TW202003561A - 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法 - Google Patents

使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法 Download PDF

Info

Publication number
TW202003561A
TW202003561A TW108107979A TW108107979A TW202003561A TW 202003561 A TW202003561 A TW 202003561A TW 108107979 A TW108107979 A TW 108107979A TW 108107979 A TW108107979 A TW 108107979A TW 202003561 A TW202003561 A TW 202003561A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
amino acid
antigen
domain
agonist
Prior art date
Application number
TW108107979A
Other languages
English (en)
Inventor
克莉絲汀娜 克勞斯
寇勒 克勞蒂亞 伏拉拉
克里斯俊 克雷恩
喬翰尼斯 山姆
帕伯羅 優瑪那
Original Assignee
瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 filed Critical 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
Publication of TW202003561A publication Critical patent/TW202003561A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Abstract

本發明係關於組合療法，其採用與HER-2靶向劑組合之4-1BB (CD137)促效劑，特定言之含有抗原結合分子的4-1BBL三聚體；此等組合療法用於治療癌症的用途；及使用該等組合療法的方法。

Description

使用靶向4-1BB　(CD137)之促效劑的組合療法
本發明係關於組合療法，其採用4-1BB (CD137)促效劑(特定言之含有抗原結合分子之4-1BBL三聚體)及HER-2靶向劑；及此等組合療法用於治療癌症的用途；以及使用該等組合療法的方法。
癌症為世界範圍內死亡之主要原因之一。儘管在治療選擇方面有所進展，但患有晚期癌症的患者之預後仍然較差。因此，對於增加癌症患者之存活期而不引起不可接受之毒性的最佳療法存在持久且緊急的醫療需要。最近臨床試驗結果已顯示，免疫療法可延長癌症患者之總存活期，且引起持久反應。不管此等有前景的結果如何，當前基於免疫之療法僅對一部分患者有效，且需要組合策略來改良治療效益。
人類表皮生長因子受體-2 (HER-2；ErbB2)為受體酪胺酸激酶及跨膜受體之表皮生長因子受體(EGFR)家族之成員。HER-2在一系列腫瘤類型中過表達，且已涉及疾病發生及進展。此與較差預後相關聯。舉例而言，在大致30%之人類乳癌中觀測到HER-2之過表達，且其涉及侵襲性生長及與此等腫瘤相關之較差臨床結果(Slamon等人(1987) Science 235:177-182)。
人類化之抗HER-2單株抗體曲妥珠單抗(CAS 180288-69-1，HERCEPTIN®，huMAb4D5-8，rhuMAb HER2，Genentech)靶向HER-2之胞外域(US 5677171；US 5821337；US 6054297；US 6165464；US 6339142；US 6407213；US 6639055；US 6719971；US 6800738；US 7074404；Coussens等人(1985) Science 230:1 132-9；Slamon等人(1989) Science 244:707-12；Slamon等人(2001) New Engl. J. Med. 344:783-792)。已顯示曲妥珠單抗抑制過表達HER-2之人類腫瘤細胞的增殖，且為抗體依賴性細胞毒性ADCC的介體(Hudziak等人(1989) Mol Cell Biol 9:1 165-72；Lewis等人(1993) Cancer Immunol Immunother; 37:255-63；Baselga 等人(1998) Cancer Res. 58:2825-2831；Hotaling等人(1996) [摘要]. Proc. Annual Meeting Am Assoc Cancer Res; 37:471；Pegram MD等人(1997) [摘要]. Proc Am Assoc Cancer Res; 38:602；Sliwkowski等人(1999) Seminars in Oncology 26(4), 增刊12:60- 70；Yarden Y.及Sliwkowski, M. (2001) Nature Reviews: Molecular Cell Biology, Macmillan Magazines, Ltd., 第2卷:127-137)。
在1998年，批准HERCEPTIN® (曲妥珠單抗，Genentech Inc.)用於治療患有過度表現HER2之轉移性乳癌的患者(Baselga等人(1996) J. Clin. Oncol. 14:737-744)。在2006年，FDA批准HERCEPTIN®作為含有小紅莓、環磷醯胺及太平洋紫杉醇之治療方案之一部分，用於輔助治療患有HER2陽性、結節陽性乳癌之患者。
曲妥珠單抗-MCC-DMl (T-DMl、曲妥珠單抗恩他新、曲妥珠單抗-恩他新偶聯物，KADCYLA®)，一種用於治療HER2陽性乳癌之新穎抗體-藥物結合物(ADC)，由在離胺酸側鏈處經由MCC連接子與曲妥珠單抗結合的細胞毒性劑DM1(含硫醇類美登素(maytansinoid)抗微管藥劑)構成，其中平均藥物負荷(藥物與抗體比率)為約3.5。在與表現於腫瘤細胞上之HER2結合之後，T-DMl進行受體介導之內化，引起胞內釋放含有DM1之細胞毒性分解代謝物，且隨後細胞死亡。在2013年，FDA批准在商品名KADCYLA®下出售之曲妥珠單抗-恩他新偶聯物，用於治療先前接受用曲妥珠單抗及紫杉烷治療之患有HER2陽性、轉移性乳癌的患者。
帕妥珠單抗(亦稱為重組人類化單株抗體2C4、rhuMAb 2C4、PERJETA®，Genentech, Inc, South San Francisco)為靶向HER-2之另一抗體治療。帕妥珠單抗為HER二聚化抑制劑(HDI)，且作用於抑制HER2之能力以與其他HER受體(諸如EGFR/HERl、HER2、HER3及HER4)形成活性雜二聚體或同二聚體。參見例如Harari及Yarden Oncogene 19:6102-14 (2000)；Yarden及Sliwkowski. Nat Rev Mol Cell Biol 2:127-37 (2001)；Sliwkowski Nat Struct Biol 10:158-9 (2003)；Cho等人Nature 421:756-60 (2003)；及Malik等人Pro Am Soc Cancer Res 44:176-7 (2003)；US 7560111。在2012年，首先批准PERJETA®與曲妥珠單抗及多烯紫杉醇組合用於治療患有晚期或後期(轉移性) HER2陽性乳癌之患者。同時，亦批准使用曲妥珠單抗及帕妥珠單抗之組合療法，用於新輔助(手術前)治療HER2陽性、局部晚期、發炎性或初期乳癌，及用於輔助(手術後)治療處於高復發風險下之HER2陽性早期乳癌(EBC)。認為帕傑它(Perjeta)及賀癌平(Herceptin)之作用機制係彼此互補的，此係由於兩者均與HER2受體結合，但結合於不同位置。認為帕傑它及賀癌平之組合提供對HER信號傳導路徑之更全面的雙重阻斷，因此預防腫瘤細胞生長及存活。
針對人類ErbB2之域II、III及IV之雙特異性二價HER-2抗體，揭示於WO 2012/143523中。包含抗體rhuMab 2C4及hu4D5之最佳化變體之雙特異性HER-2抗體(稱為Herceptarg)，已描述於WO 2015/091738中。
儘管充分證實了曲妥珠單抗在乳癌中之治療功效，但因為抗性仍有許多患者不能自曲妥珠單抗獲益。鑒於缺乏在表現低水準之HER2之特定癌症中的有效抗HER2療法、對目前療法之抗性及HER-2相關癌症的發病率，需要新療法來治療此類癌症。
4-1BB (CD137) (TNF受體超家族之成員)首先經鑑別為由經活化T細胞表現之誘導性分子(Kwon及Weissman, 1989, Proc Natl Acad Sci USA86 , 1963-1967)。後續研究表明，許多其他免疫細胞亦表現4-1BB，包括NK細胞、B細胞、NKT細胞、單核球、嗜中性白血球、肥大細胞、樹突狀細胞(DC)及非造血源之細胞(諸如內皮細胞及平滑肌細胞) (Vinay及Kwon, 2011, Cell Mol Immunol8 , 281-284)。4-1BB在不同細胞類型中之表現主要為誘導性的，且由各種刺激信號驅動，諸如T細胞受體(TCR)或B細胞受體觸發，以及經由促炎性細胞介素之共刺激分子或受體誘導的信號傳導(Diehl等人, 2002, J Immunol168 , 3755-3762；Zhang等人, 2010, Clin Cancer Res13 , 2758-2767)。
已於1993年鑑別4-1BB配體(4-1BBL或CD137L) (Goodwin等人, 1993, Eur J Immunol23 , 2631-2641)。已顯示，4-1BBL之表現限定於專職抗原呈現細胞(APC)上，諸如B細胞、DC及巨噬細胞。4-1BBL之誘導性表現為T細胞(包括αβ及γδ T細胞子集兩者)及內皮細胞之特徵(Shao及Schwarz, 2011, J Leukoc Biol89 , 21-29)。
經由4-1BB受體(例如藉由4-1BBL連接)之共刺激活化T細胞(CD4+ 及CD8+ 子集兩者)內之多個信號級聯，從而大大加強T細胞活化(Bartkowiak及Curran, 2015)。與TCR觸發組合，促效4-1BB特異性抗體增強T細胞之增殖、刺激淋巴激素分泌及降低T淋巴球對活化誘導之細胞死亡的靈敏度(Snell等人, 2011, Immunol Rev244 , 197-217)。此機制在癌症免疫療法中作為第一概念驗證而進一步經推進。在臨床前模型中，抗-4-1BB之促效抗體在攜帶腫瘤小鼠中之投與引起強效抗腫瘤效果(Melero等人, 1997, Nat Med3 , 682-685)。之後，累積證據指示，4-1BB通常僅在與其他免疫調節化合物、化學治療藥劑、腫瘤特異性接種疫苗或放射線療法組合投與時，展現其作為抗腫瘤劑之效能(Bartkowiak及Curran, 2015, Front Oncol5 , 117)。
TNFR超家族之信號傳導需要三聚配體之交聯以與受體接合，需要野生型Fc結合之4-1BB促效抗體同樣如此(Li及Ravetch, 2011, Science333 , 1030-1034)。然而，全身性投與具有功能活性Fc域之4-1BB特異性促效抗體引起與肝毒性相關的CD8+ T細胞之流入(Dubrot等人, 2010, Cancer Immunol Immunother59 , 1223-1233)，此在小鼠體內無功能性Fc受體存在下減弱或顯著改善。在臨床中，Fc勝任型4-1BB促效Ab (BMS-663513) (NCT00612664)引起導致試驗終止的4級肝炎(Simeone及Ascierto, 2012, J Immunotoxicol9 , 241-247)。因此，需要有效且更安全的4-1BB促效劑。
已製備出由一個4-1BB配體胞外域及單鏈抗體片段(Hornig等人, 2012, J Immunother35 , 418-429; Müller等人, 2008, J Immunother31 , 714-722)或與重鏈之C端融合的單一4-1BB配體(Zhang等人, 2007, Clin Cancer Res13 , 2758-2767)構成的融合蛋白。WO 2010/010051揭示由彼此連接且與抗體部分融合之三個TNF配體胞外域組成的融合蛋白之產生。在本發明中，顯示由三聚合且因此生物活性的4-1BB配體及對腫瘤相關抗原具特異性之抗原結合域以及Fc無活性域構成的抗原結合分子，尤其穩定且穩固。對於腫瘤，顯示經由4-1BB (CD137)分子之特異性共刺激尤其適用，該分子包含靶向腫瘤基質中之FAP之抗原結合域及4-1BB配體之三聚體，下文稱為FAP-4-1BBL。藉由FAP靶向特異***聯，FAP抗原結合域代替特定言之在肝中負責Fc介導的毒性的非特異性FcγR介導的交聯，因此降低毒性風險。
在本文中，吾人描述一種針對表現HER-2之腫瘤的新穎組合療法。
本發明係關於4-1BB (CD137)促效劑，特定言之含有抗原結合分子之4-1BBL三聚體；及其與HER-2靶向療法組合之用途，尤其係關於其在用於治療癌症或延遲癌症之進展的方法中的用途。已發現，本文中所描述之組合療法在抑制腫瘤生長及消除腫瘤細胞上比用單獨4-1BB促效劑或已知HER-2靶向療法更有效。
在一些態樣中，本發明提供一種用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中的4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用，且其中該4-1BB促效劑為包含能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
在一些態樣中，該HER-2靶向劑包含HER-2抗體、雙特異性HER-2抗體及/或HER-2抗體藥物結合物。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含選自由以下組成之群的HER-2抗體：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及馬戈妥昔單抗(margetuximab)。在一個態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗或帕妥珠單抗。更特定言之，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗。在一些態樣中，HER-2靶向劑為經糖基工程改造之HER-2抗體，例如TrasGex。在一些態樣中，HER-2靶向劑為雙特異性HER-2抗體，例如Herceptarg。在一些態樣中，HER-2靶向劑為HER-2抗體藥物結合物，特定言之曲妥珠單抗恩他新(曲妥珠單抗-恩他新偶聯物)。
在一些態樣中，4-1BB促效劑包含三個4-1BBL胞外域或其片段。在一些態樣中，4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段之分子，且其中該等4-1BBL胞外域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8，特定言之SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5的胺基酸序列。
在其他態樣中，4-1BB促效劑為包含能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子。在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域。在一個態樣中，腫瘤相關抗原選自由纖維母細胞活化蛋白(FAP)及CEA組成之群。
在其他態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域。在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含含有降低與Fc受體結合及/或效應功能之一或多個胺基酸取代的Fc域。在一特定態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含有降低Fcγ受體結合及/或效應功能之修飾的Fc域。藉由腫瘤相關抗原之交聯使得有可能避免非特異性FcγR介導之交聯，且因此可投與相較於普通4-1BB抗體更高且更有效劑量之4-1BB促效劑。
在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與纖維母細胞活化蛋白(FAP)特異性結合之至少一個抗原結合域。在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與FAP特異性結合之抗原結合域包含： (a)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，或 (b)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)。
在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域，及 (b)藉由二硫鍵彼此連接之第一及第二多肽，其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接之兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：(a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)；及(b)藉由二硫鍵彼此連接之第一及第二多肽，其中該抗原結合分子之特徵在於，該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈，含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈，含有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第二重鏈，及含有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第二輕鏈。
在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗-FAP/抗-4-1BB雙特異性抗體。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域。在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與CEA特異性結合之該抗原結合域包含：(a)重鏈可變區(VH CEA)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與CEA特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的重鏈可變區(VH CEA)及含有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL CEA)。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
在一些態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於，該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗CEA/抗-4-1BB雙特異性抗體。
在其他態樣中，4-1BB促效劑及HER-2靶向劑以單一組合物形式一起投與，或以兩種或更多種不同組合物形式分開投與。在其他態樣中，4-1BB促效劑與HER-2靶向劑協同作用。在其他態樣中，4-1BB促效劑與HER-2靶向劑同時、在其之前或之後投與。
在其他態樣中，提供一種組合，其包含4-1BB促效劑及HER-2靶向劑。在一個態樣中，該組合用作藥物，其中4-1BB促效劑及HER-2靶向劑係同時投與。在其他態樣中，該組合用作藥物，其中4-1BB促效劑及HER-2靶向劑係依序投與。
在另一態樣中，提供一種醫藥產品，其包含：(A)第一組合物，其包含作為活性成分之4-1BB促效劑及醫藥學上可接受之載劑；及(B)第二組合物，其包含作為活性成分之HER-2靶向劑及醫藥學上可接受之載劑，該等組合物組合、依序或同時使用以治療疾病，特定言之癌症。
在另一態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含4-1BB促效劑及HER-2靶向劑。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。在其他態樣中，提供一種醫藥組合物，其用於治療癌症或延遲癌症之進展，特定言之用於治療晚期及/或轉移性實體腫瘤。
在另一態樣中，本發明係關於一種4-1BB促效劑及HER-2靶向劑之組合之用途，其用於製造用於治療增殖性疾病(特定言之癌症)或延遲增殖性疾病之進展的藥物。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。
在另一態樣中，本發明提供一種用於治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展的方法，其包含向該個體投與有效量的4-1BB促效劑及有效量的HER-2靶向劑。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。
在一些態樣中，本發明係關於一種用於治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展的方法，其包含向該個體投與有效量的4-1BB促效劑及有效量的HER-2靶向劑，其中該4-1BB促效劑包含三個4-1BBL胞外域或其片段。在一些態樣中，4-1BB促效劑為本文提供之任何4-1BB促效劑。在一些態樣中，4-1BB促效劑及HER-2靶向劑以單一組合物形式一起投與，或以兩種或更多種不同組合物形式分開投與。在一些態樣中，4-1BB促效劑及HER-2靶向劑係經靜脈內或皮下投與。在一些態樣中，4-1BB促效劑與HER-2靶向劑同時、在其之前或之後投與。
在其他態樣中，本發明係關於一種與HER-2靶向劑組合之4-1BB促效劑或醫藥組合物，其用於治療癌症或延遲癌症之進展；一種4-1BB促效劑及HER-2靶向劑之組合的用途，其用於製造用於治療增殖性疾病(特定言之癌症)或延遲增殖性疾病之進展的藥物；或一種用於治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展的方法，其中該癌症為HER-2陽性癌症。在一些態樣中，該癌症為乳癌、卵巢癌、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、食道癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、膀胱癌、子宮內膜癌、胰臟癌、結腸癌、***癌及/或頭頸癌。
定義 除非以其他方式定義，否則本文所用之技術及科學術語具有與本發明所屬領域中通常所使用相同之含義。出於解釋本說明書之目的，將應用以下定義且只要合適，以單數形式使用之術語亦將包括複數形式且反之亦然。
如本文所用，術語「抗原結合分子 」在其最廣泛的意義上係指特異性結合抗原決定子的分子。抗原結合分子之實例為抗體、抗體片段及骨架抗原結合蛋白。
術語「抗體 」在本文中以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、單特異性及多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所需抗原結合活性即可。
如本文所用，術語「單株抗體 」係指自實質上均質抗體之群體獲得的抗體，亦即包含該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原決定基，除例如含有天然存在之突變或在單株抗體製備生產期間產生之可能變體抗體以外，此類變體一般以少量存在。與典型地包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相比，單株抗體製劑中之各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。
如本文所用，術語「單特異性 」抗體表示具有一或多個結合位點之抗體，該一或多個結合位點中之每一者與相同抗原之相同抗原決定基結合。術語「雙特異性 」意謂，抗原結合分子能夠與至少兩個不同的抗原決定子特異性結合。典型地，雙特異性抗原結合分子包含兩個抗原結合位點，其中之每一者對不同抗原性決定子具有特異性。在某些實施例中，雙特異性抗原結合分子能夠同時結合兩個抗原決定子，特定言之表現於兩個不同細胞上的兩個抗原決定子。
如本申請案中所使用之術語「價 」表示抗原結合分子中存在指定數目之結合位點。同樣，術語「二價」、「四價」及「六價」分別表示抗原結合分子中存在兩個結合位點、四個結合位點及六個結合位點。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換使用，其係指具有與原生抗體結構實質上類似之結構的抗體。「原生抗體 」係指具有不同結構之天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言，原生IgG類抗體為約150,000道爾頓(dalton)之雜四聚體醣蛋白，其由二硫鍵鍵合之兩條輕鏈及兩條重鏈構成。自N端至C端，各重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重鏈域或重鏈可變域，之後為三個恆定域(CH1、CH2及CH3)，亦稱為重鏈恆定區。類似地，自N端至C端，各輕鏈具有可變區(VL)，亦稱為可變輕鏈域或輕鏈可變域，之後為輕鏈恆定域(CL)，亦稱為輕鏈恆定區。抗體之重鏈可歸為五種類型中之一種，該五種類型稱為α (IgA)、δ (IgD)、ε (IgE)、γ (IgG)或μ (IgM)，其中一些可進一步分成子類型，例如γ1 (IgG1)、γ2 (IgG2)、γ3 (IgG3)、γ4 (IgG4)、α1 (IgA1)及α2 (IgA2)。抗體之輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列歸為兩種類型中之一種，稱為κ (kappa)及λ (lambda)。
「抗體片段 」係指不同於完整抗體，包含完整抗體之結合完整抗體所結合之抗原之部分的分子。抗體片段之實例包括(但不限於) Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2 ；雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、互換Fab片段；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及單域抗體。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等人, Nat Med 9, 129-134 (2003)。關於scFv片段之綜述，參見例如Plückthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113卷, Rosenburg及Moore編, Springer-Verlag, NewYork, 第269-315頁 (1994)；亦參見WO93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。關於包含救助受體結合抗原決定基殘基及具有增加之活體內半衰期之Fab及F(ab')2 片段的論述，參見美國專利第5,869,046號。雙功能抗體為具有兩個抗原結合位點之抗體片段，其可為二價或雙特異性的，參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人, Nat Med 9, 129-134 (2003)；及Hollinger等人, Proc Natl Acad Sci USA 90, 6444-6448 (1993)。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人, Nat Med 9, 129-134 (2003)中。單域抗體為包含抗體之重鏈可變域之全部或一部分或輕鏈可變域之全部或一部分的抗體片段。在某些實施例中，單域抗體為人類單域抗體(Domantis, Inc., Waltham, MA；參見例如美國專利第6,248,516B1號)。抗體片段可藉由各種技術來製備，包括(但不限於)如本文所描述之對完整抗體之蛋白水解消化以及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E. coli)或噬菌體)生產。
對完整抗體之番木瓜蛋白酶消化產生兩個相同的抗原結合片段，稱為「Fab」片段，其各自含有重鏈及輕鏈可變域以及輕鏈之恆定域及重鏈之第一恆定域(CH1)。如本文所用，因此，術語「Fab 片段 」係指包含含有輕鏈之VL域及恆定域(CL)之輕鏈片段，及重鏈之VH域及第一恆定域(CH1)的抗體片段。Fab'片段與Fab片段之不同之處在於，在包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸之重鏈CH1域的羧基端處添加幾個殘基。Fab'-SH為其中恆定域之半胱胺酸殘基帶有游離硫醇基之Fab'片段。胃蛋白酶處理產生F(ab')2 片段，其具有兩個抗原結合位點(兩個Fab片段)及Fc區之一部分。
術語「互換 Fab 片段 」或「xFab片段」或「互換型Fab片段」係指其中重鏈及輕鏈之可變區或恆定區互換之Fab片段。互換型Fab分子之兩種不同鏈組成係可能的且包含於本發明之雙特異性抗體中：一方面，Fab重鏈及輕鏈之可變區經互換，亦即交換型Fab分子包含由輕鏈可變區(VL)及重鏈恆定區(CH1)構成的肽鏈，及由重鏈可變區(VH)及輕鏈恆定區(CL)構成的肽鏈。此互換型Fab分子亦稱為互換Fab( VLVH ) 。另一方面，當Fab重鏈及輕鏈之恆定區互換時，互換型Fab分子包含由重鏈可變區(VH)及輕鏈恆定區(CL)組成的肽鏈，及由輕鏈可變區(VL)及重鏈恆定區(CH1)組成的肽鏈。此互換型Fab分子亦稱為互換Fab(CLCH1) 。
「單鏈Fab片段」或「scFab 」為由抗體重鏈可變域(VH)、抗體恆定域1 (CH1)、抗體輕鏈可變域(VL)、抗體輕鏈恆定域(CL)及連接子組成之多肽，其中該等抗體域及該連接子按N端至C端方向之次序具有以下中之一者：a) VH-CH1-連接子-VL-CL，b) VL-CL-連接子-VH-CH1，c) VH-CL-連接子-VL-CH1或d) VL-CH1-連接子-VH-CL；且其中該連接子為至少30個胺基酸，較佳32與50個胺基酸之間的多肽。該等單鏈Fab片段經由CL域與CH1域之間的天然二硫鍵穩定化。另外，此等單鏈Fab分子可藉由經由***半胱胺酸殘基(例如根據Kabat編號，可變重鏈中之位置44及可變輕鏈中之位置100)而產生鏈間二硫鍵來進一步穩定化。
「互換型單鏈Fab片段」或「x-scFab 」為由抗體重鏈可變域(VH)、抗體恆定域1 (CH1)、抗體輕鏈可變域(VL)、抗體輕鏈恆定域(CL)及連接子組成之多肽，其中該等抗體域及該連接子按N端至C端方向之次序具有以下中之一者：a) VH-CL-linker-VL-CH1及b)VL-CH1-連接子-VH-CL；其中VH及VL一起形成與抗原特異性結合的抗原結合位點，且其中該連接子為至少30個胺基酸的多肽。另外，此等x-scFab分子可藉由經由***半胱胺酸殘基(例如根據Kabat編號，可變重鏈中之位置44及可變輕鏈中之位置100)而產生鏈間二硫鍵來進一步穩定化。
「單鏈可變片段 (scFv) 」為抗體之重鏈(VH )及輕鏈(VL )之可變區的融合蛋白，其與具有十至約25個胺基酸之短連接肽連接。連接子通常富含甘胺酸以具有可撓性，以及絲胺酸或蘇胺酸以具有可溶性，且可使VH 之N端與VL 之C端連接，或反之亦然。儘管移除恆定區且引入連接子，但此蛋白質保留初始抗體之特異性。scFv抗體例如描述於Houston, J.S., Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-96)中。另外，抗體片段包含單鏈多肽，其具有VH域(亦即能夠與VL域一起組裝成功能性抗原結合位點)或VL域(亦即能夠與VH域一起組裝成功能性抗原結合位點)之特徵，且因此提供全長抗體之抗原結合特性。
「骨架抗原結合蛋白 」在此項技術中已知，例如纖維結合蛋白及經設計錨蛋白重複蛋白質(DARPins)已用作抗原結合域之替代骨架，參見例如Gebauer及Skerra, Engineered protein scaffolds as next-generation antibody therapeutics. Curr Opin Chem Biol 13:245-255 (2009)及Stumpp等人, Darpins: A new generation of protein therapeutics. Drug Discovery Today 13: 695-701 (2008)。在本發明之一個態樣中，骨架抗原結合蛋白係選自由以下組成之群：CTLA-4 (艾維伯迪(Evibody))，脂質運載蛋白(抗運載蛋白)，蛋白A衍生之分子(諸如蛋白A之Z域(親和抗體)、A域(高親和性多聚體/最大抗體))，血清運鐵蛋白(反式體)；經設計之錨蛋白重複蛋白質(DARPin)，抗體輕鏈或重鏈之可變域(單域抗體，sdAb)，抗體重鏈之可變域(奈米抗體，aVH)，VNAR 片段，纖維結合蛋白(阿德奈汀(AdNectin))，C型凝集素域(四連接素)；新型抗原受體β-內醯胺酶之可變域(VNAR 片段)，人類γ-晶狀體球蛋白或泛蛋白(阿菲林(Affilin)分子)；人類蛋白酶抑制劑之kunitz型域，微體(諸如來自knottin家族之蛋白質)，肽適體及纖維結合蛋白(阿德奈汀)。
脂質運載蛋白為胞外蛋白質之家族，其轉運小型疏水性分子，諸如類固醇、後色膽素、類視黃素及脂質。其具有剛性β-片狀第二結構，其在圓錐結構之開放端具有許多環，其可經工程改造以與不同靶抗原結合。抗運載蛋白之大小在160-180個胺基酸之間，且衍生於脂質運載蛋白。關於其他細節，參見Biochim Biophys Acta 1482: 337-350 (2000)、US7250297B1及US20070224633。
經設計之錨蛋白重複蛋白質(DARPins)衍生於錨蛋白，其為介導整合膜蛋白質與細胞骨架之連接的蛋白質家族。單一錨蛋白重複為由兩個α螺旋及β旋轉(beta-turn)組成之33殘基基元。其可藉由隨機化各重複之第一個α螺旋及β旋轉中之殘基而經工程改造為結合不同靶抗原。可藉由增加模組數目來增加其結合界面(親和力成熟方法)。關於其他細節，參見J. Mol. Biol. 332, 489-503 (2003), PNAS 100(4), 1700-1705 (2003)及J. Mol. Biol. 369, 1015-1028 (2007)以及US20040132028A1。
單域抗體為由單一單體可變抗體域組成之抗體片段。第一個單域來源於來自駱駝之抗體重鏈之可變域(奈米抗體或VH H片段)。此外，術語單域抗體包括自主人類重鏈可變域(aVH)或來源於鯊魚之VNAR 片段。
至於參考分子，「與相同抗原決定基結合之抗原結合分子 」係指一種抗原結合分子，其在競爭分析中阻斷參考分子與其抗原之結合達50%或更多，且相反，參考分子在競爭分析中阻斷抗原結合分子與其抗原之結合達50%或更多。
術語「抗原結合域 」係指抗原結合分子之一部分，其包含與抗原之一部分或全部特異性結合且與其互補之區域。當抗原較大時，抗原結合分子可僅與抗原之特定部分結合，該部分稱為抗原決定基。抗原結合域可由例如一或多個可變域(亦稱為可變區)提供。較佳地，抗原結合域包含抗體輕鏈可變區(VL)及抗體重鏈可變區(VH)。
如本文所用，術語「抗原決定子 」與「抗原」及「抗原決定基」同義，且係指多肽大分子上與抗原結合部分結合，形成抗原結合部分-抗原複合物的位點(例如連續胺基酸區段或由非連續胺基酸之不同區域構成的構形組態)。適用的抗原決定子可發現於例如腫瘤細胞表面上、病毒感染細胞表面上、其他病變細胞表面上、免疫細胞表面上、游離於血清中及/或胞外基質(ECM)中。除非另外指示，否則在本文中適用作抗原之蛋白質可以為來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)的任何原生形式之蛋白質。在一特定實施例中，抗原為人類蛋白質。在本文中提及特定蛋白質的情況下，該術語涵蓋「全長」未加工蛋白質，以及由細胞中之加工所產生的任何蛋白質形式。該術語亦涵蓋天然存在之蛋白質變體，例如剪接變體或等位基因變體。
「特異性結合 」意謂，結合對於抗原而言具選擇性且可與非所需或非特異性相互作用區分。抗原結合分子與特定抗原結合之能力可經由酶聯結免疫吸附分析(ELISA)或熟習此項技術者熟悉之其他技術，例如表面電漿子共振(SPR)技術(在BIAcore儀器上分析) (Liljeblad等人, Glyco J 17, 323-329 (2000))及傳統結合分析(Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002))量測。在一個實施例中，抗原結合分子與無關蛋白質之結合程度，小於抗原結合分子與抗原之結合的約10%，如例如藉由SPR所量測。在某些實施例中，與抗原結合之分子具有≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10-8 M或更少，例如10-8 M至10-13 M，例如10-9 M至10-13 M)之解離常數(Kd)。
「親和力 」或「結合親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用總強度。除非另外指示，否則如本文所用之「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間的1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力一般可由解離常數(Kd)表示，解離常數為解離速率常數與結合速率常數(分別為koff及kon)之比率。因此，等效親和力可包含不同速率常數，只要速率常數之比率保持相同即可。可藉由此項技術中已知之常見方法(包括本文所描述之彼等方法)量測親和力。一種用於量測親和力之特定方法為表面電漿子共振(SPR)。
術語「腫瘤相關抗原 」意謂由腫瘤細胞高度表現或在腫瘤基質中表現的任何抗原。特定腫瘤相關抗原為CEA或FAP。
除非另有指示，否則術語「纖維母細胞活化蛋白質 (FAP) 」，亦稱為脯胺醯基內肽酶FAP或Seprase (EC 3.4.21)，係指來自任何脊椎動物來源(包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)、非人類靈長類動物(例如食蟹獼猴)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠))之任何原生FAP。該術語涵蓋「全長」未加工FAP以及由細胞中之加工產生的任何FAP形式。該術語亦涵蓋天然存在之FAP變體，例如剪接變體或等位基因變體。在一個實施例中，本發明之抗原結合分子能夠與人類、小鼠及/或食蟹獼猴FAP特異性結合。人類FAP之胺基酸序列顯示於UniProt (www.uniprot.org)寄存編號Q12884 (版本149，SEQ ID NO: 56)或NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeqNP_004451.2中。人類FAP之胞外域(ECD)自胺基酸位置26延伸至胺基酸位置760。His標記之人類FAP ECD之胺基酸序列顯示於SEQ ID NO: 81中。小鼠FAP之胺基酸序列顯示於UniProt寄存編號P97321 (版本126，SEQ ID NO: 58)或NCBI RefSeq NP_032012.1中。小鼠FAP之胞外域(ECD)自胺基酸位置26延伸至胺基酸位置761。SEQ ID NO: 83顯示His標記之小鼠FAP ECD之胺基酸序列。SEQ ID NO: 84顯示His標記之食蟹獼猴FAP ECD之胺基酸序列。較佳地，本發明之抗-FAP結合分子與FAP之胞外域結合。例示性抗-FAP結合分子描述於國際專利申請案第WO 2012/020006 A2號中。
除非另外指示，否則術語「癌胚抗原 (CEA) 」，亦稱為癌胚抗原相關細胞黏附分子5 (CEACAM5)，係指來自任何脊椎動物來源(包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)、非人類靈長類動物(例如食蟹獼猴)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠))之任何原生CEA。人類CEA之胺基酸序列顯示於UniProt寄存編號P06731 (版本151，SEQ ID NO: 61)中。長期將CEA鑑別為腫瘤相關抗原(Gold及Freedman, J Exp Med., 121:439-462, 1965；Berinstein N. L., J Clin Oncol., 20:2197-2207, 2002)。最初歸類為僅表現於胎兒組織中之蛋白質，現今在若干正常成年人組織中鑑別出CEA。此等組織之來源主要為上皮，包括胃腸道、呼吸道及尿道之細胞，及結腸、子宮頸、汗腺及***之細胞(Nap等人, Tumour Biol., 9(2-3):145-53, 1988；Nap等人, Cancer Res., 52(8):2329-23339, 1992)。上皮來源之腫瘤以及其癌轉移含有CEA作為腫瘤相關抗原。儘管存在CEA本身並不指示轉化成癌細胞，但指示CEA之分佈。在正常組織中，CEA通常表現於細胞之頂端表面上(Hammarström S., Semin Cancer Biol. 9(2):67-81 (1999))，使其不可接近血流中之抗體。與正常組織相反，CEA傾向於在癌細胞之整個表面上表現(Hammarström S., Semin Cancer Biol. 9(2):67-81 (1999))。此表現模式之變化使得CEA可實現癌細胞中之抗體結合。另外，CEA表現在癌細胞中增加。此外，增加之CEA表現促進增加之細胞間黏附，其可引起癌轉移(Marshall J., Semin Oncol., 30(增刊8):30-6, 2003)。多種腫瘤實體中之CEA表現之發生率通常極高。根據公開之資料，組織樣本中進行之自身分析證實其高發生率，在結腸直腸癌(CRC)中為約95%，在胰臟癌中為90%，在胃癌中為80%，在非小細胞肺癌(NSCLC，其中其與HER3共表現)中為60%且在乳癌中為40%；在小細胞肺癌及神經膠母細胞瘤中發現低表現。
CEA易於自細胞表面裂解且自腫瘤直接或經由***進入血流。由於此特性，已使用血清CEA之含量作為用於診斷癌症及篩檢癌症(特定言之結腸直腸癌)復發之臨床標記物(Goldenberg D M., The International Journal of Biological Markers, 7:183-188, 1992；Chau I.等人, J Clin Oncol., 22:1420-1429, 2004；Flamini等人, Clin Cancer Res; 12(23):6985-6988, 2006)。
如本文所用，「T 細胞 抗原 」係指呈現於T淋巴球、特定言之細胞毒性T淋巴球之表面上的抗原決定子。
如本文所用，「T 細胞 活化治療劑 」係指能夠在個體內誘導T細胞活化之治療劑，特定言之經設計用於在個體內誘導T細胞活化的治療劑。
如本文所用，「活化 T 細胞抗原 」係指由T淋巴球、特定言之細胞毒性T淋巴球表現之抗原決定子，其能夠在與抗原結合分子相互作用時誘導或提高T細胞活化。具體言之，抗原結合分子與活化T細胞抗原的相互作用可藉由觸發T細胞受體複合物之信號級聯來誘導T細胞活化。例示性活化T細胞抗原為CD3。
術語「可變區 」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中涉及抗原結合分子與抗原之結合的域。原生抗體之重鏈及輕鏈(分別為VH及VL)可變域通常具有類似的結構，其中各域包含四個保守性構架區(FR)及三個高變區(HVR)。參見例如Kindt等人, Kuby Immunology, 第6版, W.H. Freeman and Co., 第91頁 (2007)。單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特異性。
如本文所用，術語「高變區 」或「HVR」係指抗體可變域中在序列上具有高變性及/或形成結構上定義之環(「高變環」)的各區域。通常，原生四鏈抗體包含六個HVR；三個位於VH中(H1、H2、H3)，且三個位於VL中(L1、L2、L3)。HVR一般包含來自高變環及/或來自「互補決定區」(CDR)的胺基酸殘基，後者具有最高的序列可變性及/或涉及抗原識別。例示性高變環出現在胺基酸殘基26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2)及96-101 (H3)處。(Chothia及Lesk,J. Mol. Biol. 196:901-917(1987))。例示性CDR (CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)出現在L1之胺基酸殘基24-34、L2之胺基酸殘基50-56、L3之胺基酸殘基89-97、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-65及H3之胺基酸殘基95-102處。(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))。高變區(HVR)亦稱為「互補決定區」(CDR)，且此等術語在本文中、在提及形成抗原結合區之可變區之部分時可互換使用。此特定區域已由Kabat等人, 美國衛生及人群服務部, 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」 (1983)及由Chothia等人,J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)描述，其中當彼此對照比較時，該等定義包括胺基酸殘基之重疊或子集。然而，涉及抗體或其變體之CDR之任何定義的應用意欲處於如本文中所定義及所用之術語的範疇內。涵蓋以上所引用參考文獻中之每一者所定義的CDR的適當胺基酸殘基如下闡述於表A中作為比較。包含特定CDR的精確殘基數目將視CDR序列及大小而變。在抗體之可變區胺基酸序列指定之情況下，熟習此項技術者可以常規方式判定哪些殘基包含特定CDR。 表A. CDR定義1
Figure 108107979-A0304-0001
 1 表A中之所有CDR定義之編號皆依據Kabat等人所闡述之編號慣例(參見下文)。2 如表A中所使用之含有小寫字母「b」之「AbM」係指如藉由Oxford Molecular之「AbM」抗體建模軟體所定義的CDR。
Kabat等人亦定義適用於任何抗體之可變區序列之編號系統。一般熟習此項技術者可將此「Kabat編號」系統明確地分配給任何可變區序列，而不依賴於超過序列本身的任何實驗資料。如本文所用，「Kabat編號」係指Kabat等人, 美國衛生及人群服務部, 「Sequence of Proteins of Immunological Interest」 (1983)所闡述之編號系統。除非另外說明，否則提及抗體可變區中之特定胺基酸殘基位置的編號係根據Kabat編號系統。
除VH中之CDR1以外，CDR通常包含形成高變環之胺基酸殘基。CDR亦包含「特異性決定殘基」或「SDR」，其為接觸抗原之殘基。SDR含於簡稱為-CDR或a-CDR之CDR區域內。例示性a-CDR (a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2及a-CDR-H3)出現在L1之胺基酸殘基31-34、L2之胺基酸殘基50-55、L3之胺基酸殘基89-96、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-58及H3之胺基酸殘基95-102處。(參見Almagro及Fransson,Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008))。除非另外指示，否則在本文中，根據Kabat等人之前述文獻對可變域中之HVR殘基及其他殘基(例如FR殘基)進行編號。
如本文所用，在抗原結合分子(例如抗體)之情形下，術語「親和力成熟 」係指衍生於參考抗原結合分子(例如藉由突變)之抗原結合分子，其與同參考抗體相同的抗原結合，較佳地同相同的抗原決定基結合；且與參考抗原結合分子相比對抗原具有更高親和力。親和力成熟通常涉及抗原結合分子之一或多個CDR中一或多個胺基酸殘基之修飾。通常，親和力成熟抗原結合分子與同初始參考抗原結合分子相同的抗原決定基結合。
「構架 」或「FR」係指除高變區(HVR)殘基之外的可變域殘基。可變域之FR通常由四個FR域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，在VH (或VL)中，HVR及FR序列一般按以下次序呈現：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
出於本文之目的，「受體人類構架 」為包含衍生於如以下所定義之人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架之胺基酸序列的構架。「衍生於」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之受體人類構架可包含人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化之數目為10個或更少、9個或更少、8個或更少、7個或更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少或2個或更少。在一些實施例中，VL受體人類構架與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架序列在序列上一致。
術語「嵌合 」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分來源於特定來源或物種，同時重鏈及/或輕鏈之其餘部分來源於不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別 」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區的類型。存在五種主要類別之抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干者可進一步分成子類(同型)，例如IgG1 、IgG2 、IgG3 、IgG4 、IgA1 及IgA2 。對應於不同類別之免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
「人類化 」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基之嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含至少一個，且通常兩個可變域之實質上全部可變域，其中HVR之全部或實質上全部可變域(例如，CDR)對應於非人類抗體之彼等，且FR之全部或實質上全部對應於人類抗體之彼等。人類化抗體視情況可包含源自人類抗體之抗體恆定區的至少一部分。抗體(例如非人類抗體)之「人類化形式 」係指已經歷人類化之抗體。本發明涵蓋之「人類化抗體」之其他形式為其中恆定區已經額外修飾或自原始抗體發生變化以產生根據本發明之特性(尤其在C1q結合及/或Fc受體(FcR)結合方面)之彼等抗體。
「人類 」抗體為胺基酸序列對應於由人類或人類細胞產生或來源於利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之抗體之胺基酸序列的抗體。人類抗體之此定義特別排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
術語「Fc域」或「Fc 區 」在本文中用於定義抗體重鏈中含有恆定區之至少一部分的C端區。該術語包括原生序列Fc區及變異Fc區。IgG Fc區包含IgG CH2及IgG CH3域。人類IgG Fc區之「CH2域」通常自約位置231處之胺基酸殘基延伸至約位置340處之胺基酸殘基。在一個實施例中，碳水化合物鏈與CH2域連接。本文中，CH2域可為原生序列CH2域或變異CH2域。「CH3域」包含Fc區中殘基C端至CH2域之延伸段(亦即IgG之約位置341處之胺基酸殘基至約位置447處之胺基酸殘基)。本文中之CH3區可為原生序列CH3域或變異CH3域(例如在其一條鏈中具有引入的「隆凸」(「杵」)及在其另一條鏈中具有對應引入的「凹穴」(「臼」)之CH3域；參見美國專利第5,821,333號，其明確地以引用之方式併入本文中)。此類變異CH3域可用於促進如本文中所描述之兩個非一致抗體重鏈之雜二聚化。在一個實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226、或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc區之C端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非本文另外規定，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所描述。
「杵 - 臼 」技術描述於例如US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway等人, Prot Eng 9, 617-621 (1996)及Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)中。一般而言，方法涉及在第一多肽之界面處引入隆凸(「杵」)及在第二多肽之界面處引入對應凹穴(「臼」)，使得隆凸可定位於凹穴中以便促進雜二聚體形成且阻礙均二聚體形成。藉由用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)置換第一多肽界面中之小胺基酸側鏈來構築隆凸。大小與隆凸相同或類似之補償性凹穴係在第二多肽之界面中藉由用較小胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)置換大胺基酸側鏈來產生。隆凸及凹穴可藉由改變編碼多肽之核酸，例如藉由定點突變誘發或藉由肽合成來製備。在一具體實施例中，杵修飾包含Fc域之兩個次單元中之一者中的胺基酸取代T366W，且臼修飾包含Fc域之兩個次單元中之另一者中的胺基酸取代T366S、L368A及Y407V。在另一具體實施例中，包含杵修飾之Fc域之次單元另外包含胺基酸取代S354C，且包含臼修飾之Fc域之次單元另外包含胺基酸取代Y349C。引入此等兩個半胱胺酸殘基使得Fc區之兩個次單元之間形成二硫橋鍵，由此進一步穩定二聚體(Carter, J Immunol Methods 248, 7-15 (2001))。
「與免疫球蛋白之Fc區等效之區」意欲包括免疫球蛋白之Fc區之天然存在之等位基因變體以及具有變化之變體，該等變化產生取代、添加或缺失，但不實質上降低免疫球蛋白介導效應功能(諸如抗體依賴性細胞毒性)之能力。舉例而言，免疫球蛋白之Fc區之N端或C端可缺失一或多個胺基酸而不實質性損失生物功能。此類變體可根據此項技術中已知的一般法則選擇以對活性具有最小影響(參見例如Bowie, J. U.等人, Science 247:1306-10 (1990))。
術語「效應功能 」係指可歸因於抗體之Fc區的彼等生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)、細胞介素分泌、免疫複合體介導之抗原呈遞細胞攝入抗原、下調細胞表面受體(例如B細胞受體)及B細胞活化。
「活化 Fc 受體 」為一種Fc受體，其與抗體之Fc區接合之後，引發信號傳導事件，此刺激攜帶受體之細胞執行效應功能。活化Fc受體包括FcγRIIIa (CD16a)、FcγRI (CD64)、FcγRIIa (CD32)及FcαRI (CD89)。特定活化Fc受體為人類FcγRIIIa (參見UniProt寄存編號P08637，版本141)。
「胞外域 」為膜蛋白中延伸至細胞外空間(亦即靶細胞外之空間)的域。胞外域通常為蛋白質中起始與表面之接觸(其引起信號轉導)之部分。因此，如本文所定義之4-1BBL之胞外域係指4-1BBL中延伸至細胞外空間(胞外域)中且亦包括負責三聚化及與對應受體4-1BB結合的較短部分或其片段的部分。因此，術語「4-1BBL之胞外域或其片段」係指4-1BBL中形成細胞外域的胞外域，或係指其仍能夠與受體結合的部分(受體結合域)。
「4-1BBL 」或「4-1BB 配體 」或「CD137L 」為能夠共刺激T細胞之增殖及細胞介素產生的共刺激TNF配體家族成員。TNF家族配體可在與其相應TNF受體相互相用時共刺激TCR信號，且與其受體之相互相用引起TNFR相關因子(TRAF)之募集，其起始引起T細胞活化之信號級聯。4-1BBL為II型跨膜蛋白。已描述具有SEQ ID NO: 62之胺基酸序列之完全或全長4-1BBL在細胞表面上形成三聚體。藉由4-1BBL之胞外域之特異性基元實現三聚體之形成。該等基元在本文中稱為「三聚化區」。人類4-1BBL序列(SEQ ID NO: 63)之胺基酸50-254形成4-1BBL之胞外域，但即使其片段亦能夠形成三聚體。在本發明之具體實施例中，術語「4-1BBL之胞外域或其片段」係指具有選自以下之胺基酸序列的多肽：SEQ ID NO: 4 (人類4-1BBL之胺基酸52-254)、SEQ ID NO: 1 (人類4-1BBL之胺基酸71-254)、SEQ ID NO: 3 (人類4-1BBL之胺基酸80-254)、SEQ ID NO: 2 (人類4-1BBL之胺基酸85-254)、SEQ ID NO: 5 (人類4-1BBL之胺基酸71-248)、SEQ ID NO: 6 (人類4-1BBL之胺基酸85-248)、SEQ ID NO: 7 (人類4-1BBL之胺基酸80-248)及SEQ ID NO: 8(人類4-1BBL之胺基酸52-248)，胞外域中能夠三聚化之其他片段且亦包括於本文中。
除非另外指示，否則如本文所用之術語「4-1BB 」或「CD137 」係指來自任何脊椎動物來源(包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)的任何原生4-1BB。該術語涵蓋「全長」未加工4-1BB以及由細胞中之加工產生的任何4-1BB形式。該術語亦涵蓋天然存在之4-1BB變體，例如剪接變體或等位基因變體。例示性人類4-1BB之胺基酸序列顯示於SEQ ID NO: 88 (Uniprot寄存編號Q07011)中，例示性鼠類4-1BB之胺基酸序列顯示於SEQ ID NO: 89 (Uniprot寄存編號P20334)中，且例示性獼猴4-1BB (來自恆河猴)之胺基酸序列顯示於SEQIDNO: 66 (Uniprot寄存編號F6W5G6)中。
術語「抗 -4-1BB 抗體 」、「抗-4-1BB」、「4-1BB抗體」及「與4-1BB特異性結合之抗體」係指能夠以足夠親和力結合4-1BB以使得抗體在靶向4-1BB時適用作診斷劑及/或治療劑之抗體。在一個實施例中，抗-4-1BB抗體與無關非-4-1BB蛋白之結合程度小於該抗體與4-1BB之結合的約10%，如例如藉由放射免疫分析(RIA)或流式細胞測量術(FACS)所量測。在某些實施例中，與4-1BB結合之抗體具有≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10-6 M 或更少，例如10-68 M至10-13 M，例如10-8 M至10-10 M)之解離常數(KD )。
術語「HER-2 」，亦稱為「ErbB2」、「ErbB2受體」或「c-Erb-B2」，係指由細胞中之HER-2前驅蛋白之加工產生的任何原生成熟HER-2。除非另外指示，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類及食蟹獼猴)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)之HER-2。該術語亦包括天然存在之HER-2變體，例如剪接變體或等位基因變體。例示性人類HER-2蛋白之胺基酸序列顯示於SEQ ID NO: 95中。
術語「肽連接子 」係指包含一或多個胺基酸(通常約2至20個胺基酸)的肽。肽連接子在此項技術中已知或描述於本文中。合適的非免疫原性連接肽為例如(G4 S)n 、(SG4 )n 或G4 (SG4 )n 肽連接子，其中「n」一般為介於1與10之間，通常介於2與4之間，特定言之為2之數字，亦即肽選自由以下組成之群：GGGGS (SEQIDNO: 67)、GGGGSGGGGS (SEQIDNO: 68)、SGGGGSGGGG (SEQIDNO: 69)及GGGGSGGGGSGGGG (SEQIDNO: 70)，且亦包括序列GSPGSSSSGS (SEQIDNO: 71)、(G4S)3 (SEQ ID NO: 72)、(G4S)4 (SEQIDNO: 73)、GSGSGSGS (SEQIDNO: 74)、GSGSGNGS (SEQIDNO: 75)、GGSGSGSG (SEQIDNO: 76)、GGSGSG (SEQIDNO: 77)、GGSG (SEQIDNO: 78)、GGSGNGSG (SEQIDNO: 79)、GGNGSGSG (SEQIDNO: 80)以及GGNGSG (SEQIDNO: 81)。備受關注之肽連接子為(G4S) (SEQ ID NO: 67)、(G4 S)2 及GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 68)。
如本申請案內所用之術語「胺基酸 」表示天然存在之羧基α-胺基酸之群，其包含丙胺酸(三字母代碼：ala，一字母代碼：A)、精胺酸(arg，R)、天冬醯胺(asn，N)、天冬胺酸(asp，D)、半胱胺酸(cys，C)、麩醯胺酸(gln，Q)、麩胺酸(glu，E)、甘胺酸(gly，G)、組胺酸(his，H)、異白胺酸(ile，I)、白胺酸(leu，L)、離胺酸(lys，K)、甲硫胺酸(met，M)、***酸(phe，F)、脯胺酸(pro，P)、絲胺酸(ser，S)、蘇胺酸(thr，T)、色胺酸(trp，W)、酪胺酸(tyr，Y)及纈胺酸(val，V)。
「融合」或「連接」意謂，組分(例如4-1BBL之多肽及胞外域)藉由肽鍵直接連接，或經由一或多個肽連接子連接。
相對於參考多肽(蛋白質)序列之「胺基酸序列一致性 百分比 (%) 」定義為在比對序列且視需要引入間隙以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將任何保守性取代視為序列一致性之一部分的情況下，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基的百分比。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目的之比對可以此項技術內之各種方式達成，例如使用公開可用之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN. SAWI或Megalign (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可判定適用於比對序列之參數，包括在所比較序列之全長內達成最大比對所需的任何演算法。然而，出於本文之目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2，產生胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程式由Genentech, Inc.設計，且原始程式碼已在U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559申請用戶文檔，其在此註冊在美國版權註冊第TXU510087號下。ALIGN-2程式可公開獲自Genentech, Inc., South San Francisco, California或可自原始程式碼編輯。ALIGN-2程式經編譯可用於UNIX操作系統，包括數位UNIX V4.0D。所有序列比較參數均由ALIGN-2程式設定且不變化。在使用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情形下，既定胺基酸序列A與既定胺基酸序列B (或者，其可表述為與既定胺基酸序列B具有或包含一定胺基酸序列一致性%的既定胺基酸序列A)之胺基酸序列一致性%如下計算： 100乘以分數X/Y 其中X為在A與B之比對程式中藉由序列比對程程式ALIGN-2評為一致匹配之胺基酸殘基之數目，且其中Y為B中之胺基酸殘基之總數目。應瞭解，在胺基酸序列A之長度與胺基酸序列B之長度不相等之情況下，A相對於B之胺基酸序列一致性%與B相對於A之胺基酸序列一致性%將不相等。除非另外特定陳述，否則本文所用之所有胺基酸序列一致性%值如緊接前述段落中所描述使用ALIGN-2電腦程式獲得。
在某些實施例中，涵蓋本文提供之抗原結合分子之胺基酸序列變體 。舉例而言，可能需要改良抗原結合分子之結合親和力及/或其他生物特性。抗原結合分子之胺基酸序列變體可藉由將適當修飾引入至編碼分子之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。此類修飾包括例如抗體之胺基酸序列內的殘基缺失及/或***及/或取代。可進行缺失、***及取代之任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有所需特徵，例如抗原結合。用於取代型突變誘發之所關注位點包括HVR及構架(FR)。保守性取代提供於表C中標題「較佳取代」下且在下文中參考胺基酸側鏈類別(1)至(6)進一步描述。可將胺基酸置換引入至所關注之分子中，且針對所需活性進行篩選之產物例如保持/改良抗原結合或減少免疫原性，或改良ADCC或CDC。 表B
Figure 108107979-A0304-0002
胺基酸可根據共有側鏈特性進行分組： (1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3)酸性：Asp、Glu； (4)鹼性：His、Lys、Arg； (5)影響鏈取向之殘基：Gly、Pro； (6)芳族性：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代將引起此等類別中之一者之成員換成另一個類別。
術語「胺基酸序列變體 」包括其中在母體抗原結合分子(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基中存在胺基酸取代的實質性變體。一般而言，所選擇之用於進一步研究之所得變體與母體抗原結合分子相比將具有某些生物特性之修飾(例如改良) (例如提高之親和力、降低之免疫原性)及/或將實質上保留母體抗原結合分子之某些生物特性。一種示例性取代型變體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所描述之彼等技術)便利地產生。簡言之，一或多個CDR殘基發生突變且變異抗原結合分子呈現於噬菌體上且針對特定生物活性(例如結合親和力)進行篩檢。在某些實施例中，取代、***或缺失可出現於一或多個CDR內，只要此類改變不實質上降低抗原結合分子結合抗原之能力即可。舉例而言，不實質上降低結合親和力之保守改變(例如，如本文所提供之保守取代)可以在CDR中進行。一種適用於鑑別可作為突變誘發之靶標之抗體之殘基或區域的方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如Cunningham及Wells (1989)Science , 244:1081-1085所描述。在此方法中，鑑別一個或一組靶標殘基(例如，帶電殘基，諸如Arg、Asp、His、Lys及Glu)，且用中性或帶負電胺基酸(例如，丙胺酸或聚丙胺酸)置換以判定抗體與抗原之相互作用是否受影響。可在對初始取代展現功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代。可替代地或另外，抗原-抗原結合分子複合物之晶體結構用以鑑別抗體與抗原之間的接觸點。此類接觸殘基及鄰近殘基可作為取代候選物之靶標或排除在取代候選物之外。可篩檢變體以判定其是否含有所需特性。
胺基酸序列***包括長度在一個殘基至含有一百個或多於一百個殘基之多肽範圍內的胺基端及/或羧基端融合，以及單個或多個胺基酸殘基之序列內***。末端***之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗原結合分子。分子之其他***型變體包括N或C端與多肽之融合，此延長抗原結合分子之血清半衰期。
在某些實施例中，本文提供之抗原結合分子經改變以提高或降低抗體經糖基化之程度。可藉由改變胺基酸序列使得產生或移除之一或多個糖基化位點來便利地獲得分子之糖基化變體。在抗原結合分子包含Fc區之情況下，可改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之原生抗體通常包含分支鏈雙觸角寡醣，其一般藉由N鍵與Fc區之CH2域的Asn297連接。參見例如Wright等人TIBTECH 15:26-32 (1997)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及連接至雙觸寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中，可對抗原結合分子中之寡醣進行修飾以便產生具有某些改良特性之變體。在一個態樣中，提供具有缺乏與Fc區(直接或間接)連接之岩藻糖之碳水化合物結構的抗原結合分子的變體。此類岩藻糖基化變體可具有改良之ADCC功能，參見例如美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta, L.)或US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)。本發明之抗原結合分子之其他變體包括具有平分寡醣之變體，例如其中與Fc區連接之雙觸角寡醣經GlcNAc平分。此類變體可具有降低之岩藻糖基化及/或改良之ADCC功能，參見例如WO 2003/011878 (Jean-Mairet等人)；美國專利第6,602,684號(Umana等人)；及US 2005/0123546 (Umana等人)。亦提供寡醣中之至少一個半乳糖殘基與Fc區連接之抗體變體。該等抗體變體可具有改良之CDC功能且描述於例如WO 1997/30087 (Patel等人)；WO 1998/58964 (Raju, S.)；及WO 1999/22764 (Raju, S.)中。
在某些實施例中，可能需要產生本發明之抗原結合分子之半胱胺酸工程改造的變體 ，例如「thioMAb」，其中該分子之一或多個殘基被半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代之殘基存在於分子之可達位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，藉此將反應性硫醇基安置於抗體之可達位點處，且可用於使抗體與其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)結合以產生免疫結合物。在某些實施例中，以下殘基中之任一者或多者可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205 (Kabat編號)；重鏈之A118 (EU編號)；及重鏈Fc區之S400 (EU編號)。半胱胺酸工程改造之抗原結合分子可例如美國專利第7,521,541號中所描述產生。
在某些態樣中，本文所提供之抗原結合分子可進一步經修飾以含有為此項技術中已知且可容易獲得之額外非蛋白質部分。適用於抗體之衍生化之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、聚葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及聚葡萄糖或聚(N-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛因其在水中之穩定性而可能在製造中具有優勢。聚合物可具有任何分子量，且可為分支鏈或未分支鏈的。與抗體連接之聚合物的數目可變化，且若連接多於一個聚合物，則聚合物可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生化之聚合物之數目及/或類型可基於包括(但不限於)待改良抗體之特定特性或功能、雙特異性抗體衍生物是否將用於限定條件下之療法等考慮因素來判定。在另一態樣中，提供抗體與可藉由暴露於輻射來選擇性地加熱之非蛋白質部分之結合物。在一個實施例中，非蛋白質部分為碳奈米管(Kam, N.W.等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102 (2005) 11600-11605)。輻射可具有任何波長，且包括(但不限於)不損害普通細胞但將非蛋白質部分加熱至殺死抗體-非蛋白質部分近側之細胞之溫度的波長。在另一態樣中，可獲得本文所提供之含4-1BBL抗原結合分子之免疫結合物。「免疫結合物 」為與一或多個異源分子，包括(但不限於)細胞毒性劑結合之抗體。
術語「聚核苷酸 」係指經分離核酸分子或構築體，例如信使RNA (mRNA)、病毒源性RNA或質體DNA (pDNA)。聚核苷酸可包含習知磷酸二酯鍵或非習知鍵(例如醯胺鍵，諸如肽核酸(PNA)中所發現)。術語「核酸分子」係指聚核苷酸中存在之任一或多個核酸區段，例如DNA或RNA片段。
「經分離 」核酸分子或聚核苷酸意指已自其原生環境中移出的核酸分子、DNA或RNA。舉例而言，出於本發明之目的，編碼載體中所含之多肽的重組聚核苷酸視為經分離的。經分離聚核苷酸的其他實例包括異源宿主細胞中所維持之重組聚核苷酸或溶液中經純化(部分或實質上)之聚核苷酸。經分離聚核苷酸包括通常含有聚核苷酸分子之細胞中所含的聚核苷酸分子，但聚核苷酸分子存在於染色體外或存在於與其天然染色體位置不同之染色體位置處。經分離RNA分子包括本發明之活體內或活體外RNA轉錄物，以及正股及負股形式，及雙股形式。根據本發明之經分離聚核苷酸或核酸進一步包括以合成方式產生之此類分子。另外，聚核苷酸或核酸可為或可包括調節元件，諸如啟動子、核糖體結合位點或轉錄終止子。
一種核酸或聚核苷酸的核苷酸序列與本發明之參考核苷酸序列具有至少例如95%「一致」，意指該聚核苷酸之核苷酸序列與參考序列一致，但該聚核苷酸序列相對於參考核苷酸序列可每100個核苷酸中包括至多五個點突變。換言之，為了獲得核苷酸序列與參考核苷酸序列至少95%一致的聚核苷酸，參考序列中至多5%的核苷酸可缺失或經另一核苷酸取代，或參考序列中可***佔參考序列核苷酸總數至多5%的多個核苷酸。參考序列之此等變化可發生於參考核苷酸序列之5'或3'末端位置或此等末端位置之間的任何位置，此等位置個別地散佈於參考序列中之殘基中或參考序列內之一或多個相鄰基團中。實際上，可使用已知電腦程式，諸如上文關於多肽所論述之一者(例如ALIGN-2)，習知地測定任何特定聚核苷酸序列是否與本發明之核苷酸序列為至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致。
術語「表現盒 」係指以重組或合成方式產生之聚核苷酸，其具有容許特定核酸在靶細胞中發生轉錄的一系列特定核酸元件。重組表現盒可併入質體、染色體、粒線體DNA、質體DNA、病毒或核酸片段中。通常，表現載體之重組表現盒部分包括待轉錄之核酸序列及啟動子，以及其他序列。在某些實施例中，本發明之表現盒包含編碼本發明之雙特異性抗原結合分子或其片段的聚核苷酸序列。
術語「載體 」或「表現載體」與「表現構築體」同義，且係指用於引入特定基因且引導該基因表現的DNA分子，該DNA分子與該基因在靶細胞中可操作地連接。該術語包括作為自我複製核酸結構之載體以及併入至已引入其之宿主細胞之基因組中的載體。本發明之表現載體包含表現盒。表現載體允許大量的穩定mRNA發生轉錄。一旦表現載體進入靶細胞內，則藉由細胞轉錄及/或轉譯機制產生由該基因編碼的核糖核酸分子或蛋白質。在一個實施例中，本發明之表現載體包含表現盒，該表現盒包含編碼本發明之雙特異性抗原結合分子或其片段的聚核苷酸序列。
術語「宿主細胞 」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用，且係指已引入外源核酸之細胞，包括此類細胞之後代。宿主細胞包括「轉化體」及「經轉化的細胞」，其包括初代轉化細胞及自其衍生之後代(不考慮繼代次數)。後代之核酸含量與母細胞可能不完全相同，但可能含有突變。本文包括針對原始轉化細胞篩檢或選擇具有相同功能或生物活性之突變型後代。宿主細胞為可用於產生本發明之雙特異性抗原結合分子之任何類型的細胞系統。宿主細胞包括培養細胞，例如哺乳動物培養細胞，諸如CHO細胞、BHK細胞、NS0細胞、SP2/0細胞、YO骨髓瘤細胞、P3X63小鼠骨髓瘤細胞、PER細胞、PER.C6細胞或融合瘤細胞、酵母細胞、昆蟲細胞及植物細胞(僅舉數例)，且亦包括轉殖基因動物、轉殖基因植物或培養植物或動物組織內所含的細胞。
藥劑之「有效量 」係指在所投與之細胞或組織中產生生理變化所需的量。
根據本發明之組合療法具有協同效應。兩種化合物之「協同效應 」係指兩種藥劑之組合之效應大於其個別效應之總和且在統計學上不同於對照物及單一藥物。在另一實施例中，本文中所揭示之組合療法具有相加效應。兩種化合物之「相加效應 」係指兩種藥劑之組合之效應為其個別效應之總和且在統計學上不同於對照物及單一藥物。
藥劑，例如醫藥組合物之「治療有效量 」係指在劑量及必需時間段下，有效達成所需治療性或防治性結果的量。治療有效量之藥劑例如消除、減少、延遲、最小化或預防疾病之副作用。
「個體 (individual/subject)」為哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)馴養動物(例如牛、羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。特定言之，個體(individual/subject)為人類。
術語「醫藥組合物 」係指所呈形式允許其中所含活性成分之生物活性有效發揮的製劑，且其不含對調配物將投與之個體具有不可接受毒性之其他組分。
「醫藥學上可接受之載劑 」係指醫藥組合物中之除活性成分之外的對個體無毒的成分。醫藥學上可接受之賦形劑包括(但不限於)緩衝劑、穩定劑或防腐劑。
術語「藥品說明書 」用以指通常包括於治療性產品之商業包裝中的說明書，其含有關於與使用此類治療性產品有關之適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症及/或警告的資訊。
如本文所用，「治療 (treatment)」(及其語法變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療個體之自然病程的臨床介入且可出於防治目的或在臨床病理學之病程期間進行。所需治療效果包括(但不限於)預防疾病發生或復發，緩解症狀，減輕疾病之任何直接或間接病理性結果，預防癌轉移，減緩疾病進展速率，改善或緩和疾病病況及緩解或改良預後。在一些實施例中，本發明之分子用於延遲疾病發展或減慢疾病之進展。
術語「癌症 」及「癌性」係指或描述哺乳動物中特徵通常為不受調控之細胞生長之生理學病狀，亦即增殖性疾病，諸如實體腫瘤或黑素瘤。「腫瘤」包含一或多種癌細胞。如本文所用，術語「實體腫瘤」係指通常不含有囊腫或液體區域之異常組織塊。實體腫瘤可為良性或惡性的。癌症之實例包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴惡性疾病。更特定而言，此類癌症之實例包括乳癌；鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌(「NSCLC」)、肺腺癌及肺鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃癌，包括胃腸癌；胰臟癌；神經膠母細胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；肝腫瘤；乳癌；結腸癌；直腸癌；結腸直腸癌；子宮內膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎癌；***癌；外陰癌；甲狀腺癌；肝癌；肛門癌；陰莖癌以及頭頸癌。在一較佳實施例中，癌症為乳癌。在另一較佳實施例中，癌症為胃癌。
提及腫瘤或癌症為「階段0」、「階段I」、「階段II」、「階段III」或「階段IV」及此分類中之多種子階段，指示使用此項技術中已知之總體階段分組或羅馬數字分級方法，對腫瘤或癌症的分類。儘管癌症之實際階段視癌症類型而定，一般而言，階段0癌症為原位病變，階段I癌症為小的局部腫瘤，階段II及III癌症為呈現涉及局部淋巴結之局部晚期腫瘤，且階段IV癌症表示轉移癌。各腫瘤類型之特定階段為熟習臨床醫師已知的。
術語「轉移性乳癌 」意謂乳癌狀態，其中藉由血管或***，癌細胞自初始位點傳輸至體內一或多個其他位點，在除***以外之一或多個器官中形成一或多個繼發性腫瘤。
「晚期」癌症為藉由局部侵襲或癌轉移已在起始位點或器官之外部擴散的癌症。因此，術語「晚期」癌症包括局部晚期及轉移性疾病兩者。「難治性」癌症為即使向癌症患者投與抗腫瘤劑(諸如化療)，仍進展的癌症。難治性癌症之實例為鉑難治性癌症。「復發性」癌症為在對初始治療，諸如手術起反應後，在初始位點或遠距離位點處已再生長的癌症。「局部復發性」癌症為治療後在與先前經治療的癌症相同的位置處再出現的癌症。「可手術」或「可切除」癌症為被限制於初始器官且適合於手術(切除)的癌症。「不可切除」或「不可切除性」癌症不能夠藉由手術移除(切除)。
「呈現HER表現、擴增或活化」之癌症或生物樣本為，在診斷性測試中，表現(包括過表現) HER受體，擴增HER基因及/或另外表現HER受體之活化或磷酸化的癌症或生物樣本。
術語「HER-2陽性」及「表現HER-2」在本文中互換使用。「HER-2陽性」癌症包含具有高於正常HER-2水準之癌細胞。HER-2陽性癌症之實例包括HER-2陽性乳癌及HER2陽性胃癌。視情況，HER2陽性為過度表現HER-2之癌症，且在某些實施例中，HER-2陽性癌症具有2+或3+之免疫組織化學(HC)評分及/或≥2.0之原位雜交(ISH)擴增比率。
使用與螢光、發色或銀偵測系統(亦即，FISH、CISH或SISH)、或CISH與SISH系統(亮場雙重ISH (BDISH)或雙重半抗原、雙色ISH (DDISH))之組合偶聯之DNA探針，原位雜交(ISH)測定her2 複本的數目。可使用僅計數her2 複本/細胞核之單一探針，或根據其中染色體17著絲點探針(染色體計數探針17，CEP17)之雜交允許測定her2 :CEP17比率的雙探針技術，來進行ISH。可根據雙色技術，用同一載玻片上之兩個探針之共雜交，或根據在依序載玻片上使用各探針之單色分析，來進行雙探針方法。her2 :CEP17比率有時被視為對her2 擴增狀態而非平均her2 複本數的較佳反映，此係由於後者亦視其他參數而定，諸如腫瘤之有絲***指數、切片厚度、細胞核截短效果及異常染色體複本數(異倍體)。片語「原位雜交(ISH)擴增比率≥2.0」係指her2 :CEP17比率≥2.0。關於其他細節，參見例如Sauter G等人 Guidelines for human epidermal growth factor receptor 2 testing: biologic and methodologic considerations.J Clin Oncol 2009; 27: 1323-1333，及Hanna等人之綜述文章Modern Pathology (2014) 27, 4-18。
在本文中，「患者」或「個體」為人類患者。患者可為「癌症患者」，亦即罹患癌症(特定言之胃癌或乳癌)之一或多個症狀或處於罹患該癌症之一或多個症狀之風險下的患者。
「患者群體 」係指一群癌症患者。此類群體可用於顯示藥物(諸如帕妥珠單抗)之統計學上顯著功效及/或安全性。「復發」患者為在緩解之後具有癌症之跡象或症狀的患者。視情況，患者在輔助或新輔助療法之後復發。
「新輔助療法 」或「手術前療法」在本文中係指在手術之前給予之療法。新輔助療法之目標是為了提供即刻全身性治療，潛在地根除當遵循標準手術順序隨後全身性療法時將另外增殖之微小轉移灶。新輔助療法亦可幫助減小腫瘤大小，從而允許完全切除最初不可切除性腫瘤或保存器官之部分及其功能。此外，新輔助療法准許活體內評定藥物功效，其可指導選擇隨後治療。
「輔助療法 」在本文中係指在其中不能偵測到殘餘疾病之跡象之決定性手術之後給予，以便降低疾病復發之風險的療法。輔助療法之目標是為了預防癌症復發，且因此降低癌症相關死亡之機率。本文中之輔助療法特別排除新輔助療法。
「化學療法 」係指使用適用於治療癌症之化學治療劑。
「化學治療劑 」為與作用機制無關之適用於治療癌症的化合物。化學治療劑之類別包括(但不限於)：烷基化劑、抗代謝物、紡錘體毒素植物鹼、細胞毒性/抗腫瘤抗生素、拓樸異構酶抑制劑、抗體、光敏劑及激酶抑制劑。
除非另外指示，否則術語「CD20 」係指B淋巴球抗原CD20，亦稱為B淋巴球表面抗原B1或白血球表面抗原Leu-16，且包括來自任何脊椎動物來源(包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)、非人類靈長類動物(例如食蟹獼猴)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠))之任何原生CD20。人類CD20之胺基酸序列顯示於Uniprot寄存編號P11836 (版本149，SEQ ID NO: 85)中。CD20為表現於前B及成熟B淋巴球上之分子量為大致35 kD的疏水性跨膜蛋白。對應的人類基因為膜跨越4域，子族A，成員1，亦稱為MS4A1。此基因編碼膜跨越4A基因家族之一員。此初生蛋白家族之成員之特徵為常見結構特徵及類似的內含子/外顯子剪接界限且在造血細胞及非淋巴組織中呈現獨特的表現模式。此基因編碼B淋巴球表面分子，其在B細胞發育且分化為漿細胞之過程中發揮作用。在家族成員之叢集中，此家族成員侷限於11q12。此基因之替代性剪接產生編碼相同蛋白質之兩個轉錄變體。術語「CD20」涵蓋「全長」的未加工CD20以及由細胞中之加工產生的任何CD20形式。該術語亦涵蓋天然存在之CD20變體，例如剪接變體或等位基因變體。
術語「抗 -CD20 抗體 」及「與CD20結合之抗體」係指能夠以足夠親和力結合CD20以使得該抗體適用作靶向CD20之診斷劑及/或治療劑之抗體。在一個實施例中，抗-CD20抗體與無關非CD20蛋白之結合程度小於該抗體與CD20之結合的約10%，如例如藉由放射免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中，與CD20結合之抗體具有≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10-8 M或更少，例如10-8 M至10-13 M，例如10-9 M至10-13 M)之解離常數(Kd)。在某些實施例中，抗-CD20抗體與在來自不同物種之CD20中保守的CD20抗原決定基結合。
「II 型 抗 -CD20 抗體 」意謂如Cragg等人, Blood 103 (2004) 2738-2743；Cragg等人, Blood 101 (2003) 1045-1052，Klein等人, mAbs 5 (2013), 22-33中所描述的具有II型抗-CD20抗體之結合特性及生物活性的抗-CD20抗體。II型抗-CD20抗體與CD20上之II類抗原決定基結合，其不使CD20定位於脂筏，顯示ADCC活性但低CDC (若其為IgG1同型抗體)，相較於與I類CD20抗原決定基結合之抗體，具有與B細胞之較低結合力，顯示同型聚集及強死亡誘導。II型抗-CD20抗體之實例包括例如奧濱尤妥珠單抗(obinutuzumab；GA101)、托斯圖單抗(tositumumab；B1)、人類化B-Ly1抗體IgG1 (揭示於WO 2005/044859中之嵌合人類化IgG1抗體)、11B8 IgG1 (揭示於WO 2004/035607中)及AT80 IgG1。在一特定態樣中，II型抗-CD20抗體為奧濱尤妥珠單抗(INN, WHO Drug Information, 第26卷, 第4期, 2012,第453頁所推薦)。如本文中所用，奧濱尤妥珠單抗為GA101之同物異名。商品名為GAZYVA®或GAZYVARO®。此置換所有先前版本(例如，第25卷,第1期, 2011,第75-76頁)且以前被稱為阿夫妥珠單抗(afutuzumab) (INN, WHO Drug Information, 第23卷, 第2期, 2009, 第176頁; 第22卷, 第2期, 2008, 第124頁所推薦)。在一個態樣中，II型抗-CD20抗體為托西莫單抗(tositumomab)。
用於本發明中之例示性4-1BB促效劑 本發明係關於4-1BB促效劑及其與HER-2靶向療法組合之用途，特定言之，其在用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中的用途。在一些實施例中，4-1BB促效劑及其與HER-2靶向療法組合之用途係用於治療實體腫瘤或延遲實體腫瘤之進展之方法中。
特定言之，如與HER-2靶向療法組合所使用之4-1BB促效劑為包含4-1BBL之分子。特定言之，用於本發明之4-1BB促效劑包含三個4-1BBL胞外域或其片段。
在一特定態樣中，4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段之分子，且其中該等4-1BBL胞外域包含選自由以下組成之群D胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8，特定言之SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5的胺基酸序列。
當4-1BB促效劑包含對腫瘤相關抗原(特定言之對癌細胞上或基質中之靶標)具有特異性之抗原結合域時，其尤其適用。因此，在一特定態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與纖維母細胞活化蛋白(FAP)或CEA特異性結合之至少一個抗原結合域。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與FAP特異性結合之抗原結合域包含： (a)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，或 (b)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在一特定態樣中，能夠與FAP特異性結合之抗原結合域包含：重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與FAP特異性結合之抗原結合域包含：含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或其中能夠與FAP特異性結合之抗原結合域包含：含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)。更特定言之，能夠與FAP特異性結合抗原結合域包含：含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子進一步包含由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域。在一個態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域。特定言之，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能的一或多個胺基酸取代的Fc域。在一特定態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含含有胺基酸取代L234A、L235A及P329G之IgG1 Fc域。
在一個態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
在一特定態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於： (i)分別地，第一多肽含有CH1或CL域及第二多肽含有CL或CH1域，其中第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH1或CL域連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CL或CH1域連接，或 (ii)分別地，第一多肽含有CH3域及第二多肽含有CH3域，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH3域之C端連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該一個胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CH3域之C端連接，或 (iii)分別地，該第一多肽含有VH-CL或VL-CH1域及該第二多肽含有VL-CH1域或VH-CL域，其中該第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與VH或VL連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之VL或VH連接。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於，該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
在一特定態樣中，4-1BB促效劑為選自由以下組成之群的抗原結合分子： a)分子，其包含含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第二輕鏈；及 b)分子，其包含含有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的第二輕鏈。
特定言之，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第二輕鏈。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽。
在一個態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽，及 (c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成之Fc域，其中包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽視情況經由肽連接子與Fc域之兩個次單元中之一者的N端或C端胺基酸融合。
特定雙特異性抗體描述於PCT公開案第WO 2016/075278 A1號中或PCT公開案第WO 2016/156291A1號中。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗-FAP/抗-4-1BB雙特異性抗體。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與CEA特異性結合之抗原結合域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與CEA特異性結合之抗原結合域包含：含有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的重鏈可變區(VH CEA)及含有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL CEA)。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子進一步包含由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域。在一個態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域。特定言之，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能的一或多個胺基酸取代的Fc域。在一特定態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含含有胺基酸取代L234A、L235A及P329G之IgG1 Fc域。
在一個態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
在一特定態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於： (i)分別地，第一多肽含有CH1或CL域及第二多肽含有CL或CH1域，其中第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH1或CL域連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CL或CH1域連接，或 (ii)分別地，第一多肽含有CH3域及第二多肽含有CH3域，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH3域之C端連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該一個胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CH3域之C端連接，或 (iii)分別地，該第一多肽含有VH-CL或VL-CH1域及該第二多肽含有VL-CH1域或VH-CL域，其中該第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與VH或VL連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之VL或VH連接。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於，該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
在一特定態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 82之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 83之胺基酸序列的第二輕鏈。
在另一態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽。
在一個態樣中，4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽，及 (c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成之Fc域，其中包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽視情況經由肽連接子與Fc域之兩個次單元中之一者的N端或C端胺基酸融合。
在另一態樣中，4-1BB促效劑包含抗CEA/抗-4-1BB雙特異性抗體。
靶向HER-2之藥劑 在本發明之態樣中，本文所描述之4-1BB促效劑與HER-2靶向療法組合使用。
在本發明之一些態樣中，4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用。在一些實施例中，藥劑與HER-2相互作用。在一些實施例中，藥劑為HER-2拮抗劑。在一些態樣中，該HER-2靶向劑包含HER-2抗體、雙特異性HER-2抗體及/或HER-2抗體藥物結合物。在一些實施例中，藥劑為抗體或抗原結合片段，特定言之抗HER-2抗體。在一些實施例中，藥劑為雙特異性HER-2抗體。在一些實施例中，藥劑為抗體-藥物結合物。
在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含選自由以下組成之群的HER-2抗體：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及馬戈妥昔單抗。在一個態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗或帕妥珠單抗。更特定言之，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗。在一些態樣中，HER-2靶向劑為經糖基工程改造之HER-2抗體，例如TrasGex。在一些態樣中，HER-2靶向劑為雙特異性HER-2抗體，例如Herceptarg。在一些態樣中，HER-2靶向劑為HER-2抗體藥物結合物，特定言之曲妥珠單抗恩他新(曲妥珠單抗-恩他新偶聯物)。
在一些態樣中，HER-2靶向劑包含含有SEQ ID NO: 96之重鏈可變域(VH)及SEQ ID NO: 97之輕鏈可變域(VL)之抗體。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含含有SEQ ID NO: 98之重鏈可變域(VH)及SEQ ID NO: 99之輕鏈可變域(VL)之抗體。
在一些實施例中，且對於本文所描述之任何用途，藥劑包含曲妥珠單抗(CAS 180288-69-1，HERCEPTIN®，huMAb4D5-8，rhuMAb HER2，Genentech)、帕妥珠單抗(rhuMAb 2C4，PERJETA®，Genentech, Inc, South San Francisco)或曲妥珠單抗恩他新(曲妥珠單抗-MCC-DMl，T-DMl，曲妥珠單抗-恩他新偶聯物，KADCYLA®)。在一些實施例中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些實施例中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些實施例中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合或由其組成。在一些實施例中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗及帕妥珠單抗之組合或由其組成。更特定言之，藥劑為曲妥珠單抗。
曲妥珠單抗為重組DNA源性IgG1 κ單株抗體，其為鼠類抗HER-2抗體(4D5)之人類化版本，其在基於細胞之分析中以高親和力(Kd = 5 nM)選擇性地與HER-2之胞外域結合。曲妥珠單抗為具有鼠類4D5抗體(ATCC CRL 10463，根據布達佩斯條約(Budapest Treaty)，在1990年5月24日，寄存於美國菌種保藏中心，12301 Parklawn Drive, Rockville, Md. 20852)之抗原結合殘基或衍生自該抗體的抗體。例示性人類化4D5抗體包括如US 5821337中之huMAb4D5-l、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7及huMAb4D5-8 (HERCEPTIN®)。
帕妥珠單抗為基於人類IgG1(K)構架產生之重組人類化單株抗體，參見例如US 7560111。帕妥珠單抗與曲妥珠單抗之不同之處在於，輕鏈(相差12個胺基酸)及重鏈(相差30個胺基酸)之抗原決定基結合區。由於此等差異，帕妥珠單抗與HER2受體上之完全不同的抗原決定基結合。帕妥珠單抗與人類上皮細胞上之HER2受體之結合，防止其與HER受體家族之其他成員形成複合物(Agus等人, Cancer Cell 2:127-137 (2002))。藉由阻斷複合物形成，帕妥珠單抗防止配體對於複合物(例如，EGF及海瑞古林(heregulin))之生長刺激性效果。
曲妥珠單抗恩他新為一種其中曲妥珠單抗經由連接部分MCC與類美登素藥物部分DM1連接的抗體-藥物結合物(US 5208020；US 6441163)。藥物與抗體之比率或藥物負載在1至約8之整數值範圍內。曲妥珠單抗-MCC-DMl包括不同負載及連接的抗體-藥物結合物之所有混合物，其中1、2、3、4、5、6、7及8個藥物部分與抗體曲妥珠單抗共價連接(US 7097840；US 2005/0276812；US 2005/0166993)。平均藥物負荷為約3.5。
可以任何組合使用曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些實施例中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗及帕妥珠單抗。
如本文所用，術語「HER-2 靶向療法 」、「HER-2 靶向劑 」及「與 HER-2 相互作用之藥劑 」係指靶向HER-2 (ErbB2)受體酪胺酸激酶之一或多種藥劑。特定言之，該術語係指與HER-2選擇性結合之一或多種藥劑。藥劑可為抗體，特定言之單株抗體。在一些情況下，藥劑以高親和力，例如在nM或pM範圍中，選擇性地與HER-2結合。在一些情況下，藥劑與HER-2受體之胞外域結合。藥劑可引起：下調HER-2受體表現、抑制過表現HER-2蛋白之人類腫瘤細胞之增殖、增強針對過表現HER-2蛋白之腫瘤細胞的免疫募集及ADCC、及/或下調血管生成因子。在一些態樣中，HER-2靶向劑為經糖基工程改造之HER-2抗體，例如TrasGex。在一些態樣中，HER-2靶向劑為雙特異性HER-2抗體，例如Herceptarg。術語「抗 HER-2 抗體 」或「與人類HER-2結合之抗體」或「與人類HER-2特異性結合之抗體」或「拮抗性抗Her2」係指與人類HER-2特異性結合之抗體。抗體可以Kd值為＜10 nM、＜5 nM、＜2 nM、＜1 nM、＜0.5 nM或更低之結合親和力，結合人類HER-2抗原。結合親和力可使用標準結合分析，諸如表面電漿子共振技術(BIAcore®, GE-Healthcare Uppsala, Sweden)來測定。
用於本發明中之雙特異性抗體之製備 在某些態樣中，用於組合中之治療劑包含多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些態樣中，該等結合特異性係針對不同抗原的。在某些態樣中，該等結合特異性係針對相同抗原上之不同抗原決定基。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段。
用於製備多特異性抗體之技術包括(但不限於)：具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之重組共表達(參見Milstein及Cuello, Nature 305: 537 (1983))、WO 93/08829及Traunecker等人, EMBO J. 10: 3655 (1991))，及「杵-臼」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體亦可如下製備：用於製備抗體Fc-雜二聚分子之工程改造靜電導向效應(WO 2009/089004A1)；使兩種或更多種抗體或片段交聯(參見例如美國專利第4,676,980號及Brennan等人, Science, 229: 81 (1985))；使用白胺酸拉鏈產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人, J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992))；使用用於製備雙特異性抗體片段之「雙功能抗體」技術(參見例如Hollinger等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993))；及使用單鏈Fv (sFv)二聚體(參見例如Gruber等人, J. Immunol., 152:5368 (1994))；及如例如Tutt等人, J. Immunol. 147: 60 (1991)中所秒述製備三特異性抗體。
本文亦包括經工程改造的具有三個或更多個功能性抗原結合位點的抗體(包括「章魚抗體」) (參見例如US 2006/0025576A1)。
本文中之抗體或片段亦包括包含與兩個不同抗原結合之抗原結合位點的「雙作用FAb」或「DAF」(參見例如US 2008/0069820)。本文中亦包括「互換單抗(Crossmab)」抗體(參見例如WO 2009/080251、WO 2009/080252、WO2009/080253或WO2009/080254)。
用於製備雙特異性抗體片段之另一技術為「雙特異性T細胞接合子」或BiTE®方法(參見例如WO2004/106381、WO2005/061547、WO2007/042261及WO2008/119567)。此方法利用排列於單一多肽上之兩個抗體可變域。舉例而言，單一多肽鏈包括兩個單鏈Fv (scFv)片段，各自具有藉由長度足以允許兩個域之間的分子內結合的多肽連接體分隔的可變重鏈(VH)域及可變輕鏈(VL)域。此單一多肽進一步包含兩個scFv片段之間的多肽間隔序列。各scFv識別不同抗原決定基，且此等抗原決定基可對不同細胞類型具有特異性，以使得當各scFv與其同源抗原決定基接合時兩個不同細胞類型之細胞接近或經繫栓。此方法之一個特定實施例包括識別與另一scFv連接之由免疫細胞表現之細胞表面抗原(例如T細胞上之CD3多肽)的scFv，該另一scFv識別由靶細胞(諸如惡性或腫瘤細胞)表現之細胞表面抗原。
由於其為單一多肽，所以可使用此項技術中已知之任何原核或真核生物細胞表現系統(例如CHO細胞株)，來表現雙特異性T細胞接合子。然而，特定純化技術(參見例如EP1691833)可為將單體雙特異性T細胞接合子與其他多聚物種分離所必需的，該等其他多聚物種可具有除單體之預期活性外之生物活性。在一個例示性純化方案中，首先對含有所分泌多肽之溶液進行金屬親和層析，且用咪唑濃度之梯度溶離多肽。使用陰離子交換層析法進一步純化此溶離液，且使用氯化鈉濃度之梯度溶離多肽。最後，對此溶離液進行尺寸排阻層析法以將單體與多聚物種分離。在一個態樣中，用於本發明中之雙特異性抗體由包含藉由肽連接子彼此融合之兩個單鏈FV片段(scFv)的單一多肽鏈構成。
降低Fc受體結合及/或效應功能之Fc域修飾 本發明之抗原結合分子之Fc域由包含免疫球蛋白分子之重鏈域的一對多肽鏈組成。舉例而言，免疫球蛋白G (IgG)分子之Fc域為二聚體，其中各次單元包含CH2及CH3 IgG重鏈恆定域。Fc域之兩個次單元彼此間能夠穩定結合。
Fc域賦予本發明之抗原結合分子有利的藥物動力學特性，包括長血清半衰期，其促進靶組織中之良好聚集，及有利的組織-血液分佈率。然而，其同時可引起本發明之雙特異性抗體不合需要地靶向表現Fc受體之細胞而非靶向較佳的攜帶抗原之細胞。因此，在特定態樣中，相較於原生IgG1 Fc域，本發明之抗原結合分子之Fc域呈現與Fc受體之降低結合親和力及/或降低效應功能。在一個態樣中，Fc不實質上與Fc受體結合及/或不誘導效應功能。在一特定態樣中，Fc受體為Fcγ受體。在一個態樣中，Fc受體為人類Fc受體。在一個特定態樣中，Fc受體為活化人類Fcγ受體，更特定言之，人類FcγRIIIa、FcγRI或FcγRIIa，最特定言之，人類FcγRIIIa。在一個態樣中，Fc域不誘導效應功能。降低之效應功能可包括(但不限於)以下中之一或多者：降低之補體依賴性細胞毒性(CDC)、降低之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、降低之抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)、降低之細胞介素分泌、降低之免疫複合物介導之抗原呈遞細胞攝入抗原、降低之與NK細胞之結合、降低之與巨噬細胞之結合、降低之與單核球之結合、降低之與多形核細胞之結合、降低之誘導細胞凋亡之直接信號傳導、降低之樹突狀細胞成熟或降低之T細胞活化。
在某些態樣中，可將一或多個胺基酸修飾引入至本文所提供之抗體的Fc區中，從而產生Fc區變體。Fc區變體可包含在一或多個胺基酸位置處含有胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如，人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在一特定態樣中，本發明提供一種抗體，其中Fc域包含降低與Fc受體、詳言之Fcγ受體之結合的一或多個胺基酸取代。
在一個態樣中，本發明之抗體之Fc域包含降低Fc域對Fc受體之結合親和力及/或效應功能的一或多個胺基酸突變。典型地，Fc域之兩個次單元中之每一者中存在相同的一或多個胺基酸突變。特定言之，Fc域在位置E233、L234、L235、N297、P331及P329 (EU編號)處包含胺基酸取代。特定言之，Fc域包含IgG重鏈之位置234及235 (EU編號)及/或329 (EU編號)處的胺基酸取代。更特定言之，提供一種根據本發明之抗體，其包含在IgG重鏈中具有胺基酸取代L234A、L235A及P329G (「P329G LALA」，EU編號)之Fc域。胺基酸取代L234A及L235A係指所謂的LALA突變。胺基酸取代之「P329G LALA」組合幾乎完全消除人類IgG1 Fc域之Fcγ受體結合且描述於國際專利申請公開案第WO 2012/130831 A1號中，其亦描述製備此類突變型Fc域之方法及測定其特性(諸如Fc受體結合或效應功能)之方法。
具有降低之Fc受體結合及/或效應功能之Fc域亦包括具有以下中之一或多者之取代的彼等Fc域：Fc域殘基238、265、269、270、297、327及329 (美國專利第6,737,056號)。此類Fc突變體包括具有胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或更多者之取代的Fc突變體，包括殘基265及297取代為丙胺酸的所謂「DANA」 Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
在另一態樣中，Fc域為IgG4 Fc域。IgG4抗體展現相較於IgG1 抗體，與Fc受體之結合親和力減弱及/或效應功能減低。在一更特定態樣中，Fc域為包含位置S228 (Kabat編號)之胺基酸取代(特定言之，胺基酸取代S228P)的IgG4Fc域。在一更特定態樣中，Fc域為IgG4 Fc域，其包含胺基酸取代L235E及S228P及P329G (EU編號)。此類IgG4 Fc域突變體及其Fcγ受體結合特性亦描述於WO 2012/130831中。
突變型Fc域可使用此項技術中熟知之遺傳學或化學方法，藉由胺基酸缺失、取代、***或修飾來製備。遺傳學方法可包括編碼DNA序列之位點特異性突變誘發、PCR、基因合成及類似方法。恰當的核苷酸變化可藉由例如定序來驗證。
與Fc受體的結合可容易測定，例如藉由ELISA，或藉由表面電漿子共振(SPR)，使用標準儀器，諸如BIAcore儀器(GE Healthcare)，且可諸如藉由重組表現來獲得Fc受體。替代地，Fc域或包含Fc域之細胞活化抗體對於Fc受體之結合親和力可使用已知表現特定Fc受體之細胞株(諸如表現FcγIIIa受體之人類NK細胞)來評價。
Fc域或包含Fc域之本發明之抗體之效應功能可藉由此項技術中已知之方法量測。適用於量測ADCC之分析描述於本文中。用於評定所關注分子之ADCC活性的活體外分析之其他實例描述於美國專利第5,500,362號；Hellstrom等人 Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986)；及Hellstrom等人, Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)；美國專利第5,821,337號；Bruggemann等人, J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)中。替代地，可採用非放射性分析方法(參見例如用於流動式細胞測量術之ACTI™非放射性細胞毒性分析(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA)；及CytoTox 96® 非放射性細胞毒性分析(Promega, Madison, WI))。適用於此類分析之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。替代地或另外，可以在活體內，例如在動物模型中，諸如Clynes等人, Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656 (1998)中所揭示之動物模型中評定所關注分子之ADCC活性。
在一些態樣中，Fc域與補體組分(具體言之C1q)的結合降低。因此，在其中Fc域經工程改造以具有降低之效應功能的一些實施例中，該降低之效應功能包括降低之CDC。可進行C1q結合分析以測定本發明之雙特異性抗體是否能夠結合C1q且因此具有CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為了評定補體活化，可執行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro等人, J Immunol Methods 202, 163 (1996)；Cragg等人, Blood 101, 1045-1052 (2003)；及Cragg及Glennie, Blood 103, 2738-2743 (2004))。
促進雜二聚化之Fc域修飾 本發明之雙特異性抗原結合分子包含與Fc域之兩個次單元的一個或另一個融合的不同抗原結合位點，因此Fc域之兩個次單元可包含於兩條不相同多肽鏈中。此等多肽之重組共表現及後續二聚化產生兩種多肽之若干種可能的組合。為了提高重組產生中本發明之雙特異性抗體的產量及純度，因此將適宜在本發明之雙特異性抗原結合分子的Fc域中引入促進所要多肽之結合的修飾。
因此，在特定態樣中，本發明係關於雙特異性抗原結合分子，其包含：(a)至能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域，(b)藉由二硫鍵彼此連接之第一及第二多肽，其中抗原結合分子之特徵在於第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其兩個片段，且在於第二多肽包含僅一個該4-1BBL胞外域或其片段，及(c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域，其中Fc域包含促進Fc域之第一及第二次單元之結合的修飾。人類IgG Fc域中之兩個次單元之間的最廣泛蛋白質-蛋白質相互作用的位點位於Fc域之CH3域中。因此，在一個態樣中，該修飾存在於Fc域之CH3域中。
在一特定態樣中，該修飾為所謂的「杵-臼」修飾，其包含Fc域之兩個次單元中之一者中的「杵」修飾及Fc域之兩個次單元之另一者中的「臼」修飾。因此，本發明係關於一種抗原結合分子，其包含：(a)能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域，(b)藉由二硫鍵彼此連接之第一及第二多肽， 其中抗原結合分子之特徵在於第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其兩個片段，且特徵在於第二多肽包含僅一個4-1BBL胞外域或其片段，及(c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域，其中根據杵-臼方法，Fc域之第一次單元包含杵且Fc域之第二次單元包含臼。在一特定態樣中，Fc域之第一次單元包含胺基酸取代S354C及T366W (EU編號)，且Fc域之第二次單元包含胺基酸取代Y349C、T366S及Y407V (根據Kabat EU指數編號)。
杵-臼技術描述於例如US5,731,168；US7,695,936；Ridgway等人, Prot Eng 9, 617-621 (1996)及Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)中。一般而言，方法涉及在第一多肽之界面處引入隆凸(「杵」)及在第二多肽之界面處引入對應凹穴(「臼」)，使得隆凸可定位於凹穴中以便促進雜二聚體形成且阻礙均二聚體形成。藉由用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)置換第一多肽界面中之小胺基酸側鏈來構築隆凸。大小與隆凸相同或類似之補償性凹穴係在第二多肽之界面中藉由用較小胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)置換大胺基酸側鏈來產生。
因此，在一個態樣中，在本發明之雙特異性抗原結合分子的Fc域的第一次單元的CH3域中，胺基酸殘基經具有較大側鏈體積之胺基酸殘基置換，由此在第一次單元之CH3域內產生隆凸，其可定位於第二次單元之CH3域內的凹穴中，且在Fc域之第二次單元的CH3域中，胺基酸殘基經具有較小側鏈體積之胺基酸殘基置換，由此在第二次單元之CH3域內產生凹穴，第一次單元之CH3域內的隆凸可可定位於該凹穴中。隆凸及凹穴可藉由改變編碼多肽之核酸，例如藉由定點突變誘發或藉由肽合成來製備。在一特定態樣中，在Fc域之第一次單元之CH3域中，位置366處之蘇胺酸殘基經色胺酸殘基(T366W)置換，且在Fc域之第二次單元之CH3域中，位置407處之酪胺酸殘基經纈胺酸殘基(Y407V)置換。在一個態樣中，在Fc域之第二次單元中，位置366之蘇胺酸殘基另外經絲胺酸殘基(T366S)置換且位置368之白胺酸殘基經丙胺酸殘基(L368A)置換。
在又一態樣，在Fc域之第一次單元中，位置354之絲胺酸殘基另外經半胱胺酸殘基(S354C)置換，且在Fc域之第二次單元中，位置349之酪胺酸殘基另外經半胱胺酸殘基(Y349C)置換。引入此等兩個半胱胺酸殘基使得Fc域之兩個次單元之間形成二硫橋鍵，進一步穩定二聚體(Carter (2001), J Immunol Methods 248, 7-15)。在一特定態樣中，Fc域之第一次單元包含胺基酸取代S354C及T366W (EU編號)，且Fc域之第二次單元包含胺基酸取代Y349C、T366S及Y407V (根據Kabat EU指數編號)。
在一替代性態樣中，促進Fc域之第一與第二次單元結合的修飾包含調節靜電導向效應之修飾，例如PCT公開案WO 2009/089004中所描述。一般而言，此方法涉及用帶電胺基酸殘基置換兩個Fc域次單元之界面處之一或多個胺基酸殘基，使得同二聚體形成在靜電上不利的，但雜二聚在靜電上為有利的。
如本文所報導之雙特異性抗體之重鏈的C端可為以胺基酸殘基PGK結束之完整C端。重鏈之C端可為縮短C端，其中已移除一或兩個C端胺基酸殘基。在一個較佳態樣中，重鏈之C端為以PG結束之縮短C端。在如本文所報導之所有態樣之一個態樣中，如本文所規定之包含包括C端CH3域之重鏈的雙特異性抗體包含C端甘胺酸-離胺酸二肽(G446及K447，根據Kabat EU索引編號)。在如本文所報導之所有態樣中之一個實施例中，如本文所規定之包含包括C端CH3域之重鏈的雙特異性抗體包含C端甘胺酸殘基(G446，根據Kabat EU索引編號)。
Fab 域中之修飾 在一個態樣中，本發明係關於一種含4-1BBL抗原結合分子，其包含：(a)能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之Fab片段，(b)藉由二硫鍵彼此連接之第一及第二多肽，其中抗原結合分子之特徵在於第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其兩個片段，且在於第二多肽包含僅一個4-1BBL胞外域或其片段，及(c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域，其中在Fab片段中之一者中，可變域VH及VL或恆定域CH1及CL互換。根據互換單抗技術製備雙特異性抗體。
在一個結合臂中具有域置換/交換的多特異性抗體(互換單抗VH-VL或互換單抗CH-CL)詳細描述於WO2009/080252及Schaefer, W.等人, PNAS, 108 (2011) 11187-1191中。其明顯地減少由針對第一抗原之輕鏈與針對第二抗原之錯誤重鏈失配(相較於沒有此類域交換之方法)而造成的副產物。
在一個態樣中，本發明係關於一種雙特異性抗原結合分子，其包含：(a)能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之第一Fab片段，(b)藉由二硫鍵彼此連接之第一及第二多肽，其中抗原結合分子之特徵在於第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其兩個片段，且在於第二多肽包含僅一個4-1BBL胞外域或其片段，且其中其中之每一者與CH1或CL域連接，及(c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域，其中鄰近於4-1BBL之恆定域CL及CH1彼此置換，使得CH1域為輕鏈的一部分而CL域為重鏈的一部分。
在另一態樣中，本發明係關於一種雙特異性抗原結合分子，其包含：(a)包含能夠與4-1BB特異性結合之兩個Fab片段及Fc域之抗體的兩條輕鏈及兩條重鏈，及(b)能夠與腫瘤相關抗原特異性結合的兩個額外Fab片段，其中該等額外Fab片段各自經由肽連接子與(a)之重鏈之C端連接。在一特定態樣中，額外Fab片段為Fab片段，其中可變域VL及VH經彼此置換，使得VH域為輕鏈的一部分且VL域為重鏈的一部分。
在另一態樣中，且為了進一步提高正確配對，雙特異性抗原結合分子包含：(a)能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之第一Fab片段，(b)藉由二硫鍵彼此連接之第一及第二多肽，其中抗原結合分子之特徵在於第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其兩個片段，且在於第二多肽包含僅一個4-1BBL胞外域或其片段，且其中其中之每一者與CH1或CL域連接，及(c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域，該雙特異性抗原結合分子可含有不同的帶電胺基酸取代(所謂的「帶電殘基」)。將此等修飾引入互換或非互換CH1及CL域中。在一特定態樣中，本發明係關於一種雙特異性抗原結合分子，其中在CL域中之一者中，位置123 (EU編號)處之胺基酸經精胺酸(R)置換且位置124 (EU編號)處之胺基酸經離胺酸(K)取代，且其中在CH1域中之一者中，位置147 (EU編號)及位置213 (EU編號)處之胺基酸經麩胺酸(E)取代。
更特定言之，本發明係關於一種包含Fab之雙特異性結合分子，其中在鄰近於4-1BBL之CL域中，位置123 (EU編號)處之胺基酸經精胺酸(R)置換且位置124 (EU編號)處之胺基酸經離胺酸(K)取代，且其中在鄰近於4-1BBL之CH1域中，位置147 (EU編號)及位置213 (EU編號)處之胺基酸經麩胺酸(E)取代。
聚核苷酸 本發明進一步提供編碼如本文中所描述之抗體或其片段的經分離聚核苷酸。
編碼本發明之抗體之經分離聚核苷酸可表述為編碼整個抗原結合分子的單一聚核苷酸或表述為共表現的多個(例如，兩個或更多個)聚核苷酸。由共表現之聚核苷酸編碼之多肽可經由例如二硫鍵或其他手段結合，以形成功能性抗原結合分子。舉例而言，免疫球蛋白之輕鏈部分可由來自免疫球蛋白之重鏈部分的單獨聚核苷酸編碼。當共表現時，重鏈多肽與輕鏈多肽結合，形成免疫球蛋白。
在一些態樣中，經分離聚核苷酸編碼如本文中所描述之根據本發明之完整抗體。在其他實施例中，經分離聚核苷酸編碼如本文中所描述的根據本發明之抗體中所包含的多肽。
在某些實施例中，聚核苷酸或核酸為DNA。在其他實施例中，本發明之聚核苷酸為RNA，例如呈信使RNA (mRNA)形式。本發明之RNA可為單股或雙股RNA。
重組方法 本發明中所用之雙特異性抗體可例如藉由固態肽合成(例如梅里菲爾德固相合成(Merrifield solid phase synthesis))或重組生產獲得。對於重組生產，分離編碼例如如上文所描述之抗體或其多肽片段的一或多個聚核苷酸，且將其***至一或多個載體中，以用於進一步選殖於宿主細胞中及/或在宿主細胞中表現。此類聚核苷酸可使用習知程序容易地分離及定序。在本發明之一個態樣中，提供包含本發明之聚核苷酸中之一或多者的載體，較佳表現載體。可使用已為熟習此項技術者所熟知之方法來構築含有抗體(片段)之編碼序列連同適當轉錄/轉譯控制信號的表現載體。此等方法包括活體外重組DNA技術、合成技術及活體內重組/基因重組。參見例如Maniatis等人, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989)；及Ausubel等人, CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1989)中所描述之技術。表現載體可為質體、病毒之一部分，或可為核酸片段。表現載體包括表現盒，將編碼抗體或其多肽片段之聚核苷酸(亦即編碼區)選殖至該表現盒中與啟動子及/或其他轉錄或轉譯控制元件可操作的連接。如本文所用，「編碼區」為核酸中由轉譯成胺基酸之密碼子組成的部分。儘管「終止密碼子」(TAG、TGA或TAA)不轉譯成胺基酸，但其可視為編碼區(若存在)之一部分，但任何側接序列(例如啟動子、核糖體結合位點、轉錄終止子、內含子、5'及3'非轉譯區及類似序列)不為編碼區之一部分。在單一聚核苷酸構築體中，例如在單一載體上，或在單獨聚核苷酸構築體中，例如在單獨(不同)載體上，可存在兩個或更多個編碼區。此外，任何載體可含有單一編碼區，或可包含兩個或更多個編碼區，例如本發明之載體可編碼一或多個多肽，其經由蛋白質裂解而轉譯後或共轉譯分離成最終蛋白質。另外，本發明之載體聚核苷酸或核酸可編碼與編碼本發明抗體或其多肽片段之聚核苷酸融合或未融合的異源編碼區或其變異體或衍生物。異源編碼區包括(但不限於)專用元件或基元，諸如分泌性信號肽或異源功能域。可操作連接為當基因產物(例如多肽)之編碼區與一或多個調節序列以使得基因產物之表現置於調節序列之影響或控制下的方式結合時。若誘導啟動子功能導致編碼所要基因產物之mRNA轉錄且若兩個DNA片段之間連接的性質不干擾表現調節序列導引基因產物表現的能力或不干擾DNA模板轉錄的能力，則兩個DNA片段(諸如多肽編碼區及與其相關聯的啟動子)為「可操作地連接」。因此，若啟動子能夠影響彼核酸之轉錄，則啟動子區域與編碼多肽之核酸可操作地連接。啟動子可為僅導引預定細胞中之DNA實質性轉錄的細胞特異性啟動子。除啟動子以外的其他轉錄控制元件(例如強化子、操縱子、抑制子及轉錄終止信號)可與引導細胞特異性轉錄之聚核苷酸可操作地連接。
合適的啟動子及其他轉錄控制區揭示於本文中。多個轉錄控制區已為熟習此項技術者所知。此等區域包括(但不限於)在脊椎動物細胞中起作用的轉錄控制區，諸如(但不限於)啟動子及增強子區段，其來自巨細胞病毒(例如即刻早期啟動子，連同內含子-A)、猴病毒40 (例如早期啟動子)及反轉錄病毒(諸如勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus))。其他轉錄控制區包括來源於脊椎動物基因(諸如肌動蛋白、熱休克蛋白、牛生長激素及兔α-血球蛋白)之區域，以及能夠控制真核細胞中之基因表現的其他序列。其他合適的轉錄控制區包括組織特異性啟動子及強化子以及誘導性啟動子(例如啟動子誘導性四環素(tetracyclin))。類似地，多種轉譯控制元件已為一般熟習此項技術者所知。此等元件包括(但不限於)核糖體結合位點、轉譯起始及終止密碼子，以及來源於病毒系統的元件(特定言之，內部核糖體入口位點或IRES，亦稱為CITE序列)。表現盒亦可包括其他特徵，諸如複製起點，及/或染色體整合元件，諸如反轉錄病毒長末端重複序列(LTR)，或腺相關聯病毒(AAV)反向末端重複序列(ITR)。
本發明之聚核苷酸及核酸編碼區可能與編碼分泌性肽或信號肽的其他編碼區連接，從而導引由本發明之聚核苷酸編碼的多肽之分泌。舉例而言，若需要分泌抗體或其多肽片段，則可將編碼信號序列之DNA置於本發明抗體或其多肽片段之核酸之上游。根據信號假設，哺乳動物細胞所分泌之蛋白質具有信號肽或分泌性前導序列，一旦生長蛋白質鏈跨越粗糙內質網之輸出已起始，該信號肽或分泌性前導序列自成熟蛋白質裂解。一般熟習此項技術者將認識到，脊椎動物細胞分泌的多肽通常具有與多肽之N端融合的信號肽，該信號肽自所轉譯之多肽裂解而產生分泌性或「成熟」形式的多肽。在某些實施例中，使用原生信號肽，例如免疫球蛋白重鏈或輕鏈信號肽，或彼序列之保持導引與其可操作地連接之多肽分泌之能力的功能衍生物。替代地，可使用異源哺乳動物信號肽或其功能衍生物。舉例而言，野生型前導序列可經人類組織纖維蛋白溶酶原活化因子(TPA)或小鼠β-葡糖醛酸酶之前導序列取代。
在編碼本發明抗體或其多肽片段之聚核苷酸內或在該聚核苷酸之末端處，可包括編碼可用以幫助後續純化(例如組胺酸標記)或有助於標記融合蛋白之短蛋白質序列的DNA。
在本發明之另一態樣中，提供一種宿主細胞，其包含本發明之一或多種聚核苷酸。在某些實施例中，提供一種宿主細胞，其包含本發明之一或多種載體。聚核苷酸及載體可併有本文分別關於聚核苷酸及載體所描述之任一特徵(單個或組合)。在一個態樣中，宿主細胞包含(例如已用以下轉化或轉染)包含編碼本發明抗體(之一部分)之聚核苷酸的載體。如本文所用，術語「宿主細胞」係指任何類型之可經工程改造以產生本發明之融合蛋白或其片段的細胞系統。適用於複製及支持抗原結合分子之表現的宿主細胞為此項技術中熟知。此類細胞可視需要經特定表現載體轉染或轉導，且可生長含有大量載體之細胞以用於接種大型醱酵槽，以獲得足量的抗原結合分子以用於臨床應用。合適的宿主細胞包括原核微生物，諸如大腸桿菌，或各種真核細胞，諸如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、昆蟲細胞或其類似物。舉例而言，可在細菌中生產多肽，尤其在不需要糖基化時。在表現之後，可自可溶性部分中之細菌細胞糊狀物分離出多肽且可將該多肽進一步純化。除原核生物外，諸如絲狀真菌或酵母菌之真核微生物為適用於編碼多肽之載體的選殖或表現宿主，包括糖基化路徑已經「人類化」，從而生產具有部分或完全人類糖基化模式之多肽的真菌及酵母菌株。參見Gerngross, Nat Biotech 22, 1409-1414 (2004)，及Li等人, Nat Biotech 24, 210-215 (2006)。
適用於表現(糖基化)多肽的宿主細胞亦來源於多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出眾多可與昆蟲細胞結合使用，尤其用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞之桿狀病毒株。植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(描述在轉殖基因植物中產生抗體的PLANTIBODIESTM 技術)。脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適合於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為藉由SV40轉化之猴腎臟CV1細胞株(COS-7)；人胚腎細胞株(293或293T細胞，如例如Graham等人, J Gen Virol 36, 59 (1977)中所描述)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞特利氏細胞(TM4細胞，如例如Mather, Biol. Reprod. 23, 243-251 (1980))中所描述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠獼猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌瘤細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；水牛鼠肝細胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞(如例如Mather等人, Annals N.Y. Acad Sci 383, 44-68 (1982)中所描述；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他適用哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括dhfr-CHO細胞(Urlaub等人, Proc Natl Acad Sci USA 77, 4216 (1980))；及骨髓瘤細胞株，諸如YO、NS0、P3X63及Sp2/0。關於適用於蛋白質生產之某些哺乳動物宿主細胞株之綜述，參見例如Yazaki及Wu, Methods in Molecular Biology, 第248卷 (B.K.C. Lo, 編, Humana Press, Totowa, NJ), 第255-268頁 (2003)。宿主細胞包括經培養細胞，例如經培養之哺乳動物細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、細菌細胞及植物細胞(僅舉數例)，且亦包括轉殖基因動物、轉殖基因植物或經培養之植物或動物組織中所包含的細胞。在一個實施例中，宿主細胞為真核細胞，較佳為哺乳動物細胞，諸如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、人胎腎(HEK)細胞或淋巴細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在此等系統中表現外來基因之標準技術為此項技術中已知的。表現包含免疫球蛋白之重鏈或輕鏈之多肽的細胞可經工程改造，以便亦表現免疫球蛋白鏈中之另一者，使得所表現產物為具有重鏈及輕鏈的免疫球蛋白。
在一個態樣中，提供一種生產本發明抗體或其多肽片段之方法，其中該方法包含：在適合於表現本發明抗體或其多肽片段的條件下，培養包含編碼如本文所提供之本發明抗體或其多肽片段之聚核苷酸的宿主細胞，及自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收本發明抗體或其多肽片段。
在某些實施例中，形成抗原結合分子之一部分之能夠與靶細胞抗原(例如Fab片段)特異性結合的部分包含能夠與抗原結合的至少一免疫球蛋白可變區。可變區可形成天然或非天然存在之抗體及其片段之一部分且來源於天然或非天然存在之抗體及其片段。產生多株抗體及單株抗體之方法為此項技術中熟知的(參見例如Harlow及Lane, 「Antibodies, a laboratory manual」, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988)。非天然存在之抗體可使用固相肽合成法來構築，可以重組方式產生(例如，如美國專利第4,186,567號中所描述)或可藉由例如篩檢包含可變重鏈及可變輕鏈之組合文庫來獲得(參見例如McCafferty之美國專利第5,969,108號)。
本發明中可使用任何動物物種之免疫球蛋白。適用於本發明之非限制性免疫球蛋白可為鼠類、靈長類動物或人類來源。若融合蛋白意欲用於人類用途，則可使用其中免疫球蛋白之恆定區係來自人類的免疫球蛋白之嵌合形式。人類化或全人類形式之免疫球蛋白亦可根據此項技術中熟知之方法來製備(參見例如Winter之美國專利第5,565,332號)。人類化可藉由多種方法來達成，包括(但不限於)：(a)將非人類(例如供體抗體) CDR移植至人類(例如受者抗體)構架區及恆定區上，保留或不保留關鍵構架殘基(例如對於保留良好抗原結合親和力或抗體功能而言具有重要作用之彼等殘基)；(b)僅將非人類特異性決定區(SDR或a-CDR；對於抗體-抗原相互作用而言具有關鍵作用之殘基)移植至人類構架區及恆定區上；或(c)移植整個非人類可變域，但藉由表面殘基置換而用人類類似區段對其進行「遮掩」。人類化抗體及其製造方法綜述於例如Almagro及Fransson, Front Biosci 13, 1619-1633 (2008)中，且進一步描述於例如Riechmann等人, Nature 332, 323-329 (1988)；Queen等人, Proc Natl Acad Sci USA 86, 10029-10033 (1989)；美國專利案第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Jones等人, Nature 321, 522-525 (1986)；Morrison等人, Proc Natl Acad Sci 81, 6851-6855 (1984)；Morrison及Oi, Adv Immunol 44, 65-92 (1988)；Verhoeyen等人, Science 239, 1534-1536 (1988)；Padlan, Molec Immun 31(3), 169-217 (1994)；Kashmiri等人, Methods 36, 25-34 (2005) (描述SDR (a-CDR)移植)；Padlan, Mol Immunol 28, 489-498 (1991) (描述「表面重修」)；Dall'Acqua等人, Methods 36, 43-60 (2005) (描述「FR改組」)；及Osbourn等人, Methods 36, 61-68 (2005)及Klimka等人, Br J Cancer 83, 252-260 (2000) (描述FR改組的「導向選擇」方法)中。根據本發明之特定免疫球蛋白為人類免疫球蛋白。人類抗體及人類可變區可使用此項技術中已知之各種技術產生。人類抗體大體上描述於van Dijk及van de Winkel, Curr Opin Pharmacol 5, 368-74 (2001)及Lonberg, Curr Opin Immunol 20, 450-459 (2008)中。人類可變區可形成藉由融合瘤方法製得之人類單株抗體的一部分且可來源於藉由融合瘤方法製得的人類單株抗體(參見例如Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, 第51-63頁 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987))。人類抗體及人類可變區亦可藉由如下製備：向已經修飾之轉殖基因動物投與免疫原，從而回應於抗原攻擊而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體(參見例如Lonberg, Nat Biotech 23, 1117-1125 (2005))。人類抗體及人類可變區亦可藉由分離選自人類衍生之噬菌體呈現文庫的Fv純系可變區序列來產生(參見例如Hoogenboom等人, Methods in Molecular Biology 178, 1-37 (O'Brien等人編, Human Press, Totowa, NJ, 2001)；及McCafferty等人, Nature 348, 552-554；Clackson等人, Nature 352, 624-628 (1991))。噬菌體通常以單鏈Fv (scFv)片段或Fab片段形式呈現抗體片段。
在某些態樣中，根據例如PCT公開案WO 2012/020006 (參見關於親和力成熟之實例)或美國專利申請公開案第2004/0132066號中揭示之方法，將抗體進行工程改造以具有增強的結合親和力。本發明之抗原結合分子與特異性抗原決定子結合之能力可經由酶聯免疫吸附分析(ELISA)或熟習此項技術者熟悉之其他技術(例如表面電漿子共振技術(Liljeblad等人, Glyco J 17, 323-329 (2000))及傳統結合分析(Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002))量測。可使用競爭分析來鑑別與參考抗體競爭與特定抗原之結合的抗原結合分子。在某些實施例中，此種競爭性抗原結合分子與同參考抗原結合分子所結合的相同抗原決定基(例如線性或構形抗原決定基)結合。抗原結合分子所結合之抗原決定基之定位的詳細例示性方法提供於Morris (1996) 「Epitope Mapping Protocols」, Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press, Totowa, NJ)中。在例示性競爭分析法中，在包含與抗原結合之第一標記抗原結合分子及測試與第一抗原結合分子競爭與抗原結合之能力的第二未標記抗原結合分子之溶液中培育經固定的抗原。第二抗原結合分子可存在於融合瘤上清液中。作為對照，在包含第一標記抗原結合分子但不包含第二未標記抗原結合分子之溶液中培育經固定的抗原。在允許第一抗體與抗原結合之條件下培育之後，移除過量的未結合之抗體，且量測與經固定的抗原結合的標記的量。若與對照樣本相比，測試樣本中與經固定的抗原結合之標記之量實質上降低，則表明第二抗原結合分子與第一抗原結合分子競爭與抗原結合。參見Harlow及Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual 第14章 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。
如本文中所描述製備之本發明抗體可藉由此項技術中已知的技術(諸如高效液相層析法、離子交換層析法、凝膠電泳、親和力層析法、尺寸排阻層析法等)純化。用於純化特定蛋白質之實際條件部分地視諸如淨電荷、疏水性、親水性等因素而定，且對於熟習此項技術者而言為顯而易見的。對於親和層析純化，可使用與抗原結合分子結合之抗體、配體、受體或抗原。舉例而言，關於本發明之融合蛋白之親和層析純化，可使用具有蛋白A或蛋白G之基質。可使用序列蛋白A或G親和層析及尺寸排阻層析來分離基本上如實例中所描述之抗原結合分子。抗原結合分子或其片段之純度可藉由多種熟知的分析方法中之任一者測定，包括凝膠電泳、高壓液相層析及其類似方法。舉例而言，如實例中所描述表現之含4-1BBL抗原結合分子顯示為完整的且適當地組裝，如藉由還原及非還原SDS-PAGE所證明。
分析 可藉由此項技術中已知之各種分析，對本文中提供之抗原結合分子針對其物理/化學特性及/或生物活性進行鑑別、篩選或表徵。
1.親和力分析 本文所提供之雙特異性抗原結合分子對於對應受體之親和力，可根據闡述於實例中之方法(藉由表面電漿子共振(SPR))，使用標準儀器(BIAcore儀器(GE Healthcare))測定，且受體或靶蛋白可諸如藉由重組表現獲得。雙特異性抗原結合分子對於靶細胞抗原之親和力，亦可藉由表面電漿子共振(SPR)，使用諸如BIAcore儀器(GE Healthcare)之標準儀器測定，且受體或靶蛋白可諸如藉由重組表現獲得。關於FAP-4-1BBL抗原結合分子，該等方法已更詳細地描述於國際專利申請公開案第WO 2016/075278 A1號中。根據一個態樣，藉由表面電漿子共振，使用BIACORE® T100機器(GE Healthcare)在25℃下量測KD 。
2.結合分析及其他分析 在一個態樣中，如國際專利申請公開案第WO 2016/075278 A1號中更詳細地描述來測試如本文所報導之FAP-4-1BBL抗原結合分子的抗原結合活性。
3.活性分析 在一個態樣中，提供用於鑑別FAP-4-1BBL抗原結合分子之生物活性的分析。
在某些實施例中，在活體外共培養分析中，用人類免疫效應細胞，來測試如本文所報導之抗體的此類生物活性。
醫藥組合物、調配物及投與途徑 在另一態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含本文提供之4-1BB促效劑及HER-2靶向療法或本文提供之藥劑，其例如用於下文治療方法中之任一者中。在一些態樣中，該HER-2靶向劑包含HER-2抗體、雙特異性HER-2抗體及/或HER-2抗體藥物結合物。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含選自由以下組成之群的HER-2抗體：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及馬戈妥昔單抗。在一個態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗或帕妥珠單抗。更特定言之，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗。在一些態樣中，HER-2靶向劑為經糖基工程改造之HER-2抗體，例如TrasGex。在一些態樣中，HER-2靶向劑為雙特異性HER-2抗體，例如Herceptarg。在一些態樣中，HER-2靶向劑為HER-2抗體藥物結合物，特定言之曲妥珠單抗恩他新(曲妥珠單抗-恩他新偶聯物)。
在一些態樣中，醫藥組合物包含本文提供之4-1BB促效劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。在其他實施例中，醫藥組合物包含本文提供之4-1BB促效劑及至少一種例如如下文所描述之額外治療劑。在一些實施例中，提供一種醫藥組合物，其包含HER-2靶向劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。
本發明之醫藥組合物包含治療有效量之一或多種溶解或分散於醫藥學上可接受之賦形劑、載劑、佐劑或稀釋劑中之抗體或藥劑。片語「醫藥學上或藥理學上可接受」係指分子實體及組合物在所用劑量及濃度下對於接受者而言一般為無毒性的，亦即當適當時向動物(諸如人類)投與時，不會產生有害的過敏反應或其他不良反應。含有至少一種抗體及視情況選用之額外活性成分的醫藥組合物之製備將為熟習此項技術者依據本發明而知，如以引用的方式併入本文中之Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版 Mack Printing Company, 1990所例示。特定言之，組合物為凍乾調配物或水溶液。如本文所用，「醫藥學上可接受之賦形劑」包括如一般熟習此項技術者已知之任何及所有溶劑、緩衝液、分散介質、包衣、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細菌劑、抗真菌劑)、等張劑、鹽、穩定劑及其組合。
非經腸組合物包括為藉由注射(例如皮下、皮內、病灶內、靜脈內、動脈內、肌肉內、鞘內或腹膜內注射)投藥所設計的彼等組合物。對於注射，本發明之抗原結合分子可於水溶液中調配，較佳於生理上相容的緩衝液(諸如漢克氏溶液(Hanks' solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理鹽水緩衝液)中調配。溶液可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。替代地，融合蛋白可呈粉末形式以用於在使用之前用合適的媒劑(例如，無菌無熱原質水)復原。藉由將所需量之本發明之融合蛋白併入視需要具有多種下文列舉之其他成分之適當溶劑中來製備無菌可注射溶液。無菌性可容易地藉由例如經由無菌過濾膜過濾來實現。一般而言，分散液係藉由將各種滅菌活性成分併入含有基本分散介質及/或其他成分的無菌媒劑中來製備。在用於製備無菌可注射溶液、懸浮液或乳液之無菌粉末的情況下，較佳製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥技術，其利用預先無菌過濾之液體介質產生活性成分加任何其他所需成分之粉末。視需要，液體介質宜經緩衝，且在與足量鹽水或葡萄糖一起注射之前，首先使液體稀釋劑呈等張性。組合物必須在製造及儲存條件下穩定且必須抵抗諸如細菌及真菌之微生物的污染作用而保藏。應瞭解，內毒素污染應最低限度地保持在安全水準，例如低於0.5 ng/mg蛋白質。合適的醫藥學上可接受之賦形劑包括(但不限於)：緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；氯化苯甲烴銨；氯化苯索銨；酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、岩藻糖或山梨醇；成鹽反離子，諸如鈉；金屬複合物(例如Zn-蛋白質複合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。水性注射懸浮液可含有增加懸浮液黏度之化合物，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、聚葡萄糖或其類似物。視情況，懸浮液亦可含有合適的穩定劑或增加化合物溶解性以允許製備高度濃縮溶液之藥劑。另外，活性化合物之懸浮液可視需要製備成油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或媒劑包括脂肪油，諸如芝麻油；或合成脂肪酸酯，諸如油酸乙酯或三酸甘油酯；或脂質體。
活性成分可包覆於微膠囊中，例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合法所製備之微膠囊，例如分別為羥基甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊；包覆於膠態藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)中或***液中。此類技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences (第18版, Mack Printing Company, 1990)中。可以製備持續釋放型製劑。持續釋放型製劑之適合實例包括含有多肽之固體疏水性聚合物之半滲透基質，該等基質呈成形物品形式，例如膜或微膠囊。在特定實施例中，可注射組合物之延長吸收可藉由在組合物中使用延遲吸收劑(諸如單硬脂酸鋁、明膠或其組合)來達成。
本文中之例示性醫藥學上可接受之賦形劑進一步包括間質藥物分散劑，諸如可溶性中性活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸如rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.)。某些示例性sHASEGP (包括rHuPH20)及使用方法描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種其他葡萄糖胺聚糖酶(諸如軟骨素酶)組合。
例示性凍乾抗體調配物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體調配物包括美國專利案第6,171,586號及WO 2006/044908中所描述之彼等調配物，後者中之調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
除了先前描述的組合物之外，抗原結合分子亦可調配為儲槽式製劑。此類長效調配物可藉由植入(例如皮下或肌肉內植入)或藉由肌肉內注射來投與。因此，舉例而言，融合蛋白可用合適的聚合或疏水性材料(例如呈於可接受之油中的乳液形式)或離子交換樹脂調配，或調配成微溶性衍生物，例如微溶性鹽。
包含本發明之抗原結合分子的醫藥組合物可藉助於習知混合、溶解、乳化、囊封、包覆或凍乾法製造。醫藥組合物可使用生理學上可接受之有利於將蛋白質處理成可在醫藥學上使用之製劑的一或多種載劑、稀釋劑、賦形劑或助劑，以習知方式調配。適當調配物視所選擇之投藥途徑而定。
本發明抗體可調配成游離酸或鹼、中性或鹽形式之組合物。醫藥學上可接受之鹽為實質上保留游離酸或鹼之生物活性的鹽。此等鹽包括酸加成鹽，例如與蛋白質組合物之游離胺基形成的鹽，或與無機酸(諸如鹽酸或磷酸)或有機酸(諸如乙酸、乙二酸、酒石酸或杏仁酸)形成的鹽。與游離羧基形成之鹽亦可衍生自無機鹼，諸如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵；或有機鹼，諸如異丙胺、三甲胺、組胺酸或普魯卡因(procaine)。相較於對應的游離鹼形式，醫藥鹽傾向於更可溶於水性及其他質子溶劑中。
本文中之組合物亦可含有多於一種為所治療之特定適應症所必需之活性成分，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之互補活性的彼等活性成分。此類活性成分宜以對預期目的有效之量組合存在。
用於活體內投與之調配物通常為無菌的。無菌性可容易地藉由例如經由無菌過濾膜過濾來實現。
4-1BB促效劑及HER-2靶向療法之投與 4-1BB促效劑及HER-2靶向療法/藥劑兩者(本文中皆稱為物質)可藉由任何適合手段投與，包括非經腸、肺內及鼻內，且在需要局部治療時，病灶內投與。然而，本發明方法對於藉由非經腸(特定言之靜脈內)輸注投與之治療劑尤其適用。在一些態樣中，該HER-2靶向劑包含HER-2抗體、雙特異性HER-2抗體及/或HER-2抗體藥物結合物。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含選自由以下組成之群的HER-2抗體：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及馬戈妥昔單抗。在一個態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗或帕妥珠單抗。更特定言之，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗。在一些態樣中，HER-2靶向劑為經糖基工程改造之HER-2抗體，例如TrasGex。在一些態樣中，HER-2靶向劑為雙特異性HER-2抗體，例如Herceptarg。在一些態樣中，HER-2靶向劑為HER-2抗體藥物結合物，特定言之曲妥珠單抗恩他新(曲妥珠單抗-恩他新偶聯物)。
非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。部分地視投藥之短期或長期性而定，給藥可藉由任何適合之途徑(例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射)來進行。本文中涵蓋各種給藥時程，包括(但不限於)單次投藥或經各個時間點多次投藥、快速投藥(bolus administration)及脈衝式輸注。在一個實施例中，非經腸(特定言之靜脈內)投與治療劑。在一特定實施例中，藉由靜脈內輸注投與治療劑。
在一些態樣中，4-1BB促效劑及HER-2靶向劑係以單一組合物形式一起投與。在一些實施例中，4-1BB促效劑及HER-2靶向劑係以兩種或更多種不同組合物形式分開投與。
4-1BB促效劑及HER-2靶向療法/藥劑兩者將以與符合良好醫學實踐之方式調配、給藥及投與。在此情形中考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症起因、藥劑遞送位點、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知之其他因素。4-1BB促效劑及HER-2靶向療法/藥劑兩者未必但視情況與目前用於預防或治療所討論之病症的一或多種藥劑一起調配。此類其他藥劑之有效量視存在於調配物中之治療劑之量、病症或治療之類型及上文所論述之其他因素而定。此等藥劑一般以相同劑量且以如本文所描述之投與途徑使用，或以本文所描述之劑量之約1%至99%使用，或以任何劑量且以憑經驗/臨床上判定為適當之任何途徑使用。
對於疾病之預防或治療，4-1BB促效劑及HER-2靶向療法/藥劑(當以其組合或與一種或多種其他額外治療劑一起使用時)之適當劑量，將視以下而定：待治療之疾病的類型、4-1BB藥劑的類型、疾病的嚴重程度及時程、投與兩種藥劑是預防性還是治療性目的、先前療法、患者之臨床病史及對於治療劑之反應，以及主治醫師之判斷。一次性或歷經一系列治療向患者適當投與各物質。視疾病之類型及嚴重程度而定，約1 µg/kg至15 mg/kg (例如0.1 mg/kg-10 mg/kg)之物質可為向個體投與的初始候選劑量，無論是例如藉由一或多次獨立投與還是藉由連續輸注。視上文所提及之因素而定，一個典型的日劑量可在約1 μg/kg至100 mg/kg之範圍內或更高。對於歷經數日或更長時間之重複投與，治療一般將視病狀而定持續直至發生疾病症狀之所需抑制為止。各物質之一個例示性劑量將在約0.05 mg/kg至約10 mg/kg範圍內。因此，可向個體投與一或多次以下劑量：約0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、3.0 mg/kg、4.0 mg/kg、5.0 mg/kg、6.0 mg/kg、7.0 mg/kg、8.0 mg/kg、9.0 mg/kg或10 mg/kg (或其任何組合)。此類劑量可間歇地投與，例如每一週、每兩週或每三週投與(例如，使得個體接受約兩個至約二十個，或例如約六個劑量之治療劑)。可在最初投與較高速效劑量、繼之以一或多個較低劑量，或最初投與較低劑量、繼之以一或多個較高劑量。例示性給藥方案包含投與約10 mg之初始劑量、繼之以約20 mg之治療劑之每兩週劑量。然而，其他給藥方案可為適用的。此療法之進程易於藉由習知技術及分析法來監測。
在一個態樣中，4-1BB促效劑及HER-2靶向療法/藥劑兩者之投與為單次投與。在一些實施例中，4-1BB促效劑及HER-2靶向療法/藥劑係同時投與。術語「同時」意謂在同一時間或在較短時間段(通常小於1小時)內。在某些態樣中，治療劑之投與為兩次或更多次投與。在同一治療週期期間，在治療之與一種或多種其他藥物的同一天，及視情況與一種或多種其他藥物同時，投與與一種或多種其他藥物「並行」投與之藥物。舉例而言，對於每3週給予之療法，在3週循環之第-1天各自投與並行投與的藥物。在一個特定態樣中，每一週、每兩週或每三週(特定言之每兩週)投與該等物質。在一個態樣中，以治療有效量投與該物質。在一個態樣中，以以下之劑量投與該物質：約50 µg/kg、約100 µg/kg、約200 µg/kg、約300 µg/kg、約400 µg/kg、約500 µg/kg、約600 µg/kg、約700 µg/kg、約800 µg/kg、約900 µg/kg或約1000 µg/kg。在一個實施例中，以高於不投與Her-2靶向療法/藥劑之對應治療方案中4-1BB促效劑之劑量的劑量投與4-1BB促效劑。在一個實施例中，以高於不投與4-1BB促效劑之對應治療方案中HER-2靶向療法/藥劑之劑量的劑量投與HER-2靶向療法/藥劑。在一個態樣中，4-1BB促效劑之投與包含初次投與第一劑量之4-1BB促效劑，及隨後一或多次投與第二劑量之4-1BB促效劑，其中第二劑量高於第一劑量。在一個態樣中，4-1BB促效劑之投與包含初次投與第一劑量之4-1BB促效劑，及隨後一或多次投與第二劑量之4-1BB促效劑，其中第一劑量不低於第二劑量。
當依序共投與兩種治療劑時，以由「特定時間段」分隔開之兩個獨立投與形式來投與該等藥劑。術語特定時間段意謂1小時至15天之任何時間。舉例而言，藥劑中之一者可在自投與另一藥劑之約1、2、3、4、5、6或7天或1至24小時內投與，且在一個實施例中，特定時間段為1至3天，或2至8小時。
在一個態樣中，在投與HER-2靶向療法/藥劑之前投與4-1BB促效劑。在另一態樣中，在投與4-1BB促效劑之前投與HER-2靶向療法/藥劑。
在一些態樣中，每劑量投與之曲妥珠單抗恩他新之初始醫藥學上有效量將在約0.3至15 mg/kg患者體重/天範圍內。市售的T-DM1調配物(KADCYLA®，曲妥珠單抗-恩他新偶聯物)為於一次性小瓶中的無菌、白色至灰白色的無防腐劑的凍乾粉末。每一小瓶含有100 mg或160 mg曲妥珠單抗-恩他新偶聯物。在復原之後，每一一次性小瓶含有曲妥珠單抗-恩他新偶聯物(20 mg/mL)、聚山梨醇酯20 [0.02% (w/v)]、丁二酸鈉(10 mM)及蔗糖[6%＞ (w/v)]，其中pH為5.0，且密度為1.026 g/mL。在稀釋之後，藉由靜脈內輸注投與含有20 mg/mL曲妥珠單抗-恩他新偶聯物之所得溶液。
帕妥珠單抗(PERJETA®)之市售調配物含有呈用於IV輸注之無防腐劑溶液形式的帕妥珠單抗420 mg/14 mL (30 mg/mL)，且可以大致420 mg(等效於對於70 kg個體之6 mg/kg的劑量)、大致525 mg、大致840 mg及/或大致1050 mg的固定劑量投與。處理可以較高速效劑量(例如840 mg，等效於12 mg/kg體重)開始。用於醫療用途之合適的帕妥珠單抗調配物包含含30 mg/mL帕妥珠單抗之20 mM乙酸組胺酸、120 mM蔗糖、0.02%聚山梨醇酯20，pH 6.0。替代的帕妥珠單抗調配物包含25 mg/mL帕妥珠單抗、10 mM 組胺酸-HCL緩衝液、240 mM蔗糖、0.02%聚山梨醇酯20，pH 6.0。
在另一態樣中，4-1BB促效劑與HER-2靶向療法/藥劑一起使用，其中在組合治療之前用II型抗-CD20抗體(較佳地，奧濱尤妥珠單抗)進行預處理，其中預處理與組合處理之間的時間段足以減少個體中回應於II型抗-CD20抗體(較佳地，奧濱尤妥珠單抗)之B細胞。
T細胞之活化可導致嚴重的細胞介素釋放症候群(CRS)。在由TeGenero進行的1期研究(Suntharalingam等人, N Engl J Med (2006) 355,1018-1028)中，所有6個健康志願者在輸注不適當給藥之T細胞刺激超促效劑抗CD28單株抗體之後，迅速經歷幾乎致命之嚴重細胞介素釋放症候群(CRS)。藉由對個體用II型抗-CD20抗體(諸如奧濱尤妥珠單抗)進行預處理，與向該個體投與T細胞活化治療劑(諸如本文所描述之4-1BB促效劑)相關的細胞介素釋放可顯著降低。使用GAZYVA®預處理(Gpt)將有助於快速消耗周邊血液及周圍淋巴樣器官兩者中之B細胞，使得藉由T細胞活化治療劑，來自於強力全身性T細胞活化的高度相關不良事件(AE) (例如CRS)的風險降低，同時支持T細胞活化治療劑的暴露水準自開始給藥時足夠高以介導腫瘤細胞消除。迄今為止，已在持續奧濱尤妥珠單抗臨床試驗中經數百患者評定及管控奧濱尤妥珠單抗之安全概況(包括細胞介素釋放)。最終，除支持T細胞活化抗體之安全概況以外，Gpt應亦幫助預防形成此等獨特分子之抗藥物抗體(ADA)。
在本發明中，4-1BB促效劑及HER-2靶向療法/藥劑之組合可與療法中之其他藥劑組合使用。舉例而言，可共同投與至少一種額外治療劑。在某些態樣中，額外治療劑為免疫治療劑。在一些實施例中，額外治療劑為化學治療劑。合適的化學治療劑包括以下中之一或多種：蒽環黴素藥物，諸如小紅莓及表柔比星(epirubicin) (pharmorubicin®)；紫杉烷藥物，諸如太平洋紫杉醇(Taxol®)及多烯紫杉醇(Taxotere®)；氟尿嘧啶(5FU)；環磷醯胺；甲胺喋呤；順鉑(cisplatin)；及卡培他濱(capecitabine)。其他額外治療劑包括激酶抑制劑拉帕替尼(lapatinib) (Tykerb)及來那替尼(neratinib) (Nerlynx)。
上文所提及之此類組合療法涵蓋組合投與(其中兩種或更多種治療劑包括在同一或獨立調配物中)及單獨投與，在此情況下，治療劑之投與可在投與一或多種額外治療劑之前、同時及/或之後進行。在一個實施例中，治療劑之投與及額外治療劑之投與彼此在約一個月；或相隔約一週、兩週或三週；或相隔約一天、兩天、三天、四天、五天或六天內進行。
治療方法及組合物 在一個態樣中，提供一種用於治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展的方法，其包含向該個體投與有效量之本文所描述的4-1BB促效劑及有效量之本文所描述的HER-2靶向劑。在各個態樣中，該HER-2靶向劑包含HER-2抗體、雙特異性HER-2抗體及/或HER-2抗體藥物結合物。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含選自由以下組成之群的HER-2抗體：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及馬戈妥昔單抗。在一個態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗或帕妥珠單抗。更特定言之，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗。在一些態樣中，HER-2靶向劑為經糖基工程改造之HER-2抗體，例如TrasGex。在一些態樣中，HER-2靶向劑為雙特異性HER-2抗體，例如Herceptarg。在一些態樣中，HER-2靶向劑為HER-2抗體藥物結合物，特定言之曲妥珠單抗恩他新(曲妥珠單抗-恩他新偶聯物)。
在一個此類態樣中，該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種額外治療劑。合適的額外藥劑包括以下中之一或多種：蒽環黴素藥物，諸如小紅莓及表柔比星(pharmorubicin®)；紫杉烷藥物，諸如太平洋紫杉醇(Taxol®)及多烯紫杉醇(Taxotere®)；氟尿嘧啶(5FU)；環磷醯胺；甲胺喋呤；順鉑；及卡培他濱。其他合適的額外治療劑包括激酶抑制劑拉帕替尼(Tykerb)及來那替尼(Nerlynx)。在其他實施例中，本文提供一種用於腫瘤縮小之方法，其包含向個體投與有效量之如本文所描述之4-1BB促效劑及HER-2靶向劑。根據任一上述態樣之「個體(individual或subject)」較佳為人類。
在一個態樣中，本發明提供一種用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中的4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用。在另一態樣中，本發明提供一種4-1BB促效劑及一種HER-2靶向劑，其用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中。在一些實施例中，將4-1BB促效劑及/或HER-2靶向劑與額外治療劑組合。
在其他態樣中，提供一種用於癌症免疫療法中之組合物，其包含4-1BB促效劑及HER-2靶向劑。在某些實施例中，提供一種組合物，其包含4-1BB促效劑及HER-2靶向劑，其用於癌症免疫療法之方法中。
在另一態樣中，本文提供一種包含4-1BB促效劑及HER-2靶向劑之組合物之用途，其用於製造或製備藥物。在一些實施例中，藥物係用於治療癌症。在一些實施例中，藥物係用於治療實體腫瘤。在一些實施例中，藥物係用於腫瘤縮小之方法中，該方法包含向患有實體腫瘤之個體投與有效量之藥物。在一個此類實施例中，該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種額外治療劑。在一些實施例中，藥物係用於治療實體腫瘤。
在特定態樣中，個體患有HER-2陽性癌症。在一些實施例中，癌症可包含過度表現HER-2之細胞。在一些實施例中，癌症包含實體腫瘤。在一些實施例中，實體腫瘤為晚期及/或轉移性實體腫瘤。在一些態樣中，HER-2陽性癌症為乳癌、卵巢癌、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、食道癌、肺癌(例如，肺腺癌或非小細胞肺癌(NSCLC))、子宮癌(例如，子宮漿液性子宮內膜癌)、唾液管癌、膀胱癌、子宮內膜癌、胰臟癌、結腸癌、***癌及/或頭頸癌。在一些態樣中，乳癌為***癌或乳腺癌。在一些態樣中，乳癌為侵襲性乳腺管癌。在一些態樣中，肺癌為肺腺癌。在一些實施例中，結腸癌為結腸直腸腺癌。根據任一上述實施例之「個體」可為人類。
在一些態樣中，癌症為HER-2陽性乳癌，特定言之轉移性乳癌(階段IV乳癌)。在一些態樣中，癌症為階段II或III HER-2陽性乳癌。在一些態樣中，癌症為HER-2陽性早期乳癌。在一些態樣中，癌症為HER-2陽性胃癌。
處理可旨在預防癌症發展或進展。因此，可使用本文所描述之4-1BB促效劑及HER-2靶向劑，防治性治療個體以抵抗疾病狀態之發展。此可在疾病狀態之症狀發作之前進行，及/或可向視為處於較高的發展或進展癌症風險之下的個體給予。
在一些實施例中，4-1BB促效劑與HER-2靶向劑協同作用。
上文提及之該等組合療法涵蓋組合投與(其中兩種或更多種治療劑包括在同一或單獨調配物中)及單獨投與，在此情況下，如本文所報導之抗體的投與可在投與一或多種額外治療劑之前、同時及/或之後進行。在一個實施例中，4-1BB促效劑及HER-2靶向劑之投與及視情況額外治療劑之投與在相隔約一個月內、或在相隔約一、二或三週內、或在相隔約一、二、三、四、五或六天內進行。
如本文所描述之4-1BB促效劑及HER-2靶向劑兩者(及任何額外治療劑)可藉由任何適合手段投與，包括非經腸、肺內及鼻內，且在需要局部治療時，病灶內投與。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。部分地視投藥之短期或長期性而定，給藥可藉由任何適合之途徑(例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射)來進行。本文中涵蓋各種給藥時程，包括(但不限於)單次投藥或經各個時間點多次投藥、快速投藥(bolus administration)及脈衝式輸注。
如本文所描述之4-1BB促效劑及HER-2靶向劑兩者將以與符合良好醫學實踐之方式調配、給藥及投與。在此情形中考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症起因、藥劑遞送位點、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知之其他因素。抗體無需但視情況與一或多種當前用於預防或治療所討論病症之藥劑一起調配。此類其他藥劑之有效量視存在於調配物中之抗體之量、病症或治療之類型及如上文所論述之其他因素而定。此等藥劑一般以相同劑量且以如本文所描述之投與途徑使用，或以本文所描述之劑量之約1%至99%使用，或以任何劑量且以憑經驗/臨床上判定為適當之任何途徑使用。
製品(套組) 在本發明之另一態樣中，提供一種套組，其含有適用於治療、預防及/或診斷上文所描述之病症的物質材料。套組包含至少一個容器及在容器上或容器隨附之標記或藥品說明書。合適的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可由多種材料(諸如玻璃或塑膠)形成。容器容納單獨或與有效治療、預防及/或診斷病狀之另一組合物組合之組合物，且可具有無菌接取口(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。套組中之至少兩種活性劑為本發明之4-1BB促效劑及HER-2靶向劑。在一些態樣中，該HER-2靶向劑包含HER-2抗體、雙特異性HER-2抗體及/或HER-2抗體藥物結合物。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑係選自由以下組成之群：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及曲妥珠單抗恩他新。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新之組合。在一些態樣中，HER-2靶向劑包含選自由以下組成之群的HER-2抗體：曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及馬戈妥昔單抗。在一個態樣中，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗或帕妥珠單抗。更特定言之，HER-2靶向劑為曲妥珠單抗。在一些態樣中，HER-2靶向劑為經糖基工程改造之HER-2抗體，例如TrasGex。在一些態樣中，HER-2靶向劑為雙特異性HER-2抗體，例如Herceptarg。在一些態樣中，HER-2靶向劑為HER-2抗體藥物結合物，特定言之曲妥珠單抗恩他新(曲妥珠單抗-恩他新偶聯物)。
在一特定態樣中，提供一種用於治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展的套組，其包含封裝，該封裝包含：(A)第一組合物，其包含作為活性成分之4-1BB促效劑及醫藥學上可接受之載劑；(B)第二組合物，其包含作為活性成分之HER-2靶向劑及醫藥學上可接受之載劑；及(C)在組合療法中，組合物之使用說明書。
標記或藥品說明書指示如何將組合物用於治療所選病狀，且提供關於在組合療法中使用組合物的說明。此外，套組可包含：(a)第一容器以及其中所含之組合物，其中該組合物包含本發明之4-1BB促效劑；及(b)第二容器以及其中所含之組合物，其中該組合物包含本發明之HER-2靶向劑。另外，套組可包含含有可組合使用之其他活性成分的一或多個其他容器。本發明之此實施例中之製品可進一步包含指示組合物可用於治療特定病狀之藥品說明書。
可替代地或另外，套組可進一步包含第二(或第三)容器，該第二(或第三)容器包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液及右旋糖溶液。其可進一步包括就商業及使用者觀點而言所需之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。 表C (序列)：
Figure AA4
Figure AA5
Figure AA6
Figure AA7
Figure AA8
Figure AA9
Figure AA10
Figure AA11
Figure AA12
Figure AA13
Figure AA14
Figure AA15
Figure AA16
Figure AA17
關於人類免疫球蛋白輕鏈及重鏈之核苷酸序列之一般資訊提供於Kabat, E.A.等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, 美國公眾衛生服務署, 國家衛生研究院, Bethesda, MD (1991)中。抗體鏈之胺基酸係根據如上文所定義之Kabat之編號系統(Kabat, E.A.等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, 美國公眾衛生服務署, 國家衛生研究院, Bethesda, MD (1991))編號及歸類。
本發明之態樣 下文列出本發明之一些態樣。
1.一種用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中的4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用。
2.一種用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中的4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用，且其中該4-1BB促效劑為包含能夠與腫瘤相關抗原特異性結合的至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
3.如態樣1之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑以單一組合物形式一起投與或以兩種或更多種不同組合物形式分開投與。
4.如態樣1或2之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑包含三個4-1BBL胞外域或其片段。
5.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段之分子，且其中該等4-1BBL胞外域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8，特定言之SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。
6.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域。
7.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與纖維母細胞活化蛋白(FAP)特異性結合之至少一個抗原結合域。
8.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與FAP特異性結合之抗原結合域包含： (a)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，或 (b)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
9.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子，其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)。
10.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域之抗原結合分子。
11.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能之一或多個胺基酸取代的Fc域的抗原結合分子。
12.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
13.如前述態樣中任一項之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與CD19特異性結合之至少一個Fab域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於： (i)分別地，第一多肽含有CH1或CL域及第二多肽含有CL或CH1域，其中第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH1或CL域連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CL或CH1域連接，或 (ii)分別地，第一多肽含有CH3域及第二多肽含有CH3域，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH3域之C端連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該一個胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CH3域之C端連接，或 (iii)分別地，該第一多肽含有VH-CL或VL-CH1域及該第二多肽含有VL-CH1域或VH-CL域，其中該第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與VH或VL連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之VL或VH連接。
14.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於，該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
15.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為選自由以下組成之群的抗原結合分子： a)分子，其包含含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第二輕鏈；及 b)分子，其包含含有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的第二輕鏈。
16.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽。
17.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽，及 (c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成之Fc域，其中包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽視情況經由肽連接子與Fc域之兩個次單元中之一者的N端或C端胺基酸融合。
18.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗-FAP/抗-4-1BB雙特異性抗體。
19.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
20.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子，其中能夠與CEA特異性結合之該抗原結合域包含：(a)重鏈可變區(VH CEA)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
21.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子，其中能夠與CEA特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的重鏈可變區(VH CEA)及含有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL CEA)。
22.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域之抗原結合分子。
23.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能之一或多個胺基酸取代的Fc域的抗原結合分子。
24.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
25.如前述態樣中任一項之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於： (i)分別地，第一多肽含有CH1或CL域及第二多肽含有CL或CH1域，其中第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH1或CL域連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CL或CH1域連接，或 (ii)分別地，第一多肽含有CH3域及第二多肽含有CH3域，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH3域之C端連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該一個胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CH3域之C端連接，或 (iii)分別地，該第一多肽含有VH-CL或VL-CH1域及該第二多肽含有VL-CH1域或VH-CL域，其中該第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與VH或VL連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之VL或VH連接。
26.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於，該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
27.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 82之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 83之胺基酸序列的第二輕鏈。
28.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽。
29.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽，及 (c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成之Fc域，其中包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽視情況經由肽連接子與Fc域之兩個次單元中之一者的N端或C端胺基酸融合。
30.如前述態樣之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗CEA/抗-4-1BB雙特異性抗體。
31.如前述態樣中任一項之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用，且其中該組合係以約一週至三週之間隔投與。
32.一種醫藥產品，其包含：(A)第一組合物，其包含作為活性成分之4-1BB促效劑及醫藥學上可接受之載劑；及(B)第二組合物，其包含作為活性成分之HER-2靶向劑及醫藥學上可接受之載劑，該等組合物組合、依序或同時使用以治療疾病，特定言之癌症。
33.一種醫藥組合物，其包含4-1BB促效劑及HER-2靶向劑。
34.如態樣32之醫藥組合物，其用於治療實體腫瘤。
35.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑包含三個4-1BBL胞外域或其片段。
36.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段之分子，且其中該等4-1BBL胞外域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8，特定言之SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。
37.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
38.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該腫瘤相關抗原為FAP。
39.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子，其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含： (a)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，或 (b)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
40.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子，其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)。
41.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子進一步包含由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域。
42.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域之抗原結合分子。
43.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能之一或多個胺基酸取代的Fc域的抗原結合分子。
44.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含含有胺基酸取代L234A、L235A及P329G之IgG1 Fc域的抗原結合分子。
45.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
46.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於： (i)分別地，第一多肽含有CH1或CL域及第二多肽含有CL或CH1域，其中第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH1或CL域連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CL或CH1域連接，或 (ii)分別地，第一多肽含有CH3域及第二多肽含有CH3域，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH3域之C端連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該一個胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CH3域之C端連接，或 (iii)分別地，該第一多肽含有VH-CL或VL-CH1域及該第二多肽含有VL-CH1域或VH-CL域，其中該第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與VH或VL連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之VL或VH連接。
47.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於，該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
48.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為選自由以下組成之群之抗原結合分子： a)分子，其包含含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第二輕鏈；及 b)分子，其包含含有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的第二輕鏈。
49.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽。
50.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽，及 (c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成之Fc域，其中包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽視情況經由肽連接子與Fc域之兩個次單元中之一者的N端或C端胺基酸融合。
51.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為抗-FAP/抗-4-1BB雙特異性抗體。
52.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該腫瘤相關抗原為CEA。
53.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子，其中能夠與CEA特異性結合之該抗原結合域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
54.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子，其中能夠與CEA特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的重鏈可變區(VH CEA)及含有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL CEA)。
55.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子進一步包含由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域。
56.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域之抗原結合分子。
57.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能之一或多個胺基酸取代的Fc域的抗原結合分子。
58.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含含有胺基酸取代L234A、L235A及P329G之IgG1 Fc域的抗原結合分子。
59.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
60.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於： (i)分別地，第一多肽含有CH1或CL域及第二多肽含有CL或CH1域，其中第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH1或CL域連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CL或CH1域連接，或 (ii)分別地，第一多肽含有CH3域及第二多肽含有CH3域，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH3域之C端連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該一個胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CH3域之C端連接，或 (iii)分別地，該第一多肽含有VH-CL或VL-CH1域及該第二多肽含有VL-CH1域或VH-CL域，其中該第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與VH或VL連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之VL或VH連接。
61.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
62.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 82之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 83之胺基酸序列的第二輕鏈。
63.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之4-1BBL胞外域或其片段的多肽。
64.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽，及 (c)由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成之Fc域，其中包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽視情況經由肽連接子與Fc域之兩個次單元中之一者的N端或C端胺基酸融合。
65.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑為抗CEA/抗-4-1BB雙特異性抗體。
66.如前述態樣中任一項之用於方法中之4-1BB促效劑或醫藥組合物，其中該HER-2靶向劑為曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新中之一或多者。
67.如前述態樣中任一項之用於方法中之4-1BB促效劑或醫藥組合物，其中該HER-2靶向劑為曲妥珠單抗。
68.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用，且其中該組合係以約一週至三週之間隔投與。
69.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其用於治療增殖性疾病(特定言之，癌症)或延遲增殖性疾病之進展。
70.如前述態樣中任一項之醫藥組合物，其用於治療乳癌、卵巢癌、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、食道癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、膀胱癌、子宮內膜癌、胰臟癌、結腸癌、***癌及/或頭頸癌。
71.一種用於治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展的套組，其包含封裝，該封裝包含：(A)第一組合物，其包含作為活性成分之4-1BB促效劑及醫藥學上可接受之載劑；(B)第二組合物，其包含作為活性成分之HER-2靶向劑及醫藥學上可接受之載劑；及(C)在組合療法中，組合物之使用說明書。
72.一種4-1BB促效劑及HER-2靶向劑之組合之用途，其用於製造用於治療增殖性疾病(特定言之，癌症)或延遲增殖性疾病之進展的藥物。
73.一種4-1BB促效劑及HER-2靶向劑之組合之用途，其用於製造藥物，其中該藥物係用於治療實體腫瘤。
74.一種用於治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展的方法，其包含向該個體投與有效量之4-1BB促效劑及有效量之HER-2靶向劑。
75.一種用於的治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展方法，其包含向該個體投與有效量之4-1BB促效劑及有效量之HER-2靶向劑，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子。
76.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含Fc域之抗原結合分子。
77.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含具有降低Fcγ受體結合及/或效應功能之修飾之Fc域的抗原結合分子。
78.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段之抗原結合分子。
79.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之抗原結合域的抗原結合分子。
80.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段之分子，且其中該等4-1BBL胞外域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8，特定言之SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5的胺基酸序列。
81.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個部分的抗原結合分子，其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含： (a)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，或 (b)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
82.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域，其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或其中能夠與FAP特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)。
83.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子進一步包含由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域。
84.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域之抗原結合分子。
85.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能之一或多個胺基酸取代的Fc域的抗原結合分子。
86.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
87.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於： (i)分別地，第一多肽含有CH1或CL域及第二多肽含有CL或CH1域，其中第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH1或CL域連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CL或CH1域連接，或 (ii)分別地，第一多肽含有CH3域及第二多肽含有CH3域，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH3域之C端連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該一個胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CH3域之C端連接，或 (iii)分別地，該第一多肽含有VH-CL或VL-CH1域及該第二多肽含有VL-CH1域或VH-CL域，其中該第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與VH或VL連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之VL或VH連接。
88.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
89.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為選自由以下組成之群之抗原結合分子： a)分子，其包含含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第二輕鏈；及 b)分子，其包含含有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的第二輕鏈。
90.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽。
91.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為抗-FAP/抗-4-1BB雙特異性抗體。
92.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個部分的抗原結合分子，其中能夠與CEA特異性結合之該抗原結合域包含： 重鏈可變區(VH CEA)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
93.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子，其中能夠與CEA特異性結合之該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的重鏈可變區(VH CEA)及含有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL CEA)。
94.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子進一步包含由能夠穩定結合之第一及第二次單元構成的Fc域。
95.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域之抗原結合分子。
96.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能之一或多個胺基酸取代的Fc域的抗原結合分子。
97.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
98.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於： (i)分別地，第一多肽含有CH1或CL域及第二多肽含有CL或CH1域，其中第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH1或CL域連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CL或CH1域連接，或 (ii)分別地，第一多肽含有CH3域及第二多肽含有CH3域，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與CH3域之C端連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該一個胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之CH3域之C端連接，或 (iii)分別地，該第一多肽含有VH-CL或VL-CH1域及該第二多肽含有VL-CH1域或VH-CL域，其中該第二多肽藉由CH1域與CL域之間的二硫鍵與第一多肽連接，且其中第一多肽包含兩個4-1BBL胞外域或其片段，該等胞外域或其片段藉由肽連接子彼此連接且與VH或VL連接，且其中第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段，該胞外域或其片段經由肽連接子與該多肽之VL或VH連接。
99.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
100.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 82之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 83之胺基酸序列的第二輕鏈。
101.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)包含藉由肽連接子彼此連接之三個4-1BBL胞外域或其片段的多肽。
102.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑為抗CEA/抗-4-1BB雙特異性抗體。
103.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用，且其中該組合係以約一週至三週之間隔投與。
104.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑以單一組合物形式一起投與或以兩種或更多種不同組合物形式分開投與。
105.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑係經靜脈內或皮下投與。
106.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑與該HER-2靶向劑同時、在其之前或之後投與。
107.如前述態樣中任一項之方法，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑係同時投與。
108.如前述態樣中任一項之用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中的4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用，且其中該4-1BB促效劑與該HER-2靶向劑協同作用。
109.用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中的4-1BB促效劑，其中該4-1BB促效劑與HER-2靶向劑組合使用，且其中在該組合治療之前用II型抗-CD20抗體進行預治療，其中該預治療與該組合治療之間的時間段足以降低個體中回應於該II型抗-CD20抗體之B細胞。
110.如態樣109之用於方法中之4-1BB促效劑，其中該II型抗-CD20抗體為奧濱尤妥珠單抗。
111.一種用於治療個體之癌症或延遲個體之癌症之進展的方法，其包含向該個體投與有效量之4-1BB促效劑及有效量之HER-2靶向劑的組合，其中在用該組合治療之前用II型抗-CD20抗體進行預治療，其中該預治療與該組合治療之間的時間段足以降低個體中回應於該II型抗-CD20抗體之B細胞。
112.如態樣111之方法，其中該II型抗-CD20抗體為奧濱尤妥珠單抗。
113.一種組合，其包含4-1BB(CD137)促效劑及HER-2靶向劑，其中該4-1BB促效劑為包含能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
114.如態樣113之組合，其中該HER-2靶向劑包含HER-2抗體、HER-2雙特異性抗體及/或HER-2抗體藥物結合物。
115.如態樣113或114之組合，其中該HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。
116.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑包含三個4-1BBL胞外域或其片段。
117.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段之分子，且其中該等4-1BBL胞外域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8，特定言之SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。
118.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與選自由纖維母細胞活化蛋白(FAP)及CEA組成之群之腫瘤相關抗原特異性結合的至少一個抗原結合域。
119.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域之抗原結合分子。
120.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為包含含有降低與Fc受體之結合及/或效應功能之一或多個胺基酸取代的Fc域的抗原結合分子。
121.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與纖維母細胞活化蛋白(FAP)特異性結合之至少一個抗原結合域。
122.如前述態樣中任一項之組合，其中能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之抗原結合域為能夠與FAP特異性結合的抗原結合域，該抗原結合域包含： (a)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，或 (b)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
123.如前述態樣中任一項之組合，其中能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之該抗原結合域為能夠與FAP特異性結合的抗原結合域，該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或其中能夠與FAP特異性結合的該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)。
124.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
125.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
126.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：含有SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的第一重鏈、含有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一輕鏈、含有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第二重鏈及含有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第二輕鏈。
127.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為抗-FAP/抗-4-1BB雙特異性抗體。
128.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
129.如前述態樣中任一項之組合，其中能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之該抗原結合域為能夠與CEA特異性結合之抗原結合域，該抗原結合域包含：(a)重鏈可變區(VH CEA)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
130.如前述態樣中任一項之組合，其中能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之該抗原結合域為能夠與CEA特異性結合之抗原結合域，該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的重鏈可變區(VH CEA)及含有SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL CEA)。
131.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
132.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為包含： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子之特徵在於該第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且在於該第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
133.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑為抗CEA/抗-4-1BB雙特異性抗體。
134.如前述態樣中任一項之組合，其用作藥物。
135.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑以單一組合物形式一起投與或以兩種或更多種不同組合物形式分開投與。
136.如前述態樣中任一項之組合，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑係用於同步投與或用於依序投與。
137.如前述態樣中任一項之組合，其用於治療HER-2陽性癌症。
實例 以下為本發明之方法及組合物的實例。應理解，考慮到上文提供之一般描述，可實踐各種其他實施例。
重組DNA技術 使用標準方法來如Sambrook, J.等人, Molecular cloning: A laboratory manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989中所描述操作DNA。分子生物試劑係根據製造商之說明書使用。關於人類免疫球蛋白輕鏈及重鏈之核苷酸序列之一般資訊在以下中給出：Kabat, E.A.等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, NIH公開案第91-3242號。
DNA定序 藉由雙股定序法測定DNA序列。
基因合成 所需基因區段係使用適當模板藉由PCR產生，或藉由自動化基因合成法，藉由Geneart AG (Regensburg, Germany)自合成寡核苷酸及PCR產物合成。在確切基因序列無法獲得的情況下，基於來自最近同源物的序列來設計寡核苷酸引子，且藉由RT-PCR自來源於適當組織之RNA分離基因。將側接有單數個限制性核酸內切酶裂解位點的基因區段選殖至標準選殖/定序載體中。自經轉化之細菌純化出質體DNA且藉由UV光譜分析來測定濃度。經次選殖之基因片段之DNA序列藉由DNA定序來確認。基因區段設計成具有允許次選殖至各別表現載體中的合適的限制位點。所有構築體設計成具有5'端DNA序列，該序列編碼靶向真核細胞中分泌之蛋白質的前導肽。
細胞培養技術 如Cell Biology (2000), Bonifacino, J.S., Dasso, M., Harford, J.B., Lippincott-Schwartz, J.及Yamada, K.M. (編), John Wiley & Sons, Inc.中之現有方案中所描述使用標準細胞培養技術。
蛋白質純化 參考標準方案，自經過濾之細胞培養物清液層純化蛋白質。簡言之，將抗體施用於蛋白A瓊脂糖凝膠管柱(GE Healthcare)且用PBS洗滌。在pH 2.8下達成抗體之溶離，隨後立即中和樣本。在PBS或20 mm組胺酸、150 mM NaCl pH 6.0中，藉由尺寸排阻層析(Superdex 200，GE Healthcare)將聚集之蛋白質與單體抗體分離。單體抗體級分經合併、使用例如MILLIPORE Amicon Ultra (30 MWCO)離心濃縮器濃縮(必要時)、冷凍且儲存在-20℃或-80℃下。提供部分樣本用於例如藉由SDS-PAGE、尺寸排阻層析(SEC)或質譜法進行後續蛋白質分析及分析型表徵。
SDS-PAGE 根據製造商說明書使用NuPAGE® Pre-Cast凝膠系統(Invitrogen)。特定言之，使用10%或4-12% NuPAGE® Novex® Bis-TRIS Pre-Cast凝膠(pH 6.4)及NuPAGE® MES (還原性凝膠，具有NuPAGE® Antioxidant操作緩衝液添加劑)或MOPS (非還原性凝膠)操作緩衝液。
分析性尺寸排阻層析 藉由HPLC層析進行用於測定抗體之聚集及寡聚狀態之尺寸排阻層析(SEC)。簡言之，將蛋白A純化抗體施用於Agilent HPLC 1100系統上300 mM NaCl、50 mM KH2 PO4 /K2 HPO4 ，pH 7.5中之Tosoh TSKgel G3000SW管柱或Dionex HPLC系統上2×PBS中之Superdex 200管柱(GE Healthcare)。藉由UV吸光度及峰面積之積分來定量溶離之蛋白質。將BioRad Gel過濾標準151-1901用作標準。
質譜法 此章節描述具有VH/VL交換(VH/VL互換單抗)之多特異性抗體之表徵，其中強調其正確組裝。藉由去糖基化完整互換單抗及去糖基化/纖維蛋白溶酶消化或以其他方式去糖基化/限制性LysC消化互換單抗之電噴霧電離質譜法(ESI-MS)來分析預期主要結構。
將VH/VL互換單抗在蛋白質濃度為1 mg/ml下，在磷酸鹽或Tris緩衝液中，在37℃下用N-糖苷酶F去糖基化達17小時。纖維蛋白溶酶或限制性LysC (Roche)消化用100 µg去糖基化VH/VL互換單抗在Tris緩衝液pH 8中，分別在室溫下進行120小時及在37℃下進行40分鐘。在質譜法之前，在Sephadex G25管柱(GE Healthcare)上經由HPLC將樣本去鹽。在配備有TriVersa NanoMate源(Advion)之maXis 4G UHR-QTOF MS系統(Bruker Daltonik)上經由ESI-MS測定總質量。
使用表面電漿子共振 (SPR) (BIACORE) 測定多特異性抗體與各別抗原之結合及結合親和力 使用BIACORE儀器(GE Healthcare Biosciences AB, Uppsala, Sweden)，藉由表面電漿子共振研究所產生之抗體與各別抗原之結合。簡言之，對於親和力量測，經由胺偶合，將山羊抗-人類IgG JIR 109-005-098抗體固定在CM5晶片上以用於針對各別抗原之抗體之呈現。在HBS緩衝液(HBS-P) (10 mM HEPES、150 mM NaCl、0.005% Tween 20，pH 7.4)中，在25℃下(或替代地在37℃下)量測結合。在溶液中以多種濃度添加抗原(R&D Systems或內部純化)。藉由80秒至3分鐘之抗原注射來量測結合；藉由用HBS緩衝液洗滌晶片表面3-10分鐘來量測解離，且使用1:1朗繆爾結合模型(Langmuir binding model)來評估KD值。自樣本曲線減去陰性對照資料(例如緩衝液曲線)以用於系統內源性基線偏移之校正及降低雜訊信號。使用各別Biacore Evaluation軟體進行感測器圖譜之分析及親和力資料之計算。
實例1
FAP-4-1BBL抗原結合分子之製備、純化及表徵 如國際專利申請公開案第WO 2016/075278 A1號中所描述製備FAP-含靶向4-1BB配體三聚體之Fc融合抗原結合分子。
特定言之，製備以下分子：
a)一價FAP-含靶向及非靶向4-1BB配體三聚體之Fc融合抗原結合分子 將編碼與人類CL域融合之二聚4-1BB配體的多肽次選殖在杵上具有人類IgG1重鏈CH2及CH3域的框架中(Merchant, Zhu等人1998, Nature Biotechnol. 16, 677-681)。將含有一個4-1BB配體胞外域之多肽與人類IgG1-CH1域融合。在構築體2.4中，為了提高鏈之正確配對，另外將以下突變引入互換CH-CL (帶電變體)中。在與人類CL融合之二聚4-1BB配體中，引入E123R及Q124K，在與人類CH1融合之單體4-1BB配體中，引入K147E及K213E。
將編碼對FAP具有特異性之結合子(純系28H1或純系4B9)之重鏈及輕鏈DNA序列之可變區，次選殖在具有臼之恆定重鏈或人類IgG1之恆定輕鏈的框架中。根據WO 2012/130831中描述之方法，已將Pro329Gly、Leu234Ala及Leu235Ala突變引入杵及臼重鏈之恆定區以消除與Fcγ受體之結合。含有S354C/T366W突變之二聚配體Fc杵鏈、單體CH1融合物、含有Y349C/T366S/L368A/Y407V突變之靶向抗-FAP-Fc臼鏈及抗-FAP輕鏈之組合，允許產生雜二聚體，其包括所組裝之三聚4-1BB配體及FAP結合Fab (圖 1A )。已相應地藉由用生殖系DP47置換FAP結合子來製備非靶向型式(圖 1C )。表 1 ： 一價構築體
Figure 108107979-A0304-0004
a)二價FAP-含靶向及非靶向4-1BB配體三聚體之Fc融合抗原結合分子 將編碼重鏈及輕鏈之重鏈及輕鏈可變區(特定地，對FAP具有特異性之結合子(純系28H1或純系4B9))的DNA序列，次選殖在具有臼之恆定重鏈、杵或人類IgG1之恆定輕鏈的框架中。根據WO 2012/130831中描述之方法，將Pro329Gly、Leu234Ala及Leu235Ala突變引入杵及臼重鏈之恆定區以消除與Fcγ受體之結合。此外，將包含兩個4-1BB配體胞外域之多肽與人類IgG1 Fc臼鏈之C端融合，且將包含一個4-1BB配體胞外域之多肽與人類IgG1 Fc杵鏈之C端融合。含有Y349C/T366S/L368A/Y407V突變之抗-FAP huIgG1臼二聚配體重鏈、含有S354C/T366W突變之抗-FAP huIgG1杵單體配體重鏈及抗-FAP輕鏈之組合，允許產生雜二聚體，其包括所組裝之三聚4-1BB配體及兩個FAP結合Fab (圖 1B )。已相應地藉由用生殖系DP47置換FAP結合子來製備非靶向型式(圖 1D )。表 2 ： 二價構築體
在WO 2016/075278之實例1至6中，分別詳細描述FAP-含靶向及未靶向4-1BB配體三聚體之Fc融合抗原結合分子的產生及表徵。
實例2
FAP靶向小鼠4-1BBL抗原結合分子(混合替代物)之製備、純化及表徵 如國際專利申請公開案第WO 2016/075278 A1號中所描述，製備包含單價結合FAP之促效小鼠4-1BB配體的雙特異性抗原結合分子，亦被稱為混合替代物或FAP-mu4-1BBL。如關於人類配體所描述，藉由用小鼠胞外域置換人類配體而製備靶向小鼠4-1BBL。
根據Uniprot資料庫之Q3U1Z9-1序列，合成編碼小鼠4-1BB配體之胞外域之一部分(胺基酸104-309，包括C160S突變)的DNA序列。用於靶向4-1BB配體之FAP結合子為純系4B9。混合替代物FAP-mu4-1BBL之胺基酸序列可見於表3中。表 3 ： 成熟混合替代物 FAP-mu4-1BBL 之胺基酸序列
Figure AA18
藉由使用eviFect (Evitria AG)，用哺乳動物表現載體共轉染生長於懸浮液中的CHO-K1細胞，來產生混合替代物FAP-mu4-1BBL。使用對應表現載體以1:1:1:1之比率(「載體Fc-臼重鏈」:「載體FAP輕鏈」:「載體4-1BBL Fc杵重鏈」:「載體mu4-1BBL輕鏈」)轉染細胞。
為了轉染，在eviMake培養基(Evitria AG)中以不含血清之懸浮液培養CHO-K1細胞。在培育箱中在37℃下5% CO2 氛圍下7天後，藉由離心收集培養上清液以用於純化，且將溶液無菌過濾(0.22 mm過濾器)並保持於4℃下。
藉由親和層析，使用蛋白A，隨後尺寸排阻層析，自細胞培養物上清液純化所分泌之蛋白質。對於親和層析，將上清液裝載於使用20 mM磷酸鈉、20 mM檸檬酸鈉pH 7.5平衡之蛋白A MabSelectSure管柱(GE Healthcare)上。藉由用含有20 mM磷酸鈉、20 mM檸檬酸鈉之緩衝液(pH 7.5)洗滌來移除未結合蛋白質。使用20 mM檸檬酸鈉、100 mM NaCl、100 mM甘胺酸、0.01% Tween20 ，pH 3.0之線性pH梯度之氯化鈉來溶離結合蛋白質。隨後用20 mM檸檬酸鈉、100 mM NaCl、100 mM甘胺酸、0.01% Tween20，pH 3.0洗滌管柱。藉由添加1/40 (v/v) 2 M Tris，pH 8.0來調節所收集之級分之pH。在裝載於用20 mM組胺酸、140 mM NaCl、0.01% Tween20，pH 6.0平衡之HiLoad Superdex管柱(GE Healthcare)上之前，將蛋白質進行濃縮且過濾。
藉由使用基於胺基酸序列計算之莫耳消光係數量測280 nm下的OD來測定經純化的雙特異性構築體的蛋白質濃度。使用LabChipGXII (測徑規)在存在及不存在還原劑(Invitrogen, USA)下藉由CE-SDS分析雙特異性構築體之純度及分子量。在25℃下，使用在25 mM K2 HPO4 、125 mM NaCl、200 mM L-精胺酸單鹽酸鹽、0.02% (w/v) NaN3 、pH 6.7操作緩衝液中平衡之TSKgel G3000 SW XL分析型尺寸排阻管柱(Tosoh)，分析雙特異性構築體之聚集物含量。表 4 ： 對混合替代物 FAP-mu4-1BBL 之生物化學分析
2.1 藉由表面電漿子共振對混合替代物 FAP-mu4-1BBL 進行功能性表徵 以如WO 2016/075278 A1中所描述之方式，藉由表面電漿子共振(SPR)評定同時結合鼠類4-1BB Fc(kih)及人類或鼠類FAP之能力。所有SPR實驗均在Biacore T200上在25℃下用HBS-EP作為操作緩衝液(0.01 M HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、3 mM EDTA、0.005%界面活性劑P20, Biacore, Freiburg/Germany)來進行。經生物素標記之鼠類4-1BB Fc(kih)與抗生蛋白鏈菌素(SA)感測器晶片之流動細胞直接偶合。使用至多600個共振單位(RU)之固定水準。
FAP-靶向mu4-1BBL構築體以200 nM濃度範圍以30微升/分鐘流速歷經90秒流過流動細胞，且解離設定為零秒。以500 nM之濃度，以30微升/分鐘之流速，歷經90秒流過流動細胞，注射人類或鼠類FAP作為第二分析物。監測解離120秒。藉由減去在參考流動細胞(其中未固定蛋白質)中獲得之反應來校正整體折射率差異。
如圖 2A 及圖 2B 之曲線中可見，混合替代物FAP-mu4-1BBL可同時結合鼠類4-1BB及鼠類/人類FAP。
實例3
與小鼠4-1BB二價結合且與FAP單價結合之雙特異性抗原結合分子之製備、純化及特徵化 對4-1BB二價結合且對FAP單價結合(亦稱為2+1)之雙特異性促效4-1BB抗體已類似於圖 1 來製備。在此實例中，構築體之第一重鏈HC1包含以下組分：抗-4-1BB (純系MU137-1)之VHCH1，隨後為含有突變Lys392Asp及Lys409Asp之Fc (稱為Fc-DD)，在其C端融合有抗-FAP結合子(純系28H1)之VL或VH。第二重鏈HC2包含抗-4-1BB (純系MU137-1)之VHCH1，隨後為含有突變Glu356Lys及Asp399Lys之Fc (稱為Fc-KK)，在其C端融合有抗-FAP結合子(純系28H1)之VH或VL。用於促進抗體Fc雜二聚體形成之DDKK突變尤其由Gunasekaran等人, J. Biol. Chem. 2010,19637-19646所描述。靶向抗-FAP-Fc DD與抗-4-1BB-Fc KK鏈之組合允許產生雜二聚體，其包括FAP結合部分及兩個鼠類小鼠4-1BB結合Fab。根據例如Baudino等人 J. Immunol. (2008), 181, 6664-6669或WO 2016/030350 A1中所描述之方法，在重鏈之恆定區中引入DAPG突變以消除與小鼠Fc γ受體之結合。簡言之，將Asp265Ala及Pro329Gly突變引入Fc-DD及Fc-KK重鏈之恆定區以消除與Fcγ受體之結合(根據Kabat EU索引編號；亦即D265A，P329G)。
a-FAP(28H1) VH與Fc-KK融合且VL與Fc-DD鏈融合之2+1抗-4-1BB(MU137-1)、抗-FAP(28H1)構築體之胺基酸序列可分別見於表 5 中。a-FAP(28H1) VL與Fc-KK融合且VH與Fc-DD鏈融合之2+1抗-4-1BB(MU137-1)、抗-FAP(28H1)構築體之胺基酸序列可分別見於表 6 中。表 5 ： 雙特異性二價抗-4-1BB (MU137-1)/抗-FAP (28H1)小鼠IgG1 DAPG抗原結合分子(FAP VL與Fc-DD鏈融合且VH與Fc-KK鏈融合之構築體，下文亦稱為Fc-DD-VL)之序列
Figure AA3
 表 6 ： 雙特異性二價抗-4-1BB (MU137-1)/一價抗-FAP (28H1)小鼠IgG1 DAPG抗原結合分子(FAP VH與Fc DD鏈融合且VL與Fc KK鏈融合之構築體，下文亦稱為Fc-DD-VH)之序列
Figure AA19
藉由使用eviFect (Evitria AG)、用哺乳動物表現載體共轉染生長於懸浮液中的CHO-K1細胞來製備雙特異性2+1抗-4-1BB抗-FAP muIgG1 DAPG。細胞用對應表現載體以1:1:1比率(「載體Fc-DD重鏈」:「載體輕鏈」:「載體Fc-KK重鏈」)轉染。
為了轉染，在eviMake (Evitria AG)培養基中以不含血清之懸浮液培養CHO-K1細胞。在培育箱中在37℃下5% CO2 氛圍下7天後，藉由離心收集培養上清液以用於純化，且將溶液無菌過濾(0.22 mm過濾器)並保持於4℃下。
藉由親和層析，使用蛋白A，隨後尺寸排阻層析，自細胞培養物上清液純化所分泌之蛋白質。對於親和層析，將上清液裝載至用40 mL 20 mM磷酸鈉、20 mM檸檬酸鈉pH 7.5平衡之蛋白A MabSelectSure管柱(CV = 5 mL，GE Healthcare)上。藉由用至少10管柱體積之含有20 mM磷酸鈉、20 mM檸檬酸鈉的緩衝液(pH 7.5)洗滌來移除未結合之蛋白質。結合之蛋白質使用超過15管柱體積之20 mM檸檬酸鈉、100 mM NaCl、100 mM甘胺酸，pH 3.0產生之線性pH梯度之氯化鈉(20至100 mM)溶離。隨後用10管柱體積之20 mM檸檬酸鈉、100 mM NaCl、100 mM甘胺酸，pH 3.0洗滌管柱。藉由添加1/40 (v/v) 2 M Tris，pH 8.0來調節所收集之級分之pH。在裝載於用20 mM組胺酸、140 mM NaCl，pH 6.0平衡之HiLoad Superdex 16/600 S200管柱(GE Healthcare)上之前，將蛋白質進行濃縮且過濾。
藉由使用基於胺基酸序列計算之莫耳消光係數量測280 nm下的OD來測定經純化的雙特異性構築體的蛋白質濃度。使用LabChipGXII (測徑規)在存在及不存在還原劑(Invitrogen, USA)下藉由CE-SDS分析雙特異性構築體之純度及分子量。在25℃下，使用在25 mM K2 HPO4 、125 mM NaCl、200 mM L-精胺酸單鹽酸鹽、0.02% (w/v) NaN3 、pH 6.7操作緩衝液中平衡之TSKgel G3000 SW XL分析型尺寸排阻管柱(Tosoh)，分析雙特異性構築體之聚集物含量。表 7 - 對與4-1BB二價結合且與FAP單價結合之雙特異性抗原結合分子(2+1)抗-4-1BB (MU137-1)、抗-FAP (28H1)小鼠IgG1 DAPG的生物化學分析
Figure 108107979-A0304-0010
3.1 藉由表面電漿子共振對小鼠替代物 muFAP-4-1BB 進行功能性表徵 以如WO 2016/075278 A1中所描述之方式，藉由表面電漿子共振(SPR)評定同時結合鼠類4-1BB Fc(kih)及鼠類FAP之能力。所有SPR實驗均在Biacore T200上在25℃下用HBS-EP作為操作緩衝液(0.01 M HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、3 mM EDTA、0.005%界面活性劑P20, Biacore, Freiburg/Germany)來進行。經生物素標記之鼠類4-1BB Fc(kih)與抗生蛋白鏈菌素(SA)感測器晶片之流動細胞直接偶合。使用至多600個共振單位(RU)之固定水準。
FAP-靶向4-1BBL構築體以200 nM濃度範圍以30微升/分鐘流速歷經90秒流過流動細胞，且解離設定為零秒。以500 nM之濃度，以30微升/分鐘之流速，歷經90秒流過流動細胞，注射鼠類FAP作為第二分析物。監測解離120秒。藉由減去在參考流動細胞(其中未固定蛋白質)中獲得之反應來校正整體折射率差異。如圖 2C 之曲線中可見，小鼠替代物muFAP-4-1BB可同時結合鼠類4-1BB及鼠類FAP。
實例4
單一注射後 C57BL/6 小鼠中之 muFAP-4-1BB 之藥物動力學概況 將單次劑量2.5 mg/kg之muFAP-4-1BB (根據實例3製備)注射至C57BL/6小鼠中。對所有小鼠均靜脈內注射200 µl適當溶液。為了得到每200 µl適當量之化合物，儲備溶液(muFAP-4-1BB；1.81 mg/mL，於20 mM組胺酸、140 mM NaCl pH 6.0中)用組胺酸緩衝液稀釋。在10分鐘、1小時、6小時、24小時、48小時、72小時、96小時、6天及9天處，對三隻小鼠/時間點進行抽血。藉由ELISA分析血清樣本中之所注射化合物。將經生物素標記之鼠類4-1BB、測試血清樣本、經HRP標記之偵測抗體抗msIgG，逐步添加至96孔抗生蛋白鏈菌素塗覆之微量滴定盤且在各步驟後於室溫下培育1 h。在各步驟後洗滌培養盤三次以移除未結合之物質。最終，藉由添加ABTS受質溶液形成著色反應產物來觀測過氧化酶結合之複合物。在405 nm下(參考波長在490 nm下)以光度測定反應產物強度，且其與血清樣本中之分析物濃度成比例。結果顯示在圖 3 中。muFAP-4-1BB顯示穩定PK行為，其針對功效研究推薦每週一次之時程。
實例5
與曲妥珠單抗組合之混合FAP-mu4-1BBL構築體之活體內抗腫瘤功效 首先在腫瘤攜帶(N87攜帶) huCD16TgScid小鼠中，進行混合FAP-mu4-1BBL (抗-FAP、小鼠4-1BBL、人類IgG主鏈)及曲妥珠單抗之組合的概念驗證。
最初自ATCC獲得N87細胞(Her2+人類胃癌瘤)且在擴增之後，寄存在Roche Glycart內部細胞庫中。於含有10% FCS及1% Glutamax之RPMI中培養細胞。在37℃下在5% CO2 下於水飽和氛圍中培養細胞。將在＞95.0%之存活力下，於RPMI細胞培養基(Gibco)及GFR基質膠(1:1，總體積100 µl)中之5 × 106 個細胞/動物，皮下注射至中動物之右側腹中。
根據提交指南(GV-Solas; Felasa; TierschG)，以每天12 h光照/12 h黑暗之循環，將在實驗開始時8-10週齡之人類FcgRIIIa (CD16)轉殖基因SCID小鼠(其表現鼠類FcγRIV陽性巨噬細胞及人類FcγRIIIa陽性轉殖基因鼠類NK細胞兩者作為效應子) (在Charles River, France處培育)，維持在不含特定病原體的條件下。實驗研究方案經當地政府審查且批准。動物在到達之後維持一週以使其適應新環境且進行觀察。在常規基礎上進行連續健康監測。
根據方案(圖 4A )，當腫瘤大小達到大約220 mm3 (第28天)時，如上文所描述對雌性huCD16TgScid小鼠皮下注射腫瘤細胞，且每週使用化合物或PBS (媒劑)處理一次。對所有小鼠每週一次靜脈內注射200 µl之適當溶液。為了得到每200 µl適當量之化合物，必需時，用組胺酸緩衝液稀釋儲備溶液(表1)。對於使用曲妥珠單抗及FAP-4-1BBL構築體之組合療法(組D，圖 4B )，同時注射療法。使用測徑規每週量測腫瘤生長兩次(圖 5A 及圖 5B )，且如下計算腫瘤體積： Tv ：(W2 /2) × L(W ：寬度， L ：長度 )
在八次注射化合物之後(在腫瘤細胞注射86天之後)，終止研究且處死所有小鼠。圖 5A 及圖 5B 顯示所有處理組中之腫瘤生長動力學(平均值+/- SEM)以及所有組之各動物的各別腫瘤生長動力學。混合FAP-mu4-1BBL之單藥療法不展現任何腫瘤生長抑制。在研究終止時，有一隻無腫瘤小鼠中，作為單藥療法給予之曲妥珠單抗誘導腫瘤停滯(TGI：95及TCR：0.35)。然而，曲妥珠單抗及混合FAP-mu4-1BBL之組合誘導強力腫瘤消退(TGI：132及TCR：0.09)，在第86天得到60%無腫瘤的小鼠。
使用JMP軟體進行統計分析：
Figure 02_image001
基於研究之第59天之計算顯示於以下表9中。表 8 ：用於活體內實驗中之組合物
Figure 108107979-A0304-0011
 表 9 ： 在第 59 天之腫瘤生長抑制 (TGI) 及 TCR
Figure 108107979-A0304-0012
 TGI：腫瘤生長抑制=＞TGI＞100意謂腫瘤消退，TGI=100意謂腫瘤停滯； TCR：處理與對照比率=＞TCR=1意謂無效果，TCR=0意謂完全腫瘤消退
實例6
CEA-4-1BBL抗原結合分子之製備、純化及表徵 如國際專利申請公開案第WO 2016/075278 A1號中所描述製備CEA-含靶向4-1BB配體三聚體之Fc融合抗原結合分子。
特定言之，製備一價CEA-含靶向及非靶向4-1BB配體三聚體之融合抗原結合分子。
將編碼與人類CL域融合之二聚4-1BB配體的多肽次選殖在杵上具有人類IgG1重鏈CH2及CH3域的框架中(Merchant, Zhu等人1998, Nature Biotechnol.16, 677-681)。將含有一個4-1BB配體胞外域之多肽與人類IgG1-CH1域融合。為了提高正確配對，另外將以下突變引入互換CH-CL (帶電變體)中：在與人類CL融合之二聚4-1BB配體中，引入E123R及Q124K，在與人類CH1融合之單體4-1BB配體中，引入K147E及K213E。
將編碼對CEA具有特異性之結合子(純系T84.66-LCHA) (CEACAM5)之重鏈及輕鏈DNA序列之可變區，次選殖在具有臼之恆定重鏈或人類IgG1之恆定輕鏈的框架中。根據WO 2012/130831中描述之方法，將Pro329Gly、Leu234Ala及Leu235Ala突變引入杵及臼重鏈之恆定區以消除與Fcγ受體之結合。含有S354C/T366W突變之二聚配體Fc杵鏈、單體CH1融合物、含有Y349C/T366S/L368A/Y407V突變之靶向抗CEA-Fc臼鏈及抗CEA輕鏈之組合，允許產生雜二聚體，其包括所組裝之三聚4-1BB配體及CEA結合Fab (類似於圖 1A ，抗-FAP經抗CEA置換)。表 10 ： 一價構築體
Figure 108107979-A0304-0013
在WO 2016/075278之實例11至13中，分別詳細描述CEA-含靶向及非靶向4-1BB配體三聚體之Fc融合抗原結合分子的產生及表徵。
圖 1 顯示特定FAP-4-1BBL抗原結合分子。此等分子更詳細地描述於實例1中。粗黑點表示杵-臼修飾。圖1A顯示一價FAP 4-1BBL三聚體，其含有在鄰近於4-1BBL二聚體及4-1BBL單體之CH1及CL域中具有修飾的抗原結合分子。由於其包含FAP結合子4B9，故其在本文中稱為單FAP(4B9)-4-1BBL。圖1B顯示具有結合子FAP(4B9)之二價構築體，被稱為二FAP(4B9)-4-1BBL。圖1C及圖1D顯示非靶向對照分子(FAP結合子已經非結合DP47 Fab置換)。圖 2A 及圖 2B 分別顯示混合替代物FAP-mu4-1BBL (分析物1)與固定的鼠類4-1BB及人類FAP或鼠類FAP (分析物2)之同步結合。圖 2C 顯示鼠類雙特異性FAP-4-1BB抗體muFAP-4-1BB (分析物1)與固定的鼠類4-1BB及鼠類FAP (分析物2)之同步結合。圖 3 顯示如實例4中所描述的在C57BL/6小鼠中單一注射之後的muFAP-4-1BB之藥物動力學概況。觀察到穩定PK行為，其表明可以每週一次之時程投與化合物。圖 4A 及圖 4B 顯示如實例5中所描述的huCD16TgScid小鼠之處理時程及處理組。圖 5A 顯示如在用單獨曲妥珠單抗、單獨混合FAP-mu4-1BBL或兩者之組合處理之小鼠中所觀測到的腫瘤生長動力學(平均值+/- SEM)。在圖 5B (對照組)、圖 5C (用單獨曲妥珠單抗處理)、圖 5D (用單獨FAP-mu4-1BBL處理)及圖 5E (用組合處理)中，顯示所有處理組之每一動物的個別腫瘤生長動力學。指示研究終止時之無腫瘤小鼠的數目。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045
Figure 12_A0101_SEQ_0046
Figure 12_A0101_SEQ_0047
Figure 12_A0101_SEQ_0048
Figure 12_A0101_SEQ_0049
Figure 12_A0101_SEQ_0050
Figure 12_A0101_SEQ_0051
Figure 12_A0101_SEQ_0052
Figure 12_A0101_SEQ_0053
Figure 12_A0101_SEQ_0054
Figure 12_A0101_SEQ_0055
Figure 12_A0101_SEQ_0056
Figure 12_A0101_SEQ_0057
Figure 12_A0101_SEQ_0058
Figure 12_A0101_SEQ_0059
Figure 12_A0101_SEQ_0060
Figure 12_A0101_SEQ_0061
Figure 12_A0101_SEQ_0062
Figure 12_A0101_SEQ_0063
Figure 12_A0101_SEQ_0064
Figure 12_A0101_SEQ_0065
Figure 12_A0101_SEQ_0066
Figure 12_A0101_SEQ_0067
Figure 12_A0101_SEQ_0068
Figure 12_A0101_SEQ_0069
Figure 12_A0101_SEQ_0070
Figure 12_A0101_SEQ_0071
Figure 12_A0101_SEQ_0072
Figure 12_A0101_SEQ_0073
Figure 12_A0101_SEQ_0074
Figure 12_A0101_SEQ_0075
Figure 12_A0101_SEQ_0076
Figure 12_A0101_SEQ_0077
Figure 12_A0101_SEQ_0078
Figure 12_A0101_SEQ_0079
Figure 12_A0101_SEQ_0080
Figure 12_A0101_SEQ_0081
Figure 12_A0101_SEQ_0082
Figure 12_A0101_SEQ_0083
Figure 12_A0101_SEQ_0084
Figure 12_A0101_SEQ_0085
Figure 12_A0101_SEQ_0086
Figure 12_A0101_SEQ_0087
Figure 12_A0101_SEQ_0088
Figure 12_A0101_SEQ_0089
Figure 12_A0101_SEQ_0090
Figure 12_A0101_SEQ_0091
Figure 12_A0101_SEQ_0092
Figure 12_A0101_SEQ_0093
Figure 12_A0101_SEQ_0094
Figure 12_A0101_SEQ_0095
Figure 12_A0101_SEQ_0096
Figure 12_A0101_SEQ_0097
Figure 12_A0101_SEQ_0098
Figure 12_A0101_SEQ_0099
Figure 12_A0101_SEQ_0100
Figure 12_A0101_SEQ_0101
Figure 12_A0101_SEQ_0102
Figure 12_A0101_SEQ_0103
Figure 12_A0101_SEQ_0104
Figure 12_A0101_SEQ_0105
Figure 12_A0101_SEQ_0106
Figure 12_A0101_SEQ_0107
Figure 12_A0101_SEQ_0108
Figure 12_A0101_SEQ_0109
Figure 12_A0101_SEQ_0110
Figure 12_A0101_SEQ_0111
Figure 12_A0101_SEQ_0112
Figure 12_A0101_SEQ_0113
Figure 12_A0101_SEQ_0114
Figure 12_A0101_SEQ_0115
Figure 12_A0101_SEQ_0116
Figure 12_A0101_SEQ_0117
Figure 12_A0101_SEQ_0118
Figure 12_A0101_SEQ_0119
Figure 12_A0101_SEQ_0120
Figure 12_A0101_SEQ_0121
Figure 12_A0101_SEQ_0122
Figure 12_A0101_SEQ_0123
Figure 12_A0101_SEQ_0124
Figure 12_A0101_SEQ_0125
Figure 12_A0101_SEQ_0126
Figure 12_A0101_SEQ_0127
Figure 12_A0101_SEQ_0128
Figure 12_A0101_SEQ_0129
Figure 12_A0101_SEQ_0130
Figure 12_A0101_SEQ_0131
Figure 12_A0101_SEQ_0132
Figure 12_A0101_SEQ_0133
Figure 12_A0101_SEQ_0134
Figure 12_A0101_SEQ_0135
Figure 12_A0101_SEQ_0136
Figure 12_A0101_SEQ_0137
Figure 12_A0101_SEQ_0138
Figure 12_A0101_SEQ_0139
Figure 12_A0101_SEQ_0140
Figure 12_A0101_SEQ_0141

Claims (35)

  1. 一種用於治療癌症或延遲癌症之進展之方法中的4-1BB (CD137)，其中該4-1BB (CD137)促效劑與HER-2靶向劑組合使用，且其中該4-1BB促效劑為包含能夠與腫瘤相關抗原特異性結合的至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
  2. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該HER-2靶向劑包含HER-2抗體、HER-2雙特異性抗體及/或HER-2抗體藥物結合物。
  3. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗(trastuzumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)及/或曲妥珠單抗(trastuzumab)恩他新(emtansine)。
  4. 如請求項1之4-1BB (CD137)，其中該4-1BB促效劑包含三個4-1BBL胞外域或其片段。
  5. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段之分子，且其中該等4-1BBL胞外域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8，特定言之SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。
  6. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與選自由纖維母細胞活化蛋白(FAP)及CEA組成之群之腫瘤相關抗原特異性結合的至少一個抗原結合域。
  7. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含IgG Fc域，具體言之IgG1 Fc域或IgG4 Fc域之抗原結合分子。
  8. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含含有一或多個胺基酸取代之Fc域的抗原結合分子，該一或多個胺基酸取代降低與Fc受體結合及/或效應功能。
  9. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含三個4-1BBL胞外域或其片段及能夠與纖維母細胞活化蛋白(FAP)特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
  10. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之該抗原結合域為能夠與FAP特異性結合之抗原結合域，該抗原結合域包含 (a)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，或 (b)重鏈可變區(VH FAP)，其包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL FAP)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
  11. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之該抗原結合域為能夠與FAP特異性結合的抗原結合域，該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或其中能夠與FAP特異性結合的該抗原結合域包含含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)。
  12. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
  13. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與FAP特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，或含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈可變區(VH FAP)及含有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL FAP)，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子的第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
  14. 如請求項1之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子：第一重鏈，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；第一輕鏈，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；第二重鏈，其包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列；及第二輕鏈，其包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列。
  15. 如請求項1至3或7至11中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗-FAP/抗-4-1BB雙特異性抗體。
  16. 如請求項1至8中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子：三個4-1BBL胞外域或其片段，及能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域。
  17. 如請求項1至8中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之該抗原結合域為能夠與CEA特異性結合之抗原結合域，該抗原結合域包含：(a)重鏈可變區(VH CEA)，其包含(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含：(iv) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，(v) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及(vi) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
  18. 如請求項1至8中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之該抗原結合域為能夠與CEA特異性結合之抗原結合域，該抗原結合域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
  19. 如請求項1至8中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個抗原結合域， (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該第一多肽包含藉由肽連接子彼此連接的兩個4-1BBL胞外域或其片段，且其中該第二多肽包含一個4-1BBL胞外域或其片段。
  20. 如請求項1至8中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為包含以下之抗原結合分子： (a)能夠與CEA特異性結合之至少一個Fab域，該至少一個Fab域包含：重鏈可變區(VH CEA)，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL CEA)，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列，及 (b)第一及第二多肽，其藉由二硫鍵彼此連接， 其中該抗原結合分子的第一多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31及SEQ ID NO: 32，且第二多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8。
  21. 如請求項1至8中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑為抗CEA/抗-4-1BB雙特異性抗體。
  22. 如請求項1至14中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑以單一組合物形式一起投與，或以兩種或更多種不同組合物形式分開投與。
  23. 如請求項1至14中任一項之4-1BB (CD137)促效劑，其中該4-1BB促效劑與該HER-2靶向劑協同作用。
  24. 一種醫藥產品，其包含：(A)第一組合物，其包含作為活性成分之4-1BB (CD137)促效劑及醫藥學上可接受之載劑，其中該4-1BB促效劑為包含能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子；及(B)第二組合物，其包含作為活性成分之HER-2靶向劑及醫藥學上可接受之載劑，該等組合物組合、依序或同時使用以治療疾病，特定言之癌症。
  25. 一種醫藥組合物，其包含4-1BB促效劑及HER-2靶向劑，其中該4-1BB促效劑為包含能夠與腫瘤相關抗原特異性結合之至少一個抗原結合域的抗原結合分子。
  26. 如請求項25之醫藥組合物，其中該HER-2靶向劑包含曲妥珠單抗、帕妥珠單抗及/或曲妥珠單抗恩他新。
  27. 如請求項25或26之醫藥組合物，其用於治療癌症或延遲癌症進展，特定言之用於治療晚期及/或轉移性實體腫瘤。
  28. 如請求項27之醫藥組合物，其中該癌症為HER-2陽性癌症。
  29. 如請求項27之醫藥組合物，其中該癌症為乳癌、卵巢癌、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、食道癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、膀胱癌、子宮內膜癌、胰臟癌、結腸癌、***癌及/或頭頸癌。
  30. 一種如請求項1至23中任一項之4-1BB促效劑之用途，其用於製造用於治療增殖性疾病，特定言之癌症或延遲該疾病之進展的藥物，其中該藥物係與HER-2靶向劑組合使用。
  31. 如請求項30之用途，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑係用於以單一組合物形式一起投與，或以兩種或更多種不同組合物形式分開投與。
  32. 如請求項30之用途，其中該4-1BB促效劑及該HER-2靶向劑係用於靜脈內或皮下投與。
  33. 如請求項30之用途，其中該4-1BB促效劑係用於與該HER-2靶向劑同時、在其之前或之後投與。
  34. 如請求項30至33中任一項之用途，其中該癌症為HER-2陽性癌症。
  35. 如請求項30至33中任一項之用途，其中該癌症為乳癌、卵巢癌、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、食道癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、膀胱癌、子宮內膜癌、胰臟癌、結腸癌、***癌及/或頭頸癌。
TW108107979A 2018-03-13 2019-03-11 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法 TW202003561A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18161340 2018-03-13
EP18161340.7 2018-03-13

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202003561A true TW202003561A (zh) 2020-01-16

Family

ID=61691230

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108107979A TW202003561A (zh) 2018-03-13 2019-03-11 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20210095002A1 (zh)
EP (1) EP3765501A1 (zh)
JP (1) JP7098741B2 (zh)
KR (1) KR20200131282A (zh)
CN (1) CN111655731A (zh)
AU (1) AU2019235330A1 (zh)
BR (1) BR112020013425A2 (zh)
CA (1) CA3090232A1 (zh)
IL (1) IL275706A (zh)
MX (1) MX2020009512A (zh)
TW (1) TW202003561A (zh)
WO (1) WO2019175125A1 (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RS61870B1 (sr) 2014-11-14 2021-06-30 Hoffmann La Roche Antigen vezujući molekuli koji sadrže trimer liganda iz tnf familije
KR20190093588A (ko) 2016-12-20 2019-08-09 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체 및 4-1bb(cd137) 작용물질의 병용 요법
EP3565843A1 (en) 2017-01-03 2019-11-13 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-4-1bb clone 20h4.9
CN110573528B (zh) 2017-03-29 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子
CN112955468A (zh) 2018-10-01 2021-06-11 豪夫迈·罗氏有限公司 包含抗fap克隆212的双特异性抗原结合分子
US11608376B2 (en) 2018-12-21 2023-03-21 Hoffmann-La Roche Inc. Tumor-targeted agonistic CD28 antigen binding molecules
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
CR20220586A (es) 2020-05-19 2023-01-09 Boehringer Ingelheim Int Moléculas de fijación para el tratamiento de cáncer
JP2023532122A (ja) * 2020-06-29 2023-07-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド ペルツズマブにトラスツズマブを加えた固定用量配合剤
WO2022200478A1 (en) * 2021-03-24 2022-09-29 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Tumor treatment with a 4-1bb/her2-bispecific agent and a her2-targeted tyrosine kinase inhibitor
CA3189227A1 (en) * 2022-02-21 2023-05-01 Ctcells, Inc. A fusion protein comprising an antigen binding domain and a cytokine trimer domain

Family Cites Families (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1156905B (it) 1977-04-18 1987-02-04 Hitachi Metals Ltd Articolo di ornamento atto ad essere fissato mediante un magnete permanente
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
JP2919890B2 (ja) 1988-11-11 1999-07-19 メディカル リサーチ カウンスル 単一ドメインリガンド、そのリガンドからなる受容体、その製造方法、ならびにそのリガンドおよび受容体の使用
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
US6800738B1 (en) 1991-06-14 2004-10-05 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
EP1997894B1 (en) 1992-02-06 2011-03-30 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
WO1998058964A1 (en) 1997-06-24 1998-12-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
DE19742706B4 (de) 1997-09-26 2013-07-25 Pieris Proteolab Ag Lipocalinmuteine
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
ES2375931T3 (es) 1997-12-05 2012-03-07 The Scripps Research Institute Humanización de anticuerpo murino.
EP2261229A3 (en) 1998-04-20 2011-03-23 GlycArt Biotechnology AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
JP4469933B2 (ja) 1998-05-06 2010-06-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質精製
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
MXPA02003456A (es) 1999-10-04 2002-10-23 Medicago Inc Metodo para regular la transcripcion de genes foraneos.
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
JP2003531588A (ja) 2000-04-11 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 多価抗体とその用途
EP1332209B1 (en) 2000-09-08 2009-11-11 Universität Zürich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
EP1423510A4 (en) 2001-08-03 2005-06-01 Glycart Biotechnology Ag ANTIBODY GLYCOSYLATION VARIANTS WITH INCREASED CELL CYTOTOXICITY DEPENDENT OF ANTIBODIES
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US7432063B2 (en) 2002-02-14 2008-10-07 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods for affinity maturation
LT3284753T (lt) 2002-10-17 2020-06-10 Genmab A/S Žmogaus monokloniniai antikūnai prieš cd20, skirti naudoti gydant išsėtinę sklerozę
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
RU2005141512A (ru) 2003-05-31 2007-07-20 Микромет Аг (De) Фармацевтические композиции, включающие биспецифические анти-cd3, анти-cd19 конструкции антител для лечения расстройств, связанных с b-клетками
WO2005019255A1 (en) 2003-08-25 2005-03-03 Pieris Proteolab Ag Muteins of tear lipocalin
HUE031632T2 (en) 2003-11-05 2017-07-28 Roche Glycart Ag Antigen binding molecules with enhanced Fc receptor binding affinity and effector function
ES2341252T3 (es) 2003-11-28 2010-06-17 Micromet Ag Composiciones que comprenden polipeptidos.
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
US7004206B2 (en) 2004-01-29 2006-02-28 Viken James P Automatic fluid exchanger
JP5128935B2 (ja) 2004-03-31 2013-01-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化抗ＴＧＦ−β抗体
EP2360186B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
NZ579482A (en) 2004-06-01 2011-02-25 Genentech Inc Antibody drug conjugates and methods
RU2361880C2 (ru) 2004-07-22 2009-07-20 Дженентек, Инк. Композиция антител к her2
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
EP1940881B1 (en) 2005-10-11 2016-11-30 Amgen Research (Munich) GmbH Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
PL2059533T3 (pl) 2006-08-30 2013-04-30 Genentech Inc Przeciwciała wieloswoiste
ES2695047T3 (es) 2007-04-03 2018-12-28 Amgen Research (Munich) Gmbh Dominio de unión específico entre especies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8592562B2 (en) 2008-01-07 2013-11-26 Amgen Inc. Method for making antibody Fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
CA3092223C (en) 2008-07-21 2023-01-03 Apogenix Ag Tnfsf single chain molecules
CA2781311C (en) * 2009-12-07 2019-03-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for enhancing anti-tumor antibody therapy
UA113712C2 (xx) 2010-08-13 2017-02-27 Антитіло до fap і способи його застосування
DK2691417T3 (en) 2011-03-29 2018-11-19 Roche Glycart Ag ANTIBODY FC VARIANTS
CA2832387A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Genmab A/S Bispecifc antibodies against her2
EP3327038B1 (en) 2013-12-20 2020-09-23 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific her2 antibodies and methods of use
SG11201701157UA (en) 2014-08-29 2017-03-30 Hoffmann La Roche Combination therapy of tumor-targeted il-2 variant immunocytokines and antibodies against human pd-l1
RS61870B1 (sr) * 2014-11-14 2021-06-30 Hoffmann La Roche Antigen vezujući molekuli koji sadrže trimer liganda iz tnf familije
EP3973980A1 (en) * 2015-03-31 2022-03-30 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a trimeric tnf family ligand
KR20170138574A (ko) * 2015-05-04 2017-12-15 피어이스 파마슈티컬즈 게엠베하 항암 융합 폴리펩타이드
IL267284B2 (en) * 2016-12-19 2023-03-01 Hoffmann La Roche Combination therapy with a targeted 4-bb1 agonist (cd137)
WO2019104716A1 (en) * 2017-12-01 2019-06-06 Adagene Inc. Methods for using cd137 ligand as biomarker for treatment with anti-cd137 antibody

Also Published As

Publication number Publication date
JP7098741B2 (ja) 2022-07-11
CN111655731A (zh) 2020-09-11
IL275706A (en) 2020-08-31
AU2019235330A1 (en) 2020-07-16
JP2021515781A (ja) 2021-06-24
BR112020013425A2 (pt) 2020-12-01
WO2019175125A1 (en) 2019-09-19
CA3090232A1 (en) 2019-09-19
MX2020009512A (es) 2020-10-22
EP3765501A1 (en) 2021-01-20
KR20200131282A (ko) 2020-11-23
US20210095002A1 (en) 2021-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7459186B2 (ja) 標的化４－１ｂｂ（ｃｄ１３７）アゴニストとの併用療法
US20210095002A1 (en) Combination therapy with targeted 4-1bb (cd137) agonists
TWI773712B (zh) 抗cd20／抗cd3雙特異性抗體及4-1bb(cd137)促效劑之組合療法
JP7418346B2 (ja) ４－１ＢＢＬを含むＨｅｒ２標的化抗原結合分子
CN113286821A (zh) 靶向肿瘤的激动性cd28抗原结合分子
TWI828662B (zh) 4-1bb促效劑與抗–cd20抗體之組合療法
TW201930353A (zh) 使用經靶向之ox40促效劑的組合療法
CN113286822A (zh) 靶向肿瘤的超激动性cd28抗原结合分子
TW201936639A (zh) 靶向腫瘤之icos促效劑與t細胞雙特異性分子之組合療法
CN113677403A (zh) 包含脂质运载蛋白突变蛋白的双特异性抗原结合分子
US20220017637A1 (en) Agonistic cd28 antigen binding molecules targeting her2
TW202307008A (zh) 靶向ＥｐＣＡＭ之促效的ＣＤ２８抗原結合分子
CN116829598A (zh) 采用pd1-lag3双特异性抗体和cd20 t细胞双特异性抗体的组合疗法