SU1571047A1 - Способ получени водорастворимых олигосахаридов - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к получению низкомолекул рных олигосахаридов со степенью полимеризации 4-8, которые могут быть использованы самосто тельно или в качестве промежуточных продуктов при получении разнообразных биологически активных веществ под действием ферментов типа хитиназ, N-ацетил-Д-глюкозаминидаз, трансгликозилаз и других подобных ферментов. Изобретение позвол ет упростить процесс за счет исключени  из процесса ультразвукового воздействи  при сохранении высокого выхода водорастворимых олигосахаридов хитина за счет того, что обработку хитина провод т 65%-ным раствором серной кислоты в количестве 2,7-10 мл на 1 г хитина при 40-50°С в течение 20-120 мин с последующей обработкой реакционной смеси ацетоном при объемном соотношении ацетона и раствора серной кислоты (5-7):1. 1 табл., 3 ил.

Description

Изобретение относитс  к получению полисахаридов из хитина, а именно низкомолекул рных олигосахаридов со степенью полимеризации 4-8, которые могут быть использованы самосто тельно или в качестве промежуточных продуктов при получении разнообразных биологически активных веществ под действием ферментов типа хитиназ , лизоцимов, N-ацетил-Д-глюкозами- нидаз, трансгликозилаз и других подобных ферментов.

Цель изобретени  - упрощение процесса .

Изобретение иллюстрируют примеры.

Пример 1. 2г хитина крабов смешивают с 20 мл 65%-ного раствора

H2S04 в воде, выдерживают 20 мин при 50 С, к образовавшейс  однородной массе добавл ют 100 мл ацетона, осадок слипаетс  в комок, жидкость отдел ют декантацией, осадок раствор ют в 100 мл воды, нерастворившуюс  часть отдел ют центрифугированием, супернатант пропускают через колонку (2,1 х 18 см) с анионитом IRA-400 в ОН -форме, колонку промывают водой. Элюат лиофилизируют, получают водорастворимые хитиновые олигосахариды, выход 1,1 г, т.е. 55%. Препарат служит хорошим донором в реакци х трансгли- козилировани , катализируемых дизо- цимом (фиг. 1).

На фиг. 1 показаны хроматограммы реакционных смесей, полученных дейсл

-sj

Ј

sj

ствием куриного лизоцима на смесь растворимого хитодекстрина и ПНФГА. Пик I принадлежит лизоциму, пик V - ПНФГА, пики II, III и IV - продуктам трансгликозилировани . Кривые 1-5 получены соответственно при увеличивающемс  времени реакции с лизоци- мом.

Пример2. 3,74 г хитина кре- веток смешивают с 10 мл 65%-ной выдерживают 2 ч при 40 С, добавл ют 70 мл ацетона. Осадок отдел ют декантированием жидкости и обрабатывают 80 мл воды при перемешивании. Нераст- ворившуюс  часть отдел ют центрифугированием , высушивают (масса 1S5 г, т.е. 40%)s а раствор пропускают через колонку с анионитом IRA-400, высушивают лиофипьно и получают 2 г т„е. 53% растворимого хитодекстрина„ оли- гоеахаридный состав которого приведен в таблице и на фиг. 2 и 3„

На фиг. 2 показана высокоэффективна  жидкостна  хроматографи  (ВЭЖХ) смеси растворимых хитодекстринов, полученных в примере 2, Сорбент: сило- сорб-К о Концентраци  хктодекстркнов ,10 мг/мл, нанесено 0901 мл. Пунктир; БЭЖХ N-ацетил-Д-глюкозамика в тех же услови х, концентраци  10 мг/мл, нанесено 0 „001 мл. Римскими цифрами обозначены места выхода олигосахари- дов с соответствующей степенью полимеризации; на фиг, 3 - гель-хроматографи  растворимых хитодекстринов, полученных в примере 2, Гель: тоеперл Н-40 (файн)«, колонка 1 х 39 см. Пределы молекул рных масс раздел емых веществ дл  данного гел  от 100 до 7000, Кулевой объем колонки П мл, объемы алюированн  глюкозы, мальтозы а хитодекстринов 35, 2$ и 15 мл соответственно , Средн   степень полимеризации хитодекстринов равна 7-8, Обозначени ; абсцисса- объем элюиро- вани , ордината - оптическа  плотность дл  УФ -поглощени  при 190 нм (сплошна  лини ) и дл  колориметрических измерений восстанавливающей способности по Шомоди (пунктир),

Данные ВЭЖХ о составе олигосаха- ридных фракций в растворимом хитодек стрине

5 0

5

0

5

0

50

5

Анализ показывает, что препарат, полученный в примере 2, содержит мо- но- и дисахарида в сумме меньше 1%, ч тетрасахарида около 10%, трисахарида примерно половину от тетрасахарида. Данные гель-хроматографии (фиг. 3) вместе с данными ВЭЖХ (фиг, 2 и таблица ) свидетельствуют о том, что полученный препарат представл ет смесь водорастворимых хитодекстринов со степенью полимеризации больше четырех .

Пример 3. Опыт провод т как в примере 1, температура .40°С, врем  2 ч, расход кислоты 3 мл на 1 г хитина , расход ацетона 6 объемов на 1 объем кислоты. Выход продукта 30%.

Предлагаемый способ  вл етс  более простым, чем известный, за счет исключени  из процесса воздействи  ультразвука и использовани  простых приемов дл  выделени  целевого продукта при сохранении его качества и выхода.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  водорастворимых олигосахаридов, включающий обработку хитина концентрированным раствором минеральной кислоты при нагревании и выделение целевого продукта, о т- личающийс  тем, что, с целью упрощени  процесса, обработку провод т 65%-ным раствором серной кислоты в количестве 2,7-10 мл на 1 г хитина при 40-50°С в течение 20- 120 мин с последующей обработкой реакционной смеси ацетоном при объемном соотношении ацетона и раствора серкой кислоты 5-7:1,

   7

   24 48 72 96

   Фиг1

   мл

   ГО

   Составитель Т.Мартинска  Редактор Н.Киштулинец Техред М.Ходанич Корректор О.Ципле ,

   Заказ 1486

   Тираж 436

   ВНИИПИ Государственного комитета по изобретени м и открыти м при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35% Раушска  наб., д. 4/5

   Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгород, ул, Гагарина, 101

   20

   30

   Фиг.З

   Подписное