TW201945390A - 靶向cd33之抗體可變域及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明揭示具有抗體重鏈與輕鏈可變域可成對形成抗原結合位點靶向細胞上CD33 (唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-3 (Siglec-3))的蛋白質；包含此蛋白質之醫藥組合物；及使用此蛋白質及醫藥組合物，包括用於治療癌症之治療方法。

Description

靶向CD33之抗體可變域及其用途
本發明提供具有抗體重鏈與輕鏈可變域之蛋白質，該等抗體重鏈與輕鏈可變域可以成對以形成形成靶向細胞上之CD33 (唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-3)的抗原結合位點；包含此類蛋白質之醫藥組合物；及使用此類蛋白質及醫藥組合物之治療方法，包括用於治療癌症之治療方法。
儘管治療此疾病之實質性研究成果及科學進展在文獻中已有報導，但癌症繼續是顯著的健康問題。成人中最常診斷之一些癌症包括***癌、乳癌及肺癌。血液惡性病雖然不如實體癌頻繁，但存活率低。此等癌症之當前治療選項並非對所有患者均有效且/或可能具有實質性有害副作用。其他類型之癌症對於使用現有治療選項治療仍亦具挑戰性。
癌症免疫療法由於其具高度特異性且可以利用患者自身免疫系統促進癌細胞毀滅而為所需的。融合蛋白(諸如雙特異性T細胞接合體)為文獻中所述之癌症免疫療法，其結合至腫瘤細胞及T細胞以促進腫瘤細胞毀滅。T細胞為後天免疫系統的主要效應子，其攻擊外來細胞以及呈遞突變肽或誤表現之肽的宿主細胞。T細胞靶向之細胞可經病毒感染以使得其表現外來蛋白質，或可為惡性的，其中其可能表現突變蛋白質。T細胞經由其T細胞受體(TCR)與靶細胞上之主要組織相容複合體蛋白質所呈遞的細胞內肽接合來識別靶細胞。個別T細胞典型地識別攜帶特定MHC-肽複合物的靶細胞，但已開發出奪取且擴增此天然過程以達成治療益處的新穎藥劑。雙特異性T細胞接合體使腫瘤相關抗原之抗原結合位點與TCR複合物組分之抗原結合位點關聯，以獨立於原生肽-MHC識別而將T細胞活性再引向所需靶細胞。舉例而言，博啉妥(Blincyto)係FDA批准的T細胞接合體，其靶向惡性B細胞上的CD19。
T細胞亦可經工程改造以表現向其賦予其CAR標靶識別能力之嵌合抗原受體(CAR)。CAR含有與T細胞活化域連接之腫瘤相關抗原的抗原結合位點。此等CAR T細胞亦可用於靶向惡性細胞，且一些已經FDA批准用於抵抗B細胞惡性疾病。
結合至某些腫瘤相關抗原及某些免疫細胞的抗體已描述於文獻中。參見例如WO 2016/134371及WO 2015/095412。使用靶向腫瘤相關抗原之抗原結合位點的抗體-藥物結合物或免疫細胞介素將毒性劑或免疫調節細胞介素遞送至特定靶細胞。
自然殺手(NK)細胞為先天免疫系統之組分且在循環淋巴球中佔約15%。NK細胞幾乎浸潤所有組織且初始特徵為其能夠有效殺死腫瘤細胞而無需預先致敏。活化NK細胞藉由類似於細胞毒性T細胞(亦即，經由含有穿孔蛋白及顆粒酶的溶胞顆粒)的方式以及經由死亡受體路徑殺死靶細胞。活化NK細胞亦分泌促進其它白血球募集至靶組織的發炎細胞介素，諸如IFN-γ及趨化因子。
NK細胞經由其表面上的多種活化及抑制受體回應於信號。舉例而言，當NK細胞遇到健康自身細胞時，其活性經由殺手細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)之活化受到抑制。或者，當NK細胞遇到外來細胞或癌細胞時，其經由其活化受體(例如NKG2D、NCR、DNAM1)活化。NK細胞亦藉由一些免疫球蛋白之恆定區、經由其表面上的CD16受體受到活化。NK細胞對活化的總體敏感性視刺激性及抑制性信號之總和而定。
CD33係唾液酸結合之免疫球蛋白樣凝集素的成員。作為主要表現於骨髓譜系細胞上的跨膜受體，CD33經由對酪胺酸激酶驅動之信號傳導路徑的阻尼效應來調節發炎及免疫反應。舉例而言，CD33展示可組成性抑制人類單核球產生促炎性細胞介素，諸如IL-1β、TNF-α及IL-8。
CD33與造血癌症相關。其廣泛表現於幾乎所有急性骨髓性白血病(AML)之母細胞中。另外，發現造血癌症幹細胞及/或祖細胞呈CD33+ ，此意指CD33定向療法可以在此類情況下潛在地根除惡性幹細胞及/或祖細胞，同時避開正常造血幹細胞。除其在AML中之表現之外，在其他骨髓贅生物(例如骨髓發育不良症候群及骨髓增生性贅瘤)及B細胞及T細胞急性淋巴母細胞白血病(ALL)/淋巴母細胞性淋巴瘤之亞群上發現CD33。此表現模式已引起在患有惡性疾病(包括AML、骨髓發育不良症候群、慢性骨髓單核球性白血病、慢性骨髓性白血病之骨髓急變，及ALL)之患者中使用CD33定向治療劑。
在一個態樣中，本發明提供結合人類CD33及/或食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點。在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合人類CD33及/或食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上的一或多個構形抗原決定基。在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合人類CD33之胞外域上的一或多個構形抗原決定基，但不識別且/或結合獼猴CD33之胞外域上的一或多個構形抗原決定基。在一個態樣中，本發明提供結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點。在一個態樣中，本發明提供結合至野生型人類CD33 (例如具有根據NCBI參考序列：NP_001763.3鑑別之胺基酸序列)、但不結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點。在一個態樣中，本發明提供結合至人類CD33上之抗原決定基的抗原結合位點，該抗原決定基包括R69。在一個態樣中，本發明提供一種包括重鏈可變域的抗原結合位點，該重鏈可變域結合至人類CD33及/或獼猴CD33的胞外域，無論標靶CD33之糖基化分佈。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其結合至人類CD33及/或獼猴CD33之胞外域，使得抗原決定基相較於此項技術中已知之一或多種抗CD33抗體所靶向的抗原決定基為獨特的。在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其結合至人類CD33及/或獼猴CD33之胞外域，且展示人類或獼猴CD33交叉反應性及對標靶CD33的高親和力結合。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO: 1]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 1至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域包括胺基酸序列FTFSSYGMS [SEQ ID NO:21]作為SEQ ID NO:1之第一互補決定區1 (「CDR1」)、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:22]作為SEQ ID NO:1之第二CDR (「CDR2」)，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:23]作為SEQ ID NO:1之第三CDR (「CDR3」)。在一些實施例中，重鏈可變域包括胺基酸序列SYGMS [SEQ ID NO:434]作為SEQ ID NO:1之第一互補決定區1 (「CDR1」)、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:22]作為SEQ ID NO:1之第二CDR (「CDR2」)，及EGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:435]作為SEQ ID NO:1之第三CDR (「CDR3」)。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYESFPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 2]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO: 2之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO: 24]作為SEQ ID NO: 2的CDR1、DASSLES [SEQ ID NO: 25]作為SEQ ID NO: 2的CDR2，及QQYESFPT [SEQ ID NO: 26]作為SEQ ID NO: 2的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO: 3]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 3至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:27]作為SEQ ID NO:3的CDR1、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:28]作為SEQ ID NO:3的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:29]作為SEQ ID NO:3的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:3的CDR1、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:28]作為SEQ ID NO:3的CDR2，及PLNAGELDV [SEQ ID NO:436]作為SEQ ID NO:3的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 3之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 3之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQLESYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 4]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 3之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO: 30]作為SEQ ID NO: 4的CDR1、EASSLES [SEQ ID NO: 31]作為SEQ ID NO: 4的CDR2，及QQLESYPLT [SEQ ID NO: 32]作為SEQ ID NO: 4的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYTMSWVRQAPGKGLEWVSAIVGSGESTYFADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO: 5]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 5至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSKYTMS [SEQ ID NO:33]作為SEQ ID NO:5的CDR1、AIVGSGESTYFADSVKG [SEQ ID NO:34]作為SEQ ID NO:5的CDR2，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:35]作為SEQ ID NO:5的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列KYTMS [SEQ ID NO:183]作為SEQ ID NO:5的CDR1、AIVGSGESTYFADSVKG [SEQ ID NO:34]作為SEQ ID NO:5的CDR2，及EGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:184]作為SEQ ID NO:5的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDDLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 6]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO: 36]作為SEQ ID NO: 6的CDR1、KASSLES [SEQ ID NO: 37]或KASSLE [SEQ ID NO:185]作為SEQ ID NO: 6的CDR2，及QQYDDLPT [SEQ ID NO: 38]作為SEQ ID NO: 6的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGMINPSWGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREAADGFVGERYFDLWGRGTLVTVSS [SEQ ID NO: 7]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 7至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFSDYYMH [SEQ ID NO:39]作為SEQ ID NO:7的CDR1、MINPSWGSTSYAQKFQG [SEQ ID NO:40]作為SEQ ID NO:7的CDR2，及AREAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:41]作為SEQ ID NO:7的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列DYYMH [SEQ ID NO:437]作為SEQ ID NO:7的CDR1、MINPSWGSTSYAQKFQG [SEQ ID NO:40]作為SEQ ID NO:7的CDR2，及EAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:438]作為SEQ ID NO:7的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQDVALPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 8]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RSSQSLLYSNGYNYLD [SEQ ID NO:42]作為SEQ ID NO: 8的CDR1、LGSNRAS [SEQ ID NO:43]作為SEQ ID NO: 8的CDR2，及MQDVALPIT [SEQ ID NO: 44]作為SEQ ID NO: 8的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGSYWMSWVRQAPGKGLEWVATIKQDGSEKSYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO: 9]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 9至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFGSYWMS [SEQ ID NO:45]作為SEQ ID NO:9的CDR1、TIKQDGSEKSYVDSVKG [SEQ ID NO:46]作為SEQ ID NO:9的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:47]作為SEQ ID NO:9的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:9的CDR1、TIKQDGSEKSYVDSVKG [SEQ ID NO:46]作為SEQ ID NO:9的CDR2，及RPLNAGELDV [SEQ ID NO:182]作為SEQ ID NO:9的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:9的CDR1、TIKQDGSEKSYVDSVKG [SEQ ID NO:46]作為SEQ ID NO:9的CDR2，及RPLNAGELDV [SEQ ID NO:182]作為SEQ ID NO:9的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 9之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 9之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSQSYPPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 10]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 9之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO: 10之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO: 48]作為SEQ ID NO: 10的CDR1、EASSLES [SEQ ID NO: 49]作為SEQ ID NO: 10的CDR2，及QQSQSYPPIT [SEQ ID NO: 50]作為SEQ ID NO: 10的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFPSYWMSWVRQAPGKGLEWVATIKRDGSEKGYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO: 11]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 11至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFPSYWMS [SEQ ID NO:51]作為SEQ ID NO:11的CDR1、TIKRDGSEKGYVDSVKG [SEQ ID NO:52]作為SEQ ID NO:11的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:53]作為SEQ ID NO:11的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:11的CDR1、TIKRDGSEKGYVDSVKG [SEQ ID NO:52]作為SEQ ID NO:11的CDR2，及PLNAGELDV [SEQ ID NO:439]作為SEQ ID NO:11的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 11之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 11之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSQSYPPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 12]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 11之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO: 54]作為SEQ ID NO: 12的CDR1、EASSLES [SEQ ID NO: 55]作為SEQ ID NO: 12的CDR2，及QQSQSYPPIT [SEQ ID NO: 56]作為SEQ ID NO: 12的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSRGSTVYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYDDEDMDVWGKGTTVTVSS [SEQ ID NO:13]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 13至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFGTYYMH [SEQ ID NO:57]作為SEQ ID NO:13的CDR1、IINPSRGSTVYAQKFQG [SEQ ID NO:58]作為SEQ ID NO:13的CDR2，及ARGAGYDDEDMDV [SEQ ID NO:59]作為SEQ ID NO:13的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列TYYMH [SEQ ID NO:440]作為SEQ ID NO:13的CDR1、IINPSRGSTVYAQKFQG [SEQ ID NO:58]作為SEQ ID NO:13的CDR2，及GAGYDDEDMDV [SEQ ID NO:441]作為SEQ ID NO:13的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHSYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 14]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQGIDSWLA [SEQ ID NO:60]作為SEQ ID NO: 14的CDR1、AASSLQS [SEQ ID NO:61]作為SEQ ID NO: 14的CDR2，及QQAHSYPLT [SEQ ID NO:62]作為SEQ ID NO: 14的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISSSSEGIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO: 15]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 15至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYAMS [SEQ ID NO:63]作為SEQ ID NO:15的CDR1、SISSSSEGIYYADSVKG [SEQ ID NO:64]作為SEQ ID NO:15的CDR2，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:65]作為SEQ ID NO:15的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYAMS [SEQ ID NO:442]作為SEQ ID NO:15的CDR1、SISSSSEGIYYADSVKG [SEQ ID NO:64]作為SEQ ID NO:15的CDR2，及EGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:443]作為SEQ ID NO:15的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASNSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSTKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDDLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 16]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASNSISSWLA [SEQ ID NO:66]作為SEQ ID NO:16的CDR1、EASSTKS [SEQ ID NO:67]作為SEQ ID NO:16的CDR2，及QQYDDLPT [SEQ ID NO:68]作為SEQ ID NO:16的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANINTDGSEVYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGPGIAYQGHFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 17]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 17至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:69]作為SEQ ID NO:17的CDR1、NINTDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:70]作為SEQ ID NO:17的CDR2，及ARDVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:71]作為SEQ ID NO:17的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:17的CDR1、NINTDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:70]作為SEQ ID NO:17的CDR2，及DVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:444]作為SEQ ID NO:17的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQVIYSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLKSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYDTPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 18]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:18之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQVIYSYLN [SEQ ID NO:72]作為SEQ ID NO:18的CDR1、AASSLKS [SEQ ID NO:73]作為SEQ ID NO:18的CDR2，及QQVYDTPLT [SEQ ID NO:74]作為SEQ ID NO:18的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTDYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIGYSGTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARETAHDVHGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:19]之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:19至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GSISSTDYYWG [SEQ ID NO:75]作為SEQ ID NO:19的CDR1、SIGYSGTYYNPSLKS [SEQ ID NO:76]作為SEQ ID NO:19的CDR2，及ARETAHDVHGMDV [SEQ ID NO:77]作為SEQ ID NO:19的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列STDYYWG [SEQ ID NO:445]作為SEQ ID NO:19的CDR1、SIGYSGTYYNPSLKS [SEQ ID NO:76]作為SEQ ID NO:19的CDR2，及ETAHDVHGMDV [SEQ ID NO:446]作為SEQ ID NO:19的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 19之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 19之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASHSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYDNLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO: 20]至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASHSVYSYLA [SEQ ID NO:78]作為SEQ ID NO:20的CDR1、DASNRAT [SEQ ID NO:79]作為SEQ ID NO:20的CDR2，及QQYDNLPT [SEQ ID NO:80]作為SEQ ID NO:20的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 266之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 266至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYAMS [SEQ ID NO:304]作為SEQ ID NO:266的CDR1、AISASGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO:305]作為SEQ ID NO:266的CDR2，及PRAYYDSSGFKVNYGMDV [SEQ ID NO:306]作為SEQ ID NO:266的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYAMS [SEQ ID NO:528]作為SEQ ID NO:266的CDR1、AISASGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO:305]作為SEQ ID NO:266的CDR2，及ARPRAYYDSSGFKVNYGMDV [SEQ ID NO:529]作為SEQ ID NO:266的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 266之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 266之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 266之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSVSSSFLA [SEQ ID NO:307]作為SEQ ID NO:267的CDR1、GASSRAT [SEQ ID NO:308]作為SEQ ID NO:267的CDR2，及QQASSSPPT [SEQ ID NO:309]作為SEQ ID NO:267的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 268之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 268至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYAMS [SEQ ID NO:310]作為SEQ ID NO:268的CDR1、GISGSGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO:311]作為SEQ ID NO:268的CDR2，及EGHSSSYYDHAFDI [SEQ ID NO:312]作為SEQ ID NO:268的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYAMS [SEQ ID NO:530]作為SEQ ID NO:268的CDR1、GISGSGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO:311]作為SEQ ID NO:268的CDR2，及AREGHSSSYYDHAFDI [SEQ ID NO:531]作為SEQ ID NO:268的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 268之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 268之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 268之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSVSSDYLA [SEQ ID NO:313]作為SEQ ID NO:269的CDR1、GASSRAT [SEQ ID NO:314]作為SEQ ID NO:269的CDR2，及QQHSSAPPT [SEQ ID NO:315]作為SEQ ID NO:269的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 270之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 270至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYYWS [SEQ ID NO:316]作為SEQ ID NO:270的CDR1、SIYYSGSTNYNPSLKS [SEQ ID NO:317]作為SEQ ID NO:270的CDR2，及VGGVYSTIETYGMDV [SEQ ID NO:318]作為SEQ ID NO:270的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GSISSYYWS [SEQ ID NO:532]作為SEQ ID NO:270的CDR1、SIYYSGSTNYNPSLKS [SEQ ID NO:317]作為SEQ ID NO:270的CDR2，及ARVGGVYSTIETYGMDV [SEQ ID NO:533]作為SEQ ID NO:270的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 270之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 270之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 270之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSVSSNLA [SEQ ID NO:319]作為SEQ ID NO:271的CDR1、GASTRAT [SEQ ID NO:320]作為SEQ ID NO:271的CDR2，及QQYTVYPPT [SEQ ID NO:321]作為SEQ ID NO:271的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 272之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:272至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GYYWS [SEQ ID NO:322]作為SEQ ID NO:272的CDR1、EIDHSGSTNYNPSLKS [SEQ ID NO:323]作為SEQ ID NO:272的CDR2，及QGIHGLRYFDL [SEQ ID NO:324]作為SEQ ID NO:272的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GSFSGYYWS [SEQ ID NO:534]作為SEQ ID NO:272的CDR1、EIDHSGSTNYNPSLKS [SEQ ID NO:323]作為SEQ ID NO:272的CDR2，及ARQGIHGLRYFDL [SEQ ID NO:535]作為SEQ ID NO:272的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 272之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 272之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 272之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該包括胺基酸序列RASQSVSSYLA [SEQ ID NO:325]作為SEQ ID NO:273的CDR1、DASNRAT [SEQ ID NO:326]作為SEQ ID NO:273的CDR2，及QQDHNFPYT [SEQ ID NO:327]作為SEQ ID NO:273的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 274之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些具體實例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 274至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:328]作為SEQ ID NO:274的CDR1、NINQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:329]作為SEQ ID NO:274的CDR2，及EANYYGNVGDDY [SEQ ID NO:330]作為SEQ ID NO:274的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:536]作為SEQ ID NO:274的CDR1、NINQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:329]作為SEQ ID NO:274的CDR2，及AREANYYGNVGDDY [SEQ ID NO:537]作為SEQ ID NO:274的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 274之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 274之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 274之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSYLN [SEQ ID NO:331]作為SEQ ID NO:275的CDR1、AASSLQS [SEQ ID NO:332]作為SEQ ID NO:275的CDR2，及QQQYVTPIT [SEQ ID NO:333]作為SEQ ID NO:275的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 276之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 276至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:334]作為SEQ ID NO:276的CDR1、NINQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:335]作為SEQ ID NO:276的CDR2，及EGGDSWYHAFDI [SEQ ID NO:336]作為SEQ ID NO:276的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:538]作為SEQ ID NO:276的CDR1、NINQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:335]作為SEQ ID NO:276的CDR2，及AREGGDSWYHAFDI [SEQ ID NO:539]作為SEQ ID NO:276的CDR3。在某些實施例中，包括與SEQ ID NO: 276之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 276之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 276之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQGISSWLA [SEQ ID NO:337]作為SEQ ID NO:277的CDR1、AASNLQS [SEQ ID NO:338]作為SEQ ID NO:277的CDR2，及QQKLSLPLT [SEQ ID NO:339]作為SEQ ID NO:277的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 278至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:278至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SGGYYWS [SEQ ID NO:340]作為SEQ ID NO:278的CDR1、SIYYSGSTYYNPSLKS [SEQ ID NO:341]作為SEQ ID NO:278的CDR2，及DRLDYSYNYGMDV [SEQ ID NO:342]作為SEQ ID NO:278的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GSISSGGYYWS [SEQ ID NO:540]作為SEQ ID NO:278的CDR1、SIYYSGSTYYNPSLKS [SEQ ID NO:341]作為SEQ ID NO:278的CDR2，及ARDRLDYSYNYGMDV [SEQ ID NO:541]作為SEQ ID NO:278的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 278之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 278之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 278之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSYLN [SEQ ID NO:343]作為SEQ ID NO:279的CDR1、GASSLQS [SEQ ID NO:344]作為SEQ ID NO:279的CDR2，及QQVYSAPFT [SEQ ID NO:345]作為SEQ ID NO:279的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 280之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:280至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SGYYWG [SEQ ID NO:346]作為SEQ ID NO:280的CDR1、SIYHSGSTNYNPSLKS [SEQ ID NO:347]作為SEQ ID NO:280的CDR2，及LPPWFGFSYFDL [SEQ ID NO:348]作為SEQ ID NO:280的CDR3。， 在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YSISSGYYWG [SEQ ID NO:542]作為SEQ ID NO:280的CDR1、SIYHSGSTNYNPSLKS [SEQ ID NO:347]作為SEQ ID NO:280的CDR2，及ARLPPWFGFSYFDL [SEQ ID NO:543]作為SEQ ID NO:280的CDR3。在某些實施例中，包括與SEQ ID NO: 280之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 280之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 280之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSVSSYLA [SEQ ID NO:349]作為SEQ ID NO:281的CDR1、DASNRAT [SEQ ID NO:350]作為SEQ ID NO:281的CDR2，及QQVDNYPPT [SEQ ID NO:351]作為SEQ ID NO:281的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 282之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 282至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:352]作為SEQ ID NO:282的CDR1、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:353]作為SEQ ID NO:282的CDR2，及DVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:354]作為SEQ ID NO:282的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:544]作為SEQ ID NO:282的CDR1、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:353]作為SEQ ID NO:282的CDR2，及ARDVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:545]作為SEQ ID NO:282的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 282之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 282之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 282之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSYLN [SEQ ID NO:355]作為SEQ ID NO:283的CDR1、AASSLQS [SEQ ID NO:356]作為SEQ ID NO:283的CDR2，及QQVYDTPLT [SEQ ID NO:357]作為SEQ ID NO:283的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 284之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:284至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SSSYYWG [SEQ ID NO:358]作為SEQ ID NO:284的CDR1、SIYYSGSTYYNPSLKS [SEQ ID NO:359]作為SEQ ID NO:284的CDR2，及ETAHDVHGMDV [SEQ ID NO:360]作為SEQ ID NO:284的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GSISSSSYYWG [SEQ ID NO:546]作為SEQ ID NO:284的CDR1、SIYYSGSTYYNPSLKS [SEQ ID NO:359]作為SEQ ID NO:284的CDR2，及ARETAHDVHGMDV [SEQ ID NO:547]作為SEQ ID NO:284的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 284之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 284之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 284之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSVSSYLA [SEQ ID NO:361]作為SEQ ID NO:285的CDR1、DASNRAT [SEQ ID NO:362]作為SEQ ID NO:285的CDR2，及QQYDNLPT [SEQ ID NO:363]作為SEQ ID NO:285的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 286之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:286至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYAIS [SEQ ID NO:364]作為SEQ ID NO:286的CDR1、SIIPIFGTANYAQKFQG [SEQ ID NO:365]作為SEQ ID NO:286的CDR2，及EVGYGWYTKIAFDI [SEQ ID NO:366]作為SEQ ID NO:286的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GTFSSYAIS [SEQ ID NO:548]作為SEQ ID NO:286的CDR1、SIIPIFGTANYAQKFQG [SEQ ID NO:365]作為SEQ ID NO:286的CDR2，及AREVGYGWYTKIAFDI [SEQ ID NO:549]作為SEQ ID NO:286的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 286之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 286之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 286之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSVSSYLA [SEQ ID NO:367]作為SEQ ID NO:287的CDR1、DASKRAT [SEQ ID NO:368]作為SEQ ID NO:287的CDR2，及QQSSNHPST [SEQ ID NO:369]作為SEQ ID NO:287的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 288之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 288至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYYMH [SEQ ID NO:370]作為SEQ ID NO:288的CDR1、IINPSGGSTTYAQKFQG [SEQ ID NO:371]作為SEQ ID NO:288的CDR2，及EAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:372]作為SEQ ID NO:288的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFTSYYMH [SEQ ID NO:550]作為SEQ ID NO:288的CDR1、IINPSGGSTTYAQKFQG [SEQ ID NO:371]作為SEQ ID NO:288的CDR2，及AREAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:551]作為SEQ ID NO:288的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 288之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 288之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 288之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RSSQSLLHSNGYNYLD [SEQ ID NO:373]作為SEQ ID NO:289的CDR1、LGSNRAS [SEQ ID NO:374]作為SEQ ID NO:289的CDR2，及MQALGVPLT [SEQ ID NO:375]作為SEQ ID NO:289的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 290之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 290至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GYYMH [SEQ ID NO:376]作為SEQ ID NO:290的CDR1、MINPYGGSTRYAQKFQG [SEQ ID NO:377]作為SEQ ID NO:290的CDR2，及EAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:378]作為SEQ ID NO:290的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFSDYYMH [SEQ ID NO:552]作為SEQ ID NO:290的CDR1、MINPYGGSTRYAQKFQG [SEQ ID NO:377]作為SEQ ID NO:290的CDR2，及AREAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:553]作為SEQ ID NO:290的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 290之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 290之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 290之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RSSQSLLYSNGYNYLD [SEQ ID NO:379]作為SEQ ID NO:291的CDR1、LGSNRAS [SEQ ID NO:380]作為SEQ ID NO:291的CDR2，及MQDVALPIT [SEQ ID NO:381]作為SEQ ID NO:291的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 292之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 292至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列IYYMH [SEQ ID NO:382]作為SEQ ID NO:292的CDR1、IINPSSGSTVYAQKFQG [SEQ ID NO:383]作為SEQ ID NO:292的CDR2，及GAGYDDEDMDV [SEQ ID NO:384]作為SEQ ID NO:292的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFEIYYMH [SEQ ID NO:554]作為SEQ ID NO:292的CDR1、IINPSSGSTVYAQKFQG [SEQ ID NO:383]作為SEQ ID NO:292的CDR2，及ARGAGYDDEDMDV [SEQ ID NO:555]作為SEQ ID NO:292的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 292之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 292之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 292之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQGIDSWLA [SEQ ID NO:385]作為SEQ ID NO:293的CDR1、AASSLQS [SEQ ID NO:386]作為SEQ ID NO:293的CDR2，及QQAHSYPLT [SEQ ID NO:387]作為SEQ ID NO:293的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 294之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 294至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GYWMS [SEQ ID NO:388]作為SEQ ID NO:294的CDR1、NINQDGSEEYYVDSVKG [SEQ ID NO:389]作為SEQ ID NO:294的CDR2，及EANYYGNVGDDY [SEQ ID NO:390]作為SEQ ID NO:294的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFGGYWMS [SEQ ID NO:556]作為SEQ ID NO:294的CDR1、NINQDGSEEYYVDSVKG [SEQ ID NO:389]作為SEQ ID NO:294的CDR2，及AREANYYGNVGDDY [SEQ ID NO:557]作為SEQ ID NO:294的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 294之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 294之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90%(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90%(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90%(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSIYNYLN [SEQ ID NO:391]作為SEQ ID NO:295的CDR1、AASNLHS [SEQ ID NO:392]作為SEQ ID NO:295的CDR2，及QQAFHVPIT [SEQ ID NO:393]作為SEQ ID NO:295的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 296之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 296至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GYWMS [SEQ ID NO:394]作為SEQ ID NO:296的CDR1、NINQDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:395]作為SEQ ID NO:296的CDR2，及EANYYGNVGDDY [SEQ ID NO:396]作為SEQ ID NO:296的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFPGYWMS [SEQ ID NO:558]作為SEQ ID NO:296的CDR1、NINQDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:395]作為SEQ ID NO:296的CDR2，及AREANYYGNVGDDY [SEQ ID NO:559]作為SEQ ID NO:296的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 296之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 296之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90%(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90%(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSIYNYLN [SEQ ID NO:397]作為SEQ ID NO:297的CDR1、AASSTQS [SEQ ID NO:398]作為SEQ ID NO:297的CDR2，及QQAFHVPIT [SEQ ID NO:399]作為SEQ ID NO:297的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 298之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 298至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:400]作為SEQ ID NO:298的CDR1、NINQDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:401]作為SEQ ID NO:298的CDR2，及DVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:402]作為SEQ ID NO:298的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:560]作為SEQ ID NO:298的CDR1、NINQDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:401]作為SEQ ID NO:298的CDR2，及ARDVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:561]作為SEQ ID NO:298的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 298之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 298之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 298之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSIYYYLN [SEQ ID NO:403]作為SEQ ID NO:299的CDR1、AASSRQS [SEQ ID NO:404]作為SEQ ID NO:299的CDR2，及QQVYDTPLT [SEQ ID NO:405]作為SEQ ID NO:299的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 300之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 300至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列NYYMH [SEQ ID NO:406]作為SEQ ID NO:300的CDR1、WINPFSGGTRYAQKFQG [SEQ ID NO:407]作為SEQ ID NO:300的CDR2，及DVGSSAYYYMDV [SEQ ID NO:408]作為SEQ ID NO:300的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFSNYYMH [SEQ ID NO:562]作為SEQ ID NO:300的CDR1、WINPFSGGTRYAQKFQG [SEQ ID NO:407]作為SEQ ID NO:300的CDR2，及ARDVGSSAYYYMDV [SEQ ID NO:563]作為SEQ ID NO:300的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 300之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 300之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 300之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列EASKGISSWLA [SEQ ID NO:409]作為SEQ ID NO:301的CDR1、AASDLQS [SEQ ID NO:410]作為SEQ ID NO:301的CDR2，及QQAFLFPPT [SEQ ID NO:411]作為SEQ ID NO:301的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗體重鏈可變域，其包括與SEQ ID NO: 302之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO: 302至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWIG [SEQ ID NO:412]作為SEQ ID NO:302的CDR1、SIYPGDSDTRYSPSFQG [SEQ ID NO:413]作為SEQ ID NO:302的CDR2，及ELAYGDYKGGVDY [SEQ ID NO:414]作為SEQ ID NO:302的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YSFTSYWIG [SEQ ID NO:564]作為SEQ ID NO:302的CDR1、SIYPGDSDTRYSPSFQG [SEQ ID NO:413]作為SEQ ID NO:302的CDR2，及ARELAYGDYKGGVDY [SEQ ID NO:565]作為SEQ ID NO:302的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO: 302之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO: 302之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 302之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSVSSSFLA [SEQ ID NO:415]作為SEQ ID NO:303的CDR1、GASSRAT [SEQ ID NO:416]作為SEQ ID NO:303的CDR2，及QQLDSPPPT [SEQ ID NO:417]作為SEQ ID NO:303的CDR3。
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300及/或302之抗體重鏈可變域視情況可以與胺基酸序列偶聯，該胺基酸序列與抗體恆定區(諸如IgG恆定區，包括鉸鏈、CH2及CH3域，具有或不具有CH1域)至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在一些實施例中，恆定區之胺基酸序列與抗體恆定區(諸如人類抗體恆定區、人類IgG1恆定區、人類IgG2恆定區、人類IgG3恆定區或人類IgG4恆定區)至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在一些其他實施例中，恆定區之胺基酸序列與來自另一哺乳動物(諸如兔、犬、貓、小鼠或馬)之抗體恆定區至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。該恆定區相較於人類IgG1恆定區可以併入一或多個突變，例如位於以下之突變：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411及/或K439。例示性取代包括例如Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、T350V、L351K、L351D、L351Y、S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、N390E、K392L、K392M、K392V、K392F、K392D、K392E、T394F、T394W、D399R、D399K、D399V、S400K、S400R、D401K、F405A、F405T、Y407A、Y407I、Y407V、K409F、K409W、K409D、T411D、T411E、K439D及K439E。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列(Ab1 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列(Ab1 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列(Ab2 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列(Ab2 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列(Ab3 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列(Ab3 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列(Ab4 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列(Ab4 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列(Ab5 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列(Ab5 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列(Ab6 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列(Ab6 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列(Ab7 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列(Ab7 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列(Ab8 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列(Ab8 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列(Ab9 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列(Ab9 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列(Ab10 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列(Ab10 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列(Ab11 -VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列(Ab11 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 268之胺基酸序列(Ab12 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 269之胺基酸序列(Ab12 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列(Ab13 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列(Ab13 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 272之胺基酸序列(Ab14 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 273之胺基酸序列(Ab14 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列(Ab15 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列(Ab15 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 276之胺基酸序列(Ab16 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 277之胺基酸序列(Ab16 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列(Ab17 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列(Ab17 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 280之胺基酸序列(Ab18 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 281之胺基酸序列(Ab18 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 282之胺基酸序列(Ab19 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 283之胺基酸序列(Ab19 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 284之胺基酸序列(Ab20 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 285之胺基酸序列(Ab20 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 286之胺基酸序列(Ab21 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 287之胺基酸序列(Ab21 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列(Ab22 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 289之胺基酸序列(Ab22 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 290之胺基酸序列(Ab23 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 291之胺基酸序列(Ab23 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 292之胺基酸序列(Ab24 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 293之胺基酸序列(Ab24 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 294之胺基酸序列(Ab25 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 295之胺基酸序列(Ab25 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 296之胺基酸序列(Ab26 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列(Ab26 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 298之胺基酸序列(Ab27 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 299之胺基酸序列(Ab27 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 300之胺基酸序列(Ab28 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列(Ab28 - VL )。
在某些實施例中，免疫球蛋白重鏈可變區包含SEQ ID NO: 302之胺基酸序列(Ab29 - VH )，且免疫球蛋白輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 303之胺基酸序列(Ab29 - VL )。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括含有重鏈可變域的人類CD33抗原結合位點，該重鏈可變域包括與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300或302之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列；該蛋白質進一步包含與結合至人類CD33之抗原結合位點相同或不同的第二抗原結合位點。
在某些實施例中，任一種前述經分離抗體對於人類CD33之胞外域具有1 nM或更低、5 nM或更低或12 nM或更低之KD ，如藉由表面電漿子共振(SPR)所量測(例如使用下文實例1中所述之Biacore方法)或藉由生物層干涉量測術(BLI)所量測(例如使用下文實例1中所述之Octet方法)，且/或結合來自個體之體液、組織及/或細胞的CD33。在某些實施例中，任一種前述經分離抗體具有等於或低於1×10- 5 、1×10- 4 、1×10- 3 、5×10- 3 、0.01、0.02或0.05 1/s的Kd (亦即，解離速率，亦稱為K離 )，如利用SPR所量測(例如使用下文實例1中所述之Biacore方法)或藉由BLI所量測(例如使用下文實例1中所述之Octet方法)。
在另一態樣中，本發明提供一或多種經分離核酸，其包含編碼任一前述抗體之免疫球蛋白重鏈及/或免疫球蛋白輕鏈可變區之序列。本發明提供一或多種表現載體，其表現任一前述抗體之免疫球蛋白重鏈及/或免疫球蛋白輕鏈可變區。類似地，本發明提供宿主細胞，其包含前述表現載體及/或經分離核酸中之一或多者。
亦提供包括含有本文所述CD33結合域之任一種蛋白質的調配物及使用此等蛋白質及/或調配物增強腫瘤細胞死亡之方法。
在另一態樣中，本發明提供一種治療個體之癌症(例如CD33相關癌症)之方法。該方法包含向個體投與有效量之含有本文所述之任何CD33結合域的蛋白質(例如抗CD33抗體)以治療個體之癌症。
在另一態樣中，本發明提供一種抑制個體之癌症生長(例如CD33相關癌症之生長)的方法。該方法包含使個體暴露於有效量之含有本文所述之任何CD33結合域的蛋白質(例如抗CD33抗體)以抑制個體之癌症生長。
本發明之另一態樣提供一種治療患者之癌症的方法。該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之含有本文所述之任何CD33結合域的蛋白質。使用蛋白質治療之例示性癌症包括例如其中該癌症係選自由以下組成之群：AML、骨髓發育不良症候群、骨髓單核球性白血病、慢性骨髓白血病之骨髓急變，及ALL。
在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，該蛋白質包含選自SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483、SEQ ID NO:484、SEQ ID NO:485、SEQ ID NO:486、SEQ ID NO:487及SEQ ID NO:488的序列。
在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，其包含連接至抗體Fc域的scFv，其中連接至抗體Fc域的scFv係由選自以下的序列表示：SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:226、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230、SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:232、SEQ ID NO:233、SEQ ID NO:234、SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:236、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:239、SEQ ID NO:240、SEQ ID NO:241、SEQ ID NO:242及SEQ ID NO:243。
在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，其包含選自SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:244及SEQ ID NO:245的序列。
在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，其包含與選自以下之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，其包含與選自以下之胺基酸序列至少95%一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，其包含與選自以下之胺基酸序列至少99%一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。
在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，其包含與選自以下之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之序列：SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:226、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230、SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:232、SEQ ID NO:233、SEQ ID NO:234、SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:236、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:239、SEQ ID NO:240、SEQ ID NO:241、SEQ ID NO:242及SEQ ID NO:243。在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，其包含與選自以下之胺基酸序列至少95%一致之序列：SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:226、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230、SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:232、SEQ ID NO:233、SEQ ID NO:234、SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:236、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:239、SEQ ID NO:240、SEQ ID NO:241、SEQ ID NO:242及SEQ ID NO:243。在某些實施例中，本發明提供本文所揭示之蛋白質，其包含與選自以下之胺基酸序列至少99%一致之序列：SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:226、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230、SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:232、SEQ ID NO:233、SEQ ID NO:234、SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:236、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:239、SEQ ID NO:240、SEQ ID NO:241、SEQ ID NO:242及SEQ ID NO:243。
本發明之另一態樣提供一種調配物，其包含如本文所揭示之蛋白質及醫藥學上可接受之載劑。
本發明之另一態樣提供一種編碼嵌合抗原受體(CAR)之核酸，其中該核酸包含編碼結合CD33之scFv的核酸序列，該scFv包含與選自以下之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484；編碼跨膜域的核酸序列；及編碼胞內信號傳導域的核酸序列。
本發明之另一態樣提供一種CAR，其包含結合CD33之scFv，該scFv包含與選自以下之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484；跨膜域；及胞內信號傳導域。
在核酸或CAR之某些實施例中，結合CD33之scFv包含與選自以下之胺基酸序列至少95%一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，結合CD33之scFv包含與選自以下之胺基酸序列至少99%一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，結合CD33之scFv包含選自以下之胺基酸序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。
在某些實施例中，跨膜域係選自T細胞受體之α、β或ξ鏈、CD28、CD3 ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD152及CD154的跨膜區。在某些實施例中，結合CD33之scFv係藉由鉸鏈區連接至跨膜域。
在某些實施例中，胞內信號傳導域包含初始信號傳導域，該初始信號傳導域包含CD3 ζ、共同FcR γ (FCER1G)、Fc γ RIIa、FcR β (Fc ε R1b)、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD79a、CD79b、DAP10及DAP12之功能信號傳導域。在某些實施例中，胞內信號傳導域進一步包含共刺激信號傳導域，該共刺激信號傳導域包含共刺激受體之功能信號傳導域。在某些實施例中，共刺激受體係選自由以下組成之群：OX40、CD27、CD28、CD30、CD40、PD-1、CD2、CD7、CD258、NKG2C、B7-H3、結合至CD83之配位體、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS及4-1BB(CD137)，或其任何組合。
本發明之另一態樣提供一種包含核酸之載體。在某些實施例中，載體為病毒載體(例如AAV載體、慢病毒載體或腺病毒載體)。
本發明之另一態樣提供一種表現如本文所揭示之CAR的免疫效應細胞。在某些實施例中，CAR表現於細胞之質膜上。本發明之另一態樣提供一種免疫效應細胞，其包含編碼如本文所揭示之CAR的核酸。亦提供一種免疫效應細胞，其包含含有該核酸之載體。在某些實施例中，免疫效應細胞為T細胞(例如CD8+ T細胞、CD4+ T細胞或NKT細胞)。在某些實施例中，效應細胞為NK細胞。
本發明之另一態樣提供一種CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體，其包含序列與選自以下之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的蛋白質：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，本發明提供一種CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體，其包含序列與選自以下之胺基酸序列至少95%一致的蛋白質：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，本發明提供一種CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體，其包含序列與選自以下之胺基酸序列至少99%一致的蛋白質：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，本發明提供一種CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體，其包含含有選自以下之胺基酸序列的蛋白質：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。
本發明之另一態樣提供一種抗體-藥物結合物，其包含序列與選自以下之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的蛋白質：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，本發明提供一種抗體-藥物結合物，其包含序列與選自以下之胺基酸序列至少95%一致的蛋白質：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，本發明提供一種抗體-藥物結合物，其包含序列與選自以下之胺基酸序列至少99%一致的蛋白質：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，本發明提供一種抗體-藥物結合物，其包含含有選自以下之胺基酸序列的蛋白質：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，抗體-藥物結合物進一步包含選自奧瑞他汀、N-乙醯基-γ卡奇黴素、類美登素、吡咯并苯并二氮呯及SN-38的藥物部分。
本發明之另一態樣提供一種免疫細胞介素，其包含與選自以下之胺基酸序列至少90%一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484，該序列連接至細胞介素。在某些實施例中，本發明提供一種免疫細胞介素，其包含與選自以下之胺基酸序列至少95%一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484，該序列連接至細胞介素。在某些實施例中，本發明提供一種免疫細胞介素，其包含與選自以下之胺基酸序列至少99%一致之序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484，該序列連接至細胞介素。在某些實施例中，本發明提供一種免疫細胞介素，其包含選自以下之胺基酸序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484，該序列連接至細胞介素。在某些實施例中，細胞介素係選自IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、TNF及IFNα。
本發明之另一態樣提供一種治療表現CD33之癌症的方法，該方法包含將本文所揭示之蛋白質或調配物投與有需要的個體。
在某些實施例中，癌症選自由以下組成之群：急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、骨髓增生贅瘤(MPN)、淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphomas)及經典霍奇金氏淋巴瘤。在某些實施例中，AML係選自未分化急性骨髓母細胞性白血病、成熟度最小之急性骨髓母細胞性白血病、成熟之急性骨髓母細胞性白血病、急性前髓細胞性白血病(APL)、急性骨髓單核球性白血病、急性骨髓單核球性白血病伴嗜伊紅血球增多、急性單核球性白血病、急性類紅血球性白血病、急性巨核母細胞白血病(AMKL)、急性嗜鹼性白血病、急性全骨髓增生伴纖維化，及母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤(BPDCN)。在某些實施例中，AML特徵為AML白血病幹細胞(LSC)上之CLL-1表現。在某些實施例中，LSC進一步表現選自CD34、CD38、CD123、TIM3、CD25、CD32及CD96之膜標記物。
在某些實施例中，AML係微小殘留病(MRD)。在某些實施例中，MRD特徵為存在或不存在選自以下之突變：FLT3-ITD ((Fms樣酪胺酸激酶3)-內部串聯重複(ITD))、NPM1 (核仁磷酸蛋白1)、DNMT3A (DNA甲基轉移酶基因DNMT3A)，及IDH (異檸檬酸去氫酶1及2 (IDH1及IDH2))。在某些實施例中，MDS選自MDS伴多譜系發育不良(MDS-MLD)、MDS伴單一譜系發育不良(MDS-SLD)、MDS伴有環狀含鐵胚血球(MDS-RS)、MDS伴有過量胚血球(MDS-EB)、MDS伴有經分離del (5q)，及類別不明MDS(MDS-U)。在某些實施例中，MDS係原發MDS或繼發MDS。
在某些實施例中，ALL選自B細胞急性淋巴母細胞性白血病(B-ALL)及T細胞急性淋巴母細胞性白血病(T-ALL)。在某些實施例中，MPN係選自真性紅血球增多症、原發性血小板增多症(ET)及骨髓纖維化。在某些實施例中，非霍奇金氏淋巴瘤係選自B細胞淋巴瘤及T細胞淋巴瘤。在某些實施例中，淋巴瘤係選自慢性淋巴球性白血病(CLL)、淋巴母細胞性淋巴瘤(LPL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma，BL)、原發縱隔大B細胞淋巴瘤(PMBL)、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、毛細胞白血病、漿細胞骨髓瘤(PCM)或多發性骨髓瘤(MM)、成熟T/NK贅瘤，及組織細胞贅瘤。
本發明的此等及其他態樣及優點藉由以下圖式、實施方式及申請專利範圍加以說明。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2018年2月20日申請之美國臨時專利申請案第62/632,756號的權益及優先權，該臨時專利申請案之揭示內容以全文引用之方式併入本文用於所有目的。
在一個態樣中，本發明提供一種多特異性結合蛋白，其包含結合人類CD33及/或食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點。在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合人類CD33及/或食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上的一或多個構形抗原決定基。在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合人類CD33之胞外域上的一或多個構形抗原決定基，但不識別且/或結合獼猴CD33之胞外域上的一或多個構形抗原決定基。在一個態樣中，本發明提供結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點。在一個態樣中，本發明提供結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點。在一個態樣中，本發明提供結合至人類CD33上之抗原決定基的抗原結合位點，該抗原決定基包括R69。在一個態樣中，本發明提供結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點。在一個態樣中，本發明提供結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點。在一個態樣中，本發明提供結合至人類CD33上之抗原決定基的抗原結合位點，該抗原決定基包括S128。在一個態樣中，本發明提供一種包括重鏈可變域的抗原結合位點，其結合至人類CD33及/或獼猴CD33的胞外域，無論標靶CD33之糖基化分佈。
在某些實施例中，本發明提供一種包含抗原結合位點的多特異性結合蛋白，該抗原結合位點結合至人類CD33及/或獼猴CD33的胞外域，使得抗原決定基相較於此項技術中已知之一或多種抗CD33抗體所靶向的抗原決定基為獨特的。在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其結合至人類CD33及/或獼猴CD33的胞外域，且展示人類或食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33交叉反應性及對標靶CD33的高親和力結合。
本發明提供結合癌細胞上之CD33的抗原結合蛋白及包含此類蛋白質之醫藥組合物，以及使用此類蛋白質及醫藥組合物之治療方法，包括用於治療癌症之治療方法。本發明之各種態樣如下闡述於各章節中；然而，一個特定章節中所述之本發明態樣不限於任何特定章節。
為促進對本發明之理解，下文定義多個術語及片語。
除非上下文不適當，否則如本文所用，術語「一(a及an)」意謂「一或多個」且包括複數個。
如本文所用，術語「抗原結合位點」係指參與抗原結合之免疫球蛋白分子的一部分。在人類抗體中，抗原結合位點係由重鏈(「H」)及輕鏈(「L」)之N末端可變區(「V」)的胺基酸殘基形成。重鏈及輕鏈V域內的三個高度分叉片段稱為「高變區」，其***更保守的側接片段(稱為「構架區」或「FR」)之間。因此，術語「FR」係指天然發現於免疫球蛋白中之高變區之間及鄰接於高變區的胺基酸序列。在人類抗體分子中，輕鏈之三個高變區及重鏈之三個高變區相對於彼此安置於三維空間中以形成抗原結合表面。抗原結合表面與所結合抗原之三維表面互補，且重鏈及輕鏈中之每一者之三個高變區稱為「互補決定區」或「CDR」。在某些動物(諸如駱駝及軟骨魚)中，抗原結合位點係由提供「單域抗體」之單一抗體鏈形成。抗原結合位點可以存在於完整抗體中、保留抗原結合表面之抗體之抗原結合片段中，或重組多肽中，諸如scFv，其使用肽連接子將單一多肽中之重鏈可變域與輕鏈可變域連接。本文所揭示之重鏈或輕鏈可變區中之所有胺基酸位置係根據Kabat編號法編號。
抗原結合位點之CDR可以藉由以下文獻中所述的方法確定：Kabat等人, J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977)及Kabat等人, Sequences of protein of immunological interest. (1991)；Chothia等人, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)，及MacCallum等人, J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)。依據此等定義確定的CDR典型地包括當相對於彼此比較時的胺基酸殘基重疊或亞群。在某些實施例中，術語「CDR」為如以下文獻所定義的CDR：MacCallum等人, J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)及Martin A., Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains, 於Antibody Engineering, Kontermann及Dubel編, 第31章, 第422-439頁, Springer-Verlag, Berlin (2001)。在某些實施例中，術語「CDR」為如Kabat等人, J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977)及Kabat等人, Sequences of protein of immunological interest. (1991)所定義之CDR。在某些實施例中，抗體之重鏈CDR及輕鏈CDR使用不同規約來加以定義。舉例而言，在某些實施例中，重鏈CDR係根據MacCallum (同上)加以定義，且輕鏈CDR係根據Kabat (同上)加以定義。CDRH1、CDRH2及CDRH3表示重鏈CDR，且CDRL1、CDRL2及CDRL3表示輕鏈CDR。
如本文所用，術語「個體」及「患者」係指藉由本文所述之方法及組合物治療的生物體。此類生物體較佳包括(但不限於)哺乳動物(例如鼠類、猿猴、馬、牛、豬、犬、貓及其類似物)，且最佳包括人類。
如本文所用，術語「有效量」係指足以實現有益或所需結果之化合物(例如本發明化合物)的量。有效量可以一或多次投藥、施藥或給藥來投與且不希望限於特定調配物或投藥途徑。如本文所用，術語「治療」包括引起病狀、疾病、病症及其類似者改善或其症狀減緩的任何作用，例如減輕、減少、調節、減緩或消除。
如本文所用，術語「醫藥組合物」係指活性劑與惰性或活性載劑之組合，此組合使得該組合物特別適合於活體內或離體診斷或治療用途。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之載劑」係指任一種標準醫藥載劑，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液(例如諸如油/水或水/油乳液)，及各種類型的濕潤劑。組合物亦可包括穩定劑及防腐劑。關於載劑、穩定劑及佐劑之實例，參見例如Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 第15版, Mack Publ. Co., Easton, PA [1975]。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指本發明化合物之任何醫藥學上可接受之鹽(例如酸或鹼)，其在投與個體時能夠得到本發明化合物或其活性代謝物或殘餘物。如熟習此項技術者所知，本發明化合物之「鹽」可以衍生自無機酸或有機酸及鹼。例示性酸包括(但不限於)氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、過氯酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、丁二酸、甲苯對磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸及其類似物。其他酸，諸如草酸，儘管本身為醫藥學上不可接受的，但可用於製備適用作中間物的鹽以獲得本發明化合物及其醫藥學上可接受之酸加成鹽。
例示性鹼包括(但不限於)鹼金屬(例如鈉)氫氧化物、鹼土金屬(例如鎂)氫氧化物、氨及式NW4 + 化合物，其中W為C1-4 烷基，及其類似物。
例示性鹽包括(但不限於)：乙酸鹽、己二酸鹽、褐藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、氟庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘化物、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、乙二酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽及其類似物。鹽之其他實例包括本發明化合物之陰離子與適合陽離子(諸如Na+ 、NH4 + 及NW4 + (其中W為C1-4 烷基))之化合物，及其類似物。
對於治療用途而言，本發明化合物之鹽預期為醫藥學上可接受的。然而，醫藥學上不可接受之酸及鹼之鹽亦可用於例如醫藥學上可接受之化合物之製備或純化。
在通篇說明書中，在組合物描述為具有、包括或包含特定組分的情況下，或在製程及方法描述為具有、包括或包含特定步驟的情況下，另外預期存在基本上由所列組分組成或由所列組分組成的本發明組合物，且存在基本上由所列處理步驟組成或由所列處理步驟組成的根據本發明之製程及方法。
一般而言，除非另外規定，否則指定百分比之組合物以重量計。此外，若變數未附定義，則以該變數之先前定義為準。
下文更詳細地論述本發明之各種特點及態樣。
I. 抗原結合位點
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:2至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:21表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:22表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:23表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:434表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:22表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:435表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:2之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:24表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:25表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:26表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:4至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:27表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:28表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:29表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:181表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:28表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:436表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:4之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:30表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:31表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:32表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:6至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:33表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:34表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:35表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:183表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:34表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:184表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:6之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:36表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:37表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:38表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:6之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:36表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:185表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:38表示的CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含與SEQ ID NO:188至少90% (例如至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含與SEQ ID NO:188至少95%一致之胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含與SEQ ID NO:188至少99%一致之胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含胺基酸序列SEQ ID NO:188。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:8至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:39表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:40表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:41表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:437表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:40表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:438表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:8之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:42表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:43表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:44表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:10至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:45表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:46表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:47表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:181表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:46表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:182表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:48表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:49表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:50表示的CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含與SEQ ID NO:198至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含與SEQ ID NO:198至少95%一致之胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含與SEQ ID NO:198至少99%一致之胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含胺基酸序列SEQ ID NO:198。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:12至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:51表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:52表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:53表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:181表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:52表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:439表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:54表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:55表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:56表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:14至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:57表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:58表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:59表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:440表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:58表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:441表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:14之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:60表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:61表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:62表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:16至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:63表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:64表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:65表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:442表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:64表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:443表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:66表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:67表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:68表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:18至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:69表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:70表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:71表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:181表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:70表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:444表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:18之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:72表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:73表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:74表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:20至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:75表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:76表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:77表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:445表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:76表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:446表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:78表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:79表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:80表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:267至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:304表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:305表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:306表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:528表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:305表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:529表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:307表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:308表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:309表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:269至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:310表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:311表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:312表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:530表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:311表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:531表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:313表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:314表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:315表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:271至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:316表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:317表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:318表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:532表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:317表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:533表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:319表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:320表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:321表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:273至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:322表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:323表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:324表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:534表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:323表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:535表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:273之胺基酸序列具有至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:325表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:326表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:327表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:275至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:328表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:329表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:330表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:536表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:329表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:537表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:331表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:332表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:333表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:277至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:334表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:335表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:336表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:538表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:335表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:539表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:337表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:338表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:339表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:279至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:340表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:341表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:342表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:540表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:341表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:541表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:343表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:344表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:345表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:281至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:346表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:347表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:348表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:542表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:347表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:543表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:349表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:350表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:351表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:283至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:352表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:353表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:354表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:544表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:353表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:545表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:355表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:356表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:357表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:285至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:358表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:359表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:360表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:546表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:359表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:547表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:361表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:362表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:363表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:287至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:364表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:365表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:366表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:548表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:365表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:549表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:367表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:368表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:369表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:289至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:370表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:371表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:372表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:550表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:371表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:551表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:373表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:374表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:375表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:291至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:376表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:377表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:378表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:552表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:377表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:553表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:379表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:380表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:381表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:293至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:382表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:383表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:384表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:554表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:383表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:555表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:385表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:386表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:387表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:295至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:388表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:389表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:390表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:556表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:389表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:557表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:391表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:392表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:393表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:297至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:394表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:395表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:396表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:558表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:395表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:559表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:397表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:398表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:399表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:299至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:400表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:401表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:402表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:560表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:401表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:561表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:403表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:404表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:405表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:301至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:406表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:407表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:408表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:562表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:407表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:563表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:409表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:410表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:411表示的CDR3序列。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:303至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體輕鏈可變域。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:412表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:413表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:414表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體重鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:564表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:413表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:565表示的CDR3序列。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域的抗原結合位點包括由胺基酸序列SEQ ID NO:415表示的CDR1序列、由胺基酸序列SEQ ID NO:416表示的CDR2序列，及由胺基酸序列SEQ ID NO:417表示的CDR3序列。
在前述實施例之每一者中，本文中預期一起結合CD33的免疫球蛋白重鏈可變區序列及/或輕鏈可變區序列可在重鏈及/或輕鏈可變區之構架區中含有胺基酸變異(例如至少1、2、3、4、5或10個胺基酸取代、缺失或添加)而不影響其顯著結合至CD33的能力。
表1列出重鏈可變域及輕鏈可變域之肽序列組合(呈Fab片段或單鏈可變片段(scFv))可以結合至CD33。除非另外指明，否則表1中所提供的CDR序列係依據Kabat確定。CD33結合域對CD33的結合親和力可改變。表1亦列出結合CD33之重鏈及輕鏈可變域之scFv形式。表1中所列之例示性核酸序列為所列相應肽序列來源及使用EMBL-EBI蛋白質序列回譯程式產生的預測可能核酸序列。
結合人類 CD33 及 / 或食蟹獼猴 / 恆河猴 ( 獼猴 ) CD33 之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，包括結合人類CD33及/或食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之抗原決定基的重鏈可變域。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:1]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:1至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域包括胺基酸序列FTFSSYGMS [SEQ ID NO:21]作為SEQ ID NO:1之第一互補決定區1 (「CDR1」)、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:22]作為SEQ ID NO:1之第二CDR (「CDR2」)，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:23]作為SEQ ID NO:1之第三CDR (「CDR3」)。在一些實施例中，重鏈可變域包括胺基酸序列SYGMS [SEQ ID NO:434]作為SEQ ID NO:1之第一互補決定區1 (「CDR1」)、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:22]作為SEQ ID NO:1之第二CDR (「CDR2」)，及EGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:435]作為SEQ ID NO:1之第三CDR (「CDR3」)。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYESFPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:2]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:2之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:24]作為SEQ ID NO:2之CDR1、DASSLES [SEQ ID NO:25]作為SEQ ID NO:2之CDR2，及QQYESFPT [SEQ ID NO:26]作為SEQ ID NO:2之CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO:3]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:3至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:27]作為SEQ ID NO:3的CDR1、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:28]作為SEQ ID NO:3的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:29]作為SEQ ID NO:3的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:3的CDR1、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:28]作為SEQ ID NO:3的CDR2，及PLNAGELDV [SEQ ID NO:436]作為SEQ ID NO:3的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQLESYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:4]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:4之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:30]作為SEQ ID NO:4之CDR1、EASSLES [SEQ ID NO:31]作為SEQ ID NO:4之CDR2及QQLESYPLT [SEQ ID NO:32]作為SEQ ID NO:4之CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYTMSWVRQAPGKGLEWVSAIVGSGESTYFADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:5]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:5至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSKYTMS [SEQ ID NO:33]作為SEQ ID NO:5的CDR1、AIVGSGESTYFADSVKG [SEQ ID NO:34]作為SEQ ID NO:5的CDR2，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:35]作為SEQ ID NO:5的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列KYTMS [SEQ ID NO:183]作為SEQ ID NO:5的CDR1、AIVGSGESTYFADSVKG [SEQ ID NO:34]作為SEQ ID NO:5的CDR2，及EGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:184]作為SEQ ID NO:5的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDDLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:6]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:6之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:36]作為SEQ ID NO:6的CDR1、KASSLES [SEQ ID NO:37]或KASSLE [SEQ ID NO:185]作為SEQ ID NO:6的CDR2，及QQYDDLPT [SEQ ID NO:38]作為SEQ ID NO:6的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGMINPSWGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREAADGFVGERYFDLWGRGTLVTVSS [SEQ ID NO:7]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:7至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFSDYYMH [SEQ ID NO:39]作為SEQ ID NO:7的CDR1、MINPSWGSTSYAQKFQG [SEQ ID NO:40]作為SEQ ID NO:7的CDR2，及AREAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:41]作為SEQ ID NO:7的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列DYYMH [SEQ ID NO:437]作為SEQ ID NO:7的CDR1、AIVGSGESTYFADSVKG [SEQ ID NO:34]作為SEQ ID NO:7的CDR2，及EAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:438]作為SEQ ID NO:7的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQDVALPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:8]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:8之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RSSQSLLYSNGYNYLD [SEQ ID NO:42]作為SEQ ID NO:8的CDR1、LGSNRAS [SEQ ID NO:43]作為SEQ ID NO:8的CDR2，及MQDVALPIT [SEQ ID NO:44]作為SEQ ID NO:8的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGSYWMSWVRQAPGKGLEWVATIKQDGSEKSYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO:9]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:9至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFGSYWMS [SEQ ID NO:45]作為SEQ ID NO:9的CDR1、TIKQDGSEKSYVDSVKG [SEQ ID NO:46]作為SEQ ID NO:9的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:47]作為SEQ ID NO:9的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:9的CDR1、TIKQDGSEKSYVDSVKG [SEQ ID NO:46]作為SEQ ID NO:9的CDR2，及RPLNAGELDV [SEQ ID NO:182]作為SEQ ID NO:9的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSQSYPPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:10]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:48]作為SEQ ID NO:10的CDR1、EASSLES [SEQ ID NO:49]作為SEQ ID NO:10的CDR2及QQSQSYPPIT [SEQ ID NO:50]作為SEQ ID NO:10的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上的抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFPSYWMSWVRQAPGKGLEWVATIKRDGSEKGYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO:11]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:11至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFPSYWMS [SEQ ID NO:51]作為SEQ ID NO:11的CDR1、TIKRDGSEKGYVDSVKG [SEQ ID NO:52]作為SEQ ID NO:11的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:53]作為SEQ ID NO:11的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:11的CDR1、TIKRDGSEKGYVDSVKG [SEQ ID NO:52]作為SEQ ID NO:11的CDR2，及PLNAGELDV [SEQ ID NO:439]作為SEQ ID NO:11的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSQSYPPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:12]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:54]作為SEQ ID NO:12的CDR1、EASSLES [SEQ ID NO:55]作為SEQ ID NO:12的CDR2，及QQSQSYPPIT [SEQ ID NO:56]作為SEQ ID NO:12的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSRGSTVYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYDDEDMDVWGKGTTVTVSS [SEQ ID NO:13]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:13至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFGTYYMH [SEQ ID NO:57]作為SEQ ID NO:13的CDR1、IINPSRGSTVYAQKFQG [SEQ ID NO:58]作為SEQ ID NO:13的CDR2，及ARGAGYDDEDMDV [SEQ ID NO:59]作為SEQ ID NO:13的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列TYYMH [SEQ ID NO:440]作為SEQ ID NO:13的CDR1、TIKRDGSEKGYVDSVKG [SEQ ID NO:52]作為SEQ ID NO:13的CDR2，及GAGYDDEDMDV [SEQ ID NO:441]作為SEQ ID NO:13的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHSYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:14]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:14之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQGIDSWLA [SEQ ID NO:60]作為SEQ ID NO:14的CDR1、AASSLQS [SEQ ID NO:61]作為SEQ ID NO:14的CDR2，及QQAHSYPLT [SEQ ID NO:62]作為SEQ ID NO:14的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上的抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISSSSEGIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:15]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:15至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYAMS [SEQ ID NO:63]作為SEQ ID NO:15的CDR1、SISSSSEGIYYADSVKG [SEQ ID NO:64]作為SEQ ID NO:15的CDR2，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:65]作為SEQ ID NO:15的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYAMS [SEQ ID NO:442]作為SEQ ID NO:15的CDR1、SISSSSEGIYYADSVKG [SEQ ID NO:64]作為SEQ ID NO:15的CDR2，及EGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:443]作為SEQ ID NO:15的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASNSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSTKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDDLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:16]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASNSISSWLA [SEQ ID NO:66]作為SEQ ID NO:16的CDR1、EASSTKS [SEQ ID NO:67]作為SEQ ID NO:16的CDR2，及QQYDDLPT [SEQ ID NO:68]作為SEQ ID NO:16的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上的抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANINTDGSEVYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGPGIAYQGHFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO:17]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:17至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:69]作為SEQ ID NO:17的CDR1、NINTDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:70]作為SEQ ID NO:17的CDR2，及ARDVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:71]作為SEQ ID NO:17的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:17的CDR1、NINTDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:70]作為SEQ ID NO:17的CDR2，及DVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:444]作為SEQ ID NO:17的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQVIYSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLKSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYDTPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:18]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:18之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQVIYSYLN [SEQ ID NO:72]作為SEQ ID NO:18的CDR1、AASSLKS [SEQ ID NO:73]作為SEQ ID NO:18的CDR2，及QQVYDTPLT [SEQ ID NO:74]作為SEQ ID NO:18的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上的抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTDYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIGYSGTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARETAHDVHGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:19]之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:19至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GSISSTDYYWG [SEQ ID NO:75]作為SEQ ID NO:19的CDR1、SIGYSGTYYNPSLKS [SEQ ID NO:76]作為SEQ ID NO:19的CDR2，及ARETAHDVHGMDV [SEQ ID NO:77]作為SEQ ID NO:19的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列STDYYWG [SEQ ID NO:445]作為SEQ ID NO:19的CDR1、SIGYSGTYYNPSLKS [SEQ ID NO:76]作為SEQ ID NO:19的CDR2，及ETAHDVHGMDV [SEQ ID NO:446]作為SEQ ID NO:19的CDR3。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASHSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYDNLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:20]至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASHSVYSYLA [SEQ ID NO:78]作為SEQ ID NO:20的CDR1、DASNRAT [SEQ ID NO:79]作為SEQ ID NO:20的CDR2，及QQYDNLPT [SEQ ID NO:80]作為SEQ ID NO:20的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:266至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:304作為SEQ ID NO:266的CDR1、SEQ ID NO:305作為SEQ ID NO:266的CDR2，及SEQ ID NO:306作為SEQ ID NO:266的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:528作為SEQ ID NO:266的CDR1、SEQ ID NO:305作為SEQ ID NO:266的CDR2，及SEQ ID NO:529作為SEQ ID NO:266的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:307作為SEQ ID NO:267的CDR1、SEQ ID NO:308作為SEQ ID NO:267的CDR2，及SEQ ID NO:309作為SEQ ID NO:267的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:268至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:310作為SEQ ID NO:268的CDR1、SEQ ID NO:311作為SEQ ID NO:268的CDR2，及SEQ ID NO:312作為SEQ ID NO:268的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:530作為SEQ ID NO:268的CDR1、SEQ ID NO:311作為SEQ ID NO:268的CDR2，及SEQ ID NO:531作為SEQ ID NO:268的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:313作為SEQ ID NO:269的CDR1、SEQ ID NO:314作為SEQ ID NO:269的CDR2，及SEQ ID NO:315作為SEQ ID NO:269的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:270至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:316作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:318作為SEQ ID NO:270的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:532作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:533作為SEQ ID NO:270的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:319作為SEQ ID NO:271的CDR1、SEQ ID NO:320作為SEQ ID NO:271的CDR2，及SEQ ID NO:321作為SEQ ID NO:271的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:272至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:322作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:324作為SEQ ID NO:272的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:534作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:535作為SEQ ID NO:272的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:325作為SEQ ID NO:273的CDR1、SEQ ID NO:326作為SEQ ID NO:273的CDR2，及SEQ ID NO:327作為SEQ ID NO:273的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:274至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:328作為SEQ ID NO:274的CDR1、SEQ ID NO:329作為SEQ ID NO:274的CDR2，及SEQ ID NO:330作為SEQ ID NO:274的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:536作為SEQ ID NO:274的CDR1、SEQ ID NO:329作為SEQ ID NO:274的CDR2，及SEQ ID NO:537作為SEQ ID NO:274的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:331作為SEQ ID NO:275的CDR1、SEQ ID NO:332作為SEQ ID NO:275的CDR2，及SEQ ID NO:333作為SEQ ID NO:275的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:276至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:334作為SEQ ID NO:276的CDR1、SEQ ID NO:335作為SEQ ID NO:276的CDR2，及SEQ ID NO:336作為SEQ ID NO:276的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:538作為SEQ ID NO:276的CDR1、SEQ ID NO:335作為SEQ ID NO:276的CDR2，及SEQ ID NO:539作為SEQ ID NO:276的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:337作為SEQ ID NO:277的CDR1、SEQ ID NO:338作為SEQ ID NO:277的CDR2，及SEQ ID NO:339作為SEQ ID NO:277的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:278至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:340作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:342作為SEQ ID NO:278的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:540作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:541作為SEQ ID NO:278的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:343作為SEQ ID NO:279的CDR1、SEQ ID NO:344作為SEQ ID NO:279的CDR2，及SEQ ID NO:345作為SEQ ID NO:279的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:280至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:346作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:348作為SEQ ID NO:280的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:542作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:543作為SEQ ID NO:280的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:349作為SEQ ID NO:281的CDR1、SEQ ID NO:350作為SEQ ID NO:281的CDR2，及SEQ ID NO:351作為SEQ ID NO:281的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列包括與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:282至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:352作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:354作為SEQ ID NO:282的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:544作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:545作為SEQ ID NO:282的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:355作為SEQ ID NO:283的CDR1、SEQ ID NO:356作為SEQ ID NO:283的CDR2，及SEQ ID NO:357作為SEQ ID NO:283的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:284至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:358作為SEQ ID NO:284的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:284的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:284的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:546作為SEQ ID NO:547的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:547的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:547的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:361作為SEQ ID NO:285的CDR1、SEQ ID NO:362作為SEQ ID NO:285的CDR2，及SEQ ID NO:363作為SEQ ID NO:285的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:286至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:364作為SEQ ID NO:286的CDR1、SEQ ID NO:365作為SEQ ID NO:286的CDR2，及SEQ ID NO:366作為SEQ ID NO:286的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:548作為SEQ ID NO:286的CDR1、SEQ ID NO:365作為SEQ ID NO:286的CDR2，及SEQ ID NO:549作為SEQ ID NO:286的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:367作為SEQ ID NO:287的CDR1、SEQ ID NO:368作為作為SEQ ID NO:287的CDR2，及SEQ ID NO:369作為SEQ ID NO:287的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:288至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:370作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:372作為SEQ ID NO:288的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:550作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:551作為SEQ ID NO:288的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:373作為SEQ ID NO:289的CDR1、SEQ ID NO:374作為SEQ ID NO:289的CDR2，及SEQ ID NO:375作為SEQ ID NO:289的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:290至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:376作為SEQ ID NO:290的CDR1、SEQ ID NO:377作為SEQ ID NO:290的CDR2，及SEQ ID NO:378作為SEQ ID NO:290的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:552作為SEQ ID NO:290的CDR1、SEQ ID NO:377作為SEQ ID NO:290的CDR2，及SEQ ID NO:553作為SEQ ID NO:290的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:379作為SEQ ID NO:291的CDR1、SEQ ID NO:380作為SEQ ID NO:291的CDR2，及SEQ ID NO:381作為SEQ ID NO:291的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:292至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:382作為SEQ ID NO:292的CDR1、SEQ ID NO:383作為SEQ ID NO:292的CDR2，及SEQ ID NO:384作為SEQ ID NO:292的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:554作為SEQ ID NO:292的CDR1、SEQ ID NO:383作為SEQ ID NO:292的CDR2，及SEQ ID NO:555作為SEQ ID NO:292的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:385作為SEQ ID NO:293的CDR1、SEQ ID NO:386作為SEQ ID NO:293的CDR2，及SEQ ID NO:387作為SEQ ID NO:293的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:294至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:388作為SEQ ID NO:294的CDR1、SEQ ID NO:389作為SEQ ID NO:294的CDR2，及SEQ ID NO:390作為SEQ ID NO:294的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:556作為SEQ ID NO:294的CDR1、SEQ ID NO:389作為SEQ ID NO:294的CDR2，及SEQ ID NO:557作為SEQ ID NO:294的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:391作為SEQ ID NO:295的CDR1、SEQ ID NO:392作為SEQ ID NO:295的CDR2，及SEQ ID NO:393作為SEQ ID NO:295的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:296至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:394作為SEQ ID NO:296的CDR1、SEQ ID NO:395作為SEQ ID NO:296的CDR2，及SEQ ID NO:396作為SEQ ID NO:296的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:558作為SEQ ID NO:296的CDR1、SEQ ID NO:395作為SEQ ID NO:296的CDR2，及SEQ ID NO:559作為SEQ ID NO:296的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:397作為SEQ ID NO:297的CDR1、SEQ ID NO:398作為SEQ ID NO:297的CDR2，及SEQ ID NO:399作為SEQ ID NO:297的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33及食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:298至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:400作為SEQ ID NO:298的CDR1、SEQ ID NO:401作為SEQ ID NO:298的CDR2，及SEQ ID NO:402作為SEQ ID NO:298的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:560作為SEQ ID NO:298的CDR1、SEQ ID NO:401作為SEQ ID NO:298的CDR2，及SEQ ID NO:561作為SEQ ID NO:298的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:403作為SEQ ID NO:299的CDR1、SEQ ID NO:404作為SEQ ID NO:299的CDR2，及SEQ ID NO:405作為SEQ ID NO:299的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:300至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:406作為SEQ ID NO:300的CDR1、SEQ ID NO:407作為SEQ ID NO:300的CDR2，及SEQ ID NO:408作為SEQ ID NO:300的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:562作為SEQ ID NO:300的CDR1、SEQ ID NO:407作為SEQ ID NO:300的CDR2，及SEQ ID NO:563作為SEQ ID NO:300的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:409作為SEQ ID NO:301的CDR1、SEQ ID NO:410作為SEQ ID NO:301的CDR2，及SEQ ID NO:411作為SEQ ID NO:301的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合人類CD33之胞外域上之抗原決定基的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:302至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:412作為SEQ ID NO:302的CDR1、SEQ ID NO:413作為SEQ ID NO:302的CDR2，及SEQ ID NO:414作為SEQ ID NO:302的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:564作為SEQ ID NO:302的CDR1、SEQ ID NO:413作為SEQ ID NO:302的CDR2，及SEQ ID NO:565作為SEQ ID NO:302的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:415作為SEQ ID NO:303的CDR1、SEQ ID NO:416作為SEQ ID NO:303的CDR2，及SEQ ID NO:417作為SEQ ID NO:303的CDR3。
識別且結合人類 CD33 及 / 或食蟹獼猴 / 恆河猴 ( 獼猴 ) CD33 之胞外域上之構形抗原決定基的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括識別且結合人類CD33及/或食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33之胞外域上之一或多個構形抗原決定基的重鏈可變域。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合部分地位於人類CD33胞外域之V域中的構形抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO:3]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:3至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:27]作為SEQ ID NO:3的CDR1、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:28]作為SEQ ID NO:3的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:29]作為SEQ ID NO:3的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQLESYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:4]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:4之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:30]作為SEQ ID NO:4之CDR1、EASSLES [SEQ ID NO:31]作為SEQ ID NO:4之CDR2及QQLESYPLT [SEQ ID NO:32]作為SEQ ID NO:4之CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合部分地位於人類CD33胞外域之V域中的構形抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFPSYWMSWVRQAPGKGLEWVATIKRDGSEKGYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO:11]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:11至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFPSYWMS [SEQ ID NO:51]作為SEQ ID NO:11的CDR1、TIKRDGSEKGYVDSVKG [SEQ ID NO:52]作為SEQ ID NO:11的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:53]作為SEQ ID NO:11的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSQSYPPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:12]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:54]作為SEQ ID NO:12的CDR1、EASSLES [SEQ ID NO:55]作為SEQ ID NO:12的CDR2及QQSQSYPPIT [SEQ ID NO:56]作為SEQ ID NO:12的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合部分地位於人類CD33胞外域之V域中的構形抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISSSSEGIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:15]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:15至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYAMS [SEQ ID NO:63]作為SEQ ID NO:15的CDR1、SISSSSEGIYYADSVKG [SEQ ID NO:64]作為SEQ ID NO:15的CDR2，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:65]作為SEQ ID NO:15的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASNSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSTKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDDLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:16]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASNSISSWLA [SEQ ID NO:66]作為SEQ ID NO:16的CDR1、EASSTKS [SEQ ID NO:67]作為SEQ ID NO:16的CDR2，及QQYDDLPT [SEQ ID NO:68]作為SEQ ID NO:16的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別及結合部分地位於人類CD33胞外域之V域中的構形抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:270至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:316作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:318作為SEQ ID NO:270的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:532作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:533作為SEQ ID NO:270的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:319作為SEQ ID NO:271的CDR1、SEQ ID NO:320作為SEQ ID NO:271的CDR2，及SEQ ID NO:321作為SEQ ID NO:271的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別及結合部分地位於人類CD33胞外域之V域中的構形抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:272至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:322作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:324作為SEQ ID NO:272的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:534作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:535作為SEQ ID NO:272的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:325作為SEQ ID NO:273的CDR1、SEQ ID NO:326作為SEQ ID NO:273的CDR2，及SEQ ID NO:327作為SEQ ID NO:273的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合部分地位於人類CD33胞外域之V域中的構形抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:280至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:346作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:348作為SEQ ID NO:280的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:542作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:543作為SEQ ID NO:280的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:349作為SEQ ID NO:281的CDR1、SEQ ID NO:350作為SEQ ID NO:281的CDR2，及SEQ ID NO:351作為SEQ ID NO:281的CDR3。
識別且結合人類 CD33 胞外域上之構形抗原決定基、但不識別且結合食蟹獼猴 / 恆河猴 ( 獼猴 ) CD33 胞外域上之構形抗原決定基的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合人類CD33之胞外域上的一或多個構形抗原決定基，但不識別且/或結合獼猴CD33之胞外域上的一或多個構形抗原決定基。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合人類CD33之胞外域上之一或多個構形抗原決定基，但不識別及/或結合獼猴CD33之胞外域上之一或多個構形抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGMINPSWGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREAADGFVGERYFDLWGRGTLVTVSS [SEQ ID NO:7]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:7至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFSDYYMH [SEQ ID NO:39]作為SEQ ID NO:7的CDR1、MINPSWGSTSYAQKFQG [SEQ ID NO:40]作為SEQ ID NO:7的CDR2，及AREAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:41]作為SEQ ID NO:7的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQDVALPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:8]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:8之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RSSQSLLYSNGYNYLD [SEQ ID NO:42]作為SEQ ID NO:8的CDR1、LGSNRAS [SEQ ID NO:43]作為SEQ ID NO:8的CDR2，及MQDVALPIT [SEQ ID NO:44]作為SEQ ID NO:8的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其識別且結合人類CD33之胞外域上之一或多個構形抗原決定基，但不識別且/或結合獼猴CD33之胞外域上之一或多個構形抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSRGSTVYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYDDEDMDVWGKGTTVTVSS [SEQ ID NO:13]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:13至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFGTYYMH [SEQ ID NO:57]作為SEQ ID NO:13的CDR1、IINPSRGSTVYAQKFQG [SEQ ID NO:58]作為SEQ ID NO:13的CDR2，及ARGAGYDDEDMDV [SEQ ID NO:59]作為SEQ ID NO:13的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHSYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:14]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:14之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQGIDSWLA [SEQ ID NO:60]作為SEQ ID NO:14的CDR1、AASSLQS [SEQ ID NO:61]作為SEQ ID NO:14的CDR2，及QQAHSYPLT [SEQ ID NO:62]作為SEQ ID NO:14的CDR3。
在某些實施例中，包括胺基酸序列與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSRGSTVYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYDDEDMDVWGKGTTVTVSS [SEQ ID NO:13]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域的抗體結合位點結合至人類CD33的全長胞外域，而非個別地結合人類CD33 V域或C域，且與林妥珠單抗不交叉阻斷對人類CD33的結合。在某些實施例中，包括重鏈可變域的抗體結合位點結合至人類CD33的全長胞外域，而非個別地結合人類CD33 V域或C域且與林妥珠單抗不交叉阻斷對人類CD33的結合，該重鏈可變域包括與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列且與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHSYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:14]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，包括重鏈可變域的抗體結合位點結合至人類CD33的全長胞外域，而非個別地結合人類CD33 V域或C域，且與林妥珠單抗不交叉阻斷對人類CD33的結合，該重鏈可變域包括與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列且與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:14之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，包括胺基酸序列RASQGIDSWLA [SEQ ID NO:60]作為SEQ ID NO:14的CDR1、AASSLQS [SEQ ID NO:61]作為SEQ ID NO:14的CDR2，及QQAHSYPLT [SEQ ID NO:62]作為SEQ ID NO:14的CDR3。
結合至人類 CD33 之 R69G 對偶基因的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點。在某些實施例中，本發明提供結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:1]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:1至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域包括胺基酸序列FTFSSYGMS [SEQ ID NO:21]作為SEQ ID NO:1之第一互補決定區1 (「CDR1」)、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:22]作為SEQ ID NO:1之第二CDR (「CDR2」)，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:23]作為SEQ ID NO:1之第三CDR (「CDR3」)。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYESFPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:2]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:2之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:24]作為SEQ ID NO:2之CDR1、DASSLES [SEQ ID NO:25]作為SEQ ID NO:2之CDR2，及QQYESFPT [SEQ ID NO:26]作為SEQ ID NO:2之CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO:3]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:3至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:27]作為SEQ ID NO:3的CDR1、NIKQDGSEKYYVDSVKG [SEQ ID NO:28]作為SEQ ID NO:3的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:29]作為SEQ ID NO:3的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQLESYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:4]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:4之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:30]作為SEQ ID NO:4之CDR1、EASSLES [SEQ ID NO:31]作為SEQ ID NO:4之CDR2及QQLESYPLT [SEQ ID NO:32]作為SEQ ID NO:4之CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYTMSWVRQAPGKGLEWVSAIVGSGESTYFADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:5]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:5至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSKYTMS [SEQ ID NO:33]作為SEQ ID NO:5的CDR1、AIVGSGESTYFADSVKG [SEQ ID NO:34]作為SEQ ID NO:5的CDR2，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:35]作為SEQ ID NO:5的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列KYTMS [SEQ ID NO:183]作為SEQ ID NO:5的CDR1、AIVGSGESTYFADSVKG [SEQ ID NO:34]作為SEQ ID NO:5的CDR2，及EGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:184]作為SEQ ID NO:5的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDDLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:6]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:6之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:36]作為SEQ ID NO:6的CDR1、KASSLES [SEQ ID NO:37]或KASSLE [SEQ ID NO:185]作為SEQ ID NO:6的CDR2，及QQYDDLPT [SEQ ID NO:38]作為SEQ ID NO:6的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGSYWMSWVRQAPGKGLEWVATIKQDGSEKSYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO:9]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:9至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFGSYWMS [SEQ ID NO:45]作為SEQ ID NO:9的CDR1、TIKQDGSEKSYVDSVKG [SEQ ID NO:46]作為SEQ ID NO:9的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:47]作為SEQ ID NO:9的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SYWMS [SEQ ID NO:181]作為SEQ ID NO:9的CDR1、TIKQDGSEKSYVDSVKG [SEQ ID NO:46]作為SEQ ID NO:9的CDR2，及RPLNAGELDV [SEQ ID NO:182]作為SEQ ID NO:9的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSQSYPPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:10]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:48]作為SEQ ID NO:10的CDR1、EASSLES [SEQ ID NO:49]作為SEQ ID NO:10的CDR2及QQSQSYPPIT [SEQ ID NO:50]作為SEQ ID NO:10的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFPSYWMSWVRQAPGKGLEWVATIKRDGSEKGYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPLNAGELDVWGQGTMVTVSS [SEQ ID NO:11]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:11至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFPSYWMS [SEQ ID NO:51]作為SEQ ID NO:11的CDR1、TIKRDGSEKGYVDSVKG [SEQ ID NO:52]作為SEQ ID NO:11的CDR2，及ARPLNAGELDV [SEQ ID NO:53]作為SEQ ID NO:11的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSQSYPPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:12]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQSISSWLA [SEQ ID NO:54]作為SEQ ID NO:12的CDR1、EASSLES [SEQ ID NO:55]作為SEQ ID NO:12的CDR2，及QQSQSYPPIT [SEQ ID NO:56]作為SEQ ID NO:12的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSRGSTVYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYDDEDMDVWGKGTTVTVSS [SEQ ID NO:13]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:13至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFGTYYMH [SEQ ID NO:57]作為SEQ ID NO:13的CDR1、IINPSRGSTVYAQKFQG [SEQ ID NO:58]作為SEQ ID NO:13的CDR2，及ARGAGYDDEDMDV [SEQ ID NO:59]作為SEQ ID NO:13的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHSYPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:14]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:14之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQGIDSWLA [SEQ ID NO:60]作為SEQ ID NO:14的CDR1、AASSLQS [SEQ ID NO:61]作為SEQ ID NO:14的CDR2，及QQAHSYPLT [SEQ ID NO:62]作為SEQ ID NO:14的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISSSSEGIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGPYYDSSGYFVYYGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:15]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:15至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYAMS [SEQ ID NO:63]作為SEQ ID NO:15的CDR1、SISSSSEGIYYADSVKG [SEQ ID NO:64]作為SEQ ID NO:15的CDR2，及AREGGPYYDSSGYFVYYGMDV [SEQ ID NO:65]作為SEQ ID NO:15的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASNSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSTKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDDLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:16]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASNSISSWLA [SEQ ID NO:66]作為SEQ ID NO:16的CDR1、EASSTKS [SEQ ID NO:67]作為SEQ ID NO:16的CDR2，及QQYDDLPT [SEQ ID NO:68]作為SEQ ID NO:16的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANINTDGSEVYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGPGIAYQGHFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO:17]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:17至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列FTFSSYWMS [SEQ ID NO:69]作為SEQ ID NO:17的CDR1、NINTDGSEVYYVDSVKG [SEQ ID NO:70]作為SEQ ID NO:17的CDR2，及ARDVGPGIAYQGHFDY [SEQ ID NO:71]作為SEQ ID NO:17的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQVIYSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLKSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYDTPLTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:18]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:18之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASQVIYSYLN [SEQ ID NO:72]作為SEQ ID NO:18的CDR1、AASSLKS [SEQ ID NO:73]作為SEQ ID NO:18的CDR2，及QQVYDTPLT [SEQ ID NO:74]作為SEQ ID NO:18的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTDYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIGYSGTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARETAHDVHGMDVWGQGTTVTVSS [SEQ ID NO:19]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:19至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列GSISSTDYYWG [SEQ ID NO:75]作為SEQ ID NO:19的CDR1、SIGYSGTYYNPSLKS [SEQ ID NO:76]作為SEQ ID NO:19的CDR2，及ARETAHDVHGMDV [SEQ ID NO:77]作為SEQ ID NO:19的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASHSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYDNLPTFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:20]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RASHSVYSYLA [SEQ ID NO:78]作為SEQ ID NO:20的CDR1、DASNRAT [SEQ ID NO:79]作為SEQ ID NO:20的CDR2，及QQYDNLPT [SEQ ID NO:80]作為SEQ ID NO:20的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:266至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:304作為SEQ ID NO:266的CDR1、SEQ ID NO:305作為SEQ ID NO:266的CDR2，及SEQ ID NO:306作為SEQ ID NO:266的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:528作為SEQ ID NO:266的CDR1、SEQ ID NO:305作為SEQ ID NO:266的CDR2，及SEQ ID NO:529作為SEQ ID NO:266的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:307作為SEQ ID NO:267的CDR1、SEQ ID NO:308作為SEQ ID NO:267的CDR2，及SEQ ID NO:309作為SEQ ID NO:267的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:268至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:310作為SEQ ID NO:268的CDR1、SEQ ID NO:311作為SEQ ID NO:268的CDR2，及SEQ ID NO:312作為SEQ ID NO:268的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:530作為SEQ ID NO:268的CDR1、SEQ ID NO:311作為SEQ ID NO:268的CDR2，及SEQ ID NO:531作為SEQ ID NO:268的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:313作為SEQ ID NO:269的CDR1、SEQ ID NO:314作為SEQ ID NO:269的CDR2，及SEQ ID NO:315作為SEQ ID NO:269的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:270至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:316作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:318作為SEQ ID NO:270的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:532作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:533作為SEQ ID NO:270的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:319作為SEQ ID NO:271的CDR1、SEQ ID NO:320作為SEQ ID NO:271的CDR2，及SEQ ID NO:321作為SEQ ID NO:271的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:272至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:322作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:324作為SEQ ID NO:272的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:534作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:535作為SEQ ID NO:272的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:325作為SEQ ID NO:273的CDR1、SEQ ID NO:326作為SEQ ID NO:273的CDR2，及SEQ ID NO:327作為SEQ ID NO:273的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:274至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:328作為SEQ ID NO:274的CDR1、SEQ ID NO:329作為SEQ ID NO:274的CDR2，及SEQ ID NO:330作為SEQ ID NO:274的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:536作為SEQ ID NO:274的CDR1、SEQ ID NO:329作為SEQ ID NO:274的CDR2，及SEQ ID NO:537作為SEQ ID NO:274的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:331作為SEQ ID NO:275的CDR1、SEQ ID NO:332作為SEQ ID NO:275的CDR2，及SEQ ID NO:333作為SEQ ID NO:275的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:276至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:334作為SEQ ID NO:276的CDR1、SEQ ID NO:335作為SEQ ID NO:276的CDR2，及SEQ ID NO:336作為SEQ ID NO:276的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:538作為SEQ ID NO:276的CDR1、SEQ ID NO:335作為SEQ ID NO:276的CDR2，及SEQ ID NO:539作為SEQ ID NO:276的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:337作為SEQ ID NO:277的CDR1、SEQ ID NO:338作為SEQ ID NO:277的CDR2，及SEQ ID NO:339作為SEQ ID NO:277的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:278至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:340作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:342作為SEQ ID NO:278的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:540作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:541作為SEQ ID NO:278的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:343作為SEQ ID NO:279的CDR1、SEQ ID NO:344作為SEQ ID NO:279的CDR2，及SEQ ID NO:345作為SEQ ID NO:279的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:280至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:346作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:348作為SEQ ID NO:280的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:542作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:543作為SEQ ID NO:280的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:349作為SEQ ID NO:281的CDR1、SEQ ID NO:350作為SEQ ID NO:281的CDR2，及SEQ ID NO:351作為SEQ ID NO:281的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:282至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:352作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:354作為SEQ ID NO:282的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:544作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:545作為SEQ ID NO:282的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:355作為SEQ ID NO:283的CDR1、SEQ ID NO:356作為SEQ ID NO:283的CDR2，及SEQ ID NO:357作為SEQ ID NO:283的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:284至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:358作為SEQ ID NO:284的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:284的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:284的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:546作為SEQ ID NO:547的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:547的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:547的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:361作為SEQ ID NO:285的CDR1、SEQ ID NO:362作為SEQ ID NO:285的CDR2，及SEQ ID NO:363作為SEQ ID NO:285的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因之的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:286至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:364作為SEQ ID NO:286的CDR1、SEQ ID NO:365作為SEQ ID NO:286的CDR2，及SEQ ID NO:366作為SEQ ID NO:286的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:548作為SEQ ID NO:286的CDR1、SEQ ID NO:365作為SEQ ID NO:286的CDR2，及SEQ ID NO:549作為SEQ ID NO:286的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:367作為SEQ ID NO:287的CDR1、SEQ ID NO:368作為SEQ ID NO:287的CDR2，及SEQ ID NO:369作為SEQ ID NO:287的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:292至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:382作為SEQ ID NO:292的CDR1、SEQ ID NO:383作為SEQ ID NO:292的CDR2，及SEQ ID NO:384作為SEQ ID NO:292的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:554作為SEQ ID NO:292的CDR1、SEQ ID NO:383作為SEQ ID NO:292的CDR2，及SEQ ID NO:555作為SEQ ID NO:292的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:385作為SEQ ID NO:293的CDR1、SEQ ID NO:386作為SEQ ID NO:293的CDR2，及SEQ ID NO:387作為SEQ ID NO:293的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:294至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:388作為SEQ ID NO:294的CDR1、SEQ ID NO:389作為SEQ ID NO:294的CDR2，及SEQ ID NO:390作為SEQ ID NO:294的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:556作為SEQ ID NO:294的CDR1、SEQ ID NO:389作為SEQ ID NO:294的CDR2，及SEQ ID NO:557作為SEQ ID NO:294的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:391作為SEQ ID NO:295的CDR1、SEQ ID NO:392作為SEQ ID NO:295的CDR2，及SEQ ID NO:393作為SEQ ID NO:295的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:296至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:394作為SEQ ID NO:296的CDR1、SEQ ID NO:395作為SEQ ID NO:296的CDR2，及SEQ ID NO:396作為SEQ ID NO:296的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:558作為SEQ ID NO:296的CDR1、SEQ ID NO:395作為SEQ ID NO:296的CDR2，及SEQ ID NO:559作為SEQ ID NO:296的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:397作為SEQ ID NO:297的CDR1、SEQ ID NO:398作為SEQ ID NO:297的CDR2，及SEQ ID NO:399作為SEQ ID NO:297的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:298至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:400作為SEQ ID NO:298的CDR1、SEQ ID NO:401作為SEQ ID NO:298的CDR2，及SEQ ID NO:402作為SEQ ID NO:298的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:560作為SEQ ID NO:298的CDR1、SEQ ID NO:401作為SEQ ID NO:298的CDR2，及SEQ ID NO:561作為SEQ ID NO:298的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:403作為SEQ ID NO:299的CDR1、SEQ ID NO:404作為SEQ ID NO:299的CDR2，及SEQ ID NO:405作為SEQ ID NO:299的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:302至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:412作為SEQ ID NO:302的CDR1、SEQ ID NO:413作為SEQ ID NO:302的CDR2，及SEQ ID NO:414作為SEQ ID NO:302的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:564作為SEQ ID NO:302的CDR1、SEQ ID NO:413作為SEQ ID NO:302的CDR2，及SEQ ID NO:565作為SEQ ID NO:302的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:415作為SEQ ID NO:303的CDR1、SEQ ID NO:416作為SEQ ID NO:303的CDR2，及SEQ ID NO:417作為SEQ ID NO:303的CDR3。
不結合至人類 CD33 之 R69G 對偶基因的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括結合野生型人類CD33、但不結合人類CD33之R69G對偶基因的重鏈可變域。在某些實施例中，本發明提供一種不結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGMINPSWGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREAADGFVGERYFDLWGRGTLVTVSS [SEQ ID NO:7]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:7至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFSDYYMH [SEQ ID NO:39]作為SEQ ID NO:7的CDR1、MINPSWGSTSYAQKFQG [SEQ ID NO:40]作為SEQ ID NO:7的CDR2，及AREAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:41]作為SEQ ID NO:7的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQDVALPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:8]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:8之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RSSQSLLYSNGYNYLD [SEQ ID NO:42]作為SEQ ID NO:8的CDR1、LGSNRAS [SEQ ID NO:43]作為SEQ ID NO:8的CDR2，及MQDVALPIT [SEQ ID NO:44]作為SEQ ID NO:8的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:288至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:370作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:372作為SEQ ID NO:288的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:550作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:551作為SEQ ID NO:288的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:373作為SEQ ID NO:289的CDR1、SEQ ID NO:374作為SEQ ID NO:289的CDR2，及SEQ ID NO:375作為SEQ ID NO:289的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:290至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:376作為SEQ ID NO:290的CDR1、SEQ ID NO:377作為SEQ ID NO:290的CDR2，及SEQ ID NO:378作為SEQ ID NO:290的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:552作為SEQ ID NO:290的CDR1、SEQ ID NO:377作為SEQ ID NO:290的CDR2，及SEQ ID NO:553作為SEQ ID NO:290的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:379作為SEQ ID NO:291的CDR1、SEQ ID NO:380作為SEQ ID NO:291的CDR2，及SEQ ID NO:381作為SEQ ID NO:291的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之R69G對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:300至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:406作為SEQ ID NO:300的CDR1、SEQ ID NO:407作為SEQ ID NO:300的CDR2，及SEQ ID NO:408作為SEQ ID NO:300的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:562作為SEQ ID NO:300的CDR1、SEQ ID NO:407作為SEQ ID NO:300的CDR2，及SEQ ID NO:563作為SEQ ID NO:300的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:409作為SEQ ID NO:301的CDR1、SEQ ID NO:410作為SEQ ID NO:301的CDR2，及SEQ ID NO:411作為SEQ ID NO:301的CDR3。
結合至人類 CD33 上之 獨特抗原決定基 ( 包括 R69) 的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括R69)的重鏈可變域。在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其結合至人類CD33上之獨特抗原決定基，包括R69；該抗原結合位點包括胺基酸序列與QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGMINPSWGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREAADGFVGERYFDLWGRGTLVTVSS [SEQ ID NO:7]之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。
在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:7至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列YTFSDYYMH [SEQ ID NO:39]作為SEQ ID NO:7的CDR1、MINPSWGSTSYAQKFQG [SEQ ID NO:40]作為SEQ ID NO:7的CDR2，及AREAADGFVGERYFDL [SEQ ID NO:41]作為SEQ ID NO:7的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與胺基酸序列DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQDVALPITFGGGTKVEIK [SEQ ID NO:8]至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:8之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列RSSQSLLYSNGYNYLD [SEQ ID NO:42]作為SEQ ID NO:8的CDR1、LGSNRAS [SEQ ID NO:43]作為SEQ ID NO:8的CDR2，及MQDVALPIT [SEQ ID NO:44]作為SEQ ID NO:8的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括R69)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:288至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:370作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:372作為SEQ ID NO:288的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:550作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:551作為SEQ ID NO:288的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:373作為SEQ ID NO:289的CDR1、SEQ ID NO:374作為SEQ ID NO:289的CDR2，及SEQ ID NO:375作為SEQ ID NO:289的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括R69)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:290至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:376作為SEQ ID NO:290的CDR1、SEQ ID NO:377作為SEQ ID NO:290的CDR2，及SEQ ID NO:378作為SEQ ID NO:290的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:552作為SEQ ID NO:290的CDR1、SEQ ID NO:377作為SEQ ID NO:290的CDR2，及SEQ ID NO:553作為SEQ ID NO:290的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:379作為SEQ ID NO:291的CDR1、SEQ ID NO:380作為SEQ ID NO:291的CDR2，及SEQ ID NO:381作為SEQ ID NO:291的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括R69)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:300至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:406作為SEQ ID NO:300的CDR1、SEQ ID NO:407作為SEQ ID NO:300的CDR2，及SEQ ID NO:408作為SEQ ID NO:300的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:562作為SEQ ID NO:300的CDR1、SEQ ID NO:407作為SEQ ID NO:300的CDR2，及SEQ ID NO:563作為SEQ ID NO:300的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:409作為SEQ ID NO:301的CDR1、SEQ ID NO:410作為SEQ ID NO:301的CDR2，及SEQ ID NO:411作為SEQ ID NO:301的CDR3。
結合至人類 CD33 之 S128N 對偶基因的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:268至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:310作為SEQ ID NO:268的CDR1、SEQ ID NO:311作為SEQ ID NO:268的CDR2，及SEQ ID NO:312作為SEQ ID NO:268的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:530作為SEQ ID NO:268的CDR1、SEQ ID NO:311作為SEQ ID NO:268的CDR2，及SEQ ID NO:531作為SEQ ID NO:268的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:268之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:269之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:313作為SEQ ID NO:269的CDR1、SEQ ID NO:314作為SEQ ID NO:269的CDR2，及SEQ ID NO:315作為SEQ ID NO:269的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:274至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:328作為SEQ ID NO:274的CDR1、SEQ ID NO:329作為SEQ ID NO:274的CDR2，及SEQ ID NO:330作為SEQ ID NO:274的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:536作為SEQ ID NO:274的CDR1、SEQ ID NO:329作為SEQ ID NO:274的CDR2，及SEQ ID NO:537作為SEQ ID NO:274的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:274之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:275之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:331作為SEQ ID NO:275的CDR1、SEQ ID NO:332作為SEQ ID NO:275的CDR2，及SEQ ID NO:333作為SEQ ID NO:275的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:276至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:334作為SEQ ID NO:276的CDR1、SEQ ID NO:335作為SEQ ID NO:276的CDR2，及SEQ ID NO:336作為SEQ ID NO:276的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:538作為SEQ ID NO:276的CDR1、SEQ ID NO:335作為SEQ ID NO:276的CDR2，及SEQ ID NO:539作為SEQ ID NO:276的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:276之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:277之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:337作為SEQ ID NO:277的CDR1、SEQ ID NO:338作為SEQ ID NO:277的CDR2，及SEQ ID NO:339作為SEQ ID NO:277的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:292至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:382作為SEQ ID NO:292的CDR1、SEQ ID NO:383作為SEQ ID NO:292的CDR2，及SEQ ID NO:384作為SEQ ID NO:292的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:554作為SEQ ID NO:292的CDR1、SEQ ID NO:383作為SEQ ID NO:292的CDR2，及SEQ ID NO:555作為SEQ ID NO:292的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:292之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:293之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:385作為SEQ ID NO:293的CDR1、SEQ ID NO:386作為SEQ ID NO:293的CDR2，及SEQ ID NO:387作為SEQ ID NO:293的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:294至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:388作為SEQ ID NO:294的CDR1、SEQ ID NO:389作為SEQ ID NO:294的CDR2，及SEQ ID NO:390作為SEQ ID NO:294的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:556作為SEQ ID NO:294的CDR1、SEQ ID NO:389作為SEQ ID NO:294的CDR2，及SEQ ID NO:557作為SEQ ID NO:294的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:294之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:295之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:391作為SEQ ID NO:295的CDR1、SEQ ID NO:392作為SEQ ID NO:295的CDR2，及SEQ ID NO:393作為SEQ ID NO:295的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:296至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:394作為SEQ ID NO:296的CDR1、SEQ ID NO:395作為SEQ ID NO:296的CDR2，及SEQ ID NO:396作為SEQ ID NO:296的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:558作為SEQ ID NO:296的CDR1、SEQ ID NO:395作為SEQ ID NO:296的CDR2，及SEQ ID NO:559作為SEQ ID NO:296的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:296之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:297之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:397作為SEQ ID NO:297的CDR1、SEQ ID NO:398作為SEQ ID NO:297的CDR2，及SEQ ID NO:399作為SEQ ID NO:297的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:298至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:400作為SEQ ID NO:298的CDR1、SEQ ID NO:401作為SEQ ID NO:298的CDR2，及SEQ ID NO:402作為SEQ ID NO:298的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:560作為SEQ ID NO:298的CDR1、SEQ ID NO:401作為SEQ ID NO:298的CDR2，及SEQ ID NO:561作為SEQ ID NO:298的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:298之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:299之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:403作為SEQ ID NO:299的CDR1、SEQ ID NO:404作為SEQ ID NO:299的CDR2，及SEQ ID NO:405作為SEQ ID NO:299的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:290至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:376作為SEQ ID NO:290的CDR1、SEQ ID NO:377作為SEQ ID NO:290的CDR2，及SEQ ID NO:378作為SEQ ID NO:290的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:552作為SEQ ID NO:290的CDR1、SEQ ID NO:377作為SEQ ID NO:290的CDR2，及SEQ ID NO:553作為SEQ ID NO:290的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:290之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:291之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:379作為SEQ ID NO:291的CDR1、SEQ ID NO:380作為SEQ ID NO:291的CDR2，及SEQ ID NO:381作為SEQ ID NO:291的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:300至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:406作為SEQ ID NO:300的CDR1、SEQ ID NO:407作為SEQ ID NO:300的CDR2，及SEQ ID NO:408作為SEQ ID NO:300的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:562作為SEQ ID NO:300的CDR1、SEQ ID NO:407作為SEQ ID NO:300的CDR2，及SEQ ID NO:563作為SEQ ID NO:300的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:300之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:301之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:409作為SEQ ID NO:301的CDR1、SEQ ID NO:410作為SEQ ID NO:301的CDR2，及SEQ ID NO:411作為SEQ ID NO:301的CDR3。
不結合至人類 CD33 之 S128N 對偶基因的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的重鏈可變域。
在某些實施例中，本發明提供結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:302至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:412作為SEQ ID NO:302的CDR1、SEQ ID NO:413作為SEQ ID NO:302的CDR2，及SEQ ID NO:414作為SEQ ID NO:302的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:564作為SEQ ID NO:302的CDR1、SEQ ID NO:413作為SEQ ID NO:302的CDR2，及SEQ ID NO:565作為SEQ ID NO:302的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:415作為SEQ ID NO:303的CDR1、SEQ ID NO:416作為SEQ ID NO:303的CDR2，及SEQ ID NO:417作為SEQ ID NO:303的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:266至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:304作為SEQ ID NO:266的CDR1、SEQ ID NO:305作為SEQ ID NO:266的CDR2，及SEQ ID NO:306作為SEQ ID NO:266的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:528作為SEQ ID NO:266的CDR1、SEQ ID NO:305作為SEQ ID NO:266的CDR2，及SEQ ID NO:529作為SEQ ID NO:266的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:307作為SEQ ID NO:267的CDR1、SEQ ID NO:308作為SEQ ID NO:267的CDR2，及SEQ ID NO:309作為SEQ ID NO:267的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:270至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:316作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:318作為SEQ ID NO:270的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:532作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:533作為SEQ ID NO:270的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:319作為SEQ ID NO:271的CDR1、SEQ ID NO:320作為SEQ ID NO:271的CDR2，及SEQ ID NO:321作為SEQ ID NO:271的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:272至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:322作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:324作為SEQ ID NO:272的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:534作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:535作為SEQ ID NO:272的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:325作為SEQ ID NO:273的CDR1、SEQ ID NO:326作為SEQ ID NO:273的CDR2，及SEQ ID NO:327作為SEQ ID NO:273的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:278至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:340作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:342作為SEQ ID NO:278的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:540作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:541作為SEQ ID NO:278的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:343作為SEQ ID NO:279的CDR1、SEQ ID NO:344作為SEQ ID NO:279的CDR2，及SEQ ID NO:345作為SEQ ID NO:279的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:280至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:346作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:348作為SEQ ID NO:280的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:542作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:543作為SEQ ID NO:280的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:349作為SEQ ID NO:281的CDR1、SEQ ID NO:350作為SEQ ID NO:281的CDR2，及SEQ ID NO:351作為SEQ ID NO:281的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:282至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:352作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:354作為SEQ ID NO:282的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:544作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:545作為SEQ ID NO:282的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:355作為SEQ ID NO:283的CDR1、SEQ ID NO:356作為SEQ ID NO:283的CDR2，及SEQ ID NO:357作為SEQ ID NO:283的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:284至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:358作為SEQ ID NO:284的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:284的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:284的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:546作為SEQ ID NO:547的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:547的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:547的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:361作為SEQ ID NO:285的CDR1、SEQ ID NO:362作為SEQ ID NO:285的CDR2，及SEQ ID NO:363作為SEQ ID NO:285的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:286至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:364作為SEQ ID NO:286的CDR1、SEQ ID NO:365作為SEQ ID NO:286的CDR2，及SEQ ID NO:366作為SEQ ID NO:286的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:548作為SEQ ID NO:286的CDR1、SEQ ID NO:365作為SEQ ID NO:286的CDR2，及SEQ ID NO:549作為SEQ ID NO:286的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:367作為SEQ ID NO:287的CDR1、SEQ ID NO:368作為SEQ ID NO:287的CDR2，及SEQ ID NO:369作為SEQ ID NO:287的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至野生型人類CD33、但不結合至人類CD33之S128N對偶基因的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:288至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:370作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:372作為SEQ ID NO:288的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:550作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:551作為SEQ ID NO:288的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:373作為SEQ ID NO:289的CDR1、SEQ ID NO:374作為SEQ ID NO:289的CDR2，及SEQ ID NO:375作為SEQ ID NO:289的CDR3。
結合至人類 CD33 上之 獨特抗原決定基 ( 包括 S128) 的抗原結合位點
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的重鏈可變域。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:302至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:412作為SEQ ID NO:302的CDR1、SEQ ID NO:413作為SEQ ID NO:302的CDR2，及SEQ ID NO:414作為SEQ ID NO:302的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:564作為SEQ ID NO:302的CDR1、SEQ ID NO:413作為SEQ ID NO:302的CDR2，及SEQ ID NO:565作為SEQ ID NO:302的CDR3。在某些實施例中，包括與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:302之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:303之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:415作為SEQ ID NO:303的CDR1、SEQ ID NO:416作為SEQ ID NO:303的CDR2，及SEQ ID NO:417作為SEQ ID NO:303的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:266至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:304作為SEQ ID NO:266的CDR1、SEQ ID NO:305作為SEQ ID NO:266的CDR2，及SEQ ID NO:306作為SEQ ID NO:266的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:528作為SEQ ID NO:266的CDR1、SEQ ID NO:305作為SEQ ID NO:266的CDR2，及SEQ ID NO:529作為SEQ ID NO:266的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:266之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:267之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:307作為SEQ ID NO:267的CDR1、SEQ ID NO:308作為SEQ ID NO:267的CDR2，及SEQ ID NO:309作為SEQ ID NO:267的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合於人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:270至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:316作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:318作為SEQ ID NO:270的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:532作為SEQ ID NO:270的CDR1、SEQ ID NO:317作為SEQ ID NO:270的CDR2，及SEQ ID NO:533作為SEQ ID NO:270的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:270之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:271之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:319作為SEQ ID NO:271的CDR1、SEQ ID NO:320作為SEQ ID NO:271的CDR2，及SEQ ID NO:321作為SEQ ID NO:271的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:272至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:322作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:324作為SEQ ID NO:272的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:534作為SEQ ID NO:272的CDR1、SEQ ID NO:323作為SEQ ID NO:272的CDR2，及SEQ ID NO:535作為SEQ ID NO:272的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:272之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:273之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:325作為SEQ ID NO:273的CDR1、SEQ ID NO:326作為SEQ ID NO:273的CDR2，及SEQ ID NO:327作為SEQ ID NO:273的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:278至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:340作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:342作為SEQ ID NO:278的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:540作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:541作為SEQ ID NO:278的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:343作為SEQ ID NO:279的CDR1、SEQ ID NO:344作為SEQ ID NO:279的CDR2，及SEQ ID NO:345作為SEQ ID NO:279的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:280至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:346作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:348作為SEQ ID NO:280的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:542作為SEQ ID NO:280的CDR1、SEQ ID NO:347作為SEQ ID NO:280的CDR2，及SEQ ID NO:543作為SEQ ID NO:280的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:280之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:281之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:349作為SEQ ID NO:281的CDR1、SEQ ID NO:350作為SEQ ID NO:281的CDR2，及SEQ ID NO:351作為SEQ ID NO:281的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:282至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:352作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:354作為SEQ ID NO:282的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:544作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:545作為SEQ ID NO:282的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:355作為SEQ ID NO:283的CDR1、SEQ ID NO:356作為SEQ ID NO:283的CDR2，及SEQ ID NO:357作為SEQ ID NO:283的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:284至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:358作為SEQ ID NO:284的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:284的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:284的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:546作為SEQ ID NO:547的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:547的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:547的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:361作為SEQ ID NO:285的CDR1、SEQ ID NO:362作為SEQ ID NO:285的CDR2，及SEQ ID NO:363作為SEQ ID NO:285的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:286至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:364作為SEQ ID NO:286的CDR1、SEQ ID NO:365作為SEQ ID NO:286的CDR2，及SEQ ID NO:366作為SEQ ID NO:286的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:548作為SEQ ID NO:286的CDR1、SEQ ID NO:365作為SEQ ID NO:286的CDR2，及SEQ ID NO:549作為SEQ ID NO:286的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:286之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:287之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:367作為SEQ ID NO:287的CDR1、SEQ ID NO:368作為SEQ ID NO:287的CDR2，及SEQ ID NO:369作為SEQ ID NO:287的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種結合至人類CD33上之獨特抗原決定基(包括S128)的抗原結合位點；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:288至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:370作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:372作為SEQ ID NO:288的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:550作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:551作為SEQ ID NO:288的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:373作為SEQ ID NO:289的CDR1、SEQ ID NO:374作為SEQ ID NO:289的CDR2，及SEQ ID NO:375作為SEQ ID NO:289的CDR3。
抗原結合位點以糖基化敏感方式結合至人類 CD33 之 V 域
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括以糖基化敏感方式結合至人類CD33之V域的重鏈可變域，例如僅在V域去糖基化時結合至CD33之V域。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其僅在V域去糖基化時結合人類CD33之V域中的抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:278至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:340作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:342作為SEQ ID NO:278的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:540作為SEQ ID NO:278的CDR1、SEQ ID NO:341作為SEQ ID NO:278的CDR2，及SEQ ID NO:541作為SEQ ID NO:278的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:278之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:279之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:343作為SEQ ID NO:279的CDR1、SEQ ID NO:344作為SEQ ID NO:279的CDR2，及SEQ ID NO:345作為SEQ ID NO:279的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其僅在V域去糖基化時結合人類CD33之V域中的抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:282至少95%一致。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:352作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:354作為SEQ ID NO:282的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:544作為SEQ ID NO:282的CDR1、SEQ ID NO:353作為SEQ ID NO:282的CDR2，及SEQ ID NO:545作為SEQ ID NO:282的CDR3。在某些實施例中，胺基酸序列與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合以形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在某些實施例中，與SEQ ID NO:282之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可以與抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域與SEQ ID NO:283之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:355作為SEQ ID NO:283的CDR1、SEQ ID NO:356作為SEQ ID NO:283的CDR2，及SEQ ID NO:357作為SEQ ID NO:283的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其僅在人類CD33之V域去糖基化時結合該V域中的抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，該抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:284至少95%一致。在一些實施例中，該重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:358作為SEQ ID NO:284的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:284的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:284的CDR3。在一些實施例中，該重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:546作為SEQ ID NO:547的CDR1、SEQ ID NO:359作為SEQ ID NO:547的CDR2，及SEQ ID NO:360作為SEQ ID NO:547的CDR3。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合形成能夠結合至CD33的抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域成對。在某些實施例中，與SEQ ID NO:284之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可與SEQ ID NO:285之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:361作為SEQ ID NO:285的CDR1、SEQ ID NO:362作為SEQ ID NO:285的CDR2，及SEQ ID NO:363作為SEQ ID NO:285的CDR3。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其僅在人類CD33之V域去糖基化時結合該V域中的抗原決定基；該抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域。在一些實施例中，該抗體重鏈可變域與SEQ ID NO:288至少95%一致。在一些實施例中，該重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:370作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:372作為SEQ ID NO:288的CDR3。在一些實施例中，該重鏈可變域併入胺基酸序列SEQ ID NO:550作為SEQ ID NO:288的CDR1、SEQ ID NO:371作為SEQ ID NO:288的CDR2，及SEQ ID NO:551作為SEQ ID NO:288的CDR3。在某些實施例中，包括胺基酸序列與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域與輕鏈可變域組合形成能夠結合至CD33之抗原結合位點。舉例而言，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域成對。在某些實施例中，與SEQ ID NO:288之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的抗體重鏈可變域可與SEQ ID NO:289之胺基酸序列至少90% (例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之抗體輕鏈可變域成對，該抗體輕鏈可變域包括胺基酸序列SEQ ID NO:373作為SEQ ID NO:289的CDR1、SEQ ID NO:374作為SEQ ID NO:289的CDR2，及SEQ ID NO:375作為SEQ ID NO:289的CDR3。
結合至人類 CD33 及 / 或獼猴 CD33 之 胞外域的抗原結合位點 ， 不論標靶 CD33 之糖基化分佈
在一個態樣中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括胺基酸序列與SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300或302之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域，該重鏈可變域結合至人類CD33的胞外域，不論標靶CD33之糖基化分佈。
在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括結合至人類CD33及/或獼猴CD33之胞外域的重鏈可變域，使得抗原決定基相較於此項技術中已知之一或多種抗CD33抗體所靶向之抗原決定基為獨特的。在某些實施例中，本發明提供一種抗原結合位點，其包括結合至人類CD33及/或獼猴CD33之胞外域的重鏈可變域，其展示人類或食蟹獼猴/恆河猴(獼猴) CD33交叉反應性及對標靶CD33的高親和力結合。
與結合人類 CD33 之抗原結合位點相同或不同的第二抗原結合位點
在某些實施例中，本發明提供一種包括含有重鏈可變域之人類CD33抗原結合位點的蛋白質，該重鏈可變域包括與SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300或302之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列，且該蛋白質進一步包含與結合至人類CD33之抗原結合位點相同或不同的第二抗原結合位點。
具有抗原結合位點之蛋白質
SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300及/或302的抗體重鏈可變域可以視情況偶聯至與抗體恆定區(諸如包括鉸鏈、CH2及CH3域、具有或不具有CH1域的IgG恆定區)至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在一些實施例中，恆定區之胺基酸序列與人類抗體恆定區(諸如人類IgG1恆定區、IgG2恆定區、IgG3恆定區或IgG4恆定區)至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在一些其他實施例中，恆定區之胺基酸序列與來自另一哺乳動物(諸如兔、犬、貓、小鼠或馬)之抗體恆定區至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。相較於人類IgG1恆定區，可以在恆定區中併入一或多個突變，例如在Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411及/或K439併入。例示性取代包括例如Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、T350V、L351K、L351D、L351Y、S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、N390E、K392L、K392M、K392V、K392F、K392D、K392E、T394F、T394W、D399R、D399K、D399V、S400K、S400R、D401K、F405A、F405T、Y407A、Y407I、Y407V、K409F、K409W、K409D、T411D、T411E、K439D及K439E。
在某些實施例中，可併入人類IgG1恆定區之CH1中的突變可以位於胺基酸V125、F126、P127、T135、T139、A140、F170、P171及/或V173。在某些實施例中，可併入人類IgG1恆定區之Cκ中的突變可以位於胺基酸E123、F116、S176、V163、S174及/或T164。
II. 多特異性結合蛋白
在某些實施例中，本發明提供的蛋白質(例如多特異性結合蛋白)中之抗原結合位點結合至癌細胞上之CD33，以及自然殺手細胞上之NKG2D受體及CD16受體以活化自然殺手細胞。如本文所用，術語「抗體」涵蓋包含一或多個抗原結合位點(例如結合CD33之抗原結合位點)且不限於單特異性抗體的蛋白質(例如多特異性結合蛋白)。在某些實施例中，該蛋白質(例如多特異性結合蛋白)或抗體為三特異性抗體，亦稱為三特異性NK細胞接合療法(TriNKET)。蛋白質(例如多特異性結合蛋白)適用於本文所述之醫藥組合物及治療方法中。包括結合至CD33以及自然殺手細胞上之NKG2D受體及CD16受體之抗原結合位點的蛋白質之結合增強自然殺手細胞摧毀癌細胞的活性。包括結合至癌細胞上之CD33之抗原結合位點的蛋白質(例如多特異性結合蛋白)之結合使得癌細胞接近自然殺手細胞，促進自然殺手細胞直接及間接摧毀癌細胞。下文提供例示性多特異性結合蛋白之進一步描述。
在本發明之某些實施例中，多特異性結合蛋白中的第一組分結合至表現CD33之細胞，該等細胞可以包括(但不限於) AML、骨髓發育不良症候群、慢性骨髓單核球性白血病、慢性骨髓性白血病之骨髓急變，及ALL。
在本發明之某些實施例中，多特異性結合蛋白中的第二組分結合至表現NKG2D受體的細胞，該等細胞可以包括(但不限於) NK細胞、γδ T細胞及CD8+ αβ T細胞。NKG2D結合後，多特異性結合蛋白可以阻斷天然配位體(諸如ULBP6及MICA)結合至NKG2D及活化NKG2D受體。
在本發明之某些實施例中，多特異性結合蛋白中的第三組分結合至表現CD16 (白血球表面上的Fc受體)之細胞，包括自然殺手細胞、巨噬細胞、嗜中性球、嗜伊紅血球、肥大細胞及濾泡性樹突狀細胞。
本發明之另一態樣提供一種包含結合NKG2D之抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含：包含胺基酸序列SYSMN [SEQ ID NO:192]的CDR1；包含胺基酸序列SISSSSSYIYYADSVKG [SEQ ID NO:112]的CDR2；及包含胺基酸序列GAPXGAAAGWFDP [SEQ ID NO:527]的CDR3，其中X為A、V、L、I、P、F、W、G、S、T、C、N、Q或Y；及輕鏈可變域，其包含：包含胺基酸序列RASQGISSWLA [SEQ ID NO:114]的CDR1，包含胺基酸序列AASSLQS [SEQ ID NO:115]的CDR2，及包含胺基酸序列QQGVSFPRT [SEQ ID NO:116]的CDR3。
在某些實施例中，X為A、V、L、I、P、F或W。在某些實施例中，X為V、L或I。在某些實施例中，重鏈可變域中之CDR3之胺基酸序列包含SEQ ID NO:195之序列。
在某些實施例中，抗原結合位點包含胺基酸序列與SEQ ID NO:191之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%)一致的重鏈可變域；及胺基酸序列與SEQ ID NO:81之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%)一致的輕鏈可變域。在某些實施例中，抗原結合位點包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:191的重鏈可變域；及含有胺基酸序列SEQ ID NO:81的輕鏈可變域。
在某些實施例中，結合NKG2D之抗原結合位點呈Fab片段形式。在某些實施例中，結合NKG2D的抗原結合位點呈scFv形式。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包含：(a)如本文所揭示包含結合NKG2D之Fab片段的第一抗原結合位點；(b)包含結合腫瘤相關抗原(例如CD33)之單鏈可變片段(scFv)的第二抗原結合位點；及(c)足以結合CD16之抗體Fc域或其一部分，或結合CD16之第三抗原結合位點。
本文所述之多特異性結合蛋白可呈多種形式。舉例而言，一種形式為雜二聚多特異性抗體，其包括第一免疫球蛋白重鏈、第一免疫球蛋白輕鏈、第二免疫球蛋白重鏈及第二免疫球蛋白輕鏈。該第一免疫球蛋白重鏈包括第一Fc (鉸鏈-CH2-CH3)域、第一重鏈可變域及視情況存在的第一CH1重鏈域。該第一免疫球蛋白輕鏈包括第一輕鏈可變域及第一輕鏈恆定域。第一免疫球蛋白輕鏈與第一免疫球蛋白重鏈一起形成結合CD33之抗原結合位點。第二免疫球蛋白重鏈包含第二Fc (鉸鏈-CH2-CH3)域、第二重鏈可變域及視情況存在的第二CH1重鏈域。第二免疫球蛋白輕鏈包括第二輕鏈可變域及第二輕鏈恆定域。第二免疫球蛋白輕鏈與第二免疫球蛋白重鏈一起形成結合NKG2D之抗原結合位點。第一Fc域與第二Fc域在一起能夠結合至CD16。
另一例示性形式涉及雜二聚多特異性抗體，其包括第一免疫球蛋白重鏈、第二免疫球蛋白重鏈及免疫球蛋白輕鏈。第一免疫球蛋白重鏈包括經由連接子或抗體鉸鏈與單鏈可變片段(scFv)融合的第一Fc (鉸鏈-CH2-CH3)域，該單鏈可變片段由成對且結合CD33或NKG2D的重鏈可變域與輕鏈可變域構成。第二免疫球蛋白重鏈包含第二Fc (鉸鏈-CH2-CH3)域、第二重鏈可變域及視情況存在的CH1重鏈域。免疫球蛋白輕鏈包括輕鏈可變域及恆定輕鏈域。第二免疫球蛋白重鏈與免疫球蛋白輕鏈成對且結合至NKG2D或CD33。第一Fc域與第二Fc域在一起能夠結合至CD16。
一或多個其它結合基元可以與恆定區CH3域之C末端融合，視情況經由連接子序列融合。在某些實施例中，抗原結合位點可為單鏈或二硫鍵穩定化可變區(scFv)或可以形態四價或三價分子。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈三功能單抗形式，其為維持IgG樣形狀之三功能雙特異性抗體。此嵌合體由兩個來源於兩種親本抗體、各具有一條輕鏈及一條重鏈的半抗體組成。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白為KiH共同輕鏈(LC)形式，其涉及臼包杵(KIH)技術。KIH涉及對CH 3域進行工程改造，以在每條重鏈中產生「杵」或「臼」以促進雜二聚化。「臼包杵(KiH)」Fc技術背後的構思係藉由用龐大殘基取代小殘基(例如EU編號的T366WCH3A )而在一個CH3域(CH3A)中引入「杵」。為容納「杵」，藉由用較小殘基置換與杵最接近之相鄰殘基(例如T366S/L368A/Y407VCH3B )而在另一CH3域(CH3B)上產生互補的「臼」表面。「臼」突變藉由結構導引的噬菌體文庫篩選達成最佳化(Atwell S, Ridgway JB, Wells JA, Carter P., Stable heterodimers from remodeling the domain interface of a homodimer using a phage display library,J. Mol. Biol. (1997) 270(1):26-35)。KiH Fc變異體之X射線晶體結構(Elliott JM, Ultsch M, Lee J, Tong R, Takeda K, Spiess C等人, Antiparallel conformation of knob and hole aglycosylated half-antibody homodimers is mediated by a CH2-CH3 hydrophobic interaction.J. Mol. Biol. (2014) 426(9):1947-57；Mimoto F, Kadono S, Katada H, Igawa T, Kamikawa T, Hattori K. Crystal structure of a novel asymmetrically engineered Fc variant with improved affinity for FcgammaRs.Mol. Immunol. (2014) 58(1):132-8)證明CH3域間核心界面處之空間互補性所驅動的疏水相互作用在熱力學上有利於雜二聚化，而杵-杵及臼-臼界面分別由於空間位阻及有利相互作用的中斷而不利於均二聚。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈雙可變域免疫球蛋白(DVD-Ig™)形式，其經由天然存在之柔性連接子將兩種單株抗體之標靶結合域組合且產生四價IgG樣分子。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈正交Fab界面(Ortho-Fab)形式。在ortho-Fab IgG方法(Lewis SM, Wu X, Pustilnik A, Sereno A, Huang F, Rick HL等人, Generation of bispecific IgG antibodies by structure-based design of an orthogonal Fab interface.Nat. Biotechnol. (2014) 32(2):191-8)中，基於結構的區域性設計僅在一個Fab之LC與HCVH-CH1 界面處的引入互補突變，而對另一個Fab不產生任何變化。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈2合1 Ig形式。在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈ES形式，其為含有兩個不同Fab與Fc融合的雜二聚構築體，該兩個不同Fab結合至標靶1及標靶2。藉由Fc中之靜電轉向突變確保雜二聚。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈ĸλ體形式，其為雜二聚構築體，其具有與藉由雜二聚突變穩定化之Fc融合的兩個不同Fab：靶向抗原1的Fab1含有κ LC，而靶向抗原2的第二Fab含有λ LC。圖30A為ĸλ體之一種形式的例示性圖示；圖30B為另一種ĸλ體的例示性圖示。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈Fab臂交換形式(藉由將重鏈及所連接輕鏈(半分子)與來自另一分子之重鏈-輕鏈對交換而交換Fab臂的抗體，從而產生雙特異性抗體)。在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈SEED體形式。經工程改造之股交換域(SEED)平台係為了產生不對稱的雙特異性抗體樣分子而設計，其能夠擴大天然抗體的治療應用。此蛋白質工程化平台係基於免疫球蛋白保守CH3域內之結構相關序列的交換。SEED設計允許高效產生AG/GA雜二聚體，同時不利於AG與GA SEED CH3域之均二聚。(Muda M.等人,Protein Eng. Des. Sel. (2011, 24(5):447-54))。在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈LuZ-Y形式，其中白胺酸拉鏈用於誘導兩個不同HC之雜二聚。(Wranik, BJ.等人,J. Biol. Chem. (2012), 287:43331-9)。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈Cov-X體形式。在雙特異性CovX體中，使用分支鏈氮雜環丁酮連接子將兩種不同肽連接在一起且在溫和條件下以定點方式與支架抗體融合。儘管藥效團負責功能性活性，但抗體支架賦予長半衰期及Ig樣分佈。藥效團可以在化學上最佳化或用其他藥效團置換以產生最佳化或獨特的雙特異性抗體。(Doppalapudi VR等人,PNAS (2010), 107(52);22611-22616)。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈Oasc-Fab雜二聚形式，其包括結合至標靶1的Fab及結合至標靶2的scFab與Fc的融合。藉由Fc中之突變確保雜二聚。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈DuetMab形式，其為雜二聚構築體，其含有結合至抗原1及2之兩種不同Fab及藉由雜二聚突變穩定化的Fc。Fab 1及2含有確保LC與HC正確成對的差異S-S橋鍵。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈互換單抗形式，其為雜二聚構築體，其具有結合至標靶1及2的兩種不同Fab與藉由雜二聚穩定化之Fc的融合。交換CL及CH1域與VH及VL域，例如CH1與VL線性融合，而CL與VH線性融合。
在一些實施例中，多特異性結合蛋白呈Fit-Ig形式，其為均二聚構築體，其中結合至抗原2的Fab與結合至抗原1之Fab之HC的N末端融合。構築體含有野生型Fc。
多特異性結合蛋白之其他形式可以藉由將本文所述之CD33結合片段之各種形式組合來設計。
在本發明之某些實施例中，多特異性結合蛋白中之第三組分為抗體恆定區。在某些實施例中，抗體恆定區之兩個免疫球蛋白重鏈中之每一者包括胺基酸序列與人類IgG1恆定區至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的恆定區。在某些實施例中，抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列在選自由以下組成之群的一或多個位置處不同於IgG1恆定區之胺基酸序列：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411及K439；且抗體恆定區中之另一條多肽鏈的胺基酸序列在選自由以下組成之群的一或多個位置處不同於IgG1恆定區之胺基酸序列：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、D401、F405、Y407、K409、T411及K439。
在本發明之某些實施例中，NKG2D抗原結合位點包含：
(1)包含與SEQ ID NO:81至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:82至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-29379]；
(2)包含與SEQ ID NO:83至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:84至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-29463]；
(3)包含與SEQ ID NO:85至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:86至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-27744]；
(4)包含與SEQ ID NO:87至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:88至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-27749]；
(5)包含與SEQ ID NO:191至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:88至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[A49MI]；或
(6)包含與SEQ ID NO:89至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:90至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-29378]。
在本發明之某些實施例中，NKG2D抗原結合位點包含：
(1)包含與SEQ ID NO:124至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:125至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-27705]；
(2)包含與SEQ ID NO:129至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:130至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-27724]；
(3)包含與SEQ ID NO:131至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:132至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-27740]；
(4)包含與SEQ ID NO:133至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:134至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-27741]；
(5)包含與SEQ ID NO:135至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:136至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-27743]；
(6)包含與SEQ ID NO:137至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:138至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-28153]；
(7)包含與SEQ ID NO:139至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:140至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域[ADI-28226 (C26)]；
(8)包含與SEQ ID NO:141至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:142至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(9)包含與SEQ ID NO:143至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:144至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(10)包含與SEQ ID NO:145至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:146至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(11)包含與SEQ ID NO:147至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:148至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域；
(12)包含與SEQ ID NO:149至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:150至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(13)包含與SEQ ID NO:151至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:152至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(14)包含與SEQ ID NO:153至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:154至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(15)包含與SEQ ID NO:155至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:156至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(16)包含與SEQ ID NO:157至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:158至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(17)包含與SEQ ID NO:159至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:160至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(18)包含與SEQ ID NO:161至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:162至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(19)包含與SEQ ID NO:163至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:164至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(20)包含與SEQ ID NO:165至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:166至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(21)包含與SEQ ID NO:167至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:168至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(22)包含與SEQ ID NO:175至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:176至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；
(23)包含與SEQ ID NO:583至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:584至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域；或
(24)包含與SEQ ID NO:585至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:580至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域。
表2列舉重鏈可變域與輕鏈可變域之肽序列，其組合可以結合至NKG2D。除非另外指明，否則表2中所提供的CDR序列係依據Kabat確定。NKG2D結合域對NKG2D的結合親和力可以改變，然而其皆活化人類NKG2D及NK細胞。
抗體分子可以具有重鏈恆定區，該重鏈恆定區選自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD及IgE之重鏈恆定區；特定而言，選自例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之(例如人類)重鏈恆定區。在另一個實施例中，抗體分子具有輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區選自例如κ或λ之(例如人類)輕鏈恆定區。可以使恆定區改變，例如突變，以修改抗體特性(例如增加或減少以下中之一或多者：Fc受體結合、抗體糖基化、半胱胺酸殘基數目、效應細胞功能及/或補體功能)。在一些實施例中，抗體具有效應功能且可以固定補體。在其他實施例中，抗體不募集效應細胞或固定補體。在另一實施例中，抗體結合Fc受體之能力減小或無結合Fc受體之能力。舉例而言，其可為不支持結合至Fc受體的同型或亞型、片段或其他突變，例如其具有誘變或缺失之Fc受體結合區。
在Fc域內，CD16結合係由鉸鏈區及CH2域介導。舉例而言，在人類IgG1內，與CD16之相互作用主要集中於胺基酸殘基Asp 265-Glu 269、Asn 297-Thr 299、Ala 327-Ile 332、Leu 234-Ser 239，及CH2域中之碳水化合物殘基N-乙醯基-D-葡糖胺(參見Sondermann等人, Nature, 406 (6793):267-273)。基於已知結構域，可以選擇增強或減小針對CD16之結合親和力的突變，諸如藉由使用噬菌體呈現文庫或酵母表面呈現cDNA文庫來選擇，或可以基於相互作用之已知三維結構來設計。
在一些實施例中，抗體恆定域包含IgG抗體(例如人類IgG1抗體)之CH2域及CH3域。在一些實施例中，在抗體恆定域中引入突變以便能夠與另一抗體恆定域發生雜二聚。舉例而言，若抗體恆定域來源於人類IgG1之恆定域，則抗體恆定域可以包含與人類IgG1抗體之胺基酸234-332至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列，且在選自由以下組成之群的一或多個位置處不同：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411及K439。本文所揭示之Fc域或鉸鏈區中的所有胺基酸位置均根據EU編號法加以編號。
雜二聚抗體重鏈之組裝可以藉由在同一細胞中表現兩種不同抗體重鏈序列來完成，從而可以引起各抗體重鏈之均二聚體之組裝以及雜二聚體之組裝。促進雜二聚體之優先組裝可以藉由將不同突變併入各抗體重鏈恆定區之CH3域中來完成，如US13/494870、US16/028850、US11/533709、US12/875015、US13/289934、US14/773418、US12/811207、US13/866756、US14/647480及US14/830336中所示。舉例而言，可以在基於人類IgG1之CH3域中產生突變且將不同的胺基酸取代對併入第一多肽及第二多肽中允許此兩條鏈彼此間選擇性地雜二聚。下文所說明之胺基酸取代位置皆根據如Kabat中之EU索引編號。
在一種情形下，第一多肽中之胺基酸取代係用選自精胺酸(R)、***酸(F)、酪胺酸(Y)或色胺酸(W)之較大胺基酸取代原始胺基酸，且第二多肽中之至少一個胺基酸取代係用選自丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)或纈胺酸(V)之較小胺基酸置換原始胺基酸，使得較大胺基酸取代(隆凸)配合較小胺基酸取代(空腔)之表面。舉例而言，一個多肽可以併入T366W取代，且另一個多肽可以併入三個取代，包括T366S、L368A及Y407V。
本發明之抗體重鏈可變域可視情況與具有與抗體恆定區(諸如包括鉸鏈、CH2及CH3域、具有或不具有CH1域的IgG恆定區)至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之胺基酸序列偶聯。在一些實施例中，恆定區之胺基酸序列與人類抗體恆定區(諸如人類IgG1恆定區、IgG2恆定區、IgG3恆定區或IgG4恆定區)至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。在一些其他實施例中，恆定區之胺基酸序列與來自另一哺乳動物(諸如兔、犬、貓、小鼠或馬)之抗體恆定區至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致。相較於人類IgG1恆定區，可以在恆定區中併入一或多個突變，例如在Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411及/或K439併入。例示性取代包括例如Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、T350V、L351K、L351D、L351Y、S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、N390E、K392L、K392M、K392V、K392F、K392D、K392E、T394F、T394W、D399R、D399K、D399V、S400K、S400R、D401K、F405A、F405T、Y407A、Y407I、Y407V、K409F、K409W、K409D、T411D、T411E、K439D及K439E。
在某些實施例中，可併入人類IgG1恆定區之CH1中的突變可以位於胺基酸V125、F126、P127、T135、T139、A140、F170、P171及/或V173。在某些實施例中，可併入人類IgG1恆定區之Cκ中的突變可以位於胺基酸E123、F116、S176、V163、S174及/或T164。
或者，胺基酸取代可選自表3中所示之以下取代集合。
或者，胺基酸取代可以選自表4中所示之以下取代集合。
或者，胺基酸取代可選自表5中所示之以下取代集合。
或者，各多肽鏈中之至少一個胺基酸取代可以選自表6。
或者，至少一個胺基酸取代可選自表7中之以下取代集合，其中第一多肽欄中所示之位置經任何已知帶負電胺基酸置換，且第二多肽欄中所示之位置經任何已知帶正電胺基酸置換。
或者，至少一個胺基酸取代可選自表8中之以下集合，其中第一多肽欄中所示之位置經任何已知帶正電胺基酸置換，且第二多肽欄中所示之位置經任何已知帶負電胺基酸置換。
或者，胺基酸取代可選自表9中之以下集合。
或者或另外，多特異性結合蛋白內之雜二聚重鏈的結構穩定性可以藉由將S354C引入第一或第二多肽鏈中之任一者及將Y349C引入對置多肽鏈、從而在兩種多肽之界面內形成人工二硫橋鍵來增強。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在位置T366不同，且其中抗體恆定區中之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由T366、L368及Y407組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由T366、L368及Y407組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區中之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在位置T366不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由以下組成之群的一或多個位置處不同：E357、K360、Q362、S364、L368、K370、T394、D401、F405及T411，且其中抗體恆定區中之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由以下組成之群的一或多個位置處不同：Y349、E357、S364、L368、K370、T394、D401、F405及T411。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由以下組成之群的一或多個位置處不同：Y349、E357、S364、L368、K370、T394、D401、F405及T411，且其中抗體恆定區中之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由以下組成之群的一或多個位置處不同：E357、K360、Q362、S364、L368、K370、T394、D401、F405及T411。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由L351、D399、S400及Y407組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區中之另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由T366、N390、K392、K409及T411組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由T366、N390、K392、K409及T411組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區之另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由L351、D399、S400及Y407組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由Q347、Y349、K360及K409組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區中之另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由Q347、E357、D399及F405組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由Q347、E357、D399及F405組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區中之另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由Y349、K360、Q347及K409組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由K370、K392、K409及K439組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區之另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由D356、E357及D399組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由D356、E357及D399組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區之另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由K370、K392、K409及K439組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由L351、E356、T366及D399組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區中之另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由Y349、L351、L368、K392及K409組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由Y349、L351、L368、K392及K409組成之群的一或多個位置處不同，且其中抗體恆定區中之另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在選自由L351、E356、T366及D399組成之群的一或多個位置處不同。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於S354C取代，且其中抗體恆定區之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於Y349C取代。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於Y349C取代，且其中抗體恆定區之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於S354C取代。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於K360E及K409W取代，且其中抗體恆定區中之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於Q347R、D399V及F405T取代。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於O347R、D399V及F405T取代，且其中抗體恆定區之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於K360E及K409W取代。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於T366W取代，且其中抗體恆定區之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於T366S、T368A及Y407V取代。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於T366S、T368A及Y407V取代，且其中抗體恆定區之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於T366W取代。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於T350V、L351Y、F405A及Y407V取代，且其中抗體恆定區中之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於T350V、T366L、K392L及T394W取代。
在本發明之某些實施例中，抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於T350V、T366L、K392L及T394W取代，且其中抗體恆定區中之另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同之處在於T350V、L351Y、F405A及Y407V取代。
下文列舉結合CD33之F3'-TriNKET之實例，其包含：結合CD33之單鏈可變片段(scFv)，其經由包含Ala-Ser的鉸鏈連接至Fc域；及結合NKG2D之Fab片段(「A49」或「A49MI」)，其包含含有重鏈可變域(SEQ ID NO:87或SEQ ID NO:191)及CH1域的重鏈部分以及含有輕鏈可變域(SEQ ID NO:88)及輕鏈恆定域的輕鏈部分，其中重鏈可變域連接至CH1域，且CH1域連接至Fc域。CDR序列加有下劃線。
在各實例中，與結合CD33之scFv連接的Fc域包含Q347R、D399V及F405T取代，以便與連接至包含K360E及K409W取代之Fab的Fc域形成雜二聚體。在下述序列中，Fc域中之此等取代呈粗體加下劃線。或者，在一個例示性實施例中，與結合NKG2D之Fab片段連接的Fc域包括Q347R、D399V及F405T之突變，且與結合CD33之scFv連接的Fc域包含匹配突變K360E及K409W以便形成雜二聚體。
另外，與結合CD33之scFv連接的Fc域包含S354C取代，且連接至Fab的Fc域包含Y349C取代，藉此經由S-S橋鍵穩定兩個Fc域之間的相互作用。在下述序列中，Fc域中之此等取代呈粗斜體加下劃線。
或者，在一個例示性實施例中，與結合NKG2D之Fab片段連接的Fc域包括CH3域中的S354C取代，其在與結合CD33之scFv連接的Fc上與Y349C取代形成二硫鍵。
本發明之結合CD33之scFv可以包括經由(G4S)4 連接子連接至輕鏈可變域的重鏈可變域。scFv經由包含Ala-Ser (粗體加下劃線)之鉸鏈連接至Fc域。SEQ ID NO:188、198及206-223為結合CD33之此類scFv多肽的例示性序列。scFv (例如SEQ ID NO:188、198或206-223)內所含的VL 及VH 含有100VL -44VH S-S橋鍵(分別由G100C及G44C取代產生)(在下述序列中，半胱胺酸殘基呈粗斜體加下劃線)。在SEQ ID NO:188、198及206-243中，(G4S)4 為呈粗體加下劃線的序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO:186]。
下文提供經由包含Ala-Ser之鉸鏈連接至Fc域之結合CD33之scFv的例示性序列。
Ab1 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R, D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab1 scFv (HC-LC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab2 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R, D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )


Ab2 scFv (HC-LC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

H76 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

H76 scFv (HC-LC) -Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

H76 scFc (LC-HC)-Fc (K360E 、 K409W 及 Y349C 取代 )


Ab4 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab4 scFv (HC-LC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

I07 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

I07 scFv (HC-LC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )


I07 scFc (LC-HC)-Fc (K360E 、 K409W 及 Y349C 取代 )

Ab6 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R, D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab6 scFv (HC-LC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab7 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )


Ab7 scFv (HC-LC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab8 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab8 scFv (HC-LC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab9 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab9 scFv (HC-LC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab10 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

Ab10 scFv (HC-LC) -Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )
本發明之TriNKET為A49-F3'-TriNKET-I07，其包含：第一多肽鏈，命名為「I07 scFv-Fc」，其包含經由Ala-Ser連接子連接至Fc域之結合CD33的scFv；第二多肽鏈，命名為「A49 VH-CH1-Fc」，其包含靶向NKG2D的重鏈；及第三多肽鏈，命名為「A49 VL-CL」，其包含靶向NKG2D的輕鏈。I07 scFv-Fc之胺基酸序列包含：
I07 scFv (LC-HC)-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )

I07 scFv-Fc之scFv部分的胺基酸序列包含：
I07 scFv
A49 VH-CH1-Fc包含連接至CH1域及Fc域(包括鉸鏈、CH2及CH3域)的A49 VH [SEQ ID NO:87]。A49 VH-CH1-Fc之胺基酸序列包含：
A49 VH-CH1-Fc (K360E 、 K409W 及 Y349C 取代 )

A49 VH-CH1-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )
A49 VL-CL包含連接至輕鏈恆定域(CL)的A49 VL [SEQ ID NO:88]。A49 VL-CL之胺基酸序列包含：
A49 VL-CL
本發明之另一種TriNKET為A49MI-F3'-TriNKET-I07，其包含：第一多肽鏈，命名為如上文所述的「I07 scFv-Fc」[SEQ ID NO:187]；第二多肽鏈，命名為「A49MI VH-CH1-Fc」，其包含靶向NKG2D的重鏈與Fc域；及第三多肽鏈，命名為如上文所述的「A49 VL-CL」[SEQ ID NO:190]。A49MI-F3'-TriNKET-I07與A49-F3'-TriNKET-I07一致，但靶向NKG2D之VH之CDR3中的M被I取代。在下述序列中，此取代呈粗斜體(且加下劃線，原因為其係CDR的一部分)。A49MI VH-CH1-Fc包含連接至CH1域及Fc域(包括鉸鏈、CH2及CH3域)的A49MI VH [SEQ ID NO:191]。A49MI VH-CH1-Fc之胺基酸序列包含：
A49MI VH-CH1-Fc (K360E 、 K409W 及 Y349C 取代 )

A49MI VH-CH1-Fc (Q347R 、 D399V 、 F405T 及 S354C 取代 )
本發明之另一種TriNKET為A49-F3'-TriNKET-I07(si)，其包含：第一多肽鏈，命名為「I07 scFv-Fc(si)」，其包含經由Ala-Ser連接子連接至靜默Fc域的結合CD33之scFv；第二多肽鏈，命名為「A49 VH-CH1-Fc(si)」，其包含靶向NKG2D的重鏈與靜默Fc域；及第三多肽鏈，其命名為如上文所述的「A49 VL-CL」[SEQ ID NO:190]。A49-F3'-TriNKET-I07(si)與A49-F3'-TriNKET-I07一致，但兩個Fc域中均存在L234A、L235A及P329A取代。在下述兩個序列中，此等取代呈粗斜體。I07 scFv-Fc(si)之胺基酸序列包含：
I07 scFv-Fc(si)
I07 scFv-Fc(si)中之scFv部分的胺基酸序列與如上文所述之I07 scFv-Fc中之scFv部分的胺基酸序列[SEQ ID NO:188]一致。
A49 VH-CH1-Fc(si)之胺基酸序列包含：
A49 VH-CH1-Fc(si)
本發明之另一種為A49-F3'-TriNKET-H76，其包含：第一多肽鏈，命名為「H76 scFv-Fc」，其包含經由Ala-Ser連接子連接至Fc域之結合CD33的scFv；第二多肽鏈，命名為如上文所述的「A49 VH-CH1-Fc」[SEQ ID NO:189]；及第三多肽鏈，命名為如上文所述的「A49 VL-CL」[SEQ ID NO:190]。H76 scFv-Fc之胺基酸序列包含：
H76 scFv-Fc

H76 scFv-Fc中之scFv部分的胺基酸序列包含：
H76 scFv
在本發明之其他實施例中，多特異性結合蛋白(例如TriNKET)中之結合CD33的scFv包含表1中所提供之任一種抗體的重鏈可變域CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變域CDR1、CDR2及CDR3。在某些實施例中，重鏈可變域之胺基酸序列與表1中之抗體之VH序列一致，但其中位置44處之Cys被取代；且輕鏈可變域之胺基酸序列與相同抗體之VL序列一致，但其中位置100處之Cys被取代。在某些實施例中，重鏈可變域經由(G4S)4 連接子連接至輕鏈可變域。重鏈可變域可以位於輕鏈可變域的N末端或輕鏈可變域的C末端。scFv經由包含Ala-Ser的鉸鏈連接至Fc域。
上述多特異性結合蛋白可以使用熟習此項技術者熟知的重組DNA技術製得。舉例而言，可將編碼第一免疫球蛋白重鏈之第一核酸序列選殖至第一表現載體中；可將編碼第二免疫球蛋白重鏈之第二核酸序列選殖至第二表現載體中；可將編碼第一免疫球蛋白輕鏈之第三核酸序列選殖至第三表現載體中；可將編碼第二免疫球蛋白輕鏈之第四核酸序列選殖至第四表現載體中；該第一、第二、第三及第四表現載體可一起穩定轉染至宿主中以產生多聚體蛋白質。
為達成多特異性結合蛋白之最高產量，可研究第一、第二、第三及第四表現載體之不同比率以確定轉染至宿主細胞中最佳之比率。轉染之後，可以使用此項技術中已知之方法(諸如有限稀釋、ELISA、FACS、顯微術或Clonepix)分離出單一純系用於產生細胞庫。
可以在適於生物反應器的條件下培養純系，按比例擴大且維持多特異性蛋白質之表現。多特異性結合蛋白可以使用此項技術中已知之方法分離及純化，包括離心、深度過濾、細胞溶解、均質化、冷凍-解凍、親和純化、凝膠過濾、離子交換層析、疏水性相互作用交換層析及混合模式層析。
在某些實施例中，抗體以20 nM、15 nM、10 nM、9 nM、8 nM、7 nM、6 nM、5 nM、4 nM、3 nM、2 nM、1 nM或更低之KD 結合CD33，如使用標準結合分析(例如表面電漿子共振或生物層干擾量測法)所量測。在某些實施例中，抗體結合來自個體之體液、組織及/或細胞的EBI3。
用於確定一種抗體是否與所揭示之抗體(例如Ab1抗體、Ab2抗體、Ab3抗體、Ab4抗體或Ab5抗體)結合至相同抗原決定基或競爭結合的競爭分析在此項技術中已知。例示性競爭分析包括免疫分析(例如ELISA分析、RIA分析)、表面電漿子共振(例如BIAcore分析)、生物層干擾量測法及流式細胞術。
典型地，競爭分析涉及使用與固體表面結合或細胞表面上所表現的抗原(例如人類CD33蛋白或其片段)、結合CD33的測試抗體及參考抗體。參考抗體經標記且測試抗體未標記。競爭性抑制係藉由在測試抗體存在下測定結合至固體表面或細胞的經標記之參考抗體的量來量測。通常，測試抗體過量(例如1倍、5倍、10倍、20倍或100倍)存在。藉由競爭分析鑑別出的抗體(例如競爭抗體)包括與參考抗體結合至相同抗原決定基或相似(例如重疊)抗原決定基的抗體，及因發生空間位阻而結合至鄰近抗原決定基的抗體，該鄰近抗原決定基足夠靠近參考抗體所結合之抗原決定基。
可在兩個方向上進行競爭分析以確保標記之存在不干擾或以其他方式抑制結合。舉例而言，在第一方向上，參考抗體經標記且測試抗體未標記，且在第二方向上，測試抗體經標記且參考抗體未標記。
若過量(例如1倍、5倍、10倍、20倍或100倍)的一種抗體抑制另一種抗體結合，例如抑制至少50%、75%、90%、95%或99%，如競爭性結合分析中所量測，則測試抗體與參考抗體競爭特異性結合至抗原。
若減少或消除一種抗體之結合之抗原中基本上所有的胺基酸突變減少或消除另一種抗體的結合，則可以確定兩種抗體結合至相同抗原決定基。若減少或消除一種抗體之結合的胺基酸突變中僅有子集合減少或消除另一種抗體之結合，則可以確定兩種抗體結合至重疊抗原決定基。
本文所揭示之抗體可以進一步最佳化(例如親和力成熟)以改良生物化學特徵(包括親和力及/或特異性)，改良生物物理特性(包括聚集、穩定性、沈澱及/或非特異性相互作用)，及/或降低免疫原性。親和力成熟程序屬於此項技術中之一般技能範圍內。舉例而言，可藉由DNA改組、鏈改組、CDR改組、隨機突變誘發及/或定點突變誘發將多樣性引入免疫球蛋白重鏈及/或免疫球蛋白輕鏈中。
在某些實施例中，經分離之人類抗體含有一或多個體細胞突變。在此等情況下，可以根據人類生殖系序列來修飾抗體以最佳化抗體(例如藉由稱為生殖系選殖的方法)。
一般而言，最佳化之抗體對抗原之親和力與衍生其之非最佳化(或親本)抗體至少相同或基本上相同。較佳地，相較於親本抗體，最佳化抗體對抗原具有較高親和力。
若抗體用作治療劑，則其可以利用標準活體外結合化學反應與效應劑(諸如小分子毒素或放射性核素)結合。若效應劑為多肽，則抗體可以化學方式與效應子結合或與效應子連接為融合蛋白。融合蛋白之構築屬於此項技術之一般技能範圍內。
抗體可以利用標準活體外結合化學反應與效應子部分(諸如小分子毒素或放射性核素)結合。若效應子部分為多肽，則抗體可以化學方式與效應子結合或與效應子連接為融合蛋白。融合蛋白之構築屬於此項技術之一般技能範圍內。
在某些實施例中，本發明之蛋白質(例如多特異性結合蛋白)基本上不被表現CD33之細胞內化。低內化程度可以改良蛋白質之藥物動力學，藉此減少使表現CD33之靶細胞與效應細胞(例如NK細胞)接合所需的劑量。內化可藉由此項技術中已知之任何方法量測，例如本發明之實例5及10中所述之方法。舉例而言，在某些實施例中，培育兩小時之後，被EOL-1細胞內化的蛋白質(例如多特異性結合蛋白)低於25%、30%、35%、40%、45%或50%，如藉由本文所揭示之方法所評估。在某些實施例中，培育24小時之後，被EOL-1細胞內化的蛋白質(例如多特異性結合蛋白)低於25%、30%、35%、40%、45%或50%，如藉由本文所揭示之方法所評估。在某些實施例中，培育兩小時之後，被Molm-13細胞內化的蛋白質(例如多特異性結合蛋白)低於25%、30%、35%、40%、45%或50%，如藉由本文所揭示之方法所評估。
KHYG-1細胞表現表面NKG2D，但不表現CD16。在某些實施例中，TriNKET介導殺死Molm-13及THP-1細胞與NKG2D介導KHYG-1效應細胞活化相關。在某些實施例中，本發明之TriNKET介導KHYG-1效應細胞殺死Molm-13 (圖15A)、EOL-1 (圖16)及THP-1 (圖17A)人類AML靶細胞株。
在某些實施例中，本發明之TriNKET介導休眠之人類NK細胞之細胞毒性對抗Molm-13或THP-1人類AML細胞。圖15B及38A表明，本發明之TriNKET介導休眠之人類NK細胞殺死Molm-13人類AML細胞。休眠之人類NK效應細胞(E)相對於標靶癌細胞(T)的比率(E:T)在圖15B中為10:1且在圖38A中為5:1。E:T比率可以反映最大溶解%的差異。
在某些實施例中，本發明之TriNKET介導休眠之人類NK細胞殺死EOL-1人類AML細胞。圖38B表明，TriNKET介導休眠之人類NK細胞以5:1之E:T殺死EOL-1細胞。在某些實施例中，本發明之TriNKET介導休眠之人類NK細胞殺死表現高親和力FcγRI的THP-1靶細胞。圖17B、38C及38D表明TriNKET介導休眠之人類NK細胞利用5:1之E:T殺死THP-1人類AML細胞。
在某些實施例中，本發明之TriNKET介導人類CD8+ T細胞殺死Molm-13靶細胞。圖40A-40B表明，TriNKET介導人類CD8+ T細胞以50:1之E:T殺死Molm-13細胞。
包含與本文所述之 CD33 結合位點競爭之抗原結合位點的蛋白質
在一個態樣中，本發明提供一種蛋白質，其包括與本文所述之CD33結合位點競爭結合至CD33的抗原結合位點。在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:1的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:2的抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:3之抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:4之抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:5的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:6的抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:7的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:8的抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:9的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:10的抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:11的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:12的抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:13的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:14的抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:15的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:16的抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:17的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:18的抗體輕鏈。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括具有胺基酸序列SEQ ID NO:19的抗體重鏈及具有胺基酸序列SEQ ID NO:20的抗體輕鏈。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:2之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括具有胺基酸序列與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及具有胺基酸序列與SEQ ID NO:4之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:6之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:8之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:14之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:18之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在一些實施例中，與CD33結合位點競爭之蛋白質的抗原結合位點包括胺基酸序列與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域及胺基酸序列與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33的抗原結合位點，該抗體包括結合腫瘤相關抗原的抗原結合位點。
在某些實施例中，本發明提供一種蛋白質，其包括與抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴CD33之抗原結合位點，該抗體包括能夠結合CD16之抗體恆定區或其一部分。
CAR T 細胞 、 CD33/CD3 定向雙特異性 T 細胞 接合體、免疫細胞介素、抗體 - 藥物結合物及免疫毒素
本發明之另一態樣提供一種包含結合CD33之抗原結合位點的分子或複合物，如本文所揭示。例示性分子或複合物包括(但不限於)嵌合抗原受體(CAR)、T細胞接合體(例如CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體)、免疫細胞介素、抗體-藥物結合物及免疫毒素。
可以使用如本文所揭示之結合CD33的任何抗原結合位點，包括(但不限於)如章節I.抗原結合位點中所揭示的結合CD33之抗原結合位點。在某些實施例中，結合CD33之抗原結合位點之胺基酸序列提供於表1中。在某些實施例中，結合CD33之抗原結合位點為scFv。在某些實施例中，scFv包含與選自以下之胺基酸序列至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。在某些實施例中，scFv包含選自以下之胺基酸序列：SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:447、SEQ ID NO:448、SEQ ID NO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:451、SEQ ID NO:452、SEQ ID NO:453、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:459、SEQ ID NO:460、SEQ ID NO:461、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQ ID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ ID NO:466、SEQ ID NO:467、SEQ ID NO:468、SEQ ID NO:469、SEQ ID NO:470、SEQ ID NO:471、SEQ ID NO:472、SEQ ID NO:473、SEQ ID NO:474、SEQ ID NO:475、SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:477、SEQ ID NO:478、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO:480、SEQ ID NO:481、SEQ ID NO:482、SEQ ID NO:483及SEQ ID NO:484。
在某些實施例中，結合CD33的抗原結合位點包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含分別由胺基酸序列SEQ ID NO:181、46及182表示的CDR1、CDR2及CDR3序列；以及輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含分別由胺基酸序列SEQ ID NO:48、49及50表示的CDR1、CDR2及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含胺基酸序列與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域；及胺基酸序列與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。在某些實施例中，抗原結合位點包含胺基酸序列與SEQ ID NO:188至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的scFv。
在此子章節之任一前述態樣的其他實施例中，結合CD33的抗原結合位點包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含分別由胺基酸序列SEQ ID NO:183、34及184表示的CDR1、CDR2及CDR3序列；及輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含分別由胺基酸序列SEQ ID NO:36、185及38表示的CDR1、CDR2及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含胺基酸序列與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的重鏈可變域；及胺基酸序列與SEQ ID NO:6之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的輕鏈可變域。在某些實施例中，抗原結合位點包含胺基酸序列與SEQ ID NO:198至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的scFv。
嵌合抗原受體 (CAR)
在某些實施例中，本發明提供一種靶向CD33之CAR，其包含如本文所揭示之結合CD33的抗原結合位點(參見例如表1)。靶向CD33之CAR可以包含Fab片段或scFv。
術語「嵌合抗原受體」或者「CAR」係指一種重組多肽構築體，其包含至少一個胞外抗原結合域、跨膜域及包含來源於刺激分子之功能信號傳導域的胞內信號傳導域(在本文中亦稱作「初始信號傳導域」)。
相應地，在某些實施例中，CAR包含如本文所揭示之結合CD33的胞外抗原結合位點、跨膜域，及包含初始信號傳導域之胞內信號傳導域。在某些實施例中，CAR進一步包含一或多個來源於至少一種共刺激分子的功能信號傳導域(也稱為「共刺激信號傳導域」)。
在一個實施例中，CAR包含一種嵌合性融合蛋白，該蛋白質包含含有表1中所列之重鏈可變域及輕鏈可變域的CD33結合域(例如結合CD33之scFv域)作為胞外抗原結合域、跨膜域，及包含初始信號傳導域之胞內信號傳導域。在一個實施例中，CAR包含一種嵌合性融合蛋白，該蛋白質包含含有表1中所列之重鏈可變域及輕鏈可變域的CD33結合域(例如結合CD33之scFv域)作為胞外抗原結合域、跨膜域，以及包含共刺激信號傳導域及初始信號傳導域的胞內信號傳導域。在一個態樣中，CAR包含一種嵌合性融合蛋白，該蛋白質包含含有表1中所列之重鏈可變域及輕鏈可變域的CD33結合域(例如結合CD33之scFv域)作為胞外抗原結合域、跨膜域，以及包含兩個共刺激信號傳導域及一個初始信號傳導域的胞內信號傳導域。在一個實施例中，CAR包含一種嵌合性融合蛋白，該蛋白質包含含有表1中所列之重鏈可變域及輕鏈可變域的CD33結合域作為胞外抗原結合域、跨膜域，以及包含至少兩個共刺激信號傳導域及初始信號傳導域的胞內信號傳導域。
就跨膜域而言，在各種實施例中，CAR設計成包含與CAR胞外域融合的跨膜域。在一個實施例中，跨膜域為與CAR中之一個結構域天然締合的結構域。在一些情況下，可以藉由胺基酸取代來選擇或修飾跨膜域，以避免此類結構域結合至相同或不同表面膜蛋白之跨膜域，從而使與受體複合物中之其他元件的相互作用降至最低。在另一個實施例中，跨膜域能夠與另一CAR在CAR T細胞表面上發生均二聚。在另一個實施例中，跨膜域之胺基酸序列可以經修飾或經取代以便使與同一CAR T細胞中存在之原生結合搭配物之結合域的相互作用降至最低。
跨膜域可以來源於天然存在的任何膜結合蛋白或跨膜蛋白。在一個實施例中，每當CAR已結合至標靶時，跨膜域能夠向胞內域傳導信號。在一些實施例中，跨膜域包含選自由以下組成之群的一或多種蛋白質之跨膜區：TCR α鏈、TCR β鏈、TCR ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137及CD154。在一些實施例中，跨膜域包含選自由以下組成之群的一或多種蛋白質之跨膜區：KIRDS2、OX40、CD2、CD27、LFA-1 (CD11a、CD18)、ICOS (CD278)、4-1BB (CD137)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM (LIGHTR)、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244、2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、SLAMF6 (NTB-A、Ly108)、SLAM (SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKG2D及NKG2C。
胞外CD33結合域(例如結合CD33之scFv域)域可藉由鉸鏈區連接至跨膜域。可以使用多種鉸鏈，包括(但不限於)人類Ig (免疫球蛋白)鉸鏈(例如IgG4鉸鏈、IgD鉸鏈)、Gly-Ser連接子、(G4 S)4 連接子、KIR2DS2鉸鏈及CD8α鉸鏈。
本發明之CAR中的胞內信號傳導域負責活化其中已置有CAR之免疫細胞的至少一種專門功能(例如T細胞的溶胞活性或輔助活性，包括分泌細胞介素)。因此，如本文所用，術語「胞內信號傳導域」係指蛋白質的一部分，其轉導效應功能信號且導引細胞執行專門功能。儘管通常可以使用整個胞內信號傳導域，但在許多情況下，無需使用整條鏈。就使用胞內信號傳導域之截斷部分而言，此類截斷部分只要其轉導效應功能信號即可用於替代完整鏈。術語胞內信號傳導域因此意欲包括足以轉導效應功能信號之胞內信號傳導域的任何截斷部分。
CAR之胞內信號傳導域包含初始信號傳導域(亦即，來源於刺激分子之功能信號傳導域)及一或多個共刺激信號傳導域(亦即，來源於至少一種共刺激分子之功能信號傳導域)。
如本文所用，術語「刺激分子」係指由免疫細胞(例如T細胞、NK細胞、B細胞)表現之分子，該分子提供的細胞質信號傳導序列以刺激方式調控免疫細胞活化以用於免疫細胞信號傳導路徑之至少一些方面。在一個實施例中，信號為初始信號，其起始於例如TCR/CD3複合物與負載有肽之MHC分子的結合，且引起T細胞反應的介導，包括(但不限於)增殖、活化、分化及其類似者。
以刺激方式起作用之初始信號傳導域可以含有信號傳導基元，稱為基於免疫受體酪胺酸之活化基元或ITAM。含有特別適用於本發明中之細胞質信號傳導序列的ITAM實例包括來源於CD3 ξ、共同FcR γ (FCER1G)、Fc γ RIIa、FcR β (Fc ε R1b)、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD79a、CD79b、DAP10及DAP12的彼等物。在一個實施例中，本發明之任一或多種CAR中的初始信號傳導域包含來源於CD3-ξ的細胞質信號傳導序列。
在一些實施例中，初始信號傳導域為TCR ξ、FcR γ、FcR β、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、4-1BB及/或CD3-ξ之功能信號傳導域。在一個實施例中，胞內信號傳導域包含CD3 ξ、共同FcR γ (FCER1G)、Fc γ RIIa、FcR β (Fc ε R1b)、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD79a、CD79b、DAP10及/或DAP12之功能信號傳導域。在一個特定實施例中，初始信號傳導域為與T細胞受體複合物締合之ξ鏈的功能信號傳導域。
如本文所用，術語「共刺激分子」係指T細胞上之同源結合搭配物，其與共刺激配位體特異性結合，藉此介導T細胞產生共刺激反應，諸如(但不限於)增殖。共刺激分子為淋巴球對抗原有效反應所必需之除抗原受體或其配位體之外的細胞表面分子。此類分子之實例包括CD27、CD28、4-1BB (CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1，CD11a/CD18)、CD2、CD7、CD258 (LIGHT)、NKG2C、B7-H3，及與CD83特異性結合之配位體，及其類似物。此類共刺激分子之其他實例包括CD5、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM (LIGHTR)、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244，2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、CD69、SLAMF6 (NTB-A，Ly108)、SLAM (SLAMF1，CD150，IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp，及與CD83特異性結合的配位體。在一些實施例中，CAR之共刺激信號傳導域為本文所述之共刺激分子(例如OX40、CD27、CD28、CD30、CD40、PD-1、CD2、CD7、CD258、NKG2C、B7-H3、結合至CD83的配位體、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS及4-1BB (CD137)或其任何組合)的功能信號傳導域。
如本文所用，術語「信號傳導域」係指蛋白質之功能部分，其藉由傳遞細胞內的資訊來起作用，以經由限定的信號傳導路徑、藉由產生第二信使或充當響應於此類信使的效應子來調控細胞活性。
本發明之CAR之細胞質信號傳導部分內的細胞質信號傳導序列可以隨機或指定次序彼此連接。視情況，長度為例如2至10個胺基酸的短寡肽或多肽連接子可形成鍵聯。
本發明之另一態樣提供一種編碼本文所揭示之靶向CD33之CAR的核酸。藉由將核酸引入細胞中，該核酸適用於效應細胞(例如T細胞)中表現CAR。
本文中揭示編碼CAR之胞外部分的例示性核酸序列，例如SEQ ID NO:246-265。可以在序列中進行修飾以產生本發明之等效物或改良變異體，例如藉由根據密碼簡併表改變一或多個密碼子。DNA密碼簡併表提供於表10中。
在某些實施例中，核酸為DNA分子(例如cDNA分子)。在某些實施例中，核酸進一步包含可操作地連接至CAR編碼序列之表現控制序列(例如啟動子及/或增強子)。在某些實施例中，本發明提供包含核酸的載體。載體可為病毒載體(例如AAV載體、慢病毒載體或腺病毒載體)或非病毒載體(例如質體)。
在某些實施例中，核酸為RNA分子(例如mRNA分子)。用於產生供轉染用之mRNA的方法可以包括用專門設計之引子活體外轉錄模板，隨後添加聚腺苷酸，以產生RNA構築體，該RNA構築體含有3'及5'未轉譯序列、5'帽及/或內部核糖體進入位點(IRES)、待表現之核酸及聚腺苷酸尾(長度典型地為50-2000個鹼基)。RNA分子可經進一步修飾以增加轉譯效率及/或穩定性，例如如美國專利第8,278,036號、第8,883,506號及第8,716,465號中所揭示。如此產生之RNA分子可以有效轉染不同種類之細胞。
在一個實施例中，核酸編碼包含位於CAR之胺基端的信號肽之胺基酸序列。此類信號肽當其表現於效應細胞中時可以促進CAR在細胞表面上定位，且在細胞處理期間自CAR裂解。在一個實施例中，核酸編碼包含位於胞外CD33結合域(例如結合CD33之scFv域)之N末端之信號肽的胺基酸序列。
可以利用多種不同方法中之任一者將RNA或DNA引入靶細胞中，該等方法例如市售方法，包括(但不限於)電穿孔、使用脂質體轉染進行的陽離子脂質體介導轉染、聚合物囊封、肽介導之轉染，或生物彈道粒子遞送系統，諸如「基因槍」(參見例如Nishikawa等人, Hum Gene Ther., 12(8):861-70 (2001))。
本發明之另一態樣提供一種表現靶向CD33之CAR的免疫效應細胞。亦提供一種免疫效應細胞，其包含編碼靶向CD33之CAR的核酸。免疫效應細胞包括(但不限於) T細胞及NK細胞。在某些實施例中，T細胞選自CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NKT細胞。T細胞或NK細胞可為初級細胞或細胞株。
免疫效應細胞可藉由此項技術中已知之方法獲自多種來源，包括周邊血液單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染位點之組織、腹水、肋膜積液、脾組織及腫瘤。免疫效應細胞亦可由多能或多潛能細胞(例如造血幹細胞)在活體外分化而成。在一些實施例中，本發明提供一種多能或多潛能細胞(例如造血幹細胞)，其表現靶向CD33的CAR或包含本文所揭示之核酸。
在某些實施例中，免疫效應細胞經分離及/或純化。舉例而言，可使用結合CD25之配位體自T細胞群中移除調控T細胞。可以藉由類似方法移除表現檢查點蛋白質(例如PD-1、LAG-3或TIM-3)的效應細胞。在某些實施例中，藉由正向選擇步驟分離出效應細胞。舉例而言，可藉由與抗CD3/抗CD28結合珠粒一起培育來分離出T細胞群。亦可利用其他細胞表面標記物(諸如IFN-7、TNF-α、IL-17A、IL-2、IL-3、IL-4、GM-CSF、IL-10、IL-13、顆粒酶B及穿孔蛋白)進行正向選擇。
免疫效應細胞通常可以使用此項技術中已知之方法活化及擴增，例如如美國專利第6,352,694號、第6,534,055號、第6,905,680號、第6,692,964號、第5,858,358號、第6,887,466號、第6,905,681號、第7,144,575號、第7,067,318號、第7,172,869號、第7,232,566號、第7,175,843號、第5,883,223號、第6,905,874號、第6,797,514號、第6,867,041號；及美國專利申請公開案第2006/0121005號及第2016/0340406號中所述。舉例而言，在某些實施例中，T細胞可藉由與抗CD3抗體及抗CD28抗體在適於刺激T細胞增殖之條件下接觸來擴增及/或活化。細胞可以在培養物中擴增若干個小時(例如約2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、18、21個小時)至約14天(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天)之時段。在一個實施例中，細胞擴增4至9天之時段。延長細胞培養(例如培養60天或更長之時段)可能需要多個刺激循環。在某些實施例中，細胞培養物包含血清(例如胎牛血清或人類血清)、介白素-2 (IL2)、胰島素、IFN-γ、IL-4、IL-7、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ、TNF-α或其組合。細胞培養物中亦可包括熟習此項技術者已知之供細胞生長用的其他添加劑，例如界面活性劑、人血漿蛋白粉(plasmanate)，及還原劑，諸如N-乙醯基-半胱胺酸及2-巰基乙醇。在某些實施例中，本發明之免疫效應細胞為活體外擴增所得的細胞。
靶向CD33之CAR (例如可調控CAR)、編碼CAR之核酸及表現CAR或包含該核酸之效應細胞的其他實施例提供於美國專利第7,446,190號及第9,181,527號、美國專利申請公開案第2016/0340406號及第2017/0049819號以及國際專利申請公開案第WO2018/140725號中。
CD33/CD3 定向雙特異性 T 細胞 接合體
在某些實施例中，本發明提供一種CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體，其包含本文所揭示之結合CD33的抗原結合位點。在某些實施例中，CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體包含與SEQ ID NO:187至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在某些實施例中，CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體包含與SEQ ID NO:197至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列。
在某些實施例中，CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體進一步包含結合CD3之抗原結合位點。結合CD3之例示性抗原結合位點揭示於國際專利申請公開案第WO2014/051433號及第WO2017/097723號中。
本發明之另一態樣提供一種核酸，其編碼CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體中的至少一種多肽，其中該多肽包含結合CD33之抗原結合位點。在某些實施例中，核酸進一步包含編碼信號肽之核苷酸序列，該信號肽在表現時處於CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體中之一或多種多肽的N末端。亦提供包含該核酸之載體(例如病毒載體)、包含該核酸或載體之生產細胞，及表現CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體之生產細胞。
免疫細胞介素
在某些實施例中，本發明提供一種免疫細胞介素，其包含結合本文揭示之CD33的抗原結合位點及細胞介素。可以使用此項技術中已知之任何細胞介素(例如促炎性細胞介素)，包括(但不限於) IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、TNF、IFNα、IFNγ及GM-CSF。更多例示性細胞介素揭示於美國專利第9,567,399號中。在某些實施例中，抗原結合位點藉由化學結合(例如共價或非共價化學結合)連接至細胞介素。在某些實施例中，抗原結合位點藉由多肽融合連接至細胞介素。免疫細胞介素可以進一步包含與結合CD33之抗原結合位點連接的Fc域。在某些實施例中，免疫細胞介素包含與SEQ ID NO:187至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列。在某些實施例中，免疫細胞介素包含與SEQ ID NO:197至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在某些實施例中，細胞介素直接或經由連接子連接至Fc域。
本發明之另一態樣提供一種編碼免疫細胞介素之至少一種多肽的核酸，其中該多肽包含結合CD33之抗原結合位點。在某些實施例中，該核酸進一步包含編碼信號肽之核苷酸序列，該信號肽當表現時處於免疫細胞介素之一或多種多肽的N末端。亦提供包含核酸之載體(例如病毒載體)、包含核酸或載體之生產細胞及表現免疫細胞介素之生產細胞。
抗體 - 藥物結合物
在某些實施例中，本發明提供一種抗體-藥物結合物，其包含結合本文所揭示之CD33的抗原結合位點及細胞毒性藥物部分。例示性細胞毒性藥物部分揭示於國際專利申請公開案第WO2014/160160號及第WO2015/143382號中。在某些實施例中，細胞毒性藥物部分係選自奧瑞他汀(auristatin)、N-乙醯基-γ卡奇黴素(calicheamicin)、類美登素(maytansinoid)、吡咯并苯并二氮呯(pyrrolobenzodiazepine)及SN-38。抗原結合位點可藉由化學結合(例如共價或非共價化學結合)連接至細胞毒性藥物部分。在某些實施例中，抗體-藥物結合物進一步包含與結合CD33之抗原結合位點連接的Fc域。在某些實施例中，抗體-藥物結合物包含與SEQ ID NO:187至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之胺基酸序列。在某些實施例中，抗體-藥物結合物包含與SEQ ID NO:197至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在某些實施例中，細胞毒性藥物部分直接或經由連接子連接至Fc域。
免疫毒素
在某些實施例中，本發明提供一種免疫毒素，其包含結合本文所揭示之CD33的抗原結合位點及細胞毒性肽部分。可使用此項技術中已知之任何細胞毒性肽部分，包括(但不限於)蓖麻毒素(ricin)、白喉毒素(Diphtheria toxin)及綠膿桿菌外毒素A (Pseudomonas exotoxin A)。更多例示性細胞毒性肽揭示於國際專利申請公開案第WO2012/154530號及第WO2014/164680號中。在某些實施例中，細胞毒性肽部分藉由化學結合(例如共價或非共價化學結合)連接至蛋白質。在某些實施例中，細胞毒性肽部分藉由多肽融合連接至蛋白質。免疫毒素可進一步包含與結合CD33之抗原結合位點連接的Fc域。在某些實施例中，免疫毒素包含與SEQ ID NO:187至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在某些實施例中，免疫毒素包含與SEQ ID NO:197至少90% (例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致的胺基酸序列。在某些實施例中，細胞毒性肽部分直接或經由連接子連接至Fc域。
本發明之另一態樣提供一種編碼免疫毒素之至少一種多肽的核酸，其中該多肽包含結合CD33之抗原結合位點。在某些實施例中，該核酸進一步包含編碼信號肽之核苷酸序列，該信號肽當表現時處於免疫毒素之一或多種多肽的N末端。亦提供包含核酸之載體(例如病毒載體)、包含核酸或載體之生產細胞及表現免疫毒素之生產細胞。
III. 治療組合物及其用途
本發明提供使用本文所述之多特異性結合蛋白及/或本文所述之醫藥組合物治療癌症之方法。該等方法可以用於藉由向有需要之患者投與治療有效量之本文所述之多特異性結合蛋白來治療表現CD33之多種癌症。
治療方法可以根據待治療之癌症表徵。舉例而言，在某些實施例中，癌症為AML、骨髓發育不良症候群、慢性骨髓單核球性白血病、慢性骨髓性白血病之骨髓急變，及ALL。
舉例而言，在某些實施例中，癌症為實體腫瘤。在某些其他實施例中，癌症為腦癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、白血病、肺癌、肝癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰臟癌、***癌、直腸癌、腎癌、胃癌、睪丸癌或子宮癌。在又其他實施例中，癌症為脈管化腫瘤、鱗狀細胞癌、腺癌、小細胞癌瘤、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、肉瘤(例如血管肉瘤或軟骨肉瘤)、喉癌、腮腺癌、膽道癌、甲狀腺癌、肢端雀斑痣性黑色素瘤、光化性角化病、急性淋巴球性白血病、急性骨髓性白血病、囊腫性腺樣癌、腺瘤、腺肉瘤、腺鱗癌、肛管癌、肛門癌、肛腸癌、星形細胞腫瘤、***(bartholin gland)癌瘤、基底細胞癌、膽道癌、骨癌、骨髓癌、支氣管癌、支氣管腺體癌瘤、類癌、膽管癌、軟骨肉瘤、脈絡叢乳頭狀瘤/癌瘤、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病、透明細胞癌瘤、結締組織癌症、囊腺瘤、消化系統癌症、十二指腸癌症、內分泌系統癌症、內胚層竇瘤、子宮內膜增生、子宮內膜基質肉瘤、子宮內膜樣腺癌、內皮細胞癌症、室管膜癌症、上皮細胞癌、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、眼眶癌、雌性生殖器癌症、局灶性結節性增生、膽囊癌、胃竇癌、胃底癌、胃泌素瘤、神經膠母細胞瘤、升糖素瘤、心臟癌症、血管母細胞瘤、血管內皮瘤、血管瘤、肝腺瘤、肝腺瘤病、肝膽癌、肝細胞癌、霍奇金氏疾病(Hodgkin's disease)、迴腸癌、胰島素瘤、上皮內贅瘤、上皮內鱗狀細胞贅瘤、肝內膽管癌、侵入性鱗狀細胞癌、空腸癌、關節癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、骨盆癌症、大細胞癌、大腸癌、平滑肌肉瘤、惡性雀斑樣痣黑色素瘤、淋巴瘤、雄性生殖器癌症、惡性黑色素瘤、惡性間皮腫瘤、神經管胚細胞瘤、髓上皮瘤、腦膜癌、間皮癌、轉移性癌瘤、口腔癌、黏液表皮樣癌瘤、多發性骨髓瘤、肌肉癌症、鼻道癌、神經系統癌症、神經上皮腺癌結節狀黑色素瘤、非上皮皮膚癌、非霍奇金氏淋巴瘤、燕麥細胞癌瘤、寡樹突神經膠質細胞癌、口腔癌、骨肉瘤、乳頭狀漿液性腺癌、陰莖癌、咽癌、腦垂體腫瘤、漿細胞瘤、假性肉瘤、肺母細胞瘤、直腸癌、腎細胞癌、呼吸系統癌症、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、漿液性癌瘤、鼻竇癌、皮膚癌、小細胞癌瘤、小腸癌、平滑肌癌、軟組織癌、生長抑素分泌腫瘤、脊椎癌、鱗狀細胞癌、橫紋肌癌、間皮下癌症、淺表擴散性黑色素瘤、T細胞白血病、舌癌、未分化癌瘤、輸尿管癌、尿道癌、膀胱癌、泌尿系統癌症、子宮頸癌症、子宮體癌症、葡萄膜黑色素瘤、***癌、疣狀癌、VIP瘤、外陰癌、分化良好的癌瘤，或威爾姆斯腫瘤(Wilms tumor)。
在某些其他實施例中，癌症為非霍奇金氏淋巴瘤，諸如B細胞淋巴瘤或T細胞淋巴瘤。在某些實施例中，非霍奇金氏淋巴瘤為B細胞淋巴瘤，諸如瀰漫性大B細胞淋巴瘤、原發縱隔B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、脾邊緣區B細胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、淋巴漿細胞性淋巴瘤、毛細胞白血病，或原發中樞神經系統(CNS)淋巴瘤。在某些其他實施例中，非霍奇金氏淋巴瘤為T細胞淋巴瘤，諸如前體T淋巴母細胞性淋巴瘤、外周T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、結外自然殺手/T細胞淋巴瘤、腸病型T細胞淋巴瘤、皮下脂層炎樣T細胞淋巴瘤、多形性大細胞淋巴瘤，或外周T細胞淋巴瘤。
待治療之癌症可根據癌細胞表面上所表現之特定抗原之存在來表徵。在某些實施例中，除CD33之外，癌細胞可以表現以下中之一或多者：CD2、CD19、CD20、CD30、CD38、CD40、CD52、CD70、EGFR/ERBB1、IGF1R、HER3/ERBB3、HER4/ERBB4、MUC1、TROP2、cMET、SLAMF7、PSCA、MICA、MICB、TRAILR1、TRAILR2、MAGE-A3、B7.1、B7.2、CTLA4及PD1。
在本發明之某些實施例中，待治療的癌症選自急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、骨髓增生性贅瘤(MPN)、淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤及經典霍奇金氏淋巴瘤。
在本發明之一些實施例中，待治療之癌症為AML。在本發明之一些實施例中，AML係選自未分化急性骨髓母細胞性白血病、成熟度最小之急性骨髓母細胞性白血病、成熟之急性骨髓母細胞性白血病、急性前髓細胞性白血病(APL)、急性骨髓單核球性白血病、急性骨髓單核球性白血病伴嗜伊紅血球增多、急性單核球性白血病、急性類紅血球性白血病、急性巨核母細胞白血病(AMKL)、急性嗜鹼性白血病、急性全骨髓增生伴纖維化，及母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤(BPDCN)。在本發明之一些實施例中，AML以AML白血病幹細胞(LSC)上之CLL-1表現為特徵。在本發明之一些實施例中，AML個體中之LSC進一步表現選自CD34、CD38、CD123、TIM3、CD25、CD32及CD96之膜標記物。在本發明之一些實施例中，AML的特徵為微小殘留病(MRD)。在本發明之一些實施例中，AML之MRD的特徵為選自FLT3-ITD ((Fms樣酪胺酸激酶3)-內部串聯重複(ITD))、NPM1 (核仁磷酸蛋白1)、DNMT3A (DNA甲基轉移酶基因DNMT3A )及IDH (異檸檬酸去氫酶1及2 (IDH1及IDH2))之突變的存在或不存在。
在本發明之某些實施例中，癌症為MDS，其選自MDS伴多譜系發育不良(MDS-MLD)、MDS伴單一譜系發育不良(MDS-SLD)、MDS伴環狀含鐵胚血球(MDS-RS)、MDS伴過量胚細胞(MDS-EB)、MDS伴分離之del(5q)，及類別不明的MDS (MDS-U)。
預期本發明之多特異性結合蛋白及/或醫藥組合物可以用於治療多種癌症，不限於其中癌細胞表現CD33的癌症。舉例而言，在某些實施例中，本文所揭示之多特異性結合蛋白及/或醫藥組合物可以用於治療與表現CD33之免疫細胞相關之癌症。CD33表現於許多骨髓譜系上，且腫瘤浸潤性骨髓細胞(例如腫瘤相關巨噬細胞)可能導致癌症進展及轉移。因此，本文所揭示之方法可以用於治療表現CD33 (無論在癌細胞上或在免疫細胞上)之多種癌症。
在某些實施例中，本發明之多特異性結合蛋白及/或醫藥組合物可以用於治療表現Fc受體之癌症，該Fc受體對Fc (例如IgG1 Fc)之結合親和力高於CD16。在某些實施例中，Fc受體為FcγRI。在某些實施例中，Fc受體表現於腫瘤微環境下之癌細胞及/或其他細胞上。
在某些實施例中，患者具有表現具有V158F取代之CD16變異體的效應細胞(例如NK細胞)。在某些實施例中，患者在引起V158F取代之CD16基因中具有單核苷酸多形性(SNP)。在某些實施例中，患者在僅一個對偶基因中具有此類SNP。在某些實施例中，患者在兩個對偶基因中均具有此類SNP或SNP。
IV. 組合療法
本發明之另一態樣提供組合療法。本文所述之多特異性結合蛋白與其他治療劑組合使用以治療癌症。
可以作為組合療法之一部分用於治療癌症的例示性治療劑包括例如輻射、絲裂黴素(mitomycin)、維甲酸(tretinoin)、利鉑莫司汀(ribomustin)、吉西他濱(gemcitabine)、長春新鹼(vincristine)、依託泊苷(etoposide)、克拉屈濱(cladribine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、甲胺喋呤(methotrexate)、多柔比星(doxorubicin)、卡波醌(carboquone)、噴司他汀(pentostatin)、二胺硝吖啶(nitracrine)、淨司他丁(zinostatin)、西曲瑞克(cetrorelix)、來曲唑(letrozole)、雷替曲塞(raltitrexed)、道諾黴素(daunorubicin)、法屈唑(fadrozole)、福莫司汀(fotemustine)、胸腺法新(thymalfasin)、索布佐生(sobuzoxane)、奈達鉑(nedaplatin)、阿糖胞苷(cytarabine)、比卡魯胺(bicalutamide)、長春瑞賓(vinorelbine)、維司力農(vesnarinone)、胺魯米特(aminoglutethimide)、安吖啶(amsacrine)、丙谷胺(proglumide)、依利醋銨(elliptinium acetate)、酮色林(ketanserin)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依曲替酯(etretinate)、異維甲酸(isotretinoin)、鏈脲菌素(streptozocin)、尼莫司汀(nimustine)、長春地辛(vindesine)、氟他胺(flutamide)、得羅淨利(drogenil)、布妥辛(butocin)、卡莫氟(carmofur)、雷佐生(razoxane)、西佐喃(sizofilan)、卡鉑(carboplatin)、二溴衛矛醇(mitolactol)、喃氟啶(tegafur)、異環磷醯胺(ifosfamide)、潑尼氮芥(prednimustine)、畢西巴尼(picibanil)、左旋咪唑(levamisole)、替尼泊苷(teniposide)、英丙舒凡(improsulfan)、依諾他濱(enocitabine)、麥角乙脲(lisuride)、羥次甲氫龍(oxymetholone)、他莫昔芬(tamoxifen)、孕酮(progesterone)、美雄烷(mepitiostane)、環硫雄醇(epitiostanol)、福美司坦(formestane)、干擾素-α、干擾素-2α、干擾素-β、干擾素-γ、群落刺激因子-1、群落刺激因子-2、地尼白介素(denileukin diftitox)、介白素-2、促黃體素釋放因子及前述藥劑之變異體，其可以展現對其同源受體的差異結合以及延長或縮短的血清半衰期。
可以作為組合療法之一部分用於治療癌症的另一類藥劑為免疫檢查點抑制劑。例示性免疫檢查點抑制劑包括抑制以下中之一或多者的藥劑：(i)細胞毒性T淋巴球相關抗原4 (CTLA4)；(ii)程式化細胞死亡蛋白1 (PD1)；(iii) PDL1；(iv) LAG3；(v) B7-H3；(vi) B7-H4；及(vii) TIM3。CTLA4抑制劑伊匹單抗(ipilimumab)已經美國食品藥物管理局(the United States Food and Drug Administration)核准用於治療黑色素瘤。
可以作為組合療法之一部分用於治療癌症的又其他藥劑為靶向非檢查點標靶的單株抗體藥劑(例如赫賽汀(herceptin))及非細胞毒性劑(例如酪胺酸激酶抑制劑)。
抗癌劑之又其他類別包括例如：(i)選自以下之抑制劑：ALK抑制劑、ATR抑制劑、A2A拮抗劑、鹼基切除修復抑制劑、Bcr-Abl酪胺酸激酶抑制劑、布魯頓氏酪胺酸激酶(Bruton's Tyrosine Kinase)抑制劑、CDC7抑制劑、CHK1抑制劑、週期蛋白依賴型激酶抑制劑、DNA-PK抑制劑、DNA-PK與mTOR之抑制劑、DNMT1抑制劑、DNMT1抑制劑 + 2-氯-去氧腺苷、HDAC抑制劑、豪豬信號傳導路徑抑制劑、IDO抑制劑、JAK抑制劑、mTOR抑制劑、MEK抑制劑、MELK抑制劑、MTH1抑制劑、PARP抑制劑、磷酸肌醇3-激酶抑制劑、PARP1與DHODH之抑制劑、蛋白酶體抑制劑、拓樸異構酶-II抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、VEGFR抑制劑及WEE1抑制劑；(ii) OX40、CD137、CD40、GITR、CD27、HVEM、TNFRSF25或ICOS之促效劑；及(iii)選自IL-12、IL-15、GM-CSF及G-CSF之細胞介素。
本發明的蛋白質亦可用作手術移除原發病灶的佐劑。
可選擇多特異性結合蛋白及其他治療劑之量及相對投藥時序以便達成所需的組合治療效果。舉例而言，當向需要此類投藥之患者投與組合療法時，組合或包含治療劑之醫藥組合物或組合物中的治療劑可以任何次序(諸如依序、並行、一起、同時及其類似者)投與。此外，舉例而言，可以在其他治療劑發揮其預防或治療效果的時間期間投與多特異性結合蛋白，或反之亦然。
V. 醫藥組合物
本發明的特徵亦為含有治療有效量之本文所述蛋白質的醫藥組合物。組合物可經調配以用於多種藥物遞送系統。為了正確調配，組合物中亦可包括一或多種生理學上可接受之賦形劑或載劑。適用於本發明之調配物見於Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 第17版, 1985。關於藥物遞送方法之簡短評述，參見例如Langer (Science 249:1527-1533, 1990)。
在一個態樣中，本發明提供蛋白質調配物，其含有本文述之CD33結合位點及醫藥學上可接受之載劑。
在某些實施例中，醫藥組合物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及具有與SEQ ID NO:2之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:3之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:4之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:5之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:6之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:7之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:8之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及具有胺基酸序列與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:14之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:18之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。在某些實施例中，調配物包括一種含有抗原結合位點的蛋白質，該抗原結合位點具有胺基酸序列與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之重鏈可變域，及胺基酸序列與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致之輕鏈可變域。
組合物可經調配以用於多種藥物遞送系統。為了正確調配，組合物中可包括一或多種生理學上可接受之賦形劑或載劑。適用於本發明之調配物見於Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 第17版, 1985。關於藥物遞送方法之簡短評述，參見例如Langer (Science 249:1527-1533, 1990)。
舉例而言，本發明可以含水醫藥調配物存在，該醫藥調配物在形成調配物之緩衝溶液中包括治療有效量之蛋白質。水性載劑可以包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝鹽水)、無菌鹽水溶液、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。在某些實施例中，製備在pH緩衝溶液中包括本文所揭示之蛋白質的水性調配物。製劑之pH典型地在3與11之間，更佳在5與9之間或在6與8之間，且最佳在7與8之間，諸如7至7.5。亦希望上述pH之中間範圍為本發明之一部分。舉例而言，希望包括使用任何上述值之組合作為上限及/或下限之值範圍。將pH控制在此範圍內之緩衝劑之實例包括乙酸鹽(例如乙酸鈉)、丁二酸鹽(諸如丁二酸鈉)、葡糖酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽及其他有機酸緩衝劑。在某些實施例中，緩衝系統包括單水合檸檬酸、檸檬酸鈉、二水合磷酸二鈉及/或二水合磷酸二氫鈉。在某些實施例中，緩衝系統包括約1.3 mg/mL檸檬酸(例如1.305 mg/mL)、約0.3 mg/mL檸檬酸鈉(例如0.305 mg/mL)、約1.5 mg/mL二水合磷酸氫二鈉(例如1.53 mg/mL)、約0.9 mg/mL二水合磷酸二氫鈉(例如0.86)及約6.2 mg/mL氯化鈉(例如6.165 mg/mL)。在某些實施例中，緩衝系統包括1至1.5 mg/mL檸檬酸、0.25至0.5 mg/mL檸檬酸鈉、1.25至1.75 mg/mL二水合磷酸氫二鈉、0.7至1.1 mg/mL二水合磷酸二氫鈉及6.0至6.4 mg/mL氯化鈉。液體調配物之pH可藉由添加醫藥學上可接受之酸及/或鹼來設定。在某些實施例中，醫藥學上可接受之酸可為鹽酸。在某些實施例中，鹼可為氫氧化鈉。
在一些實施例中，調配物包括水性載劑，其為醫藥學上可接受的(對於投與人類而言安全且無毒)且適用於製備液體調配物。說明性載劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝鹽水)、無菌鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
調配物中亦可包括充當張力劑且可以使抗體穩定的多元醇。添加至調配物中之多元醇的量可以根據調配物之所需等張性而改變。在某些實施例中，水性調配物可具有等張性。多元醇添加量亦可根據多元醇之分子量來改變。舉例而言，相較於二醣(諸如海藻糖)，可以降低單醣(例如甘露糖醇)的添加量。在某些實施例中，可以作為張力劑用於調配物中之多元醇為甘露糖醇。在某些實施例中，甘露糖醇濃度可為約5至約20 mg/mL。在某些實施例中，甘露糖醇濃度可為約7.5至15 mg/mL。在某些實施例中，甘露糖醇濃度可為約10-14 mg/mL。在某些實施例中，甘露糖醇濃度可為約12 mg/mL。在某些實施例中，調配物中可以包括多元醇山梨糖醇。
亦可將洗滌劑或界面活性劑添加至調配物中。例示性洗滌劑包括非離子型洗滌劑，諸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(poloxamers)(例如泊洛沙姆188)。洗滌劑添加量使得其減少所調配之抗體聚集且/或最小化微粒在調配物中之形成且/或減少吸附。在某些實施例中，調配物可以包括界面活性劑聚山梨醇酯。在某些實施例中，調配物可以含有洗滌劑聚山梨醇酯80或Tween 80。Tween 80為用於描述聚氧化乙烯(20)去水山梨糖醇單油酸酯的術語(參見Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Cantor Verlag Aulendorf編, 第4版, 1996)。在某些實施例中，調配物可以含有約0.1 mg/mL與約10 mg/mL之間，或約0.5 mg/mL與約5 mg/mL之間的聚山梨醇酯80。在某些實施例中，調配物中可添加約0.1%聚山梨醇酯80。
在某些實施例中，本發明之液體調配物可以與穩定含量之糖組合製備為10 mg/mL濃度溶液。在某些實施例中，液體調配物可以在水性載劑中製備。在某些實施例中，穩定劑可以不大於可能引起靜脈內投藥非所需或不適合之黏度的量添加。在某些實施例中，糖可為雙醣，例如蔗糖。在某些實施例中，液體調配物亦可包括緩衝劑、界面活性劑及防腐劑中之一或多者，將其添加至本文調配物中以減少細菌活動。防腐劑之添加可例如促進多次使用(多劑量)調配物之生產。
在一些實施例中，本發明提供存放期延長的調配物，其包括本發明蛋白質與以下之組合：甘露糖醇、單水合檸檬酸、檸檬酸鈉、二水合磷酸二鈉、二水合磷酸二氫鈉、氯化鈉、聚山梨醇酯80、水及氫氧化鈉。
去醯胺化為肽及蛋白質在醱酵、收集/細胞澄清、純化、藥物物質/藥品儲存期間及在樣品分析期間可能產生的常見產物變異體。去醯胺化為蛋白質損失NH3，從而形成可以經歷水解的丁二醯亞胺中間物。丁二醯亞胺中間物引起親本肽減少17 u質量。隨後水解，引起18 u質量增加。丁二醯亞胺中間物由於在水性條件下不穩定而難以分離。因此，當增加1 u質量時，去醯胺化典型地為可偵測的。天冬醯胺之去醯胺化產生天冬胺酸或異天冬胺酸。影響去醯胺速率之參數包括pH、溫度、溶劑介電常數、離子強度、初始序列、局部多肽構形及三級結構。與肽鏈中之Asn相鄰之胺基酸殘基影響去醯胺速率。蛋白質序列中繼Asn之後的Gly及Ser使得對去醯胺之敏感性更高。在某些實施例中，本發明之液體調配物可以在防止蛋白質產物去胺基的pH及濕度條件下保存。
在一些實施例中，調配物為凍乾調配物。在某些實施例中，調配物經冷凍乾燥(凍乾)且包含於約12-60個小瓶中。在某些實施例中，調配物經冷凍乾燥且可在一個小瓶中含有45 mg冷凍乾燥調配物。在某些實施例中，在一個小瓶中含有約40 mg至約100 mg冷凍乾燥調配物。在某些實施例中，將來自12、27或45個小瓶之冷凍乾燥調配物合併以獲得含有治療劑量之蛋白質的靜脈內藥物調配物。調配物可為液體調配物。在一些實施例中，液體調配物作為約250 mg/小瓶至約1000 mg/小瓶儲存。在某些實施例中，液體調配物作為約600 mg/小瓶儲存。在某些實施例中，液體調配物作為約250 mg/小瓶儲存。
在一些實施例中，凍乾調配物包括本文所述之蛋白質及凍乾保護劑。凍乾保護劑可為糖類，例如雙醣。在某些實施例中，凍乾保護劑可為蔗糖或麥芽糖。凍乾調配物亦可包括緩衝劑、界面活性劑、增積劑及/或防腐劑中之一或多者。適用於穩定凍乾藥品之蔗糖或麥芽糖的量可為至少1:2蛋白質與蔗糖或麥芽糖之重量比。在某些實施例中，蛋白質與蔗糖或麥芽糖重量比可為1:2至1:5。
在某些實施例中，調配物在凍乾之前的pH可藉由添加醫藥學上可接受之酸及/或鹼來設定。在某些實施例中，醫藥學上可接受之酸可為鹽酸。在某些實施例中，醫藥學上可接受之鹼可為氫氧化鈉。在凍乾之前，含有本發明蛋白質之溶液之pH可調節在6至8之間。在某些實施例中，凍乾藥品之pH範圍可為7至8。
在某些實施例中，可以添加「增積劑」。「增積劑」為一種化合物，其使凍乾混合物的質量增加且促成凍乾濾餅之物理結構(例如促進基本上均一凍乾濾餅之產生，維持開放的孔隙結構)。說明性增積劑包括甘露糖醇、甘胺酸、聚乙二醇及山梨糖醇。本發明之凍乾調配物可以含有此類增積劑。
在某些實施例中，凍乾蛋白質產物係用水性載劑復原。本文所關注之水性載劑為醫藥學上可接受(例如對於投與人類而言安全且無毒)且適用於在凍乾之後製備液體調配物的水性載劑。說明性載劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝鹽水)、無菌鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。在某些實施例中，本發明之凍乾藥品係用無菌注射用水、USP (SWFI)或0.9%氯化鈉注射液USP復原。在復原期間，將凍乾粉末溶解於溶液中。在某些實施例中，本發明之凍乾蛋白質產物用約4.5 mL注射用水復原且用0.9%鹽水溶液(氯化鈉溶液)稀釋。
蛋白質組合物可以藉由習知滅菌技術滅菌，或可經無菌過濾。所得水溶液可以封裝以便按原樣使用，或凍乾，凍乾製劑在投與之前與無菌溶液合併。呈固體形式之所得組合物可以多個單次劑量單位封裝，各單位含有固定量之一或多種上述藥劑。呈固體形式之組合物亦可以靈活的數量封裝於容器中。
可改變本發明之醫藥組合物中活性成分之實際劑量水準以便獲得一定量之活性成分，該量之活性成分對於特定患者、組合物及投藥模式有效地達成所需治療反應，而對患者無毒。
對於各患者而言，特定劑量可為均一劑量，例如50-5000 mg蛋白質。或者，可以根據患者之大致體重或表面積定製患者的劑量。決定適當劑量之其他因素可以包括待治療或預防之疾病或病狀、疾病之嚴重程度、投藥途徑以及患者之年齡、性別及醫學病狀。熟習此項技術者依常規方式，尤其根據劑量資訊及本文所揭示之分析，進一步改進為確定適當治療劑量所必需的計算。亦可經由使用確定劑量的已知分析，結合使用適當的劑量-反應資料來確定劑量。可在監測疾病進展時調整個別患者的劑量。可以量測患者中之可靶向構築體或複合物之血液含量以瞭解是否需要調整劑量以達到或維持有效濃度。藥物基因組學可以用於確定何種可靶向構築體及/或複合物及其劑量最可能對指定的個體有效(Schmitz等人,Clinica. Chimica. Acta. 308: 43-53, 2001；Steimer等人,Clinica. Chimica. Acta. 308: 33-41, 2001)。
一般而言，基於體重的劑量為每公斤體重約0.01 μg至約100 mg，諸如每公斤體重約0.01 μg至約100 mg、每公斤體重約0.01 μg至約50 mg、每公斤體重約0.01 μg至約10 mg、每公斤體重約0.01 μg至約1 mg、每公斤體重約0.01 μg至約100 μg、每公斤體重約0.01 μg至約50 μg、每公斤體重約0.01 μg至約10 μg、每公斤體重約0.01 μg至約1 μg、每公斤體重約0.01 μg至約0.1 μg、每公斤體重約0.1 μg至約100 mg、每公斤體重約0.1 μg至約50 mg、每公斤體重約0.1 μg至約10 mg、每公斤體重約0.1 μg至約1 mg、每公斤體重約0.1 μg至約100 μg、每公斤體重約0.1 μg至約10 μg、每公斤體重約0.1 μg至約1 μg、每公斤體重約1 μg至約100 mg、每公斤體重約1 μg至約50 mg、每公斤體重約1 μg至約10 mg、每公斤體重約1 μg至約1 mg、每公斤體重約1 μg至約100 μg、每公斤體重約1 μg至約50 μg、每公斤體重約1 μg至約10 μg、每公斤體重約10 μg至約100 mg、每公斤體重約10 μg至約50 mg、每公斤體重約10 μg至約10 mg、每公斤體重約10 μg至約1 mg、每公斤體重約10 μg至約100 μg、每公斤體重約10 μg至約50 μg、每公斤體重約50 μg至約100 mg、每公斤體重約50 μg至約50 mg、每公斤體重約50 μg至約10 mg、每公斤體重約50 μg至約1 mg、每公斤體重約50 μg至約100 μg、每公斤體重約100 μg至約100 mg、每公斤體重約100 μg至約50 mg、每公斤體重約100 μg至約10 mg、每公斤體重約100 μg至約1 mg、每公斤體重約1 mg至約100 mg、每公斤體重約1 mg至約50 mg、每公斤體重約1 mg至約10 mg、每公斤體重約10 mg至約100 mg、每公斤體重約10 mg至約50 mg、每公斤體重約50 mg至約100 mg。劑量可以每日給與一次或多次、每週一次、每月一次或每年一次或甚至每2年至20年一次。一般熟習此項技術者可容易地基於體液或組織中之可靶向構築體或複合物之滯留時間及濃度量測值估算給藥之重複率。本發明之投藥可為靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮下、胸膜內、鞘內、腔內、經由導管灌注或直接病灶內注射。此可每天投與一或多次、每週一或多次、每月一或多次，及每年一或多次。
以上說明描述本發明之多個態樣及實施例。本專利申請案特別涵蓋態樣及實施例之所有組合及排列。
在通篇說明書中，在組合物描述為具有、包括或包含特定組分的情況下，或在製程及方法描述為具有、包括或包含特定步驟的情況下，另外預期存在基本上由所列組分組成或由所列組分組成的本發明組合物，且存在基本上由所列處理步驟組成或由所列處理步驟組成的根據本發明之製程及方法。
在其中稱一種元素或組分包括於所列元素或組分之清單中及/或選自所列元素或組分之清單的申請案中，應理解，該元素或組分可為所列元素或組分中之任一者，或該元素或組分可選自由所列元素或組分中之兩者或更多者組成之群。
此外，應理解，本文所述之組合物或方法中的元素及/或特徵可以多種方式組合而不背離本發明之精神及範疇，無論在本文中為明確或隱含的。舉例而言，除非上下文另外理解，否則當提及特定化合物時，該化合物可用於本發明組合物之各種實施例及/或本發明之方法中。換言之，在本申請案內，實施例已以使得申請案能夠得到簡明書寫及繪製的方式描述且描繪，但希望且應瞭解，可在不脫離本發明教示及本發明之情況下以各種方式組合或分離實施例。舉例而言，應瞭解，本文中所描述及描繪之所有特徵可適用於本文中所描述及描繪之本發明之所有態樣。
應理解，除非自上下文及用途另外理解，否則表述「……中之至少一者」個別地包括該表述之前的所述對象中之每一者及所述對象中之兩者或更多者之各種組合。除非自上下文另外理解，否則表述「及/或」結合三個或更多個所述對象時應理解為具有相同含義。
除非另外特定陳述或自上下文中理解，否則使用術語「包括(includes)」、「包括(including)」、「具有(have)」、「具有(has)」、「具有(having)」、「含有(contain)」、「含有(contains)」或「含有(containing)」，包括其文法等效物，通常應理解為開放端的及非限制性的，例如不排除其他未列元素或步驟。
在數量值之前使用術語「約」時，除非另外具體說明，否則本發明亦包括特定數量值本身。除非另外說明或推斷，否則如本文所用，術語「約」係指相對於標稱值之±10%偏差。
應理解步驟次序或用於執行某些行動之次序為非實質的，只要本發明仍可實施。此外，兩個或更多個步驟或行動可同時進行。
除非主張，否則本文中任何及所有實例或例示性語言(例如「諸如」或「包括」)的使用僅意欲更好地說明本發明且不對本發明之範疇造成限制。說明書中之語言不應理解為表示任何未主張之元素為實施本發明必不可少的。
實例
所述實例僅具說明性且不希望以任何方式限制本發明之範疇或內容。
實例 1. 對 CD33 之不同變異體的結合動力學及親和力 .
使用Biacore 8K儀器(GE Healthcare)、藉由表面電漿子共振來評估具有不同CD33變異體(人類CD33 ECD、獼猴CD33 ECD、人類CD33之V域、C域或人類CD33及所選CD33 SNP)之抗CD33抗體之一系列Fab片段的動力學及親和力。使用標準胺偶合化學方法將抗Fab抗體固著於CM5晶片上。使CD33 FAB以約100 RU之密度捕捉於抗Fab晶片上。將含有不同濃度之可溶性單體CD33或其結構域的溶液在37℃下以30 µl/min注射至所捕捉之FAB及對照表面上。藉由快速注射10 mM甘胺酸(pH 1.8)而使表面在各循環之間再生。為了獲得動力學速率常數，使用Biacore 8K評估軟體(GE Healthcare)將雙參考資料與1:1相互作用模型擬合。平衡結合常數KD 係藉由結合速率常數比率kd /ka 確定。
基於 Octet 平台的動力學及親和力分析
在Octet HTX上進行ForteBio親和力量測，大體如Estep等人, High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning.Mabs 5(2), 270-278 (2013)中所述。簡言之，藉由將IgG線上裝載於AHC感測器上來執行ForteBio親和力量測。使感測器離線在分析緩衝液中平衡30分鐘且接著線上監測60秒以確立基線。使裝載有IgG的感測器暴露於100 nM抗原3分鐘，且隨後轉移至分析緩衝液中維持3分鐘以量測解離速率。使用1:1結合模型分析所有動力學。結果展示於表11中。


表11. 藉由BLI量測人類CD33結合至IgG抗體之動力學參數。
實例 2. CD33 抗體以高親和力結合至人類 CD33 且 與獼猴 CD33 交叉反應 .
儘管人類與獼猴CD33之間存在相當高的同源性(ECD中為87%)，但大部分市售抗CD33抗體(例如林妥珠單抗(lintuzumab)、麥羅塔(mylotarg)等)缺乏與獼猴CD33之交叉反應性。圖2展示全長人類與獼猴CD33之比對，突顯ECD域中之初始序列的差異。
藉由Biacore分析來分析29個Fab片段與人類及獼猴CD33 ECD結合之親和力。29種抗體中有八種展示與獼猴CD33之交叉反應性。結合動力學參數提供於表12中。將資料與林妥珠單抗進行比較。若干種抗體展示的親和力為林妥珠單抗的＞100倍。
在37℃下藉由Biacore量測來自CD33單株抗體之Fab片段對人類CD33胞外域(ECD)的結合。ADI-10159之Biacore分佈展示於圖3A中；ADI-10177之Biacore分佈展示於圖3B中；ADI-11776之Biacore分佈展示於圖3C中；ADI-11801之Biacore分佈展示於圖3D中；ADI-11807之Biacore分佈展示於圖3E中；ADI-11809之Biacore分佈展示於圖3F中；ADI-11815之Biacore分佈展示於圖3G中；ADI-11819之Biacore分佈展示於圖3H中；ADI-11830之Biacore分佈展示於圖3I中；ADI-11835之Biacore分佈展示於圖3J中；且林妥珠單抗之Fab片段的Biacore分佈展示於圖3K中。
在37℃下藉由Biacore量測來自CD33單株抗體之Fab片段對獼猴CD33 ECD之結合。ADI-10159之Biacore分佈展示於圖4A中；ADI-10177之Biacore分佈展示於圖4B中；ADI-11776之Biacore分佈展示於圖4C中；ADI11807之Biacore分佈展示於圖4D中；ADI-11809之Biacore分佈展示於圖4E中；ADI-11819之Biacore分佈展示於圖4F中；ADI-11830之Biacore分佈展示於圖4G中；且ADI-11835之Biacore分佈展示於圖4H中。
在37℃下藉由Biacore量測來自CD33單株抗體之Fab片段對人類CD33之V域及C域的結合。圖5A-5J表示對V域的結合；圖K-T表示對C域的結合。圖5A與5K均為ADI-10159之Biacore分佈；圖5B與5L均為ADI-10177之Biacore分佈；圖5C與5M均為ADI-11776之Biacore分佈；圖5D與5N均為ADI-11801之Biacore分佈；圖5E與5O均為ADI-11807之Biacore分佈；圖5F與5P均為ADI-11809之Biacore分佈；圖5G與5Q均為ADI-11815之Biacore分佈；圖5H與5R均為ADI-11819之Biacore分佈；圖5I與5S均為ADI-11830之Biacore分佈；且圖5J與5T為ADI-11835之Biacore分佈。
表12.人類CD33 ECD及獼猴CD33 ECD結合至Fab之動力學參數，如在37℃下藉由SPR量測。在100 nM之最高濃度下，不結合定義為缺乏信號。
個別結構域對 CD33 之結合界面的定位
對各種CD33抗體之Fab片段之間對CD33的結合界面進行定位。圖5A-5T展示不同CD33抗體之Fab片段對人類CD33之個別結構域(V域及C域)的結合。對於所測試之任何抗體而言，未觀測到對C域之結合。ADI-11815不結合至V或C域，表明其需要獨特構形抗原決定基。
表13展示結合至人類CD33之完整ECD與V域之動力學之間的比較。ADI-10159、ADI-11176、ADI-11807、ADI-11830、ADI-11835、ADI-11801、ADI-10155、ADI-11802、ADI-11825、ADI-11826、ADI-11828及ADI-11839展示類似動力學，表明此等抗體之抗原決定基完全位於V域中。觀測到ADI-10177、ADI-11809、ADI-11819、ADI-10157、ADI-10158及ADI-10164對V域之結合減少，表明此等抗體結合至部分位於V域中之構形抗原決定基。
亦量測ADI-10152、ADI-10154、ADI-10155、ADI-10157、ADI-10158、ADI-10160、ADI-10161、ADI-10163、ADI-10164、ADI-10165、ADI-10167、ADI-10168、ADI-10173、ADI-11802、ADI-11812、ADI-11825、ADI-11826、ADI-11828及ADI-11839結合至人類CD33之C域的動力學。此等抗體中無一者結合人類CD33之C域。
表13.在37℃下對FAB與人類CD33之重組全長ECD及V域之結合進行的Biacore分析。星號表示抗體結合至部分位於V域中的構形抗原決定基。
抗體不依賴於其糖基化狀態來識別 CD33 。
分析抗CD33抗體識別糖基化CD33之能力。表14表明抗體不依賴於其糖基化狀態來識別V域。人類CD33的位於V域中之2個糖基化位點被嚴重糖基化。不同細胞中之CD33糖基化水準的差異已報導於文獻中。糖基化可以潛在地干擾抗體對標靶的結合。在一些樣品中，在測試之前，藉由N糖苷肽酶使V域發生去糖基化。藉由SDS-PAGE與MS之轉換來證實去糖基化狀態。除ADI-10163、ADI-10165、ADI-10167及ADI-10173之外，表14中所測試的所有抗體結合至去糖基化V CD33，類似於完全糖基化型式。
表14. 在37℃下對FAB結合至完全糖基化V域相對於去糖基化V域進行的Biacore分析。
CD33 抗體結合至 CD33 之 R69G SNP 。
分析抗CD33抗體識別CD33中之R69G突變的能力。儘管CD33之若干SNP已有描述，但R69G特別顯著，存在於39-42%群體中。表15表明抗體結合至含有R69G突變的人類CD33。
表15. 對FAB結合至CD33 R69G進行的Biacore分析。
CD33 抗體結合至 CD33 之 S128N SNP
分析抗CD33抗體識別CD33中之S128N突變的能力。表16表明抗體結合至含有S128N突變的人類CD33。S128N SNP使ADI-10152、ADI-10154、ADI-10157、ADI-10158、ADI-10163、ADI-10164、ADI-10165、ADI-10167、ADI-10168及ADI-10173對人類CD33的結合親和力減弱。


表16. 對FAB結合至CD33 S128N進行的Biacore分析。
ADI-11815 識別獨特的構形抗原決定基。
分析ADI-11815之CD33結合域的結合抗原決定基。圖6及表17展現ADI-11815具有獨特的構形抗原決定基。此抗體結合至人類CD33之全長ECD，但不結合至個別結構域且與林妥珠單抗不發生交叉阻斷。


表17. ADI-11815 Fab結合至人類CD33之不同結構域及SNP R69G的動力學參數。
ADI-11801 結合至包括 R69 的 獨特抗原決定基。
分析CD33結合域(包括ADI-11815)的結合抗原決定基。圖7及表18展現ADI-11801所識別之CD33上的抗原決定基。R69G突變使其對人類CD33 ECD的結合消除。
表18. ADI-11801 Fab結合至CD33及SNP R69G之不同結構域的動力學。
實例 3 ： 評估 TriNKET 對表現人類 NKG2D 之 細胞的結合
分析包括NKG2D結合域及CD33結合域之TriNKET結合至NKG2D的能力。經人類NKG2D轉導之EL4細胞及人類KHYG-1細胞用於測試對表現人類NKG2D之細胞的結合。將TriNKET稀釋至最高濃度，且接著連續稀釋。利用mAb或TriNKET稀釋將細胞染色，且使用螢光團結合的抗人類IgG二次抗體偵測TriNKET或mAb的結合。藉由流式細胞術分析細胞，使結合MFI相對於二次抗體對照標準化以獲得相對於背景值的倍數。
圖10A-10B展示靶向CD33之TriNKET對EL4 (頂圖)或KHYG-1 (底圖)細胞上所表現之人類NKG2D的結合。EL4-hNKG2D細胞與KHYG-1細胞上的FOB結合信號相似，亦維持各純系之間對該兩種細胞株之結合的評級。圖10A展示靶向CD33之TriNKET對EL4細胞上所表現之人類NKG2D的結合。圖10B展示靶向CD33之TriNKET對KHYG-1細胞表現之人類NKG2D的結合。EL4-hNKG2D細胞與KHYG-1細胞上的FOB結合信號相似，亦維持各純系之間對該兩種細胞株之結合的評級。
實例 4 ： 評估 TriNKET 或 mAb 與細胞表現之人類癌症抗原的結合
分析包括NKG2D結合域及CD33結合域之TriNKET結合至CD33的能力。利用人類AML細胞株Molm-13評估單株抗體對細胞表面上所表現之CD33的結合。將mAb稀釋至2 µg/mL，且使用mAb稀釋液對細胞進行染色。使用螢光團結合之抗人類IgG二次抗體偵測結合之抗體。藉由流式細胞術分析細胞，比較對細胞所表現之CD33的結合與同型染色及未染色的細胞群。
利用表現CD33的人類癌細胞株評估來源於靶向NKG2D之不同純系之TriNKET的腫瘤抗原結合。利用人類AML細胞株Molm-13評估TriNKET對表現CD33之細胞的結合。將TriNKET稀釋，且與相應的細胞一起培育。使用螢光團結合的抗人類IgG二次抗體偵測TriNKET的結合。藉由流式細胞術分析細胞，使針對細胞所表現之CD33的結合MFI相對於二次抗體對照標準化，以獲得相對於背景值的倍數。
測試CD33 TriNKET結合Molm-13細胞上所表現之CD33的能力。圖8展示靶向CD33之TriNKET對Molm的結合，展示六種抗CD33抗體對Molm-13細胞上所表現之CD33的結合MFI。所有六種抗體結合至細胞表現之CD33。相較於林妥珠單抗，六種抗體中有五種展示更高的MFI結合信號。
測試CD33 TriNKET誘導休眠之NK細胞介導殺死Molm-13 AML細胞的能力。將靶向CD33之四種不同結構域聯合靶向NKG2D之五種結構域使用以製備總共20種不同TriNKET。不論TriNKET中使用靶向NKG2D之結構域，靶向CD33之單一結構域對CD33的結合係保守的。
實例 5 ： TriNKET 或 mAb 內化之評估
分析TriNKET在結合至細胞表面上之CD33之後的內化。利用人類AML細胞株Molm-13評估與細胞表面上所表現之CD33結合之單株抗體的內化。將單株抗體稀釋至2 µg/mL，且使用mAb稀釋液對細胞進行染色。CD33樣品之表面染色分離之後，將一半樣品在37℃下置放隔夜以促進內化，對於另一半樣品，則使用螢光團結合之抗人類IgG二次抗體偵測所結合的抗體。用二次抗體染色之後固定細胞，且在4℃下儲存隔夜以便次日分析。在37℃下經歷24小時之後，自培育箱中移出樣品，且使用螢光團結合之抗人類IgG二次抗體偵測細胞表面上之結合抗體。將樣品固定且在同一天分析所有樣品。抗體內化如下計算：內化% = (1-(樣品MFI 24小時/基線MFI))*100%。
圖9展示24小時之後與Molm-13細胞表面結合之抗CD33抗體的內化。所有抗CD33抗體在24小時之後展示類似的內化。林妥珠單抗展示的內化稍微高於其他抗CD33抗體。
實例 6 ： TriNKET 活化初始 NK 細胞
分析包括NKG2D結合域及CD33結合域之TriNKET活化初始NK細胞的能力。使用密度梯度離心自人類周邊血液白血球層中分離出PBMC。洗滌經分離之PBMC且製備用於NK細胞分離。利用磁珠負向選擇技術分離出NK細胞，經分離之NK細胞純度典型地＞90% CD3-CD56+。經分離之NK細胞在含有100 ng/mL IL-2之培養基中培養，用於活化或在細胞介素不存在下休眠隔夜。24-48小時後使用IL-2活化的NK細胞；休眠的NK細胞在純化之後的當天一直使用。
自培養物收集表現所關注癌症標靶之人類癌細胞株，且將細胞調節至2x106 個/毫升。靶向所關注癌症標靶之單株抗體或TriNKET於培養基中稀釋。自培養物收集休眠及/或活化之NK細胞，洗滌細胞且以2x106 個/毫升再懸浮於培養基中。將IL-2及螢光團結合的抗CD107a添加至NK細胞中用於活化培養。在培養基中稀釋布雷菲爾德菌素-A (Brefeldin-A)及莫能菌素(monensin)，以阻斷蛋白質自細胞輸出，用於細胞內細胞介素染色。向96孔盤中添加50 µl腫瘤標靶、mAb/TriNKET、BFA/莫能菌素及NK細胞，總培養體積為200 µl。製備樣品供FACS分析之前，將盤培養4小時。
活化培養4小時之後，製備細胞以便使用螢光團結合的抗CD3、CD56及IFNγ抗體、藉由流式細胞術進行分析。對CD3-CD56+群體中的CD107a及IFNγ染色進行分析，以評估NK細胞活化。
圖12展示TriNKET介導與表現CD33之THP-1 AML細胞共培養之休眠人類NK細胞的活化。利用IFNγ產生及CD107a去顆粒作為活化標記來評估人類NK細胞活化。所有TriNKET及單株抗體均活化人類NK細胞高於同型對照。觀測到四種不同抗CD33抗體存在類似活性。TriNKET活性視靶向NKG2D的純系而定，一些純系提供的TriNKET介導之活化優於其他純系。NKG2D純系提供與抗CD33靶向結構域中之每一者類似的活性。
實例 7 ：初始人類 NK 細胞的細胞毒性分析
分析包括NKG2D結合域及CD33結合域之TriNKET誘導NK細胞之細胞毒性對抗表現CD33之細胞的能力。使用密度梯度離心自人類周邊血液白血球層分離出PBMC。洗滌經分離之PBMC且製備用於NK細胞分離。利用磁珠負向選擇技術分離出NK細胞，經分離之NK細胞純度典型地＞90% CD3-CD56+。經分離之NK細胞在含有100 ng/mL IL-2之培養基中培養，或在細胞介素不存在下休眠隔夜。IL-2活化或休眠的NK細胞在次日的細胞毒性分析中使用。
使KHYG-1細胞在具有10 ng/mL IL-2之10% HI-FBS-RPMI-1640中維持。作為效應細胞在殺死分析中使用的前一天，自培養物中收集KHYG-1細胞，且將細胞自含有IL-2的培養基中洗滌。洗滌之後，將KHYG-1細胞再懸浮於中10% HI-FBS-RPMI-1640中，且在細胞介素不存在下休眠隔夜。
DELFIA 細胞毒性分析：
自培養物收集表現所關注標靶之人類癌細胞株，用HBS洗滌細胞，且以106 /mL再懸浮於生長培養基中以便用BATDA試劑(Perkin Elmer AD0116)標記。遵循製造商說明書來標記靶細胞。標記之後，用HBS洗滌細胞3次，且以0.5-1.0×105 /mL再懸浮於培養基中。為製備背景孔，將經標記細胞之等分試樣置於一旁，且將細胞自培養基中離心出來。小心地將100 µl培養基添加至三重複孔中以避免擾亂集結之細胞。將100 µl經BATDA標記的細胞添加至96孔盤之各孔中。保存自靶細胞自發釋放的孔，且藉由添加1% Triton-X製備靶細胞最大溶解的孔。在培養基中稀釋針對所關注腫瘤標靶之單株抗體或TriNKET且向各孔中添加50 µl經稀釋之mAb或TriNKET。自培養物收集休眠及/或活化之NK細胞，洗滌細胞且以105 -2.0x106 /mL再懸浮於培養基中，此視所需E:T比率而定。向培養盤之各孔中添加50 µl NK細胞以產生總共200 µl培養體積。培養盤在37℃及5% CO2下培育2-3小時，隨後進行分析。
培養2至3小時之後，自培育箱中移出培養盤且藉由在200 g下離心5分鐘使細胞集結。將20 µl培養上清液轉移至製造商提供之潔淨微量培養盤中，且向各孔中添加200 µl室溫銪溶液。將培養盤避光且在培養盤振盪器上以250 rpm培育15分鐘。使用Victor 3或SpectraMax i3X儀器讀盤。如下計算特異性溶解%：特異性溶解% = ((實驗釋放-自發釋放)/(最大釋放-自發釋放))*100%。
圖13及圖14展示靶向CD33之TriNKET介導人類NK細胞殺死Molm-13 (圖13)及THP-1 (圖14) AML靶細胞。分析靶向CD33之TriNKET介導人類NK細胞殺死Molm-13 AML靶細胞(圖13)。休眠的NK效應細胞聯合Molm-13靶細胞使用。活化的人類NK效應細胞引起的背景殺死高於休眠的人類NK效應細胞。在NK效應細胞存在下，TriNKET能夠增加Molm-13 AML靶細胞之溶解。在休眠之人類NK細胞及活化之人類NK細胞存在下，且在Molm-13靶細胞存在下，觀測到各種TriNKET的活性類似。
分析靶向CD33之TriNKET介導人類NK細胞殺死THP-1 AML靶細胞。活化的人類NK效應細胞聯合THP-1細胞使用(圖14)，其引起的背景殺死高於休眠的人類NK效應細胞。在NK效應細胞存在下，TriNKET能夠增加THP-1 AML靶細胞之溶解。在休眠之人類NK細胞及活化之人類NK細胞存在下，且在THP-1靶細胞存在下，觀測到各種TriNKET的活性類似。
因此，在NK效應細胞存在下，TriNKET能夠增加Molm-13 (圖13)及THP-1 (圖14) AML靶細胞之溶解。在休眠之人類NK細胞及活化之人類NK細胞存在下，且在Molm-13 (圖13)及THP-1 (圖14)靶細胞存在下，觀測到各種TriNKET的活性類似。
圖15A、圖16及圖17A分別展示KHYG-1效應細胞殺死Molm-13 (圖15A)、EOL-1 (圖16)及THP-1 (圖17A)人類AML靶細胞。KHYG-1細胞經證明表現表面NKG2D，但不表現CD16。因此，TriNKET介導的殺死在此依賴於NKG2D介導的KHYG-1效應細胞活化。TriNKET能夠介導KHYG-1效應細胞殺死所有三種人類AML靶細胞株。類似地，TriNKET活性已在所有三種靶細胞株上得到證明。
亦測試TriNKET介導休眠之人類NK細胞產生的細胞毒性。圖15B及圖17B表明，TriNKET亦介導休眠之人類NK細胞的細胞毒性對抗Molm-13 (圖15B)及THP-1 (圖17B)人類AML細胞。圖15B表明TriNKET介導休眠之人類NK細胞殺死Molm-13人類AML細胞。在圖15B中，休眠的人類NK效應細胞(E)相對於標靶癌細胞(T)的比率(E:T)為10:1。E:T比率可以反映最大溶解%的差異。
TriNKET亦介導休眠之人類NK細胞殺死表現高親和力FcγRI的THP-1靶細胞。圖17B表明TriNKET介導休眠之人類NK細胞殺死THP-1人類AML細胞，其中E:T為5:1。
實例 8 ： 評估 TriNKET 對表現人類 NKG2D 之 細胞的結合
I07 mAb鑑別為對CD33具有高結合親和力的單株抗體。I07-F405L (I07之Fc變異體)的重鏈及輕鏈胺基酸序列提供於下文。I07-F405L mAb包括Fc CH3域中之位置405處 (依據EU編號)之Phe被Leu取代。Lys可以視情況包括與重鏈之C末端。
I07-F405L mAb 重鏈

I07-F405L mAb 輕鏈
A49-F3'-TriNKET-I07 (I07 mAb之TriNKET衍生物)描述於章節II-多特異性結合蛋白中。此TriNKET之胺基酸序列提供於SEQ ID NO:187、189及190中。
使用經人類NKG2D (EL4-hNKG2D)轉導的EL4細胞評估A49-F3'-TriNKET-I07結合至NKG2D的能力。簡言之，連續稀釋A49-F3'-TriNKET-I07及I07-F405L mAb。將EL4-hNKG2D細胞與經稀釋之TriNKET或mAb溶液一起培育。使用螢光團結合的抗人類IgG二次抗體偵測TriNKET或mAb對EL4細胞的結合。藉由流式細胞術分析細胞，且藉由將結合MFI相對於對照組MFI (其中細胞與單獨的二次抗體一起培育)標準化來計算相對於背景值的倍數。
如圖35中所示，I07-F405L mAb展示不結合至EL4-hNKG2D細胞。A49-F3'-TriNKET-I07展現弱結合至EL4-hNKG2D細胞，即使在100 µg/mL之高濃度下亦不會達到飽和。
實例 9 ： 評估 TriNKET 對表現人類 CD33 之 細胞的結合
使用表現CD33之人類癌細胞株評估A49-F3'-TriNKET-I07結合至CD33之能力。簡言之，表現CD33之人類AML細胞株Mv4-11及Molm-13與連續稀釋之A49-F3'-TriNKET-I07及I07-F405L mAb溶液一起培育。使用螢光團結合的抗人類IgG二次抗體偵測A49-F3'-TriNKET-I07或I07-F405L mAb對AML細胞的結合。藉由流式細胞術分析細胞，且藉由將結合MFI相對於對照組MFI (其中細胞與單獨的二次抗體一起培育)標準化來計算相對於背景值的倍數。
如圖36A及36B中所示，相較於I07-F405L mAb，A49-F3'-TriNKET-I07對Molm-13與Mv4-11細胞展現的結合效力均減小三至四倍。亦發現A49-F3'-TriNKET-I07結合至細胞的相對於背景之最大倍數高於I07-F405L mAb。
實例 10 ：評估 TriNKET 內化
使用在細胞表面上表現CD33之人類AML細胞株EOL-1及Molm-13評估A49-F3'-TriNKET-I07及I07-F405L mAb在結合至CD33後之內化。簡言之，將細胞與2 µg/mL A49-F3'-TriNKET-I07或I07-F405L mAb一起在室溫下培育20分鐘。接著將細胞樣品分成三個部分。將第一部分及第二部分在37℃下分別置放2小時及24小時，以允許抗體內化。接著將細胞與螢光團結合的抗人類IgG二次抗體一起培育，且加以固定用於流式細胞術分析。用於設定基線水準之細胞樣品第三部分與未經培育之螢光團結合之抗人類IgG二次抗體一起在37℃下培育。細胞在用二次抗體染色之後加以固定，且次日在4℃下儲存用於分析(當樣品的第一半即用時)。在同一天藉由流式細胞術分析結合至細胞表面之A49-F3'-TriNKET-I07及I07-F405L mAb之量。抗體內化如下計算：內化% = (1-(24小時樣品MFI/基線樣品MFI))×100%。
如圖37A及37B中所示，CD33接合之後的A49-F3'-TriNKET-I07及I07-F405L mAb內化在EOL-1及Molm-13細胞上隨時間增加。在兩種細胞中，I07-F405L mAb之內化比A49-F3'-TriNKET-I07更快且程度更大。
實例 11 ： 初始 NK 細胞被 TriNKET 活化
使用DELFIA細胞毒性分析來評估A49-F3'-TriNKET-I07誘發初始NK細胞之細胞毒性對抗人類AML細胞的能力。簡言之，使用密度梯度離心自人類周邊血液白血球層分離出PBMC。洗滌經分離之PBMC，且使用磁珠負向選擇技術分離出NK細胞。經分離之NK細胞之純度典型地為＞90% CD3- CD56+ 。分離之NK細胞在細胞介素不存在下休眠隔夜。
次日，自培養物收集人類AML細胞株Molm-13、THP-1及EOL-1。AML細胞用HBS洗滌，且遵循製造商說明書，以106 個細胞/毫升再懸浮於生長培養基中以便用BATDA試劑(Perkin Elmer AD0116)標記。標記之後，AML細胞用HBS洗滌三次，且以0.5-1.0×105 個細胞/毫升再懸浮於培養基中。將100 µl經BATDA標記的細胞添加至96孔盤之各孔中。
在培養基中稀釋所測試之TriNKET或mAb，且向各孔中添加50 µl經稀釋之TriNKET或mAb。自培養物收集休眠之NK細胞，洗滌且以105 -2.0×106 個細胞/毫升再懸浮於培養基中以獲得5:1之所需E:T比率。將50 µl NK細胞添加至培養盤之各孔中以在各孔中產生總共200 µl培養體積。培養盤在37℃與5% CO2 下培育2-3小時。
培養之後，自培育箱移出培養盤且藉由在200×g下離心5分鐘使細胞集結。將20 µl培養上清液轉移至製造商提供之潔淨微量培養盤中。使用來自單獨培育之經標記細胞的上清液來量測TDA之自發釋放。使用與1% Triton-X一起培育之經標記細胞的上清液量測靶細胞之最大溶解。培育2-3小時之前的經標記細胞上清液用於量測背景及用於品質控制目的。
將200 µl室溫銪溶液添加至含有培養物上清液之各孔中。將培養盤避光且在培養盤振盪器上以250 rpm培育15分鐘。使用Victor 3或SpectraMax i3X儀器量測螢光。
螢光水準表示靶細胞之溶解。特異性溶解%值如下計算：特異性溶解% = ((實驗釋放-自發釋放)/(最大釋放-自發釋放))×100%。
在此分析中測試A49-F3'-TriNKET-I07及若干種單株抗體。單株抗體包括I07-F405L mAb、I07-DE mAb、林妥珠單抗-GA及280-31-01(mut)-DE。I07-DE mAb為I07 mAb之變異體，在Fc中具有S239D及I332E取代以增強ADCC活性(以下序列中呈粗體加下劃線)。I07-DE重鏈之胺基酸序列展示於下文，C末端視情況具有Lys。
I07-DE mAb 重鏈
I07-DE mAb之輕鏈與I07-F405L mAb之輕鏈[SEQ ID NO:200]一致。
280-31-01(mut)-DE為WO2012045752中所揭示之抗體純系280-31-01(mut)之變異體，其中在Fc中具有S239D及I332E取代以增強ADCC活性(以下序列中呈粗體加下劃線)。280-31-01(mut)-DE重鏈及輕鏈之胺基酸序列展示於下文，視情況在重鏈之C末端具有Lys。
280-31-01(mut)-DE 重鏈

280-31-01(mut)-DE 輕鏈
CD16基因中之SNP可以產生人類CD16蛋白質之V158或F158變異體。與具有V158的CD16相比，已知具有F158之CD16使CD16對Fc的結合親和力減小，藉此減少抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)。因此，具有CD16-F158的NK細胞對CD16刺激的反應小於表現CD16-V158的NK細胞。實際上，如圖38A中所示，I07-F405L mAb僅引起NK細胞對Molm-13細胞產生低殺死水準，該等NK細胞僅表現低親和力CD16變異體(CD16F/ F )。相比之下，A49-F3'-TriNKET-I07介導更強的NK細胞殺死與更高的Molm-13細胞特異性溶解，此可能歸因於其額外的藉由NKG2D結合來接合NK細胞的能力。類似地，當與一個對偶基因(CD16V/F )中具有此SNP之NK細胞一起培育時，A49-F3'-TriNKET-I07在殺死EOL-1細胞方面展現比I07-F405L mAb更強的活性(圖38B)。
THP-1細胞表現可以高親和力結合至IgG1 Fc的FcγRI。與靶細胞競爭結合Fc可以進一步減少NK細胞殺死。因此，如圖38C及38D中所示，當THP-1細胞與CD16F/F NK細胞一起在I07-F405L或林妥珠單抗-GA mAb存在下培育時，觀測不到THP-1細胞之特異性溶解。即使I07-DE (I07之ADCC增強型變異體)亦未能誘發NK細胞的細胞毒性。在所測試的單株抗體中，僅280-31-01(mut)-DE (WO2012045752中所揭示之抗體純系280-31-01(mut)的ADCC增強型變異體)在高濃度下展現細胞殺死活性。值得注意的是，A49-F3'-TriNKET-I07介導更強的NK細胞殺死與更高的THP-1細胞特異性溶解，此可能歸因於其額外的藉由NKG2D結合來接合NK細胞之能力。
實例 12 ： 初始 CD8+ T 細胞被 TriNKET 活化
NKG2D表現於NK細胞及許多T細胞上，包括CD8+ T細胞。使用DELFIA細胞毒性分析來評估A49-F3'-TriNKET-I07誘發初始CD8+ T細胞之細胞毒性對抗人類AML細胞的能力。
簡言之，使用密度梯度離心自人類周邊血液白血球層分離出人類周邊血液單核細胞(PBMC)。分離之PBMC在37℃下用1 µg/mL伴刀豆球蛋白A (Concanavalin A，ConA)刺激18小時。接著移除ConA，且將PBMC與25個單位/毫升IL-2一起在37℃下培養4天。使用磁珠負向選擇技術純化CD8+ T細胞，接著在含有10 ng/mL IL-15的培養基中、在37℃下培養7-13天。
根據細胞標記物表徵如上產生的初始人類效應子CD8+ T細胞。細胞用螢光團結合的抗CD3、CD8、NKG2D及CD16抗體染色，且藉由流式細胞術分析。如圖39中所示，分離的CD8+ T細胞具有高純度，因為其中超過99%對於CD3、CD8及NKG2D表現呈陽性且對於CD16表現呈陰性。
為了評估A49-F3'-TriNKET-I07誘發初始CD8+ T細胞之細胞毒性的能力，自培養物中收集Molm-13細胞，洗滌且以106 個細胞/毫升再懸浮於生長培養基中。根據製造商說明書，用BATDA試劑(Perkin Elmer AD0116)標記細胞。標記之後，細胞用HBS洗滌三次，且以0.5×105 個細胞/毫升再懸浮於培養基中。將100 µl經BATDA標記的細胞添加至96孔盤之各孔中。將50 µl連續稀釋之單株抗體或TriNKET添加至各孔中。
自培養物中收集CD8+ 效應T細胞，洗滌且以5×106 個細胞/毫升再懸浮於培養基中。向培養盤之各孔中添加50 µl CD8+ T細胞以達到50:1之E:T比率及200 µl的總培養體積。培養盤在37℃及5% CO2 下培育3.5小時。培育之後，藉由在500×g下離心5分鐘使細胞集結。將20 µl培養上清液轉移至製造商提供之潔淨微量培養盤中。使用來自單獨培育之經標記細胞的上清液來量測TDA之自發釋放。使用與1% Triton-X一起培育之經標記細胞的上清液量測靶細胞之最大溶解。
將200 µl室溫銪溶液添加至各孔中。將培養盤避光且在培養盤振盪器上以250 rpm培育15分鐘。使用SpectraMax i3X儀器量測螢光。
螢光水準表示靶細胞之溶解。特異性溶解%值如下計算：特異性溶解% = ((實驗釋放-自發釋放)/(最大釋放-自發釋放))×100%。
如圖40A及40B中所示，A49-F3'-TriNKET-I07以劑量依賴性方式增強人類初始CD8+ T細胞之細胞毒性活性。A49-F3'-TriNKET-H76 (章節II-多特異性結合蛋白中所述的蛋白質)(具有包含SEQ ID NO:197、189及190之序列的多肽)在該等條件下亦具有活性，但展現的效力小於A49-F3'-TriNKET-I07。單株抗體I07-F405L及非標靶TriNKET未展示此活性。
實例 13 ： TriNKET 對 單核球的結合
使用實例9中所述之方法，藉由流式細胞術評估血細胞上之CD33表現。簡言之，將人類全血與A49-F3'-TriNKET-I07或與螢光團結合之人類IgG1同型對照抗體一起培育。藉由流式細胞術偵測A49-F3'-TriNKET-I07或同型對照抗體之結合。為了評估特定類型之細胞上的結合程度，將結合至NK細胞、CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、B細胞及單核球之表面標記物的螢光團結合抗體添加至培育中，且當分析流式細胞術資料時，利用此等抗體存在或不存在結合來進行閘選。
如圖41A-41E中所示，A49-F3'-TriNKET-I07對NK細胞的結合弱於非標靶人類IgG1同型抗體對照物，而觀測到TriNKET對CD33+ 單核球存在強結合。
實例 14 ： TriNKET 介導 NK 細胞產生 長期的細胞毒性
NK細胞具有感測經轉型或應激之細胞且殺死其之天然能力，但不殺死健康細胞。吾等使用Molm-13 AML細胞及人類初始單核球作為靶細胞測試A49-F3'-TriNKET-I07保持天然選擇性NK細胞之細胞毒性的能力。Molm-13細胞獲自DSMZ細胞庫。自人類周邊血液中分離出人類初始單核球。簡言之，使用密度梯度離心自人類周邊血液白血球層分離出PBMC。藉由負向選擇來分離出單核球。藉由流式細胞術分析來證實人類初始單核球及Molm-13 AML細胞上的CD33表現(圖42A-42B)。
自人類周邊血液中分離出人類初始NK細胞。簡言之，使用密度梯度離心自人類周邊血液白血球層分離出PBMC。藉由負向選擇來分離出NK細胞。為了將共培養物中之靶細胞與NK細胞區分開來，用螢光標記靶細胞。特定言之，分離之單核球係根據製造商建議、用IncuCyte CytoLight Rapid活細胞標記試劑標記。Molm-13細胞用編碼核GFP的慢病毒感染，且利用嘌呤黴素選擇表現穩定的細胞。
分離之NK細胞與靶細胞在20 nM A49-F3'-TriNKET-I07存在下以10:1之E:T比率混合。共培養物中NK細胞之非特異性活化作為AML細胞殺死之陽性對照組並行進行。將混合物添加至Ibidi µ-載片上。使用IncuCyte S3儀器，每小時收集相位及綠色通道的時移影像，每個樣品3個影像。使用IncuCyte S3軟體分析影像。根據綠色螢光偵測活的靶細胞，且相同樣品在每個時間點的綠色細胞數目相對於0時的綠色細胞數目標準化。
如圖43A及43B中所示，Molm-13 AML細胞能夠在單獨NK細胞存在下增殖，但靶細胞的過度生長基本上被A49-F3'-TriNKET-I07抑制。相比之下，A49-F3'-TriNKET-I07在長期共培養中不介導人類NK細胞殺死正常單核球。A49-F3'-TriNKET-I07活性類似於PMA+離子黴素活性，其亦保持NK細胞之天然選擇性。此等結果表明A49-F3'-TriNKET-I07選擇性地損傷癌細胞，且潛在地具有寬治療窗。
以引用的方式併入
本文所提及之專利文件及科學論文中之每一者的全部揭示內容以引用之方式併入用於所有目的。
等效物
本發明可以不悖離其精神或基本特徵的其他特定形式來實施。因此，前述實施例應在所有方面中視為說明而非限制本文所述的本發明。因此，本發明之範疇由隨附申請專利範圍而非前述說明指定，且其中意欲涵蓋申請專利範圍之等效物之含義及範圍內的所有變化。
參考以下附圖可以更完全地理解本發明。
圖 1 展示人類CD33胞外域(ECD)之胞外域的結構圖。CD33 ECD含有兩個顯著的結構域：遠端V域及膜近端C域。配位體結合界面位於V域上。C域功能未知。CD33之ECD在很大程度上經糖基化，其中2個N連接糖基化位點位於V域中且3個N連接糖基化位點位於C域中。人類CD33之ECD含有若干個SNP，在42%患者中發現最顯著的突變R69G。SNP R69G位於V域中。
圖 2 展示全長人類及食蟹獼猴CD33之初級序列之比對(分別為SEQ ID NO:598及SEQ ID NO:599)。V域用藍色加下劃線，C域用綠色加下劃線。序列差異用紅色加框。
圖 3A-3K 展示結合至人類CD33 ECD之CD33單株抗體之Fab片段的SPR分佈，如在37℃下藉由Biacore所量測。各Fab片段包括本文所述之CD33結合純系。圖3A為ADI-10159之Biacore分佈；圖3B為ADI-10177之Biacore分佈；圖3C為ADI-11776之Biacore分佈；圖3D為ADI-11801之Biacore分佈；圖3E為ADI-11807之Biacore分佈；圖3F為ADI-11809之Biacore分佈；圖3G為ADI-11815之Biacore分佈；圖3H為ADI-11819之Biacore分佈；圖3I為ADI-11830之Biacore分佈；圖3J為ADI-11835之Biacore分佈；且圖3K為來自林妥珠單抗(Lintuzumab)之Fab片段的Biacore分佈。
圖 4A -4H 展示結合至食蟹獼猴CD33 ECD之CD33單株抗體之Fab片段的SPR分佈，如在37℃下藉由Biacore所量測。各Fab片段包括本文所述之CD33結合純系。圖4A為ADI-10159之Biacore分佈；圖4B為ADI-10177之Biacore分佈；圖4C為ADI-11776之Biacore分佈；圖4D為ADI-11807之Biacore分佈；圖4E為ADI-11809之Biacore分佈；圖4F為ADI-11819之Biacore分佈；圖4G為ADI-11830之Biacore分佈；且圖4H為ADI-11835之Biacore分佈。
圖 5A-5T 展示結合至人類CD33之V域及C域之CD33單株抗體之FAB的SPR分佈，如在37℃下所量測。各Fab片段包括本文所述之CD33結合純系。圖5A-5J表示對V域的結合；圖K-T表示對C域的結合。圖5A及5K為ADI-10159之Biacore分佈；圖5B及5L為ADI-10177之Biacore分佈；圖5C及5M為ADI-11776之Biacore分佈；圖5D及5N為ADI-11801之Biacore分佈；圖5E及5O為ADI-11807之Biacore分佈；圖5F及5P為ADI-11809之Biacore分佈；圖5G及5Q為ADI-11815之Biacore分佈；圖5H及5R為ADI-11819之Biacore分佈；圖5I及5S為ADI-11830之Biacore分佈；且圖5J及5T為ADI-11835之Biacore分佈。
圖 6A -6D 展示包含ADI-11815之Fab的SPR分佈，該ADI-11815結合至人類CD33及具有R69G點突變之人類CD33的不同結構域。圖 6A ：Fab對人類CD33 ECD的結合；圖 6B ：Fab對V域的結合；圖 6C ：Fab對C域的結合：圖 6D ：Fab對具有R69G之人類CD33的結合。
圖 7A -7D 展示包含ADI-11801之Fab的SPR分佈，該ADI-11801結合至人類CD33及具有R69G點突變之人類CD33的不同結構域。圖7A：人類CD33 ECD；圖7B：V域；圖7C：C域：圖7D：具有R69G之人類CD33。
圖 8 為展示包含CD33結合純系之單株抗體對Molm-13人類AML細胞上所表現之CD33之結合的條形圖。亦測試CD33抗體林妥珠單抗，且對平均螢光強度(MFI)作圖。六種抗體中有五種展示的針對CD33之結合信號高於林妥珠單抗。
圖 9 為展示24小時後Molm-13細胞對CD33抗體內化的條形圖。所有CD33抗體在24小時之後展示類似的內化。林妥珠單抗展示的內化稍微高於其他抗CD33抗體。
圖 10A-10B 展示靶向CD33之TriNKET對EL4-hNKG2D及KHYG-1細胞上所表現之人類NKG2D的結合。圖10A展示靶向CD33之TriNKET對EL4細胞上重組表現之人類NKG2D的結合。圖10B展示靶向CD33之TriNKET對KHYG-1細胞表現之人類NKG2D的結合。對於各TriNKET而言，信號相對於背景的倍數(FOB)在EL4-hNKG2D細胞與KHYG-1細胞上類似，且亦維持兩種細胞株之結合等級。
圖 11 展示靶向CD33之TriNKET對人類AML Molm-13細胞上所表現之CD33的結合。四種不同CD33結合純系聯合五種NKG2D結合純系使用以製備總共20種不同TriNKET。NKG2D結合域TriNKET不影響CD33結合純系對CD33之結合。
圖 12 為展示休眠之人類NK細胞與表現CD33之THP-1 AML細胞共培養時被靶向CD33之TriNKET活化的圖。
圖 13 為展示CD33 TriNKET誘導休眠之NK細胞介導Molm-13 AML細胞殺死的條形圖。
圖 14 為展示CD33 TriNKET誘導活化NK細胞介導THP-1細胞殺死的條形圖。
圖 15A 為展示TriNKET介導KHYG-1殺死Molm-13 AML細胞的線圖。圖 15B 為展示TriNKET介導休眠之人類NK細胞殺死Molm-13人類AML細胞的線圖。
圖 16 為展示TriNKET介導KHYG-1殺死EOL-1 AML細胞的線圖。
圖 17A 為展示TriNKET介導KHYG-1殺死THP-1細胞的線圖。圖 17B 為展示TriNKET介導休眠之人類NK細胞殺死THP-1人類AML細胞的線圖。
圖 18 為多特異性結合蛋白之圖示，該多特異性結合蛋白含有NKG2D結合域(右臂)、CD33結合域(左臂)，及結合至CD16的Fc域或其一部分。
圖 19 為多特異性結合蛋白之圖示，該結合蛋白包括NKG2D結合域或CD33結合域，其中任一者可呈scFv形式，及結合至CD16的Fc域或其一部分。
圖 20 為TriNKET之三功能單抗之圖示，其為維持IgG樣形狀之三官能雙特異性抗體。此嵌合體由兩個來源於兩種親本抗體、各具有一條輕鏈及一條重鏈的半抗體組成。
圖 21 為TriNKET之KiH共同輕鏈(LC)形式之圖示，該形式涉及臼包杵(KIH)技術。KiH為雜二聚體，其含有2個結合至標靶1及2之Fab及藉由雜二聚化突變穩定化的Fc。TriNKET之KiH形式可為雜二聚構築體，其具有2個結合至標靶1及標靶2的Fab，含有兩條不同重鏈及與兩條重鏈成對的共同輕鏈。
圖 22 為TriNKET之雙可變域免疫球蛋白(DVD-Ig™)形式的圖示，該形式為兩種單株抗體之靶結合域經由天然存在之柔性連接子的組合且產生四價IgG樣分子。DVD-Ig™為均二聚構築體，其中靶向抗原2之可變域與靶向抗原1之Fab可變域的N末端融合。構築體含有正常Fc。
圖 23 為TriNKET之正交Fab界面(Ortho-Fab)形式的圖示，其為雜二聚構築體，該構築體含有2個結合至標靶1及標靶2的Fab與Fc的融合。藉由正交界面確保LC-HC成對。藉由Fc中之突變確保雜二聚。
圖 24 為TrinKET之2合1 Ig形式的圖示。
圖 25 為TriNKET之ES形式的圖示，其為雜二聚構築體，其含有兩個結合至標靶1及標靶2的不同Fab與Fc的融合。藉由Fc中之靜電轉向突變確保雜二聚。
圖 26 為TriNKET之Fab臂交換形式的圖示：交換Fab臂的抗體，其藉由將重鏈及所連接輕鏈(半分子)與來自另一分子之重鏈-輕鏈對交換，從而產生雙特異性抗體。Fab臂交換形式(cFae)為雜二聚體，其含有2個結合至標靶1及2的Fab以及藉由雜二聚化突變穩定化的Fc。
圖 27 為TriNKET之SEED體形式的圖示，其為雜二聚體，其含有兩個結合至標靶1及2的Fab，以及藉由雜二聚化突變穩定化的Fc。
圖 28 為TriNKET之LuZ-Y形式的圖示，其中使用白胺酸拉鏈誘導兩個不同HC的雜二聚。LuZ-Y形式為雜二聚體，其含有兩個結合至標靶1及2的不同scFab與Fc的融合。
圖 29 為TriNKET之Cov-X體形式的圖示。
圖 30A-30B 表示TriNKET的ĸλ體形式，其為雜二聚構築體，其具有兩個不同Fab與藉由雜二聚突變穩定化之Fc的融合：靶向抗原1的Fab1含有κ LC，而靶向抗原2的第二Fab含有λ LC。圖30A為ĸλ體之一種形式的例示性圖示；圖30B為另一種ĸλ體的例示性圖示。
圖 31 為Oasc-Fab雜二聚構築體，其包括結合至標靶1的Fab及結合至標靶2的scFab與Fc的融合。藉由Fc中之突變確保雜二聚。
圖 32 為DuetMab，其為雜二聚構築體，其含有兩個結合至抗原1及2的不同Fab及藉由雜二聚突變穩定化的Fc。Fab 1及2含有確保輕鏈(LC)與重鏈(HC)正確成對的差異S-S橋鍵。
圖 33 為互換mAb，其為雜二聚構築體，其具有兩個結合至標靶1及2之不同Fab與藉由雜二聚穩定之Fc的融合。交換CL及CH1域與VH及VL域，例如CH1與VL線性融合，而CL與VH線性融合。
圖 34 為Fit-Ig，其為均二聚構築體，其中結合至抗原2的Fab與結合至抗原1的Fab之HC的N末端融合。構築體含有野生型Fc。
圖 35 為展示A49-F3'-TriNKET-I07及I07-F405L mAb對EL4細胞上所表現之細胞表面人類NKG2D之結合的圖。
圖 36A-36B 為展示A49-F3'-TriNKET-I07及I07-F405L mAb對CD33+ 人類AML細胞株Mv4-11 (圖36A)及Molm-13 (圖36B)之結合的圖。
圖 37A-37B 為展示A49-F3'-TriNKET-I07及I07-F405L mAb在與EOL-1細胞(圖37A)及Molm-13細胞(圖37B)一起培育之後發生內化的圖。
圖 38A-38D 為展示休眠之人類NK細胞在A49-F3'-TriNKET-I07及抗CD33單株抗體存在下使Molm-13 (圖38A)、EOL-1 (圖38B)及THP-1 (圖38C及38D)人類AML細胞發生特異性溶解的圖。
圖 39 為一系列流式細胞圖，其展示經分離之初級CD8+ T細胞上之CD3、CD8、NKG2D及CD16表現量。
圖 40A-40B 為展示經分離之初級CD8+ T細胞在A49-F3'-TriNKET-I07、A49-F3'-TriNKET-H76、非標靶TriNKET或I07-F405L mAb (圖中標示為I07)存在下使Molm-13細胞發生特異性溶解的圖。自供者1之PBMC中分離出圖40A中之初級CD8+ T細胞，且自供者2之PBMC中分離出圖40B中之初級CD8+ T細胞。點線表示在CD8+ T細胞在TriNKET或抗體不存在下使Molm-13細胞發生的特異性溶解。
圖 41A-41E 為直方圖，其展示A49-F3'-TriNKET-I07對人類全血中之NK細胞(圖41A)、CD8+ T細胞(圖41B)、CD4+ T細胞(圖41C)、B細胞(圖41D)及單核球(圖41E)的結合。未填充之點線表示A49-F3'-TriNKET-I07對細胞的結合；填充實線表示人類IgG1同型對照物對細胞的結合。
圖 42A-42B 為展示單核球上之CD33表現的圖。圖42A展示來自四位健康供者(深灰色)及Molm-13 (淺灰色)之單核球上的CD33表現。底部五列為來自經抗CD33抗體染色之細胞樣品的信號；頂部五列為來自經同型抗體染色之相同樣品的信號。圖42B展示在針對單核球進行負向選擇之前(淺灰色)及之後(深灰色)，來自相同供者之單核球上的CD33表現。
圖 43A-43B 為展示NK細胞在A49-F3'-TriNKET-I07存在下針對Molm-13 AML細胞及人類初級單核球之長期細胞毒性的圖。靶細胞增殖相對於在A49-F3'-TriNKET-I07或PMA + 離子黴素(ionomycin)存在下與NK細胞共培養的時間作圖。圖43A表示使用來自一位供者之NK細胞進行實驗的結果，且圖43B表示使用來自不同供者之NK細胞進行另一實驗的結果。
圖 44 說明一種三特異性抗體(TriNKET)，其含有結合CD33的scFv、靶向NKG2D的Fab，及結合CD16的雜二聚抗體恆定域。該抗體形式在本文中稱為F3'-TriNKET。
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Claims (197)

  1. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 9至少90%一致之胺基酸序列。
  2. 如請求項1之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 45表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 46表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 47表示之CDR3序列。
  3. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 1至少90%一致之胺基酸序列。
  4. 如請求項3之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 21表示之互補決定區1 (CDR1)序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 22表示之互補決定區2 (CDR2)序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 23表示之互補決定區3 (CDR3)序列。
  5. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 3至少90%一致之胺基酸序列。
  6. 如請求項5之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 27表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 28表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 29表示之CDR3序列。
  7. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 5至少90%一致之胺基酸序列。
  8. 如請求項7之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 33表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 34表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 35表示之CDR3序列。
  9. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 7至少90%一致之胺基酸序列。
  10. 如請求項9之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 39表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 40表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 41表示之CDR3序列。
  11. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 11至少90%一致之胺基酸序列。
  12. 如請求項11之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 51表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 52表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 53表示之CDR3序列。
  13. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 13至少90%一致之胺基酸序列。
  14. 如請求項13之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 57表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 58表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 59表示之CDR3序列。
  15. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 15至少90%一致之胺基酸序列。
  16. 如請求項15之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 63表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 64表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 65表示之CDR3序列。
  17. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 17至少90%一致之胺基酸序列。
  18. 如請求項17之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 69表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 70表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 71表示之CDR3序列。
  19. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 19至少90%一致之胺基酸序列。
  20. 如請求項19之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 75表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 76表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 77表示之CDR3序列。
  21. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 266至少90%一致之胺基酸序列。
  22. 如請求項21之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 528表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 305表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 529表示之CDR3序列。
  23. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 268至少90%一致之胺基酸序列。
  24. 如請求項23之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 530表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 311表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 531表示之CDR3序列。
  25. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 270至少90%一致之胺基酸序列。
  26. 如請求項25之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 532表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 317表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 533表示之CDR3序列。
  27. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 272至少90%一致之胺基酸序列。
  28. 如請求項27之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 534表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 323表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 535表示之CDR3序列。
  29. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 274至少90%一致之胺基酸序列。
  30. 如請求項29之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 536表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 329表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 537表示之CDR3序列。
  31. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 276至少90%一致之胺基酸序列。
  32. 如請求項31之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 538表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 335表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 539表示之CDR3序列。
  33. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 278至少90%一致之胺基酸序列。
  34. 如請求項33之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 540表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 341表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 541表示之CDR3序列。
  35. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 280至少90%一致之胺基酸序列。
  36. 如請求項35之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 542表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 347表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 543表示之CDR3序列。
  37. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 282至少90%一致之胺基酸序列。
  38. 如請求項37之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 544表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 353表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 545表示之CDR3序列。
  39. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 284至少90%一致之胺基酸序列。
  40. 如請求項39之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 546表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 359表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 547表示之CDR3序列。
  41. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 286至少90%一致之胺基酸序列。
  42. 如請求項41之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 548表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 365表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 549表示之CDR3序列。
  43. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 288至少90%一致之胺基酸序列。
  44. 如請求項43之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 550表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 371表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 551表示之CDR3序列。
  45. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 290至少90%一致之胺基酸序列。
  46. 如請求項45之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 552表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 377表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 553表示之CDR3序列。
  47. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 292至少90%一致之胺基酸序列。
  48. 如請求項47之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 554表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 383表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 555表示之CDR3序列。
  49. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 294至少90%一致之胺基酸序列。
  50. 如請求項49之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 556表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 389表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 557表示之CDR3序列。
  51. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 296至少90%一致之胺基酸序列。
  52. 如請求項51之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 558表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 395表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 559表示之CDR3序列。
  53. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 298至少90%一致之胺基酸序列。
  54. 如請求項53之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 560表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 401表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 561表示之CDR3序列。
  55. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 300至少90%一致之胺基酸序列。
  56. 如請求項55之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 562表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 407表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 563表示之CDR3序列。
  57. 一種抗體重鏈可變域，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 302至少90%一致之胺基酸序列。
  58. 如請求項57之抗體重鏈可變域，其中該胺基酸序列包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 564表示之CDR1序列；由胺基酸序列SEQ ID NO: 413表示之CDR2序列；及由胺基酸序列SEQ ID NO: 565表示之CDR3序列。
  59. 一種抗體重鏈，其包含如請求項1至58中任一項之抗體重鏈可變域及與抗體恆定區至少90%一致之胺基酸序列。
  60. 如請求項59之抗體重鏈，其中該抗體恆定區為包含鉸鏈、CH2及CH3域之人類IgG恆定區。
  61. 如請求項60之抗體重鏈，其中該抗體恆定區為進一步包含CH1域之人類IgG恆定區。
  62. 如請求項59至61中任一項之抗體重鏈，其中該抗體恆定區為IgG1恆定區。
  63. 如請求項62之抗體重鏈，其中該與抗體恆定區至少90%一致之胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由以下組成之群的位置不同：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411及K439。
  64. 如請求項63之抗體重鏈，其中該與抗體恆定區至少90%一致之胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於一或多個選自由以下組成之群的一或多個取代：Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、L351K、L351D、L351Y、S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、N390E、K392L、K392M、K392V、K392F、K392D、K392E、T394F、D399R、D399K、D399V、S400K、S400R、D401K、F405A、F405T、Y407A、Y407I、Y407V、K409F、K409W、K409D、T411D、T411E、K439D及K439E。
  65. 一種抗原結合位點，其包含如請求項1或2之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 10至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  66. 如請求項65之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 48一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 49一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 50一致之CDR3序列。
  67. 一種抗原結合位點，其包含如請求項3或4之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 2至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  68. 如請求項67之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 24一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 25一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 26一致之CDR3序列。
  69. 一種抗原結合位點，其包含如請求項5或6之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 4至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  70. 如請求項69之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 30一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 31一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 32一致之CDR3序列。
  71. 一種抗原結合位點，其包含如請求項7或8之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 6至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  72. 如請求項71之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 36一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 37一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 38一致之CDR3序列。
  73. 一種抗原結合位點，其包含如請求項9或10之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 8至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  74. 如請求項73之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:42一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:43一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:44一致之CDR3序列。
  75. 一種抗原結合位點，其包含如請求項11或12之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 12至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  76. 如請求項75之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 54一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 55一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 56一致之CDR3序列。
  77. 一種抗原結合位點，其包含如請求項13或14之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 14至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  78. 如請求項77之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:60一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:61一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:62一致之CDR3序列。
  79. 一種抗原結合位點，其包含如請求項15或16之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 16至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  80. 如請求項79之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 66一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 67一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 68一致之CDR3序列。
  81. 一種抗原結合位點，其包含如請求項17或18之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 18至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  82. 如請求項81之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 72一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 73一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 74一致之CDR3序列。
  83. 一種抗原結合位點，其包含如請求項19或20之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 20至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  84. 如請求項83之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 78一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 79一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 80一致之CDR3序列。
  85. 一種抗原結合位點，其包含如請求項21或22之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO: 267至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  86. 如請求項85之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 307一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 308一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 309一致之CDR3序列。
  87. 一種抗原結合位點，其包含如請求項23或24之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:269至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  88. 如請求項87之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 313一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 314一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 315一致之CDR3序列。
  89. 一種抗原結合位點，其包含如請求項25或26之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:271至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  90. 如請求項89之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 319一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 320一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 321一致之CDR3序列。
  91. 一種抗原結合位點，其包含如請求項27或28之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:273至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  92. 如請求項91之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 325一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 326一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 327一致之CDR3序列。
  93. 一種抗原結合位點，其包含如請求項29或30之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:275至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  94. 如請求項93之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:331一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:332一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:333一致之CDR3序列。
  95. 一種抗原結合位點，其包含如請求項31或32之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:277至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  96. 如請求項95之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 337一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 338一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 339一致之CDR3序列。
  97. 一種抗原結合位點，其包含如請求項33或34之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:279至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  98. 如請求項97之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:343一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:344一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:345一致之CDR3序列。
  99. 一種抗原結合位點，其包含如請求項35或36之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:281至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  100. 如請求項99之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 349一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 350一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 351一致之CDR3序列。
  101. 一種抗原結合位點，其包含如請求項37或38之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:283至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  102. 如請求項101之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:355一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:356一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:357一致之CDR3序列。
  103. 一種抗原結合位點，其包含如請求項39或40之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:285至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  104. 如請求項103之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:361一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:362一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:363一致之CDR3序列。
  105. 一種抗原結合位點，其包含如請求項41或42之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:287至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  106. 如請求項105之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:367一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:368一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:369一致之CDR3序列。
  107. 一種抗原結合位點，其包含如請求項43或44之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:289至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  108. 如請求項107之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:373一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:374一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:375一致之CDR3序列。
  109. 一種抗原結合位點，其包含如請求項45或46之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:291至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  110. 如請求項109之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:379一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:380一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:381一致之CDR3序列。
  111. 一種抗原結合位點，其包含如請求項47或48之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:293至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  112. 如請求項111之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:385一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:386一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:387一致之CDR3序列。
  113. 一種抗原結合位點，其包含如請求項49或50之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:295至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  114. 如請求項113之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:391一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:392一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:393一致之CDR3序列。
  115. 一種抗原結合位點，其包含如請求項51或52之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:297至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  116. 如請求項115之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:397一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:398一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:399一致之CDR3序列。
  117. 一種抗原結合位點，其包含如請求項53或54之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:299至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  118. 如請求項117之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:403一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:404一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:405一致之CDR3序列。
  119. 一種抗原結合位點，其包含如請求項55或56之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:301至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  120. 如請求項119之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO:409一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO:410一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO:411一致之CDR3序列。
  121. 一種抗原結合位點，其包含如請求項57或58之抗體重鏈可變域及包含與SEQ ID NO:303至少90%一致之胺基酸序列的抗體輕鏈可變域。
  122. 如請求項121之抗原結合位點，其中該輕鏈可變域包括與胺基酸序列SEQ ID NO: 415一致之CDR1序列、與胺基酸序列SEQ ID NO: 416一致之CDR2序列，及與胺基酸序列SEQ ID NO: 417一致之CDR3序列。
  123. 一種蛋白質，其包含如請求項65至122中任一項之抗原結合位點，其中該抗原結合位點結合至人類CD33。
  124. 如請求項123之蛋白質，其中該蛋白質進一步包含與結合至人類CD33之抗原結合位點相同或不同的第二抗原結合位點。
  125. 如請求項123或124之蛋白質，其進一步包含抗體恆定區。
  126. 如請求項125之蛋白質，其中該抗體恆定區能夠結合至CD16且包含兩條多肽鏈，各包含鉸鏈、CH2及CH3域。
  127. 如請求項125或126之蛋白質，其中該抗體恆定區之兩條多肽鏈各包含與人類IgG1恆定區至少90%一致之胺基酸序列。
  128. 如請求項127之蛋白質，該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由以下組成之群的位置不同：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411及K439；且該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由以下組成之群的位置不同：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、D401、F405、Y407、K409、T411及K439。
  129. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在位置T366不同，且其中該抗體恆定區中另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由T366、L368及Y407組成之群的位置不同。
  130. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由T366、L368及Y407組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在位置T366不同。
  131. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由以下組成之群的位置不同：E357、K360、Q362、S364、L368、K370、T394、D401、F405及T411，且其中該抗體恆定區中另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由以下組成之群的位置不同：Y349、E357、S364、L368、K370、T394、D401、F405及T411。
  132. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由以下組成之群的位置不同：Y349、E357、S364、L368、K370、T394、D401、F405及T411，且其中該抗體恆定區中另一多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由以下組成之群的位置不同：E357、K360、Q362、S364、L368、K370、T394、D401、F405及T411。
  133. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由L351、D399、S400及Y407組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由T366、N390、K392、K409及T411組成之群的位置不同。
  134. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由T366、N390、K392、K409及T411組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由L351、D399、S400及Y407組成之群的位置不同。
  135. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由Q347、Y349、K360及K409組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由Q347、E357、D399及F405組成之群的位置不同。
  136. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由Q347、E357、D399及F405組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由Y349、K360、Q347及K409組成之群的位置不同。
  137. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由K370、K392、K409及K439組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由D356、E357及D399組成之群的位置不同。
  138. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由D356、E357及D399組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由K370、K392、K409及K439組成之群的位置不同。
  139. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由L351、E356、T366及D399組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由Y349、L351、L368、K392及K409組成之群的位置不同。
  140. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由Y349、L351、L368、K392及K409組成之群的位置不同，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列在一或多個選自由L351、E356、T366及D399組成之群的位置不同。
  141. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於S354C取代，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於Y349C取代。
  142. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一個多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於Y349C取代，且其中該抗體恆定區之另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於S354C取代。
  143. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於K360E及K409W取代，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於O347R、D399V及F405T取代。
  144. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於O347R、D399V及F405T取代，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於K360E及K409W取代。
  145. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於T366W取代，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於T366S、T368A及Y407V取代。
  146. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於T366S、T368A及Y407V取代，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於T366W取代。
  147. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於T350V、L351Y、F405A及Y407V取代，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於T350V、T366L、K392L及T394W取代。
  148. 如請求項127之蛋白質，其中該抗體恆定區中之一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於T350V、T366L、K392L及T394W取代，且其中該抗體恆定區中另一條多肽鏈的胺基酸序列與IgG1恆定區之胺基酸序列不同在於T350V、L351Y、F405A及Y407V取代。
  149. 一種蛋白質，其包含抗原結合位點與以下抗體競爭結合至人類及食蟹獼猴(cynomolgus) CD33，該抗體包含分別具有以下胺基酸序列的抗體重鏈可變域及抗體輕鏈可變域：SEQ ID NO: 1及2；3及4；5及6；7及8；9及10；11及12；13及14；15及16；17及18；19及20；266及267；268及269；270及271；272及273；274及275；276及277；278及279；280及281；282及283；284及285；286及287；288及289；290及291；292及293；294及295；296及297；298及299；300及301；或302及303。
  150. 一種調配物，其包含如請求項123至149中任一項之蛋白質及醫藥學上可接受之載劑。
  151. 一種分離之編碼嵌合抗原受體(CAR)之核酸，其中該核酸包含編碼結合CD33之scFv的核酸序列，該scFv包含與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少90%一致的序列；編碼跨膜域之核酸序列；及編碼胞內信號傳導域之核酸序列。
  152. 一種分離之編碼嵌合抗原受體(CAR)之核酸，其中該核酸包含編碼結合CD33之scFv的核酸序列，該scFv包含與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少95%一致的序列；編碼跨膜域之核酸序列；及編碼胞內信號傳導域之核酸序列。
  153. 一種分離之編碼嵌合抗原受體(CAR)之核酸，其中該核酸包含編碼結合CD33之scFv的核酸序列，該scFv包含與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少99%一致的序列；編碼跨膜域之核酸序列；及編碼胞內信號傳導域之核酸序列。
  154. 如請求項151至153中任一項之經分離核酸序列，其中該跨膜域係選自T細胞受體之α、β或ξ鏈，CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD152及CD154的跨膜區。
  155. 如請求項151至154中任一項之經分離核酸，其中該結合CD33之scFv藉由鉸鏈區連接至該跨膜域。
  156. 如請求項151至155中任一項之經分離核酸，其中該胞內信號傳導域包含初始信號傳導域，該初始信號傳導域包含CD3 ξ、共同FcR γ (FCER1G)、Fc γ RIIa、FcR β (Fc ε R1b)、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD79a、CD79b、DAP10及DAP12之功能信號傳導域。
  157. 如請求項151至156中任一項之經分離核酸，其中該胞內信號傳導域進一步包含共刺激信號傳導域，該共刺激信號傳導域包含共刺激受體之功能信號傳導域。
  158. 如請求項157之經分離核酸，其中該共刺激受體係選自由以下組成之群：OX40、CD27、CD28、CD30、CD40、PD-1、CD2、CD7、CD258、NKG2C、B7-H3、結合至CD83之配位體、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS及4-1BB (CD137)，或其任何組合。
  159. 一種表現載體，其包含如請求項111至118中任一項之經分離核酸。
  160. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其中該CAR包含結合CD33之scFv，該scFv包含與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少90%一致的胺基酸序列；跨膜域；及胞內信號傳導域。
  161. 如請求項160之CAR，其中該跨膜域係選自T細胞受體之α、β或ξ鏈，CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD152及CD154的跨膜區。
  162. 如請求項160或161之CAR，其中該結合CD33之scFv藉由鉸鏈區連接至該跨膜域。
  163. 如請求項160至162中任一項之CAR，其中該胞內信號傳導域包含初始信號傳導域，該初始信號傳導域包含CD3 ξ、共同FcR γ (FCER1G)、Fc γ RIIa、FcR β (Fc ε R1b)、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD79a、CD79b、DAP10及DAP12之功能信號傳導域。
  164. 如請求項160至163中任一項之CAR，其中該胞內信號傳導域進一步包含共刺激信號傳導域，該共刺激信號傳導域包含共刺激受體之功能信號傳導域。
  165. 如請求項164之CAR，其中該共刺激受體係選自由以下組成之群：OX40、CD27、CD28、CD30、CD40、PD-1、CD2、CD7、CD258、NKG2C、B7-H3、結合至CD83之配位體、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS及4-1BB (CD137)，或其任何組合。
  166. 一種免疫效應細胞，其包含如請求項151至158中任一項之核酸。
  167. 一種免疫效應細胞，其包含如請求項159之載體。
  168. 一種免疫效應細胞，其表現如請求項160至165中任一項之CAR。
  169. 如請求項166至168中任一項之免疫效應細胞，其中該免疫效應細胞為T細胞。
  170. 如請求項169之免疫效應細胞，其中該T細胞為CD8+ T細胞、CD4+ T細胞或NKT細胞。
  171. 如請求項166至168中任一項之免疫效應細胞，其中該免疫效應細胞為NK細胞。
  172. 一種CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體(engager)，其包含序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少90%一致的蛋白質。
  173. 一種CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體，其包含序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少95%一致的蛋白質。
  174. 一種CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體，其包含序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少99%一致的蛋白質。
  175. 一種經分離之核酸，其編碼如請求項172至174中任一項之CD33/ CD3定向雙特異性T細胞接合體。
  176. 一種抗體-藥物結合物，其包含序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少90%一致的蛋白質。
  177. 一種抗體-藥物結合物，其包含序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少95%一致的蛋白質。
  178. 一種抗體-藥物結合物，其包含序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少99%一致的蛋白質。
  179. 如請求項176至178中任一項之抗體-藥物結合物，其進一步包含選自以下之藥物部分：奧瑞他汀(auristatin)、N-乙醯基-γ卡奇黴素(calichea-micin)、類美登素(maytansinoid)、吡咯并苯并二氮呯(pyrrolobenzo-diazepine)，及SN-38。
  180. 一種免疫細胞介素，其包含連接至細胞介素的序列，該序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少90%一致。
  181. 一種免疫細胞介素，其包含連接至細胞介素的序列，該序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少95%一致。
  182. 一種免疫細胞介素，其包含連接至細胞介素的序列，該序列與選自SEQ ID NO: 188、198、206-223及447-484之胺基酸序列至少99%一致。
  183. 如請求項170至172中任一項之免疫細胞介素，其中該細胞介素係選自IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、TNF及IFNα。
  184. 一種經分離之核酸，其編碼如請求項170至173中任一項之免疫細胞介素。
  185. 一種治療表現CD33之癌症的方法，該方法包含向有需要的個體投與有效量之如請求項123至149中任一項之蛋白質、如請求項150之調配物、如請求項166至171中任一項之免疫效應細胞、如請求項172至174中任一項之CD33/CD3定向雙特異性T細胞接合體、如請求項176至179中任一項之抗體-藥物結合物，或如請求項180至183中任一項之免疫細胞介素。
  186. 如請求項185之方法，其中該癌症係選自由以下組成之群：急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、慢性淋巴球性白血病(CML)、CML之骨髓急變(myeloid blast crisis)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、急性淋巴母細胞性淋巴瘤、骨髓增生贅瘤(MPN)、淋巴瘤、非霍奇金氏(Hodgkin)淋巴瘤，及經典霍奇金氏淋巴瘤。
  187. 如請求項186之方法，其中該AML係選自未分化急性骨髓母細胞性白血病、成熟度最小之急性骨髓母細胞性白血病、成熟之急性骨髓母細胞性白血病、急性前髓細胞性白血病(APL)、急性骨髓單核球性白血病、急性骨髓單核球性白血病伴嗜伊紅血球增多、急性單核球性白血病、急性類紅血球性(erythroid)白血病、急性巨核母細胞白血病(AMKL)、急性嗜鹼性白血病、急性全骨髓增生(panmyelosis)伴纖維化，及母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤(BPDCN)。
  188. 如請求項186或187之方法，其中該AML之特徵為AML白血病幹細胞(LSC)上之CLL-1表現。
  189. 如請求項188之方法，其中該等LSC進一步表現選自CD34、CD38、CD123、TIM3、CD25、CD32及CD96之膜標記物。
  190. 如請求項186至189中任一項之方法，其中該AML為微小殘留病(MRD)。
  191. 如請求項190之方法，其中該MRD之特徵為存在或不存在選自以下之突變：FLT3 - ITD ((Fms樣酪胺酸激酶3)-內部串聯重複(ITD))、NPM1 (核仁磷酸蛋白(Nucleophosmin) 1)、DNMT3A (DNA甲基轉移酶基因DNMT3A )，及IDH (異檸檬酸去氫酶1及2 (IDH1及IDH2))。
  192. 如請求項186之方法，其中該MDS係選自MDS伴多譜系發育不良(MDS-MLD)、MDS伴單一譜系發育不良(MDS-SLD)、MDS伴有環狀含鐵胚血球(MDS-RS)、MDS伴有過量胚血球(MDS-EB)、MDS伴有經分離del (5q)，及類別不明MDS (MDS-U)。
  193. 如請求項186或192之方法，其中該MDS為原發MDS或繼發MDS。
  194. 如請求項186之方法，其中該ALL係選自B細胞急性淋巴母細胞性白血病(B-ALL)及T細胞急性淋巴母細胞性白血病(T-ALL)。
  195. 如請求項186之方法，其中該MPN係選自真性紅血球增多症、原發性血小板增多症(ET)及骨髓纖維化。
  196. 如請求項186之方法，其中該非霍奇金淋巴瘤係選自B細胞淋巴瘤及T細胞淋巴瘤。
  197. 如請求項186之方法，其中該淋巴瘤係選自慢性淋巴球性白血病(CLL)、淋巴母細胞性淋巴瘤(LPL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma，BL)、原發縱隔大B細胞淋巴瘤(PMBL)、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、毛細胞白血病、漿細胞骨髓瘤(PCM)或多發性骨髓瘤(MM)、成熟T/NK贅瘤，及組織細胞贅瘤。
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