如至多6次(例如，至多6次、5次、4次、3次、2次或1次)投與抗體或其抗原結合片段。
在其他實施例中，抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之各投與包含10-15 mg/kg (例如，10、11、12、13、14或15 mg/kg)之抗體或其抗原結合片段，例如各投與包含約12 mg/kg。
本發明之抗αvβ8抗體或其抗原結合片段及其他療法可經循環投與。循環療法涉及投與第一療法(例如，第一預防劑或治療劑)一段時間，隨後投與第二療法(例如，第二預防劑或治療劑)一段時間，視情況隨後投與第三療法(例如，預防劑或治療劑)一段時間等，且重複此依序投與(亦即，循環)以便減小對療法中之一者產生抵抗性，從而避免或減小療法中之一者的副作用，及/或改良療法之功效。
在某些實施例中，本發明之抗αvβ8抗體或其抗原結合片段可經調配以確保在活體內適當分佈。舉例而言，血腦障壁(BBB)排除多種高度親水性化合物。為確保本發明之治療化合物交叉BBB (必要時)，其可例如在脂質體中經調配。關於製造脂質體之方法，參見例如美國專利第4,522,811號；第5,374,548號；及第5,399,331號。脂質體可包含選擇性輸送至特定細胞或器官之一或多個部分，因此增強標靶藥物遞送(參見例如，V.V. Ranade, 1989, J. Clin. Pharmacol. 29:685)。例示性標靶部分包括葉酸或生物素(參見例如，美國專利5,416,016)；甘露糖苷(Umezawa等人, Biochem. Biophys. Res. Commun. 153: 1038)；抗體(P. G. Bloeman等人, 1995, FEBS Lett. 357: 140；M. Owais等人, 1995, Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180)；界面活性劑蛋白A受體(Briscoe等人. (1995) Am. J. Physiol. 1233: 134)；pl20 (Schreier等人 (1994) J. Biol. Chem. 269:9090)；亦參見K. Keinanen；M.L. Laukkanen, 1994, FEBS Lett. 346:123；Killion；Fidler, 1994；Immunomethods 4:273。
本發明提供用於向有需要之個體投與醫藥組合物之方案，該醫藥組合物單獨或其與其他療法組合包含本發明之抗αvβ8抗體或其抗原結合片段。本發明之組合療法之療法(例如，預防劑或治療劑)可向個體同時或依序投與。本發明之組合療法之療法(例如，預防劑或治療劑)亦可循環投與。
本發明之組合療法之療法(例如，預防劑或治療劑)可同時向個體投與。術語「同時」不限於在恰好同一時間投與療法(例如，預防劑或治療劑)，但實際上其意謂包含本發明之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物以一順序且在一時間間隔內向個體投與，以使得本發明之抗體或其結合物可與其他療法一起起作用以提供比起其以其他方式投與時增加的益處。舉例而言，各療法可同時或按任何次序在不同時間點依序向個體投與；然而，若未同時投與，則其應在時間充分接近時經投與以提供所要治療性或防治性效果。各療法可以任何適當形式且藉由任何適合途徑分別向個體投與。在各種實施例中，可相隔小於15分鐘、小於30分鐘、小於1小時，相隔約1小時、相隔約1小時至約2小時，相隔約2小時至約3小時，相隔約3小時至約4小時，相隔約4小時至約5小時，相隔約5小時至約6小時，相隔約6小時至約7小時，相隔約7小時至約8小時，相隔約8小時至約9小時，相隔約9小時至約10小時，相隔約10小時至約11小時，相隔約11小時至約12小時，相隔24小時，相隔48小時，相隔72小時或相隔1週向個體投與療法(例如，預防劑或治療劑)。在其他實施例中，兩種或更多種療法(例如，預防劑或治療劑)可在同一患者問診內投與。
組合療法中之預防劑或治療劑可以相同醫藥組合物向個體投與。可替代地，組合療法之預防劑或治療劑可在獨立醫藥組合物中向個體同時投與。預防劑或治療劑可藉由相同或不同投與途徑向個體投與。 VII.套組
本發明亦提供包含本文所述之任何或所有抗體之套組。本發明之套組包括包含本文所述之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之一或多個容器及根據本文所述之本發明方法中之任一者之使用說明書。一般而言，此等說明書包含用於上述治療性治療之抗體投與之說明。在一些實施例中，提供套組用於產生單劑量投藥單位。在某些實施例中，套組可含有具有乾燥蛋白質之第一容器及具有水性調配物之第二容器。在某些實施例中，包括含有施料器(例如，單室及多室預填充注射器(例如，液體注射器及冷凍乾燥物注射器)之套組。
與抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之用途有關之說明書一般包括關於用於預期治療之劑量、給藥時程及投藥途徑的資訊。容器可呈單位劑型、散裝封裝(例如多劑量封裝)或次單位劑量。本發明之套組中供應之說明書為通常在標籤或藥品說明書(例如套組中包括之紙片)上之書面說明書，但機器可讀說明書(例如磁化或光學儲存盤上載有的說明書)亦為可接受的。
本發明之套組在適合封裝中。適合的封裝包括但不限於小瓶、瓶子、罐、可撓性封裝(例如密封的Mylar或塑膠袋)及其類似物。亦涵蓋用於與特定裝置，諸如吸入器、經鼻投與裝置(例如，霧化器)或輸注裝置(諸如小型泵)組合之封裝。套組可具有無菌進入孔(例如，容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。容器亦可具有無菌進入孔(例如，容器可為靜脈內溶液袋或具有可藉由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為本發明之抗αvβ8整合素抗體。容器可進一步包含如本文所述之另一種治療劑。
套組可進一步包含至少一種抗PD1抗體，諸如但不限於納武單抗、派立珠單抗、斯帕塔利單抗、皮立珠單抗、緹勒珠單抗、賽咪單抗、薩山單抗(mAb7、RN888、PD-06801591)、AMP-224、AMP-514。
套組可視情況提供諸如緩衝劑之額外組分及說明性資訊。通常，套組包含容器及容器上或與容器相連之標籤或藥品說明書。
本發明亦提供診斷套組，其包含本文所述之抗體或其抗原結合片段之任一者或所有。診斷套組適用於例如偵測樣品中αvβ8整合素之存在。在一些實施例中，診斷套組可用於鑑別患有潛在的疾病、病症或病況之個體，該疾病、病症或病況使個體處於罹患αvβ8整合素介導之疾病、病症或病況或αvβ8整合素缺陷疾病、病症或病況風險下。在一些實施例中，診斷套組可用於偵測疑似患有αvβ8整合素介導之疾病或αvβ8整合素缺陷疾病、病症或病況之個別中αvβ8整合素之存在及/或含量。
本發明之診斷套組包括包含本文所述之抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之一或多個容器及根據本文所述之本發明方法中之任一者之使用說明書。一般而言，此等說明書包含抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段之使用描述，以偵測處於αvβ8整合素介導之疾病或αvβ8整合素缺陷疾病、病症或病況之風險下或疑似患有αvβ8整合素介導之疾病或αvβ8整合素缺陷疾病、病症或病況的個體中之αvβ8整合素之存在。在一些實施例中，例示性診斷套組可經組態以含有試劑(諸如抗αvβ8整合素抗體或其抗原結合片段)、陰性對照樣品、陽性對照樣品及使用套組之說明。 VIII.等效物
前述描述及以下實例詳述本發明之某些具體實施例，且描述本發明人預期之最佳模式。然而，將瞭解，無論以文字呈現之前述內容如何詳細，本發明可以許多方式實踐，且本發明應根據所附申請專利範圍及其任何等效物解釋。
雖然已參考不同申請案、方法、套組及組合物描述所揭示教示，但將瞭解在不背離本文中之教示及下文所主張之本發明情況下可進行不同變化及修改。提供以下實例以更好地說明本發明之教示內容，且並不意欲限制本文中所呈現之教示內容之範疇。儘管已在此等例示性實施例方面描述本發明教示，但熟習此項技術者將容易理解在無不當實驗情況下此等示例性實施例之大量變化及修改為可能的。所有該等變化及修改在當前教示之範疇內。
本文中所引用之全部參考文獻(包括專利、專利申請案、論文、課本及其類似物)及其中引用的參考文獻至其尚未引用之程度，在此以全文引用之方式併入本文中。在所併入文獻及類似材料中之一或多者(包括但不限於定義之術語、術語用法、所描述之技術或其類似物)與本申請案不同或矛盾的情況下，以本申請案為準。 IX.通用技術
應理解，本發明不限於特定合成製備方法，其當然可有所變化。除非本文中另外定義，否則結合本發明使用之科學與技術術語應具有由一般技術者通常理解之含義。此外，除非上下文另外需要，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。一般而言，本文所述之與細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白與核酸化學及雜交結合使用的命名法及其技術為此項技術中熟知且常用者。
除非另外指示，否則本發明之實踐將採用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學及免疫學之習知技術，其完全處於熟習此項技術者之範圍內。該等技術在諸如以下之文獻中充分解釋：Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第二版(Sambrook等人, 1989) Cold Spring Harbor Press；Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait編, 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis編, 1998) Academic Press；Animal Cell Culture (R.I. Freshney編, 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather及P.E. Roberts, 1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths及D.G. Newell編, 1993-1998) J. Wiley and Sons；Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.)；Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir及C.C. Blackwell編)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller及M.P. Calos編, 1987)；Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel 等人, 編, 1987)；PCR:  The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等人, 編, 1994)；Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan等人, 編, 1991)；Sambrook及Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001)；Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002)；Harlow及Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998)；Coligan等人, Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY (2003)；Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)；Immunobiology (C.A. Janeway及P. Travers, 1997)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies:  a practical approach (D. Catty.編, IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal antibodies:  a practical approach (P. Shepherd及C. Dean,編, Oxford University Press, 2000)；Using antibodies:  a laboratory manual (E. Harlow及D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)；The Antibodies (M. Zanetti及J.D. Capra, 編, Harwood Academic Publishers, 1995)。
酶促反應及純化技術係根據製造商之說明書如此項技術中通常所實現或如本文中所述來進行。本文所述之與分析化學、生物化學、免疫學、分子生物學、合成有機化學、及醫學及醫藥化學結合使用之命名法、及其實驗室程序及技術為此項技術中熟知且常用者。標準技術用於化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及遞送以及患者治療。 X.生物寄存
本發明之代表性材料於2018年2月13日寄存於美國弗吉尼亞州20110-2209馬納薩斯10801大學大街之美國菌種保存中心。具有ATCC寄存編號PTA-124917之載體ADWA11 VH05-02 -VH包含編碼抗體ADWA11 2.4，亦稱為VH05-2_VK01(2.4)及ADWA11 5-2 2.4之重鏈可變區之DNA***序列。具有ATCC寄存編號PTA-124918之載體ADWA11 VK2.4 -VL包含編碼抗體ADWA11 2.4，亦稱為VH05-2_VK01(2.4)及ADWA11 5-2 2.4之輕鏈可變區之DNA***序列。
按照國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure) (布達佩斯條約(Budapest Treaty))及其下條例之規定進行存放。此保證維持自寄存之日起30年之寄存物之活力培養。寄存將由ATCC在布達佩斯條約之條款下提供，且受制於Pfizer Inc.與ATCC之間的協議，其保證在相關美國專利發佈後或在任何美國或外國專利申請案對公眾公佈後(不分先後)，公眾可永久且無限制地利用寄存培養物之子代，且保證由美國專利及商標局委員根據35 U.S.C.第122節及依據其之委員規則(包括特定參考886 OG 638之37 C.F.R.第1.14節)經授權所確定者可利用子代。
本申請案之擁有人已同意，若在適合條件下培養時，處於寄存之材料的培養物死亡或丟失或破壞，則將通知以即時用另一相同材料置換該等材料。寄存材料之可用性不解釋為許可在違反由任何政府部門根據其專利法律授予權利之情況下實踐本發明。 實例
參考以下實驗性實例來進一步詳細描述本發明。除非另外指定，否則提供此等實例僅出於說明的目的，且不意欲限制。因此，本發明決不應解釋為限於以下實例，而應解釋為涵蓋由於本文所提供之教示而變得明顯之任何及所有變化形式。實例 1 ： 抗 α v β 8 整合素小鼠融合瘤抗體之產生
根據如美國專利第9,969,804號中一般所述之方法產生抗人類αvβ8整合素之小鼠融合瘤抗體，該專利以全文引用之方式併入本文中。
簡言之，使雜交至遠親雜交CD1背景以准許出生後存活之整合素β8基因剔除小鼠以每兩週50 μg/小鼠之劑量用重組型人類αvβ8整合素(R&D Systems，4135-AV-050)免疫，直至產生可接受滴定濃度之抗αvβ8抗體。來自免疫小鼠之血清隨後藉由固相免疫檢定篩選以鑑別用於融合瘤產生之小鼠。
來自所產生融合瘤之抗體使用經轉染以表現整合素αvβ8或αvβ3或αvβ6作為陰性對照之SW480細胞進一步藉由流動式細胞量測術表徵。Sw480細胞除了αvβ5通常不表現任何αv整合素。鑑別小鼠融合瘤抗體ADWA-11 (亦稱為ADWA11)，且為確認此抗體之特異性，對使用經標記ADWA-11或抗αvβ5 (Alula)或αvβ3 (Axum-2)或αvβ6 (10D5)之抗體對各細胞系進行流動式細胞量測術(Su等人, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 36:377-386, 2007；Su等人, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 185: 58-66, 2012；Huang等人, J. Cell Sci. 111 (Pt 15): 2189-2195)。
細胞黏附檢定亦用於用TGFβ1潛伏相關肽1 μg/mL塗佈之培養皿上表現整合素αvβ8之U251細胞進行(Kueng等人, Anal. Biochem. 182: 16-19, 1989)。阻斷TGFβ活性藉由TMLC螢光素酶檢定確定，其利用表現驅使螢火蟲螢光素酶表現之PAI-1啟動子之TGFβ敏感部分之貂肺上皮細胞(Abe等人, Anal. Biochem. 216:276-284, 1994)。基於如本文所述一般進行之融合瘤篩檢，針對進一步評估選擇小鼠融合瘤抗體ADWA-11。實例 2 ： 抗 α v β 8 整合素小鼠融合瘤抗體之人類化
如美國專利第9,969,804號中所揭示及如例如本說明書之SEQ ID NO: 20-33及71-76中所闡述之小鼠融合瘤抗體ADWA-11藉由將鼠類CDR序列接枝至如表1中所列之各種人類生殖系構架中人類化，該等構架包括輕鏈生殖系構架IGKV2-28、IGKV2-30、IGKV4-1、IGKV1-39 (在本文中亦稱為DPK9)及IGKV3-11以及重鏈生殖系構架IGHV3-7 (在本文中亦稱為DP54)、IGHV1-46、IGHV3-23、IGHV3-30、IGHV1-69及IGHV3-48 (參見例如IMGT 資料庫 )。
包括一組如SEQ ID NO: 20-33及71-76中所闡述之六個鼠類CDR序列的在本文中稱為「人類化ADWA-11」之人類化抗體接枝至IGKV1-39 (例如，DPK9)輕鏈生殖系構架及IGHV3-7 (例如，DP54)重鏈生殖系構架中。亦嘗試其他生殖系構架變異體，如下表1.1及1.2中所示。表 1.1
人類化變異體 SEQ ID NO
ADWA11 IGHV1-46/IGKV1-39 VH: SEQ ID NO: 34； VL: SEQ ID NO: 65
ADWA11 IGHV1-46/IGKV2-28 VH: SEQ ID NO: 34； VL: SEQ ID NO: 62
ADWA11 IGHV1-46/IGKV3-11 VH: SEQ ID NO: 34； VL: SEQ ID NO: 66
ADWA11 IGHV1-46/IGKV2-30 VH: SEQ ID NO: 34； VL: SEQ ID NO: 63
ADWA11 IGHV1-46/IGKV4-1 VH: SEQ ID NO: 34； VL: SEQ ID NO: 64
ADWA11 IGHV1-69/IGKV1-39 VH: SEQ ID NO: 37； VL: SEQ ID NO: 65
ADWA11 IGHV1-69/IGKV2-28 VH: SEQ ID NO: 37； VL: SEQ ID NO: 62
ADWA11 IGHV1-69/IGKV3-11 VH: SEQ ID NO: 37； VL: SEQ ID NO: 66
ADWA11 IGHV1-69/IGKV2-30 VH: SEQ ID NO: 37； VL: SEQ ID NO: 63
ADWA11 IGHV1-69/IGKV4-1 VH: SEQ ID NO: 37； VL: SEQ ID NO: 64
ADWA11 IGHV3-30/IGKV1-39 VH: SEQ ID NO: 36； VL: SEQ ID NO: 65
ADWA11 IGHV3-30/IGKV2-28 VH: SEQ ID NO: 36； VL: SEQ ID NO: 62
ADWA11 IGHV3-30/IGKV3-11 VH: SEQ ID NO: 36； VL: SEQ ID NO: 66
ADWA11 IGHV3-30/IGKV2-30 VH: SEQ ID NO: 36； VL: SEQ ID NO: 63
ADWA11 IGHV3-30/IGKV4-1 VH: SEQ ID NO: 36； VL: SEQ ID NO: 64
ADWA11 IGHV3-23/IGKV1-39 VH: SEQ ID NO: 35; VL: SEQ ID NO: 65
ADWA11 IGHV3-23/IGKV2-28 VH: SEQ ID NO: 35; VL: SEQ ID NO: 62
ADWA11 IGHV3-23/IGKV3-11 VH: SEQ ID NO: 35; VL: SEQ ID NO: 66
ADWA11 IGHV3-23/IGKV2-30 VH: SEQ ID NO: 35; VL: SEQ ID NO: 63
ADWA11 IGHV3-23/IGKV4-1 VH: SEQ ID NO: 35; VL: SEQ ID NO: 64
ADWA11 IGHV3-48/IGKV1-39 VH: SEQ ID NO: 38; VL: SEQ ID NO: 65
ADWA11 IGHV3-48/IGKV2-28 VH: SEQ ID NO: 38; VL: SEQ ID NO: 62
ADWA11 IGHV3-48/IGKV3-11 VH: SEQ ID NO: 38; VL: SEQ ID NO: 66
ADWA11 IGHV3-48/IGKV2-30 VH: SEQ ID NO: 38; VL: SEQ ID NO: 63
ADWA11 IGHV3-48/IGKV4-1 VH: SEQ ID NO: 38; VL: SEQ ID NO: 64
ADWA11嵌合對照   
表 1.2
名稱 相應生殖系 SEQ ID NO: 序列
ADWA11 VH1 IGHV1-46 34 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYYMN WVRQAPGQGLEWIGWIDPDNGNTIYDQKFQ GRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11 VH2 IGHV3-23 35 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWIGWIDPDNGNTIYDDSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11 VH3 IGHV3-30 36 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWIGWIDPDNGNTIYDDSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11 VH4 IGHV1-69 37 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDYYMN WVRQAPGQGLEWIGWIDPDNGNTIYDQKFQG RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11 VH5 IGHV3-48 38 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYMN WVRQAPGKGLEWIGWIDPDNGNTIYDDSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRLLMDY WGQGTLVTVSS   
ADWA11 VK1 IGKV2-28 62 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSTKSLLHFNGNTYLF WYLQKPGQSPQLLIYYMSNLAS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11 VK2 IGKV2-30 63 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSTKSLLHFNGNTYLF WFQQRPGQSPRRLIYYMSNLAS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11 VK3 IGKV4-1 64 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGQPPKLLIYYMSNLAS GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11 VK4 IGKV1-39 65 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGKAPKLLIYYMSNLAS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
ADWA11 VK5 IGKV3-11 66 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSTKSLLHFNGNTYLF WYQQKPGQAPRLLIYYMSNLAS GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCMQSLEYPFT FGQGTKVEIK   
比較小鼠融合瘤抗體ADWA-11 (稱作「融合瘤mADWA-11」及「mADWA11」)、人類化ADWA-11抗體(「huADWA11-2.4」)及IGHV3-07及IGKV1-39生殖系序列之重鏈可變區及輕鏈可變區胺基酸序列的序列比對展示於圖1A及1B中。帶下劃線的胺基酸殘基為根據Kabat之CDR序列，加粗胺基酸殘基為根據Chothia之CDR序列。實例 3 ： 將構架突變引入人類化抗 α v β 8 整合素抗體中
如表2中所指示，與小鼠融合瘤抗體ADWA11之結合親和力相比，為改善人類化ADWA-11抗體對αvβ8整合素之結合親和力，產生在重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)中具有構架取代之幾種變異體。此實例中所述之重鏈殘基根據SEQ ID NO: 127編號。此實例中所述之輕鏈殘基根據SEQ ID NO: 128編號。表 2 . 引入人類化 ADWA11 抗體中之構架取代
變異 ADWA11 VH 及 VL 區 替代名稱 相對於 SEQ ID NO : 127 ( 對於 重鏈殘基 ) 及 SEQ ID NO : 128 ( 對於輕鏈殘基 ) 之 胺基酸取代
adwa_VH_1.1 (SEQ ID NO: 88) ADWA11 VH01    T28N、F29I
adwa_VH_1.2 (SEQ ID NO: 89) ADWA11 VH02 T28N、F29I、R72A
adwa_VH_1.3 (SEQ ID NO: 90) ADWA11 VH03 T28N、F29I、R72A、A49G、L79A
adwa_VH_1.4 (SEQ ID NO: 91) ADWA11 VH04 T28N、F29I、R72A、N74T、A75S
adwa_VH_1.5 (SEQ ID NO: 39) ADWA11 VH05 ADWA11 VH05_VK1 T28N、F29I、R72A、A49G、L79A、N74T、A75S
adwa_VL_1.1 (SEQ ID NO: 47) ADWA11 VK01 ADWA11_VK01 (1) L46R
adwa_VL_1.2 (SEQ ID NO: 92) ADWA11 VK02 L46R、Y36F
人類化ADWA11抗體變異體由合併表2中所列之各組構架取代產生。該等組合產生具有ADWA11 VH01、ADWA11 VH02、ADWA11 VH03、ADWA11 VH04或ADWA11 VH05之VH及ADWA11 VK01或ADWA11 VK02之VL之抗體。
如本文一般所述產生及評估人類化ADWA11抗體變異體ADWA11 VH01/VK01、ADWA11 VH02/VK01、ADWA11 VH03/VK01、ADWA11 VH03/VK02及ADWA11 VH05/VK01。
人類化ADWA11抗體變異體指定在VH (SEQ ID NO:88)中包括T28N及F29I取代及在VL (SEQ ID NO:47)中包括L46R取代之ADWA11 VH01/VK01。
人類化ADWA11抗體變異體ADWA11 VH02/VK01在VH (SEQ ID NO:89)中包括T28N、F29I及R72A取代，及在VL (SEQ ID NO:47)中包括L46R取代。
人類化ADWA11抗體變異體ADWA11 VH03/VK01在VH (SEQ ID NO:90)中包括T28N、F29I、R72A、A49G及L79A取代及在VL (SEQ ID NO:47)中包括L46R取代。
人類化ADWA11抗體變異體ADWA11 VH03/VK02在VH (SEQ ID NO:90)中包括T28N、F29I、R72A、A49G及L79A取代，及在VL (SEQ ID NO:92)中包括L46R及Y36F取代。
人類化ADWA11抗體變異體ADWA11 VH05/VK01在VH (SEQ ID NO: 39)中包括T28N、F29I、R72A、A49G、L79A、N74T及A75S取代，及在VL (SEQ ID NO: 47)中包括L46R取代。
測定且在表3中列舉αvβ8整合素之ADWA11 VH01/VK01、ADWA11 VH02/VK01、ADWA11 VH03/VK01、ADWA11 VH03/VK02及ADWA11 VH05/VK01之Fab結合親和力。另外，亦測定各抗體之抑制TGF-β活化之IC50值，且列於表3中。表 3 . 人類化 ADWA11 抗體變異體之表徵
      Fab 親和力 IgG 效能 TGFB 檢定
抗體名稱 ka kd KD (M) KD (pM) IC50 (pM)
   小鼠融合瘤抗體ADWA-11 VH: SEQ ID NO: 20 VL: SEQ ID NO: 21 亦稱為： 融合瘤mADWA-11 9.22E+04 4.86E-05 5.36E-10 536 183 (n=3)
人類化變異體 (DP54/DPK9) ADWA11 VH01/VK01 VH: SEQ ID NO: 88 VL: SEQ ID NO: 47 亦稱為： VH01/VK01 Fab 4.13E+04 2.51E-04 6.86E-09 6860 8473 (n=2)
ADWA11 VH02/VK01 VH: SEQ ID NO: 89 VL: SEQ ID NO: 47 亦稱為： VH02/VK01 Fab 1.30E+05 2.44E-04 1.89E-09 1890 1756 (n=2)
ADWA11 VH03/VK01 VH: SEQ ID NO: 90 VL: SEQ ID NO: 47 亦稱為： VH03/VK01 Fab 1.36E+05 ＜1E-05 7.35E-11 ＜100 138   
ADWA11 VH03/VK02 VH: SEQ ID NO: 90 VL: SEQ ID NO: 92 亦稱為： VH03/VK02 Fab 1.40E+05 5.23E-05 3.73E-10 370 223   
ADWA11 VH05/VK01 VH: SEQ ID NO: 39 VL: SEQ ID NO: 47 亦稱為： VH05-2_VK01； VH05-2_VK01親本；及 VH05/VK01 Fab 1.87E+05 ＜1E-05 5.00E-11 ＜100 148 (n=3)
如表3中所示，ADWA11 VH03/VK01、ADWA11 VH03/VK02及ADWA11 VH05/VK01各自證明與小鼠融合瘤抗體ADWA-11相比改善的αvβ8整合素之結合親和力。ADWA11 VH03/VK01 (GBT)及ADWA11 VH05/VK01各自結合至αvβ8整合素，其中KD低於100 pM，其表示比起536 pM之KD，至少5倍的KD值，其針對小鼠融合瘤抗體ADWA-11測定。此外，ADWA11 VH03/VK01及ADWA11 VH05/VK01各自證明與小鼠融合瘤抗體ADWA-11相比，抑制TGF-β反式活化較低的IC50值。
如本文一般所述進一步測定，ADWA11 VH05/VK01亦保持小鼠融合瘤抗體ADWA-11之活性、特異性及物種交叉反應性。因此，此實例證明與小鼠融合瘤抗體ADWA11之結合親和力相比，αvβ8整合素之人類化ADWA-11抗體之結合親和力得到改善。 實例4：人類化ADWA11抗體變異體之最佳化
如表4中所列之單胺基酸取代針對其改善人類化抗體ADWA11 VH05/VK01之穩定性及/或降低免疫原性的能力評估。此實例中所述之重鏈殘基根據ADWA11 VH05 (SEQ ID NO: 39)編號。此實例中所述之輕鏈殘基根據ADWA11 VK01 (SEQ ID NO: 47)編號。表 4 . 單胺基酸取代
相對於 ADWA11 VK01 ( SEQ ID NO : 47 ) 之輕鏈取代 相對於 ADWA11 VH05 ( SEQ ID NO : 39 ) 之 重鏈取代
L30S K30A
Y55A N55Q
M56A N57Q
N58S D61E
A60Q P62A
M94Q K63A
L97Y F64V
F101L   
F101W   
Q105G   
如本文中進一步所示，發現包括重鏈之可變區中之K30A、N55Q、N57Q、D61E或P62A及輕鏈之可變區中之L30S、M56A、N58S、M94Q、L97Y或Q105G之單個取代保持親本分子之活性(圖4A-4B)。另外，亦評估如表5中所列之不同單胺基酸取代之組合，且如本文中進一步描述(圖4C)，發現含有雙突變(包括N55Q及D61E)或三突變(包括N55Q、D61E及F64V)之重鏈序列保持親本分子之活性。
更特定言之，產生包括表5中所列之胺基酸取代之組合且稱作ADWA11 2.1 (「2.1」)、ADWA11 2.2 (「2.2」)、ADWA11 2.3 (「2.3」)及ADWA11 2.4 (「2.4」)的ADWA11 VH05/VK01變異體。如本文中進一步描述展示ADWA11 VH05-2/VK01變異體ADWA11 2.1及ADWA11 2.4以具有更有利的表現及活性特性。此實例證明，單胺基酸取代改善人類化抗體ADWA11 VH05/VK01之穩定性及/或降低免疫原性。表 5 . 胺基酸取代之組合
純系名稱 替代名稱 相對於 ADWA11 VK01 ( SEQ ID NO : 47 ) 之輕鏈取代 相對於 ADWA11 VH05 ( SEQ ID NO : 39 ) 之 重鏈取代
2.1 VH: SEQ ID NO: 6 VL: SEQ ID NO: 67 ADWA11 2.1 VH05-2_VK01(2.1) L30S、M94Q、Q105G N55Q、D61E
2.2 VH: SEQ ID NO: 6 VL: SEQ ID NO: 68 ADWA11 2.2 VH05-2_VK01(2.2) L30S、L97Y、Q105G N55Q、D61E
2.3 VH: SEQ ID NO: 6 VL: SEQ ID NO: 69 ADWA11 2.3 VH05-2_VK01(2.3) L30S、M56S、M94Q、Q105G N55Q、D61E
2.4 VH: SEQ ID NO: 6 VL: SEQ ID NO: 7 ADWA11 2.4 VH05-2_VK01(2.4) ADWA11 5-2 2.4    L30S、N58S、M94Q、Q105G N55Q、D61E
2.1 (F64V) VH: SEQ ID NO: 93 VL: SEQ ID NO: 67 ADWA11 2.1 (F64V) VH05-2(F64V) VK01(2.1) L30S、M94Q、Q105G N55Q、D61E、F64V
2.2 (F64V) VH: SEQ ID NO: 93 VL: SEQ ID NO: 68 ADWA11 2.2 (F64V) VH05-2(F64V) VK01(2.2) L30S、L97Y、Q105G N55Q、D61E、F64V
2.3 (F64V) VH: SEQ ID NO: 93 VL: SEQ ID NO: 69 ADWA11 2.3 (F64V) VH05-2(F64V) VK01(2.3) L30S、M56S、M94Q、Q105G N55Q、D61E、F64V
2.4 (F64V) VH: SEQ ID NO: 93 VL: SEQ ID NO: 7 ADWA11 2.4 (F64V) VH05-2(F64V) VK01(2.4) L30S、N58S、M94Q、Q105G N55Q、D61E、F64V
實例 5 ： 無效應功能之抗 α v β 8 抗體之產生
具有減少之Fcγ受體結合及減少之效應功能(例如，減少之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)及/或減少之補體依賴性細胞毒性(CDC)功能)之抗αvβ8整合素抗體藉由將本發明之輕鏈可變區及重鏈可變區次選殖至免疫球蛋白G (IgG)分子中產生，且如表1中所列。
為產生無效應功能之小鼠抗體，將來自小鼠融合瘤抗體ADWA-11之可變區次選殖至含有如美國公開案第US2009/0155256號中所概述之E233P、E318A、K320A及R322A單胺基酸取代的小鼠IgG1 Fc主鏈中。此抗體在本文中稱為ADWA-11_4mut及mIgG_4mut。結合至小鼠avB8之ADWA-11_4mut使用C8-S小鼠星形膠質細胞細胞(ATCC)評估，且阻斷TGFB活化使用共培養TMLC螢光素酶檢定中之C8-S細胞確定。
為產生無效應功能之人類抗體，將來自人類化抗體之ADWA11 VH05VK01之可變區次選殖至含有鉸鏈區中之L234A、L235A及G237A單胺基酸取代的人類IgG1 Fc主鏈(例如，如本文所述)中，以使得鉸鏈區包含胺基酸序列EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGA P (SEQ ID NO: 126)代替野生型鉸鏈區胺基酸序列EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 125)。無效應功能之此人類單株抗體在本文中稱為hIgG_VH05VK01。
在以下序列中鑑別hIgG_VH05VK01之輕鏈(SEQ ID NO: 123)及重鏈(SEQ ID NO: 124)之各種特點。ADWA11 VK01 之輕鏈
Figure 02_image001
ADWA11 VH05 之重鏈
Figure 02_image003
在以上人類化ADWA11VH05VK01之輕鏈及重鏈序列中，CDR序列帶下劃線；N鍵聯之糖基化共同序列位點在重鏈之胺基酸殘基N295、S296及T297處；潛在裂解位點在重鏈之胺基酸殘基D52及P53處；潛在去醯胺位點在輕鏈之胺基酸殘基N33、G34、N35及T36及重鏈之胺基酸殘基N57、T58、N77、S78、N84及S85處；潛在異構化位點在重鏈之胺基酸殘基D90及T91處；潛在甲硫胺酸氧化位點在輕鏈之胺基酸殘基M4及M56及重鏈之M34、M102及M426處；三丙胺酸突變在重鏈之胺基酸殘基A232、A233及A235處；且CDR外之非人類殘基為輕鏈之胺基酸殘基R51及重鏈之G49、A72、T74、S75及A79。此實例中所述之重鏈及輕鏈中之殘基分別根據SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 123編號。實例 6 ： 藉由 ELISA 評估抗 α v β 8 整合素抗體 ELISA 方法
生物素標記人類αvβ8整合素(0.6 µg/ml之50 µl)捕獲於用抗生蛋白鏈菌素塗佈之ELISA板上。阻斷及洗滌後，所關注之抗體(例如，鼠類、嵌合或人類化變異體)以各種稀釋度添加至不同孔中，且在室溫下培育1小時。洗滌後，偵測抗體、抗人類IgG-HRP經添加，且在室溫下培育1小時。洗滌後，添加酶受質(TMB)以顯影顏色10分鐘。酶反應藉由添加0.16 M硫酸淬滅，且在450 nm處量測最終信號強度。結果
針對抗密切相關之整合素人類αvβ3及人類αvβ6之結合反向篩選經證實結合人類αvβ8 (hαvβ8)整合素之小鼠融合瘤抗體以選擇特異性結合至hαvβ8之鼠類抗體。小鼠融合瘤抗體ADWA11對hαvβ8整合素具有特異性，且未結合至密切相關之整合素hαvβ3或hαvβ6 (圖2)。然而，人類化ADWA11抗體ADWA11 VH05/VK01展示與小鼠融合瘤抗體ADWA11相比實質上改善的αvβ8整合素之親和力(圖3A-3B)。
亦藉由結合至hαvβ8整合素之ELISA評估具有如表4及5中所列之單胺基酸取代或胺基酸取代之組合的ADWA11 VH05/VK01之抗αvβ8整合素Fab分子(圖4A-4C)。如圖4A中所示，在重鏈可變區中具有K30A、N55Q、N57Q、D61E、P62A或K63A單胺基酸取代之Fabs保持hαvβ8之結合親和力。如圖4B中所示，與親本抗體相比，輕鏈可變區中具有Y55A、A60Q、F101L或F101W單胺基酸取代之Fab顯示與hαvβ8之結合親和力降低。如圖4C中所示，具有如表5中所列之胺基酸取代之組合之Fab保持hαvβ8之結合親和力。
此實例證明，人類化ADWA11抗體ADWA11 VH05/VK01展示與小鼠融合瘤抗體ADWA11相比αvβ8整合素之親和力實質上得到改善，且具有單胺基酸取代之一些Fab保持hαvβ8之結合。實例 7 ： 藉由 Biacore™ 評估抗 α v β 8 整合素抗體 方法
生物素標記重組αvβ8整合素捕獲於經抗生蛋白鏈菌素塗佈之Biacore™晶片(GE Healthcare Life Sciences)上，且結合反應相對於Fab片段之時間在一系列Fab濃度內量測。獲得與動力學曲線擬合重疊之代表性背景減除Biacore™感測器圖譜。
更特定言之，重組αvβ8整合素(例如，R&D Systems)為藉由一級胺標記之生物素，且使用Biacore™ T200儀器(GE Healthcare Life Sciences)固定於感測器晶片SA上。Fab結合實驗在25℃下使用30 µl/min流動速率在0.01 M HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、1-2 mM MgCl2 及0.005% v/v界面活性劑P20 (HBS-P)緩衝液中進行。締合經監測5-10分鐘，且針對各Fab濃度再解離15-20分鐘。每次注射後該等晶片表面用IgG溶離緩衝液(Thermo Fisher Scientific)再生。所有資料使用Biacore™ T200 Evaluation軟體分析。資料使用與無捕獲之整合素之抗生蛋白鏈菌素偶合之相鄰流動細胞進行雙重背景減除，且緩衝液僅注射。獲得至少三次實驗之動力學常數，且報導為平均值。結果
評估結合至來自各種物種之αvβ8整合素之抗體。小鼠融合瘤ADWA-11 Fab及人類化ADWA-11 VH05-2/VK01(2.4) Fab均發現與其他物種之αvβ8整合素交叉反應。小鼠融合瘤ADWA-11 Fab與人類αvβ8整合素、食蟹獼猴αvβ8整合素及小鼠αvβ8整合素交叉反應。小鼠融合瘤ADWA-11 VH05-2/VK01(2.4) Fab與人類αvβ8整合素、食蟹獼猴αvβ8整合素及小鼠αvβ8整合素交叉反應。另外，此等抗體針對其結合至相關整合素hαvβ3或hαvβ6之能力評估。如圖5中所示，此等抗體對hαvβ8具有特異性，且在Biacore檢定中未結合至密切相關之整合素hαvβ3或hαvβ6。
表6中所列之親和力量測之比較展示與結合至人類αvβ8整合素及小鼠αvβ8整合素之小鼠融合瘤ADWA-11 Fab之KD相比，人類化ADWA-11 Fab對結合至人類αvβ8整合素及小鼠αvβ8整合素兩者具有較低KD。更特定言之，與小鼠融合瘤ADWA-11 Fab之各別KD值相比，人類化ADWA-11 Fab對結合至人類αvβ8整合素具有低2.5倍的KD，且對結合至小鼠αvβ8整合素具有低約3.5倍的KD。此等資料展示人類化抗αvβ8抗體優於小鼠融合瘤抗體之總體實質上的親和力改善(圖6A-6B及表6)。
為評估Fab ADWA11 2.4，在本文中亦稱為ADWA-11 VH05-2/VK01(2.4)及ADWA11 5-2 2.4及親本小鼠IgG之單體KD，重組人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8固定於Biacore晶片上，且Fab之ka及kd如本文一般所述測定(表6)。ADWA11 2.4證明人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8之相等親和力，其中KD ＜200 pM，然而，由於非常減緩的kd，精確測定KD為不可能的。親本小鼠IgG證明人類、食蟹獼猴及小鼠αvβ8之相等親和力KD (KD為489-536 pM) (不測試大鼠) (圖6C)。
額外Biacore實驗將ADWA11 2.4之KD估算值優化至人類及食蟹獼猴αvβ8之KD ＜ 100 pM及小鼠αvβ8之70.8 ± 19.9 pM (平均值±標準差)。表 6 . 如藉由 Biacore 評估之 α v β 8 整合素物種親和力 ( n ≥ 3 )
Fab αvβ8 物種 ka (1/Ms) kd (1/s) KD
小鼠融合瘤抗體 ADWA-11 亦稱為： 小鼠ADWA11 人類 9.22E+04 4.86E-05 5.36E-7M
小鼠 1.03E+05 5.03E-05 4.89E-7M
食蟹獼猴 9.81E+04 4.97E-05 5.07E-7M
ADWA11 5-2 2.4 亦稱為： ADWA11 2.4 VH05-2_VK01(2.4) 人類 1.61E+05 ≤3E-05 ≤2E-010
食蟹獼猴 1.72E+05 ≤2E-05 ≤2E-010
小鼠 2.57E+05 1.82E-05 ≤2E-010
大鼠 3.41E+05 ≤2E-05 ≤2E-010
人類化 ADWA11 人類 1.73E+05 3.61E-05 2.09E-7M
小鼠 1.77E+05 2.43E-05 1.37E-7M
ADWA11 VH05-2_VK01 VH: SEQ ID NO: 39 VL: SEQ ID NO: 47 亦稱為： ADWA11 VH05/VK01 VH05-2_VK01； VH05-2_VK01親本；及 VH05/VK01 Fab 人類 2.00E+05 2.37E-05 1.18E-10 M
小鼠 2.20E+05 ≤2E-5 ≤1E-10 M
大鼠 1.94E+05 3.10E-05 1.60E-10 M
食蟹獼猴 2.25E+05 ≤2E-5 ≤1E-10 M
為評估ADWA11 2.4之特異性，重組人類αvβ6及αvβ3固定於Biacore晶片上，且測定ADWA11 2.4之親本鼠類及人類化mAb變異體之結合。親本融合瘤及人類化mAb未結合αvβ3或αvβ6，同時觀測獨立BIAcore實驗中與αvβ8之結合。泛整合素αV抗體用於證明αvβ3或αvβ6重組蛋白固定於Biacore晶片上。因此，此實例亦證明αvβ8之人類化抗體之特異性。實例 8 ： 細胞結合檢定中之抗 α v β 8 整合素抗體之評估 方法
細胞結合實驗用MEM 10% hiFBS中培養之人類神經膠母細胞瘤U251 (Sigma)或C8-S (ATCC)細胞進行。生長至70-90%匯合之細胞用0.05%胰蛋白酶剝離，且用含有2% BSA之PBS洗滌兩次。
對於用過度表現人類αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8之HEK293-F細胞進行之細胞結合實驗。短暫表現全長人類整合素β3 (寄存編號NP_000203.2)、人類整合素β5 (寄存編號NP_002204.2)、人類整合素β6 (寄存編號NP_000879.2)或人類整合素β8 (寄存編號NP_002205.1)之HEK293-F細胞使用專用載體及供應商提供之方案製備。4天後採集細胞，且針對整合素表現進行分析。為表徵整合素αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8表現，在指定市售或直接結合之專用抗體中以及存活/死亡可固定細胞染色劑(Invitrogen)以1:2000培育100,000個細胞30分鐘，以區分活細胞。細胞在300公克力下短暫離心五分鐘。細胞隨後用洗滌緩衝劑(PBS+0.2% BSA)洗滌兩次，以移除過量未結合抗體，且在BD biosciences Fortessa流動式細胞儀上進行分析。
存活細胞結合方案 ： 100,000個細胞在冰上與抗αvβ8或人類IgG1_3mut同型抗體之稀釋系列一起培育三至四小時。細胞在300公克力下短暫離心五分鐘。細胞隨後用洗滌緩衝劑(PBS+0.2% BSA)洗滌三次，以移除過量未結合抗體。充分洗滌後，細胞與Fab'2抗人類Fc-PE (Invitrogen)或山羊Fab'2抗小鼠APC (Jackson Labs)以1:1000稀釋度以及存活/死亡可固定細胞染色劑(Invitrogen)以1:2000一起培育，以區分活細胞活細胞 在冰上培育全部內容物30分鐘。洗滌後，經染色細胞使用FlowJo分析軟體在BD biosciences Fortessa流動式細胞儀(針對活細胞圈選)上進行分析。不同抗體濃度下之平均螢光強度(MFI)針對各種抗體進行標繪。
固定細胞結合方案 ： 在一些情況下，細胞結合實驗用MEM或10% hiFBS中培養之人類神經膠母細胞瘤U251 (Sigma)細胞進行。生長至70-90%匯合之細胞用0.05%胰蛋白酶剝離，且用含有2% BSA之PBS洗滌兩次。U251 (25,000個細胞)與以1:2000存活/死亡可固定細胞染色劑(英傑公司)一起培育以區分活細胞。細胞在300公克力下短暫離心5分鐘，且用洗滌緩衝劑(PBS + 0.2% BSA)洗滌，隨後在室溫下用2%多聚甲醛固定10分鐘。固定細胞用洗滌緩衝劑洗滌兩次，隨後在37度下經1小時添加所關注之抗αvβ8抗體之稀釋系列。細胞用洗滌緩衝劑洗滌三次以移除過量未結合抗體。充分洗滌後，將1:1000稀釋度下之Fab'2抗人類Fc-PE (Invitrogen)或抗人類κ輕鏈-APC (Invitrogen)偵測抗體添加至細胞且在冰上培育30分鐘。洗滌後，經染色細胞使用FlowJo分析軟體在BD biosciences Fortessa流動式細胞儀(針對活細胞圈選)上進行分析。不同抗體濃度下之平均螢光強度(MFI)針對各種抗體進行標繪。結果
獲得重鏈可變區(包括F64V)或輕鏈可變區(包括L30S、M94Q、L97Y、F101L、F101W或Q105G)中具有單胺基酸取代之ADWA11 VH05/VK01 Fab或表5中稱作2.1、2.2、2.3、2.4、2.1 (F64V)、2.2 (F64V)、2.3 (F64V)及2.4 (F64V)之胺基酸取代之組合的固定U251細胞結合資料，且與親本抗體進行比較(圖7A-7C)。
亦獲得抗體mIgG_4mut及hIgG_VH05VK01 (亦稱為ADWA11 2.4且在實例5中進一步描述)之U251細胞結合資料(圖8)。U251細胞之mIgG_4mut及hIgG_3mut_VH05VK01之表觀親和力在下表7中展示。此等資料證明，與mIgG_4mut相比，hIgG_3mut_VH05VK01經測定具有較高親和力。表 7 . 來自 U251 細胞結合檢定之親和力值
ADWA11 抗體 U251 app KD (pM)
mIgG_4mut 823
hIgG_3mut_VH05VK01 430
根據如本文一般所述之方法，亦在細胞結合檢定中評估U251 (人類神經膠母細胞瘤)或C8-S (小鼠星形膠質細胞)細胞之ADWA11 2.4之表觀親和力。簡言之，細胞與連續稀釋度之ADWA11 2.4在冰上一起培育4小時，隨後在經結合抗體上用抗人類PE二級抗體偵測，且藉由流動式細胞量測術分析。ADWA11 2.4證明飽和結合至人類αvβ8及小鼠αvβ8表現細胞，其中U251 (人類αvβ8)細胞結合檢定中之平均值EC50為126 pm，標準差為加或減34 pM (圖9A；n = 3)。
在其他研究中，結合至人類U251細胞之ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)之EC50經測定為256 ± 115 pM (在七次非相依實驗中平均值±標準差)，且結合至小鼠C8-S細胞之EC50經測定為145 ± 23.7 pM (在四次非相依實驗中平均值±標準差)。
短暫過表現整合素β家族成員之HEK293F細胞結合實驗證明ADWA11 2.4特異性結合至表現人類αvβ8而非αvβ3、αvβ5或αvβ6之細胞(圖9B)。因此，ADWA11 2.4證明與親本小鼠抗體ADWA11相比改善的特徵，由此表明人類化ADWA11 2.4為潛在改善的人類治療劑。實例 9 ： 在 α v β 8 誘導之 TGF - β 活化檢定中評估抗 α v β 8 整合素抗體 方法
抗αvβ8抗體對TGFβ路徑反式活化之影響使用U251-MG (Sigma)及Mv1Lu-SMAD-螢光素酶報導體細胞來量測。在一些實驗中，C8-S小鼠星形膠質細胞使用U251細胞代替。簡言之，貂肺上皮細胞系MvLu1細胞(ATCC)經Cignal SMAD報導體(luc)慢病毒顆粒(SABioscience)以50之感染倍率(MOI)轉導。表現SMAD螢火蟲螢光素酶構造體之穩定細胞系藉由在補充有2 µg/mL嘌呤黴素之完全生長培養基(MEM加上10%胎牛血清(FBS)與L-麩醯胺酸+青黴素/鏈黴素)中培養細胞產生。對於實驗，將U251細胞(50 μL含有2%炭剝除之FBS的MEM培養基中5000個細胞)添加至透明底部、白色側壁的TC處理之96孔盤之各孔中，且在37℃下培育1小時。稀釋度系列之抗αvβ8抗體，例如FAB抗體在含有2%炭剝除之FBS的MEM培養基中製備，且以每孔25 µl添加至經接種之U251細胞。培育一小時後，將Mv1Lu-SMAD-螢光素酶報導體細胞添加(5000個細胞/孔於25 μL中)至各孔中，且在37℃下培育18小時後，螢光素酶活性根據製造商建議之方案使用Bright Glo試劑(Promega)來量測。發光在1 s整合時間內使用Envision盤讀取器來量測。結果
U251細胞之αvβ8誘導之TGF-β反式活化上之各種抗體之抑制活性藉由評估降低之螢光素酶活性監測(圖10A-10F)。
圖10A描繪如實例3中所述產生之抗體之比較，且包括ADWA11 VH05/VK01 (亦稱為VH05-VK01 Fab)與親本小鼠融合瘤抗體ADWA11 (mFab)之間之比較。藉由TGF-β反式活化檢定中表觀親和力量測之EC50值自親本小鼠融合瘤抗體ADWA11 (mFab)之4.6 nM提高至ADWA11 VH05/VK01 (亦稱為VH05-VK01 Fab)之1.3 nM。
亦評估在ADWA11 VH05/VK01之重鏈可變區或輕鏈可變區中進行之胺基酸取代對U251細胞之TGFβ反式活化的影響(圖10B-10D)。與ADWA11 VH05/VK01 Fab相比，輕鏈可變區中具有F101L或F101W單胺基酸取代之Fab顯示減少之TGFβ反式活化。
亦使用螢光素酶活性檢定監測人類化ADWA-11 IgG分子對U251細胞之αvβ8誘導之TGF-β反式活化的影響的比較(圖10E)。此等資料展示VH05/VK01-D61E及-N55Q-D61E突變體對TGFβ反式活化具有可比較的影響。
為評估ADWA11_VH05-2_VK01(2.4)，可替代地在本文中稱為ADWA11 2.4之效能，共培養系統用內源性表現TGFβ敏感螢光素酶報導體細胞系統之αvβ8的人類及小鼠細胞建立。簡言之，U251 (人類神經膠母細胞瘤)或C8-S (小鼠星形膠質細胞)細胞用貂肺上皮細胞(Mv1Lu)接種，該貂肺上皮細胞在50之感染倍率(MOI)下經Cignal SMAD報導體(luc)慢病毒顆粒(SABioscience)穩定轉導(Mv1Lu-Smad細胞)。Mv1Lu-Smad細胞對由U251或C8-S細胞產生之TGFβ起反應，且αvβ8功能之抑制可藉由螢光素酶活性之降低監測。圖10F展示與同型陰性對照抗體相比，ADWA11 2.4對U251細胞及C8-S之TGFβ反式活化之影響。
此等資料證明ADWA11 2.4比起其他抗體，包括小鼠ADWA11單株抗體為更加有效的αvβ8誘導之TGF-β之反式活化之抑制劑。用U251細胞進行之TGFβ反式活化檢定中ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)之IC50經測定為199 ± 93.6 pM (在五次非相依實驗中平均值±標準差)。實例 10 ： 抗 α v β 8 整合素抗體之免疫原性之評估
藉由T細胞增生檢定評估結合至主要組織相容性複合物(Major Histocompatiblity Complex；MHC)之肽之功能顯著性。T輔助細胞上表現之跨膜醣蛋白CD4識別MHC II級分子結合至抗原呈遞細胞(APC)之表面上之肽。此相互作用使得引起免疫反應之T輔助細胞增生。T細胞增生藉由含有羧基螢光素丁二醯亞胺基酯(CFSE)染料的個別細胞之螢光強度之減少監測。ProImmune之REVEAL®免疫原性系統T細胞檢定使用流動式細胞量測術方法以分析CFSE染料標記之細胞的***。來自各種供體之PMBC與CFSE一起培育以形成胞內螢光結合物。CFSE之螢光強度藉由各連續細胞***減半，因此允許量測細胞增生。此可靠的及可再現CFSE標記之T細胞檢定適用於測定MHCII呈遞之肽上之潛在的CD4-T細胞抗原決定基。衍生自流感/破傷風及結核菌素純化之蛋白質衍生物(PPD)之肽對照組用作細胞增生之陽性對照組。
涵蓋CDR之二十九個肽針對T細胞增生用衍生自51個供體之PBMC測試(表1，SEQ ID NO: 94-122)。CFSE標記之PBMC與測試肽一起培育七天，且CD4+ T細胞增生程度藉由流動式細胞量測術方法監測。對衍生自最佳化分子之肽有反應者之數目與對相應生殖系序列肽有反應者之數目進行比較。
包含已知MHC II級抗原決定基之參考抗原用於此研究。
結核菌素純化蛋白質衍生物(PPD)為結核分支桿菌之衍生物，且以5 µg/ml之最終檢定濃度使用。由於先前疫苗接種，亦即藉由記憶免疫反應，預期大約70-100%之PBMC供體對此蛋白質起反應。
匙孔螺血氰蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin ；KLH)為經識別及有效的初始蛋白質免疫原，其以0.25 mg/ml之最終濃度用於檢定中。通常可預期50-80%之間之供體對此蛋白質起反應，其可能由初始免疫反應驅使。
合成肽HA衍生自A型流感紅血球凝集素(PKYVKQNTLKLAT，殘基307-3192；SEQ ID NO: 129)，且以5 µM之最終檢定濃度使用。預期在至多50%之供體中引發反應。
合成肽TT (AQYIKANSKFIGITEL (SEQ ID NO: 130)，來自破傷風類毒素之TET 830修飾/T輔助抗原決定基)為通用人類破傷風毒素T細胞抗原決定基，其誘導T細胞活化且用作疫苗接種中之輔助肽。其以5 uM之最終濃度濃度使用，其中預期至多45%之供體起反應。
發現重鏈中之F64V取代(SEQ ID NO: 105)以提高免疫原性。51個供體之PBMC中之十一個在CD4+ T細胞增生檢定中響應，且供體中無一者對相應生殖系序列敏感。如表8中所示，發現包括Q105G (SEQ ID NO: 111)、L30S (SEQ ID NO: 106)、M94Q (SEQ ID NO: 107)及N58S (SEQ ID NO: 113)之其他取代各自將免疫原性降低至不同程度。與陽性對照肽相比不同CDR肽之反應者百分比在圖11中給出。表 8
對應於不同取代之肽之反應者數目 #
 取代 原始 取代後
F64V 0 11
Q105G 6 3
L30S 6 0
M94Q 6 0
N58S 5 3
# 供體 PBMC 之數量在 CD4 + T 細胞增生檢定中有反應
此等資料證明，與小鼠親本mAb ADWA11相比，包括ADWA11 2.4之本發明之某些抗體呈現降低之T細胞反應。此等結果表明ADWA11 2.4與其小鼠親本抗體相比為改善的潛在人類治療劑。實例 11 ： α v β 8 之抑制改善 EMT6 腫瘤模型中抗 PD - 1 療法之功效 方法
在此研究中，將3×105 個EMT6 (ATCC)細胞植入或皮下植入Balb/c小鼠(Charles River Laboratory)中之第四乳腺脂肪墊中。將小鼠隨機分為其腫瘤達至50 mm3 之平均值之治療組，且隨後開始治療。對於治療，藉由每四天靜脈內注射，總計三次劑量投與，小鼠接受10 mg/kg之劑量之指定抗體2A3_rat IgG (「2A3」；BioXcell)、抗PD-1抗體(「PD1」；純系RMP1-14，BioXcell)、2B8_mIgG1_4mut (「2B8」)或ADWA11_mIgG1_4mut (ADWA11)。腫瘤在兩個維度中量測以監測生長，其中體積(V) = ½ L × W2 ，且L (長度)定義為腫瘤之最長直徑，且W (寬度)垂直於L。每週2-3次記錄腫瘤量測，直至結束研究。結果
與抗PD1療法(ADA11 + PD1)組合之抗αvβ8 (ADWA11)比起抗PD1或抗αvβ8單一療法治療組協同及顯著降低腫瘤生長，且改善存活率(圖12A及12B)。
在10 mg/kg單一療法劑量組中，ADWA11治療在研究之第13天產生47.1%腫瘤生長抑制(TGI)，然而，TGI為暫時的，且無小鼠達至研究結束(在第51天0%存活率)。抗PD1單一療法治療在研究之第14天產生15% TGI，且無小鼠達至研究結束(在第51天0%存活率)。藉由比較，與抗PD-1抗體組合之ADWA11 (10 mg/kg劑量組)在研究之第14天產生90.0% TGI，且60%之小鼠達至研究結束(在第51天60%存活率)。
此等結果證明，第一次，包括ADWA11 2.4之ADWA11抗體在與PD-1之抑制劑，例如抗PD-1抗體組合時提供協同治療效果。此等資料表明ADWA11 2.4為潛在的人類治療劑，其可在與PD-1抑制劑組合時提供協同治療性抗腫瘤反應。實例 12 ： α v β 8 之抑制改善 EMT6 模型中 4 - 1BB 及抗 CTLA4 療法之功效 方法
在此EMT6腫瘤功效研究中，將1×106 個EMT6 (ATCC)細胞植入Balb/c小鼠(Charles River Laboratory)中之第四乳腺脂肪墊中。當腫瘤達至100 mm3 之平均值時隨機分組小鼠，且開始治療。小鼠接受4-1BB (MAB9371 R&D Systems，第0天及第4天1 mg/kg)、抗CTLA4 (純系9D9 BioXcell，第0天、第4天及第8天10 mg/kg)、抗αvβ8 (ADWA11，第0天、第4天及第8天10 mg/kg)、2B8_mIgG_4mut (10 mg/kg，第0天、第4天及第8天)或2A3_rat IgG (BioXcell，第0天、第4天及第8天10 mg/kg)之i.v.給藥。腫瘤在兩個維度中量測以監測生長，其中體積(V) = ½ L × W2 ，且L (長度)定義為腫瘤之最長直徑，且W (寬度)垂直於L。每週2-3次記錄腫瘤量測，直至結束研究。
免疫組織化學 ( IHC ) 分析 ：4 mm厚的福馬林固定之石蠟包埋(FFPE)之腫瘤組織部分使用定製方案及Leica Bond-max自動IHC染色機，針對CD8、CD45及顆粒酶B表現進行製備。影像使用20×放大率設置在Leica/Aperio AT2全滑動數位掃描儀上獲得。影像使用Visiopharm 7.2軟體中形成之定製演算法分析，且針對所關注之各目標進行最佳化。細胞計數對活的組織進行，且藉由活的組織面積標準化。細胞密度使用以下等式計算：細胞/平方微米= (#陽性細胞/活的腫瘤面積(μm2))×1 × 106 。目標密度百分比使用以下等式計算：染色面積(μm2)/活的腫瘤面積(μm2)。結果
與抗4-1BB或抗CTLA4組合之抗αvβ8 (ADWA11)比起抗4-1BB、抗CTLA4或抗αvβ8單一療法治療組顯著及協同降低腫瘤生長，且改善存活率(圖13)。
評估用抗αvβ8抗體治療後腫瘤浸潤性細胞密度之變化(圖15)。淋巴細胞豐度藉由CD45 (總淋巴細胞及骨髓細胞)、CD3 (總T細胞)、CD4 T細胞、CD8 T細胞及顆粒酶B (活化的CD8及NK細胞)染色之密度之IHC分析在EMT6腫瘤模型中定量。此等資料證明，抗αvβ8單一療法增加總CD45+細胞、CD4+ T細胞及CD8+ T細胞之豐度，且引起顆粒酶B表現細胞(各組n=10)之密度中非常顯著的增加。
第11天(在第0天、第3天、第6天、第9天抗體治療)自用同型對照或ADWA11 (2.4)治療之小鼠分析腫瘤組織中腫瘤淋巴細胞豐度(圖15)。ADWA11 (2.4)治療增加腫瘤微環境中總白血球(CD45+、1540±558對比2470±407)、CD8 T細胞(CD8+、76.3±62.7對比170±74.2)及細胞毒性細胞(顆粒酶B密度%，11.8±11.0對比106±35.1)之密度(在同型對比ADWA11 (2.4)治療中，每平方毫米細胞CD45+之平均數目、細胞CD8+之平均數目或顆粒酶B染色面積平均值%±標準差)。
此等結果證明，第一次，包括ADWA11 2.4之ADWA11抗體在與4-1BB之促效劑，例如抗4-1BB抗體組合時提供協同治療效果。此等資料表明ADWA11 2.4為潛在的人類治療劑，其可在與4-1BB之促效劑組合時提供協同治療性抗腫瘤反應。
此等結果亦證明，第一次，包括ADWA11 2.4之ADWA11抗體在與CTLA4之抑制劑，例如抗CTLA4抗體組合時提供協同治療效果。此等資料表明ADWA11 2.4為潛在的人類治療劑，其可在與CTLA4之抑制劑組合時提供協同治療性抗腫瘤反應。實例 13 ： α v β 8 之抑制改善 CT26 腫瘤模型中輻射療法之功效 方法
CT26 腫瘤功效研究 ：4×105 個CT26 (ATCC)細胞皮下植入Balb/c小鼠(Charles River Laboratory))之側腹中。當腫瘤達至100 mm3 之平均值時隨機分組小鼠，且開始治療。小鼠每4天，總共3次劑量接受2B8_mIgG1_4mut (內部)同型對照或ADWA11_mIgG1_4mut之10 mg/kg i.v.劑量，且在第一次給藥後第5天接受單次劑量之5Gy靶向腫瘤之輻射。腫瘤在兩個維度中量測以監測生長，其中體積(V) = ½ L × W2 ，且L (長度)定義為腫瘤之最長直徑，且W (寬度)垂直於L。每週2-3次記錄腫瘤量測，直至結束研究。
基因表現之 qPCR 分析 ：收集腫瘤組織，且使用Omin Bead Ruptor在900 μLRNeasy Plus Mini Kit中供應之裂解緩衝液中均勻化30 mg之組織。使用RNeasy Plus Mini Kit及供應商建議之方案分離來自均勻化腫瘤樣品之RNA。cDNA使用2 μg總RNA及高容量cDNA逆轉錄套組，使用供應商建議之方案合成。使用50 ng cDNA及基因特異性塔克曼引物TaqMan Universal Master Mix II及供應商建議之方案分析基因表現。ViiA7實時qPCR系統用於qPCR研究。使用建議之比較CT方法分析對於各樣品的閾值循環(CT)，且目標基因之表現報導為與同型對照組相比治療組之倍數變化。雙尾未配對Students T-test測試用於比較治療組與同型對照組，其中顯著性報導為＜ 0.05。
免疫組織化學 ( IHC ) 分析 ：4 mm厚的福馬林固定之石蠟包埋(FFPE)之腫瘤組織部分使用定製方案及Leica Bond-max自動IHC染色機，針對CD8、CD45及顆粒酶B表現進行製備。影像使用20×放大率設置在Leica/Aperio AT2全滑動數位掃描儀上獲得。影像使用Visiopharm 7.2軟體中形成之定製演算法分析，且針對所關注之各目標進行最佳化。細胞計數對活的組織進行，且藉由活的組織面積標準化。細胞密度使用以下等式計算：細胞/平方微米= (#陽性細胞/活的腫瘤面積(μm2))×1 × 106 。結果
與輻射療法組合之抗αvβ8抗體(ADWA11)比起單獨的輻射療法顯著降低腫瘤生長，且改善存活率(圖14A)。
在CT26研究中，ADWA11抗體(抗ITGαVβ8)單一療法在研究之第19天產生64.3% TGI，但反應為暫時的，且10隻小鼠中僅1隻達至研究結束(第57天10%存活率)。單獨的輻射療法(在第5天5個灰色(Gy))產生57.7%腫瘤生長抑制(第18天)，且20隻小鼠中1隻達至研究結束(第57天5%存活率)。藉由比較，與輻射療法組合之ADWA11治療產生87.7%腫瘤生長抑制(第19天，10 mg/kg ADWA11及5 Gy輻射療法劑量組)，且19隻小鼠中9隻達至研究結束(在第57天47.4%存活率)。
為研究CT26腫瘤模型中ADWA11對腫瘤淋巴細胞豐度之效果，腫瘤組織在第12天(在第0天、第4天、第8天抗體治療)自用同型對照或ADWA11 VH05-2/VK01 (抗ITGαVβ8)治療之小鼠收集，且針對淋巴細胞標記物藉由IHC分析(圖14B，頂板)。ADWA11 VH05-2/VK01治療增加總CD45+白血球之密度；同型：367±128、ADWA11 VH05-2/VK01：695±94.8 (每平方毫米細胞平均數目±標準差)。CD8+ T細胞；同型：173±79.3，ADWA11 VH05-2/VK01：374±80.4 (每平方毫米細胞平均數目±標準差)。表現細胞毒性細胞之顆粒酶B，同型：264±65.5，ADWA11 VH05-2/VK01：514±91.7 (每平方毫米細胞平均數目±標準差)於腫瘤微環境中。另外，與輻射療法組合之抗ADWA11治療增加腫瘤微環境中(倍數變化±標準差對比同型治療組)CD45 (3.86±0.979)、CD8a (5.45±3.53)、顆粒酶B (4.21±1.02)及IFNγ (5.53±2.13)之mRNA表現量(圖14B，下圖)。
此等研究證明，抗ITGαVβ8 (ADWA11_mIgG1_4mut)治療增加腫瘤微環境中活化淋巴細胞之豐度，且與靶向腫瘤之輻射組合在引起腫瘤消退及長期存活方面有效。
此等結果亦證明第一次，包括ADWA11 2.4之ADWA11抗體在與輻射療法組合時提供協同治療效果。此等資料表明ADWA11 2.4為潛在的人類治療劑，其可在與輻射療法組合時提供協同治療性抗腫瘤反應。實例 14 ： 整合素 α v β 8 作為腫瘤免疫性及腫瘤免疫療法之目標之新穎抑制劑之評估
在此研究中，藉由用重組αvβ8使Itgb8 基因剔除小鼠免疫產生之有效αvβ8阻斷單株抗體(ADWA-11)用於檢查此整合素之抑制是否可有助於抗腫瘤免疫。
在非贅生性組織中，αvβ8整合素於神經上皮、纖維母細胞、樹突狀細胞及T細胞上表現，且可活化潛伏轉型生長因子β (TGFβ)，其為重要免疫調節劑。如本文中現在所示，在癌瘤內，骨髓細胞表現αvβ8整合素且阻斷αvβ8 (ADWA-11)之有效單株抗體尤其在與其他免疫調節劑(抗PD1、抗CTLA-4或4-1BB)或放射線療法組合時在鱗狀細胞癌、乳癌及結腸癌之同基因型模型中引起生長遏制或完全腫瘤消退。用ADWA-11治療增加腫瘤浸潤及CD8+ T細胞之顆粒酶B表現，且增大促發炎與遏制腫瘤相關巨噬細胞之比率。大多數人類腫瘤表現ITGB8 mRNA，且如本文所示，在人類卵巢及腎細胞癌之活組織檢查中單核球、巨噬細胞及樹突狀細胞子組上存在表面αvβ8高表現量。此等結果將αvβ8整合素鑑別為癌症免疫療法之有前景的新穎目標。 鱗狀細胞癌模型中用 ADWA - 11 及抗 PD - 1 之 有效協同組合免疫療法
單獨或與抗PD-1抗體組合的ADWA11之影響在已建立之鱗狀細胞癌(CCK168細胞)之同基因型腫瘤模型中檢查(圖16A及圖28)。將CCK168細胞(衍生自FVB小鼠之化學誘導之鱗狀細胞癌細胞系)以1.5×104 個細胞/小鼠之劑量皮下注射至同基因型野生型FVB小鼠之背外側右側腹中。
使腫瘤生長超過14天。實驗所選小鼠具有直徑為至少5 mm之腫瘤尺寸，且基於腫瘤大小，在不同治療組中使用studylog軟體最佳分佈。稱重小鼠，且使用可跟蹤數位卡尺(Fisher Scientific，模型#14-648-17)每隔一天量測腫瘤尺寸維持研究之持續時間。當腫瘤尺寸達至或超過2000 mm3 或在腫瘤部位處產生大的潰爛時處死小鼠。
小鼠在第0天及第7天用融合瘤抗體ADWA11或同型匹配之對照抗體治療，且在第0天、第4天及第8天(第0天為療法之第一天)用小鼠抗PD-1抗體(RMP1-14，BioXcell)或其同型匹配之對照抗體治療。各組及同型對照抗體之適當的抗體以各抗體、ADWA11、抗PD-1抗體(RMP1-14，BioXcell)、對照抗體ADWA-21 (對於ADWA11)及對照2A3 (BioXcell)之10 mg/Kg之劑量腹膜內注射。對照ADWA-21結合人類而非小鼠整合素-β8。
CCK168腫瘤證明對抗PD1抗體之最少反應，但用ADWA11單一療法治療的十隻小鼠中之五隻展示腫瘤消退(圖16B-16C)。用ADWA11及抗PD1抗體之組合療法誘導十種腫瘤中有八種完全消退，且在小鼠用融合瘤ADWA11及抗PD1抗體(圖16B)或ADWA11_4mut_mIgG1及抗PD1抗體(圖28)治療時顯著增加總存活率。
在腫瘤消退及未展示後續腫瘤再生之跡象後，觀測存活小鼠至多兩年。來自組合療法後完全消退之兩次重複實驗之十三隻小鼠及用ADWA11之單一療法後完全消退之3隻小鼠用CCK168細胞再攻擊一次或兩次，且在任一者中無腫瘤生長，證明長期腫瘤免疫性之發展。
此等結果證明，第一次，包括ADWA11 2.4之ADWA11抗體在與PD-1之抑制劑，例如抗PD-1抗體組合時提供協同治療效果。此等資料表明ADWA11 2.4為潛在的人類治療劑，其可在與PD-1抑制劑組合時提供協同治療性抗腫瘤反應。 表面整合素 αvβ8 在腫瘤微環境內存在於骨髓細胞上
流動式細胞量測術用以鑑別哪種細胞類型之腫瘤表現整合素β8，假定其以αvβ8雜二聚體形式表現(圖17A及圖17B)。αvβ8表現在CCK168腫瘤內在大於80%之CD45+CD11b+F4/80+CD64+巨噬細胞上及低於20%之CD45+CD11b+F4/80-CD64-CD11c+MHCII高 樹突狀細胞上可易於偵測(圖17B)。αvβ8在所檢查巨噬細胞亞群，包括早期浸潤性(促發炎) Ly6C+細胞及免疫抑制CD206+細胞中之各者中以類似量表現(圖17B)。αvβ8亦表現於活體外CCK168腫瘤細胞上(圖18B)。亦發現活體內CD45-腫瘤及基質細胞上之αvβ8之低表現量(圖18A)。在瘤內T細胞上未發現αvβ8之表現(圖20)。動物
所有動物研究根據經University of California, San Francisco, Institutional Animal Care and Use Committee of Pfizer, Inc. Institutional Animal Care and Use Committee批准之方案進行。所用野生型FVB/N小鼠購自Jackson Laboratories (The Jackson Laboratories, stock #001800)或來自衍生自此儲備之吾等自己育種群落。野生型Balb/c小鼠購自Charles River Laboratories (Charles River Laboratories, strain code 028)。人類腫瘤處理
對於所有人類樣品，自所有個體獲得知情同意書，且工作根據機構審查委員會(IRB)批准進行。新鮮組織經收集，且UCSF免疫分析器工作流，一種針對癌症內分析免疫子組發展及最佳化的轉譯平台處理。簡言之，組織自操作房間獲得，且在切除4小時內輸送至實驗室。基於開發之標準操作程序，將組織劇烈絞碎(＜1 mm塊)且酶促消化(3 mg/ml膠原蛋白酶A，50 U/ml DNase I)。對免疫群體進行多個流動式細胞量測術(＞60個顏色)以分析已知子組及其表現之比例及平均螢光強度(αvβ8)。所有抗體均購自BD Pharmingen、eBioscience、Invitrogen或BioLegend。抗αvβ8抗體如先前所述產生。在特殊次序BD FACSAria融合流式細胞儀上進行包括細胞分選之所有流動式細胞量測術。流動式細胞量測術資料之分析使用FlowJo進行。流動式細胞量測術方案
使用剪刀及鈍解剖自小鼠分離皮下腫瘤。將腫瘤置放於具有在C10培養基(RPMI 1640，Hepes 1%，青黴素/鏈黴素1X，胎牛血清10%，丙酮酸鈉1 mM，非必需胺基酸1X及β-巰基乙醇0.45%)中製備之膠原蛋白酶XI (Sigma C9407) 2 mg/mL、玻尿酸酶(Sigma H3506) 0.5 mg/ML及DNase (Sigma DN25) 0.1 mg/mL之消化混合液的皮氏培養皿中。使用無菌剪刀絞碎腫瘤。將細胞之所得漿液轉移至50 mL錐形管(Fisher Scientific #14-432-22)中且用於絞碎腫瘤之皮氏培養皿用2 mL C10培養基沖洗以捕獲剩餘細胞。細胞在37℃下以255 rpm在振盪器中培育45分鐘。培育後，將15 mL C10培養基添加至經消化腫瘤細胞且輕輕地渦旋15秒。細胞漿液通過100 μm濾網(Falcon® #352360)進入乾淨的50 mL錐形管中。細胞在4℃下在200公克下藉由離心粒化5分鐘，且在PBS中復原。細胞計數使用Countless II FL血球計(Life Technologies)進行。
經分離單細胞製劑用於細胞表面及胞內染色。計數後，將10 × 106 個細胞轉移至用於染色之v形96孔盤之各孔中。在4℃下以1:1000用Ghost Dye™ Violet 510 (TONBO bioscience#13-0870)進行存活死亡染色20分鐘。Fc受體及非特異性結合在4℃下用抗CD16/30 (eBioscience #14061)阻斷10分鐘。在4℃下進行表面染色20分鐘。對於胞內染色，細胞在室溫下在Fix/Perm緩衝液(eBioscience #88-8824)中培育20分鐘，隨後在4℃下用抗體混合液胞內細胞介素染色20分鐘。完成染色後，將細胞轉移至流動式細胞量測術緩衝液(具有2% FBS之PBS，青黴素/鏈黴素/麩胺酸，EDTA 2 mM)中以用於分析。
用於T細胞染色實驗之抗體：ICOS FITC (eBioscience#11-9949-80)、CD25 AF780 (eBioscience#47-0251-82)、CD45.1 AF700 (BioLegend#110723)、CD8 BV605 (BioLegend#100743)、CD4 BV650 (BioLegend#100546)、Ki-67 PE-Cy7 (BD Biosciences#561283)、CTLA4 PE (BD Biosciences#553720)及FoxP3 PB-e450 (eBiosciences#48-5773-82)。
用於胞內細胞介素染色實驗之抗體：CD3 APC (eBioscience#17-0032-82)、NK1.1 APC-AF780 (eBioscience#47-5941-80)、CD45.1 AF700 (BioLegend#110723)、CD4 BV650 (BioLegend#104729)、CD8 BV605 (BioLegend#100546)、IFN-γ FITC (eBioscience#11-7311-82)、IL-17A PE-Cy7 (BioLegend#506921)、Granzyme-B PE (eBioscience#12-8898-82)、FasL PerCP-eFluor710 (eBioscience#46-5911-82)及FoxP3 PB-e450 (eBioscience#48-5773-82)。
用於骨髓細胞染色實驗之抗體：Ly6G BV785 (BioLegend#127645)、SiglecF BV785 (BD Biosciences#740956)、CD90.2 BV785 (BioLegend#10533)、B220 BV785 (BioLegend#103246)、CD45.1 AF700 (BioLegend#110724)、CD11b AF780 (eBioscience#47-0112-82)、CD206 PerCP-Cy5.5 (BioLegend#141716)、F4/80 PE (BioLegend#123109)、CD11c BV650 (BioLegend#117339)、Ly6C BV605 (BioLegend#128035)、MHC-II PB-e450 (eBioscience#48-5321)、CD24 PE-Cy7 (BioLegend#101822)、CD103  FITC (eBioscience#11-1031-82)、ADWA11 APC (在吾等實驗室中定製結合)及CD64 FITC (BioLegend#139316)。
用於NK細胞染色實驗之抗體：CD45.1 AF700 (BioLegend#110724)、CD3 APC (eBioscience#17-0032-82)、NK1.1 APC-AF780 (eBioscience#47-5941-80)、CD314-NKG2D PE (eBioscience#12-5882-82)、CD226-DNAM-1 PerCP-Cy5.5 (BioLegend#128814)、CD335-NKp46 FITC (eBioscience#11-3351-82)、CD107a-LAMP-1 PE-Cy7 (BioLegend#121620)及CD49b eFluor450 (eBioscience#48-5971-82)。
對於細胞刺激，在細胞表面及胞內染色之前刺激細胞。將每孔200 靗之C10培養基中之大約3×106 個細胞於圓底96孔盤中在5% CO2中之組織培養培育箱中在37℃下培育隔夜。將刺激混合液(Inomycin，PMA，Brefeldin-A，及莫能菌素(Monensin) 500×刺激混合液Tombo #TNB4975-UL100)添加至細胞中，該等細胞在37℃下在5% CO2中在組織培養培育箱中培育4小時。將細胞轉移至用於如上文所概述之染色之v-底部孔中。流動式細胞量測術使用BD LSRFortessa™ (BD Biosciences)進行且使用FlowJo™ (Tree Star Inc.)分析。 ADWA11 增加腫瘤浸潤且增強細胞毒性 CD8 + T 細胞之分化 ， 且升高發炎性單核球與遏制巨噬細胞之比率
亦表徵ADWA11 (有或無抗PD1)對免疫浸滲之性質之影響(Thomas等人, Cancer Cell 8:369-380, 2005；Wu等人, Cancer Immunol. Res. 2:487-500, 2014)。儘管在此模型中用抗PD1治療對腫瘤CD8+ T細胞之總數目無影響，但用ADWA11治療顯著增加CD8 T細胞浸潤，此影響為藉由免疫染色切除腫瘤最明顯之影響(圖19A-19B)。ADWA11亦顯著增加表現顆粒酶B之CD8+ T細胞之百分比(圖19C)，而用抗PD1治療不具有影響。發炎性單核球亦促進宿主免疫反應之腫瘤逃避。Ly6C在發炎性單核球上表現，且Ly6C之表現在腫瘤微環境中具有遏制特性之腫瘤相關巨噬細胞中減弱(Franklin等人, Science 344:921-925, 2014；Movahedi等人, Cancer Res. 70:5728-5739)。骨髓群體之進一步分類展示，ADWA11治療特異性增加CD45+CD11b+CD11c-Ly6G-Ly6Chigh CD206low 之積聚(圖19D) (Ostuni等人, Trends Immunol. 36:229-239, 2015；Noy等人, Immunity 41:49-61, 2014)。在所分析之時間點，治療中無一者對CD4+ T細胞數目、CD4+ FoxP3+調節性T細胞或T細胞子組表現之干擾素-γ有顯著影響，且我們無法證實IL-17在任何T細胞子組中之顯著表現(資料未示出)。
對於免疫染色，採集腫瘤且在4℃下固定於4%多聚甲醛中隔夜。在4℃下將固定腫瘤浸沒於30%蔗糖溶液中隔夜且包埋於O.C.T.化合物(組織Tek® #4583)中，且在15 靘下冷凍切片。冷凍部分藉由先前所描述之方案染色(Henderson等人, Nat. Med. 19:1617-1624, 2013；Rock等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108:E1475-1483, 2011)。簡言之，冷凍切片經滲透且用含0.3% Triton X-100及3% BSA之PBS阻斷。切片與一級抗體在室溫下一起培育隔夜，隨後與螢光團結合之一級及二級抗體一起培育，且隨後與延長金(Prolong Gold) (Invitrogen)一起安放。
用於免疫染色之抗體：大鼠抗F4/80 (Alexa Fluor 647結合，Serotec，純系C1，1:100)、兔抗磷酸化Smad3 (Epitomics，1880-1；1:100)、大鼠抗CD8 (Alexa Fluor 488結合或594結合，Biolegend，純系53-6.7, 1:100)。Alexa Fluor 488結合、555結合、647結合之驢抗兔及抗大鼠(Invitrogen)。共焦顯微法在Zeiss LSM780及LSM5 Pascal顯微鏡上進行。
所有定量使用表示樣品之薄(1 airy單位；約1 μm)光學切片高分辨率共焦影像進行。使用ImageJ軟體分析影像。各組含有來自至少5個對照組及5個所治療(ADWA11)小鼠之樣品。使用相同共焦設置隨機獲取來自各組織部分之四個影像(場設定大小為425.10×425.10 μm)。將影像置放在相同臨限值下，隨後計算由肌纖維母細胞染色或磷酸化Smad3覆蓋之面積。 藉由 CD8 + T 細胞耗竭消除組合 ADWA11 及抗 PD1 療法之有益的協同作用
由於ADWA11療法對CD8+ T細胞觀測到最顯著作用，因此在本文中試圖判定此等細胞是否驅動ADWA11之抗腫瘤作用。使用抗CD-8a (Bio X Cell® BE0004-1純系53-6.72)抗體使攜帶CCK168腫瘤之小鼠耗竭細胞毒性T細胞，或在第0天開始，在各投與治療藥物之前24小時腹膜內注射10 mg/Kg之劑量之對照抗體。在第1天、第5天及第9天注射組合ADWA11 (10 mg/Kg)及抗PD1 (10 mg/Kg)。根據本文所述之方法之免疫染色展示有效CD8耗竭(圖21A)，其完全消除與ADWA11及抗PD1之組合療法的有益效果(例如，存活率及腫瘤消退) (圖21B-21C)。
此等資料表明CD8+ T細胞在抗avb8 (例如ADWA11)介導之抗腫瘤效果中很重要。 活性 TGF β 信號傳導之標記物 pSmad3 存在在於 CCK168 腫瘤細胞及腫瘤微環境之細胞中 ， 且信號傳導藉由用 ADWA11 治療廣泛地抑制
因為αvβ8整合素之活體內功能中之最佳特徵為局部活化潛伏TGFβ，試圖確定未治療腫瘤中之哪些細胞展示TGFβ信號傳導之跡象，及此信號傳導是否將由ADWA11療法抑制或遏制。為鑑別自TGFβ受體積極地信號傳導之CCK168腫瘤內之細胞類型，使用免疫染色與抗磷酸化SMAD3 (TGFβ信號傳導中之近端步驟)之抗體，證據表明細胞(CD8+ T細胞，F4/80巨噬細胞及樹突狀細胞)對活性TGFβ有反應。所檢查CCK168腫瘤在整個腫瘤中具有巨噬細胞之豐富網路(圖22A)及僅少量***之DC。pSMAD3容易在腫瘤內，通常在與F4/80+巨噬細胞相鄰之細胞中偵測到，但在巨噬細胞本身中未偵測到。CD8+ T細胞在未經治療之小鼠中稀疏且在來自用AWDA-11治療之小鼠的腫瘤中實質上更充足。pSMAD3染色在此等細胞中未觀測到。在未治療之腫瘤中，在整個腫瘤微環境中看見高含量之pSMAD3；然而，pSMAD3染色藉由用ADWA11治療廣泛地受到抑制(圖22A)。因此，不希望受任何特定理論束縛，此等資料指示，在一些實施例中，αvβ8活性對此等腫瘤中之TGFβ活化為必要的，但TGFβ(在由αvβ8活化時)對CD8+ T細胞積聚、顆粒酶B表現及巨噬細胞子組分佈之效果為間接的或出現在腫瘤微環境外部。 無效應 ADWA11 在 CCK168 鱗狀細胞癌模型及 CT - 26 癌瘤中抑制腫瘤生長 ， 改善總存活率且誘導持續性抗腫瘤免疫
使用可與Fc受體相互作用之天然鼠類抗體進行初始研究。因此有可能ADWA11之抗腫瘤效果可歸因於腫瘤細胞或腫瘤浸潤性巨噬細胞或樹突狀細胞之抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。為確定ADCC對ADWA11活性之效果，藉由將4次取代引入小鼠抗體之IgG1 Fc域中以消除效應功能，產生ADWA11之重組Fc 「無效應」形式，稱為ADWA11_4mut。此等取代先前已展示與Fc受體之完全消除抗體結合(Alegre等人, J. Immunol. 148: 3461-3468, 1992；Hezareh等人, J. Virol. 75: 12161-12168, 2001)。ADWA11_4mut在CCK168模型中與野生型抗體一樣有效(圖28)。另外，在兩個同基因型腫瘤模型(亦即，CT26及EMT6腫瘤模型)中測試ADWA11_4mut抗體之功效。
除了CCK168之外選擇CT-26細胞，因為前者完全缺乏可偵測αvβ8表現(圖18B)。CT-26小鼠結腸癌細胞(ATCC@CRL-2638™)以4 × 105 個細胞/小鼠之劑量注入雌性Balb/c小鼠(Charles River Labs)之皮下側腹中。使腫瘤生長至50-100 mm3 的大小以包括於研究中。對於此等研究，在第0天、第4天、第8天、第12天注射ADWA11_4mut或同型對照2B8_mIgG_4mut，在第0天、第4天、第8天靜脈內注射抗PD1抗體(RMP1-14，BioXcell)或同型對照2A3_rat IgG (BioXcell)。所有抗體均以10 mg/Kg給藥。在第5天，除無放射治療對照組之外所有小鼠暴露於靶向腫瘤之5 Gy劑量之輻射。腫瘤生長每週兩次使用數位卡尺來量測，且以體積(長度×寬度×寬度×0.5)報導。對於再攻擊實驗，在第51天(第一抗體治療後)將具有完全反應之小鼠及初始小鼠於對側側腹上植入有含2.5 × 105 個CT26細胞之PBS，且如上所述監測腫瘤生長。
在兩種模型中，ADWA11_mut4在驅使抗腫瘤反應中有效(圖28)，證明ADCC功能不為ADWA11介導之抗腫瘤效果所需要的。 ADWA11 在多個癌瘤模型中有效 ， 且增強輻射療法及抗 PD - 1 、抗 CTLA - 4 及 4 - 1BB 療法之效果
確定ADWA11在其他實體腫瘤模型中之功效及ADWA11是否可更廣泛地增強額外免疫調節療法之有益效果。亦檢查ADWA11增強輻射療法對CT-26癌瘤之效果之能力，因為此腫瘤已展示為輻射敏感的，不活體外或活體內表現αvβ8，且已展示為對TGFB受體小分子抑制劑有反應(Young等人, PloS One 11:e0157164, 2016)。使用僅最低限度地有效作為療法之輻射劑量，添加ADWA11_4mut或抗PD-1分別顯著提高小鼠之腫瘤消退及總存活率，其中5/9及3/10完全反應者(圖29A及29B)。引起關注地，添加抗PD1至ADWA11在此模型中添加極少額外益處，提供另一證據表明αvβ8之抑制甚至在無檢查點抑制劑存在下可有效。在初始療法之後至少51天用相同CT-26腫瘤細胞在對側上再攻擊展示原發腫瘤之完全消退且接受單一療法或組合療法之存活小鼠。在少數小鼠中，在對側腫瘤之情況下觀測到最小腫瘤生長。起初生長之小腫瘤均展示完全消退，指示在一些實施例中，用ADWA11成功治療可導致長期抗腫瘤免疫，如先前關於其他免疫調節劑所述(Ascierto等人, J. Transl. Med. 15:205, 2017) (圖29C)。消退之原發腫瘤中無一者展示再生長。 ADWA11 _ 4mut 在 EMT6 乳癌模型中為有效的且增強抗 CTLA - 4 及抗 4 - 1BB 之效果。
具有免疫排除之腫瘤微環境及低αvβ8表現量之乳癌之EMT-6模型用於檢查與ADWA11_4mut組合之抗PD-1、抗CTLA4-4 (其最近已展示其經由與抗PD1不同之分子機制起作用(Wei等人, Cell 170:1120-1133, 2017)或4-1BB之促效劑、在CD8+ T細胞上表現之共刺激受體(Kang等人, Cancer Res. 2017)之效果。
亦在EMT-6腫瘤模型中測試ADWA11_4mut。將1 × 106 個EMT6細胞(小鼠上皮乳癌細胞系；ATCC®，CRL2755™)注入雌性Balb/c小鼠(Charles River Labs)之第四乳腺脂肪墊中。使腫瘤生長至至多50-100 mm3 的大小。將小鼠隨機分為抗體治療組，且操作者對治療組不知情。在第0天、第4天及第8天注射ADWA11_4mut 10 mg/kg或對照2B8_mIgG4mut 10 mg/kg、抗CTLA4 (9D9 BioXcell)或同型對照柔嫩艾美球蟲(E.tenella)-mIgG2b 10 mg/kg，且藉由靜脈內途徑在第0天及第4天注射抗4-1BB (MAB9371，R&D系統) 1 mg/kg。腫瘤生長每週兩次使用數位卡尺來量測，且以體積(長度×寬度×寬度×0.5)報導。
抗PD1、抗CTLA4或抗41-BB單一療法展示顯著的初始腫瘤消退，然而，僅一種用抗4-1BB治療之小鼠及一種用抗PD1治療之小鼠具有完全消退(圖30A-D)。相比之下，大約70%之用ADWA11與抗PD-1、抗CTLA4或抗4-1BB組合治療之小鼠具有完全消退、長期存活率及對EMT6腫瘤細胞再攻擊之抗性，暗示長期腫瘤免疫(圖30E)。對於再攻擊實驗，在第51天(第一抗體治療後)將具有完全反應之小鼠及初始小鼠於對側脂肪墊上植入有1 × 106 個EMT-6細胞，且如上所述監測腫瘤生長。
此等資料證明第一次，包括ADWA11 2.4之ADWA11抗體在與PD-1或CTLA4之抑制劑(例如，分別結合至PD-1或CTLA-4且因此抑制PD-1或CTLA-4之效果的拮抗劑抗體)及/或4-1BB之促效劑(例如，增加4-1BB之生物活性之促效劑抗體)組合時提供協同治療效果。此等資料表明ADWA11 2.4為潛在人類治療劑，其在與例如PD-1或CTLA4之抑制劑或例如4-1BB之促效劑組合時可提供協同治療性抗腫瘤反應。 人類腫瘤中之整合素 αvβ8 基因表現及染色
用於ITGB8 mRNA表現之癌症基因組圖譜(TCGA)之詢問揭示所檢查之三十種腫瘤類型之幾乎所有人類腫瘤表現可偵測之穩定含量之ITGB8 mRNA，其中在卵巢及腎細胞癌中偵測到最高程度之表現(圖23A)。整個腫瘤溶胞物中之ITGB8 表現可反映浸潤性免疫細胞上之αvβ8之表現。為測試此，進行多組流動式細胞量測術以評估新採集及解聚之人類腫瘤切除及活組織檢查之試樣中之單細胞中αvβ8蛋白質之表現。對兩種人類卵巢癌及兩種腎細胞癌之分析展示表現於CD16+單核球、CD14+腫瘤相關巨噬細胞及BCDA1+及BCDA3+單核球衍生之樹突狀細胞上之實質性αvβ8 (圖23B)。討論
如一般熟習此項技術者將瞭解，ADWA11為對阻斷αvβ8整合素具有特異性之單株抗體，且為單獨使用時有效的抗腫瘤免疫療法。舉例而言，ADWA11證明CCK168皮膚鱗狀細胞癌中之抗腫瘤活性。另外地或可替代地，與免疫調節劑(例如，抗PD-1、抗CTLA-4及抗4-1BB)或與放射線療法組合之ADWA11證明在三種不同小鼠菌株背景上之上皮癌瘤之三個同基因型同種異體移植模型中有效的及協同增強的抗腫瘤活性。在一些實施例中，如藉由在此等細胞中顆粒酶B之表現評估，αvβ8之抑制增加腫瘤中CD8+ T細胞之數目及其細胞毒性分化。CD8+ T細胞之耗竭消除ADWA11及抗PD1治療之抗腫瘤效果，指示在一些實施例中，藉由CD8 T細胞之增強的腫瘤細胞殺死對於ADWA11之功效為關鍵的。除了對CD8+ T細胞之影響之外，ADWA11增加腫瘤微環境中免疫刺激單核球之數目(Franklin等人, Science 344:921-925, 2014；Movahedi等人,Cancer Res . 70:5728-5739, 2010；Ostuni, Trends Immunol. 36: 229-239, 2015；Noy等人, Immunity 41:49-61, 2014)。儘管免疫抑制巨噬細胞之數目無差異，但此等巨噬細胞以及樹突狀細胞表現高含量之可偵測αvβ8。儘管第一腫瘤線測試活體外表現顯著表面量之αvβ8之CCK168細胞，但藉由流動式細胞量測術在來自所採集腫瘤之非造血細胞上發現αvβ8極少表現，指示在一些實施例中，當此等惡性細胞活體內形成腫瘤時表現消失。儘管如此，藉由使用不表現任何可偵測αvβ8之細胞中之重組無效應ADWA11抗體複製結果排除ADWA11之抗腫瘤作用歸因於直接經由ADCC靶向惡性細胞(亦即CT-26結腸癌細胞)之可能性。無效應抗體能夠在三個腫瘤模型CCK168、CT-26及EMT-6中遏制腫瘤生長，其中CT-26具有αvβ8之不可偵測之表現。此外，ADWA11之短期療法引起長期腫瘤遏制及對後續再攻擊之抗性，指示在一些實施例中，誘導長期抗腫瘤免疫性。總之，此等資料指示在一些實施例中整合素αvβ8阻斷藉由阻斷先天性免疫細胞或T調節性細胞上之αvβ8以增強對腫瘤之適應性免疫而引起腫瘤遏制。
先前已展示藉由樹突狀細胞、調節性T細胞、纖維母細胞、呼吸道上皮細胞及神經上皮上表現之αvβ8之TGFβ活化(Travis等人, Nature 449:361-365, 2007；Melton等人, J. Clin. Invest. 120:4436-4444, 2010；Arnold等人, J. Neurosci. 32(4):1197-1206, 2012；Fenton等人, Mucosal Immunol. 10:624-634, 2017；Mu等人, J. Cell Biol. 157:493-507, 2002；Proctor等人, J. Neurosci. 25:9940-9948, 2005；Edwards等人, J. Immunol. 193:2843-2849, 2014)，但界定整合素αvβ8表現之完整範圍在用於組織染色之可靠的試劑不存在下受到限制。在本文所闡述之實例中，使用能夠藉由流動式細胞量測術偵測整合素αvβ8之新近研發之抗體證明腫瘤相關巨噬細胞及樹突狀細胞為展示鼠類癌瘤中之αvβ8之高細胞表面染色的主要細胞類型。此指示在一些實施例中，此等細胞類型中之一或多者上之表現對於局部抗腫瘤免疫之αvβ8介導之遏制為重要的。
在本文所闡述之實例中，未偵測到T細胞(包括調節性T細胞(Treg))上之αvβ8表現。
整合素(包括αvβ8)對TGFβ之活化緊密地空間受限，使得αvβ8表現細胞對其直接接觸之細胞局部呈遞TGFβ (Travis等人, Nature 449:361-365, 2007；Munger等人, Cell 96:319-328, 1999)。已描述TGFβ遏制效應T細胞之活性。如本文所闡述之實例中所示，CD8+ T細胞在ADWA11治療之腫瘤中增加，更可能表現顆粒酶B，且對於介導ADWA11之保護性效果很重要。在一些實施例中，αvβ8對先天性免疫細胞之遏制效果歸因於引導活性TGFβ呈遞至CD8 T細胞。然而，pSMAD3之免疫染色未揭示CD8+ T細胞中TGFβ信號傳導之跡象，但展示非造血細胞(例如，腫瘤細胞)中之穩固信號傳導。因此，在一些實施例中，腫瘤細胞及一些其他腫瘤相關非造血細胞(例如，纖維母細胞)為功能上重要的細胞，其對藉由αvβ8活化之TGFβ起反應，且遏制局部腫瘤免疫。
如本文所闡述之實例中所述，αvβ8整合素廣泛地表現於多個鼠類及人類腫瘤中之單核球、巨噬細胞及樹突狀細胞上，且及抗腫瘤免疫反應之有效調節劑。靶向此整合素之單一療法(例如，ADWA11)在腫瘤中有效。此外，功效藉由組合αvβ8 (例如，用ADWA11治療)與檢查點抑制劑(例如，抗PD1或抗CTLA4)或免疫活化劑(例如，抗4-1BB)之抑制或藉由組合αvβ8單一療法與放射線療法協同增強。綜合而言，此等結果鑑別αvβ8整合素作為腫瘤免疫療法之新穎目標。實例 15 ： ADWA11 2 . 4 之進一步活體內評估 抗 αvβ8 評估之腫瘤模型之概述 使用具有免疫能力的小鼠之同基因型腫瘤模型評估活體內功效。由於用人類化之ADWA11 2.4限制暴露的強抗物種藥物反應，功效研究用親本小鼠融合瘤抗體ADWA11_4mut之無效應版本進行。表 9 . 抗 α v β 8 評估之腫瘤模型
模型 腫瘤微環境 αV 整合素之表現 TGFβ 路徑狀態
EMT6，乳癌 免疫排除之腫瘤微環境模型 表現αvβ8及αvβ6兩者 高TGFβ路徑活化基因表現概況
CT26，結腸癌 先前存在之免疫模型 不表現αvβ8或αvβ6 低TGFβ路徑活化基因表現概況
EMT6 模型之功效
EMT6腫瘤模型研究正位地(第4乳腺脂肪墊)進行，且用有或無檢查點抑制劑之抗αvβ8治療同時進行。
Charles River Balb/c小鼠(每組n = 10)植入有3×105 或1×106 個EMT6細胞/小鼠。治療在50 mm3 或100 mm3 之平均腫瘤體積下開始。
在所有研究中，鼠類親本抗αvβ8抗體ADWA11_4mut以10 mg/kg每四天一次給藥，總計三次劑量。抗PD1抗體(純系RMP1-14, BioXcell)以10 mg/kg每四天一次給藥，總計三次劑量，4-1BB促效劑mAb (純系MAB9371，R&D systems)以1 mg/kg每四天一次給藥，總計兩次劑量，且抗CTLA4 (純系9D9，BioXcell)以10 mg/kg每四天一次給藥，總計三次劑量。 當植入3×105 個細胞且以50 mm3 開始治療時，觀測到約50%腫瘤生長抑制(TGI) (第10-20天)之抗αvβ8單一療法功效。然而，當植入1×106 個細胞且以100 mm3 開始治療時，未觀測到抗αvβ8單一療法TGI。兩個研究之間之抗αvβ8單一療法TGI的差別不明確；然而，不希望受任何特定理論束縛，在植入1×106 個細胞時此模型之快速腫瘤生長率可限制αvβ8阻斷之反應，或完成抗腫瘤反應。重要地，抗αvβ8證明與抗PD1 (7/10個完全反應)、4-1BB促效劑(5個完全反應)及抗CTLA4 (6個完全反應)之顯著協同治療效果，且與單一療法及同型對照組相比產生增加之存活率。因此，此等資料表明ADWA11抗體可在EMT-6腫瘤模型中提供抗腫瘤反應。
抗CTLA4或4-1BB促效劑單一療法證明顯著反應(約50% TGI，第8-20天；然而，反應為暫時的且腫瘤最終超過反應。為了證明組合治療相比於抗血管生成或抗增生反應對EMT6腫瘤產生細胞反應，具有完全反應之小鼠在第51天(第1次劑量之後)用第二EMT6腫瘤植入物但無額外藥物治療。EMT6腫瘤在初始小鼠中快速生長，但在完全反應小鼠中快速清除，指示在一些實施例中，針對腫瘤細胞之細胞免疫性之發展，例如直接腫瘤細胞死亡，未由抗血管生成或抗增生介導。 EMT6 腫瘤模型中之淋巴細胞豐度之定量
為研究抗αvβ8治療對EMT6腫瘤微環境之影響，藉由IHC定量淋巴細胞子組之豐度。簡言之，將Charles River Balb/c小鼠(n=10隻/組)植入有1×106 個EMT6細胞且以100 mm3 之平均腫瘤體積開始治療(第0天)。以10 mg/kg每三天(例如第0天、第3天、第6天及第9天)給藥抗αvβ8 ADWA11 2.4抗體，總計四次劑量，且在第11天(第4次劑量之後48小時)採集腫瘤。
CD45 (總淋巴細胞及骨髓細胞)、CD3 (總T細胞)、CD4 T細胞、CD8 T細胞及顆粒酶B (活化CD8及NK細胞)染色之密度之免疫組織化學(IHC)分析證明，抗αvβ8單一療法增加總CD45、CD4 T細胞、CD8 T細胞之豐度，且非常顯著地增加顆粒酶B表現細胞(各組n = 10)之密度(圖15)。IHC資料指示，在一些實施例中，ADWA11 2.4單一療法足以改變腫瘤微環境，這與αvβ8之預期作用機制(MOA)相符。CT26 模型中之功效
基於αvβ8表現之缺乏、抗PD1療法之部分反應及TGFβ小分子抑制劑與次佳劑量之輻射之協同TGI的文獻中之證據選擇CT26模型。輻射療法(RT)由於其誘導免疫學細胞死亡及重生DC-T細胞激活之能力而備受關注，其中αvβ8可能在成形T細胞分化及活化中起重要作用。簡言之，Charles River Balb/c小鼠(n = 10各組)皮下植入有4e5細胞，且以100 mm3 之平均腫瘤體積開始治療。
鼠類抗αvβ8效應無效抗體ADWA11_4mut以10 mg/kg Q4D × 4給藥，抗PD1 (純系RMP1-14，BioXcell)以10 mg/kg Q4D × 3給藥，且5Gy劑量之靶向腫瘤之輻射在第一次給藥mAb後進行5天。包括抗αvβ8與RT使得展示完全反應之5/9個小鼠之TGI顯著增加。包括抗PD1與RT使得與證明完全反應之3/10小鼠之抗αvβ8相比TGI較不顯著。RT、抗及抗PD1之三組合使得具有完全反應之7/10小鼠之TGI非常顯著。類似於EMT6研究，使具有完全反應之小鼠免疫以有CT26細胞再攻擊。 CT26 腫瘤浸潤性細胞群之免疫表型
為研究抗αvβ8治療對CT26腫瘤微環境之影響，藉由流動式細胞量測術定量淋巴細胞子組之豐度。簡言之，Charles River Balb/c小鼠(n = 6各組)皮下植入有4e5細胞，且以100 mm3 之平均腫瘤體積開始治療。抗αvβ8 ADWA11 2.4以10 mg/kg或1 mg/kg Q3D × 3給藥，且在第8天(第3次劑量後48小時)採集腫瘤。解離腫瘤，且由CyTOF細胞量測術定量淋巴細胞群。抗αvβ8 (10及1 mg/kg)增加CD3 T細胞閘中之CD8 T細胞之豐度。另外，CD8細胞更常常表現顆粒酶B，其為活化表型之標記物。 概述
綜合而言，EMT6及CT26功效及PD研究證明：(1)抗αvβ8協同增加對多種檢查點抑制劑之反應；(2)抗αvβ8功效不視腫瘤細胞之αvβ8之表現而定；及(3)抗αvβ8 ADWA11 2.4單一療法足以增加腫瘤微環境中之CD8+ GzmB+ T細胞之豐度。實例 16 ： 人類 FcRn 轉殖基因 ( TG32 ) 小鼠中之 ADWA11 2 . 4 藥物動力學
已展示TG32小鼠模型與用於預測呈現線性藥物動力學之IgG1及IgG2 mAb之人類藥物動力學的猴模型一樣好。在以0.1、0.3或3 mg/kg單次IV給藥劑量投與之後在TG32小鼠中評估ADWA11 2.4之藥物動力學。隨後量測血清藥物濃度。如圖25A及圖25B中所示，觀測到抗體清除中劑量依賴型減少之明顯趨勢。此對於與細胞表面目標相互作用之單株抗體為典型的且指示標目標受體αvβ8可充當清除機制。因此，兩個獨立藥物動力學模型用於描述線性(典型FcRn介導之抗體清除機制)相對於非線性(αvβ8介導之)清除路徑。為估算線性清除率之參數，使用雙室群體藥物動力學模型僅擬合3 mg/kg資料(圖25A)。為估算在多個劑量中非線性清除之藥物動力學參數，使用雙室飽和模型(Michaelis Menten)擬合所有資料(0.1、0.3、3 mg/kg) (圖25B)。所估算之線性及非線性藥物動力學參數分別展示於表10及表11中。線性藥物動力學參數在對於TG32小鼠中之典型mAb所觀測到的範圍內。表 10 . TG32 小鼠 ( 在 3 mg / kg 下 IV ) 中之雙室藥物動力學參數
參數 估算值 %CV
CL (mL/h/kg) 0.33 9.2
CLD (mL/h/kg) 2.3 13
V1 (mL/kg) 49 2.4
V2 (mL/kg) 38 9.6
t1/2 (天) 7.6   
CL：中央室之清除率；CLD：室間分佈清除率；V1：中央室之分佈體積；V2：周邊室之分佈體積；t1 / 2 ，基於估算參數計算之終半衰期。表 11 . TG32 小鼠 ( 在 0 . 1 、 0 . 3 及 3 mg / kg 下 IV ) 中之雙室非線性藥物動力學參數
參數 估算值 %CV
Km (ng/mL) 1659 25
Vmax (ng/h/kg) 6596 5
CLD (mL/h/kg) 3.4 20
V1 (mL/kg) 49 4
V2 (mL/kg) 48 8
Vmax：最大速率；Km：用以達成半最大速率之受質濃度；CLD：室間分佈清除率；V1：中央室之分佈體積；V2：周邊室之分佈體積。
與基於血清藥物動力學之所觀測到之目標介導之藥物處置(TMDD)相符，在組織分佈研究中亦觀測到藥物分佈在多個組織(由於飽和目標結合)，尤其腎臟中之劑量依賴型降低。實例 17 ：非人類靈長類動物 (NHP) 之藥物動力學
在4、40或100 mg/kg下多次劑量投與研究之第一劑量後，在NHP探索性毒理學研究中評估ADWA11 2.4之藥物動力學。如圖26中所示，由於高於目標介導之藥物安置(TMDD)之飽和範圍，因此ADWA11 2.4之暴露似乎在此劑量範圍內為線性的。使用雙室線性模型擬合資料(圖26)，且估算之藥物動力學參數展示於表12中。儘管觀測到CL及分佈體積在典型mAb之範圍內，但末端t1 / 2 似乎在該範圍之短端上。不希望受任何特定理論束縛，此可能歸因於最終階段未良好定義為僅在給藥後至多7天取樣(限制ETS研究設計)。表 12 . NHP ( 在 4 、 40 及 100 mg / kg 第一次給藥下之 IV ) 中之雙室藥物動力學參數
參數 估算值 %CV
CL (mL/h/kg) 0.41 8.7
CLD (mL/h/kg) 15.9 25
V1 (mL/kg) 35.6 12
V2 (mL/kg) 25.1 25
t1/2 (天) 4.3   
CL：中央室之清除率；CLD：室間分佈清除率；V1：中央室之分佈體積；V2：周邊室之分佈體積；t1 / 2 ，基於估算參數計算之終半衰期。實例 18 ： 以單一療法且在與抗 PD - 1 共同給藥時鼠類替代物抗體之藥物動力學
親本(小鼠IgG)之單次劑量藥物動力學資料不可用，但在若干功效研究中之至多四個時間點量測暴露且在此等研究中似乎為一致的。親本(小鼠IgG)之暴露似乎在所研究之劑量範圍(1、3及10 mg/kg)內線性，與如人類化抗體ADWA11 2.4之TG32小鼠中所估算之飽和TMDD一致。雙室藥物動力學模型擬合至劑量-反應EMT6腫瘤模型研究中之暴露資料，估算僅CL，同時固定上文針對TG32小鼠中之人類化抗體報導之值的其他參數。此等腫瘤攜帶小鼠中親本(小鼠IgG)之估算CL為0.74 mL/hr/kg。
與用單獨鼠類替代抗體給藥或用對照大鼠IgG 2A3給藥之彼等相比，在用抗PD-1抗體重複共同給藥研究之後，親本(小鼠IgG)之暴露量似乎低約5-50×。此現象在使用兩種不同腫瘤模型(CT26及EMT6)之兩個獨立研究中觀測到。較低暴露可能歸因於在抗PD-1存在下ADA形成增加，如已報導於PD-1基因剔除小鼠中(Nishimura H等人, 1998, International Immunol. 10(10): 1563-72)。抗PD-1抗體(派立珠單抗)治療之後的ADA形成增加亦已報導於臨床中。實例 19 ：人類 PK/ 暴露預測
藉由按比例調整來自TG32小鼠之線性藥物動力學參數來預測在飽和目標介導之藥物處置(TMDD)下ADW11 2.4之人類藥物動力學概況(表13)。所預計線性人類藥物動力學參數在表13中給出。另外，基於所量測AC-SINS結合(評分= 2，部分2.4)，使用平台PBPK模型預測0.12 mL/hr/kg之線性人類CL。藉由自NHP之類比預測0.086 mL/hr/kg之線性人類CL。此等CL值在2×範圍內以基於TG32類比(0.15 mL/hr/kg)預測，進一步支持在劑量飽和TMDD下，ADW11 2.4將具有對於單株抗體典型的藥物動力學概況。
此等結果指示ADWA11 2.4為潛在的適用人類治療性抗體。表 13 . ADWA11 2 . 4 之所預計人類線性藥物動力學參數
參數 比例因數 所預計值
CL (mL/h/kg) 0.9 0.15
CLD (mL/h/kg) 0.67 0.15
V1 (mL/kg) 0.97 39
V2 (mL/kg) 0.93 21
t1/2 (天) NA 12
CL：中央室之清除率；CLD：室間分佈清除率；V1：中央室之分佈體積；V2：周邊室之分佈體積；t1 / 2 ，基於估算參數計算之終半衰期。
在雄性hFcRn TG32小鼠(n=4或8/劑量組及雄性食蟹獼猴(n=1/劑量組)中表徵額外單次劑量ADWA11 (2.4) IV及SC PK及/或TK，且修正本文先前所闡述之人類藥物動力學參數。更特定言之，在單次IV給藥(TG32小鼠及食蟹獼猴中之0.1、0.3及3 mg/kg)之後，ADWA11 (2.4)之PK在具有CL之劑量依賴型減少趨勢之兩個物種中為非線性的，與可飽和目標介導之藥物處置相符。在高於飽和清除之劑量下，ADWA11 (2.4)之PK為線性且與典型人類IgG1 mAb相符。在給藥後240小時觀測到在以10 mg/kg單次SC給藥之後的平均PK及TK參數Tmax ，且基於與單次IV給藥之後3 mg/kg之劑量標準化之AUCinf 的比較，生物可用性估計為大約100%。
ADWA11 (2.4)預期與本文中先前其他地方所闡述相比以更低劑量為劑量依賴的。亦即，基於包括線性及非線性清除率兩者之食蟹獼猴PK模型之類比來預測ADWA11 (2.4)之人類PK。經修正之預測人類PK參數如下：中央室之分佈體積為36 mL/kg；周邊室之分佈體積為33 mL/kg；自中央室(線性CL)之清除率為0.12 mL/kg/h；室間清除率為0.51 mL/kg/h；及最大非線性消除率為0.46 μg/mL/h且非線性清除率之Km為0.42 μg/mL。模型預測ADWA11 (2.4)之非線性清除率有可能飽和高於14 μg/mL血漿濃度，其中預測t½為大約15至17天。實例 20 ： 藥物動力學 - 藥效學關係及有效人類劑量之預測
在同基因型小鼠腫瘤模型中不存在明顯的暴露-TGI反應的情況下，認為10 mg/kg劑量為用於評估有效濃度之有效劑量。使用親本(小鼠IgG)之藥物動力學模型，在第12天(在研究中最後一次給藥之後4天，以10 mg/kg Q4D × 3給藥)估算平均濃度(Cavg )為107 µg/mL。類似地，儘管稍微較高，但藉由使用線性梯形規則自可用暴露資料計算AUC來估算Cavg 值。
由於ADWA11 2.4在此等有效濃度水準下預期典型抗體藥物動力學，具有按比例調整之TG32小鼠參數之雙室藥物動力學模型(表13)用於人類劑量預測(Betts等人MABS (2018) 1-14)。另外，使用按比例調整之NHP藥物動力學參數預測之人類劑量與使用TG32小鼠預測之人類劑量僅相差約20%。為匹配Cavg ，預測Q14D × 3給藥7 mg/kg之有效人類IV劑量，而預測Q28D × 3給藥12 mg/kg之IV劑量(圖27A-27B)。劑量亦可針對特定患者群體、臨床適應症及/或臨床徵象及症狀進行調整。
基於來自食蟹獼猴之類比及額外臨床前功效研究之結果來優化ADWA11 2.4之人類PK預測。將普通給藥預測(Ceff )判定為血漿濃度，其等於在使用以上2個小鼠腫瘤模型之不同研究中對腫瘤生長抑制之半最大作用的10倍。在所有研究中，估計Ceff 在10-98 nM範圍內；因此，使用保守方法定義100 nM(範圍之高端)作為標靶Ceff 。ADWA11 2.4之人類有效劑量預測為大約2 mg/kg IV Q14D或4 mg/kg IV Q28D，預測其以估算之穀藥物濃度(100 nM)提供＞IC90腫瘤生長抑制覆蓋範圍。在2 mg/kg Q14D (IV)及132、45及21 μg/mL之後，在4 mg/kg Q28D (IV)之後，在預測有效劑量下在穩定狀態下之預計Cmax 、Cave 及Cmin 分別為84、44及29 μg/mL。在預測有效劑量下所預測人類t½為大約15至17天。
此等結果支持ADWA11 2.4為潛在適用之人類治療性抗體，因為其可以商業上可行且合理產生之量給藥。實例 21 ： CD - 1 小鼠中之重複劑量毒物動態學
在以10 (IV)、100 (SC)或200 (IV)毫克/公斤/週，總計4次劑量每週靜脈內(IV)或皮下(SC)給藥ADWA11 4至作為GLP重複-劑量毒性研究之一部分的CD-1小鼠(n=3/性別/劑量組)後進行毒性動力學及抗藥物抗體評估。
在研究期間之任何時間點收集且自媒劑對照組分析之樣品中不存在可定量濃度之ADWA11 2.4。因此，基於資料之定性綜述，全身性暴露量中不存在一致的性別相關差異(如藉由Cmax及AUC168所評估)，使用來自雄性及雌性CD-1小鼠兩者之組合資料呈現組平均毒理動力學參數(表18)。表 18 . CD - 1 小鼠中 ADWA11 2 . 4 之總平均毒理動力學參數
劑量(毫克/公斤/週)/途徑 天 Cmax (µg/mL) Tmax (小時) AUC168 (µg•h/mL)
10/IV 1 22 199 615 0.54 1.1 15400 46400
100/SC 1 22 871 750 72 18 104000 591000
200/IV 1 22 5020 6510 0.25 0.54 258000 267000
AUC168 =自時間0至168小時之濃度-時間曲線下之面積；Cmax =觀測到的濃度最大值；Tmax =第一次觀測到Cmax之時間。
IV給藥之後，全身性暴露隨著在第1天以大致劑量成比例之方式增加之劑量而增加，且在第22天以低於劑量成比例之方式增加之劑量而增加。對於10毫克/公斤/週(IV)、100毫克/公斤/週(SC)及200毫克/公斤/週(IV)，平均積聚比率(AUC168 ，第22天/第1天)分別為3.0、0.6及1.0。在以100毫克/公斤/週(SC)及200毫克/公斤/週(IV)重複給藥之後，缺乏積聚可能與此等劑量組中之動物中ADA之存在相關。
ADA誘導向ADWA11 2.4之總發病率為28% (5/18動物)。ADA誘導向ADWA11 2.4之發病率分別為在10 (IV)、100 (SC)或200 (IV)毫克/公斤/週以ADWA11 2.4給藥之CD-1小鼠中之0% (0/6動物)、67% (4/6動物)及17% (1/6動物)。一般而言，ADA陽性動物中之暴露與ADA陰性動物相比類似或更低。實例 22 ：食蟹獼猴中之重複劑量毒物動態學
在以10 (IV)、100 (SC)或200 (IV)毫克/公斤/週，總計5次劑量每週靜脈內(IV)或皮下(SC)給藥ADWA11 2.4至作為GLP重複劑量毒性研究之一部分的食蟹獼猴後進行毒性動力學及抗藥物抗體評估。
在研究期間之任何時間點，自媒劑對照組收集且分析之樣品中，或在第1天給藥之前之任何測試製品給藥組中，不存在可定量濃度之ADWA11 2.4。在各劑量組中全身性暴露(如藉由Cmax及AUC168所評估)中不存在明顯的性別相關差異；因此，使用來自雄性及雌性食蟹獼猴兩者之組合資料來論述且呈現組平均TK參數(表19)。表 19 . 食蟹獼猴中 ADWA11 2 . 4 之總平均毒理動力學參數
劑量(毫克/公斤/週)/途徑 天 Cmax (µg/mL) Tmax (小時) AUC168 (µg•h/mL)
8/IV 1 22 248 394 0.54 6.3 17300 44600
100/SC 1 22 1270 2880 72 32 161000 393000
200/IV 1 22 6200 11400 1.1 2.7 479000 1100000
AUC168 =自時間0至168小時之濃度-時間曲線下之面積；Cmax =觀測到的濃度最大值；Tmax =第一次觀測到Cmax之時間。
在以8 (IV)、100 (SC)及200 (IV) mg/kg每週給藥之後，全身性暴露在第1天及第22天增加大致劑量比例，積聚比率(第22天之研究/第1天之研究)在大約2.3至2.6範圍內。
跨所有劑量組ADA誘導向ADWA11 2.4之總發病率為39% (7/18動物)。對於以ADAW11 2.4分別在8 (IV)、100 (SC)或200 (IV)毫克/公斤/週劑量給藥之動物，ADA誘導向ADAW11 2.4之發病率為17% (1/6)、33% (2/6)及67% (4/6)。一般而言，ADA陽性動物中之暴露一般與ADA陰性動物相比類似。實例 23 ： 小鼠及食蟹獼猴中之非臨床毒理學
在持續時間高達1個月之靜脈內(IV)及皮下(SC)研究中將AWA11 2.4投與至小鼠及食蟹獼猴。此等研究中鑑別之目標器官包括骨骼、脾臟及臨床化學變化，但變化不視為不良的。1個月之研究中之無不利效果水準(NOAEL)分別對於小鼠為200毫克/公斤/週IV (Cmax 及AUC168 6510 μg/mL及267000 μg•h/mL)，且對於食蟹獼猴為(Cmax 及AUC168 11,400 μg/mL及1,100,000 μg•h/mL)。單次劑量毒性
ADWA11 2.4在10、30或100 mg/kg之單次SC劑量之後在雌性CD-1小鼠中在2週觀察期後耐受。在研究期間不存在與測試製品相關之研究結果，且平均全身性暴露隨著以與藉由曲線下面積(AUC)所量測之劑量比例之方式的各劑量增加。在100 mg/kg下，平均Cmax 及AUC336 分別為795 µg/mL及148,000 µg*h/mL。重複劑量毒性
研究 1 ：在研究1中，藉由在第1天、第4天、第8天、第11天及第14天以0、1、10或100毫克/公斤/劑量之劑量IV給藥向雌性CD-1小鼠投與ADWA11 2.4。所有小鼠存活研究之持續時間且所有劑量均耐受。在100毫克/公斤/劑量下，與對照平均值相比，在臨床化學參數中存在測試製品相關差異，其包括較低葡萄糖(0.75倍)及較高磷(1.35倍)、球蛋白(1.09倍)及血尿素氮(1.18倍)而無任何相關顯微結果或明顯劑量關係(葡萄糖及磷)。在≤10毫克/公斤/劑量下，與對照平均值相比，臨床化學參數中之測試製品相關差異包括較低葡萄糖(在10毫克/公斤/劑量下僅0.77倍)及較高磷(1.26倍)。自第1天至第11天，平均全身性暴露量以適當劑量比例方式隨劑量增加而增加。在100毫克/公斤/劑量下，最高投與劑量、平均Cmax 及AUC48在第11天為4510 μg/mL及124,000 μg•h/mL。
研究 2 ：在研究2中，藉由在第1天、第8天及第14天以0、4、40或100毫克/公斤/劑量之劑量每週一次IV給藥向食蟹獼猴投與ADWA11 2.4。所有猴存活研究之持續時間且所有劑量均耐受。在雌性(0.21×基線)與雄性(0.44×基線)猴之100毫克/公斤/劑量組中，在CD8+初始T細胞中唯一的測試製品相關結果降低，但在4或40毫克/公斤/劑量組中未觀測到變化。在第1天，平均全身性暴露量以適當劑量比例方式隨劑量增加而增加。在100毫克/公斤/劑量下，最高投與劑量、平均Cmax 及AUC168 在第1天為3550 μg/mL及162,000 μg/mL。
研究 3 ：在研究3中，藉由在第1天以0.1、0.3或3 mg/kg之劑量IV給藥，或藉由以10 mg/kg SC注射向雄性食蟹獼猴投與ADWA11 2.4。隨後，在第1天經投與0.1或0.3 mg/kg (IV)之動物亦分別在第8天藉由SC注射投與30或100 mg/kg。所有投與劑量/投與途徑均耐受。在劑量投與之後的22天或29天觀察期內，不存在測試製品相關之生活觀測結果(亦即臨床徵象，或體重或食物消耗之變化)。在注射部位不存在紅斑或水腫之跡象。
在第1天以0.1、0.3及3 mg/kg單次IV投與之後，全身性藥物暴露在0.1與0.3 mg/kg之間按比例劑量增加，且在0.3與3 mg/kg之間按比例超過劑量增加。在第1天以10 mg/kg或在第8天以30 mg/kg及100 mg/kg單次SC投與之後，全身性藥物暴露按比例劑量增加。相對於3 mg/kg IV劑量之SC生物可用性在10、30及100 mg/kg下分別為103%、79%及100%。耐受以0.1、0.3或3 mg/kg (IV)或10、30或100 mg/kg (SC)向食蟹獼猴投與ADWA11 2.4且全身性暴露量隨劑量增加。
研究 4 ：在研究4中，藉由0 (IV及SC)、10 (IV)、100 (SC)或200 (IV)毫克/公斤/週之IV及/或SC劑量每週一次向雄性及雌性CD-1小鼠投與ADWA11 2.4維持1個月(總共5次劑量)。測試製品相關結果受限於臨床化學、脾臟中之免疫表型參數及脾臟重量中之非不利改變。
除在第5天發現死亡之100 (SC)毫克/公斤/週雄性之外，所有動物存活至預定屍檢；然而，此動物之死亡不被認為與測試製品相關。在各種器官中觀測到死後自解及200 (IV)毫克/公斤/週之死因，且與並行對照相比，在兩種性別中包括較高血紅素(1.15×至1.16×)，在雌性中包括較低AG比率(0.85×)，且在雄性中包括較高總蛋白質(1.11×)。mAb測試製品之投與增加全身性γ球蛋白濃度，且可能促進血清蛋白之此等變化。由於其較小量值及缺乏相關微觀或宏觀發現，此等在臨床化學參數中之觀測結果為非不利的。在脾臟中，在第30天，分別在10 (IV)、100 (SC)及200 (IV)毫克/公斤/週注意雌性中之測試製品相關之CD8+ T細胞之較低數目(0.52倍、0.65倍及0.60倍對照平均值)及雄性中之較高百分比之表現活化標記物CD25 (1.62倍、1.90倍及1.52倍對照平均值)之CD4+ T細胞。在雌性中以200 (IV)毫克/公斤/週平均絕對及相對(身體及腦重量)脾臟重量較低(0.86×至0.88×對照)。對於較低脾臟重量，不存在相關聯宏觀或微觀結果。基於資料之定性綜述，如藉由Cmax 及AUC168 所評估，在全身暴露中不存在不變的性別相關差異。全身暴露隨著IV或SC劑量增加而增加。在重複給藥之後，暴露以10毫克/公斤/週(IV)增加，以100 (SC)毫克/公斤/週降低，且保持與200 (IV)毫克/公斤/週相同。抗藥物抗體(ADA)誘導向ADWA11 2.4之發病率在10 (IV)、100 (SC)或200 (IV)毫克/公斤/週下分別為0% (0/6)、67% (4/6)及17% (1/6)。在投與ADWA11 2.4一個月之後，心臟或皮膚中不存在ADWA11 2.4相關之顯微鏡結果之證據。
在重複劑量投與之後，當相比於ADA陰性動物時，ADA陽性動物中之暴露類似或略微較低。基於在任何劑量下不存在不利結果，將所投與之最高劑量(200 (IV)毫克/公斤/週)鑑別為未觀測到的不良作用程度(NOAEL)，且與6,510μg /mL之Cmax 及在第22天為267,000 μg•h/mL之AUC168 相關聯。
研究 5 ：在研究5中，以IV及/或SC劑量0 (IV及SC)、8 (IV)、200 (IV)或100 (SC)毫克/公斤/週維持1個月(總共5次劑量)向食蟹獼猴投與ADWA11 2.4。在此研究中不存在不利的測試製品相關之發現。非不良測試製品相關之結果包括雄性之軟骨內接合處之單側器官異常增生及雌性中之血清蛋白(增加之球蛋白(至多1.29×)、總蛋白(至多1.10×)及/或100 (SC)毫克/公斤/週之降低之白蛋白球蛋白比率(降至0.75×)及200 (IV)毫克/公斤/週之兩種性別。在第1天及第22天，雄性及雌性在各劑量組中之全身性暴露量(如藉由Cmax 及AUC168 評估)相似且IV劑量組中之平均全身性暴露量隨著劑量以大致成比例之方式增加而增加。在對各組重複給藥之後，暴露較高。在投與ADWA11 2.4一個月之後，心臟或皮膚中不存在ADWA11 2.4相關之顯微鏡結果之證據。
對於以8 (IV)、100 (SC)或200 (IV)毫克/公斤/週劑量用ADWA11 2.4給藥之動物，ADA誘導之發病率分別為17% (1/6動物)、33% (2/6動物)及67% (4/6動物)；對於所有劑量組，ADA誘導向ADWA11 2.4之發病率為39%。ADA陽性動物中之血清暴露一般與ADA陰性動物相比類似。在每週一次IV或SC投與ADWA11 2.4之後，基於任何存活或死後評估中缺乏不利結果，在此1個月毒性研究中將200 (IV)毫克/公斤/週鑑別為NOAEL。在200 (IV)毫克/公斤/週，平均Cmax 為11,400 μg/mL且平均AUC168 在第22天為1,100,000 μg•h/mL。
1個月研究中之NOAEL分別對於小鼠(Cmax 及AUClast 6510 μg/mL及267000 μg•h/mL)及對於食蟹獼猴(Cmax 及AUClast 11,400 μg/mL及100,000 μg•h/mL)為200 mg/kg IV。實例 24 ： 活體外補體蛋白 C1q 及 FcR 結合
在活體外篩選檢定中分別經由C1q及Fcγ (FcγR)之結合研究ADWA11 2.4引起補體依賴性細胞毒性(CDC)及抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)之潛能。ADWA11 2.4以所測試(至多30 µg/mL)濃度未結合至C1q，且其對應的視為具有誘導CDC之低潛能。結合至所有FcγR之ADWA11 2.4類似或與結合至陰性對照抗體相比較低，且與結合至陽性對照抗體相比較低。因此，ADWA11 2.4視為具有引發ADCC活性之低潛能。實例 25 ：活體外細胞介素釋放檢定
使用來自8個人類供體之樣品，以全血及PBMC形式進行活體外細胞介素釋放檢定。在與ADWA11 2.4一起培育之後未觀測到測試製品相關之TNF、IL-6或INF-γ釋放。此等資料與在上文所述之小鼠及猴研究中投與ADWA11 2.4後血清細胞介素概況之變化缺乏一致。實例 26 ： α v β 8 之抑制改善 MC38 腫瘤模型中抗 PD - 1 療法之功效 方法：
在此研究中，將MC38鼠類結腸癌細胞系維持於含有10%胎牛血清、2 mM麩醯胺酸、100單位/毫升青黴素G鈉、100 μg/mL硫酸鏈黴素及25μg /mL慶大黴素之達爾伯克氏修飾之伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium；DMEM)中。將該等細胞在37℃下在5% CO2 及95%空氣之氛圍中培養於含濕氣培育箱中之組織培養瓶中。在腫瘤植入當天，在指數生長期間收集MC38腫瘤細胞且再懸浮於磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)中。各小鼠在右側腹中皮下(sc)在0.1 mL懸浮液中接受5×105 個細胞。在兩個維度中量測腫瘤以在平均體積接近80至120 mm3 範圍時監測生長。體積(V) = ½ L × W2 ，且L (長度)定義為腫瘤之最長直徑，且W (寬度)垂直於L。在研究之第1天，將動物分選成組平均腫瘤體積為100 mm3 之七組(n=10隻/組)且如下文所描述進行治療。每週記錄腫瘤量測值2至3次，直至腫瘤體積達到大於1200 mm3 。
對在RNeasy Plus Mini Kit套組中供應之900 μL溶解緩衝液中均勻化之30 mg採集之腫瘤組織，使用Omin Bead Ruptor進行基因表現之定量PCR(qPCR)分析。使用RNeasy Plus Mini Kit及供應商建議之方案分離來自均勻化腫瘤樣品之RNA。使用Epoch BioTek分光光度計定量RNA濃度且再懸浮至200 ng/μL之ddH20。cDNA使用2 μg總RNA及高容量cDNA逆轉錄套組，使用供應商建議之方案合成。使用50 ng cDNA及基因特異性塔克曼引物TaqMan Universal Master Mix II及供應商建議之方案分析基因表現。ViiA7實時qPCR系統用於qPCR研究。使用建議之比較CT方法分析對於各樣品的閾值循環(CT)，且目標基因之表現報導為與同型對照組相比治療組之倍數變化。雙尾未配對Students T-test測試用於比較治療組與同型對照組，其中顯著性報導為＜ 0.05。結果：
為研究αvβ8-阻斷對腫瘤淋巴細胞豐度之作用，自用同型對照或ADWA11 VH05-2/VK01(ADWA 2.4)治療之小鼠在第12天收集腫瘤組織(在第1天、第5天、第9天之抗體治療)且藉由定量PCR分析淋巴細胞標記物mRNA表現。ADWA11 VH05-2/VK01(ADWA 2.4)治療增加腫瘤微環境中CD8a (2.62±0.763)及顆粒酶B (5.79±1.55)之表現量(倍數變化±標準差對比同型組10 mg/kg治療組) (圖31A)。此等資料證明用ADWA11 2.4抗體治療增加活化淋巴細胞之豐度，其在腫瘤微環境中之腫瘤消退中起作用。
ADWA11 2.4處理在研究之第15天產生18% TGI，而抗PDl1抗體(RMP1-14)治療在研究之第16天產生10.3% TGI且無小鼠在研究結束(第30天之0%存活率)。相比之下，ADWA11 2.4與抗PDl1之組合在研究之第16天產生35.8% TGI且60%小鼠達到研究結束(第30天存活率%) (圖31B頂圖)。 此等結果證明，如由本文所用之抗體所例示，抗PD1與抗αvβ8之組合療法提供出人意料之協同抗腫瘤作用。此等資料指示本文所揭示之新穎抗αvβ8 (例如ADWA11 2.4)抗體與此項技術中熟知之抗PDI抗體之組合療法提供治療腫瘤之潛在新穎治療劑。
儘管已參考不同申請案、方法、套組及組合物描述所揭示教示，但將瞭解在不背離本文中之教示及下文所主張之本發明情況下可進行不同變化及修改。提供前述實例以更好地說明所揭示之教示，且不意欲限制本文中呈現之教示之範疇。儘管已在此等例示性實施例方面描述本發明教示，但熟習此項技術者將容易理解在無不當實驗情況下此等例示性實施例之大量變化及修改為可能的。所有該等變化及修改在當前教示之範疇內。
本文中所引用之全部參考文獻(包括專利、專利申請案、論文、課本及其類似物)及其中引用的參考文獻以其尚未引用之程度，在此出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。在所併入文獻及類似材料中之一或多者(包括但不限於定義之術語、術語用法、所描述之技術或其類似物)與本申請案不同或矛盾的情況下，以本申請案為準。
對熟習此項技術者將顯而易見，在不背離本發明之範疇或精神的情況下，可在本發明中進行各種修改及變化。考慮本文所揭示的本發明之說明書及實踐，熟習此項技術者將清楚本發明之其他實施例。僅希望說明書及實例被視為例示性的，其中本發明之真正範疇及精神藉由以下申請專利範圍指示。
當結合附圖閱讀時將更好地瞭解以上概述以及本發明之以下實施方式。出於說明本發明之目的，展示以下圖式實施例，然而，應理解，本發明不限於所展示之精確配置及工具。圖 1A 展示比較小鼠融合瘤抗體ADWA11 (稱為「mADWA11」「ADWA11」或「融合瘤小鼠ADWA11」；SEQ ID NO: 20)、人類化ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)抗體(「huADWA11-2.4」、「ADWA11 2.4」或「人類化ADWA11-2.4」；SEQ ID NO: 6)及IGHV3-07生殖系(「IMGT」或「DP-54」；SEQ ID NO: 195)序列之重鏈可變區胺基酸序列的序列比對。根據Kabat，帶下劃線的胺基酸殘基為CDR序列。圖 1B 展示比較小鼠融合瘤抗體ADWA11 (稱為「mADWA11」「AWDA11」或「融合瘤小鼠ADWA11」；SEQ ID NO: 21)、人類化ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)抗體(「huADWA11-2.4」、「ADWA11 2.4」或「人類化ADWA11 2.4」；SEQ ID NO: 7)及IGKV1-39生殖系(「IMGT」或「DPK-9」；SEQ ID NO: 196)序列之輕鏈可變區胺基酸序列的序列比對。根據Kabat，帶下劃線的胺基酸殘基為CDR序列。圖 2 展示如藉由ELISA所測定，比較小鼠融合瘤抗體ADWA2及ADWA11對人類整合素αvβ3 (「AVB3」)及αvβ6 (「AVB6」)之結合特異性的代表性圖。ADWA2及ADWA11不結合整合素αvβ3 (「AVB3」)及αvβ6 (「AVB6」)，而對照αV結合抗體(「AlphaV mAb」)結合αvβ3及αvβ6兩者。圖 3A 展示代表性圖，其展示如藉由ELISA所測定，小鼠融合瘤ADWA11抗體結合至人類αvβ8。圖 3B 展示代表性圖，其展示如藉由ELISA所測定，人類化抗體ADWA11 VH05/VK01(2.4)結合至人類αvβ8。圖 4A 展示代表性圖，其展示如藉由ELISA所測定，與親本人類化ADWA11_VH05/VK01 (ADWA VH_1.5及ADWA VL_1.1)抗體與人類αvβ8之結合親和力相比，重鏈可變區中具有K30A、N55Q、N57Q、D61E、P62A或K63A胺基酸取代之ADWA11 VH05/VK01 Fab與人類αvβ8之結合親和力。重鏈可變區中具有K30A、N55Q、N57Q、D61E、P62A或K63A胺基酸取代之Fab保持對人類αvβ8之結合親和力。圖 4B 展示代表性圖，其展示如藉由ELISA所測定，與親本ADWA11 VH05-2/VK01抗體與人類αvβ8之結合親和力相比，重鏈可變區中具有胺基酸取代(例如F64V)或輕鏈可變區中具有胺基酸取代(例如，L30S、Y55A、A60Q、M94Q、L97Y、F101L、F101W或Q105G)之ADWA11 VH05-2/VK01 Fab與人類αvβ8之結合親和力。與人類化ADWA11 VH05-2/VK01抗體相比，輕鏈可變區中具有Y55A、A60Q、F101L或F101W胺基酸取代之Fab顯示與人類αvβ8之結合親和力降低。其他測試之Fab保持對人類αvβ8的結合親和力。圖 4C 展示代表性圖，其展示如藉由ELISA所測定，且與親本抗體(VH05-2_VK01親本)相比，具有如表 5 中所示之胺基酸取代之組合的稱為VH05-2/VK01(2.1) (ADWA11 2.1)、VH05-2/VK01(2.2) (ADWA 2.2)、VH05-2/VK01(2.3) (ADWA 2.3)、VH05-2/VK01(2.4) (ADWA 2.4)、VH05-2(F64V)/VK01(2.1)、VH05-2(F64V)/VK01(2.3)及VH05-2(F64V)/VK01(2.4)之ADWA11 VH05-2/VK01 Fab與人類αvβ8之結合親和力。所測試Fab中之各者保持對人類αvβ8的結合親和力。圖 5 展示如藉由Biacore所測定，比較小鼠融合瘤ADWA11 (「MsADWA11」或「mADWA11」)及人類化ADWA11 VH05-1/VK01 (「ADWA11 5-1_1」)及ADWA11 VH05-2/VK01 (「ADWA11 5-2_1」)對人類整合素αvβ3 (avb3)及αvβ6 (avb6)之結合特異性的代表性圖。ADWA11抗體不結合整合素αvβ3 (avb3)及αvβ6 (avb6)，而對照αV結合抗體(「抗av」)結合αvβ3及αvβ6兩者。圖 6A 展示融合瘤ADWA11 (「Ms ADWA11」) Fab與人類αvβ8之代表性Biacore結合痕量。圖 6B 展示亦稱為ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)或「ADWA11 2.4」 Fab之人類化ADWA11_5-2 2.4 Fab與人類αvβ8之代表性Biacore結合痕量。圖 6C 展示代表性表格，其展示如藉由Biacore評估，與親本小鼠抗體Fab (「MsADWA11」)相比，在本文中稱為ADWA11 5-2 2.4 (亦稱為ADWA11 2.4及ADWA11 VH05-2/VK01(2.4))之人類化Fab ADWA11保持人類αvβ8之親和力及跨物種反應性。ADWA11 5-2 2.4證明人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8之相等的親和力，其中KD ＜ 200 pM。親本小鼠抗體證明人類、食蟹獼猴及小鼠αvβ8之相等的親和力，其中KD為489-536 pM。圖 7A 展示比較重鏈可變區中具有單個胺基酸取代(例如，F64V)或輕鏈可變區中具有單個胺基酸取代(例如，L30S、M94Q、L97Y、F101L或Q105G)之ADWA11 VH05-2/VK01 (親本) Fab (「ADWA11」)之U251細胞結合資料的代表性圖。與親本抗體相比，輕鏈可變區中具有F101L胺基酸取代之Fab顯示與U251細胞(人類αvβ8)之結合降低。其他測試之Fab保持與U251細胞(人類αvβ8)的結合。圖 7B 展示比較輕鏈可變區中具有單個胺基酸取代(例如，M56A或N58S)之ADWA11 VH05-2/VK01 (親本) Fab (「ADWA11」)之U251細胞結合資料的代表性圖。M56A及N58S Fab保持與U251細胞(人類αvβ8)的結合。圖 7C 展示代表性圖，其展示與親本抗體相比，具有根據表5稱為2.1、2.2、2.3、2.4、2.1 (F64V)、2.3 (F64V)及2.4 (F64V)之胺基酸取代的組合之ADWA11 VH05-2/VK01 Fab (「ADWA11」)之U251細胞結合資料。所測試之Fab中之各者保持與固定U251細胞之結合。圖 8 展示比較抗體ADWA11 mIgG_4mut及ADWA11 VH05/VK01與U251細胞之結合親和力的代表性圖。圖 9A 展示代表性圖，其展示具有胺基酸取代之組合的稱為ADWA11_VH05-2/VK01(2.1)及ADWA11_VH05-2/VK01(2.4)之ADWA11 VH05-2/VK01與U251 (人類神經膠母細胞瘤)或C8-S (小鼠星形膠質細胞)細胞之結合。ADWA11 VH05-2/VK01(2.1)及ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)抗體保持與U251細胞(人類avb8)及C8-S (小鼠avb8)之結合。圖 9B 展示描繪整合素特異性抗體(諸如ADWA11 VH05-2/VK01(2.4))與表現αvβ3、αvβ5、αvβ6及αvβ8之HEK細胞之結合的代表性圖。結果展示ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)與表現αvβ8之HEK細胞之飽和結合及無與表現αvβ3、αvβ5、αvβ6之細胞之結合。結果證明ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)與人類αvβ8之特異性結合。圖 10A 展示比較小鼠融合瘤ADWA11 (「mFab」)及人類化ADWA11 Fab：ADWA11 VH01/VK01、ADWA11 VH02/VK01、ADWA11 VH02/VK02、ADWA11 VH05/VK02及ADWA11 VH05/VK01對U251細胞之TGFβ反式活化的作用的代表性圖。VH01/VK01、VH02/VK01及VH02/VK02 Fab顯示活性降低，而VH05/VK01保持活性，且與小鼠融合瘤ADWA11 Fab (「mFab」)相比，VH05/VK02證明活性提高以阻斷U251反式活化檢定中之TGFβ活化。圖 10B 展示比較重鏈可變區中具有胺基酸取代(例如F64V)或輕鏈可變區中具有胺基酸取代(例如，L30S、M94Q、L97Y、F101L、F101W或Q105G)之指定ADWA11 VH05-2/VK01 Fab對U251細胞中之TGFβ反式活化的作用的代表性圖。與人類化親本ADWA11 VH05-2/VK01 Fab相比，輕鏈可變區中具有F101L或F101W單個胺基酸取代之Fab顯示對TGFβ反式活化之作用降低。其他所測試之Fab在TGFβ反式活化檢定中保持活性。圖 10C 展示比較具有胺基酸取代，包括根據表5稱為2.1、2.2、2.3、2.4、2.1 (F64V)、2.3 (F64V)及2.4 (F64V)之胺基酸取代之組合的ADWA11 VH05-2/VK01 Fab之作用的代表性圖。與親本ADWA11 VH05-2/VK01 Fab相比，VH02-2/VK01(2.3)及VH05-2(F64V)/VK01(2.3) Fab顯示對TGFβ反式活化之作用降低。其他所測試之Fab在TGFβ反式活化檢定中保持活性。圖 10D 展示比較重鏈可變區中具有指定胺基酸取代(例如F64V)或輕鏈可變區中具有指定胺基酸取代(例如，L30S、M94Q、L97Y Q105G、M56A或N58S)之ADWA11 VH05-2/VK01 (親本) Fab之作用的代表性圖。與親本ADWA11 VH05-2/VK01 Fab相比，所測試之Fab在TGFβ反式活化檢定中保持活性。圖 10E 展示代表性圖，其展示人類化ADWA11 VH05/VK01、VH05/VK01-D61E (VH05-1/VK01)及VH05/VK01-N55Q-D61E (VH05-2/VK01) IgG對U251細胞之TGFβ反式活化的作用。所測試抗體在TGFβ反式活化檢定中保持活性。圖 10F 描繪代表性圖，其展示與同型對照抗體相比，ADWA11_VH05-2_VK01(2.4)對U251細胞(左圖)及C8-S (右圖)之TGFβ反式活化的作用。額外實驗證明，利用U251細胞之TGFβ反式活化檢定中ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)之IC50為199 ± 93.6 pM (平均值±標準差)。圖 11 展示代表性圖，其展示與表1中所闡述之陽性對照肽相比，對不同ADWA11 VH05-2VK01 CDR肽有反應者(抗原性)之百分比。肽抗原性評分用於選擇具有降低之免疫原性風險之可能的CDR序列。圖 12A 展示代表性圖，其展示EMT6乳癌腫瘤模型中抗αvβ8 (ADWA11)、抗PD1抗體(「PD-1」，RMP1-14)、mIgG1_4mut同型(2B8)及大鼠IgG2a同型(2A3)治療之組合的功效。腫瘤生長每週三次使用數位卡尺來量測，且以腫瘤體積(長度×寬度×寬度×0.5)報導。標繪各處理組中平均腫瘤體積+/- SEM，直至各組中10隻小鼠剩餘少於8隻。存活定義為達至1000 mm3 之時間。抗PD1及ADWA11之組合以大於所測試之其他組合之程度抑制腫瘤生長及提高總存活率。圖 12B 展示代表性圖，其展示上圖中1、3、10及20 mg/kg之抗αvβ8抗體(ADWA11)作為單一療法及同型對照(mIgG1_4mut同型(2B8))在EMT6乳癌模型中之功效。亦展示EMT6乳癌腫瘤模型中1、3、10及20 mg/kg之抗αvβ8抗體ADWA11與抗PD1抗體(RMP1-14，10 mg/kg)之組合及大鼠IgG2a同型(2A3)。在研究之第0天、第4天及第8天用抗體處理小鼠，且腫瘤生長每週三次使用數位卡尺來量測，且以腫瘤體積(長度×寬度×寬度×0.5)報導。圖 13 展示代表性圖，其展示抗αvβ8 (ADWA11)、抗41BB (MAB9371)、抗CTL4 (9D9)、mIgG1_4mut同型(2B8)及大鼠IgG2a同型(2A3)治療之組合在EMT6腫瘤模型中之功效。腫瘤生長每週三次使用數位卡尺來量測，且以腫瘤體積(長度×寬度×寬度×0.5)報導，標繪各處理組中之平均腫瘤體積+/- SEM，直至各組中10隻小鼠剩餘少於8隻，且存活定義為達至1000 mm3 之時間。抗4-1BB及ADWA11或抗CLTA4及ADWA11治療之組合以大於所測試之其他組合之程度抑制腫瘤生長及提高總存活率。圖 14A 描繪代表性圖，其展示在CT26腫瘤模型中，抗αvβ8抗體及輻射療法(ADWA11 + 5Gy輻射組)之組合以大於輻射療法與同型對照(mIgG4mut (2B8) + 5Gy輻射組)之程度抑制腫瘤生長及提高總存活率。腫瘤生長每週3次使用數位卡尺來量測，且以腫瘤體積(長度×寬度×寬度×0.5)報導，標繪各處理組中之平均腫瘤體積+/- SEM，且存活定義為達至1000 mm3 之時間。* p ＜ 0.05對比無處理，** P ＜ 0.05對比輻射+ 2B8。圖 14B 上圖描繪，在第12天自在第0天、第4天及第8天用10 mg/kg同型對照(對照)ADWA11抗體(抗ITGαVβ8)處理之小鼠收集之CT26腫瘤組織中之CD45、CD8及顆粒酶B表現細胞之密度，n = 6；p = P值。下圖描繪，在第一次10 mg/kg劑量之同型對照(同型)、ADWA11抗體(抗ITGαVβ8)、與5 Gy之靶向腫瘤之輻射組合的同型或與5Gy之靶向腫瘤之輻射組合的ADWA11抗體後12日收集的腫瘤組織中CD45、CD8、顆粒酶B及IFNγ之基因表現。抗體處理在研究之第1天、第4天及第8天靜脈內投與，且輻射療法在研究之第5天投與。各處理組中包括五隻小鼠；圖示平均值及平均值之標準誤差。圖 15 描繪代表性曲線圖，其展示EMT6腫瘤模型中CD45 (總淋巴細胞及骨髓細胞)、CD3 (總T細胞)、CD4 T細胞、CD8 T細胞及顆粒酶B (活化CD8及NK細胞)之密度的IHC分析。ADWA11(2.4) (本文中亦稱為ADWA11VH05-2/VK01(2.4))處理增大所分析之所有細胞類型之密度。每組N = 10，p值係針對圖上標記之雙尾t測試。圖 16A 展示針對CCK168腫瘤模型展示治療方案之圖解。提供四個治療組之腫瘤細胞植入及腹膜內(i.p.)抗體注射之時間線。圖 16B 展示使用2000 mm3 之腫瘤體積作為CCK168腫瘤模型之存活臨界值(cutoff)的代表性卡本-麥爾存活曲線。各組中n=10。藉由對數-等級Mantel-Cox測試，**p＜0.01。圖 16C 描繪展示圖16B中所示之腫瘤之個別生長曲線的代表性圖。當腫瘤達至≥2000 mm3 時或若觀測到大量腫瘤潰爛，則在45天終點之前處死小鼠。抗PD1抗體及ADWA11處理之組合以大於單獨的抗PD1抗體、ADWA11或同型對照處理或僅相加在一起的個別效果之程度協同抑制腫瘤生長及提高總存活率。所示資料代表3個非相依生物複本。圖 17A 描繪鑑別腫瘤浸潤性單核球、巨噬細胞及樹突狀細胞之圈選策略。活的單細胞首先用包括Ly6G、SiglecF、CD90及B220之清除閘(dump gate)圈選，以消除嗜中性球、嗜酸性球、淋巴細胞及B細胞。隨後藉由流動式細胞量測術分析及圈選陰性染色之細胞。巨噬細胞經鑑別為CD45+CD11b+CD64高 F4/80高 ，且樹突狀細胞經鑑別為CD45+CD11b+F4/80-CD64-MHCII高 CD11c高 。在巨噬細胞群中，與免疫刺激巨噬細胞一致之特徵經鑑別為Ly6C高 CD206低 ，且免疫抑制巨噬細胞經鑑別為Ly6C低 CD206高 。清除通道Ly6G+SiglecF+CD90.2+B220+。圖 17B 展示代表性圖，其展示，針對作為圖17A中所述之解聚腫瘤中之多色流動式細胞量測術圖之一部分分析之整合素αvβ8的細胞表面染色。代表性流動式細胞量測術圖展示CCK168腫瘤模型中螢光減一(fluorescence minus one；FMO)對照染色及ADWA11抗體染色。N=4個腫瘤。圖 18A 描繪展示與CCK168分離之CD45陰性細胞上之ADWA11染色的代表性圖。針對CD45之存在分析活的單細胞。CCK168腫瘤模型中4%之CD45陰性細胞對使用ADWA11抗體之αvβ8表現呈陽性。圖 18B 描繪αvβ8在CCK168、CT26及EMT6細胞株中之表現。藉由流動式細胞量測術使用同型及抗αvβ8 (ALDWA11)染色抗體分析活的單細胞之αvβ8表現。CCK168及EMT6細胞株具有可偵測的αvβ8表現，而CT26細胞株不具有可偵測的αvβ8表現。圖 19A 描繪代表性圖，其展示具有CCK168腫瘤之小鼠的瘤內CD8+ T細胞總數，該等腫瘤用單獨的對照抗體、抗PD1、ADWA11或組合的抗PD1及ADWA11處理。展示所有CD45+細胞之CD4及CD8表現之代表性流動式細胞量測術圖以及各組中之各小鼠的CD8+細胞數與CD45+細胞之比率。圖 19B 展示自各處理組中之小鼠採集，針對抗CD8及DAPI染色之CCK168腫瘤部分之代表性免疫螢光顯微圖。比例尺為50 μm。圖 19C 展示代表性流動式細胞量測術圖，其展示針對CD8表現圈選之細胞中顆粒酶B之胞內染色，以及各組中之各小鼠中表現可偵測顆粒酶B之CD8+細胞的百分比。圖 19D 展示代表性流動式細胞量測術圖，其展示圈選為CD45+Ly6G-CD11b+CD64高 F4/80高 之細胞之免疫刺激巨噬細胞(Ly6c高 ，CD206低 )及免疫抑制巨噬細胞(CD206高 ，Ly6c低 )。在巨噬細胞群中，免疫刺激巨噬細胞經鑑別為Ly6C高 CD206低 ，且免疫抑制巨噬細胞經鑑別為Ly6C低 CD206高 ，以及各小鼠之免疫刺激巨噬細胞之百分比。圖中之資料為平均值±SEM，每組n=10。藉由單向ANOVA，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。圖 20 描繪代表性圖，其展示在CCK168腫瘤微環境中CD4+及CD8+ T細胞上之ADWA11染色。活的單CD45+細胞針對CD4及CD8進行圈選，且用ADWA11染色。展示來自4個處理組中之各者之小鼠的代表性圖。圖 21A 展示代表性圖，其展示CD8+ T細胞之免疫耗竭。顯微圖展示在先前有或無用抗CD8耗乏性抗體或同型對照抗體處理之情況下，組合性抗PD-1/ADWA11療法之後分離之CCK168腫瘤中，用DAPI對比染色之抗CD8的免疫染色。圖 21B 展示代表性圖，其展示在ADWA11/抗PD-1組合療法之前24小時用抗CD8耗乏性抗體或同型對照抗體預處理之CCK168腫瘤的平均腫瘤生長曲線。圖 21C 展示代表性圖，其展示在ADWA11/抗PD-1組合療法之後，用抗CD8耗乏性抗體或同型對照抗體提前一天預處理的具有CCK168腫瘤之小鼠之存活。資料報導為存活百分比，各組中n=10。藉由對數-等級Mantel-Cox測試，**p＜0.01。圖 22A 展示代表性圖，其展示自用ADWA-11或對照抗體處理，且用偵測巨噬細胞之抗CD8、F4/80之抗體及偵測TGFβ信號傳導之磷酸化SMAD3 (phospho-SMAD3；pS3)染色之小鼠採集的CCK168腫瘤。向左展示低功率合併影像及僅展示pSMAD3之影像，且向右展示放大合併影像及來自方形區域之各單個抗體之影像。圖 22B 展示代表性圖，其描繪對照及ADWA11處理之小鼠中之pSmad3 (pS3)染色密度之定量。ADWA11處理降低CCK168腫瘤中之pSmad3密度。圖 23A 展示代表性圖，其闡述自30種不同人類癌症中之整合素-β8 mRNA表現之癌症基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas；TCGA)提取之資料。各點表示個別腫瘤樣品。此圖中所示之結果係基於由TCGA研究網(TCGA Research Network)產生之資料。圖 23B 展示代表性圖，其展示針對成熟單核球(CD16+單核球)、腫瘤相關巨噬細胞(CD14+巨噬細胞)、兩個單核球衍生之樹突狀細胞群(BCDA1+ moDC及BCDA3+ moDC)或嗜酸性球進行圈選且為了表現αvβ8而染色的新鮮、去鑑別之卵巢癌及腎細胞癌之解聚細胞之流動式細胞量測術資料。亦分析來自正常扁桃體之組織作為對照。圈選策略展示於圖23C中；各腫瘤類型n=2。圖 23C 為代表性圖，其展示人類腫瘤活組織檢查樣品。活的單CD45+細胞針對進行圈選以移除粒細胞粒細胞。SSC-A(lo)針對HLA-DR+CD3-進行圈選且用CD14及CD16進行染色。CD14+CD16+為指定CD16+單核球。CD16-細胞針對CD11c進一步染色。CD14+CD11c+細胞用CD1c及CD141進一步染色。CD1c+CD141-為指定CD1c+ MoDC。CD141+CD1c-為指定CD141+ MoDC。CD1c-CD141-細胞用CD64進一步染色，且CD64+群為指定CD14+TAM。圖 24A 展示代表性圖，其展示用0.01至10 mg/ml範圍內之ADWA11之濃度進行之TMLC細胞共培養生物檢定之結果。基於PAI-1螢光素酶報導體活性，將TGFβ活性報導為相對螢光素酶單位。每個ADWA11劑量n=3，重複3次。圖 24B 展示代表性圖，其展示在0.001至10 mg/ml之濃度之ADWA-11存在下在用TGFβ1之潛伏相關肽(LAP)塗佈的培養皿上進行之細胞黏附檢定之結果。黏附細胞用結晶紫(crystal violet)染色，且黏附性表示為595 nm處之吸光度。每個ADWA11劑量n=3，重複3次。圖 24C 描繪代表性圖，其展示抗整合素αvβ3、αvβ5、αvβ6及αvβ8之抗體用於野生型結腸癌細胞、SW-480之流動式細胞量測術，該等野生型結腸癌細胞不表現以表現β3 (SW-itgb3)、β6 (SW-itgb6)或β8 (SW-itgb8)之此等整合素或SW-480細胞中之任一者。針對所測試之各抗體及細胞型展示代表性流動式細胞量測術圖。圖 25A 展示代表性圖，其描繪擬合為在TG32小鼠中0.1、0.3及3 mg/kg i.v.給藥ADWA11(2.4)之二室非線性藥物動力學模型。圓圈：觀測資料。線：模型擬合。圖 25B 展示代表性圖，其描繪在TG32小鼠中擬合為3 mg/kg i.v.給藥ADWA11 2.4之二室藥物動力學模型。圓圈：觀測資料。線：模型擬合。圖 26 展示代表性圖，其描繪在分別以4、40及100 mg/kg單次IV快速投與之後，食蟹獼猴中之ADWA11 2.4之二室藥物動力學。圓圈：觀測資料。線：模型擬合。圖 27A - 27B 展示代表性圖，其說明在12 mg/kg Q28D及7 mg/kg Q14D之後，所預測之人類ADWA11 2.4藥物動力學。CP為所預測血漿濃度；CAVG為Cavg 或平均血漿濃度；嚙齒動物NOAEL為在嚙齒動物中無觀測到之不良作用程度的Cave ；且NHP NOAEL為在非人類靈長類動物中無觀測到之不良作用程度的Cave 。圖 28 描繪代表性圖，其展示使用2000 mm3 之腫瘤體積作為CCK168腫瘤模型之存活臨界值的卡本-麥爾存活曲線。處理組為同型對照、抗PD1抗體、ADWA11_4mut及抗PD1抗體及ADWA11_4mut之組合。抗PD1抗體及ADWA11_4mut處理之組合以大於單獨的抗PD1抗體、ADWA11_4mut或同型對照處理或組合處理之預期加成作用之程度協同提高總存活率。圖 29A 展示描繪代表性存活曲線之圖，且圖 29B 展示在第5天植入有皮下CT26細胞且用同型對照抗體、抗PD1、ADWA11_4mut或抗PD1及ADWA11_4mut之組合加上5 Gy輻射劑量處理之小鼠的代表性個別腫瘤生長曲線。一組用同型對照抗體處理之小鼠未接受輻射療法。資料報導為存活百分比，各組中n=10。藉由對數-等級Mantel-Cox測試，*** p＜0.001，****p＜0.0001。圖 29C 展示描繪處理開始後存活50日之CT26治癒小鼠中之代表性腫瘤再攻擊的圖。將親本CT26細胞在開始免疫療法與輻射療法組合後第51天，與CT-26治癒之小鼠之原始腫瘤植入位點對側植入至腹腹中。對照小鼠未接受輻射，且先前未暴露於腫瘤細胞。跟蹤再攻擊小鼠30日。對照n= 10；RT加上抗PD1, n=3；RT加上ADWA11_mut，n=5；RT加上ADWA11_mut及抗PD1, n=7。圖 30A 展示描繪代表性存活曲線之圖，且圖 30B 展示描繪在用同型對照抗體、ADWA11_4mut、4-1BB、抗CTLA4、抗PD-1或ADWA-11_4mut及4-1BB之組合、抗CTLA4或抗PD-1處理後正位地植入有EMT6細胞之小鼠之代表性個別生長曲線的圖。資料報導為存活百分比，各組中n=10。藉由對數-等級Mantel-Cox測試，**** p＜0.0001圖 30C 展示描繪代表性存活曲線之圖，且圖 30D 展示描繪用抗CTLA4或4-1BB之活化劑處理之小鼠之代表性個別生長曲線的圖。圖 30E 展示代表性圖，其描繪小鼠中之腫瘤再攻擊的結果，該等小鼠在用ADWA-11_4mut及抗CTLA4之協同組合或ADWA-11_4mut及4-1BB之活化劑之協同組合處理後腫瘤完全消退下存活50日。對照小鼠先前不暴露於腫瘤。評估再攻擊小鼠30日。n= 5個對照，n= 6個ADWA-11_4mut +抗CTLA4，n=5個ADWA-11_4mut + 4-1BB。圖 31A 描繪使用CD8a及顆粒酶B特異性塔克曼探針(taqman probe)之MC38腫瘤組織之mRNA基因表現分析。第一次給藥指定劑量濃度之同型對照或ADWA11 2.4抗體後12日收集腫瘤組織。在研究之第1天、第5天及第9天靜脈內投與處理，各處理組中包括5隻小鼠。* = p值＜ 0.05。圖 31B 展示代表性圖，其描繪同型(10 mg/kg)、ADWA11 2.4 (10 mg/kg)、抗PD-1抗體(RMP1-14，10 mg/kg)及組合ADWA11 2.4 (10 mg/kg)及抗PD1抗體(RMP1-14，10 mg/kg)處理之小鼠中MC38腫瘤模型之腫瘤生長率。另外，代表性圖展示用與10 mg/kg抗PD-1抗體(RMP1-14)組合之0.03、0.3、3及30 mg/kg之劑量之ADWA11 (抗ITGAVB8 (ADWA11_mIgG_4mut)抗體處理之小鼠中MC38腫瘤之腫瘤生長率。對於所有圖，在研究之第1天、第5天及第9天投與抗體。
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Claims (47)

  1. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或片段為至少一種選自由以下組成之群之抗體或片段： (a)    包含以下之抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR-L1)；包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之CDR-L2；包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之CDR-L3；包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之重鏈CDR1 (CDR-H1)；包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之CDR-H3； (b)   包含以下之抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列之CDR-L1；包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列之CDR-L2；包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-L3；包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR-H3； (c)    包含可變輕鏈(VL)區及可變重鏈(VH)區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列編碼的胺基酸序列，該VH區包含由ATCC寄存、具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列編碼的胺基酸序列； (d)   包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，該VH區包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列； (e)    包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含選自由SEQ ID NO:62-66組成之群之胺基酸序列，該VH區包含選自由SEQ ID NO:34-38組成之群之胺基酸序列； (f)    包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含選自由SEQ ID NO:47及92組成之群之胺基酸序列，該VH區包含選自由SEQ ID NO:39及88-91組成之群之胺基酸序列； (g)   包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含選自由SEQ ID NO:7及67-69組成之群之胺基酸序列，該VH區包含選自由SEQ ID NO:6及93組成之群之胺基酸序列； (h)   包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區包含選自由SEQ ID NO:7、47-69及92組成之群之胺基酸序列，該VH區包含選自由SEQ ID NO:6、34-46、88-91及93組成之群之胺基酸序列； (i)    包含輕鏈(LC)區及重鏈(HC)區之抗體或其抗原結合片段，該LC區包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列，該HC區包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列； (j)    包含LC區及HC區之抗體或其抗原結合片段，該LC區包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列，該HC區包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列； (k)   包含LC區及HC區之抗體或其抗原結合片段，該LC區包含SEQ ID NO:123之胺基酸序列，該HC區包含SEQ ID NO:124或182之胺基酸序列； (l)    包含VL區及VH區之抗體或其抗原結合片段，該VL區由SEQ ID NO:186之核酸序列編碼，該VH區由SEQ ID NO:190之核酸序列編碼；及 (m)   包含LC區及HC區之抗體或其抗原結合片段，該LC區由SEQ ID NO:185之核酸序列編碼，該HC區由SEQ ID NO:189或191之核酸序列編碼。
  2. 如請求項1之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含VL區及VH區，該VL區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，該VH區包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
  3. 如請求項1或2之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含VL區及VH區，該VL區包含與SEQ ID NO:7至少95%一致之胺基酸序列，該VH區包含與SEQ ID NO:6至少95%一致之胺基酸序列。
  4. 如請求項1之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含LC區及HC區，該LC區包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列，該HC區包含SEQ ID NO:2或3之胺基酸序列。
  5. 如請求項1或4之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含LC區及HC區，該LC區包含與SEQ ID NO:5至少95%一致之胺基酸序列，該HC區包含與SEQ ID NO:2或3至少95%一致之胺基酸序列。
  6. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或片段包含VH區及/或VL區，該VH區包含與選自由SEQ ID NO:6、34-46、88-91及93組成之群之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，該VL區包含與選自由SEQ ID NO: 7、47-69及92組成之群之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。
  7. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或片段包含： (i)抗體HC，其包含與SEQ ID NO: 2或3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列；及/或 (ii)抗體LC，其包含與SEQ ID NO: 5具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之胺基酸序列。
  8. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體，其包含LC及HC，該LC由SEQ ID NO:5之胺基酸序列組成，該HC由SEQ ID NO:2或3之胺基酸序列組成。
  9. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體，其包含： 抗體VL區，其包含來自包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列之該VL區之該CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；及 抗體VH區，其包含來自包含SED ID NO:6之胺基酸序列之該VH區之該CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
  10. 如請求項9之經分離之抗體，其包含抗體重鏈恆定區及抗體輕鏈恆定區，該抗體重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 181或184之胺基酸序列，該抗體輕鏈恆定區包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列。
  11. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體，其包含： a)抗體VL區，其包含來自包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列之該VL區之該第一、第二及第三CDR； 抗體VH區，其包含來自包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列之該VH區之該第一、第二及第三CDR； 抗體輕鏈恆定(CL)區，其包含SEQ ID NO:83之胺基酸序列；及 抗體重鏈(CH)恆定區，其包含SEQ ID NO:181或184之胺基酸序列； b)抗體VL區，其包含與SEQ ID NO: 7至少95%一致之胺基酸序列；及抗體VH區，其包含與SEQ ID NO:6至少95%一致之胺基酸序列；或 c)抗體LC區，其包含與SEQ ID NO: 5至少95%一致之胺基酸序列；及抗體HC，其包含與SEQ ID NO: 2或3至少95%一致之胺基酸序列。
  12. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含抗體VH及抗體VL，該抗體VH包含由ATCC寄存且具有該寄存編號PTA-124917之該***序列編碼的胺基酸序列，該抗體VL包含由ATCC寄存且具有該寄存編號PTA-124918之該***序列編碼的胺基酸序列。
  13. 一種特異性結合αvβ8整合素之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或片段具有以下特性中之至少一者： m. 表示為KD的人類αvβ8整合素之結合親和力，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於約536 pM； n. 人類αvβ8整合素之KD，其低於或等於約100 pM； o. 小鼠αvβ8整合素之KD，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於約489 pM； p. 小鼠αvβ8整合素之KD，其低於約100 pM； q. 食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於鼠類抗體ADWA11之KD，例如低於約507 pM； r. 食蟹獼猴αvβ8整合素之KD，其低於或等於約100 pM； s. 大鼠αvβ8整合素之KD，其為約160 pM； t. 人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠αvβ8整合素中之至少兩者、三者或所有的大致相等的親和力，例如如使用Biacore親和力檢定測定，低於約100 pM之KD； u. 抑制TGFβ反式活化之IC50，其為約100 pM至約300 pM； v. U251細胞之EC30，其為約100 pM至約400 pM； w. C8-S細胞之EC50，其為約110 pM至約180 pM；及 x. 至少一個所預測人類藥物動力學(PK)參數，其選自： vii. 中央室(CL)之清除率，其為約0.12 mL/h/kg； viii. 室間分佈清除率(CLF)，其為約0.51 mL/h/kg； ix.  該中央室之分佈容積(V1)，其為約36 mL/kg； x.  該周邊室之分佈容積(V2)，其為約33 mL/kg； xi. 終半衰期(t1 / 2 )，其為約15至17日；及 xii. 無與人類Fcγ受體或C1q之可偵測結合。
  14. 如前述請求項中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其包含人類IgG1 Fc區，如根據Kabat之EU編號進行編號，該人類IgG1 Fc區包含一或多個選自位置L234、L235及G237之取代(例如，L234A、L235A及G237A中之一或多者)。
  15. 如前述請求項中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為人類化抗體、人類抗體、鼠類抗體、嵌合抗體或駱駝抗體。
  16. 如前述請求項中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體重鏈同型選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其任何變異體；及/或其中該輕鏈恆定區選自κ或λ。
  17. 如前述請求項中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體重鏈同型為IgG1及/或其中該輕鏈恆定區為κ輕鏈。
  18. 一種抗體或其抗原結合片段，其與如請求項4之抗體或其抗原結合片段為結合至αvβ8整合素而進行競爭。
  19. 一種醫藥組合物，其包含如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
  20. 如請求項19之醫藥組合物，其包含：i)包含抗體重鏈及抗體輕鏈之抗體或其抗原結合片段，該抗體重鏈由SEQ ID NO:2之胺基酸序列編碼，該抗體輕鏈由SEQ ID NO:5之胺基酸序列編碼，ii)包含抗體重鏈及抗體輕鏈之抗體或其抗原結合片段，該抗體重鏈由SEQ ID NO:3之胺基酸序列編碼，該抗體輕鏈由SEQ ID NO:5之胺基酸序列編碼，或iii)兩者。
  21. 一種經分離之核酸分子，其編碼如請求項1至18中任一項之抗體或其抗原結合片段。
  22. 如請求項21之經分離之核酸，其中該經分離之核酸編碼該抗體或其抗原結合片段之該VH區、VL區或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO:190之核酸序列、SEQ ID NO:186之核酸序列或兩者。
  23. 如請求項21之經分離之核酸，其中該經分離之核酸編碼該抗體或其抗原結合片段之該重鏈恆定區、該輕鏈恆定區或兩者，且其中該核酸包含SEQ ID NO: 192或193之核酸序列；SEQ ID NO: 194之核酸序列；或兩者。
  24. 如請求項21之經分離之核酸，其中該經分離之核酸編碼該抗體或其抗原結合片段之該HC、LC或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO:189或190之核酸序列；SEQ ID NO185之核酸序列；或兩者。
  25. 如請求項21之經分離之核酸，其中該經分離之核酸包含ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124917之質體之***序列的核酸序列、ATCC寄存且具有寄存編號PTA-124918之質體之***序列的核酸序列或兩者。
  26. 如請求項21之經分離之核酸，其中該經分離之核酸包含與SEQ ID NO: 189或SEQ ID NO: 191具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性之核酸序列；與SEQ ID NO: 185具有至少80%、85%、87%、90%、92%、93%、95%、97%、98%或100%序列一致性之核酸序列；或兩者。
  27. 一種載體，其包含如請求項21至26中任一項之核酸。
  28. 一種宿主細胞，其包含如請求項21至26中任一項之核酸或如請求項27之載體。
  29. 如請求項27之宿主細胞，其中該宿主細胞係選自由以下組成之群的哺乳動物細胞：CHO細胞、COS細胞、HEK-293細胞、NS0細胞、PER.C6®細胞及Sp2.0細胞。
  30. 一種製造經分離之抗體或其抗原結合片段之方法，其包含在其中該抗體或片段由如請求項28之宿主細胞表現之條件下培養該宿主細胞及分離該抗體或片段。
  31. 一種降低有需要之個體之αvβ8整合素活性之方法，該方法包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至18中任一項之抗體或其抗原結合片段或如請求項19或20之醫藥組合物。
  32. 一種治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如請求項1至18中任一項之抗體或其抗原結合片段或如請求項19或20之醫藥組合物。
  33. 如請求項32之方法，其進一步投與細胞毒性劑、細胞生長抑制劑、化學治療劑、激素治療劑、疫苗、免疫療法、手術、輻射、冷凍手術、熱療法或其組合。
  34. 如請求項33之方法，其中該進一步投與與投與治療有效量之該抗體或其抗原結合片段或醫藥組合同時、依序或分開。
  35. 如請求項33之方法，其中該免疫療法包含選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：抗PD1抗體、抗PD-L1抗體、抗PD-L2抗體、抗CTLA-4抗體、可溶性CTLA-4融合蛋白及其組合，且其中該抗PD-L1抗體不為阿維魯單抗(avelumab)。
  36. 如請求項32至35中任一項之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：頭頸部鱗狀細胞癌、透明細胞型或乳頭狀細胞型之腎細胞癌、卵巢癌、輸卵管癌、原發性腹膜癌、胃癌、胃食道接合處癌、食道癌、肺鱗狀細胞癌、胰管腺癌、膽管癌、子宮癌、黑素瘤、尿道上皮癌及其組合。
  37. 一種使用如請求項1至18之抗體或其抗原結合片段偵測樣品、組織或細胞中之αvβ8整合素之方法，其包含使該樣品、組織或細胞與該抗體或其抗原結合片段接觸及偵測該抗體或其抗原結合片段。
  38. 一種套組，其包含如請求項1至18中任一項之抗體或片段或如請求項19或20之醫藥組合物且視情況包含如請求項35之調節劑。
  39. 如請求項1至18中任一項之抗體或其抗原結合片段或如請求項19或20之醫藥組合物，其用於降低有需要之個體之αvβ8整合素活性以治療癌症。
  40. 如請求項1至18中任一項之抗體或其抗原結合片段或如請求項19或20之醫藥組合物，其用於治療癌症，視情況其中該抗體或其抗原結合片段或該醫藥組合物用於與免疫療法組合同時、依序或分開投與，其中該組合視情況提供協同治療效果。
  41. 如請求項40所使用之抗體或其抗原結合片段或醫藥組合物，其中該癌症選自由以下組成之群：頭頸部鱗狀細胞癌、透明細胞型或乳頭狀細胞型之腎細胞癌、卵巢癌、輸卵管癌、原發性腹膜癌、胃癌、胃食道接合處癌、食道癌、肺鱗狀細胞癌、胰管腺癌、膽管癌、子宮癌、黑素瘤、尿道上皮癌及其組合，視情況其中該抗體或其抗原結合片段或該醫藥組合物或組合用於與投與免疫療法或輻射療法一起使用。
  42. 一種如請求項1至18中任一項之抗體或其抗原結合片段或如請求項19或20之醫藥組合物的用途，其用於治療癌症。
  43. 一種如請求項1至18中任一項之抗體或其抗原結合片段的用途，其用於製造用以治療癌症之藥物。
  44. 一種治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之(i)特異性結合αvβ8整合素之抗體或其抗原結合片段，及(ii)抗PD1、抗PD-L1或抗PD-L2免疫檢查點分子之調節劑。
  45. 如請求項44之方法，其中該癌症為鱗狀細胞癌。
  46. 如請求項44之方法，其中該癌症為乳癌或結腸癌。
  47. 如請求項44之方法，其中該調節劑選自由以下組成之群：抗PD1抗體、抗PD-L1抗體及抗PD-L2抗體。
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