TW201125861A - CDC7 inhibitor salts - Google Patents

Description

201125861 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關新穎CDC7或CDC7/CDKS抑制劑之結晶性 鹽類，關於新穎相對應自由態鹼之結晶形，關於其製備方 法，關於此等新穎鹽形式之水合物、溶劑合物及多晶形，關 於其用於治療之用途及關於含有該等化合物之醫藥組成物。 【先前技術】 本案申請人所請之WO 2007110344係描述及主張一種雜 戊環類、其製備方法、包含其等之醫藥組成物及其用作為治 療劑特別係用於癌症及細胞增殖病症之治療之用途。代表性 雜戊環化合物選擇性地呈醫藥上可接受之鹽類形式例如為： 5-(2-胺基-¾、。定-4-基)-2 -苯基-1 比咯-3-竣酸酿胺， 5-(2-胺基-哺π定-4-基)-2 -鄰本基-1 Η-π比嘻-3-竣酸酿胺， 5-(2-胺基-°笛α定-4 -基)-2-(4-氣-2-曱基-苯基)-1H-°比洛-3-竣 酸醯胺； 5-(2 -胺基-ρ笛0定-4 -基）-2-(2,3 -二甲基-苯基)-1H-0比洛-3 -竣 酸醯胺； 5-(2 -胺基-°街α定-4 -基)-2-(2,3 -二亂-苯基)-1 Η-σ比洛-3-竣酸 醯胺； 5-(2 -胺基-〇密。定-4-基）-2-(2,4-二氣-苯基)-1Η-π比π各-3-缓酸 醯胺； 5-(2-胺基-嘧啶-4-基)-2-(2,5-二氟-苯基)-1Η-吡咯-3-羧酸 099138312 4 201125861 醯胺； 5-(2-胺基-嘧啶-4-基）-2-(2-氯-苯基）-1 Η-。比咯-3-羧酸醯 胺； 5-(2-胺基密α定-4-基)-2-(2 -氣-4-氣-苯基)-1 Η-π比ρ各-3 -竣酸 醯胺； ' 5-(2-胺基-嘧啶-4-基)-2-(2,4-二氯-苯基）-1Η-吡咯-3-羧酸 - 醯胺； 5-(2 -胺基-口治σ定-4-基)-2-(2-鼠-4-曱基-笨基)-1Η-0比σ各-3-竣 酸醯胺； 5-(2-胺基-σ密0定-4-基）-2-(2,3-二氣-苯基）-1 Η-σ比σ各-3 -叛酸 醯胺； 5-(2-胺基-。密唆-4-基)-2-(2 -氣-3-曱乳-苯基)-1 Η-°比σ各-3-叛 酸醯胺及 5-(2-胺基-σ密σ定-4-基)-2-(2-氣-4-氣-苯基)-1Η-β比°各-3-叛酸 酿胺。 此等化合物具有蛋白質激酶抑制活性，及更特定言之， CDC7或CDC7/CDKS抑制活性。該等化合物也具有作為其它 蛋白質激酶抑制劑之活性，如此可有效用於治療與其它蛋白 質激酶相關聯疾病。 更特定言之，本發明之此等化合物可用於多種癌症及細胞 增殖病症之治療。

此等化合物及其類似物例如可如前述專利申請案WO 099138312 5 201125861 2007110344所述而製備。 但前述專利申請案只揭示其中舉例說明之化合物之若干 特定鹽形式，而未述及自由態驗或鹽之任一種結晶形。 今意外的發現其中所述一種特定化合物之若干特定醫藥 上可接受之鹽具有多項優於已知自由態鹼形式之優點，及此 外，意外的發現此等鹽類具有良好調配性質之獨特組合，因 而使其特別適合用於醫藥調配物之製備。 實際上，雖然其中所述特定化合物係如同自由態鹼般有 效，但實際上其最佳係呈某些酸或自由態鹼之結晶鹽形式投 〇 【發明内容】 因此於第一態樣，本發明之目的係提供前述專利申請案所 述化合物中具有下式中之一者之特定結晶性鹽類。

及具有化學名： 5-(2-胺基-°密°定-4-基）-2-(2,4-二氣-苯基）-1H-α比洛-3-竣酸 醯胺或 5-(2-胺基-4-嘧啶基）-2-(2,4-二氯苯基）-1Η-吼咯-3-羧醯 胺。 本發明中，除非另行規定，否則此等化合物係以NMS-E354 099138312 6 201125861 編碼。 因此本發明係關於NMS-E354之結晶性半反丁稀二酸趟 順丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、曱烷磺酸鹽、硫酸鹽、L_天冬酸趟、 L-酒石酸鹽或磷酸鹽，或其水合物、溶劑合物及多晶來。 較佳本發明之結晶性鹽類為NMS-E354之半反丁稀—酉分 -鹽、順丁烯二酸鹽、曱烷磺酸鹽及硫酸鹽。本發明特別係有 - 關NMS-E354順丁烯二酸鹽及硫酸鹽，更特別係有關順丁烯 二酸鹽之新穎結晶形式、溶劑合物及水合物。較佳，本發明 係關於結晶性NMS-E354順丁烯二酸鹽及硫酸鹽，甚至更件 係有關結晶性順丁烯二酸鹽。 如前述’本發明亦係關於新穎NMS-E354自由態驗之新顆 結晶形。 NMS-E354之製備係說明於前述國際專利申請案w〇 2007110344。更明確言之，NMS-E354係依據該申請案實施 例19步驟3之合成程序製備成自由態驗，其中大致上適當甲 酸衍生物係與氨之活性形式縮合而獲得期望之醯胺。此等甲 酸衍生物又係根據實施例19步驟1及2之程序製備，包含函明 與β-酮酯之偶合、漢慈（Hantzsch)反應及水解。 NMS-E354之另一種製備方法係說明於本案申請人之國際 專利申請案WO 2009 133170實施例1步驟IV，包含於酸性條 件下適當腈衍生物之水解及隨後使用鹼處理。 NMS-E354呈自由態鹼為不良水溶性化合物，其顯示低於 099138312 7 201125861 0.01毫克/毫升之水中溶解度。NMS-E354自由態鹼之溶解度 於10%聚山梨醇酯80於5%葡萄糖溶液為約4毫克/毫升，於 5 0 %聚乙二醇400於5 %葡萄糖溶液為約7毫克/毫升及當調配 成鹽酸鹽或磷酸鹽之原位鹽時約為1/2毫克/毫升。 NMS-E354自由態鹼也適合於約1〇毫克/毫升用於水性羥丙 曱纖維素(hypromellose)懸浮液。因此，所得自由態鹼初步 係調配成以助溶劑為主之水溶液、原位鹽或羥丙甲纖維素懸 浮液來允許於早期藥理及毒理評估期間投藥用於早期藥理 研究。 雖然解決早期調配辦法的問題，所應用的配方辦法並不適 合用於臨床上適合祕敏m療料的㈣調配物^ 發展。 、 水分吸收乃醫藥散劑的主要考量。業已顯示水分對藥物、 賦形劑及調配物之物理'化學及製造性質例如具有顯—旦 響。水分於包裝、儲存、處理及儲存壽命等相關問 上也扮演關鍵性角色’成功的發展要求對吸 、 組。 “，、性吳有顯著瞭 舉例言之’可於相對濕度超過臨界程度及固體令的水 快速增加時，觀察得自無水形式轉換成水合形式。如此 對藥物本身之物理及藥學性質有影響，同時也對其-的性質有影響。 “樂: 此外，眾所周知水合物形式通常比較均質無水形式更 099138312 8 201125861 溶，對活性化合物本身之溶解速率性質及對通過胃腸道之吸 收情況可能具有有害效應。以相同方式，於濕度存在之下可 觀察得自結晶形轉變成非晶形之變換，就物理安定性而言可 能有其缺點。非晶形活性藥物若潮解時’例如可自大氣中吸 收大量水直到其溶解，同時其化學性質可能受影響，原因在 於非晶形結構為熱力學活性、结構，較為容易進行化學降級， • 及與其它化學類別進行化學交互作用。如此，調配物及活性 成分之效能及功效顯著改變。 鹽類經常顯示比自由態鹼更高的吸濕性。 此外，為了具有期望的療效’藥物須具有良好藥力學表 現’特別須具有良好生物利用率。生物利用率包含兩大主要 特徵，亦即最高血_漿濃度(Cmax)及系統性暴露(AUC)。如熟 β曰技勢人士眾所周知，最面血衆ί展度表不有多少藥物之式量 強度進入m内（吸收程度），糸統性暴露表示藥物以多快速度 進入系統循環（吸收速率）。假設療效為病人血中藥物濃度之 函數’非靜脈劑型之此兩項性質原則上對於識別對藥物劑量 . 的反應相當重要。 口服投藥後之生物利用率也可因為病人的相關因素而改 變，諸如用餐性質及時間、年齡、疾病、遺傳特徵及胃腸道 生理學。 如此，於NMS-E354形式之治療中強力需要具有改良之水 中溶解度、低吸收性及良好且可再現的生物藥物性質，因此 099138312 9 201125861 允許比較自由態鹼更安全且更有效的投藥。 如熱諳技藝人士眾所周知，鹽形式並未經常性導致溶解度 特性的&升（例如參考：Shozo Miyazaki, et al., International Journal of Pharmaceutics 1剛；6(1)，77·85)，以及就溶解度 及/或溶解及/或對抗衡離子效應的敏感度而言，不同鹽類的 表現可能依據各種藥物抗衡偶的性質而有差異。 出乎意外地’發明人已經經由提供具有改良物理化學及藥 力學性質之NMS-E354之新穎鹽類以及新穎鹽類之結晶形而 解決前述技術問題。 實際上，新穎鹽類為具有高水中溶解度的結晶性快速溶解 之固體，此外，此等鹽類具有低度或中度吸濕性，如此於處 理、儲存及配方等方面實質上導入重要優點；最後，此等鹽 類除了具有全部其它優點，特別為自由態鹼當調配成原位_ 或米索賽爾（methocel)懸浮液時所具有的治療優點外，此等 鹽類具有比自由態鹼之藥力學性質出乎意外地更佳的藥力 學性質。 令人訝異地，發現及證實NMS-E354鹽及自由態鹼之新穎 形式為結晶性。出乎意外地，本發明之鹽類具有可媲美已知 自由態鹼之低吸濕性。 因此，發明人經由提供具有改良物理化學性質之新穎 NMS-E354之鹽之新穎結晶形式及自由態驗之結晶形式而解 決前述技術問題。實際上，新穎鹽類為具有足夠水中溶解度 099138312 10 201125861 之結晶 性、非吸濕性固體，以及當調配作為 水溶液、原位鹽或羥丙曱纖維素懸浮液時， 以助溶劑為主之 除了具有自由 驗所具㈣全部其它有缝s特料治療上*二曰田態 實質上導人處理、儲存及調配等重要優點。利性質外，也 結晶性粉末之性質允許此等形式特別適合 本發明也參考後文說明之附圖舉例說明。、樂物發展。 【實施方式】 發現本發明之選自於L-天冬酸鹽、半反 鹽、順丁稀二酸鹽、甲糾酸鹽Γ碟酸/埽二酸鹽、鹽酸 又现、石泉酸趟芬τ 酸鹽之NMS-E354鹽類之新穎結晶形式為鈐曰欠风及1-酒石 此等形式特別適合料藥物的發展％性’因此使得 此等NMS-E354鹽類係利用添加期望的化 旦 或自由態鹼之抗衡離子溶解於適當溶％之〜里之洛劑 類似方法㈣。此等溶劑為錢較^㈣自^二而藉已知 其混合物之有機溶劑，制為無水溶 j甲_、乙醇或 加或於無水非極性溶劑例如二一、正己需，可藉添 而有利於所得的鹽類之沈殺或再結晶。坑或每己院再加工 特定言之，定量NMS_E354自由態驗可 適當溶劑’獲得期望之標準濃度。然後:二 抗衡離子至账削自f夜而進行鹽=二2 之進行係經由冷卻雜錢後維持錢歷經足夠休止時^ 使用作為料物料之自由態驗可為前述騎專利申請案 099138312 201125861 所述而製備者，或如後文說明製備之結晶形(i)。 所付沈殿藉真空過渡收集及乾燥。為了有利於結晶，溶液 可選擇性地藉蒸發濃縮。進一步再結晶步驟(例如於無水非 極性☆劑諸如二乙⑽濕磨化合物）可進行來分離期望之結晶 形。 ISfMS-E354及酸性抗衡離子之化學識別可藉1h刪r進行。 於另一態樣，本發明係關於NMS-E354自由態鹼之新穎結 晶形，其可始於已知之形式，使用於適當溶劑之類似結晶程 序’接著為期望結晶形之分離及乾燥。 依據本發明，結晶性鹽類及自由態鹼之定義也包含其水合 物、溶劑合物及多晶形。 本發明之又一目的係提供一種醫藥組成物包含如前文定 義之NMS-E354之任一種鹽或自由態鹼之結晶形、溶劑合物 或水合物’較佳為順丁烯二酸鹽或硫酸鹽，甚至更佳為順丁 浠一酸鹽作為活性成分及醫藥上可接受之賦形劑及/或載 劑。 本發明之又一目的係提供如前文定義之NMS-E354之任一 種鹽或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，較佳為順丁 烯二酸鹽或硫酸鹽，又更佳為順丁烯二酸鹽用作為藥物，特 別係用作為CDC7或CDC7/CDKS抑制劑。 本發明之又一目的係提供如前文定義之NMS-E354之任_ 種鹽或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，較佳為】嗔τ 099138312 12 201125861 稀二酸鹽或硫酸鹽，又更佳為順丁烯二酸鹽用於治療患有可 藉CDC7或CDC7/CDKS抑制治療疾病狀態之哺乳動物包含 人類。 本發明之又一目的係提供一種治療有需要CDC7或 CDC7/CDKs抑制之哺乳動物包含人類之方法，該方法包含 對該哺乳動物投予治療上有效量之如前文定義之NMS-E354 之任一種鹽或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，較佳 為順丁烯二酸鹽或琉酸鹽，又更佳為順丁烯二酸鹽。 此外，本發明係關於一種如前文定義之NMS-E354之任_ 種鹽或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，較佳為順丁 烯二酸鹽或硫酸鹽，又更佳為順丁烯二酸鹽用於治療患有可 藉CDC7或CDC7/CDKS抑制治療之疾病狀態之哺乳動物包 含人類，該疾病狀態表示細胞增殖病症諸如癌症、病毒性感 染、自體免疫病及神經退化病症。 如此，一種如前文定義之NMS-E354之任一種鹽或自由態 驗之結晶形、溶劑合物或水合物，較佳為順丁稀二酸鹽或硫 酸鹽，又更佳為順丁烯二酸鹽單獨使用或與其它治療劑結合 可用於治療患有可藉CDC7或CDC7/CDKS抑制治療之疾病 狀態之哺乳動物包含人類，或用於此等治療用藥物之製備。 因此，本發明也提供如前文定義之NMS-E354之任一種鹽 或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，較佳為順丁稀二 酸鹽或硫酸鹽，又更佳為順丁烯二酸鹽用於製造可藉CDC7 099138312 13 201125861 或CDC7/CDKS抑制治療之疾病狀態之治剌藥之用途。 「可治療之疾病狀態」一詞表示依據本發明之治療提供接 受治療之哺乳動物疾病狀態的緩解或穩定或至少情況或生 活品質改善。更精確言之，本發明化合物可用於治療多種癌 症包括但雜於：諸如膀胱癌、乳癌、大腸癌、直腸癌、腎 癌、肝癌、肺癌包括小細胞肺癌、食道癌、膽囊癌、印巢癌、 胰癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、攝護腺癌、及皮膚癌包 括鱗狀細胞癌；淋巴系之造血腫瘤包括白血病、急性及慢性 淋巴母細胞性白血病、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴 瘤、伯吉特氏淋巴瘤、月炙旅a ^ _ 及少發性月髓瘤；骨髓系之造血腫瘤 包括急性及慢性骨髓姓& a、产 „ 白血病、月髓增生異常症候群；間質 來源之腫瘤，包括纖維由，齒β 〜 内瘤及検紋肌肉瘤；中枢神經系統及 周邊神經系統腫瘤，包衽屋灿 星狀、，.田胞瘤、神經母細胞瘤、神經 膠細胞瘤、及神經勒Α 、 阐其匕腫瘤，包括黑色素瘤、精原 細胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、荽 4耆色性乾皮病、角化黃瘤、甲狀 腺濾泡癌、及卡波西氏肉瘤。 由於蛋白質激酶及牿定古 σ之，CDC7或CDKs於細胞增殖調 節上所扮演的關鍵要角，敁堂 匕專雜戊環類也可用於多種細胞增 殖病症的治療，諸如良柯摇# & a 、 隨攝護腺肥大、家族型腺瘤病、癌肉、 神經纖維瘤病、乾癖、弓丨益^〆 祀辨弓I發動脈粥狀硬化之血管平滑肌择 生、肺纖維化、關節炎、腎小球腎炎、及術後狹窄及再狹窄曰。 NMS-E354之結晶性鹽類及自由態驗之有效劑量可依據疾 099138312 201125861 病、病症嚴重程度及欲接受病人之狀況而改變。因此醫生經 常性須對各個病人決定最適當劑量。總而言之，有效劑量範 圍係每劑自約10毫克至約1000毫克，每日1次至10次，較佳 自約20毫克/平方米/日至約200毫克/平方米/日（以自由態驗 計算），每日單劑投予或平分多劑投予。例如，化合物可經 歷二週或三週每日投予連續經歷7日或14日。 如前文定義之NMS-E354之任一種鹽或自由態鹼之結晶 形、溶劑合物或水合物’較佳為順丁烯二酸鹽或硫酸鹽，又 更佳為順丁烯二酸鹽方便口服吸收，因此較佳經口投予。無 庸待言，本發明化合物也可藉其它投藥途徑例如藉腸道外途 徑、局部、直腸及經鼻投藥途徑投予。 NMS-E354之較佳半反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、曱烧 磺酸鹽、硫酸鹽為顯示低吸濕性及高熔點表現之物質。 NMS-E354鹽顯示比較自由態驗改良之水中溶解度，例如 順丁烯二酸鹽及硫酸鹽於0.9%氣化鈉溶液之溶解度分別為 0.07至0.15毫克/毫升。. 除了具有改良水中溶解度優點外，NMS-E354鹽類特別為 順丁烯二酸鹽及硫酸鹽也特別適合用於可再現性地以明確 的酸/驗比製造。 此項發現允許此等鹽類特別適合用於口服用之液體調配 物以及用於靜脈用之調配物。 表1- NMS-E354之代表性鹽類及自由態鹼之結晶形之固 099138312 15 201125861 態性質 NMS-E354^ 結晶形____ 順丁烯二酸璩 疏酸鹽: 甲烷磺酸 半反丁·琢 自由態I金

PXRD 圏 1C, 2Β, 3 1F, 2Ε

1Ε, 2D

1B, 2C 1Α.2Α 表 --二^企(2- θ，度）η 顯著PXRD ^_ _：16.6,17.4,21.2, 5_8,10.6,12.6, 25.6,27.9,32.2 0.0, '--λ 95.6. 27.9, 32.2 22.6,23.7,25也20.5. 21.8. 23.4 12.0,12.3,16.2,1〇；* 如.8.31.1.38.7 u-υ, , 98.8.31.1.3a./ 24.8,25.3,2621.9.22.2. 23.8. 12.4,16.5,19.0.19/' ^8.1,34.1.38.6 24.5, 25.0, 25,^^^^16.7.19.3.22.2. 3.6.7.3.12.5, η 28.7.39.3 J. T.w, fcv.v, >y |〇.i# \^.OtCC.Ct 3.6,7.3,12.5,^ ?8,〇, 28.7.39.3 _22.9,25.3,26^j^7；t 17.3.20.2.20.7. 7.1,11.7,14.1,15 A 邡 〇. 28.5. 30.9 dsc m AC, 5B, 6

4F, 5E

4E,5D

4B,5C

4A.5A 備註* : I裂，若無不同規定，則所述鹽類意圖為自由態驗 與抗衡離子間之M莫耳比。 備註:所報告之PXRD(定義如下）峰已經根據於規定之 PXRD表所述之完整資料集合中的軾高強度而選定。 於第2欄及第5攔之參考數字係自下列形成： -相關PXRD圖及DSC圖中之數字 -若圖中有多於一個數字則以大寫字母識別該曲線。 除非另行載明，否則相同類型的元件符號用於本說明書全 文。較佳具體例中，I型為大致上純質NMS-E354之1:1順丁 烯二酸鹽，顯示圖3指示之X光繞射圖。 也高度偏好使用NMS-E354之1:1順丁烯二酸鹽之I型，其 顯示圖3所示該類型之X光繞射圖，於上表丨所述之約別值(度) 具有顯著峰值強度。 於不合任何額外材料(其它結晶形、賦形劑）之樣本中，可 觀察得下表2所述於約2-Θ值(度）之繞射峰。 099138312 201125861 於另一個較佳具體例中’大致上純質之NMS-E354 1:1硫 酸鹽之I型顯示圖2E指示之X光繞射圖。 也高度偏好NMS-E354之1:1硫酸鹽之I型，其顯示圖2E所 示該型X光繞射圖，具有上表1所述與2-Θ值（度）之峰值強度。 於不含任何額外材料（其它結晶形、賦形劑）之樣本中，可 觀察得下表3所述於約2-Θ值（度）之繞射峰。 於另一個較佳具體例中，大致上純質之NMS-E354 1:1甲 烷磺酸鹽之I型顯示圖2D指示之X光繞射圖。 也高度偏好NMS-E354之1:1曱烷磺酸鹽之I型，其顯示圖 2D所示該型X光繞射圖，具有上表1所述與2_θ值（度）之峰值 強度。 於不含任何額外材料（其它結晶形、職形劑）之樣本中，可 觀察得下表4所述於約2-Θ值（度）之繞射峰。 於另一個較佳具體例中，大致上純質之NMS-E354半反丁 烯二酸鹽之I型顯示圖2C指示之X光繞射圖。 也高度偏好NMS-E354之半反丁烯二酸鹽之I型，其顯示圖 2C所示該型X光繞射圖，具有上表1所述與2-Θ值（度)之峰值 強度。 於不含任何額外材料（其它結晶形、賦形劑）之樣本中，可 觀察得下表5所述於約2-Θ值（度）之繞射峰。 於另—個較佳具體例中，大致上純質之NMS-E354自由態 驗之I型顯示圖2Α指示之X光繞射圖。 099138312 17 201125861 也同度偏好NMS-E354自由態鹼之〗型，其顯示圖2A所示 §亥型X光繞射圖，具有上表1所述與2-Θ值(度）之峰值強度。 於不含任何額外材料（其它結晶形、賦形劑）之樣本中，可 觀察得於下表6所述於約2-Θ值（度）之繞射峰。 大致上純質表示本發明之結晶形具有至少9〇%純度。更佳 本發明之結晶形具有至少95%純度，及最佳至少99%重量比 NMS-E354之酸加成鹽或自由態鹼之晶體係呈依據本發明之 結晶形存在。 (結晶性NMS-E354鹽類及自由態鹼之溶解度） NMS-E354鹽類之溶解度之測定可利用下述程序進行：已 知量之結晶性NMS-E354鹽類或自由態鹼於室溫於0.9%氣 化鈉溶液内攪拌4小時，於過量固體情況下考慮為10毫克/ 毫升目標濃度。所得製備品經過濾及利角HPLC分析。結果 報告於下表la。 表la- NMS-E354之代表性鹽類及自由態驗之結晶形之溶 解度 NMS-E354之結晶形 水性溶解度值 順丁烯二酸鹽 0.07毫克/毫升 硫酸鹽 0.15毫克/毫升 曱烷磺酸鹽 0.12毫克/毫升 半反丁烯二酸鹽 0.02毫克/毫升 自由態驗 <0.01毫克/毫升 (利用粉末X光繞射(PXRD)之分析結果) 099138312 201125861 NMS-E354鹽類係藉粉末χ光繞射（pxrd)決定特徵， PXRD之進行方式係使用Thermo/ARL XTRA裝置，以CuKot 光源(45 kV，40 mA，1·8 kW-Καί射線，波長λ= 1.54060埃） 於5度至40度間2-Θ於室溫照射粉末樣本。 知描速率為1.20度/分鐘（每階以1秒計數時間為0.020度 階）。 於X光繞射圖中，繞射2-Θ角係作圖於橫軸以軸）及射線強 度係紀錄於縱軸(y軸）。 於定義NMS-E354之鹽類及自由態鹼之結晶形的χ光粉末 繞射峰之段落中，用於表示法「…表中報告於約2_θ角…」所 使用的「於約」一詞指示峰之精確位置（亦即所引述之角 值）無法解讀為絕對值，原因在於如熟諳技藝人士瞭解，峰 之精準位置於不同機器間、不同樣本間或由於所應用之測量 條件的略微變化結果而有些微差異。 前述各段落也陳述NMS-E354之鹽類及自由態驗之結晶形 提供又光粉末繞射圖「實質上」係與則、2及3所顯示之乂光 粉末繞射圖相同，具有實質上於表 4、5及6所顯示 之位在2-Θ角值之最顯著峰。須瞭解本上下文中使用「實質 上」—詞也意圖指示X光粉末繞射圖案之2_θ角值可於不= 器間、不同樣本間或由於所應用之測量條件的略微變化結果 而有些微差異’因此附圖所顯示的及表中所弓丨述的峰位^再 度無法解讀為絕對值。就此方面Μ，技藝界已知可獲得χ 099138312 201125861 光粉末繞射圖，其依據測量條件(例如設備、樣本製劑或所 使用的機器）而定具有一個或多個測量誤差。特定言之，一 般已知X光粉末繞射圖案條件依據測量條件及試樣的製備 可能有波動差異。 舉例CF之，冰暗X光粉末繞射技藝人士瞭解峰值之相對強 度例如可能受大小大於50微米之顆粒及非均勻之縱橫比影 響’該等差異可能影響樣本的分析。 热請技藝人士也須暸解反射位置可能受繞射計的樣本位 置及繞射計的零校準之精確高度影響。 樣本之表面平坦度也有小量影響。 如此，熟諳技藝人士瞭解此處繞射圖案資料無法解讀為絕 對值（有關進一步資訊請參考「粉末繞射及結構特徵化基礎 (Fundamentals of Powder Diffraction and Structural

Characterization)」’ Pecharsky and Zavalij，Kluwer Academic

Publishers，2003)。因此，須瞭解本發明所述nms_E354之 鹽類及自由態驗之結晶形並未限於具有與圖1、2及3所示X 光粉末繞射圖案相同的X光粉末繞射圖案之晶體，而其χ光 粉末繞射圖案實質上與圖1、2及3所示相同圖案之任何晶體 皆係落入於本發明之範圍。 X光粉末繞射業界之熟諳技藝人士可判定χ光粉末繞射圖 案之實質身分。 一般而言’於X光粉末繞射圖之繞射角之測量誤差為約2 _ θ 099138312 201125861 = 0.5度或以下（或更適當，約2-θ = 0.2度或以下），此種測量 誤差程度於考慮圖1、2及3所示X光粉末繞射圖時以及當解 讀於上下文及表1、2、3、4、5及6二者所述峰位置時須列入 考慮。 因此，例如陳述NMS-E3 54之鹽類及自由態驗具有至少一 個特定峰位在約2-θ = 5.3度（或其它所述角度中之任一者）之 X光粉末繞射圖案，則可解讀為2-θ = 5.3度±0.5度或2-θ=5.3 度±0.2度。 NMS-E354順丁烯二酸鹽、硫酸鹽、曱烷磺酸鹽、半反丁 烯二酸鹽、鹽酸鹽及自由態鹼之X光繞射主峰2-Θ角度係敘述 於上表1，而全體資料集合示於表2、3、4、5及6。 099138312 21 201125861 表2-NMS-E354順丁歸二酸鹽 位置 強度 相對強度 (度） (CPS) (%) 5.8 1692.9 100.0 10.6 247.7 14.6 11.5 170.5 10.1 12.2 12.3 0.7 12.6 1675.2 99.0 14.7 2S0.0 16.5 15.5 69.7 4.1 16.1 309.8 18.3 16.6 600.2 35.5 17.4 748.9 44.2 】9.5 73.4 4.3 19.9 175.7 10.4 20.9 67.5 4.0 21.2 352.9 20.9 22.0 100.1 5.9 22.6 300.0 17.7 23.2 172.5 10.2 23.4 106.0 6.3 23.7 247.1 14.6 24.0 50.9 3.0 24.4 123.1 7.3 25.0 417.3 24.7 25.2 220.9 13.1 25.6 497.2 29.4 25.9 156.7 9.3 26.7 68.4 4.0 27.0 132.8 7.9 27.2 158.2 9.4 27.9 826.8 48.8 29.0 139.9 8.3 31.4 80.6 4.8 32.2 265.6 15.7 33.6 107.2 6.3 34.7 167.8 9.9 35.0 37.8 2.2 35.4 160.2 9.5 37.3 52.6 3.1 37.5 35.2 2.1 38.3 37.2 2.2 39.3 31.0 1.8 22 099138312 201125861 表3-NMS-E354硫酸鹽 位置 強度 相對強度 (度） (CPS) (%) 12.0 195.0 32.1 12.3 83.1 13.7 16.2 52.0 8.6 16.7 90.2 14.9 17.0 36.4 6,0 18.5 46.0 19.1 17.9 3.0 19.9 29.3 4.8 20.5 126.5 20.8 21.8 606.7 100.0 23.4 99.9 16.5 24.1 30.1 5.0 24.8 164.2 27.1 25.3 134.8 22.2 25.6 18.0 3.0 26.0 34.7 5.7 26.5 100.6 16.6 28.1 49.5 8.2 28.8 438.3 72.2 29.6 25.3 4.2 31.1 58.5 9.6 38.7 52,2 8,6 23 099138312 201125861 表kNMS-E354曱烷磺酸鹽 -位置 強度 相對強度 (度） (CPS) (¾) 6.3 49.2 η 2 10.3 49.7 11.3 12.4 232.1 52.7 15.4 41.1 9.4 15.9 44.4 10.1 16.5 93.2 21.2 19.0 123.1 28.0 19.7 79.3 18.0 20.0 168.0 38.2 20.4 42.5 9.7 20.7 50.2 11.4 21.2 46.5 10.6 21,3 39.7 9.0 21.9 249.6 56.7 22.2 98.5 22.4 23.8 171.8 39.0 24.1 32.2 7.3 24.5 440.1 100.0 25.0 51.5 11.7 25.4 230.5 52,4 25.9 180.5 41.0 26.1 Π.8 2.7 28.1 191.5 43.5 31.2 13.5 3.1 31.6 36.3 8.3 34.1 86.5 19.6 34.6 40.8 9.3 35.9 36.7 8.3 36.5 22.0 5.0 37.3 33.3 7.6 38.6 102.1 23.2 24 099138312 201125861 表5-NMS-E354半反丁烯二酸鹽 位置 強度 相對強度 (度） (CPS) ⑻ 3.6 162.3 56.6 7.3 100.8 35.2 12.5 Ϊ08.6 37.9 13.1 80.4 28.1 14.5 286.6 100.0 16.7 282.8 98.7 19.3 157.9 55.1 19.8 40.8 14.2 20.0 14.1 4.9 20.7 15.4 5.4 22.2 81.1 28.3 22.9 52.9 18.4 25.3 247.3 86.3 26.4 135.0 47.1 27.6 115.8 40.4 28.0 210.6 73.5 28.7 146.6 51.2 29.0 12.3 4.3 29.3 38.9 13.6 29.5 22.9 8.0 31.1 15.3 5.4 31.3 23.1 8.) 32.0 22.6 7.9 33.2 23.6 8.2 33.7 30.0 10.5 35,6 44.3 15.5 37.2 23.2 8.1 37,4 25.3 8.8 39.3 53.0 18.5 25 099138312 201125861 表6-NMS-E354自由態鹼

位置 (度） 7.1 11.7 14.1 15.2 15.5 17.0 17.3 17.6 20.2 20.7 21.2 22.1 22.3 23.1 23.4 25.3 26.0 27.3 28.0 28.5 30.9 34.0 (利用差動掃描量熱術(DSC)之分析結果)

DSC分析係使用 Perkin-Elmer DSC-7奘番、I W裝置進行。DSC鋁盤 裝载約2宅克樣本。分析之溫度範圍為自go。。至最高值 350°C。樣本係以l〇°C/分鐘之加熱速率於氮氣流下分析。 觀祭付NMS-E354順丁稀一酸鹽之吸熱炼點約為21(峰 溫），顯示約M8焦耳/克之△HR參考圖6)。 至於有關DSC決定固態特徵之進一步態樣，發現

NMS-E354 L-天冬酸鹽、磷酸鹽及酒石酸鹽係利用PXRD 之結晶材料決定特徵，顯示複合DSC資料集合（參考圖2)。 099138312 26 201125861 此等鹽類進行涉及解溶劑合/脫水過程及隨後藉D S c熔峰溫 度決定特徵之解溶劑合/脫水形式之熔解來進行熱變遷。當 例如出現分解時，接著為進一步熱變遷。 須瞭解DSC之起點及/或峰溫值可能依不同機器、不同方 法、不同樣本間略有變化，因此所引述之數值無法解讀為絕 對值。實際上，觀察得之溫度將依據溫度變化以及所採用的 樣本準備技術及特定儀器而改變。須暸解藉由施加不同條件 所獲得之溫度值可能有±約4。(：之變化且將此變化列入考慮。 (利用動態蒸氣吸收(DVS)之分析結果） 結晶性NMS-E354鹽類及自由態鹼之水分吸收係藉將此種 物質樣本利用DVS 1000 (SMS)接受吸濕性測試進行研究。 裝置為「經控制環境微天平」，此處經過稱重的樣本暴露於 恆定且經控制的溫度及暴露於相對濕度(RH)之程式規劃變 化。測量得之參數（重量、時間及相對濕度)係於Excd試算表 報告’允許由測試之相對濕度範圍而獲得吸濕性曲線。〇% 至90%相對濕度間之吸附/解吸附週期係於25°C之控制溫度 進行。相對濕度之進行性變化為1〇%及3% ;其係於樣本重 里平衡下藉軟體運算進行。此種條件可於恆定速率之百分重 里支化例如〇.〇〇5%/分鐘定義。貫驗結果顯示較佳NMS-E354 鹽類，包括順丁烯二酸鹽、硫酸鹽、甲烷磺酸鹽、半反丁烯 二酸鹽係以不大於2%之低度至中度水分吸收決定特徵。此 等化合物可視為具有低吸濕性，此等化合物考慮具有低吸濕 099138312 27 201125861 性’當置於25°C高達90%之相冑濕度(RH)修正時，顯示與低 吸濕性結晶性自由態鹼物質可相媲美的表現。 (NMR識別分析） H NMR^係於28 C恒定溫度’於499 8 MHz操作的 Varian In〇va 500光譜儀進行。小量樣本溶解於〇75毫升 DMSO-d6 ’移轉入5毫米NMR試管進行隨後分析。分析也驗 證分子之抗衡離子二者預期之化學結構式。 依據本發明之又-態樣’以技藝界已知之任一種藥物劑型 可根據技#界已知之方法調配醫藥組成㈣來投予哺乳動 物包括人類。 熟諸技藝人士由後謂述㈣及實驗實施姆解本發明 所述雇S-E354之新穎鹽類為治療上新穎、改良的且有價值 的工具。 含有本發明化合物之醫藥組成物通常係遵照習知方法製 備且係以適當醫藥劑型投予。 舉例言之，固體口服劑型連同活性化合物，可含有稀釋劑 例如乳糖、葡萄糖、蔗糖(sacchar〇se)、蔗糖(『⑽）、纖維 素、玉米殺粉或馬鈐薯澱粉；潤滑劑例如二氧化矽、滑石、 硬月s I硬知酸鎂或硬脂酸妈、及/或聚乙二醇類；滑動劑 例 Jia. 一氣化碎，黏結劑例如殿粉、***膠、明膠、曱 基’義、准素、羧甲基纖維素、或聚乙烯基。比咯啶酮；崩散劑例 如澱粉、褐藻酸、褐藻酸鹽類或乙醇酸澱粉鈉；發泡混合物； 099138312 28 201125861 染料；甜味劑；濕潤劑諸如卵鱗脂、聚山梨醇酉旨 (polysorbates)、月桂基疏酸鹽類；及一般無毒性及藥理上無 活性物質用於醫藥調配物。此等醫藥製劑可以已知方法例如 利用混合、造粒、打鍵、包糖衣、或包膜衣方法製備。口服 投藥用之液體分散劑例如為糖梁劑、乳液劑及懸浮液劑。 * 舉例言之，糖漿劑可含有蔗糖或蔗糖與甘油及/或甘露糖 • 醇及山梨糖醇作為載劑。 懸浮液劑及乳液劑例如含有天然樹膠、瓊脂、褐藻酸鈉、 果膠、曱基纖維素、羧曱基纖維素、或聚乙烯醇作為載劑之 實例。 用於肌肉注射之懸浮液劑或溶液劑可含有醫藥上可接受 之載劑例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、甘醇類例如丙二醇 及若有所需適量利度卡因（lidocaine)鹽酸鹽連同活性化合 物。 靜脈注射或靜脈輸注用之溶液劑可含有無菌水作為載 劑，或較佳可呈無菌水性等張性鹽溶液形式，或可含有丙二 醇作為載劑。 栓劑可含有醫藥上可接受之載劑例如可可脂、聚乙二醇或 聚氧伸乙基山梨聚糖脂肪酸酯界面活性劑或卵磷脂連同活 性化合物。 例如醫藥組成物可包含如此處定義之NMS-E354之鹽類連 同醫藥上可接受之稀釋劑或載劑。 099138312 29 201125861 [實施例] 下列實施例舉例說明本發明。 溫度係以攝氏度數(。〇測量。 除非另行指示，否則反應或實驗係於室溫進行。 縮寫： RT :室溫攪拌 RH :相對濕度 (實施例1 : NMS-E354自由態鹼之結晶型I) 自由態鹼(如WO 2007 110344實施例19步驟1-3所述製備） 於回流乙醇(75 vol)之溶液使用脫色木炭（10% w/w)處理。熱 混合物經過濾，澄清濾液維持於+4°C20小時。沈澱固體藉過 濾收集，於過濾器上使用二***（5 vol)洗滌及於+50°C於減 壓下乾燥獲得結晶化產物呈白色固體。 (實施例2 : NMS-E354順丁燁二酸鹽） NMS-E354自由態鹼（約40毫克）整份於室溫溶解於1〇毫升 曱醇，獲得約4毫克/毫升之標準濃度。 藉添加等量順丁稀二酸溶解於曱醇於室溫製備NMs_e354 自由態驗溶取而進行鹽之形成。 於-30°C靜置時間約24小時至36小時進行冷卻結晶化。 所得沈澱藉減壓過濾收集及於4〇。(：於減壓下乾燥。 (實施例3 : NMS-E354鹽類） 以類似實施例2之方式操作，但採用適量適當酸性抗衡離 099138312 30 201125861 子於溶劑（曱醇、乙醇或水），也製備下列鹽類： NMS-E354 L-天冬酸鹽、NMS-E354半反丁稀二酸鹽、 NMS-E354鹽酸鹽、NMS-E354曱烧石黃酸鹽、NMS-E354石粦酸 鹽、NMS-E354硫酸鹽及NMS-E354 L-酒石酸鹽。 當未進行結晶化時’溶液係於室溫於溫和氮氣流下蒸發濃 縮而允許沈澱。於某些情況下，要求再結晶（例如化合物於 ***濕磨）之額外步驟來分離結晶或至少始於膠狀殘餘物而 分離粉末狀樣本。 所得化合物中之NMS-E3 54及酸性抗衡離子之化學識別係 利用如前文說明之1HNMR進行。 (實施例4 : NMS-E354順丁烯二酸鹽、硫酸鹽、曱烧續酸鹽、 半反丁烯二酸鹽及鹽酸鹽） NMS-E354自由態鹼(372毫克’ 1.07毫莫耳)溶解於溫熱甲 醇(60毫升）’及然後允許其冷卻至室溫。於授拌下添加適合 酸（1.05當量）溶解於曱醇或水（用於反丁烯二酸之情況下）。 所得混合物於4°C老化48小時，及然後於減壓下濃縮至半量 體積。固體經過濾，以二***洗滌及最終於4〇°c於減壓下乾 燥獲得期望鹽類。 (實施例5 : NMS-E354順丁烯二酸鹽） 710克NMS-E354自由態鹼於回流及攪拌下於6〇升乙醇 95%加熱20分鐘，允許起始物料完全溶解（漠度約為I】克/ 升）0 099138312 201125861 約1當量順丁烯二酸(250克）溶解於L45升乙醇95%(濃度 約為170克/升）及添加至自由態驗溶液。回流1〇分鐘（始於回 流相等分鐘後鹽沈澱），中止加熱及允許混合物自動降溫至 約 25。。。 加熱中止後混合物攪拌約21小時，經過濾且以1.5升乙醇 95%洗滌及然後外部溫度設定於50°C於減壓下乾燥，獲得 564克標題化合物。 (實施例6 :硬明膠膠囊劑之製備，強度自2.5毫克至60毫克 之範圍） 含本發明化合物之口服醫藥組成物係以表7報告之百分比 範圍藉習知方法混合其它賦形劑連同活性化合物而製備。 [表7] 成分 範圍％ 活性化合物：NMS-E354順丁烯-酸豳 3.0+38.0 稀釋劑：乳糖一水合物 0.0-52.0 -崎雙劑：預膠化澱粉 8.0-97.0 JSif劑：硬脂酸鎂 0.8-1.0 滑fej1]:膠體-氧化矽 Ψ r〇l 〇〇 -1 0.0+0.7 【圖式簡單說明】 圖1顯不依據實施咖^至3所製備^NMs_E354自由態驗地 (A)半反丁稀二酸鹽段⑺）、順了稀二酸鹽工型⑹、鹽酸踏 I型⑼、甲燒石黃酸鹽！型⑻、硫酸鹽喷巧、£_天冬酸趟^ ⑹小酒石酸鹽1型⑻、磷酸鹽_)之林繞射圖。χΐ繞 099138312 32 201125861 射圖2Θ角（度）報告於X軸而強度(CPS)報告於y軸。 圖2顯示依據實施例1參考及製備之NMS-E354自由態驗I 型（A);依據實施例4製備之順丁烯二酸鹽I型（B)、半反丁烯 二酸鹽I塑（C)、甲烷磺酸鹽I型（D)、硫酸鹽I型（E)之X光繞射 圖。X光繞射圖2Θ角（度）報告於X軸而強度（CPS)報告於y軸。 -圖3顯示依據實施例5製備之NMS-E354順丁烯二酸鹽1型 •之X光繞射圖。X光繞射圖2Θ角（度）報告於X軸而強度（cps) 報告於y軸。 圖4顯示依據實施例1至3所製備之結晶性NMS-E354自由 態鹼I型（A)、半反丁烯二酸鹽I型（B)、順丁烯二酸鹽I型（c)、 鹽酸鹽I型（D)、曱烷磺酸鹽I型（E)、硫酸鹽I型（F)、L-天冬酸 鹽I型(G)、L-酒石酸鹽I型(H)、磷酸鹽I型⑴之DSC(差動掃 描量熱術）溫度紀錄圖。溫度紀錄圖於X軸報告溫度（。〇, 軸報告標準化熱流量（瓦/克）。 圖5顯示依據實施例1製備之NMS-E354自由態鹼I型（A)及 依據實施例4製備之順丁烯二酸鹽I型（B)、半反丁烯二酸鹽1 型（C)、甲烷磺酸鹽I型（D)、硫酸鹽I型（E)之DSC溫度紀錄 圖。溫度紀錄圖於X軸報告溫度（。〇，於y軸報告標準化熱流 量（瓦/克）。 圖6報告依據實施例5製備之NMS-E354順丁烯二酸鹽I型 之DSC溫度紀錄圖。溫度紀錄圖於乂軸報告溫度（。〇)，於乂軸 報告標準化熱流量（毫瓦(mW))。 099138312 33

Claims (1)

1. 201125861 七、申請專利範圍： 1. 一種具有下式之化合物NMS-E3 54之鹽類之結晶形：

   其中該化合物NMS-E354為5-(2-胺基-嘧啶-4-基)-2-(2,4- 二氯-苯基)-1Η-吡咯_3·羧酸醯胺，其係選自於L-天冬酸鹽、 半反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、順丁烯二酸鹽、曱烷磺酸鹽、硫 酸鹽、L-酒石酸鹽、或磷酸鹽之鹽類，及其水合物、溶劑合 物及多晶形。 2.如申請專利範圍第1項之化合物NMS-E354之鹽類之結 晶形’其係選自於半反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷續 酸鹽及硫酸鹽之鹽類。 3·如申請專利範圍第1項之化合物NMS-E354之鹽類之結 晶形，其係選自於順丁烯二酸鹽及硫酸鹽之鹽類。 4. 如申請專利範圍第1項之化合物NMS-E354之鹽類之結 晶形’其係為順丁烯二酸鹽之鹽類。 5. —種呈自由態鹼之化合物NMS-E354之結晶形，其中， 該化合物NMS-E354係如申請專利範圍第1項定義。 6. —種醫藥組成物，包含申請專利範圍第1至5項中任—項 所定義之NMS-E354之任一種鹽類或自由態鹼之結晶形、溶 劑合物或水合物作為活性成分’及醫藥上可接受之賦形劑及 099138312 34 201125861 /或載劑。 7·如申凊專利範圍第1至5項中任一項所定義之NMS-E354 之任一種鹽類或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，其 係用作為藥物。 8·如申請專利範圍第1至5項中任一項所定義之NMS-E354 之任一種鹽類或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，其 係用於如申請專利範圍第7項之用途，其中該藥物係用作為 CDC7或CDC7/CDKs抑制劑。 9. 如申請專利範圍第1至5項中任一項所定義之NMS-E354 之任一種鹽類或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，其 係作為治療患有可藉CDC7或CDC7/CDKS抑制作用治療之 疾病狀態之哺乳動物包含人類之用途。 10. 如申請專利範圍第1至5項中任一項所定義之 NMS-E354之任一種鹽類或自由態鹼之結晶形、溶劑合物或 水合物，其係用於患有可藉CDC7或CDC7/CDKs抑制作用治 療之疾病狀態之哺乳動物包含人類之治療。 11. 如申請專利範圍第10項之NMS-E354之任一種鹽類或 自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，其中，該可藉CDC7 或CDC7/CDKS抑制作用治療之疾病狀態為細胞增殖病症、 病毒性感染、自體免疫病或神經退化病症。 12. 如申請專利範圍第11項之NMS-E354之任一種鹽類或 自由態鹼之結晶形、溶劑合物或水合物，其中，該細胞增殖 099138312 35 201125861 病症為癌症。 13. 如申請專利範圍第12項之NMS-E354之任一種鹽類或 自由態驗之結晶形、溶劑合物或水合物，其中，該癌症包括 全部癌之類型、骨髓系或淋巴系造血腫瘤、間質來源之腫 瘤、中枢及周邊神經系統腫瘤、黑色素瘤、間皮瘤、精原細 胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤及卡波西氏肉瘤。 14. 一種如申請專利範圍第1至5項中任一項所定義之 NMS-E354之任一種鹽類或自由態驗之結晶形、溶劑合物或 水合物之用途，其係用於製造治療可藉CDC7或CDC7/CDKS 抑制作用治療之疾病狀態之藥物。 099138312 36