SU1017730A1 - Способ получени глутаматдегидрогеназы - Google Patents
Способ получени глутаматдегидрогеназы Download PDFInfo
- Publication number
- SU1017730A1 SU1017730A1 SU823390227A SU3390227A SU1017730A1 SU 1017730 A1 SU1017730 A1 SU 1017730A1 SU 823390227 A SU823390227 A SU 823390227A SU 3390227 A SU3390227 A SU 3390227A SU 1017730 A1 SU1017730 A1 SU 1017730A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- microorganisms
- cultivation
- carbon source
- sepharose
- cell
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛУТАМАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ , предусматривающий , культивирование микроорганизмов продуцентов на питательной среде, содержащей источник углерода и ми пёральные соли, дезинтеграцию м к- , роорганизмов, получение бесклеточного экстракта с последующим вьвделением из него фермента с использованием тепловой обработки и хрома .тографии, от лича ющ и йс iтем, что, с целью упрощени процесса, из микроорганизмов используют штамм Methy ophiJus methanotovorus ВКМ В-1447Д, культивирование осуществл ют в аэробных услови х с и 5пользо ваниём метанола в качестве источника углерода, при этом тепловой обра (Л ботке попвергают,бесклеточный экстракт , a хроматографию провод т последовательно сначала на вСие Sepharose CL-4B, -затем на flEAE-Sepharose.
Description
1
со
изобретение относитс к микробиологической промышленности, а име но к способу получени глутаматдегидрогеназы , котора используетс дл определени аммиака, с -кетоглутрата , глутамата.
Известен способ получени глутаматдегидрогеназы , предусматривающий культивирование микроорганизмов ВаciSeus megaterium на питательной , среде, содержащей глюкозу в качеств источника углерода ij.
Известен также способ получени (Тлутаматдегидрогеназы, предусматривающий культивирование микроорганизмов - продуцентов на питательной , среде, содержащей источник углерода и минеральные соли, дезинтеграцию микроорганизмов, получение бесклеточното экстракта с последующим выделением из него фермента с использованием тепловой обработки и хромагографии . Согласно этому способу используют анаэробные микроорганизмы CKostridium SP4, которые выращивают на-питательной среде, содержащей в качестве источника углерода лизин. ,Дл вЕдцелени фермента биомассу дезинтегрируют , получают бесклеточный экстракт, который сначала обрабатывают протаминсульфатом, фракционируют сульфа,том аммони , затем подвергают тепловой o6pa6oTj e, повторн фракционируют сульфатом аммони , хроматографируют на ДЭАЭ-целлюлозе и Сефадексе-150, Выход фермента 41% активность 485 ед/мг белка 2}.
Недостатком данного метода вл етс сложность процесса, обусловленна йеобходимостью создани анаэробнйх условий культивировани ; (удаление кислорода достигаетс при помощи реакции его с водородэм в присутствии.катализатора или пропусканием через культуральный сосуд азота), многостадийностью процесса вьщелени , а также 1спользованием в качестве источника углерода ценного продукта - лизина.
Цель изобретени .- упрощение процесса .
Указанна цель достигаетс тем, что .согласно способу получени глутаматдегидрогеназы , предусматривающему культивирование микроорганиз .мов - продуцентов на питательной среде, содержащей источник углерода и минеральные соли, дезинтеграцию микроорганизмов, получение бескле-точного экстракта с последующим выделением из него фермента с использованием тепловой обработки и хроматографии из микроорганизмов используют штамм MethyBophiCus methanoPo- vorus В-1447Д, культивирование осуществл ют в аэробных услови х с использованием метанола в качестве источника углерода, при этом тепловой
.обработке подвергают бесклеточный экстракт, а хроматографию провод т последовательно .сначала на ВРие Sepharose CL-4B, затем на ДЕАЕ - сефар6зе .
Способ осуществл ют следующим образом.
В качестве продуцента глутаматдегидрогеназы используют штамм облигатно метилотрофных бактерий MethyBophiPu methanoPovorus ВКМ В-1447Д.
Дл получени глутаматдегидрогеназы бактерии ВК1«1 выращивают на питательной среде, содержащей метанол. Клетки отдел ют от среды центрифугированием , разрушают с помощью ультразвукового дезинтегратора. После центрифугировани бесклеточный экстракт прогревают 20-40 мин при 50бО С на вод ной бане, коагулированны белок отдел ют центрифугированием и раствор хроматографируют ка Вбие Sepharose CL-4B. Далее фракции, содержащие глутаматдегидрогеназы, хроматографируют на ДЭАЕ-сефарозе. Выход глутаматдегидрогеназы по отно-. шению к бесклеточному экстракту 5060% , удельна активность препарата 500-550 ед/мг белка.
Приме р. Бактерии MethyKophigus methanoKovprus ВКМ-В-1447Д выращивают в ферментере с рабочим объемом 60 л на среде следующего состава, г на 1 л .среды: КН2РО42,0;
Nace 0,5; (NH4)2 304 2,0 Mgsq,-7Н20
0,025; FeSO4-7H20 0,01; метанол 5,0, рН среды довод т до 7,0 10%-ным раствором NaOH. Температура выращивани , .скорость перемешивани 300 об/мин, аэраци 0,5 объема воздуха в минуту на 1 объем среды. После культивировани (22 ч) клетки собирают на сепараторе АСГ-ЗМ.Дальнейшие операции провод т при +4°С.. В качестве буферного раствора используют 0,05 М Трис-НСС буфер, рН 8,0. Клетки (100 г) суспендируют в буфере и разрушают на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (20 кГц, мин) гогйогенат центрифугируют (ЗООООс, 40 мин).Бесклеточный экстракт прогревают на вод ной бане при 60°С в течение 30 мин и коагулированный белок отдел ют центрифугированием.Экстракт нанос т на колонку с Вбие Sepharose CL-4B (30 мл) и элюируют раствором .хлористого натри в буфере, градиент концентрации О - 0,5 М. Фракции, содержащие глутаматдегидрогеназу, объе дин ют, диализуют против буфера и нанос т на колонку -с ДЭАЕ-сефарозой, йлюируют раствором .-хлористого натри ( гргщиент О - 0,5 М). Объединенные фракции, содержащие глутаматдегидрогеназу , обессоливают и к полученному препарату дл стабилизации фермента добавл ют глицерин до 30%.
310177304
Выход глутаматдегидрогеназы 60%,роститьпроцесс ееполучени ,
удельна активность 550 ед/мг белка.Ферментпол учгиотс хорошим
Предложенный-способ получени выходоми. высокойактивноеглутаматдегидрогеназы позвол ет уп-тью.
Claims (1)
- СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛУТАМАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ, предусматривающий культивирование микроорганизмов продуцентов на питательной среде, содержащей источник углерода и ми) пёральные соли, дезинтеграцию мяк- . роорганизмов, получение бесклеточного экстракта с последующим ввде-в лениём из него фермента с использованием тепловой обработки и хроматографии, от лича ю щ и й с я :тем, что, с целью упрощения процесса, Из микроорганизмов используют штамм MethyCophi&us methanotovorus ВКМ В-1447Д, культивирование осуществляют в аэробных условиях с использованием метанола в качестве источни- § ка углерода, при этом тепловой обработке подвергают.бесклеточный экстракт, а хроматографию проводят последовательно сначала на Blue Sepharose CL—4В, затем на ДЕАЕ—Sepharose.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU823390227A SU1017730A1 (ru) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | Способ получени глутаматдегидрогеназы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU823390227A SU1017730A1 (ru) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | Способ получени глутаматдегидрогеназы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1017730A1 true SU1017730A1 (ru) | 1983-05-15 |
Family
ID=20995310
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU823390227A SU1017730A1 (ru) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | Способ получени глутаматдегидрогеназы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1017730A1 (ru) |
-
1982
- 1982-01-28 SU SU823390227A patent/SU1017730A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| i. Henuniea J..Ai, MantsSiea P.I. Pnrification aht Properties of GEutamate Synthase and GEutamata Dehydrogenase from Bdcie us megate- jriiun.l. Biochem./1978, 1973,p.lT52. ;.;. .. . , ; 2. Wipnaeker E.I,., Barker H.A. Purification and Properties of NAD.dependent Geutamate Dehydrosenass fгол Geoetridium,SB-4i- Biochim, Biophys. Biophysi, Acta 1970/p. 212, 225 - 242. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1512488A3 (ru) | Способ получени амида | |
| US4144129A (en) | Cholesteroloxidase and method for its production from microorganisms | |
| WO1995017505A1 (fr) | Souche de rhodococcus rhodochrous productrice de nitrile hydratase | |
| KR100233330B1 (ko) | 6-히드록시피콜린산을 제조하기 위한 미생물학적 방법 | |
| FR2487375A1 (fr) | Procede de production de l'enzyme cholesterase et d'hydrolyse des esters de cholesterol d'acides gras en utilisant l'enzyme elle-meme | |
| JPS62289A (ja) | α−ケト酸からのＬ−α−アミノ酸の酵素学的製造方法 | |
| DE69738080T2 (de) | Biokatalysatoren mit amin-acylase aktivität | |
| EP0107400B1 (en) | Hybrid plasmid and process for producing glutathione using said plasmid | |
| SU1017730A1 (ru) | Способ получени глутаматдегидрогеназы | |
| JP3492776B2 (ja) | シス−３−ヒドロキシ−ｌ−プロリンの製造法 | |
| US4357425A (en) | Process for producing L-amino acid oxidase | |
| US4010072A (en) | Process for preparing L-tartaric acid | |
| US3589982A (en) | Production of l-asparaginase | |
| JPH0155879B2 (ru) | ||
| US4017362A (en) | Microbiological process for preparing L-tartaric acid in presence of surfactants | |
| JPH04365473A (ja) | クリプトコッカス・ラウレンティｄｓｍ２７６２ | |
| SU1440919A1 (ru) | Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 | |
| SU1056909A3 (ru) | Способ получени глицерин-дегидрогеназы | |
| JPH0127714B2 (ru) | ||
| JP3413294B2 (ja) | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 | |
| JP3629290B2 (ja) | 物質の製造法 | |
| JPS60184384A (ja) | Ν−アシルノイラミン酸アルドラ−ゼの製造法 | |
| JPH0630572B2 (ja) | Ｌ−フエニルアラニン脱水素酵素 | |
| FR2519649A1 (fr) | Procede de production de tyramine oxydase | |
| FR2458583A1 (fr) | Nouvelle glycerol kinase et sa production |