SU1346181A1

SU1346181A1 - Способ получени композиционного сорбента дл колоночной хроматографии

Info

Publication number: SU1346181A1
Application number: SU853969210A
Authority: SU
Inventors: Вячеслав Иванович Максимов
Original assignee: Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Биотехнологии
Priority date: 1985-10-01
Filing date: 1985-10-01
Publication date: 1987-10-23

Abstract

Изобретение относитс к способу получени композиционных сорбентов и позвол ет получать сорбенты, пригодные дл концентрировани и выделени биополимеров. Одну часть целлюлозы смешивают с 1 -10 ч. адсорбента или смеси адсорбентов (уголь, бентонит, каолин) и добавл ют 13-15 об. 65%-ной серной кислоты. Суспензию перемешивают при комнатной температуре 15- 30 мин, добавл ют воду со льдом в количестве , достаточном дл снижени температуры до 2-10&deg;С, и выдерживают на холоде 30 мин. Смесь отфильтровывают и получают сорбент. со 4 О5

Description

Изобретение относитс к способам получени композиционных сорбентов и может быть использовано в синтезе сорбентов дл хроматографии биополимеров.

Цель изобретени - обеспечение воз- можности использовани сорбента дл концентрировани и выделени биополимеров.

Пример 1. 5 г чистой медицинской ваты (целлюлоза) и 20 г бентонита (аскангель) перемешивают с 80 мл 65%-ной серной кислоты при 18°С 30 мин. К полученной суспен- зии добавл ют воду со льдом (300 г) и перемешивают 30 мин. После фильтровани получают сорбент с отношением бентонита и целлюлозы 4:1 (БЦ-41). Полученным сорбентом наполн ют колонку размером IX X 12 см. Скорость потока воды через, колонку 48 мл/ч cм.

Пример 2. Получают сорбент аналогично примеру 1, но в качестве адсорбента берут каолин, а обработку кислотой ведут 20 мин. Получают образец сорбента KU-41.

Пример 3. 3 г ваты перемешивают с 50 мл 65%-ной серной кислоты 15 мин при комнатной температуре, добавл ют 30 г угл и перемешивают еще 3 мин. Добавл ют смесь воды и льда (200 г), выдерживают 30 мин и фильтруют. Получают образец сорбента УЦ-101 (соотношение угл и целлюлозы 10:1).

Пример 4. 5 г ваты перемешивают с 50 мл 65%-ной серной кислоты 14 мин при 25°С, добавл ют 5 г угл и 30 г бентонита и пере- мешивают 3 мин. Добавл ют 150 г смеси воды со льдом, перемешивают и оставл ют в холодильнике на 30 мин. Смесь фильтруют. Получают образец сорбента УБЦ-161.

Пример 5. Раствор лизоцима в воде концентрацией 1 мг/мл пропускают через ко- лонку (0,35- 10 см) с УЦ-101 (сорбент по примеру 3), уравновешенную водой. На колонке сорбируетс 4 мг белка. Колонку отмывают водой, лизоцим вымывают 0,1 М СНзСООН, выход белка регистрируют по пог- лош.ению при 280 нм с помощью Увикор- да 11. Сорбент, полученный согласно известному способу устойчив лишь при рН больше 8, что не позвол ет его использовать дл выделени лизоцима.

Пример 6. Раствор рибофлавина (витамина В.г) концентрацией 0,1 г/л в 0,1 М НС1 пропускают через колонку (1,0- 10 см) с

УБЦ-161 (сорбент по примеру 4) до проскока регистрируемого по поглощению при 480 нм. Колонку промывают водой. Затем вещество элюируют 0,1 М NaOH, получают раствор, концентраци которого в 5 раз выше концентрации нанесенного раствора. Из элю- ента рибофлавин выдел ют дЪбавлением кислоты , после чего он выпадает в виде кристаллов . В данном примере дл сорбции используют раствор сильной кислоты, что невозможно при известном способе.

Пример 7. Раствор лактозы концентрацией 1 мг/мл в 0,2 М НС1 пропускают через колонку (0,35- 10см) сУЦ-101 (сорбент по примеру 3), уравновешенную 0,2 М НС. На колонке сорбируетс 25 мг лактозы. Колонку промывают водой, а углевод элюируют с сорбента 0,2 М СНзСООН. В данном примере адсорбцию и элюирование вешества провод т в растворах кислоты.

Пример 8. Колонку (1,3- 6,5 см), содержащую сорбент по примеру 4, уравновешивают 0,05 М ацетатным буфером рН 5,0. Через колонку пропускают фермент инвертазу в том же буфере. Происходит иммобилизаци инвертаза на носителе. Через колонку с иммобилизованным ферментом пропускают 7%-ный раствор сахарозы в 0,05 М ацетатном буфере при рН 5,0 и 40°С. Врем контакта субстрата с ферментом (врем выхода из колонки) составл ет 20 мин. Концентраци восстанавливающих Сахаров после выхода из колонки превышает 3%, т. е. предлагаемый способ позвол ет получать сорбенты , пригодные дл иммобилизации биополимеров с сохранением их специфической активности .

Claims

Формула изобретени

Способ получени композиционного сорбента дл колоночной хроматографии, включающий смешивание минерального адсорбента с-раствором полисахаридного св зующего в кислоте с последующей коагул цией композиции, отличающийс тем, что, с целью обеспечени возможности использовани сорбента дл выделени биополимеров , смешивание компонентов провод т в 65%-ной серной кислоте, в качестве полисахарида используют целлюлозу, а коагул цию осуществл ют добавлением воды со льдом.