TW201006929A - Cancerous disease modifying antibodies - Google Patents

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201006929 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於癌症性疾病調節抗體（CDMAB)之分離及產 生以及此等CDMAB視情況與一或多種化學治療劑組合在 治療及診斷過程中的用途。本發明進一步係關於利用本發 明CDMAB之結合檢定。 【先前技術】 單株抗體作為癌症療法：患有癌症的每個人均為獨特 馨的，且患有不同於其他癌症之癌症作為該人之特性。儘管 如此，當刖療法卻以相同的方式治療患有相同類型之癌症 且處於相同階段的所有患者。此等患者中至少冒。將為第 一線療法無法治癒的，因而導致進行其他輪次之治療及治 療無效、轉移及最終死亡之可能性增加。優良治療方法應 為針對特定個人定製療法。適用於定製之惟一當前療法為 手術化學療法及輻射治療無法針對患者進行定製，而手 I 術自身在大部分情況下不足以治癒。 隨著單株抗趙的出現，開發用於定製療法之方法的可能 性因每-抗趙可針對單一抗原決定基而變得更為現實。此 外’有可能產生針對惟一確定特定個人之腫瘤之抗原決定 基群的抗雜組合。 在已認識到癌性細胞與正常細胞間之顯著差異為癌性細 胞含有轉型細胞特異性抗原的情況下，科學界長期認為單 株抗艎可設計成藉由與此等癌抗原特異性結合而特異性把 向轉型細胞；因而咸信單株抗逋可充當消除癌細胞之「神 141375.doc 201006929 奇子彈（Magic Buliet)」。然而’現已廣泛認為，單一單 抗體不能用於所有情況之癌症，且單株抗 Λ»瓶作為一類作 為靶向癌症治療部署。根據本發明所揭示之教示分離之單

株抗艘已顯不’以有益於患者之方么丨L 万式（例如藉由減小腫瘤 負荷）調節癌症性疾病過程，且在本文中 你不又中將不同地稱為癌 症性疾病調節抗體（CDMAB)或「抗癌」抗趙。 目前，癌症患者通常具有極少的治療選擇1格受控之 癌症治療方法已改善了全球存料及發料n重;於 特定個人而言，此等改良之統計資料未必與其個人㈣之 改良有關。 因而’若提出使從業者能夠獨立於同一群體中之其他患 者來治療各腫瘤的方法，則此舉將提供僅針對一個人定製 療法的獨特方法。該治療過程將理想地增加治癒率，且產 生較佳結果，從而滿足期盼已久的需要。 歷史上’已使用多株抗體治療人類癌症，所獲得的成功 有限。已用人類血襞治療·淋巴瘤及白血病，但幾乎未達成 延長的緩解或反應。此外，缺之再現性且與化學療法相比 並無額外效益。亦以人類血液、黑猩猩血清、人類血衆及 馬血清治療諸如乳癌、黑素瘤及腎細胞癌之實體腫瘤，產 生相應不可預知且無效的結果。 已進行了許多將單株抗趙用於實想腔瘤的臨床試驗。在 20世紀80年代，進行至少4個關於人類乳癌的臨床試驗， 該等臨床試驗在使用針對特定抗原或基於組織選擇性之抗 想的至^ 47名患者中僅產生】名反應者。直至】刚年才 141375.doc 201006929

獲得使用人類化抗Her2/neu抗體（Herceptin®)與CISPLATIN 組合的成功臨床試驗。在此試驗中，評估37名患者之反 應’其47約四分之一具有部分反應率，且另外四分之一具 有微小或穩定疾病進展。在反應者中’中位進展時間為 8.4個月’且中位反應持蹟時間為5.3個月。 在1998年批准Herceptin®與Taxol®組合用於第一線使 用。臨床研究結果顯示，與單獨接受Tax〇l® (3 〇個月）之群 組相比，接受抗體療法加Taxol® (6.9個月）之患者的中位疾 春 病進展時間增加。中位存活期亦略微增加；Herceptin®加 Taxol治療組為22個月’而單獨Taxol®治療組為18個月。 此外’與單獨Taxol®相比，在抗體加Taxol®組合之群組中 7G全反應者數目（8%與2%)及部分反應者數目（34%與15%) 均增加。然而，與單獨Taxol®治療相比，以Herceptin®及 Taxol®治療導致較高心臟毒性發生率（13%與ι%)。此外， Herceptin®療法僅對過度表現（如藉由免疫組織化學（IHC) _ 刀析所測疋）人類表皮生長因子受體2(Her2/neu)( —種受 體’其目前尚無已知功能或生物學上重要之配體）的患者 有效’對約25°/。患有轉移性乳癌的患者有效。因此，對於 患有乳癌之患者而言，仍在較大程度上未滿足需要。即使 可受益於Herceptin®治療的患者亦仍將需要化學療法，且 因此仍將必需至少在某種程度上應付此種治療的副作用。 考查結腸直腸癌之臨床試驗涉及針對醣蛋白及醣脂兩種 標靶之抗體。對腺癌具有一定特異性的抗體（諸如17-1A) 已在超過60名患者中進行2期臨床試驗，僅有1名患者具有 141375.doc 201006929 部分反應。在其他試驗中，在使用附加環磷醯胺之方案 中，使用17-1A在52名患者中僅產生1例完全反應及2例微 小反應。迄今為止，17-1A之III期臨床試驗尚未顯示作為 III期結腸癌之輔助療法的功效改良。最初經批准用於成像 之人類化鼠類單株抗體的使用亦不產生腫瘤消退。 最近，在使用單株抗體進行之結腸直腸癌臨床研究方面 尚未獲得任何積極結果。2004年，ERBITUX®經批准用於 患有EGFR表現轉移性結腸直腸癌、基於伊立替康 (irinotecan)之化學療法難以治癒之患者的第二線治療。兩 組II期臨床研究及單組研究之結果均顯示，ERBITUX®與 伊立替康組合分別具有23%及15%之反應率，且分別具有 4.1個月及6.5個月之中位疾病進展時間。同一兩組II期臨 床研究及另一單組研究之結果顯示，單獨以ERBITUX®治 療分別產生11%及9%之反應率，且分別具有1.5個月及4.2 個月之中位疾病進展時間。 因此，ERBITUX®與伊立替康組合治療在瑞士及美國以 及ERBITUX®單獨治療在美國已經批准作為第一線伊立替 康療法無效之結腸癌患者的第二線治療。因此，如 Herceptin®，在瑞士僅批准以單株抗體與化學療法之組合 進行治療。此外，在瑞士及美國均僅批准作為第二線療法 對患者進行治療。同樣，2004年，批准AVASTIN®與靜脈 内5-氟尿嘧啶基化學療法組合使用作為轉移性結腸直腸癌 之第一線治療。III期臨床研究結果顯示，與單獨以5-氟尿 嘧啶治療之患者相比，以AVASTIN®加5-氟尿嘧啶治療之 141375.doc 201006929 患者的中位存活期延長（分別為16個月與20個月）。然而， 又如Herceptin®及ERBITUX®，僅批准以單株抗體與化學療 法之組合進行治療。 對於肺癌、腦癌、卵巢癌、胰腺癌、***癌及胃癌亦 造成不良結果。對於非小細胞肺癌之最有前景的近期結果 來自治療涉及與殺細胞藥物小紅莓（doxorubicin)結合之單 株抗體（SGN-15 ; dox-BR96，抗唾液酸基-LeX)與化學治療 劑TAXOTERE®組合的II期臨床試驗。TAXOTERE®為惟一 # 經FDA批准用於肺癌之第二線治療之化學療法。最初數據 表明，與單獨TAXOTERE®相比，整鱧存活率提高》在研究 所招募之62名患者中，三分之二接受SGN-15與TAXOTERE® 組合，而其餘三分之一接受單獨TAXOTERE®。對於接受 SGN-15與TAXOTERE®組合之患者，中位總體存活期為7.3 個月，相比之下接受單獨TAXOTERE®之患者為5.9個月。 接受SNG-15加TAXOTERE®之患者在1年及18個月時的整體 存活率分別為29%及18% ’相比之下接受單獨TAXOTERE® W 之患者的整體存活率分別為24%及8%。計劃進行進一步臨 床試驗。 - 臨床前，在單株抗體用於黑素瘤方面取得的成功有限。 此等抗體中極少達到臨床試驗，且迄今為止均未經批准或 在III期臨床試驗中顯示有利結果。 治療疾病之新藥的發現因未在可能促成疾病發病之 3 0,000種已知基因之產物中鑑別出相關標靶而受阻。在腫 瘤學研究中，潛在藥物標靶通常簡單地由於其在腫瘤細胞 141375.doc 201006929 中過度表現而選择。接著，針對與大量化合物之相互作用 對因此鑑別之標&進行薛檢1潛在抗體療法之情況下， 此等候選化合物通常來源於根據〖⑷灯及制定之 基本原則（1975, Nature，256, 495-497, Kohler及Milstein)產 生單株抗體的傳統方法。收集以抗原免疫之小鼠的脾細胞 (例如兀整細力、細胞部分、經純化之抗原）且肖永生化融 合瘤搭配物融合。針對與標靶結合最具親合力之抗體的分 泌對所得融合瘤進行筛檢及選擇。已使用此等方法產生許 多針對癌細胞之治療性及診斷性抗體（包括HereeptinS)& RITUXIMAB)且根據其親和力進行選擇。此策略具有雙重 缺陷。第一，供治療性或診斷性抗體結合之適當標靶的選 擇因關於組織特異性致癌過程之知識的缺乏及所得锻別此 等標靶的方法（諸如藉由過度表現）過於簡單而受限。第 二，關於以最大親和力與受體結合的藥物分子通常具有引 發或抑制信號之最高可能性的假設可能並非始終成立。 儘管在乳癌及結腸癌之治療方面取得了一定進展，但單 一藥劑或共同治療形式的有效抗體療法之鑑別及開發已不 足以應對所有類型之癌症。 先前專利： 美國專利第5,750，1〇2號揭示一種以可能由患者之細胞或 組織選殖的MHC基因轉染該患者之腫瘤之細胞的方法。接 著，使用此等經轉染細胞對患者進行接種》 美國專利第4,861,581號揭示一種包含下列步驟的方法： 獲得對哺乳動物之瘤性細胞及正常細胞之内部細胞組分而 141375.doc 201006929 非外部組分具有特異性的單株抗體；標記該單株抗艎；使 經標記之抗體與接受治療之哺乳動物的組織接觸以殺死瘤 性細胞；及藉由量測經標記抗體與退化瘤性細胞之内部細 胞組分的結合來測定療法之有效性。在製備針對人類細胞 内抗原之抗體時’專利權所有人認為惡性細胞提供該等抗 原之便利來源。 美國專利第5，171，665號提供一種新穎抗體及其製造方 法。特定言之’該專利教示具有如下性質之單株抗體的形 成：較強結合與人類腫瘤（例如，結腸腫瘤及肺腫瘤）相關 之蛋白質抗原，而與正常細胞之結合程度則弱得多。 美國專利第5,484,596號提供一種癌症治療方法，該方法 包含：藉由手術除去人類癌症患者之膜瘤組織；處理腫瘤 組織以獲得腫瘤細胞；照射腫瘤細胞使其可存活但不具致 瘤性；及使用此等細胞為患者製備能夠抑制原發腫瘤復發 而同時抑制轉移之疫苗》該專利教示開發與腫瘤細胞之表 面抗原反應的單株抗體》如在第4欄第5行及以下内容所閣 述’專利權所有人利用自生性腫瘤細胞來開發單株抗體從 而在人類瘤形成中提供主動特異性免疫療法。 美國專利第5,693,763號教示一種為人類癌瘤所特有且不 依賴於源上皮組織的醣蛋白抗原。 美國專利第5,783，186號係關於誘導表現Her2之細胞之細 胞凋亡的抗Her2抗體、產生該等抗艎之融合瘤細胞株、使 用該等抗體及包括該等抗艘之醫藥組合物治療癌症的方 法。 141375.doc 201006929 美國專利第5,849,876號描述用於產生針對自腫瘤及非腫 瘤組織來源純化之黏蛋白抗原之單株抗體的新型融合瘤細 胞株》 美國專利第5,869,268號係關於產生人類淋巴細胞（其產 生對所要抗原具特異性之抗體）的方法、產生單株抗體的 方法以及藉由該方法產生之單株抗體。該專利尤其係關於 產生適用於癌症之診斷及治療的抗HD人類單株抗體。 美國專利第5,869,045號係關於與人類癌瘤細胞反應之抗 體、抗體片段、抗體結合物及單鏈免疫毒素。此等抗體具 春 有雙重作用機制，即分子與存在於人類癌瘤表面上之細胞 膜抗原反應’且此外’抗體具有在癌瘤細胞内内在化的能 力’在結合之後，其尤其適用於形成抗體-藥物及抗體_毒 素結合物。未經修飾形式之抗體在特定濃度下亦顯現細胞 毒性。 美國專利第5,780,033號揭示自體抗體於腫瘤治療及預防 中的用途。然而，此抗趙為來自成年哺乳動物之抗核自體 抗逋。在此情況下，自體抗體被認為是一類在免疫系統中 ❹ 發現之天然抗體。由於自體抗體來自「成年哺乳動物」， 因此不需要自體抗體實際上來自經受治療之患者。此外， 該專利揭示來自成年哺乳動物之天然及單株抗核自體抗 艘，及產生單株抗核自體抗艘之融合瘤細胞株。 【發明内容】 本申請案利用U.S· 6，180,357專利中教示之產生患者特異 性抗癌抗體的方法來分離編碼癌症性疾病調節單株抗體的 141375.doc -10· 201006929 融合瘤細胞株》可使此等抗體特異性針對一種腫瘤且因而 有可能定製癌症療法。在本申請案之上下文中，具有殺細 胞（細胞毒性）或細胞生長抑制（細胞抑制）性質的抗癌抗體 在下文中將稱為具細胞毒性。此等抗體可用於輔助對癌症 之分期及診斷，且可用於治療腫瘤轉移。此等抗體亦可用 於以預防性治療的方式預防癌症。與根據傳統藥物發現典 範產生之抗體不同，以此方式產生之抗體可靶向先前未證 實為惡性組織之生長及/或存活所必需之分子及路徑。此 外，此等抗體之結合親和力適合於引發可能不易引起較強 親和力相互作用之細胞毒性事件的要求。使標準化學治療 法（例如’放射性核種）與本發明之CDMAB結合，從而聚焦 該化學治療法之使用亦處於本發明範圍内。CDMAB亦可 與毒素、細胞毒性部分、酶（例如，生物素結合酶）或血源 性細胞結合，從而形成抗體結合物。 個別化抗癌治療之前景將引起處置患者之方式產生變 化。可能的臨床情境為在呈現時獲得腫瘤樣本且入庫。根 據此樣本’可由預先存在之癌症性疾病調節抗體組確定腫 瘤之類型。將按照慣例對患者分期，但可使用可得抗體對 患者進一步分期。可立即用現有抗體治療患者，且可使用 本文中陳述之方法或藉由使用噬菌體呈現庫結合本文中揭 示之篩檢法產生腫瘤特異性抗體組。產生之所有抗體均將 添加至抗癌抗體庫，此係由於有可能其他腫瘤會帶有一些 與經受治療者相同的抗原決定基《根據此方法產生之抗體 可用於治療許多患有與此等抗體結合之癌症之患者的癌症 141375.doc 201006929 性疾病。 除抗癌抗體以外’患者可決定接受目前推薦之療法作為 多模式治療方案的-部分。經由本發明方法分離之抗體對 非癌性細胞相對無毒，由此允許以高劑量單獨或連同習知 療法使用抗體之組合。高治療指數亦將允許短時間之再治 療，由此將降低出現治療抵抗型細胞的可能性。 若患者以初始療程難以治癒或發生轉移，則可重複產生 腫瘤特異性抗體之過程以進行再治療。此外，抗癌抗體可 與獲自該患者之紅血球結合且再注入以治療轉移。對於轉 移性癌症的有效治療極少，且轉移通常預示導致死亡的不 良結果。然而，轉移性癌症通常經充分血管化，且紅血球 遞送抗癌抗體可具有使抗體集中在腫瘤位點之作用。即使 在轉移之前’大部分癌細胞亦依賴宿主之血液供給而存 活，且與紅血球結合之抗癌抗體可能亦有效對抗原位腫 瘤。或者，抗體可與其他血源性細胞結合，例如淋巴細 胞、巨噬細胞'單核細胞、自然殺手細胞等。 存在5類抗體，且每一類均與其重鏈所賦予之功能有 關。一般認為，裸抗體之癌細胞殺傷作用係由抗體依賴性 細胞介導之細胞毒性或補體依賴性細胞毒性介導。舉例而 言，鼠類IgM抗體及IgG2a抗體可藉由結合補體系統之C-1 組分而活化人類補體，從而活化經典補體活化路徑，由此 可使腫瘤溶解^對於人類抗體，最有效之補體活化抗體一 般為IgM及IgGl。IgG2a及IgG3同型之鼠類抗體在募集具 有Fc受體之細胞毒性細胞方面有效，該等細胞毒性細胞將 141375.doc -12- 201006929 引起單核細胞、巨嗟細胞、趣細賒爲 m 祖細胞及某些淋巴細胞之細胞 殺傷作用。IgGl同细；3 Τίτπ·5 m S !及1gG3同型之人類抗體均介導 ADCC。 抗雜介導之癌症殺傷作料另__可能機制可能係、經由使 用功能為催化細胞膜及其相關釀$白或糖脂中之各種化學 鍵水解的抗體（所謂催化性抗體）。

抗體介導之癌細胞殺傷作用存在另外3種機制。第一種 為使用抗體作為疫苗以誘導身體針對存於癌細胞上之推定 抗原產生免疫反應《第二種為使用抗趙無向生長受趙並干 擾其功能或下調該受體以使其功能實際上喪失。第三種為 該等抗體對可能導致直接細胞死亡的細胞表面部分之直接 接合’諸如死亡受體（諸如TRAIL R14TRAIL R2)或整合 素分子（諸如ανβ3及其類似物）之接合的影響。 癌症藥物之臨床效用係基於藥物在可接受之風險概況下 對患者之效益。在癌症治療中，存活期一般為最欲尋求的 效益，然而除延長生命以外尚有許多廣泛認可之其他效 益。此等其他效益（其中治療對存活期並無不利影黎）包括 症狀減輕、防止不良事件、延長復發時間或無病存活期及 延長進展時間。此等準則已被普遍接受，且諸如美國食品 藥品管理局（the U.S. Food and Drug Administration ; F.D.A) 之管理機構批准產生此等效益之藥物（Hirschfeld等人 Critical Reviews in Oncology/Hematolgy 42:137-143 2002卜除了此等準則以外，亦普遍認為存在可能預示此 等類型之效益的其他終點。在某種程度上，美國FD A准 141375.doc -13- 201006929 予之加速批准過程說明存在可能將預示患者效益之替代 品。截至2003年底，已有16種經此過程批准之藥物，且其 中，4種已獲得完全批准，亦即，如替代終點所預示，後 續研究已顯示直接患者效益。確定實體腫瘤中之藥效的一 個重要終點為藉由量測治療反應來評估腫瘤負荷（Therasse 等人 Journal of the National Cancer Institute 92(3):205-216 2000)。該評估之臨床準則（RECIST準則）已由實體腫瘤工 作組（Solid Tumors Working Group)(國際癌症專家組）之反 應評估準則（Response Evaluation Criteria)公布。如根據 _ RECIST準則之客觀反應所示，與適當對照組相比對腫瘤 負荷具有顯著效果之藥物趨向於最終產生直接患者效益。 在臨床前配置中，一般更直接地評估並記錄腫瘤負荷。在 臨床前研究可轉為臨床配置的情況下，在臨床前模型中延 長存活期的藥物具有最大的預期臨床效用。與產生臨床治 療正性反應相類似，在臨床前配置中減小腫瘤負荷之藥物 亦可能對疾病具有顯著直接影響。雖然延長存活期為最欲 尋求的癌症藥物治療臨床結果，但仍存在具有臨床效用的 ® 其他效益，且顯然，腫瘤負荷減小（其可能與疾病進展延 遲、存活期延長或二者相關）亦可產生直接效益且具有臨 床影響（Eckhardt等人Developmental Therapeutics: Successes and Failures of Clinical Trial Designs of Targeted Compounds; ASCO Educational Book，第 39 次年議 Annual Meeting， 2003，第 209-219 頁）。 本發明描述AR59A157.1之開發及用途，其係藉由其在 141375.doc -14- 201006929 細胞毒性檢定及在人類癌症之動物模型中的作用而鑑別β 本發明描述特異性結合存在於標靶分子上之抗原決定基且 亦具有作為裸抗體針對惡性腫瘤細胞而非正常細胞之活體 外細胞毒性，且亦作為裸抗韹直接介導對腫瘤生長之抑制 的試劑。另一進展為使用諸如此類之抗癌抗體靶向表現同 源抗原標記之腫瘤以達成肢瘤生長抑制及癌症治療之其他 正性終點。 總而言之’本發明教示AR59A157.1抗原作為治療劑標 托之用途’當投與該治療劑時可減小哺乳動物之表現該抗 原之癌症的腫瘤負荷。本發明亦教示使用CDMAB (AR59A157.1)及其衍生物，以及其抗原結合片段及其誘導 細胞毒性之配體靶向其抗原以減小哺乳動物之表現該抗原 之癌症的腫瘤負荷。此外，本發明亦教示偵測癌性細胞中 之AR59A157.1抗原的用途，其可用於帶有表現此抗原之 腫瘤之哺乳動物的診斷、療法預測及預後。 因此’本發明之一目標為利用產生針對來源於特定個人 或一或多個特定癌細胞株的癌性細胞而產生之癌症性疾病 調節抗體（CDMAB)(該CDMAB對癌細胞具細胞毒性而同時 對非癌性細胞相對無毒）的方法以便分離融合瘤細胞株及 相應經分離之單株抗體及其抗原結合片段，該等抗原結合 片段編碼該等融合瘤細胞株。 本發明之另一目標為教示癌症性疾病調節抗體、其配體 及抗原結合片段。 本發明之又一目標為產生癌症性疾病調節抗體，其細胞 141375.doc 15 201006929 毒性係由抗體依賴性細胞毒性介導。 本發明之再一目標為產生癌症性疾病調節抗體，其細胞 毒性係由補體依賴性細胞毒性介導。 本發明之又一目標為產生癌症性疾病調節抗體，其細胞 毒性隨其催化細胞化學鍵水解之能力變化。 本發明之再一目標為產生癌症性疾病調節抗體，其適用 於癌症診斷、預後及監測之結合檢定。 本發明之其他目標及優勢將由以下描述變得顯而易見， 在下文中藉由說明及實例闞述本發明之某些實施例。 ❹ 【實施方式】 一般而言，當用於發明内容、實施方式、實例及申請專 利範圍中時，下列詞或短語具有所指示之定義。 術浯「抗體」以最廣范之意義使用且尤其涵蓋例如單個 單株抗體（包括促效劑、拮抗劑及中和抗體、去免疫抗 體、鼠類抗體、嵌合抗體或人類化抗體）、具有多抗原決 定基特異性之抗體組合物、單鏈抗體、免疫結合物及抗體 片段（參看下文）。 ❹ 如本文中所使用，術語「單株抗體」係指獲自大體上同 類之抗體群體的抗體，亦即，構成該群體之個別抗體除了 可能少量存在的可能天然發生之突變以外均相同。單株抗 體具有高度特異性，針對單一抗原位點。此外，與包括針 對不同決定子（抗廣'決定基）之不同抗體之多株抗艘製劑相 反，各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。除其特異性 以外，單株抗體之優勢在於其可在不受其他抗體污染之情 141375.doc •16- 201006929 況下合成。修飾語「單株」表明抗體係獲自大體上同類之 抗體群體的特徵’且不應視為需要藉由任何特定方法產生 抗體。舉例而言，根據本發明使用之單株抗體可藉由最初 由Kohler等人’ JVflfiwre 256:495 (1975)所描述之融合瘤（鼠 類或人類）法製得，或可藉由重組DNA法（參看，例如美國 專利第4,816,567號）製得。亦可使用例如Clackson等人， iV'aiMre，352:624-628 (1991)及 Marks 等人，《/. Mo/· 5z.〇/·， 222:581-597 (1991)中描述之技術自噬菌體抗體庫分離「單 ® 株抗體」。 「抗體片段」包含完整抗體之一部分，較佳包含其抗原 結合區或可變區。抗體片段之實例包括小於全長之抗體 Fab、Fab1、F(ab’）2，及Fv片段；雙功能抗體·，線性抗體； 單鏈抗體分子；單鏈抗體、單域抗體分子、融合蛋白、重 組蛋白及由抗體片段形成的多特異性抗體》 「完整」抗體為包含抗原結合可變區以及輕鏈怪定域 赢 （CL)及重鏈恆定域CH1、CH2及CH3的抗體。恆定域可為天 9 然序列恆定域（例如人類天然序列恆定域）或其胺基酸序列 變型。較佳地，完整抗體具有一或多種效應功能。 • 可依據完整抗體重鍵怪定域之胺基酸序列將其歸為不同 • 「類別」。存在5種主要類別的完整抗體：IgA、IgD、 IgE、IgG及IgM，且此等類別中有幾類可進一步分成「子 類」（同型），例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA 及 IgA2。對應於不同類別之抗體的重鏈恆定域分別稱為α、 δ、ε、γ及μ。不同類別之免疫球蛋白的次單位結構及三維 141375.doc -17- 201006929 構型已廣為人知。 抗體「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區（天然序列 Fc區或胺基酸序列變型Fc區）的生物活性。抗體效應功能 之實例包括Clq結合；補體依賴性細胞毒性；Fc受體結 合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性（ADCC);吞噬作 用；細胞表面受體（例如B細胞受體；BCR)下調等。 「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」及「ADCC」係指 細胞介導之反應，其中表現Fc受體（FcR)之非特異性細胞 毒性細胞（例如，自然殺手（NK)細胞、嗜中性白血球及巨 噬細胞）識別標靶細胞上的結合抗體且接著引起標靶細胞 溶解。介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FcyRIII，而單 核細胞表現FcyRI、FcyRII及FcyRIII。造jk細胞上之FcR表 現概述於 Ravetch及 Kinet, /mmwwo/· 9:457-92 (1991)第464頁之表3中。為了評估目標分子之ADCC活 性，可進行活體外ADCC檢定，諸如美國專利第5,500,362 號或第5,821,337號中所描述之檢定。用於該等檢定之有用 效應細胞包括周邊血液單核細胞（PBMC)及自然殺手（NK) 細胞。或者或另外，可在活體内，例如在諸如Clynes等人 尸兄45 (USA) 95:652-656 (1998)中所揭示之動物模型中評 估目標分子的ADCC活性。 「效應細胞」為表現一或多個FcR且執行效應功能之白 血球。較佳地，該等細胞表現至少FcyRIII且執行ADCC效 應功能。介導ADCC之人類白血球的實例包括周邊血液單 核細胞（PBMC)、自然殺手（NK)細胞、單核細胞、細胞毒 141375.doc -18· 201006929 性T細胞及嗜中性白血球；以PBMC及NK細胞為佳。效應 細胞可自其天然來源分離，例如自如本文中所描述之血液 或PBMC分離。 術語「Fc受體」或「FcR」係用於描述與抗體之Fc區結 合的受體。較佳FcR為天然序列人類FcR。此外，較佳FcR 為結合IgG抗體的FcR(Y受體）且包括FcYRI、FcyRII及 FcyRIII子類之受體，包括此等受體之對偶基因變異體及替 代性剪接形式。FcyRII受體包括FcyRIIA(「活化受體」）及 • FcYRIIB(「抑制受體」），其具有主要在其細胞質域方面不 同的類似胺基酸序列。活化受體FcyRIIA在其細胞質域中 含有基於免疫受體酪胺酸之活化基元（ITAM)。抑制受體 FcyRIIB在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制 基元（ITIM)(參見評述M. in DaSron, Twmwwo/· 15:203-234 (1997))。在Ravetch及Kinet，Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) ; Capel 等人，Immunomethods 4:25-34 (1994) 及 de Haas 等人，《/· Ζαό. Mei 126:330-41 (1995) 中評述FcR。本文中術語「FcR」涵蓋其他FcR，包 括有待於將來鑑別之FcR。該術語亦包括新生受體FcRn， 其負責將母親之IgG轉移至胎兒（Guyer等人，《/. /mmwwo/. 117:587 (1976)及 Kim 等人，Eur. «/. Immunol. 24:249 (1994))。 「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指分子在補體存 在下溶解標靶之能力。補體活化路徑係藉由補體系統之第 一組分（Clq)結合與同源抗原複合之分子（例如，抗體）而起 141375.doc -19- 201006929 始。為了評估補體活化，可進行CDC檢定，例如，如 Gazzano-Santoro 等人，《/_ Immunol. Methods, 202:163 (1996)中所描述。 術語「可變」係指在抗體間可變域之某些部分之序列廣 泛不同且用於各特定抗體對其特定抗原之結合及特異性。 然而’可變性在整個抗體可變域内並非均勻分布。其集中 於輕鏈可變域及重鏈可變域中稱為高變區的三個區段中。 可變域之較高保守度部分稱為構架區（FR)。天然重鏈及輕 鏈之可變域各包含大部分採用β摺疊構型， 由二個南變區 ❿ 連接的4個FR，該三個高變區形成連接且在某些情況下形 成β摺疊結構之一部分的環。各鏈中之高變區由FR緊密地 固持在一起，且與來自其他鏈之高變區一起促成抗體之抗 原結合位點的形成（參見Kabat等人，（Segwewces o/Proie/Mj 〇/ //wwwwo/ogzca/ /«iereji，東 5 版 Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，Md.第 15-17 頁；48-53 (1991))。恆定域並不直接牵涉於抗鱧與抗原之結合， 但展現各種效應功能，諸如抗體參與抗體依賴性細胞介導 響 之細胞毒性（ADCC)。 當在本文中使用時，術語「高變區」係指抗體中負責抗 原結合之胺基酸殘基。高變區一般包含來自「互補決定 區」或「CDR」之胺基酸殘基（例如，輕鏈可變域中之殘 基24-34(Ll)、50-56(L2)及89-97(L3)，及重鏈可變域中之 31-35(H1)、50-65(H2)及 95-102(H3) ; Kabat 等人， Sequences of Proteins of Immunological Interest » ^ > 141375.doc •20· 201006929

Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda，Md.第 15-17 頁；48-53 (1991))及/或來自「高變 環J之殘基（例如，輕鏈可變域中之殘基26-32(Ll)、50- 52(L2)及 91-96(L3)，及重鏈可變域中之 26-32(Η1)、53-55(H2)及 96-l〇l(H3) ; Chothia 及 Lesk «/. Λ/ο/.仉〇/. 196:901_917 (1987))。「構架區」殘基或「FR」殘基為除 本文中所定義之高變區殘基以外的可變域殘基。抗體之木 瓜蛋白酶消化產生稱為「Fab」片段且各具有單一抗原結 合位點的兩個相同抗原結合片段，及剩餘「Fc」片段（其 名稱反映其易於結晶之能力）。胃蛋白酶處理產生具有兩 個抗原結合位點且仍能夠交聯抗原的F(ab，）2片段。 「Fv」為含有完整抗原識別位點及抗原結合位點的最小 抗體片段。此區由緊密、非共價締合之一個重鏈可變域及 個輕鍵可變域之一聚體組成。正是呈此構型，各可變域 之3個高變區相互作用以界定vh_Vl二聚體表面上之抗原結 合位點。ό個高變區共同賦予抗體以抗原結合特異性。然 而，即使單一可變域（或僅包含3個抗原特異性高變區之半 個Fv)亦具有識別及結合抗原的能力，儘管其親和力比完 整結合位點低。Fab片段亦含有輕鏈之恆定域及重鏈之第 一恆定域（CH1)。Fab，片段與Fab片段不同之處在於在重鏈 CH1域之缓基末端處添加包括一或多個來自抗體鉸鏈區之 半胱胺酸的數個殘基。Fab’-SH為本文中對恆定域之半耽 胺酸殘基帶有至少一個游離硫醇基之Fab，的命名。F(ab，)2 抗體片段最初作為其間具有鉸鍵半胱胺酸之Fab·片段對而 141375.doc •21 - 201006929 產生。抗想片段之其他化學偶合物亦為已知的。 任何脊椎動物物種之抗體的「輕鍵」均可根據其怪定域 之胺基酸序列歸為兩種明顯不同的類型（稱為 <及λ)之一。 「單鏈Fv」或「scFv」抗體片段包含抗體之Vh域及& 域’其中此等域存在於單一多肽鏈中。較佳地，Fv多肽進 一步包含介於VH與VL域之間的多肽連接子，該多肽連接子 使scFv能夠形成抗原結合所需之結構。關於scFvi評述參 看 Pliickthun之 r/ze 尸/mr則⑶/0幻；o/M〇„〇c/〇似/ 如， 第 113 卷，Rosenburg 及 Moore 編，Springer_Verlag，New York，第 269-315頁（1994)。 術語「雙功能抗體」係指具有兩個抗原結合位點之小抗 體片段’該等片段包含與同一多肽鏈中之可變輕鏈域（Vl) 連接的可變重鍵域（VH)(VH-VL)。藉由使用過短而無法使同 一鍵上兩個域之間進行配對的連接子，迫使該等域與另一 鍵之互補域配對且產生兩個抗原結合位點。在（例如）Ep 404,097，W0 93/11161 ;及 Hollinger 等人，proc Jcai/· t/M，90:6444-6448 (1993)中更充分地描述雙功 能抗體。 經为離」抗體為已鑑別且與其天然環境之組分分離及/ 或自其天然環境之組分中回收之抗體。其天然環境之污染 組分為將干擾抗體之診斷或治療用途的物質，且可包括 酶、激素及其他蛋白或非蛋白溶質。由於抗體天然環境之 至少一種組分將不存在，故經分離抗體包括處於重組細胞 内之原位抗體。然而’通常將藉由至少一個純化步驟來製 141375.doc -22- 201006929 備經分離抗體。 「結合」目標抗原的抗體為能夠以足夠親和力結合抗原 以使抗體適用作靶向表現該抗原之細胞的治療劑或診斷劑 的抗體。若抗體為結合抗原部分之抗體，則與其他受體相 反，其通常將優先結合該抗原部分，且並不包括諸如非特 異性Fc接觸之偶然性結合或對於其他抗原較為普遍的與轉 譯後修飾物結合，且可能為並不顯著地與其他蛋白質交又 反應之抗體。偵測結合目標抗原之抗體的方法在此項技術 中眾所周知’且可包括（但不限於）諸如FACS、細胞ELISA 及西方墨點法（Western blot)之檢定。 如本文中所使用’措辭「細胞」、「細胞株」及「細胞培 養物」可互換使用，且所有該等名稱均包括子代。亦應瞭 解，所有子代可能由於有意或偶然性突變而在DNA含量方 面並不精確相同。包括在最初轉型細胞中所篩檢之具有相 同功能或生物活性之突變子代。其將由意指不同名稱之上 下文顯而易見。 「治療」係指治療性治療及預防性措施，其中目標為預 防或減緩（減輕）標乾病理病狀或病症。需要治療者包括已 患有該病症者以及傾向於患該病症者或有待預防該病症 者因此，本文中之待治療哺乳動物可能已㈣為患㈣ 病症或可能易患該病症。 「癌症」及「癌症性」係指或描述哺乳動物通常以 =調控之細胞生長/死亡為特徵的生理病況。癌症實例 (不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤肉瘤及白血病 141375.doc -23· 201006929 或淋巴惡性病。該等癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌 (例如上皮鱗狀細胞癌）；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細 胞肺癌；肺腺癌及鱗狀肺癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃癌， 包括胃腸癌；胰腺癌；神經膠母細胞瘤；子宮頸癌；卵巢 癌；肝癌；膀胱癌；肝腫瘤；乳癌；結腸癌；直腸癌；結 腸直腸癌；子宮内膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎癌；前列 腺癌；陰門癌；甲狀腺癌；肝癌瘤；肛門癌瘤；陰莖癌 瘤；以及頭頸部癌。 「化學治療劑j為適用於治療癌症的化合物。化學治療 ❿ 劑之實例包括烧化劑，諸如嗟替派（thiotepa)及環鱗酿胺 (CYTOXAN™);烷基磺酸鹽，諸如白消安（busulfan)、英 丙舒凡（improsulfan)及旅泊舒凡（piposulfan);氣丙咬，諸 如苯多巴（benzodopa)、卡波酿（carboquone)、甲尿多巴 (meturedopa)及尿多巴（uredopa);伸乙基亞胺及甲基三聚氰 胺，包括六甲蜜胺、三伸乙基三聚氣胺（triethylenemelamine)、 三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基三聚氰 胺（trimethylolomelamine);氣芬，諸如苯丁酸氣芥、萘氮 _ 齐、環填酿胺、雌莫司汀（estramustine)、異環鱗酿胺 (ifosfamide)、氣芥（mechlorethamine)、鹽酸氧化氮芬、美 法余（melphalan)、新恩比興（novembichin)、擔甾醇對苯乙 酸氮芥（phenesterine)、潑尼莫司汀（prednimustine)、_ 氣乙 環墙酿胺（trofosfamide)、烏拉莫司汀（uracil mustard);亞 确基脲，諸如卡氣芥（carmustine)、氣腺黴素（chlorozotocin)、 福莫司汀（fotemustine)、洛莫司汀（lomustine)、尼莫司汀 141375.doc -24- 201006929

(nimustine)、雷莫司汀（ranimustine);抗生素，諸如阿克 拉黴素（aclacinomysin)、放線菌素（actinomycin)、安麯黴素 (authramycin)、偶氮絲胺酸（azaserine)、博萊黴素（bleomycin)、 放線菌素 C(cactinomycin)、卡利徽素（calicheamicin)、卡 洛賓素（carabicin)、卡拉黴素（carnomycin)、嗜癌菌素 (carzinophilin)、色黴素（chromomycin)、放線菌素 D (dactinomycin)、道諾徽素（daunorubicin)、地托比星 (detorubicin)、6-重氮-5-氧-左旋-正白胺酸、小紅莓、表柔 比星（epirubicin)、依索比星（esorubicin)、依達黴素（idarubicin)、 麻西羅徽素（marcellomycin)、絲裂黴素（mitomycin)、黴紛酸 (mycophenolic acid)、諾加黴素（nogalamycin)、橄挽黴素 (olivomycin)、培洛黴素（peplomycin)、紫菜黴素（potfiromycin)、 嗓呤黴素（puromycin)、三鐵阿黴素（quelamycin)、羅多比 星（rodorubicin)、鏈黑菌素（streptonigrin)、鍵腺佐菌素 (streptozocin)、殺結核菌素（tubercidin)、烏苯美司 (ubenimex)、淨司他丁（zinostatin)、佐柔比星（zorubicin); 抗代謝物，諸如甲胺嗓吟（methotrexate)及5-氟尿嘴咬（5-FU);葉酸類似物，諸如迪諾特寧（denopterin)、甲胺嗓呤、 蝶羅吟（pteropterin)、三甲曲沙（trimetrexate);嗓呤類似 物，諸如敗達拉賓（fludarabine)、6-疏基嗓吟、琐味硫鳥 嗓吟（thiamiprine)、硫代鳥嗓呤（thioguanine);鳴咬類似 物，諸如環胞苦（ancitabine)、阿紮胞苦（azacitidine)、6-氮 雜尿苷、卡莫氟（carmofUr)、阿糖胞苷（cytarabine)、二去氧尿 苦（dideoxyuridine)、去氧氟尿苦（doxifluridine)、依諾他濱 141375.doc -25- 201006929 (enocitabine)、氟尿普（floxuridine)、5-FU ;雄激素，諸如二

甲睪嗣（calusterone)、屈他雄網丙酸醋（dromostanolone propionate)、環硫雄醇（epitiostanol)、美雄烧（mepitiostane)、 睪内醋（testolactone);抗腎上腺物，諸如胺魯米特 (aminoglutethimide)、米托坦（mitotane)、曲洛司坦（trilostane); 葉酸補充劑，諸如亞葉酸（frolinic acid);乙醯葡醛内酯 (aceglatone);搭破醯胺普（aldophosphamide glycoside)； 胺基乙醢丙酸；安π丫咬（amsacrine);百思曲赛（bestrabucil); 比生群（bisantrene); 依達曲沙（edatraxate);迪佛胺 (defofamine);秋水仙胺（demecolcine);地0丫酿（diaziquone); 艾佛米星（elformithine);依利醋錢（elliptinium acetate);依 託格魯（etoglucid);确酸鎵；經基腺；香蒜多糖（lentinan); 氣尼達明（lonidamine);米托脈腙（mitoguazone);米托蒽 酿（mitoxantrone);莫旅達醇（mopidamol);二胺頌 n丫咬 (nitracrine);喷司他 ί丁（pentostatin);蛋胺氮芥（phenamet);

0比柔比星（pirarubicin);足葉草酸（podophyllinic acid) ; 2-乙醣肼；曱基节耕（procarbazine) ; PSK® ;雷佐生（razoxane); 西佐鳴（sizofiran);螺鍺（spirogermanium);細交鏈抱菌明酸 (tenuazonic acid);三亞胺酿（triaziquone); 2,2'，2"-三氣三 乙胺；尿烧（urethan);長春地辛（vindesine);達卡巴0秦 (dacarbazine);甘露醇氮芥（mannomustine);二漠甘露醇 (mitobronitol);旅泊漠烧（pipobroman);加赛托星（gacytosine); 阿糖胞苦（arabinoside ;「Ara-C」）；環填酿胺；嗟替派； 紫杉烧（taxane)，例如太平洋紫杉醇（paclitaxel)(TAXOL® ; 141375.doc -26- 201006929

Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton，N.J.)及歐洲紫 杉醇（docetaxel)(TAXOTERE® ; Aventis，Rhone-Poulenc Rorer，Antony, France); 苯丁酸氮芥；吉西他濱 (gemcitabine) ; 6-硫代烏嘌呤；酼基嘌吟；曱胺嗓吟；鉑 類似物，諸如順翻（cisplatin)及卡銘（carboplatin);長春驗 (vinblastine);鉑；依託泊苷（etoposide ; VP-16);異環磷 醯胺；絲裂黴素C ;米托蒽酿；長春新驗（vincristine);長 春瑞濱（vinorelbine);諾維本（navelbine);小藍每（novantrone); 替尼泊苷（teniposide);道諾黴素（daunomycin);胺基蝶吟； 截瘤達（xeloda);伊班膦酸鹽（ibandronate) ; CPT-11 ;拓撲 異構酶抑制劑RFS 2000 ;二氟甲基鳥胺酸（DMFO);視黃 酸（retinoic acid);埃斯培拉黴素（esperamicin);卡培他濱 (capecitabine);及上述任何物質的醫藥學上可接受之鹽、 酸或衍生物。此定義中亦包括起作用以調節或抑制腫瘤上 之激素作用的抗激素劑，諸如：抗***劑，包括（例如） 他莫昔芬（tamoxifen)、雷洛昔芬（raloxifene)、芳香酶抑制 性4(5)-味〇坐、4-經基他莫昔芬、曲沃昔芬（trioxifene)、雷 洛昔芬（keoxifene)、LY117018、奥那司酮（onapristone)及 托瑞米芬（toremifene)(Fareston);及抗雄激素劑，諸如氟 他胺（flutamide)、尼魯米特（nilutamide)、比卡魯胺 (bicalutamide)、亮丙瑞林（leuprolide)及戈舍瑞林 (goserelin);及以上任何物質的醫藥學上可接受之鹽、酸 或衍生物。 出於治療目的之「哺乳動物」係指分類為哺乳動物的任 141375.doc •27- 201006929 何動物，包括人類、小鼠、SCID鼠或裸鼠或小鼠品系、家 畜及農畜’及動物園動物、運動動物或寵物，諸如綿羊、 狗、馬、貓、牛等。較佳地，本文中之哺乳動物為人類。 「寡核苷酸」為藉由已知方法（諸如鱗酸三酯、亞罐酸 酯或胺基磷酸酯化學反應）使用固相技術（諸如1988年5月4 日公開之EP 266,032中所描述）或經由去氧核苷膦酸氫酯中 間體（如 Froehler 等人，勤c/· 他心5，m:5399 54〇7, 1986所描述）化學合成之長度較短的單股或雙股聚去氧核 苷酸。接著將其在聚丙烯醯胺凝膠上純化。 根據本發明，非人類（例如，鼠類）免疫球蛋白之「人類 化」及/或「嵌合」形式係指含有特定嵌合免疫球蛋白、 免疫球蛋白鏈或其片段（諸如Fv、Fab、Fab，、F(ab')2或抗 趙之其他抗原結合子序列）的抗體，其使得人抗鼠抗體 (HAMA)、人抗嵌合抗體（HACA)或人抗人抗體（HAHA)反 應減少（與原始抗體相比），且含有來源於該非人類免疫球 蛋白之必需部分（例如，CDR、抗原結合區、可變域等）， 該等必需部分為再產生所要作用而同時保持與該非人類免 疫球蛋白相當之結合特性所必需。在大多數情況下，人類 化抗體為來自接受抗體之互補決定區（CDr)的殘基經來自 非人類物種（諸如小鼠、大鼠或兔）（供體抗體）之Cdr之具 有所要特異性、親和力及能力的殘基置換的人類免疫球蛋 白（接受抗趙）。在某些情況下，人類免疫球蛋白之Fv構架 區（FR)殘基經相應非人類fr殘基置換。此外，人類化抗體 可包含在接受體抗體及所輸入之Cdr或FR序列中均未發現 141375.doc 201006929 的殘基。進行此等修飾以進一步改進並優化抗體之效能。 一般而言，人類化抗體將包含實質上所有至少一個且通常 兩個可變域，其中所有或實質上所有CDR區對應於非人類 免疫球蛋白之CDR區，且所有或實質上所有FR殘基為人類 免疫球蛋白共同序列之FR殘基。人類化抗體視情況亦將包 含免疫球蛋白恆定區（Fc)之至少一部分，通常包含人類免 疫球蛋白恆定區之至少一部分。 「去免疫」抗體為對指定物種無免疫原性或具有較少免 疫原性的免疫球蛋白。去免疫可藉由抗體之結構變化來達 成。可採用熟習此項技術者已知之任何去免疫技術。一種 將抗體去免疫之適合技術係描述於例如2000年6月15日公 •開之 WO 00/34317 中。 誘導「細胞凋亡」之抗體為藉由例如但不限於以下之任 何方法誘導漸進式細胞死亡的抗艎：結合膜聯蛋白V (annexin V)、卡斯蛋白酶活性、DNA段裂、細胞收縮、内 質網擴張、細胞***及/或形成膜囊（稱為細胞凋亡體）。 如本文中所使用，「抗體誘導之細胞毒性」應理解為意 謂來源於由以寄存編號040608-01寄存在IDAC之融合瘤產 生之融合瘤上清液或抗體的細胞毒性作用，該作用未必與 結合程度有關。 貫穿本發明說明書，融合瘤細胞株以及由其產生之經分 離單株抗體替代性地由其内部名稱AR59A157.1或寄存名 稱 IDAC 040608-01指稱。 如本文中所使用’「抗艘配艘」包括如下部分：其對標 141375.doc •29- 201006929 靶抗原之至少一個抗原決定基展現結合特異性，且其可為 完整抗體分子、抗體片段及具有至少一個抗原結合區或其 部分（亦即，抗體分子之可變部分）的任何分子（例如Fv分 子、Fab分子、FaW分子、F(ab’)2分子），雙特異性抗體， 融合蛋白，或特異性識別並結合與由名為IDAC 040608-01 之融合瘤細胞株產生之經分離單株抗體結合之抗原（IDAC 040608-01抗原）之至少一個抗原決定基的任何遺傳工程分 子。 如本文中所使用，「癌症性疾病調節抗體」（CDMAB)係 _ 指以有益於患者之方式，例如藉由減小腫瘤負荷或延長帶 有腫瘤之個體的存活期來調節癌症性疾病過程的單株抗體 及其抗體配體。 如本文中所使用，「抗原結合區」意謂識別標靶抗原之 分子的部分。 如本文中所使用，「競爭性抑制」意謂使用習知交互抗 體競爭性檢定能夠識別並結合由名為IDAC 040608-01的融 合瘤細胞株所產生之單株抗體（IDAC 040608-01抗體）所針 ® 對之決定子位點。（Belanger L·，Sylvestre C.及 Dufour D. (1973)，Enzyme linked immunoassay for alpha fetoprotein by competitive and sandwich procedures. Clinica Chimica Acta 48，15)。 如本文中所使用，「標靶抗原」為IDAC 〇4〇6〇8-01抗原 或其部分。 如本文中所使用，「免疫結合物」意謂以化學方式或生 141375.doc -30- 201006929 物方式與細胞毒素、放射劑、酶、毒素、抗腫瘤藥物或治 療劑連接之任何分子或CDMAB，諸如抗體。抗艘或 CDMAB可在該分子之任何位置處與細胞毒素、放射劑、 抗腫瘤藥物或治療劑連接，只要其能夠結合其標靶即可。 免疫結合物之實例包括抗體毒素化學結合物及抗體毒素融 合蛋白。 如本文中所使用’「融合蛋白」意謂抗原結合區與生物 學活性分子（例如，毒素、酶或蛋白質藥物）相連接的任何 欲合蛋白。 為了更充分地理解本文中所述之發明，陳述以下實例。 本發明提供特異性識別並結合IDAC 040608-01抗原之 CDMAB(亦即，IDAC 040608-01 CDMAB)。 由以寄存編號040608-01寄存在IDAC之融合瘤產生的經 分離單株抗體之CDMAB可呈任何形式，只要其具有競爭 性抑制由融合瘤IDAC 040608-01產生之經分離單株抗體與 其標靶抗原之免疫特異性結合的抗原結合區即可。因而， 具有與IDAC 040608-01抗體相同之結合特異性的任何重組 蛋白質（例如，融合蛋白，其中抗艎係與諸如淋巴介質或 腫瘤抑制性生長因子之第二蛋白質組合）均處於本發明範 _内。 在本發明之一實施例中，CDMAB為IDAC 040608-01抗 體。 在其他實施中，CDMAB為抗原結合片段，其可能為Fv 分子（諸如，單鏈Fv分子）、Fab分子、Fab'分子、F(ab')2分 141375.doc •31· 201006929 子、融合蛋白、雙特異性抗體、異種抗體或具有IDAC 040608-01抗體之抗原結合區的任何重組分子。本發明之 CDMAB係針對IDAC 040608-01單株抗體所針對之抗原決 定基。 本發明之CDMAB可進行修飾，亦即，藉由分子内之胺 基酸修飾，以便產生衍生分子。亦有可能進行化學修飾。 衍生分子將保留多肽之功能性質，即發生該等取代之分 子仍將允許多肽與IDAC 040608-01抗原或其部分結合。 此等胺基酸取代包括但未必限於此項技術中稱為「保守 性」之胺基酸取代。 舉例而言，可通常在不改變蛋白質之構形或功能的情況 下在蛋白質中進行稱為「保守性胺基酸取代」之某些胺基 酸取代乃公認原則。 該等變化包括：以異白胺酸（I)、纈胺酸（V)及白胺酸（L) 中之任一者取代此等疏水性胺基酸中之任何其他者；以天 冬胺酸（D)取代麩胺酸（E)及以麩胺酸（E)取代天冬胺酸 (D);以麩胺醯胺（Q)取代天冬醢胺（N)及以天冬醯胺（N)取 代麩胺醯胺（Q);及以絲胺酸（S)取代蘇胺酸（T)及以蘇胺酸 (T)取代絲胺酸（S)。視特定胺基酸之環境及其在蛋白質三 維結構中之作用，其他取代亦可視為保守性。舉例而言， 甘胺酸（G)通常可與丙胺酸（A)互換，同樣丙胺酸可與纈胺 酸（V)互換。相對具疏水性之甲硫胺酸（M)通常可與白胺酸 及異白胺酸互換，且有時與纈胺酸互換。離胺酸（K)與精 胺酸（R)之位置通常可互換，其中，胺基酸殘基之顯著特 141375.doc •32· 201006929 徵為其電荷，而此兩種胺基睃殘基之ρΚ·差異並不顯著。 尚有其他變化在特定環境下可視為「保守性」》 實例1 產生融合瘤-融合瘤細胞株AR59A1 57.1 根據布達佩斯條約（Budapest Treaty)，在2008年6月4曰 將融合瘤細胞株AR59A157.1以寄存編號040608-01寄存在 加拿大衛生部微生物局（Bureau of Microbiology, Health Can ad a)加拿大國際寄存機構（International Depository Authority of Canada; IDAC)(1015 Arlington Street, Winnipeg, Manitoba, Canada，R3E 3R2)。根據37 CFR 1.808，寄存者保證專利一 旦獲准，即不可撤銷地除去對所寄存物質之公眾可用性施 加之所有限制。若寄存處無法分配活樣本，則應更換寄存 物。 為了產生可產生抗癌抗體AR59A157.1之融合瘤，在PBS 中製備冷凍之人類結腸轉移至肝之腫瘤組織（Genomics Collaborative，Cambridge，ΜΑ)的單細胞懸浮液。藉由和緩 混合使IMMUNEASY™ (Qiagen，Venlo, Netherlands)佐劑準 備使用。藉由皮下注射於50微升抗原佐劑中之2,000,000細 胞對5至7週齡之BALB/c小鼠進行免疫。以於50微升抗原 佐劑中之2,000,000細胞進行首次免疫之後2週及5週，使用 新近製備之抗原佐劑經腹膜内對經免疫之小鼠加強免疫。 最後一次免疫後3天，使用脾進行融合。藉由使經分離之 脾細胞與NSO-1骨髓瘤搭配物融合來製備融合瘤。測試來 自融合瘤次純系的融合物上清液。 141375.doc -33- 201006929 為了確定融合瘤細胞分泌之抗體為IgG同型抑或IgM同 型，採用ELISA檢定。在4°C下，向ELISA培養盤中添加 100微升/孔之於塗布緩衝液（〇·1 Μ碳酸鹽/碳酸氫鹽緩衝 液，pH 9.2-9.6)中之濃度為2.4微克/毫升的山羊抗小鼠 IgG+IgM(H+L)隔夜。培養盤在洗滌緩衝液（PBS+0.05% Tween)中洗滌3次。在室溫下向培養盤中添加微升/孔 阻斷緩衝液（5%乳於洗滌緩衝液中）歷時1小時，且接著在 洗滌緩衝液中洗滌三次’添加100微升/孔融合瘤上清液’ 且培養盤在室溫下培育1小時。以洗滌緩衝液洗滌培養盤3 ® 次，且添加100微升/孔之山羊抗小鼠1gG或1gM辣根過氧化 酶結合物之1/1 〇〇,〇〇〇稀釋液（於含有5%乳之PBS中稀釋）。 在室溫下培育培養盤1小時之後’以洗務緩衝液洗務培養 盤3次。在室溫下培育1〇〇微升/孔之TMB溶液1-3分鐘。藉 由添加50微升/孔2 M H2S〇4終止顯色反應，且以Perkin-Elmer HTS7000培養盤讀取器在450 nm下對培養盤進行讀 數。如圖1中所示’ AR59A157.1融合瘤主要分泌IgG同型 φ 之抗體。 為了破定融合瘤細胞所分泌抗想之子類’使用小鼠單株 抗體同型測定套組（HyCuit Biotechn〇i〇gy，Fr〇ntstraat， Netherlands)進行同型測定實驗。向含有大鼠抗小鼠子類 特異性抗體之測試片添加5〇〇微升緩衝溶液。向測試管添 加500微升融合瘤上清液’且藉由和緩攪動而浸沒。藉由 與膠體粒子偶合之第二大鼠單株抗體直接偵測所捕捉之小 鼠免疫球蛋白β此兩種蛋白質之組合產生用於分析同型之 141375.doc -34- 201006929 可視信號。抗癌抗體AR59A157.1為IgG2a κ同型。一輪限 制稀釋後，在細胞ELISA檢定中測試融合瘤上清液之與標 靶細胞結合之抗體。測試一個人類乳癌細胞株、一個人類 卵巢癌細胞株、一個人類結腸癌細胞株及一個人類非癌皮 膚細胞株，分別為：MDA-MB-231、OVCAR-3、Lovo及 CCD-27sk。所有細胞株均獲自美國菌種保存中心 (American Type Tissue Collection)(ATCC，Manassas，VA)。 使用前固定平瓜培養之細胞。在室溫下以含有MgCl2及 CaCl2之PBS洗滌培養盤3次。在室溫下，將100微升於PBS 中稀釋之2%多聚甲醛添加至各孔，歷時10分鐘，且接著 排出。在室溫下再以含有MgCl2及CaCl2之PBS洗滌培養盤 3次。在室溫下以100微升/孔之於洗滌緩衝液（PBS+0.05% Tween)中之5%乳進行阻斷，歷時1小時》培養盤以洗滌緩 衝液洗滌3次，且在室溫下添加75微升/孔融合瘤清液，歷 時1小時。培養盤以洗滌緩衝液洗滌3次，且添加100微升/ 孔之與辣根過氧化酶結合的山羊抗小鼠IgG或IgM抗體之 1/25,000稀釋液（於含有5%乳之PBS中稀釋）。在室溫下培 育1小時之後，培養盤以洗滌緩衝液洗滌3次，且在室溫下 培育100微升/孔之TMB受質1-3分鐘。以50微升/孔2 Μ H2S04終止反應，且以Perkin-ElmerHTS7000培養盤讀取器 在450 nm下對培養盤進行讀數。表1中列出之結果表示成 與先前已顯示不與所測試之細胞株結合的自有IgG同型對 照相比超出背景之倍數。來自融合瘤AR59A157.1之抗體 顯示與MDA-MB-23 1乳癌細胞株及Lovo結腸癌細胞株之可 141375.doc •35- 201006929 偵測結合。 結合抗體結合測試，在如下細胞株中測試融合瘤上清液 之細胞毒性作用（抗體誘導之細胞毒性）：MDA-MB-231、 OVCAR-3、SW1116、lovo 及 CCD-27sk。鈣黃綠素AM 係獲 自Molecular Probes(Eugene，OR)，且如下文所述進行檢 定。檢定前以預定之適當密度對細胞進行平加·培養。2天 後，將75微升來自融合瘤微量滴定盤之上清液轉移至細胞 培養盤，且在5% C02培育箱中培育5天。將充當陽性對照 之孔吸空，且添加100微升溶解於培養基中之疊氮化鈉 參 (NaN3, 0.01%; Sigma，Oakville，ON)、環己酿亞胺（CHX， 0.5微莫耳濃度；Sigma, Oakville, ON)或抗EGFR抗體 (c225，IgGl，κ，5微克/毫升；Cedarlane，Hornby，ON)。 處理5天後，接著藉由倒置及吸乾將培養盤排空。將含有 MgCl2及CaCl2之室溫DPBS(杜氏磷酸鹽緩衝生理食鹽水 (Dulbecco's phosphate buffered saline))由多通道播廢瓶分 配至各孔中，敲擊3次，藉由倒置將其排空且接著吸乾。 將50微升於含有MgCh及CaCh之DPBS中稀釋的螢光约黃 ® 綠素染料添加至各孔，且在37它下於5% C〇2培育箱中培育 30分鐘。在Perkin-Elmer HTS7000螢光培養盤讀取器中對 培養盤進行讀數，且在Microsoft Excel中分析數據。結果 在圖1中列出。AR59A157.1融合瘤上清液對SW1U6細胞產 生30%特異性細胞毒性。此結果為以陽性對照環己醯亞胺 及c225分別對於SW1116獲得之細胞毒性的1.5倍及15倍。 對於非癌皮膚細胞株CCD_27sk無可觀測之細胞毒性。已知 141375.doc -36- 201006929 非特異性細胞毒性劑環己醯亞胺及NaN3—般產生所預期之 細胞毒性。抗EGFR抗體c225對SW1116產生所預期之細胞 毒性。 圖1之結果顯示，AR59A157.1對不同細胞株之細胞毒性 作用並不必然地與結合水準相關。雖然AR59A157.1與 Lovo結腸癌細胞株及MDA-MB-23 1乳癌細胞株結合，但其 在Lovo結腸癌細胞株及MDA-MB-23 1乳癌細胞株中並不產 生細胞毒性。因此，該抗體展現功能特異性，該功能特異 性並不必然地與結合程度有關。 實例2 活體外結合 藉由在 CL-1000燒瓶（BD Biosciences, Oakville, ON)中培 養融合瘤來產生AR59A157.1單株抗體，每週收集並重接 種兩次。以快流速蛋白質G壤脂糖4(GE Healthcare，Baie d'Urf0，QC)進行標準抗體純化程序。利用人類化單株抗 體、去免疫單株抗體、嵌合單株抗體或鼠類單株抗體均處 於本發明之範疇内。 藉由流式細胞儀（FACS)評估AR59A157.1與乳癌細胞株 (MDA-MB-23 1)、結腸癌細胞株（DLD-1、Lovo、SW620、 81^1116及8贾620)、***癌細胞株（？〇3)、胰腺癌細胞 株（AsPC-1及BxPC-3)、肺癌細胞株（A549)及卵巢癌細胞株 (OVCAR-3)以及非癌皮膚細胞株（CCD-27sk)及非癌肺細胞 株（Hs888.Lu)之結合。所有細胞株均獲自美國菌種保存中 心(ATCC，Manassas，VA) 〇 141375.doc •37- 201006929 藉由最初以DPBS(無Ca++及Mg++)洗滌細胞單層使細胞準 備進行FACS。接著，在37°C下使用細胞解離緩衝液 (Invitrogen，Burlington，ON)將細胞自其細胞培養盤移除。 離心及收集後，將細胞再懸浮於4°C之含有MgCl2、CaCl2 及2%胎牛血清之DPBS(染色培養基）中並計數，等分成適 當細胞密度，離心以使細胞成塊，且在測試抗體 (AR59A157.1)或對照抗體（同型對照，抗EGFR)存在下再懸 浮於4°C之染色培養基中。在冰上，以20微克/毫升評估同 型對照及測試抗體，而以5微克/毫升評估抗EGFR，歷時 _ 30分鐘。在添加與Alexa Fluor 546結合之二次抗體之前， 以染色培養基洗滌細胞1次。接著，在4°C下添加於染色培 養基中之與Alexa Fluor 546結合之抗體，歷時30分鐘。接 著，最後一次洗滌細胞，且再懸浮於固定培養基（含有 1.5%多聚曱醛之染色培養基）中。藉由在FACSarray™上使 用 FACSarray™系統軟體（BD Biosciences, Oakville, ON)運 作樣本來評估細胞之流式細胞儀採集。藉由調節FSC及 SSC偵測儀上之電壓及振幅增益來設定細胞之前向散射 (FSC)及側向散射（SSC)。藉由運作未染色細胞來調節螢光 劑（Alexa-546)路徑偵測儀以使細胞具有中位螢光強度為約 1-5單位之均勻峰。對於各樣本而言，獲得約10,000個閘控 事件（經染色固定之細胞）用於分析，且結果呈現於圖2中。 圖2呈現超出同型對照之平均螢光強度增加倍數。圖3編 制AR59A157.1抗體之代表性直方圖。AR59A157.1顯示與 除結腸癌細胞株SW1116及非癌肺細胞株Hs888.Lu以外的 141375.doc -38 - 201006929 所測試細胞株結合。存在與下列細胞株之結合：乳癌細胞 株 MDA-MB-231(6.0倍）；結腸癌細胞株 DLD-1(14.9倍）、 Lovo(12.4 倍）、SW620(5.0 倍）；肺癌細胞株 A549(10.2 倍）；卵巢癌細胞株OVCAR-3(8.5倍）；胰腺癌細胞株AsPC-1(7·0倍）及BxPC-3(18.1倍）；***癌細胞株PC-3(3.9 倍）；及非癌皮虜細胞株CCD-27sk(2.4倍）。此等數據顯 示，AR59A157.1在不同的抗原表現水準下與若干不同細 胞株結合。 _ 實例3 MDA-MB-231細胞之活體内腫瘤實驗 實例1顯示，AR59A157.1具有針對人類癌細胞株之抗癌 性。為了證實在活體内對人類癌細胞株之功效，在MDA-MB-231乳癌異種移植模型中測試AR59A157.1。參考圖4及 圖5，向6至8週齡雌性SCID小鼠植入皮下注射於頸背中之 於100微升卩85溶液中之5,000,000人類乳癌細胞（^!0八-1^^-231)。將小鼠隨機分成兩個治療組，每組10隻。植入後當 β 天，將20 mg/kg之AR59A157.1測試抗體或緩衝對照物在以 含有 2.7 mM KC卜 1 mM KH2P〇4、137 mM NaCl及 20 mM Na2HP04之稀釋劑自儲備濃縮液稀釋之後，以300微升之 體積經腹膜内投與各群。接著，在研究期間每週投與抗體 及對照樣本一次。約每7天以測徑規量測腫瘤生長。在抗 體8次給藥之後完成研究。在研究期間每週記錄動物之體 重一次。在研究結束時，根據CCAC準則對所有動物施以 安樂死。 141375.doc •39· 201006929 在人類乳癌之MDA-MB-231活體内預防模型中， AR59A157.1減少腫瘤生長。如在第57天（即抗體最後一次 給藥後第7天）所測定，與緩衝液處理組相比，以 AR59A157.1處理使MDA-MB-231腫瘤之生長減少了 58.3% (ρ=0·0009，t-測試）（圖 4)。 在整個研究過程中，並無毒性之臨床徵象。以每週—次 之時間間隔量測的體重代表健康及發育不良（圖5) ^在治療 期結束時’群組間之平均體重無顯著差異。 總之’ AR59A157.1在此人類胰腺癌異種移植模型中耐 _ 受良好且顯著減小腫瘤負荷。 實例4 競爭性結合劑之分離 指定一種抗體’一般熟習此項技術者可產生競爭性抑制 CDMAB，例如識別相同抗原決定基之競爭抗體（Belanger L 等人 C/i.m.ca C/iz.miciJ! dc ία 48:15-18 (1973))。一種方法需 要以表現抗體所識別之抗原的免疫原進行免疫。樣本可包 括（但不限於）組織、經分離之蛋白質或細胞株。所得融合 〇 瘤可使用鑑別抑制測試抗體結合之抗體的競爭檢定篩檢， 該檢定諸如ELISA、FACS或西方墨點法。另一種方法可利 用噬菌體呈現抗體庫及淘選識別該抗原之至少一個抗原決 定基的抗體（Rubinstein JL 等人 314:294-300 (2003)”在每種情況下，根據抗體置換原始經標記抗體與 其標靶抗原之至少一個抗原決定基之結合的能力來選擇抗 體。該等抗體將因此具備識別與原始抗體相同之抗原之至 141375.doc •40· 201006929 少一個抗原決定基的特徵。 實例5 AR59A157.1單株抗體可變區之選殖 可確定AR59A157.1融合瘤細胞株產生之單株抗體之重 鏈（VH)及輕鏈（VL)的可變區序列。可使用涉及以異硫氰酸 胍進行細胞溶解之標準方法自主題融合瘤提取編碼免疫球 蛋白之重鏈及輕鍵的RNA(Chirgwin等人Biochem, 18:5294-5299 (1979))。可使用mRNA製備cDNA以供隨後藉由此項 • 技術已知之PCR法分離VH及VL基因（Sambrook等人編， Molecular Cloning，第 14章，Cold Spring Harbor laboratories Press, N.Y. (1989))。可獨立地藉由自動艾德曼定序（Edman sequencing)確定重鏈及輕鏈之N-末端胺基酸序列。CDR及 側接FR之其他區段亦可藉由VH及VL片段之胺基酸定序來 確定。接著，可設計合成引物以供分離AR59A 157.1單株 抗體之VH及VL基因，且可將經分離之基因接合至適當載體 中以進行定序。為了產生嵌合IgG及人類化IgG，可將可變 ^ 輕域及可變重域次選殖至適當載體中以進行表現。 (i)單株抗體 藉由使用習知程序（例如，藉由使用能夠與編碼單株抗 體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的募核苷酸探針）易於 分離編碼單株抗體（如實例1中所述）之DNA且對其進行定 序。融合瘤細胞充當該DNA之較佳來源。一經分離，即可 將DNA置於表現载體中，接著將其轉染至不另外產生免疫 球蛋白之宿主細胞（諸如大腸桿菌（E. coli)細胞、猿COS細 141375.doc -41· 201006929 胞、中國倉鼠卵巢（CHO)細胞或骨髓瘤細胞）中以在重組宿 主細胞中合成單株抗體。DNA亦可例如藉由以人類重鏈及 輕鏈恆定域之編碼序列取代同源鼠類序列來進行修飾。亦 可使用合成蛋白質化學中已知之方法（包括涉及交聯劑之 方法）活體外製備嵌合或雜交抗體。舉例而言，可使用雙 硫鍵交換反應或藉由形成硫醚鍵來構築免疫毒素。用於此 目的之適合試劑之實例包括亞胺基硫醇酯（iminothiolate) 及甲基-4-酼基丁醯亞胺酯。 (Π)人類化抗體 _ 人類化抗體具有一或多個自非人類來源引入其中之胺基 酸殘基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入」殘基， 其通常獲自「輸入」可變域。可按照Winter及其合作者之 方法藉由以齧齒動物CDR或CDR序列取代人類抗體之相應 序列來進行人類化（Jones等人，Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann等人，Nature, 332:323-327 (1988) ; Verhoeyen等 人 ’ Science, 239:1534-1536 (1988);評述於Clark, Immunol.

Today 21:397-402 (2000)中）。 ❹ 可藉由分析親本序列及各種概念性人類化產物之方法使 用親本序列及人類化序列之三維模型來製備人類化抗體。 三維免疫球蛋白模型普遍可得且為熟習此項技術者熟知。 可獲得說明及呈現所選候選免疫球蛋白序列之可能三維構 形結構的電腦程式。對此等呈現物之檢視允許分析殘基在 候選免疫球蛋白序列功能中之可能作用，亦即，分析影響 候選免疫球蛋白與其抗原結合之能力的殘基。以此方式， 141375.doc -42- 201006929 FR殘基可自共同序列及輸入序列選擇且組合以便獲得所要 抗體特徵，諸如對靶標抗原之親和力增加。一般而言， CDR殘基直接且最實質性地牵涉於對抗原結合之影響。 (iii)抗體片段 已開發各種技術來產生抗體片段。此等片段可藉由重組 宿主細胞來產生（評述於下列文獻中：Huds〇n，Curr 〇pin

Immunol· 11:548-557 (1999) ; Little等人，immunoI. Today 21·364·370 (2〇0〇))。舉例而言，pab’_sH片段可直接自大 腸桿菌中回收且進行化學偶合以形成F(ab，）2片段（Carter等 人，Biotechnology 1〇:163_167 (1992))。在另一實施例 中，使用白胺酸拉鏈GCN4促進F(ab，)2分子之組裝來形成 F(ab’）2。根據另一方法，可直接自重組宿主細胞培養物分 離 Fv、Fab 或 F(ab’)2 片段。 實例6 包含本發明抗體之組合物 本發明之抗體可用作預防/治療癌症之組合物。包含本 發明抗體之用於預防/治療癌症的組合物具有低毒性且 當其呈液體製劑形式或呈適合製劑之醫藥組合物形式時可 經口或非經腸（例如，血管内、腹膜内、皮下等）投與人類 或哺乳動物（例如，大鼠、兔、綿羊、豬、牛、貓、犬、 猿等）。本發明之抗體可單獨投藥，或可以適當組合物形 式投藥。用於投藥之組合物可含有藥理學上可接受之載劑 與本發明之抗體或其鹽、稀釋劑或賦形劑。該組合物係以 適用於經口或非經腸投藥之藥物製劑形式提供。 141375.doc •43- 201006929 供非經腸投藥之組合物之實例為可注射製劑栓劑等。 可注射製劑可包括諸如靜脈内注射劑、皮下注射劑、皮内 注射劑及肌肉内注射劑、點滴輸液劑、關節内注射劑等劑 =此等可注射製劑可藉由公眾已知之方法製備。舉例而 言，可藉由在注射劑所習用之無菌水性介質或油性介質中 冷解、懸浮或乳化本發明之抗體或其鹽來製備可注射製 劑。作為注射劑之水性介質，有例如：生理食鹽水；含有 葡萄糖及其他助劑之等張溶液等，其可與適#增溶劑，諸 如醇（例如，乙醇）、多元醇（例如，丙二醇、聚乙二醇” 非離子界面活性劑(例如，聚山梨醇醋8〇、hc〇 5〇(氫化乾 麻油之聚氧化乙烯(50莫耳)加合物))等組合使用。作為油 座質才木用例如之麻油、大豆油等其可與諸如苯甲酸 本甲醋、#甲醇等之增溶劑組合使用。Ιϋ而製得之注射劑 通常填充至適當安瓶中。用於直腸投藥之栓劑可藉由播合 本發明之抗體或其鹽與習知栓劑基質而製得。Μ口投與之 組合物包括固體或液體製劑，特定言之，錠劑(包括糖衣 錠及包衣錠劑）、藥丸、顆粒、粉末製劑、膠囊（包括軟膠 囊)、糖漿、乳液、懸浮液等。該組合物係藉由公眾已知 之方法製造’且可含有習用於醫藥製劑領域之媒劑、稀釋 劑或賦形劑Μ劑之媒劑或賦形劑之實例為乳糖、殿粉、 蔗糖、硬脂酸鎂等》 有利地，上文描述之供經口或非經腸使用之組合物係製 成具有適於配合活性成分之劑量之單位劑量的醫藥製齊卜 該等單位劑量製劑包括’例如錠劑、藥丸、膠囊、注射劑 141375.doc -44 - 201006929 (針劑）、栓劑等。上述化合物之含量一般為每劑量單位形 式5 mg至500 mg ;尤其呈注射劑形式時較佳含有約5 mg至 約100 mg上述抗趙，而對於其他形式較佳含有1〇 至25〇 mg上述抗體。 上述包含本發明抗體之預防劑/治療劑或調節劑之劑量 可依據待投藥之個體、目標疾病、病狀、投藥途徑等而變 化。舉例而5，當出於治療/預防（例如）成人乳癌之目的使 用時’宜以約0.01至約20毫克/公斤體重、較佳約至約 10毫克/公斤體重且更佳約至約5毫克/公斤體重之劑 量，約1至5次/天、較佳約丨至3次/天經靜脈内投與本發明 之抗體。在其他非經腸及經口投藥時，可以相當於上文指 定之劑量的劑量投與藥劑。當病狀尤其嚴重時，可根據病 狀增加劑量。 本發明之抗想可以其原狀投與，或以適當組合物之形式 投與。用於投藥之組合物可含有藥理學上可接受之載劑與 上述抗艎或其鹽、稀釋劑或賦形劑。該組合物係以適用於 經口或非經腸投藥之醫藥製劑（例如血管内注射劑、皮下 注射劑等）的形式提供。上述各組合物可進一步含有其他 活性成分。此外’本發明之抗體可與其他藥物組合使用， 其他藥物例如烷化劑（例如，環磷醯胺、異環磷醯胺等）、 代謝拮抗劑（例如，甲胺喋呤、5·氟尿嘧啶等）、抗腫瘤抗 生素（例如，絲裂黴素' 阿黴素（adriamycin)等）、來源於植 物之抗腫瘤劑（例如’長春新鹼、長春地辛、紫杉醇 (Taxol)等）、順鉑、卡鉑、依託泊苷、伊立替康等。本發 141375.doc -45- 201006929 明之抗體及上述藥物可同時或以錯開之時間投與患者。 眾多證據顯示，AR59A157.U^*存在於癌細胞株上之 抗原決定基的接合來介導抗癌作用。此外可顯示，可利用 例如但不限於FACS、細胞EUSA或mc之技術使用 AR59A157.1抗體偵測表現與其特異性結合之抗原決定基 的細胞。 本說明書中提及之所有專利及公開案表明熟習本發明所 屬技術者之水準。所有專利及公開案係以引用之方式併入 本文中，其引用程度就如同已特定地及個別地將各個公開 案以引用的方式併入一般。 應理解，雖然說明了本發明之某一形式，但本發明將不 限於本文中描述及展示之特定形式或部分之布置。熟習此 項技術者應顯而易見，在不偏離本發明之範疇的情況下可 作出各種變化，且不應將本發明視為限於說明書中所展示 及描述者。熟習此項技術者應易於瞭解，本發明經良好調 適以執行目標且獲得所提及之結果及優勢，以及其中固有 之結果及優勢。本文中所描述之任何寡核苷酸、肽、多 肽、生物學上相關之化合物、方法、程序及技術目前代表 較佳實施例，意欲為例示性的且不意欲作為對範疇之限 制。熟習此項技術者將會想到其中之變化及其他用途其 涵蓋於本發明之精神内並由隨附申請專利範圍之範疇界 定。儘管已結合特定較佳實施例描述本發明，但應瞭解所 主張之本發明不應過度受限於此等特定實施例。實際上， 熟習此項技術者所顯而易見的關於所描述之本發明實施方 141375.doc 201006929 式的各種修改意欲處於本發明之範疇内。 【圖式簡單說明】 圖1比較融合瘤上清液對細胞株厘〇人-]^3-231、〇¥0八11-3、SW1116、Lovo及CCD-27sk之細胞毒性百分比及結合水 準。 圖2表示AR59A157.1與癌細胞株及正常細胞株之結合； 將數據製成表以呈現超出同型對照物之平均螢光強度增加 倍數； ® 圖3包括AR59A157.1及抗EGFR抗體針對若干癌細胞株 及非癌細胞株之代表性FACS直方圖； 圖4顯示在預防性MDA-MB-231乳癌模型中AR59A147.1 對腫瘤生長之影響；垂直虛線表示投與抗體之時期；數據 點表示平均值+/- SEM ;及 圖5顯示在預防性MDA-MB-231乳癌模型中AR59A157.1 對體重之影響。數據點表示平均值+/- SEM。 141375.doc •47-

Claims (1)

1. 201006929 七、申請專利範圍： 1. 一種由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生 的經分離單株抗體。 2. —種由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生 的經分離單株抗體之人類化抗體，或一種由該人類化抗 體產生之抗原結合片段。 3. —種由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生 的經分離單株抗體之嵌合抗體，或一種由該嵌合抗體產 生之抗原結合片段。 4. 一種以寄存編號040608-01寄存於IDAC的經分離融合瘤 細胞株。 5. 一種引發選自人類腫瘤之組織樣本中之癌性細胞的抗體 誘導之細胞毒性的方法，該方法包含： 提供來自該人類腫瘤之組織樣本； 提供由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產 生之經分離單株抗體、由以寄存編號040608-01寄存於 IDAC之融合瘤產生的經分離單株抗體之人類化抗體、由 以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生的經分 離單株抗體之嵌合抗體或其CDMAB，該CDMAB之特徵 在於能夠競爭性抑制該經分離單株抗體與其標靶抗原結 合；及 使該經分離單株抗體、該人類化抗體、該嵌合抗體或 其CDMAB與該組織樣本接觸； 其中，該經分離單株抗體、該人類化抗體、該嵌合抗 141375.doc 201006929 體或其CDMAB與該組織樣本之結合誘導細胞毒性。 6. 一種如請求項1之經分離單株抗體的CDMAB。 7. 一種如請求項2之人類化抗體的CDMAB。 8. —種如請求項3之嵌合抗體的CDMAB。 9. 如請求項1、2、3、6、7或8中任一項之經分離抗體或其 CDMAB，其係與選自由細胞毒性部分、酶、放射性化 合物及血源性細胞組成之群的成員結合。 10. —種單株抗體或其CDMAB的用途，其係用於製造用於 治療哺乳動物之對抗體誘導之細胞毒性敏感之人類腫瘤 的藥物，其中該人類腫瘤表現與由以寄存編號040608-01 寄存在IDAC之融合瘤產生之經分離單株抗體或其 CDMAB特異性結合之抗原的至少一個抗原決定基，該 CDMAB之特徵在於能夠競爭性抑制該經分離單株抗體 與其標把抗原結合。 11. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體係與細胞毒 性部分結合。 12. 如請求項11之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 13. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB活化補體。 14. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB介導抗體依賴性細胞介導之細胞毒性。 15. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 141375.doc 201006929 16. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 17. —種單株抗體，其能夠特異性結合與由以寄存編號 040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生之經分離單株抗體 相同之抗原決定基。 18. —種由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生 的經分離單株抗體或其CDMAB的用途，其係用於製造 用於治療哺乳動物之人類腫瘤之藥物，其中該人類腫瘤 表現與由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產 生之經分離單株抗體或其CDMAB特異性結合之抗原的 至少一個抗原決定基，該CDMAB之特徵在於能夠競爭 性抑制該經分離單株抗體與其標靶抗原結合。 19. 如請求項18之用途，其中該經分離單株抗體係與細胞毒 性部分結合。 20. 如請求項19之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 21. 如請求項18之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB活化補體。 22. 如請求項18之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB介導抗體依賴性細胞介導之細胞毒性。 23. 如請求項18之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 24. 如請求項18之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 141375.doc 201006929 25. —種由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生 的經分離單株抗體或其CDMAB的用途，其係用於製造 用於治療哺乳動物之人類腫瘤之藥物，其中該人類腫瘤 表現與由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產 生之經分離單株抗體或其CDMAB特異性結合之抗原的 至少一個抗原決定基，該CDMAB之特徵在於能夠競爭 性抑制該經分離單株抗體與其標靶抗原結合，且其中該 單株抗體或其CDMAB係與至少一種化學治療劑結合。 26. 如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體係與細胞毒 性部分結合。 27. 如請求項26之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 28. 如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB活化補體。 29. 如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB介導抗體依賴性細胞介導之細胞毒性。 3 0.如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 3 1.如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 32. —種結合檢定，其係用於測定選自人類腫瘤之組織樣本 中癌性細胞之存在，該等癌性細胞係由IDAC寄存編號為 040608-01之融合瘤細胞株AR59A 157.1產生的經分離單 株抗體、由以寄存編號040608-01寄存在IDAC之融合瘤 141375.doc 201006929 產生的經分離單株抗體之人類化抗體或由以寄存編號 040608-01寄存在IDAC之融合瘤產生的經分離單株抗體 之嵌合抗體特異性結合，該方法包含： 提供來自該人類腫瘤之組織樣本； 提供該經分離單株抗體、該人類化抗體、該嵌合抗體 或其CDMAB中之至少一者，其識別與由IDAC寄存編號 為040608-01之融合瘤細胞株AR59A15 7.1產生的經分離 單株抗體所識別之彼等抗原決定基相同的抗原決定基； 使該等所提供之抗體或其CDMAB中之至少一者與該 組織樣本接觸；及 測定該至少一種所提供之抗體或其CDMAB與該組織 樣本之結合； 藉此指示該組織樣本中該等癌症性細胞之存在。 33. —種由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生 的經分離單株抗體或其CDMAB的用途，其係用於製造 用於減小人類腫瘤負荷之藥物，其中該人類腫瘤表現與 由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生之經 分離單株抗體或其CDMAB特異性結合之抗原的至少一 個抗原決定基，該CDMAB之特徵在於能夠競爭性抑制 該經分離單株抗體與其標靶抗原結合。 34. 如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體係與細胞毒 性部分結合。 35. 如請求項34之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 141375.doc 201006929 36. 如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB活化補體。 37. 如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB介導抗體依賴性細胞介導之細胞毒性。 38. 如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 3 9.如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 40. —種由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生 的經分離單株抗體或其CDMAB的用途，其係用於製造 用於減小人類腫瘤負荷之藥物，其中該人類腫瘤表現與 由以寄存編號040608-01寄存於IDAC之融合瘤產生之經 分離單株抗體或其CDMAB特異性結合之抗原的至少一 個抗原決定基，該CDMAB之特徵在於能夠競爭性抑制 該經分離單株抗體與其標靶抗原結合；其中該單株抗體 或其CDMAB係與至少一種化學治療劑結合。 41. 如請求項40之用途，其中該經分離單株抗體係與細胞毒 性部分結合。 42. 如請求項41之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 43. 如請求項40之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB活化補體。 44. 如請求項40之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB介導抗體依賴性細胞介導之細胞毒性。 141375.doc 201006929 仏:請求項40之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 渡0 46. 如請求項40之用途’其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 47. —種有效治療人類癌症性腫瘤的組合物其包含下列各 物之組合： 如請求項1、2、3、6、7、8或17中任一項之抗體或 CDMAB； 該抗體或其抗原結合片段與選自由細胞毒性部分、 酶、放射性化合物及血源性細胞組成之群的成員的結合 物；及 必需量的醫藥學上可接受之載劑； 其中，該組合物有效治療該人類癌症性腫瘤。

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