TR201811185T4 - Anti-cd28 hümanize edilmiş antikorlar. - Google Patents
Anti-cd28 hümanize edilmiş antikorlar. Download PDFInfo
- Publication number
- TR201811185T4 TR201811185T4 TR2018/11185T TR201811185T TR201811185T4 TR 201811185 T4 TR201811185 T4 TR 201811185T4 TR 2018/11185 T TR2018/11185 T TR 2018/11185T TR 201811185 T TR201811185 T TR 201811185T TR 201811185 T4 TR201811185 T4 TR 201811185T4
- Authority
- TR
- Turkey
- Prior art keywords
- antibody
- sequence
- seq
- fab
- cells
- Prior art date
Links
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- 241001068914 Melicope knudsenii Species 0.000 claims 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 claims 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 abstract 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 abstract 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 22
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 19
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 19
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 10
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 10
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 10
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 8
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 7
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XUHLIQGRKRUKPH-ITZCMCNPSA-N 3-(Allylsulphinyl)-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CS(=O)CC=C XUHLIQGRKRUKPH-ITZCMCNPSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 102220124379 rs886043653 Human genes 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 101100166600 Homo sapiens CD28 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000686985 Mouse mammary tumor virus (strain C3H) Protein PR73 Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 101100025811 Caenorhabditis elegans hch-1 gene Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241001658031 Eris Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 206010024641 Listeriosis Diseases 0.000 description 1
- 102000028435 Neuropeptide Y4 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010002245 Neuropeptide Y4 receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001662443 Phemeranthus parviflorus Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical class N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/524—CH2 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Buluş, insan lenfosit reseptörü CD28'e karşı yönlendirilmiş hümanize edilmiş antikorlarla ilgilidir. Tek değerli bir formda kullanıldığında, bu antikorlar, CD28'i aktive etmeden, CD28/B7 etkileşimini bloke edebilen antagonistlerdir. Bu antikorlar, özellikle CD28 reseptörü aracılığıyla T hücresi aktivasyonunu bloke etmek için terapötik ajanlar olarak kullanılabilir.
Description
Tarifnameye göre ekspresyon vektörleri olusturmak için
kullanilabilen vektörler kendi içlerinde bilinmektedir ve
özellikle kullanilmasi amaçlanan konakçi hücrenin bir
fonksiyonu olarak seçilecektir.
Mevcut tarifname ayrica bulusa ait bir polinükleotitle
dönüstürülmüs konakçi hücreleri kapsar. Tercihen, bahsedilen
konakçi hücre, bulusa ait ahCD28.3 antikorunun agir zincirini
kodlayan bir diziyi içeren bir polinükleotid ve bulusa ait bir
hCD28.3 antikorunun hafif zincirini kodlayan bir diziyi içeren
bir polinükleotid ile dönüstürülür ve bahsedilen antikoru
eksprese eder. Bahsedilen polinükleotitler ayni ekspresyon
vektörüne veya iki ayri ekspresyon vektörüne eklenebilir.
Mevcut bulus baglaminda kullanilabilen konakçi hücreler,
prokaryotik veya ökaryotik hücreler olabilir. Kullanilabilen
ökaryotik hücreler arasinda, özellikle bitki hücrelerine,
Saccharomyces gibi maya hücrelerine, Drosophila veya
Spodoptera hücreleri gibi böcek hücrelerine ve HeLa, CHO, 3T3,
C127, BHK, COS, vb. gibi memeli hücrelerine deginilecektir.
Tarifnameye ait ekspresyon vektörlerinin olusturulmasi ve
konakçi hücrelerin dönüstürülmesi geleneksel moleküler
biyoloji teknikleriyle gerçeklestirilebilir.
Tarifnamenin baska bir amaci, bulusa ait bir hCD28.3
antikorunun hazirlanmasi için bir yöntemdir. Bahsedilen
yöntenu bulusa ait bir hCD28.3 antikorunun agir zincirini
kodlayan bir diziyi ve bulusa ait bir hCD28.3 antikorunun
hafif zincirini kodlayan bir diziyi içeren bir polinükleotidi
ve bahsedilen antikoru bahsedilen kültürden geri kazanmayi
içeren bir polinükleotid, ile dönüstürülmüs bir konakçi
hücrenin kültürlenmesini içerir.
Antikor konakçi hücre tarafindan salgilanirsa, dogrudan kültür
ortamindan geri kazanilabilir; saglanamazsa, hücre lizisi
önceden gerçeklestirilecektir. Antikor daha sonra kültür
ortamindan veya hücre lizatindan, teknikte uzman kisilerce
bilinen geleneksel prosedürlerle, örnegin parçalarina ayrilmis
çökeltme, özellikle amonyum sülfat, elektroforez, jel
filtrasyonu, afinite kromatografisi. vb. ile çökeltme yoluyla
saflastirilabilir.
Bulusa ait hCD28.3 antikorlari, tibbi ürünler elde etmek için
kullanilabilir. Bu tibbi ürünler ayrica bulusun amacinin bir
parçasidir.
Mevcut bulus ayrica farmasötik olarak kabul edilebilir bir
eksipiyanla birlikte bulusa ait ahCD28.3 antikorunu içeren bir
terapötik bilesim içerir.
Tercihen, bahsedilen bilesinn bulusa. ait 5 ila 10 mg/Kg'lik
bir hCD28.3 antikorundan avantajli olarak 0,5 ila 20 mg/Kg'lik
bir dozun uygulanmasina izin verecek sekilde formüle edilmis,
bagirsakdisi uygulama için bir bilesimdir. Bilesimin
enjeksiyon yolu tercihen deri alti veya damar içi olabilir.
Örnegin, bulusa ait hCD28.3 antikorlari, CD28 reseptörünü
içeren T hücresi aktivasyon olaylarini seçici olarak bloke
eden bagisiklik baskilayici tibbi ürünlerin elde edilmesi için
kullanilabilir. CD28'in seçici olarak bloke edilmesiyle etki
eden bu tip bagisiklik baskilayici ilaçlar, özellikle,
patojenik bir ajan (özellikle cüzzam, tüberküloz, laysmanyaz,
listeriyoz, vb.) ile enfeksiyonu takiben, alerjik olaylarda
yer alan ve ayni zamanda kronik inflamasyonlu hastaliklarin
patojenezinde yer alan organ nakli reddi, graft-versus-host
hastaligi, tip I diyabet, romatoid artrit veya multipl skleroz
ve tip ID] asiri duyarlilik gibi 'T lenfosit aracili otoimmün
hastaliklari da içeren tüm T lenfosite bagli patolojik
kosullardaki uygulamalara sahiptir.
Mevcut bulus, bulusa uygun bir hCD28.3 antikorunun
preparatinin ve özelliklerinin sinirlayici olmayan örneklerine
deginilen, asagidaki açiklamadan daha net olarak
anlasilacaktir.
Tarfinameye ait ekspresyon vektörlerinin olusturulmasi ve
konakçi hücrelerin dönüstürülmesi standart moleküler biyoloji
teknikleriyle yapilabilir.
Bulusa ait bir hCD28.3 antikoru, bahsedilen antikoru kodlayan
bir nükleik asit dizisini içeren bir ekspresyon vektörüne
sahip bir konakçi hücrenin, bunun ekspresyonu için uygun
kosullar altinda kültürlenmesi ve bahsedilen antikorun konakçi
hücre kültüründen geri kazanilmasiyla elde edilebilir.
Mevcut bulus, bulusa ait hCD28.3 antikorlarinin özelliklerini
gösteren örneklere deginen asagidaki ek açiklama ile daha
fazla açiklanacaktir. Bununla birlikte, bu örneklerin, sadece
bulusun örneklenmesi amaciyla verildigi ve herhangi bir
sekilde bir sinirlama teskil etmedigi anlasilmalidir.
SEKILLERIN AÇIKLAMASI
Sekil 1: Sinyal-VH-hCHl yapisinin nükleotidike amino asit
dizileri. Kalin: öncü dizi; Alti çizili: temel CD28.3
antikorunun CDR'lerinin konumlari. Italik: insan CHI bölgesi;
Vurgulanan ve alti çift çizili: CD28.3 antikoru VH bölgesinde
yapilan ornatimlar.
Sekil 2: Sinyal-VL-hCK yapisinin nükleotidik ve amino asit
dizileri. Kalin: öncü dizi; Alti çizili: temel CD28.3
antikorunun CDR'lerinin konumlari. Italik: insan c kappa
bölgesi; Vurgulanan. ve alti çift çizili: CD28.3 antikoru `VL
Sekil 3: A) ELISA baglamasinda artan FRlO4, hCD28.3 Fab veya
CD28.3 Fab konsantrasyonlari için 405 nm'de optik yogunluk; B)
gerileme egrilerinin hesaplanmasi, karsilastirmali AC5O
degerlerinin belirlenmesine izin verir.
Sekil 4: hVHCD28.3-kisa. menteseyl-hy4CH2CH3 yapisinin
nükleotidik ve amino asit dizileri. Kalin: öncü dizi. Alti
çizili: CDR'ler. Alti çift çizili: mentese bölgesi. Alti
noktali çizili: insan IgG4'ünün CHZ-CH3 alanlari.
Sekil 5: hVLCD28.3-kisa menteseyl-hy4CH2CH3 yapisinin
nükleotidik ve amino asit dizileri. Kalin: öncü dizi. Alti
çizili: CDR'ler. Alti çift çizili: mentese bölgesi. Alti
noktali çizili: insan IgG4'ünün CHZ-CH3 alanlari.
Sekil 6: hVHCD28.3-tam menteseyl-hy4CHZCH3 yapisinin
nükleotidik ve amino asit dizileri. Kalin: öncü dizi. Alti
çizili: CDR'ler. Alti çift çizili: mentese bölgesi. Alti
noktali çizili: insan IgGl'inin CH2-CH3 alanlari.
Sekil 7: hVLCD28.3-tam menteseyl-hy4CH2CH3 yapisinin
nükleotidik ve amino asit dizileri. Kalin: öncü dizi. Alti
çizili: CDR'ler. Alti çift çizili: mentese bölgesi. Alti
noktali çizili: insan IgGl'inin CH2-CH3 alanlari.
Sekil 8: hVH/VL CD28.3 tek degerli antikorlarin anti-CD28
baglama özellikleri. COS hücreleri, 2 ug (her bir) pSinyal-
hVH-kisa menteseyl-hy4CH2-CH3 ve pSinyal-hVL-kisa menteseyl-
hy4CH2-CH3 ile birlikte transfekte edildi veya 2 pg (her bir)
pSinyal-hVH-tam menteseyl-hy4CH2-CH3 ve pSinyal-hVL-tam
menteseyl-hy4CH2-CH3 ile birlikte transfekte edildi. 6 gün
sonra, süpernatantlar toplandi ve bir* birinci sandviç ELISA
kullanilarak tek degerli antikorlarin dozu ayarlandi.
Süpernatantlar ayrica immobilize edilmis CD28 hedef
molekülleri üzerinde bir baglayici ELISA ile belirlendi ve
bagli tek degerli anti-CD28 antikorlari, peroksidazla
etiketlenmis insan disi Fc antikorlari ile açiga çikarildi. A:
Belirtilen moleküller ile konsantrasyonlarina göre elde edilen
optik yogunluk. B: gerileme egrileri ve EDSO hesaplamasi
(etkili doz 50), bu tahlilde % 50 baglama aktivitesine ulasmak
için gereken konsantrasyon.
Sekil 9: hVH/VL CD28.3 tek degerli antikorlari, aktive edilmis
T hücreleri tarafindan lL-2 salgilanmasini inhibe eder. Jurkat
T hücreleri, belirtilen saflastirilmis hVH/VL-kisa menteseyl-
hy4CH2-CH3 dek degerli antikorlari konsantrasyonlarinin
varliginda, 48 saat boyunca SEE süperantijeni ve Raji antijeni
tarafindan sunulan hücreler ile uyarildi. Süpernatan toplandi
Sekil 10: Hümanize edilmis CD28.3 antikorundan C96-Fab'larin
pegilasyonundan sonra, indirgenmemis kosullar altinda SP
sefaroz HP-kromatografisi (solda) ve SBS-PAGE (sagda). Serit
l: isaretleyici; serit 2: yük; serit 3: Tepe l; serit 4: Tepe
2; serit 5: Tepe 3.
Sekil 11: C96 mutasyonlari olan veya olmayan rekombinant
hCD28.3 Fab'larinin CD28 için baglama özellikleri. Grafik, Fab
konsantrasyonuna (X ekseni) göre baglanma aktivitesini (Y
ekseni) göstermektedir.
Sekil 12: Hümanize edilmis CD28.3 antikorundan C96A-Fab'larin
pegilasyonundan sonra, indirgenmemis kosullar altinda SP
sefaroz HP-kromatografisi (solda) ve SBS-PAGE (sagda). Serit
l: MW isaretleyicileri; serit 2: Pegile edilmis proteinlerin
ön kromatografisi; serit 3: baslangiç materyalin % 41'ini
temsil eden mono pegile edilmis Fab ihtiva eden tepe 1.
Sekil 13: Agir zincirde bir CAA C-terminal dizisine sahip
hümanize edilmis CD28.3 antikorundan C96A-Fab'larin
pegilasyonundan sonra, indirgenmemis kosullar altinda SP
sefaroz HP-kromatografisi (solda) ve SDS-PAGE (sagda). Serit
l: MW isaretleyicileri; serit 2: Pegile edilmis proteinlerin
ön kromatografisi; serit 3: tepe.
ÖRNEK 1: HCD YAPISI
VE ÖKORYOTIK EKSPRESYONU
Agir Zincir:
Insan CHI bölgesini kodlayan diziyle (NCBI Erisim. numarasi
AAFO3881) ve dogal faregil CD28.3 antikorunun agir zincirinin
öncü peptidini kodlayan bir diziyle füzyonda hCD28.3'ün (DIZI
NO: 1) VH bölgesini kodlayan dizi kimyasal olarak sentezlendi
ve amplifikasyon için pGA18 klonlama vektörüne (Geneart) dahil
edildi. Daha sonra dizi, KpnI/BamHI kisitlama enzimleri ile
sindirim yoluyla eksize edilmis ve plazmid pcDNA3.l-higro'nun
(Invitrogen) KpnI/BamHI bölgelerine alt klonlanmistir. Pozitif
klonlar, transfeksiyon adimi için Midiprep-endotoksinsiz
(Macherey-Nagel) olarak amplifiye edildi ve saflastirildi.
Elde edilen plazmid pSinyal-VH-hCHl olarak belirlenmistir.
CD28.3 agir zincir öncü peptidini kodlayan dizi ile insan CHI
bölgesini (NCBI Erisim numarasi AAFO3881) kodlayan dizi
arasinda hCD28.3'ün VH bölgesini kodlayan diziye sahip bir
yapi içerir.Bu yapinin nükleotidik ve amino asit dizileri,
Sekil 1'de gösterilmistir. Bunlar ayrica ekli dizi listesinde
DIZI NO: 3 ve DIZI NO: 4 olarak gösterilir.
Hafif zincir:
Insan c kappa bölgesini kodlayan diziyle (NCBI Erisim numarasi
BACOl725) ve dogal faregil CD28.3 antikorunun hafif zincirinin
öncü peptidini kodlayan bir diziyle füzyonda hCD28.3'un (DIZI
NO: 2) VL bölgesini kodlayan dizi kimyasal olarak sentezlendi
ve amplifikasyon için pGA18 klonlama vektörüne (Geneart) dahil
edildi. Daha sonra dizi, KpnI/BamHI kisitlama enzimleri ile
sindirim yoluyla eksize edilmis ve plazmid pcDNA3.A-higro'nun
(Invitrogen) KpnI/BamHI bölgelerine alt klonlanmistir. Pozitif
klonlar, transfeksiyon adimi için Midiprep-endotoksinsiz
(Macherey-Nagel) olarak amplifiye edildi ve saflastirildi.
Elde edilen plazmid pSinyal-VL-hCK olarak belirlenmistir.
CD28.3 hafif zincir sinyal peptidini kodlayan dizi ile insan c
kappa bölgesini (NCBI Erisim numarasi BACOl725) kodlayan dizi
arasinda hCD28.3'ün VL bölgesini kodlayan diziye sahip bir
yapi içerir. Bu yapinin nükleotidik ve amino asit dizileri,
Sekil 2'de gösterilmistir. Bunlar ayrica ekli dizi listesinde
DIZI NO: 5 ve DIZI NO: 6 olarak gösterilir.
Ökaryotik ekspresyon
COS hücreleri, üreticinin talimatlarina göre Fugene
lipofeksiyon kiti (Roche Diagnostics, Basel, Isviçre)
kullanilarak 2 pg (her bir) pSinyal-VL-hCHl ve pSinyal-VFI-
hCHl ile birlikte transfekte edilmistir. Kültürler 3 gün
boyunca 37 °C'de tutuldu, üçte bir bölündü ve 3 gün daha
kültüre geri konuldu, bundan sonra hücre süpernatanlari
toplandi.
hCD28.3 tek degerli antikorunun aktivitesi, asagidaki Örnek
2'de tarif edildigi gibi, dogrudan ELISA ile süpernatantta
degerlendirilir.
ÖRNEK 2: HCD28.3 FAB FRAGMAN BAGLAMA AKTIVITESININ ELISA
YOLUYLA SAPTANMASI
hCD28.3 Fab fragmaninin baglama özellikleri, iki ELISA tahlili
kullanilarak CD28.3 Fab (hümanize edilmemis) için kodlayan
plazmidler ile Cos hücrelerinin transfeksiyonundan sonra elde
edilenlerle karsilastirilmistir.
Ilk olarak (Sandviç ELISA), transfekte edilmis COS
hücrelerinin kültür süpernatantlarindaki hCD28.3 ve CD28.3 Fab
fragmanlarinin konsantrasyonlari bir sandviç ELISA
kullanilarak belirlenmistir. Kisaca, süpernatantlarda bulunan
anti-CD28 Fab, ilk olarak CD28.3'ün agir* ve hafif degisken
alanlari için spesifik olan bir tavsan poliklonal antikoru
tarafindan yakalanir (dogal CD28.3'ün agir ve hafif degisken
alanlarini içeren tek Zincirli bir FV ile tavsanlarin asilama
isleminden sonra elde edilir ve CD28.3 Fab-Sefaroz'da
immunoadsorbsiyon yoluyla saflastirilir). Yakalanan proteinler
daha sonra insan IgG'sinin kappa zincirine yönlendirilmis bir
fare monoklonal antikoru, saflastiran peroksidazla
isaretlenmis bir poliklonal keçi anti-fare antikoru ile ortaya
çikar. Baglanan antikor TMB substrati kullanilarak kolorimetri
ile açiga çikarildi ve 405 nm'de okundu.
Süpernatantin farkli dilüsyonlarina karsilik gelen OD daha
sonra, FRlO4 olarak adlandirilan bir CD28.3 Fab'in bilinen
miktarlari ile elde edilen standart bir egri ile
karsilastirilir, dönüstürülmüs CHO hücrelerinin kültür
süpernatanindan standart kromatografi teknikleriyle
saflastirilmis ve bir BCA (bisenkronik asit) tahlili ile dozu
ayarlanmistir. FR104, CD28.3 antikorunun dogal (hümanize
edilmemis), VH ve VL bölgelerini içerir. Bu nedenle, hücre
süpernatantlarinda bulunan Fab proteinlerinin miktarini
degerlendirilebilir.
Ikinci olarak (ELISA Baglamasi), CD28.3 Fab ile
karsilastirildiginda hCD28.3 Fab fragmanlarinin baglama
aktivitesini test etmek için, 4 °C'de bir gece boyunca
mikrotitre plakalarinin (Nunc lmmunoplates) kuyucuklarini (50
uL/kuyucuk) kaplamak üzere 2 ug/ml'de karbonat tamponu pH
9,2'lik 0,05M içinde kimerik insan CD28/Fc'si (R&D Systems,
Abingdon, United Kingdom) kullanilmistir. Bu immobilize
edilmis CD28 hedef molekülleri, anti-CD28 aktivitesi ile
sadece immünoreaktif molekülleri baglar.
Kuyucuklar daha sonra 3 kez art arda 200 uL PBS-% 0,05 Tween
ile yikandi ve 2 saat boyunca 37 °C'de 100 uL PBS Tween % 0,1
BSA % 1 ile doygun hale getirildi.
Daha sonra 200 uL PBS-% 0,05 Tween ile 3 yikamanin ardindan,
bilinen konsantrasyonlarda CDZ8.3 veya hCDZ8.3 Fab fragmanlari
içeren süpernatanlar PBS - % 0,1 Tween içinde farkli
dilüsyonlara ilave edildi (50 uL/kuyucuk) ve 2 saat boyunca 37
°C'de inkübe edildi. 200 uL PBS-% 0,05 Tween ile 3 yikamadan
sonra, insan lgG'sinin (1/10000 dilüsyon) kappa zincirine
yönlendirilmis bir fare monoklonal antikoru ilave edildi (1
saat boyunca, 37 °C'de), bunu takiben peroksidaz-konjuge keçi
anti-fare antikorlari (1/2000 dilüsyon), TMB substrati
kullanilarak kolorimetrik taniyici ile takip edildi ve 405
nm'de okudu.
Daha sonra sonuçlar, sandviç ELISA ile ölçülen Fab
konsantrasyonuna (X ekseni) göre, ELISA baglamasi ile ölçülen
absorbans (Y ekseni) olarak çizilir. Bir ACSO (Antikor
Konsantrasyonu 50), egrisinin egimi, baglama analizinde
maksimum optik yogunlugun (OD) % 50'sine ulasmak için gereken
anti-CD28 Fab konsantrasyonu olarak dogrusal aralikta
hesaplandiktan sonra belirlenir.
Sonuçlar, Sekil 3 ve Tablo 1'de gösterilmektedir.
Sekil 3A, ELISA Baglamasinda artan FRlO4, hCD28.3 Fab veya
CD28.3 Fab konsantrasyonlari için 405 nm'de optik yogunlugu
göstermektedir.
Sekil 3B, karsilastirmali ACSO degerlerinin belirlenmesine
izin veren gerileme egrilerinin hesaplanmasini göstermektedir.
Asagidaki Tablo I, standart FR104 için ODSO'yi, denklemi, ve
ACSO ve Fab fragmanlari VH-yabani tip + VL-yabani tip ve Fab
hCD28.3'ü özetlemektedir.
Tablo I
OD50 Denklem AC50
Bu sonuçlar, CD28'e baglama aktivitesinin 6 50'sinin, VH-
yabani tip + VL-yabani tip (CD28.3 Fab) ve hCD28.3 Fab gibi
Fab fragmanlari için benzer bir konsantrasyonda elde
edilebilecegini göstermektedir. Analizden önce nmhtemelen
saflastirildigindan, konsantrasyon standart için biraz daha
düsüktür. Böylece hCD28.3, CD28'in yabani tip VH ve VL
dizilerinin CD28 baglama özelliklerini korur.
ÖRNEK 3: KISA BIR yl MENTESESI VE BIR y4-CH2-CI-I3 ALANI OLAN
BIR HCD YAPISI VE
ÖKARYOTIK EKSPRESYONU
Agir zincir:
Insan IgGl'sinin (DIZI NO: 8) mentese bölgesinin bir kismini
kodlayan diziyle, insan IgG4'ün CH2-CH3 bölgeleri ile kodlama
dizisi ile C-terminal kaynasmasinda (dizinin NCBI Erisim
faregil CD28.3 antikorunun agir zincirinin öncü peptidini
kodlayan bir diziye sahip N terminali pozisyonunda hCD28.3'ün
(DIZI NO: 1) VH bölgesini kodlayan dizi, kimyasal olarak
sentezlendi ve amplifikasyon için klonlama vektörü pMA'ya
(Geneart) dahil edildi. Daha sonra dizi, Nhel/EcoRI kisitlama
enzimleri ile sindirim yoluyla eksize edilmis ve plazmid
pCIneo'nun (Promega) Nhel/EcoRI bölgelerine alt klonlanmistir.
E. coli hücrelerinin dönüsümünden sonra, pozitif klonlar
çogaltildi ve öztülenen plazmidler Midiprep-endotoksinsiz
kolonlar (Macherey-Nagel) ile saflastirildi.
Elde edilen plazmid, pSinyal-hVH-kisa menteseyl-hy4CH2-CH3
olarak belirlenmistir. CD28.3 agir zincir sinyal peptidini
kodlayan dizi ile insan yl mentese bölgesinin ve insan v4 CH2-
CH3 alanlarinin bir parçasini kodlayan dizi arasinda
hCD28.3'ün VH bölgesini kodlayan diziye sahip bir yapi içerir.
Bu yapinin nükleotidik ve amino asit dizileri, Sekil 4'de
gösterilmistir. Bunlar ayrica ekli dizi listesinde DIZI NO: 9
ve DIZI NO: 10 olarak gösterilir.
Hafif zincir:
Insan IgGl'sinin (DIZI NO: 8) mentese bölgesinin bir kismini
kodlayan diziyle, insan IgG4'ün CH2-CH3 bölgeleri ile kodlama
dizisi ile kaynasmasinda (dizinin, NCBI Erisini numarasi
CD28.3 antikorunun agir zincirinin öncü peptidini kodlayan bir
diziye sahip N terminali pozisyonunda hCD28.3'ün (DIZI NO: 2)
VL bölgesini kodlayan dizi, kimyasal olarak sentezlendi ve
amplifikasyon için klonlama vektörü pMA'ya (Geneart) dahil
edildi. Daha sonra dizi, Nhel/ECORI kisitlama› enzimleri ile
sindirim. yoluyla eksize edilmis ve plazmid. pCINeo'nun
(Promega) Nhel/EcoRI bölgelerine alt klonlanmistir. E. coli
hücrelerinin dönüsümünden sonra, pozitif klonlar çogaltildi ve
öztülenen plazmidler Midiprep-endotoksinsiz kolonlar
(Macherey-Nagel) ile saflastirildi.
Elde edilen plazmid, pSinyal-hVL-kisa menteseyl-hy4CH2-CH3
olarak belirlenmistir. CD28.3 hafif zincir sinyal peptidini
kodlayan dizi ile insan yl mentese bölgesinin ve insan y4 CH2-
CH3 alanlarinin bir parçasini kodlayan dizi arasinda
hCD28.3'ün VL bölgesini kodlayan diziye sahip bir yapi içerir.
Bu yapinin nükleotidik ve amino asit dizileri, Sekil 5'de
gösterilmistir. Bunlar ayrica ekli dizi listesinde DIZI NO: 11
ve DIZI NO: 12 olarak gösterilir.
Ökaryotik ekspresyon
COS hücreleri, üreticinin talimatlarina göre Lipofectamine
lipofeksiyon kiti (Invitrogen) kullanilarak› l ug (her bir)
pSinyal-hVL-kisa menteseyl-hy4CH2-CH3 ve pSinyal-hVH-kisa
menteseyl-hy4CH2-CH3 ile birlikte transfekte edilmistir.
Kültürler 3 gün boyunca 37 °C'de tutuldu, daha sonra hücre
süpernatanlari toplandi. Tek degerli antikorunun aktivitesi,
asagidaki Örnek 5'de tarif edildigi gibi, dogrudan ELISA ile
süpernatantta degerlendirilir.
ÖRNEK 4: TAM UZUNLUKTA yl MENTESESI VE BIR y4-CH2-CH3 ALANI
OLAN BIR HCD
YAPISI VE ÖKARYOTIK EKSPRESYONU
Agir zincir:
Insan IgGl'sinin (DIZI NO: 7) mentese bölgesinin tam
uzunlugunu kodlayan diziyle, insan IgG4'ün CH2-CH3 bölgeleri
ile kodlama dizisi ile C-terminal kaynasmasinda (dizinin NCBI
dogal faregil CD28.3 antikorunun agir zincirinin öncü
peptidini kodlayan bir diziye sahip N terminali pozisyonunda
hCD28.3'ün (DIZI NO: 1) VE bölgesini kodlayan dizi, kimyasal
olarak sentezlendi ve amplifikasyon için klonlama vektörü
pMA'ya (Geneart) dahil edildi. Daha sonra dizi, Nhel/EcoRI
kisitlama enzimleri ile sindirim yoluyla eksize edilmis ve
plazmid pCIneo'nun (Promega) Nhel/EcoRI bölgelerine alt
klonlanmistir. E. coli hücrelerinin dönüsümünden sonra,
pozitif klonlar çogaltildi ve öztülenen plazmidler Midiprep-
endotoksinsiz kolonlar (Macherey-Nagel) ile saflastirildi.
Elde edilen plazmid, pSinyal-hVH-tam menteseyl-hy4CH2-CH3
olarak belirlenmistir. CD28.3 agir zincir sinyal peptidini
kodlayan dizi ile insan yl mentese bölgesinin ve insan y4 CH2-
CH3 alanlarini kodlayan dizi arasinda hCD28.3'ün VH bölgesini
kodlayan diziye sahip bir yapi içerir. Bu yapinin nükleotidik
ve amino asit dizileri, Sekil 6'de gösterilmistir. Bunlar
ayrica ekli dizi listesinde DIZI NO: 13 ve DIZI NO: 14 olarak
gösterilir.
Hafif zincir:
Insan IgGl'sinin (DIZI NO: 7) mentese bölgesinin tam
uzunlugunu kodlayan diziyle, insan lgG4'ün CH2-CH3 bölgeleri
ile kodlama dizisi ile kaynasmasinda (dizinin NCBI Erisim
faregil CD28.3 antikorunun agir zincirinin öncü peptidini
kodlayan bir diziye sahip N terminali pozisyonunda hCD28.3'ün
(DIZI NO: 2) VL bölgesini kodlayan dizi, kimyasal olarak
sentezlendi ve amplifikasyon için klonlama vektörü pMA'ya
(Geneart) dahil edildi. Daha sonra dizi, Nhel/EcoRI kisitlama
enzimleri ile sindirim yoluyla eksize edilmis ve plazmid
pCIneo'nun (Promega) Nhel/EcoRI bölgelerine alt klonlanmistir.
E. coli hücrelerinin dönüsümünden sonra, pozitif klonlar
çogaltildi ve öztülenen plazmidler Midiprep-endotoksinsiz
kolonlar (Macherey-Nagel) ile saflastirildi.
Elde edilen plazmid, pSinyal-hVL-tam nenteseyl-hy4CH2-CH3
olarak belirlenmistir. CD28.3 hafif zincir sinyal peptidini
kodlayan dizi ile insan yl tam uzunlukta mentese bölgesinin ve
insan Y4 CH2-CH3 alanlarini kodlayan dizi arasinda hCD28.3'ün
VL bölgesini kodlayan diziye sahip bir yapi içerir. Bu yapinin
nükleotidik ve amino asit dizileri, Sekil 7'de gösterilmistir.
Bunlar ayrica ekli dizi listesinde DIZI NO: 15 ve DIZI NO: 16
olarak gösterilir.
Ökaryotik ekspresyon
COS hücreleri, üreticinin talimatlarina göre Lipofectamine
lipofeksiyon kiti (Invitrogen) kullanilarak l ug (her bir)
pSinyal-hVH-tam. menteseyl-hy4CH2-CH3 ve pSinyal-hVL-tam
mentesevl-hy4CH2-CH3 plazmidleri ile birlikte transfekte
edilmistir. Kültürler 3 gün boyunca 37 °C'de tutuldu, daha
sonra hücre süpernatanlari toplandi.
hCD28.3 tek degerli antikorünün aktivitesi, asagidaki Örnek
'de tarif edildigi gibi, dogrudan ELISA ile süpernatantta
degerlendirilir.
ÖRNEK 5: ELISA TARAFINDAN BAGLAMA AKTIVITESI OLAN HCD28.3-TAM
UZUNLUKLU yl MENTESE- 4CH2-CH3 ALANLARININ VE HCD28.3-KISA yl
MENTESE-4CH2-CH3 ALANLARININ TEK DEGERLI ANTIKORLARININ
DEGERLENDIRILMESI
HCD28.3 tek degerli antikorlarin hCD28.3-tam yl mentesey4CH2-
CH3 alanlari ve transfekte edilmis COS hücreleri tarafindan
üretilen hCD28.3-kisa yl menteseY4CH2-CH3 alanlarinin baglanma
özellikleri iki ELISA tahlili kullanilarak analiz edilmistir.
Ilk olarak (Sandviç ELISA), transfekte edilmis COS
hücrelerinin kültür süpernatantlarindaki hCD28.3 tek. degerli
antikorlarinin konsantrasyonlari bir sandviç ELISA
kullanilarak belirlenmistir. Kisaca, süpernatanlarda bulunan
tek degerli antikorlar, ilk olarak insan IgG'sine
yönlendirilmis bir keçi poliklonal antikoru tarafindan
yakalanir. Yakalanan proteinler daha sonra bir biyotinlenmis
keçi poliklonal insan disi IgG, Fc'ye özgü antikor, daha sonra
bir Peroksidaz-konjuge streptavidin ile açiga çikar. Baglanan
antikor TMB substrati kullanilarak kolorimetri ile açiga
Süpernatantin farkli dilüsyonlarina karsilik gelen OD daha
sonra, bir hCD28.3 tek degerli antikorun bilinen Iniktarlari
ile elde edilen standart bir egri ile karsilastirilir,
dönüstürülmüs CHO hücrelerinin kültür süpernatanindan standart
kromatografi teknikleriyle saflastirilmis ve bir BCA
(bisenkronik asit) tahlili ile dozu ayarlanmistir.
Ikinci olarak (ELISA. Baglamasi), CD28.3 Fab ile
karsilastirildiginda hCD28.3tek degerli antikorlarin baglama
aktivitesini test etmek için, 4 °C'de bir gece boyunca
mikrotitre plakalarinin (Nunc Immunoplates) kuyucuklarini (50
uL/kuyucuk) kaplamak üzere 2 pg/ml'de karbonat tamponu pH
9,2'lik 0,05M içinde kimerik insan CD28/Fc'si (R&D Systems,
Abingdon, United Kingdom) kullanilmistir. Bu immobilize
edilmis CD28 hedef molekülleri, anti-CD28 aktivitesi ile
sadece immünoreaktif molekülleri baglar.
Kuyucuklar daha sonra 3 kez art arda 200 uL PBS-% 0,05 Tween
ile yikandi ve 2 saat boyunca 37 °C'de lOO uL PBS Tween % 0,1
BSA % 1 ile doygun hale getirildi.
Daha sonra 200 uL PBS-% 0,05 Tween ile 3 yikamanin ardindan,
test edilecek tek degerli antikorlarin bilinen
konsantrasyonlarini içeren süpernatanlar PBS - % 0,1 Tween
içinde farkli dilüsyonlara ilave edildi (50 uL/kuyucuk) ve 2
saat boyunca 37 °C'de inkübe edildi. 200 uL PBS-% 0,05 Tween
ile 3 yikamadan sonra, CD28.3'ün agir ve hafif degisken
alanlarina özgü bir tavsan poliklonal antiserumu (1/500
dilüsyon; 1 saat boyunca, 37 °C'de) ilave edilir (dogal
CD28.3'ün agir ve hafif degisken alanlarini içeren tek
zincirli bir FV ile tavsanlarin asilama isleminden sonra elde
edilir ve CD28.3 Fab-Sefaroz'da immunoadsorbsiyon yoluyla
saflastirilir).
Bunu takiben peroksidaz-konjuge esek anti-tavsan antikorlari
(1/2000 dilüsyon), TMB substrati kullanilarak kolorimetrik
taniyici ile takip edildi ve 405 nm'de okudu.
Daha sonra sonuçlar, sandviç ELISA. ile ölçülen tek degerli
antikor konsantrasyonuna (X ekseni) göre, ELISA baglamasi ile
Ölçülen absorbans (Y ekseni) olarak çizilir. Bir AC5O (Antikor
Konsantrasyonu 50), egrisinin egimi, baglama analizinde
maksimum optik yogunlugun (OD) % 50'sine ulasmak için gereken
monoklonal antikor konsantrasyonu olarak dogrusal aralikta
hesaplandiktan sonra belirlenir.
Sekil 8, hCD28.3-tam IgGl mentese-IgG4CH2-CH3 alanlarinin,
ELISA. baglamasinda hCD28.3-kisa lgGl mentese-lgG4CH2-CH3
alanlari tek degerli antikorlari ile baglama aktivitelerini
karsilastirmaktadir (Sekil 8A).
Sekil 8B, tek degerli antikorlar için denklemi, gerileme
faktörünü ve ACSO'yi özetler.
Bu sonuçlar, CD28'e baglanma aktivitesinin. % 50'sinin,
mentese-y4CH2-CH3 alanlari tek degerli antikorlari için benzer
bir konsantrasyonda elde edilebilecegini göstermektedir.
ÖRNEK 6: hCD28-3 TEK DEGERLI ANTIKORLARIN, T HÜCRESI
AKTIVASYONUNU ÖNLEMESI
hCD28.3 tek degerli antikorunun CD28'e bagli T hücresi
aktivasyonunu bloke ettigini dogrulamak için, bir Raji B hücre
dizisi tarafindan sunulan SEE superantijen ile insan T
hücrelerin (Jurkat hücreleri) uyarildi. Endotoksin SEE, sinif
zaman, IL-2'yi salgilamak için VpS'yi eksprese eden T Ihücre
dizisi Jurkat'i aktive eder (Herman et al, 1990, J. Exp. Med.
l72:709). Jurkat hücreleri yüksek seviyede CD28 eksprese
ettiginden ve Raji hücreleri CD80/86'yi eksprese ettiginden,
bu reaksiyon kismen CD28'e baglidir. Bu tahlilde interlökin-
2'nin sentezi, hVH/VL CD28.3-kisa vl mentese- y4CH2-CH3
alanlarinin artan konsantrasyonlarinin varliginda, 48 saat
sonra ELISA (ELISA MaxTM Set Deluxe Human IL-2 Kit; Biolegend
Sonuçlar, Sekil 9'de gösterilmistir. Bunlar, hCD28.3 tek
degerli antikorlarinin, doza bagli bir sekilde T hücreleri
tarafindan IL-2 sentezini azalttigini ortaya koymaktadir.
ÖRNEK 7: PEGILE EDILMIS hCD28.3 TEK DEGERLI ANTIKORUN
HAZIRLANMASI
Örnek l'de tarif edildigi gibi hazirlanan bir hCD28.3 Fab
fragmani, redüksiyon ve PEGilasyon için standart kosullar
kullanilarak maleimid ile aktive edilmis 4OKDa PEG ile pegile
Kisaca Fab antikor fragmanlari l mg/mL'ye konsantre edildi ve
daha sonra 20 mM Sodyum fosfat, 2 mM EDTA ve pH 7.0'a karsi
diyafiltre edildi. Fab' antikor fragmanlari daha sonra oda
sicakliginda bir molar esdeger orani = 30:1'de sisteamin
klorür ilavesiyle indirgendi. 5 saat sonra çözelti bir tuz
giderme kolonuna uygulandi.
Polietilen glikol (PEG) (Sunbright GL2 4OOMA, NOF
Corporation), agirlikça % 9 çözelti vermek üzere , pH 7.0'lik
mM Fosfat, 2 mM EDTA içinde çözüldü. Tuzu giderilmis Fab
çözeltisi ve PEG, molar esdeger orani = 1:l,5'de karistirildi
ve 3 saat boyunca ortam sicakliginda inkübe edildi.
PEGilasyonun ardindan Fab-peg, SP Sefaroz HP ortami
kullanilarak kromatografiyle saflastirildi. Hedef protein, 0
ila 1 M NaCl arasinda bir tuz gradyani ile elüte edildi. Elüte
edilen tepeler SDS-Page yöntemi ile analiz edildi. Tepe l,
monopegile edilmis malzeme, tepe 2 pegile edilmemis malzeme ve
tepe 3 polipegile edilmis malzemeyi göstermektedir.
Sonuçlar, Sekil lO'de gösterilmistir.
Bu sonuçlar, CD28.3 mAb'den Fab proteinlerinin kayda deger bir
kisminin, sadece yaklasik % 5 oraninda monopegile edilmis
Fab'lerin verimi ile sonuçlanan pertürbe bir pegilasyon
profili sergiledigini göstermektedir (tepe l).
CD28.3 mAb, degisken alan hafif zincirinin 96 pozisyonunda,
zincir içi veya zincir arasi disülfür köprülerine baglanmayan
bir sistein kalintisi (C96) içerir. Serbest sistein, disülfid
köprülerine baglanan sistein kalintilarindan daha yuksek bir
reaktiviteye sahip olacaktir ve bu nedenle tercihen maleimidle
aktive edilmis peglerin hedefleri olacaktir. Bu nedenle, bu
kalinti üzerinde ikinci, istenmeyen bir pegilasyon olusmasi
muhtemeldir.
Bu problemi çözmek için, antikorun baglama özelliklerini
degistirmeden baska bir amino asit ile C96 kalintisinin
ornatiminin mümkün olup olmadigini belirlemek için bir VL-C96
mutasyon çalismasi gerçeklestirildi.
Hafif zincirdeki modifiye edilmemis C96 ile veya C96 ila A, G,
8, V, T, N veya R mutasyonlari ile hümanize edilmis anti-
CD28.3 Fab'lari için plazmid kodlamasi yapilandirildi ve Örnek
l'de tarif edildigi gibi lipofeksiyon yoluyla Cos hücrelerine
transfekte edildi. Hücre süpernatanlari ilk olarak Örnek 2'de
tarfi edildigi gibi toplam Fab konsantrasyonunu belirlemek
için sandviç ELISA ile analiz edildi. Daha sonra
supernatantlar, Örnek 2'de tarfi edildigi gibi, immobilize
edilmis rekombinant CD28 üzerindeki baglama aktivitesini
belirlemek için ELISA ile analiz edildi.
Sonuçlar Sekil ll'da gösterilmektedir. Bu sonuçlar, test
edilen diger tüm ornatimlardan farkli olarak, C96A ornatiminin
tamamen aktif bir antikor ile sonuçlandigini ve C96N
ornatiminin sadece aktivitede orta derece bir azalma ile
sonuçlandigini göstermektedir.
C96A Fab fragmani varyanti pegile edildi ve yukarida tarif
edildigi gibi kromatografiyle saflastirildi. Pegile edilmis
proteinler ön kromatografi ve elüsyon tepeleri SDS-Page ile
analiz edildi. Sonuçlar, Sekil 12'de gösterilmistir. Tepe l,
monopegile edilmis materyali göstermektedir.
Bu sonuçlar C96A Fab fragmaninin % 41'e ulasan bir etkiyle
pegile edilebildigini göstermektedir (Sekil l2).
Agir zincirin CAA C-terminal ucunun avantaji
Serbest bir sisteinin en yakin oldugu moleküler ortami,
maleimid-pegilasyona erisebilirligini degistirebilir ve bu
nedenle pegilasyon reaksiyonunun verimini degistirir. C-
terminal sisteini için olasi bir seçenek, agir zincirin son
amino asidi olmaktir. Diger bir seçenek ise son sisteinden
sonra C-terminal pozisyonunda “stuff amino asitler”in ilave
edilmesidir.
Bu nedenler, bir Fab' molekülünün hümanize edilmis CD283
Mab'sinin C96A varyantindan pegilasyon etkinligini, son C-
terminal sistein ile agir zincirin son amino asidi (C
varyanti; Sekil 12'de gösterilen veriler) olan son C-terminal
sistein ile karsilastirildi ve ardindan iki alanin (CAA
varyanti) izlendi. Veriler açik ve tekrarlanabilir bir sekilde
CAA varyantinin % 20 daha yüksek etkinlikle pegile
edilebilecegini göstermistir (Sekil 13). Aslinda C96A-C
varyanti için »5 41 olan pegilasyon verimi C96A-CAA 'varyanti
için 6 52'ye ulasmistir.
Claims (8)
1. CD28 baglama alanina sahip bir anti-CD28 antikoru asagidakilerden olusmaktadir: - birinci degisken alan (ayrica “agir zincir degisken alani” olarak tanimlanir) asagidaki dizi tarafindan tanimlanir: VQLQQSGAELKKPGASVKVSCKASGYTFTEYIIHWIKLRSGQGLEWIGWFYPGSNDIQYNAQ FKGKATLTADKSSSTVYMELTGLTPEDSAVYFCARRDDFSGYDALPYWGQGTLVTVSA (DIZI NO: 1), bahsedilen degisken alan, istege bagli olarak, N-terminal ucunda bir Q kalintisi içerir; - ikinci degisken alan (ayrica “hafif zincir degisken alani” olarak tanimlanir) asagidaki dizi tarafindan tanimlanir: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKTNENIYSNLAWYQQKDGKSPQLLIYAATHLVEGVPSRF SGSGSGTQYSLTISSLQPEDFGNYYCQHFWGTPXTFGGGTKLEI KR, burada X == C veya A'dir.
2. Istem l'e ait bir antikor olup, özelligi; tek degerli bir antikor olmasidir.
3. Isteni Z'ye ait tek degerli bir antikor` olup, özelligi; heterodimerin asagidakilerden olusmasidir: - DIZI NO: 4'ün amino asitleri 21 ila 251 dizisine sahip olan bir birinci protein zinciri, - DIZI NO: 6'nin amino asitleri 21 ila 234 dizisine sahip olan bir ikinci protein zinciri.
4. Istem 3'e ait bir tek degerli antikor olup, özelligi; ikinci protein zincirinin, X'in bir alanin kalintisini temsil ettigi bir DIZI NO: 2'nin degisken bir alanini içermesidir.
5. Isteni 4'e ait bir tek degerli antikor olup, özelligi; pegile edilmesidir.
6. Istem 1 ila 4'ten herhangi birine ait bir antikoru kodlayan bir polinükleotid.
7. Istem 1 ila 5'ten herhangi birine ait bir antikoru içeren bir terapötik bilesim.
8. Istem l ila 5'ten herhangi birine ait bir antikor olup, özelligi; organ nakli reddi, kronik allogreft vaskülopatisi, graft-versus host hastaligi, T-lenfosit aracili otoimmün hastaliklar, hipertansiyon, alerjik olaylar ve kronik inflamasyonlu hastaliklardan olusan gruptan seçilen bir patolojik durumun tedavisinde kullanim için olmasidir.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP10290080A EP2361935A1 (en) | 2010-02-18 | 2010-02-18 | Anti-CD28 humanized antibodies |
| EP10290389 | 2010-07-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TR201811185T4 true TR201811185T4 (tr) | 2018-08-27 |
Family
ID=44482493
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TR2018/11185T TR201811185T4 (tr) | 2010-02-18 | 2011-02-16 | Anti-cd28 hümanize edilmiş antikorlar. |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US8785604B2 (tr) |
| EP (2) | EP2536764B1 (tr) |
| JP (1) | JP5992340B2 (tr) |
| CA (1) | CA2788544C (tr) |
| CY (1) | CY1120707T1 (tr) |
| DK (1) | DK2536764T3 (tr) |
| ES (2) | ES2680570T3 (tr) |
| HR (1) | HRP20181360T1 (tr) |
| HU (1) | HUE039677T2 (tr) |
| LT (1) | LT2536764T (tr) |
| PL (1) | PL2536764T3 (tr) |
| PT (1) | PT2536764T (tr) |
| RS (1) | RS57667B1 (tr) |
| SI (1) | SI2536764T1 (tr) |
| TR (1) | TR201811185T4 (tr) |
| WO (1) | WO2011101791A1 (tr) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2210902A1 (en) * | 2009-01-14 | 2010-07-28 | TcL Pharma | Recombinant monovalent antibodies |
| US8785604B2 (en) * | 2010-02-18 | 2014-07-22 | Effimune | Anti-CD28 humanized antibodies |
| WO2014120916A1 (en) * | 2013-02-01 | 2014-08-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Pegylated domain antibodies monovalent for cd28 binding and methods of use |
| WO2015083173A1 (en) | 2013-12-06 | 2015-06-11 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Reduction of inflammatory disease symptoms by short peptides that inhibit signaling through cd28 |
| CN108699148A (zh) * | 2015-12-15 | 2018-10-23 | 欧斯易免疫疗法 | 配制用于向人施用的抗cd28人源化抗体 |
| CN109689684B (zh) | 2016-07-06 | 2022-09-23 | 细胞基因公司 | 具有低免疫原性的抗体及其用途 |
| EP3551034A1 (en) | 2016-12-07 | 2019-10-16 | Progenity, Inc. | Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems |
| EP4108183A1 (en) | 2017-03-30 | 2022-12-28 | Biora Therapeutics, Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device |
| WO2019226894A1 (en) * | 2018-05-23 | 2019-11-28 | Againchance Corporation Limited | Bispecific t cell engager and uses thereof |
| MA52889A (fr) | 2018-06-15 | 2021-04-21 | Flagship Pioneering Innovations V Inc | Augmentation de l'activité immunitaire par modulation de facteurs de signalisation post-cellulaires |
| US20230009902A1 (en) | 2018-06-20 | 2023-01-12 | Progenity, Inc. | Treatment of a disease or condition in a tissue orginating from the endoderm |
| US20230041197A1 (en) | 2018-06-20 | 2023-02-09 | Progenity, Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunomodulator |
| CN113348011B (zh) | 2018-11-19 | 2023-04-18 | 比奥拉治疗股份有限公司 | 用生物治疗剂治疗疾病的方法和装置 |
| WO2020227159A2 (en) | 2019-05-03 | 2020-11-12 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Methods of modulating immune activity |
| CN115666704A (zh) | 2019-12-13 | 2023-01-31 | 比奥拉治疗股份有限公司 | 用于将治疗剂递送至胃肠道的可摄取装置 |
| EP4076434A1 (en) | 2019-12-17 | 2022-10-26 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Combination anti-cancer therapies with inducers of iron-dependent cellular disassembly |
| CN116096906A (zh) | 2020-06-29 | 2023-05-09 | 旗舰创业创新五公司 | 工程化以促进萨诺传递的病毒及其在治疗癌症中的用途 |
| IL300666A (en) | 2020-08-19 | 2023-04-01 | Xencor Inc | ANTI–CD28 COMPOSITIONS |
| US20220325287A1 (en) | 2021-03-31 | 2022-10-13 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer |
| CA3224374A1 (en) | 2021-06-29 | 2023-01-05 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof |
| CA3228178A1 (en) | 2021-08-05 | 2023-02-09 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses |
| AU2022339819A1 (en) | 2021-09-03 | 2024-04-11 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-lamp1 antibodies and their uses |
| TW202328188A (zh) | 2021-09-03 | 2023-07-16 | 美商Ｇｏ治療公司 | 抗醣化-cmet抗體及其用途 |
| CA3234825A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Lyell Immunopharma, Inc. | Methods of generating cells |
| WO2023114701A2 (en) * | 2021-12-13 | 2023-06-22 | BioLegend, Inc. | Cd28 binding antibodies and antigen binding fragments thereof |
| WO2024040195A1 (en) | 2022-08-17 | 2024-02-22 | Capstan Therapeutics, Inc. | Conditioning for in vivo immune cell engineering |
| WO2024077191A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-11 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer |
| WO2024077174A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-11 | Lyell Immunopharma, Inc. | Methods for culturing nr4a-deficient cells |
| WO2024077118A2 (en) | 2022-10-06 | 2024-04-11 | Bicara Therapeutics Inc. | Multispecific proteins and related methods |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6776990B2 (en) | 1999-04-08 | 2004-08-17 | Allergan, Inc. | Methods and compositions for the treatment of pancreatitis |
| CA2432736A1 (en) * | 2000-12-14 | 2002-06-20 | J. Yun Tso | Silenced anti-cd28 antibodies and use thereof |
| ATE477275T1 (de) * | 2000-12-26 | 2010-08-15 | Inst Nat Sante Rech Med | Antikörper gegen cd28 |
| US6900292B2 (en) * | 2001-08-17 | 2005-05-31 | Lee-Hwei K. Sun | Fc fusion proteins of human erythropoietin with increased biological activities |
| GB0230203D0 (en) * | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Fc fusion |
| TW200732350A (en) * | 2005-10-21 | 2007-09-01 | Amgen Inc | Methods for generating monovalent IgG |
| LT2700651T (lt) | 2008-07-18 | 2019-06-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Vienvalentinės cd28 prisijungimo atžvilgiu kompozicijos ir panaudojimo būdai |
| EP2379584A1 (en) * | 2008-12-19 | 2011-10-26 | Novartis AG | Soluble polypeptides for use in treating autoimmune and inflammatory disorders |
| EP2210902A1 (en) * | 2009-01-14 | 2010-07-28 | TcL Pharma | Recombinant monovalent antibodies |
| US8785604B2 (en) * | 2010-02-18 | 2014-07-22 | Effimune | Anti-CD28 humanized antibodies |
| CN108699148A (zh) * | 2015-12-15 | 2018-10-23 | 欧斯易免疫疗法 | 配制用于向人施用的抗cd28人源化抗体 |
-
2011
- 2011-02-16 US US13/577,103 patent/US8785604B2/en active Active
- 2011-02-16 WO PCT/IB2011/050646 patent/WO2011101791A1/en active Application Filing
- 2011-02-16 PT PT117079186T patent/PT2536764T/pt unknown
- 2011-02-16 EP EP11707918.6A patent/EP2536764B1/en active Active
- 2011-02-16 RS RS20180994A patent/RS57667B1/sr unknown
- 2011-02-16 DK DK11707918.6T patent/DK2536764T3/en active
- 2011-02-16 EP EP18177022.3A patent/EP3428192B1/en active Active
- 2011-02-16 JP JP2012553431A patent/JP5992340B2/ja active Active
- 2011-02-16 HU HUE11707918A patent/HUE039677T2/hu unknown
- 2011-02-16 ES ES11707918.6T patent/ES2680570T3/es active Active
- 2011-02-16 PL PL11707918T patent/PL2536764T3/pl unknown
- 2011-02-16 TR TR2018/11185T patent/TR201811185T4/tr unknown
- 2011-02-16 LT LTEP11707918.6T patent/LT2536764T/lt unknown
- 2011-02-16 CA CA2788544A patent/CA2788544C/en active Active
- 2011-02-16 ES ES18177022T patent/ES2896149T3/es active Active
- 2011-02-16 SI SI201131521T patent/SI2536764T1/sl unknown
-
2014
- 2014-07-08 US US14/326,119 patent/US9562098B2/en active Active
-
2016
- 2016-12-21 US US15/386,998 patent/US10364287B2/en active Active
-
2018
- 2018-08-24 HR HRP20181360TT patent/HRP20181360T1/hr unknown
- 2018-09-28 CY CY181101006T patent/CY1120707T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3428192A1 (en) | 2019-01-16 |
| US10364287B2 (en) | 2019-07-30 |
| JP2013519389A (ja) | 2013-05-30 |
| PL2536764T3 (pl) | 2018-12-31 |
| LT2536764T (lt) | 2018-10-25 |
| US8785604B2 (en) | 2014-07-22 |
| US20170114136A1 (en) | 2017-04-27 |
| WO2011101791A1 (en) | 2011-08-25 |
| EP2536764B1 (en) | 2018-07-04 |
| PT2536764T (pt) | 2018-08-10 |
| ES2680570T3 (es) | 2018-09-10 |
| CA2788544C (en) | 2019-03-05 |
| EP3428192B1 (en) | 2021-08-11 |
| EP2536764A1 (en) | 2012-12-26 |
| US20150071916A1 (en) | 2015-03-12 |
| CY1120707T1 (el) | 2019-12-11 |
| ES2896149T3 (es) | 2022-02-24 |
| DK2536764T3 (en) | 2018-09-17 |
| HRP20181360T1 (hr) | 2018-11-02 |
| SI2536764T1 (sl) | 2018-11-30 |
| CA2788544A1 (en) | 2011-08-25 |
| RS57667B1 (sr) | 2018-11-30 |
| US9562098B2 (en) | 2017-02-07 |
| US20130078236A1 (en) | 2013-03-28 |
| HUE039677T2 (hu) | 2019-01-28 |
| JP5992340B2 (ja) | 2016-09-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TR201811185T4 (tr) | Anti-cd28 hümanize edilmiş antikorlar. | |
| US10689444B2 (en) | Recombinant monovalent antibodies | |
| CN102939305B (zh) | 对cd122的抗体 | |
| KR20190091281A (ko) | 항인간 cd73 항체 | |
| CA2938931A1 (en) | Anti-laminin4 antibodies specific for lg1-3 | |
| CA3226441A1 (en) | B7-h3 antibody and use thereof | |
| EP3538552B1 (en) | Fab molecules with a rodent hinge region and a non-rodent ch1 region | |
| EP3906256A1 (en) | Truncated multivalent multimers | |
| EP2361935A1 (en) | Anti-CD28 humanized antibodies | |
| WO2023102096A1 (en) | Blocking and non-blocking single domain antibodies and uses thereof | |
| EA042856B1 (ru) | Новые анти-cd3-эпсилон антитела |