SU1081207A1

SU1081207A1 - Питательна среда дл культивировани @

Info

Publication number: SU1081207A1
Application number: SU823417984A
Authority: SU
Inventors: Прасковья Сергеевна Соломатина; Валерий Борисович Фрейман; Нина Васильевна Глущенко; Тамара Алексеевна Павлова; Мария Александровна Кузьмина; Татьяна Михайловна Федорова; Зоя Павловна Федосова
Priority date: 1982-04-06
Filing date: 1982-04-06
Publication date: 1984-03-23

Abstract

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Bacillus thuringiensis , содержаща дрожжи, источник углеводов, магний сернокислый или марганец сернокислый , кальциевую соль и воду водопроводную, отличающа с тем, что, с целью ускорени спорообразовани Bacillus thuringiensis, о«а дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли - кальций хлористый или кальций углекислый, а в качестве источника углеводов - гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при следующем соотношении компонентов, мас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по саха (С ру0,7-1,25 (Л Дрожжи БВК0,8-1,0 Аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый 0,15-0,25 Кальций углекислый или кальций хлористый 0,15-0,2 Магний сернокислый или марганец сернокислый0 ,1-0,15 Вода водопроводна Остальное

Description

1 Изобретение относитс к микробГйо логической промышленнссти и может быть использовано при производстве энтомопатогенньгх бактериальных препаратов на основе Bacillus thuringiensis . Известна кукурузно-глюкозна питательна среда дл культивировани Bacillus thuringiensis lj . Однако известна среда малопроду тивна. Известна также питательна среда дл культивировани Bacillus thurin giensis , содержаща дрожжи кормовые , источник углеводов (кукурузную муку, крахмал, отруби или другие ), хлористый натрий, хлористый кальций, сернокислый магний или сер нокислый марганец и воду водопровод ную Y , Однако известна среда не обеспе чивает спорообразование в короткие сроки. Целью изобретени вл етс ускорение спорообразовани Bacillus thuringiensis. Указанна цель достигаетс тем, что питательна среда дл культивир вани Bacillus thuringiensis, содержаща дрожжи, источник углеводов магний сернокислый или марганец сер нокислый, кальциевую соль и воду во допроводную, дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли - кальций хлористый или кальци углекислый, а в качестве источника углеводов - гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при сле дующем соотношении компонентов,мас Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахару 0,7-1,2 Дрожжи БВК0,8-1,0 Аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый0 ,15-0,2 Кальций углекислый или кальций хлористый 0,15-0,2 Магний сернокисльш или марганец сернокислый0 ,1-0,15 Вода водопроводна Остально Среду готов т следующим образом 1%-ную водную суспензию дрожжей БВК нагревают до , вьщерживают при этой температуре в течение 30 .60 мин,затем охлаждают до 50 С и 07 ввод т в нее остальные компоненты. Соль кальци ввод т последней. Среду перемешивают, рН до стерилизации устанавливают в пределах 7,4-7,6, стерилизуют при 120-130 С в течение 30-40 мин. рН после стерилизации 6,8-7,2. Пример 1. Готов т среду следующего состава, мас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахару0,7 Дрожжи БВК0,8 Аммоний фосфорнокислый или сернокисльй 0,15 Кальций углекислый (мел) или хлористый0,15 Сернокислый магний или марганец0,1 Вода водопроводна Остальное Среду после стерилизации и охлаждени засевают Bacillus thuringiensis , культивируют в течение 37 ч при . На среде с указанной минимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентраци спор и кристаллов) составл ет 3,2 млд. в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью по ЛК5-0 0,003%. Пример 2. Готов т среду следующего состава, мас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахару1 ,0 Дрожжи БВК0,9 Аммоний фосфорнокислый или сернокислый0 ,2 Калий фосфорнокислый , 0,07 Кальций углекислый (мел) или хлористый 0,18 Сернокислый магний или марганец0,13 Вода водопроводна Остальное На среде с указанной оптимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентраци спор и кристаллов) составл ет 3,7 млрд.в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью по nKf(7 0,001%. Пример 3. Готов т среду следующего состава, йас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахару1 ,25 Дрожжи БВК1,0 Аммоний фосфорнокислый или сернокислый0 ,25 Калий фосфорнокислый 0,1 Кальций углекислый (мел) или хлористый 0,2 Сернокислый магний или марганец 0,15 Вода водопроводна Остально На среде с указанной максимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентраци СПОР и кристаллов) составл ет 3,3 млд в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью 0,002%. П р и м е .р 4, Гексозосодержащий гидролизат древесины готов т из древесной стружки путем обработки ее 0,5%-ной серной кислотой сначал при 140-160 С, затем при 180-190°С По окончании гидролиза избыток сер074 ной кислоты нейтрализуют известковым молоком . После фильтрации гидролиз ат очищают от летучих и нелетучих примесей (формальдегид, фурфурол , гуминовые вещества и другие) и затем упаривают в вакуумной упаривательной установке при 7Q-8cPc. После упаривани в гидролизате должно содержатьс не менее 20-25% редуцирующих веществ, которые представлены глюкозой (80-90%) и незначительным количеством других сахароз: галактозой, маннозой, ксилозой , арабинозой. Кроме сехаров в гидролизате содержатс минеральные компоненты: соли кали , натри , магни , железа, меди и другие в микроколичествах . Гидролизат торфа, получаемый с гидролизного завода, содержит 16,3% редуцирующих веществ. Данные по использованию гидролизатов дл выращивани Bacillus thuringiensis представлены в табл.1,

С древесным гйд39 ролизатом

С торф ным

49 гидролизатом

Данные табл.1 показьшают, что на среде с торф ным гидролизатом культура штамма 49 растет и развиваетс нормально с образованием спор и крис- JQ таллов. Культуральна жидкость обладает высокой инсектицидной способностью . Некоторое снижение продуктив0 ,001 Споры, кристаллы (1:1), заспорованные кл. 5%, вегетативные кл. 1%

0,003

2.6

То же

ности культуры на среде с торф ным гидролизатом св зано с менее тщательной очисткой гидролизата.

Сравнительные данные по времени ферментации и спорообразованию приведены в Фабл. 2.

Оптимальное47

Минимальное37

Оптимальное37

Максимальное37 Данные табл. 2 показывают, что предлагаема среда позвол ет за более корот кое врем достичь 100%-ного спорообразовани культуры Bacillus thuringiensia .

Т а б ;i и ц а 2

90

100 100 100 Использование питательной среды позвол ет ускорить спорообразование Bacillus thuringiensiS, интенсифицировать производство, улучшить качество биомассы,удешевить производство.

Claims

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Bacillus thuringiensis, содержащая дрожжи, источник углеводов, магний сернокислый или марганец сернокислый , кальциевую соль и воду водопроводную, отличающаяся тем, что, с целью ускорения спорообразования Bacillus thuringiensis, она дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли - кальций хлористый или кальций углекислый, а в качестве источника углеводов - гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахаРУ

Дрожжи БВК

Аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый

Кальций углекислый или кальций хлористый Магний сернокислый или марганец сернокислый

Вода водопроводная

0,7-1,25

0,8-1,0

0,15-0,25

0,15-0,2 (/)

0,1-0,15

Остальное

1081207 ’