SU734261A1 - Способ выделени рибонуклеазы - Google Patents
Способ выделени рибонуклеазы Download PDFInfo
- Publication number
- SU734261A1 SU734261A1 SU772473397A SU2473397A SU734261A1 SU 734261 A1 SU734261 A1 SU 734261A1 SU 772473397 A SU772473397 A SU 772473397A SU 2473397 A SU2473397 A SU 2473397A SU 734261 A1 SU734261 A1 SU 734261A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- ribonuclease
- ultrafiltration
- dialysis
- stage
- dialyzed
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Изобретение относитс к микробиологической промышленности, а именно к способу выделени рибонуклеазы, используемой в пищевой промышленности дл удалени ВНК из белкововитаминных концентратов и.улучшени их пищевой ценности, в медицине, а также в биохимических синтезах полинукл отидов и их исследовани х, изучени . строени рибонуклеиновых кислот и белков. Известен способ выделени и очист ки щелочной РНКазы из культуральной жидкости Penicit-feium brevicompactum согласно которому дл получени щелочной РНКазы из культуральной жидкости осаждают ферменты сульфатом аммони при 0,9 насыщении, осадок от дел ют на суперцентрифуге, раствор ю повторно центрифугируют и диализуют Раствор после диализа очищают хрома тографией на ДЭАЭ-целлюлозе, КМ-целл лозе и сефадексе G-75, Перед каждой стадией хроматографии растворы с фе ментом концентрируют и диализуют, Концентрат щелочной РНКазы хран т при +4 С или при -5° С в глицерине 1 Известен способ выделени рибонуклеазы из культуральной жидкости Penici.ium..brevicorapactum,. вл ющийс наиболее близким техническим решением к изобретению, предусматривающий хроматографирование культуральной жидкости, ультрафильтрацию полученного элюата и диализ 2. Однако известный способ предусматривает п.олучение только кислой рибонуклеаэы , при зтом способ вл етс лабораторным и ке позвол ет получить большие количества фермента. Целью изобретени вл етс разработка промьиаченного способа получени кислой и щелочной рибонуклеазы в одной технологической схеме, повышение степени их чистоты, упрощение процесса и повышение выхода целевого продукта. Поставленна цель достигаетс тем, что хроматографирование культуральной жидкости осуществл ют в три стадии , ка первой из которых культуральную жидкость пропускают через последовательно установленные среднеосновной и высокоосновной аниониты, после чего элюат концентрируют ультрафильтрацией и диа.пизуют, на второй стадии полученный раствор хромйтографируют на КМ-целль лозе, концентрируют ультрафильтрацией и диалиэуют, затем на третьей стадии провод т гель-хроматографию на сефадексе G-75 с получением двух фракций, одну из которых, содержащую кислую рибонуклеазу, диализуют и сушат, а другую - щелочную риеЭонуклеазу - концентрируют ультрафильтрацией и кристаллизуют диализом При этом в качестве среднеосновного анионита используют смолу ЭДЭ-1ОП в Сб -форме, а в качестве высокоосноного анионита - анионообменное волокно ЦМ-А2 в сг -форме.
Сущность способа заключаетс в следующем.
Отфильтрованную культуральную жидкость Penicietium Ьrevicompacturn пропускают с высокой скоростью сначала через колонку со среднеосновным анионитом, например ЭДЭ-1ОП, где удал ютс сильнокислотные примеси, затем через колонку, заполненную высокоосновным анионообменным волокном на целлюлозной основе, например ЦМ-А2. Насыщенную ферментом колонку промывают водой и десорбируют ферменты 0,5 н. NaCe в 0,1 н. ацетатном буферном растворе с рН-5,0. Активные элюаты концентрируют ультрафильтрацией , диализуют, хроматографируют на КМ-целлюлозе и сефадексе G-75. После сефадекса G-75 получают гомогенные фракции кислой и отдельно щелочной рибонуклеаз. Выход растворов кислой РНКазы составл ет 50-60%, а щелочной РНКазы 26-30%.
Затем раствор щелочной РНКазы диализуют против 0,01 н. трис-ацетатного буферного раствора с рН-3,5. При диализе щелочна РНКаза выкристаллизовываетс . Кристаллы фильтруют и сушат под вакуумом.
Раствор кислой РНКазы диализуют против 0,01 н. трис-НС буферного раствора с рН-7,0 и сушат лиофильно, как обычно.
Пример. 2бОл отфильтрованной культуральной жидкости с температурой 4-бС пропускают со скоростью 100 л/ч через колонку (80x200 см) с 8 кг анионита .10П (Се -форма) .
Затем раствор подщелачивают до рН-7,1 и пропускают со скоростью 90 л/ч через колонку (20x130 см) с 5 кг анионообменного волокна ЦМ-А2 (Сб-форма)-. Колонку промывают 100 л дистиллированной воды с той же скоростью . Десорбцию ведут 0,5 н. NaCE в 0,1 н. ацетатном буферном растворе с рН-5,0 со скоростью 5 л/ч. Активные элюаты (30 л) концентрируют
при рН-7,0 на ультрафильтре с мембранной УАМ-100 при давлении 2 атм. Получают 500 мл концентрата, который диализуют через целлофан против 0,01 н. трис-ацетатного буфера с рН-4,3. Раствор нанос т на колонку (10x50 см) с КМ-целлюлозой, их промывают 0,01 н. трис-ацетатным буфером с рН-4,5 и элюируют ферменты линейным градиентом NaCt. от О до 1 н. в 0,01 н. трис-ацетатном буфере с рН-4,5 со скоростью 100 мл/ч. Полученные 1000 мл активных фракций концентрируют ультрафильтрацией, диализуют и нанос т на колонку (3x100 см с сефадексом G-75. Элюцию ведут 0,1 н. КСе в 0,05 н. трис-НСС буфере с рН-7,5 со скоростью 60 мл/ч. Получают 200 мл фракции, содержащей кислую РНКазу и 210 мл фракции, содержащей щелочную РНКазу. Препараты электрофоретически гомогенны и не про вл ют ФМЭ-азной, ФДЭ-азной и ДНК-азной активности. Раствор кисло РНК-азы диализуют против 0,01 н. трис-НСС буфера с рН 7,0 и сушат лиофильно , как обычно.
Раствор щелочной РНК-азы концентрируют ультрафильтрацией до 10 мл и диализуют против 0,01 н. трис-ацетатного буфера с рН-3,5. В процессе диализа выпадает кристаллическа соль щелочной РНК-азы, которую отфильтровывают и сушат в вакуум-сушильном шкафу без нагрева. Получают 500 мг кристаллического порошка с выходом 26,0% от содержани щелочно РНК-азы в культуральной жидкости
В таблице даны следующие этапы очистки предлагаемым способом:
1)осаждение сульфатом аммони , центрифугирование, растворение осадка , центрифугирование;
2)диализ, гель - хроматографии на G-100;
3)ультрафильтраци , диализ, хроматографи на ДЭАЭ-целлюлозе;
4)ультрафильтраци , диализ, хроматографи на КМ-целлюлозе;
известным способом:
1)очистка на ЭДЭ-10, сорбци , десорбци на ЦМ-2, ультрафильтраци
2)диализ, хроматографии на КМ-целлюлозе;
3)ультрафильтраци , диализ, гель-хроматографи на G-75.
Claims (2)
- В таблице приведены данные указаного примера в сравнении очистки килой рибонуклеазы с литературными даными известного лабораторного метод получени кислой рибонуклеазы. Применение предлагаемого метода позвол ет одновременно получать оба фермента в одном технологическомпро цессе, повышенной степени чистоты, значительно упростить технологичес} ую схему и повысить вьоход кислой РНК-азы до стадии диализа и сушки в среднем на 12% против известного лабораторного способа. Предлагаемый способ позвол ет получать большие ко личества ферментов в промышленных ус лови х. Формула изобретени 1. Способ выделени рибонуклеазы из культуральной жидкости Penici im brevicompactmn, предусматривающий хроматографирование культуральной жидкости, ультрафильтрацию полученно го элюата и диализ, отличающ и и с тем, что, с целью одновре менного выделени кислой и щелочной рибонуклеаз, повышени степени их чистоты, упрощени процесса и увеличени выхода ферментов, хроматографирование культуральной жидкости осу ществл ют в три стадии, на первой и которых культуральную жидкость пропускают через последовательно уста-новленные среднеосновной и высокоосновной аниониты, после чего элюат концентрируют ультрафильтрацией и диализуют, на второй стадии полученный раствор хроматографируют на КМ-целлюлозе, концентрируют ультрафильтрацией и диализуют, затем на третьей стадии провод т гель-хроматографию на сефадексе G-75 с получением двух фракций, одну из которых, содержс1щую кислую рибонуклеазу, диализуют и сушат, а другую - щелочную рибонуклеазу - концентрируют ультрафильтрацией и кристгшлиэуют диализом. 2. Способ по п. 1, отличающ и и с тем, что в качестве среднеосновного анионита используют смо-. лу ЭДЭ-ЮП в се -форме, а в качестве высокоосновного анионита - анионообменное волокно ЦМ-А2 в Ct -форме. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1,Прикладна биохими и микробиологи , 1974, т. 5, вып. 3, с. 432.
- 2.Прикладна биохими и микробиологи . 1972, т. 8, вып. 2, с. 226 ( прототип).
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU772473397A SU734261A1 (ru) | 1977-04-11 | 1977-04-11 | Способ выделени рибонуклеазы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU772473397A SU734261A1 (ru) | 1977-04-11 | 1977-04-11 | Способ выделени рибонуклеазы |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU734261A1 true SU734261A1 (ru) | 1980-05-15 |
Family
ID=20703889
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU772473397A SU734261A1 (ru) | 1977-04-11 | 1977-04-11 | Способ выделени рибонуклеазы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU734261A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111925944A (zh) * | 2020-07-07 | 2020-11-13 | 贵州大学 | 一种短密青霉菌及其用途 |
-
1977
- 1977-04-11 SU SU772473397A patent/SU734261A1/ru active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111925944A (zh) * | 2020-07-07 | 2020-11-13 | 贵州大学 | 一种短密青霉菌及其用途 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Willis et al. | Preparation of the periplasmic binding proteins from Salmonella typhimurium and Escherichia coli | |
CA1333779C (en) | Method for producing galactooligosaccharide | |
Uchida et al. | [30a] Ribonuclease T1 from Taka-Diastase | |
US3972777A (en) | Method for recovery of refined α-galactosidase | |
EP0273076B1 (en) | Process for preparing l-rhamnose | |
Monier et al. | [53] Isolation and characterization of 5 S RNA from Escherichia coli | |
SU734261A1 (ru) | Способ выделени рибонуклеазы | |
US3097145A (en) | Acid protease and the production thereof | |
US5986089A (en) | Process for the preparation of moenomycin A | |
US3201325A (en) | Process for the recovery of collagenase | |
UCHIDA | A simplified method for the purification of ribonuclease T1 | |
Ohba et al. | Purification, crystallization and some properties of intracellular pullulanase from Aerobacter aerogenes | |
Misaki et al. | Studies on the Protease Constitution of Aspergillus oryzae Part I. Systematic Separation and Purification of Proteases | |
JPS61502585A (ja) | 醗酵ブイヨンからポリペプチドを回収するための方法および装置 | |
US4575549A (en) | Process for the preparation of fructose 1,6 diphosphate acid | |
Emiliani et al. | Induced Autolysis of Aspergillus oryzae (A. niger group) IV. Carbohydrates | |
US3597323A (en) | Method of purifying l-asparaginase | |
US3734828A (en) | Process for the separation and purification of riboflavinyl glycosides | |
Tatsuoka et al. | Purification of lipase produced by Rhizopus | |
US3215687A (en) | Process for preparing sodium salts of ribonucleotides | |
US4497730A (en) | Method for obtaining periplasmic proteins from bacterial cells using chloroform | |
EP0186871B1 (en) | A process for the production of purified glucose isomerase | |
CN86106322A (zh) | 制备新的耐热的转葡糖苷酶方法 | |
SU1392093A1 (ru) | Способ выделени и очистки внеклеточной гуанилрибонуклеазы ТRIсноDеRма наRZIаNUм | |
US3049530A (en) | Soybean trypsin inhibitors and method of isolating the same |