SU696051A1 - Method of preparing pectinase - Google Patents

Description

1one

Изобретение относитс  к области производства ферментов, а именно к активации биосинтеза пектиназы.The invention relates to the production of enzymes, namely the activation of pectinase biosynthesis.

Известные способы получени  ферментов преследуют цель оптимизации питательной среды дл  их продуцентов и предусматривают культивирование продуцирующих плесневых грибов . рода Aspergillus на питательной ереде , содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и стимул торы биосинтеза ферментов, с последующим выделением ферментов. На этих средах образуетс  комплекс пектолитических ферментов - пЪктинэстераза, эндополигалактураноза и экзополигалактуроназа , отличающиес  как по субстратной специфичности, так и по менанизму действи  1.Known methods for producing enzymes are aimed at optimizing the nutrient medium for their producers and envisioning the cultivation of producing mold fungi. Aspergillus of the genus on nutrient containing sources of carbon, nitrogen, mineral salts and enzyme biosynthesis stimulants, followed by release of enzymes. On these media, a complex of pectolytic enzymes — phyne esterase, endopolygalacturanose, and exopolygalacturonase — is formed, which differs both in substrate specificity and in impaired behavior 1.

Известные способы не обспечивают максимальный биосинтез пектиназы плесневыми грибами рода Aspergillus. В насто щее врем  не известны препараты , которые бы использовались как активаторы в производстве пектиназы очень важного фермента, широко примен емого в практике меховой, соковой и винодельческой промышленности. The known methods do not provide maximum biosynthesis of pectinase with mold fungi of the genus Aspergillus. Currently, no preparations are known that would be used as activators in the production of pectinase of a very important enzyme, which is widely used in the practice of the fur, juice and wine-making industry.

Целью изобретени   вл етс  интенсификаци  процесса образовани  пектиназы и повышение ее активности.The aim of the invention is to intensify the process of pectinase formation and increase its activity.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что к оптимальной питательной среде посевом культуры гриба в среду ввод т активатор биосинтеза фермента , в качестве которого используют 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропиранол-4 или 1, 2, 5-триметил-4-диметилфосфонпиперидол-4 в количестве 0,0005 мг/л питательной среды.The goal is achieved by introducing an activator of enzyme biosynthesis, which is 2,2-dimethyl-4-phosphonetrahydropyranol-4 or 1, 2, 5-trimethyl-4-dimethylphosphonpiperidol-4 in the amount of 0.0005 mg / l nutrient medium.

Соединение 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропиранол-4 и 1, 2, 5-триметил-4-диметилфосфонпиперидол-4 примен ютс  как стимул торы роста растений . На микроорганизмы они действуют как ингибиторы роста при концентраци х 0,01-0,005 мг/л.The compound 2,2-dimethyl-4-phosphonetrahydropyranol-4 and 1, 2, 5-trimethyl-4-dimethylphosphon-piperidol-4 is used as a plant growth stimulator. They act on microorganisms as growth inhibitors at concentrations of 0.01-0.005 mg / l.

При уменьшении концентрации испытанных веществ до 9,0005 мг/л происходит ув-еличение биосинтеза ферментов пектиназы плесневыми грибами рода Aspergillus.With a decrease in the concentration of the tested substances to 9,0005 mg / l, an increase in the biosynthesis of pectinase enzymes by mold fungi of the genus Aspergillus occurs.

П р им е р 1, Глубинную культуру Aspergillus niger .выращивают на органо-минеральной среде следующего состава (г/л): пектин-20, лактоза-20, (МН4.)2НРОу- 7; KHgPO/- 1; КС -0,5; 05;FeS04- 0,001.Example 1, Aspergillus niger depth culture was grown on an organo-mineral medium of the following composition (g / l): pectin-20, lactose-20, (MH4.) 2HRO-7; KHgPO / - 1; COP -0.5; 05; FeS04- 0.001.

С целью активации биосинтеза пекТйназы в глубин11Ь1х услови х плесневым грибом Aspergiilus niger перёд посевон культуры в питательную среду указанного выше состава ввод т 2,2-диметил-4тфосфонтетрагидропиранол-4 в дозах 0,0005 мг/л и 0,001 мг/л.In order to activate the biosynthesis of pCynase under the depth of conditions using Aspergiilus niger mold fungus, the culture of the crop was injected into the nutrient medium of the above composition 2,2-dimethyl-4-phosphonotetrahydropyranol-4 at doses of 0.0005 mg / l and 0.001 mg / l.

По истечении трех суток в фильтра (Ге культуральной жидкости определ ют акт ивность пектиназы Си пектатньм ме тодом.After three days in the filter (Hectural liquid, the activity of the pectinase is determined by the spectatomic method.

Результаты исптыаний представлены в табл. 1.The results of the tests are presented in table. one.

ТаблицаTable

Какhow

испытаний, введение небольшого количества (0,0005 мг/л) 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропиранола-4 в пита-. тбльную среду в 1,5 раза увеличивает образование, пектиназа.tests, the introduction of a small amount (0.0005 mg / l) of 2,2-dimethyl-4-phosphonetrahydropyranol-4 in the pit-. The total medium increases by 1.5 times the formation, pectinase.

П р И ме р 2, Промышленный штамм Aspergiilus awaroori kyльтивиpyют двум  способами: пери6дичес им и полунепрерывным . В питательную средуExample 2, Industrial strain Aspergiilus awaroori culture, in two ways: periodic and semi-continuous. In a nutrient medium

Контрольна  Control

15301530

1960 среда без добавлени  активатора1960 medium without adding activator

С добавлением 2у2-диметил-4-фосфонтетрагид2200 ропиранола-42800With the addition of 22-dimethyl-4-phosphonetratid2200 ropyranol-42800

Из табл. 2 видно, что добавление 2,2-диметил-4-фосфонтетрагйдропиранола-4 в питательную среду приводит к увеличению биосинтеза фермента и,From tab. 2 shows that the addition of 2,2-dimethyl-4-phosphonetragehydropyranol-4 in the nutrient medium leads to an increase in the biosynthesis of the enzyme and,

7; .- 0,5; КС1 - 0,5; 1; FeS04- 0,001; лактоза - 20; пектин 20 перед посевом ввод т 0,0005 мг/л 2,2-диметил-4-фосф6нтетрагидропиранола-4 .7; .- 0.5; KS1 - 0.5; one; FeS04- 0.001; lactose - 20; pectin 20, before sowing, 0.0005 mg / l of 2,2-dimethyl-4-phosph6-tetrahydropyranol-4 was introduced.

Данные о биосинтезе пектиназы Aspergiilus awamori с использованием 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропираио ла-4 представлены в табл. 2.Data on the biosynthesis of Aspergiilus awamori pectinase using 2,2-dimethyl-4-phosphonetrahydropyra-la-4 are presented in Table. 2

Таблица 2table 2

2100 (на 3 сутки)19702100 (on the 3rd day) 1970

15000(на 15 сутки).15,000 (on the 15th day).

2950(на 3 сутки) 7100 24700(на 15 сутки)2950 (on the 3rd day) 7100 24700 (on the 15th day)

к ,увеличению продуцирующей способности гриба.to, increase the producing capacity of the fungus.

Пример 3. Глубинную культуру Aspergiilus niger П выращивают наExample 3. Depth culture of Aspergiilus niger II is grown on

рргано-минеральной среде следующего состава (г/л): лактоза - 20; пектин 20; (ЫН4)г ; .- 1; КС1 0 ,5; Mg-SO - 0,5; 0,001.rrgano-mineral environment of the following composition (g / l): lactose - 20; pectin 20; (LH4) g; .- one; KC1 0, 5; Mg-SO - 0.5; 0,001.

С целью активации биосинтеза пектиназы в глубинных услови х плесневым грибом Aspergillus niger П. перед посевом культуры в питательную среду указанного выше состава ввод тIn order to activate the biosynthesis of pectinase in deep conditions with the mold fungus Aspergillus niger P., before sowing the culture, the nutrient medium of the above composition is introduced

Количество активатора, введенного в питательную среду, мг %The amount of activator introduced into the nutrient medium, mg%

О,О(контрольный опыт)Oh, oh (control experience)

0,00050.0005

Claims (1)

0,001 Как следует из результатов исИ(ыта- 25 НИИ, введение небольшого количества (0,0005 мг) 1, 2, 5-триметил-4-диметилф6сфоипиперидола-4 в питательную среду в 1,5 разаувеличивает образование пектиназы-важного фермента, ши-JQ роко используемого в производстве соков, виноградных и плодово годных вин, в кожевенной и меховой промышленности , а также в сельском хоз йстве как добавка в корма и комбикорма. Формула изобретени  Способ получени  пектиназы, предусматривающий культивирование продуци- 40 рующих ее микроорганизмов рода Asper1 ,2, 5-триметил-4-диметилфосфонпиперидол-4 в дозах 0,0005 мг и О ,001 мг/л, По истечении трех суток в фильтрате культуральной жидкости определ ют .активность пектиназы Си пектатным методом.0.001 As follows from the results of the ICT (this research institute, the introduction of a small amount (0.0005 mg) of 1, 2, 5-trimethyl-4-dimethyl-6-phenopiperidol-4 into the nutrient medium by 1.5 increases the formation of pectinase, an important enzyme, JQ is used in the manufacture of juices, grape and fruit wines, in the leather and fur industry, as well as in agriculture as an additive in feed and animal feed. Formula of the invention The method for producing pectinase, which involves the cultivation of the genus Asper1, 2 , 5-trimethyl-4-dimethylf osfopiperidol-4 in doses of 0.0005 mg and O, 001 mg / l. After three days in the filtrate of the culture liquid, the activity of pectinase is determined by the Pectate method. Результаты сиспытаний представлены в табл. 3.The results of tests are presented in Table. 3 ТаблицаЗTable3 Активность пектолитическа , ед/100 млPectolytic activity, u / 100 ml 1780 2740 2270 gillus на питательной среде, содержашей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением фермента отличающийс   тем, что, с целью интенсификации процесса образовани  пектина-. зы и повышени  ее активности, перед культивированием в питательную среду ввод т 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропиранол-4 ИЛИ.1, 2, 5-триметил-4-диметилфосфонпиперидол-4 в количестве 0,0005 мг/% от объема питательной среды. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1;Микробы. - продуценты биологически активных веществ , Алма-Ата, 1971, с. 123.1780 2740 2270 gillus in a nutrient medium containing sources of carbon, nitrogen and mineral salts, followed by release of an enzyme characterized in that, in order to intensify the process of pectin formation-. To increase its activity, 2,2-dimethyl-4-phosphonetrahydropyranol-4 OR.1.1, 2, 5-trimethyl-4-dimethylphosphonopiperidol-4 in the amount of 0.0005 mg /% of the nutrient volume is introduced into the nutrient medium before cultivation. environment. Sources of information taken into account in the examination 1; Microbes. - Producers of biologically active substances, Alma-Ata, 1971, p. 123.