SU736861A3 - Способ получени фракции сывороточного альбумина - Google Patents

Description

ЭАМК-сополимера. Полиэлектропитный сополимер предпочтительно превращают в сол нокислую соль дл  достижени  большей технологичности продукта ,

П15вдпочтительный полиэлектролитный сополимер содержит около 5 метиламинобиспропиламиновых сшив иощих групп и около 90 дополнительных диметиламинопропиламиновых функциональных групп на 100 ед. ангидрида малейновей кислоты в ЭАМК-сополимере . Полиэлектролитный сополимер способен в Основном полностью адсорбирбжать йёсь альбумин кров ной фракции , йосле чего альбумин можно выдел ть с выходом выще 90% с 94%-ной чистотой, примен   способ гор чей обработки и свлектив.ного элюировани .

Полиэлектролитные сополимеры смешивают с кров ной плазмой или сывороткой , или альбуминсодержащими фракци ми крови, предпочтительно в концентраци х 1-5% сополимера, Регулировкой значени  рН смолисто-белковой смеси на разные уровни вначале удал ют выборочные белки. При рН 5,5-7,5 смолой адсорбируютс  альбукин,Л и jS-глобулины и фибриноген , в то врем  как больша , часть У -глобулина остаетс  не поглощенной и может быть выделена из остатка дл  терапевтических целей. Первоначальное выделение jp -глобулина осуществл ют при рН 6, Часть поглощенных ир -глобулинов и фибриногена выдел ют доведением рН смолисто-белковой смеси примерно до 4,7 с последующим сбором десорбированного Остатка.

Значение рН смолисто-белковой смеси затем довод т до 5,0-5,5 с нагревом до температуры примерно 65-72 0 в течение 1-4 ч, рН регулируют в пределах 5,2-5,3 с нагреванием смолисто-белковой смеси примерно при,72°С в течение 1 ч.

При осуществлении стадии гор чей Обработки остаточные глобулины, в основном (/ ч -глобулины, денатурируютс , в то врем  как альбумин не денатурируетс  и легко поддаетс  выделению. После обработки нагревом рН довод т до 3,5-4,5 дл  элюировани  из смолисто-белновой смеси желательного альбумина. Смолисто-белковую смесь перёд регулировкой рН охлаикдают , после чего значение рН довод т до 4, Выдел ют гшьбумин осаждением , фильтрацией или центрифугированием , предпочтительным способом  вл етс  фильтрёщи  смолисто-белковой смеси с отрегулированным рН, промывка и сбор фильтрата в виде желательной альбуминовой фрак:ции , высокой степени чистоты. Регулировку рН , на необходимый уровень осуществл ют обработкой кислотным

или щелочным буфером, например буфером на основе ацетата натри  - уксусной кислоты или же лимонной кислоты , в цел х подкислени  или обработкой бикарбонатом натри  или е гидроокисью натри  дл  подщелачивани . Предпочтительным  вл етс  применение стабилизаторов альбумина, как натрийацетилтриптофанат и натрийкаприлат смеси смола-белок во

Q врем  обработки нагревом с учетом их стабилизирующих свойств.

Пример 1, Полиэлектролитный полимер состоит из смолистого продукта взаимодействи  в основном эквимол рных частей этилена с ангид5 РИДОМ малейновой кислоты (АМК), поперечно метилиминобиспропиламином (МИБПА) и затем подвергнутого взаимодействию с диметиламинопропиламином (ДМПА) таким образом

0 чтобы образовалось около ,п ти МИБПАсшивающих групп и около 90 ДМПА-дополнительных групп на 100 ед. АМК в ЛМК-сополимере, и превращенного в сол нокислую соль. Вначале полиэлект5 ролитный сополимер промывают в

0,04 М хлористом натрии. Плазму, полученную из смешанной человеческой крови, разбавл ют с применением 3 частей воды на 1 часть плазмы,посQ ле чего примешивают 2 вес,% промытого полизлектролитного сополимера (2 г/100 мл). Значение рН смеси смола-плазма довод т до 6,0, затем 30 мин перемешивают, фильтруют и ,

промывают 0,002 М хлористым натрием. Фильтрат, в основном состо щий из у-глобулинов, р -глобулинов,фибриногена и ассоциированных кров ных факторов , выдел ют из полученного смолисто-белкового остатка на фильтре,

Последний, содержащий адсорбированный альбумин, подкисл ют до рН 5,2, Дл  достижени  0,012 М концентрации к адсорбированному СМОЛОЙ белку примешивают надлежащее количество стабилизатора на основе каприлата натри , дл  достижени  0,002 М концентрации добавл ют хлористый натрий. После этого в течение 1 ч при 10°С поглощенный смолой белок нагревгиот, потом материал фильтруют, фильтрат выбрасывают.

Альбумин элюируют из оставшегос  смолисто-белкового жлыха путем подJ кислени  до рН 4,0 в 0,002 М хлористом натрии лимонной кислотой, затем 30 мин переманивают и фильтруют . Фильтрат собирают в виде желательной альбуминовой фракции с выходом 96,6% (в пересчете на концентрацию альбумина в первоначальной плазме) при степени чистоты 98,5%, Степень чистоты элюированного из смолы альбумина определ ют агар-гель-злектрофорезом в буфере

5 на основе дизтилбарбитуровой кислоты при рН 8,6 с применением электро фореэного устройства. Счет производ т при 600 нм с помощью денситометра . Синий типа Соогиачйе BrAttiAnt R 250  вл етс  протеиновым кр  сителем высокой чувствительности. За счет высокой степени чувствительности синий типа Coomasste Br-«e, BEue К 250 допускает определение белковых npfiMeceft в альбуминовом продукте с очень большой точностью, а проведенный количественный анализ подтверждает получение альбумииа высокой степени чистоты.

Пример 2. Повтор ют способ примера 1 за исключением того, что исходна  плазма представл ет собой AHF-обедненную плазму. Выход и степень чистоты альбуминового продукта в основном такие же, как в примере 1.

Пример 3. Повтор ют способ примера 1 за исключением того, что I включают промежуточную стадию между первой фильтрацией и гор чей обработкой в цел х удалени  дополнительных глобулинов и фибриногена из плазма. На этой промежуточной стадии рН смолисто-белкового остатка на фильтре от первой фильтрации довод т до 4,7 в 0,002 М хлористом натрии лимонной кислотой, перемешива  затем в течение 30 мин. Смесь фильтруют, прогвлвают и потом подверггиот обработке нагревом, затем стади м примера 1. Фильтрат от обработки с достижением рН 4,7 содержит А и -глобулины и фибриноген, которые собирают дл  использовани  в различных известных терапевтических и диагностических цел х. Целевой альбумин получают с выходом и степенью чистоты в основном аналогичными примеру 1.

Следу  способу выделени  очищенH .ot-o альбуминового продукта, альбумин концентрируют до требуемого уровн , рН кокцентрирован ого продукта довод т до физиологически приемлемого значени  и содержани  электролита, затем нагревают дл  уничтожени  вирусов, довод т до прозрачного состо ни  фильтрацией или иными способами дл  получени  клинически пр го ного вещества, соответствующего требовани м, предъ вл емым к обычно сывороточному материалу . К предпочтительному спосо-бу концеитрирова Еш , примен емому на практике, от№э з тс  лйофи иэаци  с последующим перхает ведением до желательной конце «1 рации, например 5 5 или 25%-на  у.р екфрафильтраци .

Предлагае1 1й с фсо.б позвол ет повысить выход целевого продукт даЗ 96,6% при степени чтстоты 98,5%.

20

Claims (1)

1. ПатентСША 3555001, кл. 266-112, опублик. 1969.