TR201816256T4 - Bir süjede smn2 uç birleştirmesinin modülasyonu için bileşimler ve yöntemler. - Google Patents

Abstract

Burada, bir süjedeki SMN2 mRNA'nın uç birleştirmesinin modüle edilmesi için bileşikler, bileşimler ve yöntemler açıklanmaktadır. Ayrıca, açıklanan bileşiklerin ve bileşimleri, spinal kas atrofisi dahil olmak üzere hastalıkların ve rahatsızlıkların tedavisi için bir ilacın üretiminde kullanımları da sağlanmaktadır.

Description

TARIFNAME BIR SÜJEDE SMN2 Uç BIRLESTIRMESININ MODÜLASYONU IÇIN BILESIMLER VE YÖNTEMLER DIZI LISTESI Mevcut basvuru, elektronik formatta bir Dizi Listesiyle birlikte yapilmaktadir. Dizi Listesi, 17 Haziran 2010 tarihinde olusturulan, 5 Kb boyutunda olan saglanmaktadir.

BULUSUN ALT YAPISI Primer transkriptler veya ön-mRNA olarak bilinen yeni sentezlenmis ökaryotik mRNA molekülleri translasyondan önce islenir. Ön-mRNA'larin islenmesi, transkriptin 3' ucuna bir 5' metilatli basligin ve yaklasik 200-250 baz poli(A) kuyrugunun eklenmesini içerir. mRNA'nin ön-mRNA'dan islenmesi ayrica siklikla, ön-mRNA'nin, memeli mRNA'larinin %90-95'inin olgunlasmasinda meydana gelen uç birlestirmesini içerir.

Intronlar (veya müdahil diziler), olgun mRNA'nin kodlama dizisinde yer almayan bir ön-mRNA (veya bunu kodlayan DNA) bölgeleridir. Eksonlar, olgun HENA'da Hmhafaza edilen primer transkript bölgeleridir. Eksonlar, olgun mRNA, dizisinin olusturulmasi için birlikte uç birlestirilir. Uç birlestirme kesismeleri ayrica, kesisimin 5' tarafinin siklikla “5' uç birlestirme alani” veya “uç birlestirme donör alani” olarak ve 3' tarafinin “3' uç birlestirme alani” veya “uç birlestirme alici alani” olarak adlandirildigi sekilde uç birlestirme alanlari olarak da ifade edilmektedir. Uç birlestirmede, bir akis yukari eksonun 3' ucu akis asagi eksonun 5' ucuna birlestirilir. Böylelikle, uç birlestirilmemis ön-mRNA, bir intronun 5' ucunda bir ekson/intron kesismesine ve bir intronun 3' ucunda bir intron/ekson kesismesine sahip olur.

Intron çikarildiktan sonra, eksonlar bazi durumlarda, olgun mRNA'da ekson/ekson kesisimi veya siniri olarak ifade edilen yerde bitisiktir. Kriptik uç birlestirme alanlari, daha az siklikla kullanilan ancak olagan uç birlestirme alani blokeli oldugunda veya mevcut olmadiginda kullanilabilen alanlardir.

Birlikte uç birlestirme olarak tanimlanan alternatif uç birlestirme veya eksonlarin farkli kombinasyonlari çogunlukla bir tek genden birden fazla mRNA transkriptiyle sonuçlanir.

Bir nokta mutasyonundan ortaya çikan insan genetik hastaliklarinin %50'sine kadari anormal ön-mRNA islenmesiyle sonuçlanir. Bu tip nokta mutasyonlari ya bir mevcut uç birlestirme alanini bozar ya da eksonlarin farkli bir kombinasyonundan olusan ya da eksonlarin silintilerine sahip mRNA transkriptleriyle sonuçlanan sekilde yeni bir uç birlestirme alani yaratir. Nokta mutasyonlar ayrica bir kriptik uç birlestirme alaninin aktivasyonuyla sonuçlanabilir ya da düzenleyici cis ögelerini (yani uç birlestirme güçlendiricileri veya susturuculari) bozar (Cartegni et al., edilen bir uç birlestirme ürününün saglanmasi için uç birlestirmeyi yeniden yönlendirmek amaciyla, birçok genetik hastalikta anormal uç birlestirmeye yol açan mutasyonlari hedeflemek için kullanilmistir (Kole, Acta Biochimica Antisens bilesikler ayrica, Bcl-x-ön-mRNA'nin uzun ve kisa biçimleri gibi dogal olusumlu degisimli uç birlestirme varyantlarinin oranini degistirmek (U.S. Patent 6.172.216; eden spesifik eksonlarin atlanmasini zorlamak için kullanilmistir (Wilton et al., Neuromuscul. Disord., 1999, 9, ihtiva eden bir ön-mRNA molekülünde, anormal uç birlestirmeyle RNAz H'yi aktive etmeyen antisens oligonükleotidler kullanilarak mücadele etmek için bilesimleri ve yöntemleri açiklamaktadir.

Yakinsal spinal kas atrofisi (SMA), spinal motor nöronlarinin kaybiyla karakterize bir genetik, nörodejeneratif rahatsizliktir. SMA, erken baslangiçli bir otozomal çekinik hastaliktir ve halihazirda bebekler arasinda ölümün Önde gelen nedenidir. SMA'nin ciddiyeti hastalar arasinda degisiklik gösterir ve böylelikle üç tip olarak siniflandirilmistir. Tip ve tipik olarak 2 yil içerisinde ölümle sonuçlanir. Tip I SMA'si olan çocuklar oturamaz veya yürüyemez. Tip II SMA orta biçimdir ve hastalar oturabilir ancak ayakta duramaz veya yürüyemez. Hastaligin kronik: bir biçimi olan Tip III SMA'si olan hastalar tipik olarak 18 aylik olduktan sonra SMA'ya yakalanir (Lefebvre et al., Hum. Mol. Genet., 1998, 7, 1531- 1536).

SMA'nin moleküler temeline, snRNP biyojenezinde ve devridaiminde yer aldigi düsünülen bir multi-protein kompleksinin parçasi olan bir protein olan, SMN Telomerik olarak da bilinebilen sagkalnn motor nöron geni 1'in (SMNl) her iki kopyasinin da kaybi neden olur. Neredeyse özdes bir gen olan, SMN Sentromerik olarak da bilinebilen SMN2, 5q13 kromozomunda kopyalanmis bir bölgede mevcuttur ve hastalik ciddiyetini modüle eder. Normal SMNl geninin ekspresyonu yalnizca sagkalim motor nöronu (SMN) proteininin ekspresyonuyla sonuçlanir. Her ne kadar SMNl ve SMN2 ayni proteini kodlama potansiyeline sahip olsa da, SMN2 ekson 7'nin +6 konumunda translasyonel olarak sessiz bir mutasyon ihtiva eder ve bu da SMN2 transkriptlerinde ekson 7'nin etkisiz dahiliyle sonuçlanir. Böylelikle, SMNZ'nin baskin formu, ekson 7'den yoksun, kararsiz ve inaktif olan budanmis bir versiyondur (Cartegni and Krainer, Nat. Genet., 2002, 30, 377- 384). SMNZ geninin ekspresyonu yaklasik %10-20 SMN proteiniyle ve %80-90 kararsiz/fonksiyonel-olmayan SMNdelta7 proteiniyle sonuçlanir. SMN proteini, uç birlestirme-zomun toplanmasinda iyi-bilinen bir rol oynar ve ayrica aksonda ve nöronlarin sinir uçlarinda mRNA alisverisine aracilik edebilir.

Antisens teknolojisi, alternatif uç birlestirme ürünleri dahil olmak üzere bir ya da daha fazla spesifik gen ürününün ekspresyonunun modüle edilmesi için etkili bir araçtir ve bir dizi terapötik, tanisal ve arastirma uygulamalarinda benzersiz bir sekilde faydalidir. Antisens teknolojisinin arkasindaki prensip, bir hedef nükleik aside melezlenen bir antisens bilesiginin, bir dizi antisens mekanizmasinin biri yoluyla, transkripsiyon, uç birlestirme veya translasyon gibi gen ekspresyonu aktivitelerini module etmesidir. Antisens bilesiklerin dizi özgüllügü bu bilesikleri, hedef dogrulama ve gen fonksiyonellestirme için aletlerin yani sira hastalikta yer alan genlerin ekspresyonunu seçimli olarak module etmek için terapötikler olarak asiri derecede caziptir.

SMNZ'ye tamamlayici belirli antisens bilesikleri teknikte American J. of Human Genetics (April 2008) 82, 1-15; Singh et al., RNA Bio. 6:3, 1-10 (2009). Burada açiklanan belirli antisens bilesikleri ve yöntemleri, teknikte bilinen bu tip bilesiklere ve yöntemlere kiyasla arzu edilen karakteristiklere sahiptir. SMN2'nin uç birlestirmesini module etmek için tasarlanan kimerik peptit nükleik asit molekülleri tarif edilmistir (WO 02/38738; Cartegni and Krainer, Nat.

American Journal of Human Genetics 82: 834-848, insan Smn2 ön- mRNA'yi hedefleyen antisens bilesikleri ve bunlarin insan SMNZ transjenik farelerde ekson 7 içerilmesi üzerindeki bir etki için test edilmelerini tarif etmektedir.

BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Bir yönde, mevcut bulus, spinal kas atrofisi (SMA) olan bir insan süjenin tedavisinde kullanim için, insan SMN2 kodlayan bir ön-mRNA'nin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid› içeren bir antisens bilesik saglamakta olup, burada bilesik insan süjenin intratekal boslugundaki beyin- omurilik sivisinin içine verilir, burada antisens oligonükleotid SEQ ID NO: l'in nükleobaz dizisinden olusan bir nükleobaz dizisine sahiptir, burada antisens oligonükleotidin her bir nükleosidi bir nmdifiye seker bölütü içerir, burada her bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütüdür ve burada her bir nükleosit arasi baglanti bir fosforotioat baglantidir.

Bulus ayrica, insan SMNZ kodlayan bir ön-mRNA'nin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin, spinal kas atrofisi (SMA) olan bir insan süjenin tedavisinde kullanim için bir ilacin üretiminde kullanimini da saglamakta olup, burada ilaç insan süjenin intratekal boslugundaki beyin-omurilik sivisinin içine verilir, burada antisens oligonükleotid SEQ ID NO: l'in nükleobaz dizisinden olusan bir nükleobaz dizisine sahiptir, burada antisens oligonükleotidin her bir nükleosidi bir modifiye seker bölütü içerir, burada her bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütüdür ve burada her bir nükleosit arasi baglanti bir fosforotioat baglantidir.

Bulusun diger yönleri mevcut istemlerde düzenlenmektedir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklama, bir süjeye, insan SMN2 ön-mRNA kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin verilisini içeren yöntemleri saglamakta olup, burada antisens bilesik beyin-omurilik sivisinin içine verilir. Belirli durumlarda, verilis intratekal boslugun içinedir. Belirli durumlarda, verilis beyindeki beyin-omurilik sivisinin içinedir. Belirli durumlarda, verilis bir bolus enjeksiyon içerir. Belirli durumlarda, verilis bir aktarma pompasiyla infüzyon içerir.

Belirli durumlarda, antisens bilesik, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 10 miligram arasinda bir antisens bilesik dozunda verilir. Belirli durumlarda, doz süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 10 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, doz süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 5 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, doz süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 1 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, doz sujenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 0,5 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, doz süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 0,5 miligram arasinda antisens bilesiktir.

Belirli durumlarda, doz günlük olarak verilir. Belirli durumlarda, doz haftalik olarak verilir. Belirli durumlarda, antisens bilesik kesintisiz olarak verilir ve burada doz, gün basina verilen miktardir. Belirli durumlarda, yöntem, bir indükleme evresinde en az bir indükleme dozunun verilisini ve bir idame evresinde en az bir idame dozunun verilisini içerir.

Belirli durumlarda, indükleme dozu, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 5,0 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, idame dozu, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 1,0 miligrani arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, indükleme evresinin süresi en az 1 haftadir. Belirli durumlarda, idame evresinin süresi en az 1 haftadir. Belirli durumlarda, her bir indükleme dozu ve her bir idame dozu bir tekli enjeksiyon içerir.

Belirli durumlarda, her bir indükleme dozu ve her bir idame dozu bagimsiz olarak iki ya da daha fazla enjeksiyon içerir.

Belirli durumlarda, antisens bilesik, en az 1 haftalik bir tedavi periyodu boyunca en az 2 kez verilir. Belirli durumlarda, tedavi periyodu en az bir aydir. Belirli durumlarda, tedavi periyodu en az 2 aydir. Belirli durumlarda, tedavi periyodu en az 4 aydir. Belirli durumlarda, indukleme dozu bir ya da daha fazla bolus enjeksiyonla verilir ve idame dozu bir infüzyon pompasiyla verilir.

Belirli durumlarda, yöntem antisens bilesigin tolere edilebilirliginin ve/veya etkililiginin tayin edilmesini içerir. Belirli durumlarda, antisens bilesigin doz miktari veya sikligi, antisens bilesigin verilisinin tolere edilmediginin bir endikasyonunu takiben indirgenir. Belirli durumlarda, antisens bilesigin doz miktari veya sikligi, antisens bilesigin verilisinin etkili oldugunun bir endikasyonunu takiben muhafaza edilir veya indirgenir. Belirli durumlarda, antisens bilesigin dozu, antisens bilesigin verilisinin etkili olmadiginin bir endikasyonunu takiben arttirilir. Belirli durumlarda, antisens bilesigin sikligi, antisens bilesigin verilisinin etkili oldugunun bir endikasyonunu takiben indirgenir. Belirli durumlarda, antisens bilesigin sikligi, antisens bilesigin verilisinin etkili olmadiginin bir endikasyonunu takiben arttirilir.

Belirli durumlarda, yöntemler, antisens bilesigin ve en az bir adet diger terapinin eS-verilisini içerir. Belirli durumlarda, bir antisens bilesik ve en az bir adet diger terapi ayni zamanda es-verilir. Belirli durumlarda, bir antisens bilesik, en az bir adet diger terapinin verilisi öncesinde verilir.

Belirli durumlarda, bir antisens bilesik, en az bir adet diger terapinin verilisinden sonra verilir. Belirli durumlarda, en az bir adet diger terapi, valproik asidin, riluzolun, hidroksiürenin ve bir bütiratin birinin ya da daha fazlasinin verilisini içerir. Belirli durumlarda, en. az bir adet diger terapi, trikostatin-A'nin verilisini içerir. Belirli durumlarda, en az bir adet diger terapi, kök hücrelerin verilisini içerir. Belirli durumlarda, en az bir adet diger terapi gen terapisidir. Belirli durumlarda, gen terapisi CSF'ye verilir ve bir antisens bilesik sistemik olarak verilir. Belirli durumlarda, gen terapisi CSF'ye verilir` ve bir antisens bilesik sistemik olarak ve CSF'ye verilir.

Belirli durumlarda, açiklama, baslangiçta bir antisens bilesigin CSF'ye ve sistemik olarak verildigi, arindan gen terapinin CSF'ye verildigi ve antisens bilesigin sistemik verildigi tedavi rejimleri saglar. Bu tip belirli durumlarda, süje ilk tedavi zamaninda bir bebektir. Bu tip belirli durumlarda, süje 2 yasindan küçüktür. Belirli durumlarda, antisens bilesik bir süjenin CNS'sine, süje gen terapisi için yeterince büyüyene kadar verilir. Bu tip belirli durumlarda, antisens bilesik basindan sonuna kadar sistemik olarak Belirli durumlarda, antisens bilesik yaklasik 0,01 mg/ml'lik, mg/ml'lik, yaklasik 1 ng/ml'lik, yaklasik 5 ng/ml'lik, yaklasik 10 mg/ml'lik, yaklasik 50 mg/ml'lik veya yaklasik 100 mg/ml'lik bir konsantrasyonda verilir.

Belirli durumlarda, süjedeki bir nmtonörondaki SMN2 mRNA'nin ekson 7'sinin inklüzyonu artar. Belirli durumlarda, süjedeki bir motonörondaki SMN2 polipeptidindeki ekson 7 amino asitlerinin inklüzyonu artar.

Belirli durumlarda, açiklama, bir süjedeki bir nwtonörondaki SMN2 mRNA'nin ekson 7'sinin inklüzyonunun arttirilmasinin, süjeye, insan SMN2 kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin verilmesini ve böylelikle süjedeki motonörondaki SMN2 mRNA'nin ekson 7'sinin inklüzyonun arttirilmasini içeren yöntemler saglamaktadir.

Belirli durumlarda, açiklama, bir süjedeki bir nwtonörondaki SMN2 polipeptidindeki ekson 7 amino asitlerinin inklüzyonunun arttirilmasinin, süjeye, insan SMN2 kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin verilmesini ve böylelikle süjedeki motonörondaki SMNZ polipeptidinin ekson 7 amino asitlerinin inklüzyonun arttirilmasini içeren yöntemler saglamaktadir.

Belirli durumlarda, süje SMA'lidir. Belirli durumlarda, süje tip 2[ SMA'lidir. Belirli durumlarda, süje tip II SMA'lidir.

Belirli durumlarda, süje tip III SMA'lidir.

Belirli durumlarda, bir birinci doz in utero verilir. Belirli durumlarda, birinci doz, kan-beyin-bariyerinin tam olusumu öncesinde verilir. Belirli durumlarda, bir birinci doz süjenin dogumunun 1 haftasi içinde verilir. Belirli durumlarda, bir birinci doz süjenin dogumunun ]_ ayi içinde 4verilir. Belirli durumlarda, bir birinci doz süjenin dogumunun 3 ayi içinde verilir. Belirli durumlarda, bir birinci doz süjenin dogumunun 6 ayi içinde verilir. Belirli durumlarda, bir birinci doz, süje 1 ila 2 yasindayken verilir. Belirli durumlarda, bir birinci doz, süje 1 ila 15 yasindayken verilir. Belirli durumlarda, bir birinci doz, süje 15 yasindan büyükken Belirli durumlarda, süje bir' memelidir. Belirli durumlarda, süje bir insandir.

Belirli durumlarda, yöntemler, SMA'si olan bir süjenin tanimlanmasini içerir. Belirli durumlarda, süje, süjenin bir ya da daha fazla kasinin elektriksel aktivitesinin ölçülmesiyle tanimlanir. Belirli durumlarda, süje, süjenin, süjenin SMNl geninde bir mutasyona sahip olup olmadiginin belirlenmesi için bir genetik testle tanimlanir. Belirli durumlarda, süje kas biyopsisiyle tanimlanir.

Belirli durumlarda, antisens bilesiginin verilisi, ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA miktarinda en az %10 bir artisla sonuçlanir.

Belirli durumlarda, ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA Iniktarindaki artis en az %ZO'dir. Belirli durumlarda, ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA miktarindaki artis en az %SO'dir. Belirli durumlarda, ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA'nin miktari en az %70'tir.

Belirli durumlarda, antisens bilesiginin verilisi, ekson 7 amino asitlerine sahip SMN2 polipeptidi miktarinda en az %10 bir artisla sonuçlanir. Belirli durumlarda, ekson 7 amino asitlerine sahip SMN2 polipeptidi miktarindaki artis en az SMN2 polipeptidi miktarindaki artis en az %SO'dir. Belirli durumlarda, ekson '7 amino asitlerine sahip SMN2 polipeptidi miktarindaki artis en az %70'tir.

Belirli durumlarda, antisens bilesiginin verilisi, süjedeki SMA'nin en az bir semptomunu iyilestirir. Belirli durumlarda, antisens bilesiginin verilisi, süjede gelismis motor fonksiyonuyla sonuçlanir. Belirli durumlarda, antisens bilesiginin verilisi, süjede geciktirilmis veya indirgenmis motor fonksiyonu kaybiyla sonuçlanir. Belirli durumlarda, antisens bilesiginin verilisi, gelismis solunum fonksiyonuyla sonuçlanir. Belirli durumlarda, antisens bilesiginin verilisi, gelismis sagkalimla sonuçlanir.

Belirli durumlarda, antisens nükleotidin en az bir nükleosidi bir nwdifiye seker bölütü içerir. Belirli durumlarda, en az bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütü içerir. Belirli durumlarda, antisens oligonükleotidin esasen her bir nükleosidi bir modifiye seker bölütü içerir. Belirli durumlarda, bir modifiye seker bölütü içeren nükleositlerin tamami ayni seker modifikasyonunu içerir. Belirli durumlarda, her bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütü içerir. Belirli durumlarda, antisens oligonükleotidin her bir nükleosidi bir modifiye seker bölütü içerir. Belirli durumlarda, nükleositlerin tamami ayni seker modifikasyonunu içerir. Belirli durumlarda, her bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütü içerir. Belirli durumlarda, en az bir nükleosit arasi baglanti bir fosforotioat nükleosit arasi baglantidir. Belirli durumlarda, her bir nükleosit arasi baglanti bir fosforotioat nükleosit arasi baglantidir.

Belirli durumlarda, antisens oligonukleotid 10 ila 25 arasinda bagli nükleositten olusur. Belirli durumlarda, antisens oligonükleotid 12 ila 22 arasinda bagli nükleositten olusur.

Belirli durumlarda, antisens oligonükleotid 15 ila 20 arasinda bagli nükleositten olusur. Belirli durumlarda, antisens oligonükleotid 18 bagli nükleositten olusur.

Belirli durumlarda, antisens oligonükleotid, insan SMNZ kodlayan nükleik aside en az %90 tamamlayicidir. Belirli durumlarda, antisens oligonükleotid, insan SMNZ kodlayan nükleik aside tamamen tamamlayicidir. Belirli durumlarda, oligonükleotid, SEQ ID NO: 1 nükleobaz dizisinin en az 10 bitisik nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, oligonükleotid, SEQ ID NO: 1 nükleobaz dizisinin en az 15 bitisik nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir. Belirli durumlarda, oligonükleotid, SEQ ID NO: 1 nükleobaz dizisini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir. Belirli durumlarda, oligonukleotid, SEQ ID NO: 1 nükleobaz dizisinden olusan bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, antisens bilesik bir konjugat grubu veya terminal grubu içerir.

Belirli durumlarda, antisens bilesik antisens oligonükleotidden olusur.

Belirli durumlarda, antisens bilesik ayrica sistemik olarak verilir. Belirli durumlarda, sistemik verilis, intravenöz veya intraperitoneal enjeksiyonladir. Belirli durumlarda, sistemik verilis ve merkezi sinir sisteminin içine verilis ayni zamanda gerçeklestirilir. Belirli durumlarda, sistemik verilis ve merkezi sinir sisteminin içine verilis farkli zamanlarda gerçeklestirilir.

Belirli durumlarda, açiklama, antisens bilesiklerin ya tek basina ya da CSF'nin içine aktarimla kombinasyon halinde sistemik verilisini saglar. Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler sistemik olarak verilir. Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler subkütan olarak verilir. Belirli durumlarda, farmasötik. bilesimler intravenöz olarak verilir.

Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler intramusküler enjeksiyonla verilir.

Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler hem dogrudan CSF'ye (örnegin IT ve/Veya ICV enjeksiyonu ve/veya infüzyon) hem sistemik olarak verilir.

Belirli durumlarda, açiklama, SMA ile iliskili en az bir semptomu olan bir süjeye, 15 ila 20 arasinda bagli nükleositlerden olusan bir oligonükleotid içeren ve tam uzunlugu boyunca SEQ ID NO. 7'ye %100 tamamlayici olan bir nükleobaz dizisine sahip bir antisens bilesigin en az bir dozunun verilisinin yöntemlerini saglamaktadir` ve burada her bir nükleosit bir 2'-MOE modifiye nükleosittir ve burada 0,1 mg/kg ila 5 mg/kg arasindaki en az bir doz CSF'ye verilir. Bu tip belirli durumlarda, doz 0,5 mg/kg ila 2 mg/kg arasindadir.

Belirli durumlarda, en az bir doz bolus enjeksiyonla verilir.

Bu tip belirli durumlarda, en az bir ikinci doz verilir. Bu tip belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 2 hafta sonra verilir: Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 4 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 8 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan. en az 12 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 16 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 20 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, suje birinci dozun verilis zamaninda 2 yasin altindadir. Belirli durumlarda, süje 2 ila 15 yas arasindadir. Belirli durumlarda, süje 15 ila 30 yas arasindadir. Belirli durumlarda, süje 30 yasindan büyüktür. Belirli durumlarda, SMA ile iliskili en az bir semptomun ilerleyisi yavaslayip azalir. Belirli durumlarda, oligonükleotid ISIS396443'tür.

Belirli durumlarda, açiklama, SMA ile iliskili en az bir semptomu olan bir süjeye, 15 ila 20 arasinda bagli nükleositlerden olusan bir oligonükleotid içeren ve tam uzunlugu boyunca SEQ ID NO. 7'ye %100 tamamlayici olan bir nükleobaz dizisine sahip bir antisens bilesigin en az bir sistemik dozunun verilisinin yöntemlerini saglamaktadir ve burada her bir nükleosit bir 2'-MOE modifiye nükleosittir ve burada en az bir doz sistemik olarak verilir. Bu tip belirli durumlarda, en az bir doz bolus enjeksiyonla verilir. Belirli durumlarda, verilen doz 0,5mg/kg ila 50mg/kg arasindadir.

Belirli durumlarda, doz 1 mg/kg ila 10mg/kg arasindadir.

Belirli durumlarda, doz 1 mg/kg ila 5 mg/kg arasindadir.

Belirli durumlarda, doz 0,5mg/kg ila lmg/kg arasindadir.

Belirli durumlarda, en az bir ikinci doz verilir. Bu tip belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 2 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 4 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 8 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 12 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 16 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, ikinci doz birinci dozdan en az 20 hafta sonra verilir. Belirli durumlarda, süje birinci dozun verilis zamaninda 2 yasin altindadir. Belirli durumlarda, süje 2 ila 15 yas arasindadir. Belirli durumlarda, süje 15 ila 30 yas arasindadir. Belirli durumlarda, süje 30 yasindan büyüktür. Belirli durumlarda, SMA ile iliskili en az bir semptomun ilerleyisi yavaslayip azalir. Belirli durumlarda, oligonükleotid ISIS396443'tür.

Belirli durumlarda, açiklama, SMA ile iliskili en az bir semptomu olan bir süjeye, 15 ila 20 arasinda bagli nükleositlerden olusan bir oligonükleotid içeren ve tam uzunlugu boyunca SEQ ID NO. 7'ye %100 tamamlayici olan bir nükleobaz dizisine sahip bir antisens bilesigin en az bir CSF dozunun ve en az bir sistemik dozunun verilisinin yöntemlerini saglamaktadir ve burada her bir nükleosit bir 2'-MOE modifiye nükleosittir. Bu tip belirli durumlarda, CSF dozu 0,1 mg/kg ila 5 mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, sistemik doz 0,5mg/kg' ila 50mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, en az bir CSF dozu bolus enjeksiyonla verilir. Belirli durumlarda, en az bir sistemik. doz bolus enjeksiyonla. verilir. Bu tip belirli durumlarda, en az bir sistemik doz subkütan enjeksiyonla verilir. Belirli durumlarda, CSF dozu ve sistemik doz ayni zamanda verilir. Belirli durumlarda, CSF dozu ve sistemik. doz farkli zamanlarda verilir. Belirli durumlarda, süje birinci dozun verilis zamaninda 2 yasin altindadir.

Belirli durumlarda, süje 2 ila 15 yas arasindadir. Belirli durumlarda, süje 15 ila 30 yas arasindadir. Belirli durumlarda, süje 30 yasindan büyüktür. Belirli durumlarda, SMA ile iliskili en az bir semptomun ilerleyisi yavaslayip azalir.

Belirli durumlarda, oligonükleotid ISIS396443'tür.

Belirli durumlarda, açiklama, SMA ile iliskili en az bir semptomu olan bir süjeye, 15 ila 20 arasinda bagli nükleositlerden olusan bir oligonükleotid içeren ve tam uzunlugu boyunca SEQ ID NO. 7'ye %100 tamamlayici olan bir nükleobaz dizisine sahip ve her bir nükleosidin bir 2'-MOE modifiye nükleosit oldugu. bir antisens bilesigin en az bir sistemik dozunun ve bir gen terapisi ajaninin en az bir dozunun verilisinin yöntemlerini saglamaktadir. Belirli durumlarda, sistemik doz 0,5mg/kg ila 50mg/kg arasindadir.

Belirli durumlarda, en az bir sistemik doz bolus enjeksiyonla verilir: Bu tip belirli durumlarda, en az bir sistemik doz subkütan enjeksiyonla verilir. Belirli durumlarda, sistemik doz ve gen terapisi ajani ayni zamanda verilir. Belirli durumlarda, sistemik doz ve gen terapisi ajani farkli zamanlarda verilir. Belirli durumlarda, gen terapisi ajani CSF'ye verilir. Bu tip belirli durumlarda, gen terapisi ajani intratekal enjeksiyonla ve/veya infüzyonla verilir. Bu tip belirli durumlarda, gen terapisi ajani intraserebroventriküler enjeksiyonla ve/Veya infüzyonla verilir. Belirli durumlarda, süje birinci dozun verilis zamaninda 2 yasin altindadir.

Belirli durumlarda, süje 2 ila 15 yas arasindadir. Belirli durumlarda, süje 15 ila 30 yas arasindadir. Belirli durumlarda, süje 30 yasindan büyüktür. Belirli durumlarda, SMA ile iliskili en az bir semptomun ilerleyisi yavaslayip azalir.

Belirli durumlarda, oligonükleotid ISIS396443'tür.

Belirli durumlarda, açiklama, SMA ile iliskili en az bir semptomu olan bir süjenin seçilmesinin ve bir antisens bilesigin yukaridaki yöntemlerin herhangi birine göre verilisinin yöntemlerini saglamaktadir. Bu tip belirli durumlarda, SMA'nin en az bir semptomu verilisten sonra tayin edilir. Bu tip belirli durumlarda, SMA'nin en az bir semptomu iyilesir. Bu tip belirli durumlarda, SMA'nin en az bir semptomu ilerlemez veya antisens bilesigin verilisini almamis olan bir süjeye kiyasla daha yavas ilerler.

Belirli durumlarda, açiklama, yukaridaki yöntemlerin herhangi birinde kullanim için, insan SMN2 kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesik saglar. Belirli durumlarda, açiklama, sagkalim motor nöronu l (SMNl) ile iliskili bir hastaligin ya da durumun tedavisinde kullanim için bu tip bir bilesik Belirli durumlarda, açiklama, insan SMNZ kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin, yukaridaki yöntemlerin herhangi birinde kullanim için bir ilacin üretiminde kullanimini saglar. Belirli durumlarda, ilaç, sagkalim motor nöronu l (SMNl) ile iliskili bir hastaligin ya da durumun tedavisi SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, Örnek 4'te müzakere edilen, ekson 7 (y-ekseni) içeren SMNZ yüzdesinin, 7 günlük tedavinin (x-ekseni) sonlandirilmasindan O, 2, 4, 6 ve 8. haftada tayin edildigi eylem çalismasinin bir süresinden alinan sonuçlari göstermektedir. “0.” hafta numunesi, tedavinin sonlandirilmasindan 1 gün sonra alinmistir. CON, salin tedavili fareleri temsil etmektedir. Kontrol salin tedavili fareler arasinda 0. ila 6. aya kadar farkli zaman noktalarinda inklüzyon %'sinde hiç fark olmamistir.

Sekil 2, Örnek 4'te müzakere edilen, ekson 7 içeren SMNZ yüzdesinin, 7 günlük tedavinin sonlandirilmasindan 0, 0,5, 1, 2, 5 ve 6. haftada tayin edildigi eylem çalismasinin bir süresinden alinan sonuçlari göstermektedir. “0.” hafta numunesi, tedavinin sonlandirilmasindan 1 gün sonra alinmistir. CON, salin tedavili fareleri temsil etmektedir. Kontrol salin tedavili fareler arasinda 0. ila 6. aya kadar farkli zaman noktalarinda inklüzyon %'sinde hiç fark olmamistir.

Sekil 3, ISIS396443'ün embriyonik verilisinin, SMA farelerinin Tayvan susunda kuyruk-boyu üzerindeki etkisini ölçen Örnek 6'da müzakere edilen bir deneyden alinan sonuçlari göstermektedir. Sekil 3A; bu birinci deneyi göstermektedir ve Sekil 3B, antisens bilesigin farkli bir konsantrasyonunu test eden, kaydedildigi sekilde ve kiyaslama amaciyla normal fareler için verileri içeren tekrarlanan bir deneyi göstermektedir.

Sekil 4, Örnek 7'de müzakere edilen western lekelemelerinden alinan sonuçlari göstermektedir. Y ekseni, ekson 7 içeren çesitli numunelerdeki SMN yüzdesidir.

Sekiller 5 ve 6, Örnek 7'de müzakere edilen deneylerden alinan sonuçlari göstermektedir. SMA farelerinin (Tayvan susu) bir dizi tayini, ya bir antisens bilesikle ya da bir kontrol oligonükleotidiyle tedavinin ardindan gerçeklestirilmistir.

Sekil 7, Örnek 7'de müzakere edilen bir deneyden alinan bir sagkalim egrisini göstermektedir.

Sekil 8, Örnek 7'de müzakere edildigi üzere, bir antisens bilesikle ya da bir kontrol oligonükleotidiyle tedavinin ardindan omuriligin farkli kisimlarindaki motor nöronlarinin sayisinin bir tayininden alinan sonuçlari göstermektedir.

Sekil 9, Örnek. 7'de müzakere edildigi üzere antisensle tedavi edilen hayvanlardaki (ekson 7 içeren) tam SMN RNA'nin bir tayininden alinan sonuçlari göstermektedir.

Sekil 10, hayvanlarin ya (1) tedavi edilmedigi; (2) dogumda (PO. Gün) antisens bilesigin bir tekli dozunun verildigi ya da (3) PO'da bir birinci dozun ve 21. günde (P21) bir ikinci dozun verildigi Örnek 7'de müzakere edilen bir deneyden alinan bir sagkalim, egrisini göstermektedir.

Sekil 11, ikinci dozu almis olan hayvanlarla yalnizca birinci dozu almis olan hayvanlari karsilastiran Örnek 7'de tarif edilen bir deneyden alinan bir sagkalim egrisini göstermektedir.

Sekil 12, antisens bilesigin maymunlara intratekal infüzyonla verilmis oldugu ve bilesigin konsantrasyonunun 96 saat sonra farkli dokularda tayin edilmis oldugu Örnek 9'da müzakere edilen bir deneyden alinan sonuçlari göstermektedir.

Sekil 13, Örnek 12'de müzakere edilen, antisens bilesigin farkli dozlarinin ciddi SMA'li farelere subkütan enjeksiyonla verilmis oldugu deneyler için bir sagkalim egrisini göstermektedir.

BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Hem yukaridaki genel tarifnamenin hem asagidaki ayrintili tarifnamenin yalnizca emsal ve açiklayici oldugu ve korumasi talep edildigi sekilde bulusu kisitlayici olmadigi anlasilmalidir. Burada, aksi spesifik olarak belirtilmedigi sürece tekil kullanim çogul kullanimi da içermektedir. Burada kullanildigi sekliyle, “veya” sözcügünün kullanimi, aksi belirtilmedigi sürece “ve/veya” anlamina gelmektedir. Dahasi, diger biçimlerin kullanimi sinirlayici degildir. Ayrica, “öge” veya “bilesen” gibi terimler, aksi spesifik olarak belirtilmedigi sürece, hem bir ünite içeren ögeleri ve bilesenleri hem birden fazla alt ünite içeren ögeleri ve bilesenleri kapsamaktadir.

Burada kullanilan bölüm basliklari yalnizca düzenleme amaçlidir ve tarif edilen ana konuyu sinirlayici olarak degerlendirilmemelidir.

Spesifik tanimlar saglanmadigi sürece, burada tarif edilen analitik kimyayla, sentetik organik kimyayla ve tibbi ve farmasötik kimyayla baglantili olarak kullanilan terimlendirme ve bunlarin prosedürleri ve teknikleri teknikte iyi bilinen ve yaygin olarak kullanilanlardir. Kimyasal sentez ve kimyasal analiz için standart teknikler kullanilabilir. Bu tip belirli teknikler örnegin Sangvi ve Cook tarafindan yayina hazirlanan Chemical Society, Washington D.C., 1994'te; “Remington's Pharmaceutical Sciences,” Mack Publishing Co., Easton, Pa., 18. baski, 1990'da ve Stanley T. Crooke tarafindan yayina hazirlanan “Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications” CRC Press, Boca Raton, Florida'da ve Sambrook et al., “Molecular Cloning, A laboratory Manual,” 2.

Baski, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989'da bulunabilir.

Aksi gösterilmedigi sürece, asagidaki terimler asagidaki anlamlara sahiptir: içeren bir bilesik anlamina gelmektedir. Nükleositlere, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, dogal olusumlu nükleositler, modifiye nükleositler ve mimetik bazlara ve/Veya seker bölütlerine sahip nükleositler dahildir. Nükleositler çesitli ornatiklarin herhangi biriyle modifiye edilebilir. vekili anlamina gelmektedir. bölütü anlamina gelmektedir. ornatik içeren bir ribofüranoz bölütü anlamina gelmektedir. nükleosidin sekerinin yerine geçebilen bir yapi anlamina gelmektedir. Seker vekillerinin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, açik halka sistemleri, 6-üyeli halkalar, oksijenin, örnegin, sülfür ya da nitrojenle degistirildigi sekerler dahildir. Örnegin, seker vekillerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, morfolinler ve 4'-tiyo-içeren sekerler dahildir. gelmektedir. Nükleobazlar dogal olusumlu olabilir veya modifiye edilebilir. Belirli durumlarda, bir nükleobaz, bir baska nükleik asidin bir nükleobazina hidrojen baglayabilen herhangi bir atom veya atom grubu içerebilir. anlamina gelmektedir. Burada kullanildigi sekliyle, nükleositlere nükleotidler dahildir. nükleositlerine kiyasla en az bir modifikasyon içeren bir nükleosittir. Bu tip modifikasyon seker bölütünde ve/Veya nükleobazda olabilir. iki karbon atomunu birlestiren bir köprü içerdigi, böylelikle bir bisiklik seker bölütü olusturdugu bir nükleosit anlamina gelmektedir.10 ve 4' karbon atomunu birlestiren furanoz halkasinin iki karbon atomunu birlestiren bir köprü içeren bir furanoz halkasi içeren bir bisiklik nükleosit anlamina gelmektedir. konumunda bir ornatik içeren bir seker içeren bir nükleosit anlamina gelmektedir. biri, seker halkasinin 2' konumunda bir -OCH3 grubu içeren bir seker anlamina gelmektedir. metoksietil” terimlerinin her biri, seker halkasinin 2' konumunda bir -OCHXHhOCHS grubu içeren bir seker anlamina gelmektedir. bilesik anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, birden fazla nükleosidin biri ya da daha fazlasi modifiyedir. Belirli durumlarda, bir oligonükleotid bir ya da daha fazla ribonükleosit (RNA) ve/Veya deoksiribonükleosit (DNA) içerir. fosfor atomu ihtiva etmedigi bir oligonükleotid anlamina gelmektedir. Burada kullanildigi sekliyle, oligonükleotidlere oligonükleositler dahildir. ve/veya en az bir modifiye nükleosit arasi baglanti içeren bir oligonükleotid anlamina gelmektedir. nükleositleri arasinda esdegerli bir baglanti anlamina gelmektedir. fosfodiester baglantisi anlamina gelmektedir. nükleosit arasi baglantidan farkli herhangi bir nükleosit arasi baglanti anlamina gelmektedir. anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, bir oligomerik bilesim bir oligonükleotidden olusur. Belirli durumlarda, bir oligomerik bilesik ayrica, bir ya da daha fazla konjugat hedef nükleik aside en azindan kismen tamamlayici olan bir oligomerik bilesik anlamina gelmekte olup, burada bu tip melezleme en az bir antisens aktiviteyle sonuçlanir. oligonükleotidden olustugu bir antisens bilesik anlamina gelmektedir. asidine melezlenmesine atfedilebilen herhangi bir saptanabilir ve/Veya ölçülebilir etkiyi ifade etmektedir. Belirli durumlarda, bu tip antisens aktivite, bir nükleik asidin ya da proteinin bir miktarinda bir artis veya azalmadir. Belirli durumlarda, bu tip antisens aktivite, bir nükleik asidin veya proteinin uç birlestirme varyantlarinin oraninda bir degisikliktiri Belirli durumlarda, bu tip antisens aktivite, bir hücredeki ve/Veya süjedeki bir fenotipik degisikliktir.10 Antisens aktivitenin “saptanmasi” veya “ölçülmesi” dogrudan veya dolayli olabilir. Örnegin, belirli durumlarda, antisens aktivite, hedef nükleik asidin ya da proteinin miktarinin veya bir hedef nükleik asidin ya da proteinin uç birlestirme varyantlarinin bagil miktarlarinin saptanmasiyla ve/veya ölçülmesiyle tayin edilir. Belirli durumlarda, antisens aktivite, bir hücrede veya hayvanda bir fenotipik degisikligin gözlemlenmesiyle saptanir. Herhangi bir aktivite, yanit veya etkiyle baglantili olarak, “saptama” ve “ölçme” terimleri, saptama veya ölçme için bir testin gerçeklestirildigini göstermektedir. Bu tip saptama ve/veya ölçme, sifir degerlerini içerebilir. Böylelikle, saptama veya ölçme için bir test hiç aktivite (sifir aktivite) olmadigina dair bir bulguyla sonuçlanirsa, aktivitenin saptanmasi veya ölçülmesi adimi yine de gerçeklestirilmistir. antisens bilesikle modüle edilebilme kapasitesine sahip herhangi bir nükleik asit molekülünü ifade etmektedir. önceden-seçilmis RNA transkripti anlamina gelmektedir. Özellikle, ön-mRNA bir ya da daha fazla intron içerir. bir protein anlamina gelmektedir. anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, modülasyon gen ekspresyonunda bir artis anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, modülasyon gen ekspresyonunda bir azalma anlamina gelmektedir. hücrede mevcut olan ve çalisan yapilara dönüstürüldügü herhangi bir fonksiyon ve adim anlamina gelmektedir. nükleobaz modifikasyonundan bagimsiz olarak bitisik nükleobazlarin bir 5' ila 3' yöneliminde siralamasi anlamina gelmektedir. komsu olan nükleobazlar anlamina gelmektedir. baglanma vasitasiyla esdegerli-olmayan eslesme yetisi anlamina gelmektedir. siki melezleme kosullari altinda melezlenebildigi anlamina gelmektedir. Örnegin, bir antisens bilesik hedef nükleik asidine, hedef nükleik asidi siki melezleme kosullari altinda melezleyebiliyorsa tamamlayicidir. nükleobazinin, bir ikinci nükleik asitteki her bir karsilik gelen bitisik konumda bir nükleobazla eslesebildigi anlamina gelmektedir.

Bir antisens bilesigin “tamamlayicilik yüzdesi", antisens bilesigin bir hedef nükleik asidin bir esit-uzunluktaki kismina tamamlayici olan nükleobazlarinin yüzdesi anlamina gelmektedir. Tamamlayicilik yüzdesi, antisens bilesigin bir hedef nükleik asidin hedef nükleik asitteki karsilik gelen10 bitisik konumlardaki nükleobazlara tamamlayici olan nükleobazlarinin sayisinin antisens bilesigin toplam uzunluguna bölünmesiyle hesaplanir. toplam sayisina bölünen, birinci nükleik asitte, bir ikinci nükleik asitteki karsilik gelen konumlardaki nükleobazlara özdes olan nükleobazlarin sayisi anlamina gelmektedir. tamamlayici nükleik asitlerin yeniden birlestirilmesi anlamina gelmektedir. asidin karsilik gelen konumundaki bir nükleobazla eslesemeyen bir nükleobazi anlamina gelmektedir. modifikasyondan bagimsiz olarak, ayni nükleobaz dizisine sahip olma anlamina gelmektedir. modifikasyonlarin yoklugu dahil olmak üzere, birbirinden farkli nükleosit modifikasyonlarina veya nükleosit arasi baglantilara sahip nükleositleri veya nükleosit arasi baglantilari ifade etmektedir. Böylelikle, örnegin, bir MOE nükleosidi ve bir modifiye edilmemis DNA nükleosidi, DNA nükleosidi modifiye edilmemis olsa bile “farkli olarak modifiyedir”. Benzer sekilde, her ikisi de dogal-olusumlu modifiye edilmemis nükleositler olsa bile, DNA ve RNA “farkli olarak modifiyedir”. Aksi belirtilmedigi sürece, ayni olan ancak. farkli nükleobazlar içeren nükleositler farkli olarak modifiye degildir. Örnegin, bir 2'-OMe modifiye seker ve bir adenin nükleobazi içeren bir nükleosit ve bir 2'-OMe modifiye seker ve bir timin nükleobazi içeren bir nükleosit farkli olarak modifiye degildir. nükleosit arasi baglantilar dahil olmak üzere) birbiriyle ayni olan nükleositleri ve nükleosit arasi baglantilari ifade etmektedir. Böylelikle, örnegin, DNA nükleosidi modifiye edilmemis olsa bile, iki modifiye edilmemis DNA nükleosidi nükleosidin modifikasyon anlamina gelmektedir ve nmdifiye ve modifiye edilmemis nükleositleri içerir. Dolayisiyla, aksi belirtilmedigi sürece, “bir birinci tipte bir modifikasyona sahip bir nükleosit” modifiye edilmemis bir nükleosit olabilir.

Bir oligonükleotidin “ayri bölgeleri”, bir oligonükleotidin, bölge içerisindeki nükleositlerin ve nükleosit arasi baglantilarin tamaminin ayni modifikasyonlari içerdigi bir kismi anlamina gelmektedir ve herhangi bir komsu kismin nükleositleri ve/Veya nükleosit arasi baglantilari GHI az bir farkli modifikasyon içerir. edilmemis nükleobazlarin, sekerlerin ve/veya nükleosit arasi baglantilarin bir paterni anlamina gelmektedir. bir sekerin ve/Veya her bir nükleosit arasi baglantinin modifiye edildigi anlamina gelmektedir. her bir sekerin ve/veya her bir nükleosit arasi baglantinin, modifiye oligonükleotid boyunca ayni modifikasyona sahip oldugu anlamina gelmektedir. nükleositlerin en az dört ayri bölgesine sahip bir oligonükleotid 'veya bunun bir kismi anlamina gelmekte olup, burada A, bir birinci tipte modifikasyona sahip nükleositlerin bir bölgesini temsil etmektedir; B, farkli tipte bir modifikasyona sahip nükleositlerin bir bölgesini temsil etmektedir; n, 2-15'tir ve m, 0 veya 1'dir. Böylelikle, degisen bölge içerir. Belirli durumlarda, her bir A bölgesi ve her bir B bölgesi bagimsiz olarak 1-4 nükleosit içerir. insan-olmayan hayvan anlamina gelmektedir. olan olara tanimlanmis bir süje anlamina gelmektedir. Bu tip örneklerde, bir süje, SMA'si olmanin veya gelistirmenin bir ya da daha fazla endikasyonuna sahiptir. saglanmasi anlamina gelmektedir ve, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, bir tibbi profesyonel tarafindan ve kendi kendine- verilis ile verilisi içerir. anlamina gelmektedir. Parenteral verilise, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, subkütan verilis, intravenöz verilis veya intramusküler verilis dahildir. alana verilis anlamina gelmektedir. Sistemik verilisin örnekleri subkütan verilis ve intravenöz verilis ver intraperitoneal verilistir. gelmektedir. gelmektedir. etrafindaki boslugu dolduran sivi anlamina gelmektedir.

CSF'nin içine aktaran herhangi bir verilis anlamina gelmektedir. sisteminin içine verilis anlamina gelmektedir. kaplayan araknoid membranin altina verilis anlamina gelmektedir. IT enjeksiyon, omuriligin tekasi üzerinden, farmasötik bir ajanin omuriligi çevreleyen setin içine enjekte edildigi subaraknoid boslugun içine gerçeklestirilir. farmasötik ajanin duragan durum konsantrasyonlarinin hedef bir dokuda elde edildigi bir dozlama evresi anlamina gelmektedir. Örnegin, bir indükleme evresi, o esnada antisens oligonükleotidin duragan durumdaki konsantrasyonlarinin karacigerde elde edildigi bir dozlama evresidir. konsantrasyonlarinin elde edilmis oldugu bir dozlama evresidir. zaman periyodu anlamina gelmektedir. Örnegin, bir indükleme evresinin süresi, o esnada indükleme dozlarinin verildigi zaman periyodudur. verilen bir doz anlamina gelmektedir. Burada kullanildigi sekliyle, “indükleme dozu”, indükleme evresi esnasinda bir tekli veriliste verilen bir doz anlamina gelmektedir. süjeye verilisi anlamina gelmektedir. Iki ya da daha fazla farmasötik. ajan bir tekli farmasötik bilesim, olabilir veya ayri farmasötik loilesimlerde olabilir. Iki ya da daha fazla ajanin her biri, ayni veya farkli verilis yolu üzerinden verilebilir. Es-verilis, paralel veya sirali verilisi kapsar.

Belirli durumlarda, terapiye, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, kimyasal terapiler ve destekli solunum, besleme sondalari gibi fiziksel müdahaleler' ve direncin arttirilmasi amaciyla fiziksel terapi dahildir. iyilestirilmesi için kullanilan bir ya da daha fazla spesifik prosedürün uygulanmasi anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, spesifik prosedür, bir ya da daha fazla farmasötik ajanin verilisidir. endikatörünün ciddiyetinin bir azaltilmasi anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, iyilestirme, bir durum ya da hastaligin bir` ya da daha fazla endikatörünün ilerlemesinde bir gecikmeyi veya yavaslamayi içerir. Endikatörlerin ciddiyeti, teknikte uzman kisilerce bilinen sübjektif veya objektif Ölçümlerle belirlenebilir. riski olan bir süjedeki bir durumun ya da hastaligin gelismesini engellemek anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, hastaliga ya da duruma yakalanma riskindeki bir süje, çoktan hastaligi ya da durumu olan bir süje tarafindan alinan tedaviye benzer tedavi alir. riski olan bir süjedeki bir durumun ya da hastaligin gelismesini geciktirmek anlamina gelmektedir. iliskili en az bir semptomun ciddiyetinin daha az hizli kötülesmesi anlamina gelmektedir. ekson 7'sine karsilik gelen kismi anlamina gelmektedir. Ekson 7 amino asitleri, ekson 7'nin uç birlestirme esnasinda hariç birakilmamis oldugu SMA RNA'dan eksprese edilen SMN proteininde mevcuttur. anlamina gelmektedir. SMN, ekson 7'nin olgun. mRNA'da. mevcut olmasi ve ekson 7 amino asitlerininr SMN proteininde mevcut olmasi sartiyla ya bir SMNl geninden ya da bir SMN2 geninden eksprese edilebilir. boyunca saglanan bir farmasötik ajanin belirlenmis bir miktari anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, bir doz iki ya da daha fazla bolusta, tablette veya enjeksiyonda verilebilir. Örnegin, subkütan ya da intratekal veya ICV 'verilisin arzu edildigi belirli durumlarda, arzu edilen doz, bir tekli enjeksiyon tarafindan kolayca barindirilamayan bir hacim gerektirir. Bu tip durumlarda, iki ya da daha fazla enjeksiyon, arzu edilen dozun elde edilmesi için kullanilabilir. Kesintisiz infüzyonun ayarlanmasinda, doz, zaman birimi basina aktarilan bir farmasötik ajanin miktari olarak eksprese edilebilir. anlamina gelmektedir. Belirli durumlarda, bir dozaj ünitesi, liyofilize oligonükleotid. ihtiva eden. bir flakondur. Belirli durumlarda, bir dozaj ünitesi, sulandirilmis oligonükleotid ihtiva eden bir flakondur. fayda saglayan bir farmasötik ajanin bir miktari anlamina gelmektedir. maddelerin, farmasötik bir ajan içeren bir karisimi anlamina gelmektedir. Örnegin, bir farmasötik bilesim bir modifiye oligonükleotid ve bir steril sulu solüsyon içerebilir. sinirlar dahilindeki yan etkilerin bir paterni anlamina gelmektedir. atfedilebilen bir fizyolojik yanit anlamina gelmektedir. 1. Belirli Modifiye Oligonükleotidler Belirli durumlarda, mevcut açiklama, DNA veya RNA gibi dogal olusumlu oligomerlerin oligonükleotidlerine kiyasla bir ya da daha fazla modifikasyon içeren antisens oligonükleotidleri içeren yöntemler ve bilesimler saglamaktadir. Bu tip modifiye antisens oligonükleotidler, bir ya da daha fazla arzu edilen özellige haiz olabilir. Bu tip belirli modifikasyonlar, antisens oligonükleotidin antisens aktivitesini, örnegin antisens oligonükleotidin hedef nükleik asidine afinitesini arttirarak, bir ya da daha fazla nükleaza direncini arttirarak ve/veya oligonükleotidin farmakokinetiklerini veya doku dagilimini degistirerek degistirir. Belirli durumlarda, bu tip modifiye antisens oligonükleotidler bir ya da daha fazla modifiye nükleosit ve/veya bir ya da daha fazla modifiye nükleosit baglantisi ve/Veya bir ya da daha fazla konjugat grubu içerir. a. Belirli Modifiye Nükleositler Belirli durumlarda, antisens oligonükleotidler bir ya da daha fazla modifiye nükleosit içerir. Bu tip modifiye nükleositler bir modifiye seker ve/Veya bir modifiye nükleobaz içerebilir.

Belirli durumlarda, bu tip modifiye nükleositlerin bir oligonükleotide katilmasi, bir hedef nükleik aside artan afiniteyle ve/veya, bunlarla sinirli kalmamakr kaydiyla, nükleaz degradasyonuna artan direnç ve/veya gelismis toksisite ve/Veya modifiye oligonükleotidin tutulum özellikleri dahil olmak üzere artan kararlilikla sonuçlanir. i. Belirli Nükleobazlar Nükleositlerin dogal olusumlu baz proteini heterosiklik baz, tipik olarak pürinler ve pirimidinlerdir. Pürin nükleobazlari olan adenin (A) ve guanin (G) ve pirimidin nükleobazlari olan timin (T), sitozin (C) ve urasil (U) gibi “modifiye edilmemis” veya “dogal” nükleobazlara ek olarak, teknikte uzman kisilerce bilinen birçok modifiye nükleobaz veya nükleobaz mimetikleri, burada tarif edilen bilesiklerin içine katilmak için uygundur.

Belirli durumlarda, modifiye bir nükleobaz, örnegin bir 7- deaza pürin, bir 5-metil sitozin veya bir G-kenetleme gibi ana nükleobaza yapi olarak oldukça benzer bir nükleobazdir.

Belirli durumlarda, nükleaz mimetigi, örnegin bir trisiklik fenoksazin nükleobaz mimetigi gibi daha komplike yapilar içerir. Yukarida kaydedilen modifiye nükleobazlarin hazirlanmasi için yöntemler, teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. ii. Belirli Modifiye Sekerler ve Seker Vekilleri Mevcut açiklamanin antisens oligonükleotidleri opsiyonel olarak, bir dogal sekere kiyasla seker bölütünün modifiye edildigi bir ya da daha fazla nükleosit ihtiva edebilir. Bu tip sekeri modifiye edilmis nükleositleri içeren oligonükleotidler güçlendirilmis nükleaz kararliligina, artan baglanma afinitesine veya bazi diger faydali biyolojik özellige sahip olabilir. Bu tip modifikasyonlara sinirlama olmadan, ornatik gruplarinin eklenmesi, bir bisiklik nükleik asit (BNA) olusturmak için ikiz-olmayan halka oksijen atomunun köprülenmesi, ribosil halkasi oksijen atomunun S, N(R) veya C(Rl)(R)2 (R. = H, Ci-Cn alkil veya bir koruyucur grup) ile degistirilmesi ve bunlarin, örnegin bir 2'-F-5'-metil ikameli nükleosit gibi kombinasyonlari (diger açiklanan 5',2'-bis ikameli nükleositler için bakiniz 21/8/08 tarihinde yayinlanan halkasi oksijen atomunun, 2'-konumunda. diger ikameyle S ile (bakiniz 16 Haziran 2005 tarihinde yayinlanan U.S. Patent '-ikamesiyle (bakiniz, LNA'nin örnegin bir 5'-metil veya bir '-vinil grubuyla ikame edildigi, 22/11/07 tarihinde degistirilmesi dahildir.

Modifiye seker bölütlerine sahip nükleositlerin örneklerine, sinirlama olmadan, 5'-Vinil, 5'-metil (R veya S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3 ve 2'-O(CHÜ20CH3 ornatik gruplari içeren nükleositler10 dahildir. 2' konumundaki ornatik ayrica, alil, amino, azido, tiyo, O-alil, O-Ci-Cm alkil, OCF3, O(CHÜ2SCH3, O(CHN2-O- N(Rm)(Rn) ve O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)'den de seçilebilecek olup, burada her bir Rm ve Rn, bagimsiz olarak, H veya ikameli ya da ikamesiz Ci-Cm alkildir.

Bisiklik nükleik asitlerin (BNA'larin) örneklerine, sinirlama olmadan, 4' ila 2' ribosil halkasi atomlari arasinda bir köprü içeren nükleositler dahildir. Belirli durumlarda, burada saglayan antisens bilesikler, köprünün su formüllerden birini içerdigi bir ya da daha fazla BNA nükleosidi içerir: 4'-ß-D- (CH2)-O-2' (ß-D-LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-a-L-(CH2)-O-2' (d-L- LNA); 4'-(CHn2-O-2' (ENA); 4'-C(CHQ2-O-2' (bakiniz WO verilen U.S. Patent -2' (bakiniz WO N(CH3)-2' (bakiniz 2 Eylül 2004 tarihinde yayinlanmis olan U.S. yayinlanan PCT/USZOO8/066154); ve burada R, bagimsiz olarak, H, Ci-Cn alkil veya bir koruyucu gruptur.

Belirli durumlarda, mevcut açiklama, bisiklik seker bölütleri olmayan modifiye seker bölütleri içeren modifiye nükleositler saglamaktadir. Bu tip belirli modifiye nükleositler bilinmektedir. Belirli durumlarda, bir nükleosidin seker halkasi herhangi bir konumda modifiye edilebilir. Bu açiklamada faydali olan seker modifikasyonlarinin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, sunlardan seçilen bir seker ornatik grubu içeren bilesikler dahildir: OH, F, 0- alkil, S-alkil, N-alkil veya O-alkil-O-alkil olup, burada alkil, alkenil ve alkinil ikameli ya da ikamesiz C1 ila Cm alkil ya da C2 ila Cu) alkenil ve alkinil olabilir. Bu tip belirli durumlarda, bu tip ornatiklar sekerin 2' konumundadir.

Belirli durumlarda, modifiye nükleositler, sekerin 2' konumunda bir ornatik içerir. Belirli durumlarda, bu tip ornatiklar sunlarin arasindan seçilir: (F dahil olmak üzere ancak bununla sinirli kalmamak kaydiyla) bir halojenür, alil, amino, azido, tiyo, O-alil, O-Cy4h0 alkil, -OCF3, O-(CHüz-O- CH3, 2'-O(CH- N(Rm)(Rn) olup, burada her bir Rm ve Rn, bagimsiz olarak, H veya ikameli ya da ikamesiz Ci-Cm alkildir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamada kullanim için faydali modifiye nükleositler sunlardir: 2-metoksietoksi, 2'-O-metil (2'-O-CH3)i 2'-floro (2'-F).

Belirli durumlarda, modifiye nükleositler 2' konumunda sunlardan seçilen bir ornatik grubuna sahiptir: O[(CH2L&HmCHL O(CH2thh, O(CH2)nCH3, O(CH2)nONH2, OCHzC(=O)N(H)CH3 ve O(CHünON[(CHdnCH3]2 olup, burada 11 ve In ]_ ila yaklasik 10 arasindadir. Diger 2'-seker ornatik gruplarina sunlar dahildir: C1 ila (ho alkil, ikameli alkil, alkenil, alkinil, alkaril, aralkil, O-alkaril veya O-aralkil, SH, SCH3, OCN, Cl, heterosikloalkil, heterosikloalkaril, aminoalkilamino, polialkilamino, ikameli silil, bir RNA yarma grubu, bir haberci grubu, bir araya ekleyici, farmakoniketik özelliklerin gelistirilmesi için bir grup veya bir oligomerik bilesigin farmakodinamik özelliklerinin gelistirilmesi için bir grup ve benzer özelliklere sahip diger ornatiklar.

Belirli durumlarda, modifiye nükleositler bir 2'-MOE yan zincir içerir (Baker et al., J. Biol. Chem., l997, 272, ll944- lZOOO). Bu tip 2'-MOE ikamesi, modifiye edilmemis nükleositlere ve 2'-O-metil, O-propil ve O-aminopropil gibi diger modifiye nükleositlere kiyasla gelismis baglanma afinitesine sahip olarak tarif edilmistir. 2'-MOE ornatikina sahip oligonükleotidlerin ayrica, gen ekspresyonunun, in vivo kullanim için umut vaat eden özelliklere sahip antisens inhibitörleri oldugu da gösterilmistir (Martin, P., Helv. 917-926).

Belirli durumlarda, 2'-seker ornatik gruplari ya arabino (yukari) konumdadir ya da ribo (asagi) konumdadir. Bu tip belirli durumlarda, bir 2'-arabino modifikasyonu 2'-F arabinodur (FANA). Benzer modifikasyonlar ayrica seker üzerindeki diger konumlarda da, özellikle bir 3' terminal nükleosit üzerindeki veya 2'-5' bagli oligonükleotidlerdeki 3' konumunda ve 5' terminal nükleotidin 5' konumunda yapilabilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamada kullanim için uygun nükleositler, ribofuranosil sekerin yerine siklobütil gibi seker vekillerine sahiptir. Bu tip modifiye seker yapilarinin hazirlanmasini ögreten örnek niteligindeki U.S. Patentlerine, Belirli durumlarda, mevcut açiklama, sekerin 2'-konumunda bir modifikasyon içeren nükleositler saglar. Belirli durumlarda, açiklama, sekerin 5'-konumunda bir modifikasyon içeren nükleositler saglar. Belirli durumlarda, açiklama, sekerin 2'- konumunda ve 5'-konumunda modifikasyonlar içeren nükleositler saglar. Belirli durumlarda, modifiye nükleositler oligonükleotidlerin içine katilmak için faydali olabilir.

Belirli durumlarda, modifiye nükleositler oligonukleotidlerin içine, oligonükleotidin 5'-ucunda katilir. b. Belirli Nükleosit Arasi Baglantilar Mevcut açiklamanin antisens oligonükleotidleri opsiyonel olarak, bir ya da daha fazla modifiye nükleosit arasi baglanti ihtiva edebilir. Baglayici gruplarin iki ana sinifi, bir fosfor atomunun varligi ya da yokluguyla tanimlanir. Temsilci fosfor ihtiva eden baglantilara, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, fosfodiesterler (P=O), fosfotriesterler, metilfosfonatlar, fosforamidat ve fosforotioatlar (P=S) dahildir. Temsilci fosfor ihtiva etmeyen baglayici gruplara, bunlarla sinirli kalmamak. kaydiyla, metilenmetilimino (-CH2- N(CH3)-O-CH2-), tiyodiester (-O-C(O)-S-), tiyonokarbamat (-O- C(O)(NH)-S-); siloksan (-O-Si(H)2-O-) ve N,N'-dimetilhidrazin (-CH2-N(CH3)-N(CH3)-) dahildir. Fosfor-olmayan baglayici gruplara sahip oligonükleotidler, oligonukleositler olarak ifade edilir. Modifiye baglantilar, dogal fosfodiester baglantilarina. kiyasla, oligonükleotidlerin. nükleaz direncini degistirmek, tipik olarak arttirmak için kullanilabilir.

Belirli durumlarda, bir kiral atomuna sahip baglantilar rasemik karisimlar olarak, ayri enantiomerler olarak hazirlanabilir. Temsilci kiral baglantilara, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, alkilfosfonatlar ve fosforotioatlar dahildir. Fosfor-ihtiva eden ve fosfor-ihtiva etmeyen baglantilarin hazirlanma yöntemleri teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir.

Burada tarif edilen antisens oligonükleotidler, bir ya da daha fazla asimetrik merkez ihtiva eder ve böylelikle enantiomerlere, diastereomerlere ve mutlak stereokimya açisindan, seker anomerleri gibi (R) ya da (S) olarak veya amino asitler et al. gibi (D) ya da (L) olarak tanimlanabilen diger stereoizomerik yapilandirmalara sebebiyet verir. Burada saglanan antisens bilesiklere, tüni bu tip olasi izomerlerin yani sira bunlarin rasemik ve optik olarak saf formlari dahildir.

Belirli durumlarda, antisens oligonükleotidler en az bir modifiye nükleosit arasi baglantiya sahiptir. Belirli durumlarda, antisens oligonükleotidler en az 2 modifiye nükleosit arasi baglantiya sahiptir. Belirli durumlarda, antisens oligonükleotidler en az 13 modifiye nükleosit arasi baglantiya sahiptir Belirli durumlarda, antisens oligonükleotidler en az 10 modifiye nükleosit arasi baglantiya sahiptir. Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotidin her bir nükleosit arasi baglantisi, bir modifiye nükleosit arasi baglantidir. Belirli durumlarda, bu tip modifiye nükleosit arasi baglantilar fosforotioat baglantilardir. c. Uzunluklar Belirli durumlarda, mevcut açiklama, çesitli araliklarda uzunluklarin herhangi birinde antisens oligonükleotidler saglamaktadir. Belirli durumlarda, açiklama, X-Y bagli nükleositler içeren ya da bunlardan olusan antisens bilesikler ya da antisens oligonükleotidler saglamakta olup, burada X ve Y'nin her biri bagimsiz olarak, X belirli durumlarda, açiklama, asagidakileri içeren veya onlardan olusan antisens bilesikler veya antisens 29-30 bagli nükleositler.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin antisens bilesikleri veya antisens oligonükleotidleri 15 nükleosit uzunlugundadir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin antisens bilesikleri veya antisens oligonükleotidleri 16 nükleosit uzunlugundadir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin antisens bilesikleri veya antisens oligonükleotidleri 17 nükleosit uzunlugundadir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin antisens bilesikleri veya antisens oligonükleotidleri 18 nükleosit uzunlugundadir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin antisens bilesikleri veya antisens oligonükleotidleri 19 nükleosit uzunlugundadir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin antisens bilesikleri veya antisens oligonükleotidleri 20 nükleosit uzunlugundadir. d. Belirli Oligonükleotid Motifleri Belirli durumlarda, antisens oligonükleotidler, uzunluklari boyunca spesifik yönlendirmelerde düzenlenen kimyasal olarak modifiye alt birimlere sahiptir. Belirli durumlarda, açiklamanin antisens oligonükleotidleri tamamen modifiyedir.

Belirli durumlarda, açiklamanin antisens oligonükleotidleri esit olarak modifiyedir. Belirli durumlarda, açiklamanin antisens oligonükleotidleri esit olarak modifiyedir ve her bir nükleosit bir 2'-MOE seker bölütü içerir. Belirli durumlarda, açiklamanin antisens oligonükleotidleri esit sekilde modifiyedir ve her bir nükleosit bir 2'-OMe seker bölütü içerir. Belirli durumlarda, açiklamanin antisens oligonükleotidleri esit sekilde modifiyedir ve her bir nükleosit bir morfolino seker bölütü içerir.

Belirli durumlarda, açiklamanin oligonükleotidleri bir degisen motif içerir. Bu tip belirli durumlarda, degisen modifikasyon tipleri, 2'-MOE, 2'-F, bir bisiklik sekeri-modifiye nükleosit ve DNA (modifiye edilmemis 2'-deoksi) arasindan seçilir. Bu tip belirli durumlarda, her bir degisen bölge bir tek nükleosit içerir.

Belirli durumlarda, açiklamanin oligonükleotidleri, bir birinci tipteki nükleositlerin bir ya da daha fazla blogunu ve bir ikinci tipteki nükleositlerin bir ya da daha fazla blogunu Belirli durumlarda, bir degisen motifteki bir ya da daha fazla degisen bölge, bir tipteki bir tek nükleositten daha fazlasini içerir. Örnegin, mevcut açiklamanin oligomerik bilesikleri, asagidaki nükleosit motiflerin herhangi birinden bir ya da daha fazla bölge içerebilir: NU1 NU2 Nui NU2 NU1 Nui; Nuz Nui NU2 NU2 Nui Nui Nuz Nuz Nui NuZ NuiNU2 Nui Nui veya burada Nui bir birinci tipte bir nükleosittir ve NU2 bir ikinci tipte bir nükleosittir. Belirli durumlarda, NU1 ve Nu2'nin biri bir 2'-MOE nükleosittir ve Nu1 ve NU2'nin digeri sunlardan seçilir: bir 2'-OMe modifiye nükleosit, BNA ve bir modifiye edilmemis DNA veya RNA nükleosidi. 2. Oligomerik Bilesikler Belirli durumlarda, mevcut açiklama Oligomerik bilesikler saglamaktadir. Belirli durumlarda, Oligomerik bilesikler yalnizca bir oligonükleotidden olusur. Belirli durumlarda, bir Oligomerik bilesik bir oligonükleotid ve bir ya da daha fazla konjugat ve/veya terminal grubu içerir. Bu tip konjugat ve/veya terminal gruplari, yukarida Hüzakere edilen kimyasal motiflerin herhangi birine sahip oligonükleotidlere eklenebilir. Böylelikle, örnegin, degisen nükleositlerin bölgesine sahip bir oligonükleotid içeren bir Oligomerik bilesik bir terminal grubu içerebilir. a. Belirli Konjugat Gruplari Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin oligonükleotidleri bir ya da daha fazla konjugat grubunun eklenmesiyle modifiye edilir. Genel olarak, konjugat gruplari eklenen oligomerik bilesigin, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, farmakodinamikleri, farmakokinetikleri, kararliligi, baglanmasi, emilimi, hücresel dagilimi, hücresel tutulumu, yüklenmesi ve klirensi dahil olmak üzere bir ya da daha fazla özelligini modifiye eder. Konjugat gruplari kimyasal tekniklerde rutin olarak kullanilir ve bir oligonükleotid gibi bir oligomerik bilesik gibi bir ana bilesige dogrudan veya bir opsiyonel konjugat baglanti bölütü vasitasiyla baglanir.

Konjugat gruplarina, sinirlama olmadan, araya ekleyiciler, haberci moleküller, poliaminler, poliamidler, polietilen glikoller, tiyoeterler, polieterler, kolesteroller, tiyokolesteroller, kolik asit bölütleri, folat, lipitler, fosfolipitler, biyotin, fenazin, fenantridin, antrakinon, adamantan, akridin, floresinler, rodaminler, kumarinler ve boyalar dahildir. Belirli konjugat gruplari daha önce tarif edilmistir, örnegin: kolesterol bölütü (Letsinger et al., (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053- 1060), bir tiyoeter, örnegin heksil-S-tritiltiol (Manoharan et tiyokolesterol (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), bir alifatik zincir, örnegin do-dekan-diol veya undesil kalintilari (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, fosfolipit, örnegin di-heksadesil-ras-gliserol veya trietil- amonyum 1,2-di-O-heksadesil-ras-glisero-3-H-fosfonat poliamin veya bir polietilen glikol zinciri (Manoharan et al., asetik asit (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), bir palmitil bölütü (Mishra et al., Biochim. veya heksilamino-karbonil-oksikolesterol bölütü (Crooke et Belirli durumlarda, bir konjugat grubu bir etken ilaç maddesi, örnegin, aspirin, varfarin, fenilbütazon, ibuprofen, suprofen, fen-büfen, ketoprofen, (S)-(+)-pranoprofen, karprofen, dansilsarkozin, 2,3,5-triiodobenzoik asit, flufenamik asit, folinik asit, bir benzotiadiazid, klorotiazid, bir diazepin, indo-metisin, bir barbitürat, bir sefalosporin, bir sülfa ilaci, bir antidiyabetik, bir antibakteriyel veya bir antibiyotik içerir. Oligonükleotid-ilaç konjugatlari ve bunlarin hazirlanmasi, US 6.656.730 olarak yayinlanan U.S.

Patent Basvurusu 09/334.l30'da tarif edilmektedir.

Oligonükleotid konjugatlarin hazirlanmasini ögreten örnek niteligindeki U.S. Patentlerine, bunlarla sinirli kalmamak dahildir.

Konjugat gruplari ya bir oligonukleotidin her iki ucuna (terminal konjugat gruplari) ve/veya herhangi bir dahili konuma eklenebilir. b. Terminal Gruplari Belirli durumlarda, oligomerik bilesikler bir ya da her iki uçta terminal gruplari içerir. Belirli durumlarda, bir terminal grubu, yukarida müzakere edilen konjugat gruplarinin herhangi birini içerebilir. Belirli durumlarda, terminal gruplari ilave nükleositler ve/veya evirtik abazik nükleositler içerebilir. Belirli durumlarda, bir terminal Belirli durumlarda, oligomerik bilesikler, örnegin nükleaz kararlilik gibi özellikleri güçlendiren bir ya da daha fazla terminal dengeleyici grup içerir. Dengeleyici gruplara baslik yapilari dahildir. Burada kullanildigi sekliyle “baslik yapisi" ya da “terminal baslik bölütu” terimleri, bir oligomerik bilesigin bir ya da her iki ucuna eklenebilen kimyasal modifikasyonlari ifade etmektedir. Bu tip belirli terminal modifikasyonlari, terminal nükleik asit bölütlerine sahip oligomerik bilesikleri eksonükleaz degradasyonundan korur ve bir hücre içerisinde aktarima ve/Veya lokalizasyona yardim edebilir. Baslik 5'-ucunda (5'-basligi) veya 3'-ucunda (3'-basligi) mevcut olabilir veya her iki uçta mevcut olabilir. (Daha fazla ayrinti için bakiniz, Wincott et al., Tetrahedron 49, 1925; U.S. Patent Basvurusu Yayini US Belirli durumlarda, bir ya da daha fazla ilave nükleosit, bir oligomerik bilesigin bir oligonükleotidinin bir ya da her iki terminal ucuna eklenir. Bu tip ilave terminal nükleositler burada, terminal-grubu nükleositleri olarak ifade edilmektedir. Bir çift-sarmalli bilesikte, bu tip terminal- grubu nükleositleri terminal (3' ve/veya 5') sarkmalaridir. Çift-sarmalli antisens bilesiklerin ayarlanmasinda, bu tip terminal-grubu nükleositler bir hedef nükleik aside tamamlayici olabilir ya da olmayabilir. Belirli durumlarda, terminal grubu bir nükleosit-olmayan terminal grubudur. Bu tip terminal-olmayan gruplar, bir nükleositten farkli herhangi bir terminal grubu olabilir. c. Oligomerik Bilesik Motifleri Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin Oligomerik bilesikleri bir motif içerir: Ti-(NUihu-(NU2LQ-(NUihß-(NU2)m-(Nuihß-T2, Nui, bir birinci tipte bir nükleosittir; Nuz, bir ikinci tipte bir nükleosittir; nl ve n5'in her biri, bagimsiz olarak 0 ila 3 arasindadir; n2 arti n4 toplami 10 ila 25 arasindadir; n3 0 ila 5 arasindadir ve her bir Ti ve T2, bagimsiz olarak, H, bir hidroksil koruyucu grup, bir opsiyonel olarak bagli konjugat grubu veya bir basliklama grubudur.

Bu tip belirli durumlarda, n2 ve n4'ün toplami 13 ya da l4'tür; nl 2'dir; n3 2 ya da 3'tür ve n5 2'dir. Bu tip belirli durumlarda, mevcut açiklamanin Oligomerik bilesikleri, Tablo A'dan seçilen bir motif içerir.

Tablo A 2 16 O 0 2 2 2 3 11 2 2 5 3 8 2 Tablo A 2 8 3 5 2 2 11 3 2 2 2 9 3 4 2 2 10 3 3 2 2 3 3 10 2 2 4 3 9 2 2 6 3 7 2 2 7 3 6 2 2 8 6 2 2 2 2 2 12 2 2 3 2 11 2 2 4 2 10 2 2 5 2 9 2 2 6 2 8 2 2 7 2 7 2 2 8 2 6 2 2 9 2 5 2 2 10 2 4 2 2 11 2 3 2 2 12 2 2 2 Tablo A'nin amaci, mevcut açiklamayi örneklemek ancak sinirlamamaktir. Tablo A'da gösterilen oligomerik bilesiklerin her biri 20 nükleosit içerir. Daha fazla ya da daha az nükleosit içeren oligomerik bilesikler, nl-nS'ih, biri ya da daha fazlasi için farkli sayilarda nükleosit seçerek kolayca tasarlanabilir. Belirli durumlarda, Nui ve NU2'nin her biri sunlar arasindan seçilir: 2'-MOE, 2'-OMe, DNA ve bir bisiklik nükleosit. 3. Antisens Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin oligomerik bilesikleri antisens bilesiklerdir. Dolayisiyla, bu tip durumlarda, oligomerik bilesikler bir hedef nükleik asitle melezlenir ve bu da bir antisens aktivitesiyle sonuçlanir. a. Melezleme Belirli durumlarda, açiklama, antisens bilesigin özgül baglanmanin arzu edildigi kosullar, yani, in vivo tayinler veya terapötik tedavi durumundaki fizyolojik kosullar altinda ve tayinlerin jii vitro tayinler` durumunda gerçeklestirildigi kosullar altinda hedef-olmayan nükleik asit dizilerine özgül- olmayan baglanmasini önlemek için yeterli tamamlayicilik derecesi oldugunda bir hedef nükleik aside özgül olarak melezlenen antisens bilesikler saglamaktadir.

Böylelikle, “siki melezleme kosullari” veya “siki kosullar”, bir antisens bilesigin bir hedef diziye, ancak minimal sayida diger dizilere melezlendigi kosullar anlamina gelmektedir.

Siki kosullar dizi-bagimlidir ve farkli durumlarda farkli olacaktir ve antisens oligonükleotidlerin bir hedef diziye melezlendigi “siki kosullar”, antisens oligonükleotidlerin yapisi ve bilesimiyle ve incelendikleri tayinlerle belirlenir.

Teknikte, nükleotid afinite Inodifikasyonlarinin. katilmasinin, modifiye edilmemis bir bilesige kiyasla daha çok sayida uyumsuzluga neden olabilecegi anlasilmaktadir. Benzer sekilde, belirli nükleobaz dizileri uyumsuzluklara karsi diger nükleobaz dizilerinden daha toleransli olabilir. Teknikte normal uzmanliga sahip bir kisi oligonükleotidlerin arasindaki veya bir antisens oligonükleotid ile bir hedef nükleik asit arasindaki uyumsuzluklarin uygun bir sayisini, mesela erime sicakligini (Tm) belirleyerek belirleyebilir. Tm veya ATm, teknikte normal uzmanliga sahip bir kisiye asina olan tekniklerle hesaplanabilir. Örnegin, Freier et al. (Nucleic teknikler, teknikte normal uzmanliga sahip bir kisinin, nükleotid modifikasyonlarini, bir RNAzDNA ikilisinin erime sicakligini arttirabilme yetilerini degerlendirmesine olanak b. ön-mRNA Isleme Belirli durumlarda, burada saglanan antisens bilesikler bir ön-mRNA'ya tamamlayicidir. Belirli durumlarda, bu tip antisens bilesikler ön-mRNA'nin uç birlestirmesini degistirebilir. Bu tip belirli durumlarda, bir` hedef ön-mRNA'ya karsilik gelen bir olgun mRNA'nin bir varyantinin o olgun mRNA'nin bir baska varyantina orani degistirilir. Bu tip belirli durumlarda, hedef ön-mRNA'dan eksprese edilen bir proteinin bir varyantinin proteinin bir baska varyantina orani degistirilir.

Bir ön-mRNA'nin uç birlestirmesini degistirmek için kullanilabilen belirli oligomerik bilesikler ve nükleobaz et al., American J. of Human Genetics (April 2008) 82, 1-15'te bulunabilir. Belirli durumlarda, uç birlestirmeyi degistiren antisens dizileri, mevcut açiklamanin motiflerine göre modifiye edilir.

Antisens, bir ya da daha fazla spesifik gen ürününün ekspresyonunun module edilmesi için etkili bir araçtir ve bir dizi terapötik, tanisal ve arastirma uygulamalarinda benzersiz sekilde faydalidir. Burada, gen ekspresyonunu, hedef isgaline dayali antisens mekanizmalari dahil olmak üzere antisens mekanizmalarinin eylemi vasitasiyla modüle etmek için faydali antisens bilesikler saglamaktadir. Bir yönde, burada saglanan antisens bilesikler bir hedef genin uç birlestirmesini modüle eder. Bu tip modülasyona, ekson inklüzyonunun tesvik edilmesi veya önlenmesi dahildir. Burada ayrica, eksonik uç birlestirme güçlendiricileri, eksonik uç birlestirme susturuculari, intronik uç birlestirme güçlendiricileri ve intronik uç birlestirme susturuculari dahil olmak üzere, ön-mRNA moleküllerinde mevcut cis uç birlestirme düzenleyici ögelerine hedeflenen antisens bilesikler de saglanmaktadir. Cis uç birlestirme düzenleyici ögelerinin bozulmasinin, uç birlestirme ürünlerinin bilesiminde bir degisiklige yol açabilecek sekilde uç birlestirme alani seçimini degistirdigi düsünülmektedir. Ökaryotik ön-mRNA'larin islenmesi, uygun mRNA uç birlestirmesini elde etmek için çok sayida sinyal ve protein faktörü gerektiren karmasik bir islemdir. Uç birlestirme-zom tarafindan ekson tanimlanmasi, intron-ekson sinirlarini tanimlayan kanonik uç birlestirme sinyallerinden daha fazlasini gerektirir. Bu tip bir ilave sinyal, cis-görevi gören düzenleyici güçlendirici ve susturucu dizileri tarafindan saglanir. Alanlarina ve etki sekillerine bagli olarak uç birlestirme donör alanlarinin veya üç birlestirme alici alanlarin kullanimini ya baskilayan ya da güçlendiren eksonik uç birlestirme güçlendiriciler (ESE), eksonik uç birlestirme susturucular (ESS), intronik uç birlestirme güçlendiriciler (ISE) ve intron uç birlestirme susturucular (ISS) tanimlanmistir (Yeo et al. 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. faktörler) bu düzenleyici dizilere baglanmasi, ya belirli uç birlestirme alanlarinin kullanimini tesvik ederek ya da önleyerek ve böylelikle uç birlestirme ürünlerinin oranini modüle ederek uç birlestirme islemini yönetir (Scamborova et 4. Farmasötik Bilesimler Belirli durumlarda, mevcut açiklama, bir ya da daha fazla antisens bilesik içeren farmasötik bilesimler saglamaktadir.

Belirli durumlarda, bu tip farmasötik. bilesimler bir steril salin solüsyonu ve bir ya da daha fazla antisens bilesik içerir. Belirli durumlarda, bu tip farmasötik bilesimler, bir steril salih solüsyonundan ve bir ya da daha fazla antisens bilesikten olusur.

Belirli durumlarda, antisens bilesikler, farmasötik bilesimlerin ya da formulasyonlarin hazirlanmasi için farmakolojik olarak kabul edilen etken ve/veya etkisiz maddelerle eklenerek karistirilabilir. Farmasötik bilesimlerin formülasyonu için bilesimler ve yöntemler, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, verilis yolu, hastaligin derecesi veya verilecek olan doz dahil olmak üzere bir dizi kriterlere baglidir.

Belirli durumlarda antisens bilesikler, bu tip oligomerik bilesikleri uygun bir farmakolojik olarak kabul edilen seyreltici veya tasiyiciyla birlestirilerek farmasötik bilesimler içinde kullanilabilir. Farmakolojik olarak kabul edilen bir seyrelticiye fosfat-tamponlu salin (PBS) dahildir.

PBS, parenteral olarak aktarilacak olan bilesimlerde kullanim için faydali bir seyrelticidir. Dolayisiyla, belirli durumlarda, burada tarif edilen yöntemlerde, bir antisens bilesik ve farmakolojik olarak kabul edilen bir seyreltici içeren bir farmasötik bilesim kullanilmaktadir. Belirli durumlarda, farmakolojik olarak kabul edilen seyreltici PBS'tir.

Antisens bilesikler içeren farmasötik bilesimler, farmakolojik olarak kabul edilen herhangi tuzlari, esterleri veya bu tip esterlerin tuzlarini kapsar. Belirli durumlarda, antisens bilesikler içeren farmasötik bilesimler, bir insan dahil olmak üzere bir hayvana verilisi üzerine, (dogrudan ya da dolayli olarak) biyolojik olarak aktif metaboliti veya bunun kalintisini saglayabilen bir ya da daha fazla oligonükleotid içerir. Dolayisiyla, örnegin, açiklama ayrica, antisens bilesiklerin farmakolojik olarak kabul edilen tuzlarina, prodroglara, bu tip prodroglarin farmakolojik olarak kabul edilen tuzlarina ve diger biyomuadillerine de yakindir. Uygun farmakolojik olarak kabul edilen tuzlara, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, sodyum ve potasyum tuzlari dahildir.

Bir prodrog, etken antisens oligomerik bilesik olusturmak için ilave nükleositlerin, bir oligomerik bilesigin Vücut içerisindeki endojen nükleazlar tarafindan yarilan bir ;%1 da her iki ucunda katilmasini içerebilir.

Lipit-bazli vektörler nükleik asit terapilerinde çesitli yöntemlerle kullanilmistir. Örnegin, bir yöntemde, nükleik asit önceden olusturulmus lipozomlarin veya katyonik lipitlerin ve nötr lipitlerin karisimlarindan yapilan lipoplekslerin içine eklenir. Bir baska yöntemde, mono- veya poli-katyonik lipitlere sahip DNA kompleksleri, bir nötr lipidin varligi olmadan olusturulur.

Belirli preparasyonlar, Akinc et al., Nature Biotechnology 26, . Bir Süjeye verilis Belirli durumlarda, bir ya da daha fazla antisens bilesik içeren farmasötik bilesimler bir süjeye verilir. Belirli durumlarda, bu tip farmasötik bilesimler enjeksiyonla verilir.

Belirli durumlarda, bu tip farmasötik bilesimler infüzyonla Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler CSF'nin içine enjeksiyonla ya da infüzyonla verilir. Bu tip belirli durumlarda, farmasötik bilesimler omurganin içine dogrudan enjeksiyon ya da infüzyonla verilir. Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler beynin içine enjeksiyon ya da infüzyonla verilir. Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler omurilik dokusunun kendisinden ziyade intratekal enjeksiyon ya da infüzyonla verilir. Teoriyle sinirli kalmaksizin, belirli durumlarda, antisens bilesik çevreleyen CSF'nin içine salinir ve omurilik parankimasinin içine nüfuz edebilir. Intratekal aktarimin ek bir avantaji, intratekal rutinin, insanlarda halihazirda rutin kullanim. olan lomber ponksiyon verilisini (yani, omurilikten sivi alma) taklit etmesidir.

Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyon veya infüzyonla verilir. Bir ya da daha fazla antisens bilesik içeren bir farmasötik bilesimin intraserebroventriküler ya da intraventriküler aktarilmasi, beynin, beyin-omurilik sivisiyla (CSF) dolu karinciklarinin herhangi birinde ya da daha fazlasinda gerçeklestirilebilir. CSF, karinciklari dolduran berrak bir sividir, subaraknoid boslukta mevcuttur ve beyinle omuriligi çevreler. CSF, koroid damar aglari tarafindan ve doku sivisinin beyin tarafindan karinciklarin içine akitilmasi veya iletilmesi vasitasiyla üretilir. Koroid damar agi, lateral karincigin tabanini ve üçüncü ve dördüncü karinciklarin çatisini kaplayan bir yapidir. Belirli çalismalar, bu yapilarin, merkezi sinir sistemi bosluklarini günde dört kez doldurmak için bir` miktarla tutarli sekilde10 günde 400-600 cc sivi üretebildigini göstermistir. Yetiskin insanlarda, bu sivinin hacmi, 125 ila 150 ml (4-5 ons) olarak hesaplanmistir. CSF kesintisiz olusum, dolasim ve emilim içindedir. Belirli çalismalar, her gün CSF'nin yaklasik 430 ila 450 ml'sinin (neredeyse 2 bardak) üretilebildigini göstermistir. Belirli hesaplamalar, üretimin yetiskinlerde yaklasik dakikada 0,35 ml'ye ve bebek insanlarda dakikada 0,15 ml'ye esit oldugunu hesaplamistir. Lateral karinciklarin koroid damar aglari CSF'nin çogunlugunu üretir. Monro forameni üzerinden, üretimle üçüncü karinciga eklendigi üçüncü karincigin içine akar ve Silvius kanali üzerinden dördüncü karinciga devam eder. Dördüncü karincik daha fazla CSF ekler; sivi daha sonra Magendie ve Luschak forameni üzerinden subaraknoid. boslugun içine gider. Daha sonra beynin tabani çevresinde, omurilik çevresinde asagi ve serebral yarikürelerin üzerinde yukari dogru devridaim yapar. CSF, araknoid killi çikintilar ve intrakraniyal vasküler sinüsler vasitasiyla kana bosalir.

Belirli durumlarda, bu tip farmasötik bilesimler sistemik olarak verilir. Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler subkütan olarak verilir. Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler intravenöz olarak verilir. Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler intramusküler enjeksiyonla verilir.

Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler hem dogrudan CSF'ye (örnegin IT ve/veya ICV enjeksiyonu ve/veya infüzyonu) hem sistemik olarak verilir.

Belirli durumlarda, sistemik olarak verilen bir antisens bilesik nöronlara girer. Belirli durumlarda, sistemik olarak verilen antisens bilesikler, özellikle kan-beyin bariyerinin tamamen olusmadigi genç süjelerde (örnegin in utero süjelerde ve/veya yenidogan süjelerde) kan-beyin bariyerine nüfuz edebilir. Belirli durumlarda, sistemik olarak verilen antisens bilesigin bir miktari, kan-beyin bariyerinin tam olarak olustugu süjelerde bile sinir hücreleri tarafindan alinabilir. Örnegin, antisens bilesikler bir nörona, nöromusküler kavsakta ya da yakininda girebilir (retrogradi tutulum). Belirli durumlarda, bu tip retrograd tutulum, bununla sinirli kalmamak kaydiyla, bir motor nöronu dahil olmak üzere nöronun içinde antisens aktivitesiyle sonuçlanir ve nöron içinde antisens aktiviteyle terapötik bir fayda saglar.

Belirli durumlarda, sistemik verilis, nöronlardan farkli hücrelerde ve/veya dokularda meydana gelen antisens aktiviteyle terapötik fayda saglar. Kanitlar, nöronlarin içindeki fonksiyonel SMN'nin normal nöron fonksiyonu için gerekli oldugunu ortaya koyarken, diger hücrelerde ve dokularda indirgenmis fonksiyonel SMN'nin sonuçlari iyi karakterize degildir. Belirli durumlarda, nöronal-olmayan hücrelerdeki antisens aktivite, o nöronal-olmayan hücrelerde SMN fonksiyonunun restorasyonuyla sonuçlanir ve bu da Belirli durumlarda, nöronal-olmayan hücrelerdeki gelismis SMN fonksiyonu, nöronlarin içindeki SMN fonksiyonu gelismis olsun ya da olmasin gelismis nöronal hücre fonksiyonu saglar. Örnegin, belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimlerin sistemik verilisi, kas hücrelerinde antisens aktiviteyle sonuçlanir. Kas hücrelerindeki bu tip antisens aktivite, o kas hücresiyle iliskili motor-nöronlara veya genel olarak nöronlara bir fayda saglayabilir. Bu tip durumlarda, tamir edilmis SMN fonksiyonuna sahip kas hücresi, nöronal viyabiliteyi ve/veya fonksiyonu gelistiren bir faktör saglayabilir. Belirli durumlarda, bu tip antisens aktivite, nöronlarin içindeki antisens bilesiklerden meydana gelen antisens aktivitesinden saglanan faydadan bagimsizdir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimlerin sistemik verilisi, nöronlarla yakin iliskide olmayan hücreler dahil olmak üzere, diger nöronal-olmayan hücrelerde antisens aktiviteyle sonuçlanir. Nöronal-olmayan hücrelerdeki bu tip antisens aktivite nöronlarin fonksiyonunu gelistirebilir. Örnegin, bir nöronal-olmayan hücredeki (örnegin karaciger hücresi) antisens aktivite, o hücrede nöronlarin fonksiyonunu gelistiren bir faktör üretilmesiyle sonuçlanabilir Not: içerdiginden, hiç antisens bilesik nörona girmese bile nöronal fonksiyona bir fayda bir “antisens aktivitedir”.

Belirli durumlarda, bir farmasötik bilesimin sistemik verilisi, nöronlarda dogrudan veya dolayli antisens aktivitelerden bagimsiz terapötik faydayla sonuçlanir. Tipik olarak, SMA'nin ayarlanmasinda, nöronal fonksiyon, kayda deger semptomlarla sonuçlanacak sekilde azalir. Ilave semptomlar diger hücrelerdeki azalan SMN aktivitesinden kaynaklanabilir.

Bu tip belirli semptomlar, azalan nöronal fonksiyondan kaynaklanan semptomlarin bagil ciddiyetiyle gizlenebilir.

Belirli durumlarda, sistemik 4verilis, nöronal-olmayan hücrelerde tamir edilmis veya gelistirilmis SMN fonksiyonuyla sonuçlanir. Bu tip belirli durumlarda, nöronal-olmayan hücrelerdeki bu tip tamir edilmis veya gelistirilmis SMN fonksiyonu terapötik faydaya sahiptir. Örnegin, belirli durumlarda, SMA'si olan süjeler azalmis büyümeye sahiptir. Bu tip azalmis büyüme, nöronal hücrelerdeki azalan fonksiyondan kaynaklanmayabilir. Aslinda, azalmis büyüme, hipofiz bezi gibi bir baska organdaki hücrelerin bozulmus fonksiyonuyla ilgili olabilir ve/Veya vücudun hücreleri boyunca SMN yetersizliklerinin sonucu olabilir. Bu tip durumlarda sistemik uygulama, hipofiz hücrelerinde ve/Veya diger hücrelerde düzelmis SMN aktivitesi ile sonuçlanabilir, bu da artmis büyüme ile sonuçlanir. Bu tip durumlarda, CSF'ye verilis, bir süjenin daha uzun yasamasini saglamakr için yeterli nöronal fonksiyonu tamir eder, ancak süjeler çogunlukla bu tip semptomlar görünmeden önce Öldügü için daha önceden bilinmeyen bir ya da daha fazla semptom ortaya çikar çünkü süje daha uzun yasar. Bu tip ortaya çikan semptomlar ölümcül olabilir.

Belirli durumlarda, ortaya çikan semptomlar sistemik verilisle tedavi edilir. Mekanizmaya bakilmaksizin, belirli durumlarda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, bozulmus nöronal fonksiyonla iliskili daha ciddi semptomlar tarafindan önceden gizlenen semptomlar dahil olmak üzere SMA'nin çesitli semptomlari sistemik verilisle tedavi edilebilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimlerinin sistemik verilisi, kas hücrelerinde artan SMN aktivitesiyle sonuçlanir. Belirli durumlarda, kas hücrelerindeki bu tip gelismis SMN aktivitesi terapötik fayda saglar. Yalnizca kastaki gelismis SMN aktivitesinin, terapötik fayda saglamak için yetersiz oldugu bildirilmistir (e.g., Belirli durumlarda, mevcut açiklama, kasta gelismis SMN fonksiyonuyla sonuçlanan ve terapötik fayda saglayan yöntemler saglamaktadir. Belirli durumlarda, terapötik fayda, diger hücrelerdeki (tek basina ya da kas hücreleriyle kombinasyon halinde) gelismis SMN fonksiyonuna atfedilebilir. Belirli durumlarda, yalnizca kastaki gelismis SMN fonksiyonu fayda saglayabilir.

Belirli durumlarda, sistemik verilis gelismis sagkalimla sonuçlanir. 6. Spinal Kas Atrofisi (SMA) SMA, spinal motor nöronlarinin dejenerasyonuyla karakterize bir genetik rahatsizliktir. SMA'ya, SMNl geninin her iki fonksiyonel kopyasinin homozigoz kaybi neden olur. Ancak, SMNZ geni, SMNl ile ayni proteini kodlama potansiyeline sahiptir ve böylelikle SMA hastalarinin genetik kusurunun üstesinden gelir. SMNZ, ekson 7'nin +6 konumunda translasyonel olarak sessiz bir mutasyon (CaT) ihtiva eder ve bu da SMNZ transkriptlerinde ekson 7'nin etkisiz inklüzyonuyla sonuçlanir. Bu nedenle, SMNZ'nin ekson 7'den yoksun olan baskin formu kararsiz ve etkisizdir. Böylelikle, SMN2 uç birlestirmeyi, ekson 7 ihtiva eden SMN2 transkriptlerinin yüzdesinin arttigi sekilde modüle edebilen terapötik bilesikler SMA'nin tedavisi için faydali olacaktir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklama, SMN2 kodlayan bir ön- mRNA'ya tamamlayici antisens bilesikler saglar. Bu tip belirli durumlarda, antisens bilesik SMNZ'nin uç birlestirmesini degistirir. SMNZ'nin uç birlestirmesinin degistirilmesi için yayinlanan PCT/USO6/024469'da bulunabilir. Belirli durumlarda, burada tarif edilen herhangi bir motife sahip oligomerik bilesikler, SMNZ'nin intron 7'sine tamamlayici bir nükleobaz dizisine sahiptir. Bu tip belirli nükleobaz dizileri, asagidaki sinirlayici-olmayan tabloda örneklenmektedir.

Dizi Uzunluk SEQ ID Dizi Uzunluk SEQ ID Mevcut açiklamanin antisens bilesikleri, bir insan gibi bir süjedeki SMNZ ekspresyonunu module etmek için kullanilabilir.

Belirli durumlarda, süjenin spinal kas atrofisi vardir. Bu tip belirli süjelerde, SMNl geni yoktur ya da fonksiyonel SMN proteininin yeterli miktarlarini üretmekte basarisizdir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin antisens bilesikleri SMN2'nin uç birlestirmesini etkili olarak module eder ve bu da SMN2 mRNA'daki ve nihayetinde ekson 7'ye karsilik gelen amino asitler içeren SMN2 proteinindeki ekson. 7 inklüzyonunda .bir artisla sonuçlanir. Bu tip degisen SMNZ proteini dogal-tip SMN proteinine benzer. Mevcut açiklamanin, SMNZ mRNA'nin ekspresyonunu veya ekspresyonun protein ürünlerini etkili sekilde module eden antisens bilesikleri aktif antisens bilesikler olarak degerlendirilmektedir.

SMN2'nin ekspresyonunun modülasyonu, hayvanin hücrelerini, dokusunu veya organini ihtiva edebilen ya da etmeyen bir Vücut sivisinda ölçülebilir. Analiz için vücut sivilari (örnegin tükürük, serum, CSF), dokular (örnegin biyopsi) veya organlar gibi numunelerin alinmasinin yöntemleri ve analize olanak saglamak için numunelerin hazirlanmasinin yöntemleri, teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. RNA ve protein seviyelerinin analizi için yöntemler yukarida müzakere edilmistir ve teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir.

Tedavinin etkileri, açiklamanin bir ya da daha fazla bilesigiyle temas etmis bir hayvandan alinan yukarida belirtilmis sivilardaki, dokulardaki veya organlardaki hedef gen ekspresyonuyla iliskili biyo-belirteçlerin, teknikte bilinen rutin klinik yöntemlerle ölçülmesiyle tayin edilebilir.

Vücut sivilarinin, organlarin veya dokularin, açiklamanin antisens bilesiklerinin ya da bilesimlerinin birinin ya da daha fazlasinin etkili bir miktariyla temas ettigi yöntemler de düsünülmüstür. Vücut sivilari, organlar veya dokular, Vücut sivilarinin, organlarin veya dokularin hücrelerindeki SMN2 ekspresyonunun modülasyonuyla sonuçlanacak sekilde açiklamanin bilesiklerinin biri ya da daha fazlasiyla temas edebilir.

Etkili bir miktar, antisens bilesigin ya da bilesiklerin veya bilesimlerin hedef nükleik asitler veya bunlarin ürünleri üzerindeki module edici etkisinin, teknikte uzman kisi için rutin olan yöntemlerle izlenmesiyle belirlenebilir.

Açiklama ayrica, burada tarif edilen sekildeki yöntemlerin herhangi birinde kullanini için, burada tarif edildigi üzere bir antisens bilesik saglar. Örnegin, açiklama, spinal kas atrofisi (SMA) gibi sagkalim motor nöron proteini (SMN) ile iliskili bir hastaligin ya da durumun tedavisinde kullanim için, insan SMNZ kodlayan bir nükleik aside tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesik saglar.

Bir diger örnek olarak, açiklama, sagkalim motor nöron proteini (SMN) ile iliskili bir hastaligin ya da durumun antisens bilesigin dogrudan merkezi sinir sisteminin (CNS) veya CSF'nin içine verilisiyle tedavisinde kullanim için, insan SMN2 kodlayan bir nükleik aside tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesik saglar.

Açiklama ayrica, burada tarif edilen sekildeki bir antisens bilesigin, burada tarif edilen sekildeki yöntemlerin herhangi birinde kullanim için bir ilacin üretiminde kullanimini da saglamaktadir. Örnegin, açiklama, insan SMN2 kodlayan bir nükleik aside tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin, spinal kas atrofisi (SMA) gibi sagkalim motor nöron proteini (SMN) ile iliskili bir hastaligin ya da durumun tedavi edilmesi için bir ilacin üretiminde kullanimini saglar. Bir diger örnek olarak, açiklama, insan SMN2 kodlayan bir nükleik aside tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin, sagkalim motor nöron proteini (SMN) ile iliskili bir hastaligin ya da durumun, ilacin dogrudan merkezi sinir sisteminin (CNS) ya da CSF'nin içine verilisiyle tedavi edilmesi için bir ilacin üretiminde kullanimini saglar.

Belirli durumlarda, burada tarif› edilen herhangi bir motife sahip oligomerik bilesikler, SMNZ'nin ekson 7'sine tamamlayici bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, buradar tarif' edilen herhangi bir motife sahip oligomerik bilesikler, SMNZ'nin intron 6'sina tamamlayici bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens bilesik, su dizinin en az 10 nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahip bir antisens oligonükleotid içerir: TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO: 1).

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin en az 11 nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin en az 12 nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin en az 13 nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin en az 14 nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin en az 15 nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin en az 16 nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin en az 17 nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin nükleobazlarini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid, bu dizinin nükleobazlarindan olusan bir nükleobaz dizisine sahiptir.

Belirli durumlarda, bir antisens oligonükleotid 10-18 bagli nükleositten olusur` ve su dizinin. bir esit-boy kismina %100 özdes bir nükleobaz dizisine sahiptir: TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ 7. Belirli Süjeler Belirli durumlarda, bir süje SMA'nin bir ya da daha fazla endikatörüne sahiptir. Belirli durumlarda, süje, bir ya da daha fazla kasin azalmis elektriksel aktivitesine sahiptir.

Belirli durumlarda, süje bir mutant SMNl genine sahiptir.

Belirli durumlarda, süjenin SMNl geni yoktur ya da fonksiyonel SMN proteini üretemez. Belirli durumlarda, süjeye genetik bir testle tani konur. Belirli durumlarda, süje kas biyopsisiyle tanimlanir. Belirli durumlarda, bir süje dik oturamaz. Belirli durumlarda, bir süje nefes alman ve/veya yemek yemek için yardima ihtiyaç duyar. Belirli durumlarda, bir süje, kasin elektrofizyolojik ölçümüyle ve/veya kas biyopsisiyle tanimlanir.

Belirli durumlarda, süjenin tip I SMA'si vardir. Belirli durumlarda, süjenin tip II SMA'si vardir. Belirli durumlarda, süjenin tip III SMA'si vardir. Belirli durumlarda, süjeye in utero SMA'si var olarak tani konur. Belirli durumlarda, süjeye dogumdan sonra bir hafta içinde SMA'si var olarak tani konur.

Belirli durumlarda, süjeye dogumun bir ayi içinde SMA'si var olarak tani konur. Belirli durumlarda, süjeye 3 aylikken SMA'si var olarak tani konur. Belirli durumlarda, süjeye 6 aylikken SMA'si var olarak tani konur. Belirli durumlarda, süjeye 1 yasindayken. SMA'si var olarak tani konur. Belirli durumlarda, süjeye 1 ila 2 yasindayken SMA'si var olarak tani konur. Belirli durumlarda, süjeye 1 ila 15 yasindayken SMA'si var olarak. tani konur. Belirli durumlarda, süjeye, süje 15 yasindan büyükken SMA'si var olarak tani konur.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu in utero verilir. Bu tip belirli durumlarda, birinci doz, kan-beyin-bariyerinin tam gelisiminden önce verilir. Belirli durumlarda, birinci doz süjeye sistemik olarak in utero verilir. Belirli durumlarda, birinci doz kan-beyin-bariyerinin, olusumundan sonra il] utero verilir. Belirli durumlarda, birinci doz CSF'ye verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu, süje bir haftaliktan küçükken verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu, süje bir ayliktan küçükken verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu, süje 3 ayliktan küçükken verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu, süje 6 ayliktan küçükken verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu, süje bir yasindan küçükken verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu, süje 2 yasindan küçükken verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu, süje 15 yasindan küçükken verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamaya göre bir farmasötik bilesimin birinci dozu, süje 15 yasindan büyükken verilir. 8. Belirli Dozlar Belirli durumlarda, mevcut açiklama doz miktarlarini ve sikliklarini saglamaktadir. Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler bir bolus enjeksiyon olarak verilir. Bu tip belirli durumlarda, bolus enjeksiyonun dozu, süjenin Vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 25 miligram arasinda antisens bilesiktir. Bu tip belirli durumlarda, bolus enjeksiyonun dozu, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 10 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, doz süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 5 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, doz süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,1 ila 2 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, doz sujenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,5 ila 1 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, bu tip dozlar ayda iki kez verilir. Belirli durumlarda, bu tip dozlar her ay verilir. Belirli durumlarda, bu tip dozlar 2 ayda bir verilir.

Belirli durumlarda bu tip dozlar, 6 ayda bir verilir. Belirli durumlarda, bu tip dozlar CSF'nin içine bolus enjeksiyonla verilir. Belirli durumlarda, bu tip dozlar intratekal bolus enjeksiyonla verilir. Belirli durumlarda, bu tip dozlar bolus sistemik enjeksiyonla (örnegin subkütan, intramusküler veya intravenöz enjeksiyon) verilir. Belirli durumlarda süjeler, CSF'ye bolus enjeksiyonlar ve bolus sistemik enjeksiyonlar alir. Bu tip durumlarda, CSF bolus ve sistemik bolusun dozlari ayni ya da birbirinden farkli olabilir. Belirli durumlarda, CSF ve sistemik. dozlar farkli sikliklarda verilir. Belirli durumlarda, açiklama, en az bir bolus intratekal enjeksiyon ve en az bir bolus subkütan enjeksiyon içeren bir dozlama rejimi saglamaktadir.

Belirli durumlarda, farmasötik bilesimler kesintisiz infüzyonla verilir. Bu tip kesintisiz infüzyon, farmasötik bilesimleri CSF'ye aktaran bir infüzyon pompasiyla basarilabilir. Belirli durumlarda, bu tip infüzyon pompasi farmasötik bilesimi IT veya ICV aktarir. Bu tip belirli durumlarda, verilen doz, günde süjenin Vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 25 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, verilen doz, günde süjenin Vücut agirliginin kilogrami basina 0,1 ila 10 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, verilen doz, günde süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,5 ila 10 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, verilen doz, günde süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,5 ila 5 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, verilen doz, günde süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 1 ila 5 miligram arasinda antisens bilesiktir. Belirli durumlarda, açiklama, CNS'nin içine infüzyon ve en az bir bolus sistemik enjeksiyon içeren bir dozlama rejimi saglamaktadir. Belirli durumlarda, açiklama, CNS'nin içine infüzyon ve en az bir bolus subkütan enjeksiyon içeren bir dozlama rejimi saglamaktadir. Belirli durumlarda, bolus ya da infüzyon olan doz, antisens bilesigin CNS dokusunun grami basina 0,1 ila 100 mikrogram arasinda bir konsantrasyonunu elde etmek ya da idame etmek için ayarlanir.

Belirli durumlarda, bolus ya da infüzyon olan doz, antisens bilesigin CNS dokusunun grami basina 1 ila 10 mikrogram arasinda bir konsantrasyonunu elde etmek ya da idame etmek için ayarlanir. Belirli durumlarda, bolus ya da infüzyon olan doz, antisens bilesigin CNS dokusunun grami basina 0,1 ila 1 mikrogram arasinda bir konsantrasyonunu elde etmek ya da idame etmek için ayarlanir.

Belirli durumlarda, bir süjenin dozlanmasi bir indükleme evresine ve bir idame evresine bölünür. Bu tip belirli durumlarda, indükleme evresi esnasinda verilen doz, idame evresi esnasinda verilen dozdan daha çoktur. Belirli durumlarda, indükleme evresi esnasinda verilen doz, idame evresi esnasinda verilen dozdan daha azdir. Belirli durumlarda, indükleme evresi bolus enjeksiyonla elde edilir ve idame evresi kesintisiz infüzyonla elde edilir.

Belirli durumlarda, açiklama, antisens bilesiklerin ya tek basina ya da CSF'nin içine aktarimla kombinasyon halinde sistemik verilisini saglar. Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, 0,1 mg/kg ila 200 mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, 0,1 mg/kg ila 100 mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, 0,5 mg/kg ila 100 mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, l mg/kg ila 100 mg/kg arasindadir.

Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, l mg/kg ila 50 mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, 1 mg/kg' ila 25 mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, 0,1 mg/kg ila 25 mg/kg arasindadir.

Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, 0,1 mg/kg ila mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, l mg/kg ila l0 mg/kg arasindadir. Belirli durumlarda, sistemik verilis için doz, l mg/kg ila 5 Ing/kg arasindadir. Hem sistemik hem. CSF aktarimini içeren belirli durumlarda, bu iki yol için dozlar bagimsiz olarak belirlenir. a. gygun Insan Dozlarinin Hesaplanmasi Belirli durumlarda, süje bir insandir. Belirli durumlarda, bir insan dozu, burada tarif edilenler gibi hayvan deneylerinden gelen verilerden hesaplanir veya tahmin edilir. Belirli durumlarda, bir insan dozu, burada tarif edilenler gibi maymun ve/veya fare deneylerinden gelen verilerden hesaplanir veya tahmin edilir. Belirli durumlarda, bir insan dozu, burada tarif edilenler gibi fare deneylerinden gelen verilerden hesaplanir veya tahmin edilir. Belirli durumlarda, uygun insan dozlari, beyin agirligi ve/veya beyin-omurilik sivisi (CSF) devir hizlari bilgisiyle birlikte fareden elde edilen farmakokinetik veriler kullanilarak hesaplanabilir. Örnegin, fare beyin agirligi, vücut agirliginin yaklasik %2'si olarak yaklasik 0,4 g'dir. Insanlarda, ortalama beyin agirligi, Vücut agirliginin yaklasik %2,5'i olan 1,5 kg'dir. Belirli durumlarda, CSF'nin içine verilis, beyin dokusunda tutulum ve müteakip metabolizma yoluyla bilesigin bir kisminin ayrilmasiyla sonuçlanir. Ek olarak, CSF devir hizi, bilesigin CSF'den kana ayrilmasini tahmin etmek için kullanilabilir.

Fare CSF devir hizi yaklasik gunde 10-12 kezdir (0,325 ul/dakikada üretilen . Insan CSF devir hizi yaklasik günde 4 kezdir (350-400 ul/dakikada üretilen .

Klirens ve dolayisiyla dozlama gereklilikleri, beyin agirligi ayirma ölçeklemeye ve/veya CSF devir ölçeklemeye dayali olabilir. Tahmin edilmis insan CSF klirensi, insanlarda, farelerdeki yaklasik dozlara esdeger dozlari tahmin etmek için kullanilabilir. Bu sekilde, insan dozlari, beyin agirligina ve CSF devir hizlarina dayali doku metabolizmasindaki farklari hesaba katarak tahmin edilebilir. Hesaplamanin ve tahmin etmenin bu tip yöntemleri teknikte uzman kisilerce bilinmektedir.

Sinirlayici-olmayan örnek yoluyla, belirli durumlarda, bir esdeger insan. dozu istenen. bir fareden mg/kg fare dozunun, belirlenen klirense ve belirli bir bilesigin ayrilmasina bagli olarak yaklasik 0,25 ila yaklasik 1,25 arasinda degisen bir faktörle çarpilmasiyla tahmin edilebilir. Böylelikle, örnegin, belirli durumlarda, 20 gramlik bir fare için 0,01 mg'lik bir dozuna esdeger bir insan dozu, 70 kiloluk bir insan için yaklasik. 8,75 mg ila yaklasik. 43,75 mg toplani doz arasinda degisecektir. Benzer sekilde, belirli durumlarda, 4 gramlik bir yenidogan fare için 0,01 mg'lik bir doza esdeger bir insan dozu, 3 kiloluk bir yenidogan insan için yaklasik 1,9 mg ila10 yaklasik 9,4 mg toplam. doz arasinda degisecektir. Bu örnek dozlar yalnizca, teknikte uzman bir kisinin uygun bir insan dozunu nasil belirleyebilecegini örneklemek içindir ve mevcut açiklamayi sinirlama amacinda degildir.

Belirli durumlarda, (tek basina veya CSF aktarimiyla kombinasyon halinde olsun ya da olmasin) sistemik aktarim için bir insan dozu, burada tarif edilenler gibi hayvan deneylerinden gelen verilerden hesaplanir veya tahmin edilir.

Tipik olarak, sistemik doz için uygun bir insan dozu (mg/kg olarak, hayvanlardaki etkili bir dozun 0,1 ila 10 kat arasindadir. Böylelikle, yalnizca örnek amaciyla, 2 gramlik bir yenidogan fare için SOug'lik bir subkütan doz, 25mg/kg'lik bir dozdur. Bir insan için karsilik gelen dozun, 2,5mg/kg ila 250mg/kg arasinda oldugu öngörülmektedir. 3 kiloluk bir bebek için, karsilik. gelen doz 7,5 mg ila 750 mg arasindadir. 25 kiloluk bir çocuk için, karsilik gelen doz 62,5 mg ila 6250 mg arasindadir. 9. Tedavi Rejimleri Belirli durumlarda, yukaridaki doz miktarlari, doz sikliklari, verilis yollari, indükleme ve idame evreleri ve birinci dozun zamanlamasi, SMA'si olan süjeler için dozlama rejimlerinin saglanmasi amaciyla birlestirilir. Bu tip dozlama rejimleri, SMA'nin bir ya da daha fazla semptomunun iyilestirilmesini saglamak ve/veya farmasötik bilesimin verilisine atfedilebilen toksisitenin veya yan etkilerin indirgenmesi ya da önlenmesi için seçilebilir ve ayarlanabilir. Belirli durumlarda, süjeler in utero veya yenidogandir. Bu tip durumlarda, farmasötik bilesimlerin, ozellikle kesintisiz infüzyonla verilisi, belirli zorluklar arz eder. Dolayisiyla, belirli durumlarda, mevcut açiklama, süje rahimdeyken yada çok genç oldugunda bolus verilisle, ardindan süje daha büyük oldugunda ve bu tip bir pompanin yerlestirilmesi daha pratik oldugunda bir implante verilisini büyüdükçe, infüzyon pompasi Ayrica, edilmesi için mutlak doz arttirilir. vasitasiyla kesintisiz durumlarda, bir doz:vücut-agirli Asagidaki tablonun amaci tedavi rejimlerini örneklemektir tedavilerin, teknikte uzman bir kisi tarafindan kolaylikla basarilabilecek olasi kombinasyonlari sinirlama amacinda degildir.

Dozlama Birinci Ikinci Dördünc Besinci periyodu ü Rejim l Süje Yasi In In utero, 6 ay 1,5 yil utero, kan-beyin- hafta kan- bariyerini beyin- n olusumu bariyeri sonrasinda öncesind Doz 50 ug 50 ug 10 50 ug/gün Miktari ug/gün Siklik Tek Tek Kesinti Kesintisiz verilis verilis siz Verilis Sistemik IT IT IT Yolu enjeksiy enjeksiyon enjeksiy infüzyo infüzyonu Süre N/A N/A l yil Sürüyor Süje Yasi In > 1 hafta 1,5 yil N/A infüzyonla Dozlama Birinci Ikinci Üçüncü Dördünc Besinci periyodu ü Rejim l bariyeri sonrasin Doz 50 pg 100 ug 5 mg/gün lO N/A Miktari mg/gün Siklik Tek Aylik Kesintis Kesinti N/A verilis iz siz Verilis ICV ICV ICV ICV N/A Yolu enjeksiy enjeksiyon infüzyon infüzyo Süre N/A 6 ay 1 yil Sürüyor N/A Süje Yasi > 1 6 ay 1,5 yil 2,5 yil* Miktari mg/gün mg/gün Siklik 2xAylik Kesintisiz Kesintis Kesintis 2xAylik Verilis ICV ICV ICV ICV IP Yolu enjeksiy infüzyonu infüzyon infüzyon * Not: rejim 3'teki 4. dozlama periyodu, periyodik sistemik verilisle birlestirilmis kesintisiz CSF infüzyonunu örneklemektedir. Bu tedavi rejimlerinin amaci Dozlama Birinci Ikinci Üçüncü Dördünc Besinci periyodu g örnek olusturmak ve mevcut açiklamayi sinirlamamaktir.

Belirli durumlarda, dozlama rejimi, ya tek basina ya da CSF'nin içine verilisle kombinasyon halinde bir sistemik verilis içerir (örnegin, yukaridaki rejim 3). Asagidaki tablo bu tip rejimleri örneklemektedir.

Sistemik verilis CSF verilisi Doz Yol Siklik Doz Yol Siklik 1-5 subkütan haftalik 5-10 bolus IT aylik 1-5 subkütan aylik 1-5 mg/kg bolus ICV 2 ay -50 subkütan aylik 0,5-1 bolus IT 6 ay 0,5- subkütan aylik 10 IT her 6 ayda mg/kg/gün infüzyonu bir 7 gün mg/kg süreyle kesintisiz 0,1- subkütan aylik yok yok 0,5-1 bolus IT 6 ay Bu tedavi rejimlerinin amaci örnek vermektir ve mevcut açiklamayi sinirlamak degildir. Teknikte uzman bir kisi, dozlarin ve aktarimlarin uygun bir kombinasyonunu, mevcut açiklamayi göz önüne alarak ve durumun ciddiyeti ve süjenin genel sagligi ve yasi gibi çesitli faktörlere dayali olarak seçebilecektir.

. Es-verilis Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimleri, SMA'nin tedavisi için ve/veya SMA ile iliskili bir ya da daha fazla semptomun tedavisi için en az bir diger farmasötik bilesimle es-verilir. Belirli durumlarda, bu tip diger farmasötik bilesim trikostatin-A'dan, valproik asitten, riluzolden, hidroksiüreden bir bütirat ya da bütirat türevinden seçilir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimleri trikostatmi A ile es-verilir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimleri, örnegin edildigi üzere, kuinazolinin bir türeviyle es-verilir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin bir farmasötik bilesimi ve en az bir diger farmasötik bilesim ayni zamanda es-verilir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin bir farmasötik bilesimi ve en az bir diger farmasötik bilesim farkli zamanlarda es- Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimleri bir gen terapisi ajaniyla es-verilir. Bu tip belirli durumlarda, gen terapisi ajani CSF'ye verilir ve mevcut açiklamanin farmasötik bilesimi sistemik. olarak verilir. Bu tip belirli durumlarda, gen terapisi ajani CSF'ye verilir ve mevcut açiklamanin farmasötik bilesimi CSF'ye ve sistemik olarak verilir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin bir farmasötik bilesimi ve bir gen terapisi ajani ayni zamanda es- verilir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin bir farmasötik bilesimi ve bir gen terapisi ajani farkli zamanlarda es- verilir. SMA tedavisine belirli gen terapisi yaklasimlari Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimleri, SMA için en az bir diger terapiyle es-verilir. Belirli durumlarda, SMA için bu tip diger terapi ameliyattir. Belirli durumlarda, bu tip diger terapi, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, nefes almak için gerekli kaslari güçlendirmek için tasarlanan egzersizler dahil olmak üzere, öksürük terapisi gibi fiziksel terapidir. Belirli durumlarda, diger terapi, bir besleme sondasi veya destekli nefes alma için cihaz gibi fiziksel bir müdahaledir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimleri, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimlerinin istenmeyen bir yan-etkisini indirgeyen bir ya da daha fazla diger farmasötik bilesimle es-verilir. 11. Fenotipik Etkiler Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin en az bir farmasötik bilesiminin verilisi, süjede bir fenotip degisiklikle sonuçlanir. Belirli durumlarda, bu tip fenotipik etkilere, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, ekson 7 içeren SMN mRNA'nin mutlak miktarinda artis; ekson 7 içeren SMN mRNA'nin ekson 7'den yoksun SMN mRNA'ya oraninda artis; ekson 7 içeren SMN proteininin nmtlak ndktarinda artis; ekson '7 içeren SMN proteininin ekson 7'den yoksun SMN proteinine oraninda artis; iyilesen kas kuvveti, en az bir kasta iyilesen elektriksel aktivite; iyilesen soluma; kilo alma ve sagkalim dahildir.

Belirli durumlarda, en az bir fenotip degisiklik süjenin bir motonöronunda saptanir. Belirli durumlarda, mevcut bulusun en az bir farmasötik bilesiminin verilisi, bir süjenin dik oturabilmesiyle, ayaga kalkabilmesiyle ve/veya yürüyebilmesiyle sonuçlanir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin en az bir farmasötik bilesiminin verilisi, süjenin yemek yiyebilmesiyle, içebilmesiyle ve/veya yardim olmadan nefes alabilmesiyle sonuçlanir. Belirli durumlarda, tedavinin etkililigi, kasin elektrofizyolojik degerlendirilmesiyle tayin edilir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin en az bir farmasötik bilesiminin verilisi SMA'nin EN] az bir semptomunu iyilestirir ve çok az ya da sifir enflamatuar etkiye sahiptir.

Bu tip belirli uygulamalarda, enflamatuar etkinin yoklugu, tedavi üzerine Aifl seviyelerinde kayda deger artisin yokluguyla belirlenir.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin. en az bir farmasötik bilesiminin verilisi, SMA'nin en az bir semptomunun baslamasini geciktirir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin en az bir farmasötik bilesiminin verilisi, SMA'nin en az bir semptomunun ilerleyisini yavaslatir. Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin en az bir farmasötik bilesiminin verilisi, SMA'nin en az bir semptomunun ciddiyetini indirger.

Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin. en az bir farmasötik bilesiminin verilisi, istenmeyen bir yan-etkiyle sonuçlanir.

Belirli durumlarda, istenmeyen yan-etkileri önlerken semptomlarin arzu edilen iyilesmesiyle sonuçlanan bir tedavi rejimi tanimlanir. 12. Dozaj üniteleri Belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimleri, verilis için dozaj üniteleri olarak hazirlanir. Bu tip belirli dozaj üniteleri, 0,01 mg ila 100mg arasindan seçilir. Bu tip belirli durumlarda, mevcut açiklamanin farmasötik bir antisens bilesik dozu içerir. Belirli durumlarda, farmasötik mg'dan seçilen bir oligonükleotid dozu içerir. 13. Kitler Belirli durumlarda, mevcut açiklama en az bir farmasötik bilesim içeren kitler saglamaktadir. Belirli durumlarda, bu tip kitler ayrica bir aktarim araci, örnegin bir siringa veya infüzyon pompasi içerir.

Sinirlayici olmayan açiklama Burada tarif edilen belirli bilesikler, bilesimler ve yöntemler belirli durumlara göre spesifik olarak tarif edilmis olsa da, asagidaki örnekler yalnizca burada tarif edilen bilesikleri örnekleme görevi görmektedir ve bunlari sinirlama amacinda degildir. Her ne kadar bu basvuruya eslik eden dizi listesi her diziyi gerektigi sekilde ya “RNA” ya da “DNA” olarak tanimlasa da, gerçekte, bu diziler, kimyasal modifikasyonlarin herhangi bir kombinasyonuyla modifiye edilebilir. Teknikte uzman bir kisi, modifiye oligonükleotidlerin tarif edilmesi için “RNA” veya “DNA” seklindeki bu tip göstermenin rastgele seçilmis oldugunu kolayca anlayacaktir. Örnegin, bir 2'-OH seker bölütü ve bir timin bazi içeren bir nükleosit içeren bir oligonükleotid, modifiye bir sekere (DNA'nin dogal 2'-H'si için 2'-OH) sahip bir DNA 'veya modifiye bir` baza (RNA'nin dogal urasili için timin (metilatli urasil)) sahip bir RNA. olarak tarif edilebilir.

Dolayisiyla, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla dizi listesindekiler dahil olmak üzere, burada saglanan nükleik asit dizileri, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla modifiye nükleobazlara sahip nükleik asitler dahil olmak. üzere dogal veya modifiye RNA ve/veya DNA'nin herhangi bir kombinasyonunu ihtiva eden nükleik asitleri kapsama amacindadir. Diger örnek yoluyla ve sinirlama olmadan, “ATCGATCG” nükleobaz dizisine sahip bir oligomerik bilesik, modifiye ya da modifiye edilmemis olsun ya da olmasin, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, “AUCGAUCG” dizisine sahip olanlar ve bazi DNA bazlarina sahip olanlar ve “AUCGATCG” gibi bazi RNA bazlari ve meC'nin 5-konumunda bir metil grubu içeren bir sitozin bazini gösterdigi “ATWCGAUCG” gibi bazi RNA bazlari içerenler gibi RNA bazlari içeren bu tip bilesikler dahil olmak üzere bu tip nükleobaz dizisine sahip herhangi bir oligomerik bilesigi Örnek 1 - SMN2'yi hedefleyen antisens bilesikleri Asagidaki oligonükleotidler, önceden bildirilen standart teknikler kullanilarak sentezlendi.

Referans # Dizi Boy Kimya SEQ PS = fosforotioat nükleosit arasi baglantilar Örnek 2 - Smn-/- SMN Transjenik Fareler Yukarida tarif edildigi sekilde antisens bilesikler kullanilarak terapötik etkililik ve güvenlik uygun bir hayvan modelinde test edilebilir. Örnegin, insan hastaligina en benzer görünen hayvan modellerine ya kendiliginden belirli hastaligin yüksek bir insidansini gelistiren ya da bunu yapmak için indüklenmis olan hayvan türleri dahildir. Özellikle, SMA için hayvan modelleri bilinmektedir. Yukarida açiklandigi üzere, bir otozomal çekinik nöromusküler rahatsizlik olan SMA'nin moleküler tabani, sagkalim motor geni l'in (SMNl) benzer genli kaybidir. SMNZ adli, SMNl geninin neredeyse özdes bir kopyasi insanlarda bulunur ve hastalik ciddiyetini module eder. Insanlarin aksine, fareler SMNl'e esdeger tek bir gene (Smn) sahiptirn Bu genin benzer genli kaybi embriyolar için ölümcüldür ve Smn gen ürününün hücresel sagkalim ve fonksiyonu için gerekli oldugunu gösterir sekilde büyük çapta hücre ölümüyle sonuçlanir. SMN2'nin 2 kopyasinin SMN'den yoksun farelere eklenmesi, SMA fenotipine sahip farelerle sonuçlanacak sekilde embriyonik ölümcüllügü kurtarir yüksek bir kopya sayisi fareleri kurtarir çünkü yeterli SMN proteini motor nöronlarinda üretilir. Bakiniz, ayrica, insan SMN2'sini eksprese eden transjenik fare çizgilerinin üretimini Özellikle, Smn-/- arka planinda SMNZ barindiran transjenik fareler omurilikte ve iskelet kaslarinda, SMA hastalarininkine benzer patolojik degisiklikler göstermistir. Bu farelerdeki patolojik degisikliklerin ciddiyeti, ekson 7 tarafindan kodlanan bölgeyi ihtiva etmis olan SMN proteininin miktariyla iliskili olmustur. Smn'nin bir kopyasindan yoksun farkli genli fareler Smn -/+ olarak ifade edilir ve SMA'nin daha az ciddi biçimi olan tip III için bir modeldir.

SMA fenotipinin ciddiyeti, farelerdeki insan SMN2'nin kopyalarinin sayisinin bir fonksiyonudur. “Tayvan” susu insan SMN2'sinin 4 kopyasina sahiptir ve bu da Tip I veya Tip II'ye benzer sekilde ortayla ciddi arasi SMA fenotipine sahip farelerle sonuçlanir.

Delta-7 fareleri de (Smn4_, hSMN2”+, SMNA7”+) fare Smn'sinden yoksundur ve insan SMNZ'si eksprese eder. Delta 7 fareleri daha ciddi bir fenotipe sahiptir ve dogumdan kisa süre sonra, tipik olarak dogumdan yaklasik 15-20 gün sonra ölürler. Örnek 3 - Smn -/- SMNZ'de (Tayvan Susu) Antisens bilesiklerin in vivo Sistemik Verilisi Tayvan fareleri intraperitoneal enjeksiyon yoluyla, salinle oligonükleotid kontrolüyle 5 gün süreyle her gün bir kez tedavi edildi ve 2 gün sonra 7. günde öldürüldü. Karaciger ve böbrek alindi ve RNA standart teknikler kullanilarak izole edildi. Ekson 7'li veya ekson 7'siz SMNZ RT-PCR ile karacigerden SMNZ'de, salinle ve uyumsuz kontrolle tedavi edilen hayvanlara kiyasla ekson 7 inklüzyonunda önemli bir artisla sonuçlandi. Örnek 4 - Smn -/- SMN2'de (Tayvan Susu) Antisens bilesiklerin in vivo Intraserebroventriküler (ICV) Verilisi Tayvan farelerine 1CV yoluyla ya salin ya da 150 ug günde Öldürüldü ve beyin ve omurilikten RNA ekstrakte edildi. edilen beyin ve omurilik numunelerindeki SMNZ'deki ekson 7 inklüzyonunda önemli artis gösterdi. Bu sonuçlar, SMN hedefleyen antisens oligonükleotidle 1CV tedavisinin SMA durumunu kurtarabildigini çünkü ekson 7'nin inklüzyonunun SMA fenotipiyle iliskili oldugunu göstermistir.

Doz-Yaniti Tayvan farelerine 1CV yoluyla ya salin ya da 10, 50, 100 veya bir tedavi grubunda 5 fare) ve 8. günde öldürüldü. RNA izole edildi ve RT-PCR ile analiz edildi. 10 ug tedavi grubu orta ekson 7 inklüzyonu gösterdi. 50 ug, 100 ug ve 150 ug gruplarinin tamami önemli ekson 7 inklüzyonu gösterdi.

Yanit Süresi Etki süresinin belirlenmesi için, 24 fareye ICV yoluyla 50 ug son doz zamaninda (O zaman) öldürüldü ve dört farenin her biri son dozdan sonra 1. haftada, 2. haftada, 4. haftada ve 8. haftada öldürüldü. Tedavi edilen farelerin tamami, Sekil 1'de gösterildigi üzere, 8. haftada diger gruplarla hiç fark göstermeme etkisiyle RT-PCR ile önemli ekson 7 inklüzyonu gösterdi.

Bu sonuçlar ISIS396443'ün 7 gün süreyle günde 50 ug ICV verilisinin, tedavinin ardindan en az 8 hafta süreyle etkili oldugunu göstermektedir.

Deney daha uzun zaman noktalarini test etmek için tekrarlandi.

Tip III fareler 7 gün süreyle 50 ug/gün olan ISIS396443'ün ICV infüzyonuyla muamele edildi. Fareler 7 günlük infüzyon periyodunun bitiminden sonraki 0, 0,5, 1, 2, 4, ve 6 aylarda öldürüldü. RNA omuriliklerden toplandi ve northern lekelemeyle infüzyonunun etkisi, Sekil 2'de gösterildigi üzere infüzyondan sonra 6 ay devam etti. Bu uzun etki süresi birçok olasi açiklamaya sahiptir. ISIS396443'ün kararliligini, düzeltilen SMN proteininin kararligini ve/veya doz metabolizmaya bilesik kaybindan sonra. bile yeterince yüksek. oldugunu, kalan dozun fayda saglamaya devam. ettigini yansitabilir. Böylelikle, bu veriler daha düsük dozlarin yani sira seyrek dozlarin verilisini destekleyebilir. Örnek 5 - Antisens Bilesiklerin Kesintisiz Intraserebroventriküler (ICV) Infüzyonla VErilisi Bir Hdkro-ozmotik pompa (Azlet Osmotic Pumps, Cupertino, CA, ABD) kullanilarak ISIS içine, bir insan SMNZ transgenine sahip yetiskin tip-III Smn+/- veya Smn-/- SMA farelerinde (Tayvan susu) sag yanal karincik yoluyla verildi. Doz-yaniti çalismalari, lSIS infüzyonunun, omurilikte SMNZ ekson 7 inklüzyonunu, salinle-tedavili farelerdeki ~%lO'a kiyasla ~%9O arttirdigini ortaya çikardi.

Western lekeleme ve immünohistokimyasal analizler, omurilik motor nöronlarindaki insan transjenik SMN protein seviyelerinin saglam bir artisini ortaya koydu. Bu sonuçlar, antisens oligonükleotid ISIS396443'in CNS infüzyonunun SMA durumunu kurtarabildigini çünkü ekson 7 inklüzyonunun SMA fenotipiyle iliskili oldugunu göstermektedir. Örnek 6 - Embriyonik Varilis gebeligin 15. gününde (E15) embriyonik Tayvan farelerine verildi. Hayvanlar dogumdan sonraki 7. günde (P7) öldürüldü.

RNA lomber omurilikten izole edildi ve RT-PCR ile analiz 7 inklüzyonuyla sonuçlandi. Bu sonuçlar, antisens oligonükleotid ISIS396443'ün in uteron tedavisinin SMA durumunu kurtarabildigini çünkü ekson 7 inklüzyonunun SMA fenotipiyle iliskili oldugunu göstermektedir.

Yukaridaki deney tekrarlandi ve hayvanlar ll. haftada Öldürüldü“ Tedavi. edilmemis Tayvan fareleri, zamanla. kisalan nekrotik kuyruklar gelistirdi. 20 ug ISIS396443'ün tekli embriyonik enjeksiyonu, Sekil 3A'da gösterildigi üzere kuyruk bozulmasinin baslamasini kayda deger sekilde geciktirdi. Bu sonuçlar, SMN'yi hedefleyen antisens oligonükleotidle embriyonik tedavinin SMA'nin baslamasini geciktirdigini göstermektedir. olmasi ve çalismanin kiyaslama için normal fareleri içermesi disinda ayni kosullar kullanilarak bir baska çalismada onaylandi. Bu deneyden alinan sonuçlar Sekil 3B'de gösterilmektedir. Örnek 7 - Delta-7 fare modelinde in vivo verilis Heterozigot (SMN+*, hSMN2+Ny SMNA7+”) damizlik çiftleri eslestirildi ve dogum gününde (PO), yenidogan yavrulara NO. 2), veya karistirilmis bir kontrol ASO (ISIS439273; l8-mer) ile muamele edildi.

Farelere iki tarafli olarak serebral yanal karinciklarin içine toplam 8 ug'lik (her bir yanal karincikta 4 ug) bir doz enjekte edildi. Enjeksiyonlarin tamami, tarif edildigi sekilde bir cam mikropipet igneyle gerçeklestirildi. Enjeksiyonlari takiben, SMA (SMN4“, hSMN2”+, SMNA7”+), heterozigos ve dogal tip (SMNh”, hSMNZh”, SMNA7h”) farelerin tanimlanmasi için yavrularin ayak parmaklari kesildi ve genotiplendi (Le et al., yavru boyunu kontrol etmek için 7 yavruya ayrildi. Yavrularin bazilarina, tedavi edilmemis kontrol gruplari olusturmak l8-mer'in genis çapli dagilimi, omuriligin torasik, lomber ve servikal bölgeleri dahil olmak üzere omurilikte, SMA farelerinde enjeksiyondan-sonra 14. günde saptandi. Dahasi, tarafindan hedeflenen hücrelerin büyük çogunlugunun motor nöronlar oldugunu onayladi. Kontrol, tedavi edilmemis farelerde hiç sinyal saptanmadi. 14. gündeki Western lekeleme analizi, beyindeki ve omurilikteki SMN miktarinin, tedavi edilmemis SMA kontrollerindeki %lO'a kiyasla %40-60 dogal tip seviyelerinde oldugunu gösterdi. ASO'nun karistirilmis bir versiyonuyla tedavi edilen kontrol farelerinde, arka planin üzerinde hiç sinyal saptanmadi. Western lekelerin sonuçlari Sekil 4'te sunulmaktadir.

SMA ASO'lar tedavi edilen SMA fareleri ayrica, ASO'nun uzunluguna bakilmaksizin, agirlikta, gezinme fonksiyonunda (dogrulma refleksi ve kavrama kuvveti) ve koordinasyonda (arka bacak ayrilma), tedavi edilmemis SMA farelerine veya karistirilmis bir ASO ile tedavi edilmis SMA farelerine kiyasla kayda deger bir artis sergiledi. Tedavi edilmemis SMA farelerine kiyasla karistirilmis bir ASO ile tedavi edilen SMA farelerinde, vücut agirliginda, gezinme fonksiyonunda (dogrulma refleksi ve kavrama kuvveti) veya koordinasyonda kayda deger bir artis gözlemlenmedi. Sonuçlar Sekiller 5 ve 6'ta sunulmaktadir. Önemli sekilde, ASO'nun boyuna bakilmaksizin ASO'larla tedavi edilen SMA fareleri, Sekil 7'de gösterildigi üzere medyan sagkalimda kayda deger` bir artis gösterdi. Sagkalim, tedavi edilmemis SMA kontrollerindeki 16,0 güne kiyasla dogumdan 31,5 (lS-mer), 27,0 (l8-mer) ve 28,0 (20-mer) gün oldu. Bunun aksine, bir l8-mer karistirilmis kontrol ile tedavi edilen SMA farelerinde sagkalini iyilesmedi. Bu sonuçlar, SMN *tedavisini hedefleyen antisens oligonükleotidle tedavinin SMA etkili süjelerde yasam süresini arttirdigini ortaya koymaktadir.

SMA ASO'lar ayrica, Sekil 8'de gösterildigi üzere omurilikteki motor nöron hücre sayimlarini arttirdi.

SMN RNA, RT-PCR ile ölçüldü. SMA ASO'larla tedavi edilen hayvanlar, tedavi edilmemis SMA farelerine kiyasla artan SMN RNA seviyelerine sahip oldu. Tedavi edilmemis SMA farelerine kiyasla ZO-mer ASO ile tedavi edilen farelerden alinan sonuçlar Sekil 9'da gösterilmektedir.

Sagkalimin bir ikinci dozun verilisiyle daha da arttirilip arttirilamayacagini belirlemek için, yukaridaki deney, 21. günde 20 pg'lik ilave bir dozla tekrarlandi. Sonuçlari Sekil lO'da gösterilmektedir. Grafik, 0. günde 8 pg'lik birinci dozun etkisini göstermektedir. P21. günde, tedavi edilen farelerin yarisina bir ikinci tedavi verildi.

Yalnizca birinci tedaviyi alan farelere kiyasla ikinci tedavinin etkisi Sekil ll'de gösterilmektedir. Bu sonuçlar, antisens oligonükleotidle bir ikinci ICV tedavisinin sagkalimi daha da arttirdigini göstermektedir. Örnek 8 - SMA tip III farelerde Aktivite Iki antisens bilesik ve bir kontrol bilesigi SMA'nin bir fare modelinde test edildi. Bilesikler asagidaki tabloda tarif edilmektedir.

Tayvan Susu SMA Farelerinde Test Edilen Bilesikler Düzgün 2'-MOE, tam PS; l8-mer; insan 396443 TCACTTTCATAATGCTGG l SMNZ'sinin intron 7'sine tamamlayici Düzgün 2-OMe; tam PS; -mer; insan 449220 ATTCACTTTCATAATGCTGG 3 SMN2'sinin intron 7'sine tamamlayici Düzgün 2'-MOE; tam 439272 TTAGTTTAATCACGCTCG PS; l8-mer; kontrol 4 SMA tip 111 farelerinin Tayvan susu The Jackson Laboratory'den (Bar* Harbor, Maine) elde edildi. Bu fareler fare SMN'sinden yoksundur ve insan SMNZ'si için benzer genlidir (mSMN -/-; hSMNZ +/+). Bu fareler Hsieh-Li HM, et al., Nature Genet. 24, 66-70 2000'de tarif edilmistir. içinde günde Kontrol farelerine yalnizca PBS ile (0 dozu) muamele edildi.

Tedavilerin tamami, bir Azlet 1007D ozmotik pompa kullanilarak intraserebroventriküler (ICV) infüzyonla verildi. Her bir doz dozundan farelerin ikisi, çalismanin tamamlanmasindan önce öldü. Hayvanlar 9. günde (son dozdan iki gün sonra) öldürüldü ve omuriliklerin beyin ve lomber kisimlari her bir hayvandan alindi. Ekson 7 içeren ((+)ekson 7) insan SMNZ mesajinin miktarini ve ekson 7'den yoksun ((-)ekson 7) insan SMNZ mesajinin. miktarini belirlemek için her bir numune üzerinde gerçek zamanli PCR gerçeklestirildi. Gerçek zamanli PCR ayrica, allograft enflamatuar faktörünün (AIFl) ve gliseraldehid 3-fosfat dehidrojenazin (GADPH) ekspresyon seviyelerini belirlemek için de gerçeklestirildi.

(+)Ekson 7 ve (-)ekson 7 için ekspresyon seviyeleri GADPH seviyelerine normalize edildi. Bu normalize edilmis ekspresyon seviyeleri daha sonra PBS tedavili kontrol farelerinden gelen GADPH-normalize seviyelerine bölündü. Ortaya çikan kat-kontrol degerleri asagidaki Tablo 17'te bildirilmektedir. Veriler, 3 sagkalan fareyi temsil eden ISIS449220'nin en yüksek dozu hariç, her bir gruptaki bes farenin tamami için kontrolün ortalama katini temsil etmektedir. artisla sonuçlandi. 10 ug/günde, ISIS396443 neredeyse iki kat (1,8 kat) beyindeki SMNZ mesajinda tutulan ekson 7 ile sonuçlandi ve lomber omurilikte, tedavi edilmemis kontrol kiyasla iki kattan fazlaydi.

Antisens Bilesiklerin SMA Farelerinde Uç Birlestirmeyi Degistirme Yetisi Bilesik Doz Beyin Lomber Kord 7 )ekson 7 )ekson Bilesik Doz Beyin Lomber Kord 7 )ekson 7 )ekson * bu doz için yalnizca 3 fareden veri Allograft enflamatuar faktörün (AIFl) ekspresyonu, enflamasyonun bir ölçüsü olarak test edildi. Tüm numunelerin (GADPH'ye) normallestirilmesinden sonra, her bir tedavi grubu en yüksek dozda bile AIFl'de sifir artisla sonuçlandi. sonuçlandi. Tablo 18'deki veriler, 3 sagkalan fareyi temsil eden ISIS449220'nin en yüksek dozu hariç, her bir gruptaki bes farenin tamami için kontrolün ortalama katini temsil etmektedir.

SMA Farelerinde antisens bilesiklerin toksisitesi Bilesik Doz (ug/gün) AIF-l/GAPDH Beyin Lomber 0 1,0 1,0 3 10 1,0 1,1 1,2 1,0 1,0 100 0,9 1,0 3 1,0 1,0 1,0 1,8 1,2 2,9 100* 1,8 3,3 Bilesik Doz (mg/gün) AIF-l/GAPDH Beyin Lomber 0,9 1,0 100 0,9 1,2 * bu doz için yalnizca 3 fareden veri Örnek 9 - Farelere VErilis dagitimini tayin etmek için sinomolgus maymunlari kullanildi. mg'lik bir doz aldi ve diger maymun 1T infüzyonla 3 mg'lik bir doz aldi. Her iki infüzyon da 24 saatlik. bir süre boyunca aktarildi. Maymunlar öldürüldü ve dokular infüzyon periyodunun konsantrasyonu, omuriligin Servikal, Torasik ve Lomber kisimlarindan alinan numunelerde ölçüldü. Sonuçlar asagidaki tabloda Özetlenmektedir. l 24 saat ICV Servikal 21,5 Lomber 23,9 2 24 saat IT Servikal 12,5 süreyle 3 infüzyon Torasik 22 6 Lomber 42,6 Sinomolgus maymunlari yaklasik 3 kg oldugundan, bu doz yaklasik 1 mg/kg'dir. 181839644'ün dagitiminin ileri tayin edilmesi için, yirmi-alti maymun, asagidaki tabloda sunuldugu sekilde alti gruba bölündü.

Grup Doz Yol Bilesik Infüzyon Öldürme Maymunlarin konsantrasyonu süresi günü sayisi 1 O ICV 0 14 gün Gün 19 2M/2F 3 3 IT 1,25 l gün Gün 6 3M/2F 4 3 IT 0,42 3 gün Gün 8 2M/2F Tüm gruplar için infüzyon orani lOO uL/saatti. Tüm maymunlar, yalnizca salin alan grup 1 hariç, salin içinde toplamda 3 mg 181839644 aldi. Maymunlar öldürüldü ve dokular infüzyonun bitiminden 5 gün sonra hasat edildi.

Farelerden alinan doku numunelerindeki 181839644 konsantrasyonlari standart teknikler kullanilarak degerlendirildi. Sonuçlar, Sekil 12'deki grafiklerde sunulmaktadir. Numuneler ayrica histolojiyle de degerlendirildi. Histoloji tedavinin herhangi bir advers hücre kaybi için hiç kanit yoktu. gibi göründü. Bu sonuçlar, belirli durumlarda daha hizli infüzyon hizlarinin veya bolus enjeksiyonun tercih edilebilecegini ortaya koymaktadir. Bolus verilis, belirli durumlarda, infüzyona göre belirli pratik. avantajlara sahip oldugundan, CSF içine tercih edilen verilis yöntemidir.

Belirli durumlarda, CSF içine tercih edilen verilis yöntemi bolus IT enjeksiyonuyladir. Örnek 10 - Ciddi SMA'nin bir fare modelinin olusturulmasi ve Ciddi bir SMA fenotipine sahip fareler (sSMA fareler) üretildi. Homozigot sSMA fareler insan SMNZ'sinin 2 kopyasini tasimaktadir ve hiç fare SMN'si tasimamaktadir. Ortalama yasam süresi yaklasik 10 gündür. Ek olarak, SMA fareleri daha küçüktür ve daha kisa kuyruklara sahiptir. heterozigotlar SMN tasir ve normal sekilde gelisir.

Bu sSMA farelerinde antisens bilesiklerin etkisini çalismak için, 20ug ISIS396443 Pl günde ICV enjekte edildi. Tedavi ortalama sagkalimda 9,9 günden (salin tedavili kontrol) 16,7 güne bir artisla sonuçlandi. RT-PCR. analizi, tedavi edilen farelerden gelen dokularda artan tam-boy SMN RNA gösterdi. Örnek 11 - ISIS 396443'ün sistemik verilisi sSMA fareleri ve saglikli heterozigot kontrol fareleri, bolus Grup 1 - ICV+SC Pl veya P2'de (dogumdan sonra 1. veya 2. gün) 20 ug'lik bir adet ICV enjeksiyonu ve PO ila P3 arasinda aktarilan 50 ug/g'lik iki subkütan enjeksiyon.

Grup 2 - SC+SC PO ila P3 arasinda aktarilan 50 ug/g'lik iki SC enjeksiyon ve IPS ila. P6 arasinda aktarilan 50 ug/g'lik10 bir adet subkütan enjeksiyon ve P9 ila P10 arasinda aktarilan 50 ug/g'lik subkütan enjeksiyon.

Grup 3 - SC PO ila P3 arasinda aktarilan 50 ug/g'lik iki SC enjeksiyon.

Grup 4 - SMA salin kontrolü Pl veya P2'de bir adet salin ICV enjeksiyonu ve PO ila P3 arasinda aktarilan iki subkütan salin enjeksiyonu.

Grup 5 - Farkli genli kontrol P1 veya P2'de 20 ug'lik bir adet ICV enjeksiyonu ve farkli genli farelerin PO ila P3 arasinda aktarilan 50 ug/g'lik iki subkütan enjeksiyon.

Her bir grup 14 ila 22 arasinda fare içerdi. Her bir gruptaki münferit fareler için (gün olarak) sagkalim asagidaki tabloda sunulmaktadir. Bu Çalismadaki birçok fare, bu basvurunun hazirlanmakta oldugu zamanda canli kalmistir. Böylelikle, bir yasamis oldugunu ve halen canli oldugunu göstermektedir.

Fare Grup 1 Örnek 12 - SC verilisin Doz-Yaniti Farkli sagkalimi, enjeksiyon, dozlarda subkütan (80 mg/kg ila 10101213 farelerinin asagidaki dozlam gruplarinca tayin edildi. 1-SC400 arasinda doz ila P3 arasinda fare basina toplamda 400 ug iki SC ul hacim). birinci doz PO veya Pl'de 150 pg idi (3 ul ve ikincisi P2 veya P3'te aktarilan 250 ug idi (5 Grup 2-SC200 (40 mg/kg ila 90 mg/kg arasinda doz PO ila P3 arasinda. fare basina toplamda. 200 pg iki SC enjeksiyon, birinci doz PO veya Pl'de 75 pg idi (1,5 pl hacim) ve ikincisi P2 veya P3'te aktarilan 125 ug idi (2,5 pl hacim).

Grup 3-SC100 (20 mg/kg ila 45 mg/kg arasinda doz PO ila P3 arasinda. fare basina tOplamda. 100 ug iki SC enjeksiyon, birinci doz PO veya Pl'de 40 ug idi (2 pl hacim) ve ikincisi P2 veya P3'te aktarilan 60 ug idi (3 ul hacim).

Grup 4-SMA salin (negatif kontroller) PO ila P3 arasinda iki salin SC enjeksiyonu, birincisi PO veya Pl'de (5 ul hacim) ve ikincisi P2 veya P3'te aktarildi (5 ul hacim).

Grup 5 - Farkli genli kontrol (pozitif kontroller) Herhangi bir tedavi almayan fareler.

Her bir grup 14 ila 26 arasinda fare içerdi. Her bir gruptaki münferit fareler için (gün olarak) sagkalim asagidaki tabloda sunulmaktadir. Bu çalismadaki birçok fare, bu basvurunun hazirlanmakta oldugu zamanda canli kalmistir. Böylelikle, bir yasamis oldugunu ve halen canli oldugunu göstermektedir.

SC4OO SC2OO SClOO Salin Het 2 > 82 >9l 11 8 > 87 Fare Grup SC4OO 1 Grup 2 Grup Örnek 13 - ICV Infüzyon vs ICV Bolus Intraserebroventriküler verilis, infüzyon) kesintisiz karsilastirildi. SMA enjeksiyonla 3 Grup intraserebroventriküler 4 Grup infüzyonla transjenik fareler infüze doz verildi ve fareler 2 gün sonra öldürüldü. ICV bolus farelerine tek bir ICV enjeksiyonunda ayni toplam dozlar, 0 9 gün sonra öldürüldü. Her bir grupta 5 fare vardi. RNA lomber omurilikten toplandi ve gerçek zamanli PCR ile analiz edildi.

Intron 7 inklüzyonu salin-tedavili kontrollere normalize edildi. Sonuçlar asagidaki tabloda özetlenmektedir.

Grup Doz PBS'e göre intron 7 inklüzyonunda kat artisi 1 PES (kontrol) 1,0 2 7 gün boyunca ICV 2,1 infüzyonla 87,5 ug 3 7 gün boyunca ICV 2,4 infüzyonla 175 ug 4 7 gün boyunca ICV 3,2 infüzyonla 350 ug 7 gün boyunca ICV 3,6 infüzyonla 700 ug 6 PES (kontrol) 1,0 7 ICV bolusla 87,5 ug 3,1 8 ICV bolusla 175 ug 3,7 9 ICV bolusla 350 ug 3,8 ICV bolusla 700 ug 3,8 Bu deneyde, ICV bolus enjeksiyonla aktarilan ayni doz, 7 gün boyunca ICV infüzyonla aktarilan dozdan daha büyük aktiviteyle sonuçlandi.

Enflamasyonun tayin edilmesi için allograft enflamatuar faktörün (AlFl) ekspresyon seviyelerini belirlemek amaciyla gerçek zamanli PCR de gerçeklestirildi. Tedavi edilen farelerden alinan numunelerin hiçbiri kontrol farelerinde anlamli bir fark göstermedi. Örnek 14 - ICV Bolusla Doz-Yaniti Intraserebroventriküler bolusla verilis ilave dozlarda test edildi. Transjenik farelere tekli bolus ICV enjeksiyonla 0, verildi ve fareler Örnek 13'te tarif edildigi sekilde 9 gün sonra öldürüldü. Numuneler beyinden ve lomber omurilikten alindi. RNA hazirlandi ve intron 7 inklüzyonundaki degisiklik için ve AlFl'deki degisiklik için RT-PCR ile analiz edildi.

Numunelerin hiçbiri, kontrole kiyasla. AIFl'de bir degisiklik göstermedi. Intron 7 inklüzyonundan sonuçlar asagidaki tabloda özetlenmektedir. ED50 yaklasik 22ug civarindadir.

Grup Doz PBS'e göre intron 7 inklüzyonunda kat artisi Beyin Lomber omurilik 1 PES (kontrol) 1,0 1.0 2 ICV bolusla 2,4 2.2 ,9 ug 3 ICV bolusla 2,8 2.7 21,9 ug 4 ICV bolusla 3,2 3.4 43,4 üg ICV bolusla 3,5 3.4 87,5 ug 6 ICV bolusla 175 4,4 3.7 Açiklama ayrica bu basvurunun türetildigi, içerigi asagidaki numaralandirilmis paragraflar olarak kopyalanan WO 1. Bir süjeye, insan SMN2 ön-mRNA'sini kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici olan bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin verilmesini içeren bir yöntem olup, burada antisens bilesik beyin- omurilik sivisinin içine verilir. 2. Paragraf l'e göre yöntem olup, burada verilis intratekal boslugun içinedir. 3. Paragraf l'e göre yöntem olup, burada verilis beyindeki beyin-omurilik sivisinin içinedir. 4. 1-3 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada verilis bir bolus enjeksiyon içerir. . 1-3 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada verilis bir aktarma pompasiyla infüzyon içerir. 6. 1-5 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesik, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 10 miligram arasinda antisens bilesiginin bir dozunda verilir. 7. Paragraf 6'ya göre yöntem olup, burada doz, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 10 miligram arasinda antisens bilesiktir. 8. Paragraf 6'ya göre yöntem olup, burada doz, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila. 5 miligram arasinda antisens bilesiktir. 9. Paragraf 6'ya göre yöntem olup, burada doz, süjenin vücut agirliginin kilogrami .basina 0,05 ila 1_ miligrani arasinda antisens bilesiktir.

. Paragraf 6'ya göre yöntem. olup, burada doz, süjenin vücut agirliginin. kilogrami basina. 0,01 ila 0,5 miligram arasinda antisens bilesiktir. 11. Paragraf 6'ya göre yöntem olup, burada doz, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 0,5 miligram arasinda antisens bilesiktir. 12. 6-11 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada doz günlük olarak verilir. 13. 6-11 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada doz haftalik olarak verilir. 14. 6-11 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesik kesintisiz olarak verilir ve burada doz günde verilen miktardir. . 1-13 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, bir indükleme evresi esnasinda en az bir indükleme dozunun verilmesini ve bir idame evresi esnasinda en az bir idame dozunun verilmesini içerir. 16. Paragraf 15'e göre yöntem olup, burada indükleme dozu, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 5,0 miligram arasinda antisens bilesiktir. 17. Paragraf 15 ya da 16'ya göre yöntem olup, burada idame dozu, süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 1,0 miligram arasinda antisens bilesiktir. 18. 15-17 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada indükleme evresinin süresi en az 1 haftadir. 19. 15-18 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada idame evresinin süresi en az 1 haftadir. . 15-19 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada her bir indükleme dozu ve her bir idame dozu bir tekli enjeksiyon içerir. 21. 15-19 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada her bir indükleme dozu ve her bir idame dozu bagimsiz olarak iki ya da daha fazla enjeksiyon içerir. 22. 1-21 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesik en az 1 haftalik bir tedavi periyodu boyunca en az 2 kez verilir. 23. Paragraf 22'ye göre yöntem olup, burada tedavi periyodu en az bir aydir. 24. Paragraf 22'ye göre yöntem olup, burada tedavi periyodu en az 2 aydir.

. Paragraf 22'ye göre yöntem olup, burada tedavi periyodu en az 4 aydir. 26. 15-25 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada indükleme dozu bir ya da daha fazla bolus enjeksiyonla verilir ve idame dozu bir infüzyon pompasiyla verilir. 27. 1-26 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, antisens bilesigin tolere edilebilirliginin ve/veya etkililiginin tayin edilmesini içerir. 28. 1-27 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesigin doz miktari veya sikligi, antisens bilesigin verilisinin tolere edilmedigine dair bir endikasyonu takiben indirgenir. 29. 1-28 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesigin doz miktari veya sikligi, antisens bilesigin verilisinin etki1i olduguna dair bir endikasyonu takiben muhafaza edilir veya indirgenir. . 1-29 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesigin dozu, antisens bilesigin verilisinin etkili olmadigina dair bir endikasyonu takiben arttirilir. 31. 1-30 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesigin verilis sikligi, antisens bilesigin verilisinin etkili olduguna dair bir endikasyonu takiben indirgenir. 32. 1-31 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesigin verilis sikligi, antisens bilesigin verilisinin etkili olmadigina. dair bir endikasyonu takiben arttirilir. 33. Yukaridaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, antisens bilesigin ve en az bir adet diger terapinin es-verilisini içerir. 34. Paragraf 33'e göre yöntem olup, burada antisens bilesik ve en az bir adet diger terapi ayni zamanda es-verilir.

. Paragraf 34'e göre yöntem olup, burada antisens bilesik, en az bir adet diger terapinin verilisi öncesinde verilir. 36. Paragraf 34'e göre yöntem olup, burada antisens bilesik, en az bir adet diger terapinin verilisinden sonra verilir. 37. 33-36 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada en az bir adet diger terapi, valproik asidin, riluzolun, hidroksiürenin veya bir bütiratin birinin ya da daha fazlasinin verilisini içerir. 38. 33-37 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada en az bir adet diger terapi, trikostatin-A'nin verilisini içerir. 39. 33-38 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada en az bir adet diger terapi, kök hücrelerin verilisini içerir. 40. 33-39 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada en az bir adet diger terapi gen terapisidir. 41. Yukaridaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesik yaklasik 0,01 mg/ml'lik, yaklasik 10 mg/ml'lik, yaklasik 50 mg/ml'lik veya yaklasik 100 mg/ml'lik bir konsantrasyonda verilir. 42. 1-41 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süjedeki bir motonörondaki SMNZ mRNA'nin ekson 7'sinin inklüzyonu artar. 43. 1-42 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süjedeki bir motonörondaki SMN2 ekson 7 amino asitlerinin inklüzyonu artar. 44. Bir süjedeki bir motonörondaki SMN2 mRNA'nin ekson 7'sinin inklüzyonunun arttirilmasi için bir yöntem olup, süjeye, insan SMN2'sini kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid 'verilmesini ve böylelikle süjedeki motonörondaki SMN2 mRNA'nin ekson 7'sinin inklüzyonunun arttirilmasini içerir. 45. Bir süjedeki bir motonörondaki SMN2 polipeptidindeki ekson ”7 amino asitlerinin inklüzyonunun arttirilmasi için bir yöntem olup, süjeye, insan SMN2'sini kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid verilmesini ve böylelikle süjedeki motonörondaki SMN2 polipeptidindeki ekson 7 amino asitlerinin inklüzyonunun arttirilmasini içerir. 46. 1-45 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje SMA hastasidir. 47. 1-45 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje tip I SMA hastasidir. 48. 1-45 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje tip II SMA hastasidir. 49. 1-45 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje tip III SMA hastasidir. 50. 1-49 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bir birinci doz in utero verilir. 51. Paragraf 50'ye göre yönteni olup, burada birinci doz, kan-beyin-bariyerinin tam olusumu öncesinde verilir. 52. 1-49 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bir birinci doz süjenin dogumunun 1 haftasi içinde verilir. 53. 1-49 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bir birinci doz süjenin dogumunun 1 ayi içinde verilir. 54. 1-49 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bir birinci doz süjenin dogumunun 3 ayi içinde verilir. 55. 1-49 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bir birinci doz süjenin dogumunun 6 ayi içinde verilir. 56. 1-49 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bir birinci doz süje 1 ila 2 yasindayken 57. 1-49 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bir birinci doz süje 1 ila 15 yasindayken verilir. 58. 1-49 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bir birinci doz süje 15 yasindan büyükken verilir. 59. 1-58 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje bir memelidir. 60. Paragraf 59'a göre yöntem olup, burada süje bir insandir. 61. 1-60 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, SMA'si olan bir hastanin tanimlanmasini içerir. 62. Paragraf 61'e göre yöntem olup, burada süje, süjenin bir ya da daha fazla kasinin elektriksel aktivitesinin Ölçülmesiyle tanimlanir. 63. Paragraf 61'e göre yöntem olup, burada süje, süjenin, süjenin SMNl geninde bir mutasyona sahip olup olmadigini belirlemek için bir genetik testle tanimlanir. 64. Paragraf 61'e göre yöntem olup, burada suje kas biyopsisiyle tanimlanir. 65. Paragraf 42'ye göre yöntem olup, burada antisens bilesiginin verilisi, ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA miktarinda en az %10 bir artisla sonuçlanir. 66. Paragraf 65'e göre yöntem olup, burada ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA miktarindaki artis en az %ZO'dir. 67. Paragraf 65'e göre yöntem olup, burada ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA miktarindaki artis en az %50'dir. 68. Paragraf 65'e göre yöntem olup, burada ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA miktarindaki artis en az %70'tir. 69. Paragraf 43'e göre yöntem olup, burada antisens bilesiginin verilisi, ekson '7 amino asitlerine sahip SMN2 polipeptidi miktarinda en az %10 bir artisla sonuçlanir. 70. Paragraf 69'a göre yönteni olup, burada ekson '7 amino asitlerine sahip SMN2 polipeptidi miktarindaki artis en az 71. Paragraf 69'a göre yöntem olup, burada ekson '7 amino asitlerine sahip SMN2 polipeptidi miktarindaki artis en az 72. Paragraf 69'a. göre yönteni olup, burada. ekson '7 amino asitlerine sahip SMN2 polipeptidi miktarindaki artis en az 73. 1-72 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesiginin verilisi, süjedeki SMA'nin en az bir semptomunu iyilestirir. 74. Paragraf 73'e göre yöntem olup, burada antisens bilesiginin verilisi, süjede gelismis motor fonksiyonuyla sonuçlanir. 75. Paragraf 73'e göre yöntem olup, burada antisens bilesiginin verilisi, süjede geciktirilmis veya indirgenmis motor fonksiyonu kaybiyla sonuçlanir. 76. Paragraf 73'e göre yöntem olup, burada antisens bilesiginin verilisi, gelismis solunum fonksiyonuyla sonuçlanir. 77. Paragraf 73'e göre yöntem olup, burada antisens bilesiginin verilisi, gelismis sagkalimla sonuçlanir. 78. 1-77 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens nükleotidin en az bir nükleosidi bir modifiye seker bölütü içerir. 79. Paragraf 78'e göre yöntem olup, burada en az bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksieti1 seker bölütü 80. 1-79 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens oligonükleotidin esasen her bir nükleosidi bir modifiye seker bölütü içerir. 81. Paragraf 80'e göre yöntem olup, burada bir modifiye seker bölütü içeren nükleositlerin tamami ayni seker modifikasyonunu içerir. 82. Paragraf 81'e göre yöntem olup, burada her bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütü içerir. 83. 1-79 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens oligonükleotidin her bir nükleosidi bir modifiye seker bölütü içerir. 84. Paragraf 83'e göre yöntem olup, burada nükleositlerin tamami ayni seker modifikasyonunu içerir. 85. Paragraf 84'e göre yöntem olup, burada her bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütü içerir. 86. 1-85 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada en az bir nükleosit arasi baglanti bir fosforotioat nükleosit arasi baglantidir. 87. Paragraf 86'ya göre yöntem olup, burada her bir nükleosit arasi baglanti bir fosforotioat nükleosit. arasi baglantidir. 88. l-87 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens oligonükleotid 10 ila 25 arasinda bagli nükleositten olusur. 89. 1-87 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens oligonükleotid 12 ila 22 arasinda bagli nükleositten olusur. 90. 1-87 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens oligonükleotid 15 ila 20 arasinda bagli nükleositten olusur. 91. 1-87 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens oligonükleotid 18 bagli nükleositten olusur. 92. 1-91 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens oligonükleotid, insan SMN2 kodlayan nükleik aside en az %90 tamamlayicidir. 93. Paragraf 92'ye göre yöntem olup, burada antisens oligonükleotid, insan SMN2 kodlayan nükleik. aside tamamen tamamlayicidir. 94. 1-93 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada oligonükleotid, SEQ ID NO: 1 nükleobaz dizisinin en az 10 bitisik nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir. 95. Paragraf 94'e göre yöntem olup, burada oligonükleotid, SEQ ID NO: 1 nükleobaz dizisinin en az 15 bitisik nükleobazini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir. 96. Paragraf 94'e göre yöntem olup, burada oligonükleotid, SEQ ID NO: 1 nükleobaz dizisini içeren bir nükleobaz dizisine sahiptir. 97. Paragraf 94'e göre yöntem olup, burada oligonükleotid, SEQ ID NO: 1 nükleobaz dizisinden olusan bir nükleobaz dizisine sahiptir. 98. 1-97 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesik bir konjugat grubu veya terminal grubu içerir. 99. 1-97 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesik antisens oligonükleotidden olusur. 100. 1-99 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre yöntem olup, burada antisens bilesik ayrica sistemik olarak 101. Paragraf 100'e göre yöntem olup, burada sistemik verilis, intravenöz veya intraperitoneal enjeksiyonladir. 102. Paragraf 100 ya da 101'e göre yöntem olup, burada sistemik verilis ve merkezi sinir sisteminin içine verilis 103. Paragraf 100 ya da 101'e göre yöntem olup, burada sistemik. verilis ve merkezi sinir sisteminin içine verilis farkli zamanlarda gerçeklestirilir. 104. Insan SMNZ kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici olan bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesik olup, 1-103 arasindaki paragraflarin herhangi birine göre bir yöntemde kullanim içindir. 105. Paragraf 104'e göre antisens bilesik olup, sagkalim motor nöronu l'le (SMNl) iliskili bir hastaligin ya da durumun tedavisinde kullanim içindir. 106. Insan SMNZ kodlayan bir nükleik asidin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin, önceki paragraflarin herhangi birine göre bir yöntemde kullanim için bir ilacin üretiminde kullanimidir. 107. Paragraf 106'ya göre kullanim olup, burada ilaç, sagkalim motor nöronu 1'le (SMNl) iliskili bir hastaligin.

Claims (4)

ISTEMLER
1. l.Spinal kas atrofisi (SMA) olan bir insan süjenin tedavisinde kullanini için, insan SMN2 kodlayan bir Ön- mRNA'nin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesik olup, burada bilesik insan süjenin intratekal boslugundaki beyin- omurilik sivisinin içine verilir, burada antisens oligonükleotid SEQ ID NO: 1'in nükleobaz dizisinden olusan bir nükleobaz dizisine sahiptir, burada antisens oligonükleotidin her bir nükleosidi bir modifiye seker bölütü içerir, burada her bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütüdür ve burada her bir nükleosit arasi baglanti bir fosforotioat baglantidir.
2. 2.Insan SMN2 kodlayan bir ön-mRNA'nin intron 7'sine tamamlayici bir antisens oligonükleotid içeren bir antisens bilesigin, spinal kas atrofisi (SMA) olan bir insan süjenin tedavisinde kullanim için bir ilacin üretiminde kullanimi olup, burada ilaç insan süjenin intratekal boslugundaki beyin-omurilik sivisinin içine verilir, burada antisens oligonükleotid SEQ ID NO: l'in nükleobaz dizisinden olusan bir nükleobaz dizisine sahiptir, burada antisens oligonükleotidin her bir nükleosidi bir modifiye seker bölütü içerir, burada her bir modifiye seker bölütü bir 2'-metoksietil seker bölütüdür ve burada her bir nükleosit arasi baglanti bir fosforotioat baglantidir.
3. 3.Istem l'e göre kullanim için antisens bilesik veya istem Z'ye göre bir antisens bilesigi kullanima. olup, burada verilis bir bolus enjeksiyon içerir.
4. 4.Istem 1 veya 3'e göre antisens bilesik veya istem 2 ya da 3'e göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesik, insan süjenin Vücut agirliginin kilogrami basina antisens bilesigin 0,01 ila 10 miligram arasinda bir dozunda verilir. .Istem 4'e göre kullanim için antisens bilesik veya istem 4'e göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada doz asagidaki gibidir: (a) insan süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 5 miligram arasinda antisens bilesik. (b) insan süjenin Vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 1 miligram arasinda antisens bilesik. (c) insan süjenin Vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 0,5 miligram arasinda antisens bilesik veya (d) insan süjenin vücut agirliginin kilogrami basina 0,05 ila 0,5 miligram arasinda antisens bilesik. .Istemler 1 veya 3-5'ten herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-5 herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, (i) tip I SMA'si; (ii) tip II SMA'si veya (iii) tip III SMA'si olan bir insan hastanin tedavisinde kullanim içindir. .Istemler 1 veya 3-6'dan herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-6'dan herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesigin verilisi, ekson 7'ye sahip SMN2 mRNA miktarinda en az %10 bir artisla sonuçlanir. .Istemler 1 veya 3-7'den herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-7'den herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, insan süje SMA'nin bir ya da daha fazla endikatörüne sahiptir. .Istemler 1 veya 3-8'den herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-8'den herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada insan süje SMA ile iliskili en az bir semptoma sahiptir. Istemler 1 veya 3-9'dan herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-9'dan herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesik hem sistemik olarak hem merkezi sinir sisteminin içine verilir ve burada sistemik verilis ve merkezi sinir sisteminin içine verilis farkli zamanlarda gerçeklestirilir. Istem lO'a göre kullanim için antisens bilesik veya bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada sistemik verilis subkütan verilisle, intravenöz veya intraperitoneal enjeksiyonladir. Istemler 1 veya 3-9'dan herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-9'dan herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesigin bir birinci dozu, insan süjenin dogumunun bir haftasi içinde verilir. Istemler 1 veya 3-9'dan herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-9'dan herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesigin bir birinci dozu insan süjenin dogumunun bir ayi içinde verilir. Istemler 1 veya 3-9'dan herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-9'dan herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesigin bir birinci dozu insan süjenin dogumunun üç ayi içinde verilir. Istemler 1 veya 3-9'dan herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-9'dan herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesigin bir birinci dozu insan süjenin dogumunun alti ayi içinde verilir. Istemler 1 veya 3-9'dan herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-9'dan herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesigin bir birinci dozu insan süje 1 ila 2 yasindayken verilir. Istemler 1 veya 3-9'dan herhangi birine göre kullanim için antisens bilesik veya istemler 2-9'dan herhangi birine göre bir antisens bilesigin kullanimi olup, burada antisens bilesigin bir birinci dozu insan süje 1 ila 15 yasindayken verilir.