TW201333194A - 用於發展認知功能之洛德乳桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ １７９３８ - Google Patents

Abstract

本發明係關於用於促進在幼小哺乳動物中建立健康及正常認知功能之洛德乳桿菌(Lactobacillus reuteri)DSM 17938。特定而言，本發明係關於洛德乳桿菌DSM 17938用於促進負責認知功能之腦結構(例如皮質及海馬迴)及其相關神經路徑之發育、及/或逆轉認知功能建立之延遲、及/或防止認知功能建立之延遲之用途。人類或動物及特定而言胎兒、早產或足月嬰兒、幼童或兒童或青少年可自本發明受益。

Description

用於發展認知功能之洛德乳桿菌(Lactobacillus reuteri)DSM 17938

本發明概言之係關於神經元健康、神經元保護及神經元發育之領域。具體而言，本發明係關於投與能夠促進嬰兒、尤其早產嬰兒、低出生體重嬰兒、極低及超低出生體重嬰兒中之認知功能之健康建立之益生菌。

神經系統係由神經元及神經膠質細胞構成之高度複雜網絡。其存在於所有哺乳動物物種中且係由中樞神經系統(腦及脊髓)及週邊神經系統(軀體、自律及腸神經系統)構成。

中樞神經系統(CNS)及特定而言腦會驅動認知功能。大腦皮質係位於哺乳動物腦之大腦最外側之神經組織薄片，其在注意力、知覺意識、思想、語言、高級認知(執行功能)及資訊整合感覺輸入中發揮關鍵作用。其係由至多6個水平層組成，每一水平層在神經元及連接性方面具有不同組成。人類大腦皮質係2-4 mm(0.08-0.16英吋)厚。

大腦皮質之系統發生學最近部分(新皮質，亦稱為同形皮質)分化成6個水平層；腦之較年久部分(海馬迴，亦稱為原腦皮質)具有至多三個細胞層且分成子域。不同層中之神經元垂直連接以形成較小微電路(稱為柱)。不同新皮質構造區域可藉由以下因素之差異來區分：該等層之厚度、其主要細胞類型及其他因素(例如神經化學標記物)。[Kandel,E.R.等人(2000)；Principles of Neural Science， 第4版，McGraw-Hill,USA，ISBN 0-8385-7701-6，第324頁]。

CNS與週邊神經系統一起在行為控制中具有基礎作用。軀體神經系統負責協調身體運動(在意識控制下)。自律神經系統在並無意識控制下維持身體活動(心率等)中之穩態。

中樞神經系統之發育及成熟係涉及諸多生理學過程之高度複雜生物現象，該等生理學過程包含(例如)神經元及神經膠質細胞生長及分化、神經元路徑搜尋及分支及經由軸突生長及神經遞質釋放建立神經元間通訊(神經信號)。另外，儘管並非所有軸突皆發生髓鞘化，但需要髓鞘化(神經膠質細胞之重要功能)以隔絕沿軸突攜載之電信號，由此確保充分之信號傳輸，且防止相鄰神經之間之串擾。[Baumann,N.及Pham-Dinh,D.(2001)；Biology of Oligodendrocyte and Myelin in the Mammalian Central Nervous System,Physiological Reviews,81(2)：871-927]；[Deoni,S.C.等人(2011)；Mapping infant brain myelinatio with magnetic resonance imaging,J.Neurosci.,31(2)：784-91]。此過程始於懷孕期間且持續至***/早期成年期期間(直至20歲時為止)[Baumann,N.及Pham-Dinh,D.(2001)]；[Benton,D.(2010)；Neurodevelopment and neurodegeneration：are there critical stages for nutritional intervention？,Nutr.Rev.,68，增刊1：S6-10]。

將神經元可塑性定義為腦持續調適其功能及結構組織以改變需求之能力[Nava,E.及Röder,B.(2011)；Adaptation and maladaptation insights from brain plasticity,Prog.Brain Res.,191：177-94]。回顧在神經系統成熟中較為重要。其係腦之準確功能化所必不可少且係認知、學習及記憶所需。在文獻中已鑑別一些該等生理學過程所需或至少與其有關之神經元標記物(包含蛋白質及神經營養因子)並加以研究[Huang,E.J.及Reichardt,L.F.(2001)；Neurotrophins：Roles in Neuronal Development and Function,Annu.Rev.Neurosci.,24：677-736]；[Denny,J.B.(2006)；Molecular Mechanisms,Biological Actions,and Neuropharmacology of the Growth-Associated Protein GAP43,Current Neuropharmacology,4：293-304]；[Baumann,N.及Pham-Dinh,D.(2001)]；[Musumeci,G.及Minichiello,L.(2011)；BDNF-TrkB signalling in fear learning：from genetics to neural networks,Rev.Neurosci.,22(3)：303-15]；[Xiao,J.等人(2009)；The role of neurotrophins in the regulation of myelin development,Neurosignals,17：265-276]及[Von Bohlen及Halbach,O.(2011)；Immunohistological markers for proliferative events,gliogenesis,and neurogenesis within the adult hippocampus,Cell Tissue Res.,345(1)：1-19]。

中樞神經系統在懷孕期間進行發育且然後在產後階段精修為成熟功能網絡。

人類中之腦發育始於卵子受精之後不久。腦自外胚層發育。在第一步驟中，形成神經管。其膨脹會產生皮質、丘腦及下丘腦、中腦、小腦及髓質[Kaufmann,L.等人(2007)]；[Johnson,M.(2005)；Kognitive Entwicklungsneuropsychologie, Developmental Cognitive Neuroscience,Göttingen：Hogrefe；(第2版)Oxford：Blackwell Publishing]。腦幹係腦之後部且經由顱神經向面部及頸部提供主要活動及感覺神經支配。其包含延腦(末腦)、腦橋(後腦之一部分)及中腦(midbrain、mesencephalon)。

在人類胎兒中，大腦皮質發育地極晚。在神經發生之後，神經元自內部部分(心室及室下區)遷移至腦之特定區域(未來之皮質)中。神經膠質細胞之網絡進行生長，從而證實此細胞遷移。

早產幼兒在大腦皮質之主要感覺區域(感知觸覺、視覺及聽覺之彼等區)以及大腦皮質之主要活動區域中展示極基本之電活性。在妊娠之最後三個月中，胎兒能夠進行簡單形式的學習，就像習慣於重複聽覺刺激(例如恰好在母親腹部外側之大聲拍手)一樣(降低其驚嚇反應)。儘管具有該等相當複雜之能力，但幼兒在來到世界上時具有仍較原始之大腦皮質，且腦之此複雜部分之逐步成熟可闡釋其在生命前幾年中之許多情緒及認知成熟[Lubsen,J.等人(2011)；Microstructural and functional connectivity in the developing preterm brain,Seminars in Perinatology,35,34-43]。

因此，CNS之不成熟或延緩成熟造成了其所調控之重要生物功能之延緩建立及不充分之功能化。因此，大腦皮質之不成熟或延緩成熟可造成學習能力延緩及/或缺損、高級推理損失或發展較差、專注困難、語言發展延緩、記憶及執行功能問題、智力降低及(由此)較差心智表現。亦可 引起其他病症，例如情緒病症及與不能正常交流及社交有關之病症(例如自閉症，包含亞斯伯格症候群(Asperger’s syndrome))。

此可在諸如以下嬰兒中觀察到：

- 早產嬰兒、低出生體重嬰兒(<2500 g)、極低及超低出生體重嬰兒(<1500 g)及小於胎齡嬰兒[Allen,M.C.(2008)；Neurodevelopmental outcomes of preterm infants,Curr.Opin Neurol.,21(2)：123-8]。

- 經歷子宮內生長延遲(IUGR)之早產或足月嬰兒，該子宮內生長延遲係在懷孕期間在任一不良事件(母親吸煙、母親服藥、低胎盤品質、異常胎盤定位、母親及胎兒營養不良、母親壓力/焦慮過大等)後發生；[Gregory,A.等人(2008)；Intrauterine Growth Restriction Affects the Preterm Infant’s Hippocampus,Pediatric Research,63(4)：438-443]。

-在(例如)出生時缺氧-缺血或任一其他不良事件後展示神經系統生長延遲之任一新生兒及嬰幼兒[Barrett,R.D.等人(2007)；Destruction and reconstruction：hypoxia and the developing brain,Birth Defects Res.C.Embryo Today,81：163-76]。

因此，若胎兒、新生兒或嬰兒已經歷中樞神經系統生長延遲，則期望此延遲迅速逆轉(若可能)，或防止任何進一步之延遲，從而中樞神經系統之發育「追上」正常程度且生長中之胎兒或嬰兒在隨後生命中經歷儘可能少之認知功能缺損。

已知營養在腦中之神經元成熟中發揮重要作用(參見[Huppi,P.S.(2008)；Nutrition for the Brain,Pediatric Research,63(3)：229-231])。具體而言，臨床研究已展示，必需脂肪酸對於確保胎兒及產後腦發育至關重要[Chang,C.Y.等人(2009)；Essential fatty acids and human brain,Acta Neurol.Taiwan,18(4)：231-41]；[Alessandri,J.M.等人(2004)；Polyunsaturated fatty acids in the central nervous system：evolution of concepts and nutritional implications throughout life,Reprod.Nutr.Dev.,44(6)：509-38]。

亦已展示早期母乳餵養及較高蛋白質攝入有益於嬰兒中之神經元成熟(參見[Huppi,P.S.(2008)])。

營養不良之後果不可逆轉且可包含較差之認知發展、可教性及(由此)未來經濟生產力。[Horton,R；(2008)The Lancet，第371卷，第9608期，第179頁]；[Laus,M.F.等人(2011)；Early postnatal protein-calorie malnutrition and cognition：a review of human and animal studies,Int.J.Environ.Res.Public Health.,8(2)：590-612]。

因此，口服干預係正性影響神經系統之發育之適當方式，從而確保早產或足月新生兒、嬰兒、幼童、兒童或青少年或幼小動物中之認知功能及心智表現之正常發展。

隨著神經元開始成熟，子宮內、產期以及產後干預對應於確保腦中負責認知功能之部分、尤其大腦皮質及海馬迴之健康發育及成熟之有前景方式。懷孕/哺乳期間之干預與兒童導向性干預相比可具有關於便利性及順從性之大量 優點。

在神經系統快速成熟時，需要在懷孕期間之最早可能階段以及在新生生命之早期階段期間促進及支持認知功能之健康建立，及/或逆轉認知功能建立之延遲及/或防止認知功能建立之進一步延遲。中樞神經系統及(特定而言)皮質部分進行發育直至***(15歲)時為止，且中樞神經系統(特定而言係皮質及海馬迴)在整個生命中不斷進行調適[Baumann,N.及Pham-Dinh,D.(2001)]；[Nosarti,C.等人(2010)；Neurodevelopmental outcomes of preterm birth,Cambridge：Cambridge University Press]。由於大腦在整個生命中之可塑性，因此在整個生命期間所需要之營養支持不斷調適[Benton,D.(2010)；Neurodevelopment and neurodegeneration：are there critical stages for nutritional intervention？,Nutr.Rev.,68，增刊1：S6-10]。

科學文獻報導使用益生菌來正性影響新生兒及嬰兒之健康，特定而言係關於減小發炎、抵抗感染及對腸排便習慣及胃腸蠕動之正性影響。對於最新概述，參見[Dobrogosz,W.J.,Peacock,T.J.及Hassan,H.M.(2010)；Evolution of the probiotic Concept：From Conception to Validation and acceptance in Medical Science,Advances in Applied microbiology,72：1-41]。

人類源性洛德乳桿菌(Lactobacillus reuteri)可視為人類胃腸道之內源性有機體，且存在於胃體及竇、十二指腸及回腸上[Reuter,G.(2001)；The Lactobacillus and Bifidobacterium microflora of the human intestine：composition and succession,Curr.Issues Intest.Microbiol,2：43-53]及[Valeur,N.等人(2004)；Colonization and immunomodulation by Lactobacillus reuteri ATCC 55730 in the human gastrointestinal tract,Appl.Environ.Microbiol.,70：1176-1181]。存在關於將洛德乳桿菌作為用於許多不同病狀之有前景療法之報導，該等病狀包含腹瀉病[Saavedra,J.(2000)；Am.J.Gastroenterol,95：S16-S18]、嬰兒腹痛[Savino,F.等人(2007)；Lactobacillus reuteri(American Type Culture Collection Strain 55730)versus simethicone in the treatment of infantile colic：a prospective randomized study,Pediatrics,119：e124-e130]、濕疹[Abrahamsson,T.R.等人(2007)；Probiotics in prevention of IgE-associated eczema：a double-blind,randomized,placebo-controlled trial,J.Allergy Clin.Immunol.,119：1174-1180]及幽門螺旋桿菌(H.pylori)感染[Imase,K.等人(2007)；Lactobacillus reuteri tablets suppress Helicobacter pylori infection-a double-blind randomised placebo-controlled cross-over clinical study,Kansenshogaku Zasshi,81：387-393]。關於4種洛德乳桿菌菌株DSM17938、ATCC PTA4659、ATCC PTA 5289及ATCC PTA 6475之最新研究顯示，該等菌株以不同方式調節新生大鼠之小腸上皮細胞及回腸中之脂多糖誘導之發炎。

在30名早產新生兒中實施之雙盲隨機化研究中(報導於2008[Indrio,F.等人(2008)；The effects of probiotics on feeding tolerance,bowel habits,and gastrointestinal motility in preterm newborns,J.Pediatr.,152(6)：801-6]中)，接受洛德乳桿菌ATCC 55730之新生兒展示與彼等給予安慰劑者相比反胃及平均日哭泣時間顯著減少且糞便次數較多。

在249名早產新生幼兒之最新臨床研究中[Romeo,M.G.等人(2011)；Role of probiotics in the prevention of the enteric colonization by Candida in preterm newborns：incidence of late onset sepsis and neurological outcome,J.Perinatology,31：63-69]，餵養洛德乳桿菌ATCC 55730(投與6週)之幼兒展示念珠菌(Candida)屬之胃腸道定殖顯著降低。對於接受益生菌補充之兒童而言，白血病事件數量之減小亦伴有異常神經學結果之較低發生率，如藉由哈默史密斯嬰兒神經學檢驗(Hammersmith Infant Neurological Examination，HINE)所量測。HINE量測嬰兒之基本腦結構-小腦及腦幹之反射及功能化。在此研究中量測顱神經功能(面部外觀、眼睛外觀、聽覺及視覺反應、吮吸/吞嚥)、運動、聲調、活動發展指標以及意識狀態、情緒狀態及社交導向)。該測試係用於檢測對於基本腦功能之損害(例如，關於大腦性癱瘓所觀察到者)之篩選方法。其並不量測嬰兒之專注、學習、記憶或高級認知。

迄今為止，尚無益生菌對於腦認知功能之發展之效應之報導。在生理學層面上，此解釋為大腦皮質及其相關神經路徑之健康發育及成熟，從而允許資訊之有效傳輸(自外 部至大腦，及自大腦至身體)以及此資訊在大腦內之處理。

因此，需要進一步發展益生菌投與領域以作為改良幼小哺乳動物(包含早產及足月幼兒、嬰兒、幼童及兒童)之健康之方式。

特定而言，需要支持在幼小哺乳動物(尤其包含早產及足月幼兒、嬰兒、兒童及青少年)中建立健康及正常認知功能。

需要支持幼小哺乳動物(尤其包含早產及足月幼兒、嬰兒及幼小兒童)中學習及記憶、注意力、知覺、思考、感覺及推理之健康發展。

需要防止或最小化幼小哺乳動物中之認知缺損之嚴重程度。此認知缺損可呈以下形式：學習能力延緩及/或缺損、推理損失、記憶功能障礙、專注困難(包含注意力缺陷病症)、智力降低及(由此)較差心智表現。此認知缺損亦可呈與不能正常交流及社交有關之病症形式，例如自閉症，包含亞斯伯格症候群。

需要正性影響幼小哺乳動物之腦、特定而言腦中與認知功能有關之結構之神經元成熟。具體而言，需要正性影響神經元生長、存活、可塑性及分化。

需要藉由支持髓鞘形成來正性影響腦中之信號傳輸。

本發明適用於所有哺乳動物，包含動物及人類。

本發明係關於用於促進在幼小哺乳動物中建立健康及正 常認知功能之洛德乳桿菌DSM 17938。特定而言，本發明係關於洛德乳桿菌DSM 17938用於促進負責認知功能之腦結構(例如皮質及海馬迴)及其相關神經路徑之發育之用途；及/或係關於逆轉認知功能之該建立之延遲；及/或係關於防止認知功能之該建立之延遲。人類或動物及特定而言胎兒、早產或足月嬰兒、幼童或兒童或青少年可自本發明受益。

本發明可尤其有益於彼等具有以下特徵之嬰兒：經歷IUGR，或具有低、極低或超低出生體重，小於胎齡，及/或在子宮內或在出生期間或在出生之後罹患認知功能缺損(例如學習及記憶缺損、缺乏好奇心、注意力幅度較差及(由此)心智表現較差、中樞神經系統生長延遲)。

本發明者發現，投與洛德乳桿菌DSM 17938會促進幼小哺乳動物中之神經元及神經膠質發育。其確保健康之神經元生長、存活、分化及可塑性以及促進軸突髓鞘形成。投與洛德乳桿菌DSM 17938可增加生長相關蛋白43(GAP43)、腦源性神經營養因子(BDNF)、神經膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)或髓鞘鹼性蛋白(MBP)在幼小哺乳動物之皮質及/或海馬迴中之表現程度。

可經由孕婦將洛德乳桿菌DSM 17938投與子宮內之胎兒中。

洛德乳桿菌DSM 17938可以下列形式直接投與嬰兒或幼童：純物質形式或稀釋於水或母乳中、於食物補充劑或乳強化劑中或在營養性餵養期間之任一腸道餵養(包含乳支 援)、於嬰兒配方中或於乳製飲料中。

可以1×10³ cfu(cfu=菌落形成單位)至1×10¹² cfu，較佳地1×10⁷ cfu至1×10¹¹ cfu之日劑量將洛德乳桿菌DSM 17938投與嬰兒、幼童或兒童。

可在至少一週，較佳地兩週，更佳地至少一個月之持續時間內將洛德乳桿菌DSM 17938投與胎兒或嬰兒。投與幼童或幼小兒童可進行至少4週，較佳地2-12個月及更佳地至少18個月時段。投與年長兒童或青少年可持續至年齡為15歲或甚至20歲為止。

本發明亦係關於包括洛德乳桿菌DSM 17938之組合物，該組合物用於促進在幼小哺乳動物之腦中建立健康認知功能。本發明可尤其用於彼等罹患IUGR之幼小哺乳動物。

定義：

在本說明書中，下列術語具有下列含義：「益生菌」意指對於宿主之健康或身體狀況具有有益效應之微生物細胞製劑或微生物細胞組份[Salminen,S.等人(1999)；Probiotics：how should they be defined,Trends Food Sci.Technol.,10：107-10]。益生菌之定義已普遍承認且與WHO定義一致。益生菌可包括唯一微生物菌株、不同菌株之混合物及/或不同細菌物種及屬之混合物。在混合物之情形下，單數術語「益生菌」仍可用於指示益生菌混合物或製劑。出於本發明目的，乳桿菌(Lactobacillus)屬微生物可視為益生菌。

「益生菌」通常意指不可消化之食物成份，其藉由選擇性刺激存在於宿主腸中之微生物之生長及/或活性來有益地影響宿主且由此試圖改良宿主健康。

「早產嬰兒」意指在懷孕37週之前出生之嬰兒。

「足月嬰兒」意指在懷孕37週之後出生之嬰兒。

「幼童」意指自可行走時至3歲之兒童。

「幼小兒童」意指自年齡為三歲至十歲之兒童。

「兒童」意指最大年齡為18歲者。

「認知功能」係指變得知曉、感知或瞭解觀念之智力過程。其涉及知覺、思考、推理及記憶之所有態樣。其與心理活動功能不同，後者與反射及聲調模式相關。

洛德乳桿菌(Lactobaccilus reuteri)DSM 17938(在正文通篇中稱為洛德乳桿菌(L.reuteri))係Biogaia AB,瑞典(Sweden)所擁有之洛德乳桿菌菌株，其科學菌株名稱為DSM 17938(先前稱為洛德乳桿菌ATCC 55730)。DSM識別涉及DSMZ德國微生物及細胞保存中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)，德國伯倫瑞克(Braunschweig,Germany)Inhoffenstr.7b,D-38124.DSM 17938.德國微生物及細胞保存中心，德國伯倫瑞克Inhoffenstr.7b D-38124。

本發明提供用於促進幼小哺乳動物中之有效認知功能之健康建立之益生菌洛德乳桿菌DSM 17938。

可經由母親將益生菌投與胎兒。其亦可直接或經由母乳投與早產或足月嬰兒。亦可投與幼小兒童(最大年齡通常 為10歲)或投與年長兒童(最大年齡為15歲)或投與等效年齡之動物。

向幼小哺乳動物(其可為人類(胎兒、嬰兒、幼童、兒童或嬰幼兒)或動物)投與洛德乳桿菌對於認知功能之健康建立具有正效應，從而使得與該等功能有關之神經系統成熟並正常發育。此效應尤其有益於彼等經歷(例如)可在懷孕期間在任一不良事件(例如，母親主動或被動吸煙、母親服藥、低胎盤品質、異常胎盤定位、母親及胎兒營養不良等)後發生之子宮內生長延遲(IUGR)。

本發明者已發現，洛德乳桿菌及/或含有洛德乳桿菌之本發明組合物可用於促進神經元及神經膠質細胞生長、存活、可塑性及分化。洛德乳桿菌及/或含有洛德乳桿菌之本發明組合物促進軸突髓鞘形成及神經元可塑性。投與洛德乳桿菌及/或含有洛德乳桿菌之本發明組合物由此促進有效認知功能(包含學習及記憶及(因此之)心智表現)之建立。在量測與該等生物過程有關蛋白質之表現程度之動物模型中已顯示該等效應。

因此，投與洛德乳桿菌及/或含有洛德乳桿菌之組合物亦有益於經歷異常認知功能(認知功能缺損)之哺乳動物。認知功能缺損可能在(例如)任何應激情形(例如彼等影響胎兒(子宮內)(例如上述IUGR)或新生兒(出生時缺氧-缺血、氧療法及高氧症、發炎、需要非經腸式營養支持等)者)或任一造成氧化應激之病因之後發生。

在嬰兒中，可使用洛德乳桿菌及/或含有洛德乳桿菌之 本發明組合物來保護中樞神經系統及特定而言腦中與建立有效認知功能有關之結構(亦即大腦皮質及其相關神經路徑)免受任一應激(例如，發生於神經元發育時期者)影響，且因此限制及/或防止應激誘導性神經元生長延遲及相關認知功能缺損。

因此，在本發明之背景中，在已觀察到CNS及特定而言腦之發育延遲時，可投與洛德乳桿菌。另外，在尚未觀察到該延遲時，可預防性投與洛德乳桿菌。

藉由投與本發明之洛德乳桿菌，所治療個體之腦(特定而言，包含大腦皮質及其相關神經路徑)健康發育。更具體而言，上調諸多與軸突髓鞘形成、神經元生長及可塑性有關之蛋白質(其皆係學習及記憶所必需)之表現。因此，該投與對於學習及記憶及(由此)心智表現具有正性影響。如此治療之嬰兒或幼童、兒童或青少年在出生後罹患病理學相關性認知功能缺損之風險有所減小。此缺損包含學習能力延緩及/或缺損、較高推理能力損失、學習障礙、專注困難、智力降低及(由此)較差心智表現。亦可導致其他與不能正常交流及社交有關之病症(例如，自閉症)。

在下文段落中詳述洛德乳桿菌對於哺乳動物中樞神經系統之健康發育之有益效應(關於認知功能之有效建立)。

益生菌之劑量：

益生菌可作為日劑量且以組合物形式投與。投與孕婦或母乳餵養之母親之洛德乳桿菌之日劑量為1×10⁶ cfu(cfu=菌落形成單位)至1×10¹² cfu，較佳地1×10⁸ cfu至1×10¹¹ cfu。適用於新生幼兒之日劑量在1×10³ cfu至1×10¹² cfu之範圍內，較佳地1×10⁷ cfu至1×10¹¹ cfu。

因此，洛德乳桿菌可以寬範圍百分比存在於組合物中，前提係其實現所闡述有益效應。然而，較佳地，洛德乳桿菌以等效於介於1×10³ cfu/g與1×10¹² cfu/g之乾燥組合物之間之量存在於組合物中。較佳地，對於投與孕婦或哺乳母親或青少年而言，益生菌以等效於介於1×10⁴ cfu/g至1×10¹¹ cfu/g之乾燥組合物之間之量存在。每克用於投與新生兒、幼童及兒童之乾燥組合物中所存在益生菌之量可較低(較佳係1×10⁶至1×10⁹)，且當然應遵守上述日劑量。

上述劑量包含細菌可能係活的、不活化或死亡狀態，或甚至以諸如DNA或細胞壁材料等片段形式存在。換言之，配方所含之細菌量係以假定所有細菌皆係活細菌時該細菌量之菌落形成能力形式表示，不論該等細菌實際上係活的、不活化抑或死亡狀態、片段化狀態或任一或所有該等狀態之混合物。

投與方法： (i)投與孕婦：

可藉由不同方式將組合物投與孕婦，只要其誘導該組合物與女性之胃腸道之間之接觸。較佳地，將組合物作為孕婦之食物、飲料或飲食補充劑之一部分經口投與。亦可以醫藥組合物形式投與組合物。較佳地，投與係口服。然而，在病理學病狀下或在以其他方式使用腸道餵養時，可將組合物投與添加至腸道餵養中。

(ii)投與新生子代：

亦可將洛德乳桿菌直接單獨經口投與子代(例如，純形式或稀釋於水或母乳中)，以補充劑(例如，人類乳強化劑補充劑)形式投與，或以醫藥或營養製品組合物形式投與，或以存於嬰兒乳液配方中之成份形式投與。此一配方可為嬰兒「早產配方」(若子代在足月之前出生或具有低出生體重)、「初生嬰兒配方(starter formula)」或「較大嬰兒配方(follow-on formula)」。配方亦可為低變應原性(HA)配方，其中牛乳蛋白質發生水解。此一初生嬰兒配方之實例在實例2中給出。

(iii)投與幼童、幼小兒童及年長兒童(最大年齡為約15歲)及青少年(最大年齡為約20歲)：

亦可以下列形式將洛德乳桿菌經口投與幼童、兒童及青少年：醫藥或營養製品組合物、成長乳、乳製飲料、食物補充劑、乳製酸乳酪、甜點及布丁、餅乾及穀物棒、穀物及水果之飲料。

(iv)投與動物：

亦可單獨或以水溶液形式或以食物補充劑、醫藥或營養製品組合物或乳液或寵物食物之形式將洛德乳桿菌經口投與動物。

與其他化合物一起投與：

可單獨(例如，純形式或稀釋於水或乳液(包含母乳)中)或以與其他化合物(例如飲食補充劑、營養補充劑、醫藥、載劑、矯味劑、可消化或不可消化之成份)之混合物 形式投與洛德乳桿菌。維他命及礦物質係典型飲食補充劑之實例。在一較佳實施例中，以組合物(例如，嬰兒配方)形式將洛德乳桿菌與其他增強對於幼小哺乳動物之所闡述有益效應之化合物一起投與。該等協同化合物可為促進將洛德乳桿菌遞送至腸道之載劑或基質，或其可以其他方式增強組合物對於子代之腸神經系統之效應。該等化合物可為其他協同或單獨影響嬰兒中腸神經系統之發育及/或增進益生菌效應之活性化合物。該等協同化合物之一實例係麥芽糊精。麥芽糊精之一個效應係提供用於益生菌之載劑，從而增強其效應且防止聚集。

可包含於本發明組合物、尤其嬰兒配方中之協同化合物之其他實例係益菌素化合物。益菌素係不可消化之食物成份，其藉由選擇性刺激結腸中之一種或有限數量細菌之生長及/或活性來有益地影響宿主，且由此改良宿主健康。該等成份不可消化意指其並不在胃或小腸中分解及吸收且由此完整地傳送至結腸，在此其由有益細菌選擇性發酵。益菌素之實例包含某些寡糖，例如果寡糖(FOS)、牛乳寡糖(CMOS)及半乳寡糖(GOS)。可使用益菌素之組合，例如具有10%短鏈果寡糖(例如以商標Raftilose®出售之產品)或10%菊糖(例如以商標Raftiline®出售之產品)之90% GOS。可用於本發明背景中之其他益菌素實例包含自乳液或其他來源獲得之寡糖群，其視情況含有海藻酸、果糖、海藻糖、半乳糖或甘露糖。較佳益菌素係唾液寡糖(SOS)、果寡糖(FOS)、半乳寡糖(GOS)、異麥芽寡糖(IMO)、木糖寡 糖(XOS)、***-木糖寡糖(AXOS)、甘露寡糖(MOS)、大豆寡糖、糖基蔗糖(GS)、乳果寡糖(LS)、唾液乳糖(SL)、岩藻糖基乳糖(FL)、乳糖-N-新四糖(LNNT)、乳果糖(LA)、異麥芽酮糖寡糖(PAO)、麥芽寡糖、樹膠及/或其水解產物、果膠、澱粉及/或其水解產物。本發明嬰兒配方較佳地進一步以佔乾燥組合物總重量之0.3%至10%之量含有至少一種益菌素。

碳水化合物及所有其他與洛德乳桿菌一起投與之化合物之日劑量應總是符合公開之安全導則及規章要求。此對於投與新生幼兒、尤其彼等以低出生體重、極低或超低出生體重出生者而言尤其重要。

含有洛德乳桿菌之組合物(例如嬰兒配方)可以不超過4.0 g/100kcal、3.0 g/100kcal或2.0 g/100kcal，較佳地1.8 g/100kcal至2.0 g/100kcal之量含有蛋白質源。並不認為蛋白質類型對於本發明至關重要，前提係滿足關於必需胺基酸含量之最小要求且確保滿意生長，但較佳地大於50重量%之蛋白質源係乳清。在一實施例中，蛋白質含量介於30%乳清蛋白與80%乳清蛋白之間。因此，可使用基於乳清、酪蛋白及其混合物之蛋白質源以及基於大豆之蛋白質源。就乳清蛋白而言，蛋白質源可基於酸乳清或甜乳清或其混合物且可以所期望之任何比例包含α-乳白蛋白及β-乳白蛋白。

蛋白質可為完整蛋白或水解蛋白或完整蛋白與水解蛋白之混合物。可能期望向(例如)據信處於產生牛乳過敏之風 險下之嬰兒供應部分水解之蛋白質(水解度介於2%與20%之間)。若需要水解蛋白，則可視需要並如業內已知實施水解過程。舉例而言，乳清蛋白水解產物可藉由在一或多個步驟中酶促水解乳清部分來製備。若用作起始材料之乳清部分實質上不含乳糖，則發現蛋白質在水解過程期間經過極少離胺酸封阻。此可使離胺酸封阻程度自約15重量%總離胺酸降至小於約10重量%離胺酸(例如約7重量%離胺酸)，從而極大地改良蛋白質源之營養品質。

組合物亦可包括碳水化合物源及/或脂肪源。嬰兒配方可含有脂質源。該脂質源可為適用於嬰兒配方之任一脂質或脂肪。較佳脂肪源包含棕櫚油、高油酸向日葵油及高油酸紅花油。亦可向必需脂肪酸亞麻油酸及α-次亞麻油酸中添加少量含有高數量之預形成花生四烯酸及二十二碳六烯酸之油，例如魚油或微生物油。脂肪含量總計較佳(例如)使得貢獻配方總能量之30%至55%。脂肪源之n-6與n-3脂肪酸之比率較佳為約5：1至約15：1；例如約8：1至約10：1。

可向營養組合物中添加其他碳水化合物源。其較佳提供營養組合物之能量之約40%至約80%。可使用任一適宜碳水化合物，例如蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖、玉米糖漿固體、麥芽糊精或其混合物。

若期望，則亦可添加其他飲食纖維。若添加，則較佳地包括營養組合物之能量之至多約5%。飲食纖維可來自任一適宜來源，包含(例如)大豆、豌豆、燕麥、果膠、瓜爾膠、***膠、果寡糖或其混合物。可以滿足適當導則之 量在營養組合物中包含適宜維他命及礦物質。

嬰兒配方中視情況存在之礦物質、維他命及其他營養素之實例包含維他命A、維他命B1、維他命B2、維他命B6、維他命B12、維他命E、維他命K、維他命C、維他命D、葉酸、肌醇、菸酸、生物素、泛酸、膽鹼、鈣、磷、碘、鐵、鎂、銅、鋅、錳、氯化物、鉀、鈉、硒、鉻、鉬、牛磺酸及L-肉鹼。通常以鹽形式添加礦物質。特定礦物質及其他維他命之存在及量將端視預期嬰兒群體而有所變化。

嬰兒配方可視情況含有可具有有益效應之其他物質，例如纖維、乳鐵蛋白、核苷酸、核苷及諸如此類。

可在組合物中包含一或多種必需長鏈脂肪酸(LC-PUFA)。可添加之LC-PUFA之實例係二十二碳六烯酸(DHA)及花生四烯酸(AA)。可以使得構成組合物中所存在脂肪酸之大於0.01%之濃度添加LC-PUFA。

若期望，則可在營養組合物中包含一或多種食品級乳化劑；例如單-及二甘油酯之二乙醯基酒石酸酯、卵磷脂及單-或二甘油酯或其混合物。類似地，可包含適宜鹽及/或穩定劑。可向組合物中添加矯味劑。

投與時段：

投與之持續時間可有所變化。儘管預計使用相對較短投與持續時間(例如，對於新生兒而言在一至兩週期間進行日投與)會獲得正性效應，但據信較長持續時間可提供增強效應或至少在年長嬰兒(例如，持續時間為3、5、8或12個月)或幼小兒童(例如，持續時間直至年齡為4或6或甚至 10歲)中維持效應。投與可持續至兒童為約15歲或甚至約20歲。對於投與動物而言，相應持續時間同樣適應。

孕婦可在其知曉其懷孕後立即開始服用洛德乳桿菌。然而，投與時段亦可始於懷孕開始之前，例如在女性打算懷孕時。投與可始於懷孕開始之後之任一時間。其可在懷孕後相對較晚時，較佳地在懷孕後第3、4、5、6、7、8或9個月時開始(在人類懷孕之情形下)，或對於其他哺乳動物而言在相應時段，或直至預產期之前兩週時。

投與時段可連續(例如，直至且包含哺乳至斷乳)或不連續。連續投與對於較持續效應而言較佳。然而，據推測，不連續模式(例如，每月在一個週內進行日投與，或隔週進行)可對於子代誘導正性效應。

投與可涵蓋至少一部分懷孕時段及至少一部分哺乳期(若新生兒餵養母乳)或新生兒並不餵養母乳之等效時段。較佳地，孕婦之投與時段涵蓋實質上懷孕時段之全部，但此時段可較短。類似地，用於哺乳母親之投與時段較佳涵蓋實質上整個哺乳期，但同樣此時段可較短。

較佳地，藉由每日攝入(擬每天服用一次或兩次)或每週攝入(擬每週服用一次或兩次)來投與母親。

可將洛德乳桿菌直接投與嬰兒。此情形尤其適用於母親並不進行母乳餵養或在其停止母乳餵養之後。然而，母乳餵養之嬰兒亦可藉由直接投與接受洛德乳桿菌。

較佳地，藉由日攝入投與嬰兒。舉例而言，若以嬰兒配方形式投與洛德乳桿菌，則與每一進食一起進行投與，亦 即對於小於一歲之嬰兒而言每天投與約4至約6次，進食之數量隨著年齡增長而減少。對於大於一歲之嬰兒而言，投與次數可較少，即每天一次或兩次。對於幼童及幼小兒童而言，投與可為日或週投與(擬每週服用一次或兩次)。

投與嬰兒(經由母乳餵養或藉由直接投與或使用此兩種方法)可持續至6個月或甚至一歲或更大之年齡。因此，可在哺乳期間(若發生哺乳)或在部分或完全斷乳之後投與洛德乳桿菌。投與可持續至嬰兒之整個幼童階段及甚至持續至20歲之年齡。

洛德乳桿菌投與之效應：

投與新生兒之洛德乳桿菌促進了有效認知功能之建立。在詳述於實例1中之大鼠模型實驗中，評估洛德乳桿菌投與對於神經元成熟及具體而言在大腦皮質及海馬迴(與較高認知功能有關之結構)中之效應。

在此實驗中，在出生2天之後使用水(對照；亦即CTRL-w及PR-w)或洛德乳桿菌(PR-L洛德乳桿菌)補充經歷母體飲食誘導性子宮內生長延遲之大鼠幼仔(PR組)及並未經歷IUGR之幼仔(CTRL)。

在出生2週之後，在處死時，藉由皮質及海馬迴中神經元標記物及神經營養因子之含量來評估腦中之神經元發育。

腦源性神經營養因子(BDNF)之增加之表現：

腦源性神經營養因子(BDNF)係支持神經元之存活、生長及分化之神經營養因子[Huang,E.J.及Reichardt,L.F. (2001)]。在文獻中多次報導BDNF與學習及記憶相關[Aguiar,A.S.Jr.等人(2011)；Short bouts of mild-intensity physical exercise improve spatial learning and memory in aging rats：Involvement of hippocampal plasticity via AKT,CREB and BDNF signaling,Mech.Ageing Dev.,[電子出版早於印刷出版]]。

在處死時(PND14)評估幼仔之海馬迴及皮質中BDNF(然後以蛋白質水解方式裂解以得到成熟形式(成熟)之前體蛋白(pro))之含量。結果展示於圖1中。

在PR-w幼仔中，海馬迴中之pro及成熟BDNF之含量維持於CTRL-w含量(圖1 A、B)，而PR-w幼仔之皮質中之成熟BDNF之含量與CTRL-w相比略有增加(圖2 B)。

自PND2至PND14，在海馬迴及皮質中，補充洛德乳桿菌會伴有pro及成熟BDNF之含量顯著增加。

已報導，大鼠中學習及記憶功能障礙之藥物誘導性改良與BDNF表現程度之增加有關[Dai,M.H.等人(2011)；Effect of venlafaxine on cognitive function and hippocampal brain-derived neurotrophic factor expression in rats with post-stroke depression,Zhejiang Da XueXueBao Yi Xue Ban,40(5)：527-34]

另外，已報導BDNF對於海馬迴可塑性較為重要，其對於學習及記憶具有直接效應。[Aguiar,A.S.Jr.等人(2011)]。

BDNF表現程度亦對於情緒較為重要。[Hashimoto,K. (2010)；Brain-derived neurotrophic factor as a biomarker for mood disorders：an historical overview and future directions,Psychiatry Clin.Neurosci.,64(4)：341-57]。Review.Erratum in：Psychiatry Clin Neurosci.2010年10月；64(5)：590。

考慮到該等數據及BDNF在神經元存活、生長及分化過程中之已知作用，在產後發育期間，在當前動物模型中觀察到之表現程度增加很可能轉變為生物及認知益處及神經保護。

生長相關蛋白43(GAP43)之表現提高：

生長相關蛋白(GAP43)係在發育期間高度表現於神經元生長錐中之生長及可塑性蛋白質[Mercken,M.等人(1992)；Immunocytochemical detection of the growth-associated protein B-50 by newly characterized monoclonal antibodies in human brain and muscle,J.Neurobiol.,23(3)：309-21]。其係用於神經元發育之標記物。[Denny,J.B.(2006)]。由蛋白質結構域指定之不同相互作用被認為係其在突觸可塑性(在神經突發生期間參與膜擴展)、神經遞質釋放及長效增益中之作用基礎[Oestreicher,A.B.等人(1997)；B-50,the growth associated protein-43：modulation of cell morphology and communication in the nervous system,Prog.Neurobiol.,53(6)：627-86]。

另外，已展示，GAP43對於記憶力很重要[Rekart,J.L.等人(2005)；Hippocampal-dependent memory is impaired in heterozygous GAP43 knockout mice,Hippocampus,15(1)：1-7]。

最近報導，在懷孕期間暴露於異氟烷(isoflurane)可在仔鼠中造成產後空間記憶及學習力缺損，此點可部分藉由海馬迴中GAP43之下調來解釋。[Kong,F.J.等人(2011)；Effects of isoflurane exposure during pregnancy on postnatal memory and learning in offspring rats,Mol.Biol.Rep.,[電子出版早於印刷出版]]。

在實例1之動物模型中量測GAP43之蛋白質表現程度且結果展示於圖2中。在海馬迴(圖2A)及皮質(圖2B)中量測蛋白質含量。與CTRL-w相比，PR-w幼仔之海馬迴中GAP43之蛋白質含量顯著降低(P=0.04)(參見圖2A)，而在皮質中則沒有出現統計學上顯著之影響(圖2B)。此反映了PR-w幼仔之海馬迴中之神經發生比對照減少。

自PND2至PND14，洛德乳桿菌補充顯著增加了兩種腦切片中之GAP43蛋白質含量。此表明洛德乳桿菌可促進在神經元發育期間該等組織之神經發生，此可能轉變為隨後生命中之認知益處。具體而言，考慮到該等結果以及關於GAP43在神經元成熟中之作用所知曉之內容，可確定向幼小哺乳動物投與洛德乳桿菌有利於海馬迴及皮質中之神經元生長、存活、分化及可塑性，由此有利於學習及記憶及(由此)心智表現。

GAP43亦對於情緒調控較為重要。最近報導，在不存在隨後應激源下，非人類靈長類動物中之早期親代缺失對於 與突觸功能及可塑性有關之基因之海馬迴表現具有長期效應。在絨猴模型中觀察到之GAP43及血清素1A受體表現程度減小與情緒病症中之發現相當。根據作者，此證實後期情緒病症可能反映了早期發育對於疾病脆弱性之貢獻[Law,A.J.等人(2009)Early parental deprivation in the marmoset monkey produces long-term changes in hippocampal expression of genes involved in synaptic plasticity and implicated in mood disorder,Neuropsychopharmacology,May；34(6)：1381-94]。

有趣的是，GAP43缺失與自閉行為有關。[Zaccaria,K.J.等人(2010)；Resistance to change and vulnerability to stress：autistic-like features of GAP43-deficient mice,Genes Brain Behav.,9(8)：985-96]。

因此，基於此數據，可假設投與本發明洛德乳桿菌亦可幫助預防及/或減弱與GAP 43有關之行為病症(例如自閉症及情緒病症)。

GFAP(神經膠質原纖維酸性蛋白)及MBP(髓鞘鹼性蛋白)之增加之表現：

在實例1之動物模型中量測神經膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)及髓鞘鹼性蛋白(MBP)之表現程度。結果展示於圖3(GFAP，A係海馬迴，且B係皮質)及圖4(MPB皮質)中。

神經膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)係對於髓鞘形成、結構維持及血腦障壁之合理功能化而言較為重要之中間絲蛋白[Eng,L.F.等人(2000)；Glial fibrillary acidic protein： GFAP-thirty-one years(1969-2000),Neurochem.Res.,25(9-10)：1439-51]。最新報導展示，GFAP表現在產後發育之早期階段急劇增加[Kim,J.S.等人，(2011)；Differential patterns of nestin and glial fibrillary acidic protein expression in mouse hippocampus during postnatal development,J.Vet.Sci.,12(1)：1-6]。

髓鞘鹼性蛋白(MBP)係對於神經之髓鞘形成過程而言較為重要之蛋白質。

GFAP之蛋白質含量未受海馬迴或皮質中之蛋白質限制影響(圖3)。然而，其因兩種腦切片中之洛德乳桿菌補充而顯著增加。此表明投與洛德乳桿菌具有與海馬迴及皮質中GFAP之表現程度增加有關之有益效應，由此確保髓鞘形成過程、維持神經元結構且使血腦障壁合理功能化。

髓鞘形成在人腦之發育階段中發揮關鍵作用，且在出生之後持續至少10至12年方才完成。[Baumann,N.及Pham-Dinh,D.(2001)]。因此，髓鞘形成之發展速率決定了相關腦功能之發展速率。

髓鞘形成過程對於傳送快速神經信號傳播而言較為重要，從而使得在不同腦區域內獲得有效組織連接性，且改良連接認知、感覺及活動功能所需之單獨腦區域之神經路徑。

洛德乳桿菌由此係促進新生兒時段期間腦中之髓鞘形成發展過程之新營養解決方案。

洛德乳桿菌對於髓鞘形成過程之此一效應可由增加之 MBP(另一亦涉及神經之髓鞘形成過程之蛋白質)表現來證實(圖4)。

實例1中所闡述之實驗結果顯示，投與洛德乳桿菌會促進皮質及海馬迴中之神經元生長、存活、分化、可塑性。經由促進髓鞘形成及神經元可塑性來確保準確神經信號傳導。因此，洛德乳桿菌投與支持認知功能、特定而言學習及記憶及(由此)心智表現之建立。

投與洛德乳桿菌幫助預防認知功能缺損及/情緒失調/紊亂及/或減小其嚴重程度。

洛德乳桿菌菌株係自母乳餵養兒童之糞便菌群分離之益生菌。因此，對於試圖儘可能接近地模擬母乳餵養兒童之菌群之健康促進策略而言，尤其向非母乳餵養兒童投與洛德乳桿菌可提供優於未在母乳餵養兒童中發現之其他菌株之優點。

實例1： 動物研究(餵養及處死)：

在由Office Vétérinaire Cantonal,Etat de Vaud授權之第2120號授權下實施動物實驗。自Harlan,Barcelona獲得懷孕一週後之2個月齡雌性斯普拉-道來氏(Sprague-Dawley)大鼠。在其到達當天，將母大鼠置於單獨籠中且隨機指配至對照(CTRL)或蛋白質限制(PR)組。使動物隨意獲取食物及水且維持於12 hr明/暗循環中。

CTRL及PR母鼠之飲食詳述於表1中。CTRL母鼠在懷孕期間接受符合標準大鼠蛋白質要求之含有20%蛋白質(酪 蛋白)之對照飲食(Reeves等人，1993)。PR母鼠接受含有10%蛋白質(酪蛋白)之PR飲食。兩種飲食等熱量，藉由添加玉米澱粉來平衡蛋白質缺乏。

CTRL及PR母鼠在懷孕及哺乳期間接受其各別飲食直至處死之日(產後第14天(PND 14))為止。

在PND 2時，將幼仔隨機指派給來自相同實驗組之母鼠，且每窩仔數調節至9只幼仔/母鼠，其中每窩之最小數量為4至5只雄性。

自PND 2直至PND14，向對照或治療組分別投與來每日手工/吸管餵養補充含有水或洛德乳桿菌之溶液。逐步改變補充劑之體積以匹配大鼠幼仔之生長(150 μl/100g體重)。

各組及飲食如下所述：1)CTRL-w：自CTRL母鼠出生之CTRL幼仔接受水補充劑， 2)PR-w：自PR母鼠出生之PR幼仔接受水補充劑，3)PR-洛德乳桿：自PR母鼠出生之PR幼仔接受凍乾洛德乳桿菌DSM 17938之補充劑(1.10⁹ cfu/天)。

在PND 14時，將最多10只來自CTRL及PR組之幼仔稱重，且然後在氟烷麻醉之後藉由斷頭術處死。

蛋白質表現程度之評估：

在分離之後，使用球式打樣器Tissue Lyser II(Qiagen,USA)在pH 7.4 PBS及完全蛋白酶抑制劑混合劑之溶液中(30mg組織/500 μl溶液緩衝液，Roche Diagnostics,Mannheim,Germany)將來自每一組中PND14幼仔之海馬迴及皮質均質化。測定蛋白質濃度(BCA,Bio Rad)。藉由SDS-Page分離蛋白質(20-40微克，此取決於所分析之標記物)，轉移至硝基纖維素膜上且隨後在3% BSA中阻斷。使用特異性抗體Rb α BDNF(Santa Cruz)、MseαGAP43/B50(Millipore)、MseαGFAP(Cell signaling)及MseαMBP(Millipore)評價BDNF(腦源性神經營養因子)、GAP43(生長相關蛋白43)、GFAP(神經膠質原纖維酸性蛋白)及MBP(髓鞘鹼性蛋白)之相對含量。使用HRP-化學發光試劑(ECL plus,Amersham)進行檢測，且藉由使用軟體AIDA Basic進行量化。

統計學：

藉由比較PR組與CTRL組來評估蛋白質限制之效應。藉由比較PR-洛德乳桿菌組與PR組來評估洛德乳桿菌補充之效應，且藉由比較PR-洛德乳桿菌組與CTRL組來評估 CTRL程度之最終恢復。使用非參數方法來分析數據。使用魏克森秩和測試(Wilcoxon rank sum test)來測試各處理之間之差異。亦獲得成對處理差異之具有95%置信區間之Hodges-Lehmann估計值。

實例2：

下文給出用於本發明之嬰兒配方之組成之實例。此組成僅係藉由闡釋方式給出。蛋白質源係乳清蛋白及酪蛋白之習用混合物。

圖1 補充有洛德乳桿菌DSM 17938之蛋白質限制之大鼠幼仔中之Pro及成熟腦源性神經營養因子(BDNF)蛋白質含量。

A、B：海馬迴

在處死時(PND14)CTRL-w、PR-w及PR-洛德乳桿菌幼仔之海馬迴中之Pro(A)及成熟(B)BDNF蛋白質含量。結果以任意單位表示，且係中值±SEMedian，n=6。在每一圖形中，使用不同字母之中值有所差異，P<0.05。

C、D：皮質

在處死(PND14)時CTRL-w、PR-w及PR-洛德乳桿菌幼仔之皮質中之Pro(C)及成熟(D)BDNF蛋白質含量。結果以任意單位表示，且係中值±SEMedian，n=6。在每一圖形中，使用不同字母之中值有所差異，P<0.05。

圖2補充有洛德乳桿菌DSM 17938之蛋白質限制之大鼠幼仔中之生長相關蛋白43(GAP43)蛋白質含量。

在處死時(PND14)CTRL-w、PR-w及PR-洛德乳桿菌幼仔之海馬迴(A)及皮質(B)中之GAP43蛋白質含量。結果以任意單位表示，且係中值±SEMedian，n=6。在每一圖形中，使用不同字母之中值有所差異，P<0.05。

圖3補充有洛德乳桿菌DSM 17938之蛋白質限制之大鼠幼仔中之神經膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)蛋白質含量。

量測在處死時(PND14)CTRL-w、PR-w及PR-洛德乳桿菌幼仔之海馬迴(A)及皮質(B)中之GFAP含量。結果以任意單位表示，且係中值±SEMedian，n=6。在每一圖形中，使用不同字母之中值有所差異，P<0.05。

圖4補充有洛德乳桿菌DSM 17938之蛋白質限制之大鼠幼仔中之髓鞘鹼性蛋白(MBP)蛋白質含量。

在處死時(PND14)CTRL-w、PR-w及PR-洛德乳桿菌幼仔中之MBP蛋白質含量。結果以任意單位表示，且係中值±SEMedian，n=6。使用不同字母之中值有所差異，P<0.05。

Claims (27)

1. 一種洛德乳桿菌(Lactobacillus reuteri)DSM 17938，其用於促進在幼小哺乳動物中健康建立認知功能及/或預防或修復認知功能缺損或減小認知功能缺損之嚴重程度。
2. 如請求項1之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該幼小哺乳動物係動物。
3. 如請求項1之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該幼小哺乳動物係人類胎兒、早產或足月嬰兒、幼童或兒童或青少年。
4. 如請求項1至3中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該幼小哺乳動物經歷過或正經歷IUGR，及/或具有或預計具有低、極低或超低出生體重，小於胎齡，及/或在子宮內或在出生期間或在出生之後正罹患或罹患認知功能缺損。
5. 如請求項4之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該認知功能缺損係由出生時缺氧-缺血所致。
6. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中經由孕婦投與該胎兒。
7. 如請求項6之洛德乳桿菌DSM 17938，其中當該孕婦懷孕1、2、3、4、5、6、7、8或9個月時開始投與或於同等時間投與即將出生的動物。
8. 如請求項1至5中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中經由哺乳母親直接或間接投與該幼小哺乳動物。
9. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中 該胎兒或嬰兒之投與時段持續至少一週，較佳地兩週，更佳地至少一個月。
10. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該幼童或幼小兒童之投與時段持續至少4週，較佳地2至12個月及更佳地至少18個月之時段。
11. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中針對兒童之投與時段係直至該兒童4歲，較佳地6歲及更佳地直至15歲，且針對青少年之該投與時段係直至大約20歲之早期成年期。
12. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該洛德乳桿菌DSM 17938係以下列形式直接投與該嬰兒或幼童：純物質形式或稀釋於水或母乳中、於食物補充劑或乳強化劑中、在營養性餵養期間包含乳支援之任何腸道餵養、於嬰兒配方中或於乳製飲料中。
13. 如請求項12之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該嬰兒配方係用於早產嬰兒之配方、初生嬰兒配方(starter formula)或較大嬰兒配方(follow-on formula)或成長乳。
14. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中較佳地以食物、飲料、飲食補充劑或醫藥組合物形式經口投與該孕婦或哺乳母親或兒童或青少年。
15. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該洛德乳桿菌DSM 17938係以1×10³ cfu(cfu=菌落形成單位)至1×10¹² cfu，較佳地1×10⁷ cfu至1×10¹¹ cfu之日劑量投與嬰兒、幼童或兒童或青少年。
16. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該洛德乳桿菌DSM 17938係作為包括介於1×10³ cfu/g乾燥組合物至1×10¹² cfu/g乾燥組合物之間之組合物投與該孕婦或哺乳母親或幼兒或幼童或兒童或青少年。
17. 如請求項16之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該組合物包括較佳地選自以下之其他成份或益菌素：菊糖、果寡糖(FOS)、短鏈果寡糖(短鏈IOS)、半乳寡糖(GOS)及牛乳寡糖(CMOS)。
18. 如請求項16或17之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該組合物亦包括一或多種其他益生菌。
19. 如請求項18之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該一或多種其他益生菌較佳地選自比菲德氏-龍根菌(Bifidobacterium longum)BB536(ATCC BAA-999)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)(CGMCC 1.3724)、比菲德氏雷特氏菌(Bifidobacterium lactis)(NCC2818)或其混合物。
20. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其中該洛德乳桿菌DSM 17938已經不活化，以致其不可複製。
21. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其用於促進幼小哺乳動物之認知、學習及/或記憶及/或心智表現。
22. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其用於促進幼小哺乳動物之專注能力、知覺、執行功能、語 言能力及情緒。
23. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其用於防止以下情形中之任一者及/或減小其嚴重程度：學習能力缺損、執行功能損失或發展較差、記憶缺損、專注困難、智力降低、較差心智表現、情緒失調/紊亂或諸如自閉症等與不能正常交流及社交有關之病症。
24. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其用於增加該幼小哺乳動物之皮質及/或海馬迴中GAP43、BDNF、GFAP或MBP中之任一者之表現程度。
25. 如前述請求項中任一項之洛德乳桿菌DSM 17938，其用於促進幼小哺乳動物之皮質及/或海馬迴中髓鞘形成、神經元生長、神經元存活、神經元分化及神經元可塑性中之任一者。
26. 一種組合物，其包括洛德乳桿菌DSM 17938，該組合物用於促進在幼小哺乳動物中健康建立認知功能及/或修復、預防認知功能缺損或減小認知功能缺損之嚴重程度。
27. 如請求項26之組合物，其中該組合物係食物補充劑、乳強化劑、初生嬰兒配方，較大嬰兒配方、成長乳或乳製飲料。