TW202019475A - Cd137結合分子 - Google Patents

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Abstract

本發明係有關於結合CD137的專一性結合物件。該專一性結合物件包含座落於該專一性結合物件的一恆定域之CD137抗原結合位址並且於舉例而言，治療癌症及感染性疾病方面獲得應用。

Description

CD137結合分子
發明領域 本發明係有關於結合CD137的專一性結合物件。該專一性結合物件包含座落於該專一性結合物件的一恆定域之CD137抗原結合位址並且於舉例而言，治療癌症及感染性疾病方面獲得應用。
發明背景 細胞訊息傳導為所有生物生命中不可或缺的一部分且通常涉及細胞表面受體與可溶性或表面表現的配體之交互作用。此交互作用導致受體、配體或二者之變化。舉例而言，配體結合能誘發受體的構形變化而造成其等簇集在一起成為二聚體或寡聚體。此簇集效應接而導致細胞內訊息傳導途徑活化。許多種受體係以此方式活化，包括腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)的成員，例如CD137。
CD137(4-1BB；TNFRSF9)是一種腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)之共刺激分子。眾所周知CD8+ T細胞上的CD137於活化後上調，且亦能表現於活化的CD4+ 輔助T細胞、B細胞、調節性T細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞及樹突細胞(DCs)上(Bartkowiak & Curran, 2015)。CD137於提升T細胞之細胞毒性的主要功能角色首次於1997(Shuford等人，1997)乙文描述，且不久以後抗CD137 mAbs被提議作為抗癌療法。
CD137為一種跨膜蛋白其帶有四個細胞外富含半胱胺酸域，稱為CRD1-4，及負責CD137訊息傳導的細胞質域。CD137的配體是CD137L。雖然CD137/CD137L錯合物(CD137/CD137L complex)無結晶結構存在，但據預測CD137會與CD137L形成三聚體/三聚體錯合物(trimer/trimer complex) (Won等人，2010)。CD137L的銜接導致受體三聚體形成及後續的多個受體三聚體之簇集，並導致CD137訊息傳導級聯(cascade)活化。此訊息傳導級聯提供存活的訊息給T細胞對抗活化誘發的細胞死亡(Hurtado等人，1997)藉此於支撑有效的T細胞免疫反應及產生免疫性記憶上扮演關鍵性的角色(Bartkowiak & Curran, 2015)。
由於CD137在腫瘤免疫學背後的角色有明確的生物學基礎，一般都很好理解其於白血球生物學的角色。活化的T細胞表現CD137且已經使用作為辨識抗原專一性CD4+ 及CD8+ T細胞的指標。典型地，CD8+ T細胞上CD137的表現比CD4+ T細胞更高(Wen等人，2002)。就CD8+ T細胞來說，經由生產干擾素γ及介白素2而增殖、存活及細胞毒性效應子功能已被歸因於CD137簇集。CD137簇集亦有助於記憶CD8+ T細胞之分化及維持。就一些CD4+ T細胞亞群來說，CD137簇集同樣會造成增殖及活化並導致釋放細胞介素如介白素2(Makkouk等人，2016)。
由於活體外 及活體內 經由促效抗CD137單株抗體所致的CD137刺激，已經證明會提升經由腫瘤靶定mAbs之自然殺手(NK)媒介的抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC) (Bartkowiak & Curran, 2015)。NK細胞經由其等之Fc受體與抗體結合並且，取決於抗體同型，此能夠導致NK細胞活化、引發細胞毒性顆粒釋放及標靶細胞溶解(Kohrt等人，2012)。Kohrt及同事證明抗CD137促效劑抗體會透過提升ADCC而提高治療抗體利妥昔單抗(rituximab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)及西妥昔單抗(cetuximab)之抗腫瘤活性，當隨其組合用劑時(Kohrt等人，2014；Kohrt等人，2011)。此外，人類NK細胞在遭遇細胞結合的抗體後經由其等之FcγR會上調CD137的表現。隨後以抗CD137抗體刺激此等NK細胞已經證明會提升其等對抗腫瘤細胞之ADCC(Chester等人，2015；Chester等人，2016)。
B淋巴細胞活化時亦表現CD137。CD137配體與CD137結合會提升B細胞增殖、存活及細胞介素生產。正常或惡性的人類B細胞於CD40結合其配體CD154(CD40配體)後亦誘發CD137表現，設若其後活化CD137會造成B細胞存活提升(Vinay and Kwon, 2011)。
也已經證明CD137表現於腫瘤浸潤型淋巴細胞(TILs)之腫瘤反應性亞群上。已經證明CD137單方療法於數種臨床前免疫性腫瘤模式例如MC38、CT26及B細胞淋巴瘤上是有效的。CD137銜接與其他抗癌劑例如化學療法、細胞介素與其他查核點調節劑之組合已經證明會造成強化已確立的腫瘤生長減少。具體而言，抗CD137抗體與抗CD20、抗EGFR及抗HER-2抗體之組合已經證明於各種臨床前異種移植模式內會對腫瘤生長減少造成增效性效應(Kohrt等人，2014；Kohrt等人，2012；Kohrt等人，2011)。
偶合腫瘤靶定的單株抗體療法與抗CD137促效劑抗體治療於淋巴瘤(Kohrt等人，2011)、頭頸部癌症、結腸直腸癌(Kohrt等人，2014)及乳癌(Kohrt等人，2012)之臨床前模式上已顯示出有希望的結果。在臨床上亦已經測試一些腫瘤靶定單株抗體與CD137促效劑抗體之組合，包括抗CD20 mAb利妥昔單抗(NCT01307267，NCT02951156)、抗EGFR mAb西妥昔單抗(cetuximab)(NCT02110082)及抗CS1 mAb埃羅妥珠單抗(elotuzumab) (NCT02252263)。然而，臨床開發已顯示由於劑量限制性高度肝發炎與CD137促效劑抗體治療相關的。烏瑞魯單抗(Urelumab) (BMS-663513)，非配體阻斷性人類IgG4同型抗體(Chester等人，2018)為首個進入臨床試驗的抗CD137抗體，但是此等試驗於觀察到顯著的、達目標、劑量依賴性肝毒性之後中止(Chester等人，2018)。最近，重新開始實性癌症的烏瑞魯單抗治療之臨床試驗，該試驗以烏瑞魯單抗治療組合放射療法(NCT03431948)或其他的治療抗體，例如利妥昔單抗(rituximab) (NCT01775631)、西妥昔單抗(cetuximab)(NCT02110082)、抗PD-1抗體納武單抗(nivolumab)(NCT02253992、NCT02534506、NCT02845323)，以及納武單抗及抗LAG-3抗體BMS986016(NCT02658981)之組合。然而，為了降低與烏瑞魯單抗治療相關的肝毒性，此等試驗中的烏瑞魯單抗用劑必須受到限制且功效結果是令人失望的(Chester等人，2018)。
輝瑞的抗CD137抗體烏托米單抗(utomilumab) (PF-05082566)，一種人類IgG2同型抗體，於晚期的癌症之第I期臨床試驗、於0.03 mg/kg高達10 mg/kg劑量範圍內觀察到沒有劑量限制性毒性(Chester等人之2016；Segal等人，2018)。然而，此抗體於患實性腫瘤患者的總客觀反應率(overall objective response rate)只有3.8%，可能表示烏托米單抗的效能及臨床功效比烏瑞魯單抗更弱，但具有更有利的安全性剖析(Chester等人，2018；Segal等人，2018)。已經測試烏托米單抗組合以放射療法(NCT03217747)或化學療法，以及組合以其他抗體療法，包括抗PD-L1抗體阿維魯單抗(avelumab)(NCT02554812)及抗PD-1抗體派姆單抗(pembrolizumab) (NCT02179918)，以評估不同治療組合的安全性、可耐受性、劑量限制性毒性(DLTs)、最大耐受劑量(MTD)及功效。此等試驗正在進行中且早期結果顯示烏托米單抗及派姆單抗組合於高達5 mg/kg的劑量都沒有DLTs以及患者反應率為26%。烏托米單抗連同阿維魯單抗以及其他免疫腫瘤學療法之三重組合亦受測試(NCT02554812，NCT03217747)。
一些靶定CD137的雙專一性分子亦處於早期發展階段，其中很多是從非抗體為基的架構或融合蛋白技術衍生。使用DARPin架構蛋白為基的技術來開發靶定CD137及FAPalpha的雙專一性分子已經有報導(Link等人，2018；Reichen等人，2018)。使用HER2-及EphA2-靶定的DART分子、經由CD137致效作用之腫瘤靶定進行的T細胞活化也被證明了(Liu等人，2017)。CD137L融合蛋白經由實性腫瘤及淋巴瘤的FAPalpha或CD19來靶定腫瘤也正在發展中。臨床上最先進的CD137雙專一性(且只有一者含有全長抗體)為PRS-343，一種CD137/HER2雙專一性分子。關於此分子，CD137係經由人工結合蛋白(抗運載蛋白(anticalin))與呈IgG4格式的HER2-靶定抗體曲妥珠單抗(trastuzumab)之Fc部分結合。據報導PRS-343在人化的小鼠模式HER2中過度表現的情況下，於淋巴細胞上提供了腫瘤標靶依賴性CD137活化，但是觀察到比起曲妥珠單抗單獨治療腫瘤生長抑制沒有改良(Hinner等人，2016及WO 2016/177802 A1)。PRS-343最近已進入一系列實性腫瘤治療的第I期臨床試驗以評估其之安全性、可耐受性及功效(NCT03330561)。
發明概要 如以上的背景章節所述，因為劑量限制性高度肝發炎(烏瑞魯單抗)或臨床功效很低(烏托米單抗)都與治療有相關，所以CD137促效劑分子之臨床發展一直受阻礙。
本發明人了解到本技藝對於展現出高活性但與劑量限制性肝發炎無關的CD137促效劑分子仍然有需要。此等分子能以最佳化該分子的效能及功效的劑量投予給個體，以及舉例而言，能用來治療癌症作為免疫治療藥物，或治療感染性疾病。
不希望受理論束縛，但一般認為肝內存在的T細胞有可能被抗CD137促效劑分子活化，導致肝發炎。已經證明CD8+ T細胞於敗血症/病毒感染之後會促進肝發炎及細胞凋亡(Wesche-Soldato等人，2007)。小鼠之抗CD137促效劑抗體療法已經證明會造成CD137-依賴性T細胞浸潤至肝臟內(Dubrot J等人，2010)。此等研究的結果，合起來表示有高活性之抗CD137促效劑抗體，例如烏瑞魯單抗，可能會造成活化的CD8+ T細胞浸潤至肝臟內，藉此導致肝發炎。任擇地，烏瑞魯單抗治療觀察到的劑量限制性肝毒性可能起因於此抗體所結合的特定表位。
本發明人執行大規模的選擇及親和力成熟計劃來單離一組抗原結合Fc片段(於此亦稱為“Fcabs”)，其包含一CD137結合位址於其等之CH3域且與二聚體CD137結合的親和力比單體CD137更高。
如本文所述，‘親和力’可指以KD 來測量之抗體分子與其同源抗原之間結合交互作用的強度。在抗體分子能與一抗原形成多重結合交互作用的情況下(例如在抗體分子能與抗原二價地結合且選擇性地，抗原為二聚體的情況下)，以KD 來測量親和力可能也會受總結合性(avidity)影響，此對熟悉此藝者來說是顯而易見的，因此總結合性係指抗體-抗原錯合物(antibody-antigen complex)之整體強度。
T細胞於活化時會上調CD137的表現。不希望受理論束縛，但認為由於活化的T細胞上CD137的高表現，CD137於此等細胞表面上會呈二聚體、三聚體及更高階的多聚體形式。相反地，初始的免疫細胞，例如初始的T細胞，表現低或微不足道的CD137位準於其等之細胞表面上並且任何存在的CD137因而可能是呈單體形式。因而預期與二聚體CD137結合的親和力比單體CD137更高之Fcabs，會優先結合活化的免疫細胞，例如活化的T細胞，而不是舉例而言，初始的免疫細胞。
本發明的Fcabs亦能結合二聚體的食蟹獼猴CD137。這是有益的因其允許於臨床前開發期間在食蟹獼猴執行毒性及功效測試。考慮到一些抗CD137抗體可見到肝發炎，是以這於結合CD137抗體分子的情況中是特別有利的。所單離的Fcabs中的二者，FS22-053-014及FS22-053-017亦會結合小鼠CD137。這是有利的因其允許相同的Fcab在投予食蟹獼猴或人類以前，先在小鼠測試。為了這個目的，需要在正常情况下結合小鼠CD137的Fcab。
本發明人意外地發現優先結合二聚體而不是單體CD137且能親和力成熟之所單離的抗CD137 Fcab分子，全部都包含部分(motif)PPY，以及5個胺基酸***，於其等之CH3域的AB環內。起始的庫篩選後所單離的另一譜系的抗CD137 Fcabs不具有此等特徵且不能成為親和力成熟的以及因而沒有進一步繼續。不希望受理論束縛，但認為PPY部分的存在可能由於脯胺酸殘基受限的可撓性，而藉由形成更剛性或暴露的環結構來促進延伸的抗原結合區域形成。任擇地，PPY序列可能代表涉及CD137結合之特定保守的部分，因已經證明富含脯胺酸的序列會結合，舉例而言SH3域蛋白的芳香族序列。而且，既然兩個單獨的Fcabs譜系已經獨立選擇出PPY保守的序列，其對於CD137的表位結合可能很重要。此外，多數單離的Fcabs之CH3域的EF環內存在保守的LE或LD序列，暗示著此胺基酸序列對於CD137結合可能也很重要。
如以上的背景章節所述，CD137配體與其受體，CD137，起始的連接發起了一連串事件導致CD137三聚合作用，接著受體簇集，活化NFkB細胞內訊息傳導途徑及後續的免疫細胞活化。為了有效率活化CD137的治療劑，必須以模擬三聚配體的方式使數種CD137單體橋接在一起。
烏托米單抗為一種IgG2分子且其之促效劑活性係依賴Fcγ受體之交聯作用。烏瑞魯單抗為一種帶有持續活性的IgG4分子且因而活性不需要Fcγ受體之交聯作用，雖然一些Fcγ受體之交聯會提升其之促效劑活性。發現Fcγ受體遍布整個人體。烏托米單抗及烏瑞魯單抗之免疫細胞的活化活性因而不限於身體的特定位址且因而可發生於肝臟或身體的其他地方。
本發明人已證明本發明的Fcabs需要交聯作用俾以簇集及活化CD137。然而應該注意到的是，此並不是與CD137結合的Fcabs之內在特徵。相反地，於篩選計劃期間單離的許多Fcabs與CD137結合但不需要交聯作用用於CD137簇集及活化或者於缺少交聯作用的情況下誘發受限的CD137簇集及活化。
如上所述，發現Fcγ受體遍布整個人體且因而CD137活化不限於特定的位址，此為Fcγ受體媒介的交聯作用之不利因素。本發明人因而導入突變至Fcabs的CH2域內以降低或廢除Fcγ受體的結合。因而，於通過Fcγ受體以外的製劑之交聯作用不存在的情況下，本發明的Fcabs不會展現出CD137促效劑活性且因而不預期會誘發肝發炎。
本發明人已經辨識出本發明的抗CD137 Fcabs能用於製備結合CD137以外的第二抗原，例如腫瘤抗原之多專一性，例如雙專一性分子。多專一性分子較佳與第二抗原二價地結合，雖然一般預料在第二抗原為一種細胞結合的腫瘤抗原的情況下，單價結合抗原會足以交聯專一性結合物件/抗體分子及誘發CD137簇集及活化。具體而言，本發明人已製備包含本發明的抗CD137 Fcabs之抗體分子其係經由其等之Fab區域來與第二抗原二價地結合。本發明人已證明此等雙專一性抗體分子在不需要例如慣用的抗體分子要求的Fcγ受體媒介的交聯作用的情況下，於該第二抗原存在之下，能有條件地活化CD137。一般認為抗體分子與第二抗原結合會造成該抗原所在之處的抗體分子交聯，此又導致T細胞表面上的CD137簇集及活化。抗體分子之促效劑活性因而取決於第二抗原與CD137二者均存在。換句話說，促效劑活性的條件是二種抗原均存在。此外，認為於第二抗原的存在下交聯抗體會經由抗體分子的恆定域抗原結合位址而協助所結合的CD137簇集。在第二抗原為疾病抗原，例如腫瘤抗原的情況下，抗體分子因而預期能以疾病依賴性方式，舉例而言於腫瘤微環境內活化免疫細胞。此靶定的免疫細胞活化預期在避免，舉例而言烏瑞魯單抗治療所見的肝發炎上是有益的。
本發明人亦已證明包含本發明的抗CD137 Fcabs之雙專一性分子，在抗體分子結合的第二抗原為免疫細胞抗原、腫瘤抗原或腫瘤細胞及免疫細胞二者均表現的抗原的情況下，能抑止活體內 的腫瘤生長。此外，與二種單專一性抗體分子組合相比，該組合之抗體分子中的一者包含如雙專一性分子相同的恆定域及另一抗體分子包含如雙專一性分子相同的可變異域結合位址，該雙專一性抗體分子觀察到更有效的腫瘤生長抑止，證明了當同一分子內存在二種結合位址時，會提升CD137的簇集及訊息傳導，且因而提升T細胞活化及相應的抗腫瘤效應。
包含本發明的抗CD137 Fcabs及對第二抗原專一的Fab部分之抗體分子，較佳會與CD137及與第二抗原二價地結合。這是有利的，因二種標靶之二價結合預料會使表現CD137及第二抗原的免疫細胞之間的橋接更穩定並藉此延長T細胞定位在特定位址，例如腫瘤微環境的時間，以及能作用於疾病，諸如腫瘤。這與絕大多數慣用的雙專一性抗體格式不同，慣用的雙專一性抗體格式為異質二聚體且經由一Fab臂與各標靶抗原單價結合。此一單價交互作用預料不只較不穩定而且在很多情況下還不足以從一開始誘導TNF受體例如CD137之簇集。
於任擇較佳的具體例中，該抗體分子包含一種能二價地結合CD137之抗CD137 Fcabs及一種對第二抗原專一的單價結合位址，例如單一Fab臂。單價結合位址可結合舉例而言，腫瘤關聯性抗原。於此等分子的情況中，第二抗原之單價結合預料會允許抗體分子更緊密地包裝於細胞表面上，導致CD137簇集及T細胞活化提升。
本發明包含抗CD137 Fcab之抗體分子另外的特徵是該抗體結構自身內含有CD137及第二抗原的二個抗原結合位址二者。具體而言，該抗體分子不需要經由鏈接子或其他構件來融合其他蛋白與該抗體分子而導致產生二價結合其之二種標靶的分子。這具有許多優點。具體而言，該抗體分子能用生產標準抗體使用的方法相似的該等方法來生產，因其等不含任何額外的融合部分。該結構也預料會導致抗體穩定性改良，因鏈接子可能隨著時間降解，造成非均質的抗體分子族群。族群中只有融合一種蛋白的該等抗體可能無法如具有二種融合蛋白的該等一般有效率的誘發TNF受體例如CD137之有條件的致效作用。鏈接子之裂解/降解可在治療劑投予給患者之前或投予給患者之後發生(例如通過酵素裂解或患者之活體內 pH)，藉此導致其於患者體內循環時的效用減少。因抗體分子內沒有鏈接子，預料抗體分子在投予前或後會保留相同數目的結合位址。此外，抗體分子的結構從分子免疫原性(immunogenicity)的角度來看也是較偏好的，因分子投予給患者時導入融合蛋白或鏈接子或二者可能誘發免疫原性，會導致治療效用降低。
本發明人已進一步證明由於本發明的Fcab分子之剛性結構所致的固定位置及/或極接近的CD137抗原結合位址，對於是誘發CD137簇集有利的，在與CD137結合位址對於抗體結構不完整而是例如藉由經由撓性鏈接子而附接至例如抗體分子或其部分的結合部分來提供的情況下相比。
因而，本發明提供：
[1]    一種專一性結合物件，其結合CD137且包含一CD137抗原結合位址座落於該專一性結合物件的一CH3域，該CD137結合位址包含一第一序列座落於該CH3域的AB結構環，其中該序列包含序列PPY(序列辨識編號：10)。
[2]    如[1]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含一***於該AB結構環內。
[3]    如[2]之專一性結合物件，其中該***的長度為1至10個胺基酸之間。
[4]    如[3]之專一性結合物件，其中該***的長度為4至6個胺基酸之間。
[5]    如[4]之專一性結合物件，其中該***的長度為5個胺基酸。
[6]   如[2]至[5]中任一項之專一性結合物件，其中該***係座落於該專一性結合物件的該CH3域之位置10至19之間，其中該胺基酸殘基編號係根據ImMunoGeneTics(IMGT)編號方式。
[7]    如[6]之專一性結合物件，其中該***係座落於該專一性結合物件的該CH3域之位置14至17之間。
[8]    如[7]之專一性結合物件，其中該***係座落於該專一性結合物件的該CH3域之位置16至17之間。
[9]    如[2]至[8]中任一項之專一性結合物件，其中該***係座落於該專一性結合物件的該CH3域之位置16.5至16.1處，其中該胺基酸殘基編號係根據ImMunoGeneTics(IMGT)編號方式。
[10]  如[1]至[9]中任一項之專一性結合物件，其中PPY序列係座落於該CH3域之位置15至17之間，以及其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[11]  如[1]至[10]中任一項之專一性結合物件，其中PPY序列係座落於該CH3域之位置16至17之間，以及其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[12]  如[11]之專一性結合物件，其中該PPY序列係座落於該CH3域之位置16.3、16.2及16.1處。
[13]  如[1]至[12]中任一項之專一性結合物件，其中該第一序列為下列專一性結合物件之第一序列： (i)FS22-172-003 之第一序列，其列於序列辨識編號：138 內； (ii)FS22-172-002 之第一序列，其列於序列辨識編號：129 內； (iii)FS22-172-004 之第一序列，其列於序列辨識編號：147 內； (iv)FS22-172-001 之第一序列，其列於序列辨識編號：120 內； (v)FS22-172-005 之第一序列，其列於序列辨識編號：156 內； (vi)FS22-172-006 之第一序列，其列於序列辨識編號：110 內；或 (vii)FS22-172 之第一序列，其列於序列辨識編號：110 內。
[14]  如[13]之專一性結合物件，其中該第一序列為下列專一性結合物件之第一序列： (i)FS22-172-003 之第一序列，其列於序列辨識編號：138內； (ii)FS22-172-002 之第一序列，其列於序列辨識編號：129內； (iii)FS22-172-004 之第一序列，其列於序列辨識編號：147內； (iv)FS22-172-001 之第一序列，其列於序列辨識編號：120內； (v)FS22-172-005 之第一序列，其列於序列辨識編號：156內；或 (vi)FS22-172-006 之第一序列，其列於序列辨識編號：110內。
[15]  如[14]之專一性結合物件，其中該第一序列為下列專一性結合物件之第一序列： (i)FS22-172-003 之第一序列，其列於序列辨識編號：138內； (ii)FS22-172-002 之第一序列，其列於序列辨識編號：129內；或 (iii)FS22-172-004 之第一序列，其列於序列辨識編號：147內。
[16]  如[15]之專一性結合物件，其中該第一序列為專一性結合物件FS22-172-003 之第一序列，其列於序列辨識編號：138內。
[17]  如[10]之專一性結合物件，其中該PPY序列係座落於該CH3域之位置16、16.5及16.4處。
[18]  如[1]至[10]或[17]中任一項之專一性結合物件，其中該第一序列為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 (較佳為專一性結合物件FS22-053-008) 之第一序列，其列於序列辨識編號：19內。
[19]  如[13]至[16]或[18]中任一項之專一性結合物件，其中該第一序列係座落於該專一性結合物件之該CH3域之位置14至17之間，其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[20]  如[19]之專一性結合物件，其中該第一序列係座落於該專一性結合物件之該CH3域之位置15、16、16.5、16.4、16.3、16.2及16.1處。
[21]  如[1]至[20]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件進一步包含一第二序列座落於該CH3域的EF結構環。
[22]  如[21]之專一性結合物件，其中該第二序列為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172( 較佳為專一性結合物件FS22-172-003) 之第二序列，其列於序列辨識編號：111內。
[23]  如[21]之專一性結合物件，其中該第二序列為下列專一性結合物件之第二序列： (i)FS22-053-008 之第二序列，其列於序列辨識編號：20 內； (ii)FS22-053-009 之第二序列，其列於序列辨識編號：29內； (iii)FS22-053-011 之第二序列，其列於序列辨識編號：47內； (iv)FS22-053-017 之第二序列，其列於序列辨識編號：101內； (v)FS22-053-014 之第二序列，其列於序列辨識編號：74內； (vi)FS22-053-010 之第二序列，其列於序列辨識編號：38內； (vii)FS22-053-012 之第二序列，其列於序列辨識編號：56內； (viii)FS22-053-013 之第二序列，其列於序列辨識編號：65內； (ix)FS22-053-015 之第二序列，其列於序列辨識編號：83內； (x)FS22-053-016 之第二序列，其列於序列辨識編號：92內；或 (xi)FS22-053 之第二序列，其列於序列辨識編號：174內。
[24]  如[23]之專一性結合物件，其中該第二序列為下列專一性結合物件之第二序列： (i)FS22-053-008 之第二序列，其列於序列辨識編號：20 內； (ii)FS22-053-009 之第二序列，其列於序列辨識編號：29內； (iii)FS22-053-011 之第二序列，其列於序列辨識編號：47內； (iv)FS22-053-017 之第二序列，其列於序列辨識編號：101內；或 (v)FS22-053-014 之第二序列，其列於序列辨識編號：74內。
[25]  如[24]之專一性結合物件，其中該第二序列為下列專一性結合物件之第二序列： (i)FS22-053-008 之第二序列，其列於序列辨識編號：20 內； (ii)FS22-053-009 之第二序列，其列於序列辨識編號：29內； (iii)FS22-053-011 之第二序列，其列於序列辨識編號：47內；或 (iv)FS22-053-017 之第二序列，其列於序列辨識編號：101內。
[26]  如[25]之專一性結合物件，其中該第二序列為專一性結合物件FS22-053-008 之第二序列，其列於序列辨識編號：20內。
[27]  如[21]至[26]中任一項之專一性結合物件，其中該第二序列係座落於該專一性結合物件之該CH3域之位置92至98處，其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[28]  如[1]至[27]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件進一步包含一第三序列座落於該CH3域的CD結構環。
[29]  如[28]之專一性結合物件，其中該第三序列係座落於該專一性結合物件之位置43至78處，其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[30]  如[28]至[29]中任一項之專一性結合物件，其中該第三序列具有列於序列辨識編號：2內的序列。
[31]  如[1]至[30]中任一項之專一性結合物件，其中該CH3域為一種人類IgG1 CH3域。
[32]  如[1]至[16]、[19]至[22]及[27]至[31]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列專一性結合物件之CH3域序列： (i)FS22-172-003 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：139 內； (ii)FS22-172-002 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：130內； (iii)FS22-172-004 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：148內； (iv)FS22-172-001 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：121內； (v)FS22-172-005 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：157內； (vi)FS22-172-006 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：165內；或 (vii)FS22-172 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：112內。
[33]  如[32]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列專一性結合物件之CH3域序列： (i)FS22-172-003 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：139內； (ii)FS22-172-002 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：130內； (iii)FS22-172-004 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：148內； (iv)FS22-172-001 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：121內； (v)FS22-172-005 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：157內；或 (vi)FS22-172-006 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：165內。
[34]  如[33]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列專一性結合物件之CH3域序列： (i)FS22-172-003 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：139內； (ii)FS22-172-002 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：130內；或 (iii)FS22-172-004 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：148內。
[35]  如[34]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-172-003 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：139內。
[36]  如[1]至[10]、[17]至[18]、[19]至[21]及[23]至[31]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列專一性結合物件之CH3域序列： (i)FS22-053-008 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：21內； (ii)FS22-053-009 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：30內； (iii)FS22-053-011 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：48內； (iv)FS22-053-017 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：102內； (v)FS22-053-014 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：75內； (vi)FS22-053-010 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：39內； (vii)FS22-053-012 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：57內； (viii)FS22-053-013 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：66內； (ix)FS22-053-015 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：84內； (x)FS22-053-016 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：93內；或 (xi)FS22-053 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：175內。
[37]  如[36]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列專一性結合物件之CH3域序列： (i)FS22-053-008 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：21內； (ii)FS22-053-009 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：30內； (iii)FS22-053-011 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：48內； (iv)FS22-053-017 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：102內；或 (v)FS22-053-014 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：75內。
[38]  如[37]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列專一性結合物件之CH3域序列： (i)FS22-053-008 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：21內； (ii)FS22-053-009 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：30內； (iii)FS22-053-011 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：48內；或 (iv)FS22-053-017 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：102內。
[39]  如[38]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-053-008 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：21內。
[40]  如[37]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-053-017 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：102內。
[41]  如[37]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-053-014 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：75內。
[42] 如[1]至[41]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件進一步包含一CH2域，較佳為人類IgG1之CH2域。
[43] 如[1]至[42]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件為二個同一的多肽鏈之二聚體，各多肽鏈包含一CH2及一CH3域。
[44] 如[42]或[43]之專一性結合物件，其中該CH2域具有列於序列辨識編號：6或5內的序列。
[45] 如[42]至[44]中任一項之專一性結合物件，其於該CH2域的N端進一步包含一免疫球蛋白鉸鏈區或其部分，較佳為一人類IgG1鉸鏈區或其部分。
[46] 如[45]之專一性結合物件，其中該鉸鏈區具有列於序列辨識編號：179 內的序列或其片段。
[47] 如[46]之專一性結合物件，其中該鉸鏈區具有列於序列辨識編號：7內的序列。
[48]  如[1]至[16]、[19]至[22]、[27]至[35]及[42]至[47]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 之序列，其分別列於序列辨識編號：141、132、150、123、159、167及114內。
[49]  如[48]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 或FS22-172-006 之序列，其分別列於序列辨識編號：141、132、150、123、159及167內。
[50]  如[49]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 或FS22-172-004 之序列，其分別列於序列辨識編號：141、132及150內。
[51]  如[50]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-172-003 之序列，其列於序列辨識編號：141內。
[52]  如[1]至[10]、[17]至[18]、[19]至[21]、[23]至[31]及[36]至[47]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 之序列，其分別列於序列辨識編號：23、32、50、104、77、41、59、68、86、95及175內。
[53]  如[52]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 或FS22-053-014 之序列，其分別列於序列辨識編號：23、32、50、104及77內。
[54]  如[53]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 或FS22-053-017 之序列，其分別列於序列辨識編號：23、32、50及103內。
[55]  如[54]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-053-008 之序列，其列於序列辨識編號：23內。
[56] 如[1]至[55]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件與人類CD137結合。
[57] 如[56]之專一性結合物件，其中該人類CD137具有下列、包含下列或由下列所組成：列於序列辨識編號：181 內之序列。
[58]  如[1]至[55]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件與二聚體CD137結合的親和力比單體CD137更高。
[59] 如[1]至[58]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件與食蟹獼猴CD137結合。
[60] 如[59]之專一性結合物件或抗體分子，其中該食蟹獼猴CD137具有下列、包含下列或由下列所組成：列於序列辨識編號：183 內之序列。
[61] 如[1]至[60]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件進一步包含一第二抗原結合位址。
[62]  如[61]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件為多專一性分子。
[63] 如[62]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件為雙專一性、三專一性或四專一性分子。
[64] 如[63]之專一性結合物件，其中該專一性結合物件為雙專一性分子。
[65] 如[61]至[64]中任一項之專一性結合物件，其中該第二抗原結合位址為一CDR-為基的抗原結合位址。
[66] 如[65]之專一性結合物件，其中該第二抗原結合位址包含一重鏈可變異域CDR1、CDR2及CDR3，以及一輕鏈可變異域CDR1、CDR2及CDR3。
[67] 如[61]至[66]中任一項之專一性結合物件，其中該第二抗原結合位址包含一重鏈可變異域及一輕鏈可變異域。
[68] 如[61]至[67]中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件為一抗體分子。
[69] 如[68]中之抗體分子，其中該抗體分子為一人類IgG1分子。
[70] 如[65]至[69]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子之該CDR-為基的抗原結合位址與選自於下列所組成的群組之第二抗原結合：免疫細胞抗原及疾病抗原。
[71]  如[70]之抗體分子，其中該疾病抗原為腫瘤抗原及或病原性抗原。
[72]  如[70]之抗體分子，其中該疾病抗原為免疫調節分子，例如PD-L1。
[73]  如[70]之抗體分子，其中該免疫細胞抗原為腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)之成員。
[74]  如[71]之抗體分子，其中該腫瘤抗原為腫瘤關聯性抗原(TAA)。
[75] 如[71]至[74]中任一項之抗體分子，其中該腫瘤抗原為一癌細胞上的細胞表面抗原。
[76]      如[71]之抗體分子，其中該腫瘤抗原為一種可溶性多聚體(multimer)。
[77] 如[76]之抗體分子，其中該可溶性多聚體為至少一種二聚體。
[78] 如[77]之抗體分子，其中該可溶性多聚體為至少一種三聚體。
[79]  如[71]之抗體分子，其中該病原性抗原為細菌或病毒抗原。
[80] 如[70]至[79]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子於該第二抗原存在下、能活化免疫細胞上存在的CD137。
[81] 如[70]至[80]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子結合CD137及該第二抗原導致免疫細胞上的CD137簇集。
[82] 如[80]或[81]之抗體分子，其中該免疫細胞為T細胞。
[83] 如[1]至[82]中任一項之專一性結合物件或抗體分子，其中該專一性結合物件或抗體分子已經修飾以降低或廢除該專一性結合物件或抗體分子的該CH2域與一個或多個Fcγ受體的結合。
[84] 如[1]至[83]中任一項之專一性結合物件或抗體分子，其中該專一性結合物件或抗體分子不會活化Fcγ受體。
[85]  如[83]或[84]之專一性結合物件或抗體分子，其中該Fcγ受體係選自於下列所組成的群組：FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIII。
[86] 如[1]至[85]中任一項之專一性結合物件或抗體分子，其中該專一性結合物件或抗體分子係複合至一種生物活性分子。
[87] 如[1]至[85]中任一項之專一性結合物件或抗體分子，其中該專一性結合物件或抗體分子係複合至一種可偵測的標記。
[88] 一種核酸分子，其編碼如[1]至[85]中任一項之專一性結合物件或抗體分子。
[89] 如[88]之核酸分子，其中該核酸分子包含： (i)專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 之CH3域核酸序列，其分別列於序列辨識編號：22 、 31 、 49 、 103 、 76 、 40 、 58 、 67 、 85 、 94 及 176 內；或 (ii)專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 之CH3域核酸序列，其分別列於序列辨識編號：140 、131 、149 、122 、158 、166 及113 內。
[90]  如[88]或[89]之核酸分子，其中該核酸分子包含下列專一性結合物件之核酸序列： (i)FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 之 核酸序列，其分別列於序列辨識編號：24 、 33 、 51 、 105 、 78 、 42 、 60 、 69 、 87 、 96 及 177 內； 或 (ii)FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 之 核酸序列，其分別列於序列辨識編號：142 、133 、151 、124 、160 、168 及115 內。
[91]  如[89]或[90]之核酸分子，其中該核酸分子包含下列專一性結合物件的CH3域核酸序列，或核酸序列： (i)FS22-172-003 ；或 (ii)FS22-053-008 。
[92] 一種載體，其包含如[88]至[91]中任一項之核酸。
[93] 一種重組宿主細胞，其包含如[88]至[91]中任一項之核酸或[92]之載體。
[94] 一種生產如[1]至[85]中任一項之專一性結合物件或抗體分子之方法，其包含於用於生產該專一性結合物件或抗體分子的條件下培養[93]之重組宿主細胞。
[95] 如[94]之方法，其進一步包含單離及/或純化該專一性結合物件或抗體分子。
[96] 一種藥學組成物，其包含如[1]至[87]中任一項之專一性結合物件或抗體分子及一藥學上可接受的賦形劑。
[97] 如[1]至[87]中任一項之專一性結合物件或抗體分子，供用於通過療法來治療人類或動物身體的方法。
[98] 一種治療一個體的一疾病或障礙的方法，其包含投予一治療有效量的如[1]至[87]中任一項之專一性結合物件或抗體分子至該個體。
[99] 如[97]之供用的專一性結合物件或抗體分子或如[98]之方法，其中該治療係治療一個體的癌症或感染性疾病。
[100]    如[97]或[99]之供用的專一性結合物件或抗體分子，或如[98]或[99]之方法，其中該治療方法包含投予組合以第二治療劑之該專一性結合物件或抗體分子至該個體。
較佳實施例之詳細說明 本發明係有關於結合CD137的專一性結合物件。CD137也被稱為腫瘤壞死因子受體超家族的成員9 (TNFRSF9)或4-1BB。該專一性結合物件較佳結合人類CD137，更佳為人類及食蟹獼猴CD137，再更佳為二聚體人類及食蟹獼猴CD137。該專一性結合物件結合的CD137部分較佳為CD137細胞外域。人類及食蟹獼猴CD137之細胞外域可以包含序列辨識編號181 及 183 內分別列出之序列或由其等所組成。該專一性結合物件較佳能與細胞表面上表現的CD137結合。細胞較佳為免疫細胞，例如CD8+ 或CD4+ T細胞或調節性T(Treg)細胞，較佳為CD8+ T細胞或B細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞、樹突細胞(DC)或腫瘤浸潤型淋巴細胞(TIL)。
該專一性結合物件較佳專一地與CD137結合。術語“專一的”可以指專一性結合物件與其專一的結合伙伴，於此為CD137，以外的分子不會表現出任何明顯結合的情況。術語“專一的”也可適用於專一性結合物件對一些抗原所攜帶的特定表位，如CD137上的表位為專一的情況，在這種情況下專一性結合物件能與攜帶該表位的各種抗原結合。專一性結合物件較佳與CD40、OX40及/或GITR不會結合，或不顯示出任何明顯結合。
如以上的背景章節所述，以抗CD137抗體烏瑞魯單抗治療患者係與劑量限制性高度肝發炎有相關。不希望受理論束縛，但認為烏瑞魯單抗治療所見的肝發炎可能是由於肝內存在的T細胞之活化，或活化的T細胞浸潤且蓄積於患者的肝臟內。為了挑選肝發炎降低或沒有肝發炎的分子，本發明人選擇高CD137總結合性(avidity)的Fcabs。具體而言，本發明人選擇與二聚體CD137結合的親和力比單體CD137更高的Fcabs。T細胞於引發(priming)及活化時會上調CD137的表現。一般認為由於活化的T細胞上CD137較高的表現，CD137於此等細胞表面上會呈二聚體、三聚體或更高階的多聚體形式。相反地，非活性T細胞表現低甚或偵測不到的CD137表現。因而認為CD137，到此等T細胞表面上表現的全體的程度，可能是呈單體形式。因而認為以高總結合性與CD137結合之Fcabs會優先結合活化的T細胞，而不是非活性T細胞，舉例而言肝臟內存在的非活性T細胞，且因而展現出肝發炎降低或沒有肝發炎。
專一性結合物件較佳以60 nM、50 nM、40 nM、30 nM、20 nM、10 nM、5 nM、4 nM、3 nM或2 nM的親和力(KD )或更大的親和力與二聚體人類CD137結合。
於較佳的具體例中，專一性結合物件與二聚體CD137結合的親和力比單體CD137更高。於較佳的具體例中，專一性結合物件與二聚體CD137結合的親和力比專一性結合物件對於單體CD137的親和力更高至少50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、110倍、120倍、130倍、140倍、150倍、160倍、170倍或200倍。
人類CD137舉例而言，可具有序列辨識編號：183 內列出的該序列。該序列係同一的不論抗原是否呈單體或二聚體形式。
也已經證明來自FS22-53及FS22-172譜系之專一性結合物件會與二聚體食蟹獼猴CD137結合。結合食蟹獼猴CD137以及人類CD137是有利的因其允許於在投予人類前先在食蟹獼猴測試專一性結合物件的功效及毒性。
於較佳的具體例中，專一性結合物件可以250 nM、200 nM、150 nM、140 nM、120 nM、100 nM、90nM、80 nM、70 nM、60 nM、50 nM、40 nM、30 nM、20 nM、10 nM、5 nM、4 nM、3 nM或2 nM的親和力(KD )或更大的親和力與二聚體食蟹獼猴CD137結合。較佳地，專一性結合物件係以2 nM的親和力(KD )或更大的親和力與二聚體食蟹獼猴CD137結合。
該專一性結合物件可以相似的親和力與二聚體人類CD137及二聚體食蟹獼猴CD137結合。認為此點對於食蟹獼猴進行可預測該專一性結合物件於人類的功效及毒性之專一性結合物件之功效及毒性研究是有利的。
因而，於較佳的具體例中，專一性結合物件與二聚體食蟹獼猴CD137結合的親和力比專一性結合物件與二聚體人類CD137結合的親和力更低或更高不超過10倍，較佳為不超過5倍。
該專一性結合物件可以與二聚體小鼠CD137、二聚體食蟹獼猴CD137及二聚體人類CD137結合。認為此點是有利的，因能使用相同的專一性結合物件執行小鼠的起始功效研究、食蟹獼猴的毒性研究以及在人類的臨床試驗，因而可能會簡化至臨床的路徑。具體而言，意外發現專一性結合物件FS22-053-014及FS22-053-017會結合二聚體小鼠、人類及食蟹獼猴CD137。
專一性結合物件與同源抗原，諸如人類或食蟹獼猴CD137的結合親和力能由，舉例而言表面電漿子共振(SPR)，如Biacore來判定。
術語“專一性結合物件”描述一種免疫球蛋白或其片段，其包含一恆定域，其含一CD137抗原結合位址。當使用於本文中，術語“專一性結合物件”因而包括抗原結合片段，條件是該抗原結合片段包含一CD137抗原結合位址座落於該專一性結合物件的一恆定域內。恆定域可以為CL、CH1、CH2、CH3或CH4域，較佳恆定域為CH1、CH2或CH3域，更佳為CH2或CH3域，最佳為CH3域。該專一性結合物件可以是部分或完全合成生產的。
較佳地，該專一性結合物件包含一CH2及CH3域，其中該CH2或CH3域，較佳為CH3域，包含一CD137抗原結合位址。該專一性結合物件較佳為二個(同一的)多肽鏈的二聚體，各多肽鏈包含一CH2及一CH3域。於較佳的具體例中，該專一性結合物件進一步包含一免疫球蛋白鉸鏈區或其部分於該CH2域的N端。此一分子於此亦可稱為一抗原結合Fc片段或FcabTM 。該鉸鏈區可由序列辨識編號：179 內列出的序列或其片段組成或包含序列辨識編號：179 內列出的序列或其片段。較佳地，該片段為具序列辨識編號：179 內列出的序列之C端片段。該片段的長度可為至多20、至多10、至多8或至多6個胺基酸。該片段的長度可為至少3、至少4、至少5或至少6個胺基酸。於較佳的具體例中，該鉸鏈區具有序列辨識編號：7 內列出的序列。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件為一種抗體分子，較佳為單株抗體或其片段。該抗體分子較佳為人類或人化的。該抗體分子可為免疫球蛋白G分子，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4分子，較佳為IgG1、IgG2或IgG4分子，更佳為IgG1分子，或其片段。
因抗體可以以一些方式予以修飾，所以術語“抗體分子”應該解釋為涵蓋抗體片段、衍生物、功能等效物及抗體同源物，不論是天然或完全或部分合成的。一種包含一CH3域的抗體片段之實例為一種抗體的Fc域。一種包含CDR序列及CH3域二者之抗體片段之實例為微型抗體(minibody)，其包含連結一CH3域之scFv(Hu等人 (1996), Cancer Res., 56(13):3055-61)。
該專一性結合物件包含一CD137抗原結合位址。該CD137抗原結合位址座落於該專一性結合物件的恆定域，較佳為CH3域。CD137抗原結合位址包含一個或多個修飾的結構環於該專一性結合物件的恆定域。工程處理抗體恆定域的結構環來創造標靶抗原之抗原結合位址為本技藝已知的且描述於舉例而言，Wozniak-Knopp G等人 (2010)；WO2006/072620及WO2009/132876之內。
大規模的選擇及親和力成熟計劃後，本發明人單離出優先結合二聚體而不是單體人類CD137的二組Fcabs。令人驚訝地，單離的Fcabs全部都包含序列PPY，以及5個胺基酸***，於其等之AB結構環內。從不同的選擇活動獨立地選出該二組Fcabs，該等選擇活動各者使用包含5個胺基酸***於該結構AB環內的庫。因而獨立地選出PPY序列二次，表示此序列對於CD137結合的重要性。從Fcab庫單離、不包含5個胺基酸***於該AB結構環內的抗CD137 Fcabs沒有進一步繼續，譬如是因為選出的Fcabs不可能親和力成熟的。此表示AB結構環內存在的胺基酸***對於CD137的結合可能很重要。因而，序列PPY及5個胺基酸***存在於AB結構環內，其中PPY序列可選擇性地全部或部分存在於5個胺基酸***內，對於CD137的結合可能很重要。
因而，該專一性結合物件之CD137抗原結合位址可包含一第一及/或第二序列，較佳為一第一及第二序列，其中該第一及第二序列係分別座落於該專一性結合物件之該恆定域，較佳為該CH3域，的AB及EF結構環。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件之CH3域的位置95及96處的殘基為野生型，即較佳分別為精胺酸(R)及色胺酸(W)。此等殘基二者均座落於EF結構環。除非另有說明，否則本文之胺基酸殘基位置係根據ImMunoGeneTics (IMGT)編號方式予以編號。Lefranc等人 ，2005乙文中描述IMGT編號方式。
該第一序列較佳包含序列PPY(序列辨識編號：10 )。
PPY序列可座落於該專一性結合物件的該CH3域之位置10至19之間，較佳為位置15至17之間。於較佳的具體例中，PPY序列係座落於該CH3域之位置16、16.5及16.4處。任擇地，PPY序列可座落於該CH3域之位置16至17之間。於任擇較佳的具體例中，PPY序列係座落於該CH3域之位置16.3、16.2及16.1處。於IMGT編號方式中，***的殘基係根據其等座落的環的方向予以編號。設若環向“上”走，則***的殘基是取緊接在***前面的殘基號碼且***的殘基號碼於序列內係以遞升的十進制數數字表示，諸如在殘基16後有三個突變的情況下為16、16.1、16.2、16.3。設若環向“下”走，則***的殘基是取緊接在***前面的殘基號碼且***的殘基號碼於序列內係以下降的十進制數數字表示，諸如在殘基16後有三個突變的情況下為16、16.3、16.2、16.1(LeFranc等人，2005，以及LeFranc等人之2015)。
於較佳的具體例中，該AB結構環包含一胺基酸***。該***的長度可以為1至10、2至9、3至7、4至6或5個胺基酸。較佳地，該***的長度為5個胺基酸。
該***可座落於該專一性結合物件的該CH3域之位置10至19之間，較佳為位置14至17之間，更佳為位置16至17之間。於較佳的具體例中，該***係如圖 1 中所示座落於該專一性結合物件的該CH3域之位置16.5至16.1處。
親和力成熟後辨識出的多數專一性結合物件都包含一白胺酸(L)殘基於CH3域之位置97處。許多專一性結合物件也包含一天冬胺酸(D)殘基或麩胺酸(E)殘基於專一性結合物件的CH3域之位置98處。此等胺基酸改變二者均係座落於該EF結構環內。此等結果暗示此等殘基之一者或二者對於CD137的結合可能很重要。因而，第二序列較佳包含序列LD或LE，其中該LD或LE序列較佳座落於專一性結合物件的CH3域之位置97及98處。
第一序列及第二序列可以為下列之CH3域的第一及第二序列：專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 ，較佳為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 或FS22-172-006 ，更佳為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 或FS22-172-004 ，再更佳為專一性結合物件FS22-172-003 。
任擇地，第一序列及第二序列可以為下列之CH3域的第一及第二序列：專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、 或FS22-053-016 、或FS22-053 ，較佳為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 或FS22-053-014 ，更佳為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、 或FS22-053-017 ，再更佳為專一性結合物件FS22-053-008 。於任擇較佳的具體例中，第一序列及第二序列為下列之CH3域的第一及第二序列：專一性結合物件FS22-053-017 或FS22-053-014 ，更佳為專一性結合物件FS22-053-017 。
專一性結合物件FS22-053 、FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-010 、FS22-053-011 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-014 、FS22-053-015 、FS22-053-016 、FS22-053-017 、FS22-172 、FS22-172-001 、FS22-172-002 、FS22-172-003 、FS22-172-004 、FS22-172-005 及FS22-172-006 之CH3域序列係分別列於序列辨識編號：175 、21 、30 、39 、49 、58 、66 、75 、84 、93 、102 、112 、121 、130 、139 、148 、157 及166 內。
專一性結合物件FS22-053 、FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-010 、FS22-053-011 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-014 、FS22-053-015 、FS22-053-016 、FS22-053-017 、FS22-172 、FS22-172-001 、FS22-172-002 、FS22-172-003 、FS22-172-004 、FS22-172-005 及FS22-172-006 之第一及第二序列可以分別為專一性結合物件FS22-053 、FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-010 、FS22-053-011 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-014 、FS22-053-015 、FS22-053-016 、FS22-053-017 、FS22-172 、FS22-172-001 、FS22-172-002 、FS22-172-003 、FS22-172-004 、FS22-172-005 及FS22-172-006 之該CH3域的位置14至17，及位置91至99之間的序列。
任擇地，專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-010 、FS22-053-011 、FS22-053-012 及FS22-053-016 之第一及第二序列可以分別為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-010 、FS22-053-011 、FS22-053-012 及FS22-053-016 之該CH3域的位置14至17，及位置92至99之間的序列。
專一性結合物件FS22-053-015 之第一及第二序列任擇地可以分別為專一性結合物件FS22-053-015 之該CH3域的位置14至17，及位置92至98之間的序列。
專一性結合物件之CD環序列較佳為未經修飾的，即野生型。CD環序列因而較佳具有序列辨識編號：2 內列出的序列。CD環序列較佳座落於該專一性結合物件之該CH3域的位置43至78處。
第一及第二序列可以分別為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 、FS22-172 、FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 之完整的AB及EF結構環序列。判定CH3域序列之AB、CD及EF結構環的位置，舉例而言依據IMGT、IMGT外顯子、EU或Kabat編號系統，係在本技術人員的能力範圍內且於Hasenhindl等人 (2013)乙文中有描述。於較佳的具體例中，AB、CD及EF結構環依據IMGT編號系統係分別座落於該專一性結合物件的該CH3域之位置10至19、42至79以及91至102之間。於較佳的具體例中，第一、第二及第三序列因而分別為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 、FS22-053 、FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 的該CH3域之位置10至19、42至79以及91至102之間的序列。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件包含第一及/或第二，較佳為下列專一性結合物件之第一及第二序列： (i)FS22-172-003 ，列於序列辨識編號：141內； (ii)FS22-172-002 ，列於序列辨識編號：132內； (iii)FS22-172-004 ，列於序列辨識編號：150內； (iv)FS22-172-001 ，列於序列辨識編號：123內； (v)FS22-172-005 ，列於序列辨識編號：159內； (vi)FS22-172-006 ，列於序列辨識編號：167內；或 (vii)FS22-172 ，列於序列辨識編號：114內；其中該第一及第二序列較佳分別座落於該專一性結合物件之該CH3域的位置14至17及91至99之間。
於更佳的具體例中，該專一性結合物件包含第一及/或第二，較佳為下列專一性結合物件之第一及第二序列： (i)FS22-172-003 ， 列於序列辨識編號：141內； (ii)FS22-172-002 ， 列於序列辨識編號：132內； (iii)FS22-172-004 ， 列於序列辨識編號：150內； (iv)FS22-172-001 ， 列於序列辨識編號：123內； (v)FS22-172-005 ， 列於序列辨識編號：159內；或 (vi)FS22-172-006 ， 列於序列辨識編號：167內。
於還更佳的具體例中，該專一性結合物件包含第一及/或第二，較佳為下列專一性結合物件之第一及第二序列： (i)FS22-172-003 ， 列於序列辨識編號：141內； (ii)FS22-172-002 ， 列於序列辨識編號：132內；或 (iii)FS22-172-004 ， 列於序列辨識編號：150內。
於甚至更佳的具體例中，該專一性結合物件包含第一及/或第二，較佳為序列辨識編號：141內列出的專一性結合物件FS22-172-003 之第一及第二序列。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件，特別是一種包含第一及/或第二，較佳為專一性結合物件FS22-172-006 之第一及第二序列的專一性結合物件，可包含一白胺酸(L)殘基於該專一性結合物件的CH3域之位置19處。
於任擇較佳的具體例中，該專一性結合物件包含第一及/或第二，較佳為下列專一性結合物件之第一及第二序列： (i)FS22-053-008 ， 列於序列辨識編號：23內； (ii)FS22-053-009 ， 列於序列辨識編號：32內； (iii)FS22-053-011 ， 列於序列辨識編號：50內； (iv)FS22-053-017 ， 列於序列辨識編號：104內； (v)FS22-053-014 ， 列於序列辨識編號：77內； (vi)FS22-053-010 ， 列於序列辨識編號：41內； (vii)FS22-053-012 ， 列於序列辨識編號：59內； (viii)FS22-053-013 ， 列於序列辨識編號：68內； (ix)FS22-053-015 ， 列於序列辨識編號：86內； (x)FS22-053-016 ， 列於序列辨識編號：95內；或 (xi)FS22-053 ， 列於序列辨識編號：15內；其中該第一及第二序列較佳分別座落於該專一性結合物件之該CH3域的位置14至17及91至99之間。
於更佳的具體例中，該專一性結合物件包含第一及/或第二，較佳為下列專一性結合物件之第一及第二序列： (i)FS22-053-008 ， 列於序列辨識編號：23內； (ii)FS22-053-009 ， 列於序列辨識編號：32內； (iii)FS22-053-011 ， 列於序列辨識編號：50內； (iv)FS22-053-017 ， 列於序列辨識編號：104內；或 (v)FS22-053-014 ， 列於序列辨識編號：77內。
於還更佳的具體例中，該專一性結合物件包含第一及/或第二，較佳為下列專一性結合物件之CH3域的第一及第二序列： (i)FS22-053-008 ， 列於序列辨識編號：23內； (ii)FS22-053-009 ， 列於序列辨識編號：32內； (iii)FS22-053-011 ， 列於序列辨識編號：50內；或 (iv)FS22-053-017 ， 列於序列辨識編號：104內。
於甚至更佳的具體例中，該專一性結合物件包含第一及/或第二，較佳為序列辨識編號：23內列出的專一性結合物件FS22-053-008 之第一及第二序列。
作為IMGT編號之替代方案，胺基酸殘基位置，包括如本文所述之胺基酸序列、取代、缺失及***的位置，可依據IMGT外顯子編號(亦稱為連續編號)、EU編號或Kabat編號來編號。圖 1 顯示CH3域殘基位置的IMGT編號、IMGT外顯子編號、EU編號及Kabat編號之間的協和。因而，舉例而言，在根據IMGT編號方式來編號殘基位置的情況下，本申請案指稱第一序列分別座落於該專一性結合物件的CH3域之位置14至17之間，在根據IMGT外顯子編號方式來編號殘基位置的情況下，第一序列係座落於該CH3域之位置18至21之間，如圖 1 中所示。任擇地，CH3域之胺基酸殘基位置，包括如本文所述之CH3域的胺基酸序列、取代、缺失及***的位置，可參考序列辨識編號： 4 內列出的野生型CH3域序列中其等的位置來定義。圖 1 亦顯示IMGT編號與野生型CH3域序列之間的協和。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件包含一CH3域序列，其包含下列、具有下列或由下列所組成：專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 之CH3域序列，較佳為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 或FS22-172-006 之CH3域序列，更佳為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 或FS22-172-004 之CH3域序列，再更佳為專一性結合物件FS22-172-003 之CH3域序列。
於任擇較佳的具體例中，該專一性結合物件包含一CH3域序列，其包含下列、具有下列或由下列所組成：專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 之CH3域序列，較佳為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 或FS22-053-014 之CH3域序列，更佳為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 或FS22-053-017 之CH3域序列，再更佳為專一性結合物件FS22-053-008 之CH3域序列。
專一性結合物件之CH3域可選擇性地包含一額外的離胺酸殘基(K)於最接近該CH3域序列之C端處。
取得單株及其他抗體並使用重組DNA科技技術來生產保留原始抗體專一性的其他抗體或嵌合分子是有可能的。此等技術可涉及導入CDRs或可變異區域，至不同的免疫球蛋白之內。導入一免疫球蛋白的CDRs至另一免疫球蛋白之內係描述於，舉例而言EP-A-184187、GB 2188638A及EP-A-239400之內。可使用相似的技術導入恆定域序列以使如本發明之專一性結合物件的CD137抗原結合位址組合至一恆定域內，例如另一種專一性結合物件的CH3域，藉此產生一種專一性結合物件其之恆定域內包含CD137抗原結合位址。任擇地，一種專一性結合物件的完整恆定域序列之片段能以如本發明之專一性結合物件的恆定域序列來取代以製備一種專一性結合物件其之恆定域內包含CD137抗原結合位址。一種專一性結合物件的恆定域序列之片段同樣地能以如本發明之包含CD137抗原結合位址之專一性結合物件的恆定域序列之對應片段來取代。
該專一性結合物件之CH2域可包含一個或多個突變，其能減少或廢除CH2域與一個或多個Fcγ受體例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIII及/或補體的結合作用。本發明人假設與Fcγ受體的結合作用減少或廢除會降低或消除該專一性結合物件所媒介的ADCC。相似地，減少或廢除與補體的結合作用預期會降低或消除該專一性結合物件所媒介的CDC。減少或廢除CH2域與一個或多個Fcγ受體及/或補體之結合作用的突變為本技藝已知的(Wang等人，2018)。此等突變包括Bruhns等人，2009及Hezareh等人，2001之內描述的"LALA突變"，其涉及以丙胺酸取代CH2域之IMGT位置1.3及1.2之白胺酸殘基(L1.3A及L1.2A)。任擇地，經由藉著使CH2域之IMGT位置84.4之天冬醯胺酸(N)突變為丙胺酸、甘胺酸或麩醯胺酸(N84.4A、N84.4G或N84.4Q)，而使保守的N-鍵接醣基化位址突變來產生無醣苷基(a-glycosyl)的抗體，亦已知會降低IgG1效應子功能(Wang等人，2018)。作為另一種選擇，已知經由使CH2域之IMGT位置114之脯胺酸突變為丙胺酸或甘胺酸(P114A或P114G)會降低補體活化(C1q結合)及ADCC(Idusogie等人，2000；Klein等人，2016)。亦可組合此等突變俾以產生具有進一步降低或沒有ADCC或CDC活性的專一性結合物件。
因而，該專一性結合物件可包含一CH2域，其中該CH2域較佳包含： (i) 丙胺酸殘基於位置1.3及1.2處；及/或 (ii) 一丙胺酸或甘胺酸於位置114處；及/或 (iii) 一丙胺酸、麩醯胺酸或甘胺酸於位置84.4處； 其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件包含一CH2域，其中該CH2域較佳包含： (i) 丙胺酸殘基於位置1.3及1.2處；及/或 (ii) 一丙胺酸或甘胺酸於位置114處； 其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
於另一較佳具體例中，該專一性結合物件包含一CH2域，其中該CH2域包含： (i) 一丙胺酸殘基於位置1.3處；及 (ii) 一丙胺酸殘基於位置1.2處； 其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
舉例而言，該CH2域可具有序列辨識編號：6 內列出的該序列。[LALA] 於任擇較佳的具體例中，該專一性結合物件包含一CH2域，其中該CH2域包含： (i) 一丙胺酸殘基於位置1.3處； (ii) 一丙胺酸殘基於位置1.2處；及 (iii) 一丙胺酸於位置114處； 其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
舉例而言，該CH2域可具有序列辨識編號：5內列出的該序列。[LALA-PA]
於較佳的具體例中，該專一性結合物件包含下列、具有下列或由下列所組成：專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 之CH2及CH3域序列，較佳為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 或FS22-172-006 之CH2及CH3域序列，更佳為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 或FS22-172-004 之CH2及CH3域序列，再更佳為專一性結合物件FS22-172-003 之CH2及CH3域序列，其中專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 及FS22-172 之CH2及CH3域序列係分別顯示於序列辨識編號141 、132 、150 、123 、159 、167 及114 內，從胺基酸7開始向前。
於任擇較佳的具體例中，該專一性結合物件包含下列、具有下列或由下列所組成：專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 之CH2及CH3域序列，較佳為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 或FS22-053-014 之CH2及CH3域序列，更佳為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 或FS22-053-017 之CH2及CH3域序列，再更佳為專一性結合物件FS22-053-008 之CH2及CH3域序列，其中專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 及FS22-053 之CH2及CH3域序列係分別顯示於序列辨識編號 23 、 32 、 50 、 104 、 77 、 41 、59 、 68 、 86 、 95 及 15 內，從胺基酸7開始向前。
於任擇較佳的具體例中，該專一性結合物件包含下列、具有下列或由下列所組成：專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 之序列，較佳為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 或FS22-053-014 之序列，更佳為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 或FS22-053-017 之序列，再更佳為專一性結合物件FS22-053-008 之序列，其中專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 及FS22-053 之序列係分別 列於序列辨識編號 23 、 32 、 50 、 104 、 77 、 41 、59 、 68 、 86 、 95 及 15 內。
於較佳的具體例中，除了座落於該專一性結合物件的恆定域之CD137抗原結合位址之外，該專一性結合物件還可包含與一個或多個另外的抗原結合位址。該一個或多個另外的抗原結合位址較佳與其等同源抗原專一地結合。
該一個或多個另外的抗原結合位址可與CD137或另一抗原結合。該專一性結合物件因而可為多專一性，例如雙專一性、三專一性或四專一性分子，較佳為雙專一性分子。於較佳的具體例中，該專一性結合物件能同時與CD137以及該一個或多個另外的抗原結合。
已知抗體分子具有模組架構，其包含離散的域，其可以多種不同方式組合以創造多專一性，例如雙專一性、三專一性或四專一性抗體格式。例示性多專一性抗體格式係舉例而言，描述於Spiess等人(2015)及Kontermann (2012)內。本發明之專一性結合物件可以此種多專一性抗體格式來使用。這情況通過該專一性結合物件之恆定域，例如CH3域內存在抗原結合位址而導入另外的抗原結合位址至此種多專一性抗體格式內有額外的優勢。
舉例而言，本發明的專一性結合物件可為異質二聚體抗體分子，例如異質二聚體完整免疫球蛋白分子或其片段。在這種情況下，抗體分子的一部份會具有如本文所述之一序列或多個序列。舉例而言，於本發明的專一性結合物件為雙專一性異質二聚體抗體分子的情況下，該專一性結合物件可包含一重鏈、其含有如本文所述之CH3域、與一結合CD137以外的抗原之重鏈配對。製備異質二聚體抗體的技術為本技藝已知的且包括旋鈕至孔洞(knobs-into-holes (KIHs))技術，其涉及工程處理抗體分子的CH3域來創造“旋鈕”或“孔洞”以促進鏈的異質二聚合。任擇地，異質二聚體抗體製備可通過導入電荷對(charge pairs)至抗體分子內以藉由靜電排斥避免CH3域之同質二聚合且藉由靜電吸引而直接異質二聚合。異質二聚體抗體格式之實例包括CrossMab、mAb-Fv、種子小體(SEED-body)及KIH IgG。
任擇地，本發明之多專一性專一性結合物件可以包含完整免疫球蛋白分子或其片段及額外的抗原結合部份(moiety)或部份(moieties)。該抗原結合部份舉例而言可以為Fv、scFv或單域抗體，且可以與完整免疫球蛋白分子或其片段融合。包含與完整免疫球蛋白分子融合之額外的抗原結合部份之多專一性抗體分子之實例包括DVD-IgG、DVI-IgG、scFv4-IgG、IgG-scFv及scFv-IgG分子(Spiess等人，2015；圖1)。包含與含CH3域的免疫球蛋白片段融合之額外的抗原結合部份之多專一性抗體分子之實例包括舉例而言，sc雙價抗體(Diabody)-CH3、雙價抗體-CH3及scFv-CH3 KIH(Spiess等人，2015；圖1)。
其他合適的多專一性格式對本技術人員來說是顯而易見的。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件包含一種與第二抗原結合的第二抗原結合位址，其中該第二抗原結合位址較佳為一種CDR-為基的抗原結合位址。CDR-為基的抗原結合位址係一種於抗體可變異區域內之抗原結合位址。CDR-為基的抗原結合位址係由六個CDRs形成；三個輕鏈可變異域(VL)CDRs及三個重鏈可變異域(VH) CDRs。
製備對抗一假定的抗原之抗體分子及此抗體分子之CDR序列之判定，係已建立的且本技藝已知許多合適的技術。CDR序列可舉例而言，依據Kabat等人 ，1991或國際ImMunoGeneTic資訊系統(IMGT) (Lefranc等人 ，2015)來判定。
舉例而言，該專一性結合物件可以為一種mAb2 (TM)雙專一性抗體。一種如本文所述之mAb2 雙專一性抗體為一種IgG免疫球蛋白，其包括一CDR-為基的抗原結合位址於其之各個可變異區域及至少一抗原結合位址於恆定域。在本發明之專一性結合物件呈mAb2 格式的情況下，除了於該專一性結合物件的恆定域內之CD137抗原結合位址之外，該專一性結合物件因而還包含一種CDR-為基的抗原結合位址於其之各個可變異區域。
抗原結合位址的三個VH域CDRs可座落於免疫球蛋白VH域之內且三個VL域CDRs可座落於免疫球蛋白VL域之內。舉例而言，CDR-為基的抗原結合位址可座落於一抗體可變異區域內。
專一性結合物件可以具有一種或較佳一種以上，舉例而言二種，用於第二抗原之CDR-為基的抗原結合位址。專一性結合物件因而可包含一種VH及一種VL域但較佳包含二種VH及二種VL域，即二種VH/VL域對，如天然存在的IgG分子的情況。
於一些較佳的具體例中，專一性結合物件可以為一種免疫球蛋白分子，其包含二個可變異區域，各個可變異區域包含一種用於第二抗原之CDR-為基的抗原結合位址。
於較佳的具體例中，該抗體分子因而為能結合CD137及第二抗原之抗體分子，該抗體分子包含： (i) 座落於該抗體分子的二個CH3域內的二個CD137之抗原結合位址；以及 (ii) 二個用於第二抗原之CDR-為基的抗原結合位址，各者係由一免疫球蛋白VH域及一免疫球蛋白VL域形成。
於更佳的具體例中，抗體為一種完整的免疫球蛋白分子，諸如一種完整的IgG1分子，其結合CD137及第二抗原，該抗體分子包含： (i) 座落於該抗體分子的二個CH3域內的二個CD137之抗原結合位址；以及 (ii) 二個用於第二抗原之CDR-為基的抗原結合位址，各者係由一免疫球蛋白VH域及一免疫球蛋白VL域形成；以及 其中該免疫球蛋白分子進一步包含CH1、CH2及CL域。
CD137活化需要CD137簇集於免疫細胞表面上，諸如T細胞表面，此接而刺激細胞內訊息傳導途徑及免疫細胞活化。專一性結合物件與免疫細胞表面上的CD137結合在缺乏專一性結合物件交聯的情況下，可能不會導致CD137形成團簇且因而可能不會導致免疫細胞活化。
本發明人已證明FS22-53及FS22-172譜系的專一性結合物件在缺乏專一性結合物件交聯的情況下，不會導致T細胞活化(見實施例 5 )。
如上所說明，抗體分子通過結合Fcγ受體之交聯是低效率且無法靶定至特定的位置例如疾病的位址，因整個人體都存在Fcγ受體表現細胞。第二抗原結合位址所結合的第二抗原因而較佳不是Fcγ受體。
於較佳的具體例中，本發明的專一性結合物件因而包含與第二抗原結合的第二抗原結合位址，其中該第二抗原能結合並交聯多重的專一性結合物件。
舉例而言，本發明人已證明在第二抗原為多聚體分子的情況下，該專一性結合物與第二抗原的結合導致或提升T細胞的活化。第二抗原因而較佳為多聚體抗原，例如二聚體、三聚體及更高階的多聚體，且因而能交聯數種專一性結合物。
本發明人也已證明使用CD137/第二抗原mAb2 分子，在第二抗原為表面抗原例如細胞表面抗原的情況下，其可以為單體或多聚體且以高濃度存在及/或簇集於表面諸如細胞表面上，抗體分子與第二抗原的結合導致或提升T細胞的活化。不希望受理論束縛，但認為抗體分子與豐富的細胞表面抗原結合，舉例而言會導致細胞表面結合高濃度的抗體分子，其使抗體分子放置得很接近而足以驅動CD137簇集及免疫細胞活化。於較佳的具體例中，第二抗原因而為一表面抗原，其以高濃度存在於表面上諸如細胞表面上。
一種專一性結合物件亦稱為有條件的促效劑，其包含如本文所述結合第二抗原的第二抗原結合位址，且其只在結合第二抗原時活化免疫細胞，例如T細胞，或其之免疫細胞活化活性在結合第二抗原時會提升。此種在結合第二抗原時之免疫細胞活化活性係獨立於該專一性結合物件與Fcγ受體及/或外部交聯劑之結合，例如蛋白A或G或二級抗體，以及因而該專一性結合物件之有條件的促效劑活性允許靶定至第二抗原存在的位址。舉例而言，在第二抗原為疾病抗原的情況下，該專一性結合物件可於疾病位址而不是個體的其他地方選擇性地活化免疫細胞。
此外，一種只在結合第二抗原時活化免疫細胞，例如T細胞，的專一性結合物件較佳具有增高的免疫細胞活化活性，在與倚賴其他機轉，例如外部交聯劑交聯或經由Fcγ受體交互作用交聯的專一性結合物件相比之下。因為CD137活化是更有效率的，所以相對於其他專一性結合物件，本文所述的專一性結合物件可以以更低濃度來達成免疫細胞活化。
因而，當本發明之專一性結合物件諸如通過結合第二抗原交聯時，該專一性結合物件較佳比該專一性結合物件未交聯時，誘發免疫細胞，例如T細胞更增高的活化。
抗體分子或專一性結合物件活化T細胞的能力可用T細胞活化分析來測量。T細胞於活化時會釋放IL-2。T細胞活化分析因而能測量IL-2釋放來判定由抗體分子或專一性結合物件誘發的T細胞活化位準。
舉例而言，抗體分子或專一性結合物件活化T細胞的能力可藉由測量T細胞活化分析中專一性結合物件或抗體分子交聯時，要求達到T細胞之IL-2半最大釋放的抗體分子或專一性結合物件的濃度。以下稱此為抗體分子或專一性結合物件的EC50 。EC50 較低表示於T細胞活化分析中要達到T細胞之IL-2半最大釋放需要的抗體分子或專一性結合物件的濃度較低，且因而該抗體分子或專一性結合物件具有較高的T細胞活化活性。該專一性結合物件或抗體分子可使用舉例而言，抗CH2抗體予以交聯。
於較佳的具體例中，該抗體分子或專一性結合物件於T細胞活化分析內所具有的EC50 ，為FS22-172-003/HelD1.3(包含LALA突變)於相同分析內之EC50 的10倍、5倍、4倍、3倍或2倍之內，其中FS22-172-003/HelD1.3(包含LALA突變)係由下列組成或包含下列：序列辨識編號：145內列出的重鏈及序列辨識編號：173內列出的輕鏈。
於任擇較佳的具體例中，該抗體分子或專一性結合物件於T細胞活化分析內所具有的EC50 ，為FS22-053-008/HelD1.3(包含LALA突變)於相同分析內之EC50 的10倍、5倍、4倍、3倍或2倍之內，其中FS22-053-008/HelD1.3(包含LALA突變)係由下列組成或包含下列：序列辨識編號：27內列出的重鏈及序列辨識編號：173內列出的輕鏈。
舉例而言，該抗體分子或專一性結合物件於T細胞活化分析內可具有5 nM或更小、4 nM或更小、3 nM或更小、2 nM或更小、1 nM或更小、或0.5 nM或更小的EC50 。
此外，或任擇地，抗體分子或專一性結合物件活化T細胞的能力可藉由測量T細胞活化分析中、於該抗體分子或專一性結合物件存在下，T細胞釋放的最大IL-2的濃度來判定，其中該抗體分子或專一性結合物件為交聯的。
於較佳的具體例中，於T細胞活化分析中、在交聯存在的該抗體分子或專一性結合物件存在下，T細胞釋放的最大IL-2的濃度，為FS22-053-008/HelD1.3(包含LALA突變)或FS22-172-003/HelD1.3(包含LALA突變)存在下，T細胞釋放的最大IL-2的濃度之3倍、2倍或1.5倍之內。
T細胞活化分析可以為如本文所述之T細胞分析，例如本實施例中所述之CD8+T細胞分析，參見例如實施例5.4 。
舉例而言，T細胞活化分析可以為一種以從人類末梢血液單核細胞(PBMCs)單離的CD8+ T細胞為基的IL-2釋放分析。舉例而言，T細胞活化分析可包含從白血球耗乏椎(cones)單離人類PBMCs。單離PBMCs的方法為本技藝已知的且描述於本實施例內。繼而可從PBMCs單離CD8+ T細胞。從PBMCs單離CD8+ T細胞的方法為本技藝已知的且描述於本實施例內。
CD8+ T細胞接而可添加至塗覆抗人類CD3抗體的多孔平盤。可製備各測試抗體分子或專一性結合物件合適的稀釋並添加至孔。T細胞接而可與測試抗體於5% CO2 、37℃下孵育歷時24小時。可收集上清液且予以分析來判定上清液內的IL-2濃度。判定溶液內的IL-2濃度之方法為本技藝已知的且描述於本實施例內。可以繪製人類IL-2濃度相對於抗體分子或專一性結合物件的log濃度的圖。產生的曲線可以使用log(促效劑)相對反應方程式來擬合。
專一性結合物件的第二抗原結合位址所結合的第二抗原可以是免疫細胞抗原或疾病抗原。疾病抗原包括病原性抗原及腫瘤抗原。
專一性結合物件所結合的免疫細胞抗原與CD137可存在於相同的免疫細胞或不同的免疫細胞上。
免疫細胞抗原可以為一種CD137以外的腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)的成員。TNFRSF受體為膜結合的細胞介素受體其包含細胞外富含半胱胺酸域，該域會結合腫瘤壞死因子超家族(TNFSF)的一或多個配體。
TNFRSF受體可座落於免疫細胞表面上。一旦結合TNFRSF配體，TNFRSF受體於免疫細胞表面上形成團簇而活化免疫細胞。舉例而言，配體結合的TNFRSF受體可形成多聚體，例如三聚體，或是多聚體之團簇。配體結合的TNFRSF受體之團簇存在會刺激細胞內訊息傳導途徑而活化免疫細胞。
不希望受理論束縛，但認為透過銜接免疫細胞表面上的CD137及第二TNFRSF受體，專一性結合物件會造成CD137及第二TNFRSF受體二者簇集且活化免疫細胞。換句話說，專一性結合物件當結合二種標靶時將作用為一種TNFRSF受體促效劑。
TNFRSF受體包括CD27、CD40、EDA2R、EDAR、FAS、LTBR、RELT、TNFRSF1A、TNFRSF1B、TNFRSF4、TNFRSF6B、TNFRSF8、TNFRSF10A-10D、TNFRSF11A、TNFRSF11B、TNFRSF12A、TNFRSF13B、TNFRSF13C、TNFRSF14、TNFRSF17、TNFRSF18、TNFRSF19、TNFRSF21及TNFRSF25。
CD27(TNFRSF7：基因ID 939)具有NP_001233.1之參考胺基酸序列且可由NM_001242.4之參考核苷酸序列所編碼。CD40(TNFRSF5：基因ID 958)具有NP_001241.1之參考胺基酸序列且可由NM_001250.5之參考核苷酸序列所編碼。EDA2R(TNFRSF27：基因ID 60401)具有NP_001186616.1之參考胺基酸序列且可由NM_001199687.2之參考核苷酸序列所編碼。EDAR(基因ID 10913)具有NP_071731.1之參考胺基酸序列且可由NM_022336, 3之參考核苷酸序列所編碼。FAS(TNFRSF6：基因ID 355)具有NP_000034.1之參考胺基酸序列且可由NM_000043.5之參考核苷酸序列所編碼。LTBR(TNFRSF3：基因ID 4055)具有NP_001257916.1之參考胺基酸序列且可由NM_001270987.1之參考核苷酸序列所編碼。 RELT(TNFRSF19L：基因ID 84957)具有NP_116260.2之參考胺基酸序列且可由NM_032871.3之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF1A(基因ID 7132)具有NP_001056.1之參考胺基酸序列且可由NM_001065.3之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF1B(基因ID 7133)具有NP_001057.1之參考胺基酸序列且可由NM_001066.2之參考核苷酸序列所編碼。
TNFRSF4(基因ID 7293)具有NP_003318之參考胺基酸序列且可由NM_003327)之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF6B(基因ID 8771)具有NP_003814.1之參考胺基酸序列且可由NM_003823.3之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF8(基因ID 943)具有NP_001234.3之參考胺基酸序列且可由NM_001243.4之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF10A(基因ID 8797)具有NP_003835.3之參考胺基酸序列且可由NM_003844.3之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF10B(基因ID 8795)具有NP_003833.4之參考胺基酸序列且可由NM_003842.4之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF10C(基因ID 8794)具有NP_003832.2之參考胺基酸序列且可由NM_003841.4之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF10D(基因ID 8793)具有NP_003831.2之參考胺基酸序列且可由NM_003840.4之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF11A(基因ID 8792)具有XP_011524547.1之參考胺基酸序列且可由XM_11526245.2之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF11B(基因ID 4982)具有NP_002537.3之參考胺基酸序列且可由NM_002546.3之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF12A(基因ID 51330)具有NP_057723.1之參考胺基酸序列且可由NM_016639.2之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF13B(基因ID 23495)具有NP_0036584.1之參考胺基酸序列且可由NM_012452.2之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF13C(基因ID 115650)具有NP_443177.1之參考胺基酸序列且可由NM_052945.3之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF14(基因ID 8764)具有NP_001284534.1之參考胺基酸序列且可由NM_001297605.1之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF17(基因ID 608)具有NP_001183.2之參考胺基酸序列且可由NM_001192.2之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF18(基因ID 8784)具有NP_004195.2之參考胺基酸序列且可由NM_004186.1之參考核苷酸序列所編碼。TNFRSF19(基因ID 55504)具有NP_001191387.1之參考胺基酸序列且可由NM_001204458.1之參考核苷酸序列所編碼。NFRSF21(基因ID 27242)具有NP_055267.1之參考胺基酸序列且可由NM_014452.4之參考核苷酸序列所編碼。結合至配體TNFSF15 (TL1A)的TNFRSF25(DR3：基因ID 8718)具有NP_001034753.1之參考胺基酸序列且可由NM_001039664.1之參考核苷酸序列所編碼。
任擇地，第二抗原結合位址結合的免疫細胞抗原可以為TNFRSF成員以外、具有免疫系統調控功能之分子，諸如免疫共刺激分子或抑制性查核點分子。此等免疫調節分子之實例包括ICOS(CD278)、LAG3、PD1、PD-L1、PD-L2、B7H3、B7H4、CTLA4、TIGIT、BTLA、HVEM、T細胞免疫球蛋白、含黏蛋白域-3(mucin-domain containing-3) (TIM-3)、CD47、CD73、A2aR、CD200、CD200R、群落刺激因子1受體(CSF-1R)、VISTA CD28、CD80、LLT1、乳醣凝集素9、NKG2A、NKG2D，及KIR。
其上存在免疫細胞抗原的免疫細胞可以屬於任何免疫細胞亞群且可以為T細胞、腫瘤浸潤型白血球(TIL)、骨髓譜系細胞如抗原呈現細胞(APC)、NK細胞及/或B細胞。當免疫細胞抗原為TNFRSF受體時，其上存在TNFRSF受體的免疫細胞較佳為T細胞。
任擇地，第二抗原結合位址可以結合如上所述之疾病抗原。不希望受理論束縛，但認為專一性結合物件與CD137及疾病抗原結合會導致疾病附近的T細胞活化。活化的T細胞繼而可能起始、促進或參與免疫反應，舉例而言對抗病原體或癌細胞的免疫反應。Chen and Mellman (2013)乙文提供免疫系統於辨識及根除癌細胞中扮演的角色之概述。
於較佳的具體例中，疾病抗原為腫瘤抗原。腫瘤抗原為主要存在於腫瘤環境中的抗原，且並非無處不在地存在於個體的其他地方。舉例而言，腫瘤抗原可存在於腫瘤細胞表面或可存在於腫瘤微環境的其他基質細胞或腫瘤附近的生物流體內。腫瘤抗原因而為腫瘤細胞在個體的位置之指標。
在一些具體例中，腫瘤抗原可為座落於癌細胞表面上的抗原。較佳地，腫瘤細胞上的腫瘤抗原為上調或過度表現的，然而來自沒有腫瘤、相同組織的相應正常基質細胞並未大量地表現腫瘤抗原。
在一些具體例中，與沒有腫瘤、相應的正常組織的基質細胞相比，腫瘤微環境的基質細胞上的腫瘤抗原是上調或過度表現的。
較佳的腫瘤抗原存在於細胞表面上且不會被快速內化。
適合該專一性結合物件靶定的腫瘤抗原可使用本技藝已熟知的方法來確認。舉例而言，靶定CD137受體及腫瘤抗原的專一性結合物件可以於一種分析中使用，其係共培養CD137表現細胞與腫瘤抗原表現細胞以及，舉例而言藉由T細胞活化分析、增殖分析或細胞毒性分析來測定CD137表現細胞之活化。
細胞表面腫瘤抗原可能為腫瘤關聯性抗原(TAA)或腫瘤專一性抗原(TSA)。
癌細胞表現的腫瘤抗原可包括，舉例而言，癌生殖細胞系基因編碼的癌睪丸(cancer-testis) (CT)抗原、例如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、GAGE-I、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、BAGE-I、RAGE-1、LB33/MUM-1、PRAME、NAG、MAGE-Xp2 (MAGE-B2)、MAGE-Xp3 (MAGE-B3)、MAGE-Xp4 (MAGE-B4)、MAGE-C1/CT7、MAGE-C2、NY-ESO-I、LAGE-I、SSX-I、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-3、SSX-4、SSX-5、SCP-I及XAGE以及其免疫性片段或變異體(Simpson等人 ，2005；Gure等人 ，2005；Velazquez等人 ，2007；Andrade等人 ，2008；Tinguely等人 ，2008；Napoletano等人 ，2008)。
其他細胞表面腫瘤抗原包括，舉例而言，AFP、αv β3 (玻連蛋白(vitronectin)受體)、αv β6 、B細胞成熟劑(BCMA)、CA125 (MUC16)、CD4、CD20、CD22、CD33、CD52、CD56、CD66e、CD80、CD140b、CD227 (MUC1)、EGFR (HER1)、EpCAM、GD3神經節苷酯、HER2、***特異性膜抗原(PSMA)、***特異性抗原(PSA)、CD5、CD19、CD21、CD25、CD37、CD30、CD33、CD45、HLA-DR、抗個體遺傳型(anti-idiotype)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen) (CEA)，諸如癌胚抗原相關的細胞黏著分子5 (CEACAM5)、TAG-72、葉酸鹽結合蛋白、A33、G250、鐵蛋白、醣脂類如神經節苷酯、醣類如CA-125、IL-2受體、纖維母細胞活化蛋白(FAP)、IGF1R、B7H3、B7H4、PD-L1、CD200、EphA2及間皮素或其變異體。此等及其他細胞表面腫瘤抗原於Carter等人 ，2004；Scott and Renner, 2001；及Cheever等人 ，2009；Tai and Anderson, 2015；及Podojil and Miller, 2017中有描述。
其他的腫瘤抗原包括“受壓力的(stressed)”癌細胞利用的非AUG轉譯起始機轉所產生的框失調(out-of-frame)胜肽-MHC錯合物(peptide-MHC complex) (Malarkannan等人 ，1999)。
其他的腫瘤抗原包括腫瘤細胞或腫瘤微環境的細胞的表面上的胜肽-MHC錯合物，其中胜肽-MHC錯合物包含突變的細胞內腫瘤抗原之腫瘤專一性新抗原胜肽片段的情況下，以及其中胜肽新抗原帶有一或多腫瘤專一性突變(Gubin等人 ，2015)。其他的腫瘤抗原為本技藝熟知的(參見例如WO00/20581；Cancer Vaccines and Immunotherapy (2000) Eds Stern, Beverley and Carroll, Cambridge University Press, Cambridge)。可從公用數據庫很容易地得到此等腫瘤抗原的序列但也可於WO1992/020356 A1、WO1994/005304 A1、WO1994/023031 A1、WO1995/020974 A1、WO1995/023874 A1及WO1996/026214 A1中找到。
較佳的腫瘤抗原包括HER2、FAP、EpCAM、CEACAM5、CD20、CD73、PSMA、間皮素、EphA2、IGF1R、CD200、αv β6 、BCMA、PD-L1、B7H3、B7H4及EGFR。
於更佳的具體例中，腫瘤抗原為間皮素(MSLN)。
於任擇更佳的具體例中，腫瘤抗原為PD-L1。
HER2(ERBB2；基因ID 2064)可具有NP_001005862.1之參考胺基酸序列且可由NM_001005862.2之參考核苷酸序列所編碼。FAP(基因ID 2191)可具有NP_001278736.1之參考胺基酸序列且可由NM_001291807.1之參考核苷酸序列所編碼。EpCAM(基因ID 4072)可具有NP_002345.2之參考胺基酸序列且可由NM_002354.2之參考核苷酸序列所編碼。
CEACAM5(基因ID 1048)可具有NP_001278413.1之參考胺基酸序列且可由NM_001291484.2之參考核苷酸序列所編碼。CD20(MS4A1；基因ID 931)可具有NP_068769.2之參考胺基酸序列且可由NM_021950.3之參考核苷酸序列所編碼。CD73(NT5E；基因ID 4907)可具有NP_001191742.1之參考胺基酸序列且可由NM_001204813.1之參考核苷酸序列所編碼。PSMA(FOLH1；基因ID 2346)可具有NP_001014986.1之參考胺基酸序列且可由NM_001014986.1之參考核苷酸序列所編碼。間皮素(MSLN；基因ID 10232)可具有NP_001170826.1之參考胺基酸序列且可由NM_001177355.2之參考核苷酸序列所編碼。EphA2(基因ID 1969)可具有NP_001316019.1之參考胺基酸序列且可由NM_001329090.1之參考核苷酸序列所編碼。IGF1R(基因ID 3480)可具有NP_000866.1之參考胺基酸序列且可由NM_000875.4之參考核苷酸序列所編碼。CD200(基因ID 4345)可具有NP_001004196.2之參考胺基酸序列且可由NM_001004196.3之參考核苷酸序列所編碼。αv β6 為由整合素次單元αV及整合素次單元β6組成之異質二聚體。整合素次單元αV (ITGAV；基因ID 3685)可具有NP_001138471.1之參考胺基酸序列且可由NM_001144999.2之參考核苷酸序列所編碼。整合素次單元β6(ITGB6；基因ID 3694)可具有NP_000879.2之參考胺基酸序列且可由NM_000888.4之參考核苷酸序列所編碼。BCMA(TNFRSF17；基因ID 608)可具有NP_001183.2之參考胺基酸序列且可由NM_001192.2之參考核苷酸序列所編碼。PD-L1(CD274；基因ID 29126)可具有NP_001254635.1之參考胺基酸序列且可由NM_001267706.1之參考核苷酸序列所編碼。B7H3(CD276；基因ID 80381)可具有NP_001019907.1之參考胺基酸序列且可由NM_001024736.1之參考核苷酸序列所編碼。B7H4(VTCN1；基因ID 79679)可具有NP_001240778.1之參考胺基酸序列且可由NM_001253849.1之參考核苷酸序列所編碼。EGFR(基因ID 1956)可具有NP_001333826.1之參考胺基酸序列且可由NM_001346897.1之參考核苷酸序列所編碼。
在其他的具體例中，腫瘤抗原可以為可溶性腫瘤抗原，舉例而言癌細胞生產或對癌細胞反應而生產的生長因子。於腫瘤附近的生物流體內之可溶性因子可以為上調或過度表現的。可溶性腫瘤抗原可以為多聚體，舉例而言二聚體或三聚體。腫瘤位址或腫瘤微環境內存在的可溶性腫瘤抗原的濃度可能比個體身體的其他地方更高。Bhome等人 (2015)乙文更詳盡地說明腫瘤微環境及相關的可溶性腫瘤抗原。
合適的可溶性腫瘤抗原包括VEGF、HGF、SDF1及TGF-β，諸如TGF-β-1、TGF-β-2、TGF-β-3及TGF-β-4。
VEGF(VEGFA；基因ID 7422)具有NP_001020537.2之參考胺基酸序列且可由NM_001025366.2之參考核苷酸序列所編碼。HGF(基因ID 3082)具有NP_000592.3之參考胺基酸序列且可由NM_000601.5之參考核苷酸序列所編碼。SDF1(CXCL12；基因ID 6387)具有NP_000600.1之參考胺基酸序列且可由NM_000609.6之參考核苷酸序列所編碼。TGF-β-1(TGFB1；基因ID 7040)可具有NP_000651.3之參考胺基酸序列且可由NM_000660.6之參考核苷酸序列所編碼。TGF-β-2(TGFB2；基因ID 7042)可具有NP_001129071.1之參考胺基酸序列且可由NM_001135599.3之參考核苷酸序列所編碼。TGF-β-3(TGFB3；基因ID 7043)可具有NP_001316867.1之參考胺基酸序列且可由NM_001329938.1之參考核苷酸序列所編碼。TGF-β-4(LEFTY2；基因ID 7044)可具有NP_001165896.1之參考胺基酸序列且可由NM_001172425.2之參考核苷酸序列所編碼。
於任擇較佳的具體例中，疾病抗原為病原性抗原。
專一性結合物件活化感染性疾病位置附近的免疫細胞例如T細胞、NK細胞及/或巨噬細胞預料可用於治療感染性疾病。感染性疾病可為急性或持續性感染性疾病但較佳為持續性感染性疾病。
病原性抗原較佳為人類病原體表現的抗原，例如病毒、細菌、真菌或寄生蟲抗原(例如原蟲抗原)，較佳為病毒或細菌抗原。病原性抗原為主要存在於病原體或於感染性疾病位置附近的抗原，且並非無處不在地存在於個體的其他地方。
舉例而言，病原性抗原可以為存在於病毒、細菌、真菌或寄生蟲表面的抗原，或者為病毒、細菌、真菌或寄生蟲表現的可溶性抗原。病毒、細菌、真菌或寄生蟲可以為本文其他地方提及的病毒、細菌、真菌或寄生蟲。
在病原性抗原為可溶性抗原的情況下，該抗原於感染性疾病位置附近的生物流體內可以為上調或過度表現的。舉例而言，感染性疾病位址處或附近存在的可溶性病原性抗原的濃度可能比個體身體的其他地方更高。可溶性病原性抗原可以為多聚體，舉例而言二聚體或三聚體。
適合該專一性結合物件靶定的病原性抗原可使用本技藝已熟知的方法來確認。舉例而言，靶定CD137及病原性抗原的專一性結合物件可以於一種分析中使用，其係共培養CD137表現細胞與病原體或病原性抗原以及舉例而言藉由T細胞活化分析、增殖分析或細胞毒性分析來測定OX40表現細胞之活化。
適合該專一性結合物件靶定的眾多病原性抗原係更為本技藝所知的且熟悉此藝者可依據要治療的感染性疾病來選擇。病毒抗原之實例包括人類免疫不全病毒(HIV)表現的蛋白p24、gp120及gp41、B型肝炎病毒(HBV)表現的B型肝炎表面抗原(HBsAg)、及流行性感冒病毒表現的血球凝集素及神經胺糖酸酶。細菌抗原之實例包括結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)表現的Rv1733、Rv2389及Rv2435n。
該專一性結合物件亦可包含於此所揭示的第一或第二序列、AB CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、Fcab、CDR、VH域、VL域、輕鏈及/或重鏈序列之變異體。可藉由序列改變或突變及篩選的方法來得到合適的變異體。於較佳的具體例中，一種包含一或多變異體序列的專一性結合物件保留親代專一性結合物件的一或多功能特徵，例如CD137之結合專一性及/或結合親和力。舉例而言，一種包含一或多變異體序列的專一性結合物件較佳以如該(親代)專一性結合物件相同的親和力，或比該(親代)專一性結合物件更高的親和力與CD137結合。該親代專一性結合物件為一種專一性結合物件其不含已經併入變異體專一性結合物件內的胺基酸取代、缺失及/或***。
舉例而言，一專一性結合物件可包含一第一、第二或第三序列、AB、CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、Fcab、CDR、VH域、VL域、輕鏈及/或重鏈序列，其與於此所揭示的第一、第二或第三序列、AB、CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、Fcab、CDR、VH域、VL域、輕鏈或重鏈序列，有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件具有或包含一CH3域序列，其與序列辨識編號：21 、30 、48 、102 、75 、39 、57 、66 、84 、93 、175 、139 、130 、148 、121 、157 、165 或112 內列出的CH3域序列，有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性，較佳為至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性。
於另外的較佳具體例中，該專一性結合物件具有或包含一CH2域序列，其與序列辨識編號：5 或6 內列出的CH2域序列，有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性。
於另一具體例中，該專一性結合物件具有一序列、包含一序列或由一序列組成，該序列與序列辨識編號：23 、32 、50 、104 、77 、41 、59 、68 、86 、95 、15 、141 、132 、150 、123 、159 、167 、114 、25 、34 、52 、106 、79 、43 、61 、70 、88 、97 、16 、143 、134 、152 、125 、161 、169 或116 內列出的Fcab序列，有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性。
序列同一性一般係參考演算法GAP(Wisconsin GCG軟體包，Accelerys Inc, San Diego USA)來定義。GAP使用Needleman及Wunsch演算法來排列兩個完整序列，其使得匹配數目最大且間隙數目最小。一般而言，使用預設參數，且空格創造罰分(gap creation penalty)等於12以及空格擴展罰分等於4。使用GAP可能是較佳的，但是也可使用其他的演算法例如BLAST(其使用Altschul等人 (1990)的方法)、FASTA(其使用Pearson and Lipman(1988)的方法)，或Smith-Waterman演算法(Smith and Waterman(1981))，或之前的Altschul等人 (1990)之TBLASTN程式，一般使用預設參數。具體而言，可以使用psi-Blast演算法。
一種專一性結合物件可包含一第一、第二或第三序列、AB、CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、Fcab、CDR、VH域、VL域、輕鏈或重鏈序列，其與於此所揭示的第一、第二或第三序列、AB、CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、Fcab、CDR、VH域、VL域、輕鏈或重鏈序列相比，具有一或多個胺基酸序列改變(加入、缺失、取代及/或***一胺基酸殘基)，較佳20個改變或更少、15個改變或更少、10個改變或更少、5個改變或更少、4個改變或更少、3個改變或更少、2個改變或更少或是1個改變。
於較佳的具體例中，該專一性結合物件可包含一CH3域序列，其與序列辨識編號：21 、30 、48 、102 、75 、39 、57 、66 、84 、93 、175 、139 、130 、148 、121 、157 、165 或112 內列出的CH3域序列相比，具有一或多個胺基酸序列改變(加入、缺失、取代及/或***一胺基酸殘基)，較佳20個改變或更少、15個改變或更少、10個改變或更少、5個改變或更少、4個改變或更少、3個改變或更少、2個改變或更少或是1個改變。
於另外的較佳具體例中，該專一性結合物件可包含一CH2域序列，其與序列辨識編號：5 或6 內列出的CH2域序列相比，具有一或多個胺基酸序列改變(加入、缺失、取代及/或***一胺基酸殘基)，較佳20個改變或更少、15個改變或更少、10個改變或更少、5個改變或更少、4個改變或更少、3個改變或更少、2個改變或更少或是1個改變。
於另外的較佳具體例中，該專一性結合物件包含一序列或由一序列所組成，該序列與序列辨識編號：23 、32 、50 、104 、77 、41 、59 、68 、86 、95 、15 、141 、132 、150 、123 、159 、167 、114 、25 、34 、52 、106 、79 、43 、61 、70 、88 、97 、16 、143 、134 、152 、125 、161 、169 或116 內列出的Fcab序列相比，具有一或多個胺基酸序列改變(加入、缺失、取代及/或***一胺基酸殘基)，較佳40個改變或更少、30個改變或更少、20個改變或更少、15個改變或更少、10個改變或更少、5個改變或更少、4個改變或更少、3個改變或更少、2個改變或更少或是1個改變。
在該專一性結合物件包含於此所揭示的第一序列、AB結構環序列、CH3域、Fcab或重鏈序列之變異體的情況下，該專一性結合物件較佳保留序列PPY於該專一性結合物件之該CH3域的位置11及19之間，較佳為位置15及17之間。此外，該專一性結合物件較佳保留一***，較佳為5個胺基酸***於該專一性結合物件之該CH3域的位置16及17之間。於另外的較佳具體例中，該專一性結合物件較佳保留於該專一性結合物件之該CH3域的位置97及98處的該序列。
具體而言，該專一性結合物件可為(或抗體分子可包含)專一性結合物件FS22-053之變異體，其中該變異體： (i)與於此所揭示的專一性結合物件FS22-053的序列相比，包含一或多個胺基酸序列改變(加入、缺失、取代及/或***一胺基酸殘基)，較佳20個改變或更少、15個改變或更少、10個改變或更少、5個改變或更少、4個改變或更少、3個改變或更少、2個改變或更少或是1個改變；或 (ii) 與於此所揭示的專一性結合物件FS22-053的序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性；及 其中該專一性結合物件或抗體分子包含序列PPY於該專一性結合物件或抗體分子之該CH3域的位置15及17之間，且選擇性地包含5個胺基酸***於位置16及17之間；及 其中該殘基編號係根據IMGT殘基編號方式。
此外，或任擇地，在該專一性結合物件包含於此所揭示的CH3域、CH2及CH3域、Fcab、輕鏈或重鏈序列之變異體的情況下，該變異體較佳不含任何胺基酸改變於座落於專一性結合物件的CH3域之AB、CD及EF結構環的第一、第二及第三序列內。舉例而言，該變異體可能不含任何胺基酸改變於專一性結合物件的CH3域之AB、CD及EF結構環內。
在一或多個胺基酸係由另一個胺基酸取代的較佳具體例中，該等取代可以為舉例而言如下表之保留式取代。在一些具體例中，中間欄位同一類別的胺基酸係彼此取代，即，舉例而言非極性胺基酸係以另一個非極性胺基酸取代。在一些具體例中，最右邊的欄位同一行的胺基酸係彼此取代。
Figure 108124777-A0304-0001
在一些具體例中，取代可以為功能上保留型。亦即，在一些具體例中包含該取代的專一性結合物件的一或多種功能性質(如結合親和力)與等效未經取代的專一性結合物件相比，可能不受該取代影響(或可能不實質影響)。
亦預期一種專一性結合物件，其包含一CD137抗原結合位址座落於該專一性結合物件的恆定域，較佳為CH3域內且其與本發明之專一性結合物件競爭與CD137之結合，或其與如本發明之專一性結合物件結合CD137上相同的表位。用於決定二種專一性結合物件競爭一抗原之方法係本技藝已知。舉例而言，二種專一性結合物件與一抗原結合之競爭能使用表面電漿子共振，諸如Biacore來判定。用於測繪一種專一性結合物件結合的表位之方法同樣為本技藝已知的。
在一些具體例中，該專一性結合物件可以不包含一種CDR-為基的抗原結合位址。
具體而言，該專一性結合物件可以不包含一種結合PD-L1之CDR-為基的抗原結合位址。
此外，或任擇地，該專一性結合物件可以不包含一種結合間皮素(MSLN)之CDR-為基的抗原結合位址。
舉例而言，該專一性結合物件可以不包含一種結合PD-L1或MSLN之CDR-為基的抗原結合位址，其中該專一性結合物件包含座落於專一性結合物件FS22-53-008 或FS22-172-003 的CH3域之AB、CD及EF結構環的第一、第二及第三序列，專一性結合物件FS22-53-008 或FS22-172-003 的CH3域之完整的AB及EF結構環序列，及/或專一性結合物件FS22-53-008 或FS22-172-003 的CH3域序列。
具體而言，該專一性結合物件可以不包含以下列出的FS22-172-003-AA/E12v2及FS22-053-008-AA/E12v2之CDRs、VH及/或VL域，及/或重及/或輕鏈序列。FS22-172-003-AA/E12v2 及FS22-053-008-AA/E12v2 VH 域CDRs HCDR1 (IMGT)     GYPFTSYG HCDR1 (Kabat)      SYGIS HCDR2 (IMGT)     ISAYSGGT HCDR2 (Kabat)      WISAYSGGTNYAQKLQG HCDR3 (IMGT)     ARDLFPTIFGVSYYYY HCDR3 (Kabat)      DLFPTIFGVSYYYYFS22-172-003-AA/E12v2 及FS22-053-008-AA/E12v2 VH 域 EVQLVQSGAEVKRPGASVKVSCKASGYPFTSYG ISWVRQAPGQG LEWMGWISAYSGGT NYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRS DDTAVYYCARDLFPTIFGVSYYYY WGQGTLVTVSSFS22-172-003-AA/E12v2 及FS22-053-008-AA/E12v2 VL 域CDRs LCDR1 (IMGT) QSIGNR LCDR1 (Kabat) RASQSIGNRLA LCDR2 (IMGT) EAS LCDR2 (Kabat) EASTSET LCDR3 (IMGT) QQSYSTPYT LCDR3 (Kabat) QQSYSTPYTFS22-172-003-AA/E12v2 及FS22-053-008-AA/E12v2 VL 域 DIQMTQSPSTLSASVRDRVIITCRASQSIGNR LAWYQHKPGKAPKL LIYEAS TSETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSY STPYT FGQGTKLEIK重鏈FS22-172-003-AA/E12v2 EVQLVQSGAEVKRPGASVKVSCKASGYPFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYSGGTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDLFPTIFGVSYYYYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG輕鏈FS22-172-003-AA/E12v2 DIQMTQSPSTLSASVRDRVIITCRASQSIGNR LA WYQHKPGKAPKLLIY EAS TSET GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSYSTPYT FGQGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC重鏈FS22-053-008-AA/E12v2 EVQLVQSGAEVKRPGASVKVSCKASGYPFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYSGGTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDLFPTIFGVSYYYYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG輕鏈FS22-053-008-AA/E12v2 DIQMTQSPSTLSASVRDRVIITCRASQSIGNR LA WYQHKPGKAPKLLIY EAS TSET GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSYSTPYT FGQGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
此外，或任擇地，該專一性結合物件可以不包含以下列出的抗MSLN抗體FS28-256-271之CDRs及/或VH及/或VL域。FS28-256-271 VH 域 CDRs HCDR1 (AA) (IMGT)                  GFTFTHTY HCDR1 (AA) (Kabat)                  HTYMS HCDR2 (AA) (IMGT)                  ISPTYSTT HCDR2 (AA) Kabat)                   AISPTYSTTNYADSVKG HCDR3 (AA) (IMGT)                  ARYNAYHAALDY HCDR3 (AA) (Kabat)                  YNAYHAALDYFS28-256-271 VH 域 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSSFS28-256-271 VL 域 CDRs LCDR1 (AA) (IMGT)                  QSVSSSY LCDR1 (AA) (Kabat)                  RASQSVSSSYLA LCDR2 (AA) (IMGT)                  GAS LCDR2 (AA) (Kabat)                  GASSRAT LCDR3 (AA) (IMGT)                  QQTVPYPYT LCDR3 (AA) (Kabat)                  QQTVPYPYTFS28-256-271 VL 域 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQTVPYPYT FGQGTKVEIK
該專一性結合物件可以複合至一種生物活性分子或可偵測的標記。在這種情況下，該專一性結合物件可以稱為複合物(conjugate)。此等複合物於治療如本文所述的疾病方面獲得應用。
舉例而言，生物活性分子可以為免疫系統調控劑，例如細胞介素，較佳為人類細胞介素。舉例而言，細胞介素可以為刺激T細胞活化及/或增殖的細胞介素。供用於複合專一性結合物件之細胞介素的實例包括IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21、GM-CSF及IFN-γ。
任擇地，生物活性分子可以為配體陷阱，例如細胞介素，如TGF-β或IL-6之配體陷阱。
可與專一性結合物件複合的合適的可偵測的標記為本技藝已知的且包括放射性同位素，例如碘-125、碘-131、釔-90、銦-111及鎝-99；螢光染料，例如螢光素、玫瑰紅、藻紅素、紅色螢光染劑(Texas Red)及花青染料衍生物例如，Cy7及Alexa750；顯色染料，例如二胺基聯苯胺；乳膠珠；酵素標記如辣根過氧化物酶；磷光體或具光譜隔離吸收或發射特徵之雷射染料；以及化學部分，例如生物素，其能經由結合專一性同源可偵測的部分，例如標記的抗生物素蛋白來偵測。
該專一性結合物件可以經由任何合適的共價或非共價鍵聯，例如雙硫鍵或胜肽鍵，與生物活性分子或可偵測的標記複合。於生物活性分子為細胞介素的情況中，細胞介素可以經由胜肽鍵接子與該專一性結合物件複合。合適的胜肽鍵接子係本技藝已知的且長度可以為5至25、5至20、5至15、10至25、10至20或10至15個胺基酸。
在一些具體例中，生物活性分子可以經由可切割的鏈接子而與該專一性結合物件複合。鏈接子能允許生物活性分子於治療位址從該專一性結合物件釋放。鏈接子可包括醯胺鍵(如胜肽鏈接子)、雙硫鍵或腙。胜肽鏈接子舉例而言可以藉由位址專一性蛋白酶予以切割，雙硫鍵可以藉由胞質液還原環境予以切割以及腙可以藉由酸媒介的水解予以切割。.
複合物可以為一種包含專一性結合物件及生物活性分子之融合蛋白。在這種情況下，生物活性分子可經由胜肽鏈接子或胜肽鍵與專一性結合物件複合。在專一性結合物件是多鏈分子的情況下，諸如專一性結合物件是或包含Fcab或為mAb2 ，生物活性分子可與專一性結合物件之一或多鏈複合。舉例而言，生物活性分子可與mAb2 分子之一或二個重鏈複合。融合蛋白具有容易生產及純化的優點，促進臨床等級的材料之生產。
本發明亦提供編碼本發明之專一性結合物件之經單離的核酸分子或多個核酸分子。使用本技藝眾所周知的方法來製備此核酸分子對於熟悉此藝者沒有困難。
於較佳的具體例中，核酸分子編碼下列專一性結合物件之CH3域：FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 ，較佳為FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 或FS22-172-006 ，更佳為FS22-172-003 、FS22-172-002 或FS22-172-004 ，再更佳為FS22-172-003 。
於任擇較佳的具體例中，核酸分子編碼下列專一性結合物件之CH3域：FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 ，較佳為FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 或FS22-053-014 ，更佳為FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 或FS22-053-017 ，再更佳為FS22-053-008 。
本文中說明此等專一性結合物件之CH3域序列。
舉例而言，一種核酸分子其編碼下列專一性結合物件之CH3域： (i)FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 ，分別列於序列辨識編號：22 、 31 、 49 、 103 、 76 、 40 、 58 、 67 、 85 、 94 及 176 內；或 (ii)FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 ，分別列於序列辨識編號：140 、131 、149 、122 、158 、166 及113 內。
於較佳的具體例中，該核酸分子編碼下列專一性結合物件：FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 ，較佳為FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 或FS22-172-006 ，更佳為FS22-172-003 、FS22-172-002 或FS22-172-004 ，再更佳為FS22-172-003 。
於任擇較佳的具體例中，該核酸分子編碼下列專一性結合物件：FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 ，較佳為FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 或FS22-053-014 ，更佳為FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、 或FS22-053-017 ，再更佳為FS22-053-008 。
舉例而言，一種核酸分子其編碼下列專一性結合物件： (i)FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 ，分別列於序列辨識編號：24 、 33 、 51 、 105 、 78 、 42 、 60 、 69 、 87 、 96 及 177 內；或 (ii)FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 ，分別列於序列辨識編號：142 、133 、151 、124 、160 、168 及115 內。
一種經單離的核酸分子可用來表現本發明之專一性結合物件。一般而言會提供用於表現重組載體的形式之核酸。本發明另外的態樣因而提供包含如上所述的核酸之載體。可挑選或建構合適的載體，包含合適的調節性序列，包括啟動子序列、終止子片段、聚腺苷酸化序列、增強子序列、標記基因及其他合適的序列。較佳地，載體含有合適的調節性序列來驅動核酸於宿主細胞內之表現。載體可為合適的質體、病毒如噬菌體或噬粒(phagemid)。
本文所述之核酸分子或載體可導入宿主細胞內。核酸或載體導入宿主細胞內的技術為本技藝已確立的且可使用任何合適的技術。本技藝已知一系列適合生產重組專一性結合物件的宿主細胞，且包括細菌、酵母、昆蟲或哺乳動物宿主細胞。較佳的宿主細胞為哺乳動物細胞，諸如CHO、NS0或HEK細胞，舉例而言HEK293細胞。最佳的宿主細胞為CHO細胞。
本發明另一態樣提供一種生產本發明專一性結合物件之方法，其包含於宿主細胞內表現編碼該專一性結合物件之核酸及選擇性地單離及/或純化由此生產的專一性結合物件。用於培養宿主細胞之方法為本技藝眾所周知的。該方法可進一步包含單離及/或純化該專一性結合物件。純化重組專一性結合物件的技術為本技藝眾所周知的且包括，諸如HPLC、FPLC或親和力層析法，舉例而言使用蛋白A或蛋白L。在一些具體例中，可利用專一性結合物件上的親和力標籤來執行純化。該方法亦可包含調配該專一性結合物件至一藥學組成物之內，選擇性地加上一藥學上可接受的賦形劑或如以下所述之其他物質。
如上所說明，CD137表現於免疫系統的細胞上，包括CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、Treg細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞、樹突細胞及腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)。具體而言，CD137活化已經證明於提升CD8+ T細胞之增殖、存活及細胞毒性效應子功能上起了作用，以及CD8+ T細胞分化及記憶CD8+ T細胞之維持。 CD137於CD4+ T細胞上表現的位準比CD8+ T細胞更低但是亦被證明涉及誘發一些CD4+ T細胞亞群之增殖及活化。也已經證明CD137之活化會提升NK細胞媒介的ADCC，以及B細胞增殖、存活及細胞介素生產。
有鑒於CD137之免疫反應提升活性，對於CD137促效劑分子於治療癌症以及治療慢性感染方面已經有研究。.
如本文所述之專一性結合物件因而可用於治療應用，特別是癌症治療。此外，預期該專一性結合物件可用於治療感染性疾病，例如持續性感染性疾病。
如本文所述之專一性結合物件因而可用於一種治療人類或動物身體的方法。提供本發明之相關態樣； (i) 本文所述之專一性結合物件供用作為一藥劑， (ii) 本文所述之專一性結合物件供用於一種治療一疾病或障礙的方法， (iii) 本文所述之專一性結合物件於製造一藥劑之用途，該藥劑用於治療一疾病或障礙；以及， (iv) 一種治療一個體的一疾病或障礙的方法，其中該方法包含投予一治療有效量的如本文所述之專一性結合物件至該個體。
個體可以為一患者，較佳為一人類患者。
治療可以是達成一些所欲治療效應之任何治療或療法，舉例而言，抑制或延遲病況的進展，且包括降低進展速度、使進展速度停止、改良病況、病況的冶癒或緩解(不論是部分或全部)、病況的一或多症狀及/或徵象之預防、改良、延遲、緩和或阻止或是延長個體或患者的存活超出沒有治療所預期者。
亦包括治療作為預防措施(即預防(prophylaxis))。舉例而言，疑似或有疾病如癌症發生或復發之風險的個體可如本文所述予以治療。此治療能預防或延遲個體之疾病的發生或復發。
一種如所述之治療方法可包含投予該專一性結合物件以外之至少一另外的治療至該個體。本文所述之專一性結合物件因而可以單獨投予或是組合以一或多其他的治療投予至該個體。在該專一性結合物件組合以另一種治療投予至該個體的情況下，額外的治療可以與該專一性結合物件之投予同時、相繼或分別投予至該個體。在額外的治療與該專一性結合物件同時投予的情況下，該專一性結合物件與額外的治療可以作為一種組合製備物投予至該個體。舉例而言，額外的治療可以為待治療的疾病已知的療法或治療劑。
當專一性結合物件可單獨投予時，專一性結合物件通常會呈藥學組成物形式投予，其可包含該專一性結合物件以外之至少一組分。本發明的另一種態樣因而提供一種藥學組成物，其包含如本文所述之專一性結合物件。亦提供一種包含方法其調配一專一性結合物件至一藥學組成物內。
藥學組成物，除了專一性結合物件之外，可包含一藥學上可接受的賦形劑、載劑、緩衝液、安定劑或本技藝熟悉此藝者眾所周知的其他物質。當使用於本文中，術語“藥學上可接受的”係關於化合物、物質、組成物及/或劑量形式，其在健全的醫學判斷範圍內係適合用於接觸個體(如人類)的組織而沒有過量毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，相稱於合理的利益/風險比率。各載劑、賦形劑等在與調配物的其他成分相容的意義上也必須是“可接受的”。載體或其他物質的確切性質將依投予途徑而定，投予途徑可為經由灌注、注射或任何其他合適的途徑，如下所述。
就非經腸，如皮下或靜脈投予而言，諸如透過注射，包含該專一性結合物件的藥學組成物可呈一種非經腸可接受的水溶液形式，其係無熱原且具有適宜的pH值、等滲透壓性及穩定性。本技藝相關技藝者能使用，舉例而言，等滲透壓性載劑，如氯化鈉注射液、林格氏(Ringer)注射液、乳酸林格氏注射液來製備適宜的溶液。可視需要使用防腐劑、安定劑、緩衝液、抗氧化劑及/或其他添加劑，包括緩衝液例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，例如抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(例如氯化十八烷基二甲基芐基銨；氯化六烴季銨；氯化苯二甲烴銨；氯化本索寧(benzethonium chloride)；酚、丁醇或苯甲醇；羥苯甲酸烷基酯，例如羥苯甲酸甲酯或羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3’-戊醇；及間甲酚)；低分子量多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他醣類包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型界面活性劑，諸如TWEENTM 、PLURONICSTM 或聚乙二醇(PEG)。
在一些具體例中，可提供呈凍乾形式之專一性結合物件供用於在投予前先還原(reconstitution)。舉例而言，凍乾的專一性結合物件可在投予至個體前先以無菌水還原且與食鹽水混合。
可按一“治療有效量”予以投予，此為足以顯示對於個體之益處之量。所投予的實際量及投予速率與時程，將取決於要被治療的病況之性質與嚴重性、所治療的特定個體、個體的臨床狀況、該障礙的肇因、組成物的遞輸部位、專一性結合物件的類型、投予方法、投予日程安排及執業醫師所知的其他因素而定。治療的處方，例如決定劑量等等，係在普通科醫生及其他醫生的責任範圍內，並且可能依所治療疾病的症狀嚴重性及/或進展而定。免疫球蛋白適當的劑量係本技藝眾所周知的(Ledermann等人之 (1991) Int. J. Cancer 47: 659-664；及Bagshawe等人之 (1991) Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4: 915-922)。可使用本文所示的特定劑量或Physician's Desk Reference (2003)中所指出之適合所投予抗體分子的特定劑量。至於抗體分子，可藉由比較其活體外 活性與在動物模式之活體內 活性而判定一專一性結合物件的治療有效量或適宜劑量。用於外推小鼠及其他測試動物之有效劑量至人類的方法係已知的。確切劑量將依數項因子而定，包括待治療區域的大小與位置以及該專一性結合物件的確切性質。
典型的免疫球蛋白劑量供用於全身應用係在100 µg至1 g的範圍內，以及供用於局部應用係在1 µg至1 mg的範圍內。可投予起始較高的速效劑量，接著一或多次較低的劑量。此係成年個體單一治療的劑量，小孩及嬰兒可按比例調整劑量，並且與分子量成比例來調整其他的專一性結合物件格式。
治療可以以每天、每星期二次、每星期或每個月的間隔予以重複，由醫師自行決定。個體的治療時間表可取決於專一性結合物件組成物的藥物動力學及藥效學性質、投予途徑及所治療病況的本質。
治療可以是定期的，且投予之間的期間可為大約二週或更長時間，如大約三週或更長時間，大約四週或更長時間，大約一個月或更長時間一次，大約五週或更長時間，或大約六週或更長時間。舉例而言，治療可以每二至四週或每四至八週。合適的調配物及途徑係如以上所述。
於較佳的具體例中，本文所述之專一性結合物件可用於一種治療癌症的方法。
癌症可特徵在於惡性的癌症細胞之異常增殖。在提及特定類型癌症，諸如乳癌的情況下，此係指相關組織，如***組織的惡性細胞之異常增殖。一種繼發性癌症，其位於***但為另一組織諸如卵巢組織的惡性細胞之異常增殖的結果，本文不會稱為乳癌而是稱為卵巢癌。
癌症可為原發性或繼發性癌症。因而，如本文所述之專一性結合物件可用於一種治療一個體癌症的方法，其中該癌症為原發性腫瘤及/或腫瘤轉移。
使用如本文所述之專一性結合物件要治療的癌症腫瘤可包含表現CD137的TILs，舉例而言於其等之細胞表面上。在一具體例中，該腫瘤可能已經判定為包含表現CD137的TILs。用於判定一種抗原於細胞表面上的表現之方法為本技藝已知的且包括，舉例而言，流動式細胞測量術。
舉例而言，使用如本文所述之專一性結合物件要治療的癌症可選自於下列所組成之群組：白血病，例如急性骨髓白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性類淋巴母細胞白血病(acute lymphoblastoid leukaemia) (ALL)及慢性淋巴球性白血病(CLL)；淋巴瘤，例如何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤及多發性骨髓瘤；及實性癌症，例如肉瘤(如軟組織肉瘤)、皮膚癌(如默克細胞癌(Merkel cell carcinoma))、黑色素瘤、膀胱癌(如泌尿上皮癌)、腦癌(如多形性神經膠質母細胞瘤)、乳癌、子宮/內膜癌、卵巢癌(如卵巢漿液性囊腺腫)、***癌、肺癌(如非小細胞肺癌(NSCLC)及小細胞肺癌(SCLC))、結腸直腸癌(如結腸直腸腺癌)、子宮頸癌(如子宮頸鱗狀細胞癌及子宮頸腺癌)、肝癌(如肝細胞癌)、頭頸部癌(如頭頸部鱗狀細胞癌)、食道癌、胰臟癌、腎癌(如腎臟細胞癌)、腎上腺癌、胃癌、睪丸癌、膽囊及膽道癌(如膽管癌)、甲狀腺癌、胸腺癌(thymus cancer)、骨癌及腦癌。
於較佳的具體例中，使用如本文所述之專一性結合物件要治療的癌症係實性癌症。更佳地，使用如本文所述之專一性結合物件要治療的癌症係選自於下列所組成之群組之實性癌症：肉瘤、黑色素瘤、膀胱癌、腦癌、乳癌、子宮體/內膜癌、卵巢癌、***癌、肺癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、肝癌、頭頸部癌、胰臟癌、腎癌及胃癌。
於癌症的情況中，治療可包括抑制癌症生長，包括完全癌症緩解及/或抑制癌症轉移，以及抑制癌症復發。癌症生長一般係指表示癌症變化的一些指數中的任一者達更發展形式。因而，測量癌症生長抑制的指數包括癌細胞存活減少、腫瘤體積或形態下降(舉例而言，使用電腦斷層(CT)、超音波檢查或其他成像方法來判定)、延遲腫瘤生長、破壞腫瘤血管分佈、改善遲發性過敏反應皮膚測試的表現、增高抗癌免疫細胞的活性或其他抗癌免疫反應，以及減少腫瘤專一性抗原的位準。活化或提升個體對癌性腫瘤之免疫反應可改善個體抵抗癌症生長的能力，特別是個體內已經存在的癌症之生長及/或減少個體內癌症生長的傾向。
於癌症治療的情況中，如本文所述之專一性結合物件可以組合以另一種抗癌療法或治療劑，例如已被證明是合適於或預期是合適於所談論的癌症之治療的抗癌療法或治療劑，投予至該個體。舉例而言，專一性結合物件可以組合以一化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、授受性細胞轉移(ACT)療法(例如授受性NK細胞療法或帶有嵌合抗原受體(CAR)T細胞、自體腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)或γ/δ T細胞之療法或激素療法製劑投予至該個體。
不希望受理論束縛，但認為本文所述之專一性結合物件可以作用為抗癌療法的佐劑。具體而言，一般認為投予該專一性結合物件組合以，舉例而言化學療法及/或放射療法、或組合以抗腫瘤疫苗接種至個體，會觸發比化學療法及/或放射療法、或抗腫瘤疫苗單獨達成的免疫反應更大的對抗癌症免疫反應。
供用於組合如本文所述之專一性結合物件投予的一種或多種化學治療劑可以選自於下列所組成的群組：紫杉烷(taxanes)、胞毒型(cytotoxic)抗生素、酪胺酸激酶抑制劑、PARP抑制劑、B-Raf酵素抑制劑、MEK抑制劑、c-MET抑制劑、VEGFR抑制劑、PDGFR抑制劑、烷化劑、鉑類似物、核苷類似物、抗葉酸劑(antifolate)、沙利竇邁(thalidomide)衍生物、抗惡性腫瘤化學治療劑及其他。紫杉烷包括多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)及nab-紫杉醇；胞毒型抗生素包括放線菌素(actinomycin)、博萊黴素(bleomycin)，及蒽環(anthracyclines)如多柔比星(doxorubicin)、雙羥蒽醌(mitoxantrone)及戊柔比星(valrubicin)；酪胺酸激酶抑制劑包括厄洛替尼(erlotinib)、吉菲替尼(gefitinib)、阿西替尼(axitinib)、PLX3397、伊馬替尼(imatinib)、考比替尼(cobemitinib)及曲美替尼(trametinib)；PARP抑制劑包括尼拉帕尼(piraparib)；B-Raf酵素抑制劑包括維羅非尼(vemurafenib)及達拉菲尼(dabrafenib)；烷化劑包括達卡巴嗪(dacarbazine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)及替莫唑胺(temozolomide)；鉑類似物包括卡鉑(carboplatin)、順鉑(cisplatin)及奥沙利鉑(oxaliplatin)；核苷類似物包括阿扎胞苷(azacitidine)、卡培他濱(capecitabine)、氟達拉濱(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)及吉西他汀(gemcitabine)；抗葉酸劑包括胺甲喋呤(methotrexate)及培美曲塞(pemetrexed)。合適用於本發明之其他的化學治療劑包括地法替尼(defactinib)、恩替諾特(entinostat)、艾日布林(eribulin)、伊立替康(irinotecan)及長春鹼(vinblastine)。
供用和如本文所述之抗體分子一起投予的較佳的治療劑為多柔比星、雙羥蒽醌、環磷醯胺、順鉑、及奥沙利鉑。
供用於組合如本文所述之專一性結合物件投予的放射療法可以為體外放射治療或近接治療。
供用於組合如本文所述之專一性結合物件投予的免疫治療藥物可以為治療抗體分子、核酸細胞介素或細胞介素為基的療法。舉例而言，治療抗體分子可結合免疫調節分子，諸如抑制性查核點分子或免疫共刺激分子或腫瘤抗原，諸如細胞表面腫瘤抗原或可溶性腫瘤抗原。治療抗體分子可結合的免疫調節分子之實例包括CTLA-4、LAG-3、TIGIT、TIM-3、VISTA、PD-L1、PD-1、CD47、CD73、CSF-1R、KIR、CD40、HVEM、IL-10及CSF-1。治療抗體分子可結合的先天性免疫系統的受體之實例包括TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9、似RIG-I受體(例如RIG-I及MDA-5)及STING。治療抗體分子可結合的腫瘤抗原之實例包括HER2、EGFR、CD20及TGF-β。
供用於組合如本文所述之專一性結合物件投予的核酸可以為siRNA。
細胞介素或細胞介素為基的療法可以選自於下列所組成的群組：IL-2、複合的IL2之前驅藥、GM-CSF、IL-7、IL-12、IL-9、IL-15、IL-18、IL-21及第一型干擾素。
癌症治療的抗腫瘤疫苗已在臨床實施且於科學文獻中詳細討論(例如Rosenberg，S. 2000)。此主要涉及激起免疫系統以對自體或同種異體癌症細胞表現的各種細胞標記起反應，其係藉由使用該等細胞作為疫苗接種方法，自體或同種異體癌症細胞二者帶有或不帶有顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)。GM-CSF於抗原呈現激起強大的反應且當與該策略一起使用時運作得特別好。
化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、ACT療法或激素療法製劑較佳為用於所談論的癌症之化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、ACT療法或激素療法製劑，亦即已經證實對治療所談論的癌症有效的化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、ACT療法或激素療法製劑。已經證實對所談論的癌症有效之合適的化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、ACT療法或激素療法製劑之挑選係在本技術人員的能力範圍內。
有鑒於CD137之免疫反應提升活性，預期CD137促效劑分子於治療感染性疾病方面獲得應用。因而，於另一較佳具體例中，如本文所述之抗體分子可用於一種治療一感染性疾病的方法，例如急性或持續性感染性疾病。
不希望受理論束縛，但一般認為CD137促效劑分子可能可以藉由誘發先天性免疫細胞，諸如嗜中性球及單核球之快速浸潤與活化，藉此促進急性感染性疾病肇因的病原體之清除，而提升對病原體引起的急性感染性疾病的免疫反應。因而，於另外的具體例中，如本文所述之抗體分子可用於一種治療一急性感染性疾病的方法，例如急性細菌疾病。於較佳的具體例中，急性感染性疾病為革蘭氏陽性細菌，例如李氏菌 屬(Listeria )細菌、肺炎鏈球菌 或金黃色葡萄球菌 感染引起的急性細菌疾病。
感染性疾病通常由免疫系統清除，但是一些感染會持續很長的時期例如數月或數年，且免疫系統與之戰鬥無效。此等感染亦稱為持續性或慢性感染。
較佳地，使用如本文所述之抗體分子來治療持續性感染性疾病，例如持續性病毒、細菌、真菌或寄生蟲感染，較佳為持續性病毒或細菌感染。
於較佳的具體例中，要用如本文所述之抗體分子來治療的持續性病毒感染為透過下列的持續性感染：人類免疫不全病毒(HIV)、艾司坦氏-巴爾氏病毒(Epstein-Barr virus)、細胞巨大病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒或水痘(Varicella Zoster)病毒。
於較佳的具體例中，要用如本文所述之抗體分子來治療的持續性細菌感染為透過下列的持續性感染：金黃色葡萄球菌、流行性感冒嗜血桿菌 (Hemophilus influenza) 、結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis) 、麻瘋分枝桿菌(Mycobacterium leprae) 、傷寒沙氏桿菌(Salmonella typhi) 、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori) 、梅毒螺旋體(Treponema pallidum) 、或肺炎鏈球菌 。
CD137致效作用已被描述為在治療革蘭氏陽性細菌的感染的情況下是有益的。因而，於較佳的具體例中，要用如本文所述之抗體分子來治療的持續性細菌感染為革蘭氏陽性細菌的持續性感染。於更佳的具體例中，持續性細菌感染為透過選自於下列所組成之群組之革蘭氏陽性細菌的持續性細菌感染：金黃色葡萄球菌、麻瘋分枝桿菌 (Mycobacterium leprae) 及肺炎鏈球菌 。
於較佳的具體例中，要用如本文所述之專一性結合物件來治療的持續性真菌感染為透過下列的持續性感染：念珠菌屬( 如白色念珠菌) 、隱球菌屬( 如格特隱球菌(Cryptococcus gattii) 或 新型隱球菌) 、籃狀菌屬(Talaromyces) ( 青黴菌屬)( 如馬爾尼菲籃狀菌(Talaromyces marneffe)) 、小芽孢菌屬(Microsporum) ( 如奧杜盎小芽孢菌(Microsporum audouinii)) 、 或 匐行疹髮癬菌 。
於較佳的具體例中，要用如本文所述之專一性結合物件來治療的持續性寄生蟲感染為透過下列的持續性感染：瘧原蟲 (Plasmodium) ，例如惡性瘧原蟲 (Plasmodium falciparum) 或是利什曼原蟲屬 ，例如黑熱病利什曼原蟲 (Leishmania donovani) 。
於治療持續性感染性疾病的情況中，治療可包括消除感染、降低個體致病的負荷(pathogenic load)、預防感染復發。舉例而言，治療可包含持續性感染的一或多症狀及/或徵象之預防、改良、延遲、緩和或阻止。任擇地，治療可包括預防感染性疾病。
於治療感染性疾病的情況中，如本文所述之專一性結合物件可以組合以另一種用於治療該感染性疾病的治療劑投予至該個體，例如已被證明是合適於，或預期是合適於所談論的感染性疾病之治療的治療劑。舉例而言，該專一性結合物件可以組合以一免疫治療藥物投予至該個體。供用於組合如本文所述之抗體分子投予的免疫治療藥物可以為治療抗體分子。舉例而言，治療抗體分子可以結合先天性免疫系統的受體。治療抗體分子可結合的先天性免疫系統的受體之實例包括TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9、似RIG-I受體(例如RIG-I及MDA-5)及STING。
在專一性結合物件用於預防感染性疾病的的情況下，該專一性結合物件可以組合以用於所談論的病原體之疫苗投予。不希望受理論束縛，但一般認為如本文所述之專一性結合物件可以作用為疫苗接種的佐劑。具體而言，認為投予該專一性結合物件組合以疫苗至個體，會觸發比疫苗單獨達成更大的免疫反應對抗病原體。
鑑於本揭露內容，包括下列實驗例證在內，本發明另外的態樣與具體例將為本技藝熟悉此藝者所顯而易見者。
本說明書所提及之所有文件係以其等之整體併入以作為參考資料。
於本文所用之“及/或”應視為兩種指定特徵或組分中之每一者具有或不具有另一者之特定揭示內容。舉例而言，“A及/或B”應視為(i)A、(ii)B以及(iii)A及B之每一者的特定揭示內容，如同各者係在本文中個別陳述一樣。
除非上下文另有規定，以上所列特性之說明與定義並不受限於本發明的任一特定態樣或具體例且同樣適用於所述的所有態樣與具體例。
本發明的其他態樣與具體例提供用術語“由…所組成”或術語“實質上由…所組成”來代替術語“包含”之上述之態樣與具體例，除非上下文另有規定。
現在將藉由實施例且參考以上所述之圖式來說明本發明的特定態樣與具體例。實施例 實施例 1 ： 人類、小鼠及食蟹獼猴(cyno)抗原之生產、特徵化及選擇作用1.1 重組抗原
腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)成員係以其等與其等的同源配體結合時會簇集在一起而形成多聚體的傾向而著稱(Croft, M. 2003)。其等的官能性之此種聚集傾向使得生產溶液內不會聚集的可溶性重組蛋白—供用於活體外 選擇作用例如噬菌體及酵母菌展示及選出的蛋白之特徵化—具有挑戰性。
測試數種可購得的重組抗原並且發現由於存在的聚集體位準，多數不適用於此等選擇作用中。於測試的該等之中僅有生物素化、人類分泌的CD137、hFc-融合蛋白(BPS Biosciences，目錄編號71171)，下文稱為‘hCD137-hFc-Avi-BPS’，有足夠低的聚集而適合且用於選擇作用，雖然成功有限(見實施例2)。.
既然認為多數可購得的抗原都不適合，所以在機構內部生產下列重組二聚體及單體CD137抗原(參見表1 )供選擇作用使用：表1
Figure 108124777-A0304-0002
藉由使用EcoRI-HF及BamHI-HF限制酵素以使編碼人類(序列辨識編號：181)或小鼠CD137(序列辨識編號：185)細胞外域的DNA連同Avi序列及六個C端組胺酸殘基選殖至經修飾的pFUSE載體(Invivogen cat no pfuse-mg2afc2)來生產單體抗原。使載體轉染至HEK293-6E細胞(National Research Council of Canada)內，且表現的CD137係使用HisTrap™ excel鎳管柱(HisTrap™ excel nickel column) (GE LifeSciences 29048586)及粒徑篩析層析法(SEC)予以純化以確保抗原為單一物種且不含聚集體。
將編碼融合mIgG2a Fc域之人類、小鼠或食蟹獼猴(cynomolgus)CD137細胞外域、連同Avi序列之DNA建構物選殖至經修飾的pFUSE載體並轉染至HEK293-6E細胞內來生產二聚體抗原。重組CD137係使用MabSelect SuRe™蛋白A管柱(GE Healthcare, 11003494)及粒徑篩析層析法(SEC)予以純化以確保抗原為單一物種且不含聚集體。
使用BirA生物素-生物素蛋白連接酶反應套組(Avidity LLC, BirA500)來生物素化每種二聚體及單體抗原以生產單一生物素分子標記的單體CD137抗原以及二聚體CD137抗原，其係以二個生物素分子標記在二個單體的每一者上。3 mg抗原係與7.8 μl BirA酵素混合物混合成莫耳比率1:50之酵素與基質。繼而根據製造商的建議添加添加劑(142 μl Biomix A、142 μl Biomix B、142 μ生物素)以及使反應混合物於室溫下孵育二小時。反應混合物立即使用Amicon 30 μm濾器(Merck Millipore UFC503096)予以緩衝液交換成DPBS(Life Technologies 14190-169)。
藉由SEC進一步純化蛋白以確保移去BirA酵素以及生產最終高品質的單分散蛋白製備物且沒有高分子量聚集體。更詳細地，同生產批次的材料混合在一起且藉由粒徑篩析高效液相層析法(SE-HPLC)、SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及多角度光散射之粒徑篩析層析法(SEC-MALS)來分析穩定性及純度。以鏈黴抗生物素(streptavidin)-位移SDS-PAGE凝膠來確認蛋白完整的生物素化。重組人類及小鼠抗原係以表面電漿子共振(SPR)來確認活體外 與抗CD137陽性對照抗體(分別為20H4.9(US專利案號7288638))及Lob12.3(南安普敦大學))之結合，以及藉由流動式細胞測量術來確認與表現人類及小鼠CD137配體之DO11.10細胞的結合。細胞以CD137抗原孵育1小時，然後使用螢光標示的抗小鼠Fc片段抗體來偵測細胞結合。重組食蟹獼猴抗原與表現食蟹獼猴CD137配體之DO11.10細胞(National Jewish Health)之結合係如上所述由流動式細胞測量術來確認。為了確認盡可能高純度的材料供用於選擇程序，所以執行透徹的抗原的蛋白特徵化以確認存在的蛋白聚集體不超過2%。1.2 細胞表現的抗原
生產分別表現全長小鼠CD137(序列辨識編號：184)或人類CD137(序列辨識編號：180)的DO11.10細胞(National Jewish Health)，稱為‘DO11.10.mCD137’及‘DO11.10.hCD137’，俾以呈現膜結合構形的抗原，大多數與天然形式相似，供用於選出的Fcabs之選擇作用及進一步特徵化，如表 2 中所列。
使用慢病毒(lentiviral)轉導來產生此等過度表現人類或小鼠CD137受體的DO11.10細胞，其係利用Lenti-X HTX包裝系統(Takara，目錄編號631249)來進行。含編碼人類CD137(序列辨識編號：180)或小鼠CD137(序列辨識編號：184)之cDNA的Lenti-X表現載體(pLVX) (Takara，目錄編號631253)，係與Lenti-X HTX包裝混合物共轉染至Lenti-X 293T細胞株(Takara，目錄編號632180)之內以產生病毒。DO11.10細胞株繼而以此等慢病毒載體予以轉導。
此等細胞上的人類CD137或小鼠CD137之表現係用流動式細胞測量術、分別藉由20H4.9及Lob12.3抗CD137陽性對照抗體與細胞的結合予以確認。細胞與人類或小鼠陽性對照抗體孵育1小時然後使用螢光標示的抗人類Fc偵測抗體(Stratech Scientific Ltd，目錄編號109-546-098-JIR)來偵測細胞結合。
表現食蟹獼猴CD137的DO11.10細胞，稱為‘DO11.10.cCD137’，亦使用相同的慢病毒轉導方法論來產生且用來測試抗人類CD137 Fcabs與食蟹獼猴CD137的交叉反應性。食蟹獼猴CD137之表現係藉由透過如前所述的流動式細胞測量術來判定抗CD137陽性對照抗體(MOR_7480.1，US 2012/0237498 A1)與細胞的結合予以確認。表2
Figure 108124777-A0304-0003
 實施例2 ：抗人類CD137 Fcabs 之初始的選擇
為了找到結合人類CD137的Fcabs，並使辨識出的結合者多樣性達到最大，所以使用酵母菌及噬菌體展示選擇活動二者。既然一些非免疫細胞類型表現的CD137位準很低，所以決定選擇挑選會選擇性地靶定大量表現CD137細胞例如活化的T細胞之抗人類CD137 Fcabs。不希望受理論束縛，但假設是具有低或微不足道的CD137表現位準的細胞會更可能有單體狀態的CD137於其等之細胞表面上，不像活化的T細胞有高度上調的CD137表現，其中多數蛋白預料會以二聚體、三聚體或更高的多聚體狀態存在於細胞表面上。
Fcab選擇係使用過度表現CD137或重組二聚體人類CD137蛋白的細胞，以暴露該等會促進與多聚體CD137高度上調的細胞之結合交互作用的代表性表位。此外，認為使用二聚體抗原來選擇二價Fcabs是有利的，二價Fcabs熱切地結合CD137且保持與標靶的銜接更長時間，而這又假設會促進與CD137的表現位準上調的細胞優先結合。在這種背景下，不會使用單體重組CD137以防止選擇出非常高親和力單價Fcab結合者其與CD137的結合會太強。
選擇策略的目標是要得到會優先結合活化的T細胞且與只展示單體CD137的初始T細胞，或其他表現非常低的CD137位準的細胞不能很好地結合。通過選擇二價結合及相較於單體抗原、會優先結合二聚體及多聚體抗原的CD137 Fcabs，認為會減少可能脫靶的T細胞活化，及伴隨降低的毒性。噬菌體 展示
使用六種展示人類IgG1的CH3域之初始的噬菌體庫以藉由噬菌體展示來進行選擇作用。所有的六種庫都含隨機化的AB環(包含根據IMGT編號位置14-18處之殘基)及隨機化的EF環(包含根據IMGT編號位置92-101處之殘基)。該等庫中的一者包含在EF環的位置101處(***的殘基在根據IMGT編號位置101.4-101.1處)帶有二或四個胺基酸(由二或四個NNK密碼子編碼)***之殖株。
執行總共12次選擇活動以辨識抗人類CD137結合者。於使用六種噬菌體庫之選擇作用中使用機構內部的hCD137-mFc-Avi抗原或商業來源的hCD137-hFc-Avi-BPS抗原及/或DO11.10.hCD137抗原表現細胞。因為從使用hCD137-hFc-Avi-BPS重組抗原之早期選擇作用只有辨識出一種功能性Fcab序列，所以剩下幾輪的重組CD137選擇作用使用機構內部的hCD137-mFc-Avi。起始幾輪係使用100 nM生物素化抗原來執行，加上使用機構內部生產的500 nM未標示的重組人類Fc片段之取消選取步驟。藉由塗覆可鏈黴抗生物素蛋白或中性親和素的磁珠來捕捉噬菌體的結合者。在選擇作用產品藉由噬菌體ELISA來偵測為非專一性結合Fc片段的情況下(A450-630nm高於0.4)，導入進一步的取消選取步驟藉以使(在機構內部生產的)生物素化Fc片段與噬菌體產品一起孵育。藉由磁性捕捉生物素化Fc結合者噬菌體而使非Fc結合者分離。
為了找到與CD137之膜結合天然構形的結合者，執行細胞選擇作用如下：來自重組抗原選擇作用的噬菌體產品係與缺少人類CD137的DO11.10細胞一起孵育以摒棄不想要的結合者，例如與細胞非專一性結合的該等。接著，噬菌體與1 × 107 個DO11.10.hCD137細胞一起孵育，藉由胰蛋白酶消化以溶析結合者然後傳播用於下一輪。第3輪遵循相似的方法，藉由減少DO11.10.hCD137細胞的數目至5 × 106 來增高選擇作用壓力。
各輪選擇作用後執行噬菌體ELISAs以判定抗原專一性噬菌體富集作用。用1 μg/ml生物素化抗原塗覆96孔鏈黴抗生物素平盤過夜。在用4% marvel PBS阻斷平盤之後，添加50 μl含噬菌體的細菌上清液至各孔且於室溫下孵育1小時同時以450 rpm搖動。藉由倒置平盤來丟棄噬菌體溶液且用PBS 0.1%吐溫清洗4次以及用PBS清洗4次。接著添加抗M13噬菌體-HRP複合的抗體來偵測與固定的抗原結合的噬菌體。藉由倒置平盤來丟棄噬菌體溶液且用PBS 0.1%吐溫清洗4次以及用PBS清洗4次。每孔添加TMB微孔過氧化物酶溶液且允許顯色高達30分鐘。用1M硫酸來終止反應，且以微量滴定平盤讀數器讀取OD450-630 。專一性命中者(hits)係定義為該等對重組CD137呈現信號強度比陰性對照，即PBS或陰性非結合者噬菌體例如野生型CH3，所定義的背景更高至少4倍，以及比生物素化重組Fc片段的結合強度更高至少10倍。
來自第2及3輪的細胞選擇作用產品執行噬菌體螢光激發細胞分選(噬菌體FACS)分析。簡言之，2 × 105 個細胞移至圓底微量滴定平盤。添加噬菌體上清液給細胞且於4 ℃下孵育1小時。接著以冰冷的PBS 2%BSA緩衝液清洗細胞二次、再懸浮於100 μl抗M13抗體及FITC複合的山羊抗小鼠IgG F(ab’)片段的溶液內以及於冰上孵育細胞1小時。PBS清洗3次之後以流式細胞儀來分析細胞。於噬菌體FACS方面，專一性命中者係定義為該等與CD137陽性細胞呈現幾何平均螢光強度(MFI)比重組CD137的結合信號更高至少10倍以及比陰性對照(PBS)所定義的背景更高至少4倍。
3230種噬菌體殖株係藉由噬菌體ELISA來篩選與二聚體重組hCD137抗原之結合並使用重組Fc作為陰性對照。1140種噬菌體殖株係藉由噬菌體FACS來篩選與DO11.10.hCD137細胞之專一性結合。個別的命中者繼而予以定序且形成的76種獨特的序列給予一Fcab殖株識別符號並亞選殖至包含HelD1.3 IgG1重鏈表現匣之pTT5表現載體(National Research Council of Canada)內用於表現呈mAb2 格式的Fcab殖株(見實施例3.1)。酵母菌 展示
使用四種展示人類IgG1的CH1至CH3域之初始的酵母菌庫以藉由酵母菌展示來進行選擇作用。所有的四種庫於CH3域都含有隨機化的AB環(包含根據IMGT編號位置14至18處之殘基)及隨機化的EF環(包含根據IMGT編號位置92至101處之殘基)。該等庫中的二者進一步包含五個胺基酸殘基***在CH3域的AB環之位置16處(殘基在根據IMGT編號位置16.5至16.1處)。
於使用四種酵母菌庫之選擇作用中使用機構內部的hCD137-mFc-Avi抗原或商業來源的hCD137-hFc-Avi-BPS抗原，雖然相似於噬菌體選擇作用，但是商業來源的抗原於早期輪次的選擇後便不再使用而是用機構內部的抗原代替。關於各庫，第1輪的選擇作用使用磁性細胞分離(MACS)執行。使庫生長、誘發以及在用1.25 μM未標示的人類或小鼠Fc進行的取消選取步驟後，以250或300 nM生物素化重組抗原孵育1 × 1010 個細胞。藉由添加鏈黴抗生物素蛋白磁珠及使用MACS LS管柱(Miltenyi Biotech 130-042-401)來分離酵母菌結合者。隨後輪次的選擇作用係透過使用螢光標示的抗體來偵測結合的抗原、(抗-生物素-APC(Miltenyi Biotech 130-090-856)、鏈黴抗生物素蛋白-APC(BD Biosciences 349024)或中性親和素-DyLight-488(Thermo Fisher 22832)、正確摺疊的IgG架構(抗人類IgG CH2域-FITC(Biorad AbD Serotec (MCA647F))，或aga2-IgG建構物的表現(anti-Xpress (Life Technologies R91025)，及抗小鼠IgG-FITC(Sigma F2653-.5ML))，藉由螢光激發細胞分選(FACS)於FACS-Aria II儀器(BD Bioscience)上執行。只要可能，抗原標記和結構標記中的一者一起使用以正規化酵母菌表面上的Fcab表現之結合強度信號。使用未染色及對照酵母菌族群來設置分類圈選如下：酵母菌細胞於FSC-A及SSC-A圖，FSC-W及FSC-H圖中以區別單態與多重態或出芽酵母菌細胞，以及FITC-A及APC-A圖以偵測結合Fcab雙重陽性。
各輪使用的抗原濃度係藉由利用先前輪次使用的抗原濃度來執行產品品質控制，而憑經驗來確定。設若結合富集作用比起先前輪次有增高(>5倍)，則抗原濃度下降1：2或1:3，否則便保持不變。亦遵循此方法來確定需要多少輪次的選擇作用以及是否認為選擇作用分支已用盡(設若多樣性下降到只有一些優勢的序列或是抗原結合於2輪後沒有增高)。
從庫選擇作用所辨識的2784種酵母菌單一殖株個別地篩選如下：於每次選擇作用輪次後，單一酵母菌細胞係使用FACS-Aria II(BD Biosciences)器械於SDCAA瓊脂平盤上塗上斑點且以下列流動式細胞測量術抗原結合分析來篩選：使單一殖株的殖株生長直到殖株直徑達到2 mm為止然後移至含600 μl的SDCAA液態培養基的深孔平盤上。培養物於30 ℃下生長且以1000 rpm搖動過夜。aga2-IgG蛋白架構之表現係藉由於光密度1(OD600=1)時、以誘發培養基SGRCAA來代替生長培養基而誘發。細胞以生物素化重組二聚體人類抗原或小鼠Fc片段予以孵育以區別結合重組hCD137抗原的Fc部分之酵母菌殖株。結合任一蛋白的酵母菌細胞係使用鏈黴抗生物素蛋白-APC來標示。也使用抗CH2-FITC抗體作為結構IgG標記。為了分析篩選結果，繪製Fc片段之結合的圖以及摒棄結合生物素化Fc的任何殖株。使用未染色及陰性對照樣本設置的圈選之下，高於0.2%的細胞為APC螢光陽性的定義為結合。
用不同的抗原濃度及條件重複選擇作用，例如增高誘發溫度、減小選擇作用嚴格性或降低輪次的數目俾以增高命中者的數目。命中者定序顯示產品多樣性相當低，且只有辨識出9種Fcab殖株具有獨特的序列：：FS22-053、FS22-172、FS22-173、FS22-174、FS22-175、FS22-176、FS22-177、FS22-178及FS22-179。實施例3 ：來自初始的選擇作用之抗人類CD137 Fcabs 的特徵化 3.1 呈“ 假(mock)”mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs 之製備
生產由IgG1分子組成的“假”mAb2 抗體，其包含從噬菌體單離的76種抗人類CD137 Fcab殖株及從酵母菌選擇單離的9種殖株，以允許呈mAb2 格式的Fcabs之特徵化。該假mAb2 之製備係藉由以Fcabs的CH3域的一部分，包含AB、CD及EF環，取代抗母雞卵白溶菌酶抗體HelD1.3的CH3域的對應區域。HelD1.3抗體的產生係描述於Tello等人之1993乙文內。抗體HelD1.3的重鏈及輕鏈序列係分別顯示於SEQ ID 186及173內。藉由暫時表現於HEK293-6E細胞來生產假mAb2 分子。為了評估生產的蛋白量，使用PALL之Octet QKe平台及蛋白A定量生物感應器(18-5021)、藉由生物層干涉術來定量IgG蛋白含量。蛋白係藉由蛋白A親和力層析法、使用mAb SelectSure管柱予以純化。53種噬菌體衍生的CD137 mAb²蛋白呈現出低於檢測閾的量度且因而判定不適合進一步分析。32種mAb²係使用mAb Select SuRe蛋白A管柱(GE Healthcare, 11003494)予以純化：FS22-005、FS22-007、FS22-033、FS22-042、FS22-049、FS22-050、FS22-052、FS22-053、FS22-054、FS22-167、FS22-169、FS22-170、FS22-171、FS22-172、FS22-173、FS22-174、FS22-175、FS22-176、FS22-177、FS22-178、FS22-179、FS22-180、FS22-181、FS22-183、FS22-184、FS22-186、FS22-187、FS22-191、FS22-192、FS22-193、FS22-194、FS22-195。
為了比較表現位準的目的，亦亞選殖一些早期的Fcabs且表現為可溶性Fcabs(含截斷的鉸鏈)於HEK293-6E細胞內以及使用mAb Select SuRe蛋白A管柱來純化。有趣地，發現一些Fcabs觀察到具有明顯更好的生物物理行為且呈假mAb2 格式的生產產量比可溶性Fcabs更好。初始的殖株FS22-053是那樣的情形，其生產為可溶性Fcab的產量非常低但是當表現為假mAb2 格式時產量改良25倍，導致可得到更多殖株用於特徵化。3.2 依BLI 之重組抗原 結合作用
以單點結合實驗、使用Octet QKe平台、依生物層干涉術來測試純化的假mAb²分子中的31種(排除殖株FS22-175)與人類重組抗原之結合。使用鏈黴抗生物素蛋白BLI生物感應器(PALL 18-5021)來捕捉以10 μg/ml配於動力學緩衝液之生物素化hCD137-mFc-Avi抗原(PALL)。感應器繼而於具有以同樣的動力學緩衝液1:1稀釋之純化的mAb²達的孔內浸240秒，接著於含1×動力學緩衝液的孔內浸240秒。依照高過緩衝液及野生型IgG1對照HelD1.3 mAb(G1/HelD1.3)的BLI反應來定義之簡單布林是/否法則(Boolean yes/no criterion)來分類結合命中者：12種mAb²不結合以及19種結合CD137-塗覆的感應器(FS22-007、FS22-033、FS22-042、FS22-049、FS22-050、FS22-052、FS22-053、FS22-054、FS22-169、FS22-172、FS22-173、FS22-174、FS22-179、FS22-180、FS22-181、FS22-183、FS22-187、FS22-194、FS22-195)。3.3 選出的抗CD137 假mAb2 於人類NF-κB 報告基因分析之活性
多聚合(multimerisation)及簇集對於TNFR訊息傳導是必要的(Bitra等人，2017)。當CD137與其之同源配體，CD137L交互作用時，其會簇集及活化NF-kB訊息傳導途徑。促效劑分子模擬配體驅動CD137之簇集及活化，藉此活化NF-kB訊息傳導途徑。已知一些促效抗體一旦結合便能固有地造成CD137簇集，舉例而言烏瑞魯單抗，然而其他抗體需要抗體自身額外的交聯來誘發CD137簇集，例如烏托米單抗(Fisher等人，2012)。已知效應子細胞上的Fc γ受體於活體內 會誘發此種交聯，雖然此為低效率且可能發生在遠離治療感興趣的位址。既然劑量限制性毒性已經與一些抗CD137抗體的治療有關連，所以決定選擇沒有固有地致效(agonise)的能力之抗CD137結合Fcabs，而只選擇需要額外的交聯俾以誘發CD137簇集之該等。因而，發展一種分析其能偵測到細胞表面上表現的CD137藉由交聯抗體而簇集時之細胞的NF-kB訊息傳導途徑之活化，但是於抗體未交聯時顯現的活性非常小。此分析繼而用於測試呈假mAb2 格式的27種抗CD137 Fcab殖株之促效功能活性，以及呈抗CD20 mAb²格式的6種抗CD137 Fcab殖株，不論依據BLI該等Fcabs是否會結合重組抗原。
於分析中使用蛋白L作為交聯劑以經由其等之Fab部分驅動假mAb2 的交聯且測量NF-κB活化。
編碼人類CD137的cDNA(SEQ ID 180)係使用EcoRI-HF及XhoI限制酵素予以亞選殖至pMSCV-新黴素載體(Takara Clontech, Cat. 634401)之內。使用RetroPack PT67細胞株(Clontech, Cat. 631510)、遵循製造商的程序來生產反轉錄病毒顆粒。此反轉錄病毒隨後用來轉導HEK.FRT.luc細胞，其為以前藉由用含控制螢光素酶表現的NF-κB-敏感型啟動子之Qiagen Cignal Lenti NFkB報告基因(luc) (Qiagen, cat no 336851)慢病毒屬(lentivirus)轉導Flp-In T-REx 293 HEK細胞株(Life Technologies, R780-07)所產生的。使用此等HEK.FRT.luc.hCD137細胞來篩選含選擇作用所辨識的CD137結合者之假mAb²。
以DPBS(Life Technologies, 14190169)製備各種假mAb2 之2 µM稀釋且以報告基因細胞培養基(DMEM(Gibco, Cat. 61965-026)；10% FCS(Gibco, Cat. 10270-106)；1x青黴素鏈黴素(PennStrep)(Gibco, Cat. 15140-122)；殺稻瘟菌素15µg/ml (Melford Laboratories Ltd. Cat. B1105)；嘌呤黴素(puromycin) 5µg/ml(Life technologies, Cat. A11113803)；吉歐黴素100µg/ml (InvivGen, Cat. 11006-33-0)；遺傳黴素(Geneticin)500µg/ml(Life Technologies, Cat. 10131-027)1:3進一步稀釋。使用蛋白L(Life Technologies, 21189)作為人工交聯劑並且以莫耳比率1:4與mAb²分子混合。孵育24小時後，用100µl Promega Bio-Glo™螢光素酶分析試劑(Promega cat no G7941)根據製造商的指示來處理細胞且用平盤讀數器及Gen5軟體，BioTek來測量積分時間0.5秒之發光。發光值為對藉由交聯的Fcabs所誘發的CD137簇集之NF-kB訊息傳導途徑活化作出反應所生產之螢光素酶作為衡量標準。繪製發光值相對於Fcab的log濃度的圖以及產生的曲線係以GraphPad Prism、使用log(促效劑)vs反應方程式來擬合。
當以蛋白L交聯時的螢光素酶信號與未交聯時相比有至少10倍增加，則確認為命中者。判定此等殖株能誘發CD137簇集及隨後活化下游訊息傳導途徑。於所有測試的殖株中，二者於交聯時能誘發螢光素酶10倍增加，FS22-053及FS22-172，雖然無法確定任何一者的EC50。二者均被選出供用於DO11.10 T細胞活化分析予以進一步特徵化。令人驚訝地，剩下的殖株於交聯條件下沒有觀察到活性，儘管依BLI會結合CD137標靶，但也許表示其等結合CD137上不相關的表位，或是此等殖株之親和力不足以足够强烈地結合CD137以起始NF-κB訊息傳導級聯。
總的來說，雖然測試了30種以上的Fcabs，但只有二種Fcabs(FS22-053及FS22-172)係從初始的選擇辨識出的，其等於NF-κB報告基因分析中、當交聯時展現出所欲的功能且當未交聯時的活性非常小。3.4 選出的抗CD137 假mAb2 於DO11.10 T 細胞 活化分析之活性
經由活化的T細胞上的促效劑分子之CD137簇集引發了T細胞活化及下游的訊息傳導，其導致但不限於，IL-2生產。既然確認FS22-053及FS22-172於NFKB報告基因分析中有活性，以T細胞活化分析來測試其等活化CD137的能力。發展一種DO11.10 T細胞活化分析其使用經工程處理以過度表現人類CD137之DO11.10 T細胞以及藉由測量IL-2釋放來評估T細胞活化。
DO11.10 T細胞(National Jewish Health)係用如前所述、設計來過度表現小鼠或人類CD137之慢病毒載體予以轉導。此DO11.10 T細胞活化分析測試下列殖株以及FS22-053及FS22-172：FS22-007、FS22-033、FS22-042、FS22-049、FS22-050、FS22-052、FS22-054、(全部呈“假”HelD1.3 mAb2 格式)。製備有或沒有重組蛋白L(Life Technologies, 21189)交聯劑之mAb2 或20H4.9陽性對照mAb之稀釋，並添加至已經以0.1 µg/ml抗CD3抗體(殖株17A2, BioLegend, 100208)塗覆過夜之96孔圓底平盤內的DO11.10.hCD137細胞。於18小時孵育後，收集上清液且用小鼠IL-2 ELISA套組(eBioscience, 88-7024-86)、遵循製造商的指示予以分析。使用平盤讀數器及Gens軟體，BioTek於450 nm下讀取平盤。450 nm的吸光度值減去570 nm的吸光度值(校正)。根據四參數邏輯曲線擬合(Gens軟體，BioTek)來計算細胞介素濃度的標準曲線。繪製mlL-2濃度vs mAb2 或基準mAb的log濃度的圖以及產生的曲線係以GraphPad Prism、使用log(促效劑)vs反應方程式來擬合。
於此分析中，殖株FS22-053及FS22-172當以蛋白L交聯時顯現出明顯提升的活性。FS22-053於未交聯時的活性為126nM且交聯時的活性為21nM(改進了6倍)，而FS22-172於未交聯時的活性為950nM且交聯時的活性為44nM(改進了22倍)。結果，二種殖株均被選擇供用於親和力成熟。此外，雖然殖株FS22-033於此分析中顯示為沒有活性，但其亦被選擇供用於親和力成熟因認為其很可能於不同的表位結合重組抗原，因為其於BLI結合分析中不與殖株FS22-053及FS22-172競爭結合(資料未顯示)。一般認為該殖株與CD137之結合親和力的改良亦可能導致改良的功能活性(見實施例4.1)。3.5 呈CD137/CD20 mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs 之製備
生產一組抗CD137 Fcabs(FS22-053、FS22-175、FS22-176、FS22-177、FS22-178、FS22-179)以允許生物更相關的mAb2 格式的Fcabs之特徵化。該mAb2 之製備係藉由以Fcab的CH3域的一部分，包含AB、CD及EF環，取代抗CD20 2F2殖株的CH3域之對應區域(來自US 8,529,902 B2)來生產結合CD137與CD20二者的mAb2 。藉由暫時表現於HEK293-6E細胞來生產此等CD137/CD20 mAb2 及使用mAb Select SuRe蛋白A管柱予以純化。3.6 抗CD137/CD20 mAb2 於DO11.10 T 細胞 活化分析之的活性
實施例3.4描述之T細胞活化分析其中抗CD137假mAb²係使用蛋白L交聯。那種設置提供可靠及可再現的方式來篩選相當多的分子，雖然由抗體及mAb2 於交聯時形成的更高階的結構是次優的且不代表生理環境。生物更相關的設置是其中mAb²分子係通過其Fab臂與生物系統內存在的標靶之結合來交聯之一者。此種細胞為基的活體外 系統經由Fab結合細胞膜而使抗體及mAb2 之呈現最佳化，驅動抗體的簇集，此又使CD137 Fcab臂與其於T細胞上的標靶之親和力增高。
CD20+ 達烏地(Daudi)細胞(ATCC CCL-213)係以1:1比率與實施例3.4所用的DO11.10.hCD137細胞一起播種於96孔圓底平盤內。實施例3.5所生產的呈CD137/CD20 mAb²之6個殖株係於此DO11.10 T細胞活化分析中測試。製備有或沒有重組蛋白L(Life Technologies, 21189)交聯劑之mAb2 或陽性對照mAb之稀釋，並添加至已經以0.1 µg/ml抗CD3抗體(殖株17A2, BioLegend, 100208)塗覆過夜之96孔圓底平盤內的DO11.10.hCD137及達烏地細胞。於18小時孵育後，收集上清液且用小鼠IL-2 ELISA套組(eBioscience, 88-7024-86)、遵循製造商的指示予以分析。使用平盤讀數器及Gens軟體，BioTek於450 nm下讀取平盤。450 nm的吸光度值減去570 nm的吸光度值(校正)。根據四參數邏輯曲線擬合(Gens軟體，BioTek)來計算細胞介素濃度的標準曲線。繪製mlL-2濃度vs mAb2 或基準mAb的log濃度的圖以及產生的曲線係以GraphPad Prism、使用log(促效劑)vs反應方程式來擬合。於測試的所有殖株中，FS22-053為此CD20細胞為基的交聯設置中顯示出明顯IL-2生產的唯一一者，且EC50為0.3 nM(及在缺乏CD20+細胞的情况下為126nM)。
實施例3.4及3.6顯示當藉由蛋白L交聯時或是藉由經由Fab與測試的mAb²格式之另一標靶(HelD1.3及CD20)結合的細胞為基交聯時，FS22-053能驅動DO11.10 T細胞表面上的CD137之簇集及活化。實施例4 ：抗人類Fcab 之 親和力成熟
如前所述，親和力成熟選擇了三種殖株，根據其等於NF-κB報告基因分析，DO11.10 T細胞活化分析之功能特徵FS22-053及FS22-172)，或認為是與不同的CD137區域結合(FS22-033)。4.1 FS22-033 之 親和力成熟
從FS22-033殖株建構二種酵母菌及二種噬菌體展示庫，一者係藉由使用ELLA引子來隨機化CH3域之AB環內的五個殘基且另一者係藉由隨機化CH3域之EF環內的五個殘基。ELLA引子詳細指明各胺基酸使用的密碼子及其等於混合物內之相對豐度。只有半胱胺酸被排除在混合物外且任何其他的胺基酸沒有偏差。
關於噬菌體FS22-033 AB及FS22-033 EF庫，親和力成熟的殖株執行二輪選擇作用，第1輪使用200 nM hCD137-mFc-Avi及第2輪使用10 nM hCD137-mFc-Avi。來自各個選擇作用產品之96種殖株係藉由噬菌體ELISA來篩選。此篩選辨識出24種獨特的殖株的(FS22-033-001至FS22-033-024)，全體都生產為含HelD1.3之假mAb²然後如實施例3.2中所述、依BLI來測試改良的結合動力學。於此分析中此等24種親和力成熟的殖株中無一者執行得比親代FS22-033殖株更好以及因而沒有繼續。關於酵母菌FS22-033 AB及FS22-033 EF庫，執行三輪選擇作用如下：第1及2輪用300 nM hCD137-mFc-Avi接著第三輪用300 nM hCD137-mFc-Avi、300 nM食蟹獼猴CD137-mFc-Avi或300 nM hCD137-Avi-his。來自第2及3輪產品的1056種殖株予以定序，所有辨識出的獨特的殖株係使用30 nM人類二聚體重組抗原、以抗原結合流動式細胞測量術分析來篩選與親代FS22-033殖株相比有改良的抗原結合作用，以及殖株係以與結合強度相關的APC+細胞之百分率予以分級。最好的五種殖株(FS22-033-025、FS22-033-026、FS22-033-027、FS22-033-028、FS22-033-029)繼而生產為HelD1.3 mAb²(如實施例3.1中所述)以及如前所述依BLI來測試與人類二聚體重組抗原的結合作用，但是該等殖株中無一者顯現出比親代FS22-033殖株改良的動力學剖析以及因而此等殖株沒有進一步繼續。4.2 FS22-053 及FS22-172 之 親和力成熟
從FS22-053及FS22-172 Fcab殖株建構四種酵母菌展示庫。七個殘基(根據IMGT在位置15-16.1處)係使用ELLA引子，具有如於實施例4.1中所述相同的三核苷酸分布，於各殖株的CH3域之AB環內進行隨機化以製造庫FS22-053 AB及FS22-172 AB。五個殘基(根據IMGT在位置92-94及97-98處)係使用ELLA引子於CH3域之EF環內進行隨機化而產生庫FS22-053 EF及FS22-172 EF。
關於庫FS22-053 AB及FS22-053 EF，以及FS22-172 AB及FS22-172 EF，執行三或四輪酵母菌庫的選擇作用以選出親和力成熟的殖株，其係使用二聚體hCD137-mFc-Avi抗原或單體hCD137-Avi-His抗原。單體抗原與二聚體抗原交替使用以確保殖株保留對抗原的親和力及不會只通過總結合性來結合。使用單體或二聚體抗原，以及各輪期間流動式細胞測量術使用的抗原濃度係憑經驗來確定，其係由先前輪次是否觀察到對單體或二聚體抗原的富集作用來確定。只要可能，使用高於親代的分類圈選來單離與親代分子相比親和力成熟的殖株。選擇作用壓力增高到達1nM的二聚體抗原。於各選擇輪次期間，個別的殖株係於瓊脂平盤上塗上斑點以評估選擇作用的進展。各殖株個別地生長及誘發以及接著使用如前所述生物素化的二聚體抗原及抗CH2結構標記、由流動式細胞測量術來判定其之結合及結構參數。遵循此篩選級聯以允許根據來自選擇作用產品之殖株樣本來判定選擇作用的成功以及允許早期篩選隨後能生產為可溶性蛋白的個別殖株。
以如前所述之抗原結合流動式細胞測量術來篩選總共1152種酵母菌單一殖株與生物素化重組抗原之結合作用。FS22-053 EF庫之選擇作用導致富集138種獨特的環序列。同樣地，從FS22-172 AB庫單離30種獨特的環序列。庫FS22-053 AB及FS22-172 EF不含比起親代殖株顯示出任何結合作用改良的任何殖株。橫跨來自FS22-053 EF及FS22-172 AB庫的最佳結合殖株之序列分析顯示出AB環內保守的PPY序列模式。既然親和力成熟後保留此序列，以及兩個單獨的Fcabs譜系均獨立選出此序列，其對於CD137的表位結合可能很重要。此外，FS22-053及FS22-172譜系二者的殖株之CH3域的EF環內保守的LE或LD序列模式，其暗示著EF環內之此胺基酸部分對於結合改良是必要的。
為了評估選擇作用的進展及是否必須重組親和力成熟殖株之間突變的AB及EF環，所以藉由與10 nM二聚體人類抗原呈現的專一性結合來分級(流動式細胞測量術結合分析中高於30% APC陽性細胞)之來自FS22-053 EF庫的前五種獨特的殖株(FS22-053-008、FS22-053-009、FS22-053-010、FS22-053-011、FS22-053-012)，及來自FS22-172 AB庫的前六種獨特的殖株(FS22-172-001、FS22-172-002、FS22-172-003、FS22-172-004、FS22-172-005、FS22-172-006，全體於相同的分析中以10 nM二聚體人類抗原篩選時都顯示出10%以上的APC陽性細胞)予以生產為假mAb2 (HelD1.3)及模擬mAb2 (PD-L1) mAb²，以評估隨機化環之功能及動力學改良。實施例5 ：呈“ 假”mAb2 格式的親和力成熟抗人類CD137 Fcabs 之 建構、表現及特徵化 5.1 呈“ 假” 及模擬mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs 之 建構
親代FS22-053殖株衍生的16種親和力成熟的殖株(FS22-053-001至FS22-053-016)，以及親代FS22-172殖株衍生的6種殖株(FS22-172-001至FS22-172-006)係製備呈mAb2 格式。殖株FS22-053-001至FS22-053-007沒有進一步繼續因其等之mAb2 格式沒有表現允許下游純化供進一步測試及特徵化的位準。據發現剩下的殖株當與衍生該序列的親代殖株的CH3序列相比，其等之CH3域有至少95%的序列同一性。百分率序列相似性矩陣係藉由比較各胺基酸位置與參考序列(親代殖株FS22-053或FS22-172)的胺基酸位置來產生。(圖1D顯示殖株FS22-053-008至FS22-053-016及FS22-053-017(見實施例10.1)的CH3域與親代FS22-053 CH3域相比的序列同一性百分率。圖1E顯示殖株FS22-172-001至FS22-172-006的CH3域與親代FS22-053 CH3域相比的序列同一性百分率。
製備包含呈HelD1.3之抗人類CD137 Fcabs的“假”mAb2 抗體用於呈mAb²格式之親和力成熟的Fcabs進一步特徵化。此等mAb²係如實施例3.1中所述予以製備。
亦生產包含抗人類CD137 Fcabs還有PD-L1結合Fab區域的模擬mAb²(殖株YW243.55.S70來自US 8,217,149 B2)。其等係以類似實施例3.1中所述的方法予以製備，其係藉由以抗PD-L1結合抗體的CH3域的一部分，包含AB、CD及EF環，取代對應的Fcab區域。此等PD-L1模擬mAb²包含LALA突變於CH2域(AA)。已知導入LALA突變於人類IgG1之CH2域會降低Fcγ受體之結合作用(Bruhns, P.，等人 (2009)及Hezareh M.，等人 (2001))。
藉由暫時表現於HEK293-6E細胞來生產CD137/HelD1.3及CD137-AA/PD-L1 mAb²及使用mAb Select SuRe蛋白A管柱予以純化。5.2 呈假mAb2 格式的人類Fcabs 於人類NF-κB 報告基因細胞分析 之活性
表3 所列出的呈假mAb2 (HelD1.3)格式之親和力成熟的抗人類CD137 Fcabs之功能活性係以實施例3.3中所述的相同的NF-κB螢光素酶分析予以測試。用平盤讀數器及Gen5軟體，BioTek來測量積分時間0.5秒之發光。此分析的結果顯示於表 3 及圖2內。正如所料，在無蛋白L交聯(-XL)下、Fcabs中無一者顯現出活性。所有親和力成熟的CD137 Fcabs顯現出超過親代CD137 Fcabs巨大的改良，而其等雖然於此分析中是陽性的，但計算其等之EC50 值是不可能的(見實施例3.3)。當以蛋白L交聯時(+XL)，FS22-053-008及FS22-172-003顯現出來自每個家族具最低的EC50 之最佳的活性。表3
Figure 108124777-A0304-0004
 N/A-不適用因信號太低不允許判定EC50 5.3 呈模擬mAb2 格式之親和力成熟的人類Fcabs 於人類DO11.10 T 細胞 活化分析之活性
表4 中所列呈模擬mAb2 (PD-L1 LALA)格式之親和力成熟的人類Fcabs之功能活性係以DO11.10 T細胞活化分析，相似於實施例3.6中所述的分析予以測試。
藉由使用KpnI及NotI限制位來使編碼小鼠PD-L1的cDNA(序列辨識編號：188)亞選殖至pcDNA5FRT載體(Life Technologies)內且使用脂質體2000(Life Technologies, 11668-019)使載體轉形至Flp-In T-REx 293細胞株(Life Technologies, R780-07)之內以生產HEK.mPD-L1細胞。細胞係生長於含有10% FBS、100 µg/ml潮黴素B(Melford Laboratories Ltd, Z2475)及15 µg/ml殺稻瘟菌素(Melford Laboratories Ltd, B1105)之DMEM內3-4週直到形成穩定轉形的細胞群落。此等群落係於1 µg/ml多西環素(Sigma Aldrich, D9891)存在下擴大以及使用PE複合的PE複合的抗小鼠PD-L1(MIH5)抗體(BD Biosciences, 558091)來測試PD-L1的表現。
使用細胞解離緩衝液使細胞分離、用PBS清洗一次且於96孔平盤的孔內平盤培養2x105 個細胞然後以1:20 PBS稀釋之抗體於4 ℃下孵育1小時。用PBS清洗細胞一次然後以Accuri C6細胞計數器(BD Biosciences)來測量以及使用FlowJoX來分析數據。再次確認小鼠PD-L1之表現。
實施例5.1所生產的呈CD137/PD-L1 mAb²之15種殖株係於此DO11.10 T細胞活化分析予以測試。製備mAb2 或陽性對照mAb之稀釋，並添加至已經以0.1 µg/ml抗CD3抗體(殖株17A2, BioLegend, 100208)塗覆過夜之96孔平底平盤內的DO11.10.hCD137(每孔7.5x103 個細胞)及HEK.mPD-L1細胞(每孔2x104 個細胞)或DO11.10.hCD137(每孔7.5x103 個細胞)及HEK細胞，其等未經轉導以表現mPD-L1(每孔2x104 個細胞)。於18小時孵育後，收集上清液且用小鼠IL-2 ELISA套組(eBioscience, 88-7024-86)、遵循製造商的指示予以分析。使用平盤讀數器及Gens軟體，BioTek於450 nm下讀取平盤。450 nm的吸光度值減去570 nm的吸光度值(校正)。根據四參數邏輯曲線擬合(Gens軟體，BioTek)來計算細胞介素濃度的標準曲線。繪製mlL-2濃度vs mAb2 或基準mAb的log濃度的圖以及產生的曲線係以GraphPad Prism、使用log(促效劑)vs反應方程式來擬合。藉由測量IL-2釋放來偵測T細胞活化。
此分析的結果顯示於表 4 及圖 3 內。在沒有藉由PD-L1表現細胞結合來交聯(沒有 細胞為基的XL欄)的情況下，觀察到沒有T細胞活性。一旦交聯，如高IL-2釋放位準及次納摩爾EC50 值所示，所有的mAb2 都有有效力的T細胞活性。陽性對照抗人類CD137 mAb，G1-AA/20H4.9，在漸增濃度下顯示出mIL-2釋放增高，然而最大的釋放顯著小於抗人類CD137 Fcabs之最大釋放。FS22-053-009及FS22-172-005之外的所有殖株EC50都小於0.3 nM，如果沒有比陽性對照更好，就是如陽性對照一樣好。觀察到最小的E最大 ，其為最大的T細胞活化之衡量標準及可能與較大的活體內 T細胞抗腫瘤活性相關聯，為7758 pg/ml，其比陽性對照更高。表4
Figure 108124777-A0304-0005
 N/A-不適用因信號太低不允許判定EC50 5.4 初級人類CD8+ T 細胞 活化分析
實施例5.3中證實Fcabs會活化過度表現CD137的HEK細胞上的CD137之活性。需要初級人類T細胞分析以測試Fcabs對於尚未經工程處理以過度表現CD137的細胞之活性。活化的胞毒型CD8+ T細胞負責直接殺死癌細胞且表現CD137於其等之細胞表面上(Ye等人，2014)。已知CD137之簇集對於誘發下游的訊息傳導及進一步CD8+ T細胞活化是不可缺少的。因而用一種CD8+ T細胞活化分析來評估Fcabs(詳情如下之mAb2 格式)驅動CD137簇集及隨後的下游訊息傳導的能力。CD8+ T細胞活化係依IL-2釋放來判定。
為了單離T細胞，從血小板捐贈的副產品，白血球耗乏椎來單離末梢血液單核細胞(PBMCs)。簡言之，用PBS沖洗白血球椎內容物以及覆蓋於菲科爾(Ficoll) (Sigma-Aldrich, 1440-02)梯度上。藉由離心來單離PBMCs以及回收沒有越過菲科爾梯度的細胞。用PBS進一步沖洗PBMCs以及通過添加10 ml 1X 紅血球溶解緩衝液(eBioscience, 00-4300-54)遵循製造商的指示、溶解剩下的紅血球。使用CD8+ T細胞單離套組II(Miltenyi Biotec Ltd, 130-096-495)根據製造商的指示、從沖提劑內存在的PBMCs單離CD8+ T細胞。
使用抗CD3抗體孵育作為驅動起始的T細胞活化之第一信號。以配於PBS之8 µg/ml抗CD3抗體(殖株 UCHT1, R&D Systems, MAB100-SP)於4 ℃下塗覆96孔平底組織培養平盤過夜。繼而用200 µl PBS清洗平盤3次。
關於呈PD-L1模擬mAb2 格式之親和力成熟的人類CD137 Fcabs的細胞為基的交聯，基本上如實施例5.3中所述來生產過度表現hPD-L1的HEK293細胞(HEK.hPD-L1)，但是藉由亞選殖編碼人類PD-L1(序列辨識編號：187)而非小鼠PD-L1的cDNA。HEK.hPD-L1細胞係以每孔2 x 105 個細胞予以平盤培養於抗CD3抗體塗覆的(8µg/ml)96孔平底平盤上、配於100µl T細胞培養基(RPMI培養基(Life Technologies, 61870-044)加上10% FBS (Life Technologies)、1X青黴素鏈黴素(Life Technologies, 15140122)、1mM丙酮酸鈉(Gibco, 11360-070)、10mM Hepes (4-羥乙基哌嗪乙磺酸) (Sigma-Aldrich, H0887)、2mM L-麩醯胺酸(Sigma-Aldrich, G7513)以及50µM 2-巰乙醇(Gibco, M6250))內。一旦於孵育4小時後，HEK.hPD-L1細胞或沒有轉導來表現hPD-L1之HEK細胞已經黏著，便移去全部的T細胞培養基且以含5.0 x 105 個細胞/ml的濃度之T細胞的100µl T細胞培養基代替，其導致5.0 x 104 個細胞/孔。
mAb2 係以500nM開始、2X終濃度以T細胞培養基稀釋以及進行1:3滴定。添加100µl的mAb2 滴定至細胞達200µl的總分析體積及1X濃度的抗體。
陽性對照抗D137抗體(G1-AA/20H4.9)及陰性對照同型IgG抗體(G1-AA/HelD1.3)各自以500nM開始、2X終濃度、以含500nM交聯劑(抗人類CH2，殖株MK1A6(Jefferis等人，1985及Jefferis等人，1992)，在機構內部生產的)的T細胞培養基予以稀釋以及進行1:3滴定。添加100µl稀釋的陽性對照抗體/交聯劑混合物或陰性對照IgG抗體/交聯劑混合物至細胞達總共200µl的分析體積及1X濃度的抗體。
該分析係於5% CO2 、37℃下孵育歷時72小時。收集上清液且用人類IL-2 ELISA Ready-SET-Go!套組(eBioscience, Cat. 88-7025-88)、遵循製造商的指示予以分析。使用平盤讀數器及Gen5軟體，BioTek於450 nm下讀取平盤。450 nm的吸光度值減去630 nm的吸光度值(校正)。根據四參數邏輯曲線擬合(Gen5軟體，BioTek)來計算細胞介素濃度的標準曲線。繪製人類IL-2(hIL-2)濃度vs抗體的log濃度的圖以及產生的曲線係以GraphPad Prism、使用log(促效劑)vs反應方程式來擬合。
表 5 顯示以細胞為基的交聯來測試，於呈PD-L1模擬mAb2 格式之親和力成熟的Fcab殖株存在之下，於T細胞活化分析中觀察到的EC50 值及最大IL-2釋放反應。陽性對照抗人類CD137 mAb，20H4.9，當以抗hCH2抗體交聯時，顯示出hIL-2釋放增高且EC50為0.5nM。此分析中所有殖株都有活性，多數顯示出良好的效能及次納摩爾(sub-nanomolar)EC50s。含Fcabs FS22-053-007、FS22-053-008、FS22-053-010、FS22-053-011、FS22-053-012、FS22-172-003、FS22-172-004、FS22-172-005之mAb2 在0.19-至0.49 nM的範圍內引發最大的T細胞反應及最小的EC50s。亦測試沒有以PD-L1表現的HEK細胞予以交聯的情況下的mAb2 之亞群(含Fcabs FS22-053-008、FS22-053-011、FS22-053-014、FS22-173-003及FS22-172-004)且於此分析中顯示出沒有活性，正如所料。此確認了NF-kB分析及DO11.10 T細胞活化分析中所見的活性。圖4顯示FS22-053-007-AA/PD-L1、FS22-053-008-AA/PD-L1及FS22-172-002-AA/PD-L1、FS22-172-003-AA/PD-L1、FS22-172-004-AA/PD-L1 mAb2 之T細胞活化分析的IL-2釋放代表圖。表 5
Figure 108124777-A0304-0006
 5.5 藉由 表面電漿子共振(SPR) 來判定 抗 人類CD137 Fcabs 之專一性
測試抗人類CD137 Fcabs關於人類CD137與其他相關的TNFSFR家族成員相比之專一性。測試呈假mAb2 (HelD1.3)格式的Fcabs中的8種且透過Biacore T200(GE Healthcare)之SPR來測量、測試與其他人類TNFRSF受體：CD40、OX40與GITR之結合。用胺偶合(胺偶合套組，GE Healthcare, BR-1000-50)塗覆人類CD40、GITR與OX40於Biacore CM5晶片(GE Healthcare, cat no 29149603)達大約1000 RU。以HBS-EP+緩衝液(BR100669)製備以1 μM開始、呈假mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs(FS22-053-008/HelD1.3、FS22-053-009/HelD1.3、FS22-053-010/HelD1.3、FS22-053-011/HelD1.3、FS22-053-012/HelD1.3、FS22-053-014/HelD1.3、FS22-172-003/HelD1.3、FS22-172-004/HelD1.3)之稀釋且以30 µl/min注射3 min，然後允許於緩衝液內解離4 min。以30 µl/min來注射10 mM甘胺酸pH 2.5歷時12 s以再生晶片。利用對不同的TNFRSF成員專一的抗體作為陽性對照以證實Biacore晶片塗覆。數據減去雙重參考且使用BIAevaluation 3.2軟體予以分析。Fcabs沒有結合任何測試的TNFRSF受體，證明其等對於CD137之專一性。結果，不預期Fcabs會引發脫靶的結合。5.6 呈假mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs 對於人類、 食 蟹獼猴及小鼠CD137 、依SPR 之 結合 親和力
抗人類CD137 Fcabs(FS22-053-008、FS22-053-011、FS22-053-014、FS22-172-004、FS22-172-004)對於人類、食蟹獼猴(cynomolgus) (食蟹獼猴(cyno))及小鼠CD137之親和力係依SPR來測量，以判定Fcabs是否可於動物研究中用於測試。一種抗人類Fab捕捉抗體係遵循製造商的建議(GE Healthcare，人類Fab捕捉套組，#28958325)、固定於一種CM5 S系列晶片(GE Healthcare #BR-1005-30)的全部四個流動室達6000 RU之平均表面密度。藉由以30 µl/min注射HBS-EP+緩衝液(GE Healthcare #BR1006-69)稀釋的3 μg/ml mAb²溶液60秒以捕捉各種mAb²達大約150 RU。繼而配於HBS-EP+緩衝液內不同濃度的人類、食蟹獼猴或小鼠CD137抗原(未生物素化的人類、食蟹獼猴或小鼠CD137-mFc-Avi或人類CD137-Avi-His)係以60 μl/min從晶片上面流過3 min然後允許解離10分鐘。於各種的抗原濃度之後，以30 μl/min的流速注射10mM甘胺酸pH 2.1歷時30秒以使晶片再生。於最高濃度的抗原之前及最低濃度的抗原之後注射緩衝液HBS-EP+用於參考扣除(reference subtraction)，以及隨機重複其中一個濃度二次。用1:1朗繆(Langmuir)模型來擬合結合動力學以產生各樣本的平衡結合常數(KD )。用BiaEvaluation軟體3.2版來執行數據分析。結果顯示於表 6 內。
結果分析顯示與各自的親代分子相比之下，所有親和力成熟的殖株和人類及食蟹獼猴CD137二者之結合均有改良。對單體人類CD137抗原之結合親和力比對二聚體人類及食蟹獼猴Fc融合抗原之結合親和力更弱(達至少100倍)。如實施例2中所討論，挑選比起單體形式的CD137會優先結合二聚體CD137之Fcabs而此資料確認了選擇策略是成功的。此動力行為使得其等較不可能與未刺激的T細胞上所表現的最小位準單體CD137結合而導致與一些抗CD137單株抗體療法相關的肝或全身毒性的風險降低。
該資料亦顯示抗人類CD137 Fcabs係以可比得上人類二聚體CD137的親和力與食蟹獼猴二聚體CD137結合。
亦測試Fcabs與小鼠二聚體CD137結合的能力。該等殖株中無一者顯現出比小鼠抗原更強的結合作用(如表 6 中所示，N/A表示無KD 能計算出來)，除了殖株FS22-053-014之外，令人驚訝的發現到其對小鼠抗原有24 nM的KD 。此為出乎意料的因為小鼠CD137和人類CD137共享的序列同源性小於57%。表6
Figure 108124777-A0304-0007
 N/A-不適用因信號太低不允許判定KD 5.7 使用異質二聚體及 同質二聚體Fcabs 之Fcab 結合價的判定
Fcabs通常含有二個同質二聚體Fc鏈及抗原結合位址於CH3域內。因為二個CH3域內的此等抗原結合位址非常接近，所以測試Fcab的結合價以判定該等CH3域是否能彼此獨立地結合CD137。利用旋鈕至孔洞(knob-into-hole)突變(旋鈕:T22W，孔洞T22S L24A Y66V) (Atwell S等人，1997)、藉由組合一個FS22-172-003鏈及一個野生型Fc鏈來建構含一個單一抗原結合CH3域之異質二聚體Fcabs。結果，每個異質二聚體含有來自FS22-172-003的一個CH3(序列辨識編號：139)於一個鏈及一個野生型CH3(序列辨識編號：4)於另一個鏈。製備呈mAb2 格式的Fcabs。
藉由SPR結合分析來比較異質二聚體Fcab與FS22-172-003同質二聚體分子(含2個抗原結合CH3域)。就此實驗而言，比起二聚體CD137抗原，單體人類CD137-mFc-Avi是更偏好的。為了補償實施例 5.6 中所述單體抗原較弱的結合作用，人類CD137-mFc-Avi係以較高密度450 RU固定於CM5晶片上。注射異質-或同質二聚體Fcabs且從固定的抗原上面流過。圖 14 的結果顯示只含一個CD137結合CH3域的異質二聚體Fcab，即使是於次優的條件下還能與抗原結合。觀察到異質二聚體Fcab之解離速率明顯快於同質二聚體Fcab之解離速率。此等結果確認FS22-172-003 Fcab能通過其中一個或兩個CH3域與CD137結合且確認實施例2 中所述的選擇策略是成功的，因Fcab能二價地銜接其標靶。5.8 抗CD137 Fcabs 與具有不同CD137 表現位準 的 細胞 之 結合
如實施例 2 中所述，選擇結合CD137之Fcabs而使其等優先結合CD137表現位準提高的細胞。FS22-172-003之二價及熱切結合係藉由實施例 5.6 之SPR予以確認：FS22-172-003展現出高總結合性(avidity)及更強大的二聚體CD137結合，與單體CD137相比。
如實施例 3.5 中所述來生產一系列表現不同CD137位準的DO11.10細胞。為了判定每種細胞株的CD137相對表現位準，根據製造商的程序(Quantum™ Simply Cellular® #816 Bangs Labs)來判定抗體結合能力(ABC)。按扣除背景後的CD137表現位準來分級每種細胞株：hCD137高(ABC：1,206,283)、hCD137中間(ABC：404,597)、hCD137中間/低(ABC：143,065)、hCD137低(ABC：14,208)、hCD137陰性(ABC：0)。
呈假mAb2 格式的抗人類CD137 Fcab(FS22-172-003-AA/HelD1.3)、陽性對照抗體(G1-AA/20H4.9)或同型對照(G1-AA/HelD1.3)與如上所述的每種細胞之結合測試如下：從T175細胞培養瓶收穫DO11.10細胞且以1200 rpm離心3 min及以2x106 個細胞/ml再懸浮於由DPBS(Life Technologies, 14190169)及1% BSA(Sigma-Aldrich, A7906)組成之冰冷的FACS緩衝液，並且每孔播種50 µl於96孔V底平盤內(Costar, 3894)。所有測試的抗體以FACS緩衝液稀釋於120 µl。DO11.10細胞繼而予以離心，移去上清液及使細胞再懸浮於100 µl每抗體稀釋內並於4 ℃下孵育45 min。用150 µl FACS緩衝液離心二次來清洗細胞，再懸浮於100 µl含以1:1000稀釋於FACS緩衝液之山羊抗人類IgG(γ-鏈專一性) F(ab′)2片段−R-藻紅素抗體(Sigma, P8047)並且於4 ℃下孵育45 min。用150 µl FACS緩衝液一次然後用150 µl DPBS清洗細胞，再懸浮於含1:10.000之DAPI (Biotium, 40043)的150 µl DPBS內且以BDCantoII或iQue(Intellicyt)來讀取。使用FlowJo v10來分析數據以判斷每孔內活細胞的PE之信號的幾何平均。
如圖 15 中所示，與陽性對照G1-AA/20H4.9相比之下，FS22-172-003-AA/HelD1.3與CD137表現較高的細胞結合較強(圖15D ：CD137int及圖15E ：CD137高)，以及不會結合表現非常低位準的CD137之細胞(圖15B ：CD137低及圖15C ：CD137int/低)。相對地，陽性對照G1-AA/20H4.9與二聚體及單體抗原結合更好，且與二聚體或單體抗原之KD 彼此相差10倍以內，不像FS22-172-003-AA/HelD1.3與單體CD137抗原的結合比二聚體抗原更弱200倍，如實施例 5.6 中所述。實施例6 ：抗小鼠CD137 Fcabs 之初始的選擇(Naïve selection)
為了測試抗CD137 Fcabs於活體內 小鼠模式中的活性，所以產出專一性結合小鼠CD137的Fcabs且予以特徵化。噬菌體 展示
先前用於選擇結合人類CD137之Fcabs的六種展示人類IgG1的CH3域之初始的噬菌體庫，係用來選擇結合小鼠CD137之Fcabs，加上使用重組小鼠二聚體CD137或表現全長小鼠CD137的細胞作為抗原。
於使用六種噬菌體庫之選擇作用中使用機構內部的mCD137-mFc-Avi抗原及表現mCD137的DO11.10細胞(DO11.10.mCD137)。遵循簡單的選擇作用方案，其中全部選擇作用輪次(總共三個)係使用100 nM生物素化抗原來執行，加上使用500 nM未標示的重組人類Fc片段之取消選取步驟。藉由鏈黴抗生物素蛋白或中性親和素上塗覆的磁珠來捕捉結合者。此外，DO11.10.mCD137細胞表現小鼠CD137選擇作用亦使用結合重組抗原的第1輪產品。簡言之，噬菌體產品係與缺少小鼠CD137的DO11.10細胞一起孵育以摒棄不想要的結合者，例如與細胞非專一性結合的該等。接著，噬菌體與1 × 107 個DO11.10.mCD137細胞一起孵育。繼而藉由胰蛋白酶消化以溶析結合者然後傳播用於第二輪選擇作用。第3輪遵循相似的方法，藉由減少DO11.10.mCD137細胞的數目至5 × 106 來增高選擇作用壓力。
所有第3輪重組抗原產品(576種殖株)及所有第3輪選擇作用產品(576種殖株)係藉由噬菌體ELISA(如前所述)來篩選以及對於DO11.10.mCD137細胞之細胞結合。關於ELISA，多數殖株呈現高的抗原結合信號強度(OD450 >1)。因而，與小鼠-Fc結合相比顯現出抗原結合之增加小於10倍的殖株便摒棄。關於細胞結合，FITC MFI高於5 × 105 被認為是陽性的。噬菌體庫中的三者之執行得相當糟糕，且許多殖株與DO11.10.mCD137細胞及重組抗原展現出非專一性結合。34個Fcab殖株命中者係如實施例3.1中所述予以亞選殖及生產為HelD1.3 mAb²。酵母菌 展示
先前用於選擇結合人類CD137之Fcabs的四種展示人類IgG1的CH1至CH3域之初始的酵母菌庫，係用來選擇結合小鼠CD137之Fcabs。
執行總共53次單獨輪次的選擇作用來辨識抗小鼠CD137結合者。使用機構內部生產的、重組、二聚體、生物素化小鼠CD137(mCD137-mFc-Avi)抗原以從酵母菌初始庫選擇出結合者。簡言之，藉由初始庫與300 nM重組抗原一起孵育及用2.5 μM未標示的小鼠IgG2a Fc片段進行取消選取來選出第1輪結合者。產品係使用MACS及鏈黴抗生物素蛋白磁珠來分離。分別用300 nM重組抗原及1.5 μM小鼠Fc用於選擇作用及取消選取來執行三輪FACS選擇作用，如實施例2中所述。
來自第2、3及4輪中各輪的單一殖株係於瓊脂平盤上塗上斑點。為了判定產品多樣性，來自各選擇作用產品的至少96種殖株予以定序。126種獨特的殖株(50種殖株來自其中一庫的第3輪，48種殖株來自其中另一庫的第3輪，以及18種殖株來自剩下的庫中之第4輪)係藉由流動式細胞測量術來篩選與重組抗原之結合作用。與重組抗原一起孵育時APC螢光道的陽性細胞顯示出高於10%且與重組mFc一起孵育時小於0.2%之殖株認為是命中者。實施例7 ：來自初始的選擇之 抗 小鼠CD137 Fcabs 之特徵化 7.1 依 BLI 來判定 抗 小鼠CD137 Fcab 之專一性
測試呈HelD1.3“假”mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcabs對於小鼠CD137之專一性且藉由測試Fcabs與其他小鼠TNFRSF受體(CD40、OX40、GITR)之結合、以Octet QKe系統、依BLI進行測量。鏈黴抗生物素生物感測器(PALL ForteBio 18-5021)來塗覆10 ng/μl小鼠CD40、GITR、OX40受體(全部都得自於R&D Systems且使用來自Thermoscientific #21328之EZ-Link Sulfo-NHS-SS-生物素套組予以生物素化)。呈假mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcabs係以動力學緩衝液(PALL 18-1092)1:1稀釋達至少1μM的終濃度。抗原塗覆的感應器在mAb²溶液中浸180秒接著於1 ×動力學緩衝液180秒。使用每種TNFRSF受體的抗體作為陽性對照。Fcab殖株FS22m-055、FS22m-063、FS22m-066、FS22m-075、FS22m-135、FS22m-055、FS22m-063、FS22m-066不與任何測試的TNFRSF受體結合，因而證明其等對於小鼠CD137之專一性。7.2 呈假mAb2 格式的小鼠Fcabs 於小鼠NF-κB 報告基因細胞分析 之活性
遵照如先前於實施例3.3中所述相同的方法論來生產表現小鼠CD137序列(序列辨識編號：184)的HEK.FRT.luc細胞。含有以前選出的抗小鼠CD137 Fcabs之mAb²係使用此細胞株，HEK.FRT.luc.mCD137，根據於實施例3.3中所述的方法來篩選。測試56種mAb2 ，其中29種為NF-kB活性陽性的。使用含有有LALA突變的人類IgG1 Fc的Lob12.3(G1AA/Lob12.3)作為陽性對照抗小鼠CD137 mAb且顯示出發光增加而確認了該分析的效度。HelD1.3，亦含有有LALA突變的人類IgG1 Fc，於此分析中使用作為陰性對照人類IgG同型以從人類IgG假Fab排除干擾。在可能的情況下計算EC50s且忽視活性沒有到達平台區之mAb2 以利於顯示出典型的S形活性動力學之mAb2 。按一旦以蛋白L交聯時之EC50及活性的倍數變化(fold-change)來分級mAb2 。選出FS22m-063，根據其一旦交聯時具有最佳的EC50(1.44nM)以及一旦交聯時活性有最高的倍數變化(27倍)。圖5顯示於HEK mCD137 NF-kB報告基因分析中、以蛋白L交聯時，呈HelD1.3假mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab FS22m-063驅動CD137簇集及NF-kB訊息傳導。實施例8 ：FS22m-063 Fcab( 呈FS22m-063-AA/PD-L1 mAb2 ) 於活體內之抗腫瘤活性
已證明FS22m-063 Fcab能於活體外驅動CD137的簇集及活化，希望測試其等於活體內活化CD137的能力。8.1 製備呈mAb2 格式之FS22m-063 Fcab 用於 小鼠 活體內測試
使用實施例7.1生產模擬mAb2 相似的方法論來製備含抗小鼠CD137 Fcab，FS22m-063及PD-L1專一的Fab區域之mAb2 ，且以MC38同基因小鼠腫瘤模式來測試活體內 抗腫瘤活性。
對照：G1-AA/Lob12.3，G1-AA/S70，G1-AA/4420。
生產活體內 實驗之對照抗體係藉由連結抗PD-L1抗體S70的可變異重區域(殖株YW243.55.S70來自US 8,217,149 B2)與含LALA突變的人類IgG1(G1m17)恆定區域，以及來自S70抗體的可變異輕區域係經由人類κ J-區域與人類恆定區域(Lm1)連結。mAb2 係藉由以FS22m-063取代以上所述經改革的建構物之CH3域來產生且稱為‘FS22m-063-AA/S70’。8.2 FS22m-063-AA/S70 mAb2 於MC38 同基因 腫瘤模式內的活性
同基因小鼠模式被接受為合適用於測試抑制治療標靶之抗腫瘤效應的鼠類系統以及已經廣泛地用於證實人類療法的發展。此實驗使用MC38同基因腫瘤模式，因已知MC38腫瘤為高度免疫性以及對於抗CD137抗體單方療法作出反應(Kocak等人，2006)且表現PD-L1(Juneja等人，2017)。
年齡9-10週大且各自稱重為17.92至23.89 g之C57BL/6雌性小鼠(The Jackson Laboratory)於研究開始前休息一週。所有的動物都被切出微缺口(micro-chipped)且給予獨一無二的識別符號。每群有12隻小鼠。MC38結腸癌細胞株(National Cancer Institute, USA)初步被擴增、儲存，然後預篩選病原體並且證實為無病原體。各動物於右側接受皮下注射配於100µl無血清培養基(改良杜氏依格氏培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium))之1x106 個細胞。腫瘤細胞接種7天後，從研究中去除在此刻沒有腫瘤的小鼠。
FS22m-063-AA/S70 mAb2 及對照抗體(G1-AA/Lob12.3(CD137陽性對照)、G1-AA/S70(陽性對照PD-L1)、G1-AA/4420(同型對照))係以配於DPBS+1mM精胺酸+0.05吐溫80之每劑量20 µg的固定濃度腹膜內注射至小鼠。各小鼠於腫瘤接種後第7、9及11天藉由200 µl腹膜內(IP)注射來接受mAb2 分子或對照抗體。進行準確的腫瘤測量，於討論的合適日子執行任何藥物用劑，以及剩餘的研究期間密切觀察小鼠。用測徑器進行腫瘤體積測量以判定腫瘤的最長軸及最短軸。使用下式來計算腫瘤體積： L X (S2 ) / 2 其中L=最長軸；S=最短軸
如圖6中所示，FS22m-063-AA/S70 mAb2 與任一對照抗體治療的小鼠相比顯示出顯著的腫瘤生長抑制。利用混合模型分析法比較所有組別，在全部研究時間的生長率都顯現出成對統計顯著性。如表 7 中所示，出乎意料地所有FS22m-063-AA/S70 mAb2 治療的小鼠在研究的最後都是無腫瘤的，與抗PD-L1及抗CD137抗體之組合(G1-AA/S70 + G1-AA/Lob12.3)治療的12隻小鼠中只有4隻或是PD-L1或CD137抗體單獨相比。表7 ：MC38 同基因 腫瘤模式中每治療組的無腫瘤 小鼠
Figure 108124777-A0304-0008
研究顯示於具有完全運作的免疫系統的小鼠內，CD137致效作用，據推測是經由PD-L1交聯的後果，想來是由於腫瘤內CD8+ T細胞的胞毒型活性增高而導致腫瘤生長減少。實施例9 ：FS22m-063 Fcab( 呈FS22m-063-AA/PD-1 mAb2 ) 於活體內之抗腫瘤活性
已證明FS22m-063 Fcab能於活體外驅動CD137的簇集及活化，希望測試其等於活體內經由另一Fab標靶，在這種情況下為只存在於免疫細胞上的標靶，PD-1，活化CD137的能力。9.1 製備呈mAb2 格式 之FS22m-063 Fcab 用於 小鼠 活體內測試
使用實施例7.1生產模擬mAb2 相似的方法論來製備含抗小鼠CD137 Fcab、FS22m-063及PD-1專一的Fab區域之mAb2 ，且以MC38同基因小鼠腫瘤模式來測試活體內 抗腫瘤活性。
生產活體內 實驗之對照抗體(G1/Lob12.3，G1-AA/F2，G1-AA/4420)係藉由連結抗PD-1抗體F2的可變異重區域(殖株PD1-F2來自WO 2004/056875 A1)與含LALA突變的人類IgG1(G1m17)恆定區域，以及來自F2抗體的可變異輕區域係經由人類κ J-區域與人類恆定區域(Lm1)連結。mAb2 係藉由以FS22m-063取代以上所述經改革的建構物之CH3域來產生且稱為‘FS22m-063-AA/F2’。9.2 FS22m-063-AA/F2 mAb2 於MC38 同基因 腫瘤模式內的活性
此實驗使用如實施例8.2中所述之MC38同基因腫瘤模式，連同下列偏差： 年齡9-11週大之C57BL/6雌性小鼠(Charles River)被切出微缺口且給予獨一無二的識別符號。每群有12隻小鼠。各動物於右側背側接受皮下注射配於100µl無血清培養基之1x106 個MC38結腸癌細胞。
FS22m-063-AA/F2 mAb2 及對照抗體(G1-AA/Lob12.3(CD137陽性對照)、G1-AA/F2(陽性對照PD-1)、G1-AA/4420(同型對照))係以配於DPBS+1mM精胺酸+0.05吐溫80之每劑量20 µg的固定濃度腹膜內注射至小鼠。各小鼠於第一次劑量後、腫瘤體積達到50-60mm3 (第0天)及第2天及第4天藉由200 µl腹膜內(IP)注射來接受mAb2 分子或對照抗體。如實施例8.2中所述來測量腫瘤。
如圖7A及B中所示，FS22m-063-AA/F2 mAb2 與同型對照抗體陽性對照PD-1抗體治療的小鼠相比顯示出高度顯著的腫瘤生長抑制。如表 8 中所示，出乎意料地以FS22m-063-AA/F2 mAb2 治療的12隻小鼠中的10隻小鼠在研究的最後都是無腫瘤的，與抗PD-1及抗CD137抗體之組合(G1-AA/F2 + G1-AA/Lob12.3)治療的12隻小鼠中只有7隻小鼠相比。表8
Figure 108124777-A0304-0009
研究顯示於具有完全運作的免疫系統的小鼠內，CD137致效作用，據推測是因為經由PD-1銜接而交聯與附加的PD-1阻斷，想來是由於腫瘤內CD8+ T細胞的胞毒型活性增高而導致腫瘤生長減少。
亦證明CD137 Fcabs當呈mAb2 格式時能藉由Fab臂與免疫細胞標靶的結合而交聯，導致CD137的簇集及活化。實施例10 ：mCD137/MSLN mAb2 於活體內之抗腫瘤活性
已證明包含FS22m-063 Fcab及PD-L1 Fab的mAb²(實施例8 )的功效，希望測試呈mAb2 格式的CD137 Fcabs活化CD137的能力，其係透過經由其Fab臂與腫瘤專一性抗原(TSA)，在這種情況下為間皮素(MSLN)，之結合來交聯mAb2 。此一腫瘤靶定的方式預料在使T細胞活化局部化在腫瘤微環境是有利的，因mAb2 的交聯，且因而CD137致效作用，只會在表現MSLN之處發生。
建構一種表現小鼠MSLN的同基因小鼠腫瘤模式。表現全長小鼠間皮素(序列辨識編號：189)的CT26結腸癌細胞(ATCC, CRL-2638)係使用pcDNA3.1載體(+) (Thermo Fisher Scientific，目錄號 V79020)、藉由脂質體轉染(lipofection) (脂質體3000，Thermo Fisher Scientific，目錄號 L3000008)來生產。遵循製造商的程序，CT26細胞係用含小鼠MSLN cDNA的pcDNA3.1載體予以轉染。使用遺傳黴素作為選擇抗生素(以600 μg/ml)於完全培養基(RPMI, 10% FBS)內來達成穩定的轉染。
CT26細胞上的小鼠MSLN之表現係藉由使用陽性對照抗體MOR6626(WO 2009/068204 A1)、透過流動式細胞測量術予以確認。具體而言，細胞以陽性對照抗體孵育1小時然後使用螢光標示的抗人類IgG偵測抗體(Stratech Scientific Ltd，目錄編號109-546-098-JIR)來偵測細胞結合。擴增殖株族群且隨後使用相同的流動式細胞測量術程序來分析以判定相對表現位準，之後選出一種殖株且稱作CT26.G10。
於活體內 確認CT26.G10腫瘤的生長。年齡8-10週大之Balb/c雌性小鼠(Charles River)被切出微缺口且給予獨一無二的識別符號。每群有17隻小鼠且各動物於左側背側接受皮下注射配於100µl無血清培養基之1x105 個細胞。如實施例 8 中所述用測徑器進行腫瘤體積測量每週三次。如實施例 8 中所述根據英國內政部規定來進行研究。
在研究結束時採集組織，以及膜結合的間皮素之表現係由福馬林固定石蠟包埋的(FFPE)腫瘤組織之免疫組織化學染色予以確認如下：使4µm FFPE組織切片脫蠟以及使用低pH 6.1於97℃提取抗原(Dako PT Link)接著過氧化物酶阻斷以及蛋白阻斷然後以1µg/ml濃度的初級抗間皮素抗體(LifeSpan Biosciences，目錄編號LS-C407883)孵育。使用標示的聚合物-HRP抗兔二級試劑及DAB(3,3'-二胺基聯苯胺)顯色終點(Dako EnVision+ System)來偵測抗間皮素抗體。
為了評估Fcab FS22m-063的功效，於活體內 測試下列分子或組合：呈人類IgG1同型有LALA突變的抗MSLN FS28m-228-010抗體(G1-AA/FS28m-228-010)、呈二種“假”mAb2 格式的Fcab(FS22m-063-AA/HelD1.3及FS22m-063-AA/4420)、FS28m-228-010抗體及有LALA突變的假CD137 mAb2 之組合(G1-AA/FS28m-228-010 + FS22m-063-AA/HelD1.3)、人類同型對照抗體(G1-AA/HelD1.3)，以及最終有LALA突變的CD137/MSLN mAb² (FS22m-063-AA/FS28m-228-010)。
年齡8-10週大且各自稱重為20-25 g之Balb/c雌性小鼠(Charles River)於研究開始前適應新環境一週。所有的動物都被切出微缺口且給予獨一無二的識別符號。除了FS22m-063-AA/4420之外(n=10隻小鼠)，每群包含20隻小鼠。CT26.G10結腸癌細胞株被擴增且產生細胞庫。各動物於左側接受皮下注射配於100µl無血清培養基之1x105 個細胞。從研究中去除腫瘤細胞接種12天後沒有腫瘤的任一小鼠。
製備200µg劑量的各抗體(~10mg/kg)且腹膜內(IP)注射至小鼠。此外，FS22m-063-AA/HelD1.3及G1-AA/FS28m-228-010二者各製備每劑量200µg(~10mg/kg)供用於組合組。於腫瘤接種後第12、14及16天(q2dx3)投予200µl劑量給小鼠。使用測徑器進行腫瘤體積測量每週三次並密切監測小鼠。根據腫瘤體積及小鼠的狀況、依人道終點來決定研究終點。
如圖 9 中所示，FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 與G1-AA/HelD1.3同型對照相比顯著地抑制腫瘤生長。表 9 顯示利用混合模型分析法比較所有組別與G1-AA/HelD1.3同型對照，所有治療組在全部研究過程的腫瘤生長率之成對比較。
表9 ：利用混合模型分析法比較所有組別與G1-AA/HelD1.3 同型對照，腫瘤生長之 成對 比較結果。
Figure 108124777-A0304-0010
 NS p≥0.05；* p>0.05；** p>0.01；*** p>0.001；**** p>0.0001
在研究的最後所有測量到等於或低於62.5mm3 患腫瘤的動物都被算作完全反應的動物(參見表 10 )。在研究的最後35%的抗CD137/MSLN mAb2 治療的動物為對治療完全反應者，與G1-AA/HelD1.3同型對照、FS22m-063-AA/HelD1.3、FS22m-063-AA/4420，以及FS22m-063-AA/HelD1.3及G1-AA/FS28m-228-010組合組之0%相比。表10 ：CT26.G10 同基因 腫瘤模式 在研究的最後 無腫瘤 小鼠 的數目及百分率( 腫瘤≤ 62.mm3).
Figure 108124777-A0304-0011
存活分析(圖 10 及表11 )顯示FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 與G1-AA/HelD1.3抗體相比誘發明顯的存活利益，而組分(G1-AA/FS28m-228-010，FS22m-063-AA/HelD1.3)或G1-AA/FS28m-228-010+FS22m-063-AA/4420沒有表現出存活的優點。此外，FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 導致改良的中位數存活時間42.5天，與G1-AA/HelD1.3(29天)、FS22m-063-AA/HelD1.3(30天)、FS22m-063-AA/4420(29天)、G1-AA/FS28m-228-010(30天)以及FS22m-063-AA/HelD1.3加上G1-AA/FS28m-228-010 之組合(29天)相比。表11 ：CT26.G10 同基因 腫瘤模式中用各化合物治療的動物之中位數存活時間，及成對統計分析結果( 對數秩).
Figure 108124777-A0304-0012
 NS p≥0.05；* p>0.05；** p>0.01；*** p>0.001；**** p>0.0001
此等資料暗示經由MSLN之mAb2 交聯能驅動於腫瘤內CD137的致效作用；雙專一性抗體之作用比靶定CD137及/或MSLN單獨(且甚至是組合)更優異，導致患腫瘤的小鼠明顯改良的存活。呈假mAb2 格式的Fcab FS22m-063-AA/HelD1.3或FS22m-063-AA/4420)，沒有任何MSLN靶定Fab，顯示於此研究中沒有内在活性。實施例11 ：獲得能結合鼠類及人類CD137 的Fcab 之選擇作用
既然驚訝的發現一些結合人類CD137的Fcabs亦會結合小鼠CD137的Fcab(見實施例5.5關於結合人類、小鼠及食蟹獼猴CD137之專一性)，所以決定要知道此等殖株是否能改良。11.1 ：定點修飾以移去FS22-053-014 殖株內可能的序列責任 ( sequence liability)
選出小鼠-人類交叉反應性殖株FS22-053-014因為依SPR證實其能結合小鼠二聚體CD137抗原(見實施例5.5)。然而，根據進一步序列分析，其具有可能的序列責任能導致其CH3域的EF環之轉譯後天門冬胺酸異構化，由於Q98D突變與野生型G99位置一起創造一種DG部分。FS22-053譜系內其他親和力成熟的殖株(參見表 12 )反而含有Q98E修飾於EF環內相同的位置。Q98D係使用QuickChange II定點誘變套組(Agilent，目錄編號200523)根據製造商的建議，藉由定點誘變而突變成Q98E，其產出殖株FS22-053-017。以下的表 12 顯示殖株FS22-053-008、FS22-172-003及FS22-172-004之CH3域的EF環內經常發生的LE部分，以及殖株FS22-053-014之CH3域的EF環之DG部分。表12
Figure 108124777-A0304-0013
 實施例12 ： 突變體FS22-053-017 Fcab 殖株 之特徵化 12.1 呈假mAb2 格式的FS22-053-017 Fcab 於人類CD137 DO11.10 T 細胞 活化分析中 之活性
Fcab殖株FS22-053-017係予以亞選殖且表現為HelD1.3“假”mAb2 格式然後以如實施例3.4中所述的人類CD137 DO11.10 T細胞活化分析，與亦呈HelD1.3 mAb²格式之FS22-053-014殖株作比較。使用G1-AA/20H4.9作為抗CD137陽性對照且G1-AA/D1.3作為IgG對照。以沒有蛋白L交聯或1:4比率之蛋白L予以交聯來測試mAb²。表13
Figure 108124777-A0304-0014
 N/A-不適用因信號太低不允許判定EC50
表13 及圖 12 之結果顯示FS22-053-17 Fcab呈假mAb2 格式 FS22-053-014 Fcab呈假mAb2 格式二者於相同的DO11.10 T細胞活化分析中以蛋白L交聯時均有相當的活性。因而進行的突變誘發沒有負面影響功能活性。二種呈假mAb2 格式的殖株在沒有交聯的情況下均沒有活性。
正如所料，陽性對照抗CD137於交聯時有活性且IgG對照沒有活性，不論有無交聯。12.2 呈假mAb2 格式的 突變體FS22-053-017 Fcab 於小鼠CD137 DO11.10 T 細胞 活化分析中 之活性
亦以如實施例3.4中所述之小鼠CD137 DO11.10 T細胞活化分析來比較FS22-053-017殖株(呈HelD1.3假mAb2 格式)對抗鼠類CD137結合Fcab殖株FS22m-063(亦呈HelD1.3假mAb2 格式)，以及親代FS22-053-014殖株(呈HelD1.3假mAb2 格式)。mAb²分子與蛋白L係以莫耳比率4:1(mAb2 :蛋白L)予以交聯。
正如所料，以IL-2釋放來測量，全部測試分子當以蛋白L交聯時證明都有活性但是沒有交聯時沒有活性。經選出與小鼠CD137結合之FS22m-063於分析中、在交聯時具有最好的活性，且EC50為0.39nM。FS22-053-14及FS22-053-017二者於分析中均有活性，表示功能沒有因為突變誘發而損失，雖然FS22-053-017的活性有輕微的損失且EC50比FS22-053-14更差8倍，在以蛋白L交聯時。圖 12 顯示呈HelD1.3假mAb2 格式之親和力成熟的人類及鼠類交叉反應性之CD137 Fcabs FS22-053-014及FS22-053-017，及抗小鼠CD137 Fcab FS22m-063，於DO11.10 T細胞活化分析中當以蛋白L交聯時會活化CD137而導致mIL-2釋放。表14
Figure 108124777-A0304-0015
 N/A-不適用因信號太低不允許判定EC50 12.3 FS22-053-017 之 結合 動力學
Fcab殖株FS22-053-017之平衡解離常數(KD )與殖株FS22-053-014之平衡解離常數係依SPR、於BIAcore T200系統上作比較。hCD137-mFc-Avi抗原使用下列方法：使抗人類Fab分子固定於CM5晶片上達9,000及11,000回應單位(RU)之間的表面密度。以HBS-EP緩衝劑稀釋抗體達4 µg/ml且以30 μl/s之流速、由抗Fab分子來捕捉。使用八種不同濃度的hCD137-mFc抗原：200 nM；66.67 nM；22.22 nM(包括二次)、7.41 nM；2.47 nM；0.82 nM、0.27 nM：0.091(以HBS-EP+緩衝劑稀釋)從捕捉的mAb²上面流過。
關於mCD137-mFc-Avi結合動力學判定，使用不同的方式。小鼠PD-L1-mFc-Avi固定於一種CM5晶片達200 RUs之表面密度。含FS22-053-014及FS22-053-017 Fcabs之mAb²組合以抗小鼠PD-L1 Fab (S70)係以HBS-EP緩衝劑稀釋達7.5 μg/ml以及以60 μl/s之流速、由固定的mPD-L1蛋白來捕捉。使用八種不同濃度的mCD137-mFc抗原：600 nM；200 nM；66.67 nM(包括二次)、22.2 nM；7.1 nM；2.47 nM；0.82 nM(以HBS-EP+緩衝劑稀釋)從捕捉的mAb²上面流過。
用Biacore T200評估軟體來完成數據分析。減去空白流動室的曲線且用有質量轉移之1:1朗繆結合模型來擬合，常數及R最大 設定在局部時將RI設定為零。結果總結於表 15 內且二種Fcab殖株均顯示出與人類抗原非常相似的動力學剖析，藉此證明有使Q98D突變為Q98E對於人類抗原的結合沒有負面效應。對小鼠抗原結合強度下降2倍亦與實施例 11.2 中所示的功能數據一致。表15
Figure 108124777-A0304-0016
 實施例13 ：PPY 於抗原 結合之涉入( 保守 的PPY 部分之丙胺酸掃描)
如實施例 5 中所述，二種獨立地選出的Fcabs之AB環內辨識出PPY序列部分，且此部分於所分析的全部親和力成熟的殖株內都是保守的。因而希望理解此部分於結合CD137及總體蛋白結構之涉入。丙胺酸掃描是一種普通的生物技術用於判定一特定的殘基於蛋白-蛋白交互作用的重要性。簡言之，三個胺基酸中的每一個依次然後一齊以丙胺酸殘基取代。丙胺酸被認為是化學上最惰性的、非龐大的殘基且因而認為不太可能幫助結合。13.1 生產 突變體 殖株用於丙胺酸掃描
突變體殖株係藉由親代殖株(FS22-172-003及FS22-053-008)之定點誘變生產。AB環內之胺基酸取代的位置係總結於表 16 內，所有其他的殘基都保留其等之各自的親代。mAb變異體繼而如實施例 3 中所述暫時地表現於HEK293-6E細胞並使用mAb Select SuRe蛋白A管柱予以純化。突變體的表現產量與親代相似且此因而暗示丙胺酸取代對於蛋白生產沒有效應。表16
Figure 108124777-A0304-0017
 13.2 突變體 殖株之結合動力學
2種親代殖株及8種突變體殖株的結合動力學使用來自ForteBio的Octet Qke 系統作比較。二聚體生物素化的hCD137-mFc-Avi係以10ug/ml被捕捉於鏈黴抗生物素蛋白的感應器上然後分析其與濃度200nM的各mAb²之交互作用。所有的FS22-172-003突變體殖株當與親代殖株相比時，mAb²與二聚體抗原的結合是受損的，且殖株FS22-172-003_AAA，及FS22-172-003_APY損失所有的結合，以及殖株FS22-172-003_PPA，及FS22-172-003_PAY保留一些結合雖然與親代相比之下顯著減少(5.5及4.4倍更低的回應單位)。FS22-053-008的結合亦受影響，且變異體PAY及AAA損失所有的結合，以及變異體APY及PPA顯示出減少與抗原的結合並減緩締合剖析，當與親代FS22-053-008殖株相比時。此數據暗示該PPY部分對於mAb²與CD137抗原二者的結合作用都很重要。13.3 同源模擬法
鑒於該PPY部分涉及結合作用，所以電腦模擬 來模擬Fcabs以評估CH3域的蛋白質結構預測會提供豐富的信息。使用2019.0101版的MOE軟體套(Chemical Computing Group ULC)來執行結構同源模擬法及隨後的構形搜索。使用蛋白質資料庫[PDB]結構5JII的Fc區域作為FS22-172-003及FS22-053-008二者的Fcab區域之結構模板。既然關於選出的結構模板存在***於AB及EF環區域內，所以應用重生 (de novo) 環搜索及殘基支鏈最佳化來產生AB及EF環結構。產生的同源模擬係根據幾何準則包括主幹鍵長、角度、二面角及掌性，使能量最小化及評分。分數通過準則的結構同源模擬使用作為構形打樣(conformational sampling)的基礎，構形打樣係使用如MOE內實施的LowModeMD模擬方法。
圖 13 內同源模擬法顯示二種Fcabs之AB及EF環採用與模板5JII相比不同的構形，且PPY部分於CH3域之核心突出的AB環發揮作用。PPY部分亦媒介交互作用導致AB環構形穩定，其係通過環內及環與其餘的結構之間二者的交互作用。使用LowModeMD模擬執行之構形搜索亦強調PPY部分的酪胺酸殘基會與同一鏈的CH3域CH3域之Q3(IMGT)及D12(IMGT)交互作用，或許是穩定AB環。把實施例13.2內顯示的結果拼湊在一起，此暗示該PPY部分對於FS22-172-003及FS22-053-008二者與CD137的結合都很重要。
序列表 WT Fcab CH3 域結構環的胺基酸序列 WT Fcab AB環– RDELTKNQ (序列辨識編號：1) WT Fcab CD環– SNGQPENNY (序列辨識編號：2) WT Fcab EF環– DKSRWQQGNV (序列辨識編號：3)WT Fcab CH3 域的胺基酸序列 ( 序列辨識編號：4) AB、CD及EF環劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG有LALA-PA 突變 的Fcab CH2 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：5) LALA-PA突變劃底線 APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALA APIEKTISKAK有LALA 突變 的Fcab CH2 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：6) LALA突變劃底線 APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK截斷 的 Fcab 鉸鏈區的胺基酸序列 ( 序列辨識編號： 7) TCPPCP有 LALA 突變的 WT Fcab 的胺基酸序列( 序列辨識編號：8) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 無 LALA 突變的 WT Fcab 的胺基酸序列( 序列辨識編號：9) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG PPY 部分 的胺基酸序列 ( 序列辨識編號： 10) PPY有LALA 突變的 Fcab FS22-033 的胺基酸序列 ( 序列辨識編號： 11) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDEYFEQEVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVARHRWQLGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-033 的胺基酸序列( 序列辨識編號：12) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDEYFEQEVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVARHRWQLGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的FS22-033/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：13) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEYFEQEVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVARHRWQLGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-033/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：14) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEYFEQEVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVARHRWQLGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG有LALA 突變的Fcab FS22-053 的胺基酸序列( 序列辨識編號：15) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYYNRWQDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053 的胺基酸序列( 序列辨識編號：16) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYYNRWQDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的FS22-053/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：17) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYYNRWQDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：18) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYYNRWQDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-008 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-008第一序列– NPPYLFS (序列辨識編號：19) FS22-053-008第二序列– DYWRWLE (序列辨識編號：20)Fcab FS22-053-008 CH3 域的胺基酸序列 ( 序列辨識編號： 21) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-008 CH3 域的核酸序列 ( 序列辨識編號： 22) GGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTACTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACTGGAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-053-008 的胺基酸序列( 序列辨識編號：23) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-008 的核酸序列( 序列辨識編號：24) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACTGGAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-008 的胺基酸序列( 序列辨識編號：25) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-008 的核酸序列( 序列辨識編號：26) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACTGGAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-008/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：27) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-008/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：28) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-009 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-009第一序列– NPPYLFS (序列辨識編號：19) FS22-053-009第二序列– EHTRWLD (序列辨識編號：29)Fcab FS22-053-009 CH3 域的胺基酸序列 ( 序列辨識編號： 30) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVEHTRWLD GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-009 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號：31) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGAACATACTAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-053-009 的胺基酸序列( 序列辨識編號：32) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVEHTRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-009 的核酸序列( 序列辨識編號：33) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGAACATACTAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的Fcab FS22-053-009 的胺基酸序列( 序列辨識編號：34) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVEHTRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-009 的核酸序列( 序列辨識編號：35) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGAACATACTAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-009/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：36) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVEHTRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-009/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：37) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVEHTRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-010 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-010第一序列– NPPYLFS (序列辨識編號：19) FS22-053-010第二序列– DYMRWLD (序列辨識編號：38)Fcab FS22-053-010 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：39) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYMRWLD GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-010 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號：40) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACATGAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的Fcab FS22-053-010 的胺基酸序列( 序列辨識編號：41) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYMRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-010 的核酸序列( 序列辨識編號：42) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACATGAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的Fcab FS22-053-010 的胺基酸序列( 序列辨識編號：43) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYMRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-010 的核酸序列( 序列辨識編號：44) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACATGAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-010/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：45) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYMRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-010/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：46) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYMRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-011 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-011第一序列–NPPYLFS(序列辨識編號：19) FS22-053-011第二序列–DYWRWTD(序列辨識編號：47)Fcab FS22-053-011 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：48) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWTD GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-011 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號：49) GGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACTGGAGGTGGACTGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA有LALA 突變的 Fcab FS22-053-011 的胺基酸序列( 序列辨識編號：50) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWTDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-011 的核酸序列( 序列辨識編號：51) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACTGGAGGTGGACTGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-011 的胺基酸序列( 序列辨識編號：52) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWTDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-011 的核酸序列( 序列辨識編號：53) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACTGGAGGTGGACTGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-011/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：54) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWTDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-011/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：55) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWTDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-012 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-012第一序列–NPPYLFS(序列辨識編號：19) FS22-053-012第二序列–DHMRWLE(序列辨識編號：56)Fcab FS22-053-012 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：57) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHMRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-012 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號：58) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATCATATGAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-053-012 的胺基酸序列( 序列辨識編號：59) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHMRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-012 的核酸序列( 序列辨識編號：60) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATCATATGAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-012 的胺基酸序列( 序列辨識編號：61) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHMRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-012 的核酸序列( 序列辨識編號：62) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATCATATGAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-012/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：63) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHMRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-012/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：64) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHMRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-013 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-013第一序列– NPPYLFS (序列辨識編號：19) FS22-053-013第二序列– GYERWLE (序列辨識編號：65)Fcab FS22-053-013 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：66) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGYERWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-013 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號：67) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGTTACGAAAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-053-013 的胺基酸序列( 序列辨識編號：68) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGYERWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-013 的核酸序列( 序列辨識編號：69) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGTTACGAAAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-013 的胺基酸序列( 序列辨識編號：70) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGYERWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-013 的核酸序列( 序列辨識編號：71) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGTTACGAAAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-013/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：72) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGYERWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-013/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：73) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGYERWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-014 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-014第一序列–NPPYLFS(序列辨識編號：19) FS22-053-014第二序列–YHWRWLD(序列辨識編號：74)Fcab FS22-053-014 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：75) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLD GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-014 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號：76) GGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGTACCATTGGAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA有LALA 突變的 Fcab FS22-053-014 的胺基酸序列( 序列辨識編號：77) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-014 的核酸序列( 序列辨識編號：78) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGTACCATTGGAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-014 的胺基酸序列( 序列辨識編號：79) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-014 的核酸序列( 序列辨識編號：80) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGTACCATTGGAGGTGGCTGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-014/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：81) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-014/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：82) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-015 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-015第一序列–NPPYLFS(序列辨識編號：19) FS22-053-015第二序列–DHWRWLQ(序列辨識編號：83)Fcab FS22-053-015 CH3 域的胺基酸序列 ( 序列辨識編號： 84) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHWRWLQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-015 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號：85) 有LALA 突變的 Fcab FS22-053-015 的胺基酸序列( 序列辨識編號：86) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHWRWLQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-015 的核酸序列( 序列辨識編號：87) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGTTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATCATTGGAGGTGGCTGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-015 的胺基酸序列( 序列辨識編號：88) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHWRWLQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-015 的核酸序列( 序列辨識編號：89) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGTTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATCATTGGAGGTGGCTGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-015/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：90) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHWRWLQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-015/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：91) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDHWRWLQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-016 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-016第一序列– NPPYLFS (序列辨識編號：19) FS22-053-016第二序列– DYIRWLN (序列辨識編號：92)Fcab FS22-053-016 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：93) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYIRWLN GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-016 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號：94) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACATCAGGTGGCTGAACGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-053-016 的胺基酸序列( 序列辨識編號：95) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYIRWLNGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-016 的核酸序列( 序列辨識編號：96) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACATCAGGTGGCTGAACGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-016 的胺基酸序列( 序列辨識編號：97) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYIRWLNGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-016 的核酸序列( 序列辨識編號：98) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGATTACATCAGGTGGCTGAACGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-016/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：99) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYIRWLNGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-016/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：100) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYIRWLNGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-017 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053-017第一序列–NPPYLFS(序列辨識編號：19) FS22-053-017第二序列–YHWRWLE(序列辨識編號：101)Fcab FS22-053-017 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：102) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053-017 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號： 103) GGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACTCTGCCCCCTTCACGCGACGAACTCAATCCGCCCTACCTGTTCTCCAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTTGTGAAGGGTTTCTACCCATCCGATATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGACAGCCGGAGAACAACTATAAGACTACCCCGCCTGTGCTGGACTCGGACGGCAGCTTCTTCTTGTACTCCAAACTGACCGTGTACCACTGGCGGTGGCTGGAAGGGAACGTGTTTAGCTGCTCCGTCATGCATGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTCTCGCTCTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-053-017 的胺基酸序列( 序列辨識編號：104) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-053-017 的核酸序列( 序列辨識編號： 105) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACTCTGCCCCCTTCACGCGACGAACTCAATCCGCCCTACCTGTTCTCCAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTTGTGAAGGGTTTCTACCCATCCGATATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGACAGCCGGAGAACAACTATAAGACTACCCCGCCTGTGCTGGACTCGGACGGCAGCTTCTTCTTGTACTCCAAACTGACCGTGTACCACTGGCGGTGGCTGGAAGGGAACGTGTTTAGCTGCTCCGTCATGCATGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTCTCGCTCTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-017 的胺基酸序列( 序列辨識編號：106) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-053-017 的核酸序列( 序列辨識編號： 107) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACTCTGCCCCCTTCACGCGACGAACTCAATCCGCCCTACCTGTTCTCCAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTTGTGAAGGGTTTCTACCCATCCGATATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGACAGCCGGAGAACAACTATAAGACTACCCCGCCTGTGCTGGACTCGGACGGCAGCTTCTTCTTGTACTCCAAACTGACCGTGTACCACTGGCGGTGGCTGGAAGGGAACGTGTTTAGCTGCTCCGTCATGCATGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTCTCGCTCTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-053-017/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：108) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-053-017/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：109) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYHWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-172第一序列– RKYYPPY (序列辨識編號：110) FS22-172第二序列– GADRWLE (序列辨識編號：111)Fcab FS22-172 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：112) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號： 113) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCGTAAATACTACCCGCCGTACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-172 的胺基酸序列( 序列辨識編號：114) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG有 LALA 突變的 Fcab FS22-172 的核酸序列( 序列辨識編號： 115) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCGTAAATACTACCCGCCGTACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-172 的胺基酸序列( 序列辨識編號：116) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的 Fcab FS22-172 的核酸序列( 序列辨識編號： 117) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCGTAAATACTACCCGCCGTACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-172/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：118) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-172/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：119) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-001 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-172-001第一序列–PFVMPPY(序列辨識編號：120) FS22-172-001第二序列–GADRWLE(序列辨識編號：111)Fcab FS22-172-001 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：121) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELPFVMPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-001 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號： 122) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATTCGTTATGCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-172-001 的胺基酸序列( 序列辨識編號：123) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPFVMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-172-001 的核酸序列( 序列辨識編號： 124) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATTCGTTATGCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-001 的胺基酸序列( 序列辨識編號：125) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPFVMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-001 的核酸序列( 序列辨識編號： 126) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATTCGTTATGCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-172-001/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：127) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPFVMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-172-001/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：128) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPFVMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-002 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-172-002第一序列–PFQMPPY(序列辨識編號：129) FS22-172-002第二序列–GADRWLE(序列辨識編號：111)Fcab FS22-172-002 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：130) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-002 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號： 131) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATTCCAGATGCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-172-002 的胺基酸序列( 序列辨識編號：132) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-172-002 的核酸序列( 序列辨識編號： 133) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATTCCAGATGCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-002 的胺基酸序列( 序列辨識編號：134) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-002 的核酸序列( 序列辨識編號： 135) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATTCCAGATGCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-172-002/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：136) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-172-002/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：137) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-003 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-172-003第一序列–PYIIPPY(序列辨識編號：138) FS22-172-003第二序列–GADRWLE(序列辨識編號：111)Fcab FS22-172-003 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：139) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-003 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號： 140) GGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-172-003 的胺基酸序列( 序列辨識編號：141) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-172-003 的核酸序列( 序列辨識編號： 142) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-003 的胺基酸序列( 序列辨識編號：143) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-003 的核酸序列( 序列辨識編號： 144) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT有 LALA 突變的FS22-172-003/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：145) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的 FS22-172-003/HelD1.3 假 mAb2 的重鏈之胺基酸序列 ( 序列辨識編號 ： 146 ) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-004 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-172-004第一序列–NYIYPPY(序列辨識編號：147) FS22-172-004第二序列–GADRWLE(序列辨識編號：111)Fcab FS22-172-004 CH3 域的胺基酸序列 ( 序列辨識編號 ： 148) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELNYIYPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-004 CH3 域 的核酸序列 ( 序列辨識編號 ： 149 ) GGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACTACATCTACCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA有 LALA 突變的 Fcab FS22-172-004 的胺基酸序列 ( 序列辨識編號 ： 150) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNYIYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-172-004 的核酸序列( 序列辨識編號： 151) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACTACATCTACCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-004 的胺基酸序列( 序列辨識編號：152) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELNYIYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-004 的核酸序列( 序列辨識編號： 153) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACTACATCTACCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-172-004/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：154) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNYIYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的 FS22-172-004/HelD1.3 假 mAb2 的重鏈之胺基酸序列 ( 序列辨識編號 ： 155 ) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNYIYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-005 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-172-005第一序列–QQVYPPY(序列辨識編號：156) FS22-172-005第二序列–GADRWLE(序列辨識編號：111)Fcab FS22-172-005 CH3 域的胺基酸序列 ( 序列辨識編號 ： 157) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELQQVYPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-005 CH3 域 的核酸序列 ( 序列辨識編號 ： 158 ) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCAGCAGGTTTACCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的 Fcab FS22-172-005 的胺基酸序列 ( 序列辨識編號 ： 159) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELQQVYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-172-005 的核酸序列( 序列辨識編號： 160) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCAGCAGGTTTACCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-005 的胺基酸序列( 序列辨識編號：161) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELQQVYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-005 的核酸序列( 序列辨識編號： 162) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCAGCAGGTTTACCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-172-005/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：163) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELQQVYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-172-005/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：164) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELQQVYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-006 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-172-006第一序列–RKYYPPY(序列辨識編號：110) FS22-172-006第二序列–GADRWLE(序列辨識編號：111)Fcab FS22-172-006 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：165) 第一及第二序列劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPY NQLSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-172-006 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號： 166) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCGTAAATACTACCCGCCGTACAACCAGCTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有LALA 突變的 Fcab FS22-172-006 的胺基酸序列( 序列辨識編號：167) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)，CH3域(斜體)，LALA突變(粗體及劃底線)TCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPYNQLSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 有 LALA 突變的 Fcab FS22-172-006 的核酸序列( 序列辨識編號： 168) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCGTAAATACTACCCGCCGTACAACCAGCTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-006 的胺基酸序列( 序列辨識編號：169) 鉸鏈區(劃底線)，CH2域(粗體)及CH3域(斜體)TCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPYNQLSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 無 LALA 突變的 Fcab FS22-172-006 的核酸序列( 序列辨識編號： 170) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCGTAAATACTACCCGCCGTACAACCAGCTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 突變的FS22-172-006/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：171) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPYNQLSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG無 LALA 突變的FS22-172-006/HelD1.3 假mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：172) VH域(劃底線)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELRKYYPPYNQLSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGHelD1.3 假mAb2 的輕鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：173) VL域(劃底線)DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPRTFGGGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFcab FS22-053 CH3 域結構環序列的胺基酸序列 FS22-053第一序列- NPPYLFS (序列辨識編號：19) FS22-053第二序列-  YYNRWQD (序列辨識編號：174)Fcab FS22-053 CH3 域的胺基酸序列( 序列辨識編號：175) (第一及第二序列劃底線)。 GQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFS NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVYYNRWQD GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFcab FS22-053 CH3 域 的核酸序列( 序列辨識編號： 176) GGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGTATTATAACAGGTGGCAGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT有 LALA 的Fcab FS22-053 Fcab 的核酸序列( 序列辨識編號： 177) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGTATTATAACAGGTGGCAGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT無 LALA 的Fcab FS22-053 Fcab 的核酸序列( 序列辨識編號： 178) ACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAACCCGCCGTACCTGTTCTCTAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGTATTATAACAGGTGGCAGGATGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT全長免疫球蛋白 鉸鏈區 的 胺基酸序列( 序列辨識編號：179) EPKSCDKTHTCPPCP人類CD137 之胺基酸序列( 序列辨識編號：180) 細胞外域 ( 斜體 ) ； 跨膜及細胞內 域 ( 粗體 ) lqdpcsncpagtfcdnnrnqicspcppnsfssaggqrtcdicrqckgvfrtrkecsstsnaecdctpgfhclgagcsmceqdckqgqeltkkgckdccfgtfndqkrgicrpwtncsldgksvlvngtkerdvvcgpspadlspgassvtppaparepghspq IISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 人類CD137 細胞外域 之胺基酸序列( 序列辨識編號：181) LQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQ食 蟹獼猴CD137 之胺基酸序列( 序列辨識編號：182) 細胞外域 ( 斜體 ) ； 跨膜及細胞內 域 ( 粗體 ) LQDLCSNCPAGTFCDNNRSQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFKTRKECSSTSNAECDCISGYHCLGAECSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSATPPAPAREPGHSPQIIFFLALTSTVVLFLLFFLVLRFSVVKRSRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 食 蟹獼猴CD137 細胞外域 之胺基酸序列( 序列辨識編號：183) LQDLCSNCPAGTFCDNNRSQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFKTRKECSSTSNAECDCISGYHCLGAECSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSATPPAPAREPGHSPQ小鼠CD137 之胺基酸序列( 序列辨識編號：184) 細胞外域 ( 斜體 ) ； 跨膜及細胞內 域 ( 粗體 ) vqnscdncqpgtfcrkynpvckscppstfssiggqpncnicrvcagyfrfkkfcssthnaececiegfhclgpqctrcekdcrpgqeltkqgcktcslgtfndqngtgvcrpwtncsldgrsvlktgttekdvvcgppvvsfspsttisvtpeggpgghslqvl TLFLALTSALLLALIFITLLFSVLKWIRKKFPHIFKQPFKKTTGAAQEEDACSCRCPQEEEGGGGGYEL 小鼠CD137 細胞外域 之胺基酸序列( 序列辨識編號：185) VQNSCDNCQPGTFCRKYNPVCKSCPPSTFSSIGGQPNCNICRVCAGYFRFKKFCSSTHNAECECIEGFHCLGPQCTRCEKDCRPGQELTKQGCKTCSLGTFNDQNGTGVCRPWTNCSLDGRSVLKTGTTEKDVVCGPPVVSFSPSTTISVTPEGGPGGHSLQVLG1/HelD1.3 mAb 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：186) QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG人類PD-L1 之胺基酸序列( 序列辨識編號：187) MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET鼠類PD-L1 之胺基酸序列( 序列辨識編號：188) MRIFAGIIFTACCHLLRAFTITAPKDLYVVEYGSNVTMECRFPVERELDLLALVVYWEKEDEQVIQFVAGEEDLKPQHSNFRGRASLPKDQLLKGNAALQITDVKLQDAGVYCCIISYGGADYKRITLKVNAPYRKINQRISVDPATSEHELICQAEGYPEAEVIWTNSDHQPVSGKRSVTTSRTEGMLLNVTSSLRVNATANDVFYCTFWRSQPGQNHTAELIIPELPATHPPQNRTHWVLLGSILLFLIVVSTVLLFLRKQVRMLDVEKCGVEDTSSKNRNDTQFEET小鼠 間皮素 之胺基酸序列( 序列辨識編號：189) DAEQKACPPGKEPYKVDEDLIFYQNWELEACVDGTMLARQMDLVNEIPFTYEQLSIFKHKLDKTYPQGYPESLIQQLGHFFRYVSPEDIHQWNVTSPDTVKTLLKVSKGQKMNAQAIALVACYLRGGGQLDEDMVKALGDIPLSYLCDFSPQDLHSVPSSVMWLVGPQDLDKCSQRHLGLLYQKACSAFQNVSGLEYFEKIKTFLGGASVKDLRALSQHNVSMDIATFKRLQVDSLVGLSVAEVQKLLGPNIVDLKTEEDKSPVRDWLFRQHQKDLDRLGLGLQGGIPNGYLVLDFNVREAFSFS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：190) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWFTPARFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2 輕鏈 之胺基酸序列( 序列辨識編號：191) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECG1AA/HelD1.3 mAb ( 有LALA) 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：192) QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-172-004-AA/S70 ( 有LALA) 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：193) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNYIYPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-172-004-AA/S70 ( 無LALA) 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：194) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA 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ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-172-002-AA/S70 ( 無LALA) 的重鏈之胺基酸序列( 序列辨識編號：198) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-172-002-AA/S70 重鏈( 無LALA)( 序列辨識編號：199) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-172-002-AA/S70 重鏈( 有LALA) ( 序列辨識編號： 200) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPFQMPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-053-011-AA/S70 重鏈( 無LALA) ( 序列辨識編號： 201) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWTDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-053-011-AA/S70 重鏈( 有LALA) ( 序列辨識編號：202) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDYWRWTDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-053-008-AA/S70 重鏈( 有LALA) ( 序列辨識編號：203) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVEHTRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22-053-008-AA/S70 重鏈( 無LALA) ( 序列辨識編號：204) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVEHTRWLDGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22m-063-AA/F2 重鏈( 無LALA) ( 序列辨識編號：205) EVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKENWGSYFDLWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22m-063-AA/F2 重鏈( 無LALA) ( 序列辨識編號：206) EVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKENWGSYFDLWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22m-063-AA/F2 輕鏈 ( 序列辨識編號：207) DIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGRAPKVLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFS22m-063/FS28m-228 重鏈( 無LALA) ( 序列辨識編號：208) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWFTPARFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG參考資料
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圖 1 ：圖 1A 、 B 及 C 顯示Fcabs FS22-053、FS22-053-008、FS22-053-009、FS22-053-010、FS22-053-011、FS22-053-012、FS22-053-013、FS22-053-014、FS22-053-015、FS22-053-016、FS22-053-017、FS22-172、FS22-172-001、FS22-172-002、FS22-172-003、FS22-172-004、FS22-172-005及FS22-172-006以及野生型(WT)Fcab的CH3域序列之排列比對。表明依據IMGT、IMGT外顯子(連續編號)、EU及Kabat編號系統之殘基編號。圖 1D 顯示殖株FS22-053-008至FS22-053-016及FS22-053-017(見實施例 10.1 )的CH3域與親代FS22-053 CH3域相比的序列同一性百分率。圖 1E 顯示殖株FS22-172-001至FS22-172-006的CH3域與親代FS22-053 CH3域相比的序列同一性百分率。圖2 顯示以CD137簇集及活化造成的螢光素酶生產之發光值作為衡量標準來判定之NF-kB訊息傳導。當於HEK hCD137 NF-kB報告基因分析(reporter assay)中、以蛋白L交聯時，呈HelD1.3假mAb2 格式的抗人類CD137親代Fcabs FS22-053及FS22-172驅動有限的CD137簇集及NF-kB訊息傳導(空心及實心圓)。當於HEK hCD137 NF-kB報告基因分析中以蛋白L交聯時，呈HelD1.3假mAb2 格式的親和力成熟的抗人類CD137 Fcabs FS22-053-008、-009、-011(空心正方形、三角形及菱形)及FS22-172-002、-003、-004(實心正方形、三角形及菱形)驅動比親代殖株相比更強大的CD137簇集及NF-kB訊息傳導。當以蛋白L交聯時，陽性對照抗人類CD137 mAb，20H4.9(點線)與親和力成熟的抗人類CD137 Fcabs相比，顯示出發光增加，且EC50值較小。圖 3 顯示於抗人類CD137 Fcabs的存在下，T細胞活化分析中的IL-2釋放。呈PD-L1(S70 LALA) mAb2 格式的FS22-053-008、FS22-053-009、FS22-053-011及FS22-172-002、FS22-172-003、FS22-172-004驅動的CD137簇集及活化，只在以過度表現PD-L1的HEK細胞交聯時(空心及實心黑色符號)，導致DO11.10 T細胞活化分析之小鼠介白素-2(mIL-2)釋放。陽性對照抗人類CD137 mAb，20H4.9，在漸增濃度下顯示出mIL-2釋放增高(點線)，然而最大的釋放顯著小於抗人類CD137 Fcabs之最大釋放。與交聯時(空心及實心黑色符號)相比，在沒有過度表現PD-L1的HEK細胞交聯的情況下，所有呈PD-L1模擬(model)mAb2 格式之抗人類CD137 Fcabs(實心灰色符號)顯示出顯著更低的mIL-2釋放。圖 4 顯示於人類初級CD8+ T細胞活化分析中的人類IL-2(hIL-2)釋放。呈PD-L1 mAb2 格式的親和力成熟的抗人類CD137 Fcabs FS22-053-008、FS22-053-009、FS22-053-011、FS22-172-002、FS22-172-003及FS22-172-004當以過度表現PD-L1的HEK細胞予以交聯時，會驅動CD8+ T細胞的CD137活化而導致人類IL-2釋放。親和力成熟的Fcabs的活性比親代Fcabs FS22-053(空心圓)及FS22-172(實心圓)的活性更好。陽性對照抗人類CD137 mAb，20H4.9(點線)，顯示出hIL-2釋放增高以及比用Fcabs有更大的IL-2釋放，然而EC50值比一些抗人類CD137 Fcabs更大，表示一些抗人類CD137 Fcabs達成更好的活性。圖 5 顯示以CD137簇集及活化造成的螢光素酶生產之發光值作為衡量標準來判定之NF-kB訊息傳導。於HEK mCD137 NF-kB報告基因分析中、當以蛋白L交聯時，呈HelD1.3假mAb2 格式的抗小鼠CD137親代Fcab FS22m-063驅動CD137簇集及NF-kB訊息傳導(實心圓)。於100nM以上的濃度，且未以蛋白L交聯時，FS22m-063驅動一些CD137簇集及NF-kB訊息傳導但是比交聯時的位準低很多(空心圓)。當以蛋白L交聯時，陽性對照抗小鼠CD137 mAb，Lob12.3，顯示出發光增高(實心正方形)，與無交聯(空心正方形)相比，然而於最高的抗體濃度達成的最大反應明顯少於抗小鼠CD137 Fcab的反應。正如所料，同型對照顯示沒有活性。圖 6 顯示於G1-AA/4420(IgG對照)、G1-AA/S70(PD-L1陽性對照)、G1-AA/Lob12.3(CD137陽性對照)、G1-AA/S70加上G1-AA/Lob12.3之組合及FS22m-063-AA/S70(呈PD-L1 mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab FS22m-063)治療的C57BL6小鼠內皮下生長的MC38同基因腫瘤模式之腫瘤體積測量。顯示出加或減95%信賴區間之平均腫瘤體積[以mm3 ]。與IgG對照治療的小鼠、抗PD-L1陽性對照mAb治療的小鼠、抗CD137陽性對照治療的小鼠相比，FS22m-063-AA/S70能夠顯著降低MC38同基因腫瘤模式之腫瘤生長。成對顯示利用混合模型分析法、在全部研究時間的生長率統計顯著性。**** ≤ 0.0001 p-值圖7 ：A 顯示於G1-AA/4420(IgG對照)、G1-AA/F2 (PD-1陽性對照)、G1/Lob12.3(CD137陽性對照)、G1-AA/F2加上G1-AA/Lob12.3之組合及FS22m-063-AA/F2(呈PD-1 mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab FS22m-063)治療的C57BL/6小鼠內皮下生長的MC38同基因腫瘤模式之腫瘤體積測量。顯示出加或減95%信賴區間之平均腫瘤體積[以mm3 ]。與IgG對照治療的小鼠相比，FS22m-063-AA/F2能夠顯著降低MC38同基因腫瘤模式之腫瘤生長。成對顯示利用混合模型分析法、在全部研究時間的生長率統計顯著性。**** ≤ 0.0001 p-值。B 顯示如圖7A相同的資料，除了分別顯示各治療的小鼠之腫瘤體積之外。這樣強調出，除了一只老鼠以外，用FS22m-063-AA/F2治療的小鼠中無一者於研究過程期間顯示出任何腫瘤再生長。相反地，用G1-AA/Lob12.3及G1-AA/F2治療的小鼠在研究的最後看見腫瘤再生長。圖 8 顯示皮下間皮素陽性CT26同基因腫瘤模式(Balb/c)之平均腫瘤體積測量。用G1-AA/4420(IgG對照)或FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb²來治療小鼠。用FS22m-063-AA/FS28m-228治療的小鼠與IgG對照治療的小鼠相比，顯示出顯著的腫瘤生長抑制。繪製加或減95%信賴區間之平均腫瘤體積[以mm3 ]。 顯示利用混合模型分析法比較在全部研究時間的生長率之統計顯著性。**** ≤ 0.0001 p-值圖 9 顯示CT26.G10同基因腫瘤模式之個別腫瘤體積測量，其係用G1-AA/HelD1.3(人類IgG1對照)、FS22m-063-AA/HelD1.3(呈假mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab)、FS22m-063-AA/4420(呈假mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab)、G1-AA/FS28m-228-010(抗小鼠MSLN mAb)、FS22m-063-AA/HelD1.3及G1-AA/FS28m-228-010之組合(抗小鼠CD137 Fcab加上抗小鼠MSLN mAb)，及FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (抗小鼠CD137/MSLN mAb2 )來治療。FS22m-063-AA/FS28m-228-010與同型對照及其他治療組相比之下，顯示出腫瘤生長降低。圖 10 顯示CT26.G10同基因腫瘤模式中用下列來治療之卡本麥爾(Kaplan Meier)存活曲線：G1-AA/HelD1.3(IgG對照)、FS22m-063-AA/HelD1.3(呈mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab)、FS22m-063-AA/4420(呈mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab)、G1-AA/FS28m-228-010(抗小鼠MSLN Fab)、FS22m-063-AA/HelD1.3及G1-AA/FS28m-228-010之組合(抗小鼠CD137 Fcab加上抗小鼠MSLN Fab)，及FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (抗小鼠CD137/MSLN mAb2 )來治療。結果顯示FS22m-063-AA/FS28m-228-010治療與同型對照治療的小鼠或其他治療組相比之下，導致明顯改良的存活。圖 11 顯示於DO11.10人類CD137 T細胞活化分析中、測試呈假mAb2 格式的小鼠及人類交叉反應性CD137 Fcabs FS22-053-014及FS22-053-017、當以蛋白L交聯時的小鼠IL-2釋放。二種Fcabs以蛋白L交聯時均能活化CD137。陽性對照抗人類CD137 mAb，20H4.9，顯示出mIL-2釋放增高，與FS22-053-017假mAb2 相似。呈假mAb2 格式的二種抗人類CD137 Fcabs在沒有蛋白L交聯的情況下(空心符號)均顯示出微不足道的mIL-2釋放，與交聯(實心符號)時相比。圖 12 顯示於DO11.10小鼠CD137 T細胞活化分析中、測試呈假mAb2 格式的小鼠及人類交叉反應性CD137 Fcabs FS22-053-014及FS22-053-017、當以蛋白L交聯時的小鼠IL-2釋放。全部都呈HelD1.3假mAb2 格式的FS22-053-014及FS22-053-017以及抗小鼠CD137 Fcab FS22m-063，當以蛋白L交聯時會活化CD137，導致mIL-2釋放。陽性對照抗小鼠CD137 mAb，Lob12.3，正如所料顯示出mIL-2釋放增高。全部呈假mAb2 格式的抗CD137 Fcabs在沒有蛋白L交聯的情況下(點線)均顯示出mIL-2釋放大幅下降，與交聯時相比。 FS22-053-017於此分析中的活性較低(EC50與FS22-053-014相比差8倍)但是仍然於分析中顯示出活性。圖 13 顯示FS22 Fcabs與含野生型人類IgG1 Fc CH3域之結構模板(PDB ID 5JII)相比之同源模擬。影像顯示5JII Fc (A )，以及FS22-053-008(B )及FS-172-003(C ) Fcabs之代表性結構。各結構的一CH3域已經使用灰色帶狀圖表現予以具像化。以帶的黑色陰影來表示AB、CD及EF環以及相應地標記。預測的AB環結構係以點線強調出用於比較，且顯示出PPY部分造成的突出其可能在結合中發揮關鍵作用。圖 14 顯示呈mAb2 格式的同質二聚體Fcab(FS22-172-003-AA) (即含2個CD137結合CH3域)與呈mAb2 格式的異質二聚體Fcab(含1個CD137結合CH3域及1個野生型CH3域)相比之結合動力學之感應圖(sensorgrams)。此感應圖顯示二種分子都結合CD137，即使只有一個結合鏈。解離速率不同，且與異質二聚體Fcab相比，同質二聚體Fcab呈現的解離(dissociation)剖析緩慢很多。此等感應圖證明抗CD137 Fca能二價結合CD137。圖 15 顯示抗人類CD137 Fcab假mAb2 格式(FS22-172-003-AA/HelD1.3)陽性對照抗體(G1-AA/20H4.9)及同型對照抗體(G1-AA/HelD1.3)與表現一系列的CD137位準的細胞，包括陰性對照細胞株(hCD137neg DO11.10) (A )之結合。由流動式細胞測量術來判定結合。結果顯示雖然G1-AA/20H4.9能結合所有表現CD137的細胞株(B-E )，但FS22-172-003-AA/HelD1.3不會結合表現低位準的CD137之DO11.10細胞株(B )，以及與陽性對照相比之結合倍數差異(fold-difference)係與細胞株表現的CD137量成反比。
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(無)

Claims (21)

  1. 一種專一性結合物件，其結合CD137且包含一CD137抗原結合位址座落於該專一性結合物件的一CH3域，該CD137結合位址包含一第一序列座落於該CH3域的AB結構環，其中該第一序列包含序列PPY(序列辨識編號：10 )。
  2. 如請求項1之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含一***(insertion)於該AB結構環內。
  3. 如請求項2之專一性結合物件，其中該***的長度為5個胺基酸。
  4. 如請求項1至3中任一項之專一性結合物件，其中該第一序列為下列專一性結合物件之第一序列： (i)FS22-172-003 之第一序列，其列於序列辨識編號：138 內； (ii)FS22-172-002 之第一序列，其列於序列辨識編號：129 內； (iii)FS22-172-004 之第一序列，其列於序列辨識編號：147 內； (iv)FS22-172-001 之第一序列，其列於序列辨識編號：120 內； (v)FS22-172-005 之第一序列，其列於序列辨識編號：156 內； (vi)FS22-172-006 之第一序列，其列於序列辨識編號：110 內；或 (vii)FS22-172 之第一序列，其列於序列辨識編號：110 內。
  5. 如請求項1至4中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件進一步包含一第二序列座落於該CH3域的EF結構環，且其中該第二序列為專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 之第二序列，其列於序列辨識編號：111 內。
  6. 如請求項1至5中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列專一性結合物件之CH3域序列： (i)FS22-172-003 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：139 內； (ii)FS22-172-002 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：130 內； (iii)FS22-172-004 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：148 內； (iv)FS22-172-001 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：121 內； (v)FS22-172-005 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：157 內； (vi)FS22-172-006 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：165 內；或 (vii)FS22-172 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：112 內。
  7. 如請求項1至6中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含專一性結合物件FS22-172-003 、FS22-172-002 、FS22-172-004 、FS22-172-001 、FS22-172-005 、FS22-172-006 或FS22-172 之序列，其分別列於序列辨識編號：141、132、150、123、159、167及114內。
  8. 如請求項1至3中任一項之專一性結合物件，其中該第一序列為專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 及或FS22-053 之第一序列，其列於序列辨識編號：19內。
  9. 如請求項1至3或8中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件進一步包含一第二序列座落於該CH3域的EF結構環，且其中該第二序列為下列專一性結合物件之第二序列： (i)FS22-053-008 之第二序列，其列於序列辨識編號：20 內； (ii)FS22-053-009 之第二序列，其列於序列辨識編號：29 內； (iii)FS22-053-011 之第二序列，其列於序列辨識編號：47 內； (iv)FS22-053-017 之第二序列，其列於序列辨識編號：101 內； (v)FS22-053-014 之第二序列，其列於序列辨識編號：74 內； (vi)FS22-053-010 之第二序列，其列於序列辨識編號：38 內； (vii)FS22-053-012 之第二序列，其列於序列辨識編號：56 內； (viii)FS22-053-013 之第二序列，其列於序列辨識編號：65 內； (ix)FS22-053-015 之第二序列，其列於序列辨識編號：83 內； (x)FS22-053-016 之第二序列，其列於序列辨識編號：92 內；或 (xi)FS22-053 之第二序列，其列於序列辨識編號：174 內。
  10. 如請求項1至3及8至9中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列專一性結合物件之CH3域序列： (i)FS22-053-008 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：21 內； (ii)FS22-053-009 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：30 內； (iii)FS22-053-011 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：48 內； (iv)FS22-053-017 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：102 內； (v)FS22-053-014 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：75 內； (vi)FS22-053-010 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：39 內； (vii)FS22-053-012 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：57 內； (viii)FS22-053-013 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：66 內； (ix)FS22-053-015 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：84 內； (x)FS22-053-016 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：93 內；或 (xi)FS22-053 之CH3域序列，其列於序列辨識編號：175 內。
  11. 如請求項1至3及8至10中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含下列序列：專一性結合物件FS22-053-008 、FS22-053-009 、FS22-053-011 、FS22-053-017 、FS22-053-014 、FS22-053-010 、FS22-053-012 、FS22-053-013 、FS22-053-015 、FS22-053-016 或FS22-053 之序列，其分別列於序列辨識編號：23、32、50、104、77、41、59、68、86、95及15內。
  12. 如請求項1至11中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件包含該第一序列、第一及第二序列、CH3域序列或專一性結合物件FS22-172-003 或FS22-053-008 ，較佳為FS22-172-003 之序列。
  13. 如請求項1至12中任一項之專一性結合物件，其中該專一性結合物件進一步包含一CDR-為基的抗原結合位址(CDR-based antigen-binding site)。
  14. 如請求項13之專一性結合物件，其中該專一性結合物件為一抗體分子。
  15. 如請求項15之抗體分子，其中該CDR-為基的抗原結合位址結合選自於下列所構成的群組之一第二抗原：一免疫細胞抗原、一腫瘤抗原及一病原性抗原。
  16. 如請求項1至15中任一項之專一性結合物件或抗體分子，其中該專一性結合物件或抗體分子已經修飾以降低或廢除該專一性結合物件或抗體分子與一個或多個Fcγ受體的結合。
  17. 一種核酸分子，其編碼如請求項1至16中任一項之專一性結合物件或抗體分子。
  18. 一種重組宿主細胞，其包含如請求項17之核酸。
  19. 一種生產如請求項1至16中任一項之專一性結合物件或抗體分子之方法，其包含於用於生產該專一性結合物件或抗體分子的條件下培養如請求項18之重組宿主細胞。
  20. 如請求項1至16中任一項之專一性結合物件或抗體分子，供用於一通過療法來治療人類或動物身體的方法。
  21. 如請求項20之供用的專一性結合物件或抗體分子，其中該治療係治療一個體的癌症或一感染性疾病。
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