SU1337411A1 - Способ определени чувствительности микроорганизмов к антибиотику - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к области медицинской микробиологии и касаетс  способа определени  чувствительности микроорганизмов к антибиотику. Цель изобретени  - повышение чувствительности способа и его ускорение. Сущность способа сводитс  к тому,что во флуоресцентн то кювету внос т суспензию исследуемого микроорганизма, затем в кювету внос т флуоресцентный краситель 3,З-дипропил-2,2-тиодикарбо- цианин йодида и регистрируют флуоресценцию . Затем в суспензию ввод т антибиотик в исследуемой концентрации, смесь инкубируют при температуре роста микроорганизмов и измер ют уровень флуоресценции. Определ ют разницу в уровн х флуоресценции до и после внесени  антибиотика, по которой определ ют чувствительность микроорганизмов к антибиотику. Врем  исследовани  10-15 мин, чувствительность - концентраци  антибиотика 10 -10 М, 1 табл. e (Л со ОО Ч 4

Description

И юОретенне относитс  к :е;;и; И : -- кой микробиологии J ;-i ,сл I.U:TH i собам определении чувствитпл ьнсс -/-и микроорганизмов к мембр пнотг С-ли - -i ли-- тибиотикам,Цель изобретение; - rLi)ibii ::fHne чуист вительности способа и РГО vciKoi ). Сущность cnocc6i;i своди ; : к I ONi y., что во флуоресцентнуго к. пнсту внос : 10 клеток тecт; pye sc Л ;1 :iiTaN M;. микроорганизмон   фосфатноь- б уферс- рН 6,5-7,5, содержапсн 100-150 х,м NaC 1 , 1-5 мМ КС 1 и и (хчучае иеогхо1:,и- мости дл  иормальног О (Ч  кл.конирова- ни  данного штамма л.рут ие ИС Н Ы (Са , Мд и т,п в коннеьгграпииу , не лре- вь 1лаюи;их 1 мМ) К1 не ге ногщоржипг.ю : температуру, onTHMajit nyra роста культуры., Затем л кк;нету Biiori.HT lO -iO t (в зависимости от увстВИТеЛЬНОСТГГ флуОрИМе Г рс ) (ЬлгуОреСП, Л Гного красител  3 , З-дипролил - 2 . 2-тис:- дикарбоцианип иодид idis С J..n i: регистрируют флуоресл1е1{дию л.,- 650 и , 670 КМ 1ип-;:а вь г;зралн  красител  во-збу;кп. щел з ме на превышать 1 им) . Затем и .yci;en- зию ввод т антибиотик в И ;:следу ам( коице т;ра1ши, иредва.ритстилю не имеет ли он собстпепно ; ф.чуорс-сдс ции в данной области, и р(мл- : рмру11: : изменение уро чн  флуоресг епгис.-;,, .,-п аг тибиотик не повреждает мембрану исследуемого микроор Гг- г;изм, .,, изменений в уровне ф нуоресденлии не наблюдаетс  , если же N eM6paJ-ia по:вреж; :,ена 3 результате иоиофорного ил.-1 щего действи  антибиотика, измеиеьгие уровн  Флуорс ;лде;: : л;, CHJ;- заиное с изменение траН :;мС мС jani нч ; ) готенци -и;а клетки „

Трансмембранный 110те1Л11:;а..г   влмс-т -: зажнейшим показатс лем жиз лес х: с;;б ас /- ти клеток и резко измен етс  гри чо -- д ействии, нарушану.дем мембрапс. г :ик;з1 ;-- организмов,. Таким образом, :. и л. iluiyOpt-(Л),еЛГ).И1; С.уД.ЯТ о

чувствитчит 1 ности даниогс- ;пта. г-:а организма к исследу а 1тг б(С1 ик . Чре.дложенный спос об но но г с : опредс1 )еделени  вместе с: лодг;)тпвк( й зани-- I lafiT не более 10 О-Т Лили- ел, особенностью данного снссоба  вл етс  то, что в суспензик :-слет;ч, тести;.

е.МЫХ культур Г- .ИКрООрТ аНИЗМО : H3Mt.:iniiразницу уровней ф туорес.аемдра- краси е с. е ни   а н ти б и о ти BacMlus sub ri is 720 н фосфатном бу- г:.с )е 6,5. содс:ржл цем 150 NaCl :- .: мМ КС 1 , Оаределение провод т при , к кювету ввод т lO М V, 1 Д1тролил ;-нкабро 1,ианин йодида :: 5 -С, л 1ег -1стрнру;от флуоресденцию прм , j.jf 6 к) и .,(,, 670 нм Загс 5 н суслснзик рт о;:1 т антибиотик

: Г 1ли 1идигг S г Кпннентралии 2 И) М :i К ги с пирур) г изменение флуо- :)- .лгенили .

:| р и м е р / . : dnyopecnenTHym

Kiii;u:Ty инос  ; клеток культуры i с occocus в фосфа Г:к;м буфере р11 7.1. сол.(П ч 1)0 мМ NaC   5 мМ .(- , Определение нротнод т при 37(.

; в юовет;. вводит : О М diS C 1 pui л(.:грирукг г д1-1уоресие1итию при тех же .и.зинах но. л, и сгуслелзию ввод т аг ;1сиотик (лшитиалнн в кслл1елтрадии ; .Ми ре i и ст|)гр Ю т изменение уров

Г ) и м е j i 3 , (, К :ви  лрозедени  : сс ьек ис с. и: ;;ов;11П :.  согласно приме- ; У . , Б к;1 -14; Tic алт} биотика ввод т ; с --:инилил S ; ксацс лт:г)алии 1 : 1 О М и a(ciFHiaj )-: и: ме1кл{; е уровн  флуорес- :. с лл;1 ,

а 1 и м г р -, ( :ви  проведени  . 1:с аект (г. как в примере / , ) ап:и ГСП Пи(-:-;ч валипоминин : : с ми(Л1 :ралии . . : и наблюдают с а.; .лк. ;;ис viKjiru: ф 1уо;)е слендии ,

а К1мсил:тра::ии :а регистрируют yja .а;ел;ци - „ 15зм(Л1ение уров- ;{)i i :c;y(peciiCH) лг i :аб.:а-1даетс  , так ка;; ; , Влс, уст ойчн- а к

i зул с;агП| предс та)::-ЛИ;; в таблиде ,

 х ,

так и в п1кробиоло1 ичес лслпюсти, и в медицииско) п качестве у1шверсального спо одновременного определени  собности клеток микроорг ани чувствительности их к антиб

Формула

- 1337

биотика, при которой вы вл етс  эффект действи  последнего на заданное количество микроорганизмов - мишеней, Эффект действи  в заданном способе определ етс  по изменению трансмембранного потенциала, который выражаетс  в изменении уровн  флуоресденпии красител  dis-C. (5) Достоверным изменением считаетс  10%-ный сдвиг уров-iQ н  флуоресценции при добавлении антибиотика .

Применение данного способа позвол ет определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам в концентра- 5 биоти-ком, отличающи ции 10 М. В прототипе эффект действи  на клетки наблюдаетс  при концентра1щи антибиотика на 2 пор дка больше и в течение 240-360 мин. Получение результатов с помощью предлага емого способа достигаетс  в течение 10-15 мин„ Способ позвол ет осуществл ть вы вление антибиотиков мембрано- тропного действи . Он прост в осуществлении , тестирование одного антибиотика вместе с подготовкой заниобре

0

Способ определени  чувст ти микроорганизмов к антиби включающий инкубирование су микроорганизмов с красителе

тем, что, с целью повьш1ени  вительности способа и его у в качестве красител  исполь дипропил-2,2-тиодикарбоциан предварительно измер ют уро оресценции смеси суспензии м низмов с красителем, затем д раствор антибиотика, после и вани  повторно измер ют уро оресценции смеси и определ ю вительность микроорганизмов биотику по разности уровней ценции до и после внесени  а ка .

мает не более 10 мин, поддаетс  автоматизации и может быть широко использован как в лабораторных условиСравнительные данные.по определению

чувствительности микроорганизмов к

антибиотикам

МикроорганизмВы вленный эффект действи  антибиотика, М

(2 10 клеток)г

по предлагаемому способу по прототипу ,

Грамицидин SПолимиксин Грами -лщин S I Полимиксин

Bordatella bronchiseptica4 ,5-10- 7,2- 0 6-10 7 10

Escherichia coli 3-10 1,5-10 S-IO 0,8 10Micrococcus lysodeikticus 2-10-88 ,3-106,5-10Составитель Г.Смирнова Редактор М.ТовтинТехред М.ХоданичКорректор Н.Король

Заказ 4097/23. Тираж 499Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска  набо, Д.4/5

Производственно-полиграфическое предпри тие, г.Ужгород, ул.Проектна ,4

 х ,

так и в п1кробиоло1 ической промьш - лслпюсти, и в медицииско) практике в качестве у1шверсального способа дл  одновременного определени  жизнеспособности клеток микроорг анизмов и чувствительности их к антибиотикам,,

Формула

обретени 

биоти-ком, отличающи

Способ определени  чувствительности микроорганизмов к антибиотику, включающий инкубирование суспензии микроорганизмов с красителем и антий с  

тем, что, с целью повьш1ени  чувствительности способа и его ускорени , в качестве красител  используют 3,3- дипропил-2,2-тиодикарбоцианин йодида, предварительно измер ют уровень фпу- оресценции смеси суспензии микроорганизмов с красителем, затем добавл ют раствор антибиотика, после инкубировани  повторно измер ют уровень флуоресценции смеси и определ ют чувствительность микроорганизмов к антибиотику по разности уровней флуоресценции до и после внесени  антибиотика .

Claims (1)

1. Формула изобретения

   Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику, включающий инкубирование суспензии микроорганизмов с красителем и антибиотиком, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и его ускорения, в качестве красителя используют 3,3дипропил-2,2-тиодикарбоцианин йодида, предварительно измеряют уровень флуоресценции смеси суспензии микроорганизмов с красителем, затем добавляют раствор антибиотика, после инкубирования повторно измеряют уровень флуоресценции смеси и определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотику по разности уровней флуоресценции до и после внесения антибиотика .

   Сравнительные данные.по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

   Микроорганизм (2 10^к клеток)

   Выявленный эффект действия антибиотика, М по предлагаемому способу по прототипу

   Грамицидин S

   Полимиксин • Грамицидин S j Полимиксин

   Bordatella bronchiseptica 4,5 ·10'^έ 7,2-10^-8 6-10^-4 7 10^-6 Escherichia coli 3·10*^ύ 1,5-10^-8 5-10^-4 0,810^-t Micrococcus lysodeikticus 2·ICT® 8-10^-1 2,3 -10^-6 6,5 40^-4