TW201350509A

TW201350509A - 疫苗

Info

Publication number: TW201350509A
Application number: TW102118063A
Authority: TW
Inventors: Guenther Staffler; Christine Landlinger; Frank Mattner
Original assignee: Affiris Ag
Priority date: 2012-05-23
Filing date: 2013-05-22
Publication date: 2013-12-16

Abstract

本發明係關於一種疫苗，該疫苗包含至少一胜肽，該胜肽包含7~19個胺基酸殘基，且該胜肽之胺基酸序列係(X3)mKDX2QLGX1(如SEQ ID NO：99所示)，其中，該X1係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬醯胺、穀氨醯胺、甘胺酸、組安酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，該X2係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、精胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，該X3係為胺基酸序列(X4)nANISX5(如SEQ ID NO：100所示)或包含1~4個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X4係為胺基酸序列VVASQLR(如SED ID NO：101所示)或包含1~6個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X5係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬胺酸、穀氨醯胺、穀胺酸、組胺酸、精胺酸、異白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸所組成之群組，其中，m為0或1，且n為0或1，其中，該至少一胜肽係與一載體偶合或熔合，且該載體包含至少一T細胞抗原表位。

Description

疫苗

本發明係關於一種用於醫藥、免疫及分子生物等領域之藥劑，係可以預防及/或治療補體C5a所引發之慢性免疫疾病。

補體系統(complement)係內生性免疫系統之中心組成份，保護生物體受到病毒、細菌及其他外來細胞或不正常細胞之侵襲，然而，補體系統之不正常或過度活化可能導致產生危害生物體本身的破壞性能力，未受調控之補體系統活化現象係涉及阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、帕金森氏症(Parkinson’s disease)、亨丁頓舞蹈症(Huntington’s disease)、老年性黃斑部病變(age-related macula degeneration)、類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis)、紅斑性狼瘡(systemic lupus erythmatosus)、抗磷脂抗體症候群(antiphospholipid syndrome)、氣喘(asthma)、血管炎(vasculitis)、動脈粥狀硬化(atherosclerosis)、多發性硬化症(multiple sclerosis)、乾癬(psoriasis)及慢性蕁麻疹(chronic urticaria)等發炎性皮膚炎(inflammatory dermatitis)、格林-巴利症候群(Guillain-Barre syndrome)及溶血***候群(hemolytic uremic syndrome)等數種慢性發炎疾病。

未受調控之補體系統活化現象更發生於癌症、姙娠高血壓(preeclamsia)及抗磷脂抗體症候群(antiphospholipid syndrome)等姙娠併發症(pregnancy complication)、敗血症(sepsis)、急性肺損傷(acute lung injury)、急性呼吸窘迫症候群(acute respiratory distress syndrome，ARDS)及缺血-再灌流損傷(ischemia-reperfusion injury)等急性病理狀態。補體系統之大量活化更會發生於人工表面，因而引起血液透析相關血栓(hemodialysis-associated thrombosis)。

上述狀態所觀察到之毒性反應係可以歸咎於過敏毒素(anaphylatoxin)C5a之過度生成，以促進免疫反應，並使該免疫反應永久化，C5a之主要功能為化學趨向性(chemotaxis)及活化粒細胞(granulocyte)、肥大細胞(mast cell)及巨噬細胞(macrophage)，進而釋放可溶性免疫因子。因此，近年來，抑制或調控補體系統之活性，被認為可以是依種治療策略。

存在於血漿(plasma)之補體蛋白質中，多數係呈非活化態之前驅物，經由下列三種不同之機制，使該等前驅物進入蛋白質水解訊息傳遞路徑，相互裂解及活化，其中，該機制包含：典型路徑、凝集素(lectin)誘導路徑及替代路徑，該三重活化訊息傳遞路徑之最終結果均為反應之放大及過敏毒素C3a、C5a及可殺死細胞之膜攻擊複合物(membrane attack complex，MAC)，使細胞產生孔洞，並導致細胞水解。

補體系統組成份C5係190kDa蛋白質，包含二胜肽鏈(α為115kDa及β為75kDa)，任一補體系統路徑之活化，可以生成C5轉化酶，進而裂解C5，使位於C5a片段羧基端之新抗原表位(neoepitode)裸露，以生成C5b及有力的過敏毒素C5a。

人類C5a係一長為74胺基酸之醣蛋白，其分子量為12~14.5kDa，該分子由四α螺旋組成，並以三內生性雙硫鍵結穩定其結構。其中，位於第64胺基酸，且具有胺基端連結碳水化合物部分(N-linked carbohydrate moiety)之天門冬醯胺，雖對其生物活性非必要，卻很可能可以於活體中調控C5a活性，當C5轉化酶裂解C5a片段後，位於C5a蛋白質第74胺基酸之最羧基端的精胺酸殘基，係極快地被血清及細胞表面之羧肽酶(carboxypeptidase)移除，並形成較不具活性之C5a desARG分子， C5a蛋白質之C5a ARG及C5a desARG兩種形式，均可以結合於七跨膜域受體(seven-transmembrane domain receptor)C5aR(CD88)，且均不容易為C5L2(gpr77)所辨識，C5L2(gpr77)係普遍表現於大多數細胞，並特別表現於巨噬細胞、嗜中性粒細胞(neutrophil)、肥大細胞及T細胞等免疫細胞之細胞表面，C5aR之配體結合位置(ligand-binding site)係複雜的，且包含至少二物理上可分離之結合域，其一與C5a雙硫結合中心(disulfide-linked core)(即，胺基酸15~46)結合，另一與C5a羧基端(即，胺基酸67~74)結合。C5aR與其配體C5a之結合親和力極佳，且其游離常數(dissociation constant，K_D)約為1nM。

本發明之目的係提供一種治療補體組成份C5a導致疾病或病徵之手段及方法。

為達到前述發明目的，本發明所運用之技術手段及藉由該技術手段所能達到之功效包含有：本發明係關於一種疫苗，該疫苗係包含至少一胜肽，該胜肽包含7~19個胺基酸殘基，較佳包含7~14個胺基酸殘基，且該胜肽之胺基酸序列係(X₃)_mKDX₂QLGX₁(SEQ ID NO：99所示)，其中，該X₁係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬胺酸、穀氨醯胺、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，該X₂係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、精胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，該X₃係為胺基酸序列(X₄)_nANISX₅(SEQ ID NO：100)或包含1~4個，較佳為1、2、3或4個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₄係為胺基酸序列VVASQLR(SEQ ID NO：101所示)或包含1~6個，較佳為1、2、3、4、5或6個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₅係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬胺酸、穀氨醯胺、穀胺酸、組胺酸、精胺酸、異白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸所組成之群組，其中，m為0或1，且n為0或1，其中，該至少一胜肽係與一載體偶合或熔合，且該載體包含至少一T細胞抗原表位。

本發明係關於拮抗生物體自身之C5a的一種活化免疫反應，該生物體自身之C5a係於多種慢性免疫性疾病中被活化，本發明之免疫標的係經由C5分子之裂解而形成可進入狀態之位於C5a羧基端之新抗原表位。因此，於生物體防衛過程中扮演重要角色之C5b片段，其生成及功能並不會受到影響。

詳而言之，本發明係關於一種疫苗，該疫苗係以與包含至少一T細胞抗原表位之一載體偶合或融合的原hC5a羧基端抗原表位胜肽變異體(又稱為VARIOTOPE)為基礎，其中，該胜肽變異體包含hC5a原羧基端序列中至少一胺基酸殘基的置換。

有興趣的擬胜肽變異體抗原表位並非完全相同，因此該胜肽變異體疫苗之優勢在於避開自體抗原之自體耐受性(autotolerance)，此外，胜肽變異體之使用可以減緩自體抗原造成之非蓄意副作用。

hC5a羧基端抗原表位之胜肽變異體可以利用〝丙胺酸掃描(alanine scanning)〞等方法被識別及挑選，丙胺酸掃描突變法係指將丙胺酸殘基系統性地置換某些蛋白質或胜肽區域之個別胺基酸，以確定某些位置之功能性角色，丙胺酸係備選為被置換之殘基，係由於丙胺酸不具有β碳原子之側鏈，並且不會改變主鏈構型，亦不會嚴重影響靜電力或立體結構。

以上述技術，即可以判別該hC5a羧基端抗原表位之胺基酸殘基對於針對hC5a引起之體液性免疫反應(humoral immune response)的重要與否。下一步驟，置換亦不會減弱針對hC5a引起體液性免疫反應之該等位置係能夠以具有不同特徵之胺基酸殘基進行系統性地置換，以鑑別相較於原抗原表位，可以引發較高或至少相等之抗hC5a抑制活性之胜肽變異體。接著，於hC5a之羧基端抗原表位同時置換二或三胺基酸，以測試其免疫遺傳性及功能活性。相較於原羧基端抗原表位，具有誘導具有較高或至少相等之抗hC5a抑制活性之抗體的胜肽變異體即為本發明之標的。

令人訝異的是，只有包含如SEQ ID NO：99所示胜肽序列，其中，至少於第2、3、5、6及7位置分別為賴胺酸、天門冬胺酸、谷氨醯胺、白胺酸及甘胺酸殘基，才足以活化良好之免疫反應(如第1A及1B圖所示)；更令人訝異的是，於該胜肽最後一個位置之胺基酸被置換時(如SEQ ID NO：99之X₁，其中，野生種C5a羧基端區域之X₁係精胺酸殘基，請參照SEQ ID NOs：1~4)，即足以引發抗C5a蛋白質之體液性免疫反應，且該體液性免疫反應明顯高於由包含SEQ ID NOs：1~4之野生種C5a片段所引發之免疫反應(請參照第1A~1D圖)。重要的是，如第2A~2D圖所示，體液性免疫反應越顯著，其對C5a之抑制活性亦越明顯。當該野生型C5a羧基端區域之倒數第5位置置換為甲硫酸胺(如SEQ ID NOs：10或18)或當該野生型C5a羧基端抗原表位之倒數第8位置置換為組酸胺(如SEQ ID NOs：7或17)之胜肽用以免疫時，亦可以觀察到相似結果(請參照第1~2圖)。由上述胺基酸(如，於該野生型C5a端抗原表位倒數第一、第五及第八位置之精胺酸、甲硫胺酸及組胺酸，請參照SEQ ID NOs：1~4)之單一胺基酸置換即可以有效引發C5a特異性抗體免疫反應，且該特異性抗體免疫反應係較包含SEQ ID NOs：1~4之野生型C5a片段更高、更有效(請參照第3~6圖所示)，此處之胜肽，相較於相對之野生型C5a片段，係具有較佳之C5a抑制能力。

與本發明無關之WO 90/09162專利案揭示與野生型hC5a片段同源之數個胜肽，該數個胜肽係用以作為C5a活性之拮抗劑。惟，該等胜肽係作為可溶性胜肽，且未與載體蛋白質偶合，因此，無法誘導抗C5a活性之抗體生成，並不適用於本發明。以WO 90/09162專利案中，第426實施例為例，該胜肽係包含於第1位置置換之***酸殘基，而於本發明中，該置換係會導致C5a抑制活性之顯著下降(如SEQ ID NO：54及第4圖所示)。

本發明疫苗包含之至少一胜肽，係包含7，較佳為8，較佳為9，較佳為10，較佳為11，較佳為12，較佳為13，較佳為14，較佳為15，較佳為16，較佳為17，較佳為18，較佳為19之胺基酸殘基。

根據本發明，X₃係(X₄)_nANISX₅(如SEQ ID NO：100所示)或該胺基酸序列之胺基端缺失片段，因此，該胺基端缺失片段可以包含ANISX₅(如SEQ ID NO：102所示)、NISX₅(如SEQ ID NO：103所示)、ISX₅、SX₅或X₅；亦即，當m為1，本發明之疫苗係可以包含具有胺基酸序列為ANISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：104所示)、NISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：105所示)、ISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：106所示)、SX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：107所示)或X₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：108所示)之至少一胜肽。

根據本發明，X₄係VVASQLR(如SEQ ID NO：101所示)或該胺基酸序列之胺基端缺失片段，該VVASQLR片段係可以包含選自下列胺基酸序列之至少一胺基酸序列：VASQLR(如SEQ ID NO：109所示)、ASQLR(如SEQ ID NO：110所示)、SQLR(如SEQ ID NO：111所示)、QLR、LR、或R，；是以，當m及n為1，本發明之疫苗係可以包含具有胺基酸序列為VVASQLRANISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：112所示)、VASQLRANISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：113所示)、ASQLRANISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：114所示)、SQLRANISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：115所示)、 QLRANISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：116所示)、LRANISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：117所示)或RANISX₅KDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：118所示)。

本發明之疫苗係可以包含如SEQ ID NO：99所示之至少一胜肽，特別係指該疫苗包含至少一胜肽，該胜肽具有如SEQ ID NO：99所示之胺基酸序列；然而，本發明之疫苗亦可以包含至少二、至少三、至少四，或甚至至少五胜肽，且該至少二、至少三、至少四，或甚至至少五胜肽係具有如SEQ ID NO：99所示之胺基酸序列。該疫苗當然也可以結合本發明之至少一胜肽及其他胜肽或活性成分，且該其他胜肽或該活性成分能夠用以治療本發明所述之某些狀態。

該胜肽/載體之結合係重要的，其原因在於，當將未與載體偶合之本發明之胜肽注入體內，並無法誘發適量之抗體，此外，該載體係可以促進引發持久之抗體反應；因此，本發明之抗hC5a之活性免疫反應係優於治療C5a相關疾病之單株抗體治療法，因此可以免除需要重複注射大量抗體、患者需要經常進出醫院，以及抗體之高生產成本等單株C5a抗體至療法之缺點。

本發明之至少一胜肽係能夠以化學合成法進行合成一分離之胜肽，或是一胜肽或一多胜肽之其中一部份，該化學合成法係本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知；該至少一胜肽亦能夠以如細菌、酵母菌或真菌等微生物，或是以如哺乳動物細胞或昆蟲細胞等真核細胞，或是以如腺病毒(adenovirus)、痘病毒(poxvirus)、皰疹病毒(herpesvirus)、塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus)、棒狀病毒(baculovirus)、噬菌體(bacteriophage)、披膜病毒(sindbis virus)或仙台病毒(sendai virus)等重組病毒載體生成該化合物/胜肽，並進行分離，或更可以進一步進行純化。適合用以生成該化合物/胜肽之細菌係包含大腸桿菌(E.coli)、枯草桿菌(B.subtilis)或是其他可以表現該等胜肽之細菌；適合用以表現該化合物/胜肽之酵母菌類型包含釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、假絲酵母(Candida spp.)、嗜甲醇酵母(Pichia pastoris)或是其他可以表現該等胜肽之酵母菌，上述方法均為係本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，以及，用以分離及純化重組胜肽之方法亦為本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，其中包含凝膠層析法(gel filtration)、親和層析法(affinity chromatography)、離子交換層析法(ion exchange chromatography)等。

為幫助該化合物/胜肽之分離，係可以製備一融合多胜肽，其中，該化合物/胜肽係於轉譯時融合(共價連結)一異源多胜肽，該異源多胜肽係可以由親和層析法進行分離，典型之異源多胜肽係組胺酸標籤(如His6，6個組胺酸殘基)、GST標籤(Glutathione-S-transferase)等，該融合多胜肽係不僅幫助該化合物/胜肽之純化，更可以防止該化合物/胜肽於純化過程中降解。當於純化後預移除該融合多胜肽，該融合多胜肽更可以於該化合物/胜肽及該之交接處包含一裂解位置(cleavage site)，該裂解位置係包含一胺基酸序列，且該胺基酸序列係可以為對該胺基酸序列具有特異性之酵素(如，蛋白酶)裂解。

X₁可以為一如丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、異白胺酸等非極性、脂肪族胺基酸殘基，或可以為一如絲胺酸、蘇胺酸、天門冬醯胺、穀氨醯胺等極性、不帶電胺基酸殘基，或可以為一如賴胺酸、組胺酸等帶正電胺基酸殘基，或可以為一如酪胺酸等極性、芳香族胺基酸殘基。X₂可以為一胺基酸殘基，選自丙胺酸、甲硫胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、賴胺酸、精胺酸、組胺酸、蘇胺酸及酪胺酸所組成之群組。X₅可以為一如丙胺酸、甲硫胺酸、異白胺酸等非極性、脂肪族胺基酸殘基、可以為一如絲胺酸、蘇胺酸、天門冬醯胺、穀氨醯胺等非極性、脂肪族胺基酸殘基，或可以為一如賴胺酸、精胺酸、組胺酸、穀胺酸等之帶電胺基酸殘基。

本發明之較佳實施例中，X₁係一胺基酸殘基，選自由蘇胺酸、谷氨醯胺、酪胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸、甘胺酸及纈胺酸所組成之群組。

本發明之較佳實施例中，當m為1，X₁較佳係一胺基酸殘基，選自由丙胺酸、天門冬醯胺、谷氨醯胺、組胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸及蘇胺酸所組成之群組，且X₅係一胺基酸殘基，選自由丙胺酸、組胺酸、甲硫胺酸及蘇胺酸所組成之群組，及/或X₂係一胺基酸殘基，選自由甲硫胺酸、丙胺酸、賴胺酸及纈胺酸所組成之群組。

本發明之較佳實施例中，當m為1，X₅較佳係一胺基酸殘基，選自由丙胺酸、甲硫胺酸及蘇胺酸所組成之群組。

本發明之較佳實施例中，X₂係一胺基酸殘基，選自由甲硫胺酸、丙胺酸、賴胺酸及纈胺酸所組成之群組。

本發明之較佳實施例中，該至少一胜肽較佳係選自由ISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：14所示)、ANISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：21所示)、KDMQLGA(如SEQ ID NO：22所示)、VVASQLRANISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：23所示)、ANISHKDMQLGT(如SEQ ID NO：24所示)、ANISHKDMQLGQ(如SEQ ID NO：25所示)、ANISHKDMQLGY(如SEQ ID NO：26所示)、ANISHKDMQLGM(如SEQ ID NO：27所示)、ANISHKDMQLGG(如SEQ ID NO：28所示)、ANISHKDMQLGV(如SEQ ID NO：29所示)、ANISHKDMQLGK(如SEQ ID NO：30所示)、ANISHKDMQLGS(如SEQ ID NO：31所示)、ANISHKDMQLGH(如SEQ ID NO：32所示)、ANISHKDMQLGN(如SEQ ID NO：33所示)、ANISHKDMQLGL(如SEQ ID NO：34所示)、 ANISTKDMQLGA(如SEQ ID NO70所示)、ANISTKDMQLGQ(如SEQ ID NO：71所示)、ANISTKDMQLGS(如SEQ ID NO：72所示)、ANISTKDMQLGM(如SEQ ID NO：73所示)、ANISMKDMQLGN(如SEQ ID NO：74所示)、ANISTKDKQLGM(如SEQ ID NO：75所示)、ANISTKDMQLGH(如SEQ ID NO：76所示)、ANISAKDMQLGA(如SEQ ID NO：77所示)、ANISMKDMQLGA(如SEQ ID NO：78所示)、ANISTKDKQLGA(如SEQ ID NO：79所示)、ANISTKDAQLGA(如SEQ ID NO：80所示)、ANISMKDMQLGS(如SEQ ID NO：81所示)、ANISTKDVQLGA(如SEQ ID NO：82所示)、ANISTKDMQLGN(如SEQ ID NO：83所示)、ANISTKDMQLGK(如SEQ ID NO：84所示)、ANISMKDMQLGM(如SEQ ID NO：85所示)、ANISTKDMQLGT(如SEQ ID NO：86所示)、ANISHKDKQLGK(如SEQ ID NO：87所示)、ANISMKDMQLGH(如SEQ ID NO：88所示)、及ANISAKDAQLGA(如SEQ ID NO：89所示)所組成之群組。

本發明之較佳實施例中，包含如SEQ ID NO：99所示之胺基酸序列的該至少一胜肽，較佳係包含於其胺基端及/或羧基端直接結合或以一間隔序列(spacer sequence)結合至少一半胱胺酸殘基。

該半胱胺酸殘基係可以作為一反應團，使該胜肽可以與其他分子或一載體結合；舉例而言，該反應團可以用以使該胜肽與一載體蛋白質結合。該半胱胺酸殘基可以直接與該等胜肽結合，或是透過一間隔序列與該等胜肽結合，該間隔序列較佳係包含至少一，較佳至少二，更佳至少三，特別是至少四，其最大值為十，較佳之最小值為五之小型、無極性胺基酸殘基，如甘胺酸。

本發明較佳實施例中，該載體系選自由鑰孔蟲戚血藍蛋白(keyhole limpet haemocyanin，KLH)、CRM197、破傷風類毒素(tetanus toxoid，TT)、白喉毒素(diphtheria toxin，DT)、蛋白質D或其他包含T細胞抗原表位之其他蛋白質或胜肽。

本發明中，該胜肽係與一藥學上可接受之載體偶合或融合，該藥學上可接受之載體係鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)、破傷風類毒素、鋁結合蛋白(albumin-binding protein)、胎牛血清蛋白(bovine serum albumin)、(dendrimer)、胜肽？(peptide linker，或flanking region)，或是如Singh et al.(請參照Singh et al.,Nat.Biotech.17,(1999)：1075~1081，表一)及O'Hagan et al(請參照O'Hagan and Valiante,Nature Reviews,Drug Discovery 2(9)；(2003)：727~735，〝endogenous immuno-potentiating compounds and delivery systems〞段落)所發表之佐劑，或其混合物。該胜肽與該載體偶合或融合之化學過程(如透過GMBS等及其他於“Bioconjugate Techniques”,Greg T.Hermanson發表之異源雙功能化合物)係可以選為該化學反應之過程，此為本發明所屬技術領域具有通常知識者所習知。

本發明之至少一胜肽亦可以利用本發明所屬技術領域具有通常知識者所習知之方法與一蛋白質載體融合，此類蛋白質係包含一胜肽及一無關之免疫遺傳蛋白質，較佳地，該免疫遺傳蛋白質係可以誘導一召回反應(recall response)，舉例而言，該類蛋白質係可以包含破傷風、肺結核、肝炎蛋白質及蛋白質D，係為革蘭氏陰性菌B型流行性感冒嗜血桿菌(Haemophilus influenza B)之表面蛋白質(請參照WO 91/18926)；較佳地，係可以使用約包含該蛋白質3分之1之蛋白質D(如，胺基端前100~110胺基酸)的一衍生物，且該衍生物係可以被脂質修飾(lipidate)。可以被用作融合蛋白質之載體可以為如LYTA蛋白質，或是LYTA之片段(較佳為LYTA之羧基端)，LYTA係衍生自肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)，合成被稱為醯胺酶LYTA(amidase LYTA)之N-乙醯-L-丙胺酸醯胺酶(N-acetyl-L-alanine amidase，(由LytA基因解碼而成，請參照 Gene 43；(1986)：265~292所記載)，LYTA係一自溶素(autolysin)，可以特異地降解肽聚醣(peptidoglycan)骨價之某些鍵結。本發明較佳實施例中，一融合蛋白係包含LYTA之一重複部分，該重複部分係位於羧基端，且起始於第178殘基，其較佳選擇為第188~305殘基。

本發明較佳實施例中，該胜肽係與一佐劑(adjuvant)複合，較佳係與鋁吸附。

本發明之疫苗係可以與一佐劑複合，該佐劑較佳係為一低溶解度之鋁組成物，特別是氫氧化鋁(aluminum hydroxide)，當然地，該佐劑亦可以為MF59、磷酸鋁(aluminum phosphate)、磷酸鈣(calcium phosphate)、細胞激素(cytokine，如，IL-2、IL-12、GM-CSF)、皂素(saponin，如，QS21)、MDP衍生物、寡CpG(CpG oligo)、LPS、MPL、聚磷腈(polyphosphazene)、乳劑(如，弗氏佐劑、SAF)、微脂囊(liposome)、仿病毒顆粒佐劑(virosome)、免疫刺激複合物(iscom)、螺旋型脂蛋白體(cochleate)、PLG微粒子、泊洛沙姆粒子(poloxamer particle)、類病毒粒子(virus-like particle)、不耐熱腸毒素(heat-labile enterotoxin，LT)、霍亂毒素(cholera toxin，CT)、突變毒素(如，LTK63及LTR72)、微粒子及/或聚合微脂囊等。

適合之佐劑係為商業上可獲得之佐劑，舉例而言，如AS01B、AS02A、AS15、AS-2及其衍生物(GlaxoSmithKline,Philadelphia,PA)、CWS、TDM、Leif、氫氧化鋁膠(alum)或磷酸鋁等鋁鹽、鈣鹽、鐵或鋅、乙醯酪胺酸之不溶性懸浮液、乙醯糖(acylated sugar)、帶陰離子或陽離子之多醣體衍生物、聚磷腈、可生物降解之微球(biodegradable microsphere)、單磷酸類脂A(monophosphoryl lipid A)及quil A，此外，GM-CSF或白細胞介素-2、白細胞介素-7或白細胞介素-12等細胞激素亦可以作為該佐劑。

在該疫苗中，該佐劑組成物較佳係可以引發卓越的Th1類型免疫反應，高量之Th1類型細胞激素(如，IFN-y、TNFct、IL-2及IL-12)係可以協助誘使對於施予之抗原發生細胞性免疫反應(cell mediated immune response)；相對地，高量之Th2類型細胞激素(如，IL-4、IL-5、IL-6及IL-10)則會協助誘導產生體液性免疫反應。

疫苗施予後，患者係會產生包含Th1類型及Th2類型之免疫反應，於本較佳實施例中，係呈現較顯著之Th1類型免疫反應，使Th1類型細胞激素含量提升至顯著高於Th2類型細胞激素含量，該等細胞激素含量係能夠以標準分析法進行分析。該些細胞激素家族之回顧，請參照Janeway et al.,Immunobiology,5^th Edition,2001所述。

較佳之佐劑係可以引發顯著之Th1類型反應，該佐劑係可以包含如單磷酸類脂A組合物，較佳為3-O-脫醯單磷酸類脂A(3-O-deacylated monophosphoryl lipid A，3D-MPL)，亦可以與一鋁鹽共同使用(舉例而言，如Ribi et al.,Immunology and Immunopharmacology of Bacterial Endotoxins,Plenum Publ.Corp.,NY,(1986)：407~419，或GB 2122204B、GB 2220211及US 4,912,094等專利案)，3D-MPL之較佳使用型態為乳劑，其中粒徑係小於0.2mm(直徑)，其製備方法係揭示於WO 94/21292專利案；包含單磷酸類脂A及一界面活性劑之液態配方已揭示於WO 98/43670專利案。例示中較佳的佐劑包含AS01B(MPL及QS21於一微脂囊配方)、3D-MPL及QS21於一微脂囊配方、AS02A(MPL及QS21及一水包油乳劑)、3D-MPL及QS21及一水包油乳劑，及AS 15(購自GlaxoSmithKline)(MPL佐劑購自GlaxoSmithKline,Seattle,WA)(請參照US 4,436,727、US 4,877,611、US 4,866,034及US 4,912,094等專利案)。

含CpG之寡核苷酸(其CpG雙核苷酸未被甲基化)亦可以誘導產生顯著之Th1免疫反應，CpG係DNA之胞嘧啶-鳥糞嘌呤雙核苷酸結構(cytosine-guanosine dinucleotide motif)的簡稱，該寡核苷酸係為人熟知，且於WO 96/02555、WO 99/33488、US 6,008,200及US 5,856,462等專利案被提及，促進免疫DNA序列另如Sato et al.,Science 273；(1996)：352所記載，CpG製成疫苗時，通常會與一游離抗原(free antigen)共同溶於一緩衝溶液後投予(請參照WO 96/02555，McCluskie and Davis,supra)或與一抗原共價結合(如WO 98/16247所示)後投予，或與如氫氧化鋁(肝炎表面抗原，Hepatitis surface antigen，請參照Davis et al.,supra；Brazolot-Millan et al.,PNAS USA,95(26),(1998)：15553~8所記載)等一載體複合後投予。此外，CpG較佳係能夠以全身及黏膜等路徑進行投予，係本發明所屬技術領域中具有通常知識者所習知(如WO 96/02555、EP 0 468 520、Davis et al.,J.Immunol,160(2),(1998)：870~876及McCluskie and Davis,J.Immunol.,161(9),(1998)：4463~6所記載)。

另一較佳佐劑係一皂素或皂素類似物或衍生物，較佳為QS21(Aquila Biopharmaceuticals Inc.)，係可以獨自使用或與其他佐劑共同使用。舉例而言，一增強系統包含一單磷酸類脂A及皂素衍生物，如WO 94/00153專利案所記載之QS21及3D-MPL組合物，或如WO 96/33739專利案所記載之包含以膽固醇結合之QS21之一較低反應原性組合物。其餘較佳配方係包含一水包油乳劑及生育酚(tocopherol)，如WO 95/17210所載之一較佳佐劑配方係包含QS21、3D-MPL及生育酚於一水包油乳劑。此外，本發明所使用之皂素佐劑係包含QS7(如WO 96/33739及WO 96/11711專利案所記載)及QS17(如US 5,057,540及EP 0 362 279 B1專利案所記載)。

另一較佳佐劑包含Montanide ISA 720(Seppic,France)、SAF(Chiron,California,United States)、免疫刺激複合物(CSL)、MF-59(Chiron)、SBAS系列佐劑(如SBAS-2、AS2'、AS2、SBAS-4或SBAS6，係購自GlaxoSmithKline)、Detox(Corixa)、RC-529(Corixa,Hamilton,MT)及他種氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸鹽(amino-alkyl glucosaminide 4-phosphates，AGP)，更進一步之舉例包含合成之MPL及以志賀毒素B次單元(Shiga toxin B subunit)為基底之佐劑(請參照WO 2005/112991專利案所記載)。

本發明之疫苗係能夠以皮下注射、肌肉注射、皮內注射、靜脈注射等途徑投予(請參照“Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formula-tions”,Sarfaraz Niazi,CRC Press Inc,2004所記載內容)，且根據投予途徑不同，該醫藥可以包含載體、佐劑及/或賦型劑。

本發明之疫苗，係包含0.1ng~10mg之該化合物，較佳為10ng~1mg，特別為100ng~100μg，或者，也可以為100fmol~10μmol，較佳為10pmol~1μmol，特別為100pmol~100nmol。本發明之該化合物或胜肽係以每次100ng~1mg之劑量投予一哺乳動物，較佳為1μg~500μg，更佳為10μg~100μg，特別為20~40，或30μg。典型地，該疫苗可以包含如緩衝溶液、穩定劑等輔助物質。本發明之疫苗係能夠以每2週~2個月之間隔投予3~6次，由於抗C5a抗體之存在，該疫苗大約係以每6個月為間隔投予。

AMD係為一種醫學狀態，通常對年長者造成影響，係由於視網膜病變，導致年長者於視野中央發生視覺喪失(即產生斑點)，AMD係包含「乾型(dry form)」及「濕型(wet form)」，其中，乾型約佔AMD患者之90%。濕型及乾型之AMD的早期診斷指標，係於視網膜色素表皮細胞周圍區域聚集之非結晶型脂蛋白狀沉積物(amorphous lipoprooteinaceous deposit)，該病理成分被稱為隱結(drusen)，近期研究指出，乾型AMD之指標一隱結之形成中，區域性之發炎反應及補體系統之活化，該研究係與顯示補體系統組成份C5聚集於隱結之其他研究一致。

此外，C5a除了涉及VEGF之釋放外，亦於誘發於濕態AMD佔一蓆之地的脈絡膜新生血管(choroidal newvascularization)扮演重要的角色，最重要地，拮抗C5a之中性抗體可以於動物模型中停止該疾病之發展。

綜合上述，補體系統調節疾病於乾型及濕型AMD為強力支援，因此，C5a似乎為治療乾型及濕型AMD之最佳標的。

主要由C5a導致之補體系統調節之發炎反應，被認為於阿茲海默症之加速及進展過程中均扮演重要的角色，阿茲海默症大腦中，纖維狀Aβ斑塊(fibrillar Aβ plaque)係會導致延長之補體系統活化，以及，該疾病之許多證據係來自C5a所徵募及活化之膠質細胞(glia)，以促進發炎反應，類似之現象亦適用於帕金森氏症及亨丁頓舞蹈症。此外，初步試驗結果指出，補體組成份C5之活化片段(C5a)係於運動神經元疾病(motor neuron disease，造成運動神經元累進式死亡，最後導致癱瘓及死亡之一群退化性疾病)中扮演特異性病原性之角色。

C5aR之阻斷，可以明顯地減緩過敏性氣喘之呼吸道發炎現象及呼吸道過度反應現象(airway hyper-responsiveness)，然而，補體組成份C5於氣喘中扮演的角色仍然具有爭議，於過敏性氣喘中，C5曾被認為可以促進或防止氣喘之呼吸道過度反應現象，暗示C5a於過敏性氣喘中扮演雙重角色；一假設為過敏原敏化反應(allergen sensitization)中之C5aR訊息傳遞，係可以防止肺過敏(pulmonary allergy)之發生，但會增加於作用階段(effector phase)之肺發炎環境(inflamed pulmonary environment)，亦即，阻斷C5aR可能於已建立之氣喘中具有治療優勢。

C5a亦於動脈粥狀硬化扮演一角色，C3a及C5a表現於人類冠狀動脈斑塊中，此外，近期C5a更被認為可以預測罹患advanced動脈粥狀硬化患者之cardiovascular event，以及，血清中C5a濃度之上升，係與股淺動脈(superficial femoral artery)氣球血管擴張手術(balloon angioplasty)後，發生血管再堵塞(restenosis)之發展有相關聯性。

血管炎係為血管之發炎過程，其組織病理學特徵為血管壁之發炎反應及類纖維素性壞死(fibrinoid necrosis)，該種血管炎之臨床特徵(clinical spectrum)可以為紫斑症(prupura)至嚴重之增生性腎絲球腎炎(proliferative glomerulonephritis)，並且，該補體系統被認為參與該些過程。舉例而言，C5a於抗中性球細胞質自體抗體(anti-neutrophil cytoplasmic autoantibody，ANCA)關聯性血管炎扮演一重要的角色，該抗中性球細胞質自體抗體關聯性血管炎為一種相對較不常見，但可能會威脅生命之全身性自體免疫性疾病；補體系統參與ANCA導致之壞死性新月體腎絲球腎炎(ANCA-induced necrotizing crescentic glomerulonephritis)之病理機轉，C5a及該嗜中性粒細胞C5aR可能組成一活化環圈，以活化ANCA調控之嗜中性粒細胞活化現象，該C5aR可能提供治療ANCA導致之壞死性新月體腎絲球腎炎的新的治療標的。

補體系統之活化涉及類天皰瘡(bullous pemphigoid，BP)、乾癬(psoriasis vulgaris)及慢性蕁麻疹等自體免疫性皮膚炎之發炎反應變化的病理機轉。天皰瘡之中，上皮之天皰瘡抗體導致之補體系統活化可能負責典型之發炎反應變化(又稱為嗜酸性海綿層水腫，eosinophilic spongiosis)之發展；乾癬之中，可以觀察到高含量之C5a，顯示補體系統活化亦涉及該疾病，乾癬係一T細胞調控疾病，然而，嗜中性粒細胞及肥大細胞亦可能涉及該疾病之病理機轉，T細胞及嗜中性粒細胞均會被C5a所吸引，因而C5a可能為治療乾癬之重要治療標的。

補體系統活化亦於自體免疫性疾病一類風濕性關節炎有貢獻，過敏毒素C5a為造成類風濕性關節炎之組織損傷的補體系統活化的主要產物，雖然膜攻擊複合物之分解及C3b片段之調理作用(opsonization) 也很重要。

補體系統於紅斑性狼瘡(SLE)病理機轉之角色仍具有爭議，一方面，補體系統組成份係調控自體抗體起始之組織損傷，另一方面，補體系統又於某些遺傳缺陷中具有保護特徵，而某些補體系統則與增加之SLE風險有關，如，SLE患者常會有補體低(hypocomplementemia)現象。此外，C5a/C5aP訊息傳遞路徑係透過調控血腦障壁(blood-brain barrier)之完整性，因而於中樞神經系統狼瘡(central nervous system lupus)之病理機轉扮演重要的角色，C5a/C5aR之阻斷被認為是一有希望之SLE治療方針。

組織再灌流(reperfusion，R)，而非缺血(ischemia，I)，係活化補體系統，並且導致發炎性損傷，雖然補體系統活化是否參與缺血-再灌流損傷(I/R injury)尚不明確，許多研究指出補體系統與缺血-再灌流損傷的病理機轉有連結性，並且猜測，抑制補體系統為一種可行之治療方針。舉例而言，於鼠類心肌缺血-再灌流損傷模式中，於再灌流之前30分鐘的全身性的C5抑制反應，可以有效地防止小鼠發生心肌缺血-再灌流損傷。

補體系統的活化已被驗證存於多種急性肺損傷中。在滴注酸所引發的急性肺損傷之中，肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluids，BALF)之C5a濃度會增加，且C5a的濃度在人類的移植肺臟中也會上升。C5a吸引嗜中性粒細胞進入肺臟，並且直接活化嗜中性粒細胞、巨噬細胞與內皮細胞。抗-C5a的保護作用與BALF中TNF-α之劇烈下降有關，和BALF中明顯下降的肺血管細胞間黏附分子ICAM-15之表現一樣，推測在發炎反應網路之基礎中、調控發炎反應之調節因子的表現中，以及黏附因子的表現中，C5a是必要的。

急性肺損傷與急性呼吸窘迫症候群(ARDS)之特徵在於肺泡間隙(intra-alveolar spaces)存在富含纖維蛋白(fibrin)的發炎分泌物，以及嗜中性粒細胞廣泛性地移動進入肺中之肺泡。從健康的自願者取出之嗜中性粒細胞中，以藥物阻斷TNF-α以及C5a的訊號傳遞，能夠顯著的減少BALF所引發對其他不同的健康細胞之促凝血活性，並伴隨著組織因子(tissue factor，TF)表現量的損失。這些結果指出，C5a以及TNF-α之訊號傳遞有助於引發被ARDS影響的肺之肺泡中所累積的嗜中性粒細胞內組織因子的表現。

在敗血症的進程中，包含細胞與體液兩種防禦機制之發炎反應系統係高度活化。已知在人類的敗血症中，補體的活化，尤其反應在C5a表現量的上昇，與較不嚴重的敗血症患者和存活者相比，係與伴隨著多重器官衰竭之顯著降低的存活率相關。甚至，攔截C5a或C5aR會顯著增加患敗血症齧齒動物的存活率。因此，C5a似乎在敗血症的發展中扮演關鍵角色，而干擾C5a/C5aR之結合，或許為一有潛力的臨床方向，以提供一預防性治療給易發展成敗血症的高危險群病患。

在體外循環(cardiopulmonary bypass)及血液透析中，當人的血液接觸到人工心肺機(heart-lung machine)或腎臟透析儀的人工表面，C5a會被替代補體路徑(alternative complement pathway)活化。C5a造成微血管通透性增加及水腫、支氣管縮小(bronchoconstriction)、肺血管收縮、白血球與血小板活化並浸潤至組織(尤其是肺臟)中。施用抗C5a的單株抗體會減少體外循環或心臟麻痺(cardioplegia)引發的冠狀動脈內皮機能不良。

腫瘤所驅使的補體活化可提供好處使腫瘤生長。在腫瘤微環境中補體C5a的產生，可以藉由抑制抗CD8+之T細胞的作用，進而促進腫瘤生長。使用小鼠進行的腫瘤生長實驗顯示，C5aR的缺乏或阻斷，與腫瘤生長遲滯有關。因此，補體抑制在腫瘤治療中被認為係一有效且有希望之方向。

補體活化的顯著增加與不同的病理性妊娠結果相關，如姙娠高血壓(preeclampsia)、反覆自發性流產、子宮內生長發育遲緩以及抗磷脂抗體症候群(antiphospholipid syndrome，APS)。相較於正常女性，患有妊娠毒血症的女性血漿中C5a的濃度增加。在APS中，抗磷脂的抗體與補體的活化(經由C3a、C5a及MAC)也許會配合啟動一局部發炎反應，最後導致胎盤血栓、缺氧以及嗜中性粒細胞浸潤。在抗磷脂引發的胎兒損傷中，組織因子(tissue factor，TF)在C5a與嗜中性粒細胞活化之間係具有關連。

總結而言，胜肽所引起抗C5a之免疫反應，造就對C5a調控(慢性發炎)疾病之一有效療法，包含神經退化性疾病，如阿茲海默症(參照如Fonseca,M.I.et al.(2009)，J Immunol "Treatment with a C5aR Antagonist Decreases Pathology and Enhances Behavioral Performance in Murine Models of Alzheimer’s Disease."及Klos,A.et al.(2009)，Mol Immunol "The role of the anaphylatoxins in health and disease.")、帕金森氏症(參照如McGeer,P.L.et al.(2004)，Parkinsonism Relat Disord "Inflammation and neurodegeneration in Parkinson's disease.")、亨丁頓舞蹈症(參照如Singhrao,S.K.et al.(1999)，Exp Neurol "Increased complement biosynthesis by microglia and complement activation on neurons in Huntington's disease.")，以及老年性黃斑部病變(參照如Nozaki,M.et al.(2006)，Proc Natl Acad Sci "Drusen complement components C3a and C5a promote choroidal neovascularization.")、類風濕性關節炎(參照如Okroj,M.et al.(2007)，Ann Med "Rheumatoid arthritis and the complement system.")，紅斑性狼瘡(參照如Chen,M.et al.(2009)，J Autoimmun "The complement system in systemic autoimmune disease."；Jacob,A.et al. (2010)，J Neuroimmunol "Inhibition of C5a receptor alleviates experimental CNS lupus."及Jacob,A,et al.(2010)，FASEB J "C5a alters blood-brain barrier integrity in experimental lupus.")，氣喘(參照如Kohl,J.et al.(2006)，J Clin Invest "A regulatory role for the C5a anaphylatoxin in type 2 immunity in asthma.")、血管炎、抗磷脂抗體症候群(APS)、動脈粥狀硬化、發炎性皮膚炎如牛皮癬(psoriasis)及慢性蕁麻疹(urticaria)、格林-巴利症候群、溶血***候群以及多發性硬化症(multiple sclerosis)。由於失去控制之hC5a釋放會造成一些病理環境如缺血、再灌流損傷、敗血症、急性肺損傷、血液透析的複雜狀況、腫瘤、妊娠的複雜狀況如妊娠毒血症與APS，藉由活化免疫系統以中和C5a或能為這些病理上的複雜狀況提供一個有效的療法。

第1圖係不同長度hC5a的羧基端片段(如SEQ ID NOs：1~4所示)之丙胺酸掃描(alanine scan)(如SEQ ID NOs：5~23所示)，目的為定義出置換後不會喪失免疫性及引發抗體對抗C5a能力之胺基酸位置。其中，第1A圖係hC5a原始抗原表位(epitope)65~74號位置(如SEQ ID NO：1所示)以及胜肽變異體的免疫性(描述為力價，titer)；第1B圖係hC5a原始抗原表位第63~74號胺基酸位置(如SEQ ID NO：2所示)以及VARIOTOPE的免疫性；第1C圖係hC5a原始抗原表位68~74號位置(如SEQ ID NO：3所示)以及VARIOTOPE的免疫性；第1D圖係hC5a原始抗原表位55~74號位置(如SEQ ID NO：4所示)以及VARIOTOPE的免疫性。

第2圖係接種胜肽變異體SEQ ID NOs：5~23小鼠之免疫血清抑制活性，原始抗原表位的序列(如SEQ ID NOs：1~4所示)則描述為100%。其中，第2A圖係hC5a原始抗原表位第65~74號位置(如SEQ ID NO：1所示)以及胜肽變異體引發的免疫血清之抑制效果；第2B圖係hC5a原始抗原表位63~74號位置(如SEQ ID NO：2所示)以及胜肽變異體引發之免疫血清抑制效果；第2C圖係hC5a原始抗原表位68~74號位置(如SEQ ID NO：3所示)以及胜肽變異體引發之免疫血清抑制效果；第2D圖係hC5a原始抗原表位55~74號位置(如SEQ ID NO：4所示)以及胜肽變異體引發之免疫血清抑制效果。

第3圖係hC5a羧基端12個胺基酸長度的胜肽變異體(如SEQ ID NO：2所示)引發的抗體之抑制活性評估，且hC5a上第74號胺基酸位置的R被置換成不同特徵之胺基酸殘基(如SEQ ID NOs：21、24~38所示)。

第4圖係hC5a羧基端12個胺基酸長度的胜肽變異體(如SEQ ID NO：2所示)引發之抗體抑制活性評估，且hC5a上第67號胺基酸位置的H被置換成不同特徵之胺基酸殘基(如SEQ ID NOs：17、39~55所示)。

第5圖係hC5a羧基端12個胺基酸長度的胜肽變異體(如SEQ ID NO：2所示)引發之抗體抑制活性評估，且hC5a上第70號胺基酸位置的M被置換成不同特徵的胺基酸殘基(如SEQ ID NOs：18、56~69所示)。

第6圖係hC5a羧基端12個胺基酸長度的胜肽變異體(如SEQ ID NO：2所示)引發之抗體抑制活性評估，且hC5a上第74號胺基酸位置的R以及一或二個第67或70號胺基酸位置被置換成不同特徵的胺基酸殘基(如SEQ ID NOs：70~98所示)。

為讓本發明之上述及其他目的、特徵及優點能更明顯易懂，下文特舉本發明之較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下：本案所指「施用」，係指提供治療，例如對一受體提供任何種類之藥物或外科手段。該治療係為了逆轉、減緩、抑制發展、預防或減少疾病、失調或狀態的可能性；或是為了逆轉、減緩、抑制或預防發展、預防或減少一或多個症狀或疾病、失調或狀態之顯示。本案所指「預防」，係歸類為造成一疾病、失調、狀態、症狀或顯示，並非發生於至少一些個體的至少一段時期。「施用」可以包含在一或多個症狀或顯示補體調控的發展後，於受體施用一藥劑，例如為了逆轉、減緩、降低嚴重性、及/或抑制或預防狀態之發展，及/或逆轉、減緩、降低嚴重性、及/或抑制一或多個症狀或環境的顯示。本發明之一組成物可以被施用於已呈現補體調控失調之受體，或是於相較於一普遍分佈之一成員具有較高發展危險性(如一疾病)之受體。本發明之組成物可以進行預防投予，如於任何症狀或環境顯示的發展之前，代表性地，該受體將會在環境發展中處於危險。

另外，近期發明係相關於一包含7~19個胺基酸殘基之胜肽，該胜肽包含胺基酸序列為(X₃)_mKDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO 99所示)，其中該X₁係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬醯胺、穀氨醯胺、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，該X₂係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、精胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，該X₃係為胺基酸序列(X₄)_nANISX₅(如SEQ ID NO：100所示)或包含1~4個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₄係為胺基酸序列VVASQLR(如SEQ ID NO：101所示)或包含1~6個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₅係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬胺酸、穀氨醯胺、穀胺酸、組胺酸、精胺酸、異白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸所組成之群組，其中，m為0或1，且n為0或1，其中，該至少一胜肽係與一載體偶合或熔合，且該載體包含至少一T細胞抗原表位。

本發明之一較佳實施例中，X₁係一胺基酸殘基，選自由蘇胺酸、穀氨醯胺、酪胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸、甘胺酸及纈胺酸所組成之群組。

當m為1，X₁較佳係一胺基酸殘基，選自由丙胺酸、天門冬醯胺、谷氨醯胺、組胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸及蘇胺酸所組成之群組，且X₅係一胺基酸殘基，選自由丙胺酸、組胺酸、甲硫胺酸及蘇胺酸所組成之群組，較佳為丙胺酸、蘇胺酸或甲硫胺酸，及/或X₂係一胺基酸殘基，選自由甲硫胺酸、丙胺酸、賴胺酸及纈胺酸所組成之群組。

本發明之一尤佳實施例中，m為1，該X₅係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、組胺酸、甲硫胺酸及蘇胺酸所組成之群組，較佳為丙胺酸、蘇胺酸或甲硫胺酸。

本發明之另一較佳實施例中，X₂為一胺基酸殘基，選自甲硫胺酸、丙胺酸、賴胺酸及纈胺酸所組成之群組。

本發明之一尤佳實施例中，該胜肽係選自ISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：14所示)、ANISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：21所示)、KDMQLGA(如SEQ ID NO：22所示)、VVASQLRANISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：23所示)、ANISHKDMQLGT(如SEQ ID NO：24所示)、ANISHKDMQLGQ(如SEQ ID NO：25所示)、ANISHKDMQLGY(如SEQ ID NO：26所示)、ANISHKDMQLGM(如SEQ ID NO：27所示)、ANISHKDMQLGG(如SEQ ID NO：28所示)、ANISHKDMQLGV(如SEQ ID NO：29所示)、ANISHKDMQLGK(如SEQ ID NO：30所示)、ANISHKDMQLGS(如SEQ ID NO：31所示)、ANISHKDMQLGH(如SEQ ID NO：32所示)、ANISHKDMQLGN(如SEQ ID NO：33所示)、ANISHKDMQLGL(如SEQ ID NO：34所示)、ANISTKDMQLGA(如SEQ ID NO：70所示)、ANISTKDMQLGQ(如SEQ ID NO：71所示)、ANISTKDMQLGS(如SEQ ID NO：72所示)、ANISTKDMQLGM(如SEQ ID NO：73所示)、ANISMKDMQLGN(如SEQ ID NO：74所示)、ANISTKDKQLGM(如SEQ ID NO：75所示)、ANISTKDMQLGH(如SEQ ID NO：76所示)、ANISAKDMQLGA(如SEQ ID NO：77所示)、ANISMKDMQLGA(如SEQ ID NO：78所示)、ANISTKDKQLGA(如SEQ ID NO：79所示)、ANISTKDAQLGA(如SEQ ID NO：80所示)、ANISMKDMQLGS(如SEQ ID NO：81所示)、NISTKDVQLGA(如SEQ ID NO：82所示)、ANISTKDMQLGN(如SEQ ID NO：83所示)、ANISTKDMQLGK(如SEQ ID NO：84所示)、ANISMKDMQLGM(如SEQ ID NO：85所示)、ANISTKDMQLGT(如SEQ ID NO：86所示)、ANISHKDKQLGK(如SEQ ID NO：87所示)、ANISMKDMQLGH(如SEQ ID NO：88所示)及ANISAKDAQLGA(如SEQ ID NO：89所示)所組成之群組。

另一方面，本發明係關於一疫苗，係包含至少一胜肽，該胜肽包含7~19個胺基酸殘基，且該胜肽之胺基酸序列係由(X₃)_mKDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：99所示)所組成，其中，該X₁係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬醯胺、穀氨醯胺、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，較佳為精胺酸，該X₂係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、精胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，較佳為丙胺酸、纈胺酸、蘇胺酸、酪胺酸或白胺酸，更佳為纈胺酸，該X₃係為胺基酸序列(X₄)_nANISX₅(如SEQ ID NO：100所示)或包含1~4個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₄係為胺基酸序列VVASQLR(SED ID NO：101所示)或包含1~6個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₅係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬胺酸、穀氨醯胺、穀胺酸、組胺酸、精胺酸、異白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸所組成之群組，最佳為組胺酸，其中，m為0或1，且n為0或1，其中，該至少一胜肽係與一載體偶合或熔合，且該載體包含至少一T細胞抗原表位。

然而，本發明另一方面係關於一疫苗，包含至少一胜肽，該胜肽包含7~19個胺基酸殘基，且該胜肽之胺基酸序列係由(X₃)_mKDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：99所示)所組成，其中，該X₁係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬胺酸、穀氨醯胺、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，最佳為精胺酸，該X₂係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、精胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，較佳為甲硫胺酸，該X₃係為胺基酸序列(X₄)_nANISX₅(如SEQ ID NO：100所示)或包含1~4個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₄係為胺基酸序列VVASQLR(如SEQ ID NO：101所示)或包含1~6個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₅係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬醯胺、穀氨醯胺、穀胺酸、精胺酸、異白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸及蘇胺酸所組成之群組，較佳為蘇胺酸、穀氨醯胺、穀胺酸、絲胺酸、賴胺酸或天門冬醯胺，更佳為蘇胺酸或穀氨醯胺，其中，m為0或1，且n為0或1，其中，該至少一胜肽係與一載體偶合或熔合，且該載體包含至少一T細胞抗原表位。

本發明較佳實施例中，X₃係為胺基酸序列(X₄)_nANISX₅(如SEQ ID NO：100所示)或一胺基端缺失片段，且X₁為精胺酸。因此該胺基端缺失片段可以包含ANISX₅(如SEQ ID NO：102所示)、NISX₅(如SEQ ID NO：103所示)、ISX₅、SX₅或X₅；亦即，當m為1，本發明之疫苗係可以包含具有胺基酸序列為ANISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 119所示)、NISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 120所示)、ISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 121所示)、SX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 122所示)或X₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 123所示)之至少一胜肽。

本發明之一較佳實施例中，X₄係為VVASQLR(如SEQ ID NO：101所示)或其胺基端缺失片段，該VVASQLR片段係可以選自下列胺基酸序列之一：VASQLR(如SEQ ID NO：109所示)、ASQLR(如SEQ ID NO：110所示)、SQLR(如SEQ ID NO：111所示)、QLR、LR、或R；是以，當m及n為1，本發明之疫苗之至少一胜肽係可以具如下胺基酸序列之一：VVASQLRANISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 124所示)、VASQLRANISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 125所示)、ASQLRANISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 126所示)、SQLRANISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 127所示)、QLRANISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 128)、LRANISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 129所示)或是RANISX₅KDX₂QLGR(如SEQ ID NO 130所示)。

本發明之一尤佳實施例中，若X₂係上述定義之胺基酸且非甲硫胺酸，則SEQ ID NOs 119~130中的X₅係組胺酸。

本發明之一更佳實施例中，若X₅係上述定義之胺基酸且非組胺酸，則SEQ ID NOs 119~130中的X₂係甲硫胺酸。

本發明之一尤佳實施例中，該胜肽係選自由ANISHKDVQLGR(如SEQ ID NO 56所示)、ANISHKDTQLGR(如SEQ ID NO 57所示)、ANISHKDYQLGR(如SEQ ID NO 58所示)、ANISHKDLQLGR(如SEQ ID NO 59所示)、ANISHKDAQLGR(如SEQ ID NO 18所示)、ANISTKDMQLGR(如SEQ ID NO 39所示)、ANISQKDMQLGR(如SEQ ID NO 40所示)、ANISEKDMQLGR(如SEQ ID NO 41所示)、ANISSKDMQLGR(如SEQ ID NO 42所示)、ANISKKDMQLGR(如SEQ ID NO 43所示)及ANISNKDMQLGR(如SEQ ID NO 44所示)的族群，較佳為選自包含 ANISHKDVQLGR(如SEQ ID NO 56所示)，ANISTKDMQLGR(如SEQ ID NO 39所示)及ANISQKDMQLGR(如SEQ ID NO 40所示)所組成之群組。

另一方面，本發明係關於一胜肽，選自由ANISHKDVQLGR(如SEQ ID NO 56所示)、ANISHKDTQLGR(如SEQ ID NO 57所示)、ANISHKDYQLGR(如SEQ ID NO 58所示)、ANISHKDLQLGR(如SEQ ID NO 59所示)、ANISHKDAQLGR(如SEQ ID NO 18所示)、ANISTKDMQLGR(如SEQ ID NO 39所示)、ANISQKDMQLGR(如SEQ ID NO 40所示)、ANISEKDMQLGR(如SEQ ID NO 41所示)、ANISSKDMQLGR(如SEQ ID NO 42所示)、ANISKKDMQLGR(如SEQ ID NO 43所示)及ANISNKDMQLGR(如SEQ ID NO 44所示)所組成之群組，較佳為選自ANISHKDVQLGR(如SEQ ID NO 56所示)，ANISTKDMQLGR(如SEQ ID NO 39所示)and ANISQKDMQLGR(如SEQ ID NO 40所示)所組成之群組。

本發明之目的係發展對抗過多人類C5a之一中和活化免疫反應，以防止過多人類C5a在慢性發炎性疾病或急性病理情形中之致病活性。

為達到此目的，係設計一VARIOTOPE以進行免疫作用，進而誘發對抗人類C5a羧基端之新抗原表位之抗體。該位於C5a羧基端之新抗原表位因C5蛋白質被C5轉化酶(convertase)裂解而造成過敏性小型片段C5a及C5b，一膜攻擊複合物的一員。VARIOTOPE係免疫性胜肽，能藉召集目標蛋白質之抗原表位，來對一目標蛋白質引發體液性免疫。因此，VARIOTOPE疫苗之優勢為避開對自體抗原的自體耐受性(autotolerance)，此外，VARIOTOPE之使用可以減緩使用體抗原造成之非蓄意副作用。

所有胜肽皆經由半胱胺酸之胺基端以化學性連結至該鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)蛋白質載體，且與鋁作為佐劑共同施用於小鼠。獲得自以VARIOTOPE進行免疫或是以hC5a原始的羧基序列進行免疫的小鼠之所有免疫血清係針對hC5a造成之抗體力價(titer)與具功能的活性抗體能力進行分析。

材料與方法

小鼠免疫反應

BALB/c品種小鼠係作為hC5a-VARIOTOPE免疫反應實驗的動物模式系統。6至8周大的BALB/c母鼠注射結合KLH之VARIOTOPE(200μl，與pH=7.4磷酸鹽溶液皮下注射)並每兩周加強免疫一次，共4次。含鋁水合膠係當做佐劑。VARIOTOPE疫苗共使用5至6隻小鼠來進行免疫反應。

免疫分析

生產疫苗之小鼠的免疫血清，係對應其注射之胜肽(資料未顯示)及hC5a蛋白質，藉由酵素免疫分析法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)來分析其抗體反應。抗體力價係以血清稀釋獲得之最大結合量的一半(例如：ODmax/2)及每一群組中所有小鼠的平均力價來呈現。

C5a抑制分析

胜肽或VARIOTOPE引發之對抗C5a抗體之抑制活性，係藉由在人類U397細胞以葡萄糖醛酸酶(glucuronidase)酵素釋放分析法來進行。U397細胞係以cyclic adenosine3’：5’-monophosphate分化，並以人類重組C5a蛋白刺激β-葡萄糖醛酸酶釋放，該效果可被hC5a特異性抗體或胜肽誘發之抗hC5a免疫血清的加入而阻斷。

詳而言之，U397細胞在含10% FBS之RPMI中以cAMP分化五天，在第五天時細胞在37℃下以細胞松弛素B(cytochalasin B)預處理十分鐘。每組1.8×10⁵預處理細胞再以10nM hC5a或外加8%熱失活處理血清(56℃一小時)之10nM hC5a進行刺激，其中，該血清源自以不同胜肽或VARIOTOPE(如表1及2之SEQ ID NOs：1~98所示)進行免疫之小鼠血清，且溶於最終體積120μl HAG-CM緩衝液(含20mM HEPES pH=7.4，125mM NaCl，5mM KCl，0.5mM glucose，1mM CaCl₂，1mM MgCl₂及0.25% BSA)。在37℃中刺激十分鐘後，細胞離心並將上清液注入至96孔盤，並與0.01M之P-nitrophenyl-β-D-glucuronide(溶於0.1M sodium acetate pH=4.0)以1：1的比例稀釋，使總體積為150μl。將96孔盤避光培養於37℃一小時，然後加入0.4M甘胺酸緩衝液(pH=10.0)以使反應停止。β-葡萄糖醛酸酶將P-nitrophenyl-β-D-glucuronide轉化為黃色，並以405nm測量。

表1係人類C5a羧基端之抗原表位，用以作為生產VARIOTOPE之模板。

表2係人類C5a羧基端片段之VARIOTOPE清單(如SEQ ID NOs：1~4)，其中，個別或多個胺基酸係被置換為不同的胺基酸殘基(以底線粗體表示)。

表3係所有胺基酸之縮寫及其側鏈特性

第一實施例：hC5a羧基端抗原表位(如SEQ ID NO：1~4及表1所示)之丙胺酸掃描，藉以定義出被置換胺基酸後免疫性與誘發抗hC5a抗體的能力能夠維持甚至增加的胺基酸位置。

hC5a羧基端抗原表位上之個別胺基酸係被置換為丙胺酸殘基，以比較置換丙胺酸前後之抗原表位免疫性。所有的VARIOTOPE皆能引發與注射之胜肽相結合的抗體，然而，與hC5a蛋白結合之力價並不同。置換為丙胺酸的hC5a第66號胺基酸(S66A)、第68號胺基酸(K68A)、第71號胺基酸(Q71A)、第72號胺基酸(L72A)、第73號胺基酸(G73A)明顯消除辨認hC5a的抗體之產生(如第1A及1B圖，SEQ ID NOs：6、8、11、12、13、19及20)。原始序列(如SEQ ID NOs：1~3所示)引發相對高的抗體力價，然而VARIOTOPE(如SEQ ID NOs：6、8、11、12、13、19及20所示)引發之抗體力價降低至小於13.000 ODmax/2，顯示胺基酸S、K、Q、L及G(hC5a上第66、68、71、72及73號胺基酸位置)對引發hC5a專一性抗體為重要的(如第1A及1B圖，表1~2所示)。

相較之下，第74號胺基酸位置之精胺酸置換為丙胺酸，能顯著增加抗hC5a抗體。這不只表現於10及12個胺基酸長度的hC5a羧基端斷片(如第1A及1B圖，SEQ ID NOs：14、21所示)，也表現於所有不同長度之hC5a羧基端VARIOTOPE及R74A(如第1C及1D圖，SEQ ID NOs：22~23所示)。VARIOTOPE R74A的力價範圍為56.000至88.000且與原始序列(如第1D圖，SEQ ID NOs：4及23所示)相比之下增加達5.5倍。VARIOTOPE N64A，I65A，H67A，D69A及M70A(如SEQ ID NOs：5、7、9、10、15~18所示)則展現出近似於原始抗原表位SEQ ID NOs：1~2之抗hC5a力價(如第1A及1B圖，表1及2所示)。總結而言，不同長度的hC5a羧基端抗原表位上單一胺基酸之置換，導致相似的結果，這顯示特定胺基酸殘基對hC5a免疫能力僅輕微被胜肽長度所影響。尤其是hC5a羧基端斷片上第74號胺基酸位置之精胺酸置換為丙胺酸，導致與原始的抗原表位相比，置換後之抗hC5a的力價顯著增加。被用來做疫苗反應的胜肽斷片包含至少hC5a羧基端之最後7個胺基酸以確保免疫能力，且可能不超過19個胺基酸，該為hC5a羧基端新抗原表位之定義長度。

各個胺基酸被置換為丙胺酸的VARIOTOPE的抑制活性，係以葡萄糖醛酸酶酵素釋放分析來評估。簡而言之，分化的人類U937細胞被hC5a刺激後會釋放β-葡萄糖醛酸酶，此刺激效果可被抗hC5a的免疫血清阻斷。

被VARIOTOPE R74A引發之免疫血清顯現最佳的抑制能力，且其抑制活性相對於原始序列(如SEQ ID NOs：1~4所示)增加兩倍(如第2A~D圖，SEQ ID NOs：14、21、22及23所示)。此外，由SEQ ID NOs：5、7、10、17及18引發之免疫血清，其抑制活性相較於原始抗原表位為增加或與相同(如第2A及2B圖所示)。因此，H67A(如SEQ ID NOs：7及17所示)、M70A(如SEQ ID NOs：10及18所示)及10個胺基酸長度的I65A(如SEQ ID NO：5；而非12個胺基酸長度的I65A，SEQ ID NO：16)，似乎有利於引發具功能之抗hC5a抗體；然而，在不同長度之VARIOTOPE中，R74A皆具有優勢(如第2A~D圖所示)。

抗hC5a之蛋白質力價及藉由葡萄糖醛酸酶釋放分析所測出之功能活性之間，具有很好的關連性。後續之實施例中，僅有原始抗原表位引發之免疫血清(抗體)抑制活性及VARIOTOPE被展現，原則上相較於單獨之抗體力價，效率較具預測性。

第二實施例：藉由丙胺酸掃描所定義出之hC5a重要胺基酸為第74號胺基酸位置之精胺酸，其會導致hC5a兩倍以上的抑制活性(如第2圖所示)。因此，在下個實驗中，第74號胺基酸進行系統性地置換成多種相對於精胺酸殘基而言，具較小殘基或相反特性殘基之胺基酸(如表3所示)。本實驗中，具12個胺基酸長度之羧基端抗原表位係被選為模板，因為相較於10或20個胺基酸長度之斷片(如第1A及D圖所示)，該12個胺基酸長度之斷片(如第1B圖所示)引發較高之抗hC5a抗體力價，並且相較於七個胺基酸長度之hC5a羧基端斷片，該12個胺基酸長度之斷片也顯現較佳之免疫活性。

具12個胺基酸長度之hC5a羧基端抗原表位的16種R74X VARIOTOPE被測試其免疫能力及其引發具功能性之活性抗體的能力。獲自R74T及R74Q VARIOTOPE的免疫血清在葡萄糖醛酸酶釋放分析顯示最佳之抑制效果(如第3圖，SEQ ID NOs：24及25所示)，次佳效果為R74Y(如第3圖，SEQ ID NO：26所示)及將R置換成非極性脂肪族胺基酸殘基M、A、G及V(如第3圖，SEQ ID NOs：27、21、28及29所示)。當VARIOTOPE中的R被置換為帶負電荷之胺基酸(R74D)或芳香族、非極性胺基酸(W及F)以及P等會影響結構的胺基酸，則不傾向於引發hC5a抑制性抗體(如第4圖，SEQ ID NOs：35~38所示)。

第三實施例：hC5a上第67號胺基酸位置之組胺酸，係為丙胺酸掃描中另一個傾向於被置換之胺基酸。因此，第67號胺基酸同樣進行系統性地置換成多種相對於組胺酸殘基而言，具較小殘基或相反特性殘基之胺基酸(如表3所示)。具12個胺基酸長度之hC5a羧基端抗原表位的18種H67X VARIOTOPE被測試其免疫能力及其引發具功能性之活性抗體的能力(如SEQ ID NOs：17，39~55所示)。

獲自H67T及H67Q VARIOTOPE的免疫血清在葡萄糖醛酸酶釋放分析顯示最佳之抑制效果(如第4圖，SEQ ID NOs：39及40所示)，且其抑制效果比原始序列(如SEQ ID NO：2所示)增加20%(如第4圖所示)。與原始序列(如SEQ ID NO：2所示)相比，獲自SEQ ID NOs：41~47 VARIOTOPE的免疫血清之抑制效果呈現些微上升或是相同。SEQ ID NOs：51~55 VARIOTOPE引發之免疫血清造成之hC5a抑制效果明顯降低，其與原始序列(如SEQ ID NO：2所示)相比降低了20%以上(如第4圖所示)。

第四實施例：hC5a上第70號胺基酸位置之甲硫胺酸，係為下一個進行系統性地置換以得到能引發比hC5a原始12個胺基酸長度之羧基端抗原表位更高的對抗hC5a抑制能力之VARIOTOPE。15種VARIOTOPE進行葡萄糖醛酸酶釋放分析，藉以測試其功能活性。SEQ ID NOs：18及56~62之VARIOTOPE引發之免疫血清顯示較佳或與原始抗原表位(如SEQ ID NO：2所示)類似的抑制效果(如第5圖所示)。然而，SEQ ID NOs：63~60之VARIOTOPE顯示逐步下降之抑制活性，且並不傾向於引發對抗hC5a之具功能性活性抗體。

第五實施例：hC5a上第74號胺基酸位置，在hC5a羧基端斷片之免疫能力上具有很重要的效果，並也接續影響其引發之抗體的功能活性(如第3圖所示)。然而，這樣的效果在hC5a羧基端抗原表位上置換第67或70號或是兩個胺基酸位置同時置換後，次要顯著。在包含R74X 及另一胺基酸置換位置67或70，或是兩個胺基酸位置同時置換之VARIOTOPE之實驗中，分別測試其免疫能力。H67T、H67M及H67A伴隨第74號胺基酸位置R置換成非極性之小胺基酸殘基(A、M)、極性無電荷胺基酸殘基(Q、S、N)及帶正電荷胺基酸殘基(H)後，得到高於原始抗原表位(如SEQ ID NO：2所示)的較高抗hC5a抗體力價及增加近1.5倍之活性抗體(如第6圖，SEQ ID NOs：70~80所示)。第74號胺基酸位置之有利置換，伴隨第67號胺基酸位置置換為如H67T、H67M及H67A，或是伴隨第7號胺基酸位置置換為如M70K、M70A及M70V，可造成比原始序列(如SEQ ID NO：2所示)更高之抑制活性。相較於原始序列，VARIOTOPE SEQ ID NOs：90~98引發之免疫血清降低抑制活性(如第6圖所示)。

雖然本發明已利用上述較佳實施例揭示，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者在不脫離本發明之精神和範圍之內，相對上述實施例進行各種更動與修改仍屬本發明所保護之技術範疇，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

<110> 亞佛瑞司股份有限公司(Affiris AG)

<120> 組成物 (Composition)

<130> R 63571

<150> EP 12166314.0

<151> 2012-05-01

<160> 196

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 1

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 2

<210> 3

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 3

<210> 4

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 4

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 5

<210> 6

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 6

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 7

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 8

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 9

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 10

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 11

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 12

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 13

<210> 14

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 14

<210> 15

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 15

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 16

<210> 17

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 17

<210> 18

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 18

<210> 19

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 19

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 20

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 21

<210> 22

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 22

<210> 23

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 23

<210> 24

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 24

<210> 25

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 25

<210> 26

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 26

<210> 27

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 27

<210> 28

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 28

<210> 29

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 29

<210> 30

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 30

<210> 31

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 31

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 32

<210> 33

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 33

<210> 34

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 34

<210> 35

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 35

<210> 36

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 36

<210> 37

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 37

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 38

<210> 39

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 39

<210> 40

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 40

<210> 41

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 41

<210> 42

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 42

<210> 43

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 43

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 44

<210> 45

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 45

<210> 46

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 46

<210> 47

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 47

<210> 48

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 48

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 49

<210> 50

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 50

<210> 51

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 51

<210> 52

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 52

<210> 53

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 53

<210> 54

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 54

<210> 55

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 55

<210> 56

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工胜肽序列

<400> 56

<210> 57

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共同序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=(任一胺基酸殘基)n，其中n=0或大於0之整數

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=一胺基酸殘基選自由天冬胺酸(aspartic acid,D)及麩胺酸(glutamic acid, E)所組成之群組

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa=任一胺基酸殘基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=任一胺基酸殘基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa=一胺基酸殘基選自由脯胺酸(proline,P)及丙胺酸(alanine,A)所組成之群組

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=(任一胺基酸殘基)n，其中n=0或大於0之整數

<400> 57

<210> 58

<211> 140

<212> PRT

<213> 人類

<400> 58

<210> 59

<211> 134

<212> PRT

<213> 人類

<400> 59

<210> 60

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類甲型共核蛋白片段

<400> 60

<210> 61

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 61

<210> 62

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 62

<210> 63

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 63

<210> 64

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 64

<210> 65

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 65

<210> 66

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 66

<210> 67

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 67

<210> 68

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 68

<210> 69

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 69

<210> 70

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 70

<210> 71

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 71

<210> 72

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 72

<210> 73

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 73

<210> 74

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 74

<210> 75

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 75

<210> 76

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 76

<210> 77

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 77

<210> 78

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 78

<210> 79

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 79

<210> 80

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 80

<210> 81

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 81

<210> 82

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 82

<210> 83

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 83

<210> 84

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 84

<210> 85

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 85

<210> 86

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 86

<210> 87

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 87

<210> 88

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 88

<210> 89

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 89

<210> 90

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 90

<210> 91

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 91

<210> 92

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 92

<210> 93

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 93

<210> 94

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 94

<210> 95

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 95

<210> 96

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 96

<210> 97

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 97

<210> 98

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 98

<210> 99

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 99

<210> 100

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 100

<210> 101

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 101

<210> 102

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 102

<210> 103

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 103

<210> 104

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 104

<210> 105

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 105

<210> 106

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 106

<210> 107

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 107

<210> 108

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 108

<210> 109

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 109

<210> 110

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 110

<210> 111

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 111

<210> 112

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 112

<210> 113

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 113

<210> 114

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 114

<210> 115

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 115

<210> 116

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 116

<210> 117

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 117

<210> 118

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 118

<210> 119

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 119

<210> 120

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 120

<210> 121

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 121

<210> 122

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 122

<210> 123

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 123

<210> 124

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 124

<210> 125

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 125

<210> 126

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 126

<210> 127

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 127

<210> 128

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 128

<210> 129

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 129

<210> 130

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 130

<210> 131

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 131

<210> 132

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 132

<210> 133

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 133

<210> 134

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<400> 134

<210> 135

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=(Xaa)n，其中Xaa係任一胺基酸殘基，較佳為半胱胺酸(cysteine)，且n為0或大於0之整數，較佳為1或0

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係一胺基酸殘基，選自由離胺酸(lysine,K)，精胺酸(arginine,R)，丙胺酸(alanine,A)及組胺酸(histidine,H)所組成之群組

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa係一胺基酸殘基，選自由天冬醯胺酸(asparagine,N)，麩醯胺酸 (glutamine,Q)，絲胺酸(serine,S)，甘胺酸(glycine,G)及丙胺酸(alanine,A)所組成之群組

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa係一胺基酸殘基，選自由麩胺酸(glutamic acid,E)，天冬胺酸(aspartic acid,D)及丙胺酸 (alanine,A)所組成之群組

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係一胺基酸殘基，選自由麩胺酸(glutamic acid,E)及天冬胺酸 (aspartic acid,D)所組成之群組

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa係一胺基酸殘基，選自由丙胺酸(alanine,A)及酪胺酸(tyrosine,Y)所組成之群組

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=(Xaa)m，其中Xaa係任一胺基酸殘基，較佳為半胱胺酸(cysteine)，且n為0或大於0之整數，較佳為1或0

<400> 135

<210> 136

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=(Xaa)m，其中Xaa係任何胺基酸殘基，較佳為半胱胺酸(cysteine)，且n為0或大於0之整數，較佳為1或0

<400> 136

<210> 137

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=(Xaa)n，其中Xaa係任何胺基酸殘基，較佳為半胱胺酸(cysteine)，且n為0或大於0之整數，較佳為1或0

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 137

<210> 138

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 138

<210> 139

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=(Xaa)m其中Xaa係任一胺基酸殘基，較佳為半胱胺酸(cysteine)，且n為0或大於0之整數，較佳為1或0

<400> 139

<210> 140

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 140

<210> 141

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=(Xaa)n其中Xaa係任一胺基酸殘基，較佳為半胱胺酸(cysteine)，且n為0或大於0之整數，較佳為1或0

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 141

<210> 142

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 142

<210> 143

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 143

<210> 144

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 144

<210> 145

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 145

<210> 146

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 146

<210> 147

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 147

<210> 148

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 148

<210> 149

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 149

<210> 150

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 150

<210> 151

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 151

<210> 152

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 152

<210> 153

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 153

<210> 154

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 154

<210> 155

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=(Xaa)n,wherein Xaa is any amino acid residue,preferably cysteine,and n is 0 or an integer of more than 0,preferably 1 or 0

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=(Xaa)m,wherein Xaa is any amino acid residue,preferably cysteine,and m is 0 or an integer of more than 0,preferably 1 or 0

<400> 155

<210> 156

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 156

<210> 157

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(14)

<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid

<400> 157

<210> 158

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 158

<210> 159

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 159

<210> 160

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 160

<210> 161

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 161

<210> 162

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 162

<210> 163

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 163

<210> 164

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 164

<210> 165

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 165

<210> 166

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 166

<210> 167

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 167

<210> 168

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 168

<210> 169

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 169

<210> 170

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 170

<210> 171

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 171

<210> 172

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 172

<210> 173

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 173

<210> 174

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 174

<210> 175

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 175

<210> 176

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 176

<210> 177

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 177

<210> 178

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 178

<210> 179

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 179

<210> 180

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 180

<210> 181

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 181

<210> 182

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 182

<210> 183

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 183

<210> 184

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 184

<210> 185

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 185

<210> 186

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 186

<210> 187

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 187

<210> 188

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 188

<210> 189

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 189

<210> 190

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 190

<210> 191

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400>191

<210> 192

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 192

<210> 193

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 193

<210> 194

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 194

<210> 195

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 擬抗原決定位

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<400> 195

<210> 196

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類甲型共核蛋白片段

<400> 196

Claims

一種疫苗，係包含至少一胜肽，該胜肽包含7~19個胺基酸殘基，且該胜肽之胺基酸序列係(X₃)_mKDX₂QLGX₁(如SEQ ID NO：99所示)，其中，該X₁係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬醯胺、穀氨醯胺、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，該X₂係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、精胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及纈胺酸所組成之群組，該X₃係為胺基酸序列(X₄)_nANISX₅(如SEQ ID NO：100所示)或包含1~4個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₄係為胺基酸序列VVASQLR(如SEQ ID NO：101所示)或包含1~6個胺基酸殘基之該胺基酸序列胺基端缺失片段，該X₅係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬胺酸、穀氨醯胺、穀胺酸、組胺酸、精胺酸、異白胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸所組成之群組，其中，m為0或1，且n為0或1，其中，該至少一胜肽係與一載體偶合或熔合，且該載體包含至少一T細胞抗原表位。
如申請專利範圍第1項所述之疫苗，其中，該X₁係一胺基酸殘基，選自蘇胺酸、穀氨醯胺、酪胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸、甘胺酸及纈胺酸所組成之群組。
如申請專利範圍第1項所述之疫苗，其中，該X₁係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、天門冬醯胺、穀氨醯胺、組胺酸、賴胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸及蘇胺酸所組成之群組，m為1，該X₅係一胺基酸殘基，選自丙胺酸、組胺酸、甲硫胺酸及蘇胺酸所組成之群組，較佳為丙胺酸、蘇胺酸或甲硫胺酸，及/或X₂為一胺基酸殘基，選自甲硫胺酸、丙胺酸、賴胺酸及纈胺酸所組成之群組。
如申請專利範圍第1或2項所述之疫苗，其中，m為1，X₅為一胺基酸殘基，選自甲硫胺酸、丙胺酸、賴胺酸及纈胺酸所組成之群組。
如申請專利範圍第1、2或4項所述之疫苗，其中，該X₂係一胺基酸殘基，選自甲硫胺酸、丙胺酸、賴胺酸及纈胺酸所組成之群組。
如申請專利範圍第1~5項中任一項所述之疫苗，其中，該至少一胜肽係選自ISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：14所示)、ANISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：21所示)、KDMQLGA(如SEQ ID NO：22所示)、VVASQLRANISHKDMQLGA(如SEQ ID NO：23所示)、ANISHKDMQLGT(如SEQ ID NO：24所示)、ANISHKDMQLGQ(如SEQ ID NO：25所示)、ANISHKDMQLGY(如SEQ ID NO：26所示)、ANISHKDMQLGM(如SEQ ID NO：27所示)、ANISHKDMQLGG(如SEQ ID NO：28所示)、ANISHKDMQLGV(如SEQ ID NO：29所示)、ANISHKDMQLGK(如SEQ ID NO：30所示)、ANISHKDMQLGS(如SEQ ID NO：31所示)、ANISHKDMQLGH(如SEQ ID NO：32所示)、ANISHKDMQLGN(如SEQ ID NO：33所示)、ANISHKDMQLGL(如SEQ ID NO：34所示)、ANISTKDMQLGA(如SEQ ID NO：70所示)、ANISTKDMQLGQ(如SEQ ID NO：71所示)、ANISTKDMQLGS(如SEQ ID NO：72所示)、ANISTKDMQLGM(如SEQ ID NO：73所示)、ANISMKDMQLGN(如SEQ ID NO：74所示)、ANISTKDKQLGM(如SEQ ID NO：75所示)、ANISTKDMQLGH(如SEQ ID NO：76所示)、ANISAKDMQLGA (如SEQ ID NO：77所示)、ANISMKDMQLGA(如SEQ ID NO：78所示)、ANISTKDKQLGA(如SEQ ID NO：79所示)、ANISTKDAQLGA(如SEQ ID NO：80所示)、ANISMKDMQLGS(如SEQ ID NO：81所示)、NISTKDVQLGA(如SEQ ID NO：82所示)、ANISTKDMQLGN(如SEQ ID NO：83所示)、ANISTKDMQLGK(如SEQ ID NO：84所示)、ANISMKDMQLGM(如SEQ ID NO：85所示)、ANISTKDMQLGT(如SEQ ID NO：86所示)、ANISHKDKQLGK(如SEQ ID NO：87所示)、ANISMKDMQLGH(如SEQ ID NO：88所示)及ANISAKDAQLGA(如SEQ ID NO：89所示)所組成之群組。
如申請專利範圍第1~6項中任一項所述之疫苗，其中，該至少一胜肽包含於胺基端結合至少一半胱胺酸殘基，該至少一半胱胺酸殘基係直接或以一間隔序列結合於該胜肽之胺基端。
如申請專利範圍第1~7項中任一項所述之疫苗，其中，包含至少一T細胞抗原表位之該載體係一蛋白質載體。
如申請專利範圍第8項所述之疫苗，其中，該蛋白質載體係選自鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)、CRM197、破傷風類毒素(TT)、蛋白質D或白喉毒素(DT)。
如申請專利範圍第1~9項中任一項所述之疫苗，其中，該化合物係與一佐劑複合，較佳係與鋁吸附。
如申請專利範圍第1~10項中任一項所述之疫苗，係用以治療及/或預防一補體系統相關疾病。
如申請專利範圍第11項所述之疫苗，其中，該補體系統相關疾病係一發炎疾病，較佳係一慢性發炎疾病。
如申請專利範圍第12項所述之疫苗，其中，該發炎疾病係選自老年性黃斑部病變(AMD)、神經退化性疾病，特別是阿茲海默症、帕金森氏症或亨丁頓舞蹈症、氣喘、動脈粥狀硬化、血管炎、皮膚炎，特別是亁癬及蕁麻疹、溶血***候群、類風濕性關節炎、格林-巴利症候群、多發性硬化症、抗磷脂抗體症候群、溶血***候群、及紅斑性狼瘡(SLE)所組成之群組。
如申請專利範圍第11項所述之疫苗，其中，該補體系統相關疾病係選自缺血-再灌流損傷、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、敗血症、癌症、姙娠併發症，如姙娠高血壓、反覆自發性流產、生長發育遲緩及血液透析相關血栓所組成之群組。