SU1440919A1 - Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 - Google Patents
Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 Download PDFInfo
- Publication number
- SU1440919A1 SU1440919A1 SU874215163A SU4215163A SU1440919A1 SU 1440919 A1 SU1440919 A1 SU 1440919A1 SU 874215163 A SU874215163 A SU 874215163A SU 4215163 A SU4215163 A SU 4215163A SU 1440919 A1 SU1440919 A1 SU 1440919A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- producer
- bacteria
- kurthia zopfii
- buffer
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
4 4i
О СО
СО
Изобретение относитс к микробиологии , в частности к получению штаммов - продуцентов рестриктаз.
Цель изобретени - вы вление штам- Maj упрощение и удешевление процесса получени его рестриктазы, обладающей способностью узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов GATC,
Изобретение предусматривает испольН зование кепатогенного штамма Kurthia Zopfii 9 ВКЛМ В-3668 - продуцента рестриктазы , культивирование провод т в питательной среде LB при в услови х аэрации, клетки разрушают ультразвуком , затем провод т хроматогра- фическую очистку фермента.
Используемый штамм Kurthia zopfii 9 выделен в результате поиска штаммов - продуцентов рестриктаз среди микроорганизмов обитающих в Аральском море, и хранитс в ВКПМ ВНИИ генетики под регистрационным номером В-3668.
Штамм обладает следующими морфоло гическими, культуральными и физиологическими свойствами,
В молодых культурах (18-24 ч) - правильные неразветвленные палочки с закругленными концами, встречаютс в цепочках, которые часто параллельны , диаметр палочек около 0,8 мкм, ртинa часто варьирует в зависимости от стадии роста, но обычно 2-8 мкм. Старые культуры (3-7 дней)состо т из кокковидных клеток, образованных при фрагментации палочек; палочки движут с при помощи перитрихальных жгутиков . Эндоспор не образуют, Грамполо- жительные, некислотоустойчивые хемо- органотрофы.Метаболизм дыхательный, не бродильный. Каталазоположительные оксидазоотрицательные . Не восстанавливают нитраты. Не образуют кислоту из углеводов или многоатомньк спиртов , подщелачивают среду.- Строгие аэробы. Температурный оптимум 25- , пределы . Хороший рост в присутствии 4-6% NaCl. Полученна рестриктаза характеризуетс следующими свойствами: узнает и специфически расщепл ет последовательность нуклеотидов GATC; оптимальное значение рН дл действи рестриктазы 7,5-9,0; оптимальна температура действи дл активности рестриктазы требуютс ионы Mg , оптимальна концентраци 5-15 мМ.
Пример. Получение рестриктазы Kzo 9 1 из Kurthia zopfii 9. Клетки .Kurthia zopfii 9, хран щиес в 50%-ном глицерине в L-бульоне (ЬВ) состава, г: триптон 10, дрожжевой экстракт 3, NaCl 10, вода до 1 л при 20 С, высевают на чашку с L-агаром, После 2 сут инкубировани при 30°С клетки собирают петлей и внос т в 100 мл LB и выращивают до плотности 1,5 при .
Затем культуру внос т в 2 л LB и вьфашлвают до плотности 2,5 при После охлаждени клетки собирают центрифугированием. ВЬЕХОД биомассы 2 г сырого веса с i л среды.
0
5
30
35
40
45
50
55
4 г клеток суспендируют в 20 мл 0,02 М буфера , рН 7,5, содержащего 10 MyS-меркаптоэтанол и 0,1%-ный тритон Х-100 и разрушают на ультразвуковом дизинтеграторе. Обломки клеток удал ют центрифугированием (18000 об/мин, 30 мин при ) и надосадочную жидкость нанос т на 30 мл фосфоцеллюлозы Р-11 (Whatman), уравновешенной буфером А (0,02 М К-фосфат, рН 7,5, 0,001 М -меркаптоэтанол, ЭДТА) 5 и затем колонку промывают буфером А до исчезновени УФ-по- глощающего материала в элюате. Адсорбированный материал элюиру;от раствором 1 М NaCl -в буфере А. 60 мл полученного смыва белков с колонки ди- ализуют ночь против 2 л буфера А и затем нанос т на 10 мл ДЕАЕ - целлюлозы (ДЕ-52, VJhatman, Англи ), уравновешенной буфером А, и элюируют 100 мл градиент 0-1,0 М Nad в буфере А. Объем каждой фракции 5 мл. Аликвоты из каждой фракции (1 мкл) инкубируют 1 ч при с 1 мкл ДНК .фаза Л и анализируют в геле агарозы. .Фракции, расщепл ющие ДНК фага (8- П), объедин ют, диализуют 3 ч против 2 л буфера А и нанос т на 4. мл фосфоцеллюлозы Р-1,1 (Whatman, Англи ) и злюируют 40 мл градиент 0-1,0 в буфере А. Объем каждой фракции 2 мл. Фракции, содержащие Kzo 9 1, определ ют так же, как при хроматографии на даАЕ-целлкшозе. Фракции 12-13, со- держагдае Kzo9 1, объедин ют и диализуют против буфера А, содержащего :0,1 М NaCl и 50%-ный глицерин. Полученный препарат фермента (I мл) имеет удельную активность 0000ед/мл..
3иД
За единицу активности принимают минимальное количество фермента, необходимое дл полного расщеплени 1 мкг ДНК фага Л в течение 1 ч при .
Ферментный препарат хран т при . Из I г биомассы получают 2500 единиц рестриктазы Kzo 9 1.
Определение последовательности нуклеотидов , узнаваемой рестриктазой Kzo 9 1.
Дп определени последовательности нуклеотрщов, узнаваемой рестриктазой Kio 9 1, провод т гидролиз ДНК фага д рестритстазаки Kzo 9 I, Sau 3AI по отдельности, а также .совместный гидролиз этими рестриктазами. Наблюдаема картина полного совпадени фрагментов, полученных при гидролизе ДНК рестриктазами Kzo 9 1 и Sau ЗА1 порознь и совместно, указывает на то, что рестриктаза Kzo 9 1 вл етс изошизомером рестриктазы Sau 3AI,узнает и расщепл ет последовательность нуклеотидов GATC.
Рестр1Пчтаза из Kurthia- zopfii. 9 названа Kzo 9 согласно общеприн той номенклатуре.
Claims (1)
- Формула изобретениШтамм бактерий Kurthia zopfii 9 BKTIM В-3668 - продуцент рестрикциок- ной эндонуклеазы Kzo 9 1 ,
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874215163A SU1440919A1 (ru) | 1987-03-23 | 1987-03-23 | Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874215163A SU1440919A1 (ru) | 1987-03-23 | 1987-03-23 | Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1440919A1 true SU1440919A1 (ru) | 1988-11-30 |
Family
ID=21292795
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU874215163A SU1440919A1 (ru) | 1987-03-23 | 1987-03-23 | Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1440919A1 (ru) |
-
1987
- 1987-03-23 SU SU874215163A patent/SU1440919A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Gelinas К.Е., Myers P.А., ВоЪerts R.I. Tvo seguence. - specific endonucleases from Moraxella bovis.I. Mol. Bid.- 1977, v.l44, 169-179. Sussenbach I.S.Monfort C.M. A restriction endonuclease from Sta- phylococcus auerus. Kucl. Acids Res, 1976, ,v. 3, p. 3193-3202. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Shaikh et al. | Production of β-galactosidase from thermophilic fungus Rhizomucor sp | |
JPS6018397B2 (ja) | D−グルコ−スをd−フルクト−スに変える方法 | |
SU1440919A1 (ru) | Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 | |
US4420562A (en) | Method for producing creatinase | |
Alessandro et al. | Partial purification and characterization of a yeast extracellular acid protease | |
US6001635A (en) | Sphingobacterium multivorum, mOL12-4s, produces deaminoneuraminidase and method for producing the same | |
US4010072A (en) | Process for preparing L-tartaric acid | |
Umar et al. | Production of Fibrinolytic Enzyme by Soil Actinobacteria: Production of Fibrinolytic Enzyme by Soil Actinobacteria | |
SU1659480A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1 | |
JPS6362195B2 (ru) | ||
SU1532583A1 (ru) | Штамм бактерий PaRacoccUS DеNIтRIFIсаNS-продуцент эндонуклеазы рестрикции Р @ 121 | |
JPH0928375A (ja) | トレハロースホスホリラーゼおよびその調製法 | |
RU2077577C1 (ru) | Штамм бактерии delcya marina - продуцент щелочной фосфатазы и способ получения щелочной фосфатазы | |
JPS6243671B2 (ru) | ||
SU1645300A1 (ru) | Штамм SтRертомYсеS FRaDIae - продуцент рестриктазы SFR I | |
SU1631080A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS меGатеRIUм - продуцент рестриктазы Вме 361 I | |
JPH0669381B2 (ja) | カルニチンの製造法 | |
SU1532584A1 (ru) | Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм IммотUм - продуцент эндонуклеазы рестрикции В @ 1 | |
SU1650697A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS LIснеNI FоRмIS - продуцент рестриктазы В @ 13I | |
SU1645293A1 (ru) | Штамм бактерий SтRертососсUS FaecaLIS - продуцент рестриктазы SFa N @ | |
SU1689400A1 (ru) | Штамм бактерий FLаVовастеRIUм ваLUSтINUм - продуцент рестриктазы FвL 1 | |
JPH08131182A (ja) | トレハロースの製造方法 | |
SU1620484A1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ ВАС1Ы,иЗ СЕКЕИ8 ПРОДУЦЕНТ РЕСТРИКТАЗЫ Все 831 2 | |
SU1659479A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS LIснеNIFоRмIS-продуцент рестриктазы В @ 49 I | |
JPH0458884A (ja) | 新規制限酵素 |