JP7034914B2 - 線維症および/または線維性疾患の治療のための抗α-vインテグリン抗体 - Google Patents
線維症および/または線維性疾患の治療のための抗α-vインテグリン抗体 Download PDFInfo
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Description
肺の線維症、例えば、肺線維症、嚢胞性線維症および/または特発性肺線維症;肝臓の線維症、例えば、肝硬変;
心臓の線維症、例えば、心房線維症、心内膜線維症および/または過去の心筋梗塞の結果として生じる損傷としてのもの、
が挙げられる。
i)血管異常:
SSc血管異常の特徴的な病理学的所見は、複数の血管床の小動脈および細動脈にかかわる非炎症性の増殖性/閉塞性血管障害である。長年のSScにおいて、これらの病巣は炎症がないときに一般的に起こるが、初期疾患では、炎症細胞の潤滑が多くの臓器で目立つ。血管損傷に関する組織病理学的証拠は、線維症が病変部および非病変部の皮膚で検出され得る前に存在し、全身性のプロセスを示す。一般的に、例えばレイノー現象などの発現は他の疾患発現に先行する。SSc血管障害のさらなる臨床兆候としては、皮膚の血管拡張、爪郭の毛細血管の変化、肺動脈高血圧症(PAH)、デジタルピット形成、胃腔血管拡張、および強皮症腎クリーゼが挙げられる。
線維症は、過剰量のI型コラーゲンおよび他の線維状コラーゲン、フィブロネクチン、エラスチン、プロテオグリカン、ならびに細胞外マトリックス(ECM)内の他の結合組織分子の蓄積を特徴とする。そのプロセスは、組織構造の破損を引き起こす。SScでは、皮膚および内臓の組織間腔および血管の線維症が、それらの進行性機能障害および最終的な不全症に直接寄与する。肺、胃腸管、心臓、腱鞘、および筋束周辺部組織周囲の骨格筋が、最も顕著に影響を受ける。
免疫系の先天性および順応性の能力は、初期SScで活性化され、そして、自己免疫が主体であると思われる;しかしながら、発症機序における細胞性および液性自己免疫エフェクター経路の役割は不明確である。
複数の抗原特異性を有する循環自己抗体は、SScに罹患しているほとんどすべての患者で検出できる。
SScの臨床兆候は多様であり、複雑な基本病理を反映している。様々な臨床所見の頻度は、疾患のステージおよびサブセットによって異なる。臓器病変の経過および重症度は個々の患者で予測できない。加えて、それぞれの合併症の重症度および活性は、治療法の決定をおこなう際に考慮される必要がある。疲労感および倦怠感は、その初期相で通常さらに目立つが、病気の期間を通じて共通である。反応性鬱病は、多くの場合、過酷で、かつ、外見を損なうこの疾患によくある付随物である。
SScの顕著な特徴は、皮膚の硬化および肥厚であるが(「強皮症」)、多くの内臓もたSScに関与し得る。2つの主要な臨床サブセットが、皮膚病変と追加の関連臨床的および実験的特徴のパターンによって差別化される(表4)。CREST症候群(皮膚石灰症、レイノー現象、食道運動障害、足指硬化症、血管拡張に由来する頭字語)は、臨床所見の組み合わせに基づいて個別化されたが、IcSSCとして分類されてもよい。SScは、他の結合組織疾患の特徴を有するか、またはそれらの基準を満たす。皮膚病変を伴わないSSc(「強皮症のない強皮症」)は稀であり、皮膚標徴の欠如により経過において晩発であると通常診断された。幼児期および青年期のSScは非常に稀である。さらなる分類法は「診断と症状」と題した項で見ることができる。
SScの診断は、通常、臨床兆候、特に皮膚病変のパターンに基づいておこなわれる。米国リウマチ学会(ACR)は、患者を分類するために診断基準を提案した。いずれか一方の大基準(すなわち、近位強皮症)または2以上の小基準(すなわち、[1]足指硬化症、[2]指先のデジタル陥凹性瘢痕または遠位指腹の実体損失、[3]両側性基底肺線維症)が、SScとして患者を分類するのに必要である。
1.これらの基準は、SSc研究に組み入れる対象となったすべての患者に適用可能である。
2.これらの基準は、例えば:腎性硬化性線維症、糖尿病性浮腫性硬化、硬化性粘液水腫、エリスロ筋肉痛、ポルフィリア、硬化性苔癬、移植片対宿主病、および糖尿病性手関節症などのそれらの兆候がより明らかな全身性硬化症様疾患を患っている患者には適用不可である。「指を割く皮膚肥厚」に罹患している患者もSScを患っているに分類されない。
表6.SScの症状(臨床兆候および他の臨床所見、表2および3を参照)
既知のモノクローナル抗αv抗体DI17E6(本明細書中でアビツズマブ、アビツズマブ、EMR62242またはEMD525797とも呼ばれる)が、線維症、そして特に線維性障害の発症、出現、および/または兆候に関連する細胞シグナル伝達プロセスを妨げるのに非常に効果的であることがわかった。
肺線維症、肺胞隔炎(間質性肺疾患、ILD)、および/または強皮症関連間質性肺疾患(SSc-ILD)の治療における使用のための、抗αvインテグリン抗体DI17E6、あるいは生物学的に活性な変異体その改変体、好ましくは抗αvインテグリン抗体DI17E6。
DI17E6抗体、および/あるいは生物学的に活性なその変異体または改変体を患者に投与することを含む、線維症、好ましくは全身性硬化症、特に先におよび/または以下で記載する全身性硬化症を治療する方法、ここで、生物学的に活性な変異体または改変体は、CDR領域、ならびに重鎖および軽鎖可変領域を含み、そしてそれは、DI17E6の可変領域と比較して、アミノ酸配列が80%~95%同一である。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、前記抗体の用量、好ましくは有効量は、2週間あたり500mg~1500mgまたは1カ月あたり1000~3000mg、好ましくは2週間あたり500~1000mgまたは1カ月あたり1000~2000mgである。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、500~1000mgの用量、好ましくは有効量が単回注入によって投与される。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、1000~2000mgの用量、好ましくは有効量が単回注入によって投与される。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、500~1000mgの用量、好ましくは有効量が1カ月に一度の単回注入によって投与される。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、1000~2000mgの用量、好ましくは有効量が1カ月に一度の単回注入によって投与される)。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、約500mgの用量、好ましくは有効量が単回注入によって投与される。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、1500mgの用量、好ましくは有効量が単回注入によって投与される。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、1500mgの用量、好ましくは有効量が1カ月に一度の単回注入によって投与される。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、1500mgの用量、好ましくは有効量が4週間に一度の単回注入によって投与される。
ここで、抗体は、追加の同時療法剤を伴わない単独療法設定で投与される。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、抗体は、追加の同時療法剤と組み合わせて併用療法設定で投与される。
・先におよび/または以下で記載するSSc-ILDに罹患している患者の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、抗体は、MMF(ミコフェノレートまたはミコフェノラート)と組み合わせて併用療法設定で1カ月あたり約500mgの量で、好ましくは1カ月に一度の単独投与として約500mgの量が投与される。
・先におよび/または以下で記載するSSc-ILDに罹患している患者の治療における使用のためのDI17E6抗体、ここで、抗体は、MMF(ミコフェノレートまたはミコフェノラート)と組み合わせて併用療法設定で1カ月あたり約1,000mgの量で、好ましくは1カ月に一度の単独投与として約1,000mgの量で投与される。
・好ましくは先におよび/または以下で記載する様式での、線維症、好ましくは過度の、および/または病的な線維症の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体。
・好ましくは先におよび/または以下で記載する様式での、全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体。
・先におよび/または以下で記載する疾患の治療における使用のための、先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記疾患で侵される臓器は、肺、肝臓、腎臓、心臓系または皮膚から成る群から選択される。
・好ましくは先におよび/または以下で記載する様式での、線維性障害、好ましくは先におよび/または以下で記載する線維性障害の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記線維性障害は、肺、肝臓、腎臓、心臓、および皮膚から成る群から選択される1若しくは複数の臓器を侵す。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記全身性硬化症は、肺、肝臓、腎臓、心臓、および皮膚から成る群から選択される1若しくは複数の臓器を侵す。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、全身性硬化症は、心臓系、血管、および/または血液を侵す。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記全身性硬化症は、肺および/または皮膚を侵す。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記全身性硬化症は皮膚を侵す。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記全身性硬化症は肝臓を侵す。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記全身性硬化症は腎臓を侵す。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記全身性硬化症は心臓を侵す。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体、ここで、前記全身性硬化症は、肺線維症および/または肺胞隔炎(間質性肺疾患、ILD)を含む。
・SSc-ILDまたは強皮症-ILDの治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体。
・SSc-ILDに罹患している患者の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体。
・強皮症-ILDに罹患している患者の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体。
・全身性硬化症に関連する間質性肺疾患(SSc-ILD)に罹患している対象、好ましくはヒト対象の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体。
・全身性硬化症に関連する間質性肺疾患(SSc-ILD)に罹患している対象、好ましくはヒト対象の治療における使用のためのアビツズマブ。
・既にミコフェノラート、好ましくは一定容量のミコフェノラートを与えた、SSc-ILDに罹患している対象、好ましくはヒト対象の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するDI17E6抗体。
・既にミコフェノラートを与えた、SSc-ILDに罹患している対象、好ましくはヒト対象の治療における使用のためのアビツズマブ。
・全身性硬化症(SSc)の治療における使用のための先におよび/または以下で記載するような前記抗αvインテグリン抗体DI17E6の生物学的に活性な変異体または改変体、ここで、全身性硬化症は、特発性肺線維症、原発性硬化性胆管炎、非アルコール性脂肪性肝炎(NASHまたはNash)、原発性巣状糸球体硬化症、原発性分節性糸球体硬化症、糖尿病性腎症、拡張機能障害、および骨髄線維症から成る群から選択される1若しくは複数の適応症を含む。
・線維症および/または線維性障害の予防および/または治療、そして特に、特発性肺線維症、原発性硬化性胆管炎、非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)、原発性巣状糸球体硬化症、原発性分節性糸球体硬化症、糖尿病性腎症、拡張機能障害、および骨髄線維症から成る群から選択される1若しくは複数の適応症の予防および/または治療のための薬物の製造のための、DI17E6、あるいは生物学的に活性なその変異体または改変体、好ましくは本明細書中に記載した内容に準じた生物学的に活性なその変異体または改変体、そして特にアビツズマブの使用。
・好ましくは肺線維症、肺胞隔炎(間質性肺疾患、ILD)、および/または強皮症関連間質性肺疾患(SSc-ILD)を含めた全身性硬化症の予防および/または治療のための薬物の製造のためのアビツズマブの使用。
・本明細書中に記載の線維症および/または線維性障害の予防および/または治療のための薬物の製造のためのDI17E6、あるいは生物学的に活性なその変異体または改変体、好ましくは本明細書中に記載した内容に準じた生物学的に活性なその変異体または改変体、そして特にアビツズマブの使用、ここで、治療は、ミコフェノール酸、ミコフェノラート、ミコフェノラートモフェチル、ミコフェノラートナトリウム、メトトレキサート、アメソプテリン、およびプレドニゾンから成る群から選択される1若しくは複数の有効成分の投与をさらに含む。
・本明細書中に記載した線維症および/または線維性障害の予防および/または治療のための薬物の製造のためのアビツズマブの使用、ここで、治療は、メトトレキサート、および/またはアメソプテリンの投与をさらに含む。
・本明細書中に記載した線維症および/または線維性障害の予防および/または治療のための薬物の製造のためのアビツズマブの使用、ここで、治療はプレドニゾンの投与をさらに含む。
その軽鎖ドメインは、ヒト化モノクローナル抗EGFR抗体425(マツズマブ)に由来する。この抗体は、例えば欧州特許第0531472B1号明細書に詳細に記載されており、そのマウス対応物425(マウスMAb 425、ATCC HB9629)に由来する。この抗体は、ヒトA431癌細胞株に対して産生されたものであり、ヒト上皮成長因子受容体(EGFR)の外部ドメイン上のポリペプチドエピトープに結合することが見出された。マツズマブは臨床試験で高い効力を示した。
(i)マウスモノクローナル抗αvインテグリン抗体17E6に由来するCDR軽鎖および重鎖領域、
(ii)ヒト化モノクローナル抗EGFR抗体425から得られる軽鎖フレームワーク領域、
(iii)マウスモノクローナル抗αvインテグリン抗体17E6に由来する重鎖フレームワーク領域(任意選択で、特定位置のアミノ酸の1つまたは複数の変異を含む)、および(iv)ヒトIgG2に由来する重鎖定常領域およびヒト定常κ軽鎖領域、ここで、前記IgG2ドメインでは、IgG2ヒンジ領域がヒトIgG1ヒンジドメインで置換されており、任意選択で、IgG2内で1つまたは複数の変異がなされている。
(i)可変および定常軽鎖配列(配列番号1):
ともにLAPに結合することができるが、αvβ1およびα8β1インテグリンは共にTGF-βを活性化しない。αvβ6依存性TGF-β活性化のPARI媒介性促進は、それによって急性肺傷害の発症に寄与する凝固カスケードが活性化する1つの機構として解釈されるだろうことが、これらのインビトロ実験で確認した。
用語「インテグリン阻害剤」または「インテグリン受容体阻害剤」は、インテグリン受容体を妨害および阻害する天然または合成の分子を指す。ある場合には、この用語には、前記インテグリン受容体のリガンド(例えば、αvβ3については:ビトロネクチン、フィブリン、フィブリノーゲン、von WiIIebrand因子、トロンボスポンジン、ラミニン;αvβ5については:ビトロネクチン;αvβ1については:フィブロネクチンおよびビトロネクチン;αvβ6については:フィブロネクチン)に対するアンタゴニストが含まれる。インテグリン受容体に対するアンタゴニストは、本発明によれば好ましい。インテグリン(受容体)アンタゴニストは、天然または合成のペプチド、非ペプチド、ペプチドミメティカ、免疫グロブリン、例えば抗体もしくはその機能性断片、または免疫コンジュゲート(融合タンパク質)であってもよい。本発明の好ましいインテグリン阻害剤は、αvインテグリン(例えば、αvβ3、αvβ5、αvβ6、およびサブクラス)の受容体に対するものである。好ましいインテグリン阻害剤は、αvアンタゴニストであり、具体的には、αvβ3アンタゴニストである。本発明の好ましいαvアンタゴニストは、RGDペプチド、ペプチドミメティック(非ペプチド)アンタゴニスト、およびαv受容体を妨害する抗体などの抗インテグリン受容体抗体である。代表的な非免疫学的αvβ3アンタゴニストは、米国特許第5,753,230号明細書および米国特許第5,766,591号明細書の教示に記載されている。好ましいアンタゴニストは、直鎖状および環状のRGD含有ペプチドである。環状ペプチドは、通常、安定性が高く、血清半減期の延長を引き出す。しかしながら、本発明の最も好ましいインテグリンアンタゴニストは、インテグリン受容体であるαvβ3、αvβ1、αvβ6、αvβ8、αIIbβ3の妨害に効果的なシクロ-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal)(EMD 121974、Cilengitide(登録商標)、Merck KGaA, Germany);欧州特許第0770622号明細書)である。線維性障害の患者へのDI17E6とCilengitideとの併用療法は、本発明に従って効果的である。
例えば、250mg/10mLの濃度においてアビツズマブは、静脈(i.v.)投与を意図した無菌液として最終製剤として使用され得る。
アビツズマブ製剤は、
例えば、灰色のブチルゴム栓で封をされた、および、例えば、アルミニウム/赤色ポリプロピレンフリップオフシールで密封された、30RI型ガラスバイアルで供給され得る。斯かるバイアルは、例えば、安定剤としてポリソルベート80(Tween(登録商標)80)を含んだ、使用された、例えば、25mg/mLの保存料無添加のクエン酸塩緩衝生理食塩溶液として250mgのアビツズマブを含む使い捨てのバイアルとして使用され得る。斯かるバイアルは、10mLの容量のアビツズマブ最終製剤を取り出すのに十分な過多量を含んでもよい。一般的に、かかるアビツズマブの最終製剤に関して、安全、かつ、現在の欧州薬局方(EP)または米国薬局方(USP)またはその両方に準拠すると見なされた賦形剤のみが使用される。
医療状況において、「月」または「1カ月」という用語は、好ましくは約28日間、約29日間、約30日間または約31日間の期間を指し、そして、より好ましくは約28日間、約30日間または約31日間の期間を指す。
医療状況において、「年」または「1年」という用語は、好ましくは約12カ月の期間、または約48週間、約50週間、もしくは約52週間の期間を指し、そして、より好ましくは12カ月の期間、または約48週間もしくは約52週間の期間を指す。
本発明は、実施例によって以下でさらに詳細に説明される。本発明は、特許請求の範囲に記載した範囲の全体にわたって実施され得ることが好ましく、ここに示した実施例に制限されない。
筋線維芽細胞の分化は、上皮線維芽細胞の共培養において誘発され、そして、アビツズマブによって阻害される
略語表
αSMA:α平滑筋アクチン
BSA:ウシ血清アルブミン
Cy5:シアニン5
DAPI:4’,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール
ECM:細胞外マトリックス
FGM:線維芽細胞増殖培地
FMT:線維芽細胞の筋線維芽細胞への転換
FITC:蛍光イソチオシアネート
IXM:Image Xpressマイクロスクリーニングシステム
μg:マイクログラム
mg:ミリグラム
mL:ミリリットル
ng:ナノグラム
NHDF:正常ヒト皮膚線維芽細胞
NHLF:正常ヒト肺線維芽細胞
PBS:リン酸緩衝生理食塩水
TGF-β1:形質転換成長因子β
ELISA:酵素結合免疫吸着アッセイ
FBS:ウシ胎仔血清
IL:インターロイキン
TGF-β1は、増強された細胞外マトリックス堆積に寄与する線維芽細胞の筋線維芽細胞への転換(FMT)の強力なメディエーターであり、そして、線維症の主なドライバーである。αvインテグリンとTGF-βとの間のクロストークに関する実質証拠がこれらのプロセス中に存在する。TGF-βは、潜在型関連ペプチド(LAP)領域を含む潜伏型で分泌される。TGF-β1のLAPは、インテグリンαvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6およびαvβ8と相互作用して、TGF-β1の活性化をもたらすRGDモチーフを含む。アビツズマブは、αvに特異的なヒト抗体なので、そのため、αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6およびαvβ8を阻害する。
線維症は、細胞外マトリックスの産生、堆積、および収縮による過度の瘢痕化を特徴とし、そして、筋線維芽細胞の増殖および活性化によって駆動されると考えられる。線維症は、それに対して効果的な治療法がない疾患の最大のグループの1つである。線維形成過程は、線維化促進および抗線維形成メディエーターのネットワーク内の複雑な相互作用セットによって調整される。TGF-βシグナル伝達は、増強された細胞外マトリックス堆積に寄与し、そして、疾患の主なドライバーである筋線維芽細胞転換(FMT)に対して線維芽細胞において重要な役割を果たすと考えられる。
本研究の目的は、インビトロにおけるTGF-β活性化およびFMTを妨害するアビツズマブの能力を測定し、それによって、線維症のための治療薬としてのその可能性を示すことであった。
試験系
試験系は、線維症を経た組織における上皮細胞と線維芽細胞の潜在的相互作用を模倣した上皮細胞/線維芽細胞共培養である。健常ドナー由来の正常ヒト肺線維芽細胞(NHLF)または正常ヒト皮膚線維芽細胞(NHDF)を、NCI-H358またはCalu3細胞株と共に共培養した。
研究設計の概略
線維芽細胞培養培地(2%FBSを含むFGM):FGM(商標)-2ブレットキット(商標)(CC-3132)は、以下の成長サプリメント:0.5mlのhFGF-B(CC4065J);0.5mlのインスリン(CC-4021J);10mlのFBS(CC-4101J);0.5mlのGA-1000(CC4081J)を含有する、線維芽細胞の細胞基礎培地(CC-3131)および線維芽細胞ブレットキット(CC-4126)の500mlボトル1本を含む。
Calu-3培地:55mlの熱不活性化FBSを含有する500mlのDMEM。
プレートを、各洗浄の間の5分間のインキュベーションを用いて、1X BD Perm洗浄バッファー(96ウェルプレートに200μl)を使用して2回洗浄した。抗SMA抗体を、洗浄バッファー中に1:100希釈にて加え、そして、室温にて3時間インキュベートした。次に、プレートを、1X BD Perm洗浄バッファー(96ウェルプレートに200μl)で2回洗浄した。AlexaFluor488と結合した二次Abヤギ抗マウスIgGを、100μlの終量においてPerm洗浄バッファー中に1:200希釈にて使用し、そして、室温にて1時間インキュベートした。細胞を、各洗浄間の5分間のインキュベーションを伴って、200μlの1X BD Perm洗浄バッファーを使用して2回洗浄した。DAPIを1:1000希釈にて洗浄バッファーに加え、そして、200μlをプレートに加え、室温にて5分間インキュベートし、溶液を吸引し、そして、200μlの1X BD Perm洗浄バッファーで置換した。
画像化のためのプレート出力手順
Image Xpressマイクロスクリーニングシステム(IXM)機器およびMetaXpressソフトウェアプログラムを、画像収集および解析のために使用した。二色染色:DAPIおよびFITC染色のために、プレート収集画像化プロトコール:「2014-YW-SMA488-DAPI-10x」を使用した。データ解析のために、多重波長細胞スコア化解析パラメータプロトコール「2014-5-7-YW-SMA488-DAPI-4x-2para a」を使用して、FMTによるSMA線維誘発の量を定量化した。個々のウェルの画像を、BMPファイルとしてダウンロードした。
ヒトIL‐6のレベルを、製造業者の取扱説明書にしたがって、市販のIL-6 ELISAアッセイ(Human Duoset IL-6、R & D Systems)を使用して測定した。450nmにおける光学濃度測定値(OD)を、Spectramax M5eリーダー(Molecular Devices)および内部IL-6標準からOD測定値を使用して計算した4-パラメーターロジスティック曲線の当てはめから推定した各サンプルのIL-6濃度を使用しておこなう。
QuantStudio 12k flex Applied BiosystemサイクラーによるRT-PCRの実施が完了した後、すべてのウェルのCT値を、相対発現の計算のためにExcelのスプレッドシートにダウンロードした。
CT閾値サイクル。CTは、反応中に作り出される蛍光が閾値線と交差するサイクル数である。CT値は対数的であり、定量分析法に直接使用される。
ΔCT値を計算する。ΔCT=CT標的-CT参照文献(GAPDH)
基礎レベルでの相対遺伝子発現としてでの2-ΔCTを計算する。
ΔCT値を計算する。ΔCT=CT標的-CT参照文献(GAPDH)
ΔΔCT値を計算する。ΔΔCT=ACT試験サンプル(治療)-ACTキャリブレーターサンプル(治療なし)
内因性標準(例えば、GAPDH)に対する正規化およびキャリブレーター(治療前または対照)に関連する、標的の量は:2-ΔΔCTによって示される。
アビツズマブは、H358線維芽細胞とCalu3線維芽細胞との共培養において高められたαSMA発現を妨害する(図1も参照)
試験は、線維形成過程中のαvインテグリンとTGF-βとの間の仮定されたクロストークに関する実質証拠を示した。腫瘍上皮細胞/線維芽細胞共培養系を、線維症をへた組織の上皮細胞と線維芽細胞との潜在的相互作用を模倣するために使用した。共培養の7日後に、αSMAの基礎レベルは、肺線維芽細胞または皮膚線維芽細胞の単独培養において低くなった。NCI-H358およびCalu-3は、線維芽細胞層におけるαSMA発現を誘発した(図1)。NHLF+NCI-H358;NHLF+Calu-3;NHDF+NCI-H358;NHDF+Calu3共培養へのアビツズマブの添加は、線維芽細胞におけるαSMA発現の誘発を阻害した。
NHLF+NCI-H358;NHDF+NCI-H358の共培養は、FMTのマーカーである複数のmRNA転写物を誘発し、そしてまたIL-6産生も増強した。この系において、これらのマーカーはアビツズマブ処理によって低減され、αvインテグリンがFMTにおいて実質的な役割を担っていることを実証した。
ヒト肺線維芽細胞表におけるTGF-β誘発性FMTに対するアビツズマブの効果
図面の一覧
図3:TGF-βは、ヒト肺線維芽細胞においてインテグリン発現を増強する。
図4:TGF-βは、肺線維芽細胞においてαSMA、IL-6、および他の筋線維芽細胞マーカー遺伝子の発現を増強する。
図5:線維芽細胞培養物のアビツズマブ処理は、TGF-β誘発性のαSMAおよびIL-6の増強を低減する。
図6:アビツズマブ処理は、TGF-β誘発性コラーゲンゲル収縮を低減する。
αSMA:α平滑筋アクチン
BSA:ウシ血清アルブミン
Cy5:シアニン5
DAPI:4’,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール
ECM:細胞外マトリックス
FGM:線維芽細胞増殖培地
FMT:線維芽細胞の筋線維芽細胞への転換
FITC:蛍光イソチオシアネート
IXM:Image Xpressマイクロスクリーニングシステム
μg:マイクログラム
mg:ミリグラム
mL:ミリリットル
ng:ナノグラム
NHDF:正常ヒト皮膚線維芽細胞
NHLF:正常ヒト肺線維芽細胞
PBS:リン酸緩衝生理食塩水
TGF-β1:形質転換成長因子β
ELISA:酵素結合免疫吸着アッセイ
FBS:ウシ胎仔血清
h:ヒト
IL:インターロイキン
TGF-β1は、増強された細胞外マトリックス堆積に寄与する線維芽細胞の筋線維芽細胞への転換(FMT)の強力なメディエーターであり、そして、線維症の主なドライバーであることをここに示す。さらに、αvインテグリンとTGF-βとの間のクロストークに関して示される実質証拠がこれらのプロセス中に存在する。TGF-βは、潜在型関連ペプチド(LAP)領域を含む潜伏型で分泌される。TGF-β1のLAPは、インテグリンαvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6およびαvβ8と相互作用して、TGF-β1の活性化をもたらすRGDモチーフを含む。アビツズマブは、αvに特異的なヒト抗体なので、そのため、αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6およびαvβ8を阻害する。
線維症は、細胞外マトリックスの産生、堆積、および収縮による過度の瘢痕化を特徴とし、そして、筋線維芽細胞の増殖および活性化によって駆動されると考えられる。線維症は、それに対して効果的な治療法がない疾患の最大のグループの1つである。線維形成過程は、線維化促進および抗線維形成メディエーターのネットワーク内の複雑な相互作用セットによって調整される。TGF-βシグナル伝達は、増強された細胞外マトリックス堆積に寄与し、そして、疾患の主なドライバーである筋線維芽細胞転換(FMT)に対して線維芽細胞において重要な役割を果たすと考えられる。
試験系
試験系は、潜在型TGF-βを伴ったまたはそれなしのTGF-β1で刺激した健常ドナー由来のNHLFである。初代NHLFは、TGF-β刺激後にα平滑筋アクチン(最初の出力)を上方制御する。
研究設計の概略
NHLF培養培地(2%FBSを含むFGM):FGM(商標)-2ブレットキット(商標)(CC-3132)は、以下の成長サプリメント:0.5mlのhFGF-B(CC4065J);0.5mlのインスリン(CC-4021J);10mlのFBS(CC-4101J);0.5mlのGA-1000(CC4081J)を含有する、線維芽細胞の細胞基礎培地(CC-3131)および線維芽細胞ブレットキット(CC-4126)の500mlボトル1本を含む。
画像化のためのプレート出力手順
Image Xpressマイクロスクリーニングシステム(IXM)機器およびMetaXpressソフトウェアプログラムを、画像収集および解析のために使用した。三色染色について:DAPI、FITC、およびCy5のために、プレート収集画像化プロトコール:「2014-YW-SMA-lnt-DAPI-647-10x」を使用した。二色染色について:DAPIおよびFITC染色のために、プレート収集画像化プロトコール:「2014-YW-SMA488-DAPI-10x」を使用した。データ解析のために、多重波長細胞スコア化解析パラメータプロトコール「2014-5-7-YW-SMA488-DAPI-4x-2para a」を使用して、FMTによるSMA線維誘発の量を定量化した。個々のウェルの画像を、BMPファイルとしてダウンロードした。
ヒトIL‐6のレベルを、製造業者の取扱説明書にしたがって、市販のIL-6 ELISAアッセイ(Human Duoset IL-6、R & D Systems)を使用して測定した。450nmにおける光学濃度測定値(OD)を、Spectramax M5eリーダー(Molecular Devices)および内部IL-6標準からOD測定値を使用して計算した4-パラメーターロジスティック曲線の当てはめから推定した各サンプルのIL-6濃度を使用しておこなう。
QuantStudio 12k flex Applied BiosystemサイクラーによるRT-PCRの実施が完了した後、すべてのウェルのCT値を、相対発現の計算のためにExcelのスプレッドシートにダウンロードした。
CT閾値サイクル。CTは、反応中に作り出される蛍光が閾値線と交差するサイクル数である。CT値は対数的であり、定量分析法に直接使用される。
ΔCT値を計算する。ΔCT=CT標的-CT参照文献(GAPDH)
基礎レベルでの相対遺伝子発現としてでの2-ΔCTを計算する。
ΔCT値を計算する。ΔCT=CT標的-CT参照文献(GAPDH)
ΔΔCT値を計算する。ΔΔCT=ACT試験サンプル(治療)-ACTキャリブレーターサンプル(治療なし)
内因性標準(例えば、GAPDH)に対する正規化およびキャリブレーター(治療前または対照)に関連する、標的の量は:2-ΔΔCTによって示される。
TGF-βは、ヒト肺線維芽細胞におけるインテグリン発現を増強する(図3も参照)
NHLFにおけるインテグリンの発現をRT-PCRによって分析し、NHLFが、定常状態で、かつ、ITGB1>ITGB5>ITGAV>ITGB8>ITGB3の順の発現レベルでインテグリンを発現することがわかった。αvインテグリンとTGF-βとの間にクロストークがあることが仮定され、そのため、我々はFMTアッセイによりインテグリン発現におけるTGF-βの効果を調べた。我々は、TGF-β誘発性FMTがITGB5の発現増強、ならびにITGB1およびITGB3のある程度の発現増強を引き起こすことがわかり;蛍光抗体染色は、αvβ5発現の増強を明らかにした(図3:TGF-βはヒト肺線維芽細胞においてインテグリン発現を増強する、を参照)。
TGF-βは、肺線維芽細胞においてαSMA、IL-6、および他の筋線維芽細胞マーカー遺伝子発現を増強する(図4も参照)
TGF-β処理は、免疫蛍光法およびRT-PCRによって検出されたとおり、IL6産生およびα平滑筋発現を増強した。TGF-β処理は、例えばα平滑筋、コラーゲン、フィブロネクチン、SERPINE1、SNAI1、ペリオスチン、肺線維芽細胞におけるN-カドヘリン発現などの筋線維芽細胞マーカー遺伝子を増強した(図4:TGF-βは、肺線維芽細胞におけるαSMA、IL-6、および他の筋線維芽細胞マーカー遺伝子の発現を増強する、を参照)。
図1に示したとおり、TGF-βはインテグリンの発現を増強し、この実験では、我々は、高用量の潜在型TGF-βと一緒に、インテグリンの発現を増強するのに準最適用量の活性TGF-βを用いてNHLFを処理した。潜在型TGF-β1と活性TGF-β1の組み合わせは、潜在型または活性型単独と比較して、αSMAを発現する細胞をより多く誘発した。アビツズマブ処理は、αSMAの発現、IL-6の産生、およびTGF-β活性化によって引き起こされるFMT遺伝子発現を低減した(図5:線維芽細胞培養物アビツズマブ処理は、αSMAおよびIL-6におけるTGF-β誘発性増強を低減する、を参照)。
三次元コラーゲンゲル試験を、線維芽細胞収縮研究に使用した。TGF-β1によるαSMAタンパク質の変化、ならびにアビツズマブ以外のαvインテグリンの妨害が、機能的結果につながったかどうか決定するために、コラーゲンゲル収縮アッセイをおこなった。アビツズマブを細胞に添加したとき、それはTGF-βの添加によって引き起こされる収縮の程度を低減した(図6:アビツズマブ処理は、TGF-β誘発性コラーゲンゲル収縮を低減する、参照)。
この報告では、我々は、ヒト肺線維芽細胞において、TGF-βが、αvインテグリン、αSMA、ならびに他のFMTの遺伝子、例えばコラーゲン、フィブロネクチン、SERPINE1、SNAI1、ペリオスチン、N-カドヘリンなどの発現を増強することを示した。線維芽細胞培養物のアビツズマブ処理は、αSMA、IL6、CTGF、SERPINE、PLODにおけるTGF-β誘発性増加を低減する。
潜在型関連ペプチド(LAP)へのαvβ6の結合に対するアビツズマブの効果
略語表
αSMA:α平滑筋アクチン
ECM:細胞外マトリックス
μg:マイクログラム
mg:ミリグラム
mL:ミリリットル
LAP:潜在型関連ペプチド(LAP)
LTBP:潜在型TGF-β結合タンパク質
ng:ナノグラム
TGF-β1:形質転換成長因子-β1
ELISA:酵素結合免疫吸着アッセイ
h:ヒト
IL:インターロイキン
αvβ3、αvβ3、αvβ6、およびαvβ8はTGF-βの活性化を制御し得る。
TGF-β1は、様々な臓器における組織線維症発症において重要な役割を果たす主要な線維形成促進サイトカインである。TGF-β1は、組織線維芽細胞の筋線維芽細胞への分化を促進することによって線維症に寄与する。筋線維芽細胞は、細胞外マトリックス(ECM)タンパク質を産生し、そして、線維症中のECMの伸縮のための主要なドライバーである。TGF-β1は潜在型複合体の状態で分泌され、TGF-β1に加えて、それはまた、潜在型関連ペプチド(LAP)および潜在型TGF-β結合タンパク質(LTBP)も含む。複合体は、LTBPがECMに固定され、かつ、LAPが、αvサブユニット上のαvインテグリン、すなわち、αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6およびαvβ8のうちの1つを結合するとき、活性TGF-β1を放出するように解放構造を採用し得る。
TGF-β1(主要な線維形成促進サイトカイン)は、様々な臓器における組織線維症の発症で重要な役割を果たす。TGF-β1は、組織線維芽細胞の筋線維芽細胞への分化を促進することによって線維症に寄与する。筋線維芽細胞は、細胞外マトリックス(ECM)タンパク質を産生し、そして、収縮させる。それらは、線維症中のECMの伸縮のための主要なドライバーである。TGF-β1は潜在型複合体の状態で分泌され、TGF-β1に加えて、それはまた、潜在型関連ペプチド(LAP)および潜在型TGF-β結合タンパク質(LTBP)も含む。複合体は、LTBPがECMに固定され、かつ、LAPが、αvサブユニット上のαvインテグリン、すなわち、αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6およびαvβ8のうちの1つを結合するとき、活性TGF-β1を放出するように解放構造を採用し得る。本研究の目的は、αvβ6へのLAPの結合をアビツズマブが妨げる能力を評価することであった。
材料
試験系
試験系は、プレートを組み換えヒトLAPでコートし、次に、アビツズマブ(別名DI17E6)の存在または不存在下で、組み換えヒトαvβ6と共にインキュベートする、競合結合アッセイである。LAPに結合したαvβ6の量を、ウサギ抗αvβ6抗体(捕獲抗体)およびセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させたヤギ抗ウサギIgG(検出抗体)を使用したELISAによって検出する。
200mMのTris
150mMのNaCl
HClで7.4にpHに調整
+1mMのCaCl2;1mMのMgCl2;0.01mMのMnCl2
ブロッキングバッファー(再蒸留水中):
50mMのTris
100mMのNaCl
HClで7.4にpHを調整
+5mg/mlのBSA
洗浄および希釈バッファー(再蒸留水中):
200mMのTris
150mMのNaCl
HClで7.4にpHを調整
+1mMのCaCl2;1mMのMgCl2;0.01mMのMnCl2
+0.1mg/kgのBSA
実験計画
研究設計の概要
LAPを用いたプレートのコーティング。
組み換えヒトLAPを、0.1μg/mlの終濃度でプレートに加え、そして、LAPでプレートをコートするために4℃にて一晩インキュベートした。次に、プレートを空にし、そして、100μlのブロッキングバッファーと共に37℃にて2時間インキュベートして、プレートへのαvβ6の非特異的結合を妨害した。
プレートをαvβ6、およびアビツズマブまたはその対照抗体と共に37℃にて60分間インキュベートした。次に、プレートを、二次抗体の添加のために洗浄した。
LAPへのαvβ6の結合を、ELISAを使用することによって計測した。LAPに結合したαvβ6の量を、研究設計において先に記載した手順を用いることによって測定した。
アビツズマブは、LAPへのαvβ6の結合を阻害する(図7も参照)
あらかじめコートしたLAPへのαvβ6の結合を、特異的な抗αvβ6抗体ベースのELISAによって検出した。それをLAPであらかじめコートしたプレート内でαvβ6と同時にインキュベートしたとき、結合は濃度依存的にDI17E6によって妨害された。抗αvβ6抗体MSB0011521H-1および10D5もまた、結合を阻害した。対照的に、アイソタイプ対照IgG2も陰性対照抗体(抗HEL、MSB0011523H-1)も阻害作用を示さない。また、αvβ3のインテグリン特異的阻害抗体LM609もLAPへのαvβ6の結合を阻害しなかった。その知見は、DI17E6がLAPへのαvβ6の結合を特異的に阻害することを示す。
アビツズマブは、LAPへのαvβ6の結合を阻害する。
あらかじめコートしたLAPへのαvβ6の結合を、特異的な抗αvβ6抗体ベースのELISAによって検出した。それをLAPであらかじめコートしたプレート内でαvβ6と同時にインキュベートしたとき、結合は濃度依存的にDI17E6によって妨害された。抗αvβ6抗体MSB0011521H-1および10D5もまた、結合を阻害した。対照的に、アイソタイプ対照IgG2も陰性対照抗体(抗HEL、MSB0011523H-1)も阻害作用を示さない。また、αvβ3のインテグリン特異的阻害抗体LM609もLAPへのαvβ6の結合を阻害しなかった。その知見は、DI17E6がLAPへのαvβ6の結合を特異的に阻害することを示す。
この試験において、我々は、アビツズマブ(DI17E6)が特異的に、かつ、濃度依存的にLAPへのαvβ6の結合を阻害することを示した。その知見は、アビツズマブが、
TGF-βの活性化における重要なステップである、LAPへのαvインテグリンの結合を妨げる能力を明確に実証する。この兆候は、線維症および/または線維性障害を治療するためのアビツズマブを使用するための科学的基礎の重要な部分を形成する(図7:図7は、アビツズマブによるLAPへのαvβ6の結合の阻害を示す、も参照)。コートしたLAPへのαvβ6の結合を、ブランク(αvβ6不含なしでバッファー)を上回るαvβ6含有ウェル(無処置)における吸光度の増大として検出した。値を、100%として前者および0%として後者を用いて正規化した。DI17E6の両バッチ(バッチ番号40350および13245)とも、抗αvβ6抗体MSB0011521H-1と同様に、しかし、抗αvβ6抗体0D5より良好に、濃度依存的にLAPへのαvβ6の結合を低減した。対照的に、アイソタイプ対照IgG(IgG2)も陰性対照抗体(抗HEL、MSB0011523H-1、データ未掲載)も、同じ濃度範囲で結合に影響した。また、αvβ3特異的阻害抗体LM609は、LAPへのαvβ6の結合を阻害しなかった。
線維症/全身性硬化症の遺伝子シグネチャー
概要
・この試験の目標は、全身性硬化症(SSc)に罹患している患者の線維症の状況を診断および観察するためのロバスト遺伝子シグネチャーを見つけることであった。
・シグネチャーのための遺伝子を二元的なストラテジーを使用して同定した:
o文献ベースの遺伝子リストを事前に定義し、そして、確立されたマイクロアレイベースの遺伝子発現データにおいてSSc皮膚での上方制御について試験した。
o全遺伝子の客観的な分析では、3種類の公共SScデータセットを使用して、SSc皮膚で上方制御される候補遺伝子を見つける。
・最終的に、候補遺伝子のリストを、固体組織と比較して、免疫関連組織における上方制御に関して選別した。
・概要では、我々は、5つの適当なデータセットを分析することによって、SScおよび肺線維性組織において上方制御される19種類の非免疫関連遺伝子のロバストシグネチャーを見つけることができる。
この試験は、二重プロセスを使用した全身性硬化症(SSc)に罹患している患者の線維症のモニタリングのためのロバスト遺伝子シグネチャーを見つけることを目指す。SScおよびTGF誘導(simulated)線維芽細胞において上方制御されると報告された文献ベースの遺伝子、ならびに公共データセットにおいてSSc/線維症に罹患している患者における上方制御の有力な証拠を有する遺伝子は、最終的にSScおよびIPFにおける線維症に関するロバスト遺伝子シグネチャーを得るために、さらなる分析に供されるべきであった。
SSc/線維症において上方制御される遺伝子の評価のために、我々は以下のデータセットを使用する。データセットは、Gene Expression Omnibus(GEO)データベースで入手可能である。遺伝子発現は、遺伝子ごとのプローブセット強度を平均化することによって得られる。
GSE9285(Milano et al., 2008)は合計で75個のサンプルを含む。皮膚生検を、びまん性SSc(dSSc)に罹患しているの17人の患者、限局性SSc(ISSc)に罹患している7人の患者、限局性強皮症に罹患している3人の患者、および6人の健常対照の前腕および背部から採取した。
GSE24206(Meltzer et al., 201)は、初期/進行性特発性肺線維症(IPF)に罹患している11人の患者由来の17個の肺サンプル。6人の患者が、上葉および下葉からの1組のサンプルを提供し、5人の患者が単独サンプルに寄与した。6個の対照標本を、肺移植時点における所定の肺容量減少の健常ドナーから得た。
データセットGSE1133(Su et al., 2004)に含まれた28個の免疫関連組織および118個の非免疫/非癌組織の遺伝子発現をこの試験で使用した。
データセットGSE22459(Park et al., 2010)は、1年プロトコール生検検体において線維症および炎症の兆候を有する65人の腎移植受容者を含む。
データセットGSE61260(Hovarth et al., 2014)は、134個のNash(非アルコール性脂肪性肝疾患)、PSC(原発性硬化性胆管炎)、PBC(胆管の原発性胆管炎)、NAFLD(非アルコール性脂肪性肝疾患)、健常な肥満、および正常肝サンプルを含む。
データセットGSE48452(Ahrens et al., 2013)は、Nash(非アルコール性の脂肪肝疾患)、脂肪症、健常な肥満、および正常肝からの73個のサンプルを含む。
データセットGSE39491(Hyland et al., 2014)は、43人のBE患者の食道扁平上皮(NE)および胃噴門(NC)からのバレット化生および適合正常粘膜の120個のサンプルを含む。
データセットGSE37200(Silvers et al., 2010)は、31このバレット食道サンプルおよび15個の腺癌サンプルを含む。
データセットGSE47460(未発表)は合計で582人の対象を含み、254人は間質性肺疾患に罹患しており、220人はCOPDに罹患しており、そして108人は対照である。
データセットGSE17978(Emblom-Callahan et al., 2010)は、末期特発性肺線維症の患者の12個の肺および正常肺(対照)の6人のドナーからの58個のサンプルを含む。
データセットGSE53845(DePianto et al., 2015)は、40人のIPF患者および8人の健常対照からのサンプルを含む。
データセットGSE44426(Desterke et al., 2015)は、原発性骨髄線維症からの6個の骨髄サンプルおよび6つの対照サンプルを含む。
データセットは、19種類の線維症シグネチャー遺伝子のうち17個に関する発現データを含む。17種類の遺伝子のうちの3個の発現は、定量化の下限(IIOQ)の下にあった。その結果、第一のデータセット(AB001)は、9個のサンプルで計測された14種類の遺伝子の発現レベルを含んだ。9個のサンプルを3つのサンプル群:NHLF単独、NHLF+TGF-β、NHLF+H358に分類し得る。第二のデータセット(AB002)は、11個のサンプル:40ng/ml抗HEL(3回の反復)で処理したNHLF、40ng/mlのアビツズマブ(2回の反復)で処理したNHLF、10μg/mlの抗HEL(3回の反復)で処理したNHLF、10μg/mlのアビツズマブ(3回の反復)で処理したNHLF、を含む。
我々は、我々の19種類の遺伝子および9種類の遺伝子シグネチャーを、我々の特許請求の範囲を支持する結果をもたらすいくつかの方法でスコア化し得ることがわかった。
発現の未加工の強度は、ログ-形質転換または形質転換であり得る。
Z正規化:複数の試料(>=9)を有するデータセットでは、発現Zスコアを得るために、それぞれの遺伝子発現ベクターは、平均または中央値に中心を置き、そして、正規化し得る。
基準として処理前強度を使用した正規化::比は、処理前および処理後の発現強度から計算できる。これらの比は、任意選択でログスケール化され得る。
サンプルごとのシグネチャーの概要スコアは、遺伝子を越えた合計、平均、または加重平均として計算される。
SScおよびTGF刺激性線維芽細胞における上方制御に関係する143個の遺伝子が、
びまん性SScに罹患している患者の皮膚病を予測する「Lafyatisシグネチャー」から4種類の遺伝子を含むDaigen Xu(TIP Immunology)によって提案された(Farina et al., 2010)。135個が、3つのSScデータセットのうちの少なくとも1つで計測される。135個の遺伝子のリストは表9で見ることができる。
図面では、所望の線維症/SScシグネチャーの同定のためのストラテジーを概説する。我々は、文献由来遺伝子と非文献由来遺伝子とで異なる。両方の遺伝子セットを、3つのSScデータセットに対して試験し、肺線維症データセットにより選別し、そして、最終的に、もうひとつの肺線維症データセットにより正当性を確認した。そのシングルステップを、次節において詳細に記載する。
線維症/SSc関連遺伝子の候補リストを得るために、我々は、それぞれのSScデータセットの遺伝子ごとにRバイオコンダクターパッケージlimma(Smyth, 2004)で実施される示差的発現分析の調整t-検定を実施した。線形モデルを、「SSc-正常」サンプルの対比を用いてあらゆる遺1伝子に当てはめた。線形モデルの当てはめを前提として、共通の値に向けた標準誤差の実証的なベイズ適正化によって、調整t統計値を計算した。誤同定率(FDR)を制御するベンジャミン・ホッホバーグ手順(Benjamini and Hochberg, 1995)によって、p値を複数の試験について調整した。
全遺伝子を、先に記載したように、3つのSScデータセットにより、SScと正常皮膚との間の示差的発現について試験した。以下の基準を満たした場合に、文献からの事前定義遺伝子を線維症遺伝子の最終前リストに組み込んだ:
・遺伝子が、3つの公共SScデータセットのうちの少なくとも1つで有意に上方制御される(調整p値<0.05)、および
・遺伝子が、3つのデータセットのすべてで有意に下方制御されてはならない。
データセットを通じて、同時の有意な上方および下方制御による遺伝子の除外はなかった。文献からの135個の事前定義遺伝子のうち40個がこれらの基準を満たした。
文献から事前定義されていない他のすべての遺伝子に関して、基準を厳しくした。以下の基準を満たした場合に、遺伝子を、上方制御される線維症/SSc遺伝子の最終前リストに組み込んだ:
・遺伝子が、3つの公共SScデータセットのうちの(少なくとも)2つで有意に上方制御される(調整p値<0.05)、および
・遺伝子が、3つのデータセットのすべてで有意に下方制御されてはならない。
文献由来ではない62個の遺伝子が、健常な皮膚と比較して、SScにおいて上方制御されることがわかった。1つのSScデータセットにおける有意な下方調整のため、62個の遺伝子のうち2個を除外したが、さらなる分析の対象となった60個の遺伝子をもたらした。
合計で、100個の遺伝子が、上方制御される線維症/SSc遺伝子の最終前リストに含まれた。
SScで上方制御されることがわかった遺伝子が肺線維症(PF)でも上方制御されるかどうか評価するために、2つのデータセット、GSE24206およびGSE48149を使用した。100個の遺伝子のうち96個が、2つのPFデータセットのうちの少なくとも1つで存在した。我々は、調整t試験を用いた線維性肺組織における上方制御について4つの比較で96個の遺伝子を試験した:
1.GSE24206:正常対初期IPF
2.GSE24206:正常対進行性IPF
3.GSE48149:正常対IPF
4.GSE48149:正常対SSc-PF
線維症/SSc関連遺伝子の候補リストからの遺伝子を残すために、我々は、正常組織データセットGSE1133の遺伝子ごとにRバイオコンダクターパッケージlimmaで実施される示差的発現分析の調整t-検定を実施した。線形モデルを、「免疫-その他」サンプルの対比を用いてあらゆる遺1伝子に当てはめた。線形モデルの当てはめを前提として、共通の値に向けた標準誤差の実証的なベイズ適正化によって、調整t統計値を計算した。誤同定率(FDR)を制御するベンジャミン・ホッホバーグ手順(Benjamini and Hochberg, 1995)によって、p値を複数の試験について調整した。1つの遺伝子(BIRC3)を、免疫関連対他の正常(非癌)組織サンプルにおける上方制御のため除外した。
文献からの予備的知識および公的に入手可能なデータセットの遺伝子発現情報からの予備的知識によって、我々は、SScおよび肺線維症において上方制御される19個の非免疫関連遺伝子から成る本当に見込みのある線維症/SScシグネチャーを構成した。遺伝子の完全なリストを表9に示す。
19個の遺伝子の発現データを(データセット単位で)正規化、すなわち平均中心化し、およびサンプルを通して正規化する。19個の遺伝子を通じた平均が、サンプルごとのシグネチャースコアとして使用する。
我々は、19遺伝子シグネチャーの遺伝子のサブセットとしてTGF-β上方/アビツズマブ下方シグネチャーのための遺伝子を選択することを目指した。そのため、我々は以下の実験を行った。正常ヒト肺線維芽細胞(NHLF)にTGF-βを補い、そして、ヒト上皮H358肺細胞株由来の細胞と共培養した。線維症シグネチャーの19個の遺伝子のうちの14個この遺伝子に関して、我々は、発現シグナルを得ることができた。TGF-β上方/アビツズマブ下方シグネチャー(以降、TUADシグネチャーと呼ばれる)に含まれるべき遺伝子に関して、それは、TGF-βの投与後に上方制御を示さなければならなかった(3つの反復実験を通じて倍率変化の中央値)。この基準を使用して、我々は9個の遺伝子を選択した。これらの9個の遺伝子が、我々の9遺伝子TUADシグネチャーを構成する(★によって示した表9を参照)。
19種類の線維症/SScシグネチャー遺伝子のいずれも免疫関連組織対非免疫関連組織において上方制御されない(表17)。
別個のデータセットにおいて、1つの遺伝子は、正常皮膚と比較して、SScにおいてのRGS5(図9)、ならびに正常肺と比較して、例えば、IPFおよびSSc-PFにおけるCOL15A1、COL1A1、COMP、IGFBP2aおよびSSP1(図10~図14a)のように上方制御された発現を示すが、19種類の遺伝子線維症/SScシグネチャーおよび9種類の遺伝子TUADシグネチャーに由来するシグネチャースコアは皮膚(図14b、図15a、図15b、図16a、および図16b)、肺(図17a、図17b、図18a、および図18b)、肝臓(図19a、図19b、図20a、図20b、図21a、および図21b)、および骨髄(図22aおよび図22b)における線維症のモニタリングに関してよりロバストなシグナルを提供する。
我々のTUAD多重遺伝子発現シグネチャーは、アビツズマブでの処理によって下方調節され得るので、さらに、(前段落で言及したように)様々な線維症において、それが疾患の重症度および/または線維症の程度に連結するので、TUADシグネチャーが、線維症において臨床的に特別なニーズのある指標と見なすことができる。TUADシグネチャーは、アビツズマブ処置のための患者選択に使用できる:TUADシグネチャーに関する高ベースライン/処理前レベルは、アビツズマブが療法の成功を達成する最高の可能性を有している患者を選択するのに使用できる。なぜなら、我々は、高いTUADシグネチャー状況が線維性疾病の状態に連結することを実証するだけではなく、アビツズマブがTUADシグネチャーを効果的に下方制御できることも実証したからである。加えて、我々が疾病の重症度との繋がりを実証したので-TUADシグネチャーは線維症を観察するのに使用でき、および-TUADシグネチャーを下方制御する実証済みのアビツズマブの能力により-そのため、それはまたアビツズマブの有効性を観察するのにも使用できる。療法応答を予測するマーカーとして役立つ言及したTUADシグネチャー能力により、およびいくつかの線維症における疾病の重症度または線維症の存在との繋がりにより、我々は、アビツズマブが一般のすべての線維症に対して使用できる薬剤であると考える。
第1相 臨床研究の試験
第1相試験は、DI17E6で治療されたCRPC患者について、前立腺特異抗原、末梢循環腫瘍細胞(CTC)、ならびに軟組織転移および骨転移に対する効果を含む、安全性、薬物動態、および抗腫瘍活性を決定するために開始された。患者はすべて、化学療法後に進行性疾患に罹患していた。患者は、1時間にわたる、250、500、1000、または1500mgのDI17E6による静脈内点滴で治療された。
適格患者は、18歳以上で、前化学療法後に骨転移の証拠がある、組織学的または細胞学的に確認された前立腺癌に罹患していた。患者は、両側性睾丸摘出を受けたか、またはゴナドトロピン放出ホルモンアゴニストもしくはアンタゴニストによる持続的アンドロゲン枯渇療法を受けているかのいずれかであり、登録前の少なくとも4週間、抗アンドロゲン療法を中止していた。患者は、持続して(すなわち、少なくとも3か月)ビスホスホネート療法を受け続けているか、または全血清テストステロンレベルが50ng/dL未満の状態でビスホスホネート療法を受けないでいるかのいずれかである必要があった。すべての患者について、少なくとも2回の前立腺特異抗原(PSA)値が、スクリーニングの少なくとも2週間前に測定された個人の最下点レベルから最低10%増加しているとして定義される進行性疾患の証拠があった;結節性または内臓に関連する進行は、PSAとは別個に包含するのに十分であった。さらに、患者は、Eastern Cooperative Oncology Group(ECOG)スコアが0~2、平均余命が少なくとも3か月、および十分な血液、腎臓、および肝臓機能があることが必要であった。各試験センターの治験審査委員会が、試験プロトコールを承認し、すべての患者が書面によるインフォームドコンセントを提出した。
43~80歳の間(年齢の中央値、66歳)の26名の男性患者を登録し、少なくとも1回のEMD 525797静脈内点滴を行った。これらの患者は安全性集団を構成した。患者はすべて、白色人種であった。全体的に、人口統計的特性は、4つの用量コホートにわたって同等であり(表1a)、最初の診断からの期間の中央値は、5.2年(2~18年の範囲)であり、診断から最初の転移性疾患までの期間の中央値は、0.1年(0~16年の範囲)であった。DLT期間の終了前に、2名の患者が取り消され、その後、後を継いで24名の患者が6週間の治療を通して、EMD 525797を3回投与された。
24名の患者(43~80歳)について、3回(1、3、および5週目)投与後、6週目の終わりに応答評価した。用量制限毒性(DLT)を最初の6週間にわたり評価し、DI17E6の最終投与の4週間後まで安全性のために患者を経過観察した。
表2aに、各コホートにおける患者ごとの薬物曝露を要約する。患者の平均EMD 525797曝露期間は、117.5日であった(中央値74.5日;範囲14~534日)。24名の患者のうちの13名は、曝露期間が期待より長期(84日超)であり、500mgコホートの2名の患者は、297および534日間の治療継続中であり、1000mgコホートの1名の患者は、310日間治療を受けている。6週間のDLT期間内にDLTは報告されなかった。すべての患者が少なくとも1つのTEAEを経験したが、TEAEにおいて用量依存的な関係は観察されなかった。
表3に薬物関連TEAEを要約する。11名の患者(42.3%)が薬物関連TEAEを経験し、それらは、器官別大分類の「皮膚および皮下組織障害」(合計4名の患者;全身性掻痒、紅斑、発疹)、「全身障害および投与局所様態」(合計3名の患者;疲労、粘膜炎、末梢性浮腫)、「胃腸障害」(合計2名の患者;口腔乾燥、舌腫脹、上部消化管出血)、および「感染症および寄生虫症」(合計2名の患者;鼻炎、敗血症)で、最も頻繁に報告があった。2名の患者(7.7%)のみが、薬物関連のグレード3または4のTEAEであった:500mgコホートの1名の患者が、γ-グルタミルトランスフェラーゼ(GGT)のグレード3の増加を経験し、1000mgコホートの1名の患者がグレード3の敗血症を経験した。
(i)62歳男性が、DI17E6(250mg)の最初の点滴でかつそれのみを受けて13日後にグレード1の上部消化管出血を経験した。この被験対象は非重篤な吐血をして入院した。胃鏡検査により、食道下部に病変が示された。活発な出血を遮断し、被験対象をオメプラゾールで処置して、この事象は解決した。
(ii)79歳の患者が、DI17E6(EMD 525797)(1000mg)の最後の点滴の1日後で最初の点滴の9週間後に、フェカリス菌(e.faecalis)による敗血症(グレード2)を発症した。この患者は入院し、回復して退院した。1か月後、この患者は、最後の点滴の4日後で最初の点滴の2.5か月後に、フェカリス菌により、再び2回目の敗血症エピソード(グレード3)を発症した。この患者は入院し、回復して退院した。さらに1か月後、この患者は、最後の点滴の4日後で最初の点滴の3.5か月後に、EMD 525797に起因する、3回目の敗血症エピソード(グレード3)を発症した。
・蓄積した安全性データを4つのSMCすべてで精査した。
・全体として、DLTは観察されなかった:DLTは、アレルギー性/過敏性反応および7日以内に可逆的で臨床相関のない任意の範囲外臨床検査値を除いて、研究者および/または治験依頼者により治験薬に関連すると合理的に疑われる、6週目の終わりまでに発生するグレード3または4の任意の血液毒性または非血液毒性として定義される。
・現在までMTDに達してない
・全体として、2つのSAEのみが、試験薬に関連するものとして観察された。
薬物動態および薬力学
単回投与および複数回投与の後、EMD 525797は用量依存的で非線形のPKプロフィールを示した。最初の1時間静脈内点滴の後、投与開始後の1~2時間以内に、DI17E6(EMD 525797)はCmaxに概ね到達した。排出半減期は、用量と共に増加するEMD 525797クリアランスの結果として、用量と共に増加したが、平均分布容積は、用量範囲全体にわたり一定のままであった(表4)。
以下の表4に示されるように、コホート2のCRPC患者への500mg/隔週の投与では、IC95の血清レベルに到達したが、250mg/隔週のコホート1の患者では、到達しなかった。500mg/隔週のコホート2におけるEMD 525797の血清トラフ濃度は、IC95を上回り、非線形CL経路のIC99に到達する(250mg/隔週は到達しなかった)。
ほとんどの患者では、CTC濃度はベースライン値周辺で安定なままであった(データを示さず)。2名の患者では、CTC濃度の相当な減少が、治療の開始後それぞれ14日目および42日目ごろに観察された。
抗EMD 525797抗体が、25名(16.0%)の評価可能患者のうちの4名に検出された。4名の患者すべてが250mgコホートであった;2名の患者は2週間後に血清反応陰性の状態に戻り、1名の患者は経過観察を受けず、1名の患者は試験期間全体を通して血清反応陽性のままであった。
Claims (34)
- 線維症および/または線維性障害に罹患している患者の治療における使用のための抗αvインテグリン抗体DI17E6を含む医薬組成物。
- 前記線維症および/または線維性障害によって侵されている臓器が、肺、肝臓、腎臓、心臓系または皮膚から成る群から選択される、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記線維性障害が、肺、肝臓、腎臓、心臓、および皮膚から成る群から選択される1若しくは複数の臓器を侵す、請求項1または2に記載の医薬組成物。
- 前記線維性障害が全身性硬化症(SSc)であるかまたはそれを含む、請求項1、2、または3のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 全身性硬化症(SSc)に罹患している患者の治療における使用のための、抗αvインテグリン抗体DI17E6を含む、医薬組成物。
- 前記全身性硬化症が、肺、肝臓、腎臓、心臓系または皮膚の全身性硬化症を含む、請求項4または5に記載の使用のための医薬組成物。
- 前記全身性硬化症が、肺、肝臓、腎臓、心臓および皮膚から成る群から選択される1若しくは複数の臓器を侵す、請求項4、5、または6のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記全身性硬化症が、心臓系、血管および/または血液を侵す、請求項4に記載の医薬組成物。
- 前記線維性障害および/または全身性硬化症が、特発性肺線維症、原発性硬化性胆管炎、非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)、原発性巣状糸球体硬化症、原発性分節性糸球体硬化症、糖尿病性腎症、拡張機能障害、および骨髄線維症から成る群から選択される1若しくは複数の適応症を含む、請求項の1~8のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記線維性障害および/または全身性硬化症が、肺線維症および/または肺胞隔炎(間質性肺疾患、ILD)を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記治療すべき疾患が、肺および/または皮膚の全身性硬化症である、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記皮膚の全身性硬化症が、びまん皮膚硬化型全身性硬化症(dcSSc)または限局皮膚硬化型全身性硬化症(IcSSc)である、請求項11に記載の医薬組成物。
- 肺線維症、肺胞隔炎(間質性肺疾患、ILD)、および/または強皮症関連間質性肺疾患(SSc-ILD)の治療における使用のための抗αvインテグリン抗体DI17E6を含む医薬組成物。
- 前記治療が、月毎に500mg~3000mgの量の、前記抗体の用量、好ましくは有効量の投与を含む、請求項1~13のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記治療が、月毎に1000mg~2000mgの量の、前記抗体の用量、好ましくは有効量の投与を含む、請求項1~14のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記用量、好ましくは有効量が単回投与で投与される、請求項14または15に記載の医薬組成物。
- 前記治療が、月毎に約500mg、月毎に約1000mg、月毎に約1500mg、月毎に約2000mgまたは月毎に約2500mgの量の前記抗体の投与を含む、請求項1~15のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記量を単回投与で投与する、請求項17に記載の医薬組成物。
- 前記抗体が単独療法として投与される、請求項の1~18のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- ヒトIgG2の代わりにヒトIgG1定常領域を含むか、またはヒトIgG1ヒンジの代わりにヒトIgG2ヒンジ領域を含む、請求項1~19のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記抗体がMMF(ミコフェノレート)と組み合わせて併用療法設定で投与される、請求項の1~20のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記疾患が全身性硬化症(SSc)または強皮症-ILD(SSc-ILD)である、請求項21に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物で治療される患者にミコフェノラートも与える、請求項1~22のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記障害がSSc-ILDであり、かつ、前記患者にミコフェノラートも与える、請求項1~22のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記抗体がアビツズマブである、請求項1~24のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 線維症および/または線維性障害の予防および/または治療のための薬物の製造のための、DI17E6の使用。
- 前記薬物が、請求項1~13のいずれか1項に記載の線維症および/または線維性障害の治療のためのものである、請求項26に記載の使用。
- 前記DI17E6抗体がアビツズマブである、請求項26または27に記載の使用。
- 前記DI17E6抗体がアビツズマブであり、かつ、前記線維性障害および/または全身性硬化症が、特発性肺線維症、原発性硬化性胆管炎、非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)、原発性巣状糸球体硬化症、原発性分節性糸球体硬化症、糖尿病性腎症、拡張機能障害、および骨髄線維症から成る群から選択される1若しくは複数の適応症を含む、請求項26~28のいずれか1項に記載の使用。
- 前記DI17E6抗体がアビツズマブであり、かつ、前記線維性障害および/または全身性硬化症が、肺線維症、肺胞隔炎(間質性肺疾患、ILD)、および/または強皮症関連間質性肺疾患(SSc-ILD)を含む、請求項26~29のいずれか1項に記載の使用。
- 前記DI17E6抗体がアビツズマブであり、かつ、前記線維性障害および/または全身性硬化症が、巣状分節状糸球体硬化症(FSGS)を含む、請求項26~30のいずれか1項に記載の使用。
- 前記治療が、ミコフェノール酸、ミコフェノラート、ミコフェノラートモフェチル、ミコフェノラートナトリウム、メトトレキサート、アメソプテリン、およびプレドニゾンから成る群から選択される1若しくは複数の有効成分の投与をさらに含む、請求項26~31のいずれか1項に記載の使用。
- 前記抗αvインテグリン抗体DI17E6が、登録国際一般名称(INN)アビツズマブを有する抗体である、請求項26~32のいずれか1項に記載の使用。
- 前記抗体が、登録国際一般名称(INN)アビツズマブを有する抗体である、請求項1~22のいずれか1項に記載の医薬組成物。
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EP4126957A1 (en) * | 2020-03-31 | 2023-02-08 | The Regents of the University of California | Compositions and methods for treating dysregulated wound healing |
WO2022165092A1 (en) * | 2021-01-29 | 2022-08-04 | Angion Biomedica Corp. | Methods for treatment of fibrotic diseases |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010533480A (ja) | 2007-07-17 | 2010-10-28 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 操作された抗αVインテグリンハイブリッド抗体 |
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Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
AUSRA MILANO; ET AL,MOLECULAR SUBSETS IN THE GENE EXPRESSION SIGNATURES OF SCLERODERMA SKIN,PLOS ONE,2008年07月16日,VOL. 3, NO. 7,PAGES: E2696 (1-19),http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0002696 |
NEIL C HENDERSON; ET AL,NATURE MEDICINE,米国,2013年11月10日,VOL. 19, NO. 12,PAGES:1617 - 1624,http://dx.doi.org/10.1038/nm.3282,IN SEVERAL ORGANS |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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