TW201902499A - 用於類鐸受體２活性化之組成物 - Google Patents

Abstract

本發明係以提供一種新穎的用於類鐸受體2活性化之組成物為目的。根據本發明，可提供含有屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物作為有效成分之用於類鐸受體2(TLR2)活性化之組成物。

Description

用於類鐸受體２活性化之組成物

本發明係有關類鐸受體2活性化用組成物。

生物體的免疫系統可分為先天的自然性免疫與後天產生的獲得性免疫此2種類。相對於只存在於人類等高等生物的獲得性免疫，自然性免疫廣泛地被保存於昆蟲至人類的免疫機轉。擔當自然性免疫的細胞(巨噬細胞與樹狀細胞等)在當病原細菌等自外界入侵時，迅速偵查到外來物的入侵，除了吞噬作用等直接攻擊之外，同時發出細胞激素等警告訊號之後，發揮活化獲得性免疫系統作為防禦感染第一階段的功能。該等一連串免疫反應系統中，擔任最初始階段，亦即發現細菌入侵此一任務的受體蛋白質即為類鐸受體(Toll-like receptor)(本說明書中稱作「TLR」)。

至今TLR在人類已有10種被鑑定出來，一般認為辨識個別TLR的分子構造係互為相異。其中，已知TLR2係與如肽聚醣(PGN)、壁脂酸、微生物的脂蛋白以及酵母聚糖等微生物的細胞壁成分反應後，以細胞訊號傳導為媒介(非專利文件1)。例如，已確認藉由活化TLR2，透過保護強化腸道的細胞間的緊密連接，可改善腸道屏蔽功能(非專利文件2)。 [先前技術文件] [非專利文件]

[非專利文件1]Wetzler, L.M. Vaccine 21, S55-S60 (2003) 　　[非專利文件2]Elke Cario et al., GASTROENTEROLOGY 127(1), pp224-238(2004)

該等經由TLR2的細胞訊號傳導，調控著以生物體免疫系統為首的各種生物體內反應。本發明團隊著眼於經由TLR2的細胞訊號傳導系統的可應用性，針對可活化TLR2的食品素材進行專心檢討。其結果，發現了屬於比菲德氏菌之菌種(特別是比菲德氏OLB6378菌株)具有強力的TLR2活化能力。

亦即，本發明係以提供新穎的用於類鐸受體2活性化之組成物以及用於類鐸受體2活性化劑為目的。

根據本發明可提供下述之發明。 　　[1]一種用於TLR2活性化組成物以及TLR2活性化劑(以下有時稱作「本發明之組成物及用劑」)，其係含有屬於比菲德氏菌之菌種(以下有時稱作「本發明之比菲德氏菌」)或其處理物作為有效成分。 　　[2]如上述[1]之組成物，其中屬於比菲德氏菌之菌種相對於短雙叉乳酸桿菌JCM1192T菌株，係具有2倍以上之TLR2活性化能力。 　　[3]如上述[1]或[2]之組成物，其中屬於比菲德氏菌之菌種係比菲德氏OLB6378菌株(Bifidobacterium bifidum OLB6378，寄存編號：NITE BP-31)。 　　[4]如上述[1]~[3]中任一項之組成物，其係為了使用於改善腸道屏蔽功能。 　　[5]如上述[4]之組成物，其係為了使用於可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病，或是症狀之治療、預防及/或改善。 　　[6]如上述[5]之組成物，其中該疾病係壞死性腸炎、潰瘍性大腸炎、持續性腹瀉、過敏疾病或食物過敏症。 　　[7]如上述[1]~[6]項中任一項之組成物，其係以新生兒為對象、以乳幼兒為對象、以兒童為對象及/或以高齡者為對象。 　　[8]如上述[1]~[7]項中任一項之組成物，其中屬於比菲德氏菌之菌種係經加熱處理之菌體。 　　[9]一種TLR2活性化方法，一種腸道屏蔽功能改善方法，及一種可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病或是症狀之治療、預防及/或改善之方法，其係包含將有效量之屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物，使需要其之對象進行攝取，或是進行投予。 　　[10]一種屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物之使用，其係為了製造TLR2活性化劑、為了製造腸道屏蔽功能改善劑、為了TLR2活性化或是為了改善腸道屏蔽功能。 　　[11]一種屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物之使用，其係為了製造可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病或症狀之治療劑、預防劑或改善劑，或，為了可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病或症狀之治療、預防及/或改善。 　　[12]一種屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物，其係為了用於TLR2活性化，或，為了用於改善腸道屏蔽功能。 　　[13]一種屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物，其係為了用於可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病或症狀之治療、預防及/或改善。

利用本發明之組成物以及用劑可期待對於攝取對象及投予對象，TLR2的活性化及與其相關的作用效果。由於本發明有效成分之屬於比菲德氏菌菌種係人類長年攝取至今的食品素材中所含的菌種，因而本發明組成物及用劑可有效利用在沒有副作用的狀態下，計畫TLR2的活性化。

[發明的具體說明]

本發明有效成分係屬於比菲德氏菌(Bifidobacterium bifidum)菌種。本發明中屬於比菲德氏菌之菌種其特徵係具有強力的TLR2活性化能。亦即，本發明中，可將較泛用菌株短雙叉乳酸桿菌(Bifidobacterium breve)JCM1192T菌株的類鐸受體2活性化能，具有更高類鐸受體2活性化能之屬於比菲德氏菌之菌種使用為有效成分，較佳係可將相對於短雙叉乳酸桿菌JCM1192T菌株具有2倍以上(較佳係2.2倍以上，更佳係2.4倍以上)的類鐸受體2活性化能屬於比菲德氏菌之菌種，使用為有效成分。且短雙叉乳酸桿菌JCM1192T菌株，可購自理化學研究所生物資源中心微生物材料開發室。另外，TLR2活性化能的程度係可以藉由TLR2活性化而分泌的鹼性磷酸酶(SEAP)濃度作為指標並評價。

本發明較佳的實施方式中屬於比菲德氏菌之菌種，可使用比菲德氏OLB6378菌株(Bifidobacterium bifidum OLB6378，寄存編號：NITE BP-31)。該菌株目前係寄存於獨立行政法人製品評價技術基盤機構專利微生物寄存中心。以下係寄存的特定內容。

(1)寄存機構名稱：獨立行政法人製品評價技術基盤機構 專利微生物寄存中心 　　(2)聯絡方式：郵遞區號292-0818，千葉縣木更津市上總鐮足2-5-8(電話號碼0438-20-5580) 　　(3)寄存編號：NITE BP-31 　　(4)識別標示：Bifidobacterium bifidum OLB6378 　　(5)原寄存日：2004年10月26日 　　(6)基於布達佩斯條約之寄存移管日：2006年1月18日

比菲德氏OLB6378菌株係來自人類乳幼兒糞便之革蘭氏陽性兼性厭氧性桿菌。將本菌塗布於BL洋菜培養基上(榮研化學公司製)平板上，使用AnaeroPack厭氧產氣包(三菱氣體化學公司製)於厭氧狀態37℃培養48小時後，形成不透明的圓形半球狀具有光澤的菌落。另外，確認了使用具有Bifidobacterium bifidum特異性的引子(腸內菌叢研討會8，腸內菌叢分子生物學檢測、鑑定，光岡知足、松本隆廣)之PCR增幅產物。另外，具有對半乳糖、葡萄糖、果糖、乳糖、龍膽二糖之發酵性。

作為為了培養本發明比菲德氏菌之培養基，可使用一般常用於培養比菲德氏菌之培養基作為培養基。亦即，並未限定本發明可利用的培養基，若含有主要碳素來源之外，氮素來源、無機物及其他營養素為規定範圍之量的培養基，可使用任一種培養基。作為碳素源的乳糖、果糖、蔗糖、果糖、澱粉水解物、糖蜜等，可因應性菌的利用性而加以使用。氮素來源可使用酪蛋白水解物、乳清蛋白質水解物、大豆蛋白質水解物等有機氮素含有物。其他增殖促進劑可使用肉類萃取物、魚肉萃取物、酵母萃取物等。

本發明比菲德氏菌之培養以厭氧條件下進行為佳，可適用通氣二氧化碳氣體同時進行培養等周知的方法，亦可使用一般常用的液體靜置培養等微好氧條件，或是批次培養條件下等使用其他方法進行培養。培養溫度以25~50℃為佳，35~42℃更佳，但本發明未限定於此，若為細菌可生長的溫度亦可使用其他溫度條件。培養中培養基的pH以維持在6.0~7.0為佳，若為細菌可生長的時間亦可使用其他pH條件。培養時間較佳為3~48小時，更佳係8~24小時，特佳為10~20小時，若為細菌可生長的時間亦可使用其他培養時間。

可使獲得的菌體經下述處理後之處理物，含於本發明的組成物及用劑中。本發明比菲德氏菌之處理物，係包含培養終止後的培養物、培養終止後施以離心分離或過濾等後的培養物、該等之濃縮物、進而加工為膏狀者、利用各種方法之乾燥物(噴霧乾燥物、冷凍乾燥物、真空乾燥物、滾筒乾燥物等)、使其分散於媒體中之液狀物、利用稀釋劑之稀釋物、經加熱處理的加熱處理物(加熱處理菌體)、經紫外線及/或放射線處理之光照射處理物(光照射處理菌體)、經藥劑(殺菌劑、抗菌劑、靜菌劑)處理之藥劑處理物(藥劑處理菌體)、使用珠磨機等破碎乾燥物之破碎物等。可利用離心分離、過濾、濃縮等一般常用的方法進行。另外乾燥可藉由真空乾燥、噴霧乾燥、冷凍乾燥、滾筒乾燥等進行。本說明書中有時將該等僅略記為「處理物」。

藉由上述方法獲得之屬於比菲德氏菌之菌及其處理物，可直接以生菌的狀態，或是製成加熱處理菌之後，作為破碎或未粉碎處理物、單獨或以複數種混合物，使其含於本發明的組成物及用劑中。若為生菌，可期待攝取或投予後於腸內增殖、定著等效果，進而亦可期待持續性地發揮本發明的效果。另外，若為經加熱處理的菌體(例如自完成加熱處理的菌體懸濁(分散)液取檢0.1mL，並塗布於含有比菲德氏菌可生長的培養基的平板培養基上，厭氧條件下培養後，無法形成菌落(colony)型態者)，由於無需考慮於氧氣存在下不易生存此一比菲德氏菌的特性，可擴大本發明的組成物及用劑之應用範圍而為佳。

本發明中使用經加熱處理之本發明比菲德氏菌時，加熱處理的條件例如，加熱溫度一般為60~300℃、較佳為60~200℃、更加係60~150℃、進而60~140℃、再佳係60~130℃、60~120℃亦佳、60~110℃、60~100℃、70~100℃、80~100℃、最佳係85~95℃。藉由設定加熱條件為60℃以上，由於可以殺菌細菌的營養細胞而為佳。另外，藉由設定加熱條件為300℃以下，由於細菌不會碳化可以留存而為佳。

加熱處理的時間例如0.01~120分鐘、較佳為0.015~60分鐘、更佳為0.02~40分鐘、0.025~30分鐘、0.03~25分鐘、最佳係0.03~20分鐘。藉由設定加熱處理時間為0.1分鐘以上，由於可以殺菌比菲德氏菌的營養細胞而為佳。另外，藉由設定加熱處理時間為120分鐘以下，由於可抑制熱變性可有效率地殺菌營養細胞而為佳。

將最適合的加熱處理時間設定在低溫域(60~100℃)之加熱處理時，例如，可設定在0.2~120分鐘、較佳為0.2~60分鐘、更佳為0.2~40分鐘、0.2~30分鐘、0.2~25分鐘、最佳係0.2~20分鐘。另外，將最適合的加熱處理時間設定在高溫域(100~300℃)之加熱處理時，例如，可設定在0.01~0.5分鐘、較佳為0.015~0.5分鐘、更佳為0.02~0.5分鐘、0.025~0.5分鐘、0.03~0.5分鐘、最佳係0.03~0.5分鐘。例如，加熱處理係90℃、15分鐘的條件進行。

並未特別限定加熱處理的方法。例如可將獲得的菌體使用平板式殺菌機、圓筒式殺菌機、直接加熱式殺菌機、夾層汽鍋等加熱殺菌裝置，再依規定條件進行加熱。

本發明之組成物及用劑，可單獨提供本發明比菲德氏菌或其處理物，或者，亦可提供本發明比菲德氏菌或其處理物與其他成分混合後之混合物。本發明之組成物及用劑中本發明比菲德氏菌的摻混量，可因應其目的、用途、形態、劑型、症狀、體重等隨意地制定，本發明雖未限定於下述條件，但其含量相對於全體量，以0.1~90%(w/w)此含量摻混，更佳係以0.1~50%(w/w)含量摻混。本發明係由本發明比菲德氏菌或其處理物構成本發明之用劑，本發明組成物係可含有本發明比菲德氏菌或其處理物與其他成分。

本發明比菲德氏菌及其處理物可使TLR2活性化，藉由TLR2活性化，透過保護強化腸道的細胞間的緊密連接，可改善腸道屏蔽功能(參考非專利文件2)。因此，本發明之組成物及用劑，可以計畫透過TLR2活性化而改善腸道屏蔽功能。亦即，根據本發明，可提供含有本發明之比菲德氏菌或其處理物為有效成分所構成之腸道屏蔽功能改善用組成物，以及腸道屏蔽功能改善劑。

此處「腸道屏蔽功能」係保護腸道避免受到與食物抗原、食物一同進入腸道的細菌、病毒、腸內細菌及該等產生的有害物質等造成的影響。另外，亦使用於包含「改善腸道屏蔽功能」、「回復腸道屏蔽功能」以及「阻礙腸道屏蔽通透性亢進」的意思。「改善腸道屏蔽功能」進而用於提高先前低落的腸道屏蔽功能、抑制腸道屏蔽功能降低、更加提高正常的腸道所具有的屏蔽功能等意思。

本發明中「回復腸道屏蔽功能」係意指腸道的通透性，自不明原因超過正常範圍的疾病狀態，或是亢進至不預期程度的狀態回復，不僅是回到正常的狀態，亦使用為接近本質上的正常的狀態之意思。另外，回復係意指縮短腸道的通透性自不明原因超過正常範圍的疾病狀態，或是自亢進至不預期程度的狀態回復為止的回復期間之回復的促進，換言之，包含使用為與攝取一般食品之狀況相比，亦即較自然治癒更早期地使其回復至正常狀態之意思。

本發明中「阻礙腸道屏蔽通透性亢進」係意指因外因性或是內因性的原因造成腸道的屏蔽功能被破壞，預防或抑制腸道屏蔽的通透性自正常狀態演變為疾病狀態，包含維持腸道通透性於正常的狀態。本發明中，腸道屏蔽的通透性的亢進，不僅是上皮細胞，亦包含腸管粘膜等其他與構成腸道的屏蔽的生物體機構相關的腸道屏蔽的破壞、破損、衰弱、功能下降。

本發明比菲德氏菌及其處理物，已知具有改善下痢症、改善便秘症、抑制腸內有害細菌的增殖、產生維他命B群、促進藉由乳糖分解的促進消化吸收等作用。因此，本發明之組成物及用劑除了與TLR2活性化相關的作用效果之外，亦可期待該等的作用效果。

如上所述，本發明比菲德氏菌及其處理物可活性TLR2，進而可改善腸道屏蔽功能。此處，已知因腸道屏蔽的破損或是功能下降，導致發症壞死性腸炎、潰瘍性大腸炎、持續性下痢、過敏疾病及食物過敏症等(參考Guamer F et al., Eur J Clin Nutr, 56(Suppl 4),S34-38(2002)等)。因此，本發明之組成物及用劑，藉由改善腸道屏蔽功能，可治療、預防或改善疾病，或是使用於治療、預防及/或改善症狀。亦即，根據本發明，可提供含有本發明比菲德氏菌或其處理物作為有效成分所構成，藉由改善腸道屏蔽功能可治療、預防或改善疾病，或症狀之治療、預防及/或改善用組成物，以及該疾患或症狀之治療、預防及/或改善劑。藉由改善腸道屏蔽功能可治療、預防或改善之疾病或症狀，可舉出壞死性腸炎、潰瘍性大腸炎、持續性下痢、過敏疾病及食物過敏症等。

本發明之組成物及用劑，以及本發明之治療劑、預防劑與改善劑可提供為醫藥品(例如醫藥組成物)、準醫藥品、食品、飼料等型態，且可依據下述記載方法實施。

本發明之比菲德氏菌及其處理物係可對人類及非人類動物進行經口投予。經口劑可舉出顆粒劑、散劑、錠劑(包含糖衣錠)、丸劑、膠囊劑、糖漿劑、乳劑、懸濁劑。該等製劑可利用相關領域一般常用的方法，使用藥學上許可的載體進行製劑化。藥學上許可的載體可舉出賦形劑、結合劑、稀釋劑、添加劑、香料、緩衝劑、增黏劑、著色劑、安定劑、乳化劑、分散劑、懸濁化劑、防腐劑等。本發明為了使經口劑不溶於胃而溶於腸，亦可提供為腸溶性製劑，例如可提供為膠囊劑、或可於錠劑等的表面被覆腸溶性薄膜。

本發明之比菲德氏菌及其處理物係可對人類及非人類動物，進行經管投予、經鼻管投予、點滴、座藥等經口投予以外之對體內的投予，可因應本發明之組成物及用劑的形狀。例如，藉由將含有本發明之比菲德氏菌或其處理物製成具有粘性的液狀組成物，或是，將含有本發明之比菲德氏菌或其處理物製成半固狀的組成物，可對咀嚼及吞嚥功能降低、無法經口攝取或是無法經口投予的人類及非人類動物進行投予。使投予對象利用經口攝取以外的方法攝取本發明之組成物及用劑，或是藉由投予，即使咀嚼與吞嚥的功能因加齡等因素而降低，亦可期待人類及非人類動物的TLR2活性化。

本發明之比菲德氏菌及其處理物可對人類及非人類動物進行經口投予。經口攝取本發明之比菲德氏菌及其處理物時，可為經單離、純化或粗純化之型態者，亦可為含有本發明之比菲德氏菌或其處理物之食品或食品的原料的形態。

將本發明之比菲德氏菌及其處理物提供為食品時，可使食品直接含有本發明之比菲德氏菌或其處理物，且該食品係含有本發明之比菲德氏菌或其處理物有效量之食品。此處，本發明之比菲德氏菌及其處理物之食品「含有有效量」，係指各食品中，於攝取一般飲食量時，以後述範圍來攝取本發明之比菲德氏菌及其處理物時的含有量。另外，「食品」係使用為包含健康食品、功能性食品、保健功能食品(例如特定保健用食品、營養功能食品、表示功能性食品)、特別用途食品(例如幼兒用食品、孕產婦用食品、患者用食品)等意思。

並未特別限定「食品」的形態，例如可為飲料及液體食物等液狀的形態，可為膏狀、半液狀、凝膠狀的形態，亦可以是固體、粉末的形態。另外，不拘液狀、固體、粉末等型態，本發明之比菲德氏菌及其處理物可添加於各種食品(牛奶、清涼飲料、發酵乳、優格、起司、麵包、餅乾、蘇打餅乾、披薩餅皮、調製乳粉、液體食品、特別用途食品、患者用食品、營養食品、冷凍食品、加工食品及其他市售食品等)，再使對象攝取。另外，營養組成物的使用型態為粉末時，可使用噴霧乾燥、冷凍乾燥等方法製造。

本發明比菲德氏菌或其處理物亦可進而提供為與水、蛋白質、糖質、脂質、維他命類、礦物質類、有機酸、有機鹼基、果汁、香料類等混合之組成物。蛋白質可舉出例如全脂乳粉、脫脂乳粉、部分脫脂乳粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白質、乳清蛋白質濃縮物(WPC)、乳清蛋白質分離物(WPI)、α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、乳鐵蛋白、大豆蛋白質、雞蛋蛋白質、肉蛋白質等動植物性蛋白質、該等的水解物；牛脂、乳性礦物質、奶油、乳清、非蛋白態氮、唾液酸、磷脂質、乳糖等各種來自乳的成份。另外，糖質可舉出例如糖類、加工澱粉(糊精之外，尚有可溶性澱粉、英式澱粉、氧化澱粉、澱粉酯、澱粉醚等)、食物纖維等。脂質可舉出例如豬脂、魚油等、該等的分餾油、加氫油、轉酯化油等動物性油脂；棕櫚油、癸花油、玉米油、菜籽油、椰子油、該等的分餾油、加氫油、轉酯化油等植物性油脂。維他命類可舉出例如維他命A、胡蘿蔔素類、維他命B群、維他命C、維他命D群、維他命E、維他命K群、維他命P、維他命Q、菸鹼酸、尼古丁酸、泛酸、生物素、肌醇、膽鹼、葉酸等。礦物質類可舉出例如鈣、鉀、鎂、鈉、銅、鐵、錳、鋅、硒。有機酸可舉出例如蘋果酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸。作為醫藥品與食品具有使用實績且無副作用者任一種皆可適用。可將該等成分組合2種以上而使用。

本發明之組成物及用劑之醫藥品或食品每1日的攝取量或投予量，由於依攝取對象的病狀、年齡、症狀、體重、用途與本發明之組成物及用劑是否為唯一的營養物等而異，並未特別限定。以TLR2活性化及與其相關作用效果為目的而攝取及投予之狀況時，例如，成人每1日本發明比菲德氏菌及其處理物的攝取量或投予量，例如每日為10⁸ 個以上，可為10⁸ ~10¹² 個，5×10⁸ ~5×10¹¹ 個，10⁹ ~10¹¹ 個，5×10⁹ ~5×10¹⁰ 個，6×10⁹ ~4×10¹⁰ 個，7×10⁹ ~3×10¹⁰ 個，亦可使用8×10⁹ ~2×10¹⁰ 個，進而更佳可為9×10⁹ ~2×10¹⁰ 個。攝取量及投予量亦可由攝取對象及投予對象的主治醫生決定。

由於本發明之組成物及用劑造成副作用的可能性低，有利於提供組成物及用劑給不具有充分體力的年齡層。本發明之組成物及用劑可提供為例如以新生兒(特別是剛出生的新生兒)為對象、以乳幼兒為對象、以兒童為對象及/或以高齡者為對象的組成物及用劑。此處「新生兒」係指剛出生的乳兒，使用為包含健康的新生兒、未足月兒、早產兒及低出生物體重兒等意思。另外，「新生兒」係指處於新生兒期的兒童，新生兒期係意指剛出生的時期，人類的狀況一般係出生後4周以內稱作新生兒期。

本發明之組成物及用劑，可提供發揮TLR2活性化及與其相關作用效果之有效1日份的攝取量的組成物及用劑。此時，本發明之組成物及用劑，可包裝為能夠攝取本發明比菲德氏菌及其處理物的1日份有效攝取量，且若為可攝取1日份有效攝取量，包裝型態可為單一包裝，亦可為複數包裝。以包裝型態提供時，希望是以將可攝取1日份有效攝取量之相關攝取量記載記於包裝上，或是一同提供記有該記載之文書。以複數包裝提供1日份有效攝取量時，為方便攝取，亦可提供以套裝組方式的1日份有效攝取量的複數包裝。

為了提供本發明之組成物及用劑的包裝型態，若為規定的一定量的形態則無特別限制，例如可舉出包裝紙、袋、軟袋、紙容器、罐、瓶、膠囊等可收納的容器。

為了更有效地使本發明之組成物及用劑發揮其效果，以持續1週以上的投予或攝取為佳，投予及攝取期間更佳係2~8周，特佳係2~4周。此處「持續性地」係指每日持續投予或攝取。將本發明之組成物及用劑提供為包裝型態時，為了可持續性地攝取，亦可將一定期間(例如1周期間)的有效攝取量以套組方式提供。

根據本發明，可提供包含將屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物，或是含其之組成物，使需要其之對象攝取或是進行投予，所構成之TLR2活性化方法，腸道屏蔽功能改善方法，及藉由改善腸道屏蔽功能可治療、預防或改善疾病或是症狀之治療、預防及/或改善之方法。攝取或是投予對象包含人類之哺乳動物，較佳係人類。本發明之方法係可依據與本發明組成物及用劑有關之記載而實施。

根據本發明，可提供為了製造TLR2活性化用組成物，且含有屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物之組成物之使用。根據本發明，進而提供為了製造TLR2活性化劑，且含有屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物之組成物之使用。根據本發明可再進而提供為了TLR2活性化，且含有屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物之組成物之使用。根據本發明，亦可再進而提供為了使用於TLR2活性化，且含有屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物之組成物。本發明之使用以及含有本發明之比菲德氏菌或其處理物以及該等之組成物，係可依據與本發明組成物及用劑有關之記載而實施。

根據本發明，可進而提供為了製造改善腸道屏蔽功能組成物，為了製造改善腸道屏蔽功能劑，或是，為了改善腸道屏蔽功能，含有屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物或含其之組成物之使用。根據本發明，可再進而提供為了使用於改善腸道屏蔽功能，含有屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物或含其之組成物。本發明之使用以及本發明之比菲德氏菌或其處理物以及含有該等之組成物，係可依據與本發明組成物及用劑有關之記載而實施。

根據本發明，為了製造藉由改善腸道屏蔽功能可治療、預防或改善疾病或症狀之治療、預防或改善而使用之醫藥組成物，為了藉由改善腸道屏蔽功能可治療、預防或改善疾病或症狀之治療劑、預防劑及/或改善劑，或是，可提供藉由改善腸道屏蔽功能為了可治療、預防或改善疾病或症狀之治療、預防或改善之屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物或含其之組成物之使用。根據本發明，可提供為了藉由改善腸道屏蔽功能可使用於治療、預防或改善疾病或症狀之治療、預防及/或改善之屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物或含其之組成物。本發明之使用以及本發明之比菲德氏菌或其處理物以及含有該等之組成物，係可依據與本發明組成物及用劑有關之記載而實施。

本發明之使用及本發明方法，可對人類或非人類動物使用，亦可計畫治療性或非治療性的使用。此處「非治療性」係意指不包含對人類進行手術、治療或診斷等行為(亦即對人類進行醫療行為)，具體而言，係意指不包含醫師或是接受醫師指示者，對人類進行手術、治療或診斷等方法。 [實施例]

以下述例為基礎更具體說明本發明，但本發明未被限定於該等範例。

例1：比菲德氏OLB6378菌株之TLR2活性化能之評價 　　將比菲德氏OLB6378菌株(寄存編號：NITE BP-31)的TLR2活性化能，與短雙叉乳酸桿菌JCM1192T菌株(標準株)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)菌株、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)相比較。

為評價TLR2活性化能，如下所述製作各供試菌株檢體。亦即，使用GAM Broth“Nissui”(日本製藥公司製，製品編號05422)，厭氧條件及37℃培養各供試菌株18小時。將菌培養液(500mL)離心分離(2,000×G，15分鐘，4℃)，以生理食鹽水再懸濁獲得之沉澱物(洗淨步驟)。該洗淨步驟係以生理食鹽水2次，蒸餾水1次共計3次重複操作，再將以獲得的沈澱加入蒸餾水製成20mL的菌懸濁液。以80℃將該菌懸濁液加熱30分鐘後，施以冷凍乾燥，獲得菌體的乾燥菌末。再以蒸餾水懸濁乾燥菌末使濃度成為2μg/mL，用於TLR2活性化能之評價。

有關TLR2活性化能之評價，係使用經導入TLR2/NFκB/SEAP各基因的HEK293細胞之TLR2 Reporter Cell Line(Novusbio公司製，型號NBP2-26274)。亦即，將TLR2 Reporter Cell Line細胞以1.5×10⁵ 個細胞/mL濃度，以每孔250μL播於48孔平盤，以含4mM麩醯胺酸的high glucose DMEM(添加10%FCS)之培養基培養24小時。之後，將如上述調製之各供試菌株的懸濁液(2μg/mL)，以每孔250μL之量添加至平盤(最終濃度1μg/mL)。添加供試菌株24小時後回收培養上清液，定量由TLR2 Reporter Cell Line所分泌之鹼性磷酸酶(SEAP)的濃度。定量係使用SEAPorter Assay Kit(Novusbio公司製，型號10055K)施行。將此時SEAP濃度作為各供試菌株的TLR2活性化能的指標。

TLR2活性化能的測定結果係如圖1所示。比菲德氏OLB6378菌株，其TLR2活性化能較其他供試菌株顯著為高，與短雙叉乳酸桿菌JCM1192T菌株(標準株)相比，高出約2.4倍。

[圖1]表示比菲德氏OLB6378菌株及其他供試菌株之TLR2活性化能(SEAP濃度)的測定結果圖(平均值±標準差，檢測極限為15.6ng/mL)。

Claims (13)

1. 一種用於類鐸受體2(TLR2)活性化之組成物，其係含有屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物作為有效成分。
2. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中屬於比菲德氏菌之菌種相對於短雙叉乳酸桿菌JCM1192T菌株，係具有2倍以上之TLR2活性化能力。
3. 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其中屬於比菲德氏菌之菌種係比菲德氏OLB6378菌株(Bifidobacterium bifidum OLB6378，寄存編號：NITE BP-31)。
4. 如申請專利範圍第1~3項中任一項之組成物，其係為了使用於改善腸道屏蔽功能。
5. 如申請專利範圍第4項之組成物，其係為了使用於可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病，或是症狀之治療、預防及/或改善。
6. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該疾病係壞死性腸炎、潰瘍性大腸炎、持續性腹瀉、過敏疾病或食物過敏症。
7. 如申請專利範圍第1~6項中任一項之組成物，其係以新生兒為對象、以乳幼兒為對象、以兒童為對象及/或以高齡者為對象。
8. 如申請專利範圍第1~7項中任一項之組成物，其中屬於比菲德氏菌之菌種係經加熱處理之菌體。
9. 一種TLR2活性化方法，一種腸道屏蔽功能改善方法，及一種可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病或是症狀之治療、預防及/或改善之方法，其係包含將有效量之屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物，使需要其之對象進行攝取，或是進行投予。
10. 一種屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物之使用，其係為了製造TLR2活性化劑、為了製造腸道屏蔽功能改善劑、為了TLR2活性化或是為了改善腸道屏蔽功能。
11. 一種屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物之使用，其係為了製造可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病或症狀之治療劑、預防劑或改善劑，或，為了可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病或症狀之治療、預防及/或改善。
12. 一種屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物，其係為了用於TLR2活性化，或，為了用於改善腸道屏蔽功能。
13. 一種屬於比菲德氏菌之菌種或其處理物，其係為了用於可藉由改善腸道屏蔽功能來治療、預防或改善之疾病或症狀之治療、預防及/或改善。