Claims (5)
;. Дл получени комплекса с преобладанием экзопэлигалактуроназы из продуктов ферментативного гидролиза пектинсодержашего сырь используют попигалактуроновые К.ЯСЛОТЫ, :чтом возврат их и гфодуцента 1Х.уществп ют через 72-120 час от начала культивировани . Целесообразно тькже продукт ферментативного гидролиза пектинсодержащего сырь вводить в среду в количестве 1О-40%. Предлагаемый способ осуществл ют следующим образом. Культивируют микроорганизм-продуцент периодическим способом-, определ биологические и физико-химические параметры в процессе выращивани ; определ ют стадии развити культуры, специфические дл образовани необходимого ферментативного комплекса , например: 1 - дл соковой промышленности; Л - дл винодельческой промышленности Ш - дл фармацевтической гфомышленности; IV дл химической промышленности и сельского хоз йства. В комплексе I определ ющими ферментами вл ютс эндополигалактуроназы, во П - кроме эндополигалактуроназ присутствуют пектинэстеразы, в Ш - отсутствуют протеазы при наличии эндополигалактуроназ И пектинэстераз, в IV - определ ющими вл ютс экзополигалактуроназы, Кажда стади развити культуры харак теризуетс своими возрастными морфологофизиологическими особенност ми. При дости жении необходимой стадии развити культуры , включают проток, состо щий из специфической питательной среды, характерной только дл данного конкретного состо ни культуры. Скорость протока измен ют от 1/3 до 1/25 полезного об-ьема в час. Дл получени необходимого комплекса пектолитических ферменгов проток среды включают на стадии активного биосинтеза заданного комплекса ферментов. , Так .дл получени пектолитического комплекса ферментов с преобладанием эндо полигалактуроназы проток среды включают через 9-24 час от начала культивировани продуцента, дл повышени содержани пектинэстеразы - через 36-64 час, экзополигапактуроназы через 72-120 час, синХрОННО с притоком осуществл ют отбор ГЛУ битшой культуры и возврат части биомассы продуцента вместе с продуктами гидролиза пектинсодержащего сырь , специфичными дл получени заданного комплекса ферменТак дл получени пектолитического ком плекса ферментов с преобладанием эндопо- лигалактуроназь5 нар ду с продуцентом в состив протока ввод т олигосахариды со ст ) .-1ИрОВв 1:1Я О-... ,(ЛЯ :й;гИ-1:: ПИЯ содержани пекП-иг пераз : r:i:o.ii-.ivi;i; олигосахаридь со г-теиенью глртокси.пирир,,ни 37-95%, дл полумени комплексна г преобладанием экзополигалактурона.чы. используют полигалактуроновые кислоть. При этом продукты ферментативного гидролизе пектинсодержащего сырь ввод т в срелу в количестве 10-40%. Пример 1, В ферментер загружают питательную среду следующего состава, в %: Экстракт свекловичного жома89,15 Выт жка из солодовых ростков 10,0 ( NH ISO,.0,70 КН.,РО Mg-SO -TH O0,05. Стерилизуют и засевают активированными кониди ми AspergifEus footidus . на 21; часу развити культуры включают проток в количестве 1/3 полезного объема в час, в состав протока вход т следующие компоненты, в %: ( NHl SO Выт жка из солодовых ростков 1О.О Прогидролизованный экстра т свекловичного жома до олигосахаридов со степенью ме токсилировани 5-37%89.15. Одновременно с включением протока синронно отбирают глубинную культуру, фильт.уют , биомассу сушат и количественно включают в состав протока, а из культуральной Ж адкости выдел ют ферментный препарат любым L3 известных способов. Ферментативные активности глубинной культуры следующие,. ПГС/В (эндополигалактуроназна акт.)3-4 ПГС/А (эндополигалактурочазна акт/),2 ПЭ {пектинэстеразна акт.)0,0 ПС (протеолитическа акт.) ЗОО-.50О Пример 2. Культивирование roati-ius ... осушествл ют аналогично способу, описанному в примере 1, однако про ток включают на 6 4 часу развити культуры в количестве 1/10 полезного объема в час, содержащий экстракт свекловичного жома, Прогидролизованный до олигос:ахаридов со степенью метоксилировани . Далее как в примере № 1. Ферментативные активности глубинной культуры следующие, ед/мл: ПГС/В1,5-2,5 ПГС/Л3-5,0 ИЭ0,7-1.6 ПС40О ек) . П р и мер 3. Периодическое и непрерывное культивирование осуществл ют ан способу, описанному в примере 2, включа в проток лакто,зу в количестве 0,5 Получаемые при этом ферментативные акти ности глубинной культуры следующие, ед/м ПГС/В3-5,0 ПГС/В3-5,0 ПЭ0,7-1-6 ПС0,0 Пример 4. Культивирование перио дическое до включени протока и непрерывн после включени протока осуществл ют ана логично способу, описанному в примере 1 той только разницей, что проток включают на 11О часу развити культуры со скоростью 1/15 полезного объема ферментера в час и в состав протока включают про гид ро лизованный до полигалактуроновых кислот жом. Получаемые при этом ферментативные активности глубинной культуры следующие, ед/мл: ПГС/В5-7 ПГС/А18-22 ПЭ0,8-1,2 Таким образом, предлагаемый способ {позвол ет эффективно решить вопрос получе ни ферментов с заданным комплексом в услови х непрерывного культивирювани , удовлетвор ет потребности различных отрас :Лей народного хоз йства (винодельческой, соковой, консервной, фармацевтической про мышленности, сельского хоз йства) Е специализированных высокоэффективных пектолитических ферментных препаратах. Формула изобретени i. Способ получени ферментов, предусматривающий культивирование продуцентов, например Aspergi.Hus j oetidu, на питательной среде, содержащей источники углерода , азота и минеральные соли, отделение клеток микг чь . ; сггади) хультиви 1(члани - г:}-; ч1 - - тбОПОМ КуЛЬТУраЛЬНОЙ .4(Ц;1.)Г l-И I. Bl.I,lt.nrHrie M из нее ферментов, о г л и т кл щ и и , тем, что, с целью получени пекто.читических фермрртоп с заданным KoMuaeKcc N и стабилизации процесса на стадии актив о) биосинтеза, культивирование продуцента провод т при протоке среды, а возврат продуценте осуществл ют на стадию максимального биосинтеза ферментов вместе с продуктами ферментативного гидролиза пектинсодержашего . сырь , характерными дл данной стадии биосинтеза, ;. To obtain a complex with a predominance of exopeligalacturonase from the products of enzymatic hydrolysis of pectin-containing raw materials, popigalacturonic K. LESLOTES are used: that their return and hypersensus 1X will exist after 72-120 hours from the start of cultivation. It is advisable that the product of enzymatic hydrolysis of pectin-containing raw material be introduced into the medium in an amount of 10-40%. The proposed method is carried out as follows. A microorganism-producer is cultivated in a periodic manner; biological and physico-chemical parameters are determined during the growth process; The stages of culture development are determined that are specific for the formation of the necessary enzyme complex, for example: 1 for the juice industry; L - for the wine industry; W - for the pharmaceutical industry; IV for the chemical industry and agriculture. In complex I, the determining enzymes are endopolygalacturonases, in P - except for endopolygalacturons, there are pectin esterases; When the required stage of culture development is achieved, a duct consisting of a specific nutrient medium, characteristic only for this particular culture condition, is included. The flow rate varies from 1/3 to 1/25 usable volume per hour. In order to obtain the required complex of pectolytic enzymes, the channel of the medium is included at the stage of active biosynthesis of a given complex of enzymes. So, to obtain a pectolytic complex of enzymes with a predominance of endo polygalacturonase, the duct of the medium includes within 9-24 hours from the start of cultivation of the producer, for increasing the content of pectinesterase - after 36-64 hours, exopolygapacturonase after 72-120 hours, synChRONO with influx is carried out culture and the return of part of the producer biomass together with the products of the hydrolysis of the pectin-containing raw material, specific for the production of a given complex of enzymes Tac to obtain a pectolytic complex of enzymes with In addition to the producer, oligosaccharides are introduced from st) along with the endopolygalacturonase5. -1PHIv 1: 1I O -..., (LA: st; rI-1 :: PIR peP-Igraz: r: i: o.ii-.ivi; i; oligosaccharides with r-theyenum glrtoksi.pyrr, nor 37-95%, for polyfluorescent complex predominance of exopolygalacturon.the polygalacturonic acids are used in. In this case, the products of enzymatic hydrolysis of pectin-containing raw material are introduced into 10-40%. Example 1, The fermenter is loaded with nutrient medium of the following composition, in%: Extract of beet pulp89,15 Extract from solo ovyh germs 10,0 (NH ISO, .0,70 KH., PO Mg-SO -TH O0,05. Sterilized and seeded with activated AspergifEus footidus conidy. by 21; Hours of culture include duct in the amount of 1/3 of the useful volume per hour, the following components are included in the duct, in%: (NHl SO Extract from malt sprouts OO. Prohydrolyzed extract of beet pulp to oligosaccharides with a degree of methoxylation of 5- 37% 89.15. Simultaneously with the inclusion of the duct, a deep-seated culture is taken away synchronously, filtered, the biomass is dried and quantitatively included in the duct composition, and the enzyme preparation is separated from the culture fluid by any L3 known methods. tours as follows. PGS / B (endopolygalacturonase act.) 3-4 PGS / A (endopolygalactic act /), 2 PE {pectin esterase act.) 0.0 PS (proteolytic act.) ZOO-.50 About Example 2. Cultivation of roati- ius ... is carried out similarly to the method described in Example 1, however, the flow includes at 1/4 hours the culture develops in an amount of 1/10 of the useful volume per hour containing the extract of beet pulp Prohydrolized to oligos: acharides with a degree of methoxylation. Further, as in example No. 1. The enzymatic activities of the deep culture are the following, u / ml: PGS / B1.5-2.5 PGS / L3-5.0 IE0.7-1.6 PS40O ec). Example 3. Periodic and continuous cultivation is carried out in the manner described in Example 2, including into the lactate duct, in an amount of 0.5. The resulting enzymatic activities of the submerged culture are as follows, units / m PGS / B3-5, 0 PGS / B3-5.0 PE0.7-1-6 PS0.0 Example 4. Cultivation is periodic until the duct is turned on and continuously after the duct is turned on, the procedure described in example 1 is performed by the only difference that the duct is turned on 11On an hour of culture development at a rate of 1/15 of the useful volume of the fermenter per hour and into the composition of eye include pro po ripple guide to polygalacturonic acid pulp. The resulting enzymatic activities of the deep culture are the following, u / ml: PGS / B5-7 PGS / A18-22 PE0.8-1.2 Thus, the proposed method {allows to effectively solve the problem of obtaining enzymes with a given complex under the conditions continuous cultivation, it satisfies the needs of various sectors: Leyushchestvennogo khozya (wine-making, juice, canning, pharmaceutical industry, agriculture) E specialized highly effective pectolytic enzyme preparations. Claims i. The method of producing enzymes, involving the cultivation of producers, for example Aspergi.Hus j oetidu, on a nutrient medium containing sources of carbon, nitrogen and mineral salts, separation of cells of microbes. ; sggadi) hultivi 1 (chlani - g:} -; p1 - - tbOPOM CULTURAL .4 (C; 1.) D l-I I. Bl.I, lt.nrHrie M from her enzymes, ohl and t cl and, by the fact that, in order to obtain a pecto.chicic farm with a given KoMuaeKcc N and to stabilize the process at the stage of the active o pectin containing hydrolysis. raw materials characteristic of this stage of biosynthesis,
2.Способ по п. 1, о т п и ч а ю щ и йс тем, что, с целью возможности получени пектолитических ферментов с преобладанием эндополигалактуроназы, из продуктов ферментативного гидролиза пектинсодержашего сырь используют )сахариды со степенью метоксилировани 5-37%, при этом возврат указанного вещества и продуцента осупествл ют через 9-24 час от начала культивировани . 2. The method according to claim 1, which is based on the fact that, from the products of enzymatic hydrolysis of pectin containing raw materials, sugars with a degree of methoxylation of 5-37% are used, with This return of the indicated substance and producer is clear after 9-24 hours from the start of the culture.
3.Способ по п. 1, о т л ь ч -а ю щ и Йс тем, что, с целью повышени содержани пектинзстеразы в комплексе, из продуктов ферментативного гидролиза пектинсодеожащего сырь используют олигосахариды со степенью метоксилировани 37-95%, при этом возврат указанного вещества и продуцента осутаествл ют через 36-64 час от начала культивировани . 3. The method according to claim 1, that is, in order to increase the content of pectinsterase in the complex, from products of enzymatic hydrolysis of the pectin-containing raw material, oligosaccharides with a degree of methoxylation of 37-95% are used, while returning this substance and producer are cured 36-64 hours after the start of cultivation.
4.Способ по п. 1, о т л и ч (j ю щ и йс тем, что, с целью возможности получени пектолитических ферментов с преобладанием экзополигалактуроназы, из продуктов ферментативного гидролиза пектинсодержащего сырь используют полигалактуроно1вые кислоты, при этом возврат их и проду цента осуществл ют через 72-120 час от 1начала культивировани . I 4. The method according to claim 1, tl and h (j y i and i with the fact that, in order to obtain pectolytic enzymes with a predominance of exopolygalacturonase, polygalacturonic acids are used from products of enzymatic hydrolysis of pectin-containing raw material, while returning them and producing carried out after 72-120 hours from the first cultivation.
5. Способ по пп. 1-4, отличающийс тем, что продукт ферментативjHoro гидролиза пектинсодержащего сырь ввод т в среду в количестве 10-4О%.5. The method according to paragraphs. 1-4, characterized in that the enzymatic product of the hydrolysis of pectin-containing raw material is introduced into the medium in an amount of 10-4%.