SU957762A3 - Способ получени пептидов или их солей - Google Patents
Способ получени пептидов или их солей Download PDFInfo
- Publication number
- SU957762A3 SU957762A3 SU752197544A SU2197544A SU957762A3 SU 957762 A3 SU957762 A3 SU 957762A3 SU 752197544 A SU752197544 A SU 752197544A SU 2197544 A SU2197544 A SU 2197544A SU 957762 A3 SU957762 A3 SU 957762A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- gly
- arg
- glu
- peptides
- product
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/10—Anilides
- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/30—Naphthyl amides, e.g. beta-NA, 2-NA, 4-methoxy-beta-naphthylamine, i.e. 4MNA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/968—Plasmin, i.e. fibrinolysin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/976—Trypsin; Chymotrypsin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/28—Bound to a nonpeptide drug, nonpeptide label, nonpeptide carrier, or a nonpeptide resin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Изобретение относитс к способу получени пептидов - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в биохимии и медицине. В химии пептидов широко использу ют метод постепенного наращивани пептидной цепи за счет конденсации активированных аминокислот, например , способам активированных эфиров Цель изобретени - синтез новых пептидов, содержащих хрбмогенную группу, которые обладают интересным свойствами. Поставленна цель достигаетс те что;согласно способу получени пепт дов общей формулы А/2.- Гли - Apr - NHR2, где R - водород, бензоил; п-нитроанилид; аспарагинил, глицил, изрлейцил , лейцил, валил, про лил, тирозил, фенилаланил; глютаминова кислота, глютамин , аспарагинова кисло или их солей, соединение Общей формулы IIjN-Rj, в которой R имеет указа ные значени подвергают взаимодействию с соответствующей аминокислотой и далее требуемую пептидную структуру постепенно наращивают путем сочетани остальных аминокислот, причем группу RJ используют в качестве защитной группы дл С-концевой карбоксильной группы первой агли но кислоты. Дл наращивани требуемой пептидной структуры используют сочетани аминокислот методом активированных эфиров. В этом ступенчатом синтезе пептидных производных используют хорошо известные в химии пептидов способы и защитные группы: карбобензокси (Кбо), пара-метоксикарбобензокси.(МеОКб), пара-нитрокарбобензокси (NOj Кбо), пара-метоксифенилазо-карбобензокси (Мкбо), трет-бутилоксикарбонил (БОК), трифторацетил (ТФА) или формил примен ют в качестве аминозащитных групп; «.-карбоксильную группу активируют путем конверсии в различные производные , которые или могут быть выделены или.получены In situ, например, пара-нитрофениловый сложный эфир, трихлорфениловый , пентахлорфениловый, N-гидроксисукцинимидовый, азид и ангидрид кислоты, которые могут быть симметричными.или несимметричными. Могут быть активированы также N-кар бодиимидом, например, N, М-дицикло гексилкарбодиимидом. Концева кар6о ксильна группа в аминопептидном пр изводном или производном аминокисло ты может быть защищена путем этериф кадии в метиловый,этиловый или изо рропиловый эфир или путем превращени в хромофорное анилиновое производное , которое также выполн ет фун кцию защитной группы во врем наращ вани пептидной цепи. Те свободные функциональные группы, которые не принимают участи в реакции во врем синтеза пептидов или их производных могут быть защищены следующимОбразом . Дл защиты остающейс аргинил-гуанидинр-группы используют протонизацию , NO/j или пара-толуолсульфонил ТОС). В качестве защиты карбоксильной группы в глютаминовой кислоте и аспарагиновой кислоте примен ют бензильную и трет-бутильную группы. Дл анализа элюатов и продуктов используют хроматографию в тонком слое силикагел р254(®рк) Используют следующие системы рас ворителей ; Л при объемном соотношении н-бутанол:уксусна кислота: вод равном. 3:1:1; С при объемном соотно цГении, н-пропанол: этилацетат: вода, равном 7:1:2; Д при объемном соотно шении п-гептан:н-бутанол:уксусна кислота, равном 3:2:1; Р при объемном соотношении хлороформ:метанол, равном 9:1. После хроматографировани в тонком слое пластинки просматривают в УФ-свете (254 Им) и затем ют хлор/толуидиновым. рёагентомТ Далее применены следующиеcdkpaщени ., Аминокислоты. Свободные аминокислоты или пепти указываютс с помощью буквы Н у ами ногруппы и ОН у карбоксильной групп Аминогруппа всегда указываетс , слев карбоксильна группа справа. Все примен югциес аминокислоты имеют L-конфигурацию, если не огово рено дополнительно. Ала-аланин; . . Гли-глицин; Арг-аргинин; Илей-изолейцин; Асп-аспарагин; Лей-лейцин; Лспа-аспарагинова Мет-метионин; кислота; Глю-глютамин ;.Фе-фенилаланин; Глю-гл12таминова Про-пролин; кислота;. Тир-тирозин;Bart-Валин, Другие сокращени : Ац-ацетил;МкбО-метоксифени азокарбобензокси Ац5 0-уксусныйМеОН-метанол; ангидрид; . ЛцОН-уксусна ОтБ-трет.бутилокси; кислота; Бок-трет.бутилОЭТ-Этилокси оксикарбонил; БзОЛ-бензоил; Оме-метилокси; Бзл-бензил;. ОпНФ-пара-нитрофеНокси; Б32 О-бензойный ОизоП-изопропилангидрид; .окси; КбО-карбобенз- пНА-пара-нитроани окси;лид; Дцгкдй-дициклогек- ТФА-трифторацетил; силкарбодиимид;. . ЭТдN-триэтиламин; ТОС-пара-толуолсульфонил . В примерах, если специально не оговариваетс , температура . Пример : НС1 Бзл-Илей-Глю-Гдй-Арг-пИА . 1а.Кбо-Гли-Арг (N02)-nHA (Мол. вес.530,4). Раствор 5,0 г (10,6. ммоль) Кбо-Арг (N0) .-пНА в 21 мл АсОН и 22 мл 4 н. НВг в АсОН в безводных услови х переме1ш-1вают 1 ч при комнатной температуре, затем медленно вливают в 200 мл эфира при энергичном перемешивании. Эфирный раствор отдел ют декантацией, а полученный зернистый остаток обрабатывают два раза эфиром по 100 мл. После суижи в вакууме над и таблетками КОН при получают бромистоводородную соль аминокислотного производного почти количественно (4,95 г). Продукт гомогенный согласно тонкослойной хроматографии (тех) в системе А. Продукт раствор ют в- 50 мл перегнанного диметилформамида, раствор охлаждают до -10°С и добавл ют триэтаноламин до нейтрального значени рН (2,1 мл). Выпавший в осадок бромгидрат триэтаноламина отфильтровывают и фильтрат охлаждают до . К раствору добавл ют 3,9 г (11,8 ммоль) Кбо-Гли-ОпНФ, смесь медленно нагревают до комнатной температуры. 3 ч раствор вновь охлаждают до и внос т 0,54 г (5, 3 ммоль) триэтаноламина. Через 2-3 ч добавл ют вновь такое же количество триэтаноламина . Реакционную смесь оставл ют на ночь при комнатной температуре, затем упаривают в вакууме при 40 С. Оставшеес т желое масло тщательно перемешивают с 100 мл дисйгиллированной воды. Воду сливают и промывку повтор ют еще два раза. Оставшеес масло раствор ют в гор чемКОН, по охлаждении продукт осаждаетс в кристаллической форме. Выход 4,2 г, продукт гомогенный согласно ТСХ в системе Р , Щ 0,16,tct -36° (с 0,50 метанол). Ib: Нок-Глю-( и -рбзл)-Гли-Арг(КО2)-пНА (мол. вес 715,8). 2,65 г (5,0 ммоль) продукта 1а декарбобензоксилируют и конденсируют с 2,5 г (5,5 ммоль) Бок-Глю(-Обзл ОпНФ согласно примеру 1а. Продукт чист т в хроматографической колонке с Сефадексом ZH в метаноле. Выход 3,25 г (91%). Продукт гомогенный согласно тех в системе Pf (R/ 0,22), 5 -34° (с 1,0,метанол).
1с: Кбо-Илен-Глю (у -Oбзл)-Гли-Apг (N02) -пПА, (Мол.вес 862,9).
1,08 г (1,5 ммоль) продукта Ib Ьаствор ют в ДО 4л трифторацетата. Ю Раствор перемешивают 1 ч при комнатной температуре, затем медленно вливают в 75 мл эфира.при сильном перемекгавании . Эфирный раствор декантируют и получен1|ь1й зернистьзй остаток два раза обрабатЕлвают эфиром по 50 мл. После сушки ввакууме над и таблетками КОН при 30с получена трифторуксуснркисла ; соль трипептидного произввдного почт.и количественно (l,OOr)2Q Продукт гомогенный согласно ТСХ в;системе Л. .
Продукт раствор ют в 20 мл диметилформамида . Раствор охлаждают до ,-10°С и нейтрализуют триэтаноламином 25 (0,23 4л) , добавл ют 0,65 г (1,68 ммоль) Кбо-Илей-ОпНФ и медленно поднимают температуру раствора до комнатной. Через 3 ч раствор вновь охлаждают до -10°С и добавл ют 0,12 мл . триэтаноламина. Через 2-3 ч повторно добавл ют триэтаноламин и раствор оставл ют на ночь. Затем избыток Кбо-Илей-ОпНФ разрушают добавлением 100 мг (1,4 ммоль) н-бутиламина к раствору.- Через 30 мин раствор упа- 35 ривают в вакууме при 40°С. Оставшеес т желое масло промывают трем порци ми дистиллированной воды. Касло раствор ют в МеОН и чист т хроматографией на Сефадексё ZH-20 в метано- 40 ле. Выход 1,07 г (83%). Продукт гомогенный согласно ТСХ в системе Р,, R 0,35гС« 1:э -24 (сО,ЗМеОН: диметилформамид 95:5).
Id: Бзл-Илей-Глю ( J -Обзл)-Гли- 45 -Apr (N02)-nHA.
260 мг (0,30 ммоль) продукта 1с дикарбобензоксилируют согласно примеру 1а. Продукт показывает два п тна на тех в системе Л, (R 0,45 CQ и 0,65), и с помощью инфракрасной спектроскопии обнаружено, что продукт вл етс смесью ПВг; И-Илёй-Глю( ;f-ОН) -Гли-Арг(Ы02)-пИА и НВг-Н-Илей-Глю . ( у -Обзл) -Глй-Арг (N0.) -пНА.Эта смесь и 800 мг (0,35 ммоль) бензойного ангидрида взаимодействуют в услови х, описанных в примере 1а. Продукт чист т на Сефадексё ZH-20 в метаноле. Получают две фракции: pi - 130 мг, «3|f -15(с 0,50 CH,CN)pO Ri 0,20 в Р и f - 105 Mrtoilo -11° (с 0,5, СНзСМ)И 0,06 в Р .
С помовд ю инфракрасной спектроскопии обнаружено, что этими двум фракци ми вл ютс Бэл-Илей-Глю( И -Обзл) - 65
-Гли-Арг(N0;)-пИА и Бэл-Илей-Глю-Гли-Арг (N0 2 ) .-..
При взаимодействии с фтористым водородом обе фракции дают оди-наковый конечный продукт 1е.
1е :ИС1 Бзл-ИлеП-Глю-Гли-Apr-nflA (мол. вес 734).
100 мг (0,12 ммоль) «; -продукта Id и 0,5 мл анизола помещают в реакционную колбу аппарата Сакакибара. В колбу отгон ют 5 мл сухого фтористого водорода и оставл ют реакционную массу на 75 мин при ос. Затем фтористый водород отгон ют под уменьшенным давлением, масл нистый остаток раствор ют в 10 мл уксусной кислоты и чист т хроматографией на Сефадексё g-15 в 33%-ной уксусной кислот ( в воде) . Затем ф15акцию, содержащую чистое незащищенное тетрапептидное производное, лиофилизуют. Полученное соединение раствор ют в смеси метаНОЛ:дистиллированна вода (95:5) и хроматографируют на слабоосновном анонном обменнике Q АЕ-СефаДекс А-25 в хлоридной форме, дл элюировани используют ту же смесь растворителей Метанол удал ют из элюата при под уменьшенным давлением и оставшийс водный раствор лиофилизируют. Выход 75 мг (85%), продукт однороден согласно ТСХ в системе А (Rf 0,48 о -40° (с 0,5, уксусна кислота в дистиллированной воде).
Анализ на аминокислоты: 0,98 Илей 0,5 Глю, 0,98 Apr, 1,00 Гли.
П р и м е р II: 2НС1 Н-Ипей-Глю-Гли-Арг-пИА .
На: 2НС1 Н-Илей-Глю-Гли-Арг-пНА (мол.вес 666,6).
100 мг (0,116 ммоль) продукта 1с обрабатывают с фтористым водородом и чист т в услови х, описанных в примере 1а.
- Выход 56 мг (73%), продукт однороден согласно тех в системе А, jl 0,34, -35° (с 0,5, 50%-на уксусна кислота в дистиллированной воде).
Анализ на аминокислоты: 0,96 Илей 0,94 Глю, 0,96 Apr, 1,00 Гли.
Пример III: НС 1 Бзл-Млей-ГлнГли-Арг-пНА (мол.вес. 733,2).
Ilia: Кбо-Глн-Гли-Арг (N02)-nHA (мол. вес 658,5).
2,65 г (5 ммоль) соединени Кбо-Гли-Арг (NOj) пНА декарбобензоксилируют бромистым водородом в уксусной кислоте и копулируют с 2,2 г, (5,5 ммоль) Кбо-Глн-ОпНФ по методу, описанному в примере 1а. Неочищенный продукт очищают двойной перекристаллизацией из метанола.
Выход 2,07 г ,(63%) Ilia. Гомогенность в соответствии с ТСХ в системе A(RI 0,62), -23 (с 0,5 метанол/диметилформамид 9/1).
IIIb: Трет-Бок-Илей-Глн-Гли-Арг (N02)-nHA (мол. вес 737,6).
0,66 г (1 ммоль) соединени Ilia декарбобензоксилируют бромистым водородом в АсОН по методу, описанному в примере 1а. Полученное соединение раствор ют в 10 мл перегнанного диметилформамида .1 Раствор охлаждают до и доВавл ют триэтиламин до нейтральной реакции. Выпавший в осадок бромгидрат триэтиламина отфил тровывают, фильтрат вновь охлаждают до и к нему добавл ют 0,40 г (1,1 1 из5оль) Бок-Илей-ОпНФ и раствор оставл ют медленно нагребатьс до комнатной температуры. Черей 3 ч рас вор вновь охлаждают до -10°С и буферируют 0,1 глл. (0,7 ммоль) триэтанолг амина, Буферирование повтор ют через 2-3 ч. Реакционный раствор оставл ют до утра и избыток трет-Бок-ИЛей-ОпНФ привод т во взаимодействие с 0,1 мл (1 ммоль) н-бутиламина. Через 30 мин раствор упаривают в вакууме при 40°G Оставшеес т жёлое масло тщательно перемешивают с 100 мл дистиллирован ной воды. Воду декантируют и промывку провод т еще дважды. Оставшеес масло раствор ют в метаноле и очищают в колонке .с сефадексрм ZH-20 в метаноле, использу в качестве элюирующего средства метанол. Выход 0,56 г (76%). Гомогенность по ТСХ в системе А (Rf 0,66.).
II1с. Бэл-Глн-Гли- Arg(N02)4iHA мол. вес 741,6) .
0,56 (0,76 ммоль) продукта Illb раствор ют в 5 мл трифторуксусной кислоты. Раствор перемешивают 15 мин при комнатной температуре, после чего медленно выливают в 100 мл энергично перемешиваемого сухого эфира. Эфир отдел ют декантацией и осадок дважды обрабатывают 50 мл эфира. После сушки в вакууме над и таблетками КОН при 30°С получают трифторуксусную соль тетрапептидного производного почти количественно. Продукт гомогенен в соответствии с тонкослойной хроматограммой в системе А.
Полученное соединение раствор ют в 8 мл диметилформамида, охлаждают до -10 С и нейтрализуют триэтаноламином . Внос т 0,23 г (1 ммоль) бензойного ангидрида и через 30 мин добавл ют еще 1,00 мкл триэтаноламина. Реакционный раствор оставл ют до утра и упаривают в вакууме при . Оставшеес т желое масло тщательно перемешивают с дистиллированной водой Воду декантируют, оставшеес масло раствор ют в метаноле и очищают в колонке , содержащей сефадекс ZH-20 в Метайоле. Выход 0,55 г (95%). Гомогенность по тех в системе А (Rf 0,64).
Hid. Бзл-Илей-Гли-Глн-Арг-пНА-НС1 (мол. вес 733,3).
0,55 г (0,75 ммоль)III привод т во взаимодействие с фтористоводородной кислотой, очищают (ионообменно) по методу, описанному в примере 1е. Выход 0,34 г (62%), Гомогенность по ТСХ в системе А (Rf 0,41), -40 (с 0,5, 50%-на уксусна кислота в дистиллированной воде).
Остальные, промежуточные и конечные продукты, использованные в качестве примеров, синтезированы в соответствии с .методами, описанными в примерах I-III.
Claims (2)
- Получение этих соединений и их свойства приведены в таблице. 139 Формула изобретени . 1. Способ получени пептидов общей формулы К -А -А2-Гли - Apr - NHR2, где R - водород/ бензоил; RJ - Н -нитроанилид; А| - аспарагинил, глицил, изолейцил , лейцил, валил, пролил , тирозил, фенилаланил; AJ - глютаминова кислота, глютамин , аспарагинова кислота , или их солей, отличающийс тем, что соединение общей формулы , в которой Rj имеет указанные значени , подвергают вза214 имодействию с соответствукадей амино кислотой и далее требуемую пептидную структуру постепенно наращивают путем сочетани остальных аминокислот , причем группу R используют в качестве защитной группы дл С - конценой карбоксильной группы первой аминокислоты.
- 2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и и с тем, что дл наращивани требуемой пептидной с±руктуры используют сочетани аминокислот методом активированных эфиров. ; Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Шредер Э. , Любке К. Пептиды, Ч. 1, М., Itop, 1967, с, 116.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE7415229A SE407058B (sv) | 1974-12-05 | 1974-12-05 | Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU957762A3 true SU957762A3 (ru) | 1982-09-07 |
Family
ID=20322900
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU752197544A SU957762A3 (ru) | 1974-12-05 | 1975-12-04 | Способ получени пептидов или их солей |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US4028318A (ru) |
JP (1) | JPS5431397B2 (ru) |
AT (1) | AT351565B (ru) |
BE (1) | BE836085A (ru) |
CA (1) | CA1048998A (ru) |
CH (1) | CH619983A5 (ru) |
CS (1) | CS187492B2 (ru) |
DD (1) | DD123316A5 (ru) |
DE (1) | DE2552570C3 (ru) |
DK (1) | DK145461C (ru) |
ES (1) | ES442997A1 (ru) |
FI (1) | FI753246A (ru) |
FR (1) | FR2293439A1 (ru) |
GB (1) | GB1488987A (ru) |
HU (1) | HU174263B (ru) |
IL (1) | IL48506A (ru) |
IT (1) | IT1052318B (ru) |
NL (1) | NL188648C (ru) |
NO (1) | NO142074C (ru) |
PL (1) | PL99020B1 (ru) |
SE (1) | SE407058B (ru) |
SU (1) | SU957762A3 (ru) |
ZA (1) | ZA757441B (ru) |
Families Citing this family (37)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE407058B (sv) * | 1974-12-05 | 1979-03-12 | Kabi Ab | Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
SE407571B (sv) * | 1975-07-11 | 1979-04-02 | Kabi Ab | Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
SE431201B (sv) * | 1976-01-24 | 1984-01-23 | Ajinomoto Kk | For anvendning vid metning av kollagenasaktivitet avsett peptidderivat jemte forfarande for nemnda metning |
US4176009A (en) * | 1976-01-24 | 1979-11-27 | Ajinomoto Co., Inc. | Method of measuring collagenase activity |
CH634662A5 (de) * | 1976-05-28 | 1983-02-15 | Pentapharm Ag | Verwendung von tripeptidderivaten zur quantitativen bestimmung von plasminogen-aktivatoren. |
SE437153B (sv) * | 1976-12-01 | 1985-02-11 | Kabi Ab | Specifika kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
US4191809A (en) * | 1977-02-26 | 1980-03-04 | Ajinomoto Co., Inc. | Method of measuring enzymatic activity using novel peptide derivatives |
JPS5415797A (en) * | 1977-06-14 | 1979-02-05 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Detection and measurement of toxin in cells |
CA1087075A (en) * | 1977-08-05 | 1980-10-07 | Robert J. Gargiulo | Composition and method for determining transferase and protease activity |
US4438029A (en) | 1978-01-19 | 1984-03-20 | Research Corporation | Synthetic peptides |
SE7801373L (sv) * | 1978-02-07 | 1979-08-08 | Kabi Ab | Lett spjelkbara substrat for kvantifiering av proteaser |
US4275153A (en) * | 1978-08-03 | 1981-06-23 | American Hospital Supply Corporation | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes |
US4336186A (en) * | 1978-08-03 | 1982-06-22 | Gargiulo Robert J | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes |
JPS59499B2 (ja) * | 1978-11-02 | 1984-01-07 | 味の素株式会社 | ペプチド誘導体 |
FR2455083A1 (fr) * | 1979-04-24 | 1980-11-21 | Jozefonvicz Marcel | Nouveau procede de dosage des proteases et des antiproteases et notamment des proteases et antiproteases des systemes de la coagulation et du complement |
DE2921216A1 (de) * | 1979-05-25 | 1980-12-04 | Teschemacher Hansjoerg | Pharmakologisch aktive peptide |
DE2936543A1 (de) * | 1979-09-10 | 1981-04-09 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen |
US4244865A (en) * | 1979-12-03 | 1981-01-13 | Abbott Laboratories | α hydroxy tripeptide substrates |
CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
US4301245A (en) * | 1980-05-29 | 1981-11-17 | Dynasciences Corporation | Chromogenic method of detecting endotoxins in blood |
JPS57501234A (ru) * | 1980-08-25 | 1982-07-15 | ||
JPS5753445A (en) * | 1980-09-16 | 1982-03-30 | Torii Yakuhin Kk | Peptide compound |
JPS5753446A (en) * | 1980-09-16 | 1982-03-30 | Torii Yakuhin Kk | Peptide derivative |
US4510241A (en) * | 1981-09-03 | 1985-04-09 | Mallinckrodt, Inc. | Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin |
US4406832A (en) * | 1981-09-03 | 1983-09-27 | Mallinckrodt, Inc. | Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin |
EP0078764B1 (de) * | 1981-11-02 | 1986-01-02 | Pentapharm A.G. | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Blutgerinnungsfaktor XII in Humanplasma |
US4448715A (en) * | 1981-11-02 | 1984-05-15 | University Of Miami | Tagged pyroglu-L-Phe-L-Arg derivatives, substrates and assays for kallikrein |
CA1247086A (en) * | 1982-02-17 | 1988-12-20 | Francis R. Pfeiffer | Renally active tetrapeptides |
DE3211254A1 (de) * | 1982-03-26 | 1983-09-29 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens |
DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
DE3312191A1 (de) * | 1983-04-02 | 1984-10-11 | Karl Mengele & Söhne Maschinenfabrik und Eisengießerei GmbH & Co, 8870 Günzburg | Schutzvorrichtung fuer mechanische schraenke und dergleichen geraete bzw. maschinen |
FR2546164B1 (fr) * | 1983-05-16 | 1987-07-17 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux derives de peptides, leur preparation et leur application comme inhibiteurs de l'elastase |
DE3446714A1 (de) * | 1984-12-21 | 1986-06-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens |
US6297024B1 (en) | 1998-10-15 | 2001-10-02 | Cell Activation, Inc. | Methods for assessing complement activation |
US6235494B1 (en) | 1999-02-08 | 2001-05-22 | The Scripps Research Institute | Substrates for assessing mannan-binding protein-associated serine protease activity and methods using the substrates |
GB2492104A (en) * | 2011-06-22 | 2012-12-26 | Job Harenberg | Assay for direct thrombin inhibitors |
CN108089006B (zh) * | 2016-11-23 | 2020-09-25 | 舒泰神(北京)生物制药股份有限公司 | 凝血因子ⅹ激活剂活性标定的方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1042487A (en) * | 1964-06-25 | 1966-09-14 | Ici Ltd | Polypeptide derivatives |
US3778426A (en) * | 1970-12-16 | 1973-12-11 | Research Corp | Therapeutically useful polypeptides |
SE380257B (sv) * | 1972-05-02 | 1975-11-03 | Bofors Ab | Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser |
SE407058B (sv) * | 1974-12-05 | 1979-03-12 | Kabi Ab | Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
-
1974
- 1974-12-05 SE SE7415229A patent/SE407058B/xx not_active IP Right Cessation
-
1975
- 1975-11-14 US US05/631,974 patent/US4028318A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-11-18 IT IT52278/75A patent/IT1052318B/it active
- 1975-11-18 CH CH1495475A patent/CH619983A5/de not_active IP Right Cessation
- 1975-11-18 FI FI753246A patent/FI753246A/fi not_active Application Discontinuation
- 1975-11-19 NL NLAANVRAGE7513505,A patent/NL188648C/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-11-20 IL IL48506A patent/IL48506A/xx unknown
- 1975-11-21 GB GB48019/75A patent/GB1488987A/en not_active Expired
- 1975-11-24 DE DE2552570A patent/DE2552570C3/de not_active Expired
- 1975-11-24 FR FR7535885A patent/FR2293439A1/fr active Granted
- 1975-11-24 NO NO753945A patent/NO142074C/no unknown
- 1975-11-26 HU HU75BO1586A patent/HU174263B/hu unknown
- 1975-11-26 ZA ZA757441A patent/ZA757441B/xx unknown
- 1975-11-26 ES ES442997A patent/ES442997A1/es not_active Expired
- 1975-11-26 CA CA75240488A patent/CA1048998A/en not_active Expired
- 1975-11-27 AT AT900775A patent/AT351565B/de not_active IP Right Cessation
- 1975-11-28 BE BE162285A patent/BE836085A/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-12-03 DD DD189851A patent/DD123316A5/xx unknown
- 1975-12-04 JP JP14342675A patent/JPS5431397B2/ja not_active Expired
- 1975-12-04 DK DK549475A patent/DK145461C/da not_active IP Right Cessation
- 1975-12-04 PL PL1975185228A patent/PL99020B1/pl unknown
- 1975-12-04 SU SU752197544A patent/SU957762A3/ru active
- 1975-12-05 CS CS758280A patent/CS187492B2/cs unknown
-
1979
- 1979-07-02 US US06/054,075 patent/US4252715A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU957762A3 (ru) | Способ получени пептидов или их солей | |
US4229438A (en) | Nonapeptides | |
US4350627A (en) | Biologically active peptides | |
Han et al. | Studies on the Primary Structure of Bovine High-MolecularWeight Kininogen: Amino Acid Sequence of a Fragment (“Histidine-Rich Peptide”) Released by Plasma Kallikrein | |
JPS63173600A (ja) | プロテア−ゼの定量方法およびそれに使用する試薬 | |
NO142812B (no) | Nye diagnostisk aktive kromogene enzymsubstrater | |
Urry et al. | Studies on the conformations and interactions of elastin. Proton magnetic resonance of the repeating tetramer | |
US4247454A (en) | Novel chromogenic thrombin substrates | |
FI56525C (fi) | Nya kromogena trombinsubstrat | |
Yamashiro et al. | PREPARATION OF Nα‐BOC‐Nε‐P‐BRZ‐LYSINE AND Nα‐BOC‐0‐M‐BRBZL‐TYROSINE AND THEIR USE FOR THE SOLID PHASE SYNTHESIS OF AN OCTAPEPTIDE OCCURRING IN THE HGH MOLECULE | |
BLANOT et al. | SYNTHESIS OF ANALOGS OF THE SERUM THYMIC NONAPEPTIDE, FACTEUR THYMIQUE SERIQUE (FTS) Part I | |
Noda et al. | A facile method for preparation of t‐butyloxycarbonylamino acid p‐nitroanilides | |
US4162941A (en) | Method for determining a proteolytic enzyme | |
JP2887765B2 (ja) | ポリアルキレングリコール残基を含む対称ビペプチド、その製造方法およびプロテアーゼの検定における使用 | |
US6448031B1 (en) | Process for producing LH-RH derivatives | |
JPS61191696A (ja) | 血清胸腺因子ペプチド類似体 | |
US3826794A (en) | Protected decapeptide derivatives of gonadotropin releasing hormone | |
FujINo et al. | Synthesis of Porcine Motilin and Its D-Phe1-Analog by the Use of Methanesulfonic Acid | |
KAWASAKI et al. | Amino acids and peptides. XXI. Laminin-related peptide analogs including poly (ethylene glycol) hybrids and their inhibitory effect on experimental metastasis | |
Rapaka et al. | Synthesis of polypeptide models of collagen | |
OGAWA et al. | Studies on Peptides. LXXVIII. Synthesis of the Nonacosapeptide corresponding to the Entire Amino Acid Sequence of Avian Glucagon (Duck) | |
US3784535A (en) | Nonapeptide intermediate to gonadotropin releasing hormone | |
AU602527B2 (en) | Chromogenic compounds, a process for their preparation and their use | |
US3655636A (en) | Process for the synthesis of peptides using 4-pyridylmethyl and related groups for the protection of c-terminal carboxyl groups | |
US4474765A (en) | Biologically active peptides |