Изобретение относитс к микро6ио огической промышленности, а име но к способу получени одной из незаменимых аминокислот L-лизина. В процессе ферментации в результате , изменени состава питательной среды уменьшаетс темп роста клеток а также измен етс их морфологи . Биомасса стареет, в ней идут процес сы автолиза и фиэиолого-биохимичес ка активность клеток падает. Это приводит к снижению выхода L-лизина Известен способ получени Ъ-лизи на, согласно которому дл повьшени выхода целевого продукта в процессе ферментацииJ начина с 16 до 30 ч определ ют концентрацию молочной кислоты или активность лактатдегидр геназы, либо определ ют активность изоцитратдегидроген.азы в клетках продуцента и с учетом этого ведут весь процесс культивировани 11. Известен также способ получени L-лизина путем глубинного культивировани его продуцентов в аэробных услови х на питательной среде, содер жащей источники углерода, азота, . необходимые минеральные солй, амино кислоты и .витамины при периодическом добавлении -свежей питательной среды с последующим выделением лизина 2 Выращивание продуцента провод т при периодическом добавлении стерильного раствора одного из компонентов питательной среды мелассы, обеспечивающей поддержание редуцирую щих веществ в культуральной жидкости в пределах 2,5-3%. Этот способ позвол ет повысить выход Ь лизина до 30 г/л, а экономический коэффици , ент выхода L-лизина до 40,2%, Однако при многократном периодическом добавлении мелассы в среде /растет концентраци Треонина, который , содержит меласса. Треонин совместно с лизином вызывают мультивалентное ингибирование активности )-аспартаткиназы, что в свою очеред резко уменьшает лизиноинтезирующую активность культуры и снижает выход целевого продукта, Мультивалентное ингибирование активности -аспартки назы наступает при определенных пре делах активности декарбоксилазы диаминопимелиновой кислоты. Эффект особенно выражен .при пере работке концентрированных питательньгх сред; концентраци редуцирующих веществ 12-15%. Целью изобретени вл етс увеличение выхода целевого продукта. Цель достигаетс тем, что в процессе культивировани , начина с 16-18 ч, в клетках продуцента оцрёдел ют активности декарбоксилазы диаминопимелиновой кислоты или соотзветствующие им концентрации L-лизина и при достижении критического дл данной культуры уровн активности декарбоксилазы диаминопимелиновой кислоты, равной 12-9.10 моль лизина/СМг белка ввод т свежую питательную среду до снижени уровн активности декарбоксштазы диаминопимелиновой кислоты до 8-6.10 моль лизина /СМг белка, после чего продолжа-. ют процесс культивировани и, начина с 30 - 36 ч с начала процесса культивировани при дост1г,кении активности 5. - А.Ю моль лизина/сМг белка, ввод т источник углерода и витамины до снижени актив моль ли- V- 2.10ности до 2,5.10 зина/с.мг белка. В процессе культивировани определ ют концентрацию L-лизина и по ней суд т об активности декарбоксилазы диаминополимелиновой кислоты. Способ осуществл ют следующим образом. В качестве продуцента L-лизина используют микроорганизмы рода Brevibacterium или Micrococcus. После выращивани культуры в посевном ферментаторе дальнейшее культивирование провод т в производственных ферментаторах на углеводной питательной среде, например мелассной . При ферментации во врем роста продуцента рО поддерживают на уровне 20-25% от насыщени . В состав питательной среды вход т, кроме источников углерода, дефицитные дл продуцента аминокислоты и -витамины, а также источники азота и фосфора. Начина с 16-18 ч, определ ют активность декарбоксилазы диаминополимелиновой кислоты (ДАП-ДК), уровень аэрации до 10-12% насыщени , сохран интенсивност.ь перемешивани системы. При достижении уровн активности ДАП-ДК преимущественно 1,2-10- - ТО моль лизина/, /с«мг белка в ферментатор добавл ют свежую стерильную питательную среду 3 до достижр.ни критической дл данно культуры активности ДАП-ДК 840,- 6 .10%1оль лизина/смг . Питательную среду ввод т непрерывно или отдельными порци ми с интервалами в 1-2 ч. При достижении уровн ДАПДК - 6. моль лизина/ /сек мг белка ввод/питательной сред прекращают. Во врем культивировани температуру поддерживают на уровне 31±lc, рН среды 7,4-7,8. При дости жении уровн активности ДАП-ДК 5.10 - 4.10 моль лизина/секМГ белка, что происходит на 30-36-м ча су культивировани , начинают вводит источники углерода и витамины до снижени активности ДАП-ДК до . 2,5-10 - 2,1 б моль лизина/с-йг белка . В качестве источников углерода используют глюкозу, сахарозу, фруктозу . После последней подпитки при активности ДАП-ДК равной 2.10 мол лизина/с-мг белка процесс ведут еще несколько часов до концентрации редуцирующих веществ равной 1-1,2%. После окончани культивировани из культуральной жидкости вьщел ют L-ЛИЗИН одним из известных методов, или получают кормовой концентрат лизина. Активность ДАП-ДК определ ют ма нометрически по количеству образующегос углекислого газа при использовании в качестве субстрата диаминополимелиновой кислоты. Активность ДАП-ДК также определ ют по концентрации лизина в культуральной жидкости. На чертеже представлена зависимость дл культуры Brevibacterium flavum 22LD активности ДАП-ДК от концентрации L-лизина, где по оси абсцисс отложена концентраци L-лиз на в г /л, а по оси ординат - активкость ДАП-ДК в ° ™ с-мг белка Така калибровочна крива строитс дл каждой культуры. Ниже приведены примеры осуществлени способа. Пример 1. Б качестве продуцента используют культуру Brevibacterium flavum 22 LD. Исходную культ ру размножают вначале на агаровьгх кос ках, затем в колбах на качалке, а затем в посевном ферментаторе емкостью 400 л на мелассной.питательной среде, Культивирование продол64 жак )т 14 ч при температуре 31±1 С, аэрации 60 мг мин, рН среды поддерживают в пределах 7,4-7,8. Посевной материал передавливают в ферментер емкостью 3000 л со средой следующего состава Меласса 470 кг (при содержании сахара 46 мае. %) Кукурузный экстракт 50 кг (NHOi S0437 кг ( NH4)2HP04, 0,75 кг KHjPO 0,75 кг Подсолнечное масло 3л ВодаДо 1300 л Начальна концентраци , содержание L-лизина 2,8 г/л после добавлени посевного материала. Во врем роста продуцента рО поддерживают на уровне .20-25% насыщени , на В-Ю-м часу рН увеличивают до 7,47 ,8 и поддерживают на этом уровне. На 18-м часу культивировани активность ДАП-ДК составл ет 9.10 моль лИзина/СМг белка, содержание L-лизина 18 г/л, концентраци РВ 8,8%. В ферментатор непрерывно ввод т в течение 2 ч стерильную свежую среду, со скоростью 1% РБ в 2 ч до снижени активности ДАП-ДК до 6,8-10 моль лизина/с-мг белка, содержание, лизина. 19 г/л. В дальнейшем активность ДАПДК определ ют каждые 2-3 ч. После подпитки уровень аэ рации уменьщают.до 10% насьщени . На 37-м часу культивировани активность ДАП-ДК составл ет 5.10 моль лизина/с-мг белка, в среду ввод т источники углерода и витамины. В качестве источника углерода ввод т сахарозу двум порци ми с периодом в 2 ч до снижени активности ДАП-ДК до 3,4. моль лизина/с-мг белка, концентраци лизина на 48-м .часу после подпитки составл ет 48.г/л. Затем продолжают культивирование, а на 52-м часу вновь ввод т сахарозу и витамины: биотин и тиамин до снижени активности ДАП-ДК - 2,2. моль лизина/ci мг . белка, концентраци лизина при этом составд ет 58 г/л. После чего продолжают культивирование до концентрации редуцирующих веществ 1,4%. На 63-м часу ферментации культуральна зиадкость содержит 65 г/л лизина, биомассы продуцейта 24 г/л. Культуральную жидкость обрабатьгоают одним из известных способен, например, с по