SU1337411A1 - Method of determining sensitivity of microorganisms to antibiotic - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к области медицинской микробиологии и касаетс  способа определени  чувствительности микроорганизмов к антибиотику. Цель изобретени  - повышение чувствительности способа и его ускорение. Сущность способа сводитс  к тому,что во флуоресцентн то кювету внос т суспензию исследуемого микроорганизма, затем в кювету внос т флуоресцентный краситель 3,З-дипропил-2,2-тиодикарбо- цианин йодида и регистрируют флуоресценцию . Затем в суспензию ввод т антибиотик в исследуемой концентрации, смесь инкубируют при температуре роста микроорганизмов и измер ют уровень флуоресценции. Определ ют разницу в уровн х флуоресценции до и после внесени  антибиотика, по которой определ ют чувствительность микроорганизмов к антибиотику. Врем  исследовани  10-15 мин, чувствительность - концентраци  антибиотика 10 -10 М, 1 табл. e (Л со ОО Ч 4This invention relates to the field of medical microbiology and concerns a method for determining the sensitivity of microorganisms to an antibiotic. The purpose of the invention is to increase the sensitivity of the method and its acceleration. The essence of the method is that a microorganism suspension is introduced into a fluorescent cell, then a fluorescent dye 3, 3-dipropyl-2,2-thiodicarbocyanine iodide is added to the cuvette and the fluorescence is recorded. The antibiotic is then introduced into the suspension at the concentration studied, the mixture is incubated at the growth temperature of the microorganisms, and the level of fluorescence is measured. The difference in fluorescence levels before and after the introduction of the antibiotic is determined, from which the sensitivity of the microorganisms to the antibiotic is determined. The time of the study is 10-15 minutes, the sensitivity - the concentration of the antibiotic 10 -10 M, 1 table. e (L with OO H 4

Description

И юОретенне относитс  к :е;;и; И : -- кой микробиологии J ;-i ,сл I.U:TH i собам определении чувствитпл ьнсс -/-и микроорганизмов к мембр пнотг С-ли - -i ли-- тибиотикам,Цель изобретение; - rLi)ibii ::fHne чуист вительности способа и РГО vciKoi ). Сущность cnocc6i;i своди ; : к I ONi y., что во флуоресцентнуго к. пнсту внос : 10 клеток тecт; pye sc Л ;1 :iiTaN M;. микроорганизмон   фосфатноь- б уферс- рН 6,5-7,5, содержапсн 100-150 х,м NaC 1 , 1-5 мМ КС 1 и и (хчучае иеогхо1:,и- мости дл  иормальног О (Ч  кл.конирова- ни  данного штамма л.рут ие ИС Н Ы (Са , Мд и т,п в коннеьгграпииу , не лре- вь 1лаюи;их 1 мМ) К1 не ге ногщоржипг.ю : температуру, onTHMajit nyra роста культуры., Затем л кк;нету Biiori.HT lO -iO t (в зависимости от увстВИТеЛЬНОСТГГ флуОрИМе Г рс ) (ЬлгуОреСП, Л Гного красител  3 , З-дипролил - 2 . 2-тис:- дикарбоцианип иодид idis С J..n i: регистрируют флуоресл1е1{дию л.,- 650 и , 670 КМ 1ип-;:а вь г;зралн  красител  во-збу;кп. щел з ме на превышать 1 им) . Затем и .yci;en- зию ввод т антибиотик в И ;:следу ам( коице т;ра1ши, иредва.ритстилю не имеет ли он собстпепно ; ф.чуорс-сдс ции в данной области, и р(мл- : рмру11: : изменение уро чн  флуоресг епгис.-;,, .,-п аг тибиотик не повреждает мембрану исследуемого микроор Гг- г;изм, .,, изменений в уровне ф нуоресденлии не наблюдаетс  , если же N eM6paJ-ia по:вреж; :,ена 3 результате иоиофорного ил.-1 щего действи  антибиотика, измеиеьгие уровн  Флуорс ;лде;: : л;, CHJ;- заиное с изменение траН :;мС мС jani нч ; ) готенци -и;а клетки „And yuoretenno refers to: e ;; and; AND: - which microbiology J; -i, I.U. - rLi) ibii :: fHne method of sensitivity and RGO vciKoi). Essence cnocc6i; i set; : I ONi y., which in the fluorescent complex. introduced: 10 cells test; pye sc L; 1: iiTaN M ;. microorganism phosphate-b-pH 6.5-7.5, content 100-150 x, m NaC 1, 1-5 mM KS 1 and (houchae Iogho1:, and for normal O (H kl.con.- Neither this strain is a lr rue of IC NU (Ca, Md and t, n in conjunction, do not commit to lui; their 1 mM) K1 is not allergic: growth temperature, onTHMajit nyra culture growth., then lcc; no Biiori.HT lO -iO t (depending on the use of the fluorime Gpc) (LguOrSP, L Gnogo dye 3, W-diprolil - 2. ., - 650 and, 670 KM 1ip - ;: a v g; zraln dye v-zbu; kp. Ü 1). Then, and .yci; enziyu is administered an antibiotic to I;: follow (koit t; rashi, iredva.Ritstil does he not own; ml-: pmru11:: a change in the level of fluoresg ephis .-; ,,., - para agibibotic does not damage the membrane of the studied microorrhyy; by: img;:, ena 3 as a result of the ioophoric ill. -1 effect of the antibiotic, izmeriegie levels Fluors; lde ;:: l ;, CHJ; a) gotentsi; and cells

Трансмембранный 110те1Л11:;а..г   влмс-т -: зажнейшим показатс лем жиз лес х: с;;б ас /- ти клеток и резко измен етс  гри чо -- д ействии, нарушану.дем мембрапс. г :ик;з1 ;-- организмов,. Таким образом, :. и л. iluiyOpt-(Л),еЛГ).И1; С.уД.ЯТ оTransmembrane 110te1L11:; a..g vlms-m -: the most vital indicator of life: s; s; b / ac cells and changes dramatically in the form of - action, disturbed demembranx. g: ik; s1; - organisms ,. In this way, :. and l. iluiyOpt- (L), eLG) .I1; S.D.NT about

чувствитчит 1 ности даниогс- ;пта. г-:а организма к исследу а 1тг б(С1 ик . Чре.дложенный спос об но но г с : опредс1 )еделени  вместе с: лодг;)тпвк( й зани-- I lafiT не более 10 О-Т Лили- ел, особенностью данного снссоба  вл етс  то, что в суспензик :-слет;ч, тести;.Sensitivity 1 nosti Daniogs-; pta. d-: and of the organism to research and 1tg b (C1 ik. Extrapolicy sposi noto s c: opred1) edeleni with: lodg;) tpvk (I took no more than 10 O-Lilis) , the peculiarity of this process is that it is suspended: -slet; h, test ;.

е.МЫХ культур Г- .ИКрООрТ аНИЗМО : H3Mt.:iniiразницу уровней ф туорес.аемдра- краси е с. е ни   а н ти б и о ти BacMlus sub ri is 720 н фосфатном бу- г:.с )е 6,5. содс:ржл цем 150 NaCl :- .: мМ КС 1 , Оаределение провод т при , к кювету ввод т lO М V, 1 Д1тролил ;-нкабро 1,ианин йодида :: 5 -С, л 1ег -1стрнру;от флуоресденцию прм , j.jf 6 к) и .,(,, 670 нм Загс 5 н суслснзик рт о;:1 т антибиотикe.MY Crop H.IRCOLT LEVELS: H3Mt.:inii difference between fouores.annum e s. e ni a n t b and about ti BacMlus sub ri is 720 n phosphate bu g: .c) e 6.5. content: NaCl 150 NaCl: -.: mM KS 1, Determination is carried out at, to the cuvette are introduced: OO V, 1 D1trolil; -ncabro 1, ianine iodide :: 5 -C, l 1r -1strnr; from fluorescence prm , j.jf 6 to) and., (,, 670 nm. FPS 5 n suspension should be merged;;: 1 ton antibiotic

: Г 1ли 1идигг S г Кпннентралии 2 И) М :i К ги с пирур) г изменение флуо- :)- .лгенили .: D 1 or 1 digg S g Kpnnentralii 2 I) M: i To gi with pyrrh) g change fluo-:) - lgenili.

:| р и м е р / . : dnyopecnenTHym: | p and m /. : dnyopecnenTHym

Kiii;u:Ty инос  ; клеток культуры i с occocus в фосфа Г:к;м буфере р11 7.1. сол.(П ч 1)0 мМ NaC   5 мМ .(- , Определение нротнод т при 37(.Kiii; u: Ty Inos; culture cells i with occocus in phosphorus G: K; m buffer p11 7.1. sol. (P h 1) 0 mM NaC 5 mM. (-, Definition of nrotne t at 37 (.

; в юовет;. вводит : О М diS C 1 pui л(.:грирукг г д1-1уоресие1итию при тех же .и.зинах но. л, и сгуслелзию ввод т аг ;1сиотик (лшитиалнн в кслл1елтрадии ; .Ми ре i и ст|)гр Ю т изменение уров; in the council; introduces: О M diS C 1 pui l (.: grürkg g d1-1oresitiyu with the same. and. zinah. l., and ag) is administered ag; 1 siotik (ш ts); t change level

Г ) и м е j i 3 , (, К :ви  лрозедени  : сс ьек ис с. и: ;;ов;11П :.  согласно приме- ; У . , Б к;1 -14; Tic алт} биотика ввод т ; с --:инилил S ; ксацс лт:г)алии 1 : 1 О М и a(ciFHiaj )-: и: ме1кл{; е уровн  флуорес- :. с лл;1 ,D) and m e ji 3, (, K: cyclo-zeni: ss-kb use s. And: ;; ov; 11P: according to example; U., Bc; 1-14; Tic alt} biotics are introduced; c -: inilil S; ksatss lt: d) Aliya 1: 1 O M and a (ciFHiaj) -: i: me1kl {; e-level fluores-:. with ll; 1,

а 1 и м г р -, ( :ви  проведени  . 1:с аект (г. как в примере / , ) ап:и ГСП Пи(-:-;ч валипоминин : : с ми(Л1 :ралии . . : и наблюдают с а.; .лк. ;;ис viKjiru: ф 1уо;)е слендии ,a 1 and mgr -, (: vi conduct. 1: with aekt (r. as in the example of /,) an: and gsp pi (-: -; h valipominin:: with mi (P1: rales.: and see with a .; lk. ;; ik viKjiru: f 1uo;) e slendii,

а К1мсил:тра::ии :а регистрируют yja .а;ел;ци - „ 15зм(Л1ение уров- ;{)i i :c;y(peciiCH) лг i :аб.:а-1даетс  , так ка;; ; , Влс, уст ойчн- а кa K1msil: tra :: ai: a: register yja .a; ate; qi - 15m (Level -–; {) i i: c; y (peciiCH) ni i: ab.: a-1, so ka ;; ; , WLS, set oichn- and to

i зул с;агП| предс та)::-ЛИ;; в таблиде , i zul with; agp | representative) :: - LI ;; in the table

 х ,x,

так и в п1кробиоло1 ичес лслпюсти, и в медицииско) п качестве у1шверсального спо одновременного определени  собности клеток микроорг ани чувствительности их к антибso in p1crobiolo1 cichesliusti, and in medicine) as a versatile ability to simultaneously determine the ability of microorgani cells to be sensitive to antibiotics

ФормулаFormula

- 1337- 1337

биотика, при которой вы вл етс  эффект действи  последнего на заданное количество микроорганизмов - мишеней, Эффект действи  в заданном способе определ етс  по изменению трансмембранного потенциала, который выражаетс  в изменении уровн  флуоресденпии красител  dis-C. (5) Достоверным изменением считаетс  10%-ный сдвиг уров-iQ н  флуоресценции при добавлении антибиотика .biotic, at which the effect of the latter on a given number of target microorganisms is revealed, the effect in a given method is determined by the change in the transmembrane potential, which is expressed in the change in the fluorescent level of the dye dis-C. (5) A significant change is considered to be a 10% level shift-iQ n fluorescence upon the addition of an antibiotic.

Применение данного способа позвол ет определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам в концентра- 5 биоти-ком, отличающи ции 10 М. В прототипе эффект действи  на клетки наблюдаетс  при концентра1щи антибиотика на 2 пор дка больше и в течение 240-360 мин. Получение результатов с помощью предлага емого способа достигаетс  в течение 10-15 мин„ Способ позвол ет осуществл ть вы вление антибиотиков мембрано- тропного действи . Он прост в осуществлении , тестирование одного антибиотика вместе с подготовкой заниобреThe application of this method allows to determine the sensitivity of microorganisms to antibiotics in a concentration-5 biotic that distinguishes 10 M. In the prototype, the effect on cells is observed when the antibiotic concentration is 2 times more and during 240-360 minutes. Obtaining results using the proposed method is achieved within 10-15 minutes. The method allows detection of membrane-tropic antibiotics. It is easy to implement, testing one antibiotic along with preparation

00

Способ определени  чувст ти микроорганизмов к антиби включающий инкубирование су микроорганизмов с красителеMethod for determining microbial susceptibility to antibiotics, including incubation of cy microorganisms with a dye

тем, что, с целью повьш1ени  вительности способа и его у в качестве красител  исполь дипропил-2,2-тиодикарбоциан предварительно измер ют уро оресценции смеси суспензии м низмов с красителем, затем д раствор антибиотика, после и вани  повторно измер ют уро оресценции смеси и определ ю вительность микроорганизмов биотику по разности уровней ценции до и после внесени  а ка .By using dipropyl-2,2-thiodicarbocyan to preserve the method and its dye, the level of the suspension of the suspension mixture with dye, then the solution of the antibiotic is measured, and the concentration of the mixture is re-measured and Determination of microorganisms in biotics based on the difference in the levels of cation before and after application.

мает не более 10 мин, поддаетс  автоматизации и может быть широко использован как в лабораторных условиСравнительные данные.по определениюIt lasts no more than 10 minutes, is automated, and can be widely used as in laboratory conditions. Comparative data. By definition

чувствительности микроорганизмов кsensitivity of microorganisms to

антибиотикамantibiotics

МикроорганизмВы вленный эффект действи  антибиотика, МMicroorganisms: Effects of an antibiotic, M

(2 10 клеток)г(2 10 cells) g

по предлагаемому способу по прототипу ,the proposed method of the prototype,

Грамицидин SПолимиксин Грами -лщин S I ПолимиксинGramicidin SP Polymyxin Grami-Schin S I Polymyxin

Bordatella bronchiseptica4 ,5-10- 7,2- 0 6-10 7 10Bordatella bronchiseptica4,5-10- 7,2- 0 6-10 7 10

Escherichia coli 3-10 1,5-10 S-IO 0,8 10Micrococcus lysodeikticus 2-10-88 ,3-106,5-10Составитель Г.Смирнова Редактор М.ТовтинТехред М.ХоданичКорректор Н.КорольEscherichia coli 3-10 1,5-10 S-IO 0,8 10 Micrococcus lysodeikticus 2-10-88, 3-106,5-10 Compiler G. Smirnova Editor M.TovtinTehred M.KhodanychKorrektor N.Korol

Заказ 4097/23. Тираж 499ПодписноеOrder 4097/23. Circulation 499 Subscription

ВНИИПИ Государственного комитета СССРVNIIPI USSR State Committee

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска  набо, Д.4/5for inventions and discoveries 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk nabo, D.4 / 5

Производственно-полиграфическое предпри тие, г.Ужгород, ул.Проектна ,4Production and printing company, Uzhgorod, Projecto st., 4

 х ,x,

так и в п1кробиоло1 ической промьш - лслпюсти, и в медицииско) практике в качестве у1шверсального способа дл  одновременного определени  жизнеспособности клеток микроорг анизмов и чувствительности их к антибиотикам,,the same in the case of the microbiological industry, and in medicine as a universal method for the simultaneous determination of the viability of microorganism cells and their sensitivity to antibiotics,

ФормулаFormula

обретени gaining

биоти-ком, отличающи biotic

Способ определени  чувствительности микроорганизмов к антибиотику, включающий инкубирование суспензии микроорганизмов с красителем и антий с  The method of determining the sensitivity of microorganisms to the antibiotic, including the incubation of a suspension of microorganisms with a dye and anti

тем, что, с целью повьш1ени  чувствительности способа и его ускорени , в качестве красител  используют 3,3- дипропил-2,2-тиодикарбоцианин йодида, предварительно измер ют уровень фпу- оресценции смеси суспензии микроорганизмов с красителем, затем добавл ют раствор антибиотика, после инкубировани  повторно измер ют уровень флуоресценции смеси и определ ют чувствительность микроорганизмов к антибиотику по разности уровней флуоресценции до и после внесени  антибиотика .By the fact that, in order to increase the sensitivity of the method and its acceleration, 3,3-dipropyl-2,2-thiodicarbocyanine iodide is used as a dye, the level of fporescence of the suspension mixture of microorganisms with the dye is preliminarily measured, then an antibiotic solution is added Incubations re-measure the fluorescence of the mixture and determine the sensitivity of the microorganisms to the antibiotic by the difference in the levels of fluorescence before and after the application of the antibiotic.

Claims (1)

Формула изобретенияClaim Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику, включающий инкубирование суспензии микроорганизмов с красителем и антибиотиком, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и его ускорения, в качестве красителя используют 3,3дипропил-2,2-тиодикарбоцианин йодида, предварительно измеряют уровень флуоресценции смеси суспензии микроорганизмов с красителем, затем добавляют раствор антибиотика, после инкубирования повторно измеряют уровень флуоресценции смеси и определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотику по разности уровней флуоресценции до и после внесения антибиотика .A method for determining the sensitivity of microorganisms to an antibiotic, including incubating a suspension of microorganisms with a dye and an antibiotic, characterized in that, in order to increase the sensitivity of the method and its acceleration, 3.3 dipropyl-2,2-thiodicarbocyanine iodide is used as a dye, the fluorescence level of the mixture is preliminarily measured suspensions of microorganisms with a dye, then an antibiotic solution is added, after incubation, the fluorescence level of the mixture is re-measured and the sensitivity of the microorganisms is determined ganisms to the antibiotic by the difference in fluorescence levels before and after the introduction of the antibiotic. Сравнительные данные.по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикамComparative data on the determination of the sensitivity of microorganisms to antibiotics Микроорганизм (2 10^к клеток)Microorganism (2 10 ^k cells) Выявленный эффект действия антибиотика, М по предлагаемому способу по прототипуThe revealed effect of the antibiotic, M according to the proposed method according to the prototype Грамицидин SGramicidin S Полимиксин • Грамицидин S j ПолимиксинPolymyxin • Gramicidin S j Polymyxin Bordatella bronchiseptica Bordatella bronchiseptica 4,5 ·10'^{έ 4,510} ' ^έ 7,2-10^-8 7.2-10 ^-8 6-10^-4 6-10 ^-4 7 10^-6 7 10 ^-6 Escherichia coli Escherichia coli 3·10*^ύ 3 · 10 * ^ύ 1,5-10^-8 1,5-10 ^-8 5-10^-4 5-10 ^-4 0,810^-t 0.810 ^-t Micrococcus lysodeikticus Micrococcus lysodeikticus 2·ICT® 2 · ICT® 8-10^-1 8-10 ^-1 2,3 -10^-6 2.3 -10 ^-6 6,5 40^-4 6.5 40 ^-4