TW201733587A - 1,3,4-噻二唑化合物及其在治療癌症中之用途 - Google Patents

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喬翰思 威爾漢默斯 瑪利亞 尼斯克
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阿斯特捷利康公司
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Abstract

一種具有式(I)之化合物：□或其藥學上可接受的鹽，其中：Q可以是1,2,4-三□-3-基、嗒□-3-基、6-甲基嗒□-3-基、或6-氟嗒□-3-基；R1可以是氫、甲氧基、三氟甲氧基、氧雜環丁烷-3-基、3-氟氮雜環丁烷-1-基、3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基、或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基；R2可以是氫或氟；R3可以是氫或甲氧基；並且R4可以是甲氧基、乙氧基、或甲氧基甲基；其條件係當R1係氫、甲氧基或三氟甲氧基時，則R3不是氫，和/或R4係甲氧基甲基。該具有式(I)之化合物可以抑制穀胺醯胺酶，例如GLS1。

Description

1,3,4-噻二唑化合物及其在治療癌症中之用途
本說明書總體上涉及經取代的1,3,4-噻二唑化合物及其藥學上可接受的鹽。該等化合物作用於穀胺醯胺酶1酶(“GLS1”)，並且因此本說明書還涉及此類化合物及其鹽治療或預防GLS1介導的疾病(包括癌症)之用途。本說明書進一步涉及包含該等化合物和鹽之藥物組成物；包含該等化合物和鹽的套組(kit)；製備該等化合物和鹽之方法；用於製備該等化合物和鹽之中間體；以及使用該等化合物和鹽治療GLS1介導的疾病、包括癌症之方法。
穀胺醯胺係最豐富的血漿胺基酸並且參與許多生長促進途徑。特別地，穀胺醯胺參與TCA循環中的氧化和維持細胞氧化還原平衡，並且還提供氮用於核苷酸和胺基酸合成(庫睿(Curi)等，生物科學前沿(Front.Biosc.)2007,12,344-57；德巴丁斯(DeBerardinis)和程(Cheng)，癌基因(Oncogene)2010,313-324，每者藉由引用以其整體結合在此)。許多癌細胞依賴於穀胺醯胺代謝作為細胞代謝變化的結果，包括瓦伯格效應，其中醣解丙酮酸轉化為乳酸而不是用於產生乙醯輔酶A(庫珀諾 (Koppenol)等人，自然綜述(Nature Reviews)2011,11,325-337，每者藉由引用以其整體結合在此)。由於這種依賴於穀胺醯胺代謝的結果，這樣的癌細胞對外源穀胺醯胺水平的變化敏感。此外，現有證據表明穀胺醯胺分解在某些癌症類型中起關鍵作用(亨斯利(Hensley)等人，臨床研究期刊(J.Clin.Inves).2013,123,3678-3684，每者藉由引用以其整體結合在此)，並且與已知的致癌驅動因子例如Myc相關(丹格(Dang)，癌症研究(Cancer Res).2010,70,859-863，每者藉由引用以其整體結合在此)。
穀胺醯胺分解代謝為穀胺酸的第一步由穀胺醯胺酶催化，穀胺醯胺酶以GLS1和GLS2這兩種亞型存在，這兩種亞型最初鑒定為分別在腎和肝中表現。已知腎穀胺醯胺酶(GLS1)比肝穀胺醯胺酶(GLS2)更普遍地表現，並且具有2種剪接變體，KGA和較短的GAC亞型，兩者都位於線粒體中。(埃嘎迪(Elgadi)等人，生理與基因組學(Physiol.Genomics)1999,1,51-62；卡斯格(Cassago)等人，美國科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.)2012,109,1092-1097，每者藉由引用以其整體結合在此)。GLS1表現與許多疾病類型中的腫瘤生長和惡性腫瘤相關(王(Wang)等人，癌症細胞(Cancer Cell)2010,18,207-219；范德華(van der Heuval)等人，癌症生物學與治療(Cancer Bio.Ther.)2012,13,1185-1194，每者藉由引用以其整體結合在此)因此，預期GLS1的抑制劑可用於治療癌症，作為單一療法或與其他抗癌劑組合。
在一個方面，提供了一種具有式(I)之化合物：
或其藥學上可接受的鹽，其中：Q可以是1,2,4-三-3-基、嗒-3-基、6-甲基嗒-3-基、或6-氟嗒-3-基；R1可以是氫、甲氧基、三氟甲氧基、氧雜環丁烷(oxetan)-3-基、3-氟氮雜環丁烷(fluoroazetidin)-1-基、3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基；R2可以是氫或氟；R3可以是氫或甲氧基；並且R4可以是甲氧基，乙氧基，或甲氧基甲基；其條件係當R1係氫、甲氧基或三氟甲氧基時，則R3不是氫，和/或R4係甲氧基甲基。
在另一方面，提供了選自下組的化合物或其藥學上可接受的鹽，該組由以下各項組成：(2S)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙醯胺；(2R)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；以及(2S)-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺。
在另一方面，藥物組成物包括如上所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，和至少一種藥學上可接受的稀釋劑或載體。
在另一方面，提供了如上所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在治療中使用。
在另一方面，提供了如上所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，用於治療癌症。
在另一方面，提供了如上所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療癌症的藥物中之用途。
在另一方面，用於在需要這種治療的溫血動物中治療癌症之方法包括給予溫血動物治療有效量的如上所述的化合物或其藥學上可接受的鹽。
其他方面將從說明書和申請專利範圍中顯而易見。
【詳細說明】
許多實施方式在整個說明書中詳細描述並且對於本領域的讀者將係顯而易見的。本發明不應被解釋為限於其任何特定一個或多個實施方式。
提供具有式(I)之化合物：
或其藥學上可接受的鹽，其中：Q可以是1,2,4-三-3-基、嗒-3-基、6-甲基嗒-3-基、或6-氟嗒-3-基；R1可以是氫，甲氧基，三氟甲氧基，氧雜環丁烷-3-基，3-氟氮雜環丁烷-1-基；3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基，或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基；R2可以是氫或氟；R3可以是氫或甲氧基；並且R4可以是甲氧基，乙氧基，甲氧基甲基，或乙氧基甲基；其條件係當R1係氫、甲氧基或三氟甲氧基時，則R3不是氫，和/或R4係甲氧基甲基。
1,2,4-三-3-基、嗒-3-基、6-甲基嗒-3-基、以及6-氟嗒-3-基環具有以下結構：
氧雜環丁烷-3-基、3-氟氮雜環丁烷-1-基；3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基、以及3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基環具有以下結構：
在一些實施方式中，具有式(I)之化合物具有下式(Ia)：
其中Q、R1、R2、R3、以及R4如上所定義。
一種化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自由以下各項組成之群組：(2S)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙醯胺； (2R)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；以及(2S)-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；也被提供。
術語“藥學上可接受的”用於指明物體(例如鹽，劑型，稀釋劑或載體)適合用於患者。藥學上可接受的鹽的實例清單可以發現於：藥用鹽手冊：性質、選擇和使用(the Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use)，P.H.斯塔爾(Stahl)和C.G.韋穆特(Wermuth)編輯，魏因海姆(Weinheim)/蘇黎世(Zürich)：威利(Wiley)-VCH出版社/VHCA，2002，將其藉由引用以其整體結合在此。具有式(I)之化合物的適合的藥學上可接受的鹽例如是酸加成鹽。在技術人員已知的條件下，具有式(I)之化合物的酸加成鹽可以藉由使該化合物與適合的無機酸或有機酸接觸來形成。酸加成鹽可以使用例如無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸形成。酸加成鹽也可以使用例如有機酸如三氟乙酸、甲磺酸或苯磺酸形成。
因此，在一個實施方式中，提供具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該藥學上可接受的鹽係鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、三氟乙酸鹽、甲磺酸鹽或苯磺酸鹽。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該藥學上可接受的鹽係鹽酸鹽或氫溴酸鹽。
具有式(I)化合物的其他合適的藥學上可接受的鹽係鹼-加成鹽。具有式(I)之化合物的鹼加成鹽可以藉由使該化合物與合適的無機鹼或有機鹼在熟習該項技術者已知的條件下接觸而形成。鹼加成鹽可以使用例如無機鹼如鹼金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰)或鹼土金屬氫氧化物(例如氫氧化鈣或氫氧化鎂)形成。鹼加成鹽也可以使用例如有機鹼如甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、啉或三-(2-羥乙基)胺來形成。
因此，在一個實施方式中，提供具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該藥學上可接受的鹽係氫氧化鈉鹽、氫氧化鉀鹽、氫氧化鋰鹽、氫氧化鈣鹽、氫氧化鎂鹽、甲胺鹽、二甲胺鹽、三甲胺鹽、哌啶鹽、啉鹽或三-(2-羥乙基)胺鹽。
在一個實施方式中，提供具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該藥學上可接受的鹽係鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、三氟乙酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、氫氧化鈉鹽、氫氧化鉀鹽、氫氧化鋰鹽、氫氧化鈣鹽、氫氧化鎂鹽、甲胺鹽、二甲胺鹽、三甲胺鹽、哌啶鹽、啉鹽或三-(2-羥乙基)胺鹽。
另一個實施方式提供了本文所定義的任何實施方式(例如如申請專利範圍第1項所述之實施方式)，其條件係選自由實例1(a)、1(b)、2(a)、2(b)、3(a)、3(b)、4(a)、4(b)、5(a)、5(b)、 6(a)、6(b)、7(a)、7(b)、8(a)、8(b)、9(a)、9(b)、10(a)、10(b)、11(a)、11(b)、12(a)、12(b)、13(a)、13(b)、14(a)、14(b)、15(a)、15(b)、16(a)、16(b)、17(a)、17(b)、18(a)、18(b)、19(a)、19(b)、20(a)、20(b)、21(a)、21(b)、22(a)、22(b)、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45(a)、45(b)、46(a)、46(b)、47(a)、47(b)、48(a)、48(b)、49(a)、49(b)、50(a)、50(b)、51(a)、51(b)、52(a)、52(b)、53(a)、53(b)、54(a)、和54(b)組成的組中的一個或多個具體實例(例如一個、兩個或三個具體實例、或可替代地一個具體實例)單獨地被放棄。
式(I)中的可變基團的一些值如下。該等值可以與任何定義、申請專利範圍(例如申請專利範圍1)、或本文所定義的實施方式組合使用以提供另外的實施方式。
R1可以是甲氧基或三氟甲氧基。
R1可以是甲氧基並且R3可以是甲氧基。
R1可以是氧雜環丁烷-3-基、3-氟氮雜環丁烷-1-基、3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基、或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基。
R1可以是氧雜環丁烷-3-基。
R1可以是3-氟氮雜環丁烷-1-基。
R1可以是3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基。
R1可以是3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基。
R2可以是H。
R2可以是氟。
R3可以是甲氧基。
R4可以是甲氧基或乙氧基。
R4可以是甲氧基。
R4可以是甲氧基甲基。
Q可以是1,2,4-三-3-基或嗒-3-基。
Q可以是1,2,4-三-3-基。
Q可以是嗒-3-基。
Q可以是6-甲基嗒-3-基或6-氟嗒-3-基。
Q可以是6-甲基嗒-3-基。
Q可以是6-氟嗒-3-基。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：Q係1,2,4-三-3-基、嗒-3-基、6-甲基嗒-3-基、或6-氟嗒-3-基；R1係甲氧基、三氟甲氧基、氧雜環丁烷-3-基、3-氟氮雜環丁烷-1-基、3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基、或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基；R2係氫或氟； R3係氫或甲氧基；並且R4係甲氧基、乙氧基、或甲氧基甲基；其條件係當R1係甲氧基或三氟甲氧基時，則R3不是氫，和/或R4係甲氧基甲基。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：Q係嗒-3-基；並且R1係甲氧基或三氟甲氧基。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：Q係嗒-3-基；並且R1係氧雜環丁烷-3-基、3-氟氮雜環丁烷-1-基、3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基、或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：Q係嗒-3-基；R1係甲氧基；並且R3係甲氧基。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其中： Q係6-甲基嗒-3-基或6-氟嗒-3-基；並且R1係3-氟氮雜環丁烷-1-基、3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基、或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物選自由以下各項組成之群組：(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2R)-3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]丙醯胺； (2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[(3R)-3-(嗒-3-基胺基)吡咯啶-1-基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-N-[5-[[(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯胺；(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2R)-2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-(4-氟苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(5-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺； (2S)-2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；以及(2S)-2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物選自由以下各項組成之群組：(2S)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙醯胺；(2R)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；以及(2S)-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺。
本說明書中描述的化合物和鹽能以溶劑化形式和非溶劑化形式存在。例如，溶劑化形式可以是水合形式，如半水合物、一水合物、二水合物、三水合物或其可替代的數量。本發明包括所有該等溶劑化和非溶劑化形式的具有式(I)之化合物。
本說明書中描述的化合物和鹽的原子能以不同的同位素形式存在。本發明包括具有式(I)之化合物的所有同位素形式，包括11C或13C碳和1H、2H(氘)或3H(氚)氫。
本說明書中所描述的化合物和鹽可以按互變異構物的混合物存在。“互變異構物”係結構異構物，其存在於由氫原子的遷移產生的平衡中。本發明包括具有式(I)之化合物的所有互變異構物。
具有式(I)之化合物能以不同的非鏡像物形式製備。本發明包括具有式(I)之化合物的所有非鏡像物形式。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，其為95%，98%或99%的非鏡像物過量(%de)的單一非鏡像異構物。在一個實施方式中，單一非鏡像異構物以99%的非鏡像異構物過量(%de)存在。
認為抑制GLS1的化合物，即具有式(I)之化合物及其藥學上可接受的鹽預期在療法(例如治療至少部分由GLS1介導 的疾病或醫學病症，包括癌症)中是有用的。
在提及“癌症”的情況下，這包括非轉移性癌症和轉移性癌症兩者，使得治療癌症涉及治療原發性腫瘤和腫瘤轉移兩者。
在一個實施方式中，該癌症係轉移性癌症。
在一個實施方式中，該癌症係非轉移性癌症。
“GLS1抑制活性”係指相對於在不存在具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽的情況下的GLS1的活性而言，作為對具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽的存在的直接或間接反應，GLS1的活性降低。這種活性的降低可以是由於具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽與GLS1的直接相互作用，或者由於具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽與轉而影響GLS1活性的一種或多種其他因素的相互作用。例如，具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽可以藉由直接結合GLS1、藉由(直接或間接地)引起另一種因子降低GLS1活性、或藉由(直接或間接地)降低細胞或生物體中存在的GLS1的量而降低GLS1。
術語“療法”旨在具有其正常的含義：治療疾病或矯正或補償基礎病理。術語“療法”還包括“預防”，除非有相反的具體指示。術語“治療的”和“治療地”應以相應的方式被解釋。
術語“治療有效量”係指如本文任何實施方式中所述的具有式(I)之化合物的量，該量在受試者中有效提供“治 療”。在癌症的情況下，如在以上“療法”、“治療”和“預防”的定義中所述的，治療有效量可以在受試者中引起任何可觀察的或可測量的變化。例如，該有效量可以減少癌症或腫瘤細胞的數量；減少整體腫瘤大小；抑制或阻止腫瘤細胞浸潤到外周器官，包括例如軟組織和骨；抑制和停止腫瘤轉移；抑制和停止腫瘤生長；在一定程度上減輕與癌症相關的一種或多種症狀；降低發病率和死亡率；提高生活質量；或該等效果的組合。有效量可以是足以減少響應於GLS1活性抑制的疾病的症狀的量。對於癌症療法，例如可以藉由評估存活期、疾病進展時間(TTP)、應答率(RR)、響應期、和/或生命質量來測定體內療效。如由熟習該項技術者所認可的，有效量可以取決於給予途徑、賦形劑的使用、以及與其他藥劑共同使用而改變。例如，在使用聯合療法的情況下，在動物患者中，對於治療靶向的失調，當聯合時，本說明書中描述的具有式(I)之化合物或藥學上可接受的鹽的量和其他一種或多種藥學上有活性的藥劑的量係共同有效的。在本上下文中，如果當聯合時，該等組合量足以降低對如上所述的GLS1活性的抑制有反應的疾病的症狀，則該等組合量為“治療有效量”。通常，這樣的量可以由熟習該項技術者藉由例如從本說明書中描述的具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽的劑量範圍開始來確定或從其他一種或多種藥學活性化合物的批准的或公開的一個或多個劑量範圍來確定。
術語“預防”旨在具有其正常含義，並包括防止疾病發展的初級預防和繼發性預防，其中該疾病已經發展並且患者被暫時或永久保護對抗疾病的加重或惡化。
術語“治療”(treatment)與“療法”(therapy)同義地使用。類似地，術語“治療”可以被認為係應用療法，其中“療法”如本文所定義。
在一個實施方式中，提供了包含具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及至少一種藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥物組成物。在一個實施方式中，藥物組成物包括游離鹼形式的具有式(I)之化合物。在另一個實施方式中，藥物組成物包括具有式(I)之化合物的藥學上可接受的鹽。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，用於在療法中使用。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物，或其藥學上可接受的鹽，用於治療癌症。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽用於生產治療癌症的藥物之用途。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於治療由GLS1介導的疾病。在一個實施方式中，由GLS1介導的疾病係癌症。在一些實施方式中，癌症可以是乳癌(例如三陰性乳癌)、肺癌(例如非小細胞肺癌)、胰腺癌、腎癌或肝細胞癌。
“三陰性乳癌”係不表現或低表現***受體，孕酮受體和Her2/neu的基因的任何乳癌。
在一個實施方式中，提供具有式(I)之化合物或其 藥學上可接受的鹽在製備用於治療由GLS1介導的疾病的藥物中之用途。在一個實施方式中，由GLS1介導的疾病係癌症。在一些實施方式中，癌症可以是乳癌(例如三陰性乳癌)、肺癌(例如非小細胞肺癌)、胰腺癌、腎癌或肝細胞癌。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽用於生產治療癌症的藥物之用途。
在一個實施方式中，提供了抑制GLS1之方法，其包括給予具有式(I)之化合物。
在一個實施方式中，提供了用於治療其中GLS1的抑制在需要這種治療的溫血動物中是有益的疾病之方法，該方法包括向該溫血動物給予治療有效量的具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽。
“溫血動物”包括例如人。
在一個實施方式中，提供了用於在需要這種治療的溫血動物中治療癌症之方法，該方法包括向該溫血動物給予治療有效量的具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽。在一些實施方式中，癌症可以是乳癌(例如三陰性乳癌)、肺癌(例如非小細胞肺癌)、胰腺癌、腎癌或肝細胞癌。
在本說明書中所描述的癌症治療可以作為單一療法係有用的，或者除了給予具有式(I)之化合物以外，還可以包括常規手術、放射療法或化學療法；或該等另外的療法之組合。這種常規手術、放射療法或化學療法可以與具有式(I)之化合物同 時地、順序地或分開地給予，以進行治療。
因此，在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及至少一種另外的抗腫瘤物質，用於在癌症的治療中使用。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及至少一種另外的抗腫瘤物質，用於在癌症的治療中同時地、分開地或順序地使用。
在一個實施方式中，提供了具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在癌症的治療中使用，其中具有式(I)之化合物與至少一種另外的抗腫瘤物質被同時地、分開地或順序地給予。
在一個實施方式中，提供了在需要這種治療的溫血動物中治療癌症之方法，該方法包括向該溫血動物給予具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽以及至少一種另外的抗腫瘤物質，其中具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及另外的抗腫瘤物質的量在產生抗癌作用方面是共同有效的。
在一個實施方式中，提供了在需要這種治療的溫血動物中治療癌症之方法，該方法包括向所述溫血動物給予具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽，並且向所述溫血動物同時地、分開地或順序地給予至少一種另外的抗腫瘤物質，其中具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及另外的抗腫瘤物質的量在產生抗癌作用方面是共同有效的。
在任何實施方式中，該另外的抗腫瘤物質係紫杉烷。在一個實施方式中，紫杉烷係紫杉醇。在一個實施方式中，紫杉烷係多西他賽(docetaxel)。
在任何實施方式中，另外的抗腫瘤物質係鉑療。在一個實施方式中，鉑療係順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)或卡鉑(carboplatin)。
根據另一個實施方式，提供了套組，其包含：a)處於第一單位劑型的、具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽；b)處於第二單位劑型的第二抗腫瘤物質；c)用於容納該第一和第二單位劑型的容器；以及視情況，d)使用說明書。
具有式(I)之化合物及其藥學上可接受的鹽可以作為藥物組成物被給予，該等藥物組成物包含一種或多種藥學上可接受的稀釋劑或載體。因此，在一個實施方式中，提供了包含具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及至少一種藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥物組成物。
該等組成物可處於適合於以下的形式：口服使用(例如作為片劑、錠劑、硬或軟膠囊劑、水性或油性懸浮液、乳劑、可分散粉劑或顆粒劑、糖漿劑或酏劑)，局部使用(例如作為乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑、或者水性或油性溶液或懸浮液)，藉由吸入給予(例如作為細碎粉末或液體氣霧劑)，藉由吹入給予(例如作 為細碎粉末)，或腸胃外給予(例如作為用於靜脈內、皮下、肌內給藥的無菌水性或油性溶液)，或作為栓劑。可以藉由常規程序使用常規藥物賦形劑來獲得該等組成物。因此，旨在口服使用的組成物可以含有例如一種或多種著色劑、甜味劑、調味劑和/或防腐劑。
在一個實施方式中，提供了包含具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及至少一種藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥物組成物，用於在療法中使用。
在一個實施方式中，提供了包含具有式(I)之化合物或其藥學上可接受的鹽、以及至少一種藥學上可接受的稀釋劑或載體之藥物組成物，用於在癌症的治療中使用。在一些實施方式中，癌症可以是乳癌(例如三陰性乳癌)、肺癌(例如非小細胞肺癌)、胰腺癌、腎癌或肝細胞癌。
具有式(I)之化合物通常以5-5000mg/m2動物體面積，即約0.1-100mg/kg的單位劑量給予溫血-動物，並且這通常提供治療有效-劑量。單位劑型如片劑或膠囊劑通常含有例如1-250mg的活性成分。每日劑量將必然取決於所治療的宿主、具體的給予途徑、共給予的任何療法、以及正在治療的疾病的嚴重性而變化。因此，治療任何具體患者的行醫者可以確定最佳劑量。
藉由以下實例說明各種實施方式。本發明不被解釋為受限於該等實例。
在實例的製備期間，通常：a)操作在環境溫度下進行，即在約17℃至30℃的範圍內和在惰性氣體如氮氣的氣氛下進行，除非另有說明；b)藉由旋轉蒸發或使用Genevac真空設備進行蒸發，並且在藉由過濾去除殘餘固體之後進行後處理常式；c)使用Grace Resolve預填充的二氧化矽柱在自動Isco Combiflash Companion上並且在使用Redisep Gold C18柱的(反相閃蒸)Isco Combiflash Rf上進行快速層析純化；d)產率，在存在的情況下，不必是可達到的最大值；e)具有式(I)之終產物的結構藉由核磁共振(NMR)光譜法證實，伴隨在δ規模上測量的NMR化學位移值。使用布魯克高級(Bruker Avance)700(700MHz)，布魯克高級(Bruker Avance)500(500MHz)，布魯克400(400MHz)或布魯克300(300MHz)儀器測定質子磁共振譜；19F NMR在282Mhz或376MHz測定；13C NMR在75MHz或100MHz測定；除非另有說明，測量在約20℃-30℃進行；使用以下縮寫：s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；dd，雙二重峰；ddd，雙二重峰的雙重峰；dt，雙三重峰；bs，寬信號；f)還使用基於具有2996 PDA和2000amu ZQ單四極質譜儀的沃特斯(Waters)2790/95 LC系統的HPLC系統，在液相層析(LCMS)之後，藉由質譜法表徵具有式(I)之終產物。所用溶劑為A=水，B=乙腈，C=50：50乙腈：水0.1%甲酸並且D=50： 50乙腈：水0.1%氫氧化銨。在1.1mL/min的流速下，將5μL樣品注射到50×2.15μm Phenomenex Gemini NX柱上。梯度從95% A到95% B持續4.0分鐘，恒定5% C輸注(用於酸分析，D用於鹼分析)。在返回開始條件之前，將流動保持在95% B下0.5分鐘。在質譜儀上在正模式和負模式下在從150至850amu下並且在PDA上的220-320nm下獲得數據。還在使用具有樣品管理器、Acquity PDA和SQD質譜儀的沃特斯Acquity二元泵的UPLC系統上進行LCMS。所用溶劑為A1=0.1%甲酸(水溶液)，B1 0.1%甲酸的乙腈溶液，A2=0.1%氫氧化銨(水溶液)並且B2 0.1%氫氧化銨的乙腈溶液。在1mL/min的流速下，將1μL樣品注射到50×2.1 1.7um沃特斯BEH柱(在40℃)。梯度經1.30分鐘從97% A1至97% B1，然後保持0.2分鐘並返回到開始條件(用A1和B1代替A2和B2用於鹼分析)。在質譜儀上在正模式和負模式下在從150至1000amu下並且在PDA上的245-320nm下獲得數據；g)中間體通常沒有完全表徵，並且藉由薄層層析、質譜、HPLC和/或NMR分析評估純度；h)使用以下縮寫：h=小時；r.t.=室溫(約17℃-30℃)；conc.=濃縮；FCC=使用二氧化矽的快速柱層析；AIBN=偶氮二異丁腈；DCM=二氯甲烷；DIPEA=二異丙基乙胺；DMA=N,N-二甲基乙醯胺；DMF=N,N-二甲基甲醯胺；DMSO=二甲基亞碸；EDC=1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺；Et2O=***；EtOAc=乙酸乙酯；EtOH=乙醇；HATU=1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-***並[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽； HOBT=羥基苯並***；K2CO3=碳酸鉀；MeOH=甲醇；MeCN=乙腈；MgSO4=無水硫酸鎂；Na2SO4=無水硫酸鈉；NBS=N-溴琥珀醯亞胺；TFA=三氟乙酸；THF=四氫呋喃；sat.=飽和水溶液。
在下面的許多實例中，描述了化合物的非鏡像物對。例如，實例1(a)和實例1(b)的化合物表示化合物的非鏡像物對，其在單一反應的產物中形成混合物，隨後分離。在這樣的實例中，立體化學的任何指定不是絕對的。作為說明，實例1(a)和1(b)涉及所述化合物的(2S,3R)和(2R,3R)非鏡像異構物；然而，並不意味著實例1(a)被確定地指定為(2S,3R)非鏡像異構物並且實例1(b)被確定為(2R,3R)非鏡像異構物。
實例1(a)和1(b)
(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，將HATU(351mg，0.92mmol)添加到在N-甲基-2-吡咯啶酮(2mL)和DMF(3mL)中的[2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙醯基]氧鋰(中間體17，170mg，0.71mmol)，N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，187mg，0.71mmol)和DIPEA(0.372mL，2.13mmol)中。將所得溶液在室溫下攪拌45分鐘。將該溶液用MeOH(15mL)稀釋並通過20g SCX柱，用MeOH沖洗，然後用1N NH3的MeOH溶液洗提產物。在減壓下蒸發溶劑，得到粗產物，將其溶於MeOH/DCM中，並蒸發至矽膠上。將殘餘物藉由FCC(SiO2，0至12% MeOH的DCM溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到為膠狀物的非鏡像異構物混合物(280mg)。藉由製備型HPLC(Phenomenex Lux C4柱，20μm，50mm×250mm，MeOH，120mL/min)分離非鏡像異構物，得到：第一洗提異構物實例1(a)，2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(65mg，23%)。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)δ 2.232.32(1H,m),3.403.59(3H,m),3.71(1H,s), 3.803.93(2H,m),4.14(2H,dd),4.37(1H,s),4.875.48(1H,m),6.43(1H,s),6.58(1H,dd),6.80(1H,ddd),6.85(1H,dd),7.17(1H,dd),7.32(1H,dd),7.64(1H,d),8.47(1H,dd),12.10(1H,s)；m/z：ES+[M+H]+ 485。
第二洗提異構物實例1(b)2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(68mg，24%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.06(1H,dd),2.28(1H,td),3.42-3.59(3H,m),3.75(1H,dd),3.8-3.93(2H,m),4.14(2H,dt),4.37(1H,dt),4.88(1H,s),5.48(1H,ddd),6.44(1H,dd),6.57-6.61(1H,m),6.81(1H,d),6.86(1H,dd),7.18(1H,t),7.32(1H,dd),7.65(1H,d),8.47(1H,dd),12.12(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+ 485。
實例2(a)和2(b)
(2S)-2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，將HATU(225mg，0.59mmol)添加到在N-甲基-2-吡咯啶酮(2mL)和DMF(3mL)中的2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸(中間體22，117mg，0.46mmol)、N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，120mg，0.46mmol)和DIPEA(0.239mL，1.37mmol)中。將所得溶液在室溫下攪拌45分鐘。將該溶液用MeOH(15mL)稀釋並通過20g SCX2柱，用MeOH沖洗以除去雜質，隨後用1N NH3的MeOH溶液洗提產物。在減壓下蒸發溶劑，得到粗產物，將其藉由FCC(SiO2，0至6% MeOH的DCM溶液)純化。蒸發純級分，得到為膠狀物的非鏡像異構物的混合物的產物(135mg)。藉由製備型HPLC(Phenomenex Lux C2柱，20μm，50mm×250mm，MeOH/EtOH，120mL/min)分離非鏡像異構物，得到：第一洗提異構物實例2(a)2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(55mg，41%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.07(1H,dt),2.22-2.32(1H,m),3.48(1H,dd),3.51-3.59(2H,m),3.74(1H,dd),4.25(4H,t),4.37(1H,dq),4.89 (1H,s),6.49-6.56(1H,m),6.67(1H,d),6.81-6.91(2H,m),7.21(1H,t),7.31(1H,dd),7.64(1H,d),8.46(1H,dd),12.11(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 503。
第二洗提異構物實例2(b)2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(61mg，45%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)2.00-2.11(1H,m),2.22-2.31(1H,m),3.48(1H,dd),3.52-3.59(2H,m),3.74(1H,dd),4.25(4H,t),4.36(1H,dt),4.88(1H,s),6.52(1H,dd),6.66(1H,s),6.82-6.91(2H,m),7.21(1H,t),7.31(1H,dd),7.61(1H,d),8.47(1H,dd),12.11(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 503。
實例3(a)和3(b)
(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，將HATU(216mg，0.57mmol)添加到在N-甲基-2-吡咯啶酮(2mL)和在DMF(3mL)中的2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙酸(中間體25，110mg，0.44mmol)、N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，115mg，0.44mmol)和DIPEA(0.229mL，1.31mmol)中。將所得溶液在室溫下攪拌45分鐘。將該溶液用MeOH(15mL)稀釋並通過20g SCX2柱，用MeOH沖洗以除去雜質，隨後用1N NH3的MeOH溶液洗提產物。在減壓下蒸發溶劑，得到粗產物。將粗產物溶解於MeOH/DCM中，並蒸發至矽膠上。藉由FCC(SiO2，0至10% MeOH的DCM溶液)純化殘餘物。將純級分蒸發至乾，得到為膠狀物的非鏡像物混合物形式的產物(140mg)。藉由製備型HPLC(Lux C4柱，20μm，50mm×250mm，100% MeOH，120mL/min)分離合併的非鏡像異構物，得到：第一洗提異構物實例3(a)2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(74mg，15%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.13(1H,td),2.3-2.38(1H,m),3.30(3H,s), 3.35(3H,s),3.54(1H,dd),3.58-3.67(4H,m),3.81(1H,dd),4.05-4.12(2H,m),4.37(1H,ddd),4.44(1H,dq),4.92(1H,s),6.45(1H,dd),6.61(1H,d),6.82(1H,d),6.91(1H,dd),7.21(1H,t),7.38(1H,dd),7.71(1H,d),8.53(1H,dd),12.16(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 497。
第二洗提異構物實例3(b)2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(67mg，14%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.11(1H,dq),2.33(1H,dt),3.29(3H,s),3.34(3H,s),3.54(1H,dd),3.58-3.66(4H,m),3.80(1H,dd),4.05-4.12(2H,m),4.36(1H,ddd),4.4-4.47(1H,m),4.91(1H,s),6.44(1H,dd),6.60(1H,s),6.82(1H,d),6.91(1H,dd),7.20(1H,t),7.37(1H,dd),7.69(1H,d),8.53(1H,dd),12.15(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 497。
實例4(a)和4(b)
(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在21℃下，在氮氣下，將HATU(329mg，0.87mmol)添加到在DMF(6mL)中的2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-乙酸(中間體28，196mg，0.87mmol)、N2-[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體6，200mg，0.72mmol)和DIPEA(0.252mL，1.44mmol)中。將所得溶液在21℃下攪拌2小時。使用SCX柱藉由離子交換層析法純化粗混合物。使用1M NH3的MeOH溶液將所需產物從柱上洗提，將純級分蒸發至乾，得到粗產物，將其藉由FCC(SiO2，0至12% MeOH的DCM溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到棕色膠狀物，藉由FCC(SiO2，0至8% MeOH的DCM溶液)再純化。將純級分蒸發至乾，得到為黃色膠狀物的非鏡像異構物的混合物。非鏡像異構物藉由製備型HPLC(Lux C2柱，20μm，50mm×250mm，100% MeOH，120mL/min)分離，得到：第一洗提異構物實例4(a)2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(21mg，6%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)δ 1.982.10(1H,m),2.182.31(1H,m),2.40(3H,s),3.30(9H,dd),3.43(1H,dd),3.47(2H,dd),3.724.36(1H,m),4.87(1H,s), 6.45-7.40(1H,m),6.62(2H,dd),6.81(1H,d),7.21(1H,s),7.64(1H,s),12.12(1H,s)；m/z：ES+[M+H]+ 486。
第二洗提異構物實例4(b)2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(18mg，5%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)δ 1.98-2.10(1H,m),2.18-2.31(1H,m),2.40(3H,s),3.30(9H,s),3.43(1H,m),3.47-3.61(2H,m),3.72(1H,m),4.36(1H,m),4.87(1H,s),6.45(1H,t),6.62(2H,d),6.81(1H,d),7.21(1H,d),7.64(1H,s),12.12(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 486。
實例5(a)和5(b)
(2R)-3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡嗒啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]丙醯胺和(2S)-3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]丙醯胺
將DIPEA(0.1mL，0.57mmol)、HATU(173.28mg，0.456mmol)和3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸(中間體29，0.09 g，0.418mmol)添加到在DMF(4mL)中的N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，0.1g，0.38mmol)溶液中。將混合物在室溫下攪拌18小時。將其用水(5mL)稀釋，萃取到DCM(10mL)中，蒸發並藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。將純級分通過SCX柱，用甲醇洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。將鹼性級分蒸發至乾，並藉由SFC(Lux C1柱5μm，21.2mm×250mm，在40℃，50mL/min的流速，50：50 MeOH：CO2，包含0.1% v/v NH3)分離非鏡像異構物的混合物，得到：第一洗提異構物實例5(a)3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]丙醯胺(25.3mg，14.6%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,25℃)δ 2.00-2.12(1H,m),2.22-2.31(1H,m),3.25(3H,s),3.45-3.59(4H,m),3.71-3.79(4H,m),3.97(1H,t),4.03-4.10(1H,m),4.31-4.43(1H,m),6.83-6.94(4H,m),7.26(1H,t),7.33(1H,dd),7.68(1H,d),8.48(1H,dd),12.23(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 456。
第二洗提異構物實例5(b)3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]丙醯胺(22.3mg，12.8%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,25℃)δ 2.00-2.14(1H,m),2.22-2.36(1H,m),3.25(3H,s),3.43-3.52(2H,m),3.52-3.61(2H,m),3.69-3.78(4H,m),3.97(1H,t),4.01-4.10(1H,m),4.31-4.43(1H,m),6.79-6.95(4H,m),7.26(1H,t), 7.33(1H,dd),7.68(1H,d),8.47(1H,dd),12.23(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 456。
實例6(a)和6(b)
(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，在N2下，將N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，0.2g，0.76mmol)和2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-乙酸(中間體33，0.18g，0.76mmol)溶解到DMF(2mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.34mL，1.943mmol)和HATU(0.29g，0.76mmol)，然後在室溫下攪拌1小時。使粗混合物通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提。將鹼性級分藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。將純級分在減壓 下蒸發並通過2g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提。在減壓下蒸發鹼性級分，得到產物為米色泡沫的非鏡像異構物的混合物。藉由SFC(Amy-C柱，5μm，20mm×250mm，含有NH3作為改性劑的MeOH/CO2 45%，50mL/min)分離非鏡像異構物，得到：第一洗提異構物實例6(a)2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(70mg，19%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 1.16(3H,t),2.04(1H,dq),3.38-3.50(3H,m),3.51-3.58(2H,m),3.66-3.78(7H,m),4.35(1H,q),4.96(1H,s),6.44(1H,t),6.62(2H,d),6.84(1H,dd),7.30(1H,dd),7.67(1H,d),8.45(1H,dd),11.96(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 486。
第二洗提異構物實例6(b)2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(74mg，20%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 1.18(3H,t),2.07(1H,dt),2.27(1H,dt),3.60-3.39(5H,m),3.79-3.70(6H,m),4.38(1H,q),4.99(1H,s),6.47(1H,t),6.64(2H,d),6.88(1H,dd),7.34(1H,dd),7.71(1H,d),8.48(1H,dd),12.15(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 486。
實例7(a)和7(b)
(2S)-2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[(3R)-3-(嗒 -3-基胺基)吡咯啶-1-基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基 -N-[5-[(3R)-3-(嗒 -3-基胺基)吡咯啶-1-基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，在氮氣下，將N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，108mg，0.41mmol)和2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸(中間體34，110mg，0.41mmol)溶解到DMF(3.5mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.11mL，0.61mmol)和HATU(186mg，0.49mmol)，然後在室溫下攪拌過夜。將粗混合物用水(50mL)稀釋，然後萃取到DCM(3×50mL)中。將有機層乾燥(MgSO4)，過濾，然後蒸發，得到橙色膠狀物，將其藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併含有所需產物的級分，蒸發並通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分，得到非鏡像異構物的混合物。然後藉由SFC(Lux C3柱，5μm，21.2mm×250mm，含有NH3改性劑的MeOH/CO2 30%，50mL/min)分離非鏡像異構物，得到： 第一洗提異構物實例7(a)2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基1-2-甲氧基-N-[5-[(3R)-3-(嗒-3-基胺基)吡咯啶-1-基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(11mg，5%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 1.94-2.12(1H,m),2.19-2.36(1H,m),3.23(3H,s),3.27(3H,s),3.43-3.61(3H,m),3.62-3.77(3H,m),4.07-4.19(2H,m),4.22-4.30(1H,m),4.32-4.43(1H,m),4.87(1H,s),6.66(1H,dd),6.73-6.84(1H,m),6.86(1H,dd),7.04(1H,dd),7.32(1H,dd),7.70(1H,d),8.47(1H,dd),12.18(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 515。
第二洗提異構物實例7(b)2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[(3R)-3-(嗒-3-基胺基)吡咯啶-1-基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(11mg，5%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 2.00-2.13(1H,m),2.22-2.34(1H,m),3.23(3H,s),3.28(3H,s),3.42-3.60(3H,m),3.63-3.80(3H,m),4.09-4.18(2H,m),4.24-4.33(1H,m),4.43-4.45(1H,m),4.87(1H,s),6.67(1H,dd),6.75-6.83(1H,m),6.87(1H,dd),7.05(1H,dd),7.33(1H,dd),7.70(1H,d),8.48(1H,dd),12.18(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 515。
實例8(a)和8(b)
(2S)-2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙 醯胺
在室溫下，在N2下，將N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，100mg，0.38mmol)和2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸鋰(中間體38，100mg，0.38mmol)溶解到DMF(2.0mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.10mL，0.57mmol)和HATU(173mg，0.46mmol)，然後在室溫下攪拌過夜。使粗混合物通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分，得到橙色膠狀物。粗產物藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併含有級分的產物，蒸發並通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分，得到為灰白色固體(94mg)的非鏡像異構物的混合物。非鏡像異構物藉由製備型HPLC(Lux C4柱，20μm，50mm×250mm，MeOH/EtOH，120mL/min)分離，得到：第一洗提異構物實例8(a)2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺 基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(33mg，17%)。1H NMR(400MHz,DMSO,31℃)2.03-2.13(1H,m),2.24-2.33(1H,m),3.49(1H,dd),3.54-3.61(2H,m),3.75(1H,dd),3.97(2H,dd),4.19-4.31(2H,m),4.35-4.43(1H,m),4.89(1H,s),5.36-5.56(1H,m),6.71(1H,dd),6.8-6.89(2H,m),7.07(1H,dd),7.32(1H,dd),7.65(1H,d),8.48(1H,dd),12.13(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 503。
第二洗提異構物實例8(b)2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(34mg，18%)。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)2.01-2.11(1H,m),2.24-2.34(1H,m),3.47-3.61(3H,m),3.76(1H,dd),3.97(2H,dd),4.18-4.32(2H,m),4.35-4.43(1H,m),4.88(1H,s),5.35-5.57(1H,m),6.71(1H,dd),6.81-6.89(2H,m),7.07(1H,dd),7.33(1H,dd),7.64(1H,d),8.48(1H,d),12.14(1H,s),21指定的Hs：加上未觀察到的OMe質子-在3.30ppm下被溶劑遮蔽。m/z：ES+[M+H]+ 503。
實例9(a)和9(b)
(2S)-N-[5-[[(3R)-1-(6-氟嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯胺和(2R)-N-[5-[[(3R)-1-(6-氟嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯胺
在室溫下，在N2下，將N2-[(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體9，0.11g，0.389mmol)和[2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯基]氧鋰(中間體24，0.12g，0.466mmol)溶解到DMF(2mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.34mL，1.943mmol)和HATU(0.4mL，0.389mmol)，然後在室溫下攪拌持續2小時。將粗混合物靜置過夜，然後通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分，得到橙色膠狀物，將其藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併純級分，蒸發並通過1g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提，得到為灰白色固體的非鏡像異構物的混合物。非鏡像異構物的混合物藉由製備型手性HPLC(Phenomenex Lux C4柱，20μm，50mm×250mm，洗提液MeOH，120mL/min)分離，得到：第一洗提異構物實例9(a)N-[5-[[(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-甲氧基-2-[3-(3-甲 氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯胺(39.1mg，19.5%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 2.07(1H,dt),2.27(1H,dt),3.24(3H,s),3.28(3H,s),3.46(1H,dd),3.50-3.61(4H,m),3.73(1H,dd),4.00-4.07(2H,m),4.27-4.42(2H,m),4.84(1H,s),6.39(1H,dd),6.55(1H,s),6.76(1H,d),7.12-7.20(2H,m),7.36(1H,dd),7.63(1H,d),12.16(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+ 515。
第二洗提異構物實例9(b)N-[5-[[(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯胺(42.8mg，21.4%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 2.05(1H,td),2.27(1H,dt),3.24(3H,s),3.28(3H,s),3.47(1H,dd),3.5-3.6(4H,m),3.73(1H,dd),3.99-4.07(2H,m),4.27-4.4(2H,m),4.83(1H,s),6.39(1H,dd),6.55(1H,d),6.77(1H,d),7.12-7.2(2H,m),7.36(1H,dd),7.59(1H,d),12.17(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 515。
實例10(a)和10(b)
(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，在N2下，將N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，134mg，0.51mmol)和2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-乙酸鋰(中間體40，137mg，0.51mmol)溶解到DMF(2mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.13mL，0.76mmol)和HATU(232mg，0.61mmol)，然後在室溫下攪拌過夜。使粗混合物通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分，得到橙色膠狀物，將其藉由製備型HPLC(。SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併含有所需物質的級分，蒸發並通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分，得到為灰白色固體(123mg)的非鏡像異構物的混合物。非鏡像異構物藉由製備型HPLC(Lux C4柱，20μm，50mm×250mm，100% MeOH，120mL/min)分離，得到：第一洗提異構物實例10(a)2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3- 基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(45mg，17%)。1H NMR(400MHz,DMSO,22℃)2.07(1H,dq),2.28(1H,dt),3.28(3H,s),3.49(1H,dd),3.52-3.59(2H,m),3.71(3H,s),3.74(1H,dd),3.80-3.86(1H,m),3.86-3.92(1H,m),4.06-4.20(2H,m),4.37(1H,dt),4.82(1H,s),5.47(1H,dtd),5.98(1H,t),6.13-6.21(1H,m),6.39-6.45(1H,m),6.86(1H,dd),7.33(1H,dd),7.67(1H,d),8.48(1H,dd),12.13(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 515。
第二洗提異構物實例10(b)2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(46mg，17%)。1H NMR(400MHz,DMSO,22℃)2.06(1H,dq),2.27(1H,dt),3.28(3H,s),3.49(1H,dd),3.53-3.59(2H,m),3.71(3H,s),3.75(1H,dd),3.80-3.86(1H,m),3.87-3.92(1H,m),4.13(2H,dt),4.37(1H,dt),4.81(1H,s),5.47(1H,dtt),5.97(1H,t),6.13-6.23(1H,m),6.38-6.45(1H,m),6.87(1H,dd),7.33(1H,dd),7.64(1H,d),8.48(1H,dd),12.15(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 515。
實例11(a)和11(b)
(2S)-2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，在N2下，將N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，100mg，0.38mmol)和2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]乙酸(中間體44，191mg，0.68mmol)溶解到DMF(3.5mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.1mL，0.57mmol)和HATU(173mg，0.46mmol)，然後在室溫下攪拌過夜。將粗混合物用水(50mL)稀釋並萃取到DCM(50mL×2)中。將有機層乾燥(MgSO4)，過濾並蒸發，得到橙色膠狀物，將其藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併含有所需物質的級分，蒸發並通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分，得到黃色固體。藉由製備型HPLC(Phenomenex Lux C2柱，20μm，50mm×250mm，使用EtOH/MeOH的50/50混合物作為洗提劑，120mL/min)分離非鏡像異構物的混合物，得到：第一洗提異構物實例11(a)2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺 基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(9.1mg，4.5%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 2.28(1H,dd),2.35-2.47(1H,m),3.48(3H,s),3.56-3.71(2H,m),3.73-3.83(4H,m),3.87(1H,dd),4.52(1H,s),4.84(1H,s),6.25(1H,s),6.56(1H,dd),6.71-6.76(1H,m),6.89-6.95(2H,m),7.11(1H,dd),8.48(1H,dd).m/z：ES+[M+H]+ 526。
第二洗提異構物實例11(b)2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(10.2mg 5.1%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 2.20-2.31(1H,m),2.35-2.47(1H,m),3.47(3H,s),3.56-3.78(3H,m),3.80(3H,s),3.84-3.93(1H,m),4.50(1H,s),4.84(1H,s),6.14(1H,s),6.57(1H,d),6.73(1H,s),6.92(2H,d),7.12(1H,dd),8.49(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 526。
實例12(a)和12(b)
(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，在N2下，將N2-[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體6，0.11g，0.389mmol)和[2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯基]氧鋰(中間體24，0.12g，0.466mmol)溶解到DMF(2mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.34mL，1.943mmol)和HATU(0.4mL，0.389mmol)，然後在室溫下攪拌持續2小時。使粗混合物通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分並藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併純級分，蒸發並通過1g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提，得到為灰白色固體(98mg)的非鏡像異構物的混合物。非鏡像異構物藉由製備型HPLC(Lux C4柱，20μm，50mm×250mm，100% MeOH，120mL/min)分離，得到：第一洗提異構物實例12(a)2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(34mg，18%)。1H NMR(400 MHz,DMSO,30℃)2.00-2.11(1H,m),2.30(1H,dt),2.41(3H,s),3.25(3H,s),3.45(1H,dd),3.49-3.62(4H,m),3.73(1H,dd),4.04(2H,t),4.28-4.41(2H,m),4.86(1H,s),6.40(1H,d),6.55(1H,s),6.77(1H,d),6.82(1H,d),7.15(1H,t),7.22(1H,d),7.62(1H,d),12.06(1H,s)；m/z：ES+[M+H]+ 511。
第二洗提異構物實例12(b)2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(38mg，19%)。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)2.05(1H,dt),2.27(1H,dt),2.42(3H,s),3.25(3H,s),3.46(1H,dd),3.5-3.61(4H,m),3.74(1H,dd),4.04(2H,t),4.28-4.41(2H,m),4.85(1H,s),6.39(1H,dd),6.55(1H,s),6.77(1H,d),6.82(1H,d),7.15(1H,t),7.22(1H,d),7.58(1H,d),12.09(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 511。
實例13(a)和13(b)
(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基1-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
將2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯基]氧鋰(中間體24，0.12g，0.475mmol)和N2-[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體12，0.13g，0.475mmol)稱重到圓底燒瓶中。添加DMF(3mL)和DIPEA(0.15g，1.187mmol)，然後加入HATU(0.18g，0.475mol)，將所得溶液在室溫下攪拌，在N2下攪拌15小時，將反應混合物加入SCX柱並用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。在減壓下蒸發鹼性級分，並藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，25mL/min)純化殘餘物。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。將含有所需物質的級分在減壓下蒸發，得到為橙色膠狀物的非鏡像異構物的混合物。藉由製備型手性HPLC(Lux C1柱，5μm，21mm×250mm，洗提液20：80庚烷：EtOH，含有0.1% NH3，21mL/min)分離非鏡像異構物，得到：第一洗提異構物實例13(a)2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(55.2mg，16.5%)。1H NMR (400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.09(1H,s),2.30(1H,d),3.24(3H,s),3.29(3H,s),3.53-3.90(6H,m),4.03(2H,tt),4.27-4.42(2H,m),4.86(1H,s),6.40(1H,ddd),6.55(1H,s),6.74-6.80(1H,m),7.15(1H,t),7.70(1H,d),8.32(1H,d),8.61(1H,d),12.17(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 498。
第二洗提異構物實例13(b)2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(54.2mg，13.7%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 1.98-2.08(1H,m),2.19-2.28(1H,m),3.18(3H,s),3.22(3H,s),3.47-3.84(6H,m),3.93-4.02(2H,m),4.21-4.36(2H,m),4.80(1H,s),6.34(1H,ddd),6.49(1H,s),6.67-6.74(1H,m),7.09(1H,t),7.64(1H,d),8.26(1H,d),8.55(1H,d),12.11(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 498。
實例14(a)和14(b)
(2S)-2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
向圓底燒瓶中稱取N2-[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體12，0.06g，0.232mmol)、[2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙醯基]氧鋰(中間體21，0.06g，0.232mmol)。添加DMF(2mL)和DIPEA(0.1mL，0.579mmol)，隨後加入HATU(0.09g，0.232mmol)，將所得溶液在室溫下攪拌15小時。將反應混合物加入SCX柱並用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。在減壓下蒸發鹼性級分，並將殘餘物藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。減壓除去溶劑，得到為奶油狀固體的非鏡像異構物的混合物。非鏡像異構物藉由手性製備型HPLC(Amy C柱，5μm，20mm×250mm，洗提液20：80庚烷：EtOH，含有0.1%NH3的EtOH，21mL/min)分離，得到：第一洗提異構物實例14(a)2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(22.1mg，18.9%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.02-2.12(1H,m),2.23-2.34(1H, m),3.29(3H,s),3.77(4H,s),4.20-4.42(5H,m),4.89(1H,s),6.49-6.57(1H,m),6.67(1H,t),6.86-6.92(1H,m),7.22(1H,t),7.67(1H,d),8.32(1H,d),8.61(1H,d),12.19(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 504。
第二洗提異構物實例14(b)2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(20.8mg，17.8%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.02-2.13(1H,m),2.24-2.35(1H,m),3.29(3H,s),3.77(4H,s),4.20-4.42(5H,m),4.89(1H,s),6.50-6.56(1H,m),6.65-6.69(1H,m),6.86-6.91(1H,m),7.22(1H,t),7.69(1H,d),8.31(1H,d),8.61(1H,d),12.19(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 504。
實例15(a)和15(b)
(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
向圓底燒瓶中稱取N2-[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體12，0.05g，0.17mmol)、[2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙醯基]氧鋰(中間體17，0.04g，0.17mmol)。添加DMF(2mL)和HATU(0.06g，0.17mmol)，隨後添加DIPEA(0.07mL，0.426mmol)，並將得到的溶液在室溫下攪拌15小時。將反應混合物加入SCX柱並用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。在減壓下蒸發鹼性級分，並將殘餘物藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。減壓除去溶劑，得到為奶油狀固體的非鏡像異構物的混合物。非鏡像異構物藉由製備型手性HPLC(Amy-C柱，5μm，20mm×250mm，洗提液20：80庚烷：EtOH，含有0.1%NH3，21mL/min)分離，得到：第一洗提異構物實例15(a)2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(17.9mg，21.7%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.04-2.13(1H,m),2.23-2.35(1H,m), 3.28(3H,s),3.47-3.94(6H,m),4.06-4.20(2H,m),4.35(1H,s),4.84(1H,s),5.55(1H,tt),6.39-6.46(1H,m),6.58(1H,t),6.80(1H,dt),7.16(1H,t),7.62(1H,s),8.31(1H,d),8.60(1H,d),12.18(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 486。
第二洗提異構物實例15(b)2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(19mg，23%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.03-2.13(1H,m),2.23-2.34(1H,m),3.28(s,3H),3.50-3.93(6H,m),4.08-4.21(2H,m),4.36(1H,s),4.87(1H,s),5.38-5.58(1H,m),6.41-6.46(1H,m),6.58(1H,t),6.77-6.83(1H,m),7.17(1H,t),7.68(1H,d),8.32(1H,d),8.61(1H,d),12.18(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 486。
實例16(a)和16(b)
(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
將DIPEA(0.1mL，0.568mmol)添加到在DMF(3mL)中的2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-乙酸(中間體28，0.13g，0.568mmol)和N2-[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體12，0.15g，0.568mmol)中。將HATU(0.22g，0.568mmol)添加到溶液中，並將反應混合物在室溫下在氮氣下攪拌24小時。在減壓下除去溶劑，得到深橙色油狀物，將其溶於DCM中，吸收到二氧化矽上並藉由FCC(SiO2，1%-10% MeOH的DCM溶液)純化。合併純的級分，減壓除去溶劑，得到深橙色油狀物，將其藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)進一步純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併純級分，減壓蒸發，通過2g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提。將鹼性級分蒸發至乾，得到為灰白色泡沫(132mg)的非鏡像異構物的混合物。非鏡像異構物藉由製備型HPLC(Lux C4柱，5μm，20mm×250mm，洗提劑MeOH，含有二乙醇胺改性劑，21mL/min)分離。將單獨的非鏡像異構物溶於DCM中，用水洗滌，蒸發有機層，得到：第一洗提異構物實例16(a)2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(23.2mg，8.6%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 2.09(1H,d)2.30(1H,dd),3.30(3H,d),3.74(6H,s),3.55-3.91(4H,m),4.38(1H,s),4.89(1H,s),6.47(1H,t),6.64(2H,d),7.71(1H,d),8.32(1H,d),8.61(1H,d),12.17(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 472。
第二洗提異構物實例16(b)2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(28.3mg，10.5%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 2.12(1H,s),2.31(1H,d),3.33(3H,s),3.60-3.73(3H,m),3.77(6H,s),3.80-3.89(1H,m),4.40(1H,s),4.92(1H,s),6.50(1H,t),6.67(2H,d),7.73(1H,d),8.35(1H,d),8.64(1H,d),12.19(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 472。
實例17(a)和17(b)
(2S)-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
將2-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-乙酸(中間體47，0.14g，0.57mmol)和N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，0.15g，0.57mmol)稱重到圓底燒瓶中。添加DMF(3mL)和DIPEA(0.18g，1.424mmol)隨後添加 HATU(0.22g，0.57mmol)，並將所得溶液在室溫下在N2下攪拌3小時。減壓除去溶劑。將殘餘的膠狀物溶於DCM中，吸收到二氧化矽上並藉由FCC(SiO2，在DCM中的1%至8% MeOH)純化。在減壓下蒸發純的級分，得到黃色膠狀物，將其藉由製備型手性SFC(Amy-C柱，5μm，20mm×250mm，含有40% NH3作為改性劑的洗提劑MeOH/CO2)分離。在波長210nm處的流速為50mL/min，得到： 第一洗提異構物實例17(a)[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(23mg，8.2%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 1.19(3H,t),2.02-2.10(1H,m),2.21-2.36(1H,m),3,37-3.63(5H,m),3.74(1H,dd),4.40-4.36(1H,m),5.12(1H,s),6.87(1H,dd),7.16(1H,dd),7.25(1H,t),7.28-7.29(1H,m),7.30-7.38(2H,m),7.45(1H,t),7.72(1H,d),8.48(1H,dd),12.27(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 492。
第二洗提異構物實例17(b)[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(0.025g，8.9%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 1.19(3H,t),2.03-2.10(1H,m),2.24-2.32(1H,m),3.38-3.62(5H,m),3.74(1H,dd),4.36-4.40(1H,m),5.12(1H,s),6.86(1H,dd),7.16(1H,t),7.24(1H,t),7.26-7.38(3H,m),7.45(1H,t),7.72(1H,d),8.48(1H,dd),12.27(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 492。
實例18(a)和18(b)
(2S)-2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在21℃下，在N2下，將HATU(520mg，1.37mmol)添加到在DMF(8mL)中的N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，300mg，1.14mmol)、2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]乙酸(中間體48，304mg，1.37mmol)和DIPEA(0.198mL，1.14mmol)中。將所得溶液在21℃下攪拌2小時。將粗產物藉由離子交換層析法使用SCX柱純化。使用1M NH3的MeOH溶液從柱上洗提所需產物，蒸發純級分。粗產物藉由FCC(SiO2，0至15% 1M NH3的MeOH的EtOAc溶液)純化。將純級分蒸發至乾燥，得到固體。將粗產物藉由製備型HPLC(Waters XBridge OBD C18柱，5μm，30mm×100mm)純化。使用極性漸減的含有1% NH4OH的水和MeCN的混合物作為流動相。將含有所需化合物的級分蒸發至乾，得到為非鏡像異構物的 混合物的產物。非鏡像異構物藉由製備型HPLC(Phenomenex Lux C4柱，20μm，50mm×250mm，MeOH/IPA 50/50，120mL/min)分離，得到：第一洗提異構物實例18(a)2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(45mg，8%)。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)δ 2.12(1H,td),2.23-2.40(1H,m),3.38(3H,s),3.46-3.69(3H,m),3.74-3.86(1H,m),4.26-4.35(1H,m),4.41-4.50(1H,m),4.65(2H,ddd),4.90-5.11(3H,m),6.91(1H,dd),7.27-7.49(4H,m),7.57(1H,s),7.70(1H,d),8.53(1H,dd),12.24(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 468。
第二洗提異構物實例18(b)2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(38mg，7%)。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)δ 2.12(1H,td),2.23-2.40(1H,m),3.38(3H,s),3.46-3.69(3H,m),3.74-3.86(1H,m),4.26-4.35(1H,m),4.41-4.50(1H,m),4.65(2H,ddd),4.90-5.11(3H,m),6.91(1H,dd),7.27-7.49(4H,m),7.57(1H,s),7.70(1H,d),8.53(1H,dd),12.24(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 468。
實例19(a)和19(b)
(2S)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙醯胺和(2R)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2- 基]-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙醯胺
將DIPEA(0.15mL，0.85mmol)、HATU(260mg，0.68mmol)和2-乙氧基-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸(中間體51，180mg，0.68mmol)添加到在DMF(4mL)中的N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，150mg，0.57mmol)溶液中。將混合物在室溫下攪拌18小時。然後將其用水(5mL)稀釋，然後萃取到DCM(10mL)中，蒸發並藉由製備型HPLC(XBridge OBD C18柱，5μm，50mm×19mm，流速為25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.3mL/L NH4OH的水和MeCN作為流動相。蒸發純級分，通過SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。將鹼性級分蒸發並真空乾燥，得到非鏡像異構物混合物形式的產物。然後藉由HPLC(Lux C4柱，5μm，20mm×250mm，包含NH3改性劑的MeOH，21mL/min)分離非鏡像異構物，得到：第一洗提異構物實例19(a)2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙醯胺，(46mg，16%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6, 21℃)δ 1.19(3H,t),1.97-2.15(1H,m),2.18-2.36(1H,m),3.40-3.65(5H,m),3.65-3.81(1H,m),4.32-4.46(1H,m),5.17(1H,s),6,87(1H,dd),7.28-7.40(2H,m),7.40-7.59(3H,m),7,74(1H,d),8.48(1H,dd),12.32(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 510。
第二洗提異構物實例19(b)2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙醯胺(39mg，14%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 1.19(3H,t),2.06(1H,m),2.20-2.35(1H,m),3.39-3.63(5H,m),3.74(1H,m),4.34-4.44(1H,m),5.17(1H,s),6.88(1H,dd),7.28-7.41(2H,m),7.42-7.58(3H,m),7,73(1H,d),8.48(1H,d),12.32(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 510。
實例20(a)和20(b)
(2R)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2S)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
將DIPEA(0.12mL，0.71mmol)、HATU(216mg，0.568mmol)和2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-乙酸(中間體52，0.13g，0.474mmol)添加到在DMF(4mL)中的N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，0.12g，0.474mmol)溶液中。將混合物在室溫下攪拌18小時。然後將其用水(5mL)稀釋，萃取到DCM(10mL)中，蒸發並藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。將純級分通過SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分。仍然看到雜質，所以藉由製備型HPLC(XBridge OBD C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)再次純化材料。使用極性比率漸減的含有0.3mL/L NH4OH的水和MeCN作為流動相。將純級分蒸發至乾，並藉由製備型手性HPLC(Phenomenex Lux C2柱，20μm，50mm×250mm，洗提劑MeOH，110mL/min)分離非鏡像異構物的混合物，得到： 第一洗提異構物實例20(a)2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(18.4mg，7.5%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,22℃)2.06(1H,dq),2.28(1H,dt),3.34(3H,s),3.45-3.60(3H,m),3.75(1H,dd),4.34-4.42(1H,m),5.03(1H,s),6.87(1H,dd),7.33(1H,dd),7.51-7.57(2H,m),7.60-7.69(2H,m),8.48(1H,dd),12.35(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 514。
第二洗提異構物實例20(b)2-[4-氟-3-(三氟甲氧基) 苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺(19.2mg，7.9%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,22℃)2.07(1H,dd),2.28(1H,dt),3.49(1H,d),3.53-3.60(2H,m),3.74(1H,dd),4.33-4.43(1H,m),5.04(1H,s),6.87(1H,d),7.33(1H,dd),7.52-7.57(2H,m),7.63(1H,d),7.68(1H,d),8.48(1H,d),12.35(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 514。
實例21(a)和21(b)
(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在21℃下，在氮氣下，將HATU(433mg，1.14mmol)添加到在DMF(8mL)中的2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-乙酸(中間體28，215mg，0.95mmol)、N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，250mg，0.95mmol)和DIPEA(0.332mL，1.90mmol)中。將所得溶液在21℃下攪拌2小時。將粗產物藉由離子交換層析法使用SCX柱純化。使用1M NH3/MeOH將所需產物從柱上洗提，將純級分蒸發至乾，得到粗產物。將粗產物藉由快速矽膠層析(洗提梯度0至12% 1M NH3/MeOH的DCM溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到米色泡沫。LCMS顯示9%的化學雜質。將粗產物藉由快速矽膠層析(洗提梯度0至8% MeOH的DCM溶液)進一步純化。將純級分蒸發至乾，得到非鏡像物混合物形式的產物。(180mg)
藉由製備型HPLC(Luc C4柱，20μm二氧化矽，50mm直徑，250mm長度，100% MeOH，120ml/min)分離非鏡像異構物。將單獨的非鏡像異構物溶於DCM中，用水洗滌，蒸發有機層，得到：實施方式21(a)，作為第一洗提異構物(固體，74mg，16%)。1H NMR(400MHz,DMSO,27℃)δ 2.06(1H,m),2.21-2.38(1H,m),3.30(9H,d),3.41-3.62(3H,m),4.28-4.47(1H,m),4.87(1H,s),6.46(1H,t),6.63(2H,s),6.85(1H,d),7.31(1H,dd),7.65(1H,d),8.47(1H,dd),12.13(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 472。
實例21(b)，作為第二洗提異構物(固體，75mg，17%)。1H NMR(400MHz,DMSO,27℃)δ 2.06(1H,m),2.21-2.38(1H,m),3.30(9H,d),3.41-3.62(3H,m),4.28-4.47(1H,m),4.87(1H,s),6.46(1H,t),6.63(2H,s),6.85(1H,d),7.31(1H,dd),7.65(1H,d),8.47(1H,dd),12.13(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+ 472。
實例22(a)和22(b)
(2S)-2-乙氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯 基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺和(2R)-2-乙氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺
在室溫下，在N2下，將HATU(0.13g，0.332mmol)和N2-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體1，0.07g，0,276mmol)溶解到DMF(2mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.07mL，0.414mmol)和2-乙氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙酸鋰(中間體56，0.07g，0.276mmol)然後在室溫下攪拌過夜。使粗混合物通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提。蒸發鹼性級分，得到不純的產物，為橙色膠狀物，其藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，25mL/min)純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併含有所需物質的級分，蒸發並通過5g SCX柱，用MeOH洗滌，然後用2N NH3的MeOH溶液洗提。真空除去溶劑，得到非鏡像異構物的混合物，其 藉由製備型手性HPLC分離。(Phenomenex Lux C4柱，20μm二氧化矽，50mm直徑，250mm長度)，EtOH/MeOH 50/50，120mL/min。將含有所需化合物的級分蒸發至乾燥，得到：實例22(a)，作為第一洗提異構物(固體，21.4mg，15%)。
實例22(b)，作為第二洗提異構物(固體，20.4mg，14%)。
其他實例
以與上述實例類似的方式製備以下實例的化合物。
實例45(a)和45(b)
(2S)-3-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-苯基-丙醯胺和(2R)-3-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-苯基-丙醯胺
在室溫下，在N2下，將N2-[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基) 吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(中間體6，0.11g，0.389mmol)和3-甲氧基-2-苯基-丙酸(0.08g，0.433mmol)溶解到DMF(2mL)中。將混合物攪拌5分鐘，然後加入DIPEA(0.34mL，1.943mmol)和N-[(二甲基胺基)(3H-[1,2,3]***[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亞甲基]-N-甲基甲基銨六氟磷酸鹽、HATU(0.4mL，0.361mmol)，然後在室溫下靜置過夜。將粗混合物藉由5g SCX-2柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。合併純的級分，減壓除去溶劑，且將殘餘物藉由製備型HPLC(SunFire C18柱，5μm，50mm×19mm，流速25mL/min)進一步純化。使用極性比率漸減的含有0.1%甲酸的水和MeCN作為流動相。合併純級分，減壓蒸發，通過SCX-2柱，用MeOH洗滌，然後用2M NH3的MeOH溶液洗提。將鹼性級分蒸發至乾，得到為淺黃色固體的非鏡像異構物的混合物。藉由製備型HPLC(Phenomonex Lux C1柱，20μm二氧化矽，50mm直徑，250mm長度)，使用MeCN/MeOH的95/5混合物作為洗提液以12mL/min分離非鏡像異構物。將含有所需化合物的級分蒸發至乾，得到：第一洗提異構物實例45(a)3-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-苯基-丙醯胺(31.7mg，20%)。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)1.95-2.12(1H,m),2.21-2.35(1H,m),2.42(3H,s),3.26(3H,s),3.4-3.63(4H,m),3.74(1H,dd),3.98(1H,t),4.12(1H,dd),4.31-4.43(1H,m),6.82(1H,d),7.15-7.46(6H,m),7.62(1H,d),12.18(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+ 440
第二洗提異構物實例45(b)3-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-苯基-丙醯胺(28.3mg，18%)。
1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)1.99-2.12(1H,m),2.2-2.36(1H,m),2.41(3H,s),3.26(3H,s),3.39-3.62(4H,m),3.73(1H,dd),3.98(1H,t),4.12(1H,dd),4.31-4.42(1H,m),6.82(1H,d),7.17-7.46(5H,m),7.62(1H,d),12.19(1H,s).m/z：ES+[M+H]+ 440。
其他實例
以與上述實例類似的方式製備以下實例的化合物。
中間體1
N'-[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺
向1L圓底燒瓶中放置(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-胺二鹽酸鹽(中間體2，10.5g，44.29mmol)在DMF(400mL)、5-溴-1,3,4-噻二唑-2-胺(7.94g，44.10mmol)和DIPEA(17.07g，132.08mmol)中的溶液。將溶液在80℃下攪拌4小時。將所得混合物在真空下濃縮。粗產物藉由從乙醇/EtOAc重結晶純化，得到為淺黃色固體的N’-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(11g，94%)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,30℃)δ 2.04(1H,td),2.22-2.31(1H,m),3.43-3.62(3H,m),3.72(1H,dd),4.28(1H,dq),6.27(2H,s),6.86(1H,dd),7.07(1H,d),7.33(1H,dd),8.48(1H,dd)。m/z：ES+[M+H]+ 264.28。
還根據以下替代程序大規模製備中間體1：在45℃下，將(R)-1-(嗒-3-基)吡咯啶-3-胺(中間體3，游離鹼形式，25.5g，150.63mmol)和5-溴-1,3,4-噻二唑-2-胺(29.8g，165.70mmol)與DIPEA(39.4mL，225.95mmol)的混合物作為在MeOH(200mL)中的漿料攪拌。將漿料冷卻至20℃，藉由真空過濾分離固體。使用50ml MeOH作為濾餅的置換洗滌 液，然後將其在40℃的真空烘箱中乾燥過夜。得到為自由流動的米色粉末的中間體1(32.9g，83%)。
中間體2
(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-胺二鹽酸鹽
向1L圓底燒瓶中加入三級丁基N-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(中間體4，20g，75.66mmol)在二(200mL)和濃HCl(100mL)中的溶液。將溶液在室溫下攪拌30分鐘。將所得混合物在真空下濃縮。將粗產物從MeOH/EtOAc以1：2的比例重結晶。這產生為灰白色固體(13.4g，75%)的(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-胺二鹽酸鹽。1H NMR(300MHz,DMSO-d6,26℃)δ 2.25-2.43(2H,m),3.66-3.74(1H,m),3.78-3.90(3H,m),4.02-4.10(1H,m),7.75(1H,d),7.94(1H,dd),8.66(1H,d),8.77-8.98(3H,brm)。m/z：ES+[M+H]+165。
根據以下程序製備中間體3(游離鹼形式)：將在吡啶(400mL)中的三級丁基N-[(3R)-1-(6-氯嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(中間體5，20g，107.38mmol)與氫氧化鈀碳(皮爾曼催化劑(Pearlman’s Catalyst)，27.5g，25,84mmol)和在MeOH(1375mL)中的1-甲基-1,4-環己二烯(31.0ml，276.13mmol)混合。然後將反應混合物加熱至65℃持續90分鐘。觀察到完全轉化，將反應冷卻回到環境溫度，藉由過濾除去催化劑。然 後將3M HCl的MeOH溶液(184mL，552.27mmol)加入到反應混合物中，將溶液加熱至65℃持續1小時。觀察到完全轉化後，將反應溶液冷卻至環境溫度，並藉由已用MeOH預洗提的10×50g SCX柱。使用1M NH3的MeOH溶液從SCX釋放化合物。將所得溶液用甲苯(1L)稀釋，並藉由旋轉蒸發濃縮至乾，得到自由流動的固體。(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-胺以97% w/w的強度作為游離鹼分離。
中間體4
三級丁基N-[(3R)-1-嗒 -3-基吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯
向2L圓底燒瓶中加入在MeOH(800mL)中的三級丁基N-[(3R)-1-(6-氯嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(中間體5，23g，76.98mmol)和鈀碳(2g)。將系統吹掃並用氫氣保持。將所得溶液在室溫下攪拌4小時。濾出固體。將所得混合物真空濃縮，得到為黃色固體的三級丁基N-[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(20g，84%)。1H NMR(300MHz,CDCl3,24℃)δ 1.44(9H,s),2.25-2.35(2H,m),3.48-3.56(1H,m),3.70-4.10(3H,m),4.35-4.42(1H,m),7.26-7.32(1H,m),7.70-7.75(1H,m),8.53-8.55(1H,m)。m/z：ES+[M+H]+ 265。
中間體5
三級丁基N-[(3R)-1-(6-氯嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯
向1L圓底燒瓶中加入三級丁基N-[(3R)-吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(20g，107.38mmol)在吡啶(400mL)和3,6-二氯嗒(16g，107.40mmol)中的溶液。將所得溶液加熱至回流過夜。將所得混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由從乙醇/Et2O以1：3的比例重結晶而純化，得到為黃色固體的三級丁基N-[(3R)-1-(6-氯嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(23g，72%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 1.45(9H,s),2.02(1H,dq),2.31(1H,td),3.41(1H,dd),3.54-3.70(2H,m),3.78(1H,dd),4.37(1H,s),4.76(1H,s),6.61(1H,d),7.17(1H,d).m/z：ES+[M+H]+ 299。
中間體6
N2-[(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺
將5-溴-1,3,4-噻二唑-2-胺(912mg，5.07mmol)、(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-胺(中間體7，860mg，4.83mmol)和DIPEA(0.924mL，5.31mmol)溶解到DMF(10mL)中。將反應加熱至100℃持續1小時，然後在室溫下放置過夜。將粗產物藉由離子交換層析法使用SCX柱純化。使用1M NH3的MeOH溶液將所需產物從柱上洗提，將純級分蒸發至乾燥，得到粗 產物。將其溶於DCM/MeOH中，吸附到二氧化矽上並藉由FCC(SiO2，0至20% MeOH的DCM溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到為棕色膠狀物的N2-[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(350mg，26%)。m/z：ES+[M+H]+ 278。
中間體7
(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-胺
在21℃下，在氮氣下，將三氟乙酸(12mL)添加到在DCM(60mL)中的三級丁基N-[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(中間體8，2.1g，7.54mmol)中。將所得溶液在21℃下攪拌2小時。將粗產物藉由離子交換層析法使用SCX柱純化。使用7M NH3的MeOH溶液從柱上洗提所需產物，並將純級分蒸發至乾燥，得到為黃色油狀物的(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-胺(1.6g，119%)，將其靜置固化。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)δ 1.56-1.8(1H,m),2.04(1H,m),2.39(3H,s),3.07(1H,m),3.37-3.43(1H,m),3.47-3.66(3H,m),4.08(1H,s),6.73(1H,d),7.19(1H,d)。m/z：ES+[M+H]+ 179。
中間體8
三級丁基N-[(3R)-1-(6-甲基嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯
將DIPEA(8.49mL，48.62mmol)、三級丁基N-[(3R)-吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(3.62g，19.45mmol)、3-氯-6-甲基嗒(2.5g，19.45mmol)和正丁醇(30mL)的混合物在130℃下攪拌12小時，然後冷卻過週末。蒸發反應混合物並且將粗產物藉由FCC(SiO2，0至10% 1M NH3的MeOH的EtOAc溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到為黃色固體的三級丁基N-[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(2,1g，38,8%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)δ 1.39(9H,s),1.88(1H,m),2.14(1H,m),2.40(3H,s),3.23(1H,m),3.37-3.45(1H,m),3.47-3.58(1H,m),3.61(1H,m),3.99-4.2(1H,m),6.77(1H,d),7.20(2H,m)。m/z：ES+[M+H]+ 279。
中間體9
N2-[(3R)-1-(6-氟嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺
在室溫下，將DIPEA(3.48mL，19.96mmol)添加到無水DMF(40mL)中的5-溴-1,3,4-噻二唑-2-胺(1.797g，9.98mmol)和(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-胺(中間體10，2g，10.98mmol)中。將所得溶液在80℃下攪拌4小時。將粗產物藉由離子交換層析法使用SCX柱純化。使用1M NH3的MeOH溶液從柱上洗 提所需產物，並且將純級分蒸發至乾，得到為棕色固體的N2-[(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺(2.9g，103%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 1.90-2.12(1H,m),2.23(1H,dtd),3.42(1H,dd),3.47-3.61(2H,m),3.69(1H,dd),4.25(1H,dq),6.25(2H,s),7.04(1H,d),7.14(1H,dd),7.33(1H,dd)。m/z：ES+[M+H]+ 282。
中間體10
(3R)-1-(6-氟嗒 -3-基)吡咯啶-3-胺
在25℃下，將三級丁基N-[(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(中間體11，6g，21.25mmol)添加到DCM(70mL)和TFA(14.00mL)中。將所得溶液在25℃下攪拌4小時。將粗產物藉由離子交換層析法使用SCX柱純化。使用1M NH3的MeOH溶液將所需產物從柱上洗提，將純級分蒸發至乾燥，得到為淺黃色膠狀固體的(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-胺(2.0g，52%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 1.55-1.83(1H,m),1.98-2.13(1H,m),2.89-3.14(1H,m),3.29-3.43(1H,m),3.54(3H,ddt),7.06(1H,dd),7.30(1H,dd)。m/z：ES+[M+H]+ 183。
中間體11
三級丁基N-[(3R)-1-(6-氟嗒 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯
將3,6-二氟嗒(6.06g，52.21mmol)三級丁基N-[(3R)-吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(9.72g，52.21mmol)、DIPEA(22.80mL，130.53mmol)和正丁醇(140mL)的混合物在130℃下攪拌10小時。將反應混合物用EtOAc(750mL)稀釋，並用水(150mL)洗滌兩次。將有機層用Na2SO4乾燥，過濾並蒸發，得到粗產物。然後將其溶於DCM中，粗產物藉由FCC(SiO2，30%-65% EtOAc的庚烷溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到為奶油狀固體的三級丁基N-[(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(15g，102%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 1.46(9H,s),1.91-2.13(1H,m),2.32(1H,dq),3.40(1H,dd),3.56-3.72(2H,m),3.78(1H,dd),4.37(1H,s),4.70(1H,s),6.78(1H,dd),6.98(1H,dd)。m/z：ES+[M+H]+ 283。
中間體12
N2-[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺
在室溫下，在N2下，將5-溴-1,3,4-噻二唑-2-胺(1.31g，7.264mmol)和(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-胺(中間體13，1.2g，7.264mmol)在DMF(15mL)中合併。將混合物在室溫下攪拌過夜。然後蒸發至乾，藉由FCC(SiO2，5%-10% 2N NH3 的MeOH(在DCM中)溶液)純化，得到為米色泡沫(1.7g，88%)的N2-[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]-1,3,4-噻二唑-2,5-二胺。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)δ 1.80-1.85(1H,m),1.98-2.05(1H,m),3.40(4H,brs),4.03(1H,brs),6.09(2H,s),6.88(1H,d),8.10(1H,d),8.38(1H,d)。
中間體13
(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-胺
將三級丁基N-[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(中間體14，2.39g，9.01mmol)溶於DCM(20mL)和三氟乙酸(5mL)的混合物中，並將溶液在室溫下靜置1小時，然後在減壓下蒸發。將殘餘物溶於MeOH中，並藉由用MeOH沖洗的20g SCX柱，然後用3N NH3的MeOH溶液沖洗，以得到產物。在減壓下蒸發溶劑，得到為黃色固體的(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-胺(1.460g，98%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,27℃)δ 1.80-1.92(1H,m),2.18-2.29(1H,m),3.45(1H,s),3.6-4.01(4H,m),8.13(1H,d),8.50(1H,d)。m/z：ES+[M+H]+ 166。
中間體14
三級丁基N-[(3R)-1-(1,2,4-三 -3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯
將3-甲基硫烷基-1,2,4-三(中間體15，1.5g，11.80mmol)和三級丁基N-[(3R)-吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(2.64g，14.15mmol)溶解到乙醇(12mL)中，並且密封進入微波管。將反應在微波反應器中加熱至100℃持續24小時，並冷卻至室溫。LC/MS顯示61%產物和34%未反應的三。進一步添加三級丁基N-[(3R)-吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(0.52g)，並且在微波中在100℃下繼續加熱15小時。LC/MS顯示76%的產物和18%的未反應的三。在減壓下除去溶劑，並將殘餘物在EtOAc和碳酸氫鈉水溶液之間分配。將水層用新鮮EtOAc再次萃取，將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發。將粗產物藉由FCC(SiO2，0至80% EtOAc的庚烷溶液)純化。蒸發相關級分，得到為黃色固體的三級丁基N-[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(2.390g，76%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,27℃)δ 1.46(9H,s),1.96-2.07(1H,m),2.26-2.37(1H,m),3.55(1H,s),3.75(2H,s),3.90(1H,s),4.39(1H,s),4.69(1H,s),8.14(1H,d),8.53(1H,d)。m/z：ES-[M-H]-264。
中間體15
3-甲基硫烷基-1,2,4-三
將甲基肼碳亞胺硫代酯氫碘酸鹽(中間體16，7.5g，32.18mmol)的冰/水(400mL)溶液加入到攪拌的40%乙二酸(14.70mL，128.71mmol)和碳酸氫鈉(6.76g，80.45mmol)的冰/水(400 mL)溶液中。將所得溶液在0℃下攪拌5小時，然後用DCM(2×150mL)萃取。將萃取物合併，用1M檸檬酸(50mL)洗滌，乾燥(MgSO4)，蒸發，得到為黃色固體的3-甲基硫烷基-1,2,4-三(3.60g，88%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,27℃)δ 2.68(3H,s),8.38(1H,d),8.94(1H,d)。
中間體16
肼碳亞胺硫代酯氫碘酸鹽
將碘甲烷(0.623mL，10.00mmol)添加到肼硫代甲醯胺(0.911g，10mmol)的乙醇(10mL)溶液中。將所得混合物在70℃下攪拌30分鐘。使反應冷卻至室溫。然後將反應混合物通過尼龍濾器過濾。然後將所得固體用Et2O洗滌，並在真空下乾燥過夜，得到作為白色固體的甲基肼碳亞胺硫代酯氫碘酸鹽(1.810g，78%)，將其不經進一步純化使用。
中間體17
【2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙醯基]氧鋰
將甲基2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(中間體18， 0.26g，1.034mmol)和氫氧化鋰一水合物(0.07g，1.552mmol)溶於MeOH(5mL)和水(2mL)的混合物中。將反應物在室溫下攪拌2小時。然後蒸發並真空乾燥過週末，得到為白色固體(270mg，100%)的[2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙醯基]氧鋰。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)δ 3.35(3H,s),4.08-3.91(2H,m),4.29(2H,ddd),4.42(1H,s),5.78-5.56(1H,m),6.50(1H,ddd),6.68(1H,t),6.93(1H,dt),7.25(1H,t)。m/z：ES+[M+H]+ 240。
中間體18
甲基2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯
向甲基2-(3-溴苯基)-2-甲氧基乙酸酯(中間體19，500mg，1.93mmol)和3-氟氮雜環丁烷鹽酸鹽(215mg，1.93mmol)在甲苯(20mL)中的混合物中加入Ruphos鈀(II)苯乙胺氯化物(58.3mg，0.07mmol)、二環己基(21,6'-二異丙氧基-[1,1’-聯苯]-2-基膦(29.7mg，0.06mmol)和碳酸銫(2.20mg，6.75mmol)。將反應用氮氣鼓泡約5分鐘，然後加熱至90℃，在氮氣下攪拌過夜。將反應冷卻至室溫，然後用EtOAc和水稀釋。將有機層乾燥(MgSO4)，過濾並在減壓下蒸發溶劑。藉由FCC(SiO2，0-25% EtOAc的庚烷溶液)純化。將含有級分的產物在減壓下蒸發，得到為油狀物的甲基2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(330mg， 67%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 3.40(3H,s),3.72(3H,s),3.90-4.02(2H,m),4.19(2H,ddd),4.71(1H,s),5.30-5.51(1H,m),6.44(1H,ddd),6.54-6.56(1H,m),6.83(1H,d),7.21(1H,t)。m/z：ES+[M+H]+ 254。
中間體19
甲基2-(3-溴苯基)-2-甲氧基乙酸酯
在N2下將鈉(0.345g，15.00mmol)溶於無水MeOH(50mL)中，向該溶液中加入甲基2-溴-2-(3-溴苯基)乙酸酯(中間體20，4.2g，13.64mmol)在無水MeOH(10mL)中的溶液。將反應混合物在40℃加熱2小時，然後減壓蒸發。將殘餘物用氯化銨水溶液處理，並將混合物用EtOAc(50mL×2)萃取。將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並在減壓下蒸發，得到粗產物，將其藉由FCC(SiO2，0-12% EtOAc的庚烷溶液)純化。將含有級分的產物蒸發至乾，得到為油狀物的甲基2-(3-溴苯基)-2-甲氧基乙酸酯(2.95g，83%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 3.42(3H,s),3.74(3H,s),4.73(1H,s),7.24(1H,t),7.36-7.39(1H,m),7.47(1H,ddd),7.61(1H,t)。m/z：TOF MS EI+ 257.9880。
中間體20
甲基2-溴-2-(3-溴苯基)乙酸酯
將甲基2-(3-溴苯基)乙酸酯(4g，17.46mmol)和NBS(3.26g，18.33mmol)和(E)-2,2’-(二氮烯-1,2-二基)雙(2-甲基丙腈)(0.143g，0.87mmol)的四氯化碳(50mL)溶液加熱回流4小時，然後冷卻至室溫。濾出固體，棄去，在減壓下蒸發濾液。藉由FCC純化(SiO2，0-5% EtOAc的庚烷溶液)。在減壓下蒸發含有級分的產物，得到為油狀物的甲基2-溴-2-(3-溴苯基)乙酸酯(4.2g，78%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 3.80(3H,s),5.28(1H,s),7.21-7.26(1H,m),7.45-7.48(1H,m),7.48-7.5(1H,m),7.70(1H,t)。m/z：TOF MS EI+ 305.8891。
中間體21
【2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙醯基]氧鋰
將甲基2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(中間體23，0.08g，0.295mmol)和氫氧化鋰一水合物(0.01g，0.354mmol)溶解在甲醇(3mL)和水(2mL)的混合物中。將反應在室溫下攪拌2小時。將反應混合物在減壓下蒸發，並在真空烘箱中乾燥過週末，以給出[2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙醯基]氧鋰。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.19(3H,s),4.24-4.17(4H,m),6.42-6.35(1H,m),6.57(1H,s),6.82(1H,d),7.09(1H,t)。
中間體22
2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸
將2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸乙酯(中間體23，270mg，1.00mmol)在MeOH(4mL)中的溶液用氫氧化鋰一水合物(84mg，1.99mmol)的水(2mL)溶液處理，並將混合物在室溫下攪拌2小時。在減壓下蒸發MeOH，水層用鹽水(2ml)稀釋，用乙酸中和，用2-甲基四氫呋喃(4×5mL)萃取。將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到為膠狀的2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸(130mg，50.8%)。m/z：ES+[M+H]+ 258。
中間體23
甲基2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯
向在甲苯(20mL)中的甲基2-(3-溴苯基)-2-甲氧基乙酸酯(中間體19，473mg，1.83mmol)和3,3-二氟氮雜環丁烷 鹽酸鹽(236mg，1.83mmol)的混合物中加入Ruphos鈀(II)苯乙胺氯化物(55.2mg，0.07mmol)、二環己基(2',6'-二異丙氧基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(28.1mg，0.06mmol)和碳酸銫(2.08g，6.39mmol)。將反應用N2鼓泡約5分鐘，然後加熱至90℃，在N2下攪拌過夜。將反應冷卻至室溫，然後用EtOAc(20mL)和水(20mL)稀釋。將有機層乾燥(MgSO4)，過濾並在減壓下蒸發溶劑。藉由FCC純化(SiO2，0-20% EtOAc的庚烷溶液)。將含有級分的產物在減壓下蒸發，得到為油狀物的甲基2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(280mg，57%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 3.62(3H,s),4.25(4H,t),4.82(1H,s),6.51-6.56(2H,m),6.79(1H,d),7.19-7.25(1H,m)。m/z：ES+[M+H]+ 272。
中間體24
【2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯基]氧鋰
將甲基2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙酸酯(中間體26，0.24g，0.886mmol)和氫氧化鋰一水合物(0.06g，1.329mmol)溶於甲醇(5mL)和水(2mL)的混合物中。將反應物在室溫下攪拌2小時，然後減壓蒸發並真空乾燥過週末。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 2.96(3H,s),3.03(3H,s),3.37 -3.26(2H,m),3.80(2H,dd),4.01(1H,s),4.09(1H,tt),6.06(1H,dd),6.25(1H,t),6.49(1H,dt),6.83(1H,t)。
中間體25
2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙酸
將甲基2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙酸酯(中間體26，450mg，1.61mmol)在MeOH(7mL)中的溶液用氫氧化鋰一水合物(135mg，3.22mmol)的水(3mL)溶液處理，並且將混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓下蒸發MeOH，將含水殘餘物用***萃取。將水層用乙酸酸化，用固體氯化鈉處理，得到飽和溶液，用EtOAc(3×10mL)萃取。將有機層乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到膠狀的2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙酸(236mg，58.3%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 3.23(3H,s),3.26(3H,s),3.51-3.59(2H,m),3.97-4.06(2H,m),4.26-4.34(1H,m),4.59(1H,s),6.38(1H,dd),6.43(1H,s),6.69(1H,d),7.13(1H,t).m/z：ES+[M+H]+ 252。
中間體26
甲基2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙酸酯
向甲基2-(3-溴苯基)-2-甲氧基乙酸酯(中間體19，524mg，2.02mmol)和3-甲氧基氮雜環丁烷鹽酸鹽(250mg，2.02mmol)在甲苯(20mL)中的混合物中加入Ruphos鈀(II)苯乙胺氯化物(61.1mg，0.07mmol)、二環己基(2',6'-二異丙氧基-[1,1’-聯苯]-2-基)膦(31.2mg，0.07mmol)和碳酸銫(2307mg，7.08mmol)。將反應用氮氣鼓泡約5分鐘，然後加熱至90℃，在氮氣下攪拌過夜。將反應冷卻至室溫，然後用EtOAc和水稀釋。將有機層乾燥(MgSO4)，過濾並在減壓下蒸發溶劑。藉由FCC(SiO2，0-25% EtOAc的庚烷溶液)純化，得到為油狀物的甲基2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙酸酯(450mg，84%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 3.33(3H,s),3.39(3H,s),3.68-3.74(5H,m),4.07-4.13(2H,m),4.29-4.36(1H,m),4.70(1H,s),6.43(1H,ddd),6.51-6.54(1H,m),6.79(1H,d),7.19(1H,t).m/z：ES+[M+H]+ 266。
中間體27
2-乙氧基-2-(3-甲氧基苯基)乙酸
在0℃下，經1小時，向3-甲氧基苯甲醛(5.0g，36.72 mmol)和溴仿(3.85mL，44.06mmol)在乙醇(40mL)中的攪拌混合物中滴加氫氧化鉀(11.33g，201.98mmol)在乙醇(60mL)中的溶液。添加完成後，將混合物在室溫下攪拌過夜。藉由過濾除去形成的沈澱，蒸發濾液，得到糊狀物，將其溶於水(100mL)中，用EtOAc(2×100mL)萃取。然後將水相用2M HCl酸化至pH=2，並用EtOAc(2×100mL)萃取。將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並蒸發，得到淺棕色油狀物。將其吸附到二氧化矽上，藉由FCC(SiO2，5% MeOH的DCM溶液)純化，得到為淺棕色油狀物的2-乙氧基-2-(3-甲氧基苯基)乙酸(3.1g，40%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,21℃)δ 1.28(3H,t),2.09(1H,s),3.64-3.52(2H,m),3.81(3H,s)4.86(1H,s),6.89(1H,ddd),6.99(1H,m),7.03(1H,m),7.29(1H,t)。m/z：ES-[M-H]- 209。
中間體28
2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-乙酸
經2小時將氫氧化鉀(9.79g，174.43mmol)的MeOH(80mL)溶液以小份加入到3,5-二甲氧基苯甲醛(5.27g，31.71mmol)和溴仿(3.33mL，38.06mmol)在MeOH(40mL)中的攪拌混合物中。然後將混合物溫熱至室溫，並且攪拌過夜。在減壓下過濾固體，並用MeOH(40mL)沖洗。將濾液蒸發為濃稠的白色糊狀物，然後重新溶解於水(150mL)中。將其用Et2O(200mL)洗滌，並將含水部分用2M HCl酸化至pH=2。將水相用EtOAc (500mL)萃取。將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到為黃色膠狀物(5.00g，70%)的2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-乙酸。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)δ 3.72(9H,s),4.68(1H,s),6.45(1H,s),6.52(2H,s)。
中間體29
3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸
將乙基3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸酯(中間體30，03g，1.259mmol)懸浮於水(5mL)中，並用氫氧化鋰(0.3g，12.59mmol)處理，然後在60℃下加熱持續3小時。將反應混合物冷卻至室溫。用EtOAc(20mL)萃取水溶液，棄去有機物。將水層用1M HCl酸化至pH=1，並用EtOAc(2×20mL)萃取。將有機物乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到無色膠狀物，藉由FCC(SiO2，0-100% EtOAc的環己烷溶液)純化。合併含有所需化合物的級分，並且蒸發，得到3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸(88mg，33%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 3.25(s,3H),3.49(1H,dd),3.74(3H,s),3.88-3.76(2H,m),6.93-6.80(3H,m),7.32-7.17(1H,m),12.51(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+ 211。
中間體30
乙基3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸酯
向圓底燒瓶中的乙基3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸酯(中間體31，0.38g，1.695mmol)在MeCN(2mL)中的溶液中加入氧化銀(0.5g，2.14mmol)。將溶液冷卻至0℃，並且用碘甲烷(0.17mL，2.676mmol)處理。將反應混合物在室溫下在黑暗中攪拌2.5天。LCMS分析顯示一些產物，但主要是起始原料。進一步加入0.53mL碘甲烷和0.15g氧化銀，並繼續攪拌24小時。反應進一步進行，將其再攪拌7天。LCMS分析顯示完全轉化。將混合物通過矽藻土過濾，並且在減壓下除去溶劑。將殘餘物吸附到二氧化矽上並藉由FCC(SiO2，0-40% EtOAc的環己烷溶液)純化。在減壓下蒸發適當的級分，以分離為無色油狀物(0.3g，74%)的乙基3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸酯。1H NMR(400MHz,CDCl3,21℃)δ 1.23(3H,t),3.37(3H,s),3.58(1H,dd),3.80(3H,s),3.84(1H,dd),3.97(1H,t),4.24-4.08(2H,m),6.82(1H,ddd),6.95-6.85(2H,m),7.23(1H,d)。m/z：ES+[M+H]+ 239。
中間體31
乙基3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸酯
將乙基2-(3-甲氧基苯基)乙酸酯(1.0g，5.149mmol)稱重添加至具有碳酸氫鈉(0.02g，0.257mmol)的圓底燒瓶中。 加入DMSO(8mL)，然後加入多聚甲醛(0.39mL，5.149mmol)。將所得懸浮液在室溫下攪拌24小時，然後將反應在60℃下加熱3小時，得到無色溶液。將反應混合物冷卻，用水(100mL)稀釋並用0.5M HCl中和。將水溶液用EtOAc(3×50mL)萃取，乾燥(MgSO4)並減壓蒸發，得到無色油狀物，將其藉由FCC(SiO2，0-50% EtOAc的環己烷溶液)純化。在減壓下除去溶劑，得到為無色油狀(0.38g，33%)的乙基3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸酯。1H NMR(400MHz,CDCl3,21℃)δ 1.23(3H,t),2.26(1H,s),3.86-3.76(5H,m),4.28-4.06(3H,m),6.89-6.79(3H,m),7.30-7.22(1H,m).m/z：ES+[M+H]+ 225。
中間體32
2-甲氧基-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸
經2小時在0℃將氫氧化鉀(1.851g，33.00mmol)在MeOH(10mL)中的溶液以小份加入到3-(三氟甲氧基)苯甲醛(1.141g，6mmol)和溴仿(0.630mL，7.20mmol)在MeOH(5.00mL)中的攪拌溶液中。然後將混合物溫熱至室溫，並攪拌過夜。在反應混合物中形成白色沈澱。在減壓下濾出固體，用MeOH(15mL)沖洗濾餅。將濾液蒸發為濃稠的白色糊狀物，然後重新溶於水(50mL)中。然後將其用Et2O(50mL)洗滌。將水相酸化至pH=2(約5mL 2M HCl溶液)，然後萃取到EtOAc(3×50mL) 中。將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到澄清油狀物。將粗產物藉由FCC(SiO2，10%-50% EtOAc的庚烷溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到為無色油狀物的2-甲氧基-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸(0.832g，55%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ 3.47(3H,s),4.81(1H,s),7.20-7.24(1H,m),7.33(1H,s),7.37-7.46(2H,m)。m/z：ES-[M-H]- 249.4。
中間體33
2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-乙酸
在0℃下，經30分鐘，向3,5-二甲氧基苯甲醛(2.16mL，15.04mmol)和溴仿(1.58mL，18.054mmol)在乙醇(15mL)中的攪拌混合物中加入氫氧化鉀(4.64g，82.747mmol)在乙醇(30mL)中的溶液。添加完成後，將混合物攪拌並溫熱至室溫過夜。第二天早上，藉由過濾除去沈澱。蒸發濾液，得到糊狀物，將其溶於水(75mL)中，用EtOAc(2×75mL)萃取。然後將水相用2N HCl酸化至pH=2。將其用EtOAc(2×100mL)萃取。將合併的有機物乾燥(MgSO4)並蒸發，得到粗產物。藉由FCC(SiO2，0-5% MeOH的DCM溶液)純化。合併純的級分，在減壓下蒸發，得到為橙色膠狀物(2.46g，68%)的2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-乙酸。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,25℃)δ 1.15(3H,t),3.37-3.42(1H,m),3.48-3.55(1H,m),3.73(6H,s),4.78(1H,s),6.29 (1H,s),6.53(1H,s),6.54(1H,s),12.76(1H,s)。m/z：ES-[M-H]- 239。
中間體34
2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸
甲基2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(中間體35，250mg，0.88mmol)懸浮於水(1.5mL)中，用氫氧化鋰(42mg，1.77mmol)處理，並且在40℃加熱2小時。使反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下蒸發MeOH。將水相用鹽水(5mL)稀釋，藉由加入飽和檸檬酸水溶液調節至pH=5。用含有5% MeOH(3×10mL)的DCM萃取水溶液。將合併的有機萃取物乾燥(MgSO4)並過濾。藉由加入甲酸將水溶液進一步酸化至pH=3，然後用EtOAc(4×10mL)再萃取。合併EtOAc萃取物，乾燥(MgSO4)，過濾，與DCM/MeOH萃取物合併，然後在減壓下蒸發。將膠狀殘餘物從Et2O濃縮兩次，得到為淡黃色玻璃狀固體的2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸(221mg，93%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,21℃)δ 3.33(3H,s),3.41(3H,s),3.80-3.83(2H,m),4.19-4.23(2H,m),4.29-4.33(1H,m),4.68(1H,s),6.50(1H,dd),6.75(1H,ddd),6.94(1H,dd)。m/z：ES+[M+H]+ 270.1。
中間體35
甲基2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯
將甲基2-(3-溴-4-氟-苯基)-2-甲氧基-乙酸酯(中間體36，600mg，2.17mmol)稱重添加到配有suba密封件，N2入口和回流冷凝器的三頸圓底燒瓶中。將燒瓶用N2沖洗5分鐘，然後加入3-甲氧基氮雜環丁烷鹽酸鹽(0.27g，2.17mmol)和碳酸銫(2.47g，7.58mmol)。在單獨的燒瓶中，將2-二環己基膦基-2,6-二異丙氧基聯苯(Ruphos，0.04g，0.087mmol)和Ruphos Pd G2(0.06g，0.077mmol)溶於無水甲苯中。將溶液通過針頭用N2脫氣5分鐘，然後通過suba密封件加入到3頸圓底燒瓶中的其他試劑中。將反應混合物在90℃加熱20小時。將反應混合物冷卻至室溫，並用EtOAc(20mL)和水(20mL)稀釋。收集有機層，並且用另一份EtOAc(20mL)洗滌水相。有機物用鹽水(50mL)洗滌，分離並且在減壓下蒸發。將殘餘物藉由FCC(SiO2，0-70% EtOAc的石油醚溶液)純化。合併純的級分，並且在減壓下蒸發，得到為無色油狀物的甲基2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(136mg，22%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,21℃)δ 3.33(3H,s),3.38(3H,s),3.72(3H,s),3.78-3.83(2H,m),4.19-4.23(2H,m),4.29-4.33(1H,m),4.67(1H,s),6.55(1H,dd),6.75(1H,ddd), 6.92(1H,dd)。m/z：ES+[M+H]+ 284.0。
中間體36
甲基2-(3-溴-4-氟-苯基)-2-甲氧基-乙酸酯
在N2下將鈉(93mg，4.05mmol)溶解在MeOH(12mL)中。添加甲基2-溴-2-(3-溴-4-氟-苯基)乙酸酯(中間體37，1.20g，3.68mmol)在MeOH(3mL)中的溶液，將反應混合物加熱至40℃持續2小時。將反應混合物冷卻至室溫，並且在減壓下蒸發。將殘餘物用飽和NH4Cl(水溶液)(10mL)處理，用EtOAc(3×10mL)萃取。將合併的有機萃取物乾燥(MgSO4)，過濾，並且在減壓下蒸發。將殘餘物藉由FCC(SiO2，0-10% EtOAc的石油醚溶液)純化。合併純的級分，並且在減壓下蒸發，得到為無色油狀物的甲基2-(3-溴-4-氟-苯基)-2-甲氧基-乙酸酯(616mg，60%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,21℃)δ 3.42(3H,s),3.74(3H,s),4.73(1H,s),7.12(1H,t),7.37(1H,ddd),7.67(1H,dd)。
中間體37
甲基2-溴-2-(3-溴-4-氟-苯基)乙酸酯
製備甲基2-(3-溴-4-氟-苯基)乙酸酯(5.0g，20.24mmol)在四氯化碳(50mL)中的溶液，並且添加N-溴琥珀醯亞 胺(3.78g，21.25mmol)，隨後添加2,2’-偶氮雙(2-甲基丙腈)(0.17g，1.01mmol)。將反應加熱至回流4小時，並使其冷卻至室溫。濾出沈澱，在減壓下蒸發溶液。將粗殘餘物藉由FCC(SiO2，0-10% EtOAc的石油醚溶液)純化。合併純的級分，並且在減壓下蒸發，得到為無色油狀物的甲基2-溴-2-(3-溴-4-氟-苯基)乙酸酯(5.30g，80%)。1H NMR(400MHz,CDCl3,21℃)δ 3.81(3H,s),5.28(1H,s),7.12(1H,t),7.49(1H,ddd),7.78(1H,dd)。
中間體38
2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸鋰
將氫氧化鋰(99.86mg，4.16mmol)懸浮在水(10mL)和甲醇(33mL)中，用甲基2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(中間體39，565mg，2.08mmol)處理，並且在45℃下，在氮氣下加熱2小時。將反應混合物冷卻至室溫，在減壓下除去MeOH和水，然後在真空烘箱中乾燥1天。這得到2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸鋰(0.60g，75%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.18(3H,s),3.95-3.50(3H,m),4.18-4.11(1H,m),4.21(1H,s),5.58-5.32(1H,m),6.60(1H,dd),6.77-6.70(1H,m),6.96-6.88(1H,m).m/z：ES+[M+H]+ 263.1。
中間體39
甲基2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯
向配備有suba密封件、磁力攪拌棒氮氣入口和回流冷凝器的2頸圓底燒瓶中加入Ruphos Pd G1甲基三級丁基醚加合物(0.16g，0.193mmol)、2-二環己基膦基-2,6-二異丙氧基聯苯，(Ruphos，0.09g，0.193mmol)、3-氟氮雜環丁烷鹽酸鹽(0.5g，4.461mmol)和碳酸銫(4.24g，13.01mmol)，將燒瓶用氮氣沖洗5分鐘，然後在單獨的圓底燒瓶中放置甲基2-(3-溴-4-氟-苯基)-2-甲氧基-乙酸酯(中間體36，1.03g，3.717mmol)。將燒瓶裝上suba密封件，在氮氣下加入甲苯(25mL)。藉由向其中鼓入氮氣5分鐘使所得溶液脫氣，然後在氮氣下將其加入到含有其他試劑的2頸圓底燒瓶中。將反應混合物在90℃加熱48小時，然後使其冷卻至室溫，並在減壓下蒸發。將殘餘物在EtOAc(100mL)和水(100mL)之間分配。將水層用另一部分EtOAc(200mL)萃取。合併有機物，用MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發，得到淺棕色油狀物，將其溶於EtOAc中並吸附到二氧化矽上，然後藉由快速柱層析法純化，用0-100% EtOAc的環己烷溶液洗提。蒸發適當的餾分，提供為淡黃色液體(565mg，33%)的甲基2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.28(3H,s),3.63(3H,s),4.02-3.84(2H,m),4.31-4.17(2H,m),4.84(1H,s),5.57-5.31(1H,m),6.62-6.53(1H,m),6.79-6.71 (1H,m),7.07(1H,dd)。m/z：ES+[M+H]+ 271.2。
中間體40
2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-乙酸鋰
將氫氧化鋰(0.02g，0.932mmol)懸浮於水(1mL)和MeOH(3mL)中，並且用甲基2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(中間體41，0.13g，0.466mmol)處理。將混合物在N2下加熱至45℃持續2小時。然後將其冷卻至室溫，並且在減壓下除去溶劑，然後真空乾燥3天，得到2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-乙酸鋰(137mg，101%)。m/z：ES+[M+H]+ 269.3。
中間體41
甲基2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-乙酸酯
在圓底燒瓶中放置甲基2-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-2-甲氧基-乙酸酯(中間體42，0.3g，1.038mmol)。該燒瓶配備有suba密封件，並在N2下加入甲苯(6.5mL)。將所得溶液藉由N2鼓泡脫 氣5分鐘。向裝有suba密封件、磁力攪拌棒、氮氣入口和回流冷凝器的2頸圓底燒瓶中加入Ruphos Pd G1甲基三級丁基醚加合物(0.04g，0.054mmol)、2-二環己基膦基-2,6-二異丙氧基聯苯，(Ruphos，0.03g，0.054mmol)、3-氟氮雜環丁烷鹽酸鹽(0.14g，1.245mmol)和碳酸銫(1.18g，3.632mmol)。將燒瓶用N2沖洗5分鐘，然後通過suba密封件加入甲基2-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-2-甲氧基-乙酸酯(0.3g，1.038mmol)在甲苯中的脫氣溶液。將反應混合物在90℃下加熱48小時，然後使其冷卻至室溫，並在減壓下蒸發。將殘餘物在EtOAc(100mL)和水(100mL)之間分配。將水層用另一部分EtOAc(200mL)萃取。將有機物合併，乾燥(MgSO4)，過濾並蒸發，得到淺棕色油，將其溶於EtOAc中並吸附到二氧化矽上。藉由FCC(SiO2，0-50% EtOAc的環己烷溶液)純化。蒸發適當的級分，提供為淺黃色液體的甲基2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(132mg，42%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 3.27(3H,s),3.62(3H,s),3.71(3H,s),3.78-3.96(2H,m),4.05-4.21(2H,m),4.77(1H,s),5.35-5.57(1H,m),5.98(1H,s),6.05(1H,s),6.29(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+ 283.3。
中間體42
甲基2-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-2-甲氧基-乙酸酯
將2-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-2-甲氧基-乙酸(中間體 43，2.77g，10.06mmol)溶於MeOH(30mL)中，用濃硫酸(0.17mL，2.014mmol)處理，然後加熱至65℃持續2小時。將混合物冷卻至室溫，蒸發，然後用水(5mL)稀釋，隨後用飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)稀釋。將水層萃取到DCM中，然後用EtOAc萃取。蒸發合併的有機物，藉由FCC(SiO2，0-40% EtOAc的環己烷溶液)純化粗物質。蒸發含有級分的產物，得到甲基2-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-2-甲氧基-乙酸酯(1.2g，41%)。(400MHz,DMSO-d6,30℃)δ 3.31(s,3H),3.65(3H,s),3.78(3H,s),4.94(1H,s),6.90-6.95(1H,m),7.11-7.14(1H,m),7.15(1H,dd)。m/z：ES+[M+H]+ 290。
中間體43
2-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-2-甲氧基-乙酸
在0℃下，經10分鐘，向氫氧化鉀(2.87g，51.15mmol)和溴仿(0.98mL，11.16mmol)在甲醇(15mL)中的攪拌混合物中加入3-溴-5-甲氧基-苯甲醛(0.75mL，9.301mmol)在甲醇(60mL)中的懸浮液。添加完成後，將混合物溫熱至室溫過夜攪拌。然後將反應混合物用DCM(60mL)處理，並藉由過濾除去沈澱。將濾液蒸發，得到糊狀物，將其溶於水(200mL)中，用DCM(200mL)萃取。然後將水相用2M HCl酸化至pH 2，並用DCM(2×100mL)和EtOAc(2×100mL)萃取。將合併的有機物在減壓下蒸發並進行層析分離(SiO2，0-30% EtOAc-環己烷)。蒸發含有級分的產物，得到2-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-2-甲氧基-乙酸 (0.84g，33%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.30(s,3H)3.77(s,3H),4.78(s,1H),6.94-6.91(m,1H),7.14-7.10(m,2H),13.04(s,1H).m/z：ES+[M+H]+ 275.1。
中間體44
2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]乙酸
在0℃下，經30分鐘，向3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯甲醛(中間體45，0.15g，0.681mmol)和溴仿(0.07mL，0.81mmol)在MeOH(1mL)中的攪拌混合物中逐滴加入氫氧化鉀(0.207g，3.75mmol)在MeOH(2mL)中的溶液。將混合物攪拌並加熱至室溫過夜。藉由過濾除去所得沈澱。蒸發濾液，得到糊狀物，將其溶於水(100mL)中，用EtOAc(2×100mL)萃取以除去未反應的醛。然後將水相用2N鹽酸酸化至pH=2，並用EtOAc(2×100mL)萃取。將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到粗產物，將其藉由FCC(SiO2，0-10% MeOH的DCM溶液)純化，得到為黃色固體的2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]乙酸(191mg，34%)。m/z：ES+[M+H]+ 280。
中間體45
3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯甲醛
向[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]甲醇(中間體46，330mg，1.49mmol)在DCM(18mL)中的攪拌溶液中加入活化的二氧化錳(646mg，7.43mmol)，並且將反應混合物在室溫下攪拌3小時。將反應混合物用水(50mL)稀釋，用DCM(3×50mL)萃取，用鹽水(100mL)洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到粗產物，將其藉由FCC(SiO2，0-50% EtOAc的環己烷溶液)，得到為無色油狀物的3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯甲醛(0.15g，45%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 3.83(3H,s),7.24-7.27(1H,m),7.39-7.42(1H,m),7.46-7.48(1H,m),9.94(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+ 222。
中間體46
[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]甲醇
在0℃下，在氮氣下，經10分鐘，向3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(0.50g，2.12mmol)在THF(10mL)中的攪拌溶液中滴加氫化鋰鋁(1M在THF中，2.33mL，2.33mmol)。在氮氣下將反應混合物攪拌3小時，並且溫熱至室溫。將反應混合物用水(10mL)稀釋，然後用2N NaOH(30mL)溶液稀釋，藉由過濾除去形成的鹽。將濾液用DCM(3×100mL)萃取，乾燥 (MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到粗產物，將其藉由FCC(SiO2，0-50% EtOAc的環己烷溶液)純化，得到為白色固體的[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]甲醇(0.33g，67%)。m/z：ES+[M+H]+ 222。
中間體47
2-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-乙酸
在0℃下，經1小時，向3-(二氟甲氧基)苯甲醛(2.0g，11.619mmol)和溴仿(1.22mL，13.94mmol)在乙醇(40mL)中的攪拌混合物中加入氫氧化鉀(3.59g，63.90mmol)在乙醇(20mL)中的溶液。添加完成後，將混合物攪拌並溫熱至室溫過夜。藉由過濾除去沈澱物，濾液在減壓下蒸發，得到糊狀物，將其溶於水(100mL)中，用EtOAc(2×75mL)萃取。然後將水相用2M HCl酸化至pH=1，並用EtOAc(2×75mL)萃取。將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並蒸發，得到淺棕色油狀物，將其藉由FCC(SiO2，95：5環己烷：EtOAc+0.1%甲酸，增至8：2 EtOAc：環己烷+0.1%甲酸)純化。在減壓下蒸發適當的級分，以提供為無色油狀(1.8g，62%)的2-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-乙酸1H NMR(400MHz,CDCl3,21℃)δ 1.29(3H,t),3.49-3.70(2H,m),4.89(1H,s),6.52(1H,t),7.07-7.15(1H,m),7.21-7.26(1H,m),7.28-7.35(1H,m),7.34-7.41(1H,m)。m/z：ES-[M-H]- 245。
中間體48
2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]乙酸
經2小時將氫氧化鉀(1.427g，25.43mmol)在MeOH(30mL)中的溶液以小部分加入到3-(氧雜環丁烷-3-基)苯甲醛(中間體49，750mg，4.62mmol)和溴仿(0.485mL，5.55mmol)在MeOH(15mL)中的攪拌溶液中，然後將混合物溫熱至室溫，並且攪拌過夜。在減壓下過濾固體，用MeOH(15mL)沖洗固體。將濾液蒸發為濃稠的白色糊狀物，然後重新溶於水(150mL)中。將其用Et2O(200mL)洗滌，然後用2M酸化至pH=2。將水相萃取到EtOAc(300mL)中，將合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾並減壓蒸發，得到為無色油狀物(1.0g，97%)的2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]乙酸，其不經進一步純化而使用。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)δ 3.31(3H,s),4.18-4.35(1H,m),4.58(2H,m),4.77(1H,s),4.94(1H,m),7.22-7.57(4H,m)。
中間體49
3-(氧雜環丁烷-3-基)苯甲醛
在氮氣下在21℃下將氧化錳(IV)(14.30g，164.43mmol)加入到在DCM(70mL)中的(3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基) 甲醇(中間體50，1.5g，8.22mmol)中。將所得混合物在21℃下攪拌16小時。然後將反應通過矽藻土過濾，用DCM洗滌並蒸發成膠狀物。將粗產物藉由FCC(SiO2，10%-60% EtOAc的庚烷溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到為無色膠狀物的3-(氧雜環丁烷-3-基)苯甲醛(800mg，60%)。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)δ .21-4.51(1H,m),4.64(2H,m),4.98(2H,m),7.60(1H,t),7.74(1H,d),7.79-7.85(1H,d),7.94(1H,s),10.03(1H,s)。
中間體50
(3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基)甲醇
在0℃和氮氣下，將氫化鋁鋰(1M的THF溶液，1.94mL，1.95mmol)滴加到3-(氧雜環丁烷-3-基)苯甲酸鈉(300mg，1.50mmol)的THF(10mL)溶液中。將所得混合物在0℃下攪拌20分鐘，然後在25℃下攪拌18小時。添加5% HCl水溶液，將混合物用EtOAc(100mL)萃取，用2M水性Na2CO3溶液洗滌，然後將有機層乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。將粗產物藉由FCC(SiO2，50%-100% EtOAc的庚烷溶液，然後10% 1M NH3的MeOH(在EtOAc中)溶液)純化。將純級分蒸發至乾，得到為無色膠狀物的(3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基)甲醇(140mg，57%)。1H NMR(400MHz,DMSO,30℃)δ 4.20(1H,m),4.51(2H,d),4.62(2H,m),4.95(2H,m),5.16(1H,t),7.17-7.29(2H,m),7.31-7.41(2H,m)。
中間體51
2-乙氧基-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸
在0℃下，經10分鐘，向氫氧化鉀(1.62g，28.93mmol)和溴仿(0.55mL，6.31mmol)在乙醇(15mL)中的攪拌混合物中加入3-(三氟甲氧基)苯甲醛(0.75mL，5.26mmol)的乙醇(30mL)溶液。添加後，將混合物攪拌並溫熱至室溫過夜。藉由過濾除去沈澱。將濾液蒸發，得到糊狀物，將其溶於水(200mL)中，用DCM(100mL)萃取。這形成乳液，然後將水相用2M HCl(10mL)酸化並分離。然後進一步用EtOAc(100mL)萃取。將合併的有機物在減壓下蒸發並藉由FCC(SiO2，0-50% EtOAc的環己烷溶液)純化。合併純的級分，並且在減壓下蒸發，得到2-乙氧基-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸(690mg，49%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,21℃)δ 1.16(3H,t),3.38-3.50(1H,m),3.53-3.66(1H,m),4.99(1H,s),7.28-7.39(2H,m),7.45(1H,d),7.53(1H,t),13.04(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+ 265。
中間體52
2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-乙酸
將氫氧化鋰(0.02g，0.9mmol)懸浮於水(1mL)和甲醇(3mL)中並用乙基2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(中間體53，0.13g，0.45mmol)處理，並在45℃下加熱2小時。使反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下除去MeOH。將水相用鹽水(20mL)稀釋，藉由加入甲酸調節至pH 3，然後用EtOAc(3×20mL)萃取。將合併的EtOAc萃取物用鹽水(30mL)洗滌，經MgSO4乾燥，過濾並在減壓下除去溶劑，得到2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-乙酸(0.127g，105%)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d6,25℃)δ 3.47(3H,s),4.78(1H,s),7.23(1H,dd),7.37-7.46(2H,m)。m/z：ES+[M+H]+ 268.98。
中間體53
乙基2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯
在N2下，在圓底燒瓶中，將鈉(0.04g，1.66mmol)加入到無水甲醇(12mL)中。在N2下向該溶液中加入甲基2-溴-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸酯(中間體54，0.5g，1.51mmol)的甲醇(3mL)溶液。將反應混合物在40℃加熱2小時。在減壓下除去溶劑，將剩餘的膠狀物在飽和氯化銨溶液(50mL)和EtOAc(50mL)之間分配。將水層用另一部分EtOAc(50mL)萃取。將有機物合併，用MgSO4乾燥，過濾並在減壓下除去溶劑。將殘餘的油藉由快速柱層析純化(用100%環己烷至15% EtOAc的環己 烷溶液洗提)。蒸發適當的級分，以提供乙基2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-乙酸酯(0.127g，28%)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d6,25℃)δ 1.23(3H,t),3.44(3H,s),4.12-4.28(2H,m),4.74(1H,d),7.20(1H,dd),7.39(1H,dddd),7.42-7.48(m,1H)。
中間體54
甲基2-溴-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸酯
將甲基2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸酯(中間體55，0.65g，2.578mmol)和N-溴琥珀醯亞胺(4.08g，22.919mmol)稱重至圓底燒瓶中，並且添加在四氯化碳(6mL)中的2,2-偶氮雙(2-甲基丙腈)(AIBN，0.02g，0.129mmol)。將反應加熱至回流4小時，並且使其冷卻至室溫。濾出沈澱，將溶液用二氧化矽處理，減壓蒸發，並且藉由快速柱層析純化(用100%環己烷逐漸增加至環己烷中的30% EtOAc進行洗提)。在減壓下蒸發適當的級分，得到為淺黃色油狀物(1.1g，129%)的甲基2-溴-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸酯。
1H NMR(400MHz,CDCl3-d6,25℃)δ 3.81(3H,s),5.29(1H,s),7.17-7.24(1H,m,),7.46-7.52(1H,m),7.53-7.59(1H,m)。
中間體55
甲基2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸酯
將4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基乙酸(1.0g，4.199mmol)懸浮於甲醇(10mL)中，並且用硫酸(0.07mL，0.84mmol)處理，並且在45℃下加熱2小時。使反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下除去甲醇。將殘餘物用鹽水(20mL)稀釋，然後用EtOAc(3×20mL)萃取。將合併的EtOAc萃取物用鹽水(30mL)洗滌，用MgSO4乾燥，過濾並減壓除去溶劑，得到甲基2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]乙酸酯，(0.65g，61%)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.63(3H,s),3.78(2H,s),7.33-7.39(1H,m),7.42-7.53(2H,m)。m/z：ES+[M+H]+ 253。
生物測定
使用以下測定來測量在此描述的化合物的效果：a)GLS酶效力測定；b)GLS細胞效力測定；c)GLS細胞增殖測定。在測定的描述中，通常：
i. 使用以下縮寫：CO2=二氧化碳；DMEM=杜氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)；DMSO=二甲亞碸；EDTA=乙二胺四乙酸；EGTA=乙二醇四乙酸；FCS=胎牛血清；h=小時；NBS=非結合表面；SDS=十二烷基硫酸鈉；TRIS=三(羥甲基)胺基甲烷。
ii. 使用Genedata智慧擬合模型計算IC50值。IC50值係抑制50%生物活性的測試化合物的濃度。
測定a)：GLS酶效力測定
使用穀胺酸氧化酶/AmplexRed偶聯測定來測量化合物在體外結合並抑制GLS1活性的能力。純化在大腸桿菌中表現的6His標記的GLS蛋白(胺基酸63-669)，並以等分試樣保存在-80℃。將GLS1稀釋至2x工作濃度，並在室溫下培養以允許四聚體/二聚體形式達到穩定狀態。測定測量在包含50mM TRIS(pH 7.8)、100mM NaPO4(pH 7.8)、0.001%v/v Tween 20的緩衝液中進行。將純化的重組GLS1蛋白在測定緩衝液中稀釋至12nM，並在室溫下預培養30分鐘。藉由在100% DMSO中稀釋以製備用於12點濃度響應的正確劑量範圍並且使用Labcyte Echo 555聲學分配器將適當體積(2.5-60nl)分配到384孔微量測定板(Greiner產品代碼784900)中來製備測試化合物。藉由用DMSO溶液回填來將DMSO濃度維持在2%。然後使用BioRaptr自動分配器(Beckman-Coulter)將3μL稀釋的GLS1蛋白(12nM)分配到每個孔中，並在室溫下培養15分鐘。然後添加3μL的在測定緩衝液中稀釋的100mM穀胺醯胺，並將反應在室溫培養60分鐘。然後藉由添加在100mM TRIS(pH 7.5)中的45μM 6-(2-溴乙快基)-2,3-二甲基-喹唑啉-4-酮、75μM Amplex Red、0.375單位/mL辣根過氧化物酶、0.12單位/mL穀胺酸氧化酶來終止反應。在黑暗中在室溫下30分鐘後，使用535/590nm光學濾器在Perkin Elmer EnVision上讀取平板，並且使用Genedata分析原始數據以產生IC50值。其中用 測定緩衝液替換6His標記的GLS蛋白和穀胺醯胺的測定的人工製品版本也用於排除對測定組分的非特異性影響。
測定b)：GLS細胞效力測定
藉由使用測量細胞穀胺酸鹽耗竭的PC3偶聯測定來評價化合物抑制細胞GLS活性的潛力。藉由在100% DMSO中稀釋以製備用於12點濃度響應的正確劑量範圍並且使用Labcyte Echo 555聲學分配器將適當體積(5-120nl)分配到384孔微量測定板(科寧(Corning)產品代碼3712)中來製備測試化合物。藉由用DMSO溶液回填來將DMSO濃度維持在0.3%。PC3細胞在不含苯酚的DMEM、10%透析的FCS、2mM穀胺醯胺中生長，並藉由胰蛋白酶消化分散，以每孔5.6×103細胞在40μl生長培養基中直接接種到含有分配的化合物的384孔測定板中。在37℃下培養6小時後，吸出5% CO2生長培養基，並且細胞在含有10mM TRIS pH 7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1mM NaF、20mM Na4P2O7、2mM Na3VO4、1% Triton X-100、10%甘油、0.1% SDS和0.5%去氧膽酸鹽的15μl緩衝液中裂解。然後將4μl細胞裂解物轉移到384孔NBS板(科寧產品編號3575)中，並添加35μl 27.5μM Amplex Red、0.1375U/mL辣根過氧化物酶、0.044U/mL穀胺酸氧化酶、100mM TRIS pH 7.5。在黑暗中在室溫下30分鐘後，使用535/590nm光學濾器在Perkin Elmer EnVision上讀取平板，並且使用專有軟體分析原始數據以產生IC50值。
測定c)：GLS細胞增殖測定
使用384孔板NCI-H1703細胞增殖測定法測量化合 物抑制細胞生長的能力。將NCI-H1703細胞在不含酚紅的RPMI1640、10% FCS和2mM穀胺醯胺中生長，並在40μl生長培養基中以每孔750個細胞的密度接種進入澄清底384孔測定板(科寧產品代碼3712)中，並在37℃，5% CO2下培養24小時。藉由在100% DMSO中稀釋以製備用於12點濃度響應的正確劑量範圍並將適當體積(5-120nl)直接分配到含有鋪板細胞的測定板中來製備測試化合物。藉由用DMSO溶液回填來將DMSO濃度維持在0.3%。將板在37℃、5% CO2培養5天，添加Sytox Green和皂苷至終濃度分別為2μM和0.25%，並培養6小時，然後分析。在Acumen eX3(TTP Labtech公司)上使用488nm激發和FITC濾光片組(500-530nm)針對發射讀取平板。藉由使用GeneData軟體分析將曲線擬合至第零天生長的最大抑制來計算IC50值。
測定a)-c)之結果顯示在表1中。

Claims (15)

  1. 一種具有式(I)之化合物： 或其藥學上可接受的鹽，其中：Q係1,2,4-三-3-基、嗒-3-基、6-甲基嗒-3-基、或6-氟嗒-3-基；R1係氫、甲氧基、三氟甲氧基、氧雜環丁烷-3-基、3-氟氮雜環丁烷-1-基、3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基、或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基；R2係氫或氟；R3係氫或甲氧基；並且R4係甲氧基、乙氧基、或甲氧基甲基；其條件係當R1係氫、甲氧基或三氟甲氧基時，則R3不是氫，和/或R4係甲氧基甲基。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R1係甲氧基並且R3係甲氧基。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R1係氧雜環丁烷-3-基，3-氟氮雜環丁烷-1-基；3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基，或3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基。
  4. 如申請專利範圍第1-3項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的 鹽，其中R2係H。
  5. 如申請專利範圍第1-4項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R3係甲氧基。
  6. 如申請專利範圍第1-5項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R4係甲氧基。
  7. 如申請專利範圍第1-6項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中Q係1,2,4-三-3-基、或嗒-3-基。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該化合物選自由以下各項組成之群組：(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2R)-3-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]丙醯胺；(2S)-2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶 -3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[4-氟-3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[(3R)-3-(嗒-3-基胺基)吡咯啶-1-基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-N-[5-[[(3R)-1-(6-氟嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]乙醯胺；(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)-5-甲氧基-苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2R)-2-甲氧基-2-[3-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-(4-氟苯基)-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(5-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-(6-甲基嗒-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[4-氟-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[3-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-甲氧基-2-[3-(3-甲氧基氮雜環丁烷-1-基)苯 基]-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-三-3-基)吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；以及(2S)-2-甲氧基-2-[3-(氧雜環丁烷-3-基)苯基]-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺。
  9. 一種化合物或其藥學上可接受的鹽，其中該化合物選自由以下各項組成之群組：(2S)-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]乙醯胺；(2R)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；(2S)-2-[4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺；以及(2S)-[3-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-N-[5-[[(3R)-1-嗒-3-基吡咯啶-3-基]胺基]-1,3,4-噻二唑-2-基]乙醯胺。
  10. 一種藥物組成物，包含如申請專利範圍第1-9項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽和至少一種藥學上可接受的稀釋劑或載體。
  11. 如申請專利範圍第1-9項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在療法中使用。
  12. 如申請專利範圍第1-9項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的 鹽，用於治療癌症。
  13. 如申請專利範圍第1-9項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療癌症的藥物中之用途。
  14. 一種治療需要這種治療的溫血動物的癌症之方法，該方法包括給予該溫血動物治療有效量的如申請專利範圍第1-9項中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽。
  15. 如申請專利範圍第12、13或14項所述之化合物、用途或方法，其中該癌症係乳癌、肺癌、胰腺癌、腎癌或肝細胞癌。
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