SU957762A3 - Способ получени пептидов или их солей - Google Patents

Способ получени пептидов или их солей Download PDF

Info

Publication number
SU957762A3
SU957762A3 SU752197544A SU2197544A SU957762A3 SU 957762 A3 SU957762 A3 SU 957762A3 SU 752197544 A SU752197544 A SU 752197544A SU 2197544 A SU2197544 A SU 2197544A SU 957762 A3 SU957762 A3 SU 957762A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
gly
arg
glu
peptides
product
Prior art date
Application number
SU752197544A
Other languages
English (en)
Inventor
Эрик Аурелл Лейф
Геран Клаесон Карл
Original Assignee
Актиеболагет Каби (Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Актиеболагет Каби (Фирма) filed Critical Актиеболагет Каби (Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU957762A3 publication Critical patent/SU957762A3/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
    • C12Q2337/10—Anilides
    • C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
    • C12Q2337/30—Naphthyl amides, e.g. beta-NA, 2-NA, 4-methoxy-beta-naphthylamine, i.e. 4MNA
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
    • G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
    • G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
    • G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
    • G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
    • G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/968—Plasmin, i.e. fibrinolysin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/974—Thrombin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/976—Trypsin; Chymotrypsin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/28—Bound to a nonpeptide drug, nonpeptide label, nonpeptide carrier, or a nonpeptide resin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Изобретение относитс  к способу получени  пептидов - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в биохимии и медицине. В химии пептидов широко использу ют метод постепенного наращивани  пептидной цепи за счет конденсации активированных аминокислот, например , способам активированных эфиров Цель изобретени  - синтез новых пептидов, содержащих хрбмогенную группу, которые обладают интересным свойствами. Поставленна  цель достигаетс  те что;согласно способу получени  пепт дов общей формулы А/2.- Гли - Apr - NHR2, где R - водород, бензоил; п-нитроанилид; аспарагинил, глицил, изрлейцил , лейцил, валил, про лил, тирозил, фенилаланил; глютаминова  кислота, глютамин , аспарагинова  кисло или их солей, соединение Общей формулы IIjN-Rj, в которой R имеет указа ные значени  подвергают взаимодействию с соответствующей аминокислотой и далее требуемую пептидную структуру постепенно наращивают путем сочетани  остальных аминокислот, причем группу RJ используют в качестве защитной группы дл  С-концевой карбоксильной группы первой агли но кислоты. Дл  наращивани  требуемой пептидной структуры используют сочетани  аминокислот методом активированных эфиров. В этом ступенчатом синтезе пептидных производных используют хорошо известные в химии пептидов способы и защитные группы: карбобензокси (Кбо), пара-метоксикарбобензокси.(МеОКб), пара-нитрокарбобензокси (NOj Кбо), пара-метоксифенилазо-карбобензокси (Мкбо), трет-бутилоксикарбонил (БОК), трифторацетил (ТФА) или формил примен ют в качестве аминозащитных групп; «.-карбоксильную группу активируют путем конверсии в различные производные , которые или могут быть выделены или.получены In situ, например, пара-нитрофениловый сложный эфир, трихлорфениловый , пентахлорфениловый, N-гидроксисукцинимидовый, азид и ангидрид кислоты, которые могут быть симметричными.или несимметричными. Могут быть активированы также N-кар бодиимидом, например, N, М-дицикло гексилкарбодиимидом. Концева  кар6о ксильна  группа в аминопептидном пр изводном или производном аминокисло ты может быть защищена путем этериф кадии в метиловый,этиловый или изо рропиловый эфир или путем превращени  в хромофорное анилиновое производное , которое также выполн ет фун кцию защитной группы во врем  наращ вани  пептидной цепи. Те свободные функциональные группы, которые не принимают участи  в реакции во врем синтеза пептидов или их производных могут быть защищены следующимОбразом . Дл  защиты остающейс  аргинил-гуанидинр-группы используют протонизацию , NO/j или пара-толуолсульфонил ТОС). В качестве защиты карбоксильной группы в глютаминовой кислоте и аспарагиновой кислоте примен ют бензильную и трет-бутильную группы. Дл  анализа элюатов и продуктов используют хроматографию в тонком слое силикагел  р254(®рк) Используют следующие системы рас ворителей ; Л при объемном соотношении н-бутанол:уксусна  кислота: вод равном. 3:1:1; С при объемном соотно цГении, н-пропанол: этилацетат: вода, равном 7:1:2; Д при объемном соотно шении п-гептан:н-бутанол:уксусна  кислота, равном 3:2:1; Р при объемном соотношении хлороформ:метанол, равном 9:1. После хроматографировани  в тонком слое пластинки просматривают в УФ-свете (254 Им) и затем ют хлор/толуидиновым. рёагентомТ Далее применены следующиеcdkpaщени ., Аминокислоты. Свободные аминокислоты или пепти указываютс  с помощью буквы Н у ами ногруппы и ОН у карбоксильной групп Аминогруппа всегда указываетс , слев карбоксильна  группа справа. Все примен югциес  аминокислоты имеют L-конфигурацию, если не огово рено дополнительно. Ала-аланин; . . Гли-глицин; Арг-аргинин; Илей-изолейцин; Асп-аспарагин; Лей-лейцин; Лспа-аспарагинова  Мет-метионин; кислота; Глю-глютамин ;.Фе-фенилаланин; Глю-гл12таминова  Про-пролин; кислота;. Тир-тирозин;Bart-Валин, Другие сокращени : Ац-ацетил;МкбО-метоксифени азокарбобензокси Ац5 0-уксусныйМеОН-метанол; ангидрид; . ЛцОН-уксусна  ОтБ-трет.бутилокси; кислота; Бок-трет.бутилОЭТ-Этилокси оксикарбонил; БзОЛ-бензоил; Оме-метилокси; Бзл-бензил;. ОпНФ-пара-нитрофеНокси; Б32 О-бензойный ОизоП-изопропилангидрид; .окси; КбО-карбобенз- пНА-пара-нитроани окси;лид; Дцгкдй-дициклогек- ТФА-трифторацетил; силкарбодиимид;. . ЭТдN-триэтиламин; ТОС-пара-толуолсульфонил . В примерах, если специально не оговариваетс , температура . Пример : НС1 Бзл-Илей-Глю-Гдй-Арг-пИА . 1а.Кбо-Гли-Арг (N02)-nHA (Мол. вес.530,4). Раствор 5,0 г (10,6. ммоль) Кбо-Арг (N0) .-пНА в 21 мл АсОН и 22 мл 4 н. НВг в АсОН в безводных услови х переме1ш-1вают 1 ч при комнатной температуре, затем медленно вливают в 200 мл эфира при энергичном перемешивании. Эфирный раствор отдел ют декантацией, а полученный зернистый остаток обрабатывают два раза эфиром по 100 мл. После суижи в вакууме над и таблетками КОН при получают бромистоводородную соль аминокислотного производного почти количественно (4,95 г). Продукт гомогенный согласно тонкослойной хроматографии (тех) в системе А. Продукт раствор ют в- 50 мл перегнанного диметилформамида, раствор охлаждают до -10°С и добавл ют триэтаноламин до нейтрального значени  рН (2,1 мл). Выпавший в осадок бромгидрат триэтаноламина отфильтровывают и фильтрат охлаждают до . К раствору добавл ют 3,9 г (11,8 ммоль) Кбо-Гли-ОпНФ, смесь медленно нагревают до комнатной температуры. 3 ч раствор вновь охлаждают до и внос т 0,54 г (5, 3 ммоль) триэтаноламина. Через 2-3 ч добавл ют вновь такое же количество триэтаноламина . Реакционную смесь оставл ют на ночь при комнатной температуре, затем упаривают в вакууме при 40 С. Оставшеес  т желое масло тщательно перемешивают с 100 мл дисйгиллированной воды. Воду сливают и промывку повтор ют еще два раза. Оставшеес  масло раствор ют в гор чемКОН, по охлаждении продукт осаждаетс  в кристаллической форме. Выход 4,2 г, продукт гомогенный согласно ТСХ в системе Р , Щ 0,16,tct -36° (с 0,50 метанол). Ib: Нок-Глю-( и -рбзл)-Гли-Арг(КО2)-пНА (мол. вес 715,8). 2,65 г (5,0 ммоль) продукта 1а декарбобензоксилируют и конденсируют с 2,5 г (5,5 ммоль) Бок-Глю(-Обзл ОпНФ согласно примеру 1а. Продукт чист т в хроматографической колонке с Сефадексом ZH в метаноле. Выход 3,25 г (91%). Продукт гомогенный согласно тех в системе Pf (R/ 0,22), 5 -34° (с 1,0,метанол).
1с: Кбо-Илен-Глю (у -Oбзл)-Гли-Apг (N02) -пПА, (Мол.вес 862,9).
1,08 г (1,5 ммоль) продукта Ib Ьаствор ют в ДО 4л трифторацетата. Ю Раствор перемешивают 1 ч при комнатной температуре, затем медленно вливают в 75 мл эфира.при сильном перемекгавании . Эфирный раствор декантируют и получен1|ь1й зернистьзй остаток два раза обрабатЕлвают эфиром по 50 мл. После сушки ввакууме над и таблетками КОН при 30с получена трифторуксуснркисла ; соль трипептидного произввдного почт.и количественно (l,OOr)2Q Продукт гомогенный согласно ТСХ в;системе Л. .
Продукт раствор ют в 20 мл диметилформамида . Раствор охлаждают до ,-10°С и нейтрализуют триэтаноламином 25 (0,23 4л) , добавл ют 0,65 г (1,68 ммоль) Кбо-Илей-ОпНФ и медленно поднимают температуру раствора до комнатной. Через 3 ч раствор вновь охлаждают до -10°С и добавл ют 0,12 мл . триэтаноламина. Через 2-3 ч повторно добавл ют триэтаноламин и раствор оставл ют на ночь. Затем избыток Кбо-Илей-ОпНФ разрушают добавлением 100 мг (1,4 ммоль) н-бутиламина к раствору.- Через 30 мин раствор упа- 35 ривают в вакууме при 40°С. Оставшеес  т желое масло промывают трем  порци ми дистиллированной воды. Касло раствор ют в МеОН и чист т хроматографией на Сефадексё ZH-20 в метано- 40 ле. Выход 1,07 г (83%). Продукт гомогенный согласно ТСХ в системе Р,, R 0,35гС« 1:э -24 (сО,ЗМеОН: диметилформамид 95:5).
Id: Бзл-Илей-Глю ( J -Обзл)-Гли- 45 -Apr (N02)-nHA.
260 мг (0,30 ммоль) продукта 1с дикарбобензоксилируют согласно примеру 1а. Продукт показывает два п тна на тех в системе Л, (R 0,45 CQ и 0,65), и с помощью инфракрасной спектроскопии обнаружено, что продукт  вл етс  смесью ПВг; И-Илёй-Глю( ;f-ОН) -Гли-Арг(Ы02)-пИА и НВг-Н-Илей-Глю . ( у -Обзл) -Глй-Арг (N0.) -пНА.Эта смесь и 800 мг (0,35 ммоль) бензойного ангидрида взаимодействуют в услови х, описанных в примере 1а. Продукт чист т на Сефадексё ZH-20 в метаноле. Получают две фракции: pi - 130 мг, «3|f -15(с 0,50 CH,CN)pO Ri 0,20 в Р и f - 105 Mrtoilo -11° (с 0,5, СНзСМ)И 0,06 в Р .
С помовд ю инфракрасной спектроскопии обнаружено, что этими двум  фракци ми  вл ютс  Бэл-Илей-Глю( И -Обзл) - 65
-Гли-Арг(N0;)-пИА и Бэл-Илей-Глю-Гли-Арг (N0 2 ) .-..
При взаимодействии с фтористым водородом обе фракции дают оди-наковый конечный продукт 1е.
1е :ИС1 Бзл-ИлеП-Глю-Гли-Apr-nflA (мол. вес 734).
100 мг (0,12 ммоль) «; -продукта Id и 0,5 мл анизола помещают в реакционную колбу аппарата Сакакибара. В колбу отгон ют 5 мл сухого фтористого водорода и оставл ют реакционную массу на 75 мин при ос. Затем фтористый водород отгон ют под уменьшенным давлением, масл нистый остаток раствор ют в 10 мл уксусной кислоты и чист т хроматографией на Сефадексё g-15 в 33%-ной уксусной кислот ( в воде) . Затем ф15акцию, содержащую чистое незащищенное тетрапептидное производное, лиофилизуют. Полученное соединение раствор ют в смеси метаНОЛ:дистиллированна  вода (95:5) и хроматографируют на слабоосновном анонном обменнике Q АЕ-СефаДекс А-25 в хлоридной форме, дл  элюировани  используют ту же смесь растворителей Метанол удал ют из элюата при под уменьшенным давлением и оставшийс  водный раствор лиофилизируют. Выход 75 мг (85%), продукт однороден согласно ТСХ в системе А (Rf 0,48 о -40° (с 0,5, уксусна  кислота в дистиллированной воде).
Анализ на аминокислоты: 0,98 Илей 0,5 Глю, 0,98 Apr, 1,00 Гли.
П р и м е р II: 2НС1 Н-Ипей-Глю-Гли-Арг-пИА .
На: 2НС1 Н-Илей-Глю-Гли-Арг-пНА (мол.вес 666,6).
100 мг (0,116 ммоль) продукта 1с обрабатывают с фтористым водородом и чист т в услови х, описанных в примере 1а.
- Выход 56 мг (73%), продукт однороден согласно тех в системе А, jl 0,34, -35° (с 0,5, 50%-на  уксусна  кислота в дистиллированной воде).
Анализ на аминокислоты: 0,96 Илей 0,94 Глю, 0,96 Apr, 1,00 Гли.
Пример III: НС 1 Бзл-Млей-ГлнГли-Арг-пНА (мол.вес. 733,2).
Ilia: Кбо-Глн-Гли-Арг (N02)-nHA (мол. вес 658,5).
2,65 г (5 ммоль) соединени  Кбо-Гли-Арг (NOj) пНА декарбобензоксилируют бромистым водородом в уксусной кислоте и копулируют с 2,2 г, (5,5 ммоль) Кбо-Глн-ОпНФ по методу, описанному в примере 1а. Неочищенный продукт очищают двойной перекристаллизацией из метанола.
Выход 2,07 г ,(63%) Ilia. Гомогенность в соответствии с ТСХ в системе A(RI 0,62), -23 (с 0,5 метанол/диметилформамид 9/1).
IIIb: Трет-Бок-Илей-Глн-Гли-Арг (N02)-nHA (мол. вес 737,6).
0,66 г (1 ммоль) соединени  Ilia декарбобензоксилируют бромистым водородом в АсОН по методу, описанному в примере 1а. Полученное соединение раствор ют в 10 мл перегнанного диметилформамида .1 Раствор охлаждают до и доВавл ют триэтиламин до нейтральной реакции. Выпавший в осадок бромгидрат триэтиламина отфил тровывают, фильтрат вновь охлаждают до и к нему добавл ют 0,40 г (1,1 1 из5оль) Бок-Илей-ОпНФ и раствор оставл ют медленно нагребатьс  до комнатной температуры. Черей 3 ч рас вор вновь охлаждают до -10°С и буферируют 0,1 глл. (0,7 ммоль) триэтанолг амина, Буферирование повтор ют через 2-3 ч. Реакционный раствор оставл ют до утра и избыток трет-Бок-ИЛей-ОпНФ привод т во взаимодействие с 0,1 мл (1 ммоль) н-бутиламина. Через 30 мин раствор упаривают в вакууме при 40°G Оставшеес  т жёлое масло тщательно перемешивают с 100 мл дистиллирован ной воды. Воду декантируют и промывку провод т еще дважды. Оставшеес  масло раствор ют в метаноле и очищают в колонке .с сефадексрм ZH-20 в метаноле, использу  в качестве элюирующего средства метанол. Выход 0,56 г (76%). Гомогенность по ТСХ в системе А (Rf 0,66.).
II1с. Бэл-Глн-Гли- Arg(N02)4iHA мол. вес 741,6) .
0,56 (0,76 ммоль) продукта Illb раствор ют в 5 мл трифторуксусной кислоты. Раствор перемешивают 15 мин при комнатной температуре, после чего медленно выливают в 100 мл энергично перемешиваемого сухого эфира. Эфир отдел ют декантацией и осадок дважды обрабатывают 50 мл эфира. После сушки в вакууме над и таблетками КОН при 30°С получают трифторуксусную соль тетрапептидного производного почти количественно. Продукт гомогенен в соответствии с тонкослойной хроматограммой в системе А.
Полученное соединение раствор ют в 8 мл диметилформамида, охлаждают до -10 С и нейтрализуют триэтаноламином . Внос т 0,23 г (1 ммоль) бензойного ангидрида и через 30 мин добавл ют еще 1,00 мкл триэтаноламина. Реакционный раствор оставл ют до утра и упаривают в вакууме при . Оставшеес  т желое масло тщательно перемешивают с дистиллированной водой Воду декантируют, оставшеес  масло раствор ют в метаноле и очищают в колонке , содержащей сефадекс ZH-20 в Метайоле. Выход 0,55 г (95%). Гомогенность по тех в системе А (Rf 0,64).
Hid. Бзл-Илей-Гли-Глн-Арг-пНА-НС1 (мол. вес 733,3).
0,55 г (0,75 ммоль)III привод т во взаимодействие с фтористоводородной кислотой, очищают (ионообменно) по методу, описанному в примере 1е. Выход 0,34 г (62%), Гомогенность по ТСХ в системе А (Rf 0,41), -40 (с 0,5, 50%-на  уксусна  кислота в дистиллированной воде).
Остальные, промежуточные и конечные продукты, использованные в качестве примеров, синтезированы в соответствии с .методами, описанными в примерах I-III.

Claims (2)

  1. Получение этих соединений и их свойства приведены в таблице. 139 Формула изобретени  . 1. Способ получени  пептидов общей формулы К -А -А2-Гли - Apr - NHR2, где R - водород/ бензоил; RJ - Н -нитроанилид; А| - аспарагинил, глицил, изолейцил , лейцил, валил, пролил , тирозил, фенилаланил; AJ - глютаминова  кислота, глютамин , аспарагинова  кислота , или их солей, отличающийс   тем, что соединение общей формулы , в которой Rj имеет указанные значени , подвергают вза214 имодействию с соответствукадей амино кислотой и далее требуемую пептидную структуру постепенно наращивают путем сочетани  остальных аминокислот , причем группу R используют в качестве защитной группы дл  С - конценой карбоксильной группы первой аминокислоты.
  2. 2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и и с   тем, что дл  наращивани  требуемой пептидной с±руктуры используют сочетани  аминокислот методом активированных эфиров. ; Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Шредер Э. , Любке К. Пептиды, Ч. 1, М., Itop, 1967, с, 116.
SU752197544A 1974-12-05 1975-12-04 Способ получени пептидов или их солей SU957762A3 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE7415229A SE407058B (sv) 1974-12-05 1974-12-05 Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU957762A3 true SU957762A3 (ru) 1982-09-07

Family

ID=20322900

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU752197544A SU957762A3 (ru) 1974-12-05 1975-12-04 Способ получени пептидов или их солей

Country Status (23)

Country Link
US (2) US4028318A (ru)
JP (1) JPS5431397B2 (ru)
AT (1) AT351565B (ru)
BE (1) BE836085A (ru)
CA (1) CA1048998A (ru)
CH (1) CH619983A5 (ru)
CS (1) CS187492B2 (ru)
DD (1) DD123316A5 (ru)
DE (1) DE2552570C3 (ru)
DK (1) DK145461C (ru)
ES (1) ES442997A1 (ru)
FI (1) FI753246A (ru)
FR (1) FR2293439A1 (ru)
GB (1) GB1488987A (ru)
HU (1) HU174263B (ru)
IL (1) IL48506A (ru)
IT (1) IT1052318B (ru)
NL (1) NL188648C (ru)
NO (1) NO142074C (ru)
PL (1) PL99020B1 (ru)
SE (1) SE407058B (ru)
SU (1) SU957762A3 (ru)
ZA (1) ZA757441B (ru)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE407058B (sv) * 1974-12-05 1979-03-12 Kabi Ab Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser
SE407571B (sv) * 1975-07-11 1979-04-02 Kabi Ab Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser
SE431201B (sv) * 1976-01-24 1984-01-23 Ajinomoto Kk For anvendning vid metning av kollagenasaktivitet avsett peptidderivat jemte forfarande for nemnda metning
US4176009A (en) * 1976-01-24 1979-11-27 Ajinomoto Co., Inc. Method of measuring collagenase activity
CH634662A5 (de) * 1976-05-28 1983-02-15 Pentapharm Ag Verwendung von tripeptidderivaten zur quantitativen bestimmung von plasminogen-aktivatoren.
SE437153B (sv) * 1976-12-01 1985-02-11 Kabi Ab Specifika kromogena enzymsubstrat for serinproteaser
US4191809A (en) * 1977-02-26 1980-03-04 Ajinomoto Co., Inc. Method of measuring enzymatic activity using novel peptide derivatives
JPS5415797A (en) * 1977-06-14 1979-02-05 Seikagaku Kogyo Co Ltd Detection and measurement of toxin in cells
CA1087075A (en) * 1977-08-05 1980-10-07 Robert J. Gargiulo Composition and method for determining transferase and protease activity
US4438029A (en) 1978-01-19 1984-03-20 Research Corporation Synthetic peptides
SE7801373L (sv) * 1978-02-07 1979-08-08 Kabi Ab Lett spjelkbara substrat for kvantifiering av proteaser
US4275153A (en) * 1978-08-03 1981-06-23 American Hospital Supply Corporation Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes
US4336186A (en) * 1978-08-03 1982-06-22 Gargiulo Robert J Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes
JPS59499B2 (ja) * 1978-11-02 1984-01-07 味の素株式会社 ペプチド誘導体
FR2455083A1 (fr) * 1979-04-24 1980-11-21 Jozefonvicz Marcel Nouveau procede de dosage des proteases et des antiproteases et notamment des proteases et antiproteases des systemes de la coagulation et du complement
DE2921216A1 (de) * 1979-05-25 1980-12-04 Teschemacher Hansjoerg Pharmakologisch aktive peptide
DE2936543A1 (de) * 1979-09-10 1981-04-09 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Chromogene verbindungen
US4244865A (en) * 1979-12-03 1981-01-13 Abbott Laboratories α hydroxy tripeptide substrates
CA1161432A (en) * 1980-02-12 1984-01-31 Lars G. Svendsen Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes
US4301245A (en) * 1980-05-29 1981-11-17 Dynasciences Corporation Chromogenic method of detecting endotoxins in blood
JPS57501234A (ru) * 1980-08-25 1982-07-15
JPS5753445A (en) * 1980-09-16 1982-03-30 Torii Yakuhin Kk Peptide compound
JPS5753446A (en) * 1980-09-16 1982-03-30 Torii Yakuhin Kk Peptide derivative
US4510241A (en) * 1981-09-03 1985-04-09 Mallinckrodt, Inc. Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin
US4406832A (en) * 1981-09-03 1983-09-27 Mallinckrodt, Inc. Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin
EP0078764B1 (de) * 1981-11-02 1986-01-02 Pentapharm A.G. Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Blutgerinnungsfaktor XII in Humanplasma
US4448715A (en) * 1981-11-02 1984-05-15 University Of Miami Tagged pyroglu-L-Phe-L-Arg derivatives, substrates and assays for kallikrein
CA1247086A (en) * 1982-02-17 1988-12-20 Francis R. Pfeiffer Renally active tetrapeptides
DE3211254A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens
DE3244030A1 (de) * 1982-11-27 1984-05-30 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
DE3312191A1 (de) * 1983-04-02 1984-10-11 Karl Mengele & Söhne Maschinenfabrik und Eisengießerei GmbH & Co, 8870 Günzburg Schutzvorrichtung fuer mechanische schraenke und dergleichen geraete bzw. maschinen
FR2546164B1 (fr) * 1983-05-16 1987-07-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de peptides, leur preparation et leur application comme inhibiteurs de l'elastase
DE3446714A1 (de) * 1984-12-21 1986-06-26 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens
US6297024B1 (en) 1998-10-15 2001-10-02 Cell Activation, Inc. Methods for assessing complement activation
US6235494B1 (en) 1999-02-08 2001-05-22 The Scripps Research Institute Substrates for assessing mannan-binding protein-associated serine protease activity and methods using the substrates
GB2492104A (en) * 2011-06-22 2012-12-26 Job Harenberg Assay for direct thrombin inhibitors
CN108089006B (zh) * 2016-11-23 2020-09-25 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 凝血因子ⅹ激活剂活性标定的方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1042487A (en) * 1964-06-25 1966-09-14 Ici Ltd Polypeptide derivatives
US3778426A (en) * 1970-12-16 1973-12-11 Research Corp Therapeutically useful polypeptides
SE380257B (sv) * 1972-05-02 1975-11-03 Bofors Ab Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser
SE407058B (sv) * 1974-12-05 1979-03-12 Kabi Ab Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser

Also Published As

Publication number Publication date
AU8687275A (en) 1977-06-02
FR2293439A1 (fr) 1976-07-02
BE836085A (fr) 1976-03-16
NL7513505A (nl) 1976-06-09
SE407058B (sv) 1979-03-12
NO142074B (no) 1980-03-17
NL188648C (nl) 1992-08-17
JPS5431397B2 (ru) 1979-10-06
JPS5183595A (ru) 1976-07-22
IL48506A0 (en) 1976-01-30
US4028318A (en) 1977-06-07
HU174263B (hu) 1979-12-28
FR2293439B1 (ru) 1979-07-13
DK145461B (da) 1982-11-22
CH619983A5 (ru) 1980-10-31
US4252715A (en) 1981-02-24
FI753246A (ru) 1976-06-06
AT351565B (de) 1979-08-10
PL99020B1 (pl) 1978-06-30
SE7415229L (sv) 1976-06-08
DK145461C (da) 1983-04-18
CA1048998A (en) 1979-02-20
DE2552570B2 (de) 1980-01-10
DD123316A5 (ru) 1976-12-12
IT1052318B (it) 1981-06-20
ES442997A1 (es) 1977-04-16
GB1488987A (en) 1977-10-19
NO753945L (ru) 1976-06-09
NO142074C (no) 1980-06-25
DE2552570A1 (de) 1976-06-10
DE2552570C3 (de) 1983-11-17
NL188648B (nl) 1992-03-16
DK549475A (da) 1976-06-06
IL48506A (en) 1979-05-31
ZA757441B (en) 1976-11-24
CS187492B2 (en) 1979-01-31
ATA900775A (de) 1978-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU957762A3 (ru) Способ получени пептидов или их солей
US4229438A (en) Nonapeptides
US4350627A (en) Biologically active peptides
Han et al. Studies on the Primary Structure of Bovine High-MolecularWeight Kininogen: Amino Acid Sequence of a Fragment (“Histidine-Rich Peptide”) Released by Plasma Kallikrein
JPS63173600A (ja) プロテア−ゼの定量方法およびそれに使用する試薬
NO142812B (no) Nye diagnostisk aktive kromogene enzymsubstrater
Urry et al. Studies on the conformations and interactions of elastin. Proton magnetic resonance of the repeating tetramer
US4247454A (en) Novel chromogenic thrombin substrates
FI56525C (fi) Nya kromogena trombinsubstrat
Yamashiro et al. PREPARATION OF Nα‐BOC‐Nε‐P‐BRZ‐LYSINE AND Nα‐BOC‐0‐M‐BRBZL‐TYROSINE AND THEIR USE FOR THE SOLID PHASE SYNTHESIS OF AN OCTAPEPTIDE OCCURRING IN THE HGH MOLECULE
BLANOT et al. SYNTHESIS OF ANALOGS OF THE SERUM THYMIC NONAPEPTIDE, FACTEUR THYMIQUE SERIQUE (FTS) Part I
Noda et al. A facile method for preparation of t‐butyloxycarbonylamino acid p‐nitroanilides
US4162941A (en) Method for determining a proteolytic enzyme
JP2887765B2 (ja) ポリアルキレングリコール残基を含む対称ビペプチド、その製造方法およびプロテアーゼの検定における使用
US6448031B1 (en) Process for producing LH-RH derivatives
JPS61191696A (ja) 血清胸腺因子ペプチド類似体
US3826794A (en) Protected decapeptide derivatives of gonadotropin releasing hormone
FujINo et al. Synthesis of Porcine Motilin and Its D-Phe1-Analog by the Use of Methanesulfonic Acid
KAWASAKI et al. Amino acids and peptides. XXI. Laminin-related peptide analogs including poly (ethylene glycol) hybrids and their inhibitory effect on experimental metastasis
Rapaka et al. Synthesis of polypeptide models of collagen
OGAWA et al. Studies on Peptides. LXXVIII. Synthesis of the Nonacosapeptide corresponding to the Entire Amino Acid Sequence of Avian Glucagon (Duck)
US3784535A (en) Nonapeptide intermediate to gonadotropin releasing hormone
AU602527B2 (en) Chromogenic compounds, a process for their preparation and their use
US3655636A (en) Process for the synthesis of peptides using 4-pyridylmethyl and related groups for the protection of c-terminal carboxyl groups
US4474765A (en) Biologically active peptides